ES2312983T3 - Conjugados radiomarcados basados en sustancia p y sus usos. - Google Patents

Conjugados radiomarcados basados en sustancia p y sus usos. Download PDF

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Adrian Merlo
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Abstract

Un conjugado de un análogo de la sustancia P y una molécula queladora, en el que el conjugado de la sustancia P tiene la abreviatura Quelador-R-Arg 1 -Pro 2 -Lys 3 -Pro 4 -Gln 5 -Gln 6 -Phe 7 -Phe 8 -Gly 9 -Leu 10 -Met 11 -NH2 y comprende los compuestos de fórmula I (Ver fórmula) en la que R es -CH2-C(O)-, -C(CO2H)CH2CH2-C(O)- o -C(CO2H)CH2-C(O)-, se modifica mediante la modificación a) subsiguiente en la secuencia de aminoácidos de la sustancia P: a) sustitución de Met 11 por -NH-CH(CH2CH2-SO2-CH3)-C(O)-(Met(O2)11 ), -NH-CH(CH2CH2-SO-CH3)-C (O)-(Met(O)11 ), o -NH-CH[CH(CH2)CH2CH3)-C(O)-(Ile 11 ), y opcionalmente al menos una de las modificaciones b) a g) subsiguientes: b) sustitución de Leu 10 por -NH-CH[CH(CH2)CH2CH3)-C(O)-(Ile 10 ), c) sustitución de Gly 9 por -N(CH3)-CH2-C(O)-(Sar 9 ), d) sustitución de Phe 7 o Phe 8 o tanto Phe 7 como Phe 8 por un residuo de las fórmulas (Ver fórmulas) e) sustitución de Lys 3 por un residuo de las fórmulas (Ver fórmulas) f) truncamiento de 1 a 5 aminoácidos de la secuencia Arg 1 -Pro 2 -Lys 3 -Pro 4 -Gln 6 , o g) sustitución de 1 a 5 aminoácidos de la secuencia Arg 1 -Pro 2 -Lys 3 -Pro 4 -Gln 5 por -N(CH3)-CH2-C(O)-(Sar), y en el que los conjugados están sin marcar o marcados con un radionucleido seleccionado del grupo que consiste en Actinio-225, Bismuto-212, Bismuto-213, Plomo-203, Cobre-64, Cobre-67, Galio-66, Galio-67, Galio-68, Lutecio-177, Indio-111, Indio-113, Itrio-86 e Itrio-90, Disprosio-162, Disprosio-165, Disprosio-167, Holmio-166, Praseodi-mio- 142, Praseodimio-143, Prometio-149 y Terbio-149.

Description

Conjugados radiomarcados basados en sustancia P y sus usos.
La presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéutico y una cantidad eficaz de un conjugado de un análogo de la sustancia P con 1-(1,3-carboxipropil)-4,7,10-(carboximetil)-1,4,7,10-tetraazaciclododecano (quelador DOTAGA), 1-(1,2-carboxietil)-4,7,10-(carboximetil)-1,4,7,10-tetraazaciclododecano (quelador DOTASA) o ácido 1,4,7,10-tetraazaciclo-dodecan-1,4,7,10-tetraacético (quelador DOTA), que están marcados con radionucleidos adecuados; su uso para la selección como objetivo y para el tratamiento de tumores cerebrales, o el uso de los conjugados de la sustancia P marcados correspondientes para la selección como objetivo y el tratamiento de tumores cerebrales; los conjugados de análogos de la sustancia P con DOTAGA, DOTASA o DOTA, que están marcados con radionucleidos adecuados; y los conjugados de análogos de la sustancia P con DOTAGA, DOTASA o DOTA y sus ésteres de t-butilo.
La sustancia P es un neuropéptido de 11 aminoácidos que se da de forma natural, y pertenece a la familia de neuropéptidos bioactivos conocidos como taquicininas [Payan (1989) Ann. Rev. Med. 40, 341]. La secuencia de aminoácidos de este undecapéptido se identificó como H-Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}-Gln^{6}-Phe^{7}-Phe^{8}-Gly^{9}-Leu^{10}-Met^{11}-NH_{2}. En el documento WO 92/18536 se describe un método para detectar y localizar tejidos que tienen receptores de neurocinina 1 (NK1), tales como tumores con receptores NK1 en el organismo de un ser vivo de sangre caliente, mediante la administración de una composición que comprende un péptido corto marcado, p. ej. sustancia P y los derivados análogos que tienen una afinidad selectiva hacia los receptores de neurocinina 1, y ensayarlos en ese ser vivo. Además, la invención se refiere a un método para el tratamiento terapéutico de tumores malignos, p. ej. glioma, cáncer de pulmón de células pequeñas y otros.
J. Fichna et al. resumen en Bioconjugate Chem. 2003, páginas 3 a 17, la síntesis de péptidos radiomarcados específicos del objetivo para el diagnóstico por la imagen y las posibilidades para su aplicación como productos radiofarmacéuticos. Se mencionan diversos péptidos y conjugados con diversas moléculas quelantes, pero no se describe la combinación de la sustancia P y de sus análogos con DOTA o DOTAGA, y no hay ninguna indicación sobre el tratamiento de tumores cerebrales con estos conjugados radiomarcados.
El proquelador (éster) y el quelador (ácido) DOTA, ácido 1,4,7,10-tetraazaciclo-dodecan-1,4,7-tris(éster t-butílico de ácido acético)-10-acético se describe en Chem. Eur. J. 1999, 5, nº 7, páginas 1974-1981.
Los estudios satisfactorios sobre la selección como objetivo locorregional de receptores de péptidos reguladores con un análogo de somatostatina difundible DOTA^{0}-D-Phe^{1}-Tyr^{3}-octreótido (DOTATOC) marcado con ^{111}In/^{90}Y, un conjugado basado en somatostatina radiomarcado, demostraron por primera vez in vivo en pacientes de tumores cerebrales humanos que DOTATOC tiene una unión de afinidad elevada a SSTR-2 (receptor de somatostatina del subtipo 2) en el intervalo nanomolar bajo, lo cual fue informado por A. Merlo et al. (1999) en Clin. Cancer Res. 5, 1025-1033. Además, S. Hofer et al. informan en Swiss Med. Weekly 2001, 131: 640-644 del efecto de la braquiterapia difundible (dBT) mediante el uso del radioconjugado estable inyectado localmente DOTA^{0}-D-Phe^{1}-Tyr^{3}-octreótido (DOTATOC) marcado con ^{90}Y para tratar gliomas de bajo grado sintomáticos.
El documento EP-A-1 283 216 se refiere a análogos de somatostatina que comprenden entre otras alternativas un quelador basado en DOTA, y el uso de los análogos de somatostatina en el tratamiento de enfermedades caracterizadas por una sobreexpresión de los receptores de somatostatina. Además, M. Laznicek et al. han informado en Cancer Biotherapy and Radiopharmaceuticals, vol. 17, nº 5, 2002, 527-533 de los perfiles de distribución y las rutas de eliminación de los derivados de octreotato radiomarcados con itrio.
El documento WO 01/02 021 se refiere a un análogo del péptido taquicinina radiomarcado y a su uso en la formación de imágenes de los receptores del péptido taquicinina in vivo en mamíferos.
En el documento WO 02/24235 se describe la preparación de 1-(1-carboxi-3-carbo-tert-butoxipropil)-4,7,10-(carbo-tert-butoxi-metil)-1,4,7,10-tetraazaciclododecano (proquelador DOTAGA), que se usa para preparar conjugados de moléculas efectoras y 1-(1,3-carboxi-propil)-4,7,10-(carboxi-metil)-1,4,7,10-tetraazaciclododecano (quelador DOTAGA). Como moléculas efectoras se proponen los péptidos tales como octreótido o CCK, que se acoplan al extremo N-terminal de estos péptidos bioactivos. También se han mencionado los conjugados con la sustancia P, pero no se han preparado y por lo tanto no se han ejemplificado. Dichos conjugados se pueden marcar con radionucleidos tanto para aplicaciones diagnósticas (^{111}In, ^{67/68}Ga) como para aplicaciones radioterápicas internas (^{90}Y, ^{177}Lu). La publicación se centra en los conjugados de octreótido y octreotato tales como DOTATOC, que proporcionan un mejor rendimiento de marcaje y una estabilidad elevada. No se menciona el tratamiento de tumores cerebrales, p. ej. gliomas.
