ES2285767T3 - Receptor de ldl. - Google Patents
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Abstract
Una molécula de ácido nucleico aislado que codifica un polipéptido que incluye la secuencia de aminoácidos mostrada en la figura 5(e).
Description
Receptor de LDL.
La presente invención se refiere a ácidos
nucleicos, polipéptidos, sondas de oligonucleótidos y cebadores,
procedimientos de diagnóstico o prognosis, y otros procedimientos
referentes a, y basados en, la identificación de un gen, que se
caracteriza como un miembro de la familia de receptores de LDL y
para el que hay indicaciones de que algunos alelos están asociados
con la susceptibilidad a la diabetes mellitus dependiente de
insulina ("IDDM"), también conocida como diabetes tipo 1.
Más particularmente, la presente invención se
basa en la clonación y caracterización de un gen que los presentes
inventores han denominado "proteína 5 relacionada con receptor de
LDL (LRP5)" (previamente
"LRP-3"), basándose en características
del polipéptido codificado que se revelan en el presente documento
por primera vez y que lo identifican como un miembro de la familia
de receptores de LDL. Además, se incluyen pruebas experimentales en
el presente documento que proporcionan indicación de que LRP5
es el gen IDDM4 de susceptibilidad a IDDM.
La diabetes, la desregulación de la hemostasia
de la glucosa, afecta a aproximadamente el 6% de la población
general. La forma más grave, la diabetes tipo 1, que afecta a hasta
el 0,4% de la población europea, está provocada por la destrucción
autoinmunitaria de las células \beta productoras de insulina del
páncreas, con una edad máxima de aparición de 12 años. La
destrucción de células \beta es irreversible, y a pesar de la
sustitución de insulina mediante inyección los pacientes padecen
mortalidad temprana, insuficiencia renal y ceguera (Bach, 1994;
Tisch y McDevitt, 1996). Por tanto, el principal objetivo de la
investigación genética es identificar los genes que predisponen
para la diabetes tipo 1 y usar esta información para entender los
mecanismos de la enfermedad y predecir y evitar la destrucción total
de células \beta y la enfermedad.
El modo de herencia de la diabetes tipo 1 no
sigue un patrón mendeliano sencillo, y la concordancia del genotipo
de susceptibilidad y la aparición de la enfermedad es muy inferior
al 100%, tal como se pone en evidencia por la concordancia del
30-70% de gemelos idénticos (Matsuda y Kuzuya, 1994;
Kyvik et al, 1995). La diabetes está provocada por varios
genes o poligenes que actúan conjuntamente en armonía, lo que hace
particularmente difícil identificar y aislar genes individuales.
El locus de IDDM principal está codificado por
el complejo mayor de histocompatibildiad (MHC) sobre el cromosoma
6p21 (IDDM1). El grado de agrupamiento familiar en este
locus, \lambdas = 2,5, en el que \lambdas = P esperada
[compartir cero alelos en el locus idénticos por descendencia
(IBD)]/P observada [compartir cero alelos IBD] (Risch 1987; Todd,
1994), con un segundo locus en el cromosoma 11p15, IDDM2, el
minisatélite de insulina \lambdas = 1,25 (Bell et al,
1984; Thomson et al, 1989; Owerbach et al, 1990;
Julier et al, 1991; Bain et al, 1992; Spielman et
al, 1993; Davies et al, 1994; Bennett et al,
1995). Estos locus se detectaron inicialmente mediante estudios de
asociación de control de pocos casos, basándose en su estado como
candidatos funcionales, que posteriormente se confirmaron mediante
otros estudios de asociación y unión, de control de casos.
Sin embargo, estos dos locus no pueden
representar todas las agrupaciones observadas de enfermedad en
familias (\lambdas = 15), que se estima a partir de la proporción
del riesgo para hermanos de pacientes y la prevalencia de la
población (6%/0,40) (Risch, 1990). Se inició una estrategia de
clonación posicional esperando identificar otros locus causantes de
susceptibilidad para diabetes tipo 1, utilizando el hecho de que los
marcadores unidos a un gen de enfermedad mostrarán un exceso de
alelos compartidos idénticos por descendencia en pares de hermanos
afectados (Penrose, 1953; Risch, 1990; Holmans, 1993).
La exploración inicial en todo el genoma para
detectar la unión utilizando 289 marcadores de microsatélites, en
96 familias de pares de hermanos en el RU, reveló la evidencia de la
unión a otros dieciocho locus (Davies et al, 1994). La
confirmación de la unión a dos de esos locus se logró mediante
análisis de otros dos conjuntos de familias (102 familias en el RU
y 84 familias en los EE.UU.), IDDM4 en el cromosoma 11q13
(MLS 1,3, P = 0,003 en FGF3) e IDDM5 en el cromosoma
6q (MLS 1,8 en ESR). En IDDM4 la unión más
significativa se obtuvo en el subconjunto de familias que compartían
1 ó 0 alelos IBD en HLA (MLS = 2,8; P=0,001; \lambdas = 1,2)
(Davies et al, 1994). Esta unión también se observó por
Hashimoto et al (1994) usando 251 pares de hermanos
afectados, obteniendo P= 0,0008 en todos los pares de hermanos.
Combinando estos resultados, con 596 familias, se proporciona un
apoyo sustancial para IDDM4 (P = 1,5 X 10^{-6}) (Todd y
Farrall, 1996; Luo et al, 1996).
Los presentes inventores describen ahora por
primera vez un gen que codifica un miembro novedoso de la familia
de receptores de LDL, que denominan "LRP5" (previamente
"LRP-3"). Además, la evidencia indica
que el gen representa el locus IDDM4 de susceptibilidad a
IDDM, cuya identificación y aislamiento es un avance
científico
principal.
principal.
Durante los últimos 10 años, se han ubicado
muchos genes de enfermedades monogénicas o de un único gen, que son
relativamente raras en la población, mediante análisis de unión en
familias, y se han localizado en una región lo bastante pequeña
como para permitir la identificación del gen. La última
sublocalización y mapeo preciso puede llevarse a cabo en
enfermedades raras de un único gen porque las recombinaciones dentro
de familias definen los límites del intervalo mínimo sin ninguna
duda. En cambio, en enfermedades comunes tales como la diabetes o
el asma la presencia de la mutación de la enfermedad no siempre
coincide con el desarrollo de la enfermedad: las mutaciones de
susceptibilidad a la enfermedad en trastornos comunes proporcionan
riesgo de desarrollar la enfermedad, y este riesgo es normalmente
muy inferior al 100%. Por tanto, los genes de susceptibilidad en
enfermedades comunes no pueden localizarse usando acontecimientos de
recombinación en familias, a menos que haya decenas de miles de
familias disponibles para mapear con precisión el locus. Dado que
las colecciones de este tamaño no son prácticas, los investigadores
contemplan el uso de mapeo por asociación, que se basa en
acontecimientos de recombinación histórica durante la historia de la
población de la que proceden las familias.
El mapeo por asociación se ha usado en más de
una docena de ejemplos de rasgos de un único gen raro, y
particularmente en poblaciones genéticamente aisladas tales como
Finlandia para mapear con precisión mutaciones de enfermedades. No
obstante, el mapeo por asociación es fundamentalmente diferente del
mapeo por unión directo dado que aunque el grado de asociación
entre dos marcadores o un marcador y una mutación de enfermedad es
proporcional a la distancia física a lo largo del cromosoma, esta
relación puede ser impredecible ya que depende de las frecuencias
de alelos de los marcadores, el historial de la población y la edad
y número de mutaciones en el locus de la enfermedad. Para
enfermedades de un único gen raras, sumamente penetrantes,
normalmente hay un cromosoma fundador principal en la población en
estudio, haciendo relativamente factible localizar un intervalo que
es menor que uno que puede definirse mediante acontecimientos de
recombinación habituales en familias vivas. La resolución de este
procedimiento en enfermedades monogénicas en las que hay un
cromosoma fundador principal es ciertamente inferior a 2 cM, y en
ciertos ejemplos la resolución es de tan sólo 100 kb de ADN
(Hastbacka et al. (1994) Cell 78,1-20).
En enfermedades comunes como diabetes tipo 1,
que están provocadas por varios genes o poligenes que actúan
conjuntamente en armonía, la frecuencia en la población del alelo de
la enfermedad puede ser muy alta, superando quizás el 50%, y es
posible que haya varios cromosomas fundadores, todos los cuales
confieren un riesgo, y no una certeza del 100% de desarrollo de la
enfermedad. Dado que el mapeo por asociación depende de parámetros
impredecibles, y dado que los cromosomas fundadores serán varios y
de frecuencia común en la población general, la tarea de mapear con
precisión poligenes es actualmente una con cierta controversia, y
muchos dudan sobre la viabilidad de un enfoque genético sistemático
usando una combinación de mapeo por unión y por asociación.
Recientemente, Risch y Marakandis han proporcionado algún
antecedente matemático para la viabilidad del mapeo por asociación
en enfermedades complejas (Science 273 1516-1517,
1996) pero no tuvieron en cuenta el efecto de múltiples cromosomas
fundadores.
Como resultado de estas incertidumbres, se
requieren números extremadamente grandes de familias diabéticas
para determinar el genotipo, con un gran número de marcadores a lo
largo de una región específica, dando una curva de desequilibrio de
unión que puede tener varios picos. La cuestión es, ¿qué pico
identifica la mutación etiológica, y de qué manera puede
establecerse esto? Hasta donde se sabe, las curvas de desequilibrio
de unión y mapas de asociación de haplotipo mostrados en las figuras
3, 4, 19 y 20 son las primeras de su clase para cualquier
enfermedad poligénica compleja para cualquier locus. Aún no se han
publicado curvas de esta naturaleza en la bibliografía, incluso
para el locus IDDM1/MHC bien establecido. Con respecto a esto
el trabajo descrito en el presente documento es totalmente novedoso
y a la vanguardia de la investigación en la genética de
poligenes.
La figura 1 ilustra la ubicación aproximada de
IDDM4 en el cromosoma 11q13. El mapa de unión de múltiples
puntos de máxima probabilidad IBD en un subgrupo de personas que
comparten HLA 1:0 en 150 familias. Se obtuvieron MLS de 2,3 en
FGF3 y D11S1883 (\lambdas= 1,19) (Davies et
al (1994) Nature 371: 130-136).
La figura 2 muestra un mapa físico de la región
D11S987 - Galanina en el cromosoma 11q13. Se clonó el
intervalo en PAC, BAC y cósmidos, y se realizó mapeo por restricción
usando una gama de enzimas de restricción para determinar la
distancia física entre cada marcador.
La figura 3 muestra una curva de desequilibrio
de unión de un único punto en la región de IDDM4. Se
analizaron 1289 familias mediante TDT, con un máximo en
H0570POLYA,) P=0,001. Eje x: distancia física en kb; eje y:
estadística \chi^{2} de TDT (tdf).
La figura 4 muestra una curva de desequilibrio
de unión de enrollamiento de tres puntos en IDDM4, con 1289
familias, a partir de cuatro poblaciones diferentes (RU, EE.UU.,
Cerdeña y Noruega). Con el fin de minimizar los efectos de la
variación en la frecuencia de alelos en cada polimorfismo, se
obtuvieron datos de TDT en tres marcadores consecutivos, y se
expresaron como promedio de los tres. Eje x: distancia física en kb;
eje y: estadística \chi^{2} de TDT.
La figura 5(a) muestra la secuencia de
ADN del ADNc de la isoforma 1 de LRP5.
La figura 5(b) muestra la secuencia de
ADN del marco de lectura abierto más largo presente en el ADNc de
LRP5.
La figura 5(c) es la traducción en
secuencia de aminoácidos (en código de una única letra habitual) del
marco de lectura abierto en la figura 5(b).
La figura 5(d) son los motivos de la
isoforma 1 de LRP5, codificada por el marco de lectura
abierto contenido en la figura 5(b). Símbolos: los residuos
subrayados 1-24 contienen una señal para la rotura y
exportación de proteínas, \ding{116} indica la posición de un
límite intrón/exón, * indica un posible sitio de glucosilación unido
a N en la parte extracelular propuesta del receptor. Los motivos de
unión a EGF están sombreados con gris claro, los motivos de ligando
de receptor de LDL están sombreados en gris más oscuro. Las regiones
espaciadoras se indican por los cuatro aminoácidos subrayados con
alta similitud con el motivo YWTD. Un posible dominio de extensión
transmembrana está subrayado con una línea gruesa. Las zonas
sombreadas en el dominio citoplasmático (1409 hasta el final) pueden
estar implicadas en la endocitosis.
La figura 5(e) es la secuencia de
aminoácidos de la proteína LRP5 madura.
La figura 5(f) muestra la comparación de
la secuencia de nucleótidos de los primeros 432 nucleótidos del
extremo 5' de la secuencia de ADNc de isoforma 1 humana (figura
5(a)) en la línea superior con los primeros 493 nucleótidos
del extremo 5' de la secuencia de ADNc de Lrp5 de ratón (figura
16(a)) en la línea inferior. La comparación se realizó usando
el algoritmo GAP del GCG (Genetics Computer Group, Madison, WI).
La figura 5(g) muestra la comparación de
los primeros 550 aminoácidos de la isoforma 1 de LRP5 humana con los
primeros 533 aminoácidos de de Lrp5 de ratón usando el algoritmo GAP
del GCG (Genetics Computer Group, Madison, WI).
La figura 6(a) muestra la secuencia de
aminoácidos de los motivos de LRP5. Se realizó una comparación
usando el programa de correspondencia cruzada (obtenido del Dr. Phil
Green, Universidad de Washington) entre los motivos presentes en
LRP1 y la secuencia de aminoácidos de LRP5. Se muestra la mejor
correspondencia para cada motivo de LRP5. Para cada motivo, la línea
superior es la secuencia de aminoácidos de la isoforma 1 de LRP5, la
línea del medio son los aminoácidos que son idénticos en los dos
motivos, la línea inferior es la secuencia de aminoácidos del motivo
de LRP1 con mejor correspondencia. Debe observarse particularmente
los residuos de cisteína (C) conservados que son el signo
característico de los motivos tanto del precursor de EGF como del
ligando de unión a receptor de LDL.
La figura 6(b) ilustra la organización de
motivos del receptor de LDL y LRP5. Los motivos de unión a ligando
de receptor de LDL se representan por los recuadros gris claro, los
motivos de tipo EGF se representan por los recuadros gris oscuro.
Los motivos espaciadores YWTD se indican por líneas verticales. Los
posibles dominios transmembrana están representados por el recuadro
negro.
La figura 7 muestra la estructura del gen de
LRP5. La secuencia de ADN de partes contiguas del ADN genómico se
representa por las líneas gruesas y son según la escala indicada. Se
indica la posición de los marcadores D11S1917 (UT5620),
H0570POLYA, L3001CA, D11S1337, y
D11S970. Se indican los exones mediante pequeños recuadros
negros con su nombre numérico o alfabético debajo, el tamaño de los
exones no es a escala.
La figura 8 ilustra diferentes isoformas del gen
LRP5. Como alternativa, se indican extremos 5' cortados y
empalmados del gen LRP5 con el número de isoforma para cada
forma alternativamente cortada y empalmada. La flecha gris claro
indica el inicio de la traducción que se produce en el exón 6 en la
isoforma 1, puede ocurrir en sentido 5' del exón 1 en la isoforma 3
y se produce en el exón B en las isoformas 2, 4, 5 y 6. Los 22
exones de núcleo (A a V) se representan por el recuadro.
La figura 9 es un mapa de SNP de cóntigo 57. Se
identificaron polimorfismos mediante comparación de la secuencia de
ADN de BAC 14-1-15 con los cósmidos
EO 864 y BO 7185. La tabla 6 correspondiente indica un amplicón de
PCR que incluye el sitio del polimorfismo, la naturaleza de los
polimorfismos de un único nucleótido (SNP), su ubicación y el sitio
de restricción que está alterado, si lo hay. La línea representa el
ADN genómico contiguo con la ubicación relativa de los polimorfismos
y los amplicones usados para detectarlos. Los triángulos delgados
grandes representan el sitio de posibles exones. Se indica el
marcador H0570POLYA.
La figura 10 es un mapa de SNP de cóntigo 58. Se
identificaron polimorfismos mediante comparación de la secuencia de
ADN de BAC 14-1-15 con cósmido BO
7185. La tabla 6 correspondiente indica un amplicón de PCR que
incluye el sitio del polimorfismo, la naturaleza del polimorfismo de
un único nucleótido (SNP), su ubicación y el sitio de restricción
que está alterado, si lo hay. La línea representa el ADN genómico
contiguo con la ubicación relativa de los polimorfismos y los
amplicones usados para detectarlos. El triángulo delgado grande al
final de la línea representa el exón A de LRP5.
La figura 11(a) muestra la secuencia de
ADN del ADNc de la isoforma 2.
La figura 11(b) muestra el marco de
lectura abierto más largo de la isoforma 2 (también isoformas 4, 5,
6).
La figura 11(c) muestra la secuencia de
aminoácidos de la isoforma 2 (también isoformas 4, 5, 6), codificada
por el marco de lectura abierto de la figura 12(b).
La figura 12(a) muestra la secuencia de
ADN del ADNc de la isoforma 3.
La figura 12(b) muestra la secuencia
obtenida mediante GRAIL y una posible extensión de la isoforma
3.
La figura 12(c) muestra un posible marco
de lectura abierto para la isoforma 3.
La figura 12(d) muestra la secuencia de
aminoácidos de la isoforma 3.
La figura 12(e) muestra la secuencia
promotora prevista por GRAIL para la isoforma 3.
La figura 13 muestra la secuencia de ADN del
ADNc de la isoforma 4, que contiene un marco de lectura abierto que
codifica la isoforma 2 (figura 11(b)).
La figura 14 muestra la secuencia de ADN de la
presente en el ADNc de la isoforma 5, que contiene un marco de
lectura abierto que codifica la isoforma 2 (figura
11(b)).
La figura 15 muestra la secuencia de ADN de la
isoforma 6, que contiene un marco de lectura abierto que codifica la
isoforma 2 (figura 11(b)).
La figura 15(b) muestra la secuencia
promotora prevista por GRAIL asociada con la isoforma 6.
La figura 16(a) muestra la secuencia de
ADN de una parte del ADNc de Lrp5 de ratón.
La figura 16(b) muestra la secuencia de
ADN de la extensión en 5' del clon de ratón.
La figura 16(c) muestra la secuencia de
ADN de una parte del marco de lectura abierto de Lrp5 de
ratón.
La figura 16(d) muestra la secuencia de
aminoácidos del marco de lectura abierto que codifica una parte del
Lrp5 de ratón.
La figura 17(a) muestra la secuencia de
ADN de los exones A a V.
La figura 17(b) muestra la secuencia de
aminoácidos codificada por un marco de lectura abierto contenido en
la figura 17(a).
La figura 18(a) muestra la secuencia de
nucleótidos del ADNc de Lrp5 de ratón de longitud
completa.
La figura 18(b) muestra la secuencia de
nucleótidos para el marco de lectura abierto más largo presente en
el ADNc de Lrp5 de ratón.
La figura 18(c) muestra la traducción en
secuencia de aminoácidos (en código de una única letra) del marco de
lectura abierto en la figura 18(b).
La figura 18(d) muestra una alineación de
la secuencia de aminoácidos del programa de la proteína LRP5 humana
y la proteína Lrp5 de ratón usando el algoritmo GAP del GCG
(Genetics Computer Group, Madison, WI).
La figura 18(e) muestra una alineación de
la secuencia de aminoácidos de la proteína LRP5 humana madura con el
programa de LRP5 de ratón maduro usando el algoritmo GAP de GCG
(Genetics Computer Group, Madison, WI).
La figura 19 muestra una representación
esquemática de haplotipos a través de la región de IDDM4. Se
muestran tres haplotipos distintos. El haplotipo A es protector
frente a IDDM mientras que los B y C son susceptibles/no protectores
para IDDM.
