ES2333511B1 - Derivados polimerizables de peptidos lineales antimicrobianos. - Google Patents
Derivados polimerizables de peptidos lineales antimicrobianos. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2333511B1 ES2333511B1 ES200930305A ES200930305A ES2333511B1 ES 2333511 B1 ES2333511 B1 ES 2333511B1 ES 200930305 A ES200930305 A ES 200930305A ES 200930305 A ES200930305 A ES 200930305A ES 2333511 B1 ES2333511 B1 ES 2333511B1
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- baselineskip
- peptide
- group
- peptides
- antimicrobial
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 175
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 title claims abstract description 53
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title abstract description 66
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 66
- -1 amino acid amino acid Chemical class 0.000 claims abstract description 39
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims abstract description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 25
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 claims abstract description 16
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 125000003647 acryloyl group Chemical group O=C([*])C([H])=C([H])[H] 0.000 claims description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 12
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 9
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 7
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 claims description 5
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000005392 carboxamide group Chemical class NC(=O)* 0.000 claims description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 5
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 5
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 claims description 5
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims description 4
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 abstract description 52
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 abstract description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 4
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 abstract description 3
- 125000003917 carbamoyl group Chemical class [H]N([H])C(*)=O 0.000 abstract 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 64
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 47
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 47
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 38
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 19
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 19
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 19
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 108700042778 Antimicrobial Peptides Proteins 0.000 description 13
- 102000044503 Antimicrobial Peptides Human genes 0.000 description 13
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 13
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 13
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 12
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 12
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 12
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 12
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 11
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 10
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 10
- ROOXNKNUYICQNP-UHFFFAOYSA-N ammonium persulfate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-]S(=O)(=O)OOS([O-])(=O)=O ROOXNKNUYICQNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 10
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 8
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 8
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 description 8
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 7
- 239000006137 Luria-Bertani broth Substances 0.000 description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 5
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 5
- 229910001870 ammonium persulfate Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N n,n'-methylenebisacrylamide Chemical compound C=CC(=O)NCNC(=O)C=C ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 5
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 5
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 5
- CBPJQFCAFFNICX-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-methylpentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 CBPJQFCAFFNICX-IBGZPJMESA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 4
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 4
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-6-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 3
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 3
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SJVFAHZPLIXNDH-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-phenylpropanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C1=CC=CC=C1 SJVFAHZPLIXNDH-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 2
- QXVFEIPAZSXRGM-DJJJIMSYSA-N (2s,3s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-methylpentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 QXVFEIPAZSXRGM-DJJJIMSYSA-N 0.000 description 2
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LEJBBGNFPAFPKQ-UHFFFAOYSA-N 2-(2-prop-2-enoyloxyethoxy)ethyl prop-2-enoate Chemical compound C=CC(=O)OCCOCCOC(=O)C=C LEJBBGNFPAFPKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical compound CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QDGAVODICPCDMU-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3-[3-[bis(2-chloroethyl)amino]phenyl]propanoic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=CC(N(CCCl)CCCl)=C1 QDGAVODICPCDMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KUDUQBURMYMBIJ-UHFFFAOYSA-N 2-prop-2-enoyloxyethyl prop-2-enoate Chemical compound C=CC(=O)OCCOC(=O)C=C KUDUQBURMYMBIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003143 4-hydroxybenzyl group Chemical group [H]C([*])([H])C1=C([H])C([H])=C(O[H])C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- SOGAXMICEFXMKE-UHFFFAOYSA-N Butylmethacrylate Chemical compound CCCCOC(=O)C(C)=C SOGAXMICEFXMKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101800003223 Cecropin-A Proteins 0.000 description 2
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 2
- 239000004395 L-leucine Substances 0.000 description 2
- 235000019454 L-leucine Nutrition 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 101800004761 Magainin-2 Proteins 0.000 description 2
- BAPJBEWLBFYGME-UHFFFAOYSA-N Methyl acrylate Chemical compound COC(=O)C=C BAPJBEWLBFYGME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine Chemical compound CN(C)CCN(C)C KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- HFBMWMNUJJDEQZ-UHFFFAOYSA-N acryloyl chloride Chemical compound ClC(=O)C=C HFBMWMNUJJDEQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012644 addition polymerization Methods 0.000 description 2
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- PVEOYINWKBTPIZ-UHFFFAOYSA-N but-3-enoic acid Chemical compound OC(=O)CC=C PVEOYINWKBTPIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003857 carboxamides Chemical class 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 108010067216 glycyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical group 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- OVHQWOXKMOVDJP-UHFFFAOYSA-N melitin Chemical compound OC1C(O)C(O)C(C)OC1OC1C(O)C(OC=2C=C3C(C(C(OC4C(C(O)C(O)C(COC5C(C(O)C(O)C(CO)O5)O)O4)O)=C(C=4C=CC(O)=CC=4)O3)=O)=C(O)C=2)OC(C)C1O OVHQWOXKMOVDJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 2
- 239000003973 paint Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 230000003032 phytopathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 238000010526 radical polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 2
- IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N sodium 2-[[2-[[hydroxy-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyphosphoryl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound [Na+].C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NP(O)(=O)OC1OC(C)C(O)C(O)C1O IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N subtilin Chemical compound CC1SCC(NC2=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC(=C)C(=O)NC(CCCCN)C(O)=O)CSC(C)C2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C1NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C2NC(=O)CNC(=O)C3CCCN3C(=O)C(NC(=O)C3NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CC=4C5=CC=CC=C5NC=4)CSC3)C(C)SC2)C(C)C)C(C)SC1)CC1=CC=CC=C1 WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N 0.000 description 2
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 2
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- ADOHASQZJSJZBT-AREMUKBSSA-N (2r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]indol-3-yl]propanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2N(C(=O)OC(C)(C)C)C=C1C[C@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 ADOHASQZJSJZBT-AREMUKBSSA-N 0.000 description 1
- JAUKCFULLJFBFN-RUZDIDTESA-N (2r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]phenyl]propanoic acid Chemical compound C1=CC(OC(C)(C)C)=CC=C1C[C@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 JAUKCFULLJFBFN-RUZDIDTESA-N 0.000 description 1
- UGNIYGNGCNXHTR-GOSISDBHSA-N (2r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-methylbutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@H](C(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UGNIYGNGCNXHTR-GOSISDBHSA-N 0.000 description 1
- SJVFAHZPLIXNDH-JOCHJYFZSA-N (2r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-phenylpropanoic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C1=CC=CC=C1 SJVFAHZPLIXNDH-JOCHJYFZSA-N 0.000 description 1
- UMRUUWFGLGNQLI-JOCHJYFZSA-N (2r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-6-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@H](CCCCNC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UMRUUWFGLGNQLI-JOCHJYFZSA-N 0.000 description 1
- QXVFEIPAZSXRGM-BFUOFWGJSA-N (2r,3r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-methylpentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@H]([C@H](C)CC)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 QXVFEIPAZSXRGM-BFUOFWGJSA-N 0.000 description 1
- SWZCTMTWRHEBIN-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C1=CC=C(O)C=C1 SWZCTMTWRHEBIN-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 1
- ADOHASQZJSJZBT-SANMLTNESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]indol-3-yl]propanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2N(C(=O)OC(C)(C)C)C=C1C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 ADOHASQZJSJZBT-SANMLTNESA-N 0.000 description 1
- JAUKCFULLJFBFN-VWLOTQADSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]phenyl]propanoic acid Chemical compound C1=CC(OC(C)(C)C)=CC=C1C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 JAUKCFULLJFBFN-VWLOTQADSA-N 0.000 description 1
- UGNIYGNGCNXHTR-SFHVURJKSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-methylbutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UGNIYGNGCNXHTR-SFHVURJKSA-N 0.000 description 1
- 125000000980 1H-indol-3-ylmethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 2,4-Hexadienoic acid, potassium salt (1:1), (2E,4E)- Chemical compound [K+].CC=CC=CC([O-])=O CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- XRKLXLGVJOJYOO-UHFFFAOYSA-N 2-(2-hydroxyethoxy)ethanol;2-methylprop-2-enoic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O.CC(=C)C(O)=O.OCCOCCO XRKLXLGVJOJYOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOXQRTZXKQZDDN-UHFFFAOYSA-N 2-Ethylhexyl acrylate Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)C=C GOXQRTZXKQZDDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HWSSEYVMGDIFMH-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-(2-methylprop-2-enoyloxy)ethoxy]ethoxy]ethyl 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCOCCOCCOC(=O)C(C)=C HWSSEYVMGDIFMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FLYIRERUSAMCDQ-UHFFFAOYSA-N 2-azaniumyl-2-(2-methylphenyl)acetate Chemical compound CC1=CC=CC=C1C(N)C(O)=O FLYIRERUSAMCDQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WDQMWEYDKDCEHT-UHFFFAOYSA-N 2-ethylhexyl 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CCCCC(CC)COC(=O)C(C)=C WDQMWEYDKDCEHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OMIGHNLMNHATMP-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyethyl prop-2-enoate Chemical compound OCCOC(=O)C=C OMIGHNLMNHATMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DBCAQXHNJOFNGC-UHFFFAOYSA-N 4-bromo-1,1,1-trifluorobutane Chemical compound FC(F)(F)CCCBr DBCAQXHNJOFNGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FIHBHSQYSYVZQE-UHFFFAOYSA-N 6-prop-2-enoyloxyhexyl prop-2-enoate Chemical compound C=CC(=O)OCCCCCCOC(=O)C=C FIHBHSQYSYVZQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OAOABCKPVCUNKO-UHFFFAOYSA-N 8-methyl Nonanoic acid Chemical compound CC(C)CCCCCCC(O)=O OAOABCKPVCUNKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000178 Acrylic resin Polymers 0.000 description 1
- 239000004925 Acrylic resin Substances 0.000 description 1
- 241000269338 Bombina variegata Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-RFZPGFLSSA-N D-Isoleucine Chemical compound CC[C@@H](C)[C@@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-RFZPGFLSSA-N 0.000 description 1
