ES2345260T3 - Anticuerpos modificadores de enfermedades cancerosas. - Google Patents
Anticuerpos modificadores de enfermedades cancerosas. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2345260T3 ES2345260T3 ES05714544T ES05714544T ES2345260T3 ES 2345260 T3 ES2345260 T3 ES 2345260T3 ES 05714544 T ES05714544 T ES 05714544T ES 05714544 T ES05714544 T ES 05714544T ES 2345260 T3 ES2345260 T3 ES 2345260T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- monoclonal antibody
- antibody
- antibodies
- cancer
- tumor
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3069—Reproductive system, e.g. ovaria, uterus, testes, prostate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3046—Stomach, Intestines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Anticuerpo monoclonal aislado codificado por el clon depositado en la IDAC con el número de acceso 280104-0
Description
Anticuerpos modificadores de enfermedades
cancerosas.
La presente invención se refiere al aislamiento
y producción de anticuerpos modificadores de enfermedades
cancerosas (CDMAB) y a la utilización de estas CDMAB en
procedimientos terapéuticos y diagnósticos, opcionalmente en
combinación con uno o más agentes quimioterapéuticos. Asimismo, la
invención se refiere a ensayos de unión, que utilizan los CDMAB de
la presente invención.
Cada individuo que se presenta con cáncer es
único y presenta un cáncer que es tan diferente de otros cánceres
como lo es la identidad de la persona. A pesar de ello, la terapia
actual trata a todos los pacientes con el mismo tipo de cáncer, en
el mismo estado, de la misma manera. Por lo menos en 30 por ciento
de estos pacientes fracasará la terapia de primera línea,
conduciendo de esta manera a rondas adicionales de tratamiento y a
una probabilidad incrementada de fracaso del tratamiento, metástasis
y, finalmente, la muerte. Un enfoque superior al tratamiento sería
adaptar la terapia al individuo particular. La única terapia actual
que se presta la adaptación es la cirugía. El tratamiento de
quimioterapia y de radiación no puede adaptarse al paciente, y la
cirugía por sí misma, en la mayoría de casos, resulta inadecuada
para producir la curación.
Con la llegada de los anticuerpos monoclonales,
la posibilidad de desarrollar métodos para adaptar la terapia se
hicieron más reales, debido a que cada anticuerpo puede ser dirigido
a un único epítopo. Además, resulta posible producir una
combinación de anticuerpo que son dirigidos a la constelación de
epítopos que definen de manera única un tumor de un individuo
particular.
Tras el reconocimiento de que una diferencia
significativa entre las células cancerosas y las normales es que
las células cancerosas contienen antígenos que son específicos de
las células transformadas, la comunidad científica ha mantenido
desde hace mucho tiempo que los anticuerpos monoclonales pueden
diseñarse para dirigirse específicamente a las células
transformadas mediante la unión específica a estos antígenos del
cáncer; dando lugar de esta manera a la creencia de que los
anticuerpos monoclonales pueden servir de "balas mágicas" para
eliminar las células de cáncer.
Los anticuerpos monoclonales aislados según las
enseñanzas de la presente invención dada a conocer se ha demostrado
que modifican el proceso de la enfermedad cancerosa de una manera
que resulta beneficiosa para el paciente, por ejemplo mediante la
reducción de la carga tumoral, y se denominarán diversamente en la
presente memoria como anticuerpos modificadores de enfermedades
cancerosas (CDMAB), o anticuerpos "anticáncer".
En la actualidad, el paciente de cáncer
habitualmente presenta pocas opciones de tratamiento. El enfoque
regimentado a la terapia del cáncer ha mejorado las tasas globales
de supervivencia y de morbilidad. Sin embargo, para el individuo
particular, estas estadísticas mejoradas no se correlacionan
necesariamente con una mejora de su situación personal.
De esta manera, en el caso de que se
proporcionase una metodología que permitiese al médico tratar cada
tumor independientemente de otros pacientes de la misma cohorte,
ello permitiría el enfoque único de adaptar la terapia a únicamente
esa persona. Este curso de terapia idealmente incrementaría la tasa
de curación y produciría mejores resultados clínicos, satisfaciendo
de esta manera una necesidad sentida desde hace mucho tiempo.
Históricamente la utilización de anticuerpos
policlonales ha presentado un éxito limitado en el tratamiento de
los cánceres humanos. Se han tratado linfomas y leucemias con plasma
humano, pero se produjeron pocas remisiones o respuestas
prolongadas. Además, existía una falta de reproducibilidad y ningún
beneficio adicional en comparación con la quimioterapia. Los
tumores sólidos, tales como los cánceres de mama, los melanomas y
los carcinomas de células renales, también han sido tratados con
sangre humana, suero de chimpancé, plasma humano y suero de
caballo, con resultados correspondientemente impredecibles e
ineficaces.
Se han realizado muchos ensayos clínicos de
anticuerpos monoclonales para tumores sólidos. En los años ochenta
se realizaron por lo menos 4 ensayos clínicos para el cáncer de mama
humano que produjeron únicamente 1 respondedor de entre por lo
menos 47 pacientes utilizando anticuerpos contra antígenos
específicos o basándose en la selectividad de tejidos. No fue hasta
1998 que se realizó un ensayo clínico exitoso utilizando un
anticuerpo anti-Her2 humanizado en combinación con
cisplatino. En este ensayo, se accedió a 37 pacientes para sus
respuestas, de entre las que aproximadamente un cuarto presentó una
tasa de respuesta parcial y la mitad presentó una progresión menor
o estable de la enfermedad.
Los ensayos clínicos que han investigado el
cáncer colorrectal implican anticuerpos contra dianas tanto
glucoproteicas como glucolipídicas. Algunos anticuerpos, tales como
17-1A, que presenta cierta especificidad para los
adenocarcinomas, ha sido sometido a ensayos clínicos de fase 2 en
más de 60 pacientes, presentando únicamente 1 paciente una
respuesta parcial. En otros ensayos, la utilización de
17-1A produjo únicamente 1 respuesta completa y 2
respuestas menores entre 52 pacientes en protocolos que utilizan
ciclofosfamida adicional. Otros ensayos que implicaban
17-1A proporcionaron resultados similares. La
utilización de un anticuerpo monoclonal murino humanizado aprobados
inicialmente para la obtención de imágenes tampoco produjeron
regresiones tumorales. Hasta hoy no se ha encontrado un anticuerpo
que resulte eficaz para el cáncer colorrectal. De manera similar, se
han obtenido resultados igualmente pobres para el cáncer de pulmón,
los cánceres de cerebro, los cánceres ováricos, el cáncer
pancreático, el cáncer de próstata y el cáncer de estómago. Se ha
obtenido un éxito limitado en la utilización de anticuerpos
monoclonales anti-GD3 para el melanoma. De esta
manera, puede observarse que, a pesar de los estudios con éxito
utilizando animales pequeños, que son un requisito previo para los
ensayos clínicos humanos, los anticuerpos que se han sometido a
ensayo hasta el momento han resultado, en su mayor parte,
ineficaces.
La patente US nº 5.750.102 da a conocer un
procedimiento en el que se transfectan células procedentes de un
tumor de un paciente con genes MHC, que pueden clonarse a partir de
células o tejido del paciente. A continuación, estas células se
utilizan para vacunar al paciente.
La patente US nº 4.861.581 da a conocer un
procedimiento que comprende las etapas de obtener anticuerpo
monoclonales que son específicos de un componente celular interno
de células neoplásicas y normales del mamífero, pero no de
componentes externos, marcar el anticuerpo monoclonal, poner en
contacto el anticuerpo marcado con tejido de un mamífero que ha
recibido terapia para eliminar células neoplásicas, y determinar la
eficacia de la terapia mediante la medición de la unión del
anticuerpo marcado al componente celular interno de las células
neoplásicas en degeneración. Durante la preparación de anticuerpos
dirigidos contra antígenos intracelulares humanos, el cesionario
reconoce que la células malignas representan una fuente conveniente
de dichos antígenos.