Se descubrió sorprendentemente que el receptor NK-1 se expresa en tumores cerebrales y se puede aplicar para la unión de conjugados radiomarcados basados en la sustancia P y sus análogos con los queladores DOTAGA, DOTASA o DOTA, y dichos conjugados son mucho más eficaces que DOTATOC, sustancia P radiomarcada, sustancia P y análogos, y saporina, y otros péptidos pequeños radiomarcados con o sin agente quelante en la selección como objetivo y el tratamiento de tumores, especialmente tumores cerebrales, p. ej. gliomas. También se descubrió sorprendentemente que la formación del complejo metálico se consigue en poco tiempo y que los complejos poseen una estabilidad química mayor, por lo que se evita la contaminación del tejido o de los líquidos corporales con radionucleidos libres. Los conjugados radiomarcados basados en la sustancia P muestran una semivida inesperadamente elevada en el suero, que es suficiente para la aplicación como agentes internos de radiodiagnóstico y radioterapia. La estabilidad en el suero de los conjugados basados en los análogos de la sustancia P incluso se incrementa sin disminuir la afinidad de unión al receptor NK1 en un grado indeseable. En algunos casos la afinidad de unión incluso mejora cuando se usan los análogos de la sustancia P. También se descubrió que la metionina en la posición 11 es sensible a la oxidación (radiolisis) tras el marcaje (se forma un sulfóxido), y que dicha oxidación se puede inhibir al sustituir la metionina por metionina-sulfona, por lo cual la afinidad de unión se puede mantener sustancialmente o incluso mejorarse con otras sustituciones de aminoácidos en la secuencia de la sustancia P. También se descubrió sorprendentemente que los conjugados radiomarcados basados en la sustancia P son capaces de difundir tras la administración e infiltrar los nidos de células tumorales o las lesiones satélites, de forma que se pueden detectar y tratar.
Un primer objetivo de la invención es un conjugado de la sustancia P y de una molécula queladora marcada con un radionucleido, que tiene la abreviatura Quelador-R-Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}-Gln^{6}-Phe^{7}-Phe^{8}-Gly^{9}-Leu^{10}-Met^{11}-NH_{2} y que comprende los compuestos de fórmula I
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1 
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en la que
R es -CH_{2}-C(O)-, -C(CO_{2}H)CH_{2}CH_{2}-C(O)- o -C(CO_{2}H)CH_{2}-C(O)-, modificada mediante la modificación a) subsiguiente en la secuencia de aminoácidos de la sustancia P:
a)
sustitución de Met^{11} por -NH-CH(CH_{2}CH_{2}-SO_{2}-CH_{3})-C(O)-(Met(O_{2})^{11}), -NH-CH(CH_{2}CH_{2}-SO-CH_{3})-C(O)-(Met(O)^{11}), o -NH-CH[CH(CH_{3})CH_{2}CH_{3})-C(O)-(Ile^{11}), y opcionalmente al menos una de las modificaciones b) a g) subsiguientes:
b)
sustitución de Leu^{10} por -NH-CH[CH(CH_{3})CH_{2}CH_{3})-C(O)-(Ile^{10}),
c)
sustitución de Gly^{9} por -N(CH_{3})-CH_{2}C(O)-(Sar^{9}),
d)
sustitución de Phe^{7} o Phe^{8} o tanto Phe^{7} como Phe^{8} por un residuo de las fórmulas
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2 
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3 
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4 
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e)
sustitución de Lys^{3} por un residuo de las fórmulas
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5 
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f)
truncamiento de 1 a 5 aminoácidos de la secuencia Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}, o
g)
sustitución de 1 a 5 aminoácidos de la secuencia Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5} por -N(CH_{3})-CH_{2}-C(O)-(Sar),
y en el que el conjugado está marcado con un radionucleido seleccionado del grupo que consiste en Actinio-225, Bismuto-212, Bismuto-213, Plomo-203, Cobre-64, Cobre-67, Galio-66, Galio-67, Galio-68, Lutecio-177, Indio-111, Indio-113, Itrio-86 e Itrio-90, Disprosio-162, Disprosio-165, Disprosio-167, Holmio-166, Praseodimio-142, Praseodimio-143, Prometio-149, y Terbio-149, y su uso como ingrediente activo en formulaciones radio-farmacéuticas o radio-diagnósticas para seleccionar como objetivo o tratar tumores cerebrales, especialmente gliomas.
Cuando el R de la fórmula I unido al residuo tetraazamacrocíclico es -CH_{2}-C(O)-, se abrevia como el quelador DOTA; cuando el R de la fórmula I unido al residuo tetraazamacrocíclico es -C(CO_{2}H)CH_{2}CH_{2}-C(O)-, se abrevia como el quelador DOTAGA; y cuando el R de la fórmula I unido al residuo tetraazamacrocíclico es -C(CO_{2}H)CH_{2}-C(O)-, se abrevia como el quelador DOTASA. Cuando los grupos carboxílicos de los restos queladores están esterificados, por ejemplo con t-butanol, los residuos se denominan proquelador. Los proqueladores se pueden usar para el acoplamiento adecuado a los péptidos durante la síntesis en fase sólida.
El marcaje en el contexto de esta invención significa la unión del radionucleido a los grupos carboxílicos y a los átomos de nitrógeno del residuo quelador, por lo cual los aniones de las sales de los radionucleidos se sustituyen de acuerdo con la valencia del ión metálico, que son sustancialmente iones de metal(III) o metal(II).
Las abreviaturas usadas para modificar los aminoácidos se explican a continuación: Met(O) es metionina-sulfóxido; Met(O_{2}) es metionina-sulfona; Ile es isoleucina; Sar es sarcosina; 2-Thi es 3-(2-tienil)-alanina; 3-BzThi es 3-(3-benzotienil)-alanina; 2-Nal es 3-(2-naftil)-alanina; 1-Nal es 3-(1-naftil)-alanina; Cha es ciclohexil-alanina; Arg es arginina; Orn es ornitina; y Phegly es fenilglicina.
En una realización preferida de la invención, el residuo R de la fórmula I significa -CH_{2}-C(O)-. En una realización más preferida, la secuencia de aminoácidos de la fórmula I corresponde a las fórmulas
a)
Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met(O_{2})-NH_{2},
b)
Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Sar-Leu-Met(O_{2})-NH_{2},
c)
Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Thi-Gly-Leu-Met(O_{2})-NH_{2},
d)
Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Thi-Phe-Gly-Leu-Met(O_{2})-NH_{2},
e)
Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Thi-Sar-Leu-Met(O_{2})-NH_{2},
f)
Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Thi-Phe-Sar-Leu-Met(O_{2})-NH_{2},
g)
Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Thi-Thi-Sar-Leu-Met(O_{2})-NH_{2},
h)
Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Thi-Thi-Gly-Leu-Met(O_{2})-NH_{2}.
En otra realización preferida, los compuestos de fórmula I comprenden en la posición 11 de la secuencia natural de la sustancia P un residuo de metionina-sulfona de fórmula -NH-CH(CH_{2}CH_{2}-SO_{2}-CH_{3})-C(O)- en lugar de un residuo de metionina. Se descubrió que el residuo de metionina tiene tendencia a la oxidación/se oxida fácilmente al aire, y especialmente durante el proceso de marcaje con los radionucleidos, lo que conduce a productos finales desiguales. La desigualdad se puede evitar mediante el uso de metionina-sulfona en vez de metionina.
Otro conjugado preferido de análogo de la sustancia P de fórmula I es uno en el que el residuo de glicina de la posición 9 de la secuencia natural de la sustancia P se sustituye por un residuo de sarcosina de fórmula -N(CH_{3})-CH_{2}-C(O)-.
Otro conjugado preferido de análogo de la sustancia P de fórmula I es uno en el que el residuo de fenilalanina de la posición 7 u 8 o de ambas posiciones de la secuencia natural de la sustancia P se sustituye por un residuo de 3-(2-tienil)-alanina de fórmula
8
Otro conjugado preferido de análogo de la sustancia P de fórmula I es uno en el que el residuo de fenilalanina de la posición 8 de la secuencia natural de la sustancia P se sustituye por una 3-(2-tienil)-alanina, y el residuo de glicina de la posición 9 se sustituye por un residuo de sarcosina.
Otro conjugado preferido de análogo de la sustancia P de fórmula I es uno en el que el residuo de metionina de la posición 11 de la secuencia natural de la sustancia P se sustituye por un residuo de metionina-sulfona, y el residuo de fenilalanina de la posición 8 de la secuencia natural de la sustancia P se sustituye por un residuo de 3-(2-tienil)-alanina, o el residuo de glicina de la posición 9 se sustituye por un residuo de sarcosina.
Los conjugados de análogos de la sustancia P de fórmula I, que están modificados en la posición 8 como se describió anteriormente, muestran una estabilidad en el suero muy superior o una sensibilidad inferior a las peptidasas, respectivamente. Los conjugados de análogos de la sustancia P de fórmula I, que están modificados en las posiciones 7, 8, 9 y/o 11 como se describió anteriormente, demuestran también que poseen una afinidad de unión elevada hacia el receptor NK-1 en comparación con la sustancia P natural, tal como se puede detectar con una autorradiografía al medir los valores de CI_{50}, que pueden ser de 0,1 a 50, preferiblemente de 0,5 a 20 y más preferiblemente de 0,7 a 10.