- 229930182845 D-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N D-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- 229930182819 D-leucine Natural products 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine Chemical compound NCCCC[C@@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- 229930182832 D-phenylalanine Natural products 0.000 description 1
- 229930182827 D-tryptophan Natural products 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N D-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-MRVPVSSYSA-N D-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- 229930195709 D-tyrosine Natural products 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-SCSAIBSYSA-N D-valine Chemical compound CC(C)[C@@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 1
- 229930182831 D-valine Natural products 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588694 Erwinia amylovora Species 0.000 description 1
- CBPJQFCAFFNICX-LJQANCHMSA-N Fmoc-D-Leu-OH Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@H](CC(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 CBPJQFCAFFNICX-LJQANCHMSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 241000256023 Hyalophora cecropia Species 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 101800004760 Magainin-1 Proteins 0.000 description 1
- VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N Methyl methacrylate Chemical compound COC(=O)C(C)=C VVQNEPGJFQJSBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HSHXDCVZWHOWCS-UHFFFAOYSA-N N'-hexadecylthiophene-2-carbohydrazide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCNNC(=O)c1cccs1 HSHXDCVZWHOWCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001204 N-oxides Chemical class 0.000 description 1
- NVNLLIYOARQCIX-MSHCCFNRSA-N Nisin Chemical compound N1C(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)[C@@H]([C@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)[C@H](N)[C@H](C)CC)CSC[C@@H]1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]2C(NCC(=O)N[C@H](C)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CS[C@@H]2C)C(=O)N[C@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]2C(N[C@H](C)C(=O)N[C@@H]3C(=O)N[C@@H](C(N[C@H](CC=4NC=NC=4)C(=O)N[C@H](CS[C@@H]3C)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N[C@H]([C@H](C)CC)C(=O)N[C@H](CC=3NC=NC=3)C(=O)N[C@H](C(C)C)C(=O)NC(=C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(O)=O)=O)CS[C@@H]2C)=O)=O)CS[C@@H]1C NVNLLIYOARQCIX-MSHCCFNRSA-N 0.000 description 1
- 108010053775 Nisin Proteins 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 241000589623 Pseudomonas syringae pv. syringae Species 0.000 description 1
- ZJCCRDAZUWHFQH-UHFFFAOYSA-N Trimethylolpropane Chemical compound CCC(CO)(CO)CO ZJCCRDAZUWHFQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000567019 Xanthomonas vesicatoria Species 0.000 description 1
- 241000269368 Xenopus laevis Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- PMZXXNPJQYDFJX-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;2,2,2-trifluoroacetic acid Chemical compound CC#N.OC(=O)C(F)(F)F PMZXXNPJQYDFJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 238000009452 anti-microbial packaging Methods 0.000 description 1
- 238000002802 antimicrobial activity assay Methods 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 244000000005 bacterial plant pathogen Species 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 238000012662 bulk polymerization Methods 0.000 description 1
- CQEYYJKEWSMYFG-UHFFFAOYSA-N butyl acrylate Chemical compound CCCCOC(=O)C=C CQEYYJKEWSMYFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VPKDCDLSJZCGKE-UHFFFAOYSA-N carbodiimide group Chemical group N=C=N VPKDCDLSJZCGKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- HCQPHKMLKXOJSR-IRCPFGJUSA-N cecropin-a Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)[C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C1=CC=CC=C1 HCQPHKMLKXOJSR-IRCPFGJUSA-N 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- LDHQCZJRKDOVOX-NSCUHMNNSA-N crotonic acid Chemical compound C\C=C\C(O)=O LDHQCZJRKDOVOX-NSCUHMNNSA-N 0.000 description 1
- XUDOZULIAWNMIU-UHFFFAOYSA-N delta-hexenoic acid Chemical compound OC(=O)CCCC=C XUDOZULIAWNMIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 125000004386 diacrylate group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 description 1
- 238000000119 electrospray ionisation mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000007720 emulsion polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- STVZJERGLQHEKB-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol dimethacrylate Substances CC(=C)C(=O)OCCOC(=O)C(C)=C STVZJERGLQHEKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000010528 free radical solution polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 244000000004 fungal plant pathogen Species 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 210000000087 hemolymph Anatomy 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- USSYUMHVHQSYNA-SLDJZXPVSA-N indolicidin Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)CC1=CNC2=CC=CC=C12 USSYUMHVHQSYNA-SLDJZXPVSA-N 0.000 description 1
- 239000012442 inert solvent Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- OFIZOVDANLLTQD-ZVNXOKPXSA-N magainin i Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 OFIZOVDANLLTQD-ZVNXOKPXSA-N 0.000 description 1
- MGIUUAHJVPPFEV-ABXDCCGRSA-N magainin ii Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 MGIUUAHJVPPFEV-ABXDCCGRSA-N 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- FQPSGWSUVKBHSU-UHFFFAOYSA-N methacrylamide Chemical compound CC(=C)C(N)=O FQPSGWSUVKBHSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005395 methacrylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- VHRYZQNGTZXDNX-UHFFFAOYSA-N methacryloyl chloride Chemical compound CC(=C)C(Cl)=O VHRYZQNGTZXDNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RBQRWNWVPQDTJJ-UHFFFAOYSA-N methacryloyloxyethyl isocyanate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCN=C=O RBQRWNWVPQDTJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 1
- ZMLXKXHICXTSDM-UHFFFAOYSA-N n-[1,2-dihydroxy-2-(prop-2-enoylamino)ethyl]prop-2-enamide Chemical compound C=CC(=O)NC(O)C(O)NC(=O)C=C ZMLXKXHICXTSDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 239000004309 nisin Substances 0.000 description 1
- 235000010297 nisin Nutrition 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 229920006284 nylon film Polymers 0.000 description 1
- 125000000466 oxiranyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- HVAMZGADVCBITI-UHFFFAOYSA-N pent-4-enoic acid Chemical compound OC(=O)CCC=C HVAMZGADVCBITI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WXZMFSXDPGVJKK-UHFFFAOYSA-N pentaerythritol Chemical compound OCC(CO)(CO)CO WXZMFSXDPGVJKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007030 peptide scission Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000010241 potassium sorbate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004302 potassium sorbate Substances 0.000 description 1
- 229940069338 potassium sorbate Drugs 0.000 description 1
- 238000012673 precipitation polymerization Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000001012 protector Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012265 solid product Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- DHHKPEUQJIEKOA-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 2-[6-(nitromethyl)-6-bicyclo[3.2.0]hept-3-enyl]acetate Chemical compound C1C=CC2C(CC(=O)OC(C)(C)C)(C[N+]([O-])=O)CC21 DHHKPEUQJIEKOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UWHCKJMYHZGTIT-UHFFFAOYSA-N tetraethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCOCCO UWHCKJMYHZGTIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000101 thioether group Chemical group 0.000 description 1
- LDHQCZJRKDOVOX-UHFFFAOYSA-N trans-crotonic acid Natural products CC=CC(O)=O LDHQCZJRKDOVOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIUWNILCHFBLEQ-NSCUHMNNSA-N trans-pent-3-enoic acid Chemical compound C\C=C\CC(O)=O UIUWNILCHFBLEQ-NSCUHMNNSA-N 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N tri(propan-2-yl)silicon Chemical compound CC(C)[Si](C(C)C)C(C)C ZGYICYBLPGRURT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010050327 trypticase-soy broth Proteins 0.000 description 1
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 1
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 1
- 229910052720 vanadium Inorganic materials 0.000 description 1
- GPPXJZIENCGNKB-UHFFFAOYSA-N vanadium Chemical compound [V]#[V] GPPXJZIENCGNKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001567 vinyl ester resin Polymers 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08L89/00—Compositions of proteins; Compositions of derivatives thereof
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Derivados polimerizables de péptidos lineales
antimicrobianos.
En la presente invención se describen nuevos
derivados polimerizables de péptidos lineales que confieren
actividad antimicrobiana a los polímeros de los que forman parte.
Los péptidos están formados por 11 aminoácidos, y tienen el grupo
amino del aminoácido que constituye el extremo
N-terminal funcionalizado con un grupo que incluye
un doble enlace susceptible de polimerizar con otros monómeros
insaturados. El aminoácido que constituye el extremo
C-terminal de dichos péptidos está en forma de
carboxamida. En la invención también se describe la preparación y la
utilización de los mencionados derivados como monómeros apropiados
para obtener polímeros con propiedades antimicrobianas. También se
describe un procedimiento para preparar dichos polímeros y también a
los polímeros obtenibles de acuerdo con dicho procedimiento.
Description
Derivados polimerizables de péptidos lineales
antimicrobianos.
La presente invención se refiere a derivados de
péptidos lineales que pueden ser empleados para preparar polímeros
con propiedades antimicrobianas.
Una gran cantidad de agentes antimicrobianos son
ampliamente utilizados y producidos para aplicación en productos
poliméricos, como por ejemplo plásticos, o pinturas que contienen
resinas acrílicas, para eliminar microorganismos o inhibir el
crecimiento de los mismos.
Existen varios métodos para conferir propiedades
antimicrobianas a los polímeros, entre ellos se pueden mencionar:
recubrir el polímero con un compuesto antimicrobiano apropiado;
injertar un compuesto antimicrobiano en un polímero ya formado;
preparar una solución o mezcla del polímero y el compuesto
antimicrobiano, y formar el artículo por moldeo; o copolimerizar con
un monómero que confiera propiedades antimicrobianas al
polímero.
Las propiedades antimicrobianas de los polímeros
pueden ser temporales o sustancialmente permanentes. En el primer
caso, la eficacia se va reduciendo con el tiempo, mientras que en
el segundo, las propiedades antimicrobianas persisten durante un
plazo considerable de tiempo.
Entre los compuestos que se han empleado para
conferir propiedades antimicrobianas a los polímeros se pueden
citar:
- 1)
- Metales como, por ejemplo, cobre, vanadio o plata como se describe en el artículo de Vojdani, et al., Potassium Sorbate Permeability of Methylcellulose and Hydroxypropylmethylcellulose Multi-layer films, J. Food Proc. Preserv., 1989,13, 417-430;
- 2)
- Moléculas orgánicas como, por ejemplo, quitosano como se describe en el artículo de Lee et al., Wide-spectrum antimicrobial packaging materials incorporating nisin and chitosan in the coating, Packag. Technol. Sci. 2003, 16, 99-106;
- 3)
- Grupos amino formados por radiación ultravioleta en la superficie del nilón, como se describe, por ejemplo, en el artículo de Paik et al., Antimicrobial activity of UV-irradiated nylon film for packaging applications, Packag. Technol. Sci., 1998, 11, 179-187; y
- 4)
- Péptidos injertados en la superficie del polímero como se describe, por ejemplo, en el artículo de Appendini et al., Surface Modification of Poly(styrene) by the Attachment of an Antimicrobial Peptide, J. App. Pol. Sc., 2001, 81, 609-616.
\vskip1.000000\baselineskip
La plata es uno de los compuestos
antimicrobianos más comunes debido a su baja toxicidad y a la
facilidad de producción. Sin embargo, presenta el inconveniente de
que la actividad antimicrobiana del polímero se va reduciendo a
medida que se liberan los iones metálicos.
La incorporación de un compuesto antimicrobiano
de forma permanente permite obtener polímeros con características
antimicrobianas de larga duración.
Los péptidos han merecido la atención durante
los últimos años porque algunos de ellos, aislados de la
naturaleza, presentan propiedades antimicrobianas.
Los péptidos naturales antimicrobianos poseen
pocas similitudes entre las secuencias de aminoácidos que los
componen. Por ejemplo la magainina 1 es un péptido lineal de 23
aminoácidos que se encuentra en la piel de la rana Xenopus
laevis, la cecropina A es también un péptido lineal formado por
37 aminoácidos que se encuentra en la hemolinfa de la mariposa
Hyalophora cecropia, y la bombinina H5 es un péptido lineal de 21
aminoácidos que se encuentra en la piel de la rana Bombina
variegata. Estos tres péptidos presentan diferencias
sustanciales en las secuencias de aminoácidos que los definen.
