ES2290204T3 - Procedimiento para autenticacion de productos. - Google Patents

Procedimiento para autenticacion de productos. Download PDF

Info

Publication number
ES2290204T3
ES2290204T3 ES02002027T ES02002027T ES2290204T3 ES 2290204 T3 ES2290204 T3 ES 2290204T3 ES 02002027 T ES02002027 T ES 02002027T ES 02002027 T ES02002027 T ES 02002027T ES 2290204 T3 ES2290204 T3 ES 2290204T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
product
compound
sample
light emitting
procedure
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES02002027T
Other languages
English (en)
Inventor
Richard H. Selinfreund
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sun Chemical BV
Original Assignee
Sun Chemical BV
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sun Chemical BV filed Critical Sun Chemical BV
Application granted granted Critical
Publication of ES2290204T3 publication Critical patent/ES2290204T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G07CHECKING-DEVICES
    • G07FCOIN-FREED OR LIKE APPARATUS
    • G07F7/00Mechanisms actuated by objects other than coins to free or to actuate vending, hiring, coin or paper currency dispensing or refunding apparatus
    • G07F7/08Mechanisms actuated by objects other than coins to free or to actuate vending, hiring, coin or paper currency dispensing or refunding apparatus by coded identity card or credit card or other personal identification means
    • G07F7/086Mechanisms actuated by objects other than coins to free or to actuate vending, hiring, coin or paper currency dispensing or refunding apparatus by coded identity card or credit card or other personal identification means by passive credit-cards adapted therefor, e.g. constructive particularities to avoid counterfeiting, e.g. by inclusion of a physical or chemical security-layer
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N21/00Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
    • G01N21/62Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
    • G01N21/63Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
    • G01N21/64Fluorescence; Phosphorescence
    • G01N21/6428Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Computer Security & Cryptography (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
  • Collating Specific Patterns (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Control And Other Processes For Unpacking Of Materials (AREA)
  • Vending Machines For Individual Products (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Management, Administration, Business Operations System, And Electronic Commerce (AREA)
  • Inspection Of Paper Currency And Valuable Securities (AREA)

Abstract

Un procedimiento para almacenar y poner a disposición información sobre emisión de luz de un producto conocido, comprendiendo el procedimiento: obtención de una pluralidad de registros para el producto que indican medidas de intensidad de luz emitida por muestras de mezclas del producto con un componente, estando la pluralidad de registros almacenada en una base de datos informática; obtención de una indicación del componente y/o el producto; y uso de la indicación del componente y/o el producto para recuperar los registros.