La figura 20 muestra una representación
esquemática de haplotipos de polimorfismo de un único nucleótido
(SNP) a lo largo de la región de IDDM4. El haplotipo A es
protector mientras que los haplotipos B, C, D, y E son
susceptibles/no protectores. Se indica una región mínima de 25 kb
que es idéntica por descendencia (IBD) para los cuatro haplotipos
susceptibles. Las denominaciones de SNP, por ejemplo
57-3, son tal como se describen en la tabla 6 y las
figuras 9 y 10.
El gen identificado contiene 22 exones,
denominados A-V, que codifican la mayor parte de la
proteína LRP5 madura. Los 22 exones representan 4961 nucleótidos
del tránscrito de gen LRP5 (figura 5(a)) y se
localizan en aproximadamente 110 kb de ADN genómico. El ADN
genómico que contiene estos exones comienza en sentido 3' del
marcador genético L3001CA e incluye los marcadores genéticos
D11S1337, 141ca5, y D11S970 (figura 7). Se han
identificado varios extremos en 5' diferentes del tránscrito de
LRP5. Es de interés particular la isoforma 1 con un extremo
5' que codifica una secuencia de péptido señal para exportar
proteína (péptido líder secretor) a través de la membrana
plasmática. Tal como se analiza a continuación es posible que la
proteína LRP5 contenga un gran dominio extracelular, por tanto se
anticiparía que esta proteína tendría una secuencia señal. El exón
que codifica la secuencia señal, denominado exón 6, yace cerca del
marcador genético H0570POLYA. Este exón está 35 kb en
sentido 5' del exón A y por tanto extiende el ADN genómico que
comprende el gen LRP5 hasta al menos 160kb.
Se han identificado varias isoformas adicionales
del gen LRP5 que surgen de cortes y empalmes alternativos
del extremo 5' mediante PCR (figura 8). La relevancia funcional de
estas isoformas adicionales no está clara. Dos de estos transcritos
de LRP5 contienen exón 1 que está ubicado en sentido 5' del
marcador genético D11S1917(UT5620) y expande el gen
LRP5 hasta aproximadamente 180 kb de ADN genómico. El
transcrito denominado isoforma 3 está constituido por exón 1
cortado y empalmado directamente al exón A. El marco de lectura
está abierto en el extremo 5' y por tanto existe el potencial para
información codificante adicional presente en exones en sentido 5'
del exón 1. Como alternativa, la extensión centromérica del exón 1
para incluir todo el marco de lectura abierto asociado con esta
región proporciona el marco de lectura abierto para la isoforma
3.
El segundo transcrito que contiene exón 1
también contiene exón 5, que está ubicado cerca del marcador
genético H0570POLYA. El marco de lectura abierto para esta
isoforma, la isoforma 2, comienza en el exón B y por tanto codifica
una proteína LRP5 truncada que carece de cualquier péptido líder
secretor previsto en los primeros 100 aminoácidos. Hay otros tres
transcritos cada uno con un marco de lectura abierto que comienza en
el exón B y con extremos 5' cerca del marcador genético
L3001CA.
El análisis por transferencia de tipo Northern
indica que el tránscrito de ARNm principal para el gen LRP5
tiene aproximadamente de 5 a 5,5 kb y se expresa principalmente en
el hígado, páncreas, próstata y placenta. También se detecta
expresión en el músculo esquelético, riñón, bazo, timo, ovarios,
pulmón, intestino delgado y colon. Se detectan bandas minoritarias
tanto mayores como menores de 5 kb y pueden representar
acontecimientos de corte y empalme alternativos o miembros de
familia relacionados.
El gen identificado en el locus IDDM4,
lrp5, es un miembro de la familia de receptores de LDL. Esta
familia de proteínas tiene varias características distintivas, un
gran dominio extracelular que contiene motivos ricos en cisteína
que está implicado en la unión a ligando, un único dominio de
extensión transmembrana, y un motivo de internalización "NPXY"
(Krieger y Herz (1994) Ann. Rev. Biochem. 63:
601-637). El papel funcional de los miembros de
esta familia es el aclaramiento de sus ligandos mediante el
mecanismo de endocitosis mediada por receptor. Esto se ilustra
mediante el miembro de la familia más sumamente caracterizado, el
receptor de LDL que es responsable del aclaramiento de colesterol
LDL del plasma (Goldstein, et. al. (1985) Ann. Rev. Cell
Biol. 1: 1-39).
LRP5 está lo más estrechamente relacionada con
la proteína relacionada con receptor de LDL (LRP) que también se
conoce como receptor de
alfa-2-macroglobulina. La traducción
del marco de lectura abierto (ORF) de la isoforma 1 proporciona la
proteína LRP5. La comparación de la proteína LRP5 con LRP1 humana
usando el algoritmo GAP (Genetics Computer Group, Madison, WI)
revela una similitud de aminoácidos global del 55% y el 34% de
identidad con respecto a la región de la proteína LRP1 humana desde
los aminoácidos 1236 hasta 2934. El ADN de este ORF es idéntico en
un 45% al ADN que codifica LRP1 tal como se indica por GAP. Se
observa un nivel ligeramente inferior pero significativo de
similitud con el receptor de megalina también denominado LRP2 y
gp330 (Saito, et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. 91:
9725-9729), así como el receptor de de vitelogenina
de Drosophilla (Schonboum et. al. (1995) Proc. Natl.
Acad. Sci. 92: 1485-1489). También se observa
similitud con otros miembros de la familia de receptores de LDL
incluyendo el receptor de LDL (Suedhof et al. (1985) Science
228: 815-822) y el receptor de VLDL (Oka et
al. (1994) Genomics 20: 298-300). Debido a la
presencia de motivos de tipo EGF en LRP5 también se observa
similitud con el precursor de EGF y precursor de nidogen que no son
miembros de la familia de receptores de LDL.
Es posible que la parte
N-terminal de LRP5 tenga potencial para un sitio de
rotura de secuencia señal. Las secuencias señal se encuentran
frecuentemente en proteínas que se exportan a través de la membrana
plasmática (von Heijne (1994) Ann. Rev. Biophys. Biomol. Struc. 23:
167-192). Además, otros miembros de la familia de
receptores de LDL contienen una secuencia señal para exportar
proteínas.
La presencia de un sitio de rotura de secuencia
señal se identificó inicialmente mediante una comparación del
LRP5 humano con una secuencia de ADNc de ratón que se obtuvo.
La secuencia de ADNc parcial de ratón inicial que se obtuvo, 1711
nucleótidos (figura 16(a)), es idéntica en un 87% a lo largo
de una parte de aproximadamente 1500 nucleótidos al ADNc de
LRP5 humano y por tanto es posible que sea el ortólogo de
ratón (Lrp5) del LRP5 humano. La parte clonada del
ADNc de ratón contiene un marco de lectura abierto (figura
16(c)) que codifica 533 aminoácidos. El codón de inicio
tiene nucleótidos consenso para una traducción eficaz en las
posiciones tanto -3 (purina) como +4 (nucleótido G) (Kozak, M. 1996,
Mamalian Genome 7:563-574). 500 aminoácidos de la
parte de Lrp5 de ratón (figura 5(g) y figura 16(d))
son idénticos en un 96% a la LRP5 humana, apoyando adicionalmente
la proposición de que es el ortólogo de ratón de LRP5.
De manera significativa, los primeros 200
nucleótidos del ADNc de ratón tienen muy poca similitud con las
extensiones en 5' presentes en las isoformas 2-6
tratadas a continuación. Mediante contraste esta secuencia es
idéntica en un 75% a la secuencia humana para el exón 6 que
comprende el extremo 5' de la isoforma 1. Por tanto, la isoforma 1
que codifica un péptido señal para la exportación de proteínas
representa posiblemente la forma más biológicamente relevante de
LRP5.
De manera importante, los marcos de lectura
abiertos tanto de LRP5 humano como de Lrp5 de ratón
codifican un péptido con el potencial para actuar como una
secuencia señal eucariota para la exportación de proteínas (von
Heijne, 1994, Ann. Rev. Biophys. Biomol. Struc.
23:167-192). La puntuación más alta para la
secuencia señal según se determina usando el programa SigCleave en
el paquete de análisis del GCG (Genetics Computer Group, Madison
WI) genera un péptido maduro que empieza en el residuo 25 de LRP5
humana y el residuo 29 de Lrp5 de ratón (figura 5(d y g)).
Otros sitios que pueden utilizarse producen péptidos maduros en LRP5
humana comenzando en los residuos de aminoácidos 22, 23, 23, 26,
27, 28, 30 ó 32. Otros sitios de rotura adicionales en el Lrp5 de
ratón dan como resultado péptidos maduros comenzando en los residuos
de aminoácidos 31, 32, 33, ó 38 (figura 5(g)). La proteína
LRP5 humana madura se muestra en la figura 5(e).
Las otras isoformas alternativas de LRP5 carecen
de una secuencia señal cerca del extremo N-terminal
de la proteína codificada. Se desconoce la relevancia funcional de
estas isoformas adicionales, sin embargo hay varias proteínas
exportadas que carecen de una secuencia señal y se transportan por
un mecanismo independiente de péptidos señal (Higgins, C. F. (1992)
Ann. Rev. Cell Biol. 8: 67-113). Por tanto, es
posible que el posible dominio extracelular de estas isoformas esté
trasladado a través de la membrana plasmática.
El domino extracelular de los miembros de la
familia de receptores de LDL contiene múltiples motivos que
contienen seis residuos de cisteína dentro de una región de
aproximadamente 40 aminoácidos. (Krieger y Herz (1994) Ann. Rev.
Biochem. 63: 601-637). Se han definido varias clases
de estos motivos ricos en cisteína basándose en la separación de
estos residuos de cisteína y la naturaleza de otros aminoácidos
conservados dentro del motivo. El motivo de unión a ligando del
receptor de LDL (clase A) se distingue por una agrupación de
residuos ácidos en la parte C-terminal del motivo
que incluye una secuencia de SDE sumamente conservada. La
importancia de esta región ácida en la unión a ligandos se ha
demostrado mediante estudios de mutagénesis (Russell et
al.(1989) J. Biol. Chem. 264: 21682-21688). Se
encuentran tres motivos de unión a ligando del receptor de LDL en la
proteína LRP5 (figura 6(a)). El motivo de tipo EGF (clase B)
carece de la agrupación de residuos ácidos presente en el motivo de
unión a ligando del receptor de LDL. Además, la separación de
residuos de cisteína difiere en los motivos de tipo EGF con
respecto al motivo de unión a ligando del receptor de LDL. La
proteína LRP5 contiene 4 motivos precursores de EGF (B.2), que
tienen la propiedad de un motivo NGGCS entre el primer y el segundo
residuo de cisteína (figura 6(a)).
El tamaño de los miembros de la familia de
receptores de LDL y el número de repeticiones ricas en cisteína en
el dominio extracelular varía enormemente. LRP1 es una proteína
grande de 4544 aminoácidos y contiene 31 motivos de unión a ligando
del receptor de LDL (clase A) y 22 motivos de tipo EGF (clase B)
(Herz et al., (1988) EMBO 7: 4119-4127). De
manera similar, el receptor de megalina, LRP2, es una proteína de
4660 aminoácidos y está constituida por 36 motivos de unión a
ligando del receptor de LDL y 17 motivos de tipo EGF (Saito et
al. (1994) PNAS 91: 9725-9729). En cambio, el
receptor de LDL es una proteína relativamente pequeña de 879
aminoácidos que contiene 7 motivos de unión a ligando de LDL y 3
motivos de tipo EGF. El tamaño previsto de la proteína LRP5 madura,
1591 aminoácidos, está entre LRP1 y el receptor de LDL. Tal como se
indicó anteriormente, la proteína LRP5 contiene cuatro motivos de
tipo EGF y tres motivos de unión a ligando de LDL. Se ha propuesto
que las unidades de múltiples motivos, particularmente evidentes en
LRP1 y LRP2, representan la capacidad de estas proteínas para
unirse a múltiples ligandos de proteínas y lipoproteínas (Krieger y
Herz (1994) Ann. Rev. Biochem. 63: 601-637).
La disposición de los motivos de unión a ligando
del receptor de LDL y de tipo EGF entre sí es similar tanto en el
receptor de LDL, LRP1, como LRP2. En cada una de estas proteínas,
múltiples motivos de unión a ligando de LDL se agrupan juntos y se
siguen por al menos un motivo de tipo EGF (Herz et al.,
(1988) EMBO 7: 4119-4127, 1988). En cambio, en la
proteína LRP5 un motivo de tipo EGF precede al grupo de tres motivos
de unión a ligando de LDL (figura 6(b)). Una propiedad
adicional única para LRP5 es que los motivos de unión a ligando de
LDL en LRP5 están seguidos por el posible dominio transmembrana. La
diferente disposición de los dominios puede definir LRP5 como un
miembro de una nueva subfamilia dentro de la familia de proteínas
relacionadas con receptor de LDL.
LRP5 tiene un péptido señal para la exportación
de proteínas en el extremo N-terminal de la
proteína. La rotura del péptido señal produce una proteína LRP5
madura que comienza con un dominio espaciador precursor de EGF
desde los aminoácidos 31-297 (los números de residuo
de aminoácidos se basan en el precursor de LRP5). El dominio
espaciador precursor de EGF está compuesto por cinco repeticiones de
aproximadamente 50 aminoácidos que contienen cada una el motivo de
secuencia característico
Tyr-Trp-Thr-Asp
(YWTD). Hay otros tres dominios espaciadores desde los aminoácidos
339-602, 643-903, y
944-1214. Cada dominio espaciador está seguido por
una repetición de EGF desde los aminoácidos 297-338
(egf1), 603-642 (egf2), 904-943
(egf3), y 1215-1255 (egf4). Las repeticiones de EGF
contienen seis residuos de cisteínas conservadas y son de la clase
B.2 que tiene un motivo
Asn-Gly-Gly-Cys
(NGGC) como rasgo distintivo (Herz et al. 1988, EMBO J
7:4119-27) (figura 6(a)). Una única unidad
definida como un dominio espaciador precursor de EGF y una
repetición de EGF, se repite cuatro veces en LRP5. La última
repetición de EGF es adyacente a tres repeticiones de LDLR
consecutivas desde los aminoácidos 1257-1295
(ldlr1), 1296-1333 (ldlr2), y
1334-1372 (ldlr3). Las repeticiones de LDLR tienen
los residuos de cisteínas conservadas, así como el motivo
Ser-Asp-Glu (SDE) como un rasgo
característico (figura 6(a)). Hay trece aminoácidos
separando las repeticiones de LDLR del posible dominio de expansión
transmembrana de 23 aminoácidos desde 1386-1408. El
posible dominio extracelular de LRP5 tiene seis posibles sitios para
la glucosilación unida a N en los residuos de aminoácidos 93, 138,
446, 499, 705, y 878 (figura 5(d)).
El dominio intracelular de LRP5 está compuesto
por 207 aminoácidos que es más largo que la mayoría de los miembros
de la familia pero de tamaño similar a LRP2 (Saito et al.
(1994) PNAS 91:9725-9729). No muestra similitud con
la familia de receptores de LDL, ni es similar a ninguna otra
proteína conocida. El dominio citoplasmático de LRP5 está compuesto
por un 16% de prolina y un 15% de residuos de serina (figura
5(d)). La mayoría de los miembros de la familia de
receptores de LDL contienen un motivo NPXY conservado en el dominio
citoplasmático que se ha implicado en la endocitosis mediante
pocillos recubiertos (Chen et al. (1990) J. Biol. Chem. 265:
3116-3123). Estudios de mutagénesis han indicado que
el residuo crítico para el reconocimiento por componentes del
procedimiento endocítico es el residuo de tirosina (Davis, et
al. (1987) Cell 45: 15-24). Se tolera la
sustitución del residuo de tirosina por fenilalanina o triptófano,
por tanto el requisito mínimo para este residuo parece ser que sea
un aminoácido aromático (Davis, et al. (1987) Cell 45:
15-24). Estudios estructurales han indicado que la
función crítica de los residuos NP es proporcionar un giro beta que
presenta al residuo aromático (Bansal y Gierasch (1991) Cell 67:
1195-1201).
Aunque el dominio citoplasmático de LRP5 no
contiene un motivo NPXY, hay varios residuos aromáticos en el
dominio citoplasmático de LRP5 que yacen en posibles regiones de
giro (figura 5(d)) y por tanto pueden estar implicados en
facilitar la endocitosis. En particular, la tirosina 1473 que se
produce en el motivo VPLY de la secuencia tiene la prolina y la
tirosina en la posición correcta, con respecto al motivo consenso.
Aunque el motivo NPXY se ha implicado en la endocitosis en varias
proteínas, no es un requisito absoluto ya que hay proteínas que
carecen del motivo NPXY, por ejemplo el receptor de transferrina,
que experimenta endocitosis por pocillos recubiertos (Chen, et
al. (1990) J. Biol. Chem. 265: 3116-3123). En
cualquier caso, se anticipa que la función principal de esta
proteína será la endocitosis mediada por receptor de su ligando.
La capacidad de los miembros de la familia de
receptores de LDL para unirse a múltiples ligandos sugiere que LRP5
puede funcionar para unirse a uno o más ligandos. Además, de una
manera análoga a otros miembros de la familia, una vez unido, el
complejo ligando receptor de LRP5 experimentará endocitosis dando
como resultado el aclaramiento del ligando del medio extracelular.
La naturaleza del ligando de LRP5 puede ser un lípido, una
proteína, un complejo de proteínas, o una lipoproteína y puede tener
una variedad de funciones. Aunque la función fisiológica del
miembro más estrechamente relacionado de la familia de receptores de
LDL, LRP1, no está clara, tiene varias actividades bioquímicas.
LRP1 se une a la
alfa-2-macroglobulina. La
alfa-2-macroglobulina es un
complejo plasmático que contiene un ligando "cebo" para una
variedad de proteinasas, por ejemplo, tripsina, quimotripsina,
elastasa pancreática y calicreína plasmática (Jensen (1989) J. Biol.
Chem. 20:11539-11542). Una vez que se une la
proteinasa y rompe enzimáticamente el "cebo", la
alfa-2-macroglobulina experimenta un
cambio conformacional y "atrapa" la proteinasa. El complejo
proteinasa: alfa-2-macroglobulina se
aclara rápidamente por LRP. Este mecanismo fagocita las proteinasas
que tienen el potencial para mediar en una variedad de funciones
biológicas, por ejemplo, tratamiento de antígenos y secreción de
proteinasas (Strickland et al. (1990) J. Biol. Chem. 265:
17401-17404). La importancia de esta función se pone
en evidencia por la muerte prenatal de ratones inactivados con
Lrp1 (Zee et al. (1994) Genomics 23:
256-259).
La presentación de antígenos es un componente
crítico en el desarrollo de IDDM tal como se demuestra por el papel
central de haplotipos de MHC para conferir susceptibilidad a la
enfermedad (Tisch y McDivitt (1996) Cell 85:
291-297). Por analogía con LRP1, LRP5 puede
desempeñar un papel en la presentación de antígenos en cuyo caso
los polimorfismos en este gen podrían afectar al desarrollo de la
autoinmunidad en el paciente con diabetes tipo 1.
