ES2303789B1 - Derivados glicosilados de mitramicina, su procedimiento de obtencion y sus usos. - Google Patents
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Abstract
Derivados glicosados de mitramicina, su
procedimiento de obtención y sus usos. Esta invención se refiere a
derivados de mitramicina obtenidos por fermentación de cepas
bacterianas recombinantes. La invención se refiere también a los
procedimientos empleados para la obtención de las cepas
recombinantes y la producción de derivados de mitramicina.
La invención también se refiere a cepas
bacterianas útiles para la producción de derivados de mitramicina.
Finalmente, los derivados de mitramicina aquí descritos son de
aplicación en el campo de la salud humana, en concreto para fabricar
medicamentos útiles en el tratamiento de enfermedades tumorales y
neurológicas.
Description
Derivados glicosilados de mitramicina, su
procedimiento de obtención y sus usos.
La invención se adscribe al campo farmacéutico y
en concreto se refiere a compuestos con aplicación en oncología,
con estructura química derivada de mitramicina y que se obtienen
por fermentación de microorganismos.
La mitramicina (MTM) es un fármaco antitumoral
producido por microorganismos del género Streptomyces,
incluyendo Streptomyces argillaceus ATCC 12956. Este fármaco
es el representante más importante del grupo del ácido aureólico, y
es empleado para el tratamiento del carcinoma testicular, la
enfermedad de Paget y la hipercalcemia causada por lesiones óseas
asociadas al cáncer (Oncology 1973,
28,147-163; Biochem. Biophys. Res. Commun.
1993, 195, 1245-1253; Treat. Endocrinol.
2002, 1, 241-257; Treat. Endocrinol. 2003, 2,
273-292). La MTM es además un agente neuroprotector
que podría ser útil para el tratamiento de enfermedades
neurológicas tales como accidente cerebrovascular, esclerosis
lateral amiotrófica, enfermedad de Parkinson, enfermedad de
Huntington, esclerosis múltiple y encefalitis vírica (J.
Neurosci. 2004, 24, 10335-10342; J. Biol.
Chem. 2006, 281, 16672-16680). Además, la MTM
presenta actividad antibiótica (Antibiot. Chemother. 1962,
12, 182-186).
La estructura química de la MTM se muestra en la
Fig. 1. El grupo de compuestos del ácido aureólico incluye MTM,
cromomicina A_{3}, olivomicina A, UCH9 y durhamicina (Appl.
Microbiol. Biotechnol. 2006, 73, 1-14). Todos
ellos contienen un núcleo tricíclico de origen policetídico, con
una cadena lateral altamente funcionalizada en el carbono 3. El
residuo en el carbono 7 puede ser un átomo de hidrógeno o un
alquilo de cadena corta. Asimismo, estos compuestos poseen
4-6 desoxiazúcares unidos en forma de trisacárido o
tetrasacárido (en el carbono 2) y monosacárido o disacárido (en el
carbono 6). Los compuestos del ácido aureólico difieren en la
naturaleza y el modo de unión de sus cadenas glucidicas, que
contienen diferentes 2,6-didesoxiazúcares. Estas
variaciones estructurales son las responsables de las sutiles
diferencias que existen entre los miembros del grupo en cuanto a su
unión al ADN y su perfil de actividad biológica. Es bien conocido
que el patrón de glicosilación de los fármacos antitumorales que
actúan uniéndose al ADN, como es el caso de la MTM, tiene gran
importancia en su actividad biológica (Biopolymers 2000, 54,
104-114). Por ello, la obtención de nuevos derivados
de MTM con patrones glicosídicos alterados puede generar fármacos
con actividad mejorada.
El conjunto de genes responsables de la
biosíntesis de MTM ha sido ampliamente estudiado (Appl.
Microbiol. Biotechnol. 2006, 73, 1-14). La
biosíntesis de MTM en Streptomyces argillaceus incluye la
condensación de 10 unidades de acil-coenzima A para
generar un intermediario tetracíclico, denominado premitramicinona
(Fig. 2). A continuación, 5 unidades de desoxiazúcares son añadidas
de forma sucesiva, generándose intermediarios tetracíclicos con 3
azúcares y con 5 azúcares. Las glicosiltransferasas MtmGIII y
MtmGIV son responsables de la formación del trisacárido, mientras
que las glicosiltransferasas MtmGI y MtmGII catalizan la formación
del disacárido. Finalmente, la ruptura de uno de los anillos,
seguida de la reducción de un grupo ceto en la cadena lateral,
genera la MTM.
Actualmente existe una gran necesidad de nuevos
agentes antitumorales, con actividad mejorada, con menos efectos
secundarios indeseables y con mayor selectividad, en comparación
con los fármacos actualmente en uso. Tradicionalmente, la industria
farmacéutica ha desarrollado nuevos fármacos mediante dos vías
fundamentales: (1) búsqueda de nuevos productos naturales, y (2)
síntesis y/o modificación química de determinados compuestos. Estos
métodos siguen siendo útiles, pero suelen requerir inversiones muy
importantes de recursos (tiempo, dinero, energía), pues normalmente
es necesario analizar miles de productos para encontrar un nuevo
compuesto prometedor. El desarrollo de la tecnología del ADN
recombinante ha abierto un interesante campo de investigación para
la generación de nuevos compuestos bioactivos mediante la
manipulación de genes implicados en la biosíntesis de agentes
antitumorales, principalmente de bacterias del grupo de los
actinomicetos (Trends Biotechnol. 2001, 19,
449-456; J. Mol. Microbiol. Biotechnol.
2005, 9, 77-85; Curr. Opin. Drug Discov.
Devel. 2005, 8, 748-756; J. Ind Microbiol.
Biotechnol. 2006, 33, 560-568; Curr. Opin.
Microbiol. 2006, 9, 252-260). Estas técnicas
también pueden ser usadas para mejorar la producción de compuestos
naturales ya conocidos, pues las cepas naturales suelen producir
bajas concentraciones del metabolito de interés.
La presente invención proporciona nuevas cepas
bacterianas derivadas de Streptomyces argillaceus. Estas
cepas son obtenidas mediante la introducción de ciertos ácidos
nucleicos adicionales en cepas bacterianas existentes, las cuales
pueden ser: (a) Streptomyces argillaceus, o bien (b) cepas
derivadas de Streptomyces argillaceus. Las cepas del
apartado (b) pueden obtenerse (entre otros métodos) mediante la
inactivación de uno (o varios) de los genes responsables de la
biosíntesis de mitramicina, y son útiles para la obtención de
derivados de MTM (US 2005/0192432 Al; J. Am. Chem. Soc.