Description

Procedimiento para autenticación de productos.
Antecedentes de la invención
Esta invención de la descripción se sitúa en el campo general de los procedimientos, reactivos y aparato para autenticar o monitorizar la composición de muestras.
La autenticación y monitorización de productos para distinguir entre mezclas complejas muy similares es útil por varias razones. En primer lugar, debería detectarse el uso de sustancias falsificadas (por ejemplo, material con marca inadecuada de un competidor o material mal formulado de un concesionario/franquiciado) para preservar la integridad de una marca.
Las características de un producto pueden usarse para identificar su lote. Pueden usarse procedimientos similares en pruebas de control de calidad. Además, la falsificación de productos suscita serias preocupaciones de salud y seguridad. En 1995, una versión con etiquetado falso de leche de fórmula para lactantes se distribuyó, según los informes recibidos, a 15 estados en los Estados Unidos continentales. Se estima que el vino, licores, perfume, leche de fórmula para lactantes, refrescos, cosméticos y productos farmacéuticos falsificados cuestan a las empresas de los Estados Unidos 200.000 millones de dólares al año ("The Boston Phoenix", Sección Uno, 2 de diciembre de 1994).
Es importante desarrollar procedimientos rápidos, rentables en costes y aplicables para identificar productos fraudulentos o falsificados. También es importante determinar la conformidad de la fabricación usando procedimientos automatizados para reducir la cantidad de tiempo gastada en identificar productos fraudulentos. Es deseable reducir al mínimo el tiempo requerido de investigadores y técnicos altamente cualificados para realizar y registrar los resultados de las pruebas de autenticidad/conformidad de productos en línea, fuera de línea y disponibles en stock.
Se han hecho intentos para determinar la autenticidad de productos (por ejemplo, leche de fórmula para lactantes) mediante electroforesis de proteínas, que requiere un tiempo (y un gasto) sustancial de configuración y análisis. En otras industrias, por ejemplo, de vino y licores, se han usado o propuesto para autenticación de productos análisis infrarrojo mediante transformada de Fourier, cromatografía de gases, pH, espectroscopia Raman y otros procedimientos analíticos (Constant y col., Differentiation of Alcoholic Beverages FT-IR Spectra. A Original Multivariate Approach, Resumen ACS presentado en la 208ª Reunión Nacional de ACS, 25 de agosto 1994, publicado en Issue of Chemical and Engineering News, 10 1994).
Biocode, Limited ha usado anticuerpos marcados con fluorescentes para determinar los ingredientes en los productos.
La patente de EE.UU. 5.429.952 desvela la adición de productos químicos emisores de luz a un producto para análisis, como marcadores de productos exógenos que no forman parte corrientemente del producto.
El uso de procedimientos analíticos de patrones para monitorizar la autenticidad o conformidad de todos los lotes o serie para un producto o producto competidor con equipo de laboratorio a menudo puede ser caro.
El documento US-5.424.959 describe un sistema de inteligencia artificial según se usa con un conglomerado de datos de fluorescencia para proporcionar a partir de un procedimiento de mejora del reconocimiento de una sustancia desconocida de su patrón espectral. Los sistemas de redes neuronales a medida permiten la organización definitiva y el uso ingenioso de variables de suposición libre ya existentes en una base de datos de fluorescencia de exploración total para una diferenciación y correspondencia mucho más extensa, discreta y precisa de espectros de lo que es posible con la memoria humana. El sistema proporciona una velocidad incrementada del análisis de huellas digitales, precisión y fiabilidad junto con una curva de aprendizaje disminuida y una objetividad aumentada para el análisis.
El documento US-4.365.303 describe un procedimiento y aparato para determinar la naturaleza de una sustancia desconocida, que incluye varios aparatos para introducir una tabla de picos del espectro de una sustancia desconocida, para ajustar la tabla de picos a un primer formato estandarizado preseleccionado, para comparar la tabla de picos así estandarizada de la sustancia desconocida con una primera biblioteca de unidades químicas estructurales, para hacer una lista de las posibles unidades químicas estructurales que se corresponden más estrechamente con la sustancia desconocida, para reajustar la tabla de picos a un segundo formato de patrón preseleccionado y para formar un archivo para la sustancia desconocida que incluya datos correspondientes a la tabla de picos reajustada y a la lista de posibles unidades químicas estructurales. El archivo puede compararse además con una segunda biblioteca que contiene archivos de sustancias conocidas. El resultado final es una lista de sustancias conocidas que se corresponden más estrechamente con la sustancia desconocida.
El documento EP-0.625.702 describe un procedimiento y aparato para identificar un gas desconocido. Se genera un espectro de infrarrojo del gas desconocido. Se comprime un espectro de infrarrojo del gas desconocido y se compara con la biblioteca de espectros de infrarrojo comprimidos de los compuestos de referencia.
Resumen de la invención
Los autores de la invención han descubierto un procedimiento automatizado de desarrollo de una base de datos para almacenar información para análisis de tipo "huella digital" de productos (así como de números de lote y serie de productos). El análisis automatizado es un procedimiento de evaluación y distinción de productos, dentro incluso de un campo o industria restringidos, en competencia y de otro modo, por ejemplo, para establecer la autenticidad o punto de origen del producto. La invención se refiere a un procedimiento para identificar analitos como ingredientes clave y/o las cantidades relativas de analitos como ingredientes clave en productos. El procedimiento permite la autenticación y monitorización de productos en cuanto a fraude y control de calidad usando emisión de luz. La invención de la descripción se refiere también a compuestos emisores de luz (por ejemplo, que incluyen uno o más compuestos emisores de luz) que pueden usarse para identificar y cuantificar las cantidades relativas de analitos en los productos.
En un aspecto, la descripción presenta un procedimiento para determinar el grado de relación de una muestra con un patrón que se sabe auténtico o del que se sabe que tiene al menos una característica seleccionada de material auténtico. El procedimiento incluye: a) suministro de una mezcla de muestra y al menos un compuesto emisor de luz ("CEL"); (b) irradiación de la mezcla de muestra con una longitud de onda de irradiación de luz; (c) monitorización de al menos una longitud de onda emitida de luz (generada como respuesta a la irradiación) para establecer la intensidad de emisión de una muestra; y (d) suministro de una característica de huella digital patrón de una mezcla patrón; y (e) comparación de la intensidad de emisión de la muestra con la huella digital patrón para determinar si la muestra es auténtica. La mezcla patrón incluye el patrón y el compuesto emisor de luz. La huella digital patrón se genera irradiando varias mezclas patrón con la longitud de onda de irradiación y monitorizando la longitud de onda emitida como respuesta a la misma.
En formas de realización preferidas, se emplean dos y preferentemente tres o más compuestos emisores de luz, y se compara un perfil de huellas digitales de varios compuestos emisores de luz con las intensidades de emisión correspondientes para la muestra. Con la máxima preferencia, los compuestos emisores de luz emiten luz en longitudes de onda no superpuestas, con lo que pueden añadirse múltiples compuestos a la muestra y/o patrón al mismo tiempo.
En formas de realización preferidas, el procedimiento incluye además: suministro de una mezcla de control de fondo que incluye el compuesto emisor de luz sin la muestra o el patrón; irradiación de la mezcla de control de fondo con la longitud de onda de irradiación y monitorización de la longitud de onda emitida como respuesta a la misma, para establecer la emisión de fondo; y determinación de la intensidad de emisión de la muestra basándose en al menos una diferencia entre la emisión de la mezcla de control y la emisión de la mezcla de muestra. Se prefiere que el patrón sea una composición que tiene una cantidad relativa predeterminada de una característica de componente de material auténtico. La huella digital de la muestra se genera basándose en un primer cambio en la emisión, determinado comparando la emisión de fondo y la emisión de la mezcla de muestra. La huella digital patrón se genera basándose en un segundo cambio en las emisiones, determinado comparando la emisión de fondo y la emisión del patrón para cada medida. La etapa de comparación incluye la comparación del primer cambio en la emisión con la huella digital ajustada de fondo, por ejemplo, para cuantificar las cantidades relativas de componente de muestra.
En otro aspecto de la descripción, se proporciona un procedimiento para determinar si un producto es auténtico. Se obtiene una muestra líquida de un producto de prueba y a continuación se añade un compuesto emisor de luz a la muestra líquida para formar una muestra de prueba. El compuesto emisor de luz interacciona con un analito del producto. Se irradia la muestra de prueba, y se determina la intensidad de luz emitida desde la muestra de prueba a una longitud de onda. A continuación se compara la intensidad de luz emitida desde la muestra de prueba en esta longitud de onda con la intensidad de luz emitida a la longitud de onda como resultado de irradiar una mezcla del compuesto que emite luz y un patrón líquido auténtico del producto, en el que la semejanza de intensidad de emisión de luz es determinante acerca de la autenticidad de la muestra y esta semejanza de intensidad de emisión de luz es determinante acerca de la no autenticidad de la muestra. En una forma de realización importante, la intensidad de luz emitida desde la muestra de prueba se compara con la intensidad de luz emitida desde una pluralidad de la mezcla, y en la que la autenticidad requiere que la intensidad de luz emitida desde la muestra de prueba esté dentro de un límite de confianza preseleccionado que define un intervalo de intensidad calculado a partir de la intensidad de luz emitida desde la pluralidad de dicha mezcla. La pluralidad de dicha mezcla es al menos cuatro patrones que contienen una mezcla del compuesto que emite luz y un patrón líquido auténtico del producto, y preferentemente es cuatro de dichas mezclas.
En algunas de las formas de realización anteriores, la composición química del producto es desconocida. En otras de las formas de realización, la estructura química del analito al que se une el compuesto que emite luz es desconocida. En otras formas de realización más, el analito es distinto de un marcador de producto exógeno. En una forma de realización particularmente importante, el producto es un producto consumible líquido.
Según se menciona anteriormente, puede usarse una pluralidad de los compuestos emisores de luz. En dichas formas de realización, se prefiere que cada compuesto que emite luz se una a un analito del producto diferente. Con la máxima preferencia, los compuestos emisores de luz son un tinte fluorescente.
En otras formas de realización preferidas, el compuesto emisor de luz se añade a la muestra mediante una pipeta automatizada. Se prefiere que la mezcla de muestra sea dispensada por una pipeta automatizada en una placa de pocillos múltiples.
En otras formas de realización preferidas, el patrón, la muestra o ambos, incluyen intrínsecamente un compuesto fluorescente, fosforescente o luminiscente. En algunos productos el compuesto es cafeína.
En otras formas de realización preferidas, el compuesto emisor de luz es fluorescente, fosforescente o luminiscente, y la emisión varía como respuesta a la cantidad o calidad de analitos del producto. Preferentemente, el compuesto emisor de luz interacciona con componentes de la muestra, el patrón o ambos, para producir al menos un componente fluorescente, fosforescente o luminiscente.
En otras formas de realización preferidas, el patrón es una composición que tiene una cantidad relativa predeterminada de un analito característica de material auténtico, y la etapa de comparación incluye cuantificación de las cantidades relativas del analito en la muestra.
En formas de realización preferidas, el procedimiento incluye la realización de las etapas (b) a (c) descritas anteriormente, al menos dos veces y preferentemente tres veces. Las etapas (b) a (c) pueden realizarse usando los mismos o diferentes compuestos emisores de luz, y en cada etapa realizada se monitorizan las mismas o diferentes longitudes de onda de irradiación y emisión.
En una forma de realización importante, el patrón es una bebida que contiene cafeína, y el compuesto emisor de luz es: a) 5-(2-carbohidrazinometiltioacetil)aminofluoresceína; b) 5-(4,6-diclorotriazinil)aminofluoresceína; c) sal de pentaamonio de fluo-3 (Minta y col., J. Biol. Chem. 264:8171, 1989 y patente de EE.UU. n° 5.049.673); d) 4-aminofluoresceína; e) 5-aminofluoresceína; f) cumarina azul de sulfito; g) criptando diácido de cumarina (CD222) (Costlei y col., J. of Chem. Society Perkins translation 2, pág. 1615); o h) eosina Y.
En otra forma de realización importante, el patrón es una leche de fórmula para lactantes, y el compuesto emisor de luz se selecciona entre el grupo constituido por 5-(2-carbohidrazinometiltioacetil)aminofluoresceína, 5-(4,6-diclorotriazinil)aminofluoresceína, sal de pentaamonio de fluo-3 o benzotiazol de cumarina, sal de tetrapotasio (BTC5N) (Cela Calcium, pág. 190, 1994). En otras formas de realización preferidas, el patrón contiene jarabe de maíz, y el compuesto emisor de luz se selecciona entre el grupo constituido por 5-(2-carbohidrazinometiltioacetil)aminofluoresceína, 5-(4,6-diclorotriazinil)aminofluoresceína, sal de pentaamonio de fluo-3, 4-aminofluoresceína, 5-aminofluoresceína, cumarina azul de sulfito, criptando diácido de cumarina (CD222) o eosina Y. En otras formas de realización preferidas, el patrón es una bebida que contiene etanol y el compuesto emisor de luz se selecciona entre el grupo constituido por 5-(2-carbohidrazinometiltioacetil)aminofluoresceína, 5-(4,6-diclorotriazinil)aminofluoresceína, sal de pentaamonio de fluo-3, hemisulfato de proflavina, sal de tetra(tetrametilamonio), clorhidrato de naranja de acridina hidratado, BTC-5N, acriflavina, 4-aminofluoresceína o 5-aminofluoresceína. El Compuesto 11 es cumarina azul de sulfito. El Compuesto 12 es criptando di-ácido de cumarina (CD222). El Compuesto 13 es eosina Y. En otras formas de realización preferidas, el patrón es una mezcla acuosa y el compuesto emisor de luz es un compuesto que interacciona o reacciona con metales pesados, seleccionándose el compuesto emisor de luz entre el grupo constituido por sal de pentaamonio de fluo-3 o BTC-5N.
En otro aspecto, la descripción presenta un procedimiento para determinar el grado de relación de una primera muestra con una segunda muestra, ninguna de las cuales es un patrón conocido. El procedimiento incluye: (a) suministro de una primera mezcla de muestra que incluye la primera muestra y al menos un compuesto emisor de luz; (b) irradiación de una pluralidad de la primera mezcla de muestra con una longitud de onda de irradiación de luz; (c) monitorización de al menos una longitud de onda de luz emitida generada como respuesta a la irradiación, para establecer una primera huella digital de la muestra característica de la primera mezcla de muestra; (d) suministro de una segunda huella digital de la muestra característica de una segunda mezcla de muestra, incluyendo la segunda mezcla de muestra la segunda muestra y el compuesto emisor de luz; generándose la segunda huella digital de la muestra por irradiación de una pluralidad de la segunda mezcla de muestra con la longitud de onda de irradiación y monitorizando la longitud de onda emitida como respuesta a la misma; y (e) comparación de la primera huella digital de la muestra con la segunda huella digital de la muestra para determinar el grado de relación de las dos muestras.
En formas de realización preferidas, la primera muestra se identifica como un producto específico o como parte de un lote homogéneo de un producto por comparación del perfil de emisión de la primera muestra con una biblioteca de huellas digitales de muestras cuya composición o número de lote de los productos se conocen.
En otras formas de realización preferidas, el procedimiento incluye además el suministro de una o más huellas digitales adicionales para generar un perfil de huellas digitales para cada uno de al menos dos compuestos emisores de luz adicionales y la comparación del primer perfil de huellas digitales de la mezcla de muestra con el segundo perfil de huellas digitales de la muestra o patrón.
En formas de realización preferidas, el procedimiento se usa para determinar la autenticidad del producto, la falsificación de producto o la conformidad de fabricación del producto. En otras formas de realización preferidas, la muestra es un producto de perfume, aromatizante, saborizante, alimentario o de bebida.
