ES2422288T3 - Método para el cribado ultrarrápido de poblaciones de transposón etiquetado e identificación masiva de la secuencia en paralelo de los sitios de inserción - Google Patents

Método para el cribado ultrarrápido de poblaciones de transposón etiquetado e identificación masiva de la secuencia en paralelo de los sitios de inserción

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Abstract

Método para la identificación de una inserción asociada a un gen o fenotipo de interés en un miembro deuna población de transposones, que comprende las etapas de: (a) aislar, individualmente o en mezclas, el ADN genómico de miembros de la población detransposones; (b) realizar la restricción del ADN utilizando una o más endonucleasas de restricción, realizar laligación de los adaptadores con los fragmentos de restricción para preparar de este modo losfragmentos de restricción ligados a adaptadores; (c) realizar la amplificación de los fragmentos de restricción ligados a adaptadores con un par decebadores, con lo que uno de los cebadores comprende una sección que es complementaria a partede una secuencia de transposón conocida, siendo el otro cebador por lo menos complementario aladaptador, comprendiendo uno o ambos cebadores una etiqueta para correlacionar el cebador y elproducto de amplificación con el miembro original de la población; (d) determinar por lo menos parte de la secuencia de nucleótidos de por lo menos parte de losfragmentos de (c) utilizando la secuenciación ultrarrápida; (e) identificar uno o más fragmentos de la etapa (d) que se puedan alinear con las secuencias denucleótidos de una base de datos, correlacionando de este modo los fragmentos identificados con ungen o fenotipo de interés; (f) identificar el/los miembro(s) de la población de transposones que comprenden el/los fragmento(s)de la etapa (e).
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