2003, 125, 5745-5753; J. Am. Chem. Soc. 2002,
124, 1606-1614; Mol. Gen. Genet. 2001, 264,
827-835; FEMS Microbiol. Lett. 2000, 186,
61-65; Mol. Gen. Genet. 2000, 262,
991-1000; J. Biol. Chem. 2000, 275,
3065-3074; Mol. Gen. Genet. 1999, 261,
216-225; Chem. Biol. 1999, 6,
19-30; J. Bacteriol. 1999, 181,
642-647; J. Bacteriol. 1998, 180,
4929-4937; J. Bacteriol. 1997, 179,
3354-3357; Mol. Gen. Genet. 1996, 251,
692-698; Gene 1996, 172,
87-91). Un ejemplo de cepa del apartado (b), que
puede ser utilizada en la presente invención, es Streptomyces
argillaceus M7U1, que fue obtenida a partir de Streptomyces
argillaceus mediante inactivación del gen mtmU (Mol.
Gen. Genet. 2001, 264, 827-835). El gen
mtmU codifica una 4-cetorreductasa implicada
en biosíntesis de D-oliosa, y su inactivación
resulta en acumulación de premitramicinona y premitramicina A. Otro
ejemplo de cepa del apartado (b) es Streptomyces argillaceus
M7W1, que fue obtenida a partir de Streptomyces argillaceus
mediante inactivación del gen mtmW (US 2005/0192432 Al;
J. Am. Chem. Soc. 2003, 125, 5745-5753). El
gen mtmW codifica una cetorreductasa, y su inactivación
resulta en acumulación de
desmicarosil-MTM-SK,
MTM-SA, MTM-SDK, y
MTM-SK.
La introducción de ácidos nucleicos en
Streptomyces argillaceus (o en cepas derivadas) se puede
realizar mediante transformación de protoplastos, conjugación, u
otros métodos conocidos (tales como lo descritos en Practical
Streptomyces genetics, The John Innes Foundation, Norwich,
Gran Bretaña, 2000), de tal forma que los ácidos nucleicos son
replicables en el organismo, bien en forma de elemento
extracromosómico o bien integrados en el cromosoma del organismo.
Dichos ácidos nucleicos codifican enzimas para la biosíntesis de
diferentes azúcares; dichos azúcares no son producidos normalmente
por Streptomyces argillaceus. Ejemplos de ácidos nucleicos
utilizables para la presente invención son los contenidos en los
siguientes plásmidos (los cuales son citados a modo de ejemplos):
pLNBIV (Chem. Biol. 2002, 9, 721-729; J.
Nat. Prod. 2002, 65, 1685-1689), pRHAM (J.
Mol. Microbiol. Biotechnol. 2000, 2, 271-276),
pLN2 (Chem. Biol. 2002, 9, 721-729), pLNR
(Chem. Biol. 2002, 9, 721-729), y pFL845
(Chem. Commun. (Camb). 2005 Mar 28;
(12):1604-6). Los plásmidos citados contienen
ácidos nucleicos que codifican enzimas para la biosíntesis de los
siguientes azúcares (en forma de derivados NDP), respectivamente:
L-digitoxosa, L-rhamnosa,
L-olivosa, D-olivosa, y
D-amicetosa. Sin embargo, otros ácidos nucleicos
pueden usarse en la presente invención, que codifiquen enzimas para
la biosíntesis de otros azúcares no citados.
Las cepas bacterianas de esta invención pueden
ser cultivadas en cualquier medio adecuado, en condiciones que
permitan su crecimiento, tal como se describe en Gene 1996,
172, 87-91; J. Bacteriol. 1998, 180,
4929-4937; J. Am. Chem. Soc. 2003, 125,
5745-5753. Tras varios días de incubación, estos
cultivos contienen una cantidad elevada de células (micelio), junto
con una mezcla de compuestos, incluyendo derivados de MTM. A
continuación, los cultivos son sometidos a procesos para la
separación de una fase líquida (sobrenadante) y una fase sólida
(micelio). Seguidamente las dos fases son sometidas, separadamente,
a diversos procedimientos que pueden incluir extracción con
diversos solventes orgánicos, y varios tipos de cromatografias
(tales como HPLC, cromatografia líquida de alto rendimiento), con el
fin de obtener los derivados de MTM en forma de compuestos puros.
Los derivados de MTM son agentes antitumorales y también actúan
como agentes neuroprotectores.
Asimismo, la presente invención proporciona
compuestos caracterizados por la siguiente fórmula (I):
\vskip1.000000\baselineskip
donde
R_{1} es hidrógeno, hidroxilo (OH), un grupo
hidroxilo protegido con un grupo protector, un monosacárido de
fórmula (II)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
R_{2} es hidrógeno, un grupo protector, un
monosacárido de fórmula (III),
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
un monosacárido de fórmula
(IV),
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
un disacárido de fórmula
(V),
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
un disacárido de fórmula
(VI),
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
o un disacárido de fórmula
(VII).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
R_{3}, R_{4}, R_{5}, R_{6}, R_{7} y
R_{8}, R_{10}, R_{11}, R_{12}, R_{13}, R_{14}, R_{15},
R_{16}, R_{17}, R_{18}, R_{19}, R_{20}, R_{21},
R_{22}, R_{23} y R_{24} son cada uno e independientemente,
hidrógeno o un grupo protector;
R_{9} es hidrógeno, un grupo metilo, o un
grupo alquilo; y
la estereoquímica de los carbonos a, b, c, d y e
es R, S o mezcla de ambos.
\vskip1.000000\baselineskip
El grupo protector puede consistir en un grupo
alquilo, un grupo cicloalquilo, un grupo cicloalquilo
heterocíclico, un grupo hidroxialquilo, un grupo alquilo
halogenado, un grupo alcoxialquilo, un grupo alquenilo, un grupo
alquinilo, un grupo arilo, un grupo arilo heterocíclico, un grupo
alquilarilo, un grupo éster, un grupo carbonato, un grupo ácido
carboxílico, un grupo aldehído, un grupo cetona, un grupo uretano,
un grupo sililo, un grupo sulfoxo o una combinación de ellos.
Los compuestos de fórmula (I) incluyen aquellos
donde:
R_{3}, R_{4}, R_{5} y R_{6} son
hidrógeno; o bien
R_{3}, R_{4}, R_{5}, R_{6}, R_{7} y
R_{8} son hidrógeno; o bien
R_{9} es metilo; o bien
la estereoquímica en los carbonos a, b, c y d es
S, y la estereoquímica en el carbono e es R; o bien
R_{3}, R_{4}, R_{5}, R_{6}, R_{7},
R_{8}, R_{10}, R_{11}, R_{12}, R_{13}, R_{14}, R_{15},
R_{16}, R_{17}, R_{18}, y R_{19} son hidrógeno, R_{9} es
metilo, la estereoquímica en los carbonos a, b, c y d es S, y la
estereoquímica en el carbono e es R.