En otro aspecto de la descripción, se proporciona un procedimiento para seleccionar un tinte para determinar la autenticidad de un producto. Se añade un tinte candidato a una pluralidad de diluciones candidatas de una muestra líquida de un patrón del producto auténtico, siendo el tinte candidato emisor de luz a una longitud de onda particular cuando se irradia si interacciona con un analito en la muestra líquida. A continuación se selecciona una dilución de prueba a la cual el tinte candidato emite luz a una intensidad seleccionada cuando dicho tinte candidato se añade a dicha muestra líquida en la dilución de prueba. Se determina un intervalo de intensidad de emisión de luz a longitudes de onda discretas para una pluralidad de mezclas de dicho tinte candidato y dicha muestra líquida a dicha dilución de prueba. A continuación se determina la intensidad de emisión de luz experimental en las longitudes de onda discretas para una mezcla de dicho tinte candidato y un muestra líquida de producto no auténtico a dicha dilución de prueba. Finalmente, se compara la intensidad experimental en las longitudes de onda discretas con el intervalo de intensidad de emisión de luz en las longitudes de onda discretas, seleccionándose dicho tinte como útil para determinar la autenticidad de dicho producto si dicha intensidad experimental se encuadra fuera de dicho intervalo de emisión de luz a las longitudes de onda discretas. En una forma de realización, el tinte candidato es una pluralidad de tintes candidatos, emitiendo luz cada uno de los tintes a diferentes longitudes de onda, y en la que el analito es una pluralidad de analitos, uniéndose cada tinte a uno diferente de dicha pluralidad de la pluralidad de analitos. En una forma de realización importante, la composición química del producto es desconocida y/o la estructura química del analito es desconocida. En otras formas de realización importantes, el producto es un producto consumible líquido.
En otro aspecto de la invención de la descripción, se proporciona un procedimiento implementado por ordenador para determinar la autenticidad de un producto líquido. El procedimiento implica la recepción de datos de emisión de luz producidos añadiendo un componente a una muestra de prueba del producto líquido y midiendo la emisión de luz de la misma. También implica la recepción de datos de emisión de luz producidos midiendo la emisión de luz desde una muestra de una mezcla de un producto líquido auténtico y el componente. A continuación existe una comparación de la intensidad de emisión de luz de la muestra de prueba con la intensidad de emisión de luz de muestras de la pluralidad de las mezclas, en la que la autenticidad requiere que la intensidad de emisión de luz de la muestra de prueba esté dentro de un límite de confianza preseleccionado que define un intervalo de intensidad a longitudes de onda discretas calculadas a partir de la intensidad de emisión de luz a las longitudes de onda discretas de la pluralidad de las mezclas.
En una forma de realización importante, se usa una base de datos informática para almacenar y poner a disposición información sobre emisión de luz de un producto auténtico. La base de datos incluye un medio legible por ordenador que tiene una lógica legible por ordenador almacenada en el mismo, en el que la lógica legible por ordenador comprende una pluralidad de registros para el producto auténtico que indican medidas de intensidad de luz emitida por muestras de una pluralidad de mezclas del producto auténtico con un componente. La base de datos incluye también una indicación del componente, en la que los registros son accesibles usando una indicación del componente y/o el producto auténtico en el que la etapa de recepción de datos de emisión de luz para el producto auténtico incluye la etapa de acceso al medio legible por ordenador usando una indicación del componente y/o el producto para recuperar los registros.
Según la invención, se proporciona un procedimiento para almacenar y poner a disposición información sobre emisión de luz de un producto auténtico. El procedimiento comprende el uso de una base de datos que incluye un medio legible por ordenador que tiene lógica legible por ordenador almacenada en el mismo, en el que la lógica legible por ordenador comprende una pluralidad de registros para el producto auténtico que indican medidas de intensidad de luz emitida por muestras de una pluralidad de mezclas del producto auténtico con un componente, y una indicación del componente. También se incluyen medios para acceder al medio legible por ordenador usando una indicación del componente y/o el producto auténtico para recuperar los registros.
Es también una característica de la presente descripción que, cuando se añade un compuesto emisor de luz a una muestra de acuerdo con los procedimientos descritos en la presente memoria descriptiva, la muestra puede separarse del patrón. Esto difiere de la situación en la que se usan marcadores de productos, en que se añaden marcadores de productos a un producto auténtico para formar una mezcla etiquetada en la que la adición del marcador a la muestra no está separada de la adición del marcador al patrón.
Los compuestos emisores de luz participan en la emisión de luz como respuesta a la irradiación con luz de una longitud de onda diferente. La emisión de luz de interés puede ser un resultado de la fosforescencia, quimioluminiscencia o, más preferentemente, fluorescencia o fluorescencia polarizada. Específicamente, el término "compuestos emisores de luz", según se usa en la presente memoria descriptiva, significa compuestos que tienen una o más de las siguientes propiedades: 1) son una sustancia fluorescente, fosforescente o luminiscente; 2) interaccionan con componentes de la muestra o el patrón o ambos para producir al menos un compuesto fluorescente, fosforescente o luminiscente; o 3) interaccionan con al menos un compuesto fluorescente, fosforescente o luminiscente en la muestra, el patrón, o ambos para alterar la emisión en la longitud de onda de emisión.
"Huella digital" se refiere al conjunto de datos de intensidad de emisión de luz desde un compuesto emisor de luz en combinación con una muestra líquida de un producto medido al menos tres veces, con estas tres combinaciones medidas al menos una vez, o ambas cosas. En consecuencia, cada producto puede tener una huella digital particular. Un "perfil de huellas digitales" es una reunión de huellas digitales de una muestra líquida de un producto en combinación con una serie (o perfil) de diferentes compuestos emisores de luz.
El término "analito", según se usa en la presente memoria descriptiva, significa un ingrediente clave o compuesto traza del producto. Un analito nativo es aquel que se encuentra corrientemente en el producto sin adulterar, no añadido como un marcador de producto exógeno. La invención se basa en interacción de los compuestos emisores de luz con dichos analitos, con lo que pueden detectarse alteraciones en un producto, incluyendo (1) dilución de un analito, (2) sustitución de un ingrediente por un analito, (3) adición de un compuesto que altera la interacción del compuesto emisor de luz con un analito y (4) adición de un compuesto que inactiva la emisión de luz resultante de la interacción de un compuesto emisor de luz con un analito. Con la máxima frecuencia, la alteración detectada está en la cantidad de analito unido al compuesto emisor de luz, que es reflejado por la intensidad de luz emitida cuando se irradia una muestra.
Por "interacciona con", según se usa en la presente memoria descriptiva, se quiere decir reacción, intercalado, unión o cualquier otra interacción que haga que el tinte altere sus propiedades de emisión de luz cuando se irradia.
El término "ingrediente clave", según se usa en la presente memoria descriptiva, significa un componente incluido en una composición de un producto que es importante para identificar el producto en particular.
El término "compuesto traza", según se usa en la presente memoria descriptiva, significa un compuesto que está presente en concentraciones bajas (por ejemplo, en niveles de ppm o ppmm) en un producto. El compuesto traza puede relacionarse, por ejemplo, con un ingrediente clave en particular. El compuesto traza puede introducirse en la fuente del ingrediente clave o durante la fabricación del producto.
La descripción puede incluir una o más de las ventajas siguientes. El procedimiento puede usarse en la industria de licores destilados, en la que los compuestos traza y los ingredientes clave pueden medirse usando compuestos emisores de luz específicos. Además, los compuestos emisores de luz que indican la fuente de etanol pueden usarse para determinar la autenticidad de un producto. Por ejemplo, los licores obtenidos de maíz dentado amarillo contienen diferentes compuestos traza que los licores obtenidos de azúcar de caña.
Además, aunque las colas, y otros refrescos, contienen niveles similares de ingredientes clave, los niveles de ingredientes clave pueden usarse para determinar si un fabricante en particular está diluyendo el concentrado al nivel apropiado. Por ejemplo, la cafeína puede ser un ingrediente diana para compuestos emisores de luz en el análisis de refrescos. Las dianas adicionales en los refrescos pueden incluir, pero no se limitan a, el jarabe de maíz rico en fructosa y el pH.
Además, pueden someterse a medida de huella digital perfumes, aromas, sabores, alimentos y todos los tipos de bebidas, usando los procedimientos de la invención, sin añadir ningún reactivo al producto que el usuario va a consumir. Una ventaja de la tecnología desvelada es que no es necesario añadir marcadores de productos exógenos. En su lugar, pueden someterse a ensayo analitos nativos del producto. Esto es particularmente importante para determinar la autenticidad de productos alimentarios, en los que no es deseable añadir marcadores que pudieran afectar al sabor, olor, consistencia y similar y que podrían incluso ser perjudiciales para la salud al ingerirlos. Esto es de gran importancia para muchas empresas que son reacias a adulterar sus productos.
La tecnología permite determinar y monitorizar perfiles precisos de productos emisores de luz sin alterar el producto.
Otra ventaja de la tecnología desvelada es que es innecesario conocer o determinar la composición del producto con el fin de seleccionar compuestos emisores de luz y desarrollar ensayos para determinar la autenticidad con precisión. Así, es innecesario conocer o determinar la fórmula de Coca-Cola® o Pepsi® para probar la autenticidad de productos comercializados con estas marcas comerciales. Esto contrasta con procedimientos de infrarrojo (por ejemplo, IR cercano, IR medio e IR de Transformada de Fourier), que a menudo dan como resultado la recogida de información suficiente para determinar la composición de un producto sometido a prueba. Esta ventaja de la presente tecnología es de gran importancia para empresas reacias a identificar los ingredientes secretos de sus productos.
Una ventaja adicional de la tecnología desvelada es que el uso de compuestos emisores de luz da como resultado un nivel de sensibilidad que supera ampliamente los niveles de sensibilidad alcanzables por el uso de procedimientos de IR de Transformada de Fourier.
Las características y ventajas de la invención serán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada de la misma, y a partir de las reivindicaciones.
Breve descripción de los dibujos
La Figura 1 es a dibujo que muestra las estructuras químicas de los Compuestos 1 a 13.
La Figura 2 es un diagrama de flujo de datos.
Descripción detallada
La descripción presenta un procedimiento automatizado para analizar analitos como ingredientes clave y las cantidades relativas de analitos como ingredientes clave en productos lo que, a su vez, permite la autenticación y monitorización de productos para posible fraude y control de calidad. Pueden usarse compuestos emisores de luz en particular para identificar y cuantificar los niveles relativos de analitos como ingredientes clave en los productos.
Un procedimiento para identificar productos falsificados o alterados se basa en el desarrollo de un grupo de entre dos y siete compuestos emisores de luz específicos para un solo producto junto con procedimientos de manipulación automatizados especializados y nuevos análisis de datos. Estos procedimientos pueden usarse para proporcionar un procedimiento que es más sencillo de usar que las técnicas anteriores y que puede ejecutarse rápidamente usando equipos convencionales y disponibles generalmente. Un aspecto adicional de la invención es proporcionar una técnica que ofrezca una medida cuantitativa del grado con el que el producto se altera o falsifica. Un aspecto adicional de la invención es proporcionar procedimientos y compuestos para identificar ingredientes clave del producto.
La descripción proporciona un procedimiento para determinar las cantidades relativas de analitos en un producto exponiendo los productos a compuestos emisores de luz seleccionados presentes en un compuesto emisor de luz. Los analitos se seleccionan de manera que, en presencia del analito, los compuestos pueden interaccionar (por ejemplo, reparto, intercalado o unión) con los analitos en las fracciones líquidas acuosas y/u orgánicas del producto. La interacción entre los componentes del producto y el compuesto emisor de luz induce un cambio químico que puede detectarse usando sistemas automatizados de detección por emisión de luz. La emisión de luz puede incluir luminiscencia, fluorescencia o fosforescencia. La fluorescencia se describe, por ejemplo, en "Practical Fluorescence", Segunda Edición, G.G. Guilbault, Editor, Marcel Dekker, Inc., 1990.
En general, se mezclan una muestra del producto y el compuesto emisor de luz. Se deja que los compuestos emisores de luz y los analitos en el producto reaccionen durante un periodo de tiempo y a una temperatura que es específica para cada producto y compuesto emisor de luz, por ejemplo, hasta que la emisión de luz de la mezcla no cambie ya con el tiempo. Se usan filtros de paso de banda y de corte para aislar las longitudes de onda de excitación de los espectros de emisión debidas a la emisión de luz desde la muestra. El cambio en emisión de luz debido a la interacción puede determinarse a partir de la fórmula [(Fd-Fp)/Fd]x100, en la que la emisión de luz del compuesto emisor de luz en ausencia de producto es Fp, y la emisión de luz después de exponer el compuesto emisor de luz al producto es Fd. La emisión de luz cambia como consecuencia de interacciones del compuesto emisor de luz con analitos en el producto. La emisión de luz también puede cambiar debido a influencias indirectas, como inactivación por un ingrediente de un producto adulterado.
El compuesto emisor de luz puede incluir dos compuestos emisores de luz y puede añadirse conjuntamente en el mismo pocillo de muestra, si la emisión máxima de los tintes tiene una separación superior a 40 nm. El filtro de longitudes de onda debe cambiarse para cada compuesto emisor de luz que esté siendo observado. No existe límite práctico para el número de los compuestos emisores de luz que pueden usarse para demostrar la presencia específica de un analito en particular. El número de los compuestos emisores de luz puede aumentarse para indicar la presencia específica de un ingrediente o descartar posibles análisis inespecíficos de compuestos estrechamente relacionados.
Es posible determinar la autenticidad de producto si la traza o estructura química del analito o producto es desconocida, preferentemente usando entre tres y siete compuestos emisores de luz individuales en el compuesto emisor de luz. Usando un puesto de trabajo robótico automatizado (por ejemplo, el Beckman Biomek 1000), es posible combinar los compuestos emisores de luz en orden aleatorio con los patrones del producto en una placa de micropocillos. Una vez que se desarrolla una pauta detectable de emisión de luz para todos los patrones, puede añadirse un único producto de prueba a la misma placa de micropocillos (por ejemplo, hasta 99 patrones y 1 solo producto de prueba). La salida de emisión de luz de la muestra se compara con cada uno de los patrones en el procesamiento de la placa. De este modo, es posible determinar la autenticidad sin desarrollar un registro anterior de niveles patrón de emisión de luz.
Existen muchos ejemplos de compuestos emisores de luz que pueden incluirse en el compuesto emisor de luz, algunos de los cuales se muestran en la Figura 1 (Compuestos 1 a 13). El Compuesto 1 es 5-(2-carbohidrazinometiltioacetil)aminofluoresceína. El Compuesto 2 es 5-(4,6-diclorotriazinil)aminofluoresceína. El Compuesto 3 es sal de pentaamonio de fluo-3. El Compuesto 4 es hemisulfato de proflavina (hemisulfato de 3,6-dimetilaminoacridina). El Compuesto 5 es sal de tetra(tetrametilamonio). El Compuesto 6 es clorhidrato de naranja de acridina hidratado. El Compuesto 7 es BTC-SN. El Compuesto 8 es acriflavina. El Compuesto 9 es 4-aminofluoresceína. El Compuesto 10 es 5-aminofluoresceína. El Compuesto 11 es cumarina azul de sulfito. El Compuesto 12 es criptando diácido de cumarina (CD222). El Compuesto 13 es eosina Y.