Se ha observado que los péptidos de origen
natural habitualmente tienen secuencias largas de aminoácidos,
presentan una mala biodisponibilidad, y son susceptibles de la
degradación por proteasas. Por ello, también se ha descrito la
preparación de péptidos con secuencias más cortas, que contienen la
combinación de fragmentos de péptidos de origen natural.
Por ejemplo, en Ali et al., Inhibition of
Fungal and Bacterial Plant Pathogens by Synthetic Peptides: In
Vitro Growth Inhibition, Interaction Between Peptides and
Inhibition of Disease Progression, Mol.
Plant-Microbe Interact., 2000, 13,
847-859 se describe un undecapéptido formado por
fragmentos de los péptidos de origen natural cecropina A y
melitina, que es activo frente a algunas bacterias patógenas de las
plantas.
Otra aproximación para desarrollar nuevos
compuestos antimicrobianos consiste en introducir modificaciones en
péptidos de origen natural o derivados de ellos.
Por ejemplo en el artículo de Badosa et al.,
A library of linear undecapeptides with antibacterial activity
against phytopathogenic bacteria, Peptides, 2007, 28,
2276-2285, y en la solicitud de patente
ES-A-2262448 se describen
undecapéptidos lineales con propiedades antimicrobianas frente a
bacterias fitopatógenas como Erwinia amylovora, Xanthomonas
vesicatoria, y Pseudomonas syringae.
En el estado de la técnica se han descrito
polímeros que contienen péptidos antimicrobianos en su
estructura.
Por ejemplo, en la solicitud de patente PCT
WO-A-2004/056402 se describen
lentes de contacto que contienen un recubrimiento estable de un
péptido antimicrobiano formado por 29 residuos de aminoácidos. La
unión se efectúa mediante enlaces covalentes del tipo éster o amida
entre el péptido y el polímero que constituye las lentes de
contacto.
En la solicitud de patente PCT
WO-A-2005/019241 se describen
oligopéptidos catiónicos y antimicrobianos que tienen puentes
disulfuro y que se encuentran inmovilizados sobre polímeros por vía
químico-física o covalentemente. En este último
caso se describe la inmovilización sobre poliéster facilitada por
compuestos que tienen el grupo carbodiimida, y sobre un polímero
que contiene grupos oxirano que reacciona con grupos amino o sulfuro
de los péptidos.
En la solicitud de patente PCT
WO-A-2008/141326 se describen
polímeros biodegradables del tipo poliéster, que tienen péptidos
unidos covalentemente a través de grupos hidroxílicos terminales.
Los péptidos, que pueden tener propiedades antimicrobianas, se
liberan al medio a medida que el polímero se degrada.
En la solicitud de patente PCT
WO-A-95/00547 se describen péptidos
con 16 a 18 aminoácidos que presentan propiedades antimicrobianas.
También se describe que un péptido se puede hacer reaccionar con el
metacrilato de 2-isocianatoetilo y así obtener un
monómero que se puede copolimerizar radicalariamente con otros
monómeros insaturados. Alternativamente, se puede injertar el
péptido funcionalizado al polímero por reacción con grupos amino o
hidroxilo del mismo.
En el artículo de Haynie et al.,
Antimicrobial Activities of Amphiphilic Peptides Covalently Bonded
to a Water-Insoluble Resin, Antimicrob. Agents
Chemother., 1995, 39(2), 301-307, se
describen péptidos derivados del péptido natural magainina 2 unidos
covalentemente a una poliamida insoluble en agua a través de su
extremo C-terminal mediante enlaces amida. En dicho
artículo también se describe que la inmovilización de los péptidos
en un soporte insoluble en agua restringe el rango de penetración
del agente antimicrobiano en los loci que se encuentran en la pared
bacteriana. También se describe que la orientación del péptido en
la cadena lateral del polímero es importante, ya que un polímero
que tiene el péptido antimicrobiano magainina 2 inmovilizado
presenta actividad antimicrobiana, mientras que el polímero con el
péptido que tenía la secuencia inversa de aminoácidos presenta una
actividad antimicrobiana inferior en comparación con el de la
secuencia normal.
A pesar de los diferentes desarrollos que se han
descrito en el estado de la técnica, subsiste la necesidad de
disponer de nuevos derivados de péptidos antimicrobianos fáciles de
preparar y que sean apropiados para reaccionar con otros monómeros,
para así obtener polímeros con propiedades antimicrobianas.
Los autores de la presente invención han
desarrollado nuevos derivados de péptidos lineales que resultan de
fácil preparación y que se pueden emplear para preparar polímeros
con propiedades antimicrobianas.
El objeto de la presente invención es
proporcionar derivados de péptidos lineales antimicrobianos.
Forma también parte del objeto de la invención
la utilización de dichos derivados para preparar polímeros con
propiedades antimicrobianas.
También forma parte del objeto de la invención
un procedimiento para preparar un polímero con propiedades
antimicrobianas, y el polímero obtenible mediante dicho
procedimiento.
En la Figura 1 se representan los resultados del
método cinético para la determinación de la actividad
antimicrobiana de un gel de poliacrilamida que incluye en su
estructura un derivado de los péptidos lineales de la invención. En
abscisas se representan los intervalos de tiempo expresados en
minutos en los que se extrajeron las muestras para ser analizadas, y
en ordenadas se representan las unidades formadoras de colonias
(UFC) por ml determinadas para cada tiempo. Las tres series de
resultados corresponden al control positivo (marcador
\ding{117}), al gel de poliacrilamida con el derivado de la
invención (marcador \ding{115}) y al gel de poliacrilamida sin
dicho derivado (marcador \ding{110}). Se puede observar en la
figura que el gel que contiene el derivado de la invención presenta
una reducción en el número de UFC/ml considerablemente superior al
producido por el gel de poliacrilamida sin dicho derivado, y al del
control
positivo.
positivo.
En la Figura 2 se representan los resultados del
ensayo para determinar la cinética de muerte de una suspensión de
bacterias E. coli en contacto con un disco de gel de
poliacrilamida que contiene en su estructura polimérica el derivado
de la invención preparado en el Ejemplo 1. En abscisas se
representa el tiempo en minutos, y en ordenadas se representa el
número de bacterias viables expresado como el logaritmo en base 10
de las unidades formadoras de colonias por ml (log_{10} UFC/ml).
De los resultados se puede extraer que los polímeros que contenían
un 0,5% en peso sobre el peso total de monómeros o más de derivado
de la invención, inhibían el crecimiento de las bacterias a corto
plazo (180 minutos).
En la Figura 3 se representan también los
resultados del mismo ensayo obtenidos hasta un período de dos días.
En abscisas se representa el tiempo en horas, y en ordenadas se
representa el número de bacterias viables expresado como el
logaritmo en base 10 de las unidades formadoras de colonias por ml
(log_{10} UFC/ml). De los resultados se puede extraer que los
polímeros que contenían al menos un 0,5% en peso sobre el peso
total de monómeros de derivado de la invención, inhibían el
crecimiento de las bacterias también a largo plazo (48 horas).
En la Figura 4 se representa la velocidad de
inactivación K_{d} obtenida en dicho ensayo para determinar la
cinética de muerte en función del contenido en % en peso del
derivado del Ejemplo 1 sobre la cantidad total de monómeros del gel
de poliacrilamida. En abscisas se representa el contenido expresado
en % peso del derivado de la invención sobre el peso total de
monómeros del gel de acrilamida, y en ordenadas se representa la
velocidad de inactivación K_{d} expresada en min^{-1}. Se puede
observar que existe claramente mente una relación
dosis-efecto y se aprecia una cinética de
saturación, con valores óptimos por encima de 0,5%. También se
puede observar que se produce un aumento considerable en la
velocidad de inactivación al pasar del 0,1% en peso al 0,5% en peso
de derivado de la
invención.
invención.
El objeto de la presente invención es
proporcionar derivados de péptidos lineales antimicrobianos que
responden a la fórmula general (I):
(I)X_{1}-X_{2}-Lys-Leu-Phe-Lys-Lys-Ile-Leu-Lys-X_{3}-Leu-NH_{2}
en
donde
X_{1} es el grupo
X_{2} es Lys, Tyr, Leu, Phe, o Trp,
X_{3} es Lys, Tyr, Val, Phe, o Trp,
R^{1} es hidrógeno, o un grupo alquilo
C_{1}-C_{4},
R^{2} es hidrógeno o metilo,
n es 0, 1, 2, 3, o 4, y
en donde los residuos de aminoácidos son de la
serie L o D.
\vskip1.000000\baselineskip
Como se desprende de la fórmula general (I), los
derivados de los péptidos lineales de la presente invención son
derivados de péptidos que contienen un grupo polimerizable en el
extremo N-terminal del péptido, y un grupo
carboxamido en el extremo C-terminal.
Los grupos polimerizables son aquellos que
incluyen un doble enlace susceptible de polimerizar
radicalariamente con otros monómeros insaturados como, por ejemplo,
ácido acrílico y sus esteres, ácido metacrilico y sus esteres,
acrilamida,
N,N'-metilen-bis-acrilamida,
estireno, o vinil éster del ácido versático.
Preferiblemente el grupo polimerizable X_{1}
se selecciona entre el grupo formado por acriloilo, metacriloilo,
crotonoilo, 3-butenoilo,
4-pentenoilo, 3-pentenoilo,
5-hexenoilo, o 6-heptenoilo; y más
preferiblemente el grupo polimerizables es acriloilo.
En la Tabla I se muestran los grupos
polimerizables que se funcionalizan de forma preferida en el
extremo
N-terminal:
N-terminal:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Las abreviaturas empleadas para los aminoácidos
en esta descripción siguen la normativa de la Comisión para la
Nomenclatura Bioquímica de la IUPAC-IUB, según se
describe en el libro Biochemical Nomenclature and Related
Documents, 2nd edition, Portland Press, 1992, Londres [ISBN
1-85578-005-4].
\newpage
\global\parskip0.900000\baselineskip
En la Tabla II se presentan las abreviaturas
aceptadas para los aminoácidos que figuran en esta descripción:
En esta descripción los péptidos que únicamente
incluyen aminoácidos de la serie L, tienen los aminoácidos
representados mediante la abreviatura de 3 letras. Así Leu
significa L-leucina, Lys significa
L-lisina, Ile significa
L-isoleucina, Phe significa
L-fenilalanina, Tyr significa
L-tirosina, Trp significa
L-triptófano, Val significa
L-valina.
En esta descripción los péptidos que incluyen
uno o más aminoácidos de la serie D, tienen los aminoácidos
representados mediante la abreviatura de 1 letra, en donde los
aminoácidos de la serie L se representan con una única letra
mayúscula, y los aminoácidos de la serie D se representan mediante
una única letra minúscula, negrita y subrayada. Así, I representa
L-isoleucina, L representa
L-leucina, K representa L-lisina, F
representa L-fenilalanina, W representa
L-triptófano, Y representa
L-tirosina, V representa L-valina,
k representa el aminoácido D-lisina, I
el aminoácido D-leucina, la i, el aminoácido
D-isoleucina, f el aminoácido
D-fenilalanina, w el aminoácido
D-triptófano, v el aminoácido
D-tirosina, y v el aminoácido
D-valina.