En particular, la presente invención
proporciona, entre otros, los compuestos con las siguientes
fórmulas (VIII, IX, X, XI, XII, XIII):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos de la invención son inhibidores
de crecimiento de tumores y son por tanto útiles en el tratamiento
del cáncer.
De esta forma, son objeto de la presente
invención las composiciones farmacéuticas que comprenden una
cantidad efectiva de un compuesto de fórmula I o una sal o solvato
farmacéuticamente aceptable del mismo junto con un excipiente
farmacéuticamente aceptable.
Es también objeto de la presente invención el
uso de un compuesto de fórmula I o una sal o solvato
farmacéuticamente aceptable del mismo en la manufactura de un
medicamento.
Es también objeto de la presente invención el
uso de un compuesto de fórmula I o una sal o solvato
farmacéuticamente aceptable del mismo para inhibir el crecimiento
de un tumor.
Tal como es usado aquí, "inhibir" significa
disminuir, hacer más lento, o detener. Por tanto, un compuesto de
esta invención puede disminuir, hacer más lento, o detener el
crecimiento de una célula tumoral. Tal como es usado aquí,
"crecimiento" significa aumento en tamaño, o proliferación, o
ambos. Por tanto, un compuesto de esta invención puede inhibir el
aumento de tamaño de una célula tumoral y/o puede impedir que la
célula tumoral se divida y aumente el número de células tumorales.
Una "célula tumoral" es una célula que constituye un neoplasma
(crecimiento nuevo), el cual puede ser canceroso (maligno) o no
canceroso (benigno). Una célula tumoral cancerosa puede invadir los
tejidos normales a su alrededor y los vasos sanguíneos/linfáticos y
formar metástasis en tejidos alejados del tumor original. Por el
contrario, una célula tumoral no cancerosa puede crecer y comprimir
los tejidos normales adyacentes pero no puede invadir tejidos
normales y vasos sanguíneos/linfáticos, y tampoco puede formar
metástasis en tejidos alejados del tumor original.
Es también objeto de la presente invención el
uso de un compuesto de fórmula I o una sal o solvato
farmacéuticamente aceptable del mismo para tratar el cáncer.
Es también objeto de la presente invención el
uso de un compuesto de fórmula I o una sal o solvato
farmacéuticamente aceptable del mismo en la manufactura de un
medicamento con actividad antitumoral.
Es también objeto de la presente invención el
uso de un compuesto de fórmula I o una sal o solvato
farmacéuticamente aceptable del mismo en la manufactura de un
medicamento para el tratamiento del cáncer.
Es también objeto de la presente invención un
método de tratamiento de un sujeto, incluyendo un ser humano,
diagnosticado con cáncer, que consiste en tratar a dicho sujeto con
una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula I
o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable.
Tal como es usado aquí, un "sujeto" puede
incluir animales domesticados (por ejemplo, gatos, perros, etc.),
ganado (por ejemplo, vacas, caballos, cerdos, ovejas, cabras,
etc.), animales de laboratorio (por ejemplo, ratones, conejos,
cobayas, etc.) y pájaros. De manera preferente, el sujeto es un
mamífero tal como un primate y, con mayor preferencia, un ser
humano.
En general, una "cantidad efectiva" de un
compuesto es aquella cantidad necesaria para conseguir el resultado
deseado. Por ejemplo, la cantidad efectiva de un compuesto de la
presente invención trata el cáncer mediante la inhibición del
crecimiento de las células que constituyen el tumor, con lo que
previene la invasión de tejidos normales y vasos
sanguíneos/linfáticos por parte de las células tumorales y, por
tanto, previene metástasis. Ejemplos de cánceres que pueden ser
tratados incluyen, pero no están limitados a, pulmón, colon, ovario,
próstata, testículo, melanoma, riñón, mama, sistema nervioso
central y leucemia. La expresión "composición farmacéutica
aceptable" consiste en un material adecuado biológicamente, es
decir, que el material puede ser administrado al sujeto sin
causarle efectos biológicos sustancialmente dañinos.
Las dosis o cantidades de los compuestos de la
invención deben ser suficientemente grandes para producir el efecto
deseado. Sin embargo, la dosis no debe ser tan grande que cause
efectos secundarios adversos, por ejemplo reacciones cruzadas
indeseadas, reacciones anafilácticas, y similares. Generalmente, la
dosis variará con la edad, condición, sexo y el grado de la
enfermedad del sujeto, y puede ser determinada por cualquier
experto en la materia. La dosis puede ser ajustada por cada médico,
en base a la condición clínica del sujeto implicado. La dosis,
régimen de dosificación y ruta de la administración pueden
variarse. Las dosis y el régimen de dosificación actualmente
empleados para la MTM proporcionan una guía para las dosis y el
régimen de dosificación que pueden emplearse para los nuevos
derivados de MTM (ver por ejemplo Cancer Treat. Rep. 1979,
.63, 1835-1838; Ann. Intern. Med. 1975, 83,
659-660).
Es también objeto de la presente invención el
uso de un compuesto de fórmula I o una sal o solvato
farmacéuticamente aceptable del mismo en la manufactura de un
medicamento para el tratamiento de la enfermedad de Paget.
Es también objeto de la presente invención un
método de tratamiento de un sujeto, incluyendo un ser humano,
diagnosticado con la enfermedad de Paget, que consiste en tratar a
dicho sujeto con una cantidad terapéuticamente efectiva de un
compuesto de fórmula I o una sal o solvato farmacéuticamente
aceptable. El sujeto puede ser un mamífero, preferentemente un ser
humano, y el compuesto puede ser, entre otras vías, administrado
parenteralmente.
Es también objeto de la presente invención el
uso de un compuesto de fórmula I o una sal o solvato
farmacéuticamente aceptable del mismo en la manufactura de un
medicamento para el tratamiento de la hipercalcemia.
Es también objeto de la presente invención un
método de tratamiento de un sujeto, incluyendo un ser humano,
diagnosticado con hipercalcemia, que consiste en tratar a dicho
sujeto con una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de
fórmula I o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable. El
sujeto puede ser un mamífero, preferentemente un ser humano, y el
compuesto puede ser, entre otras vías, administrado
parenteralmente.
Es también objeto de la presente invención el
uso de un compuesto de fórmula I o una sal o solvato
farmacéuticamente aceptable del mismo en la manufactura de un
medicamento para el tratamiento de la hipercalciuria.
Es también objeto de la presente invención un
método de tratamiento de un sujeto, incluyendo un ser humano,
diagnosticado con hipercalciuria, que consiste en tratar a dicho
sujeto con una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de
fórmula I o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable. El
sujeto puede ser un mamífero, preferentemente un ser humano, y el
compuesto puede ser, entre otras vías, administrado
parenteralmente.
Es también objeto de la presente invención el
uso de un compuesto de fórmula I o una sal o solvato
farmacéuticamente aceptable del mismo en la manufactura de un
medicamento para el tratamiento de enfermedades neurológicas.