La patente US nº 5.171.665 proporciona un nuevo
anticuerpo y un método para su producción. Específicamente, la
patente enseña la formación de un anticuerpo monoclonal que presenta
la propiedad de unirse fuertemente a una
proteína-antígeno asociada a tumores humanos, por
ejemplo aquéllas del tumor de colon y del tumor de pulmón,
uniéndose mucho menos a las células normales.
La patente US nº 5.484.596 proporciona un método
de terapia del cáncer que comprende extirpar quirúrgicamente tejido
tumoral de un paciente humano de cáncer, tratar el tejido tumoral
para obtener células tumorales, irradiar las células tumorales para
que sean viables aunque no tumorigénicas, y utilizar estas células
para preparar una vacuna para el paciente capaz de inhibir la
recurrencia del tumor primario, inhibiendo simultáneamente las
metástasis. La patente enseña el desarrollo de anticuerpo
monoclonales que son reactivos con los antígenos de superficie de
las células tumorales. Tal como se indica en la columna 4, líneas 45
y posteriores, los cesionarios utilizan células tumorales
autóctonas en el desarrollo de inmunoterapia específica de expresión
de anticuerpos monoclonales activa en neoplasias humanas.
La patente US nº 5.693.763 enseña una
gluproteína-antígeno característica de los
carcinomas humanos que no es dependiente del tejido epitelial de
origen.
La patente US nº 5.783.186 se refiere a
anticuerpos anti-Her2 que inducen la apoptosis en
células que expresan Her2, a líneas celulares de hibridoma que
producen los anticuerpos, a un método de tratamiento de cáncer que
utiliza los anticuerpos, y a composiciones farmacéuticas que
incluyen dichos anticuerpos.
La patente US nº 5.849.876 describe nuevas
líneas celulares de hibridoma para la producción de anticuerpos
monoclonales contra antígenos de mucina purificados a partir de
fuentes de tejido tumoral y no tumoral.
La patente US nº 5.869.268 se refiere a un
método para generar un linfocito humano productor de un anticuerpo
específico de un antígeno deseado, un método para producir un
anticuerpo monoclonal, así como a anticuerpos monoclonales
producidos mediante el método. La patente se refiere particularmente
a la producción de un anticuerpo monoclonal humano
anti-HD que resulta útil para el diagnóstico y
tratamiento de cánceres.
La patente US nº 5.869.045 se refiere a
anticuerpos, a fragmentos de anticuerpo, a conjugados de anticuerpos
y a inmunotoxinas de una sola cadena reactivas con células de
carcinoma humano. El mecanismo por el que funcionan estos
anticuerpos es doble: las moléculas son reactivas con antígenos de
membrana celular presentes sobre la superficie de los carcinomas
humanos, y además los anticuerpos presentan la capacidad de
internalizarse en las células de carcinoma, tras la unión, haciendo
que resulten especialmente útiles para formar conjugados de
anticuerpo-fármaco y de
anticuerpo-toxina. En su forma no modificada, los
anticuerpos también muestran propiedades citotóxicas a
concentraciones específicas.
La patente US nº 5.780.033 da a conocer la
utilización de autoanticuerpos para la terapia y profilaxis
tumorales. Sin embargo, este anticuerpo es un autoanticuerpo
antinuclear procedente de un mamífero de edad avanzada. En este
caso, se dice que el autoanticuerpo es un tipo de anticuerpo natural
presente en el sistema inmunológico. Debido a que el autoanticuerpo
procede de un "mamífero de edad avanzada", no existe ningún
requisito de que el autoanticuerpo realmente proceda del paciente
bajo tratamiento. Además, la patente dada conocer un autoanticuerpo
antinuclear monoclonal y natural procedente de un mamífero de edad
avanzada, y una línea celular de hibridoma productora de un
autoanticuerpo antinuclear monoclonal.
Los anticuerpos monoclonales modificadores de
enfermedades cancerosas pueden prepararse específicamente para un
tumor y de esta manera permiten la adaptación individual de la
terapia del cáncer. Dentro del contexto de la presente solicitud,
los anticuerpos anticáncer que presentan propiedades de eliminación
celular (citotóxicas) o de inhibición del crecimiento celular
(citostáticas) en lo sucesivo en la presente memoria se denominan
citotóxicos. Estos anticuerpos pueden utilizarse como ayuda en la
estadificación y diagnóstico de un cáncer, y pueden utilizarse para
tratar metástasis tumorales.
La perspectiva de un tratamiento anticáncer
individual producirá un cambio en el modo en que se controla el
paciente. Un escenario clínico probable es que se obtenga una
muestra tumoral en el momento de la presentación, y se almacene en
un banco. A partir de esta muestra puede tiparse el tumor a partir
de un panel de anticuerpos preexistentes modificadores de
enfermedades cancerosas. El paciente se estadifica
convencionalmente, aunque los anticuerpos disponibles pueden
resultar de utilidad para la estadificación adicional del paciente.
El paciente puede tratarse inmediatamente utilizando los
anticuerpos existentes, y producir un panel de anticuerpos
específicos del tumor utilizando los métodos descritos de manera
general en la presente memoria, o mediante la utilización de
bibliotecas de expresión fágica conjuntamente con los métodos de
cribado dados a conocer en la presente memoria. Todos los
anticuerpos generados se añaden a la biblioteca de anticuerpos
anticáncer, debido a que existe una posibilidad de que otros
tumores puedan portar algunos de los mismos epítopos que los que se
están tratando. Los anticuerpos producidos según este método pueden
resultar útiles para tratar enfermedades cancerosas en cualquier
paciente que presente cáncer que se una a dichos anticuerpos.
Además de los anticuerpos anticáncer, el
paciente puede elegir recibir las terapias recomendadas actualmente
como parte de un régimen multimodal de tratamiento. El hecho de que
los anticuerpos aislados mediante la presente metodología son
relativamente no tóxicos para las células no cancerosas permite
utilizar combinaciones de anticuerpos a dosis elevadas, solos o
conjuntamente con terapia convencional. El elevado índice
terapéutico también permite la repetición del tratamiento en una
escala de tiempo corta, reduciendo la probabilidad de que surjan
células resistentes al tratamiento.
Además, se encuentra comprendido dentro del
alcance de la presente invención conjugar modalidades
quimioterapéuticas estándares, por ejemplo radionucleidos, con los
CDMAB de la presente invención, focalizando de esta manera la
utilización de dicha quimioterapia.
En el caso de que el paciente sea refractario al
curso inicial de la terapia o se desarrollen metástasis, puede
repetirse el procedimiento de generar anticuerpos específicos para
el tumor para la repetición del tratamiento. Además, los
anticuerpos anticáncer pueden conjugarse con glóbulos rojos
obtenidos del paciente y reinfusionarse para el tratamiento de las
metástasis. Existen pocos tratamientos eficaces para el cáncer
metastásico y las metástasis habitualmente presentan un mal
pronóstico, resultando en la muerte. Sin embargo, los cánceres
metastásicos habitualmente se encuentran bien vascularizados y la
administración de anticuerpos anticáncer por parte de los glóbulos
rojos puede presentar el efecto de concentrar los anticuerpos en el
sitio del tumor. Incluso antes de las metástasis, la mayoría de
células cancerosas dependen del suministro sanguíneo del huésped
para su supervivencia y los anticuerpos anticáncer conjugados a
glóbulos rojos también pueden resultar eficaces contra tumores
in situ. Alternativamente, los anticuerpos pueden conjugarse
con otras células hematógenas, por ejemplo linfocitos, macrófagos,
monocitos, células asesinas naturales, etc.