También de acuerdo con dicha normativa los
péptidos se representan con las abreviaturas de los aminoácidos que
los componen unidos por guiones, que representan los enlaces
peptídicos. Así por ejemplo el péptido denominado
glicilglicilglicina se simboliza como
Gly-Gly-Gly. Esto requiere la
modificación del símbolo Gly para la glicina,
H_{2}N-CH_{2}-COOH, de tres
formas distintas:
- (i)
- "Gly-" significa H_{2}N-CH_{2}-CO-
- (ii)
- "-Gly-" significa HN-CH_{2}-CO-, y
- (iii)
- "-Gly" significa HN-CH_{2}-COOH
Así, cuando el guión se coloca a la derecha del
símbolo, caso (i), indica que se ha eliminado el grupo OH del grupo
carboxílico del aminoácido, y cuando se coloca a la izquierda del
símbolo, caso (iii), indica que se ha eliminado un átomo de
hidrógeno del grupo amino del aminoácido; en el caso (ii) ambas
modificaciones se aplican a un mismo símbolo.
El aminoácido Gly- constituye el extremo
N-terminal del péptido, y el aminoácido -Gly
constituye el extremo C-terminal del péptido.
Las estructuras de los derivados de los péptidos
de la invención se definen de acuerdo con la fórmula general
(I).
Preferiblemente los residuos de aminoácidos son
de la serie L.
Otra forma de definir la estructura de los
péptidos que sirven de base para preparar los derivados de la
invención consiste en:
- a)
- emplear las secuencias de aminoácidos SEQ_ID_NO: 1 a SEQ_ID_NO: 25 para indicar los aminoácidos que forman el péptido,
- b)
- especificar la funcionalización que presenta en el extremo N-terminal del péptido, y
- c)
- especificar la funcionalización que presenta en el extremo C-terminal del péptido.
Como ya se ha indicado, todos los péptidos de la
invención tienen el aminoácido que forma el extremo
C-terminal en forma de carboxamida.
\global\parskip1.000000\baselineskip
Así pues, las secuencias de los péptidos que
sirven de base para preparar los derivados de la invención se
muestran en la Tabla III.
\newpage
Dichas secuencias fueron descritas ya en la
solicitud de patente ES-A-2262448,
y se refieren todas ellas a péptidos formados exclusivamente por
residuos de aminoácidos de la serie L. En dicha solicitud de patente
también se describen las propiedades antimicrobianas de dichos
péptidos.
Resultan ser preferidos los derivados de los
péptidos definidos por las secuencias SEQ_ID_NO: 1 a SEQ_ID_NO: 25,
que tienen el aminoácido del extremo N-terminal
funcionalizado con un grupo seleccionado entre el grupo formado por
acriloilo, metacriloilo, crotonoilo, 3-butenoilo,
4-pentenoilo, 3-pentenoilo,
5-hexenoilo, y 6-heptenoilo, y el
aminoácido del extremo C-terminal en forma de grupo
carboxamida.
Resultan ser más preferidos los derivados de los
péptidos definidos por las secuencias SEQ_ID_NO: 1 a
SEQ_ID_NO: 25, que tienen el aminoácido del extremo N-terminal funcionalizado con el grupo acriloilo, y el aminoácido del extremo C-terminal en forma de grupo carboxamida.
SEQ_ID_NO: 25, que tienen el aminoácido del extremo N-terminal funcionalizado con el grupo acriloilo, y el aminoácido del extremo C-terminal en forma de grupo carboxamida.
Dentro de este grupo, resulta especialmente
preferido el derivado del péptido definido por la secuencia
SEQ_ID_NO: 6, que tiene el aminoácido del extremo N-terminal funcionalizado con el grupo acriloilo, y el aminoácido del extremo C-terminal en forma de grupo carboxamida. Dicho péptido tiene la estructura Acriloilo-Lys-Lys-Leu-Phe-Lys-Lys-Ile-Leu-Lys-Tyr-Leu-NH_{2}, correspondiente a la fórmula general (I) donde X_{1} es acriloilo, X_{2} es Lys, y X_{3} es Tyr.
SEQ_ID_NO: 6, que tiene el aminoácido del extremo N-terminal funcionalizado con el grupo acriloilo, y el aminoácido del extremo C-terminal en forma de grupo carboxamida. Dicho péptido tiene la estructura Acriloilo-Lys-Lys-Leu-Phe-Lys-Lys-Ile-Leu-Lys-Tyr-Leu-NH_{2}, correspondiente a la fórmula general (I) donde X_{1} es acriloilo, X_{2} es Lys, y X_{3} es Tyr.
Como se puede observar en los Ejemplos, los
péptidos que sirven de base para preparar los derivados de la
invención presentan un grado de degradación variable frente a
proteasas, que puede oscilar entre el 50% y el 100 después de
permanecer 45 minutos en contacto con dichos enzimas.
La incorporación de aminoácidos de la serie D en
la estructura de dichos péptidos permite modular el grado de
degradación de los mismos frente a proteasas. De esta forma se
puede regular la resistencia de los péptidos a la degradación,
siendo posible llegar a una degradación mínima, y así conseguir un
efecto antimicrobiano más duradero.
En una realización particular los derivados de
los péptidos lineales de la invención incluyen uno o más
aminoácidos de la serie D en la secuencia de aminoácidos.
Sorprendentemente se ha comprobado que los
derivados de los péptidos lineales de la invención pueden emplearse
para preparar polímeros que presentan una actividad antimicrobiana,
a pesar de que los péptidos inmovilizados pueden perder capacidad
de penetración en los puntos activos situados en la membrana
celular de las bacterias.
La inmovilización del péptido en la estructura
del polímero presenta ventajas, ya que en general no es consumido
por las bacterias y puede actuar repetidas veces, de este modo se
necesita menos péptido para conseguir una determinada actividad
antimicrobiana, y así es menos probable que los microorganismos
desarrollen resistencia frente a dichos péptidos.
\vskip1.000000\baselineskip
Los péptidos que constituyen la base de los
derivados de la invención están formados por 11 aminoácidos que los
hace apropiados para ser preparados empleando los procedimientos
habituales de síntesis de péptidos en fase sólida, descritos por
R.B. Merrifield, Solid Phase Peptide Synthesis. I. The Synthesis
of a Tetrapeptide, J. Am. Chem. Soc., 1963, 85,
2149-2154.
Entre ellos se puede mencionar el que emplea
como soporte sólido la resina 4-metilbencidrilamina
(MBHA) funcionalizada con grupos amino. Sobre dicho soporte sólido
se llevan a cabo las reacciones sucesivas de acoplamiento entre los
diferentes aminoácidos que integran el péptido.
Dicho procedimiento es bien conocido por el
experto en la materia y se encuentra descrito, por ejemplo, en S.
A. Kates, F. Albericio Eds., Solid-Phase Synthesis.
A practical guide, Marcel Dekker, New York, 2000 [ISBN:
0-8247-0359-6], o en
K. Burguess Eds., Solid-Phase Organic Synthesis,
Wiley, John & Sons, New York, 1999 [ISBN: 0471318256].
Cuando se emplea la resina MBHA como soporte
sólido, habitualmente se incorpora a dicha resina un espaciador
bifuncional sensible al medio ácido, que permite el desanclaje en
condiciones suaves del péptido una vez sintetizado.
Por ejemplo un espaciador bifuncional apropiado
es el Fmoc-Rink-Linker (número CAS:
145469-56-3) comercializado por la
empresa Senn Chemicals (Suiza).
Dicho espaciador, una vez se ha unido a través
de su grupo carboxílico al grupo amino de la resina MBHA, y se ha
eliminado el grupo protector Fmoc, presenta un grupo amino libre
que permite el anclaje de un aminoácido que tenga un grupo
carboxílico libre.
En el mercado se puede adquirir la resina
Fmoc-Rink-MBHA en la empresa Senn
Chemicals, que ya tiene incorporado el espaciador mencionado.
Un procedimiento para la preparación de los
péptidos de la invención puede ser por ejemplo el que se describe a
continuación.
En dicho procedimiento se utiliza la química del
grupo Fmoc (9-fluorenilmetoxicarbonilo) como
protector del grupo \alpha-amino de los
aminoácidos que se emplean para preparar los péptidos de la
invención.
Para la protección de la cadena lateral de la
lisina (Lys) y del triptófano (Trp) se ha empleado el grupo
terc-butiloxicarbonilo (Boc). Para la protección de la
cadena lateral de la tirosina (Tyr) se ha empleado el grupo
terc-butilo (t-Bu).
En la primera etapa se procede a la eliminación
del grupo protector Fmoc, presente en el grupo amino del espaciador
bifuncional. A continuación se procede al anclaje del aminoácido
leucina, que también tiene el grupo a-amino
protegido por el grupo Fmoc.
Antes de proceder al nuevo acoplamiento se
elimina el grupo protector Fmoc de la leucina anclada en la
resina.
El ciclo de
acoplamiento-desprotección se repite hasta completar
la estructura del péptido.
La incorporación de los dos últimos aminoácidos
del péptido se realiza habitualmente mediante 2 o 3 acoplamientos
sucesivos con el fin de completar la reacción de acoplamiento del
aminoácido con el péptido anclado en la resina.
La funcionalización del grupo amino en el
extremo N-terminal se realiza una vez se ha
desprotegido el grupo Fmoc del último aminoácido incorporado y
manteniendo el péptido unido al soporte sólido. Para ello se puede
emplear un cloruro de ácido, un anhídrido o un ácido apropiado, como
por ejemplo ácido acrílico, cloruro de acriloilo, ácido
metacrílico, cloruro de metacriloilo, ácido crotónico, cloruro de
crotonoilo, ácido 3-butenoico, ácido
4-butenoico, ácido 3-pentenoico,
ácido 4-pentenoico, cloruro de
4-pentenoilo, ácido 5-hexenoico, o
ácido 6-heptenoico. En general se emplea un exceso
de cloruro de acido, anhídrido o ácido con respecto al grupo amino,
preferiblemente se emplean un exceso comprendido entre 5 y 50
equivalentes, más preferiblemente entre 10 y 30 equivalentes, y aún
más preferiblemente entre 15 y 25 equivalentes.
La escisión del péptido del soporte sólido se
realiza en condiciones ácidas, al mismo tiempo que se eliminan los
grupos protectores de las cadenas laterales de los aminoácidos que
forman el péptido.
Tras un proceso convencional de aislamiento, los
péptidos de la invención se obtienen con una buena pureza,
habitualmente superior al 90%, determinada por HPLC, en forma de
sólidos pulverulentos, y se caracterizan por espectrometría de
masas (ESI-MS).
\vskip1.000000\baselineskip
Forma parte del objeto de la invención la
utilización de los derivados de los péptidos lineales de la
invención para la preparación de polímeros con propiedades
antimicrobianas.