Algunos ejemplos de los productos líquidos que pueden analizarse y los compuestos emisores de luz que pueden proporcionar análisis distintivos y significativos de los productos son: productos con base de alcohol como licores neutros, vodka y tequila que pueden analizarse, por ejemplo, con los Compuestos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ó 9; productos con base de sacarosa y alto contenido en fructosa como refrescos (por ejemplo, Coca-Cola y Pepsi) que pueden analizarse, por ejemplo, con los Compuestos 1, 2, 3 ó 9; y leches de fórmula para lactantes como Similac, Carnation, Enfamil que pueden analizarse, por ejemplo, con los Compuestos 1, 2, 3 ó 7. Debe entenderse que puede obtenerse una muestra líquida de un producto líquido o de productos no líquidos (por ejemplo, por disolución de un sólido o semisólido, por extracción de un sólido y disolución del material extraído o similar).
Los procedimientos de la descripción pueden usarse para analizar otros productos líquidos, así como muestras líquidas obtenidas de otros productos, basándose en la elección correcta de los compuestos emisores de luz usados en el análisis. Por ejemplo, pueden usarse compuestos emisores de luz que son compuestos que contienen amina (por ejemplo, Compuesto 1) y compuestos emisores de luz que son reactivos para modificar aminas, alcoholes, arginina, guanosina y polisacáridos (por ejemplo, Compuesto 2) en autenticidad/monitorización del producto y pruebas, por ejemplo, de licores neutros, licores destilados, leche de fórmula para lactantes o refrescos. Además, pueden usarse productos químicos emisores de luz que son indicadores de calcio (por ejemplo, Compuesto 3) o son capaces de formar complejo con Cd^{2+}, Zn^{2+}, Pb^{2+} y Ba^{2+} (por ejemplo, Compuesto 7) para autenticidad/monitorización de producto para probar licores neutros, licores destilados o refrescos. Los compuestos emisores de luz de acridina (por ejemplo, Compuesto 6) son capaces de formar complejo con lípidos y grasas para autenticación o monitorización de producto de licores destilados o leches de fórmula para lactantes. Los compuestos emisores de luz de acriflavina que interaccionan con alcoholes (por ejemplo, Compuesto 8) son útiles para autenticación/monitorización de producto para probar de licores neutros y destilados. Los productos químicos emisores de luz que reaccionan con alcoholes, aldehídos o cetonas primarios (por ejemplo, Compuestos 9 y 10) son útiles para autenticación o monitorización de licores neutros, licores destilados o refrescos.
Selección de compuestos emisores de luz
Los compuestos emisores de luz pueden seleccionarse basándose en una o más de las siguientes propiedades; (1) un compuesto emisor de luz en la composición debe interaccionar con un analito en el producto; (2) un compuesto emisor de luz en la composición debe interaccionar con un analito en el producto en una forma dependiente de la concentración; (3) un compuesto emisor de luz y el o los productos de interacción deben ser estables y la interacción debe ser repetible; (4) números de lote similares del producto deben interaccionar de la misma forma con el compuesto emisor de luz; y (5) el compuesto emisor de luz debe interaccionar de forma diferente con productos estrechamente relacionados sobre la base de las estructuras químicas de ingredientes clave en el producto (por ejemplo, para distinguir entre nombres de marca de un producto, como, por ejemplo, entre vodkas Smirnoff y Absolute). En muchas situaciones, se desea que se identifiquen múltiples compuestos emisores de luz para autenticar o monitorizar un solo producto de consumidor.
Para determinar un compuesto emisor de luz que puede usarse en el análisis de un producto, no es necesario conocer la estructura química de los analitos en el producto seleccionado, pero puede escogerse, o suponerse presente en el producto. Al menos un analito es diana en un producto en particular. Un compuesto emisor de luz candidato puede seleccionarse generalmente usando las directrices, descritas anteriormente, junto con la información enumerada en la Tabla 1 y la Tabla 2. La información enumerada en las tablas no pretende ser limitativa, sino que proporciona información general que puede ser útil en la selección de un compuesto emisor de luz. La Tabla 1 enumera grupos reactivos en compuestos emisores de luz que pueden ser útiles para identificar grupos funcionales particulares en un ingrediente clave del producto. La Tabla 2 enumera compuestos emisores de luz iniciales útiles seleccionados. La emisión de luz desde una muestra que contiene un compuesto emisor de luz (seleccionado según las directrices como resultado de interacciones con analitos en el producto) puede usarse para autenticar y monitorizar productos en relación con fraude y control de calidad.
Un procedimiento de selección preferido es el siguiente. Se selecciona un producto. El producto se diluye hasta que su absorbancia es inferior a 0,02. Se selecciona una pluralidad de los compuestos emisores de luz como tintes. Los tintes se diluyen unos con respecto a otros de manera que todos tengan una intensidad de emisión de entre 200 y 2.000 unidades de fluorescencia por ml cuando se añade 1,4 \mul de tinte a 1 ml de producto diluido (normalmente entre 0,3 y 500 micromolar). A continuación se preparan unas series de diluciones de producto (todas por debajo de absorbancia 0,02). Por ejemplo, podría tratarse de diluciones de producto como 1:10, 1:15, 1:20, 1:25 y 1:30. Se añaden tintes a estas diluciones a 1,4 \mul tinte/ml de producto diluido. Los tintes se añaden también análogamente a (1) un patrón aceptable, pero alterado (como un patrón diluido sólo al 5%) y (2) un patrón inaceptable, pero alterado (como un patrón diluido en > 10%) y (3) un producto no auténtico pero estrechamente relacionado (como Pepsi® cuando el producto es Coca-Cola®). Las pruebas se ejecutan en cuadruplicado. Se genera electrónicamente una huella digital para el patrón, y se determina electrónicamente un intervalo aceptable que incluye el producto aceptable alterado pero excluye los productos no aceptables y no auténticos, usando software y fórmulas matemáticas según se describe más adelante, preseleccionando los límites de confianza (por ejemplo dos desviaciones típicas, tres desviaciones típicas, etc.) Se ejecutan simultáneamente múltiples tintes en placas de 96 pocillos que se leen automáticamente. A continuación se seleccionan los tintes basándose en su capacidad para distinguir entre productos auténticos y aceptables y productos no auténticos y no aceptables. Puede realizarse mayor calibrado. Primero, puede seleccionarse una dilución de prueba como aquella dilución que sea el 50% de la mínima dilución de producto a la que se consigue una fluorescencia máxima para un tinte. A continuación, pueden variarse variables como temperatura, tiempo de incubación y productos no aceptables o no auténticos, medidos preferentemente en cuadruplicado, para permitir la selección de tintes útiles para un producto dado. Como debería entenderse, mediante el uso de esta metodología de detección selectiva, pueden seleccionarse paneles de tintes para producir perfiles de huellas digitales, sin conocimiento de la composición del producto o los analitos en el producto a los que se une el tinte.
TABLA 1
1
TABLA 2
2
\newpage
Otra herramienta de emisión de luz para identificación de productos es el fenómeno de emisión de luz estándar denominado inactivación de impurezas. Incluso en soluciones diluidas, las impurezas pueden causar una inactivación mensurable de la emisión de luz. La cantidad específica de inactivación puede aprovecharse para identificar un lote o serie específico de un producto. Ver, por ejemplo, "Practical Fluorescence", G.G. Guilbault, Editor, página 32. Es también posible que la longitud de onda de emisión de luz del compuesto emisor de luz pueda desplazarse en presencia (o ausencia) de un ingrediente en el producto. Este desplazamiento puede usarse para cuantificar la cantidad de ingrediente presente en el producto.
Las diferencias de producción regional pueden determinarse usando dos procedimientos diferentes. Un procedimiento implica la identificación de compuestos de especificidad regional a partir de diferencias en los materiales de partida. Diferentes proveedores de ingredientes de un producto dejarán diferentes niveles de compuestos traza en sus materiales suministrados. Aun cuando estos compuestos traza estén presentes en niveles extremadamente bajos, los compuestos emisores de luz son sensibles a un nivel de partes por millón e incluso a partes por mil millones en algunos casos. Por ejemplo, los niveles traza de los compuestos, como aldehídos y metanol, pueden usarse para identificar diferentes variedades (es decir, proveedores) de sacarosa y jarabe de maíz rico en fructosa en productos de consumidor de frutas y cola. En otro ejemplo, el etanol destilado a partir de maíz contiene diferentes componentes traza que el etanol destilado a partir de azúcar de caña. La identificación y análisis de estos elementos traza puede usarse para detectar la autenticidad del producto o detectar el relleno (dilución) de un producto en particular.
Un segundo procedimiento para determinar diferencias regionales en un producto implica análisis de elementos (o compuestos) traza, por ejemplo, en el agua usada para diluir el producto de consumidor. Los elementos (o compuestos) traza pueden usarse como un marcador de número de lote específico. Específicamente, pueden usarse niveles de calcio, magnesio y/o metales pesados para identificar productos mediante "identidad de agua de número de lote específico". Adicionalmente, los procedimientos de una empresa pueden dar como resultado una cantidad detestable de al menos un material traza que puede identificar el producto específico de las empresas. La identidad y cantidad de los materiales traza hace posible identificar el número de lote de una tanda de producción específica. Por ejemplo, muchas colas tienen un nivel fijo de cafeína en el concentrado y en el producto final. Pueden desarrollarse compuestos emisores de luz que indican concentraciones de cafeína según los procedimientos descritos en la presente memoria descriptiva.
Las cantidades relativas de ingredientes clave en una muestra pueden determinarse por análisis de emisión de luz. La medida de emisión de luz puede usarse en combinación con otro análisis de emisión de luz traza para determinar la autenticidad. Por ejemplo, el vodka debe contener el 50% de etanol para poder denominarse legalmente vodka. Adicionalmente, este procedimiento puede usarse para identificar un número de lote o número de serie o para determinar la autenticidad de, por ejemplo, zumo de naranja, zumo de manzana o zumo de limón.
Las cantidades relativas de agua pueden compararse en un patrón de muestra estándar y una muestra sospechosa usando, por ejemplo, los tintes de emisión de luz de naftilamina. Las naftilaminas sulfonadas, como 2-p-toludinilnaftalen-6-sulfonato (2,6-TNS) y 1-anilino-8-naftalensulfonato (1,8-ANS), desplazan la longitud de onda de emisión de luz en agua. La cantidad relativa de desplazamiento depende de la cantidad de agua en una muestra. Por ejemplo, en agua, la sensibilidad espectral se desplaza sustancialmente a longitudes de onda más largas, y la producción cuántica de emisión de luz y los tiempos de desintegración disminuyen.
Análisis de datos
El análisis multivariante puede usarse para analizar los resultados de emisión de luz de cada muestra de producto con cada compuesto emisor de luz. Normalmente, los resultados se interpretan en comparación con la emisión de luz de una muestra de producto patrón tratada de la misma forma, o una "huella digital". Todas las muestras pueden analizarse en relación con la presencia de ingrediente clave usando un compuesto emisor de luz que contiene un único compuesto emisor de luz o una combinación de los compuestos emisores de luz. Para cada conjunto de muestras de productos se determinan los valores medios mayor y menor usando cuatro medidas independientes tomadas de la misma muestra (n = 4). El procedimiento de comparación múltiple permite la determinación de un valor crítico (por ejemplo, a un nivel de confianza del 95%) para la diferencia entre las medias mayor y menor de la muestra, que se refiere a las diferencias en los productos respectivos. Una diferencia en las medias de muestras que sea igual o mayor que el valor crítico sugiere una diferencia importante en los productos. Una diferencia importante puede implicar diferentes tratamientos de productos, materiales de partida y composiciones.
Normalmente, el análisis implica un Procedimiento de Comparación Múltiple de Tukey realizado, por ejemplo, a un nivel de confianza del 95% (a = 0,05). El Procedimiento de Comparación Múltiple supone que el número de medias de muestras, k, se basa en muestras aleatorias independientes, conteniendo cada una el mismo número de observaciones, n. En este caso, s, la desviación típica, es la raíz cuadrada de los errores cuadráticos medios (ECM) de las medias de muestras. El ECM tiene una serie de grados de libertad, v, asociados con él. A partir de k, v y a, puede determinarse el valor crítico del intervalo de Student q_{a}(k,v) (ver, por ejemplo, Biometrika Tables, Vol. 1, E.L. Pearson y H.O. Harily, eds., Cambridge University Press, Cambridge (1966)). De ello se sigue que la distancia, omega
(\omega) es
\omega = q_{a} (k, v) \frac{s}{_{N}0,5}
El análisis de Tukey puede permitir la identificación de medias de muestras que no se corresponden con los productos patrón. Si dos medidas difieren en un valor mayor que omega, entonces las dos muestras son diferentes. En caso contrario, las muestras son pares que tienen composiciones sustancialmente similares (es decir, son la misma composición, pero podrían ser diferentes series). Cada sistema de compuesto emisor de luz/muestra de producto puede considerarse una única variante. La combinación conjunta de los análisis de cada uno de los compuestos emisores de luz puede llevar a un programa de análisis multivariante para el cual los autores de la invención han desarrollado un programa de software. Este análisis de autenticidad del producto emisor de luz multivariante puede realizarse usando, por ejemplo, programas informáticos de tipo hoja de cálculo.
Aunque en la presente memoria descriptiva se ha descrito el análisis de Tukey, debe observare que pueden usarse otros procedimientos multivariantes. Dichos procedimientos alternativos incluyen, por ejemplo, el análisis de intervalos múltiples de Duncan y el análisis de Newman-Kuls, según se describen en Biostatistical Analysis, 3ª Edición, J.H. Zar, Prentice-Hall, Upper Saddle River, NJ (1996).
La Figura 2 es un diagrama de flujo de datos que representa el procesamiento global en este sistema de la descripción. Se procesan muestras patrón con compuestos seleccionados mediante el primer sistema de procesamiento 40 para producir resultados de emisión de luz 42. Es posible que estos resultados de emisión de luz puedan almacenarse en una base de datos 44. Análogamente, se procesan muestras desconocidas mediante un sistema de procesamiento 46 usando los mismos compuestos seleccionados. El sistema de procesamiento 46 produce resultados de emisión de luz 48, es decir, una huella digital para cada muestra desconocida. Se realiza un procedimiento de comparación mediante un comparador para producir una indicación de la autenticidad de la muestra. La comparación puede realizarse usando el Procedimiento de Comparación Múltiple de Tukey descrito anteriormente. Este ordenador puede recibir los datos de los resultados de emisión de luz a partir de sistemas de procesamiento 40 y 46 ya sea directamente desde esos sistemas o a través de una red informática. El comparador también puede recibir la huella digital de las muestras patrón de una base de datos que puede ser local o remota desde el ordenador que ejecuta el procedimiento de comparación.
Un sistema informático adecuado para implementar el comparador 50 incluye normalmente una unidad principal conectada a un dispositivo de salida, como una pantalla, y un dispositivo de entrada, como un teclado. La unidad principal incluye generalmente un procesador conectado a un sistema de memoria por medio de un mecanismo de interconexión. El dispositivo de entrada está conectado también al procesador y el sistema de memoria por medio del mecanismo de conexión, al igual que el dispositivo de salida.
Debe entenderse que al sistema informático pueden conectarse uno o más dispositivos de salida. Los dispositivos de salida de ejemplo incluyen una pantalla de tubo de rayos catódicos (TRC), pantallas de cristal líquido (LCD), impresoras, dispositivos de comunicación como un módem y salida de audio. Debe entenderse también que al sistema informático pueden conectarse uno o más dispositivos de entrada. Los dispositivos de entrada de ejemplo incluyen un teclado, teclado numérico, puntero de bola, ratón, lápiz y alfombrilla, dispositivo de comunicación, entrada de audio y escáner. Debe entenderse que la descripción no se limita a los dispositivos de entrada o salida en particular usados en combinación con el sistema informático o a los descritos en la presente memoria descriptiva.
