ES2354426T3 - Remedios de enfermedades, que se han de aplicar a los ojos. - Google Patents

Abstract

Un agente que comprende 17ß-estradiol incluido (formando un compuesto de inclusión) en 2-hidroxipropil-ß-ciclodextrina en la forma de unas gotas oculares o de unos agentes de lavado de los ojos, para su uso en el tratamiento de un glaucoma.

Description

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Campo técnico

El presente invento se refiere a un agente para el tratamiento de enfermedades oculares, que contiene hormonas esteroides sexuales, una sustancia que tiene una acción estrógena, o un agente modulador selectivo de receptores de estrógenos, o un estrógeno no feminizante (estrógeno no hormonal), particularmente a un agente 10 destinado al tratamiento de enfermedades oculares en forma de gotas oculares/agentes de lavado de los ojos, etc.

Técnica de antecedentes

De acuerdo con la terapia por reemplazo hormonal (HRT, acrónimo de 15 hormone replacement therapy), en la que se toman por vía oral solamente estrógenos, o una combinación de un estrógeno y de progesterona, se ha informado acerca de una posibilidad de mejorar los síntomas de diversas clases de enfermedades oculares tales como la degeneración macular relacionada con la edad (AMD, acrónimo de age related macular degeneration), un agujero macular, un glaucoma, una retinopatía 20 diabética, una catarata senil, etc.

Sin embargo la HRT causa algunas veces potentes efectos colaterales, tales como un cáncer de mama, un cáncer uterino, una ginecomastia, impotencia, etc., puesto que un estrógeno (o un estrógeno y la progesterona) se administra al cuerpo entero. Correspondientemente la HRT no se puede utilizar con facilidad para el 25 tratamiento de diversas clases de enfermedades, particularmente para el tratamiento de enfermedades oculares a pesar de poseer una posibilidad de proporcionar remedio.

Se ha afirmado que la aparición de un glaucoma, que es una enfermedad ocular, es de 1 persona por cada 30 personas entre la población con una edad por encima de los 40 años. Sin embargo, de acuerdo con el informe de investigación de la 30 Asociación Japonesa del Glaucoma en 2002, éste aparece en 1 persona por cada 17 personas entre la población con una edad por encima de los 40 años, con lo cual está aumentando el número de pacientes de glaucoma. Al alcanzarse una sociedad en curso de envejecimiento, se puede esperar en el futuro un aumento en el número de pacientes con enfermedades oculares, incluyendo un glaucoma. 35

Las gotas oculares para el tratamiento de enfermedades oculares tales como un glaucoma han usado convencionalmente una menor presión intraocular pero son insuficientes como remedio para estrechar el campo visual y, también, hay algunos casos en los que causan una hiperemia en los ojos o una erosión de la córnea. También, ellas requieren que se instile en los ojos varias veces por día, de manera tal 5 que resultan perturbadoras.

Un objeto del presente invento es el de proporcionar un agente para el tratamiento de enfermedades mediante gotas oculares, etc., que superen los problemas implicados en una HRT, tales como efectos colaterales, etc.

También, otro objeto del presente invento es el de proporcionar un agente 10 básico para el tratamiento de enfermedades oculares, tales como un glaucoma, una catarata, etc., que tenga un tiempo prolongado con efectos del tratamiento tales como un mejoramiento en el campo visual, una disminución en la presión ocular, etc., y pueda proporcionar efectos con un ritmo de tiempo de instilación (adición gota a gota) de una vez por día o de una vez por cada 2 o 3 días. 15

Descripción del invento

El presente invento se refiere a un agente para el tratamiento de enfermedades oculares, que comprende una o varias hormona(s) esteroide(s) sexual(es), una o varias sustancia(s) que tienen una acción estrógena, o uno o varios agente(s) 20 modulador(es) selectivo(s) de receptores de estrógenos, o un estrógeno no feminizante (un estrógeno no hormonal).

La(s) hormona(s) esteroide(s) sexual(es), que han de estar contenidas en un agente para tratar enfermedades del presente invento, es/son una(s) hormona(s) sintetizada(s) principalmente o segregadas en una gónada tal como un ovario, un 25 testículo, etc., o en la placenta y, en el presente invento, están contenidas/os también una sustancia sintética que tiene su acción, un derivado de la misma y metabolitos de la misma. La hormona esteroide sexual es clasificada de un modo basto en andrógenos, estrógenos y gestágenos. Ella es preferiblemente una hormona esteroide sexual que tiene un número de átomos de carbono de 18 a 21. 30

Como el andrógeno, se pueden dar como ejemplos, por ejemplo, testosterona androstenodiona, deshidroepiandrosterona, androsterona, androstanodiona, metil testosterona y derivados de las mismas, o compuestos análogos estructurales a las mismas, y se prefieren la testosterona y derivados de la misma o compuestos análogos a la misma. 35

Como el estrógeno, se pueden dar como ejemplos 17β-estradiol, estrona, estriol, equilina, equilenina, etinil estradiol y un fitoestrógeno, etc., y derivados de los mismos, metabolitos de los mismos (las mismas), etc., y se prefieren el 17β-estradiol y derivados del mismo y metabolitos del mismo. Además del derivado de estrógeno o de sus metabolitos, se incluye(n) una sustancia que tiene una acción estrógena o unos 5 compuestos análogos estructurales a estrógenos, y se pueden dar como ejemplos los siguientes compuestos.

En el derivado de estrógeno, se incluyen un estrógeno no feminizante y sus derivados, etc. Se puede mencionar, por ejemplo, un compuesto de la siguiente fórmula: 10

(en la que R1 representa H, OH, OR2 o R2, R2 representa un alquilo de C1 a C6, R3 representa OH, =O o R1, R4 representa R1, C≡CH o C=CH2) que ha sido descrito en el documento de patente de los EE.UU. USP nº 5.521.168, particularmente 2-metoxi-estradiol, 2-hidroxi-estradiol, 4-metoxi-estradiol, 2-metoxi-estradiol 3-metil éter, 2-15 metoxi-estrona y 2-hidroxi-estrona, etc. También, se puede mencionar un compuesto de la siguiente fórmula

(en la que el compuesto puede tener uno o más doble(s) enlace(s) que conjuga(n) al anillo aromático A entre los átomos de carbono 6 y 7, 8 y 9, o 9 y 11, y en dicho caso, 20 no existe(n) o bien uno de los R8 o R9 o ambos de ellos, n es de 1 a 4, y, cuando existen R8 y R9, ellos son hidrógeno o alquilo, R13 representa hidrógeno, hidrocarbilo sustituido o sin sustituir, halógeno, amido, sulfato o nitrato, R14 representa hidrógeno o alquilo, Rz representa un cicloalquilo, cicloalquenilo, heterocicloalquilo o

heterocicloalquenilo (heterocicloalenilo) sustituido o sin sustituir) que se ha descrito en el documento de solicitud de patente internacional WO 02/40032 A2, particularmente los ZYC-1, 2, 4, 9, 10, 11, 12, 13, 27 y 28, etc. También se puede mencionar el ZYC-5 descrito en Neurobiology of Disease (neurobiología de una enfermedad), 9, 282-293 (2002). 5

Como el gestágeno, se prefieren la progesterona y derivados de la misma o compuestos análogos estructurales de la misma.

La hormona esteroide sexual es preferiblemente de una o más clases seleccionadas entre el conjunto que consiste en un estrógeno, la testosterona, la progesterona y un andrógeno, y derivados de los mismos, metabolitos de los mismos y 10 compuestos análogos estructurales a los mismos.

Se prefieren particularmente como las hormonas esteroides sexuales el 17β-estradiol y derivados del mismo, metabolitos del mismo, y compuestos análogos estructurales al mismo.

Las hormonas esteroides sexuales tales como el 17β-estradiol, etc., se 15 convierten en una suspensión cuando ellas se mezclan con agua. Correspondientemente, en el agente para tratar enfermedades del presente invento, se prefiere hacer solubles en agua a las hormonas esteroides sexuales tales como el 17β-estradiol, o solubilizar en agua a las hormonas esteroides sexuales con un agente tensioactivo, particularmente en los sitios de los efectos, se prefiere solubilizar en agua 20 al 17-β estradiol o a un derivado del mismo o a metabolitos del mismo.

El 17β-estradiol es hidrófobo y tiene una baja solubilidad en agua, de manera tal que incluso cuando él se mezcla con agua destilada, produce unos aglomerados con un tamaño no uniforme, de manera tal que el tamaño de partículas se vuelve grande, la conservación de la estabilidad es mala, con lo cual es difícil el ajuste de una 25 concentración que se desee. Correspondientemente, es necesario poseer un cierto dispositivo para preparar gotas oculares estables a partir de una sustancia difícilmente soluble en agua, tal como 17β-estradiol, etc., que pueda ajustar una concentración deseada. Es necesario proporcionar un método seguro y útil que pueda asegurar la estabilidad de un agente medicinal, y no dañe a las características fisiológicas y 30 químicas de la córnea y de la conjuntiva. También, es necesario no causar ninguna irritación o sensación desagradable en el momento del uso.

Hasta ahora, para preparar unas gotas oculares a partir de una sustancia difícilmente soluble, se intentaba usar un método para añadir un aditivo, un aceite, un alcohol, etc., o aumentar la viscosidad de las gotas oculares, pero ellas implicaban los 35

defectos de que la sensación desagradable se presenta en el momento de realizar la instilación, y otros similares.

Por el contrario, en el presente invento, se prefiere emplear un método en el que un agente medicinal es incluido (es decir, convertido en un compuesto de inclusión) por uso de una ciclodextrina para solubilizarlo en agua. Una ciclodextrina es 5 un oligosacárido de glucosa, cuya parte exterior es hidrófila y cuya parte interior (cavidad) es hidrófoba, y por un compuesto de inclusión con un agente medicinal hidrófobo, tal como el 17β-estradiol, el agente puede ser solubilizado en agua y estabilizado, y se pueden obtener unas gotas oculares que no tienen ninguna sensación desagradable en el momento de uso, de manera tal que él es apropiado 10 para preparar gotas oculares. En el caso de una ciclodextrina, se ha sabido generalmente que existen tres clases, las α, β y .

