ES2447090A1

ES2447090A1 - Additives for feeding aquatic animals, containing probiotics

Info

Publication number: ES2447090A1
Application number: ES201231256A
Authority: ES
Inventors: Enrique PABLOS PÉREZ
Original assignee: Norel SA
Current assignee: Norel SA
Priority date: 2012-08-01
Filing date: 2012-08-01
Publication date: 2014-03-11
Anticipated expiration: 2032-08-01
Also published as: ES2447090B1; WO2014020226A1

Abstract

The invention relates to an additive for feeding aquatic animals, comprising the combination of two species pertaining to the genus Bacillus, said species being B. amyloliquefaciens and B. cereus, preferably the strains CECT 5940 of B. amyloliquefaciens and CECT 953 of B. cereus, in combination with an organic acid salt, preferably with the sodium salt of butanoic acid. The additives for feeding aquatic animals described in the present invention can also comprise other bacterial strains with a probiotic capacity, preferably pertaining to the species Pediococcus acidilactici.

Description

Aditivos para alimentación de animales acuáticos que contienen probióticos. Feed additives for aquatic animals that contain probiotics.

FIELD OF THE INVENTION

La presente invención divulga aditivos para la alimentación de animales acuáticos, aditivos que contienen al menos un probiótico que, además, puede ir acompañado de al menos una sal de un ácido orgánico. Dichos aditivos son utilizados como promotores o estimulantes del crecimiento y de la supervivencia animal. Por tanto, la presente invención se engloba dentro del campo de la acuicultura y más específicamente dentro de la producción, alimentación y salud animal. The present invention discloses additives for feeding aquatic animals, additives containing at least one probiotic which, in addition, may be accompanied by at least one salt of an organic acid. These additives are used as promoters or stimulants of growth and animal survival. Therefore, the present invention is encompassed within the field of aquaculture and more specifically within animal production, food and health.

STATE OF THE TECHNIQUE

La acuicultura ha tenido en los últimos años adelantos significativos en la producción de una amplia variedad de organismos acuáticos tanto de consumo humano como de especies de ornamentación. Debido a las condiciones de cría, como por ejemplo las altas densidades de animales y a las variaciones en la calidad del agua, los organismos están sujetos a un estrés constante que se traduce en una elevada tasa de mortalidad, así como en bajas tasas de crecimiento y eficiencia alimenticia, además de incrementarse la presencia e incidencia de enfermedades ocasionadas por patógenos oportunistas. La necesidad de una acuicultura sostenible y rentable ha impulsado la búsqueda de soluciones aceptables para optimizar la producción de una manera natural y respetuosa con el medio ambiente. In recent years, aquaculture has made significant advances in the production of a wide variety of aquatic organisms for both human consumption and ornamentation species. Due to the breeding conditions, such as high animal densities and variations in water quality, organisms are subject to constant stress that results in a high mortality rate, as well as low growth rates and nutritional efficiency, in addition to increasing the presence and incidence of diseases caused by opportunistic pathogens. The need for sustainable and profitable aquaculture has driven the search for acceptable solutions to optimize production in a natural and environmentally friendly way.

Para sobrellevar estos problemas se han utilizado suplementos y/o aditivos alimenticios que evitan la aparición de enfermedades y que además operan como promotores del crecimiento. Entre dichos suplementos se encuentran las hormonas, los antibióticos y algunas sales. Sin embargo, su uso inapropiado puede presentar en efectos adversos en el animal o en el consumidor final, así como dar lugar a resistencia cruzada en los animales de cría, frente a bacterias patógenas, dando lugar a desequilibrios ambientales y pérdidas económicas de las explotaciones acuícolas. Por lo tanto, la tendencia en la actualidad en acuicultura, es la búsqueda de una dieta que no sólo cubra las necesidades alimenticias de los animales, sino que además refuerce su estado inmunológico y sanitario, en general y reduzca los problemas patológicos sin utilizar medicamentos, para así conseguir mejorar su producción, evitar problemas con la seguridad de los alimentos obtenidos a partir de los animales de cría e incrementar los rendimientos económicos de las explotaciones. Para la consecución de estos objetivos, una de las vías de obtención ha sido el control de la flora intestinal de los animales de cría, utilizándose para ello los probióticos (Robertson, P.A.W. et al. Aquaculture 2000; 185: 235-243; Verschuere, L., G. et al. Microbiological Molecular 2000; 64: 655-671; Gullian, M. et al., Aquaculture 2004; 233: 1-14; Balcázar, J.L.,et al. Veterinary Microbiology 2006; 114: 173-186; Gatesoupe, F.J. Journal of Molecular Microbiological Biotechnology. 2008;14: 107-114) que pueden definirse como microorganismos viables que administrados en la dieta promueven el bienestar de los organismos de cría por medio de la estimulación del sistema inmune, así como del establecimiento del balance microbiano intestinal en dichos animales de cría, mediante la exclusión de microorganismos potencialmente patógenos (Irianto, A. y B. Journal of Fish Diseases 2002; 25: 333-342; Irianto, To overcome these problems, supplements and / or food additives have been used that prevent the onset of diseases and also operate as growth promoters. Among these supplements are hormones, antibiotics and some salts. However, its inappropriate use may have adverse effects on the animal or the final consumer, as well as lead to cross resistance in breeding animals, against pathogenic bacteria, leading to environmental imbalances and economic losses of aquaculture farms. . Therefore, the current trend in aquaculture is the search for a diet that not only covers the nutritional needs of animals, but also reinforces their immunological and sanitary status, in general and reduces pathological problems without using medications, in order to improve its production, avoid problems with the safety of food obtained from farmed animals and increase the economic yields of farms. For the achievement of these objectives, one of the ways of obtaining this has been the control of the intestinal flora of the breeding animals, using probiotics for this purpose (Robertson, PAW et al. Aquaculture 2000; 185: 235-243; Verschuere, L., G. et al. Microbiological Molecular 2000; 64: 655-671; Gullian, M. et al., Aquaculture 2004; 233: 1-14; Balcázar, JL, et al. Veterinary Microbiology 2006; 114: 173- 186; Gatesoupe, FJ Journal of Molecular Microbiological Biotechnology. 2008; 14: 107-114) that can be defined as viable microorganisms that administered in the diet promote the well-being of breeding organisms by stimulating the immune system, as well as the establishment of the intestinal microbial balance in these breeding animals, by excluding potentially pathogenic microorganisms (Irianto, A. and B. Journal of Fish Diseases 2002; 25: 333-342; Irianto,

A. y B. Austin. Journal of Fish Diseases 2003; 26: 59-62; Lara-Flores, M., et al. Aquaculture 2003; 216: 193-201). A. and B. Austin. Journal of Fish Diseases 2003; 26: 59-62; Lara-Flores, M., et al. Aquaculture 2003; 216: 193-201).

El uso de probióticos en la producción animal es una forma eficaz de control de la microflora intestinal de los animales de cría y ha demostrado ser, tanto un buen sustituto como un buen complemento, a los antibióticos promotores del crecimiento. Los probióticos son ampliamente utilizados en la cría de cerdos y aves, pero poco se ha hecho para incorporarlos en la acuicultura. The use of probiotics in animal production is an effective way to control the intestinal microflora of breeding animals and has proven to be both a good substitute and a good complement to growth-promoting antibiotics. Probiotics are widely used in pig and poultry farming, but little has been done to incorporate them into aquaculture.

En este sentido, los animales acuáticos difieren de los animales terrestres en el nivel de interacción entre la microbiota intestinal y el ambiente que los rodea. Las bacterias presentes en el ambiente acuático influyen en la composición de la microflora del intestino de los animales acuáticos y viceversa. La composición de la comunidad bacteriana del tracto intestinal de los animales acuáticos es diferente a lo que se encuentra en los animales terrestres. En el ambiente marino predominan las bacterias Gram negativas y en menor proporción las Gram positivas; estas usualmente constituyen la mayoría de las bacterias que normalmente se presentan en la microflora asociada a los camarones silvestres y de cultivo. La gran mayoría de los microbios presentes en el ambiente marino (bacterias, virus, hongos o parásitos) son inocuos o son controlados exitosamente por los mecanismos internos de defensa de los organismos en cultivo. Las etapas tempranas del ciclo de vida de los organismos acuáticos suelen ser más susceptibles a los ataques de dichos agentes, sobre todo cuando se llevan cultivos larvarios en forma intensiva, que por efecto del estrés provocado por las altas densidades, reduce el potencial de defensa de los organismos. La ruptura del equilibrio dinámico de la flora intestinal es provocada por el estrés que se genera por las condiciones intensivas de la producción animal, mencionadas previamente. Cuando descienden las concentraciones de bacterias beneficiosas, aparece la oportunidad para las bacterias menos deseables ó para que los patógenos potenciales se instalen y se multipliquen. In this sense, aquatic animals differ from terrestrial animals in the level of interaction between the intestinal microbiota and the surrounding environment. The bacteria present in the aquatic environment influence the composition of the microflora of the intestine of aquatic animals and vice versa. The composition of the bacterial community of the intestinal tract of aquatic animals is different from what is found in terrestrial animals. Gram negative bacteria predominate in the marine environment and Gram positive in a smaller proportion; these usually constitute the majority of the bacteria that normally occur in the microflora associated with wild and cultivated shrimp. The vast majority of microbes present in the marine environment (bacteria, viruses, fungi or parasites) are harmless or are successfully controlled by the internal defense mechanisms of organisms in culture. The early stages of the life cycle of aquatic organisms are usually more susceptible to attacks by such agents, especially when larval cultures are carried out intensively, which, due to the stress caused by high densities, reduces the defense potential of the organisms The breakdown of the dynamic balance of the intestinal flora is caused by the stress that is generated by the intensive conditions of animal production, mentioned previously. When concentrations of beneficial bacteria decrease, the opportunity for less desirable bacteria or for potential pathogens to install and multiply appears.