El sistema informático puede ser un sistema informático de propósito general que es programable usando un lenguaje de programación informática de alto nivel, como "C" o "Pascal". El sistema informático puede ser también un hardware de propósito general programado especialmente. En un sistema informático de propósito general, el procesador es normalmente un procesador disponible comercialmente, del cual son ejemplos los procesadores de la serie x86, disponibles en Intel, y los microprocesadores de la serie 680X0 disponibles en Motorola. Se puede disponer de otros muchos procesadores. Dicho microprocesador ejecuta un programa denominado sistema operativo, del que son ejemplos UNIX, DOS y VMS, que controla la ejecución de otros programas informáticos y proporciona planificación, depuración, control de entradas/salidas, contabilidad, compilación, asignación de memoria, gestión de datos y gestión de memoria, y control de comunicación y servicios relacionados. El procesador y el sistema operativo definen una plataforma informática para la cual se escriben programas de aplicación en lenguajes de programación de alto nivel.
Un sistema de memoria incluye normalmente un soporte de grabación no volátil legible y escribible por ordenador, del cual son ejemplos un disco magnético, una memoria instantánea y una cinta. El disco puede ser extraíble, conocido como disco flexible o disco óptico, o permanente, conocido como disco duro. Un disco tiene una serie de pistas en las que se almacenan las señales, normalmente en forma binaria, es decir, una forma interpretada como una secuencia de unos y ceros. Dichas señales pueden definir un programa de aplicación que será ejecutado por el microprocesador, o información almacenada en el disco que será procesada por el programa de aplicación. Normalmente, en funcionamiento, el procesador hace que los datos sean leídos por el soporte de grabación no volátil en un elemento de memoria de circuito integrado, que es normalmente una memoria volátil de acceso aleatorio como una memoria de acceso aleatorio dinámica (DRAM) o una memoria estática (SRAM). El elemento de memoria de circuito integrado permite un acceso más rápido a la información por parte del procesador que al disco. El procesador manipula generalmente los datos dentro de la memoria de circuito integrado y después copia los datos al disco cuando se completa el procesamiento. Se conoce una diversidad de mecanismos para gestionar el movimiento de datos entre el disco y el elemento de memoria del circuito integrado, y la descripción no se limita al mismo. También debe entenderse que la descripción no se limita a un sistema de memoria en particular.
\newpage
Debe entenderse que la descripción no se limita a una plataforma informática en particular, un procesador en particular o un lenguaje de programación de alto nivel en particular. Adicionalmente, el sistema informático puede ser un sistema informático multiprocesador o puede incluir múltiples ordenadores conectados en una red informática.
Materiales y procedimientos
Los procedimientos se desarrollaron para optimizar el análisis o determinar la autenticidad o falsificación de un producto en el agua y/o componente orgánico del producto. A continuación se describen en general los procedimientos para el uso de los Compuestos 1 a 10.
Se usó un puesto de trabajo automatizado Beckman Biomek 1000 (Beckman Instruments, Columbia, MD) para preparar diluciones y colocar 150 microlitros del compuesto emisor de luz en una placa de prueba, aunque puede usarse cualquier puesto de trabajo de dispensación automatizado. La placa de prueba puede estar hecha de cualquier material adecuado y puede tener cualquier número de pocillos, como 6, 24, 96 ó 384 pocillos (Corning-Costar, Falcon-Collaborative, placa de pruebas de micropocillos). La emisión de luz del compuesto emisor de luz en ausencia de producto es Fp, y la emisión de luz después de exponer el compuesto emisor de luz al producto es Fd. El análisis de emisión de luz Fd y Fp para el fin de estos experimentos se realizó usando un Molecular Dynamics Fluorlmager 575, aunque puede usarse cualquier lector de microplacas (por ejemplo, Cytofluor).
Se usan filtros de paso de banda y de corte para aislar longitudes de onda de excitación de espectros de emisión debido a emisión de luz desde la muestra. El análisis de emisión de luz Fd se realizó para cada producto químico en cada pocillo de la placa de prueba. La repetición de las medidas permite la corrección de variabilidad sistemática debida, por ejemplo, a pipeteo automático (< 5%). A continuación, se añaden 150 microlitros de producto a los productos químicos en los micropocillos usando el puesto de trabajo automatizado Beckman Biomek 1000. Se deja que el producto químico y el producto reaccionen durante un periodo de tiempo y a una temperatura que es específica de cada producto y producto químico. El cambio en la emisión de luz del producto químico debido a la presencia del producto se determina mediante cálculo usando la ecuación [(Fd-Fp)/Fd]x100.
En ciertas formas de realización, puede usarse un patrón inmutable, como un rubí u otra piedra preciosa, para compensar variaciones en la intensidad de la señal de salida láser. Para dichas formas de realización, el patrón inmutable puede colocarse en uno de los pocillos de la placa de prueba.
El compuesto 1,5-(2-carbohidrizinometiltioacetil)aminofluoresceína se obtuvo de Molecular Probes, Inc., Eugene, OR, Lote 2841-1. La concentración final de la solución de trabajo puede estar comprendida entre 0,5 y 10 micromolar. El Compuesto 1 tiene una excitación máxima a 488 nm en pH neutro y 356 nm en pH 8. El Compuesto 1 tiene un máximo de emisión a 520 nm. Ver R.E. Hileman y col., Bioconjugate Chem. 5:436 (1994) para la síntesis del compuesto.
El Compuesto 2 y el Compuesto 3 deben usarse en el procedimiento conjuntamente. El Compuesto 2,5-(4,6-diclorotiazinil)aminofluoresceína, se obtuvo de Molecular Probes, Inc., Eugene, OR, Lote 2851-1. Se preparó una solución de reserva de Compuesto 2 en sulfóxido de dimetilo (DMSO, reactivo ACS, Sigma Chemical, St Louis, MO). La concentración final de la solución de trabajo puede estar comprendida entre 0,5 y 10 micromolar. El Compuesto 2 tiene un máximo de excitación a 495,7 nm y un máximo de emisión a 516,3 nm. Para una referencia que describe el uso original de este compuesto, ver Barskii y col., Izv. Akad. Nuak SSSR, V.E. (1968) PN 101.
El Compuesto 3, Fluo-3, sal de pentaamonio, se obtuvo de Molecular Probes, Inc., Eugene, OR, Lote 2641-6. La concentración final de la solución de trabajo puede estar comprendida entre 0,5 y 10 micromolar. El Compuesto 3 tiene un máximo de excitación a 510 nm y un máximo de emisión a 530 nm. Fluo-3 se desarrolló para medir niveles de calcio en experimentos celulares. Ver, por ejemplo, Tsien, R., y col., J. Biol. Chem. 264:8171 (1989).
El Compuesto 4, hemisulfato de proflavina (hemisulfato de 3,6-diaminoacridina), se obtuvo de Sigma-Aldrich, St. Louis, MO. La concentración final de la solución de trabajo puede estar comprendida entre 0,5 y 10 micromolar. El Compuesto 4 tiene un máximo de emisión a 515 nm en metanol. La proflavina se desarrolló como un tinte de material textil y para procedimientos de tinción celular. Ver, por ejemplo, Chan, L.M., y col., Biochem. Biophys. Acta, 204:252 (1970).
El Compuesto 5, sal de tetra(tetrametilamonio), se obtuvo de Molecular Probes, Inc., Eugene OR. La concentración final de la solución de trabajo puede estar comprendida entre 0,5 y 20 micromolar, dependiendo del producto sometido a prueba. El Compuesto 5 tiene un máximo de excitación a 488 nm y un máximo de emisión a aproximadamente 535 nm. El Compuesto 5 se desarrolló en Molecular Probes como Sodio Greenlm para la determinación fluorométrica de concentraciones de Na^{+}.
El Compuesto 6, clorhidrato de naranja de acridina hidratado, se obtuvo de Sigma-Aldrich, St. Louis, MO. La concentración final de la solución de trabajo puede estar comprendida entre 0,5 y 20 micromolar. El Compuesto 6 tiene un máximo de excitación a aproximadamente 490 nm y un máximo de emisión a 519 nm. El Compuesto 6 puede usarse para tintas de impresión y como un colorante para grasas y lípidos en muestras biológicas. Ver, por ejemplo, Clark, G:, "Staining Procedures" ed. Williams y Wilkins, Baltimore 1981 pág. 48, 57, 61, 71, 72, 86, 87, 89, 90 y 429.
El Compuesto 7, BTC-5N (Costlei y col., J. of Chem. Society Perkins translation 2, pág. 1615), se obtuvo de Molecular Probes, Inc., Eugene, OR. La concentración final de la solución de trabajo puede estar comprendida entre 0,5 y 20 micromolar. El Compuesto 7 tiene un máximo de excitación a aproximadamente 415 nm y un máximo de emisión a 515 nm.
El Compuesto 8, acriflavina, está compuesto por una mezcla aproximada de 8 a 1 de cloruro de 3,6-diamino-10-metilacridinio y 3,6-diaminoacridina, y se obtuvo de Sigma-Aldrich, St. Louis, MO. La concentración de la solución de trabajo puede estar comprendida entre 0,5 y 20 micromolar, dependiendo del producto sometido a prueba. El Compuesto 8, en su forma neutra, tiene un máximo de excitación en etanol a 483 nm y un máximo de emisión a 517 nm con un estado de emisión de larga duración que puede usarse para identificar los niveles relativos de etanol en una muestra. La emisión de larga duración en etanol es observada por Furumoto, H.W. y Ceccon, H.L., IEEE J. Quantum Electron., QE-6, 262, (1970). El Compuesto 8 es un colorante biológico corriente y es útil como un compuesto emisor de luz y un reactivo de Schiff. Ver, por ejemplo, "Conn's, Biological Stains", 9ª ed.: Lillie, R.D., Ed.; Williams y 25 Wilkins: Baltimore, 1977; pág. 355.
El Compuesto 9, 4-aminofluoresceína, se obtuvo de Sigma-Aldrich, St. Louis, MO. La concentración de la solución de trabajo puede estar comprendida entre 0,5 y 20 micromolar, dependiendo del producto sometido a prueba. El Compuesto 9 tiene un máximo de excitación a 496 nm y un máximo de emisión a 530 nm. Ver, por ejemplo, Coons, A.H., y col., J. Exp. Med. 91:1-14 (1950).
El Compuesto 10, 5-aminofluoresceína, obtenido de Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, se usó de una forma similar y a concentraciones similares que el Compuesto 9. La emisión es a 530 nm. Glabe y col., Anal. Biochem, 130:287-294 (1983).
El Compuesto 11, cumarina azul de sulfito, S-6902, se obtuvo de Molecular Probes, Eugene, OR. El Compuesto 11 tiene un máximo de excitación a 325 nm y un máximo de emisión a 373 nm. El Compuesto 11 puede ser útil para medir sulfitos. La contaminación de sulfitos en jarabe de maíz rico en fructosa es un problema bien conocido en la industria de procesamiento y molido del maíz.
El Compuesto 12, criptando diácido de cumarina (CD222) (Costlei y col., J. of Chem. Society Perkins translation 2, pág. 1615), se obtuvo de Molecular Probes, Eugene, OR. El Compuesto 12 es un tinte de porcentaje con un máximo de excitación a 365 nm y un máximo de emisión a 465 nm. El Compuesto 12 es un tinte sensible al potasio, que facilita la autenticación basada en benzoato de potasio, un conservante en muchas bebidas de cola.
El Compuesto 13, eosina Y, se obtuvo de Sigma Aldrich, calidad certificada, St. Louis, MO. El Compuesto 13 tiene un máximo de excitación a 522 nm y un máximo de emisión a 551 nm. El Compuesto 13 es un compuesto emisor de luz sensible al pH.
Ejemplo 1
Licores neutros
Los procedimientos de análisis de la descripción pueden usarse en la industria de vino y licores destilados para determinar la autenticidad del producto, defender las marcas comerciales internacionales, documentar la calidad de productos y detectar el rellenado de productos (es decir, dilución con ingredientes de menor calidad). En esta industria, el origen y fuente del etanol en un producto puede usarse para determinar la autenticidad del producto. La etiqueta del producto debe representar correctamente el contenido en un envase del fabricante. Anteriormente, no había procedimiento práctico para determinar la fuente de etanol o licores neutros (etanol al 96%).
Se realizó un experimento doble ciego para determinar las diferencias entre 6 muestras de licores neutros. Además, si existían duplicados, el experimento se diseñó para identificar los duplicados.
Los orígenes de productos de licores neutros pueden identificarse a partir de los datos presentados en la Tabla 3 y la Tabla 4. En referencia a la Tabla 3, el nivel de emisión de luz en excitación se monitorizó en una matriz de seis muestras (10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5 y 10-6) que se sometieron a prueba cada una cuatro veces (A, B, C y D) con un par de los compuestos emisores de luz. Dentro de cada conjunto, cada muestra del producto se sometió a prueba cuatro veces con un compuesto emisor de luz. La longitud de onda de excitación fue de 522 nm. Los compuestos emisores de luz fueron el Compuesto 2 y el Compuesto 3.
Las soluciones de reserva de los compuestos emisores de luz se prepararon disolviendo el Compuesto 2 en DMSO a una concentración de 2 mM y el Compuesto 3 en DMSO a una concentración de 1 mM.
Las concentraciones de las soluciones de trabajo de los compuestos emisores de luz se optimizaron frente a muestras conocidas de licores neutros. Las concentraciones óptimas se determinaron a partir de las concentraciones de los compuestos emisores de luz que proporcionan intensidades de emisión que son capaces de distinguir muestras conocidas de licores neutros de otras muestras en un valor mayor que omega. La solución de trabajo del Compuesto 2 se preparó diluyendo 120 \mul de tinte de la solución de reserva en 20 ml de agua destilada. La solución de trabajo del Compuesto 3 se preparó diluyendo 100 \mul de la solución de reserva en 20 ml de agua destilada.
Tanto el Compuesto 2 como el Compuesto 3 requieren un filtro de paso de banda 530BP+15 nm para reducir la intensidad de la longitud de onda de excitación durante las medidas de emisión. La intensidad de la emisión se midió en unidades de fluorescencia relativas (ufr). La medidas de emisión se realizan siempre en la región de respuesta lineal, que en este instrumento de medida de fluorescencia se realiza entre 200 y 2.000 ufr.
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 3
3
\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
\cr
\cr}
4
\newpage
Cada solución de trabajo (150 \mul) se añadió a la placa de prueba usando un dispositivo de manipulación automatizado con menos del 5% de error en medida del volumen. Se midió en la combinación solución de trabajo/placa la fluorescencia de fondo para tener en cuenta la variabilidad en composición, dimensiones de placa y producción láser. Los experimentos de excitación y emisión pueden realizarse en cualquier sistema de detección de fluorescencia láser o no láser. En este conjunto de experimentos las medidas se realizaron usando un FluorImager 575 (Molecular Dynamics, Sunnyvale, CA).
Las muestras de licores neutros se añadieron directamente a la placa de muestra. Un descubrimiento clave en el análisis de licores neutros (etanol al 96%) es que el análisis del agua residual es importante. La señal del Compuesto 3 se diseña para analizar el agua residual. Sin embargo, las altas concentraciones de etanol en las muestras enmascaran la señal del agua. Para que este procedimiento de identificación funcione bien, se elimina el etanol al vacío de las muestras después de que se hayan añadido a los micropocillos individuales de la placa. Esta reducción permite el análisis exacto del agua en las muestras de licores neutros. Como la reducción tiene lugar directamente en las placas de micropocillos, todas las muestras se tratan por igual y el procedimiento se automatiza colocando una campana de vacío en el puesto de trabajo automatizado de manipulación de placas.
Los resultados del experimento se presentan en la Tabla 3. Para cada grupo (A, B, C o D) de 4 medidas se calcularon la varianza y la media. Se usaron niveles de confianza del 95% para este análisis de huella digital. Si dos medias de muestras difieren en una cantidad mayor que omega, las muestras son diferentes (es decir, sustancialmente diferentes en composición). Por ejemplo, en la prueba A, la muestra 10-1 tenía una intensidad media de emisión de luz de 0,2357 y la muestra 10-2 tenía una intensidad media de emisión de luz de -0,5495. La diferencia en intensidad de emisión de luz fue de 0,7852. El valor omega para la prueba A fue 0,0354918. Si la diferencia (0,7852) es mayor que omega (0,0354918) para dos muestras cualesquiera, entonces las muestras son diferentes. Por tanto, 10-1 y 10-2 son diferentes. La comparación se realiza basándose estrictamente en los datos estadísticos y puede realizarse automáticamente, sin necesidad de más interpretación.
Los datos de huella digital se presentan en la Tabla 4 para hacer posibles todas las comparaciones. Un valor de 1 en la Tabla 4 indica que las dos medias de muestras difieren en más de omega. El valor de 0 indica que dos muestras no difieren en más de omega. Así, un valor de 0 significa que las muestras son pares (es decir, sustancialmente similares en composición, como diferentes series o lotes) o que la muestra se está sometiendo a prueba frente a sí misma (a lo largo de la diagonal de arriba a la izquierda abajo a la derecha de la Tabla 4) y un valor de 1 significa que las muestras son diferentes. Cuando los pares de muestras son consistentemente diferentes, se determina que las muestras tienen sustancialmente composiciones diferentes (es decir, diferentes marcas en conjunto). Como consecuencia del análisis de huellas digitales de la Tabla 4, se determinó que los productos 10-1 y 10-6, 10-2 y 10-5, y 10-3 y 10-4 eran pares (es decir, sustancialmente similares en composición) que son diferentes entre sí (es decir, diferentes lotes).
Ejemplo 2
Licores destilados
De manera similar a la descrita en el Ejemplo 1, es posible autenticar licores destilados, como vodka. Para este análisis de huella digital pueden usarse Compuesto 1, Compuesto 2, Compuesto 3, Compuesto 4, Compuesto 5, Compuesto 6, Compuesto 7 y Compuesto 8.