Entre las ciclodextrinas, la β-ciclodextrina implica los problemas de tener una propiedad hemolítica, una propiedad tóxica renal debida a la baja solubilidad en agua, etc., de manera que es sensato usar los derivados de β-ciclodextrina que se 15 mencionan seguidamente.

En los derivados de β-ciclodextrina hay una ciclodextrina hidrófila y una ciclodextrina hidrófoba, y las hidrófilas son apropiadas para gotas oculares. En el caso de la ciclodextrina hidrófila, existen una ciclodextrina metilada y una ciclodextrina hidroxialquilada, y se puede encontrar a partir de los resultados de experimentos en 20 animales y seres humanos, como los que se mencionan seguidamente, que una ciclodextrina metilada no es apropiada debido a una irritación de los ojos, a un daño para la córnea o la conjuntiva, o a un problema de hemólisis. Por otra parte, una ciclodextrina hidroxialquilada tiene una alta seguridad, no produce ninguna irritación en los ojos, no causa ningún daño para el epitelio corneal, y es excelente para preparar 25 gotas oculares.

En el caso de una ciclodextrina hidroxi-alquilada, se incluyen hidroxietil-ciclodextrina, hidroxipropil-ciclodextrina etc., en particular la 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina es sumamente preferida en los sitios en los que ella tiene una excelente solubilidad en agua de un compuesto de inclusión o una excelente estabilidad de un 30 agente medicinal, y causa menos irritación o toxicidad para los seres vivos.

Se puede usar preferiblemente -ciclodextrina y sus derivados. La α-ciclodextrina no presenta una solubilidad en agua tan alta del 17β-estradiol por inclusión, de manera tal que se prefiere una -ciclodextrina.

Se puede usar hidroxipropil--ciclodextrina, sulfonil-β-ciclodextrina, sulfobutil éter-β-ciclodextrina o δ-ciclodextrina.

La solubilización en agua de hormonas esteroides sexuales, tales como el 17β-estradiol, etc., se puede llevar a cabo, por ejemplo, de acuerdo con una manera convencional, usando hormonas esteroides sexuales como un compuesto huésped, e 5 incluyéndolas en un compuesto anfitrión, tal como un compuesto cíclico que incluye α, β o -ciclodextrina, etc, o sus derivados, etc. Las hormonas esteroides sexuales solubilizadas en agua tienen una buena solubilidad en agua, y pueden transferir e impregnar un agente medicinal dentro de un tejido de los ojos por instilación, de manera tal que los efectos del remedio son altos, la concentración en sangre en el 10 cuerpo entero puede ser reducida, lo cual significa menos efectos colaterales, y también, la sensación en el momento de uso es buena y no hay ninguna sensación desagradable, por lo que ellas son particularmente apropiadas para gotas oculares.

Se confirma que el 17β-estradiol solubilizado en agua es transferido a una parte diana en ojos por instilación, y a células activadas (véanse los Ejemplos 1 a 6, 15 mencionados seguidamente).

Entre las sustancias que tienen una acción estrógena o los agentes moduladores selectivos de receptores de estrógenos (SERM, acrónimo de selective estrogen receptor modulator) que han de estar contenidas/os en un ejemplo para el tratamiento de enfermedades del presente invento, se pueden mencionar, por ejemplo, 20 raloxifeno, arzoxifeno, etc.

Se puede considerar que los compuestos análogos estructurales a estrógenos, la sustancia que tiene una acción estrógena, el agente modulador selectivo de receptores de estrógenos o el estrógeno no feminizante (un estrógeno no hormonal), son eficaces para el tratamiento de enfermedades en la parte diana para el tratamiento 25 por elevación de la transferibilidad a un tejido diana en los ojos haciéndolos solubilizables en agua como el 17β-estradiol solubilizado en agua.

Las enfermedades aptas para ser tratadas en el presente invento no están limitadas específicamente, y, por ejemplo, se pueden mencionar glaucoma, glaucoma con alta tensión, glaucoma con tensión normal, degeneración macular senil 30 neovascular, enfermedades maculares seniles, coriorretinopatia central (coriorretinitis), degeneración macular senil, agujero macular, cataratas, cataratas seniles, hemorragia coriorretinal, oclusión de la arteria retinal central, arteriosclerosis de la arteria retinal, fotopsias, retinopatía diabética, atrofia coriorretinal, enfermedades neovasculares de la retina y la coroides, cataratas debidas a una eliminación de ovarios, cataratas debidas 35

al TGF β, membrana epirretinal macular (fibrosis macular), lágrima retinal, desprendimiento de la retina, retinitis proliferante, degeneración retinal pigmentaria, queratitis, opacidad de la córnea, erosión de la córnea, desprendimiento del epitelio corneal, ulcera de córnea, degeneración de células endoteliales corneales, y distrofia o pérdida de células endoteliales, distrofia (degeneración) de la córnea, 5 queratoconjuntivitis epidémica, chalazión, iritis, uveítis, una enfermedad autoinmunitaria, coriorretinitis, iridociclitis, astenopía, estrechamiento del campo visual debido a diversas clases de enfermedades, atrofia del nervio óptico, neuritis óptica, neuropatía óptica isquémica (anterior), disminución en la actividad visual dinámica, visión anormal de los colores, un error de refracción tal como presbiopía, miopía, 10 hiperopía, astigmatismo, etc., y enfermedades del sistema nervioso central, tales como enfermedades de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, ALS (esclerosis lateral amiotrófica), etc., y psicosis tales como esquizofrenia y psicosis depresiva maniaca, histeria, enfermedades debidas a trastornos de la glándula pituitaria cerebral y desequilibrio de hormonas, enfermedades debidas a trastornos genéticos y 15 enfermedades debidas a trastornos inmunitarios. En un glaucoma se incluye el síndrome de Posner-Schlossman, y en la distrofia (degeneración) de la córnea se incluye distrofia (degeneración) de células endoteliales corneales y derrames, degeneración granular de la córnea (tipo 1 de Groenouw, tipo 2 de Groenouw), queratopatia conformada en banda de la córnea. 20

El agente para tratamiento del presente invento es un material que se ha de aplicar directamente a los ojos, y la forma del mismo puede ser, por ejemplo, la de gotas oculares (colirios), agentes de lavado de los ojos, ungüentos, inyecciones en la conjuntiva y agentes adsorbentes para lentes de contacto.

En el agente para tratar enfermedades oculares del presente invento, una 25 hormona esteroide sexual, una sustancia que tiene una acción estrógena o un agente modulador selectivo de receptores de estrógenos o un estrógeno no feminizante (un estrógeno no hormonal) se administra directamente a los tejidos oculares, de manera tal que no hay temor de causar efectos colaterales debidos al hecho de aumentar la concentración de una hormona esteroide sexual, etc., en la sangre del cuerpo entero 30 que aparece por el tratamiento convencional de HRT a través del sistema circulatorio, el tiempo en el que continúa el efecto es largo, con lo cual las enfermedades pueden ser tratadas de una manera eficaz con un pequeño número de tiempos de instilación. Éste puede hacer disminuir la presión intraocular, y particularmente puede mejorar el estrechamiento del campo visual de una manera notable, de modo tal que él puede 35

llevar a cabo de una manera particularmente eficaz un tratamiento no solamente de un glaucoma con alta tensión sino también un tratamiento de un glaucoma con tensión normal, para el que hoy en día no hay ningún método de tratamiento.

Breve descripción de los dibujos 5

La Fig. 1 es una fotografía de gotas oculares A del Ejemplo 1.

La Fig. 2 es una fotografía de gotas oculares B del Ejemplo 1.

La Fig. 3 es un gráfico que muestra la concentración transferida de 17β-estradiol dentro de la cámara anterior después de la instilación de las gotas oculares A hasta C con un intervalo de tiempo. 10

La Fig. 4 es una fotografía de la parte anterior de un ratón en un grupo testigo (Testigo), en un grupo irradiado con rayos UV al que se le ha administrado previamente (Pre 0,01 g/l y 0,1 g/l) y en un grupo irradiado con rayos UV al que se le ha administrado posteriormente (Post 0,01 g/l y 0,1 g/l) en el Ejemplo 4.

La Fig. 5 es una fotografía con microscopio de la retina de un ratón en la que se instiló 15 agua destilada en el Ejemplo 5.

La Fig. 6 es una fotografía con microscopio de la retina de un ratón en el que se instilaron unas gotas oculares que contenían 17β-estradiol soluble en agua en el Ejemplo 5.

La Fig. 7 es una imagen positiva de anticuerpos anti-receptores de estrógenos en la 20 retina.

La Fig. 8 es una imagen positiva de anticuerpos anti-receptores de estrógenos en la lente.

La Fig. 9 es una imagen positiva de anticuerpos anti-receptores de estrógenos en la córnea. 25

La Fig. 10 es una imagen positiva de anticuerpos anti-receptores de estrógenos en el cuerpo ciliar.

La Fig. 11 es una imagen obtenida en células granulares externas (de la capa nuclear) de la retina cuando no se añadió un estrógeno y tampoco se añadió un anticuerpo.

La Fig. 12 es una imagen positiva de anticuerpos anti-receptores de estrógeno en 30 células granulares externas (de la capa nuclear) de la retina cuando no se añadió 17β-estradiol y se añadió un anticuerpo.

La Fig. 13 es una imagen obtenida en células granulares externas (capa nuclear) de la retina cuando se añadió 17β-estradiol y no se añadió un anticuerpo.

La Fig. 14 es una imagen positiva de anticuerpos anti-receptores de estrógeno en células granulares externas (capa nuclear) de la retina cuando se añadió 17β-estradiol y se añadió un anticuerpo.

La Fig. 15 muestra la concentración (de 0 a 100 µg/ml) de 17β-estradiol instilado y el número de células en las que un receptor de estrógenos se había transferido a un 5 núcleo.