En una realización más preferida, la secuencia de aminoácidos de la fórmula I corresponde a las fórmulas
a)
Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met(O_{2})-NH_{2},
b)
Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Sar-Leu-Met(O_{2})-NH_{2},
c)
Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Thi-Gly-Leu-Met(O_{2})-NH_{2},
d)
Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Thi-Sar-Leu-Met(O_{2})-NH_{2}.
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En una realización particularmente preferida, la secuencia de aminoácidos de la fórmula I corresponde a las fórmulas
a)
Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Sar-Leu-Met(O_{2})-NH_{2}, o
b)
Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Thi-Gly-Leu-Met(O_{2})-NH_{2},
ya que estos compuestos muestran una oxidación y una estabilidad en el suero excepcionales, así como una afinidad de unión muy elevada, que es comparable o incluso mayor que la de la secuencia natural de la sustancia P.
Los conjugados de fórmula I y los radioconjugados preferidos mencionados anteriormente, que tienen los queladores DOTAGA, DOTASA o DOTA unidos al extremo aminoterminal, son útiles para las investigaciones de diagnóstico mediante el uso de gammagrafía con sustancia P o análogos marcados con Indio-111, o mediante el uso de tomografía de emisión de positrones con los marcadores Galio-68, Galio-66, Itrio-86 o Cobre-64. El vector peptídico de diagnóstico se puede aplicar de forma locoregional o sistémica.
Para el tratamiento terapéutico, los conjugados de fórmula I y los conjugados de análogos mencionados anteriormente con los queladores DOTAGA, DOTASA o DOTA se pueden marcar, por ejemplo, con isótopos emisores \alpha, p. ej. Bismuto-213, Actinio-225, y los emisores \beta Itrio-90 y Lutecio-177.
Otro aspecto de la invención proporciona una composición para seleccionar como objetivo tumores cerebrales, localizar o tratar tumores cerebrales y sus lesiones satélites en un hospedador que padece tumores cerebrales, p. ej. gliomas, que comprende al menos un compuesto de fórmula I. La composición es especialmente útil en la detección y el tratamiento terapéutico de tumores cerebrales y de sus lesiones satélites.
Un objetivo de la invención es también una composición terapéutica o diagnóstica para seleccionar como objetivo tumores cerebrales, localizar o tratar tumores cerebrales y sus lesiones satélites en un mamífero, que comprende administrar a un mamífero que necesita tal terapia una cantidad eficaz de un conjugado de la sustancia P marcado con un radionucleido de fórmula I.
Otro objetivo de la invención es una composición para administrar un conjugado de la sustancia P marcado con un radionucleido de fórmula I a un hospedador, que comprende administrar a un hospedador un conjugado de la sustancia P marcado con un radionucleido de fórmula I para diagnosticar o para tratar tumores cerebrales humanos.
Un objetivo adicional de la invención es el uso de un conjugado de la sustancia P marcado con un radionucleido de fórmula I para la fabricación de un medicamento útil para la detección y para el tratamiento terapéutico de tumores cerebrales y de sus lesiones satélites en un mamífero, tal como un humano; y un conjugado de la sustancia P marcado con un radionucleido de fórmula I para el uso en la terapia médica.
El objetivo de la invención son los conjugados de análogos de la sustancia P y de una molécula queladora, en los que el conjugado de la sustancia P tiene la abreviatura Quelador-R-Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}-Gln^{6}-Phe^{7}-Phe^{8}-Gly^{9}-Leu^{10}-Met^{11}-NH_{2} y comprende los compuestos de fórmula I
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en la que
R es -CH_{2}-C(O)-, -C(CO_{2}H)CH_{2}CH_{2}-C(O)- o -C(CO_{2}H)CH_{2}-C(O)-, se modifica mediante la modificación a) subsiguiente en la secuencia de aminoácidos de la sustancia P:
a)
sustitución de Met^{11} por -NH-CH(CH_{2}CH_{2}-SO_{2}CH_{3})-C(O)-(Met(O_{2})^{11}), -NH-CH(CH_{2}CH_{2}-SO-CH_{3})-C(O)-(Met(O)^{11}), o -NH-CH[CH(CH_{3})CH_{2}CH_{3})-C(O)-(Ile^{11}), y opcionalmente al menos una de las modificaciones b) a g) subsiguientes:
b)
sustitución de Leu^{10} por -NH-CH[CH(CH_{3})CH_{2}CH_{3})-C(O)-(Ile^{10}),
c)
sustitución de Gly^{9} por -N(CH_{3})-CH_{2}C(O)-(Sar^{9}),
d)
sustitución de Phe^{7} o Phe^{8} o tanto Phe^{7} como Phe^{8} por un residuo de las fórmulas
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e)
sustitución de Lys^{3} por un residuo de las fórmulas
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f)
truncamiento de 1 a 5 aminoácidos de la secuencia Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}, o
g)
sustitución de 1 a 5 aminoácidos de la secuencia Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5} por -N(CH_{3})-CH_{2}C(O)-(Sar),
y en el que los conjugados están sin marcar o marcados con un radionucleido seleccionado del grupo que consiste en Actinio-225, Bismuto-212, Bismuto-213, Plomo-203, Cobre-64, Cobre-67, Galio-66, Galio-67, Galio-68, Lutecio-177, Indio-111, Indio-113, Itrio-86 e Itrio-90, Disprosio-162, Disprosio-165, Disprosio-167, Holmio-166, Praseodimio-142, Praseodimio-143, Prometio-149 y Terbio-149; lo que incluye las realizaciones preferidas de los análogos como se mencionó anteriormente.
Aún un objetivo adicional de la invención es una composición que comprende (a) al menos un vehículo farmacéutico y (b) al menos un conjugado de un análogo de la sustancia P y de una molécula queladora, en la que el conjugado de la sustancia P tiene la abreviatura Quelador-R-Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}-Gln^{6}-Phe^{7}-Phe^{8}-Gly^{9}-Leu^{10}-Met^{11}-NH_{2} y comprende los compuestos de fórmula I
16
en la que
R es -CH_{2}-C(O)-, -C(CO_{2}H)CH_{2}CH_{2}-C(O)- o -C(CO_{2}H)CH_{2}C(O)-, se modifica mediante la modificación a) subsiguiente en la secuencia de aminoácidos de la sustancia P:
a)
sustitución de Met^{11} por -NH-CH(CH_{2}CH_{2}-SO_{2}-CH_{3})-C(O)-(Met(O_{2})^{11}), -NH-CH(CH_{2}CH_{2}-SO-CH_{3})-C(O)-(Met(O)^{11}), o -NH-CH[CH(CH_{3})CH_{2}CH_{3})-C(O)-(Ile^{11}), y opcionalmente al menos una de las modificaciones b) a g) subsiguientes:
b)
sustitución de Leu^{10} por -NH-CH[CH(CH_{3})CH_{2}CH_{3})-C(O)-(Ile^{10}),
c)
sustitución de Gly^{9} por -N(CH_{3})-CH_{2}C(O)-(Sar^{9}),
d)
sustitución de Phe^{7} o Phe^{8} o tanto Phe^{7} como Phe^{8} por un residuo de las fórmulas
17 
\vskip1.000000\baselineskip
18
19 
\vskip1.000000\baselineskip
e)
sustitución de Lys^{3} por un residuo de las fórmulas
20
f)
truncamiento de 1 a 5 aminoácidos de la secuencia Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}, o
g)
sustitución de 1 a 5 aminoácidos de la secuencia Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5} por -N(CH_{3})-CH_{2}-C(O)-(Sar),
y en el que los conjugados están marcados con un radionucleido seleccionado del grupo que consiste en Actinio-225, Bismuto-212, Bismuto-213, Plomo-203, Cobre-64, Cobre-67, Galio-66, Galio-67, Galio-68, Lutecio-177, Indio-111, Indio-113, Itrio-86 e Itrio-90, Disprosio-162, Disprosio-165, Disprosio-167, Holmio-166, Praseodimio-142, Praseodimio-143, Prometio-149, y Terbio-149; lo que incluye las realizaciones preferidas como se mencionó anteriormente.