La solución de reserva de Compuesto 1 fue 1,5 mM en una mezcla 1:1 de DMSO/agua. La solución de reserva de Compuesto 2 fue 2 mM en DMSO. La solución de reserva de Compuesto 3 fue 0,5 mM en una mezcla 1:1 de DMSO/agua. La solución de reserva de Compuesto 4 fue 1 mM en DMSO. La solución de reserva de Compuesto 5 fue 1 mM en agua destilada. La solución de reserva de Compuesto 6 fue 1 mM en DMSO. La solución de reserva de Compuesto 7 fue 1 mM en agua destilada. La solución de reserva de Compuesto 8 fue 4 mg/ml en etanol (calidad de cromatografía, Sigma Chemical Company, St. Louis, MO).
Las concentraciones de soluciones de trabajo se determinaron como en el Ejemplo 1. Se determinó que la concentración óptima de compuesto emisor de luz fuera del nivel que permite la distinción de muestras conocidas que tienen diferencias de valores mayores que omega. La solución de trabajo de Compuesto 2 se preparó diluyendo 120 \mul de la solución de reserva 2 mM en 20 ml de agua destilada. La solución de trabajo de Compuesto 3 se preparó diluyendo 100 \mul de la solución de reserva en 20 ml de agua destilada. La solución de trabajo de Compuesto 4 se preparó diluyendo 100 \mul de la solución de reserva en 50 ml de agua destilada. La solución de trabajo de Compuesto 5 se preparó diluyendo 75 \mul de la solución de reserva en 50 ml de agua destilada. La solución de trabajo de Compuesto 6 se preparó diluyendo 50 \mul de la solución de reserva en 50 ml de etanol. La solución de trabajo de Compuesto 7 se preparó diluyendo 25 \mul de la solución de reserva en 50 ml de agua destilada. La solución de trabajo de Compuesto 8 se preparó diluyendo 50 \mul de la solución de reserva en 50 ml de agua destilada. Los Compuestos 1, 2, 3, 4, 5, 6 y 8 requieren un filtro de paso de banda 530BP+15 nm para reducir la intensidad de la longitud de onda de excitación durante las medidas de emisión. El Compuesto 7 requiere el uso de un filtro de Paso Largo (PL) de 515 nm.
Cada solución de trabajo (150 \mul) se añadió a la placa de prueba usando un dispositivo de manipulación automatizado con menos del 5% de error en la medida de volumen como en el Ejemplo 1. Las muestras de licores destilados (vodka) se analizaron según se describe en el Ejemplo 1.
Ejemplo 3
Bebidas carbonatadas y bebidas de frutas
Los procedimientos de análisis de la descripción pueden usarse en la industria de los refrescos y los zumos de frutas, en particular para comprobar reformulaciones de terceros en todos los lotes y monitorizar los acuerdos de licencias, por ejemplo. La velocidad de análisis necesaria para comprobar las muestras de este tipo debe ser superior a 300 muestras/hora. Ésta no fue una prueba de doble ciego.
Las formulaciones de productos pueden verificarse por procedimientos similares a los descritos en el Ejemplo 1. La huella digital es la misma que cuando el producto se produce con la misma alta calidad de patrones. En referencia a la Tabla 5, se monitorizó la emisión de luz en una matriz de seis muestras (Pepsi 1, Pepsi 2, Diet Pepsi 3, Coke Classic 4, Diet Coke 5 y Black Cherry 6), cada una de las cuales se sometió a prueba cuatro veces con los cuatro compuestos emisores de luz diferentes (A, B, C y D). La prueba A usó Compuesto 1. La prueba B usó Compuesto 2. La prueba C usó Compuesto 3. La prueba D usó Compuesto 9. Cada muestra del producto fue sometida a prueba cuatro veces con cada compuesto emisor de luz.
Los procedimientos de prueba se realizaron generalmente de la siguiente manera. Las bebidas o zumos se diluyeron a entre 1:10 y 1:300 con agua para una reacción óptima con los compuestos emisores de luz. La respuesta óptima de la muestra se determina empíricamente, usando una curva de concentración para elevar al máximo la respuesta de emisión. La concentración de la muestra se seleccionó para dar una mitad de la respuesta de emisión máxima con la muestra sometida a prueba.
5
\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
\cr
\cr}
6
\newpage
Las soluciones de reserva de los compuestos emisores de luz se prepararon disolviendo Compuesto 1 a una concentración de 1,5 mM en DMSO/agua 1:2, Compuesto 2 a una concentración de 2 mM en DMSO, Compuesto 3 a una concentración de 1 mM en DMSO y Compuesto 9 a una concentración de 10 mM en DMSO.
Las concentraciones de soluciones de trabajo de los compuestos emisores de luz se optimizaron según se describe en el Ejemplo 1. Las concentraciones óptimas se calcularon a partir de las concentraciones de compuesto emisor de luz que proporcionan valores de intensidad de emisión que pueden distinguir una muestra de producto patrón de otras muestras desconocidas por un valor mayor que omega. La solución de trabajo de Compuesto 1 se preparó diluyendo
75 \mul de la solución de reserva en 50 ml de agua destilada. La solución de trabajo de Compuesto 2 se preparó diluyendo 120 \mul de la solución de reserva en 20 ml de agua destilada. La solución de trabajo de compuesto 3 se preparó diluyendo 100 \mul de la solución de reserva en 20 ml de agua destilada. La solución de trabajo de Compuesto 9 se preparó diluyendo 50 \mul de la solución de reserva en 50 ml de agua destilada.
Los Compuestos 1, 2, 3 y 9 requieren un filtro de paso de banda 530BP\pm15 nm para reducir la intensidad de la longitud de onda de excitación durante las medidas de emisión. La colocación de las muestras y el análisis de emisión se realizaron según se describe en el Ejemplo 1.
Los resultados del experimento se presentan en la Tabla 5. Hubo cuatro medidas diferentes (A, B, C y D) realizadas cada muestra en combinación con cada compuesto emisor de luz. Cada medida se repitió cuatro veces para demostrar el nivel de reproducibilidad. La varianza y la media se calcularon para cada grupo de 4 medidas. Se usaron niveles de confianza del 95% para este análisis de huella digital. Si dos medias de muestras difieren en una cantidad mayor que omega, las muestras son diferentes (es decir, sustancialmente similares en composición). Por ejemplo, en la prueba con compuesto emisor de luz D, la muestra Pepsi 1 tenía una emisión de luz media de 8,9944 y la muestra Pepsi 2 tenía una emisión de luz media de 9,1055. La diferencia en emisión de luz fue de 0,1111. El valor de omega para la prueba fue 0,3232988. Si la diferencia (0,1111) es mayor que omega para dos muestras cualesquiera, entonces las muestras son sustancialmente la misma. Por tanto, Pepsi 1 y Pepsi 2 son sustancialmente la misma.
Los datos de huellas digitales se presentan en la Tabla 6 para hacer todas las comparaciones posibles y se establecen de la misma manera que en el Ejemplo 1. Como consecuencia del análisis de huellas digitales de la Tabla 6, Pepsi 1 y Pepsi 2 son pares, con composiciones similares, y las otras muestras no están relacionadas.
Ejemplo 4
Análisis de bebidas en una etapa
Los procedimientos del Ejemplo 3 pueden modificarse para monitorizar ingredientes clave en bebidas. De manera importante, se descubrió que los ingredientes clave que se miden actualmente mediante procedimientos analíticos estándar para monitorización de autenticidad pueden medirse también por los procedimientos de medidas automatizadas de emisión de la invención. En otras palabras, existen algunos ingredientes inherentes a ciertos productos que tienen propiedades características de emisión de luz. Los procedimientos pueden usarse para analizar estos componentes en un análisis monoplaca con todos los compuestos emisores de luz combinados conjuntamente, con lo que se permite la modificación y automatización del procedimiento en un solo y económico barrido de emisión de una etapa.
Los ingredientes patrón que se monitorizan en colas son, por ejemplo, jarabe de maíz rico en fructosa (JMRF), cafeína, benzoato de potasio, benzoato de sodio, pH y aspartamo. Se han desarrollado dos combinaciones de los compuestos emisores de luz para el análisis de colas. La Combinación 1 permite la monitorización de fuentes de azúcar (o JMRF), cafeína, pH y conservantes (como benzoato de potasio o de sodio). La Combinación 1 es útil para analizar bebidas carbonatadas corrientes. La Combinación 2 está adaptada para el análisis de bebidas carbonatadas de dieta y permite la monitorización de aspartamo, cafeína, pH y conservantes. Las Combinaciones están diseñadas para detectar cambios en ingredientes específicos del 0,1, 0,3, 0,5, 1, 2 y 3% de niveles de reducción.
La Combinación 1 incluye Compuesto 1, Compuesto 3 y Compuesto 11 para el análisis de azúcar (o JMRF). La cafeína es un compuesto emisor de luz en solitario y no requiere la adición de otro componente a la mezcla. Los conservantes comunes, benzoato de potasio y de sodio, pueden identificarse usando una serie de los compuestos emisores de luz. Por ejemplo, el Compuesto 12 es un tinte sensible al potasio. El ácido carboxílico en el grupo benzoato es reactivo con todos los compuestos emisores de luz que contienen haluro de alquilo, carbodiimida y alcohol (ver Tabla 1). El pH puede determinarse usando cualquier compuesto emisor de luz sensible al pH que emite en el intervalo de pH de 1 a 4 (la mayoría de los refrescos están comprendidos en pH de 2,4 a 4,0). Un ejemplo específico de un compuesto emisor de luz sensible al pH es el Compuesto 13.
Las soluciones de reserva de los compuestos emisores de luz se prepararon disolviendo Compuesto 1 a una concentración de 1,5 mM en una mezcla 1:1 de DMSO/agua, Compuesto 3 a una concentración de 0,5 mM en mezcla 1:1 de DMSO/agua, Compuesto 11 a una concentración de 10 mM en etanol, Compuesto 12 a una concentración de 10 mM en DMSO y Compuesto 13 a una concentración de 10 mM en agua destilada.
Se optimizaron las concentraciones de trabajo para identificación de ingredientes clave para cada producto de bebida refrescante, según se describe en el Ejemplo 1. La solución de trabajo de Compuesto 1 se preparó diluyendo
75 \mul de la solución de reserva en 50 ml de agua destilada. La solución de trabajo de Compuesto 3 se preparó diluyendo 100 \mul de la solución de reserva en 20 ml de agua. La solución de trabajo de Compuesto 11 se preparó diluyendo 50 \mul
de la solución de reserva en 50 ml de agua destilada. La solución de trabajo de Compuesto 12 se preparó diluyendo
50 \mul de la solución de reserva en 50 ml de agua destilada. La solución de trabajo de Compuesto 13 se preparó diluyendo 50 \mul en 100 ml de agua destilada.
La cafeína (anhidra; Producto Patrón de Referencia Sigma IC-1778) se usó como un patrón en una bebida sin cafeína (específica del producto) como un patrón de calibrado interno en cuanto a la presencia de cafeína. La cafeína tiene máximos de excitación a 254 nm y 330 nm y un máximo de emisión a 350 nm.
El Compuesto 1 y el Compuesto 3 requieren un filtro de paso de banda 520BP\pm15 nm. La cafeína requiere un filtro de paso largo 345LP nm. El Compuesto 11 requiere un filtro de paso de banda 3658+15. El Compuesto 12 requiere un filtro de paso de banda 460BP+6,8 nm. El Compuesto 13 requiere un filtro de paso de banda 550BP+15 nm.
La Combinación 2, para analizar bebidas carbonatadas de dieta, es esencialmente la misma que la Combinación 1 con la salvedad de que los Compuestos 1, 3 y 11 se sustituyen por compuestos emisores de luz que indican la presencia relativa de aspartamo. Éstos incluyen los compuestos emisores de luz que reaccionan, o interaccionan, con grupos de ácido carboxílico y grupos amina. Ver ejemplos en la Tabla 1.
Ejemplo 5
Leches de fórmula para lactantes
Los procedimientos de la descripción pueden usarse en la industria de leches de fórmula para lactantes para autenticación de productos. En 1995, se distribuyó ilegalmente en cadenas de tiendas de 16 estados una versión con etiqueta falsificada de leche de fórmula para lactantes. La autenticación de leche de fórmula para lactantes en las estanterías puede ayudar a asegurar a los clientes de leches de fórmula que un producto es auténtico y fiable. Usando los procedimientos, se puede asegurar que el producto en la fuente se corresponde con el producto en el destino. Además, puede ser posible detectar la falsificación de producto por análisis de huella digital.
Las formulaciones de productos pueden verificarse mediante procedimientos similares a los descritos en el Ejemplo 1. La huella digital es la misma cuando el producto se produce con los mismos patrones de alta calidad. En referencia a la Tabla 7, se monitorizó la emisión de luz en una matriz de seis muestras (Gerber, Similar en líquido, Similac en polvo, Carnation Follow-Up, Enfamil y un patrón de leche en polvo) que se sometieron a ensayo cada una cuatro veces con un compuesto emisor de luz. El compuesto emisor de luz incluyó Compuesto 1, Compuesto 2, Compuesto 3 y Compuesto 7.
Las muestras se prepararon diluyendo las leches de fórmula para lactantes con agua destilada según las instrucciones del fabricante (por ejemplo, 8,5 gramos en 60 ml de agua destilada). Las soluciones resultantes se diluyeron aún más en un factor de 1.000, y se filtraron usando un filtro de jeringuilla estéril Millipore 0,22/lm. Las muestras del filtro se usaron directamente en los análisis.
Se prepararon soluciones de reserva de los compuestos emisores de luz que contenían Compuesto 1 a una concentración de 1,5 mM en una mezcla 1:2 de DMSO/agua, Compuesto 2 a una concentración de 2 mM en DMSO, Compuesto 3 a una concentración de 1 mM en DMSO y Compuesto 7 a una concentración de 1 mM en agua destilada.
Las concentraciones de las soluciones de trabajo se determinaron según se describe en el Ejemplo 1. La solución de trabajo de Compuesto 1 se preparó diluyendo 75 pi de la solución de reserva en 20 ml de agua destilada. La solución de trabajo de Compuesto 2 se preparó diluyendo 120 \mul de la solución de reserva en 20 ml de agua destilada. La solución de trabajo de Compuesto 3 se preparó diluyendo 100 \mul de la solución de reserva en 20 ml de agua destilada. La solución de trabajo de Compuesto 7 se preparó diluyendo 25 \mul de la solución de reserva en 50 ml de agua destilada.
Los Compuestos 1, 2, 3 y 7 requieren un filtro de paso de banda 530BP\pm15 nm para reducir la intensidad de las longitudes de onda de excitación en la medida de emisión. El análisis se realizó según se describe en el Ejemplo 1. Las muestras diluidas y filtradas se añadieron directamente a los tintes y se midió la emisión.
Los resultados del experimento se presentan en la Tabla 7. Hubo una medida realizada para cada muestra en combinación con el compuesto emisor de luz. Cada medida se repitió cuatro veces para demostrar el nivel de reproducibilidad. Se calculó la varianza y la media para cada grupo de 4 medidas. Para este análisis de huella digital se usaron niveles de confianza del 95%. El análisis es similar al descrito en los Ejemplos 1 y 2.
Por ejemplo, la muestra de Gerber tenía una emisión de luz media de -0,2049 y la muestra de Similac tenía una emisión de luz media de -0,1941. La diferencia en la emisión de luz fue de 0,0108. El valor omega para la prueba fue de 0,044. Si la diferencia (0,0108) es menor que omega para dos muestras cualesquiera, entonces las muestras son sustancialmente la misma. Por tanto, los productos son sustancialmente el mismo. Los datos de huellas digitales se presentan en la Tabla 8 para hacer posibles todas las comparaciones y se establecen de la misma manera que en el Ejemplo 1. Como consecuencia del análisis de huella digital de la Tabla 8, las muestras de Gerber, Similac y Enfamil son la misma. Sin embargo, Carnation y el Patrón son diferentes. El Patrón es Leche Evaporada Carnation.
TABLA 7
7
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 8
70
\vskip1.000000\baselineskip
Otras formas de realización están dentro de las reivindicaciones.
\vskip1.000000\baselineskip
Referencias citadas en la descripción
Esta lista de referencias citada por el solicitante es sólo para comodidad del lector. No forma parte del documento de patente europea. Aunque se ha puesto mucho cuidado en la compilación de las referencias, no pueden excluirse errores u omisiones y la EPO niega toda responsabilidad a este respecto.
Documentos de patentes citados en la descripción
US-5.429.952-A [0007]
US 5.424.959-A [0009]
US-4.365.303-A [0010]
EP-0.625.702-A [0011]
US-5.049.673-A [0024]
\newpage
Bibliografía distinta de patentes citada en la descripción
CONSTANT y col. Differentiation of Alcoholic Beverages FT-IR Spectra. An Original Multivariate Approach, Resumen ACS presentado en la 208ª Reunión Nacional de ACS. Issue of Chemical and Engineering News, 25 de agosto de 1994, vol. 10 [0005]
MINTA y col. J. Biol. Chem., 1989, vol. 264, 8171 [0024]
COSTLEI y col. J. of Chem. Society Perkins translation 2, 1615 [0024] [0091]
Cell Calcium, 1994, 190 [0025]
Practical Fluorescence. Marcel Dekker, Inc, 1990 [0051]
Biometrika Tables. Cambridge University Press, 1966, vol. 1 [0067]
R. E. HILEMAN y col. Bioconjugate Chem., 1994, vol. 5, 436 [0080]
BARSKII y col. Izv. Akad. Nuak SSSR, V.E., 1968, vol. 101 [0081]
TSIEN, R. y col. J. Biol. Chem., 1989, vol. 264, 8171 [0082]
CHAN, L.M. y col. Biochem. Biophys. Acta, 1970, vol. 204, 252 [0083]
CLARK, G. Staining Procedures. 1981, 48 57 61 71 72 86 87 89 90 429 [0085]
FURUMOTO, H.W.; CECCON, H.L. IEEE J. Quantum Electron., 1970, vol. QE-6, 262 [0087]
Conn's, Biological Stains. 1977, 355 [0087]
COONS, A.H. y col. J. Exp. Med., 1950, vol. 91, 1-14 [0088]
GLABE y col. Anal. Biochem, 1983, vol. 130, 287-294 [0089]

