ES2300321T3 - Vacuna para peces contra piscirickettsia salmonis. - Google Patents

Vacuna para peces contra piscirickettsia salmonis. Download PDF

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Nathalie Simard
Huub Brouwers
Simon Jones
Steve Griffiths
Pablo Valenzuela
Luis Burzio
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Abstract

Una secuencia de ácido nucleico derivada de Piscirickettsia salmonis que consiste de una secuencia seleccionada del grupo que consiste de los números de ID de SECUENCIA: 1, 3, 5, 7, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26 y 28 y análogos de éstos preparados de forma sintética.

Description

Vacuna para peces contra Piscirickettsia salmonis.
La presente solicitud describe una vacuna para peces. Más específicamente una vacuna para proteger salmones contra piscirickettsiosis también referida como septicemia rickettsiana salmónida (SRS).
Se reconoce, por ejemplo, en Jones et al. (1998) Dis Aquat. Org: 33:25-31, que existen similitudes antigénicas entre cepas de organismos similares a rickettsial en salmónidos. Marshall et al. (1998) App. Env. Micro, 64, 8, 3066-3069 también describe un ensayo de selección para Piscirickettsia salmonis.
Sin embargo, hasta la fecha no hay vacunas comercialmente disponibles efectivas contra Piscirickettsia salmonis, el agente causante del SRS. De acuerdo con esto subsiste la necesidad para una vacuna efectiva contra Piscirickettsia salmonis.
La presente solicitud describe una vacuna para peces. Más específicamente una vacuna de ácido nucleico para administración a peces para protegerlos contra piscirickettsiosis también referida como septicemia rickettsiana salmónida (SRS).
La solicitud describe adicionalmente una secuencia de aminoácido para la administración a peces para protegerlos contra SRS.
La presente invención proporciona por lo menos una secuencia de ácido nucleico y/o una secuencia de aminoácido que se deriva de Piscirickettsia salmonis, o un análogo preparado de forma sintética de éste o una secuencia sustancialmente homóloga.
Una secuencia de ácido nucleico sustancialmente homóloga es una secuencia que se puede transcribir y/o traducir para proporcionar una secuencia de aminoácido que es sustancialmente homóloga con por lo menos una parte de un antígeno de superficie presente en Piscirickettsia salmonis.
Una secuencia de aminoácido sustancialmente homóloga corresponde a por lo menos el 70% de un antígeno de superficie e induce una respuesta inmune.
Más preferiblemente la secuencia de aminoácido homóloga corresponde a por lo menos el 90% de la secuencia de aminoácido.
Una secuencia de ácido nucleico típica se selecciona de las secuencias de Psclone51A p 10.6 (también conocido como clon inmuno-reactivo 0110-2-5), IcmE, clone3/original, clone3/3PST-R, clone3,3APA-F, clone7/original, clone7/XbaR, clone7/7MunR, clone7/7MunF, clone20/original, clone20/20VSPF o clon 15. Típicamente la secuencia de aminoácido se deriva de una de las secuencias de ácido nucleico anteriormente mencionada o se selecciona de las secuencias del antígeno p45 o HSP70.
Preferiblemente las secuencias de péptido o secuencias de ácido nucleico se identifican aquí como números ID de secuencia 1, 3, 5, 7, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26 y 28.
La solicitud describe el uso de secuencias de ácido nucleico o secuencia de péptido como se define aquí en la preparación de una vacuna para la protección de peces contra Piscirickettsia salmonis.
Una vacuna para proteger peces contra Piscirickettsia salmonis en donde la vacuna incluye secuencias de ácido nucleico o péptido como se define aquí.
Antecedente de la invención
Barnes et al. (1998) Dis. Aquat. Org. 33, 33-41 y Kuzyk et al. (1996) Infect. And Immunity, 64, 12, 5205-5210 suministra caracterización de algunas secuencias de Piscirickettsia salmonis, ninguna de las cuales tiene homología significativa con las secuencias de la presente invención.
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La Tabla 1 proporciona la SEQ ID No. y el número de Figura correspondiente para las secuencias de la presente invención.