Existen cinco clases de anticuerpos y cada una
se asocia a una función proporcionada por su cadena pesada. Se cree
generalmente que la eliminación de células cancerosas por
anticuerpos desnudos se encuentra mediada por la citotoxicidad
celular dependiente de anticuerpos (ADCC) o por la citotoxicidad
dependiente del complemento (CDC). Por ejemplo, los anticuerpos IgM
e IgG2a murinos pueden activar el complemento humano mediante la
unión del componente C-1 del sistema de
complemento, activando de esta manera la ruta clásica de activación
del complemento, que puede conducir a la lisis tumoral. Para los
anticuerpos humanos, los anticuerpos activadores del complemento
más eficaces generalmente son IgM e IgG1. Los anticuerpos murinos de
los isotipos IgG2a e IgG3 resultan eficaces en el reclutamiento de
células citotóxicas que presentan receptores Fc que conducirán a la
eliminación de células por parte de monocitos, macrófagos,
granulocitos y determinados linfocitos. Los anticuerpos humanos de
tanto el isotipo IgG1 como el IgG3 median en la ADCC.
Otro posible mecanismo de eliminación de cáncer
mediada por anticuerpos podría ser mediante la utilización de
anticuerpos que funcionan catalizando la hidrólisis de diversos
enlaces químicos en la membrana celular y sus glucoproteínas o
glucolípidos asociados, denominados anticuerpos catalíticos.
Existen dos mecanismos adicionales de
eliminación de células cancerosas mediada por anticuerpos que se
encuentran más ampliamente aceptadas. El primer es la utilización
de anticuerpos como vacuna para inducir al cuerpo a producir una
respuesta inmunológica contra el antígeno putativo del cáncer que
reside sobre la célula tumoral. El segundo es la utilización de
anticuerpos con diana en receptores de crecimiento, que interfieren
en su función o que regulan negativamente el receptor de manera que
se pierde efectivamente su función.
La utilidad clínica de un fármaco para el cáncer
se basa en el beneficio del fármaco bajo un perfil de riesgo
aceptable para el paciente. En la terapia del cáncer, la
supervivencia ha sido generalmente el beneficio más buscado; sin
embargo, existen otros beneficios bien reconocidos además de la
prolongación de la vida. Entre estos otros beneficios, en los que
el tratamiento no afecta adversamente a la supervivencia, se
incluyen la paliación de síntomas, la protección frente a sucesos
adversos, la prolongación del tiempo hasta la recurrencia, o
supervivencia libre de enfermedad, y la prolongación del tiempo
hasta la progresión. Estos criterios se encuentran generalmente
aceptados y algunos cuerpos reguladores, tales como la U.S. Food and
Drug Administration (F.D.A.), aprueban fármacos que producen estos
beneficios (Hirschfeld et al., Critical Reviews in
Oncology/Hematology 42:137-143, 2002). Además de
estos criterios, está bien reconocido que existen otros criterios de
valoración que podrían presagiar estos tipos de beneficios. En
parte, el proceso acelerado de aprobación concedido por la F.D.A.
estadounidense reconoce que existen variables sustitutivas que
probablemente predicen beneficios para el paciente. Al final del
año 2003, se habían aprobado dieciséis fármacos bajo este proceso, y
de estos, cuatro han seguido hasta la aprobación total, es decir,
los estudios de seguimiento han demostrado beneficios directos para
el paciente, según la predicción de los criterios de valoración
sustitutivos. Un criterio de valoración importante para determinar
los efectos de un fármaco sobre tumores sólidos es la evaluación de
la carga tumoral mediante la medición de la respuesta al tratamiento
(Therasse et al., Journal of the National Cancer Institute
92(3):205-216, 2000). Los criterios clínicos
(criterios RECIST) para dicha evaluación han sido promulgados por
el grupo de trabajo de criterios de evaluación de la respuesta en
tumores sólidos, un grupo de expertos internacionales del cáncer.
Los fármacos con un efecto demostrado sobre la carga tumoral, tal
como muestran las respuestas objetivas según los criterios RECIST,
en comparación con el grupo de control apropiado tienden a producir
finalmente un beneficio directo en el paciente. En el contexto
preclínico, la carga tumoral generalmente resulta más sencilla de
evaluar y documentar. En la medida en que los estudios preclínicos
puedan traducirse al contexto clínico, los fármacos que produzcan
una supervivencia prolongada en modelos preclínicos presentarán la
mayor utilidad clínica anticipada. De manera análoga a la producción
de respuestas positivas al tratamiento clínico, los fármacos que
reducen la carga tumoral en el contexto preclínico también pueden
presentar un impacto directo significativo sobre la enfermedad.
Aunque la prolongación de la supervivencia es el resultado clínico
más buscado en el tratamiento farmacológico del cáncer, existen
otros beneficios que presentan utilidad clínica y resulta claro que
la reducción de la carga tumoral también puede llevar a beneficios
directos y presentar un impacto clínico (Eckhardt et al.,
Developmental Therapeutics: Successes and Failures of Clinical
Trial Designs of Targeted Compounds; ASCO Educational Book, 39th
Annual Meeting, 2003, páginas 209 a 219).
De acuerdo con lo anteriormente expuesto, es un
objetivo de la invención utilizar un método para producir CDMAB a
partir de células derivadas de un individuo particular que son
citotóxicas con respecto a las células cancerosas, siendo
simultáneamente relativamente no tóxicas para las células no
cancerosas, con el fin de aislar líneas celulares de hibridoma y
los anticuerpos monoclonales aislados correspondientes y los
fragmentos de unión a antígeno de los mismos para los que dichas
líneas celulares de hibridoma se encuentran codificadas.
Es un objetivo adicional de la invención enseñar
CDMAB y fragmentos de unión a antígeno de los mismos.
Es un objetivo adicional de la presente
invención producir CDMAB cuya citotoxicidad se encuentra mediada por
toxicidad celular dependiente de anticuerpos.
Es todavía un objetivo adicional de la presente
invención producir CDMAB cuya citotoxicidad se encuentre mediada
por la toxicidad celular dependiente del complemento.
Es todavía un objetivo adicional de la presente
invención producir CDMAB cuya citotoxicidad sea una función de su
capacidad para catalizar la hidrólisis de enlaces químicos
celulares.
Un objetivo todavía adicional de la presente
invención es producir CDMAB, que resultan útiles en un ensayo de
unión para el diagnóstico, pronóstico y seguimiento del cáncer.
Otros objetivos y ventajas de la presente
invención resultarán evidentes a partir de la descripción siguiente,
en la que, a título ilustrativo y de ejemplo, se proporcionan
determinadas realizaciones de la presente invención.
En un primer aspecto, la invención proporciona
un anticuerpo monoclonal aislado codificado por el clon depositado
en la IDAC con el número de acceso 280104-02. En un
aspecto adicional, la invención proporciona un método in
vitro para iniciar la citotoxicidad celular inducida por
anticuerpos de células cancerosas en una muestra de tejido
procedente de un tumor humano, que comprende: proporcionar un
anticuerpo monoclonal aislado o un fragmento de unión a antígeno
inductor de citotoxicidad celular según la reivindicación 1, y
poner en contacto dicho anticuerpo monoclonal
aislado o fragmento del mismo de unión a antígeno inductor de
citotoxicidad celular, con dicha muestra de tejido. En un aspecto
todavía adicional, la invención proporciona un anticuerpo
monoclonal codificado por un clon depositado en la IDAC con el
número de acceso 280104-02, o un fragmento de unión
a antígeno del mismo, para la utilización en el tratamiento de un
tumor humano.
\vskip1.000000\baselineskip
La figura 1 incluye histogramas FACS
representativos de AR36A36.11.1 y anticuerpo
anti-EGFR dirigidos contra varias líneas celulares
de cáncer y normales.
La figura 2 compara el porcentaje de
citotoxicidad de los sobrenadantes de hibridoma contra las líneas
celulares PC-3, LnCap y CCD-27sk
frente a los niveles de unión.
La figura 3 es una comparación entre la
citotoxicidad de AR36A36.11.1 frente a controles positivos y
negativos.
La figura 4 representa la unión de AR36A36.11.1
frente a un control anti-EGFR y factor de incremento
de la intensidad de fluorescencia media tabulada por encima de un
isotipo de control. Los resultados se representan cualitativamente
como: entre 1,5 y 5 (+), entre 5 y 25 (++), entre 25 y 50 (+++), y
más de 50 (++++).