La invención incluye las sales y los complejos farmacéuticamente aceptables de los conjugados marcados con radionucleidos de fórmula I, y de los conjugados sin marcar de fórmula I. Las sales se pueden formar a partir de ácidos orgánicos o inorgánicos. Los ejemplos de ácidos inorgánicos adecuados son ácido clorhídrico, ácido fluorhídrico, ácido bromhídrico, ácido yodhídrico, ácido sulfúrico y ácido bórico. Los ejemplos de ácidos orgánicos adecuados son ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido fórmico, ácido oxálico, ácido malónico, ácido succínico, ácido tartárico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido metanosulfónico, ácido trifluorometanosulfónico, ácido benzoico, ácido glicólico, ácido láctico, ácido cítrico y ácido mandélico. Las sales se pueden formar a partir de bases orgánicas o inorgánicas, tales como hidróxidos de metales alcalinos, e hidróxidos de amoníaco, hidroxietilamina, hidrazina, metilamina, etilamina, trimetilamina, trietilamina, etilendiamina, hidroxietilamina, morfolina, piperazina y guanidina.
Los conjugados marcados con radionucleidos se pueden usar en formulaciones farmacéuticas en forma de polvos (partículas micronizadas), gránulos, suspensiones o soluciones, o se pueden combinar junto con otros ingredientes farmacéuticamente aceptables mediante la mezcla de los componentes y opcionalmente la división fina de los mismos, y después mediante el relleno de cápsulas, compuestas por ejemplo de gelatina dura o blanda, la preparación de parches transdérmicos, la compresión en comprimidos, píldoras o trociscos, o la suspensión o la disolución de los mismos en vehículos para soluciones, suspensiones, elixires y jarabes. Se pueden aplicar revestimientos tras la compresión para formar píldoras.
Los ingredientes farmacéuticamente aceptables se conocen bien para los diversos tipos de formulaciones, y pueden ser, por ejemplo, aglutinantes tales como polímeros naturales o sintéticos, disolventes, excipientes, lubricantes, tensoactivos, agentes edulcorantes y aromatizantes, materiales de revestimiento, conservantes, colorantes, espesantes, adyuvantes, agentes antimicrobianos, estabilizantes, osmorreguladores, y otros vehículos para los diversos tipos de formulaciones.
Los conjugados de la sustancia P marcados con radionucleidos de fórmula I para la selección como objetivo y el tratamiento de tumores cerebrales se pueden administrar mediante todas las vías conocidas, y se pueden seleccionar del grupo que consiste en la vía intravenosa, la vía intraarterial, la vía intracutánea, la vía subcutánea, la vía oral, la vía bucal, la vía intramuscular, la vía anal, la vía transdérmica, la vía intradérmica, la vía intratecal y similares.
En una realización preferida, el vehículo farmacéutico es un líquido y la composición farmacéutica está en forma de una suspensión, emulsión y preferiblemente una solución.
Los ejemplos de vehículos líquidos son el agua, los alcoholes tales como etanol, glicerol, propilenglicol, polietilenglicoles líquidos, triacetina y aceites, que se pueden usar solos o en combinación de al menos dos componentes.
La cantidad de conjugado marcado con radionucleido en la formulación depende sustancialmente del tipo de formulación y de las dosis deseadas durante los periodos de tiempo de administración. La cantidad puede ser del 0,01 al 40 por ciento en peso, preferiblemente del 0,1 al 25 por ciento en peso, y más preferiblemente del 0,5 al 15 por ciento en peso, respecto de la composición farmacéutica.
Las composiciones farmacéuticas líquidas, que son soluciones o suspensiones estériles, se pueden usar para inyecciones intramusculares, intratecales, intratraqueales, epidurales, intraperitoneales y subcutáneas. Las soluciones estériles se pueden administrar también de forma intravenosa. Los conjugados se pueden preparar en forma de una composición sólida estéril que se puede disolver o suspender (difundir) en el momento de la administración mediante el uso de agua estéril, solución salina, u otro medio inyectable estéril apropiado.
Se prefiere particularmente la inyección local de los vectores peptídicos difundibles a usar según la invención para la aplicación locorregional. El compuesto radiofarmacéutico se inyecta en un catéter ventricular implantado de forma estereotáctica o en una cápsula a partir de la cual un catéter conduce al centro del tumor o a la cavidad de resección (también denominado dispositivo Port-a-Cath). Se pueden usar para este fin varias cápsulas y catéteres diferentes, disponibles comercialmente.
En las masas tumorales principales sin resecar, la punta del catéter tiene que centrarse en la parte media putativa del tumor, lo cual se puede conseguir normalmente mediante el uso de un sistema de planificación estereotáctico tridimensional. Es importante esperar al menos un día, preferiblemente varios días, entre la inserción del catéter y la primera aplicación para controlar el problema del flujo de retorno a lo largo del exterior del catéter fuera del sitio seleccionado como objetivo, hacia el espacio subaracnoideo, subdural, epidural o subcutáneo. Este fenómeno se puede reducir adicionalmente disminuyendo la presión intracraneal elevada mediante el uso de osmodiuréticos y dexametasona a dosis elevadas antes de la aplicación del compuesto radiofarmacéutico. En los casos sólidos sin resecar, se usa una técnica de infusión lenta aprovechando el uso de una bomba de infusión que permite la infusión continua de un volumen de 5-10 ml a lo largo de un período de tiempo de 1-2 horas. Esta técnica es distinta de la denominada "administración mejorada por convección" de macromoléculas en el parénquima cerebral, que usa velocidades de infusión aún menores para permitir cierta penetración de las moléculas grandes que no difunden debido a su tamaño. Los conjugados usados según la invención son fármacos virtualmente pequeños (1-2 kDaltons), y exhiben propiedades sumamente difusivas. Se ha observado repetidamente la difusión a través de grandes áreas de un tumor, incluso a través del cuerpo calloso hacia el otro hemisferio, dentro de los 30 minutos después de una inyección rápida de 2-3 ml del compuesto radiofarmacéutico usado según la invención.
Los conjugados de la sustancia P marcados con radionucleidos de fórmula I se pueden usar solos o en combinación con otras sustancias farmacéuticamente activas. En el caso de las combinaciones con otros compuestos farmacéuticamente activos, se prepara una combinación fija de dos o más componentes (p. ej., equipo de componentes) como ya conoce una persona experta en la técnica, y dichos conjugados y cualquier otro compuesto activo se administran a un intervalo que permite un efecto común, adicional o preferiblemente sinérgico para los tumores cerebrales y/o su tratamiento, p. ej. para la selección como objetivo y el tratamiento de gliomas.
En cualquier régimen de tratamiento, las composiciones farmacéuticas de los conjugados de la sustancia P marcados con radionucleidos de fórmula I se pueden administrar a un paciente por separado o en una mezcla que contiene dos o más toxinas dirigidas al objetivo, otros agentes terapéuticos o composiciones, lo que incluye, por ejemplo, agentes inmunosupresores, agentes inductores de tolerancia, potenciadores y agentes para mitigar los efectos secundarios. Los agentes para mitigar los efectos secundarios particularmente preferidos son aquellos útiles para reducir las reacciones alérgicas de un hospedador. Los agentes inmunosupresores preferidos incluyen prednisona, DECADRON (Merck, Sharp and Dohme, West Point, Pa.), ciclofosfamida, ciclosporina, 6-mercaptopurina, metotrexato, azatioprina y gammaglobulina, o su combinación. Los potenciadores preferidos incluyen monensina, cloruro amónico, perhexilina, verapamilo, amantadina y cloroquina. Todos estos agentes se administran en intervalos de dosis eficaces aceptados generalmente.
Los expertos en la técnica pueden determinar las dosis óptimas a administrar, y variarán con el objetivo y el compuesto particular que se use, la concentración de la preparación, el modo de administración y el avance del estado de la enfermedad. Los factores adicionales que dependen del sujeto a tratar, que incluyen la edad del sujeto, el peso, el sexo, la dieta y el momento de la administración, darán como resultado la necesidad de ajustar las dosis para este propósito específico. La administración de los conjugados y opcionalmente de agentes farmacéuticos adicionales se puede llevar a cabo de manera continua o intermitente.
En el tratamiento, el nivel de dosis apropiado será en general de 0,001 a 50 mg/kg de peso corporal del paciente por día, que se puede administrar en dosis únicas o múltiples. Preferiblemente, el nivel de dosis será de 0,005 a 25 mg/kg por día, más preferiblemente 0,01 a 10 mg/kg por día, e incluso más preferiblemente de 0,05 a 1 mg/kg por día.
Los conjugados de la sustancia P de fórmula I y los conjugados de la sustancia P marcados con radionucleidos de fórmula I se preparan de una manera conocida llevando a cabo una síntesis en fase sólida estándar (SPPS) de forma habitual con protección de las cadenas laterales, que es la versión de la síntesis preferida normalmente.