TABLA 1 SEQ ID No. y Número de Figura
1
SEQ ID No. 1,2,3,4 - Psclone 51A
Una descripción detallada de la invención, que lista la secuencia de nucleótido exacta del Psclone 51A y la secuencia de aminoácido deducida para el cuadro de lectura abierto (ORF), se proporciona en las figuras 1, 2 y 3. La secuencia genética se ha derivado del cADN clonado en donde los clones de cADN se derivan de la cepa del tipo Piscirickettsia salmonis, (LF-89) ARN mensajero (mARN). El material clonado se secuencia en ambas direcciones desde los sitios de inserción 5' y 3' utilizando superposición de amplicones.
La veracidad de la secuencia del Psclone51A se confirma por Reacción de Cadena de Polimerasa (PCR) y PCR de Transcriptasa Inversa (RT-PCR) de ampliaciones de tamaño apropiado de línea celular embriónica (CHSE-214) de salmón Chinook infectado con Piscirickettsia salmonis y no de material de control no infectado. La expresión de la secuencia clonada ha producido una proteína de aproximadamente 12 kDa.
El ORF del Psclone51A descrito en la figura 1 no tiene ninguna homología significante en el nivel de nucleótido con presentaciones previas para bases de datos accesibles por BLAST. En el nivel de proteína, se encuentra una similitud de línea límite con una proteína de 21,5 kDa hipotética de Escherichia coli.
El ORF tiene valor comercial por las siguientes razones:
Hay razón suficiente para creer que el nucleótido que corresponde a la secuencia de aminoácido es de origen Piscirickettsia salmonis. Como tal su incorporación en las vacunas de ácido nucleico puede tener un impacto en la reducción de la mortalidad de salmón Atlántico cultivado originado por Piscirickettsia salmonis. La caracterización del producto de gen conducirá a la identificación de los elementos claves en la patogenia de la infección y con el diseño de más pruebas de diagnóstico más aguadas que también ayudarán en estudios epidemiológicos que documentan la diseminación de diferentes cepas de esta enfermedad.
La secuencia de nucleótido Psclone51A y los derivados asociados de ésta cuando se traducen en la secuencia de proteína se componen de aminoácidos idénticos o equivalentes, que deben inducir una respuesta por el sistema inmune del anfitrión. Este principio se puede expandir adicionalmente para utilizar estas proteínas en pruebas de diagnóstico y procedimientos de vacunación.
ID de Secuencia No. 5 y 6 - p. 10.6
Una descripción detallada de la invención, que lista la secuencia de nucleótido exacta de p10.6 y la secuencia de aminoácido deducida para el cuadro de lectura abierto (ORF), se proporciona en la figura 4 y figura 5 respectivamente.
La secuencia genética de Piscirickettsia salmonis (cepa ATCC VR-1361), que crece en células CHSE-214 que utilizan antisuero homólogo de conejos inmunizados con Piscirickettsia salmonis, un clon inmuno-reactivo (0110-230 5) (plo.6) se identifica de la colección de expresión. Este clon se secuencia y desarrolla los cebadores de reacción de cadena de polimerasa (PCR).
El origen de la Piscirickettsia salmonis de clon p10.6 se confirma a través de amplificación PCR de ADN de línea celular embriónica de salmón Chinook (CHSE-214) y Piscirickettsia salmonis utilizando cebadores de clon específicos. Los amplicones de tamaño apropiado se amplifican a partir del ADN de Piscirickettsia salmonis 8, pero no del ADN de CHSE-214 que confirma que el clon inmuno-reactivo es de origen Piscirickettsia salmonis y no del ADN de la célula de anfitrión.
El cuadro de lectura abierto (ORF) para el gen completo se termina por PCR inverso a partir de ADN de Piscirickettsia salmonis genómico.
El ORF del p10.6 descrito en la figura 4 no tiene ninguna homología significativa en el nivel de nucleótido con anteriores presentaciones a bases de datos accesibles por BLAST. La secuencia de aminoácido derivada, pero no la secuencia de nucleótido, muestra homología significativa con el antígeno 17 kDa encontrado en Rickettsia del Grupo de la Fiebre Exantemática, donde se considera un grupo de proteína de membrana externa, específica.
ID de Secuencia No. 7 y 8 - IcmE (403)
Una secuencia de ácido nucleico típica es IcmE (403).