Existen diferentes especies bacterianas utilizadas como probióticos en acuicultura destacando, sobre todo, las bacterias acidolácticas, preferentemente pertenecientes al género Lactobacillus (Nikoskelainen, S.A. et al. Fish Sellfish Immunology 2003; 15: 443-452; Balcázar, J.L. et al. British Journal of Nutrition 2007; 97: 522-527; Gatesoupe, F.J. Journal of Molecular Microbiological Biotechnology. 2008; 14: 107-114). Bacterias de dicho género forman parte de la flora microbiana natural que se encuentran acompañando a los camarones en todos sus estadios de vida y parte de dichas bacterias presentan potencial para usarse como probióticos en la acuacultura. Sin embargo, debido a que esta práctica aún es reciente en la acuicultura, son pocas las especies de microorganismos que se usan, por lo que en la actualidad es necesario continuar seleccionando cepas con características probióticas. Además, puede ser beneficioso para complementar el sistema inmune, particularmente en el tracto gastrointestinal de los animales acuáticos, utilizar, en combinación con los probióticos, otros ingredientes o aditivos que potencien el beneficio de dichos probióticos en la salud y producción en acuicultura. There are different bacterial species used as probiotics in aquaculture highlighting, above all, the acid-lactic bacteria, preferably belonging to the genus Lactobacillus (Nikoskelainen, SA et al. Fish Sellfish Immunology 2003; 15: 443-452; Balcázar, JL et al. British Journal of Nutrition 2007; 97: 522-527; Gatesoupe, FJ Journal of Molecular Microbiological Biotechnology. 2008; 14: 107-114). Bacteria of this genus are part of the natural microbial flora that are found accompanying shrimp in all their stages of life and part of these bacteria have potential to be used as probiotics in aquaculture. However, because this practice is still recent in aquaculture, few species of microorganisms are used, so it is currently necessary to continue selecting strains with probiotic characteristics. In addition, it may be beneficial to complement the immune system, particularly in the gastrointestinal tract of aquatic animals, to use, in combination with probiotics, other ingredients or additives that enhance the benefit of such probiotics in health and aquaculture production.

Mientras que los probióticos son útiles para la promoción de la salud de un animal, a menudo son difíciles de almacenar, manejar y administrar a dichos animales, más cuando dicha administración se realiza disolviendo el aditivo, junto con el alimento habitual de los animales, en el medio acuático. En este sentido, la formulación de alimentos no solo tiene que llenar los requerimientos de los animales, debe también producir un alimento muy estable en el agua porque los animales acuáticos se alimentan lenta y continuamente. Específicamente, el camarón detecta el alimento a distancia por quimiorecepción, por lo que dicho alimento debe ser además atractante (que atraiga al animal) y palatable (que le guste el sabor), debiéndose además presentar una forma y composición uniforme. En este sentido, el uso de sustancias atractantes permite que los alimentos sean localizados y consumidos más rápido por los animales. Estos compuestos son moléculas muy solubles en agua y son de bajo peso molecular; como: aminoácidos, compuestos cuaternarios de amonio, trimetilamina, betaina (trimetilglicina), nucleótidos, aminas biogénicas y ácidos orgánicos. De manera comercial se encuentran disponibles en el mercado harinas solubles y aceites de pescado, moluscos ó crustáceos; que funcionan como excelentes atractantes. While probiotics are useful for promoting the health of an animal, they are often difficult to store, handle and administer to these animals, especially when such administration is done by dissolving the additive, along with the usual food of the animals, in The aquatic environment. In this sense, the food formulation not only has to meet the requirements of the animals, it must also produce a very stable food in the water because aquatic animals feed slowly and continuously. Specifically, the shrimp detects the food at a distance by chemoreception, so that the food must also be attractive (attracting the animal) and palatable (which likes the taste), and must also have a uniform shape and composition. In this sense, the use of attractive substances allows food to be located and consumed faster by animals. These compounds are very water soluble molecules and are of low molecular weight; as: amino acids, quaternary ammonium compounds, trimethylamine, betaine (trimethylglycine), nucleotides, biogenic amines and organic acids. Commercially available soluble flours and fish oils, molluscs or crustaceans; They work as excellent attractants.

Existe, por tanto, una necesidad de nuevos aditivos para la alimentación de animales acuáticos, que contengan probióticos capaces de reforzar el sistema inmune evitando así la invasión por patógenos oportunistas y dando lugar a un incremento en la longevidad de los animales criados en cautividad mediante técnicas de acuicultura. Otro de los objetivos, de los aditivos incorporados en la dieta de los animales acuáticos es conseguir un mayor aprovechamiento del alimento y una actividad incrementada de las enzimas digestivas que se traduzca en un incremento en el crecimiento de los animales de cría y por consiguiente redunde en los beneficios económicos para las explotaciones acuícolas. There is, therefore, a need for new additives for feeding aquatic animals, containing probiotics capable of strengthening the immune system thus preventing invasion by opportunistic pathogens and resulting in an increase in the longevity of animals reared in captivity by means of techniques Aquaculture Another objective, of the additives incorporated in the diet of aquatic animals is to achieve greater use of food and an increased activity of digestive enzymes that results in an increase in the growth of breeding animals and therefore results in the economic benefits for aquaculture farms.

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN DESCRIPTION OF THE INVENTION

Brief Description of the Invention

La presente invención describe un nuevo aditivo alimenticio para animales acuáticos que comprende al menos dos cepas bacterianas, preferentemente en forma de espora, pertenecientes al género Bacillus y que se selecciona de entre Bacillus amyloliquefaciens y Bacillus cereus. The present invention describes a new food additive for aquatic animals comprising at least two bacterial strains, preferably in spore form, belonging to the genus Bacillus and selected from among Bacillus amyloliquefaciens and Bacillus cereus.

La cepa bacteriana Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 es una cepa bacteriana aislada por NOREL S.A., España depositada el 25 de Abril del 2001 en la Colección Española de Cultivos tipo sita en el Parque Científico de la Universidad de Valencia. Calle Catedrático Agustín Escardino, 9 de Paterna (Valencia) y, que se comercializa como el probiótico ECOBIOL. The bacterial strain Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 is a bacterial strain isolated by NOREL S.A., Spain deposited on April 25, 2001 in the Spanish Collection of Crops type sita in the Scientific Park of the University of Valencia. Calle Agustín Escardino Professor, 9 de Paterna (Valencia) and, which is marketed as the ECOBIOL probiotic.

El ECOBIOL es un probiótico en forma de esporas resistentes capaces de sobrevivir incluso al proceso de granulación y/o peletización del pienso. Una vez en el animal, donde la bacteria encuentra un medio adecuado para su desarrollo en términos de nutrientes temperatura y humedad, las esporas que componen el ECOBIOL germinan, pasando entonces la bacteria a producir todos los efectos beneficiosos para el animal. Dicho probiótico se caracteriza además porque presenta un mejor ratio de reproducción en comparación a otras esporas de Bacillus spp y además, es capaz de liberar compuestos químicos que tienen un efecto inhibidor en la población patógena. ECOBIOL is a probiotic in the form of resistant spores capable of surviving even the process of granulation and / or pelletization of feed. Once in the animal, where the bacterium finds a suitable medium for its development in terms of temperature and humidity nutrients, the spores that make up the ECOBIOL germinate, then passing the bacteria to produce all the beneficial effects for the animal. Said probiotic is also characterized in that it has a better reproduction ratio compared to other Bacillus spp spores and is also capable of releasing chemical compounds that have an inhibitory effect on the pathogenic population.

La cepa bacteriana Bacillus cereus CECT 953 es una cepa bacteriana aislada por NOREL S.A., España depositada el 25 de Octubre de 1988 en la Colección Española de Cultivos tipo sita en el Parque Científico de la Universidad de Valencia. Calle Catedrático Agustín Escardino, 9 de Paterna (Valencia) y, que se comercializa como el probiótico ESPORAFEED. The bacterial strain Bacillus cereus CECT 953 is a bacterial strain isolated by NOREL S.A., Spain deposited on October 25, 1988 in the Spanish Collection of Crops type sita in the Science Park of the University of Valencia. Calle Agustín Escardino Professor, 9 de Paterna (Valencia) and, which is marketed as the ESPORAFEED probiotic.

El ESPORAFEED es un probiótico en forma de esporas resistentes capaces de sobrevivir incluso al proceso de granulación de los piensos para alimentación animal. Dicho probiótico se caracteriza por resistir altas temperaturas de granulación, así como agentes físicos y acidificantes. Además, ESPORAFEED produce enzimas que mejoran la digestibilidad de la dieta. Los aditivos descritos en la presente invención se adicionan a la dieta de los animales acuáticos, preferentemente en aquéllos animales de cría mediante acuicultura y que se seleccionan, entre otros, de entre cualquiera de la siguiente lista: crustáceos, moluscos, tilapia, dorada, lubina y salmónidos. ESPORAFEED is a probiotic in the form of resistant spores capable of surviving even the process of granulation of feed for animal feed. Said probiotic is characterized by resisting high granulation temperatures, as well as physical and acidifying agents. In addition, ESPORAFEED produces enzymes that improve the digestibility of the diet. The additives described in the present invention are added to the diet of aquatic animals, preferably in those animals farmed by aquaculture and which are selected, among others, from any of the following list: crustaceans, molluscs, tilapia, gilthead sea bass and salmonids.

El aditivo de la invención actúa como promotor natural del crecimiento, al mostrar una mejora en el factor de conversión del alimento, un incremento en el crecimiento de los animales y en la biomasa, así como un incremento en la supervivencia de los animales a los que se les administra dicho aditivo frente a los animales alimentados sin el aditivo. The additive of the invention acts as a natural growth promoter, showing an improvement in the feed conversion factor, an increase in the growth of animals and biomass, as well as an increase in the survival of the animals to which these additives are administered to animals fed without the additive.

El aditivo de la invención puede contener además otros ingredientes capaces de reforzar el sistema inmune y mejorar la digestibilidad del alimento dando lugar a un aumento en la acción de los probióticos. Entre dichos ingredientes se encuentran las sales de los ácidos orgánicos, siendo preferida la sal sódica del ácido butírico. The additive of the invention may also contain other ingredients capable of strengthening the immune system and improving the digestibility of the food resulting in an increase in the action of probiotics. Among these ingredients are salts of organic acids, with sodium salt of butyric acid being preferred.

Los ácidos orgánicos de cadena corta son capaces de reducir el de pH a nivel estomacal lo que limita el desarrollo de patógenos y ayuda en la digestión de proteínas y, por otro lado, presentan habilidad para entrar en las bacterias, específicamente en aquéllas patógenas y bloquear su metabolismo. Su acción bactericida se ejerce preferentemente entre los géneros: Escherichia, Campylobacter, Clostridium y Salmonella, entre otros. En la presente invención se utiliza el producto de Norel S.A. España comercializado con el nombre de GUSTOR BP70, a partir de aquí y, a lo largo de toda la invención lo llamaremos BP-70. Organic short-chain acids are capable of reducing the pH at the stomach level, which limits the development of pathogens and helps in the digestion of proteins and, on the other hand, they have the ability to enter the bacteria, specifically those pathogens and block Your metabolism Its bactericidal action is exerted preferably between the genera: Escherichia, Campylobacter, Clostridium and Salmonella, among others. In the present invention the product of Norel S.A. is used. Spain marketed under the name of GUSTOR BP70, from here and, throughout the entire invention we will call it BP-70.