La Fig. 16 muestra el número de células en las que un receptor de estrógenos se había transferido a un núcleo con un intervalo de tiempo después de la instilación de 17β-estradiol.

La Fig. 17 es un dibujo que muestra el campo visual del ojo derecho de un paciente 10 del Ejemplo 9 antes del tratamiento.

La Fig. 18 es un dibujo que muestra el campo visual del ojo izquierdo de un paciente del Ejemplo 9 antes del tratamiento.

La Fig. 19 es un dibujo que muestra el campo visual del ojo derecho de un paciente del Ejemplo 9 después del tratamiento. 15

La Fig. 20 es un dibujo que muestra el campo visual del ojo izquierdo de un paciente del Ejemplo 9 después del tratamiento.

La Fig. 21 es un dibujo que muestra el campo visual del ojo derecho de un paciente del Ejemplo 10 antes del tratamiento.

La Fig. 22 es un dibujo que muestra el campo visual del ojo izquierdo de un paciente 20 del Ejemplo 10 antes del tratamiento

La Fig. 23 es un dibujo que muestra el campo visual del ojo derecho de un paciente del Ejemplo 10 después del tratamiento.

La Fig. 24 es un dibujo que muestra el campo visual del ojo derecho de un paciente del Ejemplo 10 después del tratamiento. 25

La Fig. 25 es un dibujo que muestra la relación entre las condiciones de instilación y la agudeza visual de un paciente en el Ejemplo 11.

La Fig. 26 es un dibujo que muestra el cambio del punto cercano antes y después de la instilación a un paciente en el Ejemplo 12.

La Fig. 27 es un dibujo que muestra el campo visual del ojo derecho de un paciente 30 del Ejemplo 13 antes del tratamiento.

La Fig. 28 es un dibujo que muestra el campo visual del ojo izquierdo de un paciente del Ejemplo 13 antes del tratamiento.

La Fig. 29 es un dibujo que muestra el campo visual del ojo derecho de un paciente del Ejemplo 13 después del tratamiento. 35

La Fig. 30 es un dibujo que muestra el campo visual del ojo izquierdo de un paciente del Ejemplo 13 después del tratamiento.

La Fig. 31 es un dibujo que muestra la agudeza visual dinámica de un paciente en el Ejemplo 26.

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Mejor modo de llevar a cabo el invento

El agente de tratamiento del presente invento se puede preparar de acuerdo con el método convencionalmente usado de la misma manera que en esta clase de agentes medicinales generales. En el caso de gotas oculares o agentes de lavado de los ojos, por ejemplo, la hormona esteroide sexual, la sustancia que tiene una acción 10 estrógena o el ZYC-5, el agente modulador selectivo de receptores de estrógenos o el estrógeno no feminizante (estrógeno no hormonal) todos/as los/las cuales están solubilizados/as en agua es/son disueltos en un agua destilada esterilizada, en una BSS (acrónimo de balanced salt solution = solución equilibrada de sales) plus, en una solución salina fisiológica, etc., con una concentración previamente determinada para 15 obtener una formulación.

En el agente de tratamiento del presente invento, la hormona esteroide sexual, la sustancia que tiene una acción estrógena o el ZYC-5, el agente modulador selectivo de receptores de estrógenos o el estrógeno no feminizante (estrógeno no hormonal) requieren estar contenidos/as en una cantidad eficaz para el tratamiento. Una cantidad 20 eficaz para el tratamiento está situada, en el caso de un agente líquido, por ejemplo, en una concentración de 0,1 µg a 100 g/l, de manera preferible de 0,5 µg a 1 g/l, de manera particularmente preferible de 1 µg a 500 mg/l, y en el caso de un agente sólido se pueden mencionar, por ejemplo, las concentraciones de 0,1 µg a 100 g/kg, de manera preferible de 0,5 µg a 10 g/kg, de manera particularmente preferible de 1 µg a 25 5 g/kg.

El agente de tratamiento del presente invento puede controlar el tiempo durante el cual se desarrolla el efecto o el tiempo durante el cual aparece el efecto, por cambio de la concentración de la hormona esteroide sexual, de la sustancia que tiene una acción estrógena o del agente modulador selectivo de receptores de estrógenos o del 30 estrógeno no feminizante (estrógeno no hormonal) en la formulación, del número de veces en que se realiza la administración, de la dosis administrada, o también seleccionar el método de administración del agente medicinal (por ejemplo gotas oculares, agentes de lavado de los ojos, o un ungüento).

Para el tratamiento del presente invento, se pueden añadir, si fuese necesario, los aditivos convencionalmente usados tales como excipientes, vehículos, agentes de control del pH, agentes isotónicos, agentes conservantes, glutatión, glucosa, diversas clases de sal(es), agentes estabilizadores, agentes refrigerantes, agentes antioxidantes, agentes antisépticos, etc. 5

También, se pueden añadir una hidroxipropil-metil celulosa, una carboximetil celulosa o su sal de sodio, una poli(pirrolidona), una poli(vinil-pirrolidona) (ésta se añade y se calienta), etc.

Ejemplos 10

Seguidamente se explica el presente invento haciendo referencia a unos Ejemplos, pero el presente invento no está limitado por estos Ejemplos.

Ejemplo 1

Como se describe seguidamente, se prepararon unas gotas oculares a partir de 15 17β-estradiol y de productos de inclusión del mismo con diversas clases de ciclodextrinas. Como las diversas clases de ciclodextrinas se usaron las que están disponibles a partir de SIGMA Co. (MO, EE.UU.), y como 17β-estradiol se usó el que está disponible a partir de CALBIOCHEM AG (Alemania).

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Gotas oculares A: gotas oculares de 17β-estradiol

El 17β-estradiol se disolvió en un agua destilada con una concentración de 1 mg/ml. Cuando ésta se dejó reposar, provocó unos coágulos aglomerados con un tamaño aleatorio y se convirtió en una dispersión. De esta manera se producen las gotas oculares A (Fig. 1) sin aumentar la viscosidad y sin añadir ningún alcohol. 25

Gotas oculares B: gotas oculares de un material de inclusión de 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina y 17β-estradiol.

En 13,3 mM de 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina se incluyeron 3,67 mM (1 mg/ml) de 17β-estradiol, y el material de inclusión se disolvió en un agua destilada para 30 preparar una solución acuosa uniforme transparente (Fig. 2). Esta solución acuosa se convirtió en gotas oculares B (relación molar (3,62 : 1)).

Gotas oculares C: gotas oculares de un material de inclusión de α- + -ciclodextrinas y 17β-estradiol.

En la α-ciclodextrina se incluyeron 3,67 mM (1 mg/ml) de 17β-estradiol, y se añadieron a esto agua destilada, y luego el líquido permaneció en un estado suspendido. A la suspensión se añadió la -ciclodextrina y se convirtió en una solución 5 acuosa transparente. Esta solución acuosa fue transformada en la gotas oculares C. La cantidad total de las α- + -ciclodextrinas fue de 24,6 mM (relación molar: 6,7 : 1).

Gotas oculares D: gotas oculares de un material de inclusión de metil-β-ciclodextrina y 17β-estradiol. 10

En 15 mM de metil-β-ciclodextrina se incluyeron 3,67 mM (1 mg/ml) de 17β-estradiol, y el producto fue disuelto en un agua destilada para preparar una solución acuosa transparente y uniforme. Esta solución acuosa fue convertida en gotas oculares D (relación molar: 4,09 : 1).

Cuando el 17β-estradiol fue incluido en la 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina, en las 15 α- + -ciclodextrinas o en la metil-β-ciclodextrina, la solubilidad en agua es aumentada y se pueden preparar unas gotas oculares (gotas oculares B hasta D) que son transparentes y estables.

Ejemplo 2 Efectos sobre el tejido queratoconjuntivo 20

Con la finalidad de investigar las acciones de las gotas oculares B hasta D preparadas en el Ejemplo 1 sobre los ojos, ellas son instiladas en conejos, en ratones y en seres humanos y son evaluadas.

Cuando se instilaron gotas oculares B (con el producto de inclusión con 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina) en los ojos de un conejo doméstico (conejo alemán) 25 cuatro veces, cada vez con 50 µl (1 gota) a intervalos de 30 minutos, no se presentó ningún problema específico. También, cuando el mismo producto se instiló en un ratón una vez (50 µl) por día durante 8 meses y en un ser humano con la misma cantidad durante 11 meses, no apareció ningún problema específico.

Cuando las gotas oculares C (con el producto de inclusión con α- + -30 ciclodextrinas) se instilaron en los ojos de un ser humano, no se produjo ninguna estimulación.

Cuando las gotas oculares D (con el producto de inclusión con metil-β-ciclodextrina) se instilaron en los ojos de un conejo doméstico (conejo alemán) 4 veces, cada vez con 50 µl (1 gota) a intervalos de 30 minutos: 35

después de 30 minutos, aumentó el número de erosiones de la córnea y los vasos de sangre quedaron inyectados alrededor de la córnea:

después de 1 hora, aparece una descarga en el ojo y se aumenta el área de la zona con erosión de la córnea;

después de 1 hora y 30 minutos, el número de erosiones se vuelve grande y la 5 profundidad de las mismas se vuelve muy grande; y a las 2 horas, la inyección resulta notable, y se produjeron un desprendimiento de todo el epitelio corneal y una úlcera corneal en la parte periférica de la córnea con la forma de un triángulo que tenía una base de 2 mm y una altura de 3 mm, por lo que se detuvo el experimento.

Además, cuando las gotas oculares D se instilaron en un ser humano con 1 10 gota (50 µl) se produjo una fuerte estimulación, se produjo una lacrimación, y continuó una sensación de incongruencia durante 5 horas hasta irse a la cama, pero el ojo se recuperó en la siguiente mañana.