Se puede llevar a cabo la síntesis peptídica en fase sólida (SPPS) en un sintetizador de péptidos modelo 431 A o 432 A de Applied Biosystems mediante el uso, por ejemplo, de la estrategia Fmoc (9-fluorenometoxicarbonilo). Los principios y métodos generales llevados a cabo se conocen bien en la técnica. Para una descripción más precisa se hace referencia a "Fluorenemethoxycarbonyl-polyamide solid phase synthesis: General Synthesis and Development", capítulo 3 en "Solid peptide Synthesis: A practical approach", de E. Atherton y R.C. Sheppard, Information Press Ltd. Oxford, R.U., (1989).
Los undecapéptidos obtenidos (sustancia P o análogos) se acoplan, por ejemplo, a los proqueladores DOTAGA(^{t}Bu)_{4}, DOTASA(^{t}Bu)_{4} o DOTA(^{t}Bu)_{3}. Tras la escisión de la resina y la desprotección opcional, los productos se pueden purificar mediante HPLC preparativa hasta una pureza mayor del 99,5%.
Los conjugados de la sustancia P de fórmula I obtenidos se pueden marcar con los radionucleidos de maneras conocidas, opcionalmente con o tras la desprotección para formar los grupos de ácido carboxílico unidos al residuo tetraazacíclico. El marcaje se puede llevar a cabo en solución acuosa al poner en contacto el conjugado desprotegido con sales de los radionucleidos de ácidos orgánicos o inorgánicos, tales como halogenuros (cloruros, bromuros, yoduros), sulfatos, nitratos, sulfonatos tales como sulfonato de fenilo o toluilo, formiatos, acetatos, benzoatos u oxalatos.
La invención se ilustra adicionalmente en los siguientes ejemplos, en los que se describe con más detalle la síntesis y la aplicación de los conjugados de la sustancia P de fórmula I y de los conjugados de la sustancia P marcados con radionucleidos de fórmula I.
A) Preparación de conjugados de la sustancia P y conjugados de análogos de la sustancia P (No obstante, los conjugados de la sustancia P que no se ajustan a la fórmula general (I) no forman parte de la invención)
a) Procedimiento de preparación general para la síntesis de péptidos
Como ya se mencionó anteriormente, los péptidos se sintetizan en fase sólida mediante el uso de la estrategia fmoc (fmoc = 9-Fluorenilmetoxicarbonilo). Para conseguir amidas N-terminales, se usa la resina Rink Amide-MBHA. La síntesis se lleva a cabo en un sintetizador de péptidos semiautomático de RINK Engineering, Bubendorf, Suiza. Este sintetizador está equipado con uno o hasta 10 recipientes de reacción. Los aminoácidos se adquieren de Novabiochem AG, Läufelfingen, Suiza. Todos los demás reactivos se adquieren de Fluka Chemie GmbH, Buchs, Suiza.
En general, se proporciona al reactor 1 equivalente de la resina Rink Amide-MBHA con una carga teórica de 0,7 mmoles/g de resina. Se añade dimetilformamida (DMF) al reactor y se agita durante 15 minutos para permitir el hinchamiento de la resina. Después de eliminar el disolvente, se añade de nuevo una porción de DMF durante 2 minutos. Se añade una disolución de un 20% de piperidina en DMF a la resina pre-hinchada en 5 minutos para eliminar la protección fmoc de la resina. Esta etapa se repite una vez en 5 minutos y después otra vez, pero en 12 minutos. Después de este procedimiento, la fase sólida se lava dos veces durante 0,5 minutos con DMF y de nuevo una vez durante 1 min con DMF. Las disoluciones de piperidina y las disoluciones de DMF de los últimos tres lavados se recogen y se completan con etanol (EtOH) hasta 500 ml. De esta disolución se toma una alícuota para determinar espectrofotométricamente la cantidad de grupos protectores fmoc eliminados. Por lo tanto, se determina la absorción de la disolución a 300 nm y se calcula la cantidad original de fmoc.
Antes de acoplar el derivado fmoc-aminoácido a la fase sólida, la resina se lavan dos veces durante 2 minutos con N-metil-pirrolidinona (NMP). Mientras tanto, se disuelven en NMP 3 equivalentes del derivado de aminoácido protegido con fmoc junto con 3,3 equivalentes de 1-hidroxibenzotriazol y 3,3 equivalentes de N,N'-diisopropilcarbodiimida, y se incuban durante 45 minutos. Después, esta disolución de acoplamiento se añade a la fase sólida y se ajusta el pH hasta un valor de 7-8 mediante la adición de alrededor de 5 equivalentes de N,N-diisopropiletilamina (DIPEA). La reacción se incuba durante 90 minutos con agitación suave. Después de eliminar la disolución de reacción, la fase sólida se lava dos veces con DMF durante 1 minuto. La reacción se controla llevando a cabo un análisis de Kaiser: Alrededor de 10 esferas de la fase sólida se lavan 5 veces con etanol. Se mezclan 20 g de fenol en 10 ml de etanol con 1 ml de una disolución de 1 ml de KCN 0,01 M en 49 ml de piridina. Se añaden 50 \mul de esta mezcla a las esferas, seguido de 10 \mul de una disolución de 500 g de ninhidrina en 10 ml de etanol. Las esferas se calientan durante 10 minutos a 95ºC. Las esferas azules indican la existencia de funciones amino libres.
Tras la unión del primer aminoácido, los siguientes fmoc-aminoácidos se acoplan de una manera similar, pero con un programa de tiempos ligeramente diferente. El sintetizador se programa por tanto como se describe en la siguiente tabla:
21
Todos los aminoácidos se usan en forma de derivados protegidos con fmoc en posición N-terminal. La lisina se usa con el grupo protector tert-butoxicarbonilo (Boc) en la función amino de la cadena lateral. La arginina se usa con protección mediante 2,2,4,6,7-pentametildihidro-benzofuran-5-sulfonilo (Pbf) de la cadena lateral. Si la síntesis peptídica se lleva a cabo en un único reactor, el análisis de Kaiser se realiza después de acoplar cada aminoácido. Si el análisis de Kaiser indica que existen funciones amino libres, se repite el acoplamiento del aminoácido.
Después de la construcción de la secuencia completa del péptido deseado, la fase sólida se lava 5 veces con isopropanol, seguido de 5 lavados con éter dietílico, cada uno durante 1 minuto. Durante 5 min, se seca la fase sólida con una corriente de aire constante.
b) Acoplamiento con proquelador DOTAGA(^{t}Bu)_{4} y DOTA(^{t}Bu)_{3}
El proquelador DOTAGA(^{t}Bu)_{4} se sintetiza como se describe en el documento WO 02/24235 (H.R. Mäcke et al.). DOTA(^{t}Bu)_{3} se adquiere de Macrocyclics Inc., Dallas, EE.UU. Antes de acoplar el proquelador, se elimina la protección fmoc aminoterminal de los péptidos unidos a la resina. Por lo tanto, ésta se hincha durante 15 minutos en DMF, se lava de nuevo durante 2 minutos con DMF y se trata después dos veces con una disolución del 20% de piperidina en DMF durante 5 minutos. Después, la fase sólida se trata otros 12 minutos con esta disolución y se lava dos veces durante 0,5 minutos con DMF y durante otro minuto de nuevo con DMF. La disolución procedente de los tratamientos con piperidina y los siguientes lavados con DMF se recogen para determinar el contenido de grupos fmoc escindidos. Se disuelven en DMF 2 equivalentes de Proquelador y 1,2 equivalentes de hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N'N'-tetrametiluronio (HATU), y se incuba durante 45 minutos. Tras esto, se añaden 2 equivalentes de DIPEA a la disolución. Esta disolución de reacción se añade después a la fase sólida, y después de 2 minutos se controla el pH de la reacción y, si es necesario, se ajusta a un valor entre 7 y 8 añadiendo algo más de DIPEA. La mezcla de reacción se agita durante la noche. Tras eliminar la disolución, la fase sólida se lava dos veces con DMF durante 2 minutos, 5 veces con isopropanol y 5 veces con éter dietílico durante 1 minuto. Después se seca con una corriente de aire durante 10 minutos.