Las secuencias de péptido trascritas o traducidas de las secuencias de ácido nucleico de IcmE (403) se pueden incorporar en una estrategia de vacunación para inducir una respuesta inmune a un antígeno de superficie de Piscirickettsia salmonis en sí misma.
Una descripción detallada de la invención, que lista la secuencia del nucleótido exacta del IcmE (403) y la secuencia de aminoácido deducida para el cuadro de lectura abierta (OFR), se proporciona en la figura 6.
La secuencia genética se ha derivado de un producto de reacción de cadena de polimerasa inversa (IPCR) amplificado a partir del ADN genómico (gADN) de la cepa del tipo Piscirickettsia salmonis (LF-89). El producto IPCR se secuencia en ambas direcciones de los lados 5' y 3' utilizando amplicones sobrepuestos.
La proteína codificada por el ORF del IcmE (403) tiene una homología significativa del 37% en el nivel de proteína con la proteína IcmE de Legionella pneumophila cuando se compara con presentaciones anteriores a bases de datos accesibles por BLAST.
ID de Secuencia No. 9 -p45
Una secuencia de aminoácido típica es p45.
Una secuencia de ácido nucleico que transcribe la secuencia de aminoácido de p45 se puede incorporar en una estrategia de vacunación para inducir una respuesta inmune a un antígeno de superficie contra Piscirickettsia salmonis y así para Piscirickettsia salmonis en sí misma.
Una descripción detallada de la invención, que lista la secuencia de aminoácido exacta de una porción del antígeno mayor de p45, se proporciona en la figura 7. La secuencia de aminoácido se ha derivado de la microsecuenciación de una proteína de aproximadamente 45 kDa encontrada por ser inmunoreactiva a anticuerpos anti-P salmonis de conejo. Más aún, el p45 se encuentra únicamente en células embriónicas de salmón Chinook (SHSE-214) infectadas con Piscirickettsia salmonis y no en células CHSE-214.
La secuencia de aminoácido de la p45 no tiene homología significativa con otras proteínas bacterianas cuando se compara con presentaciones anteriores a bases de datos accesibles por BLAST.
ID de Secuencia No. 10, 11, 12, 13, 14 y 15 -clone 3
Una secuencia de ácido nucleico típica es clone3/original, clone 3/3PST-R y clone 3.3APA-F que corresponde a la SEQ ID No. 10, SEQ ID No. 12 y SEQ ID No. 14, respectivamente.
Las secuencias de péptido trascritas o traducidas de la secuencia de ácido nucleico de clone3/original, clone 3/3PST-R y clone 3.3APA-F se pueden incorporar en una estrategia de vacunación para inducir una respuesta inmune a una antígeno de superficie de ADN genómico de Piscirickettsia salmonis (gADN). Las secuencias de aminoácido correspondientes para el clone3/original, clone 3/3PST-R y clone 3.3APA-F son SEQ ID No. 11, SEQ ID No. 13 y SEQ ID No. 15, respectivamente.
Las proteína codificadas por el ORF del clone3/original, clone3/3PST-R y clone3.3APA-F tienen respectivamente 40%, 38% y 34% de homología significativa en el nivel de proteína para la porción diferente de la proteína transposase de Vibrio anguillarum (gb AAA81776.1) cuando se compara con presentaciones anteriores a bases de datos accesibles por BLAST.
SEQ ID No. 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 y 23 -clone 7
Una secuencia de ácido nucleico típica es clone7/original, clone 7/7XbaR, y clone7/7MunR y clone 7/7MunF que corresponden a la SEQ ID No. 16, SEQ ID No. 18, SEQ ID No. 20 y SEQ ID No. 22, respectivamente.
Las secuencias de péptido trascritas o traducidas de la secuencia de ácido nucleico del clone7/original, clone7/7XbaR, clone7/7MunR, y clone 7/7MunF se pueden incorporar en una estrategia de vacunación para inducir una respuesta inmune a un antígeno de superficie de Piscirickettsia salmonis y así para Piscirickettsia salmonis en sí misma.
Una descripción detallada de la invención, que lista la secuencia de nucleótido extraída del clone7/original, clone7/7XbaR, clone7/7MunR, y clone 7/7MunF y la secuencia de aminoácido deducida para sus cuadros de lectura abierto (ORF), se proporcionan en las figuras 11, 12, 13 y 14 respectivamente.