Los derivados de péptidos lineales
antimicrobianos de la invención tienen un grupo polimerizable que
incluye un doble enlace susceptible de polimerizar con otros
monómeros y por ello pueden emplearse para preparar polímeros con
propiedades antimicrobianas.
También forma parte del objeto de la invención
un procedimiento para preparar un polímero con propiedades
antimicrobianas que comprende la polimerización de:
- 1)
- un monómero seleccionado entre los derivados de péptidos lineales de la invención o mezclas de los mismos,
- 2)
- un monómero seleccionado entre el grupo formado por ácido acrílico, sus esteres y amidas; ácido metacrílico sus esteres y amidas; estireno; y/o mezclas de los mismos, y eventualmente
- 3)
- un monómero reticulante.
\vskip1.000000\baselineskip
También forma parte del objeto de la invención
un polímero obtenible por dicho procedimiento.
Un monómero es una molécula de pequeña masa
molecular que unida a otros monómeros, a veces cientos o miles, por
medio de enlaces químicos, generalmente covalentes, forman
macromoléculas llamadas polímeros.
Mediante el procedimiento de la invención el
péptido antimicrobiano se convierte en una cadena lateral del
polímero.
El componente 1) es un derivado de péptidos
lineales de la invención o bien una mezcla de los mismos.
Resultan ser preferidos los derivados de los
péptidos definidos por las secuencias SEQ_ID_NO: 1 a SEQ_ID_NO: 25,
que tienen el aminoácido del extremo N-terminal
funcionalizado con un grupo seleccionado entre el grupo formado por
acriloilo, metacriloilo, crotonoilo, 3-butenoilo,
4-pentenoilo, 3-pentenoilo,
5-hexenoilo, y 6-heptenoilo, y el
aminoácido del extremo C-terminal en forma de grupo
carboxamida.
Resultan ser más preferidos los derivados de los
péptidos definidos por las secuencias SEQ_ID_NO: 1 a
SEQ_ID_NO: 25, que tienen el aminoácido del extremo N-terminal funcionalizado con el grupo acriloilo, y el aminoácido del extremo C-terminal en forma de grupo carboxamida.
SEQ_ID_NO: 25, que tienen el aminoácido del extremo N-terminal funcionalizado con el grupo acriloilo, y el aminoácido del extremo C-terminal en forma de grupo carboxamida.
Dentro de este grupo, resulta especialmente
preferido el derivado del péptido definido por la secuencia
SEQ_ID_NO: 6, que tiene el aminoácido del extremo N-terminal funcionalizado con el grupo acriloilo, y el aminoácido del extremo C-terminal en forma de grupo carboxamida.
SEQ_ID_NO: 6, que tiene el aminoácido del extremo N-terminal funcionalizado con el grupo acriloilo, y el aminoácido del extremo C-terminal en forma de grupo carboxamida.
El componente 2) es un monómero seleccionado
entre el grupo formado por ácido acrílico, sus esteres y amidas;
ácido metacrílico sus esteres y amidas; estireno; y/o mezclas de
los mismos. Por ejemplo: ácido acrílico, acrilato de metilo,
acrilato de butilo, acrilato de 2-etilhexilo,
acrilato de hidroxietilo, acrilamida, ácido metacrílico,
metacrilato de metilo, metacrilato de butilo, metacrilamida, o
metacrilato de 2-etilhexilo.
Habitualmente el componente 2) es una mezcla de
varios monómeros para así poder regular las propiedades del
polímero como, por ejemplo, dureza, resistencia a la rotura,
fragilidad, tenacidad, flexibilidad, elasticidad, ductilidad, o
brillo.
El componente 3) es un monómero reticulante, es
decir, tiene más de un grupo insaturado polimerizable, así puede
establecer enlaces entre diferentes cadenas de polímero, y formar
una red tridimensional. Entre los monómeros reticulantes se pueden
mencionar por ejemplo:
N,N'-metilen-bis-acrilamida;
N,N'-(1,2-dihidroxietileno)-bis-acrilamida;
diacrilato de etilenglicol; diacrilato de dietilenglicol;
diacrilato de 1,6-hexanodiol; diacrilato de
tetraetilenglicol; tetraacrilato de pentaeritrita; triacrilato de
trimetilolpropano; dimetacrilato de etilenglicol; dimetacrilato de
dietilenglicol; dimetacrilato de trietilenglicol; o
divinilbenceno.
El contenido de componente 1) en el polímero
está comprendido entre 0,5% y 10% con respecto al peso total de
monómeros, preferiblemente entre 1% y 7%, más preferiblemente entre
2% y 5%.
El contenido de componente 2) en el polímero
está comprendido entre 85% y 99% con respecto al peso total de
monómeros, preferiblemente entre 89% y 98%, más preferiblemente
entre 92% y 96%.
El contenido de componente 3), en el caso de
estar presente, está comprendido entre 0,5% y 5% con respecto al
peso total de monómeros, preferiblemente entre 1% y 4%, más
preferiblemente entre 2% y 3%.
La polimerización de los componentes 1), 2), y
eventualmente 3) se lleva a cabo siguiendo procedimientos bien
conocidos por el experto en la materia, como por ejemplo la
polimerización por adición, tal como se describe por ejemplo en el
libro de S. F. Sun, Physical Chemistry of Macromolecules: Baisc
Principles and Issues, 2nd edition, Wiley, 2004 [ISBN:
978-0-471-28138-2].
La polimerización por adición puede ser
radicalaria, si es iniciada por radicales, o bien iónica si es
iniciada por iones. En general, los polímeros de la invención se
preparan por polimerización radicalaria.
Existen varias formas de llevar a cabo la
polimerización radicalaria, entre las que se pueden mencionar:
- a)
- Polimerización en masa: síntesis sin disolvente,
- b)
- Polimerización en solución en un disolvente inerte,
- c)
- Polimerización en emulsión: por adición de un iniciador (por ejemplo persulfato amónico) a una emulsión de los monómeros insolubles en agua,
- d)
- Polimerización en suspensión: por adición de un iniciador a una suspensión acuosa de los monómeros, o
- e)
- Polimerización por precipitación: se emplea un disolvente para precipitar el polímero.
\vskip1.000000\baselineskip
Por ejemplo la polimerización se puede llevar a
cabo entre la acrilamida, un derivado de la invención,
N,N'-metilen-bis-acrilamida
como agente reticulante, y persulfato amónico como iniciador, tal
como se describe en el libro de S. Roe, Protein purification
techniques: a practical approach, 2nd edition, Oxford
University Press, 2001, [ISBN: 0199636737].
\newpage
Una vez se ha obtenido el polímero, se lava para
eliminar los agentes químicos residuales, entre ellos eventuales
trazas del derivado de la invención, y se puede esterilizar
mediante radiación ultravioleta o tratamiento térmico.
En una realización preferida, los polímeros se
esterilizan de forma efectiva, después de su lavado con agua,
mediante un tratamiento térmico en estufa durante 20 minutos a
80ºC, comprobándose que en estas condiciones no se produce
crecimiento de microorganismos cuando el polímero se trata con
caldo de cultivo Luria-Bertani (LB) durante 2 h, se
escurre y se deja incubar a 37ºC durante 24 h. Si los polímeros no
se esterilizan, se ha observado el crecimiento de microorganismos
debido a la contaminación ambiental cuando se incuban en caldo LB
sin haber procedido a la inoculación de microorganismos.
Los polímeros con propiedades antimicrobianas de
la invención pueden ser empleados en superficies donde la
contaminación microbiana es un problema, como por ejemplo en
envases para alimentos, semillas, vendajes para heridas, suturas,
catéteres, membranas de diálisis, o filtros de agua. También son
apropiados para la formulación de pinturas, ya que de esta forma se
obtiene una película con propiedades antimicrobianas. Otra
aplicación de dichos polímeros se encuentra en la preparación de
implantes, y de nanopartículas poliméricas.
\vskip1.000000\baselineskip
La actividad antimicrobiana del polímero
preparado con un derivado de los péptidos lineales de la invención
frente a una bacteria patógena como E. coli se ha evaluado
mediante la metodología de la detección del punto final, un método
cinético, y la determinación de la inhibición del crecimiento de
bacterias por parte de polímeros con diferentes contenidos de
derivado de la invención.
Los ensayos biológicos se han realizado con el
polímero preparado en el Ejemplo 2, que es un gel de poliacrilamida
que contiene un derivado de péptido lineal antimicrobiano, y la
actividad antimicrobiana se ha comparado con la de un polímero
análogo que no incluía dicho derivado en su estructura.
En el método de la detección del punto final, se
tomaron geles del polímero, previamente lavados dos veces en agua
destilada y pasteurizados 20 min a 80ºC para eliminar posibles
microorganismos contaminantes, y se colocaron piezas de cada uno de
los geles en un caldo de cultivo LB durante 2 horas para que se
empaparan con dicho caldo. A continuación se eliminó el exceso de
líquido y se inocularon ambos geles con una suspensión de E.
coli. Tras la incubación durante 24 h a 37ºC, se homogeneizaron
ambos geles en peptona tamponada, se hicieron diluciones decimales
seriadas del sobrenadante, y se sembraron alícuotas de las mismas
en una placa de agar.
Tras la incubación durante 24 h a 37ºC, se
contaron las colonias formadas en cada una de las placas y se
calculó el número de unidades formadoras de colonias por ml
(UFC/ml) del extracto y se determinó la cantidad total en cada gel.
El gel de poliacrilamida que contenía el derivado del péptido lineal
del Ejemplo 1 presentó un factor de reducción logarítmica de 4 en el
crecimiento de las colonias de E. coli, con respecto al gel
de poliacrilamida que no contenía dicho derivado.
Este ensayo confirmó las propiedades
antimicrobianas del gel de poliacrilamida preparado con un derivado
de los péptidos lineales de la invención.
En el método cinético los geles de
poliacrilamida, previamente lavados dos veces en agua destilada y
pasteurizados 20 min a 80ºC para eliminar posibles microorganismos
contaminantes, se sumergieron en una suspensión de E. coli
en caldo de cultivo LB.
A continuación se incubaron a 37ºC en agitación
orbital y se extrajeron muestras de la suspensión a diferentes
intervalos de tiempo, que fueron diluidas y las correspondientes
alícuotas sembradas en placas de Petri con agar nutritivo para
determinar la concentración de microorganismos después de incubar
dichas placas durante 24 h a 37ºC.
En la Figura 1 se representan los resultados
obtenidos a partir de dicho ensayo y se puede observar la reducción
en el número de UFC/ml en el caso del gel de poliacrilamida que
contenía en su estructura un derivado de los péptidos lineales
antimicrobianos de la invención.
En este ensayo se observó que a los 240 minutos
el número de UFC/ml es sustancialmente menor en la solución que
contenía el gel de poliacrilamida con el derivado de la invención
en comparación con la solución control, y con la solución que
contenía el gel de poliacrilamida sin el derivado de la
invención.