El complejo de alfa-2
macroglobulina también se une a citocinas y factores de crecimiento
tales como interleucina-1 beta, interleucina 2,
interleucina 6, factor de crecimiento
transformante-beta, y factor de crecimiento de
fibroblastos (Moestrup y Gliemann (1991) J. Biol. Chem. 266:
14011-14017). Por tanto, el receptor de
alfa-2 macroglobulina tiene potencial para
desempeñar un papel en el aclaramiento de citocinas y factores de
crecimiento. El papel de las citocinas en la mediación de
respuestas inmunitarias e inflamatorias está bien establecido. Por
ejemplo, el gen de la interleucina-2 es un gen
candidato fuerte para el locus Idd3 en el ratón diabético no
obeso, un modelo de animal para la diabetes tipo 1 (Denny et
al. (1977) Diabetes 46:695-700). Si LRP5 se une
a la alfa-2 macroglobulina complejos relacionados,
entonces puede desempeñar un papel en la respuesta inmunitaria
mediante el aclaramiento de citocina. Por ejemplo, el LRP5 que se
expresa en el páncreas, el tejido objetivo de la IDDM, puede
desempeñar un papel en el aclaramiento de citocinas del infiltrado
inflamatorio (insulitis) que está en curso en la enfermedad. Un
polimorfismo en LRP5 que redice la capacidad de LRP5 para aclarar
las citocinas puede aumentar en los individuos la susceptibilidad
para desarrollar IDDM. Además, un individuo con un polimorfismo que
aumenta la capacidad de LRP5 para aclarar citocinas puede protegerse
frente al desarrollo de IDDM. Por el contrario, ciertas citocinas
contrarrestan otras citocinas y por tanto la retirada de ciertas
citocinas beneficiosas por LRP5 puede conferir susceptibilidad a la
enfermedad y por tanto un polimorfismo que reduce la actividad de
LRP5 puede conferir protección frente al desarrollo de la
enfermedad.
Se ha mostrado que los aumentos de los ácidos
grasos libres (AGL) reducen la secreción de insulina en animales
(Boden et al. (1997) Diabetes 46: 3-10).
Además, ApoE que es un ligando para el receptor de LDL, se ha
asociado con una actividad antioxidante (Miyata y Smith (1996)
Nature Genet. 14: 55-61) y el daño oxidativo es un
mecanismo patogénico central en la destrucción de células \beta
pancreáticas en la diabetes tipo 1 (Bac (1994) Endocrin. Rev. 15:
516-542). Por tanto, las alteraciones en la
capacidad de LRP5 para unirse a ApoE y lipoproteínas relacionadas
pueden influir sobre la susceptibilidad frente al daño oxidativo en
células \beta pancreáticas. La transfección de formas de LRP5 en
células \beta puede facilitar la resistencia de las células
\beta frente al daño por el sistema inmunitario en la
autoinmunidad y en el transplante.
Se ha descrito una entidad farmacológica
denominada receptor estimulado por lipólisis (LSR) que se une y
endocita restos de quilomicrones en presencia de AGL (Mann et
al. (1995) Biochemistry 34: 10421-10431. Un
posible papel para el producto del gen LRP5 es que sea
responsable de esta actividad.
Otro miembro de la familia de LRP es LRP2,
también conocido como megalina y gp330, esta proteína se ha
implicado en la nefritis de Heymann, una enfermedad autoinmunitaria
del riñón en las ratas (Saito et al. (1994) PNAS 91:
9725-9729). La nefritis de Heymann es un modelo de
nefritis glomerular y se caracteriza por el desarrollo de
autoanticuerpos frente a la proteína asociada al receptor de
alfa-2 macroglobulina, también conocida como
antígeno de la nefritis de Heymann. El antígeno de la nefritis de
Heymann se une a LRP2 (Strickland et al. (1991) J. Biol.
Chem. 266: 13364-13369). LRP2 puede desempeñar un
papel en esta enfermedad mediante aclaración de esta proteína
patogénica. De una manera análoga, la función de LRP5 puede ser
unirse y aclarar proteínas en el páncreas frente a las que ha
generado autoanticuerpos el paciente con IDDM. Como alternativa, la
propia LRP5 puede ser un autoantígeno en el paciente con IDDM.
Se ha identificado LRP1 como el receptor para
ciertas toxinas bacterianas (Krieger y Herz (1994) Ann. Rev.
Biochem. 63: 601-637) y el rinovirus humano (Hofer
et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. 91:
1839-42). Es posible que una infección viral altere
la susceptibilidad de un individuo frente a IDDM (Epstein (1994) N.
Eng. J. Med. 331: 1428-1436). Si ciertos virus
utilizan LRP5 como modo de entrada en la célula, entonces los
polimorfismos en LRP5 pueden alterar la susceptibilidad del
individuo frente a la diabetes tipo 1.
Las alteraciones en la LRP5 pueden participar en
la patogénesis de otras enfermedades. LRP1 se une a lipoproteínas
tales como apoE y C-apolipoproteínas. El
aclaramiento de lipoproteínas tales como apoE y apoB por el receptor
de LDL es su papel principal, las mutaciones en el receptor de LDL
conducen a hipercolesterolemia (Chen et al. (1990) J. Biol.
Chem. 265: 3116-3123). Por tanto, las mutaciones en
LRP5 que disminuyen la capacidad de la proteína para fagocitar
lipoproteínas pueden provocar un aumento en el colesterol. Las
variaciones de LRP5 pueden predisponer al desarrollo de
complicaciones macrovasculares en pacientes diabéticos, la principal
causa de muerte. En pacientes con diabetes tipo 2, la patología
pancreática se caracteriza por la deposición de amiloide. La
deposición de amiloides puede disminuir la función de las células
\beta pancreáticas. LRP5 puede funcionar en el metabolismo del
amiloide del islote e influenciar la susceptibilidad frente a la
diabetes tipo 2 así como la diabetes tipo 1. El papel de ApoE en la
enfermedad de Alzheimer indica que proteínas tales como LRP1 y
posiblemente LRP5 tienen el potencial para contribuir a la
patogénesis de esta enfermedad.
El polimorfismo en genes implicados en el
síndrome de osteoporosis-pseudoglioma se ha mapeado
en una región 3-cM del cromosoma 11 que incluye el
gen que codifica LRP5 (Gong et al. (1996) Am. J. Hum. Genet.
59: 146-151). Se desconoce el mecanismo patogénico
de esta enfermedad pero se cree que implica un papel regulador, los
pacientes que tienen un crecimiento vascular aberrante en la
vítreo-retina. El posible papel de LRP5 en el
aclaramiento del factor de crecimiento de fibroblastos, un mediador
de la angiogénesis, y la ubicación cromosómica del gen sugiere que
puede desempeñar un papel en esta enfermedad. Su función propuesta
podría estar conectada con el desarrollo de retinopatía en la
diabetes.
Los exones del gen LRP5 están
explorándose para detectar polimorfismos. Hay varios polimorfismos
que cambian un aminoácido en LRP5 que se han identificado en
pacientes con IDDM (tabla 5). Es de interés particular una
transición de C a T, que cambia un codón Ala por Val, en uno de los
tres motivos de unión a ligando del receptor de LDL conservados.
Además de este polimorfismo descrito anteriormente, se identificó
una transición de C a T en el codón para Asn^{709} (sin efecto
sobre el aminoácido codificado), y se identificaron tres
polimorfismos en secuencias intrónicas que flanquean los exones. Se
ha identificado otro conjunto de polimorfismos comparando
experimentalmente secuencias de ADNc derivadas con la secuencia de
ADN genómico (tabla 5). Algunos de estos polimorfismos se
analizarán en un gran número de pacientes con IDDM e individuos
control para determinar su asociación con
IDDM.
IDDM.
Se identificó un número de (aproximadamente 30)
polimorfismos de un único nucleótido (SNP) en las secuencias de ADN
genómico de BAC de solapamiento y clones de cósmidos que rodean al
marcador genético poli A. Las secuencias genómicas contiguas que
contienen estos polimorfismos se han denominado cóntigo 57 (figura
9), que contiene los exones 1 y 5 junto con los marcadores
genéticos poly A y D11S1917(UT5620), y cóntigo 58
(figura 10) que contiene el marcador genético L3001ca y parte
del exón A.
Se ha identificado una región de identidad por
descendencia asociada con la diabetes tipo 1 en la parte en 5' del
gen LRP5. Combinando datos de SNP y marcadores de
microsatélites, se ha identificado una región idéntica por
descendencia en haplotipos susceptibles, la región mínima está
compuesta por 25 kb que contienen las posibles regiones reguladoras
de LRP5 y el primer exón. Esto refuerza las evidencias
genéticas para que LRP5 sea un gen de riesgo de diabetes.
Por tanto, los tratamientos que afectan al LRP5 pueden ser
útiles en la prevención y tratamiento de la diabetes tipo 1.
La sobreexpresión de LRP5 en ratones
proporciona evidencias de que LRP5 afecta al metabolismo de
lipoproteínas. Se han obtenido evidencias estadísticamente
significativas para la modulación de triglicéridos por LRP5. Por
tanto, los tratamientos que afectan al LRP5 pueden ser útiles
en el tratamiento de enfermedades cardiovasculares y estados en los
que los triglicéridos séricos son elevados.
Se obtuvieron evidencias sugerentes de que LRP5
reduce el colesterol sérico cuando está por encima del normal.
También hay evidencias de la capacidad de LRP5 para interaccionar
con partículas de lipoproteínas de muy baja densidad y reducir sus
niveles en suero. Por tanto, los tratamientos que afectan al
LRP-5 pueden ser útiles en el tratamiento de
enfermedades cardiovasculares y estados en los que los niveles de
colesterol sérico son elevados.
Estudios bioquímicos indican que LRP5 tiene la
capacidad para funcionar en la captación de partículas de
lipoproteínas de baja densidad (LDL). Por tanto, los tratamientos
que afectan al LRP5 pueden ser útiles en el tratamiento de
enfermedades cardiovasculares en las que los niveles de LDL son
elevados.
La sobreexpresión de LRP5 en ratones
proporcionó evidencias estadísticamente significativas para una
reducción en la fosfatasa alcalina sérica. Una reducción en la
fosfatasa alcalina sérica concuerda con que LRP5 desempeñe un papel
en la modulación de la respuesta inmunitaria. Esto proporciona
evidencias de que LRP5 participa en la patogénesis de la
diabetes tipo 1. Por tanto, los tratamientos que afectan al
LRP5 pueden ser útiles en el tratamiento de enfermedades
autoinmunitarias.
La ubicación celular de LRP5 indica que se
expresa en un subtipo particular, los macrófagos fagocíticos, de
macrófagos tisulares maduros. Las evidencias de la bibliografía
indican que esta clase de macrófagos está implicada en la
enfermedad autoinmunitaria, lo que apoya el papel de LRP5 en la
enfermedad autoinmunitaria y la diabetes tipo 1. Por tanto, los
tratamientos que afectan al LRP5 pueden ser útiles en el
tratamiento de enfermedades autoinmunitarias.
Se han obtenido ADNc de longitud completa para
LRP5 tanto humano como de ratón. Se han desarrollado
anticuerpos dirigidos frente a LRP5. Estos reactivos proporcionan
herramientas para analizar adicionalmente la función biológica de
LRP5.
Independientemente del auténtico modo de acción
de LRP5 y su implicación en la IDDM y otras enfermedades, el
trabajo experimental descrito en el presente documento establece y
apoya las aplicaciones prácticas que se describen como aspectos y
realizaciones de la presente invención.
Según un aspecto de la presente invención se
proporciona una molécula de ácido nucleico que tiene una secuencia
de nucleótidos que codifica un polipéptido que incluye la secuencia
de aminoácidos mostrada en la figura 5(c), la figura
5(d) o la figura 5(e). La secuencia de aminoácidos de
la figura 5(c) incluye la de la figura 5(e) y una
secuencia señal.
La secuencia codificante puede ser la mostrada
incluida en la figura 5(a) o la figura 5(b) o puede
ser un mutante, variante, derivado o alelo de la secuencia
mostrada. La secuencia puede diferenciarse de la mostrada por un
cambio que es uno o más de adición, inserción, deleción y
sustitución de uno o más nucleótidos de las secuencias mostradas.
Los cambios realizados en una secuencia de nucleótidos pueden dar
como resultado un cambio de aminoácidos a nivel de la proteína, o
no, según se determina por el código genético.
Por tanto, un ácido nucleico según la presente
invención puede incluir una secuencia diferente de las secuencias
mostradas en la figura 5(a) o la figura 5(b) y aún
codificar un polipéptido con la misma secuencia de aminoácidos. La
secuencia de aminoácidos mostrada en la figura 5(c) está
constituida por 1615 residuos.
Por otra parte, el polipéptido codificado puede
comprender una secuencia de aminoácidos que difiere en uno o más
residuos de aminoácidos de la secuencia de aminoácidos mostrada en
la figura 5(c). La presente invención proporciona
adicionalmente el ácido nucleico que codifica un polipéptido que es
una secuencia de aminoácidos mutante, variante, derivada o alelo de
la secuencia mostrada en la figura 5(c). Tales polipéptidos
se tratan a continuación. El ácido nucleico que codifica un
polipéptido de este tipo puede mostrar a nivel de la secuencia de
nucleótidos y/o aminoácidos codificados más de aproximadamente un
60% de homología con la secuencia codificante mostrada en la figura
5(a) y/o la secuencia de aminoácidos mostrada en la figura
5(c), más de aproximadamente un 70% de homología, más de
aproximadamente un 80% de homología, más de aproximadamente un 90%
de homología o más de aproximadamente un 95% de homología. Por
"homología" de aminoácidos, puede entenderse similitud (según
los principios establecidos de similitud de aminoácidos, por
ejemplo, según se determina usando el algoritmo GAP (Genetics
Computer Group, Madison, WI) o identidad. GAP usa el algoritmo de
Needleman y Wunsch para alinear dos secuencias completas que
maximiza el número de correspondencias y minimiza el número de
huecos. Generalmente, se usan los parámetros por defecto, con una
penalización de creación de hueco = 12 y una penalización de
extensión de hueco = 4. El uso de cualquiera de los términos
"homología" y "homólogo" en el presente documento no
implica ninguna relación necesariamente de evolución entre las
secuencias comparadas, conservando por ejemplo el uso habitual de
expresiones tales como "recombinación homóloga" que simplemente
requiere que dos secuencias de nucleótidos sean lo suficientemente
similares como para recombinarse en condiciones apropiadas. A
continuación se encuentra una evaluación adicional de polipéptidos
según la presente invención, que pueden codificarse por un ácido
nucleico según la presente invención.
La presente invención se extiende a un ácido
nucleico que se hibrida con una cualquiera o más de las secuencias
específicas descritas en el presente documento en condiciones
rigurosas. Condiciones adecuadas incluyen, por ejemplo, para la
detección de secuencias que son idénticas en aproximadamente el
80-90% tal como la detección de LRP5 de
ratón con una sonda humana o viceversa, la hibridación durante la
noche a 42ºC en Na_{2}HPO_{4} 0,25 M, pH 7,2, SDS al 6,5%,
sulfato de dextrano al 10% y un lavado final a 55ºC en 0,1 X SSC,
SDS al 0,1%. Para la detección de secuencias que son idénticas en
más de aproximadamente un 90%, condiciones adecuadas incluyen la
hibridación durante la noche a 65ºC en Na_{2}HPO_{4} 0,25 M, pH
7,2, SDS al 6,5%, sulfato de dextrano al 10% y un lavado final a
60ºC en 0,1 X SSC, SDS al 0,1%.
La secuencia codificante puede incluirse dentro
de una molécula de ácido nucleico que tiene la secuencia mostrada
en la figura 5(a) (isoforma 1) o la figura 5(b) y
codifica el polipéptido completo de la isoforma 1 (figura
5(c)).
También se describe una molécula de ácido
nucleico que codifica un polipéptido que incluye la secuencia de
aminoácidos mostrada en la figura 17(b). Esta secuencia forma
una parte sustancial de la secuencia de aminoácidos mostrada en la
figura 5(e). El ácido nucleico que codifica un polipéptido
que incluye la secuencia de aminoácidos mostrada en la figura
17(b) puede incluir la secuencia codificante mostrada en la
figura 17(b), o un alelo, variante, mutante o derivado en
términos similares a los tratados anteriormente y a continuación
para otros aspectos y realizaciones de la presente invención.
Según diversos aspectos de la presente invención
también se proporcionan diversas isoformas del gen y polipéptido
LRP5. El gen de la figura 5 se conoce como la isoforma 1. En la
presente invención se incluye una molécula de ácido nucleico que
tiene una secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido que
incluye la secuencia de aminoácidos de un polipéptido mostrado en
la figura 11(c) (isoforma 2). La secuencia codificante puede
ser tal como se muestra en la figura 11(b) (que puede
incluirse en una molécula que tiene la secuencia mostrada en la
figura 11(a) (isoforma 2) o la secuencia mostrada en la
figura 12(a) (isoforma 3)), la figura 13 (isoforma 4), la
figura 14 (isoforma 5) y la figura 15 (isoforma 6).
Otras moléculas de ácido nucleico según la
presente invención incluyen la secuencia de nucleótidos de
cualquiera de la figura 5(a), la figura 12(b), la
figura 12(e), la figura 15(b), la figura 16(a)
y la figura 16(b) y ácido nucleico que codifica las
secuencias de aminoácidos codificadas por la figura 5(a), la
figura 11(b), la figura 12(c) o la figura
16(c), junto con mutantes, alelos, variantes y derivados de
estas secuencias. Además se incluyen moléculas de ácido nucleico
que codifican la secuencia de aminoácidos de la figura 18(c),
incluyendo particularmente la secuencia codificante mostrada en la
figura 18(b).
Alelos particulares descritos en el presente
documento tienen secuencias que tienen una variación indicada en la
tabla 5 o la tabla 6. Uno o más de estos puede estar asociado con la
susceptibilidad frente a IDDM u otra enfermedad. Pueden preferirse
alteraciones en una secuencia según la presente invención que está
asociada con IDDM u otra enfermedad según realizaciones de la
presente invención. A continuación se tratan las implicaciones para
la exploración, por ejemplo, para fines de diagnóstico o
prognosis.
Generalmente, el ácido nucleico según la
presente invención se proporciona como un aislado, en forma aislada
y/o purificada, o libre o sustancialmente libre de material con el
que está asociado de manera natural, tal como libre o
sustancialmente libre de ácido nucleico que flanquea el gen en el
genoma humano, excepto posiblemente una o más secuencia(s)
reguladora(s) para la expresión. El ácido nucleico puede ser
total o parcialmente sintético y puede incluir ADN genómico, ADNc o
ARN. La secuencia codificante mostrada en el presente documento es
una secuencia de ADN. Cuando el ácido nucleico según la invención
incluye ARN, las referencias a las secuencias mostradas deben
interpretarse como que abarcan la referencia al equivalente de ARN,
sustituyendo U por T.
Puede proporcionarse ácido nucleico como parte
de un vector replicable, y también se proporciona por la presente
invención un vector que incluye ácido nucleico tal como se expuso
anteriormente, particularmente cualquier vector de expresión a
partir del cual puede expresarse el polipéptido codificado en
condiciones apropiadas, y una célula huésped que contiene cualquier
vector o ácido nucleico de este tipo. Un vector de expresión en
este contexto es una molécula de ácido nucleico que incluye ácido
nucleico que codifica un polipéptido de interés y secuencias
reguladoras apropiadas para la expresión del polipéptido, en un
sistema de expresión in vitro, por ejemplo lisado de
reticulocitos, o in vivo, por ejemplo en células eucariotas
tales como células COS o CHO o en células procariotas tales como
E. coli. Esto se trata adicionalmente a continuación.
La secuencia de ácido nucleico proporcionada
según la presente invención es útil para identificar un ácido
nucleico de interés (y que puede ser según la presente invención) en
una muestra de prueba. La presente invención proporciona un
procedimiento para obtener ácido nucleico de interés, incluyendo el
procedimiento hibridar una sonda que tiene la secuencia mostrada en
cualquiera de las figuras 5(a), 11(a), 11(b),
12(a), 12(b), 12(c), 12(e), 13, 14, 15,
15(b) 16(a), 16(b), y 16(c), o una
secuencia complementaria, con ácido nucleico objetivo. La
hibridación se sigue generalmente por la identificación de
hibridación satisfactoria y el aislamiento de ácido nucleico que se
ha hibridado con la sonda, lo que puede implicar una o más etapas de
PCR. Normalmente no será necesario usar una sonda con la secuencia
completa mostrada en cualquiera de estas figuras. Pueden usarse
fragmentos más cortos, particularmente fragmentos con una secuencia
que codifica los motivos conservados (figura 5(c, d), y
figura 6(a)).