c) Desprotección, escisión y purificación
La fase sólida se transfiere a una jeringa equipada con una frita. Se añade una disolución de un 91% de ácido trifluoroacético (TFA), un 5% de tioanisol, un 3% de agua y un 1% de triisopropilsilano, y la jeringa se agita durante 1 h. La disolución se vierte después en un tubo de polipropileno. A esta disolución se le añade una mezcla de un 50% de éter diisopropílico y un 50% de éter de petróleo. Durante 30 min el tubo se enfría a -20 ºC. La precipitación se recoge mediante centrifugación del tubo a 1006 g durante 5 minutos y se decanta el disolvente. Mientras tanto, la fase sólida de la jeringa se trata de nuevo con la disolución de desprotección anterior durante 2 h. La disolución de desprotección se añade a la precipitación ya conseguida y el sólido se diluye con ésta. Después de otras 3 h de desprotección, el producto bruto se precipita de nuevo, se enfría, se centrifuga y se separa del disolvente mediante decantación. El producto bruto se mantiene después en vacío (<100 mbares) durante la noche para eliminar los disolventes restantes. El producto bruto se disuelve en una mezcla de acetonitrilo : agua = 1 : 1 y se purifica mediante HPLC preparativa en una columna VP Nucleosil 100-5C18 de Macherey-Nagel de 21x250 mm. El gradiente de eluyentes llevado a cabo es el siguiente: A = acetonitrilo, B = 0,1% de ácido trifluoroacético (TFA) en agua; caudal = 15 ml/min; 0 min, 15% de A; 25 min, 50% de A; 26 min, 100% de A; 28 min, 100% de A; 30 min, 15% de A. El pico principal se recoge y se evapora hasta sequedad. Se analiza mediante HPLC analítica y espectroscopía de masas (MALDI-TOF-MS). Se usa una columna CC250/4 Nucleosil 120-3C18 de Macherey-Nagel para la separación analítica mediante el uso del siguiente gradiente de eluyentes: A = acetonitrilo, B = 0,1% de TFA en agua; caudal = 0,75 ml/min; 0 min, 90% de A; 20 min, 40% de A; 23 min, 0% de A; 24 min, 0% de A; 27 min, 90% de A.
Se preparan los siguientes conjugados:
DOTAGA significa un residuo
22
y
DOTA significa un residuo
23
Ejemplo A1
DOTAGA-Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}-Gln^{9}-Phe^{7}-Phe^{8}-Gly^{9}-Leu^{10}-Met^{11}-NH_{2}
DOTAGA-Sustancia P: C_{82}H_{128}N_{22}O_{22}S, calculado (m/z): 1806,1, hallado 1807,2; R_{f}: 29,8.
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Ejemplo A2
DOTA-Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}-Gln^{6}-Phe^{7}-Phe^{8}-Gly^{9}-Leu^{10}-Met(O_{2})^{11}-NH_{2}
DOTA-[Met(O_{2})^{11}]-Sustancia P: C_{79}H_{126}N_{22}O_{22}S, calculado (m/z): 1766,9, hallado 1766,2; R_{f}: 26,0.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo A3
DOTA-Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}-Gln^{6}-Phe^{7}-Phe^{8}-Sar^{9}-Leu^{10}-Met^{11}-NH_{2}
DOTA-[Sar^{9}]-Sustancia P: C_{80}H_{128}N_{22}O_{22}S, calculado (m/z): 1748,9, hallado 1748,5; R_{f}: 28,03.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo A4
DOTA-Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}-Gln^{6}-Phe^{7}-Thi^{8}-Gly^{9}-Leu^{10}-Met^{11}-NH_{2}
DOTA-[Thi^{8}]-Sustancia P: C_{77}H_{124}N_{22}O_{20}S_{2}, calculado (m/z): 1740,9, hallado 1740,7; Rf: 27,87.
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Ejemplo A5
DOTA-Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}-Gln^{6}-Thi^{7}-Phe^{8}-Gly^{9}-Leu^{10}-Met^{11}-NH_{2}
DOTA-[Thi^{8}]-Sustancia P: C_{77}H_{124}N_{22}O_{20}S_{2}, calculado (m/z): 1740,9, hallado 1740,6; R_{f}: 27,66.
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Ejemplo A6
DOTA-Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}-Gln^{6}-Phe^{7}-Phe^{8}-Sar^{9}-Leu^{10}-Met(O_{2})^{11}-NH_{2}
DOTA-[Sar^{9}, Met(O_{2})^{11}]-Sustancia P: C_{80}H_{128}N_{22}O_{22}S, calculado (m/z): 1780,9, hallado 1780,1; R_{f}: 25,34.
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Ejemplo A7
DOTA-Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}-Gln^{6}-Phe^{7}-Thi^{8}-Gly^{9}-Leu^{10}-Met(O_{2})^{11}-NH_{2}
DOTA-[Thi^{8}, Met(O_{2})^{11}]-Sustancia P: C_{77}H_{124}N_{22}O_{22}S_{2}, calculado (m/z): 1772,9, hallado 1772,7; R_{f}: 25,34.
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Ejemplo A8
DOTA-Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}-Gln^{6}-Phe^{7}-Thi^{8}-Sar^{9}-Leu^{10}-Met^{11}-NH_{2}
DOTA-[Thi^{8}, Sar^{9}]-Sustancia P: C_{78}H_{126}N_{22}O_{20}S_{2}, calculado (m/z): 1754,9, hallado 1754,9; R_{f}: 26,70.
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Ejemplo A9
DOTA-Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}-Gln^{6}-Thi^{7}-Thi^{8}-Gly^{9}-Leu^{10}-Met^{11}-NH_{2}
DOTA-[Thi^{7}, Thi^{8}]-Sustancia P: C_{75}H_{122}N_{22}O_{20}S_{3}, calculado (m/z): 1746,8, hallado 1746,4; R_{f}: 27,29.
\newpage
B) Preparación de conjugados marcados con radionucleidos Procedimiento general
Para ^{90}Y-/^{111}In-DOTAGA-Sustancia P: A una alícuota estéril de 30 \mug del conjugado quelador-péptido en agua se le añade una disolución acuosa de ^{90}YCI_{3} de 330 mCi o una disolución acuosa de ^{111}InCl_{3} de 0,5 mCi y se completa hasta 500 \mul con tampón estéril de NaOAc 0,4 M (pH 5). Esta disolución se calienta durante 30 minutos a 95ºC y se enfría a temperatura ambiente durante 15 minutos. La disolución se diluye hasta 1 ml con solución fisiológica de NaCI. Una muestra de ella se controla mediante radio-HPLC para determinar el contenido de radionucleido sin unir. Mediante el uso de ^{90}Y-DOTAGA-Sustancia P, se descubrió que se forma una cantidad menor del producto de oxidación ^{90}Y-DOTAGA-[Met(O)^{11}]-Sustancia P. Se lleva a cabo una HPLC analítica como se describió en el
ejemplo A(c).
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Se preparan los siguientes conjugados marcados con radionucleidos:
Ejemplo B1:
^{111}In-DOTAGA-Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}-Gln^{6}-Phe^{7}-Phe^{8}-Gly^{9}-Leu^{10}-Met^{11}-NH_{2}
^{111}In-DOTAGA-Sustancia P: C_{82}H_{125}InN_{22}O_{22}S, calculado (m/z): 1916,81, hallado: 1917,6 (M+H)^{+}, R_{f}: 29,80.
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Ejemplo B2
^{90}Y-DOTAGA-Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}-Gln^{6}-Phe^{7}-Phe^{8}-Gly^{9}-Leu^{10}-Met^{11}-NH_{2}
^{90}Y-DOTAGA-Sustancia P
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Ejemplo B3
^{111}In-DOTA-Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}-Gln^{6}-Phe^{7}-Phe^{8}-Gly^{9}-Leu^{10}-Met(O_{2})^{11}-NH_{2}
^{111}In-DOTA-[Met(O_{2})^{11}]-Sustancia P
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Ejemplo B4
^{111}In-DOTA-Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}-Gln^{6}-Phe^{7}-Phe^{8}-Sar^{9}-Leu^{10}-Met^{11}-NH_{2}
^{111}In-DOTA-[Sar^{9}]-Sustancia P
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Ejemplo B5
^{111}In-DOTA-Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}-Gln^{6}-Phe^{7}-Thi^{8}-Gly^{9}-Leu^{10}-Met^{11}-NH_{2}
^{111}In-DOTA-[Thi^{8}]-Sustancia P
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Ejemplo B6
^{111}In-DOTA-Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}-Gln^{6}-Thi^{7}-Phe^{8}-Gly^{9}-Leu^{10}-Met^{11}-NH_{2}
^{111}In-DOTA-[Thi^{8}]-Sustancia P
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Ejemplo B7
^{111}In-DOTA-Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}-Gln^{6}-Phe^{7}-Phe^{8}-Sar^{9}-Leu^{10}-Met(O_{2})^{11}-NH_{2}
^{111}In-DOTA-[Sar^{9}, Met(O_{2})^{11}]-Sustancia P
\newpage
Ejemplo B8
^{111}In-DOTA-Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}-Gln^{6}-Phe^{7}-Thi^{8}-Gly^{9}-Leu^{10}-Met(O_{2})11-NH_{2}
^{111}In-DOTA-[Thi^{8}, Met(O_{2})^{11}]-Sustancia P
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Ejemplo B9
^{111}In-DOTA-Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}-Gln^{6}-Phe^{7}-Thi^{8}-Sar^{9}-Leu^{10}-Met^{11}-NH_{2}
^{111}In-DOTA-[Thi^{8}, Sar^{9}]-Sustancia P
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Ejemplo B10
^{111}In-DOTA-Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}-Gln^{6}-Thi^{7}-Thi^{8}-Gly^{9}-Leu^{10}-Met^{11}-NH_{2}
^{111}In-DOTA-[Thi^{7}, Thi^{8}]-Sustancia P
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Ejemplo B11
Protocolo de marcaje
El procedimiento general descrito en B) se repite a 50ºC y se detecta la unión de ^{90}YCI_{3} después de los tiempos de reacción definidos. A partir del resultado de la siguiente tabla se puede observar que la reacción se puede considerar completa después de alrededor de 15 minutos.