Las gotas oculares B y C, y particularmente las gotas oculares B, no causan ningún problema específico ni siquiera cuando se instilan, y se encontró que hay un 15 valor óptimo en el caso de las gotas oculares. Por otra parte, las gotas oculares D tienen una potente estimulación, cambian las propiedades químicas fisiológicas de la córnea o de la conjuntiva, y causan una inyección, un desprendimiento del epitelio mórbido de la córnea y una úlcera corneal, de manera tal que se puede encontrar que ellas son inapropiadas como gotas oculares. 20

Ejemplo 3 Concentración de 17β-estadiol para transferir a la cámara anterior de un ojo

Para investigar los efectos de las gotas oculares A hasta D preparadas en el Ejemplo 1, se llevó a cabo una medición de la concentración del 17β-estradiol transferido a la cámara anterior después de que se realizó una instilación usando un 25 conejo doméstico (conejo alemán: hembra) con un estudio a ciegas.

A las 10 de la mañana cada una de las gotas oculares se instiló con 1 gota (50 µl), y después de 5 minutos, se instiló 1 gota más. Después de la instilación, a los 30 minutos, a la 1 hora, a las 2 horas y a las 3 horas, la córnea fue sometida a una céntesis usando una aguja de inyección del calibre 27 y una jeringa de 1 ml para 30 recoger 0,1 ml del humor acuoso en la cámara anterior para producir una muestra. La muestra fue sometida a extracción en una columna C18 y luego se midió la cantidad del 17β-estradiol usando el estuche con estradiol y doble anticuerpo DPC (de Diagnostic Products Corporation, EE.UU.). Este es un método en el que se mide la radiactividad mediante un contador de rayos gamma usando un anticuerpo contra 35

estradiol y un reactivo de estradiol yodado 125I. Los valores medidos se calculan en términos de pg/ml. Los resultados se muestran en la Figura 3. La concentración del 17β-estradiol en la cámara anterior, inmediatamente antes de la instilación, era de 153 pg/ml en promedio.

Tal como puede observarse a partir de la Fig. 3, en cualquiera de las gotas 5 oculares, la concentración del 17β-estradiol en la cámara anterior mostró el valor más alto después de 30 minutos a partir de la instilación, y después de esto éste disminuyó. Puesto que la concentración del 17β-estradiol incluido en 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina de las gotas oculares B en la cámara anterior tiene el valor más alto, puede afirmarse de que éstas pasan a través de la córnea y de la conjuntiva de la 10 manera más potente. A partir de este resultado, puede estimarse que la 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina actúa como un agente intensificador del 17β-estradiol que pasa a través de la córnea y de la conjuntiva, es decir actúa para pasar con facilidad a través de la córnea y de la conjuntiva. Las que mostraron la segunda concentración más alta del 17β-estradiol en la cámara anterior fueron las gotas oculares C en las que 15 el 17β-estradiol estaba incluido en α + -ciclodextrinas. La α-dextrina tiene una baja solubilidad del 17β-estradiol, y la función de la -dextrina parece ser más potente. Las gotas oculares A (en forma de suspensión) tenían una baja concentración transferida a la cámara anterior, y manifestaron una mala permeabilidad. La razón por la cual se obtuvo este resultado puede considerarse en que, en el caso de las gotas oculares A, 20 ellas causan unos coágulos aglomerados con un tamaño aleatorio y el tamaño de partículas se vuelve grande como uno de los factores. Las gotas oculares D, en las que el 17β-estradiol estaba incluido en la metil-β-ciclodextrina, mostraron una más alta concentración transferida del 17β-estradiol en la cámara anterior (el valor después de 30 minutos a partir de la instilación era de: 36.178 pg/ml), pero en esta muestra, las 25 propiedades químicas fisiológicas de la córnea y de la conjuntiva han cambiado por causa de la metil-β-ciclodextrina, y había una permeación mórbida a través de una córnea y de una conjuntiva patológicas, por lo que éstas se excluyeron del gráfico.

A partir de los resultados experimentales, se encontró que las gotas oculares B, que son un producto de inclusión de 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina, eran las mejores. 30

Ejemplo 4 Tratamiento de una catarata (experimento con animales)

Se llevaron a cabo, con un estudio a ciegas, experimentos con animales con el fin de investigar el efecto del tratamiento de una catarata mediante gotas oculares con 17β-estradiol (concentración de 17β-estradiol: 0,1 g/l y 0,01 g/l) preparadas a partir 35

de un producto de inclusión del 17β-estradiol soluble en agua en la 2-hidroxipropil-β-

ciclodextrina procedente de SIGMA Co. (EE.UU.).

Grupo testigo (Testigo): En los ojos de ratones (en 4 ojos) se irradiaron rayos ultravioleta UV-A + UV-B (cada uno con 0,36J: 100 µW x 1 hora) desde las 10 de la noche hasta las 11 de la noche en el primer día, en el tercer día, en el quinto día cada 5 vez, y tres veces en total. Con la condición de que, antes de 1 minuto y después de 1 minuto de cada irradiación con rayos ultravioleta, se instiló 1 gota (50 µl) de una PBS (solución salina fisiológica tamponada con fosfato), y se instiló 1 gota de una PBS en cada caso una vez en el segundo día, en el cuarto día, en el sexto día, en el séptimo día, en el octavo día, en el noveno día y en el décimo día. 10

Grupo con irradiación con rayos ultravioletas al que se había administrado previamente (Pre 0,1 g/l y Pre 0,01 g/l): En los ojos de un ratón se irradiaron rayos ultravioletas UV-A + UV-B (cada uno con 0,36J: 100 µW x 1 hora) desde las 10 de la noche hasta las 11 de la noche en el primer día, en el tercer día, en el quinto día cada vez, y tres veces en total. Con la condición de que, antes de 1 minuto de cada 15 irradiación con rayos ultravioletas, se instiló 1 gota (50 µl) de unas gotas oculares con una concentración de 17β-estradiol de 0,1 g/l (en 4 ojos) o de 0,01 g/l (en 4 ojos), y después de 1 minuto a partir de la irradiación con rayos ultravioletas se instiló 1 gota de PBS, y en el segundo día, en el cuarto día, en el sexto día, en el séptimo día, en el octavo día, en el noveno día y en el décimo día se instiló cada vez 1 gota (50 µl) de 20 unas gotas oculares con una concentración de 17β-estradiol de 0,1 g/l o de 0,01 g/l.

Grupo con irradiación con rayos ultravioletas al que se administró posteriormente (Post 0,1 g/l y Post 0,01 g/l): En los ojos de un ratón se irradiaron rayos ultravioletas UV-A + UV-B (cada uno con 0,36J: 100 µW x 1 hora) desde las 10 de la noche hasta las 11 de la noche en el primer día, en el tercer día, en el quinto día cada 25 vez, y tres veces en total. Con la condición de que, antes de 1 minuto de cada irradiación con rayos ultravioletas, se instiló 1 gota de PBS y después de 1 minuto a partir de la irradiación con rayos ultravioletas se instiló 1 gota (50 µl) de unas gotas oculares con una concentración de 17β-estradiol de 0,1 g/l (en 4 ojos) o de 0,01 g/l (en 4 ojos), y en el segundo día, en el cuarto día, en el sexto día, en el séptimo día, en el 30 octavo día, en el noveno día y en el décimo día se instiló cada vez 1 gota (50 µl) de unas gotas oculares con una concentración de 17β-estradiol de 0,1 g/l o de 0,01 g/l.

A las 10 de la noche del décimo día, se fotografió la parte anterior del ojo (Fig. 4).

Tal como puede observarse a partir de la Fig. 4, cuando se irradiaron rayos ultravioletas UV-A + UV-B a los ojos de un ratón durante 3 días, en el décimo día apareció una catarata en el grupo testigo, al que se le administró solamente PBS, mientras que en el grupo con irradiación al que se había administrado previamente y en el grupo con irradiación al que se administró posteriormente en el que se habían 5 instilado unas gotas oculares que contenían 17β-estradiol, podría confirmarse que escasamente se observaba una aparición de cataratas. El grupo al que se le administraron gotas oculares con una mayor concentración de 17β-estradiol manifestó menos aparición de cataratas que el grupo al que se le administraron gotas oculares con una menor concentración de las mismas, y los efectos farmacéuticos eran más 10 potentes. También, el grupo con irradiación con rayos ultravioleta al que se había administrado previamente mostró menos aparición de cataratas que el grupo con irradiación al que se administró posteriormente, y los efectos farmacéuticos manifestaron ser más potentes. En el 17β-estradiol incluido en 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina, podría confirmarse que habían estado presentes tanto el efecto de 15 prevención como el efecto del tratamiento de una catarata por instilación.

Unas gotas oculares que contenían 17β-estradiol incluido en 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina (concentración de 17β-estradiol 10 mg/l) se añadieron a los ojos de un ratón y cuando el núcleo de las células de la corteza de la lente fue sometido a tinción inmunitaria por un anticuerpo contra un receptor de estrógenos, en la periferia del 20 núcleo y en el núcleo se tiñó como se describe aquí seguidamente, con lo que se podría conformar que el 17β-estradiol había llegado a las células de la corteza de la lente.

Ejemplo 5 Transferencia del receptor de estrógenos dentro del núcleo de las células 25 de la capa (nuclear) granular externa de la retina (experimento con animales).