El BP-70 está formado por la sal sódica del ácido butírico protegida, frente a una digestión temprana, con una matriz de grasas vegetales, que protegen solo una parte del ingrediente activo y permiten la liberación lenta del producto, asegurando así su acción potenciadora del crecimiento y bactericida en todo el tracto digestivo del animal. Esta protección parcial asegura que una parte del butirato llegue a las partes más lejanas del tracto digestivo de los animales, ejerciendo así su acción. Por una parte, el butirato sódico desprotegido ejercerá su acción en las partes del tracto digestivo más próximas. Por otra, el butirato sódico protegido, va a ejercer su acción en las partes del tracto digestivo más distales, una vez la capa protectora que impide su acción, se haya hidrolizado a lo largo del proceso digestivo. The BP-70 is formed by the sodium salt of protected butyric acid, against early digestion, with a matrix of vegetable fats, which protect only a part of the active ingredient and allow the slow release of the product, thus ensuring its potentiating action growth and bactericide throughout the digestive tract of the animal. This partial protection ensures that a part of the butyrate reaches the farthest parts of the digestive tract of animals, thus exercising its action. On the one hand, unprotected sodium butyrate will exert its action on the nearest parts of the digestive tract. On the other, the protected sodium butyrate will exert its action on the most distal parts of the digestive tract, once the protective layer that prevents its action has hydrolyzed throughout the digestive process.

Los aditivos descritos en la presente invención favorecen además la actividad específica de las enzimas digestivas, preferentemente de las lipasas, proteasas, amilasas y quimiotripsinas, así como el factor de conversión alimenticia, lo que da lugar a un mayor aprovechamiento del alimento y en consecuencia a una mayor biomasa de los animales. The additives described in the present invention further favor the specific activity of digestive enzymes, preferably of lipases, proteases, amylases and chymotrypsins, as well as the food conversion factor, which results in greater use of the food and consequently greater biomass of animals.

Las concentraciones de cada uno de los ingredientes que compren los aditivos de la invención, se incorporan en cantidades suficientes para conseguir las propiedades beneficiosas de los mismos, tales como mejorar el factor de conversión alimenticia, un mejor aprovechamiento del alimento, un incremento en su biomasa y un incremento en la longevidad de los individuos. The concentrations of each of the ingredients purchased by the additives of the invention are incorporated in amounts sufficient to achieve the beneficial properties thereof, such as improving the food conversion factor, a better utilization of the food, an increase in its biomass. and an increase in the longevity of individuals.

Otro objeto descrito en la presente invención se refiere al uso de los aditivos de la invención como promotores del crecimiento de los animales acuáticos, así como promotor de la salud y el bienestar de los mismos, al dotar los aditivos de la invención a los animales alimentados con los mismos de un sistema inmune reforzado. En este sentido, el virus del síndrome de la mancha blanca (WSSV, white spot syndrome virus, en sus siglas en inglés) es el principal patógeno del camarón y los brotes matan en pocos días a la totalidad de las poblaciones de camarones, siendo por lo tanto el responsable de grandes pérdidas de producción/ganancias en esta industria a nivel mundial. Además de infectar a los camarones, el virus tiene una amplia gama de huéspedes, como por ejemplo, crustáceos como cangrejos, langostas espinosas, cangrejos de río, etc. que pueden ser infectados con gravedad variable dependiendo de la etapa vital del crustáceo y de la presencia de factores estresantes externos Another object described in the present invention relates to the use of the additives of the invention as promoters of the growth of aquatic animals, as well as promoter of their health and well-being, by providing the additives of the invention to fed animals. with them from a reinforced immune system. In this sense, the white spot syndrome virus (WSSV) is the main pathogen of shrimp and outbreaks kill all shrimp populations in a few days, being by therefore responsible for large production / profit losses in this industry worldwide. In addition to infecting shrimp, the virus has a wide range of hosts, such as crustaceans such as crabs, spiny lobsters, crayfish, etc. which can be infected with varying severity depending on the vital stage of the crustacean and the presence of external stressors

(temperatura, salinidad, enfermedades bacterianas, contaminantes, etc). Los signos clínicos de la “mancha blanca” incluyen una súbita reducción del consumo de alimentos, letargo, pérdida de cutícula, decoloración y la (temperature, salinity, bacterial diseases, contaminants, etc.). The clinical signs of "white spot" include a sudden reduction in food consumption, lethargy, cuticle loss, discoloration and

presencia de manchas blancas de 0,5 a 2,0 mm de diámetro en la superficie interior del caparazón, apéndices y sobre la cutícula de los segmentos abdominales. Hasta ahora no existe ningún tratamiento efectivo para controlar la infección provocada por dicho virus, pero los animales acuáticos alimentados con los diferentes aditivos descritos aquí, al tener reforzado su sistema inmune gracias a los aditivos de la invención, no muestran signos de la enfermedad, por lo tanto, los aditivos de la invención son capaces de prevenir la infección por el virus de la mancha blanca. presence of white spots of 0.5 to 2.0 mm in diameter on the inner surface of the shell, appendages and on the cuticle of the abdominal segments. Until now there is no effective treatment to control the infection caused by said virus, but aquatic animals fed with the different additives described here, having their immune system reinforced thanks to the additives of the invention, show no signs of the disease. therefore, the additives of the invention are capable of preventing infection by the white spot virus.

Otro objeto de la presente invención se refiere a un método para promover el crecimiento de los animales acuáticos mediante la administración del aditivo descrito en la invención, dado que dicho aditivo es capaz de dar lugar a un mayor aprovechamiento del alimento consumido. Another object of the present invention relates to a method for promoting the growth of aquatic animals by administering the additive described in the invention, since said additive is capable of giving greater use to the food consumed.

Otros objetos, características y ventajas de la presente invención serán fácilmente evidentes para los expertos en la técnica. Other objects, features and advantages of the present invention will be readily apparent to those skilled in the art.

A efectos de la presente invención se definen los siguientes términos: For the purposes of the present invention the following terms are defined:

El término “acuicultura” se refiere al conjunto de actividades técnicas y conocimientos de cultivo de especies acuáticas vegetales y animales. Es una importante actividad económica de producción de alimentos, materias primas de uso industrial y farmacéutico, y organismos vivos para repoblación u ornamentación. Los sistemas de cultivo pueden ser de agua dulce o agua de mar. Los cultivos más habituales corresponden a organismos planctónicos (microalgas y Artemia), macroalgas, moluscos, crustáceos y peces. The term "aquaculture" refers to the set of technical activities and knowledge of cultivation of aquatic species of plants and animals. It is an important economic activity of food production, raw materials for industrial and pharmaceutical use, and living organisms for repopulation or ornamentation. Cultivation systems can be freshwater or seawater. The most common crops correspond to planktonic organisms (microalgae and Artemia), macroalgae, molluscs, crustaceans and fish.

El término "aditivo dietético", “aditivo alimenticio” , “aditivo para alimentación” o “suplemento dietético”, a efectos de la presente invención se refiere a una composición destinada a ser ingerida junto con la dieta normal del animal. El aditivo descrito en la invención puede comprender al menos un probiótico, solo o en combinación con otros ingredientes, preferentemente, sales de ácidos orgánicos. The term "dietary additive", "food additive", "feed additive" or "dietary supplement", for the purposes of the present invention refers to a composition intended to be ingested together with the normal diet of the animal. The additive described in the invention may comprise at least one probiotic, alone or in combination with other ingredients, preferably salts of organic acids.

A efectos de la presente invención se denominan “promotores o estimulantes del crecimiento” a los aditivos que forman parte de la dieta animal y que cumplen con la función de mejorar el aumento de peso diario de los animales (GDP), así como el factor de conversión alimenticia. En la presente invención, los promotores o estimulantes del crecimiento pueden ser administrados de diferentes maneras, ya sean inyectados, en implantes For the purposes of the present invention, "growth promoters or stimulants" are called additives that are part of the animal diet and that fulfill the function of improving the animals' daily weight gain (GDP), as well as the factor of food conversion In the present invention, growth promoters or stimulants can be administered in different ways, whether injected, in implants.

o como un aditivo en el alimento o piensos de los animales. Se prefiere la administración como un aditivo en el alimento o pienso. En la presente invención, el efecto sobre el crecimiento se mide como incremento de la biomasa. or as an additive in animal feed or feed. Administration as an additive in the food or feed is preferred. In the present invention, the effect on growth is measured as an increase in biomass.

A los efectos de la presente invención, el término ácido orgánico se refiere a compuestos que contienen en su fórmula uno o más grupos carboxílicos (-COOH), generadores de protones, que pueden tener además diferentes grupos funcionales tales como hidroxiácidos, cetoácidos, ácidos aromáticos, compuestos heterocíclicos, así como amidas y lactonas. Los ácidos orgánicos utilizados en la presente invención son preferentemente ácidos grasos volátiles, preferentemente de cadena corta y entre los que se pueden seleccionar: ácido butírico, ácido propiónico, ácido fórmico, ácido láctico, ácido cítrico, ácido láurico, ácido cúprico, ácido caprílico, ácido caproico, ácido acético, entre otros. Las proporciones en las que se encuentra el ácido orgánico en el aditivo para alimentación animal descrito en la presente invención, suelen variar entre un 30 y un 70% en peso de producto total húmedo, siendo la proporción preferida de un 50%. For the purposes of the present invention, the term "organic acid" refers to compounds that contain in its formula one or more carboxylic groups (-COOH), proton generators, which may also have different functional groups such as hydroxy acids, keto acids, aromatic acids , heterocyclic compounds, as well as amides and lactones. The organic acids used in the present invention are preferably volatile fatty acids, preferably short chain and from which can be selected: butyric acid, propionic acid, formic acid, lactic acid, citric acid, lauric acid, cupric acid, caprylic acid, caproic acid, acetic acid, among others. The proportions in which the organic acid is found in the animal feed additive described in the present invention, usually vary between 30 and 70% by weight of total wet product, the preferred proportion being 50%.