Es también objeto de la presente invención un
método de tratamiento de un sujeto, incluyendo un ser humano,
diagnosticado con una enfermedad neurológica, que consiste en
tratar a dicho sujeto con una cantidad terapéuticamente efectiva de
un compuesto de fórmula I o una sal o solvato farmacéuticamente
aceptable. El sujeto puede ser un mamífero, preferentemente un ser
humano, y el compuesto puede ser, entre otras vías, administrado
parenteralmente.
Ejemplos de enfermedades neurológicas que pueden
ser tratadas incluyen, pero no están limitados a, enfermedades
neurodegenerativas tales como las de Parkinson, Alzheimer, y
Huntington.
Los compuestos de la invención pueden ser útiles
para la investigación en bioquímica o biología celular. Por
ejemplo, los compuestos pueden ser útiles para bloquear la
expresión de c-Src (y otros enzimas dependientes de
SpI) en osteoclastos u otros tipos celulares.
Cualquiera de los compuestos de la invención
puede ser utilizado terapéuticamente formando parte de una
composición farmacéutica aceptable. Cualquier experto en la materia
puede crear composiciones farmacéuticas aceptables, las cuales
pueden consistir en soluciones estériles en agua, soluciones
salinas, o soluciones tamponadas a pH fisiológico. Cualquiera de
los compuestos de la invención puede ser preparado en forma de
composición farmacéutica. Las composiciones farmacéuticas pueden
incluir diversos agentes transportadores, espesantes, diluentes,
tamponantes, conservantes, tensoactivos, y otros, además del
compuesto de la invención. Las composiciones farmacéuticas pueden
incluir también ingredientes activos tales como agentes
antimicrobianos, antiinflamatorios, anestésicos, etc.
Los compuestos de la invención pueden ser
administrados al sujeto de varias maneras distintas, dependiendo de
si se desea que el tratamiento sea local o sistémico, y dependiendo
del área a ser tratada. Así, por ejemplo, un compuesto de la
presente invención puede ser administrado en forma de solución
oftálmica, de aplicación en la superficie del ojo. Además un
compuesto puede ser administrado a un sujeto por vía vaginal,
rectal, intranasal, oral, por inhalación, o por vía parenteral, ya
sea por ruta intradermal, subcutánea, intramuscular,
intraperitoneal, intrarrectal, intraarterial, intralinfática,
intravenosa, intratecal e intratraqueal. La administración
parenteral, si se emplea, se realiza generalmente mediante
inyección. Los inyectables pueden ser preparados de diversas
formas, tales como soluciones o suspensiones líquidas, formas
sólidas adecuadas para ser disueltas o puestas en suspensión antes
de la inyección, o como emulsiones. Otras formas de administración
parenteral emplean sistemas de liberación lenta o sostenida, de tal
forma que se consigue mantener una dosis constante (ver, por
ejemplo, patente US 3,710,795). Las preparaciones para la
administración parenteral incluyen soluciones estériles acuosas o no
acuosas, suspensiones, y emulsiones, que además pueden contener
tampones y aditivos diluentes y otros. Ejemplos de solventes no
acuosos son: propilenglicol, polietilenglicol, aceites vegetales
tales como el aceite de oliva, y ésteres orgánicos inyectables
tales como etiloleato. Ejemplos de solventes acuosos son: agua,
soluciones alcohólico-acuosas, emulsiones o
suspensiones, incluyendo soluciones salinas y tamponadas. Ejemplos
de vehículos parenterales son: solución de cloruro sódico, dextrosa
de Ringer, cloruro de sodio y dextrosa, etc. También pueden estar
presentes conservantes y otros aditivos, tales como, por ejemplo,
agentes antimicrobianos, antioxidantes, quelantes, gases inertes,
etc. Las formulaciones para administración tópica pueden incluir
cremas, lociones, geles, gotas, supositorios, sprays, líquidos y
polvos. También pueden ser necesarios o deseables ciertos
transportadores farmacéuticos convencionales, bases acuosas,
oleosas, o en polvo, espesantes, etc. Las composiciones para
administración oral pueden incluir polvos o gránulos, suspensiones
o soluciones en agua o medio no acuoso, cápsulas, o tabletas. Puede
ser deseable la inclusión de agentes espesantes, saborizantes,
diluentes, emulsionantes, dispersantes, etc.
Para una mejor comprensión de la presente
invención, se exponen los siguientes ejemplos, descritos en
detalle, que deben entenderse sin carácter limitativo del alcance
de la invención.
La cepa Streptomyces argillaceus (pLNBIV)
se generó mediante la introducción del plásmido pLNBIV en
Streptomyces argillaceus ATCC 12956. La introducción del
plásmido se realizó mediante transformación de protoplastos,
siguiendo procedimientos estándar (Kieser et al., Practical
Streptomyces genetics, The John Innes Foundation, Norwich,
Gran Bretaña, 2000). El plásmido pLNBIV ha sido descrito con
anterioridad, y contiene una serie de genes que codifican la
biosíntesis de nucleosidildifosfato
(NDP)-L-digitoxose (Chem.
Biol. 2002, 9, 721-729; J. Nat. Prod.
2002, 65, 1685-1689). La cepa Streptomyces
argillaceus (pLNBIV) fue depositada con fecha 15/11/2006 en la
Colección Española de Cultivos Tipo (CECT), Universidad de
Valencia, Campus de Burjassot, 46100 Burjassot (Valencia, España)
con el número de acceso CECT 3384.
Para la purificación de los derivados de MTM, la
cepa S. argillaceus (pLNBIV) fue cultivada en medio R_{5}A
empleando un método de cultivo en dos pasos, tal como se ha
descrito anteriormente (J. Bacteriol. 1998, 180,
4929-4937). En el paso de producción, se emplearon
8 matraces Erlenmeyer de 2 litros, cada uno de ellos conteniendo
400 ml de medio, los cuales fueron incubados durante 5 días. Los
cultivos fueron centrifugados y filtrados, y el caldo fue extraído
en fase sólida tal como se ha descrito (Chem. Biol. 2002, 9,
519-531). Las fracciones obtenidas fueron
analizadas por HPLC-MS empleando un equipo
cromatográfico acoplado a un espectrómetro de masas ZQ4000
(Waters-Micromass), usando como solventes
acetonitrilo y 0.1% ácido trifluoroacético (TFA) en agua, y una
columna de fase reversa (Symmetry C18, 2.1 x 150 mm, Waters). Las
muestras fueron eluídas con 10% acetonitrilo durante los primeros 4
min., seguido de un gradiente lineal 10-88%
acetonitrilo durante 26 min., a un flujo de 0.25 ml/min. La
detección y la caracterización espectral de los picos fue realizada
con un detector de fotodiodos y software Empower (Waters). Los
análisis de MS fueron hechos mediante ionización de electrospray en
modo positivo, con un voltaje de capilar de 3 kV y voltajes de cono
de 20 y 100 V. Aquellas fracciones que contenían derivados de MTM
(que eluían entre 45 y 55 min.) fueron reunidas y secadas en vacío.