En unos ratones machos con una edad de tres meses (peso corporal: aproximadamente 20 g) se instiló 1 gota (50 µl) de unas gotas oculares con una concentración de 17β-estradiol de 100 mg/l, preparadas tal como se menciona en el Ejemplo 7 presentado seguidamente, una vez por la mañana en el primer día, dos 30 veces por la mañana y por la tarde en el segundo día, y una vez por la mañana en el tercer día. Las células (células visuales) en la capa (nuclear) granular externa de la retina de un ratón después de la forma de instilación durante 3 días se convirtieron en las muestras. Como un testigo, se usó una muestra procedente de un ratón al que se había instilado agua destilada de la misma manera. 35

De acuerdo con el método experimental que se menciona aquí seguidamente, las muestras fueron sometidas a una tinción inmunitaria usando un clon AER311 de anticuerpos anti-receptores de estrógenos (IgG monoclonal de ratón 2aK) (200 µg/200 µl), y fueron observadas con un microscopio (x100). Los resultados se muestran en las Figs. 5 y 6. 5

En un testigo, se podría confirmar que era pequeña (véase la Fig. 5) la transferencia del receptor de estrógenos al núcleo de las células (células visuales) en la capa (nuclear) granular externa de la retina de un ratón, pero en las células (células visuales) en la capa (nuclear) granular externa de la retina de un ratón al que se habían instilado unas gotas oculares que contenían 17β-estradiol soluble en agua, 10 podría confirmarse que el receptor había sido transferido al núcleo de las células en una mayor cantidad en comparación con las del testigo (véase la Fig. 6). De acuerdo con las gotas oculares solubilizadas en agua, se podría confirmar que el 17β-estradiol había sido transferido incluso a una capa profunda (retina) en el ojo, y se podría probar que las células dianas están activadas. 15

Ejemplo 6 Experimento biológico molecular (experimento con animales)

Se podría encontrar que el 17β-estradiol puede ser transferido suficientemente a los ojos de acuerdo con una instilación, por inclusión con 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina, de manera tal que unos experimentos detallados se llevaron a cabo 20 según la biología molecular.

(Materiales y métodos experimentales)

<Materiales experimentales>

Como el ratón se usó el C57BL/6 (adquirido de Saitama Experimental Animals Supply Co., Ltd.). Para una anestesia en el momento de efectuar la disección, se usó 25 éter.

Se prepararon gotas oculares a partir de 17β-estradiol incluido en 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina (SIGMA Co., MO, EE.UU), y se usaron con una concentración de 17β-estradiol de 0,01 a 100 µg/ml.

El clon AER311 de anticuerpos monoclonales anti-receptores de estrógenos se 30 adquirió de Upstate Co. (NY, EE.UU). El reactivo necesario para la tinción inmunitaria que contenía un anticuerpo secundario se adquirió de VENTANA Co. (AZ, EE.UU).

<Método de preparación de una rebanada enfriada con hielo>

Después de haber transcurrido un período de tiempo predeterminado a partir de la instilación, un ratón fue anestesiado con éter para realizar su eutanasia, se 35

extrajo un globo de ojo que contenía un nervio óptico parcial, y se enfrió con hielo junto con una PBS (solución salina fisiológica tamponada con fosfato) que contenía 2 % de paraformaldehído con el fin de fijarlo durante 1 hora. Luego, se empotró en isopentano enfriado con hielo seco, usando el TISSU MOUNT (Shiraimatu Instrument Co., Ltd.). La rebanada fue sumergida en una solución fijadora de HE (79 % de etanol, 20 % de 5 formalina y 1 % de ácido acético) durante 5 minutos después de la fijación usando un criostato (LEICA CM1900, ALEMANIA). Se lavó con PBS y se aplicó para la exploración de la tinción.

<Detección de un receptor de estrógeno por tinción inmunitaria>

Un trozo cortado en rebanadas fue sometido a una tinción inmunitaria usando 10 un sistema HX de VENTANA Co. Como protocolo de tinción, se seleccionó el protocolo de DAB Sin Parafina, la muestra fue sometida a un tratamiento de activación del antígeno mediante un agente acondicionador CCl, y se hizo reaccionar con un anticuerpo anti-receptores de estrógenos, diluido en una concentración de 4 µg/ml con una solución diluyente de anticuerpos, como un anticuerpo primario durante 32 15 minutos. La coloración usando un anticuerpo secundario y diaminobencidina (DAB) se llevó a cabo usando el Estuche de Amplificación de Ventana. También se usó un REACTIVO DE AZULADO (BLUING REAGENT) para después de la contra-tinción. Después de haberse completado la tinción, se llevó a cabo una penetración usando etanol y xileno, y el montaje se llevó a cabo usando un Soft Mount (Wako Junyaku 20 K.K.).

<Observación de una rebanada teñida>

Para la observación de la rebanada sometida a tinción inmunitaria, se usó un microscopio vertical, la imagen se fotografió mediante una cámara digital (Nikon CoolPix 900), y se analizó presentándola visualmente en un ordenador personal 25 usando un programa lógico soft Photoshop para el tratamiento de imágenes.

<Distribución de los receptores de estrógenos en un globo de ojo>

Puesto que se han explicado ahora la función y el mecanismo de un estrógeno, se ha conocido realizar una activación de un receptor de estrógenos en células por fijación a un estrógeno, transferencia dentro de un núcleo, aumento de la actividad de 30 transcripción de un grupo específico de genes por fijación a un agente intensificador. Así, se examina si existe en un globo de ojo un receptor sobre el que se requiere que actúe el estrógeno. Como resultado, cuando éste se observó por coloración usando DAB, se podría obtener una imagen positiva de anticuerpos anti-receptores de estrógenos en una retina que contiene una capa (nuclear) granular externa (Fig. 7), 35

una parte de la lente (Fig. 8), la córnea (Fig. 9), y el cuerpo ciliar (Fig. 10). En el cuerpo ciliar el fondo era fuerte, por lo que fue difícil emitir un juicio.

Se llevo a cabo una confirmación de si se había transferido 17β-estradiol a una parte profunda de un ojo debido a una instilación, y si éste es eficaz o no para el tratamiento de diversas clases de enfermedades del fondo de ojo, enfermedades del 5 nervio óptico, tales como un glaucoma, etc.

<Transferencia al núcleo en una retina de un receptor de estrógenos debido a la instilación de 17β-estradiol>

Como antes se ha mencionado, se admitió la presencia de un receptor de estrógenos en la retina. Sin embargo, tal como se muestra en la Fig. 7, su localización 10 era el citoplasma, y este estado es un tipo desactivado. Se ha informado con un gran número en células cultivadas, etc, que cuando se fija un estrógeno, entonces se produce una transferencia al núcleo. Sin embargo, in vivo, es bastante incierto si el estrógeno induce una transferencia del receptor al núcleo, y esto puede ser confirmado por tinción inmunitaria de un trozo cortado de tejido, o no. Por lo tanto, se 15 examinó en primer lugar si se puede admitir o no la transferencia de un receptor desde la retina al núcleo, por instilación de un estrógeno.

(1) Transferencia de un receptor de estrógenos al núcleo en la retina

A un ratón se le instiló 1 gota (50 µl) de unas gotas oculares que contenían un estrógeno (17β-estradiol incluido en 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina 10 µg/ml) cuatro 20 veces al mediodía en el 1er día, por la mañana y por la tarde en el 2º día, y por la mañana en el 3er día, y después de 1 hora a partir de la instilación final, se extrajo un globo de ojo, se congeló y se cortó en rebanadas, y luego se tiño con un anticuerpo anti-receptores de estrógenos. Como resultado, en células de la capa (nuclear) granular externa de la retina se puede confirmar una imagen transferida dentro del 25 núcleo con una cierta relación (desde la Fig. 11 hasta la Fig. 14). Basándose en los resultados, a continuación, se han de analizar un cambio en la concentración de 17β-estradiol instilado y un cambio debido a un tiempo después de la adición.

(2) Cambio debido a una concentración de 17β-estradiol instilado

Para examinar una concentración de 17β-estradiol instilado, que es capaz de 30 transferir un receptor de estrógenos de células granulares externas (capa nuclear) de la retina dentro de un núcleo, diversas concentraciones de 17β-estradiol incluido en 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina se instilaron cuatro veces, al mediodía en el 1er día, por la mañana y por la tarde en el 2º día y por la mañana en el 3er día de la misma manera que en (1), y después de 1 hora a partir de la instilación final, se extrajo el globo de 35

ojo, se congeló y se cortó en rebanadas y luego se tiñó con un anticuerpo anti-receptores de estrógenos. Los resultados se muestran en la Fig. 15. Cuando se instilaron unas gotas oculares con una concentración de 0,01 o más µg/ml de 17β-estradiol, la transferencia del receptor al núcleo se puede admitir significativamente en comparación con unas gotas oculares (17β-estradiol 0 µg/ml) que contenían 5 solamente una PBS (solución salina fisiológica tamponada con fosfato). La transferencia al núcleo aumentó de un modo dependiente de la dosis hasta una concentración de 17β-estradiol de 100 µg/ml.

(3) Cambio después de la instilación de 17β-estradiol

Con la finalidad de examinar hasta cuándo continúa la transferencia de un 10 receptor de estrógenos al núcleo mediante el 17β-estradiol incluido en 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina instilado, se instiló 17β-estradiol tres veces con una concentración de 10 µg/ml a intervalos de 10 minutos y después de esto se extrajeron globos de ojos a las 2, 8, 24 y 48 horas a partir de la instilación inicial, se congelaron y se cortaron en rebanadas, y luego se tiñeron con un anticuerpo anti-receptores de estrógenos. Los 15 resultados se muestran en la Fig. 16. Tal como se puede observar a partir de esta figura, después de 2 horas a partir de la instilación, se puede observar una transferencia al núcleo en un 36 % de las células granulares externas (capa nuclear) de la retina, y ésta se hizo de 22 % y de 19 % después de 24 horas y 48 horas, respectivamente, y se puede admitir una disminución en el número de células 20 transferidas hasta cuando se añadió un exceso ligero de 18 % de un testigo al que se había añadido 0 µg/ml de 17β-estradiol.

De acuerdo con la instilación de 17β-estradiol, se puede confirmar que, en células granulares externas (capa nuclear) de la retina, un receptor de las mismas es transferido al núcleo de una manera dependiente de la dosis. Estos resultados 25 muestran con claridad que el 17β-estradiol actúa directamente sobre una capa profunda de un ojo por instilación. Sin embargo, los efectos disminuyeron después de 1 a 2 días. También, el receptor de estrógenos transferido al núcleo es sometido a una proteólisis.