24 
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C) Ejemplos de aplicación
Ejemplo C1
Observaciones generales
Los conjugados de la sustancia P y radionucleidos y sus análogos que son undeca-péptidos se preparan mediante la aplicación de la síntesis en fase sólida estándar (SPPS) de forma habitual con protección de las cadenas laterales, y el péptido obtenido se acopla al proquelador DOTAGA(^{t}Bu)_{4}. Después de la escisión y tras la desprotección, DOTAGA-Sustancia P y los análogos se purifican mediante HPLC preparativa hasta una pureza mayor del 95%. Los conjugados de la sustancia P y de los análogos obtenidos se esterilizan y posteriormente se marcan con una sal de radionucleido como se mencionó anteriormente, p. ej. ^{111}InCl_{3} (18 MBq por aplicación) para la formación de imágenes y ^{90}YCI_{3} (37 MBq/\mug de DOTAGA-Sustancia P) mediante el uso, por ejemplo, de tampón de acetato sódico 0,4 M ajustado a pH 5,0 que contiene ácido ascórbico (2 g/10 ml) y ácido 2,5-dihidroxi-benzoico (370 mg/19 ml).
El marcaje también se puede llevar a cabo con ^{213}Bi, un emisor \alpha muy prometedor disponible de un generador de Ac-225/Bi-213. Los rendimientos de marcaje están en el mismo intervalo para Y-90 e In-111 (>95%), pero Bi-213 tiene un periodo de semidesintegración corto de solamente 47 min.
Durante el proceso de marcaje se identifica un segundo pico en el cromatograma de HPLC que se identifica como ^{90}Y/^{111}In-DOTAGA-[Met(O)^{11}]-Sustancia P, como producto de la radiolisis durante el proceso de marcaje. Desafortunadamente, este derivado muestra una afinidad de unión hacia los receptores NK1 inferior en un factor de 11 respecto de la sustancia sin oxidar. Incluso mediante la adición al tampón de una gran cantidad de un agente reductor, p. ej. ácido ascórbico, no se puede inhibir completamente esta oxidación indeseada. Por otra parte, el derivado sintetizado ^{90}Y/^{111}In-DOTAGA- o DOTA-[Sar^{9} Met(O_{2})^{11}]-Sustancia P muestra una afinidad muy superior a la de los derivados de sulfóxido (menor de un factor de 2 más baja que la secuencia nativa). Así, se subraya que se puede introducir Met(O_{2}) en la posición 11 de la secuencia peptídica sin una pérdida significativa de afinidad, y elimina los problemas de oxidación que acaban apareciendo.
Se llevan a cabo análisis de estabilidad adicionales mediante experimentos in vitro con la incubación de ^{90}Y-DOTAGA-Sustancia P en diferentes aspirados de LCR (líquido cefalorraquídeo) de pacientes. Se puede demostrar una diferencia significativa en la degradación del radiopéptido que tiene correlación con la "calidad" de la muestra de LCR. Si el aspirado es incoloro y de aspecto claro (no contiene sangre), el conjugado marcado es estable durante varias horas, mientras en aspirados con una contaminación de suero sanguíneo visible, la sustancia se degrada completamente en 5 h.
Esta degradación enzimática tiene también un gran impacto en los pacientes, como se observa en diferentes muestras de orina de 0 a 24 h p.i., y de aspirados de LCR de 1 semana p.i. Todas las muestras exhiben los mismos dos metabolitos radiactivos que en el experimento in vitro con muestras de LCR contaminadas con suero. La cuantificación de la radiactividad en la orina también indica una eliminación muy rápida del ^{90}Y aplicado unido a metabolitos de DOTAGA-Sustancia P.
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Ejemplo C2
Prueba de estabilidad (transferencia de radionucleidos al quelador competitivo DTPA
Se disuelve ^{90}Y-DOTAGA-Sustancia P en agua a pH 7 y se mezcla con un exceso de 10^{5} de ácido dietilentriamino-pentaacético (DTPA). La cantidad de radionucleido intacto se determina tras ciertos períodos de tiempo. Los resultados, que indican una estabilidad elevada, se proporcionan en la siguiente tabla.
25 
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Ejemplo C3
Estabilidad metabólica en suero sanguíneo
Los compuestos marcados con ^{111}Y como se menciona en la tabla se ponen en contacto con suero sanguíneo y se determina la cantidad de partes intactas después de ciertos períodos de tiempo. Los resultados, que indican la estabilidad superior del conjugado de la sustancia P modificada, se proporcionan en la siguiente tabla.
26
Ejemplo C4
Afinidad de unión a receptores NK-1
Se lleva a cabo una autorradiografía in vitro con tejido tumoral que expresa receptores NK1. El radioligando usado es ^{125}I-Bolton-Hunter-SP. Los experimentos de desplazamiento se llevan a cabo en secciones sucesivas con los diversos compuestos enumerados en la tabla, administrados a concentraciones que oscilan de 0,1 nM a 1000 nM. Los valores de CI_{50} se calculan a partir de 10 análogos de la sustancia P distintos radiomarcados y se comparan con la SP natural. Los resultados se proporcionan en la siguiente tabla.
27
Ejemplo C5
Autorradiografía de receptores en tumores cerebrales primarios en la comparación del sistema de selección como objetivo con somatostatina y el sistema de neurocinina-1 (NK-1)
Un estudio inmunohistoquímico de casos representativos de gliomas primarios llevado a cabo demostró que la distinción entre el tejido cerebral infiltrado por el tumor y el cerebro normal es, en muchos casos, prácticamente imposible debido a la expresión de fondo de receptores de somatostatina en el tejido cerebral normal. A pesar de esta observación, las gammagrafías de In-111 DOTATOC muestran el confinamiento del radiofármaco inyectado en el compartimento tumoral tal como se visualiza mediante MRI. Esto se podría explicar mejor por la estructura caótica de la arquitectura del tejido extracelular dentro del tumor y en el cerebro infiltrado en comparación con el tejido cerebral sin infiltrar. Bakay ha demostrado en su publicación (Brain 1970, 93, 693-698) que el espacio extracelular puede constituir hasta el 20-40% de un volumen dado de tejido tumoral cerebral, en comparación con el cerebro normal, que contiene alrededor del 5% de espacio extracelular. Físicamente, un tumor utiliza la energía disponible para proliferar e infiltrarse, y no para maximizar el orden de la arquitectura molecular como hace el tejido cerebral normal (ley de la entropía). Se ha descrito la expresión uniforme y elevada de receptores de neurocinina-1 en glioblastomas, pero también en gliomas de grado bajo e intermedio. Por lo tanto, se ha llevado a cabo un estudio autorradiográfico comparativo entre el sistema de la somatostatina/DOTATOC y el sistema de la sustancia P/NK-1 para definir los mejores compuestos de selección de objetivo para la terapia locorregional en tumores cerebrales. Con la única excepción de un ependimoma, la expresión de receptores NK-1 es al menos equivalente o superior en la mayoría de gliomas de grados II-IV. Los resultados demuestran que el sistema de la sustancia P/NK-1 puede sustituir al sistema de somatostatina/DOTATOC fácilmente, al producir respuestas superiores debido a una proporción claramente más favorable de señal del tumor respecto de la señal de fondo del cerebro.