En el contexto de la presente invención, “probiótico”, se refiere a cualquier tipo de micro-organismo viable aplicado a un huésped animal u hombre, y que afecta beneficiosamente al huésped, debido a sus efectos beneﬁciosos, en la salud o en el aumento de la resistencia a enfermedades, que éste pueda tener sobre su consumidor. Los probióticos pueden exhibir una o más de las características siguientes, no limitantes: no patógenos o no tóxicos para el huésped; están presentes como células viables, capaces de sobrevivir en el medio intestinal (por ejemplo, a bajo pH y a los ácidos y las secreciones gastrointestinales), adherencia a las células epiteliales, particularmente a las células epiteliales del tracto gastrointestinal, actividad microbicida o microbiostática o efecto hacia las bacterias patógenas; actividad anticancerígena; actividad de modulación inmune; actividad moduladora de la actividad hacia la flora endógena; mejoramiento de la salud del tracto urogenital; actividad antiséptica en o alrededor de las heridas; reducción de la diarrea; reducción de las reacciones alérgicas; reducción en la enterocolitis necrotizante neonatal; reducción en la enfermedad inflamatoria intestinal y reducción de la permeabilidad intestinal. In the context of the present invention, "probiotic" refers to any type of viable micro-organism applied to an animal or human host, and which beneficially affects the host, due to its beneficial effects, on health or on the increase of disease resistance, which it may have on its consumer. Probiotics may exhibit one or more of the following, non-limiting characteristics: non-pathogenic or non-toxic to the host; they are present as viable cells, capable of surviving in the intestinal environment (for example, at low pH and acids and gastrointestinal secretions), adhesion to epithelial cells, particularly to epithelial cells of the gastrointestinal tract, microbicidal or microbiostatic activity or effect towards pathogenic bacteria; anticancer activity; immune modulation activity; activity modulating the activity towards the endogenous flora; improvement of the health of the urogenital tract; antiseptic activity in or around wounds; diarrhea reduction; reduction of allergic reactions; reduction in neonatal necrotizing enterocolitis; reduction in inflammatory bowel disease and reduction of intestinal permeability.

A efectos de la presente invención, el término "viable" se refiere a un microorganismo vivo capaz de reproducirse y/o de colonizar. For the purposes of the present invention, the term "viable" refers to a living microorganism capable of reproducing and / or colonizing.

Tal como se utiliza en el presente documento, las formas singulares "un", "un", y "el" incluyen referencia plural a menos que el contexto indique claramente otra cosa. As used herein, the singular forms "a", "a", and "the" include plural reference unless the context clearly indicates otherwise.

Del mismo modo, las palabras "comprender" y "comprende" deben ser interpretados de manera inclusiva y no exclusiva, abarcando, recíprocamente, los términos “consistir” y “consiste”. Similarly, the words "understand" and "understand" must be interpreted in an inclusive and non-exclusive manner, encompassing, reciprocally, the terms "consist" and "consist".

Description of the figures

Figura 1. Biomasa del camarón Litopenaeus vannamei de aproximadamente 0.85 g de peso, analizada cada 10 días, durante un periodo total de 60 días. Los camarones fueron alimentados con el alimento estándar al que se añadieron los diferentes aditivos de la invención a la concentración de 2g/Kg dieta estándar: ECOBIOL que contiene el probiótico CECT 5940 (primera columna-barra cuadriculada), o ECOBIOL PLUS que contiene el probiótico CECT 5940+BP70 (segunda columna-barra blanca), o ECOBIOL SUPER que contiene la combinación de los probióticos CECT 5940+CECT 953+BP70 (tercera columna-barra negra) o exclusivamente la dieta estándar (grupo control) (cuarta columna-barra rayada). En el eje X se muestra el tiempo expresado en días y en el eje Y la biomasa expresada en gramos. * p<0.05 vs control. Figure 1. Litopenaeus vannamei shrimp biomass of approximately 0.85 g in weight, analyzed every 10 days, for a total period of 60 days. The shrimp were fed with the standard food to which the different additives of the invention were added to the concentration of 2g / Kg standard diet: ECOBIOL containing the probiotic CECT 5940 (first column-grid bar), or ECOBIOL PLUS containing the probiotic CECT 5940 + BP70 (second column-white bar), or ECOBIOL SUPER containing the combination of CECT 5940 + CECT 953 + BP70 (third column-black bar) probiotics or exclusively the standard diet (control group) (fourth column-bar striped). The time expressed in days is shown on the X axis and the biomass expressed in grams on the Y axis. * p <0.05 vs control.

Figura 2. Porcentaje de supervivencia de Litopenaeus vannamei de aproximadamente 0.85 g de peso, analizado cada 10 días, durante un periodo total de 60 días alimentando a los camarones con una dieta estándar a la que se añadieron los diferentes aditivos de la invención a la concentración de 2g/Kg dieta estándar: ECOBIOL que contiene el probiótico CECT 5940 (línea discontinua con rombo), o ECOBIOL PLUS que contiene el probiótico CECT 5940+BP70 (línea continua con círculo), o ECOBIOL SUPER que contiene la combinación de los probióticos CECT 5940+CECT 953+BP70 (línea discontinua con triángulo) o exclusivamente la dieta estándar (línea continua con cuadrado). En el eje X se muestra el tiempo expresado en días y en el eje Y la supervivencia expresada en forma de porcentaje. * p<0.05 vs control. Figure 2. Litopenaeus vannamei survival percentage of approximately 0.85 g of weight, analyzed every 10 days, for a total period of 60 days feeding shrimp with a standard diet to which the different additives of the invention were added to the concentration 2g / Kg standard diet: ECOBIOL containing the CECT 5940 probiotic (broken line with rhombus), or ECOBIOL PLUS containing the CECT 5940 + BP70 probiotic (continuous circle line), or ECOBIOL SUPER containing the combination of CECT probiotics 5940 + CECT 953 + BP70 (dashed line with triangle) or exclusively the standard diet (continuous line with square). The time expressed in days is shown on the X axis and the survival expressed as a percentage on the Y axis. * p <0.05 vs control.

Figura 3. Factor de conversión alimenticia (gramos de alimento por gramo de biomasa cosechada) de Litopenaeus vannamei de aproximadamente 0.85 g de peso, al final de los 60 días del cultivo, alimentados con su dieta estándar más los aditivos descritos en la invención, ECOBIOL que contiene el probiótico CECT 5940, o ECOBIOL PLUS que contiene el probiótico CECT 5940+BP70, o ECOBIOL SUPER que contiene la combinación de los probióticos CECT 5940+CECT 953+BP70 o exclusivamente la dieta estándar (grupo control). Figure 3. Food conversion factor (grams of food per gram of biomass harvested) of Litopenaeus vannamei of approximately 0.85 g of weight, at the end of the 60 days of the crop, fed with its standard diet plus the additives described in the invention, ECOBIOL containing the CECT 5940 probiotic, or ECOBIOL PLUS containing the CECT 5940 + BP70 probiotic, or ECOBIOL SUPER containing the combination of the CECT 5940 + CECT 953 + BP70 probiotics or exclusively the standard diet (control group).

Figura 4. Biomasa de Litopenaeus vannamei de aproximadamente 7.0 g de peso, analizada cada 10 días, durante un periodo total de 60 días. Los camarones fueron alimentados con el alimento estándar al que se añadieron los diferentes aditivos de la invención a la concentración de 2g/Kg de dieta estándar: ECOBIOL que contiene el probiótico CECT 5940 (primera columna-barra cuadriculada), o ECOBIOL PLUS que contiene el probiótico CECT 5940+BP70 (segunda columna-barra blanca), o ECOBIOL SUPER que contiene la combinación de los probióticos CECT 5940+CECT 953+BP70 (tercera columna-barra negra) o exclusivamente la dieta estándar (grupo control) (cuarta columna-barra rayada). En el eje X se muestra el tiempo expresado en días y en el eje Y la biomasa expresada en gramos. * p<0.05. Figure 4. Litopenaeus vannamei biomass of approximately 7.0 g weight, analyzed every 10 days, for a total period of 60 days. The shrimp were fed with the standard food to which the different additives of the invention were added to the concentration of 2g / kg of standard diet: ECOBIOL containing the probiotic CECT 5940 (first column-grid bar), or ECOBIOL PLUS containing the CECT 5940 + BP70 probiotic (second column-white bar), or ECOBIOL SUPER containing the combination of CECT 5940 + CECT 953 + BP70 probiotics (third column-black bar) or exclusively the standard diet (control group) (fourth column- striped bar). The time expressed in days is shown on the X axis and the biomass expressed in grams on the Y axis. * p <0.05.

Figura 5. Porcentaje de supervivencia de Litopenaeus vannamei de aproximadamente 7.0 g de peso, analizado cada 10 días, durante un periodo total de 60 días alimentando a los camarones con una dieta estándar a la que se añadieron los diferentes aditivos de la invención a la concentración de 2g/Kg de dieta estándar: ECOBIOL que contiene el probiótico CECT 5940 (línea discontinua con rombo), o ECOBIOL PLUS que contiene el probiótico CECT 5940+BP70 (línea continua con círculo), o ECOBIOL SUPER que contiene la combinación de los probióticos CECT 5940+CECT 953+BP70 (línea discontinua con triángulo) o exclusivamente la dieta estándar (grupo control) (línea continua con un aspa). En el eje X se muestra el tiempo expresado en días y en el eje Y la supervivencia expresada en forma de porcentaje. Figure 5. Litopenaeus vannamei survival percentage of approximately 7.0 g weight, analyzed every 10 days, for a total period of 60 days feeding shrimp with a standard diet to which the different additives of the invention were added to the concentration of 2g / kg of standard diet: ECOBIOL containing the probiotic CECT 5940 (broken line with rhombus), or ECOBIOL PLUS containing the probiotic CECT 5940 + BP70 (continuous line with circle), or ECOBIOL SUPER containing the combination of probiotics CECT 5940 + CECT 953 + BP70 (dashed line with triangle) or exclusively the standard diet (control group) (continuous line with a cross). The time expressed in days is shown on the X axis and the survival expressed as a percentage on the Y axis.

Figura 6. Factor de conversión alimenticia (gramos de alimento por gramo de biomasa cosechada) de Litopenaeus vannamei de aproximadamente 7.0 g de peso, al final de los 60 días del cultivo, alimentados con su dieta estándar más los aditivos descritos en la invención, a la concentración de 2g/Kg de dieta estándar: ECOBIOL que contiene el probiótico CECT 5940, o ECOBIOL PLUS que contiene el probiótico CECT 5940+BP70 o ECOBIOL SUPER que contiene la combinación de los probióticos CECT 5940+CECT 953+BP70 o exclusivamente la dieta estándar (grupo control). Figure 6. Food conversion factor (grams of food per gram of harvested biomass) of Litopenaeus vannamei of approximately 7.0 g of weight, at the end of the 60 days of the crop, fed with its standard diet plus the additives described in the invention, to the concentration of 2g / Kg of standard diet: ECOBIOL containing the CECT 5940 probiotic, or ECOBIOL PLUS containing the CECT 5940 + BP70 or ECOBIOL SUPER probiotic containing the combination of the CECT 5940 + CECT 953 + BP70 probiotics or exclusively the diet standard (control group).