Este extracto fue redisuelto y cromatografiado en una columna
p.Bondapak C18 de compresión radial (PrepPak Cartridge, 25 x 100
mm, Waters). Se empleó una elución isocrática con una mezcla de
acetonitrilo y 0.1% TFA en agua (42:58), a 10 ml/min. La
desmicarosil-3D-\beta-D-digitoxosil-MTM
y la 3A-desolivosil-MTM fueron
repurificadas en una columna semipreparativa (Symmetry C18, 7.8 x
300 mm, Waters) con elución isocrática con acetonitrilo y 0.1% TFA
en agua (37:63), a 3 ml/min. La
desoliosil-3C-\alpha-L-digitoxosil-MTM
y la
desoliosil-3C-\beta-D-micarosil-MTM
fueron también repurificadas empleando la misma columna y los
mismos solventes, pero cambiando la mezcla a 45:55. En todos los
casos, después de cada paso de purificación, los compuestos
recogidos eran diluidos 4 veces con agua y eran desalados y
concentrados mediante extracción en fase sólida, para ser
finalmente liofilizados. De esta manera se obtuvieron 14.3 mg de
desmicarosil-3D-\beta-D-digitoxosil-MTM,
5.8 mg de
desoliosil-3C-\alpha-L-digitoxosil-MTM,
3.3 mg de
desoliosil-3C-\beta-D-micarosil-MTM,
y 10.9 mg de
3A-desolivosil-MTM.
\newpage
Los productos se caracterizaron mediante
espectroscopia de NMR y espectroscopia de masas. Los espectros de
masas de ionización por electrospray (ESI-MS)
fueron adquiridos empleando un espectrómetro de masas Thermo
Finnigan LCQ, con introducción de la muestra por difusión directa.
La espectrometria de masas FAB ("fast atom bombardment") de
alta resolución, en modo positivo, fue adquirida empleando un
espectrómetro de masas modelo VG70SQ (con "double focusing
magnetic sector"). La espectrometria MS-MS sobre
ion pseudomolecular fue realizada en ambos modos +ve y -ve para
estudiar el patrón de fragmentación de la molécula. Los espectros
UV fueron obtenidos con un espectrómetro Varian CARY50, y los
espectros IR fueron obtenidos a partir de discos de KBr en un
espectrómetro Nicolet Magna 1R-560. Todos los datos
de NMR fueron obtenidos en pyridine d5, empleando un
instrumento Varian Inova de 400 MHz, excepto los espectros de
^{13}C de banda ancha, que fueron obtenidos a 50.3 y 75.4 MHz en
espectrómetros Varian Inova de 200 y 300 MHz, respectivamente. Los
valores \delta fueron ajustados en referencia a los picos del
solvente (\delta 8.74 ppm y \delta 150.35 ppm para NMR de
^{1}H y de ^{13}C, respectivamente). Todas las asignaciones de
NMR están basadas en espectros de ^{1}H y de ^{13}C empleando
espectros de ^{1}H, ^{13}C-HSQC y
CIGAR-HMBC, espectros
^{1}H,^{1}H-DQ-COSY y NOESY, lo
que permitió asignar sin ambigüedades todas las señales de NMR. La
desmicarosil-3D-\beta-D-digitoxosil-MTM
fue además estudiada mediante espectros 1D-TOCSY
para identificar separadamente los patrones de spin de los
azúcares. La estructura química de los compuestos se muestra
en
la Fig. 4.
la Fig. 4.
Análisis NMR y MS de
desmicarosil-3D-\beta-D-digitoxosil-MTM,
C_{51}H_{74}O_{24}. ESI-MS negativo
m/z (intensidad relativa):1069 (100) [M-H],
1105/1107 (22) [M+Cl^{-}], 939 (7)
[M-H-Azúcar IA].
ESI-MS positivo m/z (intensidad relativa):
1093 (100) [M+Na], 1109 (11) [M+K], 833 (7) [M+H-{Azúcar 1A y
1B}+Na], 811 (16) [M+H-Azúcar IA y IB], 681 (14)
[M+H-Trisacárido], 421 (18) [M+H-Tri
y disacárido]. HR-FAB m/z [M+Na^{+}]:
calculado, 1093.4467; obtenido, 1093.4447. UV/Vis (Metanol)
\lambdamax (\varepsilon): 412 (1532), 317 (1663), 279 (5112),
229 (5042) nm. IR(KBr) \nu 3420 (OH), 2920 (CH), 2848 (CH),
1716 (C=O), 1631 (C=O), 1514 (C=C), 1382, 1130, 1064 cm^{-1}. La
Tabla 1 muestra los datos de ^{1}H-NMR y
^{13}C-NMR.
Análisis NMR y MS de
desoliosil-3C-\alpha-L-digitoxosil-MTM,
C_{52}H_{76}O_{24}. ESI-MS negativo m/z
(intensidad relativa): 1083 (100) [M-H], 1119/1121
(26) [M+Cl^{-}]. ESI-MS positivo m/z
(intensidad relativa): 1107 (100) [M+Na^{+}], 1123 (13)
[M+K^{+}], 847 (5) [M+H-{Disacárido}+Na], 825 (27)
[M+H-Disacárido], 681 (11)
[M+H-Trisacárido], 551 (34)
[M+H-Azúcares 1A,1B,1D y 1E] y 421 (22)
[M+H-Tri y disacárido]. HR-FAB
m/z [M+Na^{+}]: calculado, 1107.4603; obtenido, 1107.4624.
UV/Vis (Metanol) \lambdamax (\varepsilon): 412 (2148), 317
(2491), 278 (6851), 230 (6420) nm. IR(KBr) \nu. 3409 (OH),
2924 (CH), 2850 (CH), 1716 (C=O), 1634 (C=O), 1514 (C=C), 1374,
1126, 1064 cm^{-1}. La Tabla 2 muestra los datos de
^{1}H-NMR y ^{13}C-NMR.
Análisis NMR y MS de
desoliosil-3C-\beta-D-micarosil-MTM,
C_{46}H_{66}O_{21}. ESI-MS negativo m/z
(intensidad relativa): 953 (100) [M-H].
ESI-MS positivo m/z (intensidad relativa):
977 (100) [M+Na^{+}], 993 (5) [M+K^{+}], 695 (8)
[M-Azúcar 1A y 1B], 681 (10)
[M-Azúcar 1C y 1D] y 421 (20)
[M+H-bis-disacárido].