Las secuencias de aminoácido correspondientes al 7/original, clone7/7XbaR, clone7/7MunR, y clone 7/7MunF son las SEQ ID No. 17, SEQ ID No. 19, SEQ ID No. 21 y SEQ ID No. 23, respectivamente.
Algunas de las secuencias genéticas se han derivado de un producto de reacción de cadena de polimerasa inversa (IPCR) amplificado del ADN genómico de Piscirickettsia salmonis (gADN). Los péptidos codificados por el ORF del clone7/original, clone7/7XbaR, clone7/7MunR, y clone 7/7MunF tienen un 40% a 44% de homología significativa en el nivel de proteína para diferentes porciones de la proteína de unión ATP del transportador ABC de otras especies bacterianas cuando se compara con presentaciones anteriores a bases de datos accesibles por BLAST. Existe una razón suficiente para creer que el nucleótido y la secuencia de aminoácido correspondiente son de origen Piscirickettsia salmonis. También, parte de los ORF se encuentra en un clon inmuno-reactivo de una COLECCIÓN de
expresión.
ID de Secuencia No. 24, 25, 26, y 27 - clone 20
Una secuencia de ácido nucleico típica es clone20/original y clone 20/20VSPF que corresponden a la SEQ ID No. 24 y SEQ ID No. 26 respectivamente.
Las secuencias de péptido trascritas o traducidas de la secuencia de ácido nucleico del clone20/original y clone20/20VSPF se pueden incorporar en una estrategia de vacunación para inducir una respuesta inmune a un antígeno de superficie de Piscirickettsia salmonis y así para Piscirickettsia salmonis en sí misma.
Una descripción detallada de la invención, que lista la secuencia de nucleótido exacta del clone20/original, y clone 20/20VSPF y la secuencia de aminoácido deducida para sus cuadros de lectura abierto (ORF), se proporcionan en la figura 15 y figura 16 respectivamente.
Las secuencias de aminoácido correspondientes para el clone20/original y clone 20/20VSPF son las SEQ ID No. 25 y SEQ ID No. 27 respectivamente.
Algunas de las secuencias genéticas se han derivado de un producto de reacción de cadena de polimerasa inversa (IPCR) amplificado a partir de ADN genómico de Piscirickettsia salmonis (gADN).
Los péptidos codificados por el ORF del clone20/original y clone20/20VSPF tienen un 41% y 51% de homología significativa en el nivel de proteína con un aminoácido transportador/proteína permasa de otros organismos cuando se compara con presentaciones anteriores a bases de datos accesibles por BLAST.
ID de Secuencia No. 28 y 29 - clone 15
Una secuencia de ácido nucleico típica es el clone15/original que corresponde a la SEQ ID No. 28.
Las secuencias de péptido trascritas o traducidas de la secuencia de ácido nucleico del clone15/original se puede incorporar en una estrategia de vacunación para inducir una respuesta inmune a un antígeno de superficie de Piscirickettsia salmonis y así con Piscirickettsia salmonis en sí misma.
Una descripción detallada de la invención, que lista la secuencia de nucleótido exacta del clone15/original y la secuencia de aminoácido deducida para sus cuadros de lectura abierto (ORF), se proporcionan en la figura 17. La secuencia de aminoácido que corresponde al clone15/original es la SEQ ID No. 29.
Las secuencias de aminoácido correspondientes para el clon20/original y clon 20/20VSPF son las SEQ ID No. 25 y SEQ ID No. 27 respectivamente.
La secuencia de nucleótido y el péptido codificado por el (ORF) del clon15/original no tienen homología significativa con las proteínas de otras especies de bacterias cuando se compara con presentaciones anteriores a bases de datos accesibles por BLAST.
A partir de la anterior información existe razón suficiente para creer que las secuencias de aminoácido y de nucleótido correspondientes son de origen con Piscirickettsia salmonis. También, el ORF se encuentra en un clon inmuno reactivo de una colección de expresión.
ID de Secuencia No. 30 - Hsp 70
Una secuencia de ácido nucleico típica es la Hsp 70 que corresponde a la SEQ ID No. 30.
Una secuencia de ácido nucleico que trascribe la secuencia de aminoácido Hsp 70 se puede incorporar en una estrategia de vacunación para inducir una respuesta inmune a un antígeno de superficie de Piscirickettsia salmonis y así para Piscirickettsia salmonis en sí misma.