30

(Conclusiones)

La acción de un 17β-estradiol incluido en 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina sobre un globo de ojo, debida a la instilación, se confirmó por biología molecular usando modelos con animales. Esto se hace para mostrar que un estrógeno, tal como el 17β-

estradiol, etc., se puede hacer actuar con facilidad sobre los ojos por instilación usando este método para una aplicación clínica con datos.

Cuando se instilaron 0,01 o más µg/ml de 17β-estradiol en comparación con un testigo en el que se instiló PBS, se puede admitir significativamente la transferencia de un receptor de estrógenos en células granulares externas (capa nuclear) de la retina 5 dentro del núcleo, la transferencia dentro del núcleo es dependiente de la dosis con una concentración de desde 0,1 µg/ml hasta 100 µg/ml, y se puede encontrar que una concentración de 0,1 µg/ml hasta 100 o más µg/ml es una concentración apropiada de gotas oculares que contienen 17β-estradiol.

También, los efectos pueden continuar durante un largo periodo de tiempo (24 10 horas o más) desde un intervalo de tiempo de transferencia dentro del núcleo, de manera tal que es suficiente con una administración en una vez o en dos veces por cada 1 hasta 2 días, y se puede concentrar que el número de administraciones de gotas oculares se puede hacer pequeño.

A partir de los experimentos, se puede esperar que mediante una instilación 15 son posibles unos tratamientos de diversas clases de enfermedades del fondo de ojo, un tratamiento de enfermedades del nervio óptico, tales como un glaucoma, etc., y se puede afirmar que unas gotas oculares que contienen 17β-estradiol incluido en 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina constituyen un excelente agente de tratamiento por instilación para diversas clases de enfermedades. 20

Ejemplo 7 Preparación de gotas oculares/agentes de lavado de los ojos

Un producto de inclusión de 17β-estradiol soluble en agua (17β-estradiol encapsulado en ciclodextrina, procedente de SIGMA CO. (EE.UU.); que es un producto de inclusión que usa 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina, y que contiene 45 mg de 25 17β-estradiol por 1 g del producto de inclusión) se disolvió en un agua destilada esterilizada con una concentración de 2,2 g/l (100 mg/l de 17β-estradiol) para preparar gotas oculares/agentes de lavado de los ojos.

Ejemplo 8 Efectos sobre la presión intraocular (experimento con animales) 30

Para los experimentos, se usaron cinco conejos domésticos en colores (en 10 ojos) (peso corporal: de 1,8 a 2 kg) con una edad de desde 8 meses hasta 10 meses desde el nacimiento.

(1) Fluctuación de la presión intraocular durante un día

Se midió la fluctuación de la presión intraocular de conejos domésticos durante un día. Los valores medios fueron de 14 mm de Hg a las 9 de la mañana, de 12 mm de Hg a la 1 de la tarde, de 12 mm de Hg a las 3 de la tarde y de 16 mm de Hg a las 6 de la tarde. 5

La presión intraocular media fue de 14 ± 2 mm de Hg.

(2) Efecto 1 de gotas oculares/agentes de lavado de los ojos

Tal como puede observarse a partir de la fluctuación de la presión intraocular de un conejo doméstico durante un día, la presión intraocular aumenta por la tarde, de manera tal que unas gotas oculares/agentes de lavado de los ojos se administraron a 10 la 1 de la tarde y se observaron los efectos. La presión intraocular del conejo doméstico antes del tratamiento con gotas oculares/agentes de lavado de los ojos era de 14 mm de Hg a la 1 de la tarde.

En los ojos del conejo doméstico se instilaron 25 µl (1 gota) de gotas oculares/agentes de lavado de los ojos con 17β-estradiol, que se habían preparado en 15 Ejemplo 7 por un ojo a la 1 de la tarde. Cuando se midió la presión intraocular del conejo doméstico en el que se había instilado a las 4:30 de la tarde, es decir después de 3,5 horas a partir de la instilación, ésta disminuyó hasta 10 mm de Hg, y, también, el efecto continuó al menos hasta las 6 de la tarde, esto es después de 5 horas a partir de la instilación. 20

Por otra parte, un conejo doméstico en el que no se había instilado fue lavado con gotas oculares/agentes de lavado de los ojos con 17β-estradiol, que se habían preparado en el Ejemplo 7 a la 1 de la tarde. La máxima caída de la presión intraocular apareció después de 50 minutos a partir del lavado. Los efectos de disminución de la presión intraocular continuaron al menos hasta después de 5 horas tras el lavado. 25

(3) Efecto 2 de gotas oculares/agentes de lavado de los ojos

Se llevó a cabo un experimento usando un conejo doméstico, en el cual 1 ojo solamente tenía una alta presión intraocular. (Estos datos no se usaron para el cálculo del promedio).

La presión intraocular del conejo doméstico a las 5 de la tarde antes de realizar 30 una instilación era de 24 mm de Hg. Cuando el conejo doméstico fue lavado con gotas oculares/agentes de lavado de los ojos con 17β-estradiol, que se han preparado en el Ejemplo 7 a las 5 de la tarde, la presión intraocular disminuyó hasta 15 mm de Hg después de 15 minutos a partir del lavado. Este conejo doméstico fue lavado inmediatamente después con las mismas (los mismos) gotas oculares/agentes de 35

lavado de los ojos, la presión intraocular disminuyó hasta 13 mm de Hg después de 45 minutos a partir del lavado .

El conejo doméstico sometido a un tratamiento con gotas oculares/agentes de lavado de los ojos se dejó reposar, y la presión intraocular se midió al día siguiente a las 9 de la mañana, y ella era de 18 mm de Hg, y permanecieron los efectos de las/los 5 gotas oculares/agentes de lavado de los ojos en el día anterior. En el conejo doméstico se instilaron 25 µl (1 gota) de las/los gotas oculares/agentes de lavado de los ojos con 17β-estradiol, que se habían preparado en el Ejemplo 7, la presión intraocular se hizo disminuir hasta 13 mm de Hg después de 3 horas y 15 minutos a partir de la instilación. En este momento, se instilaron de nuevo 25 µl de las/los gotas 10 oculares/agentes de lavado de los ojos con 17β-estradiol que se habían preparado en el Ejemplo 7, la presión intraocular, después de 3 horas y 15 minutos a partir de la instilación, era nuevamente de 13 mm de Hg. Después de esto, se instilaron adicionalmente 25 µl de las mismas (los mismos) gotas oculares/agentes de lavado de los ojos, la presión intraocular era de 12 mm de Hg después de 1 hora y 50 minutos a 15 partir de la instilación.

La presión intraocular al día siguiente (en el tercer día) antes de la instilación era de 10 mm de Hg a las 9 de la mañana, y en este momento se instilaron una vez 25 µl de las/los gotas oculares/agentes de lavado de los ojos con 17β-estradiol, que se habían preparado en el Ejemplo 7, la presión intraocular al mediodía (después de 3 20 horas desde el momento de la instilación) era de 9 mm de Hg, la presión intraocular a las 3:15 de la tarde era de 12 mm de Hg, y la presión intraocular a las 6 de la tarde era de 11 mm de Hg. Se puede encontrar que los efectos de una instilación continúan durante un largo período de tiempo.

Puesto que los efectos permanecen al día siguiente de la administración, 25 puede pertenecer a esto un receptor de estrógenos y puede pertenecer a esto una acción con un nivel de ADN. Hay una posibilidad, debida a la generación de NO. Se puede considerar otro mecanismo distinto del anterior.

Ejemplo 9 Efecto del tratamiento de un paciente de glaucoma con tensión normal 30

El paciente es una mujer con edad de 75 años, a la que se le diagnosticó un glaucoma con tensión normal.

Un producto de inclusión de 17β-estradiol soluble en agua (17β-estradiol encapsulado en ciclodextrina, disponible de SIGMA CO. (EE.UU.); un producto de inclusión que usa 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina, y que contiene 45 mg de 17β-35

estradiol por 1 g del producto de inclusión) fue disuelto en un agua destilada esterilizada con una concentración de 2,2 g/l (100 mg/l de 17β-estradiol) para preparar unas gotas oculares.

En el paciente antes mencionado, se instiló 1 gota (25 µl) de unas gotas oculares por cada ojo una vez cada mañana durante 10 días. 5

Las presiones intraoculares del paciente fueron de 14 mm de Hg a la derecha y de 12 mm de Hg a la izquierda antes de la instilación, y fueron de 12 mm de Hg a la derecha y 3 mm de Hg a la izquierda después de la instilación durante 10 días.

De acuerdo con una medición del campo visual mediante el Octopus 1-2-3 del paciente antes de la instilación, se confirmó un defecto en el campo visual (Figs. 17 y 10 18), pero de acuerdo con una instilación durante 10 días, ambos ojos mejoraron extremadamente bien (Figs. 19 y 20). Se pueden confirmar clínicamente los efectos del tratamiento de un glaucoma con tensión normal.

Ejemplo 10 Efecto del tratamiento de un glaucoma de ángulo abierto con una alta 15 presión intraocular

El paciente es una mujer con una edad de 54 años, a la que se le diagnosticó un glaucoma de ángulo abierto con una alta presión intraocular.

Un producto de inclusión de 17β-estradiol soluble en agua (17β-estradiol) encapsulado en ciclodextrina, disponible de SIGMA CO. (EE.UU.); un producto de 20 inclusión que usa 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina, y que contiene 45 mg de 17β-estradiol por 1 g del producto de inclusión) fue disuelto en un agua destilada esterilizada con una concentración de 2,2 mg/l (100 µg/l de 17β-estradiol) para preparar gotas oculares.

En el paciente antes mencionado, se instiló 1 gota (25 µl) de unas gotas 25 oculares una vez cada mañana durante una semana.

Las presiones intraoculares del paciente fueron de 23 mm de Hg a la derecha y de 24 mm de Hg a la izquierda antes de la instilación, y fueron de 16 mm de Hg a la derecha y de 18 mm de Hg a la izquierda después de la instilación durante 1 semana.