También se ha efectuado un ensayo para
determinar la cinética de muerte de una suspensión de bacterias E.
cola en caldo LB en contacto con un disco de un polímero de la
invención, que contiene en su estructura un derivado de péptido
lineal antimicrobiano.
Para ello se prepararon diversos polímeros que
contenían diferentes cantidades de derivados de la invención. En
particular, se efectuaron ensayos con geles de poliacrilamida que
contenían 0,1%, 0.5%, 0,98%, 2,01% y 3,94% en peso del derivado de
la invención preparado en el Ejemplo 1 sobre el peso total de
monómeros. También se ensayó un gel de poliacrilamida control que
no contenía dicho derivado.
El ensayo de inactivación se efectuó en una
placa con múltiples pocillos en donde se colocó un volumen de
suspensión de bacterias E. coli en caldo LB y un cilindro de
gel de poliacrilamida de 1 cm de diámetro y 0,2 cm de altura. A
continuación se tomaron muestras de la suspensión bacteriana a
diferentes tiempos entre 0 y 48 horas, y se prepararon
diluciones.
Dichas diluciones se sembraron en placas de agar
que se incubaron durante 48 h a 37ºC y se realizó el recuento de
colonias en las mismas.
De los resultados se puede extraer que los
polímeros que contenían un 0,5% o más de derivado de la invención,
inhibían el crecimiento de las bacterias a corto plazo (180
minutos) tal como se puede observar en la Figura 2. En la Figura 3
se aprecia como dicho efecto antimicrobiano de los geles de
poliacrilamida con el péptido antimicrobiano se mantiene durante
largos periodos de tiempo (hasta 48 horas en el ejemplo) con una
reducción de hasta 8 unidades logarítmicas en relación con los
controles, en los que se produce un crecimiento de 4 unidades
logarítmicas respecto al tiempo inicial.
Con el ensayo para determinar la cinética de
muerte se evaluó el tiempo de reducción decimal (D) y la velocidad
de inactivación (K_{d}) en función del contenido en % en peso del
derivado de la invención sobre la cantidad total de monómeros del
gel de poliacrilamida.
El tiempo de reducción decimal es el tiempo
necesario para reducir en un 90% una población de bacterias, y la
velocidad de inactivación es el inverso de dicho tiempo. Estos
parámetros son bien conocidos por el experto en la materia y se
encuentran descritos por ejemplo en el libro de G. Sykes,
Disinfection and sterilization, 2nd edition, Lippincott,
1965.
En la Figura 4 se puede observar que existe
claramente una relación dosis-efecto y se aprecia
una cinética de saturación con valores óptimos por encima de 0,5%.
También se puede observar que se produce un aumento considerable en
la velocidad de inactivación al pasar del 0,1% en peso al 0,5% en
peso de derivado de la invención.
También se ha comprobado que el efecto
antimicrobiano de los geles de acrilamida no se manifiesta cuando
en el pocillo de ensayo se incuba en caldo LB el gel y en la parte
superior se dispone un microfiltro en el interior del cual se
inocula una solución de E. coli con 10^{6} UFC/ml. El
filtro impide el contacto de los microorganismos con el gel, y en
estas condiciones el crecimiento bacteriano es similar al
control.
\vskip1.000000\baselineskip
La estabilidad de los péptidos a la degradación
por proteasas se ha evaluado mediante el tratamiento de soluciones
de los péptidos en tampón TRIS con Proteinasa K
(Sigma-Aldrich), y la monitorización de su
degradación por HPLC a diferentes intervalos de tiempo. La
degradación se expresa como el porcentaje de péptido degradado
después de un intervalo de tiempo determinado, normalmente
45minutos, calculado a partir de la disminución del área del pico
del péptido nativo por HPLC. Una descripción de la metodología
empleada para la determinación de la estabilidad a proteasas se
encuentra en Rozek et al., Structure-based
design of an indolicidin peptide analogue with increased protease
stability, Biochemistry, 2003, 42,
14130-14138.
A continuación, a los efectos de completar de
forma suficiente la anterior descripción, se exponen los siguientes
ejemplos.
\vskip1.000000\baselineskip
En los ejemplos que siguen se emplean las
siguientes abreviaciones: Boc:
terc-butiloxicarbonilo; t-Bu:
terc-butilo; DIEA:
N,N-diisopropiletilamina; DMF:
N,N-dimetilformamida; EDTA, ácido
etilendiaminotetracético; ESI-MS: espectrometría de
masas con ionización por electropulverización; Fmoc:
9-fluorenilmetoxicarbonilo; HBTU: hexafluorofosfato
de N-óxido de
N-[(1H-benzotriazol-1-il)(dimetilamino)metilen]-N-metilmetanaminio;
HPLC: cromatografía líquida de alta resolución; LB: Luna Bertani;
MBHA: 4-metilbencidrilamina; NMP:
N-metilpirrolidona; TEMED:
N,N,N',N'-tetrametiletilendiamina, TFA: ácido
trifluoroacético; TIS: triisopropilsilano; TRIS:
tris(hidroximetil)aminometano; TSB: Trypticase Soy
Broth; UV: ultravioleta.
Los productos
Fmoc-Lys(Boc)-OH,
Fmoc-Phe-OH,
Fmoc-Leu-OH,
Fmoc-Ile-OH,
Fmoc-Tyr(tBu)-OH,
Fmoc-Trp(Boc)-OH,
Fmoc-Val-OH,
Fmoc-D-Lys(Boc)-OH,
Fmoc-D-Phe-OH,
Fmoc-D-Leu-OH,
Fmoc-D-Ile-OH,
Fmoc-D-Tyr(tBu)-OH,
Fmoc-D-Val-OH,
Fmoc-D-Trp(Boc)-OH,
la resina Fmoc-Rink-MBHA
funcionalizada con grupos amino, y HBTU, se obtuvieron de Senn
Chemicals. Los productos N-metilpirrolidona, y TIS
se obtuvieron de Aldrich. Los productos piperidina y DIEA se
obtuvieron de Fluka.
Las siguientes indicaciones sobre el
procedimiento para la preparación de los péptidos son de carácter
general:
- -
- Se emplearon aminoácidos que tienen el grupo a-amino protegido con el grupo Fmoc.
- -
- Para la protección de la cadena lateral de la lisina y del triptófano se empleó el grupo terc-butiloxicarbonilo (Boc). Para la protección de la cadena lateral de la tirosina se empleó el grupo terc-butilo (t-Bu).
- -
- Las reacciones se llevaron a cabo en jeringas de 2 o 5 ml que tenían incorporado un filtro microporoso de polipropileno.
- -
- Todas las transformaciones y lavados se llevaron a cabo a 25ºC, a no ser que se indique lo contrario.
- -
- El análisis por HPLC se llevó a cabo con un flujo de 1,0 ml/min empleando una columna de fase reversa Kromasil (4,6 x 40 mm; tamaño de partículas de 3,5 \mum). Se emplearon gradientes lineales con TFA acuoso al 0,1% y TFA en acetonitrilo al 0,1%, con una relación comprendida entre 0,98:0,02 y 0,98:0,1 durante un período de tiempo de 7 minutos con detección UV a una longitud de onda de 220 nm.
- -
- Los espectros ESI-MS fueron adquiridos empleando un instrumento cuadrupolo Navigator; operando en el modo positivo de iones (ES+) con un voltaje en la muestra de 30 kV.
- -
- Todas las relaciones entre los disolventes son volumen/volumen, a no ser que se especifique otro tipo de proporción.
\vskip1.000000\baselineskip
En una jeringa de 2 ml de capacidad, equipada
con un filtro microporoso en la parte inferior, se colocaron 30 mg
de resina Fmoc-Rink-MBHA con una
funcionalización de 0,66 mmol/g, equivalentes a 19,8 \mumoles de
grupos amino, y se llenó la jeringa con disolvente para
hinchar-lavar la resina de acuerdo con la siguiente
secuencia: CH_{2}Cl_{2} (1 \times 20 min) y DMF (1 \times 20
min). La expresión CH_{2}Cl_{2} (1 \times 20 min) se refiere
a que se realizó 1 lavado de 20 minutos con cloruro de metileno.
Después de cada etapa de lavado se eliminó el disolvente mediante
un filtrador de vacío múltiple (Vac Man Laboratory Vacuum Manifold
de Promega Distribuidora).
Después de hinchar-lavar la
resina, ésta se trató con una mezcla de piperidina y DMF (3:7, 1
\times 2 min y 1 \times 10 min) para eliminar el grupo Fmoc
presente en el grupo amino del espaciador bifuncional, y, a
continuación, se lavó con DMF (6 \times 1 min).
Seguidamente la resina se trató con 21 mg de
Fmoc-Leu-OH (59 \mumoles), 22 mg
de HBTU (59 \mumoles) y 11 \mul de DIEA (63 \mumoles) en 0,1
ml de DMF. Después de 4 h se lavó la resina con DMF (6 \times 1
min) y se comprobó que el test de ninhidrina era negativo (Kaiser
et al, Anal. Biochem., 1970, 34,
595-598).
La eliminación del grupo Fmoc y los lavados
subsiguientes se realizaron como ya se ha descrito
anteriormente.
El ciclo de
acoplamiento-desprotección se repitió para los
siguientes cuatro aminoácidos protegidos con el grupo
N^{\alpha}-Fmoc:
Fmoc-Tyr-OH,
Fmoc-Lys(Boc)-OH,
Fmoc-Leu-OH y
Fmoc-Ile-OH. En cada etapa se
procedió al lavado con DMF (6 \times 1 min).
A partir del quinto aminoácido incorporado,
tanto la eliminación del grupo Fmoc, los ciclos
acoplamiento-desprotección como los correspondientes
lavados se realizaron de la misma manera substituyendo en estos
casos la DMF por NMP. Los seis últimos aminoácidos se incorporaron
protegidos con el grupo N^{\alpha}-Fmoc:
Fmoc-Lys(Boc)-OH,
Fmoc-Phe-OH y
Fmoc-Leu-OH. Para la incorporación
de los dos últimos aminoácidos se realizaron 2-3
acoplamientos sucesivos para obtener un test de ninhidrina
negativo.
Después de eliminar el grupo Fmoc del último
aminoácido acoplado, como ya se ha descrito anteriormente, se lavó
la resina con NMP (6 \times 1 min) y CH_{2}Cl_{2} (6 \times
1 min), y se obtuvo el péptido lineal unido a la resina,
H-Lys-Lys-Leu-Phe-Lys-Lys-Ile-Leu-Lys-Tyr-Leu-Rink-MBHA.
A continuación dicho péptido se trató con 1,18
mmoles de cloruro de acriloilo, y 2,36 mmoles de
N,N-diisopropiletilamina durante 24 h a temperatura
ambiente. Posteriormente, la resina se lavó con DMF (6 \times 1
min).
Finalmente, se escindió el péptido de la resina
mediante un tratamiento con 1 ml de una mezcla de TFA, agua y TIS
(95:2,5:2,5) durante 2 horas. Con dicho tratamiento ácido también
se eliminaron los grupos protectores de las cadenas laterales.