Figura 7. Respuesta de la actividad enzimática digestiva en los hepatopáncreas del camarón Litopenaeus vannamei, ante el estímulo de dietas conteniendo los diferentes tipos de probióticos: ECOBIOL que contiene el probiótico CECT 5940 (línea discontinua con rombo), o ECOBIOL PLUS que contiene el probiótico CECT 5940+BP70 (línea continua con círculo), o ECOBIOL SUPER que contiene la combinación de los probióticos CECT 5940+CECT 953+BP70 (línea discontinua con triángulo) o exclusivamente la dieta estándar (grupo control) (línea continua con cuadrado). A tiempo 0 los camarones aún no recibían el alimento; 1, 2, 3, 4 y 5h corresponden al tiempo después de que los camarones recibieron el alimento. (a)= Lipasas, (b)= Proteasas, (c) Amilasas y (d)= Quimiotripsinas. En el eje X se muestra el tiempo expresado en horas y en el eje Y se muestra la actividad enzimática específica expresada como U/mg proteína. Figure 7. Response of the digestive enzymatic activity in the hepatopancreas of the Litopenaeus vannamei shrimp, given the stimulation of diets containing the different types of probiotics: ECOBIOL containing the probiotic CECT 5940 (broken line with rhombus), or ECOBIOL PLUS containing the probiotic CECT 5940 + BP70 (continuous line with circle), or ECOBIOL SUPER which contains the combination of the probiotics CECT 5940 + CECT 953 + BP70 (dashed line with triangle) or exclusively the standard diet (control group) (continuous line with square). In time 0 the shrimp still did not receive the food; 1, 2, 3, 4 and 5h correspond to the time after the shrimp received the food. (a) = Lipases, (b) = Proteases, (c) Amylases and (d) = Chymotrypsins. The time expressed in hours is shown on the X axis and the specific enzymatic activity expressed as U / mg protein is shown on the Y axis.

Detailed description of the invention

Un aspecto de la presente invención se refiere a un aditivo para alimentación de animales acuáticos que comprende la combinación de, al menos, dos especies pertenecientes al género Bacillus, seleccionadas de entre One aspect of the present invention relates to an additive for feeding aquatic animals comprising the combination of at least two species belonging to the genus Bacillus, selected from among

B. amyloliquefaciens y Bacillus cereus. B. amyloliquefaciens and Bacillus cereus.

En una realización preferida, el aditivo de la invención comprende las cepas Bacillus amyloliquefaciens cepa CECT 5940 y Bacillus cereus cepa CECT 953. In a preferred embodiment, the additive of the invention comprises strains Bacillus amyloliquefaciens strain CECT 5940 and Bacillus cereus strain CECT 953.

En otra realización preferida de la invención, el aditivo para alimentación de animales acuáticos puede comprender además otros probióticos seleccionados de entre cualquiera de los siguientes géneros: In another preferred embodiment of the invention, the feed additive for aquatic animals may further comprise other probiotics selected from any of the following genera:

Bifidobacterium, Bacteroides, Clostridium, Fusobacterium, Melissococcus, Propionibacterium, Streptococcus, Enterococcus, Lactococcus, Staphylococcus, Peptostrepococcus, Bacillus, Pediococcus, Micrococcus, Leuconostoc, Weissella, Aerococcus, Oenococcus y Lactobacillus. Bifidobacterium, Bacteroides, Clostridium, Fusobacterium, Melissococcus, Propionibacterium, Streptococcus, Enterococcus, Lactococcus, Staphylococcus, Peptostrepococcus, Bacillus, Pediococcus, Micrococcus, Leuconostoc, Weissella, Aerococcus Ousella, Aerococcus Ousella, Aerococcus Ousella, Aerococcus Ousella, Aerococcus Ousella, Aerococcus

En realizaciones preferidas, los probióticos comprenden al menos una cepa adecuada o subespecie de entre: Enterococcus, Streptococcus, Lactobacillus, Lactococcus, Bifidobacterium y Pediococcus y/o combinaciones de las mismas. En una realización más preferida de la invención la cepa se seleccionan del género Pediococcus, preferentemente de la especie Pediococcus acidilactici, y en una realización más preferida, el probiótico más preferido es Pediococcus acidilactici cepa CNCM MA 18/5 M, depositado en la Colección Nacional de Cultivos de Microorganismos (CNCM) del Instituto Pasteur de París. In preferred embodiments, the probiotics comprise at least one suitable strain or subspecies from among: Enterococcus, Streptococcus, Lactobacillus, Lactococcus, Bifidobacterium and Pediococcus and / or combinations thereof. In a more preferred embodiment of the invention the strain is selected from the genus Pediococcus, preferably from the species Pediococcus acidilactici, and in a more preferred embodiment, the most preferred probiotic is Pediococcus acidilactici strain CNCM MA 18/5 M, deposited in the National Collection of Cultures of Microorganisms (CNCM) of the Pasteur Institute in Paris.

Los aditivos descritos en la presente invención incluyen probióticos en una cantidad adecuada para mejorar el sistema inmunológico, para aumentar los efectos beneficiosos de los probióticos y/o para incrementar la biomasa de los animales y/o extender la vida de los mismos. En general, los aditivos alimenticios comprenden aproximadamente de 105 a 1010 UFC/g de pienso para cada uno de los probióticos utilizados, siendo preferida una concentración de aproximadamente 106 UFC/g de pienso, de cada uno de los probióticos utilizados. The additives described in the present invention include probiotics in an amount suitable to improve the immune system, to increase the beneficial effects of the probiotics and / or to increase the biomass of the animals and / or extend their life. In general, food additives comprise approximately 105 to 1010 CFU / g of feed for each of the probiotics used, with a concentration of approximately 106 CFU / g of feed being preferred, of each of the probiotics used.

El experto en la técnica puede determinar la cantidad apropiada de los probióticos que se añade al aditivo de la invención. Dichos factores que pueden tenerse en cuenta son el promedio de consumo de determinados tipos de composiciones de diferentes animales, si el animal que tiene la intención de ingerir los suplementos dietéticos tiene algún problema de salud en particular, el bienestar o las necesidades nutricionales, o sufre de una enfermedad o trastorno, la edad, sexo, tamaño o especie del animal. Las concentraciones de los probióticos para ser añadidos al aditivo de la invención pueden calcularse sobre la base de los requerimientos de energía y nutrientes del animal. The person skilled in the art can determine the appropriate amount of probiotics that is added to the additive of the invention. These factors that can be taken into account are the average consumption of certain types of compositions of different animals, if the animal that intends to ingest dietary supplements has a particular health problem, well-being or nutritional needs, or suffers of a disease or disorder, the age, sex, size or species of the animal. The concentrations of probiotics to be added to the additive of the invention can be calculated based on the energy and nutrient requirements of the animal.

En otra realización preferida de la invención el aditivo comprende además al menos una sal de un ácido orgánico. In another preferred embodiment of the invention the additive further comprises at least one salt of an organic acid.

En otra realización preferida, los ácidos orgánicos se seleccionan de entre cualquiera de los siguientes: butírico, propiónico, fórmico, láctico, cítrico, láurico, cúprico, caprílico, caproico o acético. In another preferred embodiment, the organic acids are selected from any of the following: butyric, propionic, formic, lactic, citric, lauric, cupric, caprylic, caproic or acetic.

En otra realización más preferida de la invención, las sales de los ácidos orgánicos se seleccionan de entre cualquiera de la lista: sódica, cálcica, cúprica o potásica. Las proporciones en las que se encuentra la sal del ácido orgánico en el aditivo para alimentación animal descrito en la presente invención, suele variar entre un 30 y un 70% en peso del aditivo final húmedo, siendo la proporción preferida de un 60%. In another more preferred embodiment of the invention, the salts of the organic acids are selected from any of the list: sodium, calcium, cupric or potassium. The proportions in which the organic acid salt is found in the animal feed additive described in the present invention, usually varies between 30 and 70% by weight of the wet final additive, the preferred proportion being 60%.

En otra realización aún más preferida, la sal del ácido orgánico que comprende el aditivo de la invención es la sal sódica del ácido butírico (butirato sódico), aunque puede ser utilizada cualquiera de las sales de los ácidos descritos previamente. In another even more preferred embodiment, the organic acid salt comprising the additive of the invention is the sodium salt of butyric acid (sodium butyrate), although any of the salts of the acids described previously may be used.

En otra realización preferida el aditivo de la invención se caracteriza por que comprende una combinación de los probióticos B. amyloliquefaciens CECT 5940 y B. cereus CECT 953 junto con sal sódica del ácido butírico. In another preferred embodiment the additive of the invention is characterized in that it comprises a combination of the probiotics B. amyloliquefaciens CECT 5940 and B. cereus CECT 953 together with sodium salt of butyric acid.

Los aditivos de la invención, pueden comprender adicionalmente también sustancias tales como: minerales, vitaminas, proteínas, aminoácidos, colorantes, conservantes, etc. Ejemplos no limitantes de minerales incluyen por ejemplo: calcio, fósforo, potasio, sodio, hierro, cloro, cobre, zinc, magnesio, manganeso, selenio, etc. Ejemplos no limitantes de vitaminas incluyen por ejemplo: Vitamina A, diferentes tipos de Vitamina B (niacina, ácido pantoténico, ácido fólico, biotina) Vitamina D y Vitamina K. The additives of the invention may additionally also comprise substances such as: minerals, vitamins, proteins, amino acids, dyes, preservatives, etc. Non-limiting examples of minerals include for example: calcium, phosphorus, potassium, sodium, iron, chlorine, copper, zinc, magnesium, manganese, selenium, etc. Non-limiting examples of vitamins include for example: Vitamin A, different types of Vitamin B (niacin, pantothenic acid, folic acid, biotin) Vitamin D and Vitamin K.

Otro de los objetos descritos en la presente invención se refiere al uso de los aditivos descritos en el presente documento en la cría de animales acuáticos, como promotores del crecimiento de dichos animales, siendo capaces de favorecer el factor de conversión del alimento, así como la actividad específica de enzimas digestivas, preferentemente de lipasas, proteasas, amilasas y quimiotripsinas. Another of the objects described in the present invention relates to the use of the additives described herein in the breeding of aquatic animals, as growth promoters of said animals, being able to favor the food conversion factor, as well as the specific activity of digestive enzymes, preferably of lipases, proteases, amylases and chymotrypsins.

En una realización preferida de la invención, los aditivos descritos aquí se usan para promover la salud y el bienestar de los animales acuáticos. In a preferred embodiment of the invention, the additives described herein are used to promote the health and welfare of aquatic animals.

En otra realización preferida de la invención, los probióticos descritos aquí, preferentemente los probióticos seleccionados entre B. amyloliquefaciens, B. cereus, B. subtilis y B. licheniformis y/o combinaciones de los mismos, se utilizan en la cría de animales acuáticos. In another preferred embodiment of the invention, the probiotics described herein, preferably the probiotics selected from B. amyloliquefaciens, B. cereus, B. subtilis and B. licheniformis and / or combinations thereof, are used in the breeding of aquatic animals.