En lo que se refiere al campo visual, se admitió un escotoma, pero en el ojo 30 derecho, un ligero defecto (Fig. 21) se podría recuperar de manera sustancialmente normal (Fig. 23), y en el ojo izquierdo, un defecto progresivo (Fig. 22) se podría mejorar ligeramente (Fig. 24).

Cuando se continuó adicionalmente la instilación, a las 3 semanas, las presiones intraoculares del paciente habían aumentado hasta 20 mm de Hg a la 35

derecha y hasta 19 mm de Hg a la izquierda antes de la instilación. Se considera que una concentración de 17β-estradiol de 100 µg/l está cerca del límite inferior de la concentración que revela un efecto. Un tratamiento más efectivo se puede llevar a cabo produciendo una concentración más alta, o aumentando el número de veces en que se realiza la instilación por 1 día. 5

Los efectos del tratamiento de un glaucoma abierto con alta presión intraocular se podrían confirmar clínicamente.

Ejemplo 11 Tratamiento de una catarata (efecto de un tratamiento clínico)

Un paciente con una catarata fue tratado por preparación de unas gotas 10 oculares con una concentración de 1 mg/ml de 17β-estradiol, que se habían preparado disolviendo un producto de inclusión de 17β-estradiol soluble en agua, usado en el Ejemplo 7, en una agua destilada esterilizada, y se instiló una gota (50 µl) del mismo a las 8 de la mañana cada mañana una vez por 1 día, y entonces se admitió una mejoría en la agudeza visual (véase la Fig. 25). También, en un microscopio con lámpara de 15 hendidura para el examen, se observó que se había reducido la opacidad de una catarata.

Ejemplo 12 Efecto del tratamiento de una presbiopía

El paciente es un varón con una edad de 59 años, que padece de presbiopía 20 que tiene una miopía ligera de –2,5 dioptrios y un astigmatismo de –1,0D.

Cuando se midió el punto cercano del ojo izquierdo del paciente sin corrección con lentes, éste era de 29 cm.

Un producto de inclusión de 17β-estradiol soluble en agua (17β-estradiol) encapsulado en ciclodextrina, disponible de SIGMA CO. (EE.UU.); un producto de 25 inclusión que usa 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina, y que contiene 45 mg de 17β-estradiol por 1 g del producto de inclusión) se disolvió en un agua destilada esterilizada con una concentración de 2,2 g/l (100 mg/l de 17β-estradiol) para preparar unas gotas oculares.

En el paciente se instiló 1 gota (25 µl) de unas gotas oculares a las 9 de la 30 mañana por cada ojo. El punto cercano del paciente, que era de 29 cm antes de la instilación, se hizo de 27 cm después de 1 hora a partir de la instilación, de 24 cm después de 3 horas, y se observó una mejoría en la refracción en el máximo de 5 cm (Fig. 26). Incidentalmente, el punto lejano era en promedio de 41 ± 2 cm.

Se demostró clínicamente por instilación el efecto del tratamiento de una presbiopía.

Ejemplo 13 Tratamiento de una degeneración pigmentaria de la retina

El paciente es una mujer con una edad de 86 años, y que tenía unos ojos con 5 una lente intraocular artificial insertada, que ya habían sido sometidos a una operación de cataratas. Debido a una degeneración pigmentaria de la retina, se produce un estrechamiento del campo visual. En el paciente se instiló una gota (50 µl) de unas gotas oculares que contenían 17β-estradiol, preparadas en el Ejemplo 7 en una concentración de 100 mg/ml una vez cada día (a las 8 de la mañana), y entonces se 10 mejoraron gradualmente los campos visuales. Después de 77 días desde el comienzo de la instilación, se podría confirmar que mejoraron tanto la agudeza visual como el campo visual.

La agudeza visual antes de la instilación era

de Vd = 0,4xIOL (visión después de la corrección: 0,6) y 15

de Vs = 0,8xIOL (visión después de la corrección: 0,8)

Sin embargo después de los 77 días, los valores fueron de

Vd = 0,4xIOL (visión después de la corrección: 0,8) y

Vs = 0,5xIOL (visión después de la corrección: 1,0)

con lo cual se podría confirmar una mejoría en las agudezas visuales. 20

También, cuando los campos visuales se midieron por un OCTOPUS con un perímetro estático de 1-2-3 antes de la instilación y después de 77 días a partir de la iniciación de la instilación, y ellos fueron comparados, se podría confirmar que habían mejorado (véanse las Figs. 27 a 30).

25

Ejemplo 14 Tratamiento de un chalazión

En el ojo derecho de una niña de 8 años con chalazión se instiló 1 gota (50 µl) de unas gotas oculares que contenían 17β-estradiol, preparadas en el Ejemplo 11, con una concentración de 1 mg/l una vez cada mañana y, entonces, el tumor desapareció después de 12 días. 30

Ejemplo 15 Tratamiento de una miopía

1. En un niño de 13 años de edad [agudeza visual: Vd = 0,7(1,5x-0,5D)

Vs = 0,6(1,5x-0,5D)]

se instiló 1 gota (50 µl) de unas gotas oculares preparadas disolviendo un producto de inclusión de 17β-estradiol soluble en agua, usado en el Ejemplo 7, en un 17β-estradiol 5 que contenía agua destilada con una concentración de 100 µg/l una vez por día a las (8 de la mañana), y entonces se mejoró la agudeza visual hasta

Vd = 1,0(1,5x-0,25D)

Vs = 1,0(1,5x-0,25D)

después de 9 días. 10

2. En un niño de 13 años de edad [agudeza visual: Vd = 0,4(1,5x-0,75D)

Vs = 0,3(1,5x-1,25D)]

se instiló 1 gota (50 µl) de unas gotas oculares preparadas en el Ejemplo 11, que contenían 17β-estradiol con una concentración de 1 mg/l una vez cada mañana, y entonces la agudeza visual se mejoró después de 45 días a partir de la instilación tal 15 como se menciona seguidamente.

Vd = 1,0 (1,5x-0,5D)

Vs = 0,5 (1,5x-1,0D)

Ejemplo 16 Tratamiento de una presbiopía 20

En un varón con una edad de 49 años con una presbiopía que tenía corregida la agudeza visual cercana (visión cercana después de la corrección) antes del tratamiento de

Vd = 0,6/30 cm x NJB

Vs = 0,4/30 cm x NJB 25

se instiló 1 gota (50 µl) de unas gotas oculares preparadas en el Ejemplo 11, que contenían 17β-estradiol con una concentración de 1 mg/l una vez cada mañana, y entonces, después de una instilación durante 14 días, la visión cercana después de la corrección se mejoró tal como se menciona seguidamente

Vd = 1,0/30 cm x NJB 30

Vs = 0,7/30 cm x NJB

Ejemplo 17 Tratamiento de una hemorragia coriorretinal

En un varón con una edad de 80 años, que tenía una hemorragia coriorretinal en el ojo derecho, se le instiló 1 gota (50 µl) de unas gotas oculares preparadas en el 35

Ejemplo 11, que contenían 17β-estradiol con una concentración de 1 mg/l, una vez cada mañana, y simultáneamente se administró por vía oral una cantidad total de 30 mg de Adona (nombre registrado) tres veces por día, y entonces la hemorragia desapareció después de 45 días.

5

Ejemplo 18 Tratamiento de una úlcera corneal

En el ojo derecho de una mujer con una edad de 76 años, que es una paciente que tiene una úlcera corneal recurrente en ambos ojos alternativamente y que se diagnosticó como que tenía una ulcera corneal de Mooren, se instiló 1 gota (50 µl) de unas gotas oculares que contenían 17β-estradiol, preparadas en el Ejemplo 11 con 10 una concentración de 1 mg/l dos veces por día a las 8 de la mañana y a las 5 de la tarde, y entonces la enfermedad estaba curada en 3 semanas. Por lo tanto, se puede considerar que es posible el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria.

Ejemplo 19 Tratamiento de una degeneración corneal 15

1. En el ojo izquierdo de una mujer con una edad de 63 años, a la que se le diagnosticó una degeneración corneal granular, se instiló 1 gota (50 µl) de unas gotas oculares de 17β-estradiol con una concentración de 1 mg/l, preparadas en el Ejemplo 11, dos veces (a las 8 de la mañana y a las 3 de la tarde) en un día, y entonces la agudeza visual se mejoró con un tratamiento durante 2 semanas. 20

Vs = 0,6 (n·c) → Vs = 0,4 (0,8)

2. En el ojo derecho de una mujer con una edad de 68 años, a la que se le diagnosticó una degeneración corneal granular, se instiló 1 gota (50 µl) de las mismas gotas oculares que antes se han mencionado, una vez cada mañana, entonces se observó una mejoría en la agudeza visual durante 1 semana como de 25

Vd = 0,3 (0,9) → Vd=0,3 (1,0), y, después de 2 meses, ésta se mejoró notablemente como de Vd = 0,5 (1,2). El valor puesto entre paréntesis muestra la visión después de la corrección.

Ejemplo 20 Tratamiento de una iridociclitis 30

En una paciente femenina con una edad de 85 años en cuyo ojo derecho se observó una iridociclitis, se instiló 1 gota (50 µl) de unas gotas oculares con una concentración de 17β-estradiol de 1 mg/l, preparadas en el Ejemplo 11, a las 8 de la mañana cada mañana, y entonces la enfermedad fue aligerada después de 1 semana (desaparecieron las células inflamatorias en la cámara anterior). 35

Ejemplo 21 Tratamiento del síndrome de Posner-Schlossman

En un paciente con una edad de 36 años en cuyo ojo izquierdo se observó iritis y un aumento en la presión intraocular (Tos = 36 mm de Hg) que se diagnostico como con el síndrome de Posner-Schlossman, se instiló 1 gota (50 µl) de unas gotas oculares con una concentración de 17β-estradiol de 1 mg/l, y preparadas en el 5 Ejemplo 11, una vez a las 8 de la mañana por cada día durante 1 semana, entonces desapareció la iritis y también se normalizó la presión intraocular (Tos = 17 mm de Hg).