Ejemplo C6
Estudio piloto de tratamiento con ^{90}Y-DOTAGA-Sustancia P
En el siguiente estudio piloto con sustancia P se incluyen 4 casos de biopsia sola seguida de ^{90}Y-DOTAGA-Sustancia P (tratamiento); todos los casos corresponden a tumores profundos o localizados de manera elocuente, en los que la cirugía abierta no se considera conveniente como primera opción de tratamiento, y 5 casos con resección total macroscópica abierta y braquiterapia subsiguiente con conjugado de radionucleido. Como tercer grupo que puede servir como control, se incluyeron 5 casos avanzados que se habían tratado mediante los denominados regímenes estándar, prácticamente sin opción terapéutica. Ya que este es un estudio piloto no controlado, tuvo que depender de los resultados del único gran ensayo aleatorizado de gliomas llevado a cabo y publicado hace más de 20 años (Walker et al., 1980, N Engl J Med). En casos de biopsia sola, la supervivencia media es de alrededor de 9 semanas sin tratamiento adicional. En los 4 casos de este estudio piloto, todos los pacientes sobrevivieron al menos 2 meses y hasta 9 meses, y un caso especial incluso mostró una respuesta parcial notable. En los 5 casos resecados seguido por la braquiterapia interna con conjugado de radionucleido, la supervivencia total pareció ser más larga de lo esperado, que está en el intervalo entre 14 y 26 meses. Según el único gran ensayo aleatorizado de los años 70, que sirve como control histórico, la resección sola habría llevado a una supervivencia esperada de alrededor de 4 meses, y la resección más una radioterapia externa habría llevado a una supervivencia de alrededor de 9,5 meses. De forma bastante notable, todas las cifras de supervivencia media están localizadas a la derecha de estos valores esperados en el eje de tiempo, lo que se puede considerar como una indicación sólida de que el conjugado Y-90-DOTAGA-sustancia P es ciertamente más eficaz que una solución de agua pura.
Esta interpretación de los datos está apoyada adicionalmente por una respuesta parcial impresionante (caso W.M.), que se obtiene en un glioblastoma talámico izquierdo no resecable mediante el uso de monoterapia con ^{90}Y-DOTAGA-Sustancia P, y en el que se observó una reducción del volumen de más del 80% del glioblastoma. Una cuestión clave en la terapia local de gliomas es si se puede llegar a alcanzar los nidos de células tumorales infiltradas o la lesión satélite. En un caso instructivo con ^{111}In-DOTAGA-Sustancia P, se demuestra la difusibilidad en una lesión satélite distante 4 cm que se hace visible tras la inyección intracavitaria en la cavidad de resección. A pesar de haberse marcado bien, la lesión satélite no se pudo controlar con Y-90-sustancia P. Este caso demuestra que incluso si el objetivo se puede marcar, hubiera sido mucho más probable que un radionucleido con un alcance más reducido erradicase esta lesión. En contraste, los actuales emisores \alpha (alcance de \mum) y los emisores \beta de alcance reducido (p. ej., Lu-177, 1-2 mm) deberían demostrar que son superiores en el tratamiento de grupos de células tumorales invasivas. El Y-90 (alcance de 3-6 mm) actualmente utilizado es más adecuado para lesiones voluminosas.

Claims (7)

1. Un conjugado de un análogo de la sustancia P y una molécula queladora, en el que el conjugado de la sustancia P tiene la abreviatura Quelador-R-Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5}-Gln^{6}-Phe^{7}-Phe^{8}-Gly^{9}-Leu^{10}-Met^{11}-NH_{2} y comprende los compuestos de fórmula I
28
en la que
R es -CH_{2}-C(O)-, -C(CO_{2}H)CH_{2}CH_{2}-C(O)- o -C(CO_{2}H)CH_{2}-C(O)-, se modifica mediante la modificación a) subsiguiente en la secuencia de aminoácidos de la sustancia P:
a)
sustitución de Met^{11} por -NH-CH(CH_{2}CH_{2}-SO_{2}-CH_{3})-C(O)-(Met(O_{2})^{11}), -NH-CH(CH_{2}CH_{2}-SO-CH_{3})-C(O)-(Met(O)^{11}), o -NH-CH[CH(CH_{2})CH_{2}CH_{3})-C(O)-(Ile^{11}), y opcionalmente al menos una de las modificaciones b) a g) subsiguientes:
b)
sustitución de Leu^{10} por -NH-CH[CH(CH_{2})CH_{2}CH_{3})-C(O)-(Ile^{10}),
c)
sustitución de Gly^{9} por -N(CH_{3})-CH_{2}-C(O)-(Sar^{9}),
d)
sustitución de Phe^{7} o Phe^{8} o tanto Phe^{7} como Phe^{8} por un residuo de las fórmulas
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29 
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30 
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31 
\vskip1.000000\baselineskip
e)
sustitución de Lys^{3} por un residuo de las fórmulas
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32 
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f)
truncamiento de 1 a 5 aminoácidos de la secuencia Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{6}, o
g)
sustitución de 1 a 5 aminoácidos de la secuencia Arg^{1}-Pro^{2}-Lys^{3}-Pro^{4}-Gln^{5} por -N(CH_{3})-CH_{2}-C(O)-(Sar),
y en el que los conjugados están sin marcar o marcados con un radionucleido seleccionado del grupo que consiste en Actinio-225, Bismuto-212, Bismuto-213, Plomo-203, Cobre-64, Cobre-67, Galio-66, Galio-67, Galio-68, Lutecio-177, Indio-111, Indio-113, Itrio-86 e Itrio-90, Disprosio-162, Disprosio-165, Disprosio-167, Holmio-166, Praseodimio-142, Praseodimio-143, Prometio-149 y Terbio-149.
2. El conjugado de la reivindicación 1, en el que en la secuencia de aminoácidos de la sustancia P, Met^{11} se sustituye por -NH-CH(CH_{2}CH_{2}-SO_{2}-CH_{3})-C(O)-(Met(O_{2})^{11}).
3. Una composición que comprende (a) al menos un vehículo farmacéutico y (b) al menos uno de los conjugados marcados según la reivindicación 1 ó 2.
4. El conjugado marcado de la reivindicación 1 ó 2 para el uso en la terapia médica.
5. El conjugado marcado de la reivindicación 1 ó 2 para seleccionar como objetivo o para tratar tumores cerebrales, especialmente gliomas.
6. El conjugado marcado de la reivindicación 1 ó 2 para su aplicación locorregional mediante inyección en un catéter ventricular implantado de forma estereotáctica o en una cápsula a partir de la cual un catéter conduce al centro del tumor o a la cavidad de resección de un hospedador.
7. El uso de un conjugado marcado según la reivindicación 1 ó 2 para la fabricación de formulaciones radiofarmacéuticas o radiodiagnósticas para seleccionar como objetivo o tratar tumores cerebrales, especialmente gliomas.
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Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL2076535T3 (pl) 2006-10-16 2013-08-30 Salk Inst Biological Studies Antagoniści somatostatyny selektywni względem receptora (SSTR2)
US8691761B2 (en) 2006-10-16 2014-04-08 Jean E. F. Rivier Somatostatin receptor 2 antagonists
GB0624587D0 (en) * 2006-12-08 2007-01-17 Univ Muenchen Tech Chelating agent
US20100247590A1 (en) * 2009-03-30 2010-09-30 Johnson & Johnson Peptide-Based Systems For Delivery Of Cosmetic Agents
WO2016025322A1 (en) * 2014-08-09 2016-02-18 Purdue Research Foundation Design and development of neurokinin-1 receptor-binding agent delivery conjugates
CA3013882A1 (en) 2016-02-09 2017-08-17 Cdrd Ventures Inc. Somatostatin receptor antagonist compounds and methods of using the same
MX2019007615A (es) * 2016-12-23 2019-11-05 Univ Johns Hopkins Imagenología de celulas tumorales e inmunitarias basadas en expresion de pd-l1.
GB201705258D0 (en) * 2017-03-31 2017-05-17 South African Nuclear Energy Corp Ltd Imaging agent
US10093741B1 (en) 2017-05-05 2018-10-09 Fusion Pharmaceuticals Inc. IGF-1R monoclonal antibodies and uses thereof
CA3062553C (en) 2017-05-05 2024-02-06 Fusion Pharmaceuticals Inc. Pharmacokinetic enhancements of bifunctional chelates and uses thereof
AU2018261890A1 (en) 2017-05-05 2019-11-28 Centre For Probe Development And Commercialization IGF-1R monoclonal antibodies and uses thereof
CN113853220A (zh) * 2019-03-11 2021-12-28 生物相容英国有限公司 用于中枢神经系统肿瘤治疗的放射性微球

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5750646A (en) * 1987-09-24 1998-05-12 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Bradykinin analogs with non-peptide bond
EP1196200A2 (en) * 1999-07-05 2002-04-17 Pedro Ortiz Aruma A radiolabeled mammalian tachykinin peptide analogue
ATE271396T1 (de) * 2000-05-12 2004-08-15 Univ Hospital Prochelators von radiometall markierten molekülen
EP1283216A1 (en) * 2001-08-10 2003-02-12 Mallinckrodt Inc. Somatostatin analogues binding to all somatostatin receptor subtypes and their use
US7544657B2 (en) * 2002-10-02 2009-06-09 Zealand Pharma A/S Stabilized Exendin-4 compounds

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ATE410191T1 (de) 2008-10-15

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