En otra realización más preferida, los probióticos utilizados para la cría de animales acuáticos son preferentemente el probiótico B. amyloliquefaciens cepa CECT 5940 y el probiótico B. cereus cepa CECT 953. In another more preferred embodiment, the probiotics used for the breeding of aquatic animals are preferably the probiotic B. amyloliquefaciens strain CECT 5940 and the probiotic B. cereus strain CECT 953.

En otra realización más preferida, los probióticos utilizados para la cría de animales acuáticos se caracterizan por que además puede incluir un probiótico adicional del género Pediococcus, preferentemente la especie Pediococcus acidilactici y más preferentemente la cepa CNCM MA 18/5 M, depositado en la Colección Nacional de Cultivos de Microorganismos (CNCM) del Instituto Pasteur de París. In another more preferred embodiment, the probiotics used for the breeding of aquatic animals are characterized in that they can also include an additional probiotic of the genus Pediococcus, preferably the species Pediococcus acidilactici and more preferably the strain CNCM MA 18/5 M, deposited in the Collection National Crops of Microorganisms (CNCM) of the Pasteur Institute in Paris.

En otra realización más preferida de la invención, los probióticos utilizados para la cría de animales acuáticos se caracterizan por que además comprenden al menos una sal de un ácido orgánico, encontrándose dicha sal del ácido orgánico preferentemente en una proporción de entre un 30-70% en peso húmedo, siendo más preferible una proporción del 60%. In another more preferred embodiment of the invention, the probiotics used for the breeding of aquatic animals are characterized in that they further comprise at least one salt of an organic acid, said salt of the organic acid being preferably in a proportion of between 30-70% in wet weight, a proportion of 60% being more preferable.

En otra realización más preferida de la invención, los ácidos orgánicos se seleccionan de entre cualquiera de lo siguientes: butírico, propiónico, fórmico, láctico, cítrico, láurico, cúprico, caprílico, caproico o acético. In another more preferred embodiment of the invention, the organic acids are selected from any of the following: butyric, propionic, formic, lactic, citric, lauric, cupric, caprylic, caproic or acetic.

En otra realización más preferida de la invención, las sales de ácidos orgánicos se seleccionan de entre cualquiera de la lista: sódica, cálcica, cúprica o potásica. In another more preferred embodiment of the invention, the salts of organic acids are selected from any of the list: sodium, calcium, cupric or potassium.

En otra realización más preferida aún de la invención, los probióticos utilizados para la cría de animales 5 acuáticos se caracterizado por que la sal del ácido orgánico es la sal sódica del ácido butírico. In another even more preferred embodiment of the invention, the probiotics used for the breeding of aquatic animals are characterized in that the organic acid salt is the sodium salt of butyric acid.

En otra realización más preferida de la invención, los probióticos utilizados para la cría de animales acuáticos comprenden una combinación de los probióticos B. amyloliquefaciens CECT 5940 y B. cereus CECT 953 junto con sal sódica del ácido butírico. In another more preferred embodiment of the invention, the probiotics used for the breeding of aquatic animals comprise a combination of the probiotics B. amyloliquefaciens CECT 5940 and B. cereus CECT 953 together with sodium salt of butyric acid.

En otra realización preferida de la invención, los animales acuáticos se seleccionan de entre cualquiera de la lista: moluscos, crustáceos, tilapia, dorada, lubina y salmónidos, siendo preferidos los crustáceos, preferentemente los camarones. In another preferred embodiment of the invention, aquatic animals are selected from any of the list: mollusks, crustaceans, tilapia, gilthead sea bass, and salmonids, with crustaceans being preferred, preferably shrimp.

15 Todos los porcentajes expresados aquí son en peso de la composición de aditivo en base a materia seca a menos que específicamente se indique lo contrario. All percentages expressed herein are by weight of the additive composition based on dry matter unless specifically indicated otherwise.

La invención no se limita a la metodología en particular, los protocolos y reactivos descritos en este documento, ya que pueden variar. Además, la terminología usada aquí es para el propósito de describir las realizaciones particulares solamente y no está destinado a limitar el alcance de la presente invención. The invention is not limited to the particular methodology, protocols and reagents described herein, as they may vary. In addition, the terminology used here is for the purpose of describing particular embodiments only and is not intended to limit the scope of the present invention.

A menos que se defina otra cosa, todos los términos técnicos, científicos y cualquier acrónimo utilizado aquí tiene el mismo significado como se entiende comúnmente por un experto medio en la técnica dentro del campo de la invención. Unless otherwise defined, all technical, scientific and any acronym terms used here have the same meaning as commonly understood by a person skilled in the art within the scope of the invention.

25 Los ejemplos que se describen a continuación tienen como objetivo ilustrar la presente invención, pero sin limitar el alcance de la misma. The examples described below are intended to illustrate the present invention, but without limiting the scope thereof.

Ejemplo 1. Respuesta del crecimiento y supervivencia del camarón blanco Litopenaeus vannamei alimentado con dieta estándar suplementada con los aditivos de la invención. Example 1. Growth response and survival of the white shrimp Litopenaeus vannamei fed a standard diet supplemented with the additives of the invention.

Se utilizaron camarones de la especie Litopenaeus vannamei, seleccionados al azar, con un peso promedio de Shrimp of the Litopenaeus vannamei species, randomly selected, with an average weight of

0.85 g. Dichos camarones fueron previamente aclimatados durante 72 horas en un tanque de 2500 litros de agua 0.85 g These shrimp were previously acclimatized for 72 hours in a 2500 liter water tank

35 marina con 36.0 UPS (unidades prácticas de salinidad), aireación constante (>4.0 mg/l de oxígeno), temperatura controlada (30 a 34°C) y pH de 7.5 a 8.0. Los camarones se cultivaron en acuarios de 10 L, con agua marina y conservando las variables de calidad mencionadas anteriormente. Los ensayos se llevaron a cabo con un total de 8 camarones por acuario con seis replicaciones para cada uno de los aditivos alimenticios utilizados en la presente invención. El experimento tuvo una duración de 60 días, con biometrías cada 10 diez días con el fin de evaluar las tasas de crecimiento, supervivencia y biomasa. La biomasa se refiere a la suma de los pesos individuales de los camarones presentes en cada uno de los tratamientos con los diferentes aditivos dietéticos. 35 marine with 36.0 UPS (practical salinity units), constant aeration (> 4.0 mg / l oxygen), controlled temperature (30 to 34 ° C) and pH 7.5 to 8.0. The shrimp were grown in 10 L aquariums, with sea water and keeping the quality variables mentioned above. The tests were carried out with a total of 8 shrimp per aquarium with six replications for each of the food additives used in the present invention. The experiment lasted 60 days, with biometrics every 10 to 10 days in order to assess growth, survival and biomass rates. Biomass refers to the sum of the individual weights of shrimp present in each of the treatments with the different dietary additives.

Para la elaboración de las dietas se utilizó un alimento/pienso comercial utilizado comúnmente para la alimentación de los camarones con un 35% de proteína el cual fue molido y tamizado a 200 micras. Los For the preparation of the diets, a commercial feed / feed commonly used for feeding shrimp with 35% protein was used, which was ground and sieved at 200 microns. The

45 diferentes probióticos fueron agregados en forma de aditivo a la dieta estándar a razón de 2g/Kg de alimento. Una vez incorporado el aditivo a la dieta estándar, la mezcla fue homogenizada y pasada por un molino para carnes y finalmente por un horno de secado a 40°C durante 12 horas. El alimento fue colocado en comederos; el alimento no consumido posterior a las dos horas fue retirado y posteriormente pesado para su análisis. Las cuatro dietas analizadas que contenían los suplementos dietéticos o aditivos descritos en la presente invención se describen en la Tabla 1. 45 different probiotics were added as an additive to the standard diet at a rate of 2g / kg of food. Once the additive was incorporated into the standard diet, the mixture was homogenized and passed through a meat grinder and finally by a drying oven at 40 ° C for 12 hours. The food was placed in feeders; food not consumed after two hours was removed and subsequently weighed for analysis. The four analyzed diets containing the dietary supplements or additives described in the present invention are described in Table 1.

Tabla 1. Los camarones se alimentaron tres veces al día ad limitum de acuerdo con el siguiente programa de alimentación. Table 1. Shrimp were fed three times a day ad limitum according to the following feeding program.

Grupo Group: Dieta Suplemento dietético Dosis / Vía Diet Dietary supplement Dose / Way

1 one: ECOBIOL CECT 5940 Saciedad/Oral ECOBIOL CECT 5940 Satiety / Oral

2 2: ECOBIOL PLUS CECT 5940+BP-70 Saciedad/Oral ECOBIOL PLUS CECT 5940 + BP-70 Satiety / Oral

3 3: ECOBIOL SÚPER CECT 5940+CECT 953+BP-70 Saciedad/Oral SUPER ECOBIOL CECT 5940 + CECT 953 + BP-70 Satiety / Oral

4 4: Control Dieta estándar Saciedad/Oral Control Standard diet Satiety / Oral

Por consiguiente, cuando en la presente descripción se habla de alimento en los ensayos llevados a cabo, este término comprende tanto la dieta estándar suministrada a los controles, formada por el alimento comercial arriba indicado, como la mezcla de éste con los diferentes aditivos de la invención. Therefore, when the present description refers to food in the tests carried out, this term includes both the standard diet supplied to the controls, formed by the commercial food indicated above, and the mixture thereof with the different additives of the invention.

Como se ha indicado previamente a lo largo del presente documento, el probiótico ECOBIOL comprende la bacteria B. amyloliquefaciens cepa CECT 5940, el probiótico ECOBIOL PLUS que contiene la bacteria B. amyloliquefaciens cepa CECT 5940 junto con la sal sódica del ácido butírico BP70. Como se ha mencionado previamente, la sal sódica del ácido butírico, específicamente la composición de Norel, S.A. llamada BP-70 está formada, por un 70% en peso húmedo de butirato sódico y un 30% en peso húmedo de grasas vegetales. El 30% de la grasa vegetal protege aproximadamente el 43% del butirato sódico total, así por tanto, el producto BP-70 se puede decir que está formado por un 30% de butirato sódico protegido y por un 40% de butirato sódico sin proteger. El probiótico ECOBIOL SUPER contiene la combinación de las bacterias B. amyloliquefaciens cepa CECT 5940, junto B. cereus cepa 953 y junto con BP70. As previously indicated throughout the present document, the ECOBIOL probiotic comprises the bacteria B. amyloliquefaciens strain CECT 5940, the probiotic ECOBIOL PLUS containing the bacteria B. amyloliquefaciens strain CECT 5940 together with the sodium salt of the butyric acid BP70. As previously mentioned, the sodium salt of butyric acid, specifically the composition of Norel, S.A. called BP-70 is formed by 70% wet weight of sodium butyrate and 30% wet weight of vegetable fats. 30% of vegetable fat protects approximately 43% of total sodium butyrate, so the BP-70 product can be said to be made up of 30% protected sodium butyrate and 40% unprotected sodium butyrate . The probiotic ECOBIOL SUPER contains the combination of bacteria B. amyloliquefaciens strain CECT 5940, together with B. cereus strain 953 and together with BP70.