HR-FAB m/z [M + Na^{+}]: calculado,
977.3745; obtenido, 977.3948. UV/Vis (Metanol) \lambdamax
(\varepsilon): 412 (1357), 316 (1629), 278 (3274), 230 (2982) nm.
IR (KBr) \nu 3425 (OH), 2924 (CH), 2850 (CH), 1716 (C=O), 1631
(C=O), 1514 (C=C), 1374, 1122, 1064 cm^{-1}. La Tabla 3 muestra
los datos de ^{1}H-NMR y
^{13}C-NMR.
Análisis NMR y MS de
3A-desolivosil-MTM,
C_{46}H_{66}O_{21}. ESI-MS negativo
m/z (intensidad relativa): 953 (100) [M-H],
989/991 (9) [M+Cl^{-}], 823 (5) [M- Azúcar 1B], 809 (8)
[M+H-Azúcar ID]. ESI-MS positivo
m/z (intensidad relativa): 955 (100) [M+Na^{+}], 993 (10)
[M+K^{+}], 833 (13) [M+H-{Azúcar 1D}+Na^{+}], 825 (11)
[M+H-Azúcar 1B], 695 (5)
[M+H-Azúcar 1A y 1B], 681 (25)
[M+H-Azúcar 1C y ID], 551 (50)
[M+H-Azúcares 1A,1B y 1D] y 421 (33)
[M+H-Tri y monosacárido]. HR-FAB
m/z [M+Na^{+}]: calculado, 977.3735; obtenido, 977.3950.
UV/Vis (Metanol) \lambdamax (\varepsilon): 412 (2178), 316
(2310), 278 (8099), 231 (7363) nm. IR (KBr) \nu 3421 (OH), 2924
(CH), 2850 (CH), 1716 (C=O), 1634 (C=O), 1514 (C=C), 1374, 1122,
1060 cm^{-1}. La Tabla 4 muestra los datos de
^{1}H-NMR y ^{13}C-NMR.
\vskip1.000000\baselineskip
La cepa Streptomyces argillaceus (pFL845)
se generó mediante la introducción del plásmido pFL845 en
Streptomyces argillaceus. La introducción del plásmido se
realizó mediante transformación de protoplastos, siguiendo
procedimientos estándar (Kieser et al., Practical
Streptomyces genetics, The John Innes Foundation, Norwich,
Gran Bretaña, 2000). El plásmido pFL845 ha sido descrito con
anterioridad, y contiene una serie de genes que codifican la
biosíntesis de nucleosidildifosfato
(NDP)-D-amicetosa (Chem. Commun.
(Camb). 2005 Mar 28;(12):1604-6). La cepa
Streptomyces argillaceus (pFL845) fue depositada con fecha
15/11/2006 en la Colección Española de Cultivos Tipo (CECT),
Universidad de Valencia, Campus de Burjassot, 46100 Burjassot
(Valencia, España) con el número de acceso CECT 3383.
\newpage
Para purificar los nuevos derivados de
mitramicina producidos por S. argillaceus (pFL845), se cultivó esta
cepa en 8 matraces de 2 L conteniendo 400 ml de medio R_{5}A
suplementado con tioestreptona (5 \mug/ml c.f). Tras 6 días de
incubación a 30°C, los cultivos se centrifugaron, filtraron y se
realizó una extracción en fase sólida. Posteriormente el extracto
se sometió a una primera cromatografia utilizando un cartucho
\muBondapak C18. La elución se realizó a 10 ml/min utilizando como
fase móvil una mezcla de acetonitrilo y TFA en agua (42:58). A
continuación se realizó una segunda cromatografia en Symmetry C18
(7.8 x 300), a 3 ml/min utilizando como fase móvil una mezcla de
acetonitrilo y TFA en agua (37:63, para 845-1 P1;
42:58, para 845-1 P3). Se obtuvo el siguiente
rendimiento: 16.1 mg de desmicarosil-MTM, y 4.3 mg
de
6-desdiolivosil-6-\beta-D-amicetosil-MTM.
Los productos fueron caracterizados por HPLC-MS, de
la forma descrita en el Ejemplo 2.
\vskip1.000000\baselineskip
Los derivados de MTM se ensayaron frente a una
serie de líneas celulares procedentes de tumores. Se determinó
cuantitativamente el crecimiento celular y la viabilidad,
utilizando un ensayo tipo colorimétrico, usando la reacción con
sulforrodamina B (SRB), según la técnica descrita por Faircloth y
colaboradores (Journal of Tissue and Culture Methods 1988,
11, 201-205). Los resultados se muestran en la
Tabla 5.
Se inoculan placas de "microtiter" de 96
pocillos, con células (5x10^{3} células por pocillo) en alícuotas
de 195 \mul de medio, incubándolas durante 18 h, en medio sin
compuesto añadido, para permitir que las células se adhieran a la
superficie. A continuación, se añaden los compuestos a ensayar, en
muestras de 5 \mul, en un rango de concentraciones de 10 a
10^{-8} \mug/ml, disueltas en DMSO/EtOH (0.2% en tampón PS).
Tras 48 h de exposición, se mide el efecto antitumoral utilizando la
técnica de SRB: se fijan las células añadiendo 50 \mul de ácido
tricloroacético frío al 50% (p/v) y se incuba durante 60 min. a
4°C. Las placas se lavan con agua desionizada y se secan. Se añaden
100 \mul de solución de SRB (0.4% p/v en ácido acético al 1%) a
cada pocillo, y se incuba durante 10 min. a temperatura ambiente.
Se elimina la SRB no unida, lavando con ácido acético al 1%. Las
placas se secan al aire y el colorante unido se disuelve con tampón
Tris. Se leen las densidades ópticas en un lector espectrofotómetro
de placas automático a una longitud de onda de 490 nm. En la Tabla
5 se muestran los resultados de las GI_{50} (inhibición del
crecimiento). Los seis compuestos ensayados mostraron actividad
citotóxica frente a las líneas tumorales ensayadas, siendo
desmicarosil-3D-\beta-D-digitoxosil-MTM
el más activo (con actividad similar a la de MTM), y
desmicarosil-MTM y
6-desdiolivosil-6-\beta-D-amicetosil-MTM
los menos activos.
\vskip1.000000\baselineskip
Fig. 1. Estructura química de la
mitramicina.
Fig. 2. Biosíntesis de mitramicina.
Abreviaturas: AcO, acetato; MalO, malonato; Mtm PKS, policétido
sintasa de mitramicina; preMTMone, premitramicinona;
preMTM-A3, premitramicina A3;
preMTM-B, premitramicina B; MTM, mitramicina.