Se recogieron los filtrados en un vial mediante
una presión positiva de nitrógeno. La resina se lavó con una mezcla
de TFA, agua y TIS (95:2,5:2,5, 2 \times 0,5 ml). Los filtrados
se combinaron y se evaporaron casi a sequedad bajo una corriente de
nitrógeno hasta obtener un aceite. Dicho aceite se precipitó con
éter dietílico, se centrifugó, y el éter se decantó. Este proceso
se repitió 3 o 4 veces. Finalmente, el producto sólido obtenido se
disolvió en agua, y se liofilizó.
Se obtuvo un sólido pulverulento que tenía una
pureza superior al 90% analizada por HPLC, y su estructura se
confirmó por ESI-MS.
\vskip1.000000\baselineskip
Se prepararon 50 ml de una solución madre de
acrilamida con la disolución de 14,6 g de acrilamida, y 0,45 g de
N,N'-metilen-bis-acrilamida
en agua, y se mantuvo a una temperatura de 4ºC y en ausencia de
luz.
Se preparó una solución de persulfato amónico al
10% en peso/volumen por disolución de 0,5 g de persulfato amónico
en agua destilada hasta un volumen de 5 ml.
En un vial se mezclaron 3,42 ml de solución
madre de acrilamida, 5,08 ml de agua y 21,1, mg del péptido
obtenido en el Ejemplo 1. A continuación se añadieron 18 \mul de
TEMED y 43 pi de solución de persulfato amónico, se agitó y se dejó
polimerizar durante 30 minutos.
Transcurrido dicho período de tiempo se obtuvo
un gel de poliacrilamida que contenía un 2% en peso del derivado de
péptido lineal del Ejemplo 1 unido covalentemente en la estructura
polimérica.
Una vez obtenido el gel, se lavó con agua para
eliminar los restos de agentes químicos, y se esterilizó mediante
tratamiento térmico en estufa durante 20 minutos a 80ºC,
comprobándose que en estas condiciones no se produce crecimiento de
microorganismos cuándo el gel se trata con caldo LB durante 2 h, se
escurre y se deja incubar a 37ºC durante 24 h.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplos 3 a
6
Siguiendo un procedimiento análogo al descrito
en el Ejemplo 2 se prepararon geles de poliacrilamida que contenían
diferentes cantidades del derivado de la invención preparado en el
Ejemplo 1.
En la Tabla IV se muestran las cantidades de
derivado preparado en el Ejemplo 1 que se incluyó en los diferentes
geles de poliacrilamida:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Para preparar dichos geles se emplearon 3,42 ml
de la solución madre de acrilamida preparada en el Ejemplo 2, que
corresponden a 995,1 mg de acrilamida, y 30,8 mg de
N,N'-metilen-bis-acrilamida.
También se preparó un gel de acrilamida exento
de propiedades antimicrobianas siguiendo un procedimiento análogo,
pero sin la adición del derivado del péptido lineal preparado en el
Ejemplo 1.
\vskip1.000000\baselineskip
El efecto antimicrobiano del polímero preparado
en el Ejemplo 2, gel de acrilamida, se determinó frente a una cepa
de E. coli, en comparación con un gel de acrilamida
preparado sin adición de un derivado de la invención.
Las bacterias se conservaron a una temperatura
de -80ºC en caldo LB complementado con glicerina al 20% en
volumen/volumen.
Se cortaron piezas de los geles de acrilamida de
13 mm de diámetro y 4 mm de altura, correspondientes a 0,53
cm^{3}, y se esterilizaron por tratamiento a 80ºC durante 20
minutos.
Se colocaron las piezas en un caldo de cultivo
LB durante 2 horas. Transcurrido dicho período de tiempo se sacaron
las piezas de gel de acrilamida del caldo de cultivo, retirando el
exceso de líquido, y se inocularon con 20 \mul de una suspensión
de E. coli con 10^{6} UFC/ml.
A continuación dichas piezas de gel se incubaron
durante 24 h a 37ºC.
Tras la incubación, las piezas de gel se
homogeneizaron con un homogeneizador (Masticator) en 20 ml de
peptona tamponada (2,72 g de fosfato monopotásico, 7,10 g de
fosfato monosódico, 1 g de peptona bacteriológica pH 6,2\pm0,2,
disueltos en agua hasta el volumen de 1 l).
Se hicieron diluciones con cada una de las
muestras con un factor de 10, 100 y 1000, y se sembraron 40 \mul
de cada una de ellas en una placa Petri con agar nutritivo.
Se incubaron las placas durante 24 h a 37ºC, se
contaron las colonias formadas en cada una de ellas y se calculó el
número de unidades formadoras de colonias por ml (UCF/ml). El gel
de poliacrilamida que contenía el derivado del péptido lineal del
Ejemplo 1 presentó un factor de reducción logarítmica de 4 en los
niveles de E. coli, con respecto al gel de poliacrilamida que
no contenía dicho derivado.
Se puede observar que el gel de acrilamida que
contiene el derivado del péptido de la invención presenta
propiedades antimicrobianas.
\vskip1.000000\baselineskip
En este caso, los dos geles de poliacrilamida se
sumergieron en recipientes separados que contenían una solución de
caldo LB que tenía una concentración de E. coli de 10^{5}
UFC/ml.
El control positivo estaba formado únicamente
por la solución de bacterias y no contenía ningún gel
sumergido.
A continuación se extrajeron muestras de 40
\mul de la suspensión bacteriana del control positivo y del gel
de poliacrilamida sin derivado de la invención, y 50 \mul de la
suspensión bacteriana del gel de poliacrilamida a tiempo 0, y a los
10, 30, 60, 120 y 240 minutos. Cada una de las muestras se diluyó
con un factor 1, 10, 100 y 1000.
Se sembraron 40 \mul de cada una de las
diluciones en una placa de agar y se incubaron durante 24 horas a
37ºC.
Finalmente se contaron las colonias y se
calcularon las UFC por ml (UFC/ml).
\newpage
En la Tabla V se presentan las UFC/ml obtenidas
en función del tiempo para el control, para el gel de
poliacrilamida que contenía en su estructura un derivado de los
péptidos lineales de la invención y para el gel de poliacrilamida
que no contenía dicho derivado:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
En la Figura 1 se representan los resultados y
se puede observar que a los 240 minutos la solución que contenía el
gel de poliacrilamida con el derivado de la invención presentó un
factor de reducción logarítmica de 4 en el crecimiento de las
colonias de E. coli, con respecto al gel de poliacrilamida
que no contenía dicho derivado.
\vskip1.000000\baselineskip
En este ensayo se determinó la actividad
antimicrobiana de un gel de acrilamida que contenía diferentes
cantidades de derivado de la invención.
Se preparó una suspensión de células de E.
coli en agua y se diluyó hasta obtener una concentración de
10^{6} UFC/ml.
Se tomaron 150 \mul de dicha suspensión y se
diluyeron con 1350 de caldo de cultivo LB.
Se sumergieron piezas de los geles de
poliacrilamida preparados en los Ejemplos 2 a 6, y del gel que no
contenía el derivado de la invención en recipientes que contenían
la suspensión de bacterias. Las piezas tenían forma de disco con un
diámetro de 1 cm y 0,2 cm de altura.
El control positivo estaba constituido por una
suspensión de bacterias en el caldo de cultivo LB.
A continuación se extrajeron muestras de 50
\mul de la suspensión bacteriana del control positivo y del gel
de poliacrilamida sin derivado de la invención, y del gel de
poliacrilamida a tiempo 0, y a los 10, 30, 60, 120, 180, 240
minutos, y también a las 24 y 48 horas. Cada una de las muestras se
diluyó en un factor 1, 10, 100, 1000, y 10000. Las muestras
correspondientes a las 24 h y 48 se diluyeron en un factor
10^{6}.
Se sembraron por triplicado 50 \mul de cada
una de las diluciones en una placa de agar nutritivo y se incubaron
durante 24 horas a 37ºC.
Finalmente se contaron las colonias y se
calcularon las UFC por ml (UFC/ml).
\newpage
En la Tabla VI se presentan el número de
bacterias supervivientes expresadas como Log_{10} UFC/ml, en
función del tiempo expresado en minutos para cada una de las
concentraciones en % en peso del derivado del Ejemplo 1 en el gel
de poliacrilamida:
En la Figura 2 se representan gráficamente estos
resultados y se puede observar que el efecto antimicrobiano aumenta
a medida que se incrementa la cantidad de péptido antimicrobiano
que forma parte del gel de poliacrilamida, detectándose actividad
ya a los 30 minutos, y obteniéndose reducciones de hasta casi 10000
veces en la concentración de bacterias viables (4 reducciones
logarítmicas) a las 3 horas de incubación.
En la Tabla VII se presentan resultados del
mismo ensayo para evaluar la actividad antimicrobiana a largo plazo
(48 horas). En concreto se muestra el número de bacterias
supervivientes expresadas como Log_{10} UFC/ml, en función del
tiempo expresado en horas y en función del contenido en % en peso
del derivado del Ejemplo 1 en el gel de poliacrilamida:
\newpage
En las Figura 3 se representan gráficamente
dichos resultados y se puede apreciar como el efecto antimicrobiano
de los geles de poliacrilamida con el péptido antimicrobiano se
mantiene durante largos periodos de tiempo (hasta 48 horas en el
ejemplo) con una reducción de hasta 8 unidades logarítmicas en
relación con los controles, en los que se produce un crecimiento de
4 unidades logarítmicas respecto al tiempo inicial.
De los resultados se puede extraer que los
polímeros que contienen un 0,5% o más de derivado de la invención,
inhiben el crecimiento de las bacterias a corto plazo (180 minutos)
tal como se puede observar en la Figura 2, y a largo plazo (48 h)
tal como se puede observar en la Figura 3.
A partir de los resultados obtenidos se calculó
el tiempo de reducción decimal D y la velocidad de inactivación
K_{d}, tal como se describe por ejemplo en el libro de G. Sykes,
Disinfection and sterilization, 2nd edition, Lippincott,
1965.
En la Tabla VIII se presenta dicha velocidad de
inactivación expresada en min^{-1} en función del contenido del
derivado de la invención preparado en el Ejemplo 1 expresada en %
en peso sobre la cantidad total de monómeros en el gel de
acrilamida:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
En la Figura 4 se representa gráficamente la
velocidad de inactivación en función del contenido en peso. Se
puede observar que existe claramente una relación
dosis-efecto y se aprecia una cinética de
saturación, con valores óptimos por encima de 0,5%.
Se puede observar también que se produce un
aumento considerable en la velocidad de inactivación al pasar del
contenido del 0,1% en peso al contenido del 0,5% en peso de
derivado de la invención.
\vskip1.000000\baselineskip
En estos ensayos se determinó la estabilidad
frente a la degradación por proteasas de los péptidos, que sirven
de base para preparar los derivados de la invención.