La figura 5 demuestra el efecto de AR36A36.11.1
sobre el crecimiento tumoral en un modelo de cáncer de mama
MB-231. Las líneas verticales indican el periodo
durante el que se administró el anticuerpo. Los puntos de datos
representan medias +/- SEM.
La figura 6 demuestra el efecto de AR36A36.11.1
sobre el peso corporal en un modelo de cáncer de mama
MB-231. Los puntos de datos representan medias +/-
SEM.
La figura 7 demuestra el efecto de AR36A36.11.1
sobre el crecimiento tumoral en un modelo establecido de cáncer de
mama MB-231. Las líneas verticales indican el
periodo durante el que se administró el anticuerpo. Los puntos de
datos representan medias +/- SEM.
La figura 8 demuestra el efecto de AR36A36.11.1
sobre el peso corporal en un modelo de cáncer de mama
MB-231 establecido. Los puntos de datos representan
medias +/- SEM.
La figura 9 demuestra el efecto de AR36A36.11.1
sobre el crecimiento tumoral en un modelo de cáncer de colon
SW1116. Las líneas verticales indican el periodo durante el que se
administró el anticuerpo. Los puntos de datos representan medias
+/- SEM.
La figura 10 demuestra el efecto de AR36A36.11.1
sobre el peso corporal en un modelo de cáncer de colon SW1116. Los
puntos de datos representan medias +/- SEM.
La figura 11 demuestra el efecto de AR36A36.11.1
sobre el crecimiento tumoral en un modelo de cáncer de próstata
PC-3. Las líneas verticales indican el periodo
durante el que se administró el anticuerpo. Los puntos de datos
representan medias +/- SEM.
La figura 12 demuestra el efecto de AR36A36.11.1
sobre el peso corporal en un modelo de cáncer de próstata
PC-3. Los puntos de datos representan medias +/-
SEM.
La línea celular de hibridoma AR36A36.11.1 se
depositó, de acuerdo con el Tratado de Budapest, en el International
Depository Authority of Canada (IDAC), Bureau of Microbiology,
Health Canada, 1015 Arlington Street, Winnipeg, Manitoba, Canadá,
R3E 3R2, el 28 de enero de 2004, bajo el número de acceso
280104-02. Según 37 CFR 1.808, los depositantes
garantizan que la totalidad de las restricciones impuestas sobre la
disponibilidad para el público de los materiales depositados serán
irrevocablemente retiradas tras la concesión de una patente.
Para producir el hibridoma que produce el
anticuerpo anticáncer AR36A36.11.1, se preparó en PBS una suspensión
fresca de células individuales de la línea celular de cáncer de
próstata PC-3 que había sido cultivada como tumor
sólido en ratones SCID. Se preparó adyuvante IMMUNEASY^{TM}
(Qiagen, Venlo, Países Bajos) para la utilización mediante mezcla
suave. Se inmunizaron ratones BALB/c de cinco a siete semanas de
edad mediante inyección subcutánea de 2 millones de células en 50
microlitros del antígeno-adyuvante. Se utilizó
antígeno-adyuvante preparado recientemente para
reforzar intraperitonealmente los ratones inmunizados 2 y 5 semanas
después de la inmunización inicial, con 2 millones de células en 50
microlitros. Se utilizó un bazo para la fusión tres días de la
última inmunización. Se prepararon los hibridomas mediante la fusión
de esplenocitos aislados con parejas del mieloma
NSO-1. Se sometieron a ensayo los sobrenadantes de
las fusiones para la subclonación de los hibridomas.
Para determinar si los anticuerpos secretados
por las células de hibridoma eran del isotipo IgG o IgM, se utilizó
un ensayo ELISA. Se añadieron 100 microlitros/pocillo de IgG + IgM
(H+L) antiratón de cabra a una concentración de 2,4 microgramos/ml
en tampón de recubrimiento (tampón carbonato/bicarbonato 0,1 M, pH
9,2 a 9,6) a 4ºC, a las placas de ELISA durante la noche. Las
placas se lavaron tres veces en tampón de lavado (PBS + Tween al
0,05%). Se añadieron 100 microlitros/pocillo de tampón de bloqueo
(leche al 5% en tampón de lavado) a la placa durante 1 hora a
temperatura ambiente y después se lavó tres veces en tampón de
lavado. Se añadieron 100 microlitros/pocillo de sobrenadante de
hibridoma y la placa se incubó durante 1 hora a temperatura
ambiente. Las placas se lavaron tres veces con tampón de lavado y se
añadió una dilución 1/100.000 de conjugado de IgG o IgM antiratón
de cabra con peroxidasa de rábano picante (diluido en PBS que
contenía leche al 5%), 100 microlitos/pocillo. Tras incubar la
placa durante 1 hora a temperatura ambiente, la placa se lavó tres
veces con tampón de lavado. Se incubaron 100 microlitros/pocillo de
solución TMB durante 1 a 3 minutos a temperatura ambiente. Se
terminó la reacción de color mediante la adición de 100
microlitros/pocillo de H_{2}SO_{4} 2 M y la placa se leyó a 450
nm con un lector de placas Perkin-Elmer HTS7000. Tal
como se indica en la figura 2, el hibridoma AR36A36.11.1 secretaba
principalmente anticuerpos del isotipo IgG.
Tras una ronda de dilución limitante, se
sometieron a ensayo los sobrenadante de hibridoma para anticuerpos
que se unían a células diana en un ensayo celular ELISA. Se
sometieron a ensayo dos líneas celulares de cáncer de próstata
humano y 1 línea celular de piel humana normal:
PC-3, LnCap y CCD-27sk,
respectivamente. Las células sembradas en placas se fijaron
previamente a su utilización. Las placas se lavaron tres veces con
PBS que contenía MgCl_{2} y CaCl_{2} a temperatura ambiente, se
añadieron 100 microlitros de paraformaldehído al 2% diluido en PBS
a cada pocillo durante 10 minutos a temperatura ambiente y después
se descartaron. Las placas se lavaron nuevamente con PBS que
contenía MgCl_{2} y CaCl_{2} tres veces a temperatura ambiente.
El bloqueo se realizó con 100 microlitros/pocillo de leche al 5% en
tampón de lavado (PBS + Tween al 0,05%) durante 1 hora a
temperatura ambiente. Las placas se lavaron tres veces con tampón de
lavado y el sobrenadante de hibridoma se añadió a 100
microlitros/pocillo durante 1 hora a temperatura ambiente. Las
placas se lavaron 3 veces con tampón de lavado y se añadieron 100
microlitros/pocillo de dilución 1/25.000 de anticuerpo IgG o IgM
antiratón de cabra conjugado con peroxidasa de rábano picante
(diluido en PBS que contenía leche al 5%). Tras incubar durante 1
hora a temperatura ambiente, las placas se lavaron 3 veces con
tampón de lavado y se incubaron 100 microlitros/pocillo de sustrato
TMB durante 1 a 3 minutos a temperatura ambiente. La reacción se
terminó con 100 microlitros/pocillo de H_{2}SO_{4} 2 M y la
placa se leyó a 450 nm con un lector de placas
Perkin-Elmer HTS7000. Los resultados, tal como se
tabulan en la figura 2, se expresaron como factor sobre el fondo en
comparación con un control de isotipo IgG del propio laboratorio que
había demostrado previamente que no se unía a las líneas celulares
sometidas a ensayo. Los anticuerpos procedentes del hibridoma
AR36A36.11.1 mostraron unión a la línea celular de cáncer de
próstata PC-3 y un nivel de unión más débil a otra
línea celular de cáncer de próstata, LnCap. AR36A36.11.1 también
demostró unión detectable a la línea celular de piel normal.