Fig. 3A. Análisis por HPLC de un extracto de
Streptomyces argillaceus (pFL845). Identificador de los
picos: 1 = mitramicina (MTM); 2 = premitramicina A1 (preMTM); 3 =
desmicarosil-MTM [fórmula (XII)]; 4 =
6-desdiolivosil-6-\beta-D-amicetosil-MTM
[fórmula (XIII)];
Fig. 3B. Análisis por HPLC de un extracto de
Streptomyces argillaceus (pLNBIV). Identificador de los
picos: 1 = mitramicina (MTM); 2 = premitramicina A1 (preMTM); 3 =
desmicarosil-MTM [fórmula (XII)],
3A-desolivosil-MTM (XI), y
desmicarosil-3D-\beta-D-digitoxosil-MTM
[fórmula (VIII)]; 4 =
desoliosil-3C-\alpha-L-digitoxosil-MTM
[fórmula (IX)]; 5 =
desoliosil-3C-\beta-D-micarosil-MTM
[fórmula (X)].
Fig. 4. Estructuras químicas de
desmicarosil-3D-\beta-D-digitoxosil-MTM
(fórmula VIII),
desoliosil-3C-\alpha-L-digitoxosil-MTM
[fórmula (IX)],
desoliosil-3C-\beta-D-micarosil-MTM
[fórmula (X)], 3A-desolivosil-MTM
[fórmula (XI)], desmicarosil-MTM [fórmula (XII)], y
6-desdiolivosil-6-[3-D-amicetosil-MTM
[fórmula (XIII)].
Claims (56)
1. Un compuesto con la fórmula (I)
donde
R_{1} es hidrógeno, hidroxilo (OH), un grupo
hidroxilo protegido con un grupo protector, un monosacárido de
fórmula (II)
\vskip1.000000\baselineskip
R_{2} es hidrógeno, un grupo protector, un
monosacárido de fórmula (III),
\vskip1.000000\baselineskip
un monosacárido de fórmula
(IV),
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
un disacárido de fórmula
(V),
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
un disacárido de fórmula
(VI),
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
o un disacárido de fórmula
(VII).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
R_{3}, R_{4}, R_{5}, R_{6}, R_{7} y
R_{8}, R_{10}, R_{11}, R_{12}, R_{13}, R_{14}, R_{15},
R_{16}, R_{17}, R_{18}, R_{19}, R_{20}, R_{21},
R_{22}, R_{23} y R_{24} son cada uno e independientemente,
hidrógeno o un grupo protector;
R_{9} es hidrógeno, un grupo metilo, o un
grupo alquilo; y
la estereoquímica de los carbonos a, b, c, d y e
es R, S o mezcla de ambos.
2. El compuesto de la reivindicación 1, donde el
grupo protector abarque un grupo alquilo, un grupo cicloalquilo, un
grupo cicloalquilo heterocíclico, un grupo hidroxialquilo, un grupo
alquilo halogenado, un grupo alcoxialquilo, un grupo alquenilo, un
grupo alquinilo, un grupo arilo, un grupo arilo heterocíclico, un
grupo alquilarilo, un grupo éster, un grupo carbonato, un grupo
ácido carboxílico, un grupo aldehído, un grupo cetona, un grupo
uretano, un grupo sililo, un grupo sulfoxo o una combinación de
ellos.
3. El compuesto de la reivindicación 1, donde
R_{3}, R_{4}, R_{5} y R_{6} son hidrógeno.
4. El compuesto de la reivindicación 1, donde
R_{3}, R_{4}, R_{5}, R_{6}, R_{7} y R_{8} son
hidrógeno.
5. El compuesto de la reivindicación 1, donde
R_{9} es metilo.
6. El compuesto de la reivindicación 1, donde la
estereoquímica en los carbonos a, b, c y d es S, y la
estereoquímica en el carbono e es R.
7. El compuesto de la reivindicación 1, donde
R_{3}, R_{4}, R_{5}, R_{6}, R_{7}, R_{8}, R_{10},
R_{11}, R_{12}, R_{13}, R_{14}, R_{15}, R_{16},
R_{17}, R_{18}, y R_{19} son hidrógeno, R_{9} es metilo, la
estereoquímica en los carbonos a, b, c y d es S, y la estereoquímica
en el carbono e es R.
8. El compuesto de la reivindicación 1, con la
fórmula (VIII):
9. El compuesto de la reivindicación 1, con la
fórmula (IX):
\newpage
10. El compuesto de la reivindicación 1, con la
fórmula (X):
11. El compuesto de la reivindicación 1, con la
fórmula (XI):
12. El compuesto de la reivindicación 1, con la
fórmula (XII):
13. El compuesto de la reivindicación 1, con la
fórmula (XIII):
14. Cepas bacterianas derivadas de
Streptomyces argillaceus, caracterizadas porque cada
una de dichas cepas posee un ácido nucleico adicional que codifica
enzimas activos para la biosíntesis de azúcares que no están
presentes en Streptomyces argillaceus.
15. Una cepa bacteriana según la reivindicación
14, caracterizada porque dicha cepa es Streptomyces
argillaceus (pLNBIV).
16. Una cepa bacteriana de la reivindicación 14,
caracterizada porque dicho ácido nucleico es el plásmido
pLNBIV, el cual codifica enzimas activos para la biosíntesis de
nucleosidildifosfato-L-digitoxosa y
sus intermediarios biosintéticos.
17. Una cepa bacteriana según la reivindicación
14, caracterizada porque dicha cepa es Streptomyces
argillaceus (pFL845).
18. Una cepa bacteriana de la reivindicación 14,
caracterizada porque dicho ácido nucleico es el plásmido
pFL845, el cual codifica enzimas activos para la biosíntesis de
nucleosidildifosfato-D-amicetosa y
sus intermediarios biosintéticos.
19. Un método para obtener las cepas bacterianas
de la reivindicación 14, que comprende la introducción de un ácido
nucleico en Streptomyces argillaceus o en una cepa derivada
de Streptomyces argillaceus.
20. El método de la reivindicación 19, que
comprende la introducción del plásmido pLNBIV en Streptomyces
argillaceus.
21. El método de la reivindicación 19, que
comprende la introducción del plásmido pFL845 en Streptomyces
argillaceus.
22. Un método para producir derivados de
mitramicina, que comprende:
- a)
- incubar una cepa bacteriana de cualquiera de las reivindicaciones 14 a 18 para producir una composición que incluye un derivado de mitramicina; y
- b)
- aislar un derivado de mitramicina a partir de la composición producida en el paso (a).
23. Un método según la reivindicación 22,
caracterizado porque la cepa bacteriana es Streptomyces
argillaceus (pLNBIV).
24. Un método según la reivindicación 22,
caracterizado porque la cepa bacteriana es Streptomyces
argillaceus (pFL845).
25. Un método según la reivindicación 22,
caracterizado porque el derivado de mitramicina es
desmicarosil-3D-\beta-D-digitoxosil-mitramicina
[fórmula (VIII)].