Una descripción detallada de la invención, que lista la secuencia de nucleótido exacta de la porción principal de la proteína HSP70 se proporciona en la figura 18.
La secuencia de aminoácido del Hsp70 tiene 70% de homología significativa en el nivel de proteína para las proteínas de Coxiella burnetti y Legionella pneumophila Hsp70 cuando se comparan con presentaciones anteriores a bases de datos accesibles por BLAST.
Las secuencias aminoácido y ácido nucleico descritas tienen valor comercial por las siguientes razones:
De la anterior información hay suficiente razón para creer que las secuencias de aminoácido y de nucleótido correspondientes son de origen Piscirickettsia salmonis. También, varios de los ORF se encuentran en clones inmuno-reactivos de una colección de expresión. Juntos, estos muestran el potencial de estos ORF a ser incorporados en las vacunas de ácido nucleico que pueden tener un impacto sobre la reducción de la mortalidad de salmónidos cultivados debido a Septicemia de Salmónidos Richettsiales originados por Piscirickettsia salmonis.
Los cebadores PCR derivados del ORF completo, utilizados en ensayos PCR son capaces de detectar Piscirickettsia salmonis en tejidos de peces infectados. Esto conducirá a pruebas de diagnósticos más exactas para ser utilizadas para propósitos de estudio epidemiológico así como también propósitos clínicos.
Los derivados asociados con las secuencias de nucleótidos de éstos cuando se traducen en la secuencia de proteína están compuestos de aminoácidos idénticos o equivalentes, deben inducir una respuesta por el sistema inmune del anfitrión. Este principio se puede expandir adicionalmente para utilizar estas proteínas en pruebas de diagnóstico y procedimientos de vacunación con ácido nucleico.
<110> Novartis AG
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Simard, Nathalie 
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Griffiths, Steve 
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Brouwers, Huub 
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Jones, Simon 
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Valenzuela, Pablo 
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Burzio, Luis 
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<120> secuencia
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<130> H-32319
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<140> 01 911 869.4
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<141>
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<150> PCT/GB01/01055
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<151> 2001-03-12
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<150> GB0005838.8
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<151> 2000-03-11
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<150> GB0016080.4
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<150> GB0016082.0
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<151> 2000-07-01
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<150> GB0018599.1
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<211> 1098
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Piscirickettsia salmonis 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> misc_feature
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 765, 1064
\vskip0.400000\baselineskip
<223> n = A, T, C o G
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
\vskip1.000000\baselineskip
8 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 226
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Piscirickettsia salmonis 
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 8
9 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 30
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Piscirickettsia salmonis 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 9
10 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 164
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Piscirickettsia salmonis 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 10
\vskip1.000000\baselineskip
11 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 44
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Piscirickettsia salmonis 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 11
12 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 195
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Piscirickettsia salmonis 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> misc_feature
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 31, 41, 147
\vskip0.400000\baselineskip
<223> n = A, T, C o G
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 12
13 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<211>65
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Piscirickettsia salmonis 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> VARIANTE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 11, 14, 49
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa = Cualquier Aminoácido
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 13
14 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 213
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Piscirickettsia salmonis 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> misc_feature
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 186
\vskip0.400000\baselineskip
<223> n = A, T, C o G
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 14
15 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 71
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Piscirickettsia salmonis 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> VARIANTE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 62
\vskip0.400000\baselineskip
<223>Xaa = Cualquier Aminoácido
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 15
16 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 16
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 115
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Piscirickettsia salmonis 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> misc_feature
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<223> n = A, T, C o G
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 16
\vskip1.000000\baselineskip
17 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 17
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 38
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Piscirickettsia salmonis 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> VARIANTE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<223>Xaa = Cualquier Aminoácido
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 17
18 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 179
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
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<213> Piscirickettsia salmonis 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> misc_feature
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 25, 141, 164, 167, 177
\vskip0.400000\baselineskip
<223> n = A, T, C o G
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 18
\vskip1.000000\baselineskip
19 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 48