Claims (10)

1. Un procedimiento para almacenar y poner a disposición información sobre emisión de luz de un producto conocido, comprendiendo el procedimiento:
obtención de una pluralidad de registros para el producto que indican medidas de intensidad de luz emitida por muestras de mezclas del producto con un componente, estando la pluralidad de registros almacenada en una base de datos informática;
obtención de una indicación del componente y/o el producto; y
uso de la indicación del componente y/o el producto para recuperar los registros.
2. El procedimiento de la reivindicación 1, en el que el componente es un componente emisor de luz.
3. El procedimiento de la reivindicación 2, en el que el componente es un componente fluorescente, fosforescente o luminiscente.
4. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el componente es cafeína.
5. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el componente es un tinte fluorescente.
6. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes 2 a 5, en el que el compuesto emisor de luz reacciona con las muestras o un patrón para producir el al menos un componente fluorescente, fosforescente o luminiscente.
7. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el producto tiene una composición química desconocida.
8. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que las muestras comprenden un analito de estructura química desconocida.
9. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que las muestras comprenden un analito distinto de un marcador de producto exógeno presente con el producto.
10. El procedimiento de cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el producto conocido es un producto consumible líquido.
ES02002027T 1996-05-06 1997-05-06 Procedimiento para autenticacion de productos. Expired - Lifetime ES2290204T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US642927 1996-05-06
US08/642,927 US5753511A (en) 1996-05-06 1996-05-06 Automated fingerprint methods and chemistry for product authentication and monitoring