26. Un método según la reivindicación 22,
caracterizado porque el derivado de mitramicina es
desoliosil-3C-\alpha-L-digitoxosil-mitramicina
[fórmula (IX)].
27. Un método según la reivindicación 22,
caracterizado porque el derivado de mitramicina es
desoliosil-3C-\beta-D-micarosil-mitramicina
[fórmula (X)].
28. Un método según la reivindicación 22,
caracterizado porque el derivado de mitramicina es
3A-desolivosil-mitramicina [fórmula
(XI)].
29. Un método según la reivindicación 22,
caracterizado porque el derivado de mitramicina es
desmicarosil-mitramicina [fórmula (XII)].
30. Un método según la reivindicación 22,
caracterizado porque el derivado de mitramicina es
6-desdiolivosil-6-\beta-D-amicetosil-mitramicina
[fórmula (XIII)].
31. Un compuesto derivado de mitramicina
obtenible según el método de la reivindicación 22.
32. Un compuesto derivado de mitramicina
caracterizado por ser producido por una cepa bacteriana de
cualquiera de las reivindicaciones 14 a 18.
33. Un compuesto derivado de mitramicina
caracterizado por ser producido por la cepa Streptomyces
argillaceus (pLNBIV) de la reivindicación 15.
34. Un compuesto derivado de mitramicina
caracterizado por ser producido por la cepa Streptomyces
argillaceus (pFL845) de la reivindicación 17.
35. Una preparación farmacéutica que comprende,
entre otros componentes, una cantidad terapéuticamente efectiva de
un compuesto de la reivindicación 1, o una sal, solvato o prodroga
farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con uno o más
excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables.
\newpage
36. Una preparación farmacéutica que comprende,
entre otros componentes, una cantidad terapéuticamente efectiva de
un compuesto de la reivindicación 32, o una sal, solvato o prodroga
farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con uno o más
excipientes o diluyentes farmacéuticamente aceptables.
37. Uso de un compuesto de fórmula I según la
reivindicación 1, o una sal, solvato o prodroga farmacéuticamente
aceptable del mismo en la manufactura de un medicamento útil en el
tratamiento del cáncer en un sujeto diagnosticado de dicha
enfermedad.
38. Uso según la reivindicación 37, donde el
sujeto es un ser humano.
39. Uso de la preparación farmacéutica de la
reivindicación 36 para preparar un medicamento destinado a tratar
el cáncer en un sujeto diagnosticado con dicha enfermedad.
40. Uso según de la reivindicación 39, donde el
sujeto es un ser humano.
41. Uso de la preparación farmacéutica de la
reivindicación 35 para preparar un medicamento destinado a tratar
la enfermedad de Paget en un sujeto diagnosticado con dicha
enfermedad.
42. Uso según de la reivindicación 41, donde el
sujeto es un ser humano.
43. Uso de la preparación farmacéutica de la
reivindicación 36 para preparar un medicamento destinado a tratar
la enfermedad de Paget en un sujeto diagnosticado con dicha
enfermedad.
44. Uso según de la reivindicación 43, donde el
sujeto es un ser humano.
45. Uso de la preparación farmacéutica de la
reivindicación 35 para preparar un medicamento destinado a tratar
hipercalcemia en un sujeto diagnosticado con dicha enfermedad.
46. Uso según de la reivindicación 45, donde el
sujeto es un ser humano.
47. Uso de la preparación farmacéutica de la
reivindicación 36 para preparar un medicamento destinado a tratar
hipercalcemia en un sujeto diagnosticado con dicha enfermedad.
48. Uso según de la reivindicación 47, donde el
sujeto es un ser humano.
49. Uso de la preparación farmacéutica de la
reivindicación 35 para preparar un medicamento destinado a tratar
hipercalciuria en un sujeto diagnosticado con hipercalciuria.
50. Uso según de la reivindicación 49, donde el
sujeto es un ser humano.
51. Uso de la preparación farmacéutica de la
reivindicación 36 para preparar un medicamento destinado a tratar
hipercalciuria en un sujeto diagnosticado con hipercalciuria.
52. Uso según de la reivindicación 51, donde el
sujeto es un ser humano.
53. Uso de la preparación farmacéutica de la
reivindicación 35 para preparar un medicamento destinado a tratar
una enfermedad neurológica en un sujeto diagnosticado con dicha
enfermedad.
54. Uso según de la reivindicación 53, donde el
sujeto es un ser humano.
55. Uso de la preparación farmacéutica de la
reivindicación 36 para preparar un medicamento destinado a tratar
una enfermedad neurológica en un sujeto diagnosticado con dicha
enfermedad.
56. Uso según de la reivindicación 55, donde el
sujeto es un ser humano.
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ADAMS, V. et al. "{}New Anti-tumor Mithramycins with Altered Saccharide Chain through Combinatorial Biosynthesis"{}. 2005 AAPS Annual Meeting and Exposition. Noviembre 2005. [recuperado el 22.04.2008]. Recuperado de Internet: <http://abstracts.aapspharmaceutica.com/ExpoAAPS05/CC/ forms/attendee/index.aspx?content=sessionInfo&sessionId=493> * |
CHATTERJEE, S. et al. "{}Sequence-Selective DNA Binding Drugs Mithramycin A and Chromomycin A3 Are Potent Inhibitors of Neuronal Apoptosis Induced by Oxidative Stress and DNA Damage in Cortical Neurons"{}. Annals of Neurology, 2001, Volumen 49, Número 3, páginas 345-354. Ver resumen. * |
FERNÁNDEZ LOZANO, M.J. et al. "{}Characterization of Two Polyketide Methyltransferases Involved in the Biosynthesis of the Antitumor Drug Mithramycin by Streptomyces argillaceus"{}. The Journal of Biological Chemistry, 2000, Volumen 275, Número 5, páginas 3065-3074. Ver especialmente página 3065. * |
LOMBÓ, F. et al. "{}Engineering Biosynthetic Pathways for Deoxysugars: Branched-Chain Sugar Pathways and Derivatives from the Antitumor Tetracenomycin"{}. Chemistry & Biology, 2004 Volumen 11, páginas 1709-1718. Ver página 1711, columna 2. * |
O'CONNOR, S. "{}Aureolic Acids: Similar Antibiotics with Different Biosynthetic Gene Clusters"{}. Chemistry & Biology, 2004, Volumen 11, páginas 8-10. * |
SHASHKOV, A.S. et al. "{}Structure of antitumor antibiotic variamycin"{}. Bioorganicheskaya Khimiya, 1991, Volumen 17, Número 3, páginas 410-416. (resumen) HCAPLUS [en línea] [recuperado el 22.04.2008]. Recuperado de STN International, Columbus, Ohio (EE UU). N$^{o}$ de acceso: 1991:472059. Ver también compuestos I y III (página 411) en el documento original. * |
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