Dicha estabilidad se determinó mediante un
ensayo de digestión del péptido por Proteinasa K
(Sigma-Aldrich Corporation, Madrid, España).
Se empleó una disolución de 50 \mug/ml de
péptido y de 1 \mug/ml de Proteinasa K en tampón TRIS 100 mM a pH
7,6, a temperatura ambiente.
El progreso de la escisión del péptido se
determinó cromatográficamente a tiempos comprendidos entre 5 y 45
minutos. Para ello se empleó una columna C_{18} de fase reversa
(Kromasil, 4,6 x 40 mm; 3,5 \mum de tamaño de partícula), y
gradientes lineales de TFA acuoso al 0,1% y TFA en acetonitrilo al
0,1% desde 0,98:0,02 a 0:1 durante 7 min realizando la detección
mediante absorbancia en el ultravioleta a 220 nm.
\newpage
En la Tabla V se presentan los resultados de
estabilidad a la degradación por proteasas, expresada como el
porcentaje de degradación de cada péptido a los 45 minutos. Los
péptidos de la Tabla IX se identifican con los parámetros X_{1},
X_{2}, y X_{3} que figuran en la fórmula general (I):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Se puede observar que los péptidos de la Tabla
IX tienen un átomo de hidrógeno en el extremo
N-terminal en lugar de un grupo polimerizable. Esto
es así porque dichos péptidos son los péptidos que sirven de base
para preparar los derivados de la invención de acuerdo con el
procedimiento descrito en el Ejemplo 1.
\vskip1.000000\baselineskip
- \bullet
- Artificial sequence: Secuencia artificial
- \bullet
- Derivatives Antimicrobial linear peptides: Derivados de péptidos lineales antimicrobianos
- \bullet
- PatentIn version 3.3: PatentIn versión 3.3
- \bullet
- PEPTIDE: Péptido
- \bullet
- SEQUENCE LISTING: Listado de secuencias
- \bullet
- Synthetic peptide: Péptido sintético
- \bullet
- University of Girona: Universidad de Girona
\global\parskip0.000000\baselineskip
<110> University of Girona
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> Derivatives Antimicrobial linear
peptides
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> - - -
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 25
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn version 3.3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial sequence
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Synthetic peptide
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> PEPTIDE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(11)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial sequence
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Synthetic peptide
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> PEPTIDE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(11)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRI
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial sequence
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Synthetic peptide
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> PEPTIDE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(11)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial sequence
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Synthetic peptide
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> PEPTIDE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(11)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial sequence
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Synthetic peptide
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> PEPTIDE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(11)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial sequence
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Synthetic peptide
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> PEPTIDE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(11)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial sequence
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Synthetic peptide
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> PEPTIDE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(11)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial sequence
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Synthetic peptide
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> PEPTIDE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(11)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 8
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial sequence
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Synthetic peptide
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> PEPTIDE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(11)
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 9
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial sequence
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Synthetic peptide
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> PEPTIDE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(11)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 10
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial sequence
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Synthetic peptide
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> PEPTIDE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(11)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 11
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial sequence
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Synthetic peptide
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> PEPTIDE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(11)
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 12
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRI
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial sequence
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Synthetic peptide
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> PEPTIDE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(11)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 13
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRI
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial sequence
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Synthetic peptide
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> PEPTIDE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(11)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 14
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial sequence
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Synthetic peptide
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> PEPTIDE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(11)
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 15
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 16
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial sequence
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Synthetic peptide
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> PEPTIDE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(11)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 16
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 17
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial sequence
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Synthetic peptide
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> PEPTIDE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(11)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 17
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial sequence
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Synthetic peptide
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> PEPTIDE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(11)
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 18
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial sequence
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Synthetic peptide
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> PEPTIDE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(11)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 19
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial sequence
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Synthetic peptide
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> PEPTIDE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(11)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 20
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial sequence
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Synthetic peptide
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> PEPTIDE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(11)
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 21
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial sequence
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Synthetic peptide
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> PEPTIDE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(11)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 22
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial sequence
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Synthetic peptide
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> PEPTIDE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(11)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 23
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRI
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial sequence
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Synthetic peptide
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> PEPTIDE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(11)
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 24
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial sequence
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Synthetic peptide
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> PEPTIDE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(11)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 25
\hskip1cm
Claims (8)
1. Derivados de péptidos lineales
antimicrobianos caracterizados porque responden a la fórmula
general (I):
(I)X_{1}-X_{2}-Lys-Leu-Phe-Lys-Lys-Ile-Leu-Lys-X_{3}-Leu-NH_{2}
en
donde
X_{1} es el grupo
X_{2} es Lys, Tyr, Leu, Phe, o Trp,
X_{3} es Lys, Tyr, Val, Phe, o Trp,
R^{1} es hidrógeno, o un grupo alquilo
C_{1}-C_{4},
R^{2} es hidrógeno o metilo,
n es 0, 1, 2, 3 o 4, y
en donde los residuos de aminoácidos son de la
serie L o D.
\vskip1.000000\baselineskip
2. Derivados según la reivindicación 1,
caracterizados porque los residuos de aminoácidos son de la
serie L.
3. Derivados según las reivindicaciones 1 ó 2,
caracterizados porque el grupo polimerizable X_{1} se
selecciona entre el grupo formado por acriloilo, metacriloilo,
crotonoilo, 3-butenoilo,
4-pentenoilo, 3-pentenoilo,
5-hexenoilo, o 6-heptenoilo.
4. Derivados según la reivindicación 3,
caracterizados porque el grupo polimerizable X_{1} es
acriloilo.
5. Derivado según la reivindicación 4,
caracterizado porque el péptido está definido por la
secuencia SEQ_ID_NO: 6, tiene el aminoácido del extremo
N-terminal funcionalizado con el grupo acriloilo, y
el aminoácido del extremo C-terminal en forma de
grupo carboxamida.
6. Utilización de los derivados de péptidos
lineales según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 para la
preparación de polímeros con propiedades
anti-microbianas.
7. Procedimiento para preparar un polímero con
propiedades antimicrobianas caracterizado porque comprende
la polimerización de:
- 1)
- un monómero seleccionado entre los derivados de péptidos lineales según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 o mezclas de los mismos,
- 2)
- un monómero seleccionado entre el grupo formado por ácido acrílico, sus esteres y amidas; ácido metacrílico sus esteres y amidas; estireno; y/o mezclas de los mismos, y eventualmente
- 3)
- un monómero reticulante.
8. Polímero obtenible por el procedimiento de la
reivindicación 7.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200930305A ES2333511B1 (es) | 2009-06-15 | 2009-06-15 | Derivados polimerizables de peptidos lineales antimicrobianos. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200930305A ES2333511B1 (es) | 2009-06-15 | 2009-06-15 | Derivados polimerizables de peptidos lineales antimicrobianos. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2333511A1 ES2333511A1 (es) | 2010-02-22 |
| ES2333511B1 true ES2333511B1 (es) | 2011-01-24 |
Family
ID=41663092
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES200930305A Active ES2333511B1 (es) | 2009-06-15 | 2009-06-15 | Derivados polimerizables de peptidos lineales antimicrobianos. |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| ES (1) | ES2333511B1 (es) |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001513120A (ja) * | 1997-02-11 | 2001-08-28 | ザ カウンシル オブ ザ クイーンズランド インスティチュート オブ メディカル リサーチ | ペプチドを含むポリマー |
| US7282214B2 (en) * | 2002-12-19 | 2007-10-16 | Johnson & Johnson Vision Care, Inc. | Biomedical devices with antimicrobial coatings |
| ES2262448B1 (es) * | 2006-04-28 | 2007-11-01 | Universitat De Girona | Peptidos lineales antimicrobianos. |
-
2009
- 2009-06-15 ES ES200930305A patent/ES2333511B1/es active Active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| BADOSA, E., FERRE, R., PLANAS, M. et al. A library of linear undecapeptides with bactericidal activity against phytopathogenic bacteria. Peptides. Noviembre 2007, Vol. 28, N$^{o}$ 12, páginas 2276-2285. ISSN 0196-9781. <DOI:10.1016/j.peptides.2007.09.010> * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES2333511A1 (es) | 2010-02-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Yan et al. | Advances of peptides for antibacterial applications | |
| US5847047A (en) | Antimicrobial composition of a polymer and a peptide forming amphiphilic helices of the magainin-type | |
| ES2753886T3 (es) | Tratamiento de biopelículas | |
| WO2011070573A1 (en) | Antimicrobial water treatment membranes and production thereof | |
| JP2009526862A (ja) | 非滲出性抗菌ペプチドを含む医療デバイスおよびコーティング | |
| Mukherjee et al. | Leucine-based polymer architecture-induced antimicrobial properties and bacterial cell morphology switching | |
| JP6553706B2 (ja) | 抗微生物ペプチドデンドリマー | |
| JP2003321500A (ja) | 新規なポリペプチドおよびその製造方法 | |
| Yu et al. | Rapid assembly of infection-resistant coatings: Screening and identification of antimicrobial peptides works in cooperation with an antifouling background | |
| Camó et al. | Antimicrobial peptide KSL-W and analogues: Promising agents to control plant diseases | |
| ES2728408T3 (es) | Sistema de protección vegetal y/o promoción del crecimiento vegetal | |
| WO2012118780A2 (en) | Preparation of peptide mixtures by protease catalysis designed to provide useful biological and physical properties | |
| ES2333511B1 (es) | Derivados polimerizables de peptidos lineales antimicrobianos. | |
| US8026219B2 (en) | Antimicrobial linear peptides | |
| CN110028557B (zh) | 一种Ce6标记的双链抗菌肽及其合成方法和应用 | |
| Bang et al. | A novel Trp-rich model antimicrobial peptoid with increased protease stability | |
| JP3862361B2 (ja) | 医療用手当材およびそれに用いる新規なペプチド | |
| KR101062793B1 (ko) | 적조유발 생물에 항조류 활성을 가지는 적조 방제용 펩타이드, 그의 용도 및 이의 제조 방법 | |
| KR20120021827A (ko) | 항적조 활성을 가지는 ｈｐａ３ｎｔ３ 펩타이드 및 그의 용도 | |
| JP2006272002A (ja) | 医療用手当材 | |
| US20220047770A1 (en) | Antimicrobial biopolymer compositions, methods of synthesis, and applications of use | |
| Offei | Synthesis of Flagellin 22 as a Probe for Plant Signaling and Molecular Trafficking Towards Improved Crops | |
| Cleophas | Immobilization of stabilized antimicrobial peptides into a bactericidal hydrogel coating | |
| EP4053144A2 (en) | Peptides with plant protection action | |
| Sharma et al. | Synthesis Characterization and Antibacterial Evaluation of Peptides and their Poly-N-Substituted Glycine Congeners |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EC2A | Search report published |
Date of ref document: 20100222 Kind code of ref document: A1 |
|
| FG2A | Definitive protection |
Ref document number: 2333511 Country of ref document: ES Kind code of ref document: B1 Effective date: 20110112 |