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2290204T3 true ES2290204T3 (es) 2008-02-16

Family

ID=24578622

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES02002027T Expired - Lifetime ES2290204T3 (es) 1996-05-06 1997-05-06 Procedimiento para autenticacion de productos.

Country Status (10)

Country Link
US (1) US5753511A (es)
EP (2) EP1217356B1 (es)
JP (1) JP2000510237A (es)
CN (1) CN1217789A (es)
AT (2) ATE222360T1 (es)
AU (1) AU2998497A (es)
CA (1) CA2253447A1 (es)
DE (2) DE69714719T2 (es)
ES (1) ES2290204T3 (es)
WO (1) WO1997042490A1 (es)

Families Citing this family (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6232124B1 (en) 1996-05-06 2001-05-15 Verification Technologies, Inc. Automated fingerprint methods and chemistry for product authentication and monitoring
US6008889A (en) * 1997-04-16 1999-12-28 Zeng; Haishan Spectrometer system for diagnosis of skin disease
JP2002510790A (ja) * 1998-04-06 2002-04-09 ブンセン ラッシュ ラボラトリーズ インコーポレーテッド 指向的進化バイオセンサ
US6490030B1 (en) 1999-01-18 2002-12-03 Verification Technologies, Inc. Portable product authentication device
US6512580B1 (en) 1999-10-27 2003-01-28 Verification Technologies, Inc. Method and apparatus for portable product authentication
GB0000788D0 (en) 2000-01-14 2000-03-08 Willett Int Ltd Apparatus
US20030112423A1 (en) * 2000-04-24 2003-06-19 Rakesh Vig On-line verification of an authentication mark applied to products or product packaging
US20040000787A1 (en) * 2000-04-24 2004-01-01 Rakesh Vig Authentication mark for a product or product package
US6638593B2 (en) 2000-06-30 2003-10-28 Verification Technologies, Inc. Copy-protected optical media and method of manufacture thereof
WO2002002301A1 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Verification Technologies Inc. Copy-protected optical media and method of manufacture thereof
US7660415B2 (en) 2000-08-03 2010-02-09 Selinfreund Richard H Method and apparatus for controlling access to storage media
DE10124917B4 (de) 2001-05-28 2007-03-22 Bionorica Ag Verfahren zur Klassifizierung von Wein und Kaffee
DE10137484C1 (de) * 2001-08-03 2002-10-31 Siemens Ag Verfahren und Vorrichtung zum Identifizieren einer Markierung
JP4473572B2 (ja) * 2001-08-31 2010-06-02 株式会社林原生物化学研究所 クマリン化合物
BRPI0311155A2 (pt) * 2002-05-20 2009-01-27 Sun Chemical Corp sistema de geraÇço de imagem de seguranÇa
US20040023397A1 (en) * 2002-08-05 2004-02-05 Rakesh Vig Tamper-resistant authentication mark for use in product or product packaging authentication
JP2006504491A (ja) * 2002-10-31 2006-02-09 ユーロ−セルティーク エス.エイ. 医薬製品の識別
US7218589B2 (en) * 2003-11-24 2007-05-15 General Electric Company Authenticable optical disc, system for authenticating an optical disc and method thereof
FR2864666A1 (fr) * 2003-12-24 2005-07-01 Dgtec Procede d'identification optique
US7919325B2 (en) * 2004-05-24 2011-04-05 Authentix, Inc. Method and apparatus for monitoring liquid for the presence of an additive
US7964407B2 (en) * 2004-07-21 2011-06-21 Bates Lynn S Methods of marking products using natural materials having genetically controlled micromorphological structures as markers
US7101997B2 (en) * 2004-10-07 2006-09-05 Honeywell International Inc. Method for producing phenothiazinium compounds
US7892618B2 (en) * 2005-03-21 2011-02-22 Sony Corporation Deterring theft of optical media
US8258481B2 (en) * 2005-04-25 2012-09-04 Sony Dadc Us Inc. System and method for selectively enabling or disabling an optical device
US20070050585A1 (en) * 2005-08-24 2007-03-01 Sony Dadc Us Inc. Selectively enabling playback of content on an optical medium
US8566598B2 (en) * 2005-09-02 2013-10-22 Goodman Consulting Group Method for article authentication using an article's authentication code and a second code provided by the party requesting authentication
WO2007095501A2 (en) * 2006-02-10 2007-08-23 Parallel Synthesis Technologies, Inc. Authentication and anticounterfeiting methods and devices
US20070280073A1 (en) * 2006-05-30 2007-12-06 Verification Technologies, Inc. Authenticating polymeric film
US9995681B2 (en) * 2010-09-28 2018-06-12 Authentix, Inc. Determining the quantity of a taggant in a liquid sample
KR101261470B1 (ko) * 2010-11-30 2013-05-10 중앙대학교 산학협력단 아황산 이온 선택성을 갖는 레소루핀 레불리네이트를 포함하는 센서 및 이를 이용한 아황산 이온 검출방법
DE102012100065A1 (de) 2012-01-05 2013-07-11 Frederic Laager S.U.P.E.R. Lab Verfahren zur Analyse von Proben und Systeme hierfür
GB201406707D0 (en) 2014-04-15 2014-05-28 Univ Leicester In-bottle detection method
CN105646557B (zh) * 2016-01-21 2017-07-21 兰州大学 可对醇水体系进行识别的材料、检测液及使用方法
JP6749575B2 (ja) * 2016-07-07 2020-09-02 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構 加熱履歴推定方法、加熱履歴推定装置、および、プログラム
CN108254350B (zh) * 2018-03-07 2020-12-29 上海睿钰生物科技有限公司 一种图像类流式染料的制备方法
CN110987856B (zh) * 2019-12-19 2022-02-11 中国检验检疫科学研究院 基于配方体系和指纹图谱的化妆品质量快速鉴定方法

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1822098A (en) * 1927-06-02 1931-09-08 Plymouth Cordage Co Marking device
US2265196A (en) * 1940-04-30 1941-12-09 Charles H Riley Concealed marker for alcohols and method of identification thereof
US4365303A (en) * 1980-02-07 1982-12-21 The Perkin-Elmer Corporation Method and apparatus for determining the nature of an unknown chemical substance
US4387112A (en) * 1980-10-23 1983-06-07 Blach Rodney J Article identification process and articles for practice thereof
US4439356A (en) * 1981-03-03 1984-03-27 Syva Company Unsymmetrical fluorescein derivatives
US4755469A (en) * 1982-09-27 1988-07-05 Union Oil Company Of California Oil tracing method
JPH0672883B2 (ja) * 1985-06-19 1994-09-14 コニカ株式会社 分析素子
US5049673A (en) * 1987-10-30 1991-09-17 The Regents Of The University Of California Fluorescent indicator dyes for calcium working at long wavelengths
US5429952A (en) * 1988-02-02 1995-07-04 Biocode, Inc. Marking of products to establish identity and source
GB8802237D0 (en) * 1988-02-02 1988-03-02 Shell Int Research Detection of chemicals by immunoassay
US5128243A (en) * 1990-06-28 1992-07-07 University Of South Florida Assay for the detection of beet sugar adulteration of food products
US5279967A (en) * 1992-01-24 1994-01-18 Nalco Chemical Company Fluorescent labeling of hydrocarbons for source identification
US5237631A (en) * 1992-03-31 1993-08-17 Moshe Gavish Method for the manufacture of a fluorescent chemical sensor for determining the concentration of gases, vapors or dissolved gases in a sample
US5448070A (en) * 1993-05-17 1995-09-05 The Foxboro Company Identification of unknown gases using infrared absorption spectroscopy
US5424959A (en) * 1993-07-19 1995-06-13 Texaco Inc. Interpretation of fluorescence fingerprints of crude oils and other hydrocarbon mixtures using neural networks
DE69425817D1 (de) * 1994-06-04 2000-10-12 Orbisphere Lab Vorrichtung und Verfahren zur Luminiszenzanalyse
US5525516B1 (en) * 1994-09-30 1999-11-09 Eastman Chem Co Method for tagging petroleum products

Also Published As

Publication number Publication date
CN1217789A (zh) 1999-05-26
JP2000510237A (ja) 2000-08-08
US5753511A (en) 1998-05-19
EP0897532A1 (en) 1999-02-24
EP0897532B1 (en) 2002-08-14
EP1217356A2 (en) 2002-06-26
ATE222360T1 (de) 2002-08-15
DE69738087D1 (de) 2007-10-11
DE69714719D1 (de) 2002-09-19
ATE371856T1 (de) 2007-09-15
DE69714719T2 (de) 2003-04-24
EP1217356A3 (en) 2003-11-19
AU2998497A (en) 1997-11-26
WO1997042490A1 (en) 1997-11-13
EP1217356B1 (en) 2007-08-29
CA2253447A1 (en) 1997-11-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2290204T3 (es) Procedimiento para autenticacion de productos.
US6232124B1 (en) Automated fingerprint methods and chemistry for product authentication and monitoring
US6707539B2 (en) Portable product authentication device
US7301611B2 (en) Security imaging system
CN101183099B (zh) 用于标记和鉴定液体的方法和装置
CN102308210B (zh) 测定液体中的荧光的方法和装置
US6380547B1 (en) Tagging compositions and methods
Kiefer et al. Analysis of single malt Scotch whisky using Raman spectroscopy
JP2003513245A (ja) 可搬製品鑑定のための方法および装置
US7071481B2 (en) Automated reagentless system of product fingerprint authentication and trademark protection
CN104838254A (zh) 材料的标记、被标记材料和验证方法或稀释的确定
Bradshaw et al. Multichannel verification system (MVS): a dual-dye ratiometric photometry system for performance verification of multichannel liquid delivery devices
RU2450358C1 (ru) Способ защиты от подделки и контроля подлинности изделий
Corin et al. Triplet-state detection of labeled proteins using fluorescence recovery spectroscopy
Kurbanoglu et al. Validation of analytical methods for the assessment of hazards in food
Pulgarín et al. Simultaneous determination of mefenamic and tolfenamic acids in real samples by terbium-sensitized luminescence
RU2368645C2 (ru) Способ идентификации маркированных нефтепродуктов
Druzik et al. Formaldehyde: Detection and Mitigation
Comley Fluorescence Lifetime
Tarasashvili et al. Diagnostics of luminescent recording media based on the polarized scattering spectra of hologram sensors formed in the substance analyzed
Näther et al. Time-correlated single photon counting: an advancing technique in a plate reader for assay development and high throughput screening
AU7827098A (en) Tagging compositions and methods
JPH09257707A (ja) 偏光解析装置
BRPI0801672A2 (pt) traçador quìmico para marcação de combustìveis automotivos lìquidos e método de quantificação do traçador