El ácido nucleico según la presente invención
puede obtenerse usando una o más sondas de oligonucleótido o
cebadores diseñados para hibridarse con uno o más fragmentos de la
secuencia de ácido nucleico mostrada en cualquiera de las figuras,
particularmente fragmentos de secuencia relativamente rara,
basándose en el uso del codón o análisis estadístico. Un cebador
diseñado para hibridarse con un fragmento de la secuencia de ácido
nucleico mostrada en cualquiera de las figuras puede usarse junto
con uno o más oligonucleótidos diseñados para hibridarse con una
secuencia en un vector de clonación dentro del cual se ha clonado
ácido nucleico objetivo, o en los denominados "RACE"
(amplificación rápida de extremos de ADNc) en los que los ADNc en
una biblioteca se acoplan con un conector de oligonucleótido y se
realiza la PCR usando un cebador que se hibrida con una secuencia
mostrada y un cebador que se hibrida con el conector de
oligonucleótido.
Tales sondas de oligonucleótido o cebadores, así
como la secuencia de longitud completa (y mutantes, alelos,
variantes y derivados) también son útiles para examinar una muestra
de prueba que contiene ácido nucleico para detectar la presencia de
alelos, mutantes y variantes, con implicaciones de diagnóstico y/o
prognosis tal como se trata con más detalle a continuación.
El ácido nucleico aislado y/o purificado de una
o más células (por ejemplo humanas) o una biblioteca de ácido
nucleico derivada de ácido nucleico aislado y/o purificado de
células (por ejemplo una biblioteca de ADNc derivada de ARNm
aislado de las células), puede explorarse con sondas en condiciones
para la hibridación selectiva y/o someterse a una reacción de
amplificación de ácido nucleico específica tal como reacción en
cadena de la polimerasa (PCR) (revisada por ejemplo en "PCR
protocols; A Guide to Methods and Applications", Eds. Innis
et al, 1990, Academic Press, Nueva York, Mullis et al,
Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 51:263, (1987), Ehrlich
(ed), PCR technology, Stockton Press, NY, 1989, y Ehrlich et
al, Science, 252:1643-1650, (1991)). La PCR
comprende etapas de desnaturalización de ácido nucleico molde (si es
de cadena doble), reasociación de cebador con la molécula objetivo,
y polimerización. El ácido nucleico explorado con sonda o usado como
molde en la reacción de amplificación puede ser ADN genómico, ADNc
o ARN. Otras técnicas de amplificación de ácido nucleico
específicas incluyen activación por desplazamiento de la cadena, el
sistema de replicasa de QB, la reacción de reparación en cadena, la
reacción en cadena de la ligasa y la transcripción activada por
acoplamiento. Por conveniencia, y dado que generalmente se prefiere,
se usa el término PCR en el presente documento en contextos en los
que pueden aplicarse otras técnicas de amplificación de ácido
nucleico por los expertos en la técnica. A menos que el contexto
requiera otra cosa, debe entenderse que la referencia a PCR cubre
el uso de cualquier reacción de amplificación nucleica adecuada
disponible en la técnica.
En el contexto de la clonación, puede ser
necesario acoplar uno o más fragmentos de genes para generar una
secuencia codificante de longitud completa. Además, cuando no se ha
obtenido una molécula de ácido nucleico codificante de longitud
completa, puede usarse una molécula más pequeña que representa parte
de la molécula completa para obtener clones de longitud completa.
Pueden prepararse insertos a partir de clones de ADNc parciales y
usarse para examinar bibliotecas de ADNc. Los clones de longitud
completa aislados pueden subclonarse en vectores de expresión y
someterse a ensayo la actividad mediante transfección en células
huésped adecuadas, por ejemplo con un plásmido indicador.
Un procedimiento puede incluir la hibridación de
una o más (por ejemplo dos) sondas o cebadores para el ácido
nucleico objetivo. Cuando el ácido nucleico es ADN de cadena doble,
la hibridación estará generalmente precedida por desnaturalización
para producir ADN de cadena sencilla. La hibridación puede ser parte
de un procedimiento de PCR, o parte de un procedimiento de
exploración con sondas que no implica PCR. Un procedimiento de
ejemplo sería una combinación de PCR e hibridación de baja
rigurosidad. Un procedimiento de selección, seleccionado de los
muchos disponibles por los expertos en la técnica, se usa para
identificar acontecimientos de hibridación satisfactorios y ácido
nucleico hibridado aislado.
La unión de una sonda a un ácido nucleico
objetivo (por ejemplo ADN) puede medirse usando cualquiera de una
variedad de técnicas a disposición de los expertos en la técnica.
Por ejemplo, pueden marcarse las sondas de manera radioactiva,
fluorescente o enzimática. Otros procedimientos que no emplean el
marcaje de sondas incluyen la exploración de polimorfismos de
longitud de fragmentos de restricción, amplificación usando PCR,
rotura con ARNasa y exploración con sondas de oligonucleótido de
alelos específicos. La exploración con sondas puede emplear la
técnica de transferencia de tipo Southern habitual. Por ejemplo,
puede extraerse ADN de células y digerirse con diferentes enzimas
de restricción. Entonces pueden separarse los fragmentos de
restricción mediante electroforesis sobre gel de agarosa, antes de
la desnaturalización y transferirse a un filtro de nitrocelulosa.
La sonda marcada puede hibridarse con los fragmentos de ADN sobre el
filtro y determinarse la unión. El ADN para la exploración con
sondas puede prepararse a partir de preparaciones de ARN de
células.
Pueden realizarse experimentos preliminares
hibridando en condiciones de baja rigurosidad diversas sondas con
transferencias de tipo Southern de ADN digerido con enzimas de
restricción. Se lograrán condiciones adecuadas cuando un gran
número de fragmentos de hibridación se obtengan mientras que la
hibridación de fondo sea baja. Usando estas condiciones pueden
investigarse bibliotecas de ácido nucleico, por ejemplo bibliotecas
de ADNc representativas de secuencias expresadas. Los expertos en
la técnica pueden emplear condiciones adecuadas de la rigurosidad
deseada para la hibridación selectiva, teniendo en cuenta factores
tales como la composición de las bases y longitud del
oligonucleótido, temperatura y similares. Basándose en la
información de secuencia de aminoácidos, pueden diseñarse cebadores
o sondas de oligonucleótidos, teniendo en cuenta la degeneración
del código genético y, cuando sea apropiado, el uso de codones del
organismo del que se deriva el ácido nucleico candidato. Un
oligonucleótido para su uso en la amplificación de ácidos nucleicos
puede tener aproximadamente 10 o menos codones (por ejemplo 6, 7 u
8), es decir, tener una longitud de aproximadamente 30 o menos
nucleótidos (por ejemplo 18, 21 ó 24). Generalmente, los cebadores
específicos tienen una longitud de más de 14 nucleótidos, pero no
necesitan tener más de 18-20. Los expertos en la
técnica conocen bien el diseño de cebadores para su uso en
procedimientos tales como PCR. En la técnica se conocen bien
diversas técnicas para sintetizar cebadores de oligonucleótidos,
incluyendo procedimientos de síntesis de fosfotriésteres y
fosfodiésteres.
Las secuencias de aminoácidos preferidas
adecuadas para su uso en el diseño de sondas o cebadores de PCR
pueden incluir secuencias conservadas (completa, sustancial o
parcialmente) que codifican los motivos presentes en LRP5 (figura
5(d)).
Otro aspecto de la presente invención
proporciona un fragmento de oligonucleótido o polinucleótido de la
secuencia de nucleótidos mostrada en cualquiera de las figuras en
el presente documento que proporciona ácido nucleico según la
presente invención, o una secuencia complementaria, en particular
para su uso en un procedimiento de obtención y/o selección de ácido
nucleico. Algunos oligonucleótidos preferidos tienen una secuencia
mostrada en la tabla 2, tabla 4, tabla 7, tabla 8 o tabla 9, o una
secuencia que se diferencia de cualquiera de estas secuencias
mostradas mediante adición, sustitución, inserción o deleción de uno
o más nucleótidos, pero preferiblemente sin eliminación de la
capacidad para hibridarse selectivamente con ácido nucleico según la
presente invención, es decir, en los que el grado de similitud del
oligonucleótido o polinucleótido con uno de las secuencias
facilitadas es lo suficientemente alto.
Pueden usarse fragmentos y otros
oligonucleótidos como cebadores o sondas tal como se trata, pero
también pueden generarse (por ejemplo mediante PCR) en
procedimientos relativos a la determinación de la presencia en una
muestra de prueba de una secuencia indicativa de susceptibilidad
frente a IDDM u otra enfermedad.
A continuación se tratan procedimientos que
implican el uso de ácido nucleico en contextos de diagnóstico y/o
prognosis, por ejemplo, en la determinación de la susceptibilidad
frente a IDDM u otra enfermedad, y otros procedimientos relativos a
la determinación de la presencia de secuencias indicativas de
susceptibilidad frente a IDDM u otra enfermedad.
Otras realizaciones de oligonucleótidos
descritos en el presente documento son secuencias de
oligonucleótidos antisentido basadas en las secuencias de ácido
nucleico descritas en el presente documento. Los oligonucleótidos
antisentido pueden diseñarse para hibridarse con la secuencia de
ácido nucleico complementaria, pre-ARNm o ARNm
maduro, interfiriendo con la producción de polipéptido codificado
por una secuencia de ADN dada (por ejemplo, polipéptido nativo o
bien una forma mutante del mismo), de manera que su expresión se
reduzca o evite completamente. Pueden usarse técnicas antisentido
para seleccionar como objetivo una secuencia codificante, una
secuencia control de un gen, por ejemplo en la secuencia flanqueante
en 5', mediante lo cual los oligonucleótidos antisentido pueden
interferir con secuencias control. Los oligonucleótidos antisentido
pueden ser ADN o ARN y pueden tener una longitud de aproximadamente
14-23 nucleótidos, de manera particular
aproximadamente 15-18 nucleótidos. La construcción
de secuencias antisentido y su uso se describe en Peyman y Ulman,
Chemical Reviews, 90:543-584, (1990), y Crooke,
Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol., 32:329-376,
(1992).
El ácido nucleico según la presente invención
puede usarse en procedimientos de terapia génica, por ejemplo en el
tratamiento de individuos con el objetivo de prevenir o curar (total
o parcialmente) IDDM u otra enfermedad. Esto puede aliviar uno o
más síntomas de la enfermedad. Esto se trata a continuación.
El ácido nucleico según la presente invención,
tal como cebador o sonda de oligonucleótidos o secuencia codificante
de longitud completa, puede proporcionarse como parte de un kit,
por ejemplo en un recipiente adecuado tal como un vial en el que se
protege el contenido del entorno externo. El kit puede incluir
instrucciones para el uso del ácido nucleico, por ejemplo en PCR
y/o un procedimiento para determinar la presencia de ácido nucleico
de interés en una muestra de prueba. Un kit en el que se prevé el
ácido nucleico para su uso en PCR puede incluir uno o más reactivos
requeridos para la reacción, tales como polimerasa, nucleósidos,
disolución tampón, etc. El ácido nucleico puede estar marcado. Un
kit para su uso en la determinación de la presencia o ausencia de
ácido nucleico de interés puede incluir uno o más artículos y/o
reactivos para la realización del procedimiento, tales como medios
para proporcionar la propia muestra de prueba, por ejemplo un hisopo
para retirar células de la cavidad bucal o una jeringuilla para
extraer una muestra de sangre (siendo generalmente tales componentes
estériles).
En el presente documento también se describe una
molécula de ácido nucleico que incluye un promotor del gen
LRP5.
Por tanto, en el presente documento se describe
una molécula de ácido nucleico que incluye un promotor, incluyendo
el promotor la secuencia de nucleótidos mostrada en la figura
12(e) o la figura 15(b). El promotor puede comprender
uno o más fragmentos de la secuencia mostrada en la figura
12(e) o la figura 15(b), suficiente para estimular la
expresión del gen. El promotor puede comprender o estar constituido
esencialmente por una secuencia de nucleótidos en 5' con respecto
al gen LRP5 en el cromosoma humano, o una secuencia
equivalente en otra especie, tal como el ratón.
Cualquiera de las secuencias descritas en las
figuras en el presente documento puede usarse para construir una
sonda para su uso en la identificación y aislamiento de un promotor
a partir de una biblioteca genómica que contiene un gen LRP5
genómico. Las técnicas y condiciones para tal exploración con sondas
se conocen bien en la técnica y se tratan en otra parte en el
presente documento. Para encontrar motivos o elementos mínimos
responsables de la regularización tisular y/o del desarrollo, pueden
usarse enzimas de restricción o nucleasas para digerir una molécula
de ácido nucleico, seguido de un ensayo apropiado (por ejemplo usar
un gen indicador tal como luciferasa) para determinar la secuencia
requerida. Una realización preferida de la presente invención
proporciona un aislado de ácido nucleico con la secuencia de
nucleótidos mínima mostrada en la figura 12(e) o la figura
15(b) requerida para la actividad de promotor.
Tal como se observa, el promotor puede
comprender uno o más motivos o elementos de secuencia que confieren
control de expresión reguladora del desarrollo y/o específica del
tejido. Pueden incluirse otras secuencias reguladoras, por ejemplo
tal como se identifica mediante ensayo de mutación o digestión en un
sistema de expresión apropiado o mediante comparación de secuencias
con información disponible, por ejemplo, usando un ordenador para
buscar en bases de datos en línea.
Por "promotor" se hace referencia a una
secuencia de nucleótidos a partir de la cual puede iniciarse la
transcripción de ADN operativamente unido en sentido 3' (es decir
en la dirección 3' sobre la cadena sentido del ADN de cadena
doble).
"Operativamente unido" significa unido como
parte de la misma molécula de ácido nucleico, colocado adecuadamente
y orientado para que se inicie la transcripción a partir del
promotor. El ADN operativamente unido a un promotor está "bajo la
regulación del inicio transcripcional" del promotor.
Por tanto, un promotor puede tener una secuencia
de nucleótidos que es un alelo, mutante, variante o derivado,
mediante adición, inserción, sustitución o deleción de nucleótidos
de una secuencia promotora según se proporciona en el presente
documento. Los niveles preferidos de homología de secuencia con una
secuencia proporcionada pueden ser análogos a los expuestos
anteriormente para polipéptidos y ácido nucleico codificante según
la presente invención. La mutagénesis sistemática o aleatoria de
ácido nucleico para preparar una alteración de la secuencia de
nucleótidos puede realizarse usando cualquier técnica conocida por
los expertos en la técnica. Una o más alteraciones a la secuencia
promotora según la presente invención pueden aumentar o disminuir la
actividad promotora, o aumentar o disminuir la magnitud del efecto
de una sustancia que puede modular la actividad promotora.
"Actividad promotora" se usa para referirse
a la capacidad para iniciar la transcripción. El nivel de actividad
promotora puede cuantificarse por ejemplo mediante evaluación de la
cantidad de ARNm producido mediante transcripción a partir del
promotor o mediante evaluación de la cantidad de producto de
proteína producido mediante traducción de ARNm producido mediante
transcripción a partir del promotor. La cantidad de ARNm específico
presente en un sistema de expresión puede determinarse, por
ejemplo, usando oligonucleótidos específicos que pueden hibridarse
con el ARNm y que están marcados o pueden usarse en una reacción de
amplificación específica tal como la reacción en cadena de la
polimerasa. El uso de un gen indicador facilita la determinación de
la actividad promotora mediante referencia con la producción de
proteína.
También se describe un constructo de ácido
nucleico que comprende una región promotora de LRP5 o un
fragmento, mutante, alelo, derivado o variante de la misma que
puede promover la transcripción, operativamente unido a un gen
heterólogo, por ejemplo una secuencia codificante. Un gen
"heterólogo" o "exógeno" no es generalmente una forma
modificada de LRP5. Generalmente, el gen puede transcribirse
para dar ARNm que puede traducirse para dar un producto de péptido
o polipéptido que puede detectarse y preferiblemente cuantificarse
tras la expresión. Un gen cuyo producto codificado puede someterse
a ensayo tras la expresión se denomina "gen indicador", es
decir un gen que "indica" una actividad promotora.
El gen indicador codifica preferiblemente una
enzima que cataliza una reacción que produce una señal detectable,
preferiblemente una señal visualmente detectable, tal como un
producto coloreado. Se conocen muchos ejemplos, incluyendo
\beta-galactosidasa y luciferasa. Puede someterse
a ensayo la actividad de \beta-galactosidasa
mediante producción de color azul sobre un sustrato, siendo el
ensayo a simple vista o mediante el uso de un espectrofotómetro
para medir la absorbancia. Puede cuantificarse la fluorescencia, por
ejemplo que se produce como resultado de actividad de luciferasa,
usando un espectrofotómetro. Pueden usarse ensayos radioactivos,
por ejemplo usando cloramfenicol acetiltransferasa, que también
puede usarse en ensayos no radioactivos. La presencia y/o cantidad
de un producto génico resultante de la expresión del gen indicador
puede determinarse usando una molécula que puede unirse al
producto, tal como un anticuerpo o fragmento del mismo. La molécula
de unión puede marcarse directa o indirectamente usando cualquier
técnica habitual.
Los expertos en la técnica son conscientes de
que pueden usarse una multitud de posibles genes indicadores y
técnicas de ensayo para determinar la actividad génica. Puede
usarse cualquier indicador/ensayo adecuado.
Pueden emplearse constructos de ácido nucleico
que comprenden un promotor (tal como se describe en el presente
documento) y un gen heterólogo (indicador) en la exploración para
seleccionar una sustancia que puede modular la actividad del
promotor. Para fines terapéuticos, por ejemplo para el tratamiento
de IDDM u otra enfermedad, puede buscarse una sustancia que puede
regular por incremento la expresión del promotor. Un procedimiento
de exploración para determinar la capacidad de una sustancia para
modular la actividad de un promotor puede comprender poner en
contacto un sistema de expresión, tal como una célula huésped, que
contiene un constructo de ácido nucleico tal como se describe en el
presente documento con una sustancia de prueba o candidata y
determinar la expresión del gen heterólogo.
El nivel de expresión en presencia de la
sustancia de prueba puede compararse con el nivel de expresión en
ausencia de la sustancia de prueba. Una diferencia en la expresión
en presencia de la sustancia de prueba indica la capacidad de la
sustancia para modular la expresión del gen. Un aumento en la
expresión del gen heterólogo comparado con la expresión del otro
gen no unido a un promotor tal como se describe en el presente
documento indica especificidad de la sustancia por la modulación del
promotor.
Un constructo de promotor puede introducirse en
una línea celular usando cualquier técnica previamente descrita
para producir una línea celular estable que contiene el constructo
indicador integrado en el genoma. Las células pueden crecer e
incubarse con compuestos de prueba durante tiempos variantes. Las
células pueden crecer en placas de 96 pocillos para facilitar el
análisis de grandes números de compuestos. Entonces pueden lavarse
las células y analizarse la expresión del gen indicador. Para
algunos indicadores, tales como luciferasa, se lisarán las células y
luego se analizarán.
Tras la identificación de una sustancia que
modula o afecta a la actividad promotora, la sustancia puede
investigarse adicionalmente. Además, puede fabricarse y/o usarse en
la preparación, es decir, la fabricación o formulación, de una
composición tal como un medicamento, composición farmacéutica o
fármaco. Estos pueden administrarse a individuos.
Por tanto, no sólo es posible identificar una
sustancia usando una molécula de ácido nucleico como modulador de
la actividad promotora, según lo descrito en el presente documento,
sino también producir una composición farmacéutica, medicamento,
fármaco u otra composición que comprende una sustancia de este tipo,
un procedimiento que comprende la administración de una composición
de este tipo a un paciente, por ejemplo, para aumentar la expresión
de LRP5 por ejemplo en el tratamiento (que puede incluir tratamiento
preventivo) de IDDM u otra enfermedad, uso de una sustancia de este
tipo en la fabricación de una composición para su administración,
por ejemplo, para aumentar la expresión de LRP5 por ejemplo
en el tratamiento de IDDM u otra enfermedad, y un procedimiento de
preparación de una composición farmacéutica que comprende mezclar
una sustancia de este tipo con un excipiente o vehículo
farmacéuticamente aceptable, y opcionalmente otros componentes.