Conjuntamente con los ensayos para la unión de
anticuerpos, se sometieron a ensayo los efectos citotóxicos de los
sobrenadantes de hibridoma en las mismas líneas celulares:
PC-3, LnCap y CCD-27sk. El ensayo de
citotoxicidad Live/Dead se obtuvo de Molecular Probes (Eu, OR). Los
ensayos se llevaron a cabo siguiendo las instrucciones del
fabricante, con las modificaciones indicadas de manera general
posteriormente. Las células se sembraron en placa antes del ensayo
a una densidad apropiada predeterminada. Tras 2 días, se
transfirieron 100 \mul del sobrenadante procedente de las placas
de microtitulación de hibridoma a las placas celulares y se
incubaron en un incubador de 5 por ciento de CO_{2} durante 5
días. Los pocillos que servían como controles positivos se aspiraron
hasta vaciarlos y se añadieron 100 \mul de azida sódica
(NaN_{3}) o cicloheximida. Tras 5 días de tratamiento, las placas
seguidamente se vaciaron mediante inversión y secado con un filtro.
Se dispensó en cada pocillo DPBS (solución salina tamponada con
fosfato de Dulbecco) a temperatura ambiente que contenía MgCl_{2}
y CaCl_{2} de una botella dosificadora multicanal, golpeada 3
veces, vaciada mediante inversión y después secada con un filtro.
Se añadieron 50 \mul del pigmento fluorescente calceína diluido en
DPBS que contenía MgCl_{2} y CaCl_{2} a cada pocillo y se
incubaron a 37ºC en un incubador de 5% de CO_{2} durante 30
minutos. Las placas se leyeron en un lector de fluorescencia de
placas Perkin-Elmer HTS7000 y los datos se
analizaron en Microsoft Excel. Los resultados e tabulan en la figura
2. El hibridoma AR36A36.11.1 produjo citotoxicidad específica de 17
por ciento en células PC-3, que era 46 y 25 por
ciento de la citotoxicidad obtenida con los controles positivos
azida sódica y cicloheximida, respectivamente. El hibridoma
AR36A36.11.1 también produjo citotoxicidad específica de 25 por
ciento en células LnCap, que era 36 y 69 por ciento de la
citotoxicidad obtenida con los controles positivos azida sódica y
cicloheximida, respectivamente. Tal como se tabula en la figura 2,
a pesar de la unión a CCD-27sk, AR36A36.11.1 no
produjo citotoxicidad significativa en esta línea celular normal.
Los agentes citotóxicos no específicos conocidos cicloheximida y
NaN_{3} generalmente produjeron citotoxicidad, tal como se
esperaba.
Se produjo anticuerpo monoclonal AR36A36.11.1
mediante le cultivo del hibridoma en matraces
CL-1000 (BD Biosciences, Oakville, ON) realizando
recolección y nuevas siembras dos veces a la semana. Se siguieron
procedimientos estándares de purificación de anticuerpos con
proteína G-sefarosa 4 Fast Flow (Amersham
Biosciences, Baie d'Urfé, QC). Se encuentra comprendida dentro del
alcance de la presente invención la utilización de anticuerpos
monoclonales que se encuentran humanizados, quimerizados o que son
murinos.
Se comparó AR36A36.11.1 con varios controles
tanto positivos (anti-ECGFR (C225, IgG1, kappa, 5
\mug/ml, Cedarlane, Hornby, ON), cicloheximida (CHX, 0,5 \muM,
Sigma, Oakville, ON) y NaN_{3} (al 0,1%, Sigma, Oakville, ON)) y
negativos (G155-178 (anti-TNP,
IgG2a, kapppa, 20 \mug/ml, BD Biosciences, Oakville, ON) y tampón
de IgG (al 3%)) en un ensayo de citotoxicidad (figura 3). Se
sometieron a ensayo líneas celulares de cáncer de mama
(MDA-MB-231
(MB-231), NCI-MCF-7
(MCF-7), de colón (DLD-1, Lovo,
SW1116), ovárico (OVCAR-3), pancreático
(BxPC-3) y de próstata (PC-3, LnCap,
DU-145) y piel no cancerosa
(CCD-27sk) y de pulmón (Hs888.Lu) (todos de ATCC,
Manassas, VA). Se obtuvo el ensayo de citotoxicidad Live/Dead de
Molecular Probes (Eugene, OR). Los ensayos se llevaron a cabo
siguiendo las instrucciones del fabricante, con las modificaciones
indicadas de manera general posteriormente. Se sembraron células en
placas antes del ensayo a la densidad apropiada predeterminada.
Tras 2 días, se diluyeron en medio 100 \mul de anticuerpo
purificado o de los controles, y después se transfirieron a las
placas celulares y se incubaron en un incubador de 5 por ciento de
CO_{2} durante 5 días. A continuación, se vaciaron las placas
mediante inversión y se secaron con un filtro. Se dispensó en cada
pocillo DPBS que contenía MgCl_{2} y CaCl_{2} a temperatura
ambiente desde una botella dosificadora multicanal, se golpeó 3
veces, se vació mediante inversión y después se secó con un filtro.
Se añadieron 50 \mul del pigmento fluorescente calceína diluido en
DPBS que contenía MgCl_{2} y CaCl_{2} a cada pocillo y se
incubaron a 37ºC en un incubador de 5 por ciento de CO_{2} durante
30 minutos. Las placas se leyeron en un lector de placas
fluorescentes Perkin-Elmer HTS7000 y los datos se
analizaron en Microsoft Excel y los resultados se tabulan en la
figura 3. Los datos se representaron como medias de cuatro
experimentos sometidos a ensayo por triplicado y se presentan
cualitativamente de la manera siguiente: experimentos 3/4 a 4/4 con
>15% de citotoxicidad por encima del fondo (++++), 2/4
experimentos con >15% de citotoxicidad por encima del fondo
(+++), por lo menos 2/4 experimentos con 10% a 15% de citotoxicidad
por encima del fondo (++), por lo menos 2/4 experimentos con
citotoxicidad de 8% a 10% por encima del fondo (+), 7% de
citotoxicidad por encima del fondo (+/-). Las células no marcadas
en la figura 3 representan inconsistencias o efectos inferiores al
umbral de citotoxicidad. El anticuerpo AR36A36.11.1 produjo
citotoxicidad en la línea celular de cáncer de próstata LnCap
respecto a controles negativos tanto de isotipo como de tampón; la
citotoxicidad sobre las células LnCap era superior a la observada
con el bien caracterizado anticuerpo anti-EGFR.
Resulta importante que AR36A36.11.1 no produjo citotoxicidad contra
líneas celulares no cancerosas, tales como CCD-27sk
o HS8888.Lu, indicando que el anticuerpo era específico de células
cancerosas. Debe indicarse que el anticuerpo
anti-EGFR produjo citotoxicidad en células
CCD-27sk debido a que esta línea celular epidérmica
se espera que exprese receptores de factor de crecimiento
epidérmico. Los agentes citotóxicos químicos indujeron la
citotoxicidad no específica esperada.
La unión de AR36A36.11.1 al panel anteriormente
mencionado de líneas celulares cancerosas y normales se evaluó
mediante citometría de flujo (FACS). Las células se prepararon para
FACS mediante lavado inicial de la monocapa celular con DPBS (sin
Ca^{++} ni Mg^{++}). A continuación, se utilizó tampón de
disociación celular (INVITROGEN, Burlington, ON) para desprender
las células de sus placas de cultivo celular a 37ºC. Tras la
centrifugación y la recolección, las células se resuspendieron en
DPBS que contenía MgCl_{2}, CaCl_{2} y suero fetal bovino al 2%
a 4ºC (medio de tinción) y se contaron, se prepararon alícuotas a la
densidad celular apropiada, se peletizaron las células y se
resuspendieron en medio de tinción a 4ºC en presencia de anticuerpos
de ensayo (AR36A36.11.1) o de anticuerpos de control (control de
isotipo, anti-EGFR) a 20 \mug/ml sobre hielo
durante 30 minutos. Antes de añadir anticuerpo secundario conjugado
con Alexa Fluor 488, las células se lavaron una vez con medio de
tinción. A continuación, se añadió el anticuerpo conjugado con Alexa
Fluor 488 en medio de tinción durante 30 minutos. Seguidamente se
levaron las células la última vez y se resuspendieron en medio de
fijación (medio de tinción que contenía paraformaldehído al 1,5%).