El alimento fue agregado a saciedad tres veces al día utilizando comederos. El factor de conversión alimenticia (FCA), fue calculado en gramos de alimento por gramo de biomasa extraída; utilizando los valores del alimento agregado diariamente, el no consumido y la biomasa de camarón obtenida al final de los 60 días del experimento. El crecimiento y la supervivencia de los camarones fueron evaluadas cada 10 días registrando el peso promedio y el número de camarones respectivamente. The food was added to satiety three times a day using feeders. The food conversion factor (FCA) was calculated in grams of food per gram of biomass extracted; using the values of the food added daily, the unconsumed and the shrimp biomass obtained at the end of the 60 days of the experiment. Shrimp growth and survival were evaluated every 10 days by recording the average weight and the number of shrimp respectively.

Los resultados de crecimiento y supervivencia muestran, como se puede observar en las Figuras 1 y 2 respectivamente, que los camarones alimentados con la dieta suplementada con el aditivo ECOBIOL SUPER generó diferencias significativas (p<0.05) de peso y supervivencia ya a partir de los 40 días del experimento, con respecto a la dieta control. Como además se puede observar en la Figura 1, los camarones alimentados con los aditivos ECOBIOL, ECOBIOL PLUS y ECOBIOS SUPER, a los 60 días de tratamiento, muestran un incremento significativo (p<0.05) en su biomasa respecto al grupo control. The growth and survival results show, as can be seen in Figures 1 and 2 respectively, that shrimp fed the diet supplemented with the additive ECOBIOL SUPER generated significant differences (p <0.05) in weight and survival, starting from 40 days of the experiment, regarding the control diet. As can also be seen in Figure 1, shrimp fed with the additives ECOBIOL, ECOBIOL PLUS and ECOBIOS SUPER, at 60 days of treatment, show a significant increase (p <0.05) in their biomass with respect to the control group.

Para demostrar si el peso inicial del animal influye en la respuesta al crecimiento y la supervivencia de los camarones alimentados con los diferentes aditivos dietéticos descritos en la invención, se diseñó un experimento con camarones, seleccionados al azar, con un peso promedio de 7.0 g. Como se puede observar en la Figura 4, ya a partir del día 30 de tratamiento, los camarones alimentados con la dieta ECOBIOL SUPER presentaron un incremento significativo en su biomasa con respecto a los camarones alimentados con la dieta control (p<0.05). Por otro lado, tal y como puede observarse en la Figura 5 los camarones alimentados con las dietas conteniendo los aditivos de la invención, mostraron un mayor porcentaje de supervivencia respecto a los animales alimentados exclusivamente con la dieta estándar, grupo control y un mejor factor de conversión del alimento (Figura 6). To demonstrate whether the initial weight of the animal influences the response to growth and survival of shrimp fed with the different dietary additives described in the invention, an experiment was designed with shrimp, randomly selected, with an average weight of 7.0 g. As can be seen in Figure 4, as of day 30 of treatment, shrimp fed with the ECOBIOL SUPER diet showed a significant increase in their biomass compared to shrimp fed with the control diet (p <0.05). On the other hand, as can be seen in Figure 5, shrimp fed the diets containing the additives of the invention, showed a higher survival rate compared to animals fed exclusively with the standard diet, control group and a better factor of feed conversion (Figure 6).

El aprovechamiento del alimento, analizado como factor de conversión alimenticia, fue mejor en las dietas que contenían los aditivos de la invención (Figura 6), lo que indica que los animales tienen mayor disponibilidad de nutrientes para el crecimiento y para la obtención de energía. Esto a largo plazo, se refleja en lograr animales más sanos y con tallas más adecuadas para la comercialización, en un menor tiempo. The use of food, analyzed as a food conversion factor, was better in the diets containing the additives of the invention (Figure 6), indicating that animals have greater availability of nutrients for growth and for obtaining energy. This in the long term, is reflected in achieving healthier animals and with sizes more suitable for commercialization, in a shorter time.

Por lo tanto, los datos mostrados en la presente invención, ponen de manifiesto que los aditivos descritos funcionan como promotores del crecimiento en animales acuáticos, preferentemente crustáceos, con resultados superiores a los obtenidos con la dieta estándar, sin incluir aditivos. Therefore, the data shown in the present invention show that the described additives function as growth promoters in aquatic animals, preferably crustaceans, with results superior to those obtained with the standard diet, not including additives.

Ejemplo 2. Actividad enzimática digestiva del camarón blanco L. vannamei alimentado con los diferentes aditivos descritos en la invención. Example 2. Digestive enzymatic activity of the white shrimp L. vannamei fed with the different additives described in the invention.

La expresión y actividad de enzimas digestivas es afectada por una serie de factores limitantes como por ejemplo: parámetros físico-químicos del agua (pH, oxígeno, salinidad y temperatura), edad y tamaño del camarón, cambios ontogénicos, ayuno, ingredientes de la dieta, nivel y fuente proteica, nivel y tipo de aglutinantes, aditivos promotores de crecimiento, cantidad y frecuencia de alimentación, ciclos circadianos, ciclo de muda e incluso el agua de cultivo. The expression and activity of digestive enzymes is affected by a series of limiting factors such as: physical-chemical parameters of water (pH, oxygen, salinity and temperature), age and size of shrimp, ontogenetic changes, fasting, diet ingredients , level and protein source, level and type of binders, growth promoting additives, quantity and frequency of feeding, circadian cycles, molting cycle and even the cultivation water.

Para determinar la respuesta de actividad enzimática digestiva ante el estímulo de los diferentes aditivos dietéticos utilizados en la presente invención: ECOBIOL, ECOBIOL PLUS y ECOBIOL SÚPER, se utilizaron camarones juveniles de L vannamei, con un peso promedio de 6 g, los cuales fueron mantenidos en ayuno por 12 horas y previamente seleccionados en estadios de intermuda. La intermuda se conoce como la secuencia de transformaciones comprendidas entre dos mudas (eliminación del antiguo exoesqueleto y la formación de un tegumento nuevo y generalmente de mayor tamaño), en cuyo período se cumple un ciclo completo de modificaciones morfológicas, fisiológicas y bioquímicas, responsables del crecimiento. Las mediciones de dicha actividad enzimática se realizaron en intervalos de una hora, durante un tiempo de 5 horas. To determine the response of digestive enzymatic activity to the stimulation of the different dietary additives used in the present invention: ECOBIOL, ECOBIOL PLUS and ECOBIOL SUPER, juvenile L vannamei shrimp were used, with an average weight of 6 g, which were maintained fasting for 12 hours and previously selected in intermuda stages. The intermuda is known as the sequence of transformations between two molts (elimination of the old exoskeleton and the formation of a new and generally larger tegument), in which period a complete cycle of morphological, physiological and biochemical modifications, responsible for the increase. The measurements of said enzymatic activity were carried out in intervals of one hour, for a time of 5 hours.

La actividad y producción de enzimas digestivas en el hepatopáncreas de los crustáceos se encuentra controlada principalmente por hormonas. El hepatopáncreas, a diferencia del intestino y estómago, presenta una mayor actividad enzimática, sugiriendo la importancia de dicho órgano en la síntesis y secreción de enzimas digestivas. The activity and production of digestive enzymes in the hepatopancreas of crustaceans is mainly controlled by hormones. The hepatopancreas, unlike the intestine and stomach, has a greater enzymatic activity, suggesting the importance of this organ in the synthesis and secretion of digestive enzymes.

Para el análisis de la actividad enzimática digestiva se determinó la actividad proteasa, lipasa, amilasa y quimiotripsinasa, en los extractos enzimáticos preparados mediante la metodología propuesta por Galgani F. For the analysis of the digestive enzymatic activity, the protease, lipase, amylase and chymotrypsinase activity was determined in the enzyme extracts prepared by the methodology proposed by Galgani F.

(Galgani, F. PhD. Thesis Université dÁix-Marseille II. Etude des proteases digestives de crevettes peneides (Crustacea Decapoda) France. 1983) en los hepatopáncreas extraídos de los camarones, a los intervalos indicados previamente y que estaban almacenados, para dicho análisis, a una temperatura de -48ºC. Además se determinó, mediante el método de Bradford la concentración de proteínas presentes en dichos extractos enzimáticos. (Galgani, F. PhD. Thesis Université dÁix-Marseille II. Etude des digestive proteases of crevettes peneides (Crustacea Decapoda) France. 1983) in hepatopancreas extracted from shrimp, at the intervals indicated previously and that were stored, for said analysis , at a temperature of -48 ° C. In addition, the concentration of proteins present in said enzymatic extracts was determined by the Bradford method.

Para obtener los datos de actividad proteasa presente en los extractos enzimáticos se siguió el método descrito por Hernández C.M. (Hernández, C.M. Crustacean protease characterization biochemical and molecular consideration. Comprehensive summary Ph D Thesis. 1983. Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, La Paz, B.C.S. México.), usando como sustrato la azocaseína. La actividad lipasa presente en los extractos se determinó de acuerdo a Versaw W.K. et al. (Versaw, W.K. et al. Journal of Food Science. 1989; 54: 1557-1558), usando como sustrato el R-naftil caprilato. La determinación de la actividad amilasa se realizó de acuerdo a Vega-Villasante et al., (Vega-Villasante, F. et al. Bulletin of Marine Science, 1999; 65:1-9), usando como sustrato almidón al 1 % en TRIS-HCL (50 mM, pH 8.0). La actividad quimiotripsina fue evaluada de acuerdo a Delmar To obtain the protease activity data present in the enzyme extracts, the method described by Hernández C.M. (Hernández, C.M. Crustacean protease characterization biochemical and molecular consideration. Comprehensive summary Ph D Thesis. 1983. Northwest Biological Research Center, La Paz, B.C.S. Mexico.), Using azocasein as a substrate. The lipase activity present in the extracts was determined according to Versaw W.K. et al. (Versaw, W.K. et al. Journal of Food Science. 1989; 54: 1557-1558), using R-naphthyl caprylate as substrate. Amylase activity was determined according to Vega-Villasante et al., (Vega-Villasante, F. et al. Bulletin of Marine Science, 1999; 65: 1-9), using as a substrate 1% starch in TRIS-HCL (50 mM, pH 8.0). Chymotrypsin activity was evaluated according to Delmar

E.G. et al. (Delmar E.G. et al. Anal Biochem. 1979; 99:316-320. La actividad específica de cada enzima está representada en unidades de enzima por miligramo de proteína (U/mg). E.G. et al. (Delmar E.G. et al. Anal Biochem. 1979; 99: 316-320. The specific activity of each enzyme is represented in units of enzyme per milligram of protein (U / mg).