Otro aspecto de la presente invención
proporciona un polipéptido que tiene la secuencia de aminoácidos
mostrada en la figura 5(c), que puede estar en forma aislada
y/o purificada, libre o sustancialmente libre de material con el
que está asociado de manera natural, tal como otros polipéptidos o
tal como polipéptidos humanos distintos al de la secuencia de
aminoácidos mostrada en la figura 5(c), o (por ejemplo si se
produce mediante expresión en una célula procariota) que carece de
glucosilación nativa, por ejemplo, no glucosilados. Otros
polipéptidos según la presente invención tienen una secuencia de
aminoácidos seleccionada de la mostrada en el polipéptido mostrado
en la figura 11(c),
la mostrada en 12(d), y el polipéptido parcial mostrado en la figura 16(d).
la mostrada en 12(d), y el polipéptido parcial mostrado en la figura 16(d).
También se describen polipéptidos que son
variantes, alelos, derivados o mutantes de secuencia de aminoácidos.
Un polipéptido que es una variante, alelo, derivado o mutante puede
tener una secuencia de aminoácidos que se diferencia de la
facilitada en una figura en el presente documento por uno o más de
adición, sustitución, deleción e inserción de uno o más
aminoácidos. Tales polipéptidos preferidos tienen función de LRP5,
es decir, tienen una o más de las siguientes propiedades:
reactividad cruzada inmunológica con un anticuerpo reactivo frente
al polipéptido para el que se facilita la secuencia en una figura en
el presente documento; compartir un epítopo con el polipéptido para
el que se muestra la secuencia de aminoácidos en una figura en el
presente documento (tal como se determina por ejemplo mediante
reactividad cruzada inmunológica entre los dos polipéptidos); una
actividad biológica que se inhibe mediante un anticuerpo preparado
frente al polipéptido cuya secuencia se muestra en una figura en el
presente documento; capacidad para reducir los triglicéridos
séricos; capacidad para reducir el colesterol sérico; capacidad
para interaccionar con y/o reducir los niveles séricos de partículas
de lipoproteínas de muy baja densidad; capacidad para afectar a los
niveles de fosfatasa alcalina sérica. La alteración de la secuencia
puede cambiar la naturaleza y/o nivel de actividad y/o estabilidad
de la proteína LRP5.
Un polipéptido que es una variante, alelo,
derivado o mutante de secuencia de aminoácidos de la secuencia de
aminoácidos mostrada en una figura en el presente documento puede
comprender una secuencia de aminoácidos que comparte más de
aproximadamente el 35% de identidad de secuencia con la secuencia
mostrada, más de aproximadamente el 40%, más de aproximadamente el
50%, más de aproximadamente el 60%, más de aproximadamente el 70%,
más de aproximadamente el 80%, más de aproximadamente el 90% o más
de aproximadamente el 95%. La secuencia puede compartir más de
aproximadamente el 60% de similitud, más de aproximadamente el 70%
de similitud, más de aproximadamente el 80% de similitud o más de
aproximadamente el 90% de similitud con la secuencia de aminoácidos
mostrada en la figura relevante. La similitud de aminoácidos se
define generalmente con referencia al algoritmo GAP (Genetics
Computer Group, Madison, WI) tal como se observó anteriormente, o el
programa TBLASTN, de Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol.
215: 403-10. La similitud permite una "variación
conservativa", es decir sustitución de un residuo hidrófobo tal
como isoleucina, valina, leucina o metionina por otro, o la
sustitución de un residuo polar por otro, tal como lisina por
arginina, ácido aspártico por glutámico, o asparagina por glutamina.
Las variantes de secuencia de aminoácidos particulares pueden
diferir de la mostrada en una figura en el presente documento
mediante inserción, adición, sustitución o deleción de 1 aminoácido,
2, 3, 4, 5-10, 10-20,
20-30, 30-50,
50-100, 100-150, o más de 150
aminoácidos.
La comparación de secuencias puede realizarse a
lo largo de la longitud completa de la secuencia relevante mostrada
en el presente documento, o más preferiblemente puede ser a lo largo
de una secuencia contigua de aproximadamente, o más de
aproximadamente, 20, 25, 30, 33, 40, 50, 67, 133, 167, 200, 233,
267, 300, 333, 400, 450, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1100, 1200,
1300, 1400, 1500, 1600, o más aminoácidos o tripletes de
nucleótidos, comparado con la secuencia de aminoácidos o secuencia
de nucleótidos relevante según sea el caso.
Además se describen partes, fragmentos,
derivados y componentes miméticos funcionales activos de los
polipéptidos de la invención. Una "parte activa" de un
polipéptido significa un péptido que es inferior a dicho polipéptido
de longitud completa, pero que conserva una actividad biológica,
tal como una actividad biológica seleccionada de unión a ligando,
implicación en la endocitosis. Por tanto, una parte activa del
polipéptido LRP5 puede, en una realización, incluir el dominio
transmembrana y la parte de la cola citoplasmática implicada en la
endocitosis. Un fragmento activo de este tipo puede incluirse como
parte de una proteína de fusión, por ejemplo, incluyendo una parte
de unión para un ligando diferente. En realizaciones diferentes,
pueden incluirse combinaciones de motivos de LDL y EGF en una
molécula para conferir a la molécula diferentes especificidades de
unión.
Los fragmentos de la secuencia de polipéptido
LRP5 pueden incluir determinantes antigénicos o epítopos útiles
para preparar anticuerpos frente a una parte de la secuencia de
aminoácidos. Comúnmente se usan exploraciones de alanina para
encontrar y refinar motivos de péptidos dentro de los polipéptidos,
implicando la sustitución sistemática de cada residuo sucesivo con
el aminoácido alanina, seguida por la evaluación de la actividad
biológica.
Los fragmentos preferidos de LRP5 incluyen
aquellos con cualquiera de las siguientes secuencias de
aminoácidos:
SYFHLFPPPPSPCTDSS
VDGRQNIKRAKDDGT
EVLFTTGLIRPVALVVDN
IQGHLDFVMDILVFHS,
que pueden usarse por ejemplo para preparar o
aislar anticuerpos. Péptidos variantes y derivados, péptidos que
tienen una secuencia de aminoácidos que se diferencia de una de esas
secuencias mediante una adición, inserción, deleción o sustitución
de uno o más aminoácidos, también se describen en el presente
documento, generalmente con la condición de que el péptido variante
o derivado esté unido a un anticuerpo u otro elemento de unión
específica que se une a uno de los péptidos cuya secuencia se
muestra. Un péptido que es una variante o derivado de uno de los
péptidos mostrados puede competir con el péptido mostrado por la
unión a un elemento de unión específica, tal como un anticuerpo o
fragmento de unión a antígeno del mismo.
Un "derivado" de un polipéptido o un
fragmento del mismo puede incluir un polipéptido modificado haciendo
variar la secuencia de aminoácidos de la proteína, por ejemplo
mediante manipulación del ácido nucleico que codifica la proteína o
alterando la propia proteína. Tales derivados de la secuencia de
aminoácidos natural puede implicar uno o más de inserción, adición,
deleción o sustitución de uno o más aminoácidos, que puede ser sin
alterar fundamentalmente la naturaleza cualitativa de la actividad
biológica del polipéptido de tipo natural. También se describen
componentes miméticos funcionales de fragmentos activos de los
polipéptidos LRP5 proporcionados (incluyendo alelos, mutantes,
derivados y variantes). La expresión "componente mimético
funcional" significa una sustancia que puede no contener una
parte activa de la secuencia de aminoácidos relevante, y
probablemente no es un péptido en absoluto, pero que conserva en
términos cualitativos la actividad biológica de polipéptido LRP5
natural. El diseño y selección de componentes miméticos candidatos
se describe en detalle a continuación.
Las secuencias de variantes de secuencia de
aminoácidos representativas de realizaciones preferidas de la
presente invención se muestran en la tabla 5 y la tabla 6. La
exploración para detectar la presencia de una o más de éstas en una
muestra de prueba tiene un uso diagnóstico y/o pronóstico, por
ejemplo para determinar la susceptibilidad frente a IDDM u otra
enfermedad, tal como se trata a continuación.
Otros fragmentos de los polipéptidos para los
que se proporciona información de secuencia en el presente documento
se describen por ejemplo correspondiendo a dominios funcionales. Un
dominio funcional de este tipo es el posible dominio extracelular,
de tal manera que un fragmento de polipéptido según la presente
invención puede incluir el dominio extracelular del polipéptido
cuya secuencia de aminoácidos se muestra en la figura 5(e) o
la figura 5(c). Esto va hasta el aminoácido 1385 de la
secuencia precursora de la figura 5(c). Otro dominio de LRP5
útil es el dominio citoplasmático, los 207 aminoácidos mostrados en
la figura 5(d). Esto puede usarse en la selección como
objetivo de proteínas para moverse a través de la ruta de
endocitosis.
Un polipéptido según la presente invención puede
aislarse y/o purificarse (por ejemplo usando un anticuerpo) por
ejemplo tras la producción mediante expresión a partir del ácido
nucleico codificante (para lo cual, véase a continuación). Por
tanto, puede proporcionarse un polipéptido libre o sustancialmente
libre de contaminantes con los que está asociado de manera natural
(si es un polipéptido que se produce en la naturaleza). Puede
proporcionarse un polipéptido libre o sustancialmente libre de otros
polipéptidos. Los polipéptidos según la presente invención pueden
generarse total o parcialmente mediante síntesis química. El
polipéptido aislado y/o purificado puede usarse en formulación de
una composición, que puede incluir al menos un componente adicional,
por ejemplo, una composición farmacéutica que incluye un excipiente
o vehículo farmacéuticamente aceptable. Una composición que incluye
un polipéptido según la invención puede usarse en el tratamiento
profiláctico y/o terapéutico tal como se trata a continuación.
Un polipéptido, fragmento de péptido, alelo,
mutante, derivado o variante tal como se describe en el presente
documento puede usarse como un inmunógeno o de otra manera para
obtener anticuerpos específicos. Los anticuerpos son útiles en la
purificación y otras manipulaciones de polipéptidos y péptidos,
exploración para diagnóstico y contextos terapéuticos. Esto se
trata adicionalmente a continuación.
Un polipéptido según la presente invención puede
usarse en la exploración para seleccionar moléculas que afectan o
modulan su actividad o función, por ejemplo unión a ligando,
implicación en endocitosis, movimiento desde un compartimento
intracelular hasta la superficie celular, movimiento desde la
superficie celular hasta un compartimento intracelular. Tales
moléculas pueden interaccionar con la parte de unión a ligando de
LRP5, la parte ciotoplasmática de LRP5, o con una o más moléculas
accesorias, por ejemplo implicadas en el movimiento de vesículas
que contienen LRP5 hacia y desde la superficie celular, y pueden ser
útiles en un contexto terapéutico (posiblemente incluyendo el
profiláctico).
Se sabe bien que la investigación farmacéutica
que conduce a la identificación de un nuevo fármaco puede implicar
la exploración de números muy grandes de sustancias candidatas,
tanto antes como incluso después de haber encontrado un compuesto
líder. Éste es un factor que hace que la investigación farmacéutica
sea muy cada y requiera mucho tiempo. Los medios para ayudar en el
procedimiento de selección pueden tener una importancia y utilidad
comercial considerable. Tales medios para la exploración para
seleccionar sustancias potencialmente útiles para tratar o evitar
IDDM u otra enfermedad se proporcionan por polipéptidos según la
presente invención. Las sustancias identificadas como moduladores
del polipéptido representan un avance en la lucha contra IDDM y
otras enfermedades ya que proporcionan la base para el diseño e
investigación de compuestos terapéuticos para su uso in
vivo. Además, pueden ser útiles en cualquiera de varios estados,
incluyendo enfermedades autoinmunitarias, tales como
glomerulonefritis, enfermedades y trastornos que implican la
alteración de la endocitosis y/o presentación de antígenos,
enfermedades y trastornos que implican el aclaramiento de citocinas
y/o inflamación, infección vírica, contaminación por toxinas
bacterianas patogénicas, aumento de ácidos grasos libres o
hipercolesterolemia, diabetes tipo 2, osteoporosis, y enfermedad de
Alzheimer, dadas las indicaciones funcionales para LRP5, tratadas
en otra parte en el presente documento. Tal como se observa en otra
parte, LRP5, fragmentos del mismo, y ácido nucleico según la
invención también pueden ser útiles para combatir cualquiera de
estas enfermedades y trastornos.
Un procedimiento de exploración para seleccionar
una sustancia que modula la actividad de un polipéptido puede
incluir poner en contacto una o más sustancias de prueba con el
polipéptido en un medio de reacción adecuado, someter a prueba la
actividad del polipéptido tratado y comparar la esa actividad con la
actividad del polipéptido en medio de reacción comparable sin
tratar con la sustancia o sustancias de prueba. Una diferencia en la
actividad entre los polipéptidos tratados y sin tratar es
indicativa de un efecto modulador de la sustancia o sustancias de
prueba relevantes.
La tecnología de biblioteca combinatoria
(Schultz, J S (1996) Biotechnol. Prog. 12:729-743)
proporciona una manera eficaz de someter a prueba un número
potencialmente amplio de sustancias diferentes para determinar la
capacidad para modular la actividad de un polipéptido. Antes, o a la
vez, de explorarse para seleccionar la modulación de la actividad,
pueden explorarse las sustancias de prueba para seleccionar la
capacidad para interaccionar con el polipéptido, por ejemplo en un
sistema de dos híbridos de levadura, (que requiere que tanto el
polipéptido como la sustancia de prueba puedan expresarse en
levadura a partir de ácido nucleico codificante). Esto puede usarse
en una exploración tosca antes de someter a prueba una sustancia
para determinar la capacidad real para modular la actividad del
polipéptido.
Tras la identificación de una sustancia que
modula o afecta a la actividad de polipéptido, puede investigarse
adicionalmente la sustancia. Además, puede fabricarse y/o usarse en
la preparación, es decir fabricación o formulación, de una
composición tal como un medicamento, composición farmacéutica o
fármaco. Estos pueden administrarse a individuos.
Por tanto, la presente memoria descriptiva
describe en varios aspectos no sólo una sustancia identificada como
un modulador de la actividad de polipéptido, según lo descrito en el
presente documento, sino también una composición farmacéutica,
medicamento, fármaco u otra composición que comprende una sustancia
de este tipo, un procedimiento que comprende la administración de
una composición de este tipo a un paciente, por ejemplo para el
tratamiento (que puede incluir el tratamiento preventivo) de IDDM u
otra enfermedad, el uso de una sustancia de este tipo en la
fabricación de una composición para la administración, por ejemplo
para el tratamiento de IDDM u otra enfermedad, y un procedimiento
de preparación de una composición farmacéutica que comprende
mezclar una sustancia de este tipo con un excipiente o vehículo
farmacéuticamente aceptable y opcionalmente otros componentes.
Una sustancia identificada usando un modulador
de la función de polipéptido o promotor puede ser de naturaleza
peptídica o no peptídica. Las "moléculas pequeñas" no
peptídicas se prefieren a menudo en muchos usos farmacéuticos in
vivo. En consecuencia, puede diseñarse un componente mimético o
que imita a la sustancia (particularmente si es un péptido) para su
uso farmacéutico. El diseño de componentes miméticos para un
principio farmacéuticamente activo conocido es un enfoque conocido
para el desarrollo de compuestos farmacéuticos basados en un
compuesto "líder". Esto puede ser deseable cuando el principio
activo es difícil o caro de sintetizar o cuando no es adecuado para
un procedimiento de administración particular, por ejemplo los
péptidos no son muy aptos como principios activos para
composiciones orales, ya que tienden a degradarse rápidamente por
las proteasas en el canal alimentario. El diseño, síntesis y
análisis de componentes miméticos puede usarse para evitar explorar
aleatoriamente un gran número de moléculas para seleccionar una
propiedad objetivo.
Hay varias etapas realizadas comúnmente en el
diseño de un componente mimético a partir de un compuesto que tiene
una propiedad objetivo dada. En primer lugar, se determinan las
partes particulares del compuesto que son críticas y/o importantes
para determinar la propiedad objetivo. En el caso de un péptido,
esto puede realizarse haciendo variar sistemáticamente los residuos
de aminoácidos en el péptido, por ejemplo sustituyendo cada residuo
por turnos. Estas partes o residuos que constituyen la región activa
del compuesto se conocen como su "farmacóforo".
Una vez que se ha encontrado el farmacóforo, se
modela su estructura según sus propiedades físicas, por ejemplo,
estereoquímica, enlaces, tamaño y/o carga, usando datos de una gama
de fuentes, por ejemplo, técnicas espectroscópicas, datos de
difracción de rayos X y RMN. Puede utilizarse análisis
computacional, mapeo de similitud (que modeliza la carga y/o
volumen de un farmacóforo, en vez de la unión entre átomos) y otras
técnicas en este procedimiento de modelización.
En una variante de este enfoque, se modelizan la
estructura tridimensional del ligando y su compañero de unión. Esto
puede ser especialmente útil cuando el ligando y/o compañero de
unión cambian la conformación al unirse, permitiendo que el modelo
tenga esto en cuenta en el diseño del componente mimético.
Entonces se selecciona una molécula molde sobre
la cual pueden injertarse grupos químicos que imitan al farmacóforo.
La molécula molde y los grupos químicos injertados sobre la misma
pueden seleccionarse convenientemente de manera que los componentes
miméticos sean fáciles de sintetizar, sea posible que sean
farmacéuticamente aceptables, y no se degraden in vivo,
mientras conservan la actividad biológica del compuesto líder.
Entonces puede(n) explorarse el componente o componentes
mimético(s) encontrado(s) mediante este enfoque para
ver si tienen la propiedad objetivo, o hasta qué grado lo muestran.
Entonces puede llevarse a cabo una optimización o modificación
adicional para llegar a uno o más componentes miméticos finales para
pruebas in vivo o clínicas.
Una manera conveniente para producir un
polipéptido según la presente invención es expresar el ácido
nucleico que lo codifica, usando el ácido nucleico en un sistema de
expresión. En consecuencia, la presente descripción también
describe un procedimiento para preparar un polipéptido (tal como se
describe), incluyendo el procedimiento la expresión a partir de un
ácido nucleico que codifica el polipéptido (generalmente ácido
nucleico según la invención). Esto puede lograrse convenientemente
haciendo crecer una célula huésped en cultivo, que contiene un
vector de este tipo, en condiciones apropiadas que provocan o
permiten la expresión del polipéptido. Los polipéptidos también
pueden expresarse en sistemas in vitro, tales como lisado de
reticulocitos.
Se conocen bien los sistemas para clonar y
expresar un polipéptido en una variedad de células huésped
diferentes. Las células huésped adecuadas incluyen bacterias,
células eucariotas tales como de mamíferos y levaduras, y sistemas
de baculovirus. Las líneas celulares de mamíferos disponibles en la
técnica para la expresión de un polipéptido heterólogo incluyen
células de ovario de hámster chino, células HeLa, células de riñón
de cría de hámster, células COS y muchas otras. Un huésped
bacteriano común y preferido es E. coli. Pueden elegirse o
construirse vectores adecuados, que contienen secuencias reguladoras
apropiadas, incluyendo secuencias promotoras, fragmentos
terminadores, secuencias de poliadenilación, secuencias
potenciadoras, genes marcadores y otras secuencias según sea
apropiado. Los vectores pueden ser plásmidos, virus, por ejemplo
fagos o fagémidos, según sea apropiado. Para más detalles, véase
por ejemplo, Molecular Cloning: a Laboratory Manual: 2ª edición,
Sambrook et al., 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press.
Muchas técnicas conocidas y protocolos para la manipulación de
ácido nucleico, por ejemplo en la preparación de constructos de
ácido nucleico, mutagénesis, secuenciación, introducción de ADN en
células y expresión de genes, y análisis de proteínas, se describen
en detalle en Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel et
al. eds., John Wiley & Sons, 1992.