Ejemplo 22 Tratamiento de enfermedades del sistema nervioso central 10

En una mujer con una edad de 80 años, a la que se le diagnosticó una esquizofrenia que fue tratada preparando unas gotas oculares con una concentración de 17β-estradiol de 1 mg/ml, que habían sido preparadas disolviendo el producto de inclusión de 17β-estradiol soluble en agua usado en el Ejemplo 7 en un agua destilada y esterilizada, se instiló 1 gota (50 µl) de las mismas cada mañana una vez por 1 día, y 15 entonces se obtuvo, como se menciona seguidamente, una mejoría en la agudeza visual y una mejoría en el estado mental.

En el momento del comienzo Vd = 0,1xIOL(0,3)

Vs = 0,09xIOL(0,1)

↓ 1 mg/l instilado con 1 gota (50 µl) 20

una vez cada mañana

Después de 14 días Vd = 0,1xIOL(0,4)

Vs = 0,1xIOL(0,1)

El paciente dijo que había mejorado

bien la agudeza visual 25

↓ 1 mg/l instilado con una 1 gota (50 µl)

una vez cada mañana

Después de 42 días Vd = 0,15xIOL (0,4)

Vs = 0,09xIOL (0,1)

El paciente dijo que se sentía animado, 30

↓ 1 mg/l instilado con 1 gota (50 µl)

una vez cada mañana

Después de 77 días Vd = 0,3xIOL (0,6)

Vs = 0,1xIOL (0,15)

↓ 1 mg/l dos veces (50 µl) 35

Después de 115 días Vd = 0,2xIOL (0,4)

Vs = 0,09xIOL (0,2)

El valor puesto entre paréntesis muestra la visión después de una corrección.

Podría confirmarse que esto es eficaz para el tratamiento de un paciente de esquizofrenia. Se puede considerar que esto es eficaz para el tratamiento de otras 5 enfermedades del sistema nervioso central, por ejemplo, enfermedades de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, ALS, psicosis, esquizofrenia, psicosis depresiva maniaca, etc.

Ejemplo 23 Tratamiento de una atrofia coriorretinal 10

En el ojo derecho de un varón con una edad de 65 años se administraron 50 µl de unas gotas oculares que contenían 1 mg/l de 17β-estradiol, preparadas en el Ejemplo 11, una vez por día durante 1 mes, un valor de 0,08 (no corregido) de la agudeza visual (imposible de corregir) se mejoró hasta una visión después de una corrección de 0,2, y cuando en el ojo izquierdo de una mujer con una edad de 70 años 15 se administró una gota (50 µl) de las gotas oculares antes mencionadas una vez por día durante 1 mes, la visión después de la corrección de 0,1 fue mejorada a una visión después de la corrección de 0,3.

Ejemplo 24 Tratamiento de una retinopatía diabética 20

A una paciente femenina con una edad de 74 años que padecía de una retinopatía diabética, se le administró 1 gota (50 µl) de unas gotas oculares que contenían 1 mg/l de 17β-estradiol, preparadas en el Ejemplo 11, mediante instilación una vez cada día. Después de aproximadamente 2 meses desde el comienzo de la administración, se observó la hemorragia retinal por medio de una fotografía de los 25 fondos de los ojos, ésta se había mejorado ligeramente. Después de alrededor de 100 días desde el comienzo de la administración, desapareció la hemorragia retinal.

Ejemplo 25 Tratamiento de un agujero macular.

En el ojo izquierdo de una mujer con una edad de 76 años, en el que se estaba 30 generando un agujero macular, y la agudeza visual de 0,7 estaba disminuyendo constantemente, se instiló 1 gota (50 µl) de unas gotas oculares (10 mg/l) que contenían 17β-estradiol incluido en 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina dos veces por día durante 1 mes, entonces el agujero macular se curó, y la agudeza visual se recuperó hasta 1,2. 35

Ejemplo 26 Efecto mejorado en la agudeza visual dinámica

En el ojo izquierdo de una mujer con una edad de 60 años, con una visión

después de la corrección de Vs = 0,1 (2,0 x-2,75 D  -0,50D Ax 115º)

˘ 5

se instilaron 50 µl (1 gota) de unas gotas oculares (con una concentración de 17β-estradiol de 10 µg/ml) que contenían 17β-estradiol incluido en 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina, de una sola vez, y se realizó una medición de la agudeza visual dinámica usando un aparato medidor de la agudeza visual dinámica KV-100 fabricado por NIDEK. Se mejoró abruptamente por la agudeza visual dinámica durante 30 minutos 10 hasta 1 hora y 15 minutos después de la instilación (Fig. 31).

Ejemplo 27 Regeneración y protección de células endoteliales de la córnea

A una paciente femenina con una edad de 30 años, cuyas células endoteliales se habían perdido y disminuido debido a que ella llevaba una lente de contacto se le 15 instiló 1 gota (50 µl) de unas gotas oculares que contenían 17β-estradiol (1 mg/l), preparadas en el Ejemplo 11, entonces ella se mejoró durante 10 días (se instiló una vez por día)

Número de células endoteliales del ojo derecho (por mm2): 2.801 → 3.412

Número de células endoteliales del ojo izquierdo (por mm2) 2.906 → 3.496 20

Como dispositivo de medición se usó un microscopio especular NONCON ROBO (KONAN INC).

Ejemplo 28 Mejoría en las fotopsias

En una mujer con una edad de 62 años, que se quejaba de fotopsias, se instiló 25 1 gota (50 µl) de unas gotas oculares (con una concentración de 17β-estradiol de 10 mg/l (10 µg/ml)) que contenían 17β-estradiol incluido en 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina, una vez por día durante 3 semanas y entonces el síntoma se aligero.

Ejemplo 29 Tratamiento de una queratoconjuntivitis epidémica 30

A una mujer con una edad de 26 años, que padecía de una queratoconjuntivitis epidémica, se le administró 1 gota (50 µl) de unas gotas oculares (con una concentración de 17β-estradiol de 1 mg/l) que contenían 17β-estradiol incluido en 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina, una vez por día, entonces se curó la queratitis superficial difusa en el cuarto día, mientras que aumentaron las descargas en el ojo. 35

Ejemplo 30 Tratamiento de una astenopía

A un varón con una edad de 30 años, que se quejaba de fatiga ocular debido a entrar y trabajar en un ordenador, se le administraron unas gotas oculares (con una concentración de 17β-estradiol de 10 mg/l), que contenían 17β-estradiol incluido en 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina, una vez por día (50 µl), y entonces la astenopía fue 5 aligerada durante 3 semanas.

Ejemplo 31 Tratamiento de una coriorretinopatía central (coriorretinitis)

En un paciente masculino con una edad de 18 años, que tenía una agudeza visual en disminución en el ojo izquierdo y que también tenía una coriorretinopatía 10 central (coriorretinitis) se instiló 1 gota (50 µl) de unas gotas oculares que contenían 17β-estradiol incluido en 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina (10 mg/l) dos veces por día, y entonces la agudeza visual se mejoró durante una semana y se aligeró un edema macular.

Agudeza visual antes de la instilación: Vs = 0,1 (0,8x-2,5D  cyl- 2,75D Ax10º) 15

˘

Agudeza visual después de un tratamiento: Vs = 0,3 (1,5x-2,5D  cyl- 2,25D Ax175º)

˘

Aplicabilidad en la industria 20

De acuerdo con el presente invento, se pueden superar unos efectos colaterales que son problemas de una HRT (terapia de sustitución hormonal), y es posible proporcionar un agente de tratamiento que tiene unos altos efectos de los tratamientos de enfermedades oculares tales como un glaucoma o una catarata, etc., o un agente de tratamiento de enfermedades del sistema nervioso central o de 25 psicosis.

También, de acuerdo con el presente invento, se puede proporcionar un agente de tratamiento de enfermedades oculares tales como un glaucoma, una catarata, enfermedades de los fondos de los ojo, etc., en que es largo el período de tiempo durante el cual los efectos continúan, y es suficiente con una vez por día o con una 30 vez por cada 2 a 3 días. Esto puede reducir la presión intraocular, y mejora también un estrechamiento del campo visual de una manera particularmente marcada, por lo que se puede llevar a cabo de una manera particularmente eficaz no solamente el tratamiento de un glaucoma con alta tensión, sino también el tratamiento de un glaucoma con tensión normal, para el que no existe ningún método de tratamiento 35 efectivo hoy en día.

Claims (9)

1. REIVINDICACIONES
2. 1. Un agente que comprende 17β-estradiol incluido (formando un compuesto de inclusión) en 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina en la forma de unas gotas oculares o de unos agentes de lavado de los ojos, para su uso en el tratamiento de un 5 glaucoma.
3. 2. El agente de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el glaucoma se selecciona entre el conjunto que consiste en un glaucoma, un glaucoma con alta tensión y un glaucoma con tensión normal.
4. 3. El agente de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en el que el glaucoma 10 es un glaucoma con tensión normal.
5. 4. El agente con una cualquiera de las reivindicaciones 1 hasta 3, en el que la concentración de 17β-estradiol en un agente líquido es de desde 0,1 µg/ml hasta 100 µg/ml.
6. 5. Uso del 17β-estradiol incluido en 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina en la 15 producción de un agente destinado a tratar un glaucoma, en la forma de unas gotas oculares o de unos agentes de lavado de los ojos.
7. 6. El uso de acuerdo con la reivindicación 5, en el que el glaucoma se selecciona entre el conjunto que consiste en un glaucoma, un glaucoma con alta tensión y un glaucoma con tensión normal. 20
8. 7. El uso de acuerdo con la reivindicación 5 ó 6, en el que el glaucoma es un glaucoma con tensión normal.
9. 8. El uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 5 hasta 7, en el que la concentración de 17β-estradiol en un agente líquido es de desde 0,1 µg/ml hasta 100 µg/ml. 25