Los resultados obtenidos pusieron de manifiesto que, la adición de los aditivos descritos en la invención a la dieta del camarón L. vannamei, incrementaron la actividad enzimática digestiva, presentando una mayor expresión de las enzimas digestivas analizadas (Figura 7) respecto a los camarones alimentados con la dieta control. Loscamarones que recibieron el aditivo ECOBIOL SÚPER mostraron una mayor evidencia en la actividad específica de las enzimas lipasas y quimiotripsina (lípidos y proteínas). The results obtained showed that, the addition of the additives described in the invention to the diet of shrimp L. vannamei, increased digestive enzymatic activity, presenting a greater expression of the digestive enzymes analyzed (Figure 7) with respect to fed shrimp With the control diet. Shrimp that received the additive ECOBIOL SUPER showed greater evidence in the specific activity of the enzymes lipases and chymotrypsin (lipids and proteins).

Se concluye que los aditivos descritos en la presente invención utilizados en las dietas para animales acuáticos, preferentemente crustáceos y particularmente, la combinación de los probióticos CECT 5940+CECT 953+butirato sódico (BP-70), favorecen la actividad específica de las enzimas digestivas y el factor de conversión en el alimento de los crustáceos lo cual sugiere un mayor aprovechamiento del alimento, así como un incremento en su biomasa y supervivencia, respecto a animales alimentados con una dieta control, no suplementada con los aditivos de la invención. It is concluded that the additives described in the present invention used in diets for aquatic animals, preferably crustaceans and particularly, the combination of probiotics CECT 5940 + CECT 953 + sodium butyrate (BP-70), favor the specific activity of digestive enzymes and the conversion factor in the food of the crustaceans which suggests a greater use of the food, as well as an increase in its biomass and survival, with respect to animals fed a control diet, not supplemented with the additives of the invention.

Claims

1. one.: Uso de Bacillus amyloliquefaciens, en la cría de animales acuáticos. Use of Bacillus amyloliquefaciens, in the breeding of aquatic animals.

2. 2.: Uso según la reivindicación 1 caracterizado por que en la cría de animales acuáticos se utiliza la cepa CECT 5940 de B. amyloliquefaciens. Use according to claim 1 characterized in that in the breeding of aquatic animals the strain CECT 5940 of B. amyloliquefaciens is used.

3. 3.: Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2 caracterizado por que en la cría de animales acuáticos se utiliza además al menos la especie Bacillus cereus. Use according to any one of claims 1 to 2 characterized in that at least the Bacillus cereus species is also used in the breeding of aquatic animals.

4. Four.: Uso según la reivindicación 3 caracterizado por que en la cría de animales acuáticos se utiliza la cepa CECT 953 de B. cereus. Use according to claim 3 characterized in that in the breeding of aquatic animals the strain CECT 953 of B. cereus is used.

5. 5.: Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 caracterizado por que en la cría de animales acuáticos se utiliza además al menos la especie Pediococcus acidilactici. Use according to any of claims 1 to 4 characterized in that at least the Pediococcus acidilactici species is also used in the breeding of aquatic animals.

6. 6.: Uso según la reivindicación 5 caracterizado por que en la cría de animales acuáticos se utiliza la cepa CNCM MA 18/5 M de P. acidilactici. Use according to claim 5 characterized in that in the breeding of aquatic animals the strain CNCM MA 18/5 M of P. acidilactici is used.

7. 7.: Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 caracterizado por que en la cría de animales acuáticos se utiliza además al menos otras especies seleccionadas de entre cualquiera de las siguientes: B. subtilis y B. licheniformis. Use according to any of claims 1 to 6, characterized in that at least other species selected from any of the following are used in the breeding of aquatic animals: B. subtilis and B. licheniformis.

8. 8.: Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 caracterizado por que en la cría de animales acuáticos se utiliza además al menos una sal de un ácido orgánico. Use according to any one of claims 1 to 7 characterized in that at least one salt of an organic acid is used in the breeding of aquatic animals.

9. 9.: Uso según la reivindicación 8 caracterizado por que la sal del ácido orgánico se encuentra preferentemente en una proporción de entre un 30-70% en peso húmedo, siendo más preferible una proporción del 60%. Use according to claim 8 characterized in that the organic acid salt is preferably in a proportion of between 30-70% by wet weight, a proportion of 60% being more preferable.

10. 10.: Uso según cualquiera de las reivindicaciones 8 o 9 caracterizado por que los ácidos orgánicos se seleccionan de entre cualquiera de los siguientes: butírico, propiónico, fórmico, láctico, cítrico, láurico, cúprico, caprílico, caproico o acético. Use according to any of claims 8 or 9 characterized in that the organic acids are selected from any of the following: butyric, propionic, formic, lactic, citric, lauric, cupric, caprylic, caproic or acetic.

11. eleven.: Uso según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10 caracterizado por que las sales de ácidos orgánicos se seleccionan de entre cualquiera de la lista: sódica, cálcica, cúprica o potásica. Use according to any of claims 8 to 10 characterized in that the salts of organic acids are selected from any of the list: sodium, calcium, cupric or potassium.

12. 12.: Uso según las reivindicaciones 8 a 11 caracterizado por que la sal del ácido orgánico es la sal sódica del ácido butírico. Use according to claims 8 to 11 characterized in that the organic acid salt is the sodium salt of butyric acid.

13. 13.: Uso según las reivindicaciones 8 a 12 caracterizado por que en la cría de animales acuáticos se utiliza una combinación de las cepas CECT 5940 de B. amyloliquefaciens y CECT 953 de Use according to claims 8 to 12 characterized in that a combination of the CECT 5940 strains of B. amyloliquefaciens and CECT 953 of

B. cereus together with sodium salt of butyric acid.

14. 14.: Uso según las reivindicaciones 1 a 13 donde los animales acuáticos son preferentemente moluscos, crustáceos, tilapia, dorada, lubina y salmónidos. Use according to claims 1 to 13 wherein the aquatic animals are preferably molluscs, crustaceans, tilapia, gilthead sea bass, sea bass and salmonids.

15. fifteen.: Aditivo para alimentación de animales acuáticos que comprende la combinación de, al menos, dos especies pertenecientes al género Bacillus, seleccionadas de entre: B. amyloliquefaciens y B. cereus. Additive for feeding aquatic animals comprising the combination of at least two species belonging to the genus Bacillus, selected from: B. amyloliquefaciens and B. cereus.

16. 16.: Aditivo según la reivindicación 15 caracterizado por que comprende la combinación de, al menos, la cepa CECT 5940 de B. amyloliquefaciens y la cepa CECT 953 de B. cereus. Additive according to claim 15 characterized in that it comprises the combination of at least the CECT 5940 strain of B. amyloliquefaciens and the CECT 953 strain of B. cereus.

17. 17.: Aditivo según cualquiera de las reivindicaciones 15 a 16 caracterizado por que además puede comprender la especie P. acidilactici. Additive according to any of claims 15 to 16 characterized in that it can also comprise the species P. acidilactici.

18. 18.: Aditivo según la reivindicación 17 caracterizado por que comprende la cepa CNCM MA 18/5 M de Pediococcus acidilactici. Additive according to claim 17 characterized in that it comprises the CNCM MA 18/5 M strain of Pediococcus acidilactici.

19. 19.: Aditivo según las reivindicaciones 15 a 18 caracterizado por que además comprende al menos una sal de un ácido orgánico. Additive according to claims 15 to 18 characterized in that it further comprises at least one salt of an organic acid.

20. twenty.: Aditivo según la reivindicación 19 caracterizado porque la sal del ácido orgánico se encuentra preferentemente en una proporción de entre un 30-70% en peso húmedo, siendo más preferible una proporción del 60%. Additive according to claim 19 characterized in that the organic acid salt is preferably in a proportion of between 30-70% by wet weight, a proportion of 60% being more preferable.

21. twenty-one.: Aditivo según cualquiera de las reivindicaciones 19 a 20 caracterizado por que los ácidos orgánicos se seleccionan de entre cualquiera de los siguientes: butírico, propiónico, fórmico, láctico, cítrico, láurico, cúprico, caprílico, caproico o acético. Additive according to any of claims 19 to 20 characterized in that the organic acids are selected from any of the following: butyric, propionic, formic, lactic, citric, lauric, cupric, caprylic, caproic or acetic.

22. 22: Aditivo según las reivindicaciones 19 a 21 caracterizado por que las sales de ácidos orgánicos se seleccionan de entre cualquiera de la lista: sódica, cálcica, cúprica o potásica. Additive according to claims 19 to 21 characterized in that the salts of organic acids are selected from any of the list: sodium, calcium, cupric or potassium.

23. 2. 3.: Aditivo según las reivindicaciones 19 a 22 caracterizado por que la sal del ácido orgánico es la sal sódica del ácido butírico. Additive according to claims 19 to 22, characterized in that the organic acid salt is the sodium salt of butyric acid.

24. 24.: Aditivo según las reivindicaciones 15 a 23 caracterizado por que comprende una combinación de las cepas CECT 5940 de B. amyloliquefaciens y CECT 953 de B. cereus junto con sal sódica del ácido butírico. Additive according to claims 15 to 23 characterized in that it comprises a combination of the CECT 5940 strains of B. amyloliquefaciens and CECT 953 of B. cereus together with sodium salt of butyric acid.

25. 25.: Aditivo según las reivindicaciones 15 a 24 caracterizado por que los animales acuáticos se seleccionan de entre cualquiera de la lista: moluscos, crustáceos, tilapia, dorada, lubina y salmónidos. Additive according to claims 15 to 24 characterized in that the aquatic animals are selected from any of the list: mollusks, crustaceans, tilapia, gilthead sea bass, sea bass and salmonids.

26. 26.: Uso de los aditivos de las reivindicaciones 15 a 25 en la cría de animales acuáticos. Use of the additives of claims 15 to 25 in the breeding of aquatic animals.

27. 27.: Uso de los aditivos según la reivindicación 26 caracterizado por que los animales acuáticos se seleccionan de entre cualquiera de la lista: moluscos, crustáceos, tilapia, dorada, lubina y salmónidos. Use of the additives according to claim 26 characterized in that the aquatic animals are selected from any of the list: molluscs, crustaceans, tilapia, gilthead sea bass, sea bass and salmonids.

eleven

12

FIGURE 1

FIGURE 2 FIGURE 3

FIGURE 4

0 1020304060

Time (days)

FIGURE 5

% Survival

FIGURE 6

FIGURE 7