Por tanto, también se describe una célula
huésped que contiene ácido nucleico tal como se describe en el
presente documento. El ácido nucleico de la invención puede
integrarse en el genoma (por ejemplo cromosoma) de la célula
huésped. La integración puede promoverse mediante la inclusión de
secuencias que promueven la recombinación con el genoma, según
técnicas habituales. El ácido nucleico puede estar en un vector
extra-cromosómico dentro de la célula.
También se describe un procedimiento que incluye
introducir el ácido nucleico en una célula huésped. La introducción,
que puede denominarse generalmente (particularmente para la
introducción in vitro) sin limitación como
"transformación", puede emplear cualquier técnica disponible.
Para células eucariotas, tales técnicas adecuadas pueden incluir
transfección por fosfato de calcio, DEAE-dextrano,
electroporación, transfección mediada por liposomas y transducción
usando retrovirus u otros virus, por ejemplo vaccinia o, para
células de insectos, baculovirus. Para células bacterianas, las
técnicas adecuadas pueden incluir transformación por cloruro de
calcio, electroporación y transfección usando bacteriófagos.
Pueden usarse genes marcadores tales como genes
de sensibilidad o resistencia a antibióticos para identificar
clones que contienen ácido nucleico de interés, tal como se sabe
bien en la técnica.
La introducción puede seguirse provocando o
permitiendo la expresión del ácido nucleico, por ejemplo cultivando
las células huésped (que pueden incluir células realmente
transformadas aunque más posiblemente las células serán
descendientes de las células transformadas) en condiciones para la
expresión del gen, de manera que se produce el polipéptido
codificado. Si el polipéptido se expresa acoplado a un péptido líder
señal apropiado, puede secretarse de la célula en el medio de
cultivo. Tras la producción mediante expresión, puede aislarse y/o
purificarse un polipéptido de la célula huésped y/o medio de
cultivo, según sea el caso, y posteriormente usarse según se desee,
por ejemplo en la formulación de una composición que puede incluir
uno o más componentes adicionales, tales como una composición
farmacéutica que incluye uno o más excipientes o vehículos
farmacéuticamente aceptables (por ejemplo, véase a
continuación).
La introducción de ácido nucleico puede tener
lugar in vivo a modo de terapia génica, tal como se trata a
continuación. Una célula huésped que contiene ácido nucleico según
la presente invención, por ejemplo como resultado de la
introducción del ácido nucleico en la célula o en una célula
progenitora y/o alteración genética de la secuencia endógena de la
célula o progenitora (introducción o alteración que puede tener
lugar in vivo o ex vivo), puede estar comprendida
(por ejemplo en el soma) dentro de un organismo que es un animal,
particularmente un mamífero, que puede ser un ser humano o no
humano, tal como conejo, cobaya, rata, ratón u otro roedor, gato,
perro, cerdo, oveja, cabra, ganado o caballo, o que es un ave, tal
como un pollo. También se proporcionan animales o aves
genéticamente modificados o transgénicos que comprenden una célula
de este tipo como aspectos adicionales de la presente invención.
Por tanto, es posible preparar un animal no
humano con un transgén de LRP5 humano dentro de su genoma.
El transgén puede tener la secuencia de cualquiera de las isoformas
identificadas en el presente documento o un mutante, derivado,
alelo o variante de la misma según se describe. En una realización
preferida, la secuencia de LRP5 humano heteróloga sustituye
a la secuencia animal heteróloga. En otras realizaciones preferidas,
se añaden una o más copias de la secuencia de LRP5 humano al
genoma del animal.
Preferiblemente, el animal es un roedor, y lo
más preferiblemente un ratón o rata.
Esto puede tener un objetivo terapéutico (la
terapia génica se trata a continuación). La presencia de una
secuencia mutante, alelo o variante en las células de un organismo,
particularmente cuando está en lugar de una secuencia endógena
homóloga, puede permitir que se use el organismo como un modelo en
el análisis y/o estudio del papel del gen LRP5 o sustancias
que modulan la actividad del polipéptido y/o promotor codificado
in vitro o están indicadas de otro modo como potencialmente
terapéuticas.
Un modelo animal para la deficiencia en
LRP5 puede construirse usando técnicas habituales para
introducir mutaciones en una línea germinal de animal. En un
ejemplo de este enfoque, usando un ratón, puede transfectarse un
vector que lleva una mutación de inserción dentro del gen
LRP5 en las células madre embrionarias. Un marcador
seleccionable, por ejemplo un gen de resistencia a antibióticos tal
como neoR, puede incluirse para facilitar la selección de
clones en los que el gen mutante ha sustituido al homólogo de tipo
natural endógeno. Tales clones también pueden identificarse o
investigarse adicionalmente mediante hibridación de transferencia
tipo Southern. Entonces pueden expandirse los clones e inyectarse
las células en embriones de ratón en fase de blastocistos. Los
ratones en los que las células inyectadas han contribuido al
desarrollo del ratón pueden identificarse mediante transferencia
tipo Southern. Entonces estos ratones quiméricos pueden
reproducirse para producir ratones que llevan una copia de la
mutación en la línea germinal. Entonces estos animales mutantes
heterocigóticos pueden reproducirse para producir ratones que llevan
mutaciones en el gen de manera homocigótica. Los ratones que tienen
una mutación heterocigótica en el gen LRP5 pueden ser un
modelo adecuado para individuos humanos que tienen una copia del gen
mutado en la línea germinal que tienen riesgo de desarrollar IDDM u
otra enfermedad.
Los modelos de animales también pueden ser
útiles para cualquiera de las diversas enfermedades tratadas en otra
parte en el presente documento.
En lugar, o además, de usarse para la producción
de un polipéptido codificado por un transgén, las células huésped
pueden usarse como fábrica de ácido nucleico para replicar el ácido
nucleico de interés con el fin de generar grandes cantidades del
mismo. Pueden prepararse múltiples copias de ácido nucleico de
interés dentro de una célula cuando se acopla a un gen amplificable
tal como dihidrofolato reductasa (DHFR), tal como se sabe bien.
Pueden cultivarse células huésped transformadas con ácido nucleico
de interés, o que descienden de células huésped en las que se
introdujo ácido nucleico, en condiciones adecuadas, por ejemplo, en
un fermentador, tomarse del cultivo y someterse a tratamiento para
purificar el ácido nucleico. Tras la purificación, el ácido
nucleico o uno o más fragmentos del mismo pueden usarse, según se
desea, por ejemplo en un ensayo de diagnóstico o prognosis tal como
se trata en otra parte en el presente documento.
La provisión de las isoformas y mutantes,
alelos, variantes y derivados de polipéptido LRP-5
novedosos permite por primera vez la producción de anticuerpos que
pueden unirse específicamente a esas moléculas.
\newpage
\global\parskip0.900000\baselineskip
En consecuencia, un aspecto adicional de la
presente invención proporciona un anticuerpo que puede unirse
específicamente al polipéptido cuya secuencia se facilita en una
figura en el presente documento. Un anticuerpo de este tipo puede
ser específico en el sentido de que puede distinguir entre el
polipéptido al que puede unirse y otros polipéptidos humanos para
los que no tiene ninguna, o sustancialmente ninguna, afinidad de
unión (por ejemplo una afinidad de unión de aproximadamente 1000x
menos). Los anticuerpos específicos se unen a un epítopo sobre la
molécula que no está presente o bien no está accesible sobre otras
moléculas. Los anticuerpos según la presente invención pueden ser
específicos para el polipéptido de tipo natural. Los anticuerpos
también son útiles para purificar el polipéptido o polipéptidos a
los que se unen, por ejemplo tras la producción mediante expresión
recombinante a partir de ácido nucleico codificante.
Los anticuerpos preferidos según la invención
están aislados, en el sentido de que están libres de contaminantes
tales como anticuerpos que pueden unirse a otros polipéptidos y/o
libres de componentes séricos. Se prefieren anticuerpos
monoclonales para algunos fines, aunque los anticuerpos policlonales
están dentro del alcance de la presente invención.
Pueden obtenerse anticuerpos usando técnicas que
son habituales en la técnica. Los procedimientos para producir
anticuerpos incluyen inmunizar un mamífero (por ejemplo ratón, rata,
conejo, caballo, cabra, oveja o mono) con la proteína o un
fragmento de la misma. Pueden obtenerse anticuerpos a partir de
animales inmunizados usando cualquiera de una variedad de técnicas
conocidas en la técnica, y seleccionarse, preferiblemente usando la
unión del anticuerpo al antígeno de interés. Por ejemplo, pueden
usarse inmunoprecipitación o técnicas de inmunotransferencia tipo
Western (Armitage et al., 1992, Nature 357:
80-82). El aislamiento de anticuerpos y/o células
productoras de anticuerpos a partir de un animal puede acompañarse
por una etapa de sacrificio del animal.
Como alternativa o complemento a inmunizar un
mamífero con un péptido, puede obtenerse un anticuerpo específico
para una proteína a partir de una biblioteca producida de manera
recombinante de dominios variables de inmunoglobulina expresados,
por ejemplo usando el bacteriófago lambda o bacteriófagos
filamentosos que presentan dominios de unión a inmunoglobulina
funcionales sobre sus superficies; véase, por ejemplo, el documento
WO92/01047. La biblioteca puede ser virgen, es decir, construida a
partir de secuencias obtenidas de un organismo que no se ha
inmunizado con ninguna de las proteínas (o fragmentos), o puede ser
una construida usando secuencias obtenidas de un organismo que se
ha expuesto al antígeno de interés.
Péptidos adecuados para su uso para inmunizar un
animal y/o aislar anticuerpo anti-LRP5 incluyen
cualquiera de las siguientes secuencias de aminoácidos:
SYFHLFPPPPSPCTDSS
VDGRQNIKRAKDDGT
EVLFTTGLIRPVALVVDN
IQGHLDFVMDILVFHS.
Los anticuerpos según se describen en el
presente documento pueden modificarse de varias maneras. De hecho,
el término "anticuerpo" debe interpretarse como que cubre
cualquier sustancia de unión que tiene un dominio de unión con la
especificidad requerida. Por tanto, este término cubre fragmentos de
anticuerpo, derivados, equivalentes funcionales y homólogos de
anticuerpos, incluyendo moléculas sintéticas cuya forma imita la de
un anticuerpo permitiéndolas unirse a un antígeno o epítopo.
Ejemplos de fragmentos de anticuerpos, que
pueden unirse a un antígeno u otro compañero de unión, son el
fragmento Fab constituido por los dominios VL, VH, Cl y CH1; el
fragmento Fd constituido por los dominios VH y CH1; el fragmento Fv
constituido por los dominios VL y VH de un único brazo de un
anticuerpo; el fragmento dAb constituido por un dominio VH;
regiones de CDR aisladas y fragmentos F(ab')_{2}, un
fragmento bivalente que incluye dos fragmentos Fab unidos por un
puente disulfuro en la región de bisagra. También se incluyen
fragmentos Fv de cadena sencilla.
Un hibridoma que produce un anticuerpo
monoclonal según la presente invención puede someterse a mutación
genética u otros cambios. Se entenderá adicionalmente por los
expertos en la técnica que un anticuerpo monoclonal puede someterse
a las técnicas de tecnología de ADN recombinante para producir otros
anticuerpos o moléculas quiméricas que conservan la especificidad
del anticuerpo original. Tales técnicas pueden implicar introducir
ADN que codifica para la región variable de inmunoglobulina, o las
regiones determinantes de la complementariedad (CDR), de un
anticuerpo en las regiones constantes, o regiones constantes más
regiones de entramado, de una inmunoglobulina diferente. Véanse,
por ejemplo, los documentos EP184187A, GB 2188638A o
EP-A-0239400. La clonación y
expresión de anticuerpos quiméricos se describe en los documentos
EP-A-0120694 y
EP-A-0125023.
Los hibridomas que pueden producir anticuerpos
con características de unión deseadas están dentro del alcance de
la presente invención, tales como células huésped, eucariotas y
procariotas, que contienen ácido nucleico que codifica anticuerpos
(incluyendo fragmentos de anticuerpos) y que pueden realizar su
expresión. La invención también proporciona procedimientos de
producción de los anticuerpos incluyendo hacer crecer una célula que
puede producir el anticuerpo en condiciones en las que se produce
el anticuerpo, y preferiblemente se secreta.
\global\parskip1.000000\baselineskip
Las reactividades de los anticuerpos de una
muestra pueden determinarse mediante cualquier medio apropiado. El
marcaje con moléculas indicadoras individuales es una posibilidad.
Las moléculas indicadoras pueden generar directa o indirectamente
señales detectables, y preferiblemente medibles. La unión de
moléculas indicadoras puede ser directa o indirecta, covalente, por
ejemplo mediante un enlace peptídico, o no covalente. La unión
mediante un enlace peptídico puede ser como resultado de la
expresión recombinante de una fusión de genes que codifican un
anticuerpo y una molécula indicadora.
Un modo favorecido es mediante unión covalente
de cada anticuerpo con un colorante láser, fósforo o fluorocromo
individual con características de absorción o emisión espectralmente
aisladas. Los fluorocromos adecuados incluyen fluoresceína,
rodamina, ficoeritrina y Texas Red. Los colorantes cromogénicos
adecuados incluyen diaminobencidina.
Otros indicadores incluyen partículas coloidales
macromoleculares o material particulado tal como perlas de látex
que están coloreadas, son magnéticas o paramagnéticas, y principios
biológica o químicamente activos que pueden provocar directa o
indirectamente señales que se observan visualmente, se detectan
electrónicamente o se registran de otro modo. Estas moléculas
pueden ser enzimas que catalizan reacciones que desarrollan o
cambian colores o provocan cambios en las propiedades eléctricas,
por ejemplo. Pueden poder excitarse molecularmente, de manera que
las transiciones electrónicas entre estados de energía dan como
resultado emisiones o absorciones espectrales características.
Pueden incluir entidades químicas usadas junto con biosensores.
Pueden emplearse sistemas de detección de biotina/avidina o
biotina/estreptavidina y fosfatasa alcalina.
El modo de determinación de la unión no es una
característica de la presente invención y los expertos en la
técnica pueden elegir un modo adecuado según su preferencia y
conocimiento general. Realizaciones particulares de anticuerpos
según la presente invención incluyen anticuerpos que pueden unirse
y/o que pueden unirse específicamente, por ejemplo con una afinidad
de al menos 10^{-7} M, a uno de los siguientes péptidos:
SYFHLFPPPPSPCTDSS
VDGRQNIKRAKDDGT
EVLFTTGLIRPVALVVDN
IQGHLDFVMDILVFHS.
Los anticuerpos según la presente invención
pueden usarse en la exploración para detectar la presencia de un
polipéptido, por ejemplo en una muestra de prueba que contiene
células o lisado de células tal como se trata, y pueden usarse para
purificar y/o aislar un polipéptido según la presente invención, por
ejemplo tras la producción del polipéptido mediante expresión de
ácido nucleico codificante para el mismo. Los anticuerpos pueden
modular la actividad del polipéptido al que se unen y eso, si ese
polipéptido tiene un efecto perjudicial en un individuo, puede ser
útil en un contexto terapéutico (lo que puede incluir la
profilaxis).
Puede proporcionarse un anticuerpo en un kit,
que puede incluir instrucciones para el uso del anticuerpo, por
ejemplo para determinar la presencia de una sustancia particular en
una muestra de prueba. Pueden incluirse uno o más de otros
reactivos, tales como moléculas de marcaje, disoluciones tampón,
eluyentes y similares. Pueden proporcionarse reactivos dentro de
recipientes que los protegen del entorno externo, tales como un vial
sellado.
La identificación del gen LRP5 e
indicaciones de su asociación con IDDM y otras enfermedades prepara
el camino para aspectos de la presente invención para proporcionar
el uso de materiales y procedimientos, tal como se describieron y
trataron anteriormente, para establecer la presencia o ausencia en
una muestra de prueba de una forma variante del gen, en particular
un alelo o variante específicamente asociado con IDDM u otra
enfermedad. Esto puede ser para diagnosticar una predisposición de
un individuo frente a IDDM u otra enfermedad. Puede ser para
diagnosticar que IDDM en un paciente con la enfermedad está asociada
con el gen IDDM4.
Esto permite planificar el tratamiento
terapéutico y/o profiláctico apropiado, permitiendo hacer más eficaz
el tratamiento seleccionando como objetivo los que tienen más
posibilidades de ser beneficiosos.
Una forma variante del gen puede contener una o
más inserciones, deleciones, sustituciones y/o adiciones de uno o
más nucleótidos comparados con la secuencia de tipo natural (tal
como se muestra en la tabla 5 o la tabla 6) que puede o no alterar
la función del gen. Las diferencias a nivel del ácido nucleico no se
reflejan necesariamente por una diferencia en la secuencia de
aminoácidos del polipéptido codificado. Sin embargo, una mutación u
otra diferencia en un gen puede dar como resultado un desplazamiento
de marco o codón de detención, que podría afectar gravemente la
naturaleza del polipéptido producido (si lo hay), o una mutación
puntual o cambio mutacional grande del polipéptido codificado,
incluyendo inserción, deleción, sustitución y/o adición de uno o
más aminoácidos o regiones en el polipéptido. Una mutación en una
secuencia promotora u otra región reguladora puede evitar o reducir
la expresión del gen o afectar al tratamiento o estabilidad del
transcrito de ARNm. Por ejemplo, una alteración de secuencia puede
afectar al corte y empalme alternativo del ARNm. Tal como se trata,
se proporcionan diversas isoformas de LRP5 resultantes de
cortes y empalmes alternativos por la presente invención.
\newpage
Hay diversos procedimientos para determinar la
presencia o ausencia en una muestra de prueba de una secuencia de
ácido nucleico particular, tal como la secuencia mostrada en
cualquier figura en el presente documento, o un mutante, variante o
alelo de la misma, por ejemplo que incluye una alteración mostrada
en la tabla 5 o la tabla 6.
Pueden llevarse a cabo pruebas sobre las
preparaciones que contienen ADN genómico, ADNc y/o ARNm. Las pruebas
de ADNc o ARNm tienen la ventaja de que la complejidad del ácido
nucleico se reduce por la ausencia de secuencias intrónicas, pero
la posible desventaja del tiempo suplementario y el esfuerzo
requeridos para preparar las preparaciones. El ARN es más difícil
de manipular que el ADN debido a la aparición muy extendida de
ARNasas. El ácido nucleico en una muestra de prueba puede
secuenciarse y compararse la secuencia con la secuencia mostrada en
cualquiera de las figuras en el presente documento, para determinar
si hay una diferencia presente o no. Si la hay, puede compararse la
diferencia con alelos de susceptibilidad conocidos (por ejemplo tal
como se muestra en la tabla 5 o la tabla 6) para determinar si el
ácido nucleico de prueba contiene una o más de las variaciones
indicadas, o puede investigarse la diferencia para determinar su
asociación con IDDM u otra enfermedad.
Ya que generalmente no será rentable en cuanto
al tiempo y al esfuerzo secuenciar todo el ácido nucleico en una
muestra de prueba o incluso todo el gen LRP5, puede emplearse
una reacción de amplificación específica tal como PCR usando uno o
más pares de cebadores para amplificar la región de interés en el
ácido nucleico, por ejemplo, el gen LRP5 o una región
particular en la que se producen polimorfismos asociados con la
susceptibilidad frente a IDDM u otra enfermedad. Entonces puede
secuenciarse el ácido nucleico amplificado tal como anteriormente,
y/o someterse a prueba de cualquier otra manera para determinar la
presencia o ausencia de una característica particular. El ácido
nucleico para las pruebas puede prepararse a partir de ácido
nucleico extraído de células o en una biblioteca usando una
variedad de otras técnicas tales como digestión con enzimas de
restricción y electroforesis.
El ácido nucleico puede explorarse usando una
sonda específica de variante o alelo. Una sonda de este tipo
corresponde en secuencia a una región del gen LRP5, o su
complemento, que contiene una alteración de secuencia que se sabe
que está asociada susceptibilidad frente a con IDDM u otra
enfermedad. En condiciones rigurosas adecuadas, la hibridación
específica de una sonda de este tipo con un ácido nucleico de prueba
es indicativa de la presencia de la alteración de secuencia en el
ácido nucleico de prueba. Para fines de exploración eficaz, puede
usarse más de una sonda sobre la misma muestra de prueba.