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Piscirickettsia salmonis 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> VARIANTE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 47
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa = Cualquier Aminoácido
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400>19
\vskip1.000000\baselineskip
20 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 390
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Piscirickettsia salmonis 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> misc_feature
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 55
\vskip0.400000\baselineskip
<223> n = A, T, C o G
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 20
21 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 101
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Piscirickettsia salmonis 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> VARIANTE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa = Cualquier Aminoácido
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 21
22 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 280
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Piscirickettsia salmonis 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> misc_feature
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 9, 38, 236, 255, 256, 273
\vskip0.400000\baselineskip
<223> n = A, T, C o G
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 22
23 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 23
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 91
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Piscirickettsia salmonis 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> VARIANTE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 3, 9, 15, 81, 91
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa = Cualquier Aminoácido
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 23
24 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 170
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Piscirickettsia salmonis 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 24
25 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 25
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 56
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Piscirickettsia salmonis 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 25
26 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 26
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 199
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Piscirickettsia salmonis 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 26
27 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 27
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 38
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Piscirickettsia salmonis 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 27
\vskip1.000000\baselineskip
28 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 375
\vskip0.400000\baselineskip
<212> DNA
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Piscirickettsia salmonis 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> misc_feature
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<223> n = A, T, C o G
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 28
\vskip1.000000\baselineskip
29 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 29
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 125
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Piscirickettsia salmonis 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> VARIANTE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa= Cualquier Aminoácido
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 29
\vskip1.000000\baselineskip
30 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 30
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 639
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Piscirickettsia salmonis 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> VARIANTE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa = Cualquier Aminoácido
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 30
\vskip1.000000\baselineskip
31
32

Claims (14)

1. Una secuencia de ácido nucleico derivada de Piscirickettsia salmonis que consiste de una secuencia seleccionada del grupo que consiste de los números de ID de SECUENCIA: 1, 3, 5, 7, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26 y 28 y análogos de éstos preparados de forma sintética.
2. Una secuencia de ácido nucleico seleccionada del grupo de acuerdo con la Reivindicación 1 que se puede transcribir y/o traducir para proporcionar una secuencia de aminoácido que corresponde a por lo menos 70% de un antígeno de superficie presente en Piscirickettsia salmonis e induce una respuesta inmune.
3. Una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 1 o reivindicación 2 que comprende el gen JcmE de la cepa LF-89 del tipo Piscirickettsia salmonis que corresponde a la SEQ ID No. 7.
4. Una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 1 o reivindicación 2 que comprende una secuencia de cADN de la cepa LF-89 del tipo Piscirickettsia salmonis que codifica una proteína de aproximadamente 12 kDa.
5. Una secuencia de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 1 o reivindicación 2 que comprende una secuencia de gen de la cepa LF-89 del tipo Piscirickettsia salmonis que codifica una secuencia de aminoácido que muestra homología significativa para el antígeno 17 kDa encontrado en Rickettsia del Grupo de la Fiebre Exantemática.
6. Una secuencia de aminoácido derivada de la secuencia de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.
7. Una secuencia de aminoácido de acuerdo con la reivindicación 6 que se traduce de la secuencia de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5.
8. Una secuencia de aminoácido derivada de Piscirickettsia salmonis seleccionada del grupo que consiste de los números de ID de SECUENCIA: 2, 4, 6, 8, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, y 30, y análogos preparados de éstos preparados de forma sintética.
9. Una secuencia de aminoácido de acuerdo con la reivindicación 8 que corresponde a por lo menos el 70% de una parte de un antígeno de superficie de Piscirickettsia salmonis e induce una respuesta inmune.
10. Una secuencia de aminoácido de acuerdo con la reivindicación 8 o reivindicación 9 seleccionada de la secuencia de p45 que tiene la SEQ ID No. 9 o HSP70 que tiene el antígeno de la SEQ ID No. 30 de Piscirickettsia salmonis.
11. Un kit de prueba diagnóstica que comprende la secuencia de aminoácido de una cualquiera de la reivindicaciones 6 a 10.
12. Un cebador PCR de ácido nucleico derivado del ORF de una secuencia de ácido nucleico de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 capaz de detectar Piscirickettsia salmonis en tejidos de peces infectados.
13. Uso de un cebador PCR de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 12 en la preparación de una prueba diagnóstica para detectar Piscirickettsia salmonis.
14. Uso de una secuencia de aminoácido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 10 en la preparación de una prueba diagnóstica para detectar Piscirickettsia salmonis.
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