Se evaluó la captación de las células mediante citometría de flujo,
corriendo las muestras en un FACScan utilizando el programa
CellQuest (BD Biosciences, Oakville, ON). Se fijó la dispersión
directa (FSC) y lateral (SSC) de las células mediante el ajuste de
las ganancias de voltaje y de amplitud en los detectores de FSC y
de SSC. Los detectores del canal de fluorescencia (FITC) se
ajustaron mediante el corrido de células teñidas únicamente con
anticuerpo secundario conjugado con Alexa Fluor 488, de manera que
las células presentaban un pico uniforme con una mediana de
intensidad de fluorescencia de aproximadamente 1 a 5 unidades. Para
cada muestra, se captaron aproximadamente 10.000 células fijadas
teñidas para el análisis y los resultados se presentan en la figura
4.
La figura 4 tabula el factor de incremento de la
intensidad de fluorescencia media por encima del control de
isotipo, y se presenta cualitativamente como: entre 1,5 y 5 (+),
entre 5 y 25 (++), entre 25 y 50 (+++) y más de 50 (++++). Se
compilaron histogramas representativos de AR36A36.11.1 para la
figura 1. AR36A36.11.1 mostró unión a todas las líneas celulares
sometidas a ensayo. Estos datos han demostrado que AR36A36.11.1
mostraba especificidad funcional en el aspecto de que, aunque se
producía unión clara a varios tipos de cáncer, únicamente se
presentaba citotoxicidad asociada con células de cáncer de próstata
LnCap. Por el contrario, el anticuerpo anti-EGFR
mostró una correlación más alta entre unión y citotoxicidad, siendo
un ejemplo la línea celular no de cáncer derivada de epidermis
CCD-27sk.
\vskip1.000000\baselineskip
Con referencia a las figuras 5 y 6, se
implantaron mediante inyección subcutánea en la nuca 5 millones de
células de cáncer de mama humano (MB-231) en 100
microlitros de solución salina en ratones SCID hembra de 4 a 8
semanas de edad. Se dividieron aleatoriamente los ratones en 2
grupos de tratamiento de 5 El día después de la implantación, se
administraron 20 mg/kg de anticuerpo de ensayo AR36A36.11.1 o un
anticuerpo de isotipo de control (que era conocido que se unía a
células MB-231) por vía intraperitoneal a un volumen
de 300 microlitros tras la dilución a partir de la concentración de
solución madre con un diluyente que contenía KCl 2,7 mM,
KH_{2}PO_{4} 1 mM, NaCl 137 mM y Na_{2}HPO_{4} 20 mM. A
continuación, se administraron los anticuerpos una vez a la semana
durante un periodo de 7 semanas del mismo modo. Se midió el
crecimiento tumoral aproximadamente cada séptimo día con un
calibrador durante hasta 8 semanas o hasta que los animales
individuales alcanzaron los puntos finales según la Canadian
Council for Animal Care (CCAC). Se registraron los pesos corporales
de los animales durante todo el estudio. Al final del estudio, se
eutanizaron todos los animales según las directrices de la
CCAC.
AR36A36.11.1 evitó completamente el crecimiento
tumoral y redujo la carga tumoral en un modelo in vivo
preventivo de cáncer de mama humano. El día 56 tras la implantación,
6 días después de la última dosis de tratamiento, el volumen
tumoral medio en el grupo tratado con AR36A36.11.1 era 0 por ciento
del volumen tumoral en el grupo tratado con isotipo de control
(p=0,0002, prueba t, figura 5).
No se observaron indicios clínicos de toxicidad
durante la totalidad del estudio. El peso corporal medido a
intervalos semanales era una variable sustitutiva del estado de
bienestar y de un desarrollo deficiente. La figura 6 muestra que no
existía ninguna diferencia significativa de peso corporal entre los
grupos al final del periodo de tratamiento (p=0,0676, prueba t).
Por lo tanto, AR36A36.11.1 resultó bien tolerado y redujo la carga
tumoral en un modelo de xenoinjerto de cáncer de mama.
Con referencia a las figuras 7 y 8, se
implantaron mediante inyección subcutánea en la nuca 5 millones de
células de cáncer de mama humano MB-231 en 100
microlitros de solución salina en ratones SCID hembra de 5 a 6
semanas de edad. Se midió el crecimiento tumoral con un calibrador
cada semana. Al alcanzar la mayoría de la cohorte un volumen
tumoral medio de aproximadamente 100 mm3 (intervalo de entre 60 y
140 mm3) 59 días después de la implantación, se asignaron
aleatoriamente 10 ratones a 2 grupos de tratamiento. Se
administraron 20 mg/kg por vía intraperitoneal de anticuerpo de
control AR36A36.11.1 o tampón de control a una volumen de 300
microlitros tras la dilución a partir de la concentración de
solución madre con n diluyente que contenía KCl 2,7 mM,
KH_{2}PO_{4} 1 mM, NaCl 137 mM y NaH_{2}PO_{4} 20 mM. A
continuación, se administraron los anticuerpos 3 veces a la semana
durante 10 dosis en total de la misma manera hasta el día 81 tras la
implantación. Se midió el crecimiento tumoral aproximadamente cada
séptimo día con un calibrador hasta el día 90 tras la implantación
o hasta que los animales individuales alcanzaron los puntos finales
según la CCAC. Se registraron los pesos corporales de los animales
durante todo el estudio. Al final del estudio se eutanizaron todos
los animales según las directrices de la CCAC.
AR36A36.11.1 previno el crecimiento tumoral y
redujo la carga tumoral en este modelo in vivo establecido
de cáncer de mama humano. El día 83 tras la implantación, 2 días
después de la última dosis de tratamiento, el volumen tumoral medio
en el grupo tratado con AR36A36.11.1 era 46% del volumen tumoral en
el grupo tratado con tampón de control (p=0,0038, prueba t, figura
7). Esto corresponde a un T/C medio de 32%.
No se observaron indicios clínicos de toxicidad
durante la totalidad del estudio. El peso corporal medido a
intervalos semanales era una variable sustitutiva del estado de
bienestar y del desarrollo deficiente. La figura 8 muestra que no
existía ninguna diferencia significativa de peso corporal entre los
grupos al final del periodo de tratamiento (p=0,6493, prueba
t).
En resumen, AR36A36.11.1 es bien tolerado y
significativamente más eficaz que el tampón de control en la
supresión del crecimiento tumoral en un modelo establecido de
xenoinjerto tumoral de cáncer de mama en ratones SCID. Durante el
periodo de tratamiento de 3 semanas, AR36A36.11.1 alcanzó un punto
final de volúmenes tumorales T/C medios inferior a 50% respecto al
control. Se observaron beneficios de tratamiento en un modelo bien
reconocido de enfermedad cancerosa humana, sugiriendo beneficios
farmacológicos y farmacéuticos de este anticuerpo para la terapia
en toros mamíferos, incluyendo el ser humano.
Con referencia a las figuras 9 y 10, se
implantaron mediante inyección subcutánea en la nuca en ratones SCID
hembra de 4 a 8 semanas de edad 5 millones de células de cáncer de
colon humano (SW1116) en 100 microlitros de solución salina. Los
ratones fueron divididos aleatoriamente en 2 grupos de tratamiento
de 5. El día después de la implantación, se administraron 20 mg/kg
de anticuerpo de ensayo AR36A36.11.1 o tampón de control por vía
intraperitoneal a un volumen de 300 microlitros tras la dilución a
partir de la concentración de solución madre con un diluyente que
contenía KCl 2,7 mM, KH_{2}PO_{4} 1 mM, NaCl 137 mM y
Na_{2}HPO_{4} 20 mM. A continuación los anticuerpos se
administraron una vez a la semana durante un periodo de 7 semanas
del mismo modo. Se midió el crecimiento tumoral aproximadamente
cada séptimo día con un calibrador durante hasta 8 semanas o hasta
que los animales individuales alcanzasen los puntos finales según la
Canadian Council for Animal Care (CCAC). Se registraron los pesos
corporales de los animales durante la totalidad del estudio. Al
final del estudio se eutanizaron todos los animales según las
directrices de la CCAC.
AR36A36.11.1 evitó el crecimiento tumoral y
redujo la carga tumoral en un modelo in vivo preventivo de
cáncer de colon humano. El día 55 tras la implantación, 56 días
después de la última dosis de tratamiento, el volumen tumoral medio
en el grupo tratado con AR36A36.11.1 era 51 por ciento del volumen
tumoral en el grupo tratado con tampón de control (p=0,0055, prueba
t, figura 9).
No se observaron indicios clínicos de toxicidad
durante la totalidad del estudio. El peso corporal medido a
intervalos semanales era una variable sustitutiva del estado de
bienestar y del desarrollo deficiente. La figura 10 muestra que no
se existía ninguna diferencia significativa de peso corporal entre
los grupos al final de periodo de tratamiento (p=0,4409, prueba t).
Por lo tanto, AR36A36.11.1 fue bien tolerado y redujo la carga
tumoral en un modelo de xenoinjerto de cáncer de colon.
Con referencia a las figuras 11 y 12, se
implantó mediante inyección subcutánea en la nuca de ratones SCID
macho de 4 a 8 semanas de edad 1 millón de células de cáncer de
próstata humano (PC-3) en 100 microlitros de
solución salina. Los ratones se dividieron aleatoriamente en 2
grupos de tratamiento de 5. El día después del a implantación se
administraron 20 mg/kg de anticuerpo de ensayo AR36A36.11.1 o tampón
de control por vía intraperitoneal a un volumen de 300 microlitros
tras la dilución a partir de la concentración de solución madre con
un diluyente que contenía KCl 2,7 mM, XH_{2}PO_{4} 1 mM, NaCl
137 mM y Na_{2}HPO_{4} 20 mM. A continuación, se administraron
los anticuerpos una vez a la semana durante la totalidad del estudio
del mismo modo. Se midió el crecimiento tumoral aproximadamente
cada séptimo día con un calibrador. El estudio se completó tras 6
inyecciones (41 días), al alcanzar los animales los puntos finales
según la Canadian Council for Animal Care (CCAC) debido a lesiones
ulcerosas grandes. Se registraron los pesos corporales durante la
totalidad del estudio. Al final del estudio se eutanizaron todos los
animales según las directrices de la CCAC.
AR36A36.11.1 evitó el crecimiento tumoral y
redujo la carga tumoral en un modelo in vivo preventivo de
cáncer de próstata humano. El día 41 tras la implantación, 5 días
después de la última dosis de tratamiento, el volumen tumoral medio
en el grupo tratado con AR36A36.11.1 era 14 por ciento del volumen
tumoral en el grupo tratado con tampón de control (p=0,0009, prueba
t, figura 11).
En un modelo de xenoinjerto de cáncer de
próstata PC-3, el peso corporal puede utilizarse
como indicador sustitutivo de la progresión de la enfermedad (Wang
et al., Int. J. Cancer., 2003). Tal como se muestra en la
figura 12, al final del estudio (día 41), los animales de control
mostraban una reducción de 27% del peso corporal comparado con el
inicio del estudio. Por el contrario, el grupo tratado con
AR36A36.11.1 presentaba un peso corporal significativamente más
alto que el grupo de control (p=0,017). Globalmente, el grupo
tratado con AR36A36.11.1 perdió únicamente 6% de su peso corporal,
mucho menos que el 27% perdido por el grupo de tampón de
control.
Por lo tanto AR36A36.11.1 resultó bien tolerado
y redujo la carga tumoral y la caquexia en un modelo de xenoinjerto
de cáncer de próstata.
Wang Z., Corey E., Hass
G.M. et al. Expression of the human
cachexia-associated protein (HCAP) en prostate
cancer and in a prostate cancer animal model of cachexia. Int. J.
Cancer 105(1):123-9, 2003.
Claims (15)
1. Anticuerpo monoclonal aislado codificado por
el clon depositado en la IDAC con el número de acceso
280104-02.
2. Anticuerpo según la reivindicación 1, que se
ha humanizado o que es quimérico.
3. Clon aislado depositado en la IDAC con el
número de acceso 280104-02.
4. Fragmentos de unión a antígeno del anticuerpo
monoclonal aislado según la reivindicación 1, o del anticuerpo
humanizado o del anticuerpo quimérico según la reivindicación 2.
5. Anticuerpo aislado o fragmentos de unión a
antígeno según cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 4 conjugado
con un miembro seleccionado de entre el grupo que consiste de
grupos citotóxicos, enzimas, compuestos radioactivos y células
hematógenas.
6. Método in vitro para iniciar
citotoxicidad celular inducida por anticuerpos de células cancerosas
en una muestra de tejido procedente de un tumor humano, que
comprende:
proporcionar un anticuerpo monoclonal aislado o
un fragmento de unión a antígeno inductor de citotoxicidad celular
según la reivindicación 1, y
poner en contacto dicho anticuerpo monoclonal
aislado o fragmento de unión a antígeno inductor de citotoxicidad
celular del mismo con dicha muestra de tejido.
7. Método según la reivindicación 6, en el que
la muestra de tejido tumoral humano procede de un tumor originario
de un tejido seleccionado de entre el grupo que consiste de tejido
de colon, ovario, próstata, páncreas y mama.
8. Anticuerpo monoclonal codificado por un clon
depositado en la IDAC con el número de acceso
280104-02 o un antígeno de unión a antígeno del
mismo, para la utilización en el tratamiento de un tumor humano.
9. Anticuerpo monoclonal según la reivindicación
8, en el que dicho anticuerpo monoclonal se conjugad con un grupo
citotóxico.
10. Anticuerpo monoclonal según la
reivindicación 9, en el que dicho grupo citotóxico es un isótopo
radioactivo.
11. Anticuerpo monoclonal según la
reivindicación 8, en el que dicho anticuerpo monoclonal activa el
complemento, o en el que dicho anticuerpo monoclonal media en la
citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos.
12. Anticuerpo monoclonal según la
reivindicación 8, en el que dicho anticuerpo monoclonal se ha
humanizado, o en el que dicho anticuerpo monoclonal es
quimérico.
13. Anticuerpo monoclonal según la
reivindicación 8, en el que dicho tumor es un tumor de mama, de
colon o de próstata.
14. Anticuerpo monoclonal codificado por un clon
depositado en la IDAC con el número de acceso
280104-02, o un fragmento de unión a antígeno del
mismo, para la utilización como medicamento.
15. Anticuerpo monoclonal según la
reivindicación 14, en el que dicho anticuerpo monoclonal se ha
humanizado, o en el que dicho anticuerpo monoclonal es
quimérico.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US54866704P | 2004-02-26 | 2004-02-26 | |
| US548667P | 2004-02-26 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2345260T3 true ES2345260T3 (es) | 2010-09-20 |
Family
ID=34911008
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES05714544T Active ES2345260T3 (es) | 2004-02-26 | 2005-02-28 | Anticuerpos modificadores de enfermedades cancerosas. |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7399835B2 (es) |
| EP (1) | EP1718737B1 (es) |
| JP (1) | JP2008504227A (es) |
| CN (1) | CN1934246A (es) |
| AT (1) | ATE469220T1 (es) |
| AU (1) | AU2005217008A1 (es) |
| CA (1) | CA2557093A1 (es) |
| DE (1) | DE602005021459D1 (es) |
| DK (1) | DK1718737T3 (es) |
| ES (1) | ES2345260T3 (es) |
| NZ (1) | NZ549409A (es) |
| PL (1) | PL1718737T3 (es) |
| PT (1) | PT1718737E (es) |
| SI (1) | SI1718737T1 (es) |
| WO (1) | WO2005083064A1 (es) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7947496B2 (en) * | 1999-10-08 | 2011-05-24 | Hoffmann-La Roche Inc. | Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of CD44 |
| US20060140963A1 (en) * | 2003-04-14 | 2006-06-29 | Arius Research, Inc. | Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of CD59 |
| US20080213169A1 (en) * | 2003-04-14 | 2008-09-04 | Arius Research, Inc. | Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of CD59 |
| US20080025977A1 (en) * | 2003-04-14 | 2008-01-31 | Arius Research, Inc. | Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of CD59 |
| US7494648B2 (en) | 2005-08-02 | 2009-02-24 | Hoffmann-La Roche Inc. | Cancerous disease modifying antibodies |
| US7452979B2 (en) * | 2005-08-02 | 2008-11-18 | Arius Research, Inc. | Cancerous disease modifying antibodies |
| US7456259B2 (en) * | 2005-08-02 | 2008-11-25 | Arius Research, Inc. | Cancerous disease modifying antibodies |
| US7411046B2 (en) * | 2005-08-02 | 2008-08-12 | Arius Research Inc | Cancerous disease modifying antibodies |
| US7452978B2 (en) * | 2005-08-02 | 2008-11-18 | Arius Research, Inc. | Cancerous disease modifying antibodies |
| US7456258B2 (en) * | 2005-08-02 | 2008-11-25 | Arius Research, Inc. | Cancerous disease modifying antibodies |
| CA2668484A1 (en) * | 2006-11-13 | 2008-05-22 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Cancerous disease modifying antibodies 180706-02 |
| CN101668849A (zh) * | 2007-03-26 | 2010-03-10 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 由杂交瘤细胞系ar51a630.3产生的减轻癌性疾病的抗体010207-01 |
| KR20100028643A (ko) * | 2007-07-16 | 2010-03-12 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 항-암 세포독성 단클론 항체 |
| WO2012106281A2 (en) | 2011-01-31 | 2012-08-09 | The General Hospital Corporation | Multimodal trail molecules and uses in cellular therapies |
| WO2014018113A1 (en) | 2012-07-24 | 2014-01-30 | The General Hospital Corporation | Oncolytic virus therapy for resistant tumors |
| WO2014035474A1 (en) * | 2012-08-30 | 2014-03-06 | The General Hospital Corporation | Compositions and methods for treating cancer |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4433059A (en) * | 1981-09-08 | 1984-02-21 | Ortho Diagnostic Systems Inc. | Double antibody conjugate |
| US4828991A (en) | 1984-01-31 | 1989-05-09 | Akzo N.V. | Tumor specific monoclonal antibodies |
| AU613590B2 (en) | 1986-11-19 | 1991-08-08 | Bristol-Myers Squibb Company | Hybridomas producing monoclonal antibodies to new mucin epitopes |
| US4861581A (en) | 1986-12-05 | 1989-08-29 | Cancer Biologics, Inc. | Detection of necrotic malignant tissue and associated therapy |
| US5171665A (en) | 1989-04-17 | 1992-12-15 | Oncogen | Monoclonal antibody to novel antigen associated with human tumors |
| US6020145A (en) | 1989-06-30 | 2000-02-01 | Bristol-Myers Squibb Company | Methods for determining the presence of carcinoma using the antigen binding region of monoclonal antibody BR96 |
| DE69229254T2 (de) | 1991-10-30 | 1999-09-23 | Idemitsu Kosan Co | Verfahren zur Herstellung von menschlichen Lymphozyten und menschlichen Antikörpern; und so hergestellte Antikörper |
| IL105008A0 (en) | 1992-03-13 | 1993-07-08 | Yeda Res & Dev | Double transfectants of mhc genes as cellular vaccines for immunoprevention of tumor metastasis |
| CA2154266A1 (en) | 1993-02-05 | 1994-08-18 | John F. Codington | Human carcinoma antigen (hca), hca antibodies, hca immunoassays, methods of imaging and therapy |
| DE69518919T2 (de) | 1994-06-24 | 2001-03-29 | Vladimir P Torchilin | Autoantikörper enthaltende zusammensetzung für tumorbehandlung und -vorbeugung |
| US5783186A (en) | 1995-12-05 | 1998-07-21 | Amgen Inc. | Antibody-induced apoptosis |
| US7009040B2 (en) * | 2003-01-21 | 2006-03-07 | Arius Research, Inc. | Cancerous disease modifying antibodies |
| US20030138425A1 (en) * | 2001-09-21 | 2003-07-24 | Mather Jennie Powell | Antibodies that bind to cancer-associated antigen cytokeratin 8 and methods of use thereof |
| US20030086929A1 (en) | 2001-10-11 | 2003-05-08 | Tso J. Yun | Treatment of prostate cancer by inhibitors of ATP synthase |
| WO2003086456A2 (en) | 2002-04-05 | 2003-10-23 | Arius Research, Inc. | Anti-ck18 monoclonal antibody and therapeutic and diagnostic uses thereof in cancer |
| US20060140963A1 (en) | 2003-04-14 | 2006-06-29 | Arius Research, Inc. | Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of CD59 |
-
2005
- 2005-02-25 US US11/067,366 patent/US7399835B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2005-02-28 WO PCT/CA2005/000302 patent/WO2005083064A1/en active Application Filing
- 2005-02-28 AT AT05714544T patent/ATE469220T1/de active
- 2005-02-28 DE DE602005021459T patent/DE602005021459D1/de active Active
- 2005-02-28 CA CA002557093A patent/CA2557093A1/en not_active Withdrawn
- 2005-02-28 PL PL05714544T patent/PL1718737T3/pl unknown
- 2005-02-28 EP EP05714544A patent/EP1718737B1/en not_active Not-in-force
- 2005-02-28 NZ NZ549409A patent/NZ549409A/en unknown
- 2005-02-28 JP JP2007500025A patent/JP2008504227A/ja active Pending
- 2005-02-28 PT PT05714544T patent/PT1718737E/pt unknown
- 2005-02-28 AU AU2005217008A patent/AU2005217008A1/en not_active Abandoned
- 2005-02-28 ES ES05714544T patent/ES2345260T3/es active Active
- 2005-02-28 SI SI200531076T patent/SI1718737T1/sl unknown
- 2005-02-28 CN CNA2005800060181A patent/CN1934246A/zh active Pending
- 2005-02-28 DK DK05714544.3T patent/DK1718737T3/da active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20050191305A1 (en) | 2005-09-01 |
| CA2557093A1 (en) | 2005-09-09 |
| ATE469220T1 (de) | 2010-06-15 |
| CN1934246A (zh) | 2007-03-21 |
| DE602005021459D1 (de) | 2010-07-08 |
| EP1718737A1 (en) | 2006-11-08 |
| PL1718737T3 (pl) | 2010-10-29 |
| AU2005217008A1 (en) | 2005-09-09 |
| US7399835B2 (en) | 2008-07-15 |
| EP1718737B1 (en) | 2010-05-26 |
| WO2005083064A1 (en) | 2005-09-09 |
| SI1718737T1 (sl) | 2010-09-30 |
| JP2008504227A (ja) | 2008-02-14 |
| PT1718737E (pt) | 2010-08-09 |
| DK1718737T3 (da) | 2010-08-09 |
| NZ549409A (en) | 2009-12-24 |
| EP1718737A4 (en) | 2007-03-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2345260T3 (es) | Anticuerpos modificadores de enfermedades cancerosas. | |
| US7009040B2 (en) | Cancerous disease modifying antibodies | |
| US7348413B2 (en) | Cancerous disease modifying antibodies | |
| ES2278309T3 (es) | Anticuerpos que modifican una enfermedad cancerosa. | |
| US7361342B2 (en) | Cancerous disease modifying antibodies | |
| EP1796721A1 (en) | Cancerous disease modifying antibodies | |
| US20050027106A1 (en) | Cancerous disease modifying antibodies | |
| US20040141914A1 (en) | Cancerous disease modifying antibodies | |
| JP2009529010A (ja) | 癌性疾患修飾抗体 | |
| CA2658504A1 (en) | Cancerous disease modifying antibodies | |
| EP1996623A1 (en) | Cancerous disease modifying antibodies for diagnostic and therapeutic use in breast and prostate cancer |