De manera similar pueden usarse oligonucleótidos
específicos de alelo o variante en PCR para amplificar
específicamente secuencias particulares si están presentes en una
muestra de prueba. La evaluación de si una banda de PCR contiene
una variante de gen puede llevarse a cabo de varias maneras
familiares para los expertos en la técnica. Por ejemplo, el
producto de PCR puede tratarse de una manera que permite presentar
el polimorfismo sobre un gel de secuenciación de ADN de
poliacrilamida, con bandas específicas que están unidas a variantes
de genes que están seleccionándose.
Puede usarse el análisis de heterodúplex SSCP
para explorar fragmentos de ADN para seleccionar
variantes/muta-
ciones de secuencia. Generalmente implica amplificar fragmentos del gen de 100-300 pb radiomarcados, diluyendo estos productos y desnaturalizando a 95ºC. Los fragmentos se enfrían rápido sobre hielo de manera que el ADN permanece en forma de cadena sencilla. Se hacen pasar estos fragmentos de cadena sencilla a través de geles basados en acrilamida. Las diferencias en la composición de la secuencia harán que las moléculas de cadena sencilla adopten conformaciones diferentes en esta matriz de gel, haciendo su movilidad diferente de la de fragmentos de tipo natural, permitiendo así detectar mutaciones en los fragmentos que están analizándose con respecto a un fragmento control al exponer el gel a película de rayos X. Los fragmentos con movilidad/conformaciones alteradas pueden escindirse directamente del gel y secuenciarse directamente para determinar la mutación.
ciones de secuencia. Generalmente implica amplificar fragmentos del gen de 100-300 pb radiomarcados, diluyendo estos productos y desnaturalizando a 95ºC. Los fragmentos se enfrían rápido sobre hielo de manera que el ADN permanece en forma de cadena sencilla. Se hacen pasar estos fragmentos de cadena sencilla a través de geles basados en acrilamida. Las diferencias en la composición de la secuencia harán que las moléculas de cadena sencilla adopten conformaciones diferentes en esta matriz de gel, haciendo su movilidad diferente de la de fragmentos de tipo natural, permitiendo así detectar mutaciones en los fragmentos que están analizándose con respecto a un fragmento control al exponer el gel a película de rayos X. Los fragmentos con movilidad/conformaciones alteradas pueden escindirse directamente del gel y secuenciarse directamente para determinar la mutación.
La secuenciación de un producto de PCR puede
implicar la precipitación con isopropanol, resuspensión y
secuenciación usando un kit de secuenciación TaqFS+ Dye terminator.
Los productos de extensión pueden someterse a electroforesis en un
secuenciador de ADN ABI 377 y analizarse los datos usando el
software Sequence Navigator.
Otro posible enfoque de selección emplea un
ensayo de PTT en el que se amplifican los fragmentos con cebadores
que contienen secuencias de iniciación de Kozak consenso y un
promotor de ARN polimerasa de T7. Estas secuencias suplementarias
se incorporan en el cebador en 5' de tal manera que están en marco
con la secuencia codificante nativa del fragmento que está
analizándose. Estos productos de PCR se introducen en un sistema de
transcripción/traducción acoplado. Esta reacción permite la
producción de ARN a partir del fragmento y la traducción de este ARN
en un fragmento de proteína. Los productos de PCR de los controles
proporcionan un producto de proteína de un tamaño de tipo natural
con respecto al tamaño del fragmento que está analizándose. Si el
producto de PCR analizado tiene una mutación de desplazamiento de
marco o sin sentido, el ensayo proporcionará un producto de proteína
truncado con respecto a los controles. El tamaño del producto
truncado está relacionado con la posición de la mutación, y la
región relativa del gen de este paciente puede secuenciarse para
identificar la mutación de truncamiento.
Una alternativa o complemento para buscar la
presencia de secuencias variantes en una muestra de prueba es
buscar la presencia de la secuencia normal, por ejemplo, usando una
sonda o cebador de oligonucleótido especifico adecuado. El uso de
sondas y cebadores de oligonucleótidos se trató en más detalle
anteriormente.
Pueden seleccionarse sondas o cebadores de
oligonucleótidos específicos de alelos o variantes según
realizaciones de la presente invención a partir de las mostradas en
la tabla 4, la tabla 7 o la tabla 8.
Pueden emplearse enfoques que se basan en la
hibridación entre una sonda y un ácido nucleico de prueba y la
posterior detección de un apareamiento erróneo. En condiciones
apropiadas (temperatura, pH etc.), una sonda de oligonucleótido
hibridará con una secuencia que no es totalmente complementaria. El
grado de apareamiento de bases entre las dos moléculas será
suficiente para que se reasocien a pesar de un apareamiento erróneo.
En la técnica se conocen bien diversos enfoques para detectar la
presencia de un apareamiento erróneo entre dos moléculas de ácido
nucleico que se reasocian.
Por ejemplo, la ARNasa A rompe en el sitio de un
apareamiento erróneo. La rotura puede detectarse mediante
electroforesis del ácido nucleico de prueba para el que se ha
reasociado la sonda o sonda relevante y búsqueda de moléculas más
pequeñas (es decir moléculas con una movilidad electroforética
superior) que la sonda/híbrido de prueba de longitud completa.
Por tanto, una sonda de oligonucleótido que
tiene la secuencia de una región del gen LRP5 normal (cadena
sentido o bien antisentido) en la que se sabe que se producen
mutaciones asociadas con susceptibilidad frente a IDDM u otra
enfermedad (por ejemplo, véase la tabla 5 y la tabla 6) puede
reasociarse con ácido nucleico de prueba y determinarse la
presencia o ausencia de un apareamiento erróneo. La detección de la
presencia de un apareamiento erróneo puede indicar la presencia en
el ácido nucleico de prueba de una mutación asociada con
susceptibilidad frente a IDDM u otra enfermedad. Por otra parte, una
sonda de oligonucleótido que tiene la secuencia de una región del
gen que incluye una mutación asociada con susceptibilidad frente a
IDDM u otra enfermedad puede reasociarse con un ácido nucleico de
prueba y determinarse la presencia o ausencia de un apareamiento
erróneo. La presencia de un apareamiento erróneo puede indicar que
el ácido nucleico en la muestra de prueba tiene la secuencia normal
(indicando la ausencia de un apareamiento erróneo que el ácido
nucleico de prueba tiene la mutación). En cualquier caso, puede
emplearse una batería de sondas frente a diferentes regiones del
gen.
La presencia de diferencias en la secuencia de
moléculas de ácido nucleico puede detectarse por medio de digestión
con enzimas de restricción, tal como en un procedimiento de huellas
de ADN en el que el patrón de restricción producido cuando se usan
una o más enzimas de restricción para cortar una muestra de ácido
nucleico se compara con el patrón obtenido cuando se digiere con la
misma enzima o enzimas una muestra que contiene el gen normal
mostrado en una figura en el presente documento o una variante o
alelo, por ejemplo que contiene una alteración mostrada en la tabla
5 o la tabla 6.
La presencia o ausencia de una lesión en un
promotor u otra secuencia reguladora también puede evaluarse
determinando el nivel de producción de ARNm mediante transcripción
o el nivel de producción de polipéptido mediante traducción a
partir del ARNm. La determinación de la actividad promotora se trató
anteriormente.
Una muestra de prueba de ácido nucleico puede
proporcionarse, por ejemplo, extrayendo un ácido nucleico de
células o tejidos o líquidos biológicos, orina, saliva, heces, un
hisopo bucal, biopsia o preferiblemente sangre, o para pruebas
prenatales del amnios, placenta o del propio feto.
Hay diversos procedimientos para determinar la
presencia o ausencia en una muestra de prueba de un polipéptido
particular, tal como el polipéptido con la secuencia de aminoácidos
mostrada en cualquier figura en el presente documento o una
secuencia de aminoácidos mutante, variante o alelo de la misma.
Puede someterse a prueba una muestra para
determinar la presencia de un compañero de unión para un elemento
de unión específica tal como un anticuerpo (o mezcla de
anticuerpos), específico para una o más variantes particulares del
polipéptido mostrado en una figura en el presente documento. Puede
someterse a prueba una muestra para determinar la presencia de un
compañero de unión para un elemento de unión específica tal como un
anticuerpo (o mezcla de anticuerpos), específico para el polipéptido
mostrado en una figura en el presente documento. En tales casos,
puede someterse a prueba la muestra poniéndola en contacto con un
elemento de unión específica tal como un anticuerpo en condiciones
apropiadas para la unión específica, antes de determinar la unión,
por ejemplo, usando un sistema indicador tal como se trató. Cuando
se usa un panel de anticuerpos, pueden emplearse diferentes
marcadores indicadores para cada anticuerpo de manera que puede
determinarse la unión de cada uno.
Un elemento de unión específica tal como un
anticuerpo puede usarse para aislar y/o purificar su polipéptido
compañero de unión a partir de una muestra de prueba, para permitir
el análisis de secuencia y/o bioquímico del polipéptido para
determinar si tiene la secuencia y/o propiedades del polipéptido
cuya secuencia se describe en el presente documento, o si es una
forma mutante o variante. La secuencia de aminoácidos es de rutina
en la técnica usando máquinas de secuenciación automatizadas.
Una muestra de prueba que contiene uno o más
polipéptidos puede proporcionarse por ejemplo como una preparación
de células o lisado de células en bruto o parcialmente purificada,
por ejemplo usando tejidos o células, tal como de saliva, heces, o
preferiblemente sangre, o para pruebas prenatales del amnios,
placenta o del propio feto.
Ya sea un polipéptido, anticuerpo, péptido,
molécula de ácido nucleico, molécula pequeña u otro compuesto
farmacéuticamente útil según la presente invención el que debe
administrarse a un individuo, la administración es preferiblemente
en una "cantidad profilácticamente eficaz" o una "cantidad
terapéuticamente eficaz" (según sea el caso, aunque la
profilaxis puede considerarse tratamiento), siendo esto suficiente
para mostrar beneficio para el individuo. La cantidad real
administrada, y la tasa y transcurso del tiempo de la
administración, dependerán de la naturaleza y gravedad de lo que
esté tratándose. La recomendación del tratamiento, por ejemplo,
decisiones sobre la dosificación, etc., está dentro de la
responsabilidad de médicos de cabecera y otros médicos.
Una composición puede administrarse sola o en
combinación con otros tratamientos, simultánea o bien
secuencialmente dependiendo del estado que esté tratándose.
Las composiciones farmacéuticas según la
presente invención, y para su uso según la presente invención,
pueden incluir, además del principio activo, un excipiente,
vehículo, tampón, estabilizante u otros materiales farmacéuticamente
aceptables conocidos por los expertos en la técnica. Tales
materiales deben ser no tóxicos y no deben interferir con la
eficacia del principio activo. La naturaleza precisa del vehículo u
otro material dependerá de la vía de administración, que puede ser
oral, o mediante inyección, por ejemplo cutánea, subcutánea o
intravenosa.
Las composiciones farmacéuticas para la
administración oral pueden estar en forma de comprimido, cápsula,
polvo o líquido. Un comprimido puede incluir un vehículo sólido tal
como gelatina o un adyuvante. Las composiciones farmacéuticas
líquidas incluyen generalmente un vehículo líquido tal como agua,
vaselina, aceites animales o vegetales, aceite mineral o aceite
sintético. También pueden incluirse solución salina fisiológica,
dextrosa u otra disolución de sacáridos o glicoles tales como
etilenglicol, propilenglicol o polietilenglicol.
Para la inyección intravenosa, cutánea o
subcutánea, o inyección en el sitio de la aflicción, el principio
activo estará en forma de una disolución acuosa parenteralmente
aceptable que está libre de pirógenos y tiene un pH, isotonicidad y
estabilidad adecuados. Los expertos en la técnica son bien capaces
de preparar disoluciones adecuadas usando, por ejemplo, vehículos
isotónicos tales como inyección de cloruro de sodio, inyección de
Ringer, o inyección de Ringer lactato. Pueden incluirse
conservantes, estabilizantes, tampones, antioxidantes y/u otros
aditivos según se requiera.
Pueden usarse terapias dirigidas para
administrar el principio activo más específicamente a ciertos tipos
de células, mediante el uso de sistemas de dirección tales como
ligandos específicos de células o anticuerpos. El direccionamiento
puede ser deseable por una variedad de motivos; por ejemplo, si el
agente es inaceptablemente tóxico, o si requeriría de otro modo una
dosificación demasiado elevada, o si no podría de otro modo entrar
en las células objetivo.
En vez de administrar un agente directamente,
puede producirse en células objetivo mediante expresión de un gen
codificante introducido en las células, por ejemplo en un vector
viral (véase a continuación). El vector puede dirigirse a las
células específicas que deben tratarse, o puede contener elementos
reguladores que se activan de manera más o menos selectiva por las
células objetivo. Los vectores virales pueden dirigirse usando
moléculas de unión específica, tales como azúcar, glucolípidos o
proteínas tales como un anticuerpo o fragmento de unión del mismo.
El ácido nucleico puede dirigirse por medio de la unión a un ligando
de proteína (tal como un anticuerpo o fragmento de unión del mismo)
mediante polilisina, siendo el ligando específico para un receptor
presente sobre la superficie de las células objetivo.
Un agente puede administrarse en forma de un
precursor, para su conversión en una forma activa mediante un
agente activador producido en, o dirigido a, las células que deben
tratarse. Este tipo de enfoque se conoce a veces como ADEPT o
VDEPT; implicando el primero la dirección del agente activador a las
células mediante conjugación a un anticuerpo específico de células,
mientras que el último implica producir el agente activador, por
ejemplo una enzima, en un vector mediante expresión a partir de ADN
codificante en un vector viral (véanse por ejemplo, los documentos
EP-A-415731 y WO 90/07936).
El ácido nucleico según la presente invención,
por ejemplo que codifica el polipéptido LRP-5
biológicamente activo auténtico o un fragmento funcional del mismo,
puede usarse en un procedimiento de terapia génica, para tratar un
paciente que no puede sintetizar el polipéptido activo o que no
puede sintetizarlo en un nivel normal, proporcionando así el efecto
proporcionado por el tipo natural con el objetivo de tratar y/o
prevenir uno o más síntomas de IDDM y/o una o más de otras
enfermedades.
Se han usado vectores tales como vectores
virales para introducir genes en una amplia variedad de células
objetivo diferentes. Normalmente, se exponen los vectores a las
células objetivo de manera que puede tener lugar la transfección en
una proporción suficiente de las células para proporcionar un efecto
terapéutico o profiláctico útil a partir de la expresión del
polipéptido deseado. El ácido nucleico transfectado puede
incorporarse permanentemente en el genoma de cada una de las células
objetivo, proporcionando un efecto de larga duración, o como
alternativa el tratamiento puede tener que repetirse
periódicamente.
En la técnica se conoce una variedad de
vectores, tanto vectores virales como vectores de plásmidos, véase
por ejemplo la patente estadounidense número 5.252.479 y el
documento WO 93/07282. En particular, se han usado varios virus
como vectores de transferencia de genes, incluyendo adenovirus,
papovavirus, tales como SV40, virus vaccinia, virus del herpes,
incluyendo VHS y VEB, y retrovirus, incluyendo virus de la leucemia
del gibón, virus del sarcoma de Rous, virus de la encefalitis
equina venezolana, virus de la leucemia murina de Moloney y virus
del tumor de mama murino. Muchos protocolos de terapia génica en la
técnica anterior han usado retrovirus murinos inactivados.
Se producen vectores de virus inactivados en
líneas de células cooperadoras en las que se expresan genes
requeridos para la producción de partículas víricas infecciosas.
Las líneas de células cooperadoras carecen generalmente de una
secuencia que se reconoce por el mecanismo que empaqueta el genoma
vírico y produce viriones que no contienen ácido nucleico. Un
vector viral que contiene una señal de empaquetamiento intacta junto
con el gen u otra secuencia que debe administrarse (por ejemplo,
que codifica el polipéptido LRP5 o un fragmento del mismo) se
empaqueta en las células cooperadoras dentro de partículas de
viriones infecciosos, que entonces pueden usarse para la
administración de genes. Otros procedimientos conocidos de
introducción de ácido nucleico en células incluyen la
electroporación, coprecipitación con fosfato de calcio, técnicas
mecánicas tales como microinyección, transferencia mediada por
liposomas y captación de ADN directa y transferencia de ADN mediada
por receptor. Los liposomas pueden encapsular ARN, ADN y viriones
para su administración a células. Dependiendo de factores tales
como pH, la fuerza iónica y la los cationes divalentes que están
presentes, puede diseñarse la composición de liposomas para
dirigirse a células o tejidos particulares. Los liposomas incluyen
fosfolípidos y pueden incluir lípidos y esteroides y puede
alterarse la composición de cada uno de tales componentes. El
direccionamiento de liposomas también puede lograrse usando un
elemento de par de unión específica tal como un anticuerpo o
fragmento de unión del mismo, un azúcar o un glucolípido.
El objetivo de la terapia génica usando un ácido
nucleico que codifica el polipéptido, o una parte activa del mismo,
es aumentar la cantidad del producto de expresión del ácido nucleico
en células en las que el nivel del polipéptido de tipo natural está
ausente o presente sólo a niveles reducidos. Tal tratamiento puede
ser terapéutico o profiláctico, particularmente en el tratamiento
de individuos que se sabe, mediante exploración o pruebas, que
tienen un alelo de susceptibilidad IDDM_{4} y por tanto una
predisposición a la enfermedad.
Pueden usarse técnicas similares para la
regulación antisentido de la expresión de genes, por ejemplo
dirigiendo una molécula de ácido nucleico antisentido a las células
en las que se expresa una forma mutante del gen, siendo el objetivo
reducir la producción del producto génico mutante. Otros enfoques
para la regulación por disminución específica de genes se conocen
bien, incluyendo el uso de ribozimas diseñadas para romper
secuencias específicas de ácido nucleico. Las ribozimas son
moléculas de ácido nucleico, en realidad ARN, que rompe
específicamente ARN de cadena sencilla, tal como ARNm, en
secuencias definidas, y puede diseñarse mediante ingeniería su
especificidad. Pueden preferirse ribozimas de cabeza de martillo
dado que reconocen secuencias de bases de aproximadamente
11-18 bases de longitud, y por tanto tienen una
especificidad superior que las ribozimas del tipo Tetrahymena
que reconocen secuencias de aproximadamente 4 bases de longitud,
aunque el último tipo de ribozimas son útiles en ciertas
circunstancias. La bibliografía sobre el uso de ribozimas incluyen
Marschall, et al. Cellular and Molecular Neurobiology, 1994.
14(5): 523; Hasselhoff, Nature 334: 585 (1988) y Cech, J.
Amer. Med. Assn., 260: 3030 (1988).
Ahora se ilustrarán aspectos de la presente
invención con referencia a las figuras adjuntas ya descritas
anteriormente y ejemplos experimentales, a modo de ejemplo y no de
limitación. Otros aspectos y realizaciones resultarán evidentes al
experto en la técnica.
Tal como se observó anteriormente, se logró la
confirmación de la unión a dos de los 18 locus potenciales para la
predisposición a IDDM mediante análisis de dos conjuntos de familias
(102 familias del RU y 84 familias de los EE.UU.), IDDM4 en
el cromosoma 11q13 (MLS 1,3, P = 0,01 en FGF3) e IDDM5
en el cromosoma 6q (MLS 1,8, P = 0,003 en ESR). En el
IDDM4 la unión más significativa se obtuvo en el subconjunto
de familias que compartían 1 ó 0 alelos IBD en HLA (MLS = 2,8; P =
0,0002; ls = 1,2) (Davies et al, 1994). Esta unión también
se observó por Hashimoto et al (1994) usando 251 pares de
hermanos afectados, obteniendo P = 0,0008 en todos los pares de
hermanos. Combinando estos resultados, con 596 familias, se
proporciona un apoyo sustancial para IDDM4 (P = 1,5 X
10^{-6}) (Todd y Farrall, 1996; Luo et al, 1996).
El análisis de múltiples puntos con otros
marcadores en la región de FGF3 produjo un MLS de 2,3 en
FGF3 y D11S1883 (ls= 1,19), y se delineó el intervalo
hasta una región de 27 cM, flanqueada por los marcadores
D11S903 y D11S527 (figura 1).
El análisis de unión de múltiples puntos no
puede localizar el gen en una región pequeña a menos que estén
disponibles varios miles de familias con múltiplex. En su lugar, el
mapeo por asociación se ha usado para enfermedades raras de un
único gen lo que puede estrechar el intervalo que contiene el gen de
la enfermedad hasta menos de 2 cM o 2 M bases. No obstante, este
procedimiento es sumamente impredecible y no se ha usado
previamente para localizar un poligén para una enfermedad común. El
mapeo por asociación se ha usado para localizar el poligén
IDDM2/INS pero esto se basa en la selección de un
polimorfismo/gen candidato funcional y se restringió a una región
muy pequeña (<30 kb). Se llevaron a cabo estudios de asociación
o desequilibrio de unión (LD) con el fin de delinear la región de
IDDM4 hasta menos de 2 cM. En teoría, la asociación de un
alelo particular muy próximo a la mutación fundadora se detectará en
poblaciones descendientes de ese fundador. La prueba de
desequilibrio de transmisión (TDT, Spielman et al, 1993) mide
la asociación evaluando la desviación a partir del 50% de la
transmisión de alelos desde un locus marcador de padres a hijos
afectados. La detección de la asociación depende de que la
ascendencia de cada población estudiada sea lo más homogénea
posible, con el fin de reducir la posibilidad de la presencia de
varios cromosomas fundadores, disminuyendo la potencia para
detectar la asociación. Estos parámetros son sumamente
impredecibles.
El análisis de marcadores que extienden el
intervalo de unión de IDDM4, se detectó LD en D11S1917
(UT5620) en 554 familias, P=0,01. Se logró un mapa físico de
esta región, que comprende aproximadamente 500 kb, construyendo un
cóntigo de pac, bac y cósmido (figura 2). Se mapeó físicamente la
región mediante hibridación de marcadores sobre clones digeridos
por enzimas de restricción resueltos a través de agarosa, y
sometidos a transferencia tipo Southern.
Se analizaron otros microsatélites (tanto
publicados, como los aislados a partir de clones mediante rescate
de microsatélites) en 1289 familias, a partir de cuatro poblaciones
distintas (RU, EE.UU., Cerdeña y Noruega). Se construyó una gráfica
de LD, con un pico en H0570POLYA, P = 0,001, flanqueado por
los marcadores D11S987 y 18018AC (figura 3). El LD
detectado en un marcador polimórfico se ve influenciado por la
frecuencia de alelos, y si la mutación que provoca la
susceptibilidad frente a diabetes tipo 1 surgió en un cromosoma en
el que el alelo en LD es el mismo alelo que en cromosomas
protectores o neutros. En el caso en el que el marcador que se
analiza tenga el mismo alelo en LD con genotipos tanto susceptible
como protector, permanecerán sin detectarse mediante análisis de un
único punto, de hecho se cancelan entre sí, y muestra poca o ninguna
evidencia de LD con el locus de la enfermedad. Ya se observó
anteriormente la impredicibilidad del procedimiento que surge de
esto.
Con el fin de maximizar la información obtenida
con cada marcador, se produjo una curva de LD de enrollamiento de
tres puntos con los marcadores de IDDM4 (figura 4). En este
caso, se calculó el porcentaje de transmisión (%T) a partir de un
marcador, y sus dos marcadores inmediatamente flanqueantes, y se
calculó el promedio entre los mismos para minimizar los efectos de
fluctuación de la frecuencia de alelos. Esto también produjo un pico
en H0570POLYA, con P=0,04, e indica que la mutación de
IDDM4 es más posible que esté en el intervalo E0864CA -
D11S1337 (75 kb).
Mediante la identificación de este intervalo de
75 kb que muestra asociación con la diabetes tipo 1, se
identificaron haplotipos asociados con la enfermedad. Se derivaban
de los cromosomas fundadores originales en los que surgió la
mutación o mutaciones de diabetes de IDDM4. Con el fin de
identificar la mutación que provoca la susceptibilidad a la
diabetes tipo 1 se construyó una curva de desequilibrio de unión
refinada, basándose en polimorfismos de un único nucleótido (SNP) y
haplotipos. Se identifican los SNP secuenciando individuos con
haplotipos específicos que se identificaron a partir del análisis
de microsatélites: susceptibilidad homocigótica a la diabetes tipo
1, protección homocigótica para la diabetes tipo 1, y controles. Uno
de estos SNP puede ser la mutación etiológica de IDDM4, o
puede estar en un desequilibrio de unión muy fuerte con el locus de
enfermedad primario, y por tanto estar en un pico de la curva
refinada. El análisis de correspondencia cruzada reduce
adicionalmente el número de SNP candidatos, tal como se muestra
mediante la ubicación de la mutación de IDDM2 mediante este
procedimiento (Bennett et al, 1995; Bennett y Todd, 1996).
Esto requiere la identificación de distintos haplotipos o
cromosomas fundadores, que tienen una disposición de alelos
diferente de los haplotipos susceptible o protector principales, de
manera que esa asociación o transmisión de alelos de SNP candidatos
puede someterse a prueba en diferentes fondos de haplotipos. Las
mutaciones candidatas pueden evaluarse para detectar los efectos
sobre la función o regulación de genes.
En poblaciones diferentes, pueden haber surgido
diferentes mutaciones de IDDM4 en el mismo gen. Están
secuenciándose varios posibles cromosomas fundadores o haplotipos
asociados a enfermedad a partir de varios individuos no
relacionados de diferentes poblaciones para identificar mutaciones
candidatas para IDDM4, y que se agrupan en el mismo gen.
Para llevar a cabo una búsqueda exhaustiva para
detectar mutaciones o polimorfismos de ADN, se secuenciaron toda la
región y regiones flanqueantes de la región asociada (la región
central de 75 kb y los 125 kb de ADN flanqueante). La secuencia de
ADN también ayuda en la identificación de genes y es complementaria
a otros procedimientos de identificación de genes tales como
selección de ADNc o identificación de genes mediante secuenciación
de ADN y análisis comparativo de ADN genómico de ratón homólogo.
Se usaron diversas estrategias con la esperanza
de identificar posibles secuencias codificantes dentro de esta
región: secuenciación, predicción informática de posibles exones y
promotores, y selección de ADNc, para intentar aumentar la
posibilidad de identificar todos los genes dentro de este
intervalo.
Se preparó ADN a partir de cósmidos, BAC
(cromosomas artificiales bacterianos), o bien PAC (cromosomas
artificiales de P1). Se sembraron en estrías las células que
contenían el vector sobre placas de agar
Luria-Bertani (LB) complementadas con el
antibiótico apropiado. Se usó una única colonia para inocular 200 ml
de medio LB complementado con el antibiótico apropiado y se hizo
crecer durante la noche a 37ºC. Se sedimentaron las células mediante
centrifugación y se preparó ADN de plásmido siguiendo el protocolo
de purificación de plásmidos/cósmidos Tip500 Maxi de QIAGEN
(Chatsworth, CA) con las siguientes modificaciones; se usaron las
células de 100 ml de cultivo para cada columna Tip500, se aumento
la concentración de NaCl del tampón de elución desde 1,25 M hasta
1,7 M, y se calentó el tampón de elución hasta 65ºC.
Se digirió el ADN purificado de BAC y PAC con
endonucleasa de restricción Not I y luego se sometió a
electroforesis en gel de campo pulsado usando un sistema CHEF
Mapper de BioRad. (Richmond, CA). Se sometió el ADN digerido a
electroforesis durante la noche en un gel de agarosa de bajo punto
de fusión al 1% (BioRad, Richmond CA) que se preparó con Tris
Borato EDTA 0,5X (disolución madre 10X, Fisher, Pittsburg, PA). Se
usaron los ajustes por defecto del algoritmo del CHEF Mapper para
potenciales y tiempos cambiantes. Tras la electroforesis, se tiñó
el gel con bromuro de etidio (Sigma, St. Louis, MO) y se visualizó
con un transiluminador ultravioleta. La(s) banda(s)
de insertos se escindieron del gel. Se eluyó el ADN de la lámina de
gel mediante digestión con beta-agarasa (New
England Biolabs, Beverly MA) según las instrucciones del fabricante.
Se llevó la disolución que contenía el ADN y agarosa digerida a
Tris 50 mM pH 8,0, MgCl_{2} 15 mM, y glicerol al 25% en un volumen
de 2 ml y se colocó en un nebulizador AERO-MIST
(CIS-US, Bedford MA). Se unió el nebulizador a una
fuente de gas nitrógeno y se sometió aleatoriamente a cizalladura
el ADN a 68 947,57 pascales durante 30 seg. Se precipitó con etanol
el ADN sometido a cizalladura y volvió a suspenderse en TE (Tris 10
mM, EDTA 1 mM). Se prepararon extremos romos mediante tratamiento
con nucleasa Mung Bean (Promega, Madison, WI) a 30ºC durante 30
min, seguido de extracción con fenol/cloroformo, y tratamiento con
ADN polimerasa de T4 (GIBCO/BRL, Gaithersburg, MD) en tampón
multicore (Promega, Madison, WI) en presencia de dNTP 40 \muM a
16ºC. Para facilitar la subclonación de los fragmentos de ADN, se
acoplaron adaptadores de BstX I (Invitrogen, Carlsbad, CA) a los
fragmentos a 14ºC durante la noche con ADN ligasa de T4 (Promega,
Madison WI). Se retiraron los adaptadores y fragmentos de ADN de
menos de 500 pb mediante cromatografía en columna usando una columna
de selección por tamaño de ADNc (GIBCO/BRL, Gaithersburg, MD) según
las instrucciones proporcionadas por el fabricante. Se combinaron
las fracciones que contenían ADN de más de 1 kb y se concentraron
mediante precipitación con etanol. Se acoplaron los fragmentos de
ADN que contenían adaptadores de BstX I en los sitios de BstX I de
pSHOT II que se construyó subclonando los sitios de BstX I a partir
de pcDNA II (Invitrogen, Carlsbad, CA) en los sitios de BssH II de
pBlueScript (Stratagene, La Jolla, CA). Se preparó pSHOT II mediante
digestión con endonucleasa de restricción BstX I y se purificó
mediante electroforesis en gel de agarosa. Se extrajo el ADN de
vector purificado en gel de la agarosa siguiendo el protocolo
Prep-A-Gene (BioRad, Richmond, CA).
Para reducir el acoplamiento del vector a sí mismo, se trató el
vector digerido con fosfatasa intestinal de ternero (GIBCO/BRL,
Gaithersburg, MD). Se transformaron las reacciones de acoplamiento
de los fragmentos de ADN con el vector de clonación en células
XL-2 Blue ultracompetentes (Stratagene, La Jolla,
CA), y se sembraron en placas sobre placas de agar LB complementado
con ampicilina 100 \mug/ml. Se escogieron colonias individuales en
una placa de 96 pocillos que contenía 100 \mul/pocillo de caldo
de LB complementado con ampicilina y se hicieron crecer durante la
noche a 37ºC. Se añadieron aproximadamente 25 \mul de glicerol
estéril al 80% a cada pocillo y se almacenaron los cultivos a
-80ºC.
Se usaron reservas de glicerol para inocular 5
ml de caldo de LB complementado con 100 \mug/ml de ampicilina
manualmente o bien usando un robot Tecan Genesis RSP 150 (Tecan AG,
Hombrechtikon, Suiza) programado para inocular 96 tubos que
contenían 5 ml de caldo de los 96 pocillos. Se hicieron crecer los
cultivos durante la noche a 37ºC con agitación para proporcionar
aireación. Se sedimentaron las células bacterianas mediante
centrifugación, se decantó el sobrenadante, y se almacenó el
sedimento celular a -20ºC. Se preparó ADN de plásmido con un Bio
Robot 9600 de QIAGEN (QIAGEN, Chatsworth CA) según el protocolo
Qiawell Ultra. Para someter a prueba la frecuencia y tamaño de los
insertos, se digirió el ADN de plásmido con la endonucleasa de
restricción Pvu II. Se examinó el tamaño de los productos de la
endonucleasa de restricción mediante electroforesis en gel de
agarosa siendo el tamaño promedio de inserto de 1 a 2 kb.
Se realizó un análisis de la secuencia de ADN
usando el kit de reacción lista para secuenciación de ciclos de
terminador de colorante ABI PRISM™ con ADN polimerasa AmpliTaq, FS
(Perkin Elmer, Norwalk, CT). Se realizó el análisis de secuencia de
ADN con cebadores directo e inverso M13. Tras la amplificación en un
instrumento Perkin-Elmer 9600 se purificaron los
productos de extensión y se analizaron en un secuenciador
automatizado ABI PRISM 377 (Perkin Elmer, Norwalk, CT). Se
realizaron aproximadamente de 12 a 15 reacciones de secuenciación
por kb de ADN que debía examinarse, por ejemplo, se realizarían 1500
reacciones para un inserto de PAC de 100 kb.
Se usó Phred/Phrap para el montaje de secuencias
de ADN. Este programa se desarrolló por el Dr. Phil Green y
licenciado de la Universidad de Washington (Seattle, WA).
Phred/Phrap está compuesto por los siguientes programas: Phred para
la llamada de bases, Phrap para el montaje de secuencias, Crossmatch
para las comparaciones de secuencias, Consed y Phrapview para la
visualización de datos, y Repeatmasker para la selección de
secuencias repetitivas. Se identificaron secuencias de ADN de
vector y E. coli mediante Crossmatch y se eliminaron del
procedimiento de montaje de secuencias de ADN. El montaje de
secuencias de ADN se realizó en un servidor SUNEnterprise 4000 que
ejecutaba el sistema operativo Solaris 2.51 (Sun Microsystems Inc.,
Mountain View, CA) usando los parámetros por defecto de Phrap. Los
montajes de secuencias se analizaron adicionalmente usando Consed y
Phrapview.
Cuando las secuencias de ADN montadas se
aproximaban a de cinco a seis veces la cobertura de la región de
interés, se utilizaron las capacidades de predicción de exones y
promotores del programa GRAIL (ApoCom, Oak Ridge) para ayudar en la
identificación de genes. ApoCom GRAIL es una versión comercial del
software de caracterización de genes GRAIL desarrollado por el
Department of Energy (Departamento de Energía) concedido a ApoCom
Inc. por la Lockheed Martin Energy Research Corporation
(Corporación de Investigación Energética Lockheed Martin) y ApoCom
Client Tool for Genomics (ACTG) TM.
Se consultaron las secuencias de ADN en diversas
fases de montaje frente a las secuencias de ADN en la base de datos
de GenBank (objeto) usando el algoritmo de BLAST (S.F. Altschul,
et al. (1990) J. Mol. Biol. 215, 403-410),
con los parámetros por defecto. Cuando se examinaron grandes
secuencias de ADN contiguas, se enmascararon los elementos
repetitivos tras la identificación mediante correspondencia cruzada
con una base de datos de elementos repetitivos de mamíferos. Tras
el análisis de BLAST, se compilaron los resultados mediante un
programa de análisis sintáctico escrito por el Dr. Guochun Xie
(Merck Research Lab). El análisis sintáctico proporcionó la
siguiente información a partir de la base de datos para cada
secuencia de ADN que tenía una similitud con un valor de P superior
a 10^{-6}; el nombre anotado de la secuencia, la base de datos de
la que se deriva, la longitud y porcentaje de identidad de la
región de similitud, y la ubicación de la similitud tanto en la
secuencia consulta como en la objeto.
El análisis BLAST identificó un alto grado de
similitudes (idénticas en un 90-100%) a lo largo de
una longitud superior a 100 pb entre secuencias de ADN obtenidas y
varias secuencias de EST humanas presentes en la base de datos.
Estas secuencias de EST humanas se agrupaban en grupos que estaban
representados por números de acceso; R73322, R50627, F07016. En
general, se supone que cada agrupación de EST está presente en un
único gen. Las secuencias de ADN en la agrupación R73322 de 424
nucleótidos tuvieron un grado inferior pero significativo de
similitud de secuencia de ADN con respecto al gen que codifica la
proteína relacionada con el receptor de LDL (número de acceso de
GenBank X13916) y varios otros miembros de la familia de receptores
de LDL. Por tanto, se concluyó que las secuencias que eran
sumamente similares a R73322 de EST codificaban para un miembro de
la familia de receptores de LDL.
Se reunieron los miembros de cada agrupación de
EST usando el programa Sequencher (Perkin Elmer, Norwalk CT). Para
aumentar la precisión de los datos de secuencia de EST extraídos de
la base de datos, se incluyeron en el montaje archivos de diagramas
de cromatogramas relevantes de las secuencias de ADN genómico
obtenidas a partir de secuenciación al azar. Se volvieron a
analizar las secuencias de EST corregidas mediante BLAST y BLASTX.
Para la agrupación de EST 3, representada por el número de acceso
R50627, el análisis del montaje de EST editado reveló que esta
agrupación era similar a miembros de la familia de receptores de
LDL. Este resultado sugirió la posibilidad de que estas dos
agrupaciones de EST fueran componentes del mismo gen.
Se montaron secuencias de ADNc derivadas de
manera experimental usando el programa Sequencher (Perkin Elmer,
Norwalk CT). Se compararon secuencias de ADN genómico y secuencias
de ADNc usando el programa Crossmatch que permitió una detección
rápida y sensible de la ubicación de los exones. La identificación
de límites intrón/exón se logró entonces comparando manualmente las
secuencias de ADNc y genómico usando el programa GeneWorks
(Intelligenetics Inc., Campbell CA).
Se usaron los cebadores 256F y 622R (tabla 2)
para amplificar un producto de PCR de 366 pb a partir de una
biblioteca de ADNc de cerebro fetal. Se purificó este producto en un
gel de agarosa, se extrajo el ADN, y se subclonó en pCR2.1
(Invitrogen, Carlsbad, CA). Se marcó la sonda de 366 pb mediante
cebadores aleatorios con el kit Rediprime de Amersham (Arlington
Heights, IL) en presencia de 50-100 \muCi de 3000
Ci/mmol [alfa ^{32}P]dCTP (Dupont/NEN, Boston, MA). Se
eliminaron los nucleótidos no incorporados con una columna de
centrifugación ProbeQuant G-50 (Pharmacia/Biotech,
Piscataway, NJ). Se incubó la sonda radiomarcada a una concentración
superior a 1 x 10^{6} cpm/ml en tampón de hibridación rápida
(Clontech, Palo Alto, CA) durante la noche a 65ºC con
transferencias de tipo Northern I y II de múltiples tejidos humanos
(Clontech, Palo Alto, CA). Se lavaron las transferencias mediante
dos incubaciones de 15 min en 2X SSC, SDS al 0,1% (preparado a
partir de disoluciones madre de SSC 20X y SDS al 20%, Fisher,
Pittsburg, PA) a temperatura ambiente, seguido por dos incubaciones
de 15 min en SSC 1X, SDS al 0,1% a temperatura ambiente, y dos
incubaciones de 30 min en SSC 0,1X, SDS al 0,1% a 60ºC. Se realizó
la autorradiografía de las transferencias para visualizar las bandas
que se hibridaban específicamente con la sonda radiomarcada.
La sonda se hibridó con un transcrito de ARN, de
aproximadamente 5-5,5 kb que se expresa
principalmente en la placenta, hígado, páncreas y próstata. Se
expresa a un nivel intermedio en el pulmón, músculo esquelético,
riñón, bazo, timo, ovarios, intestino delgado y colon. El mensajero
se expresa a un nivel bajo en el cerebro, testículos y leucocitos.
En los tejidos en los que el transcrito se expresa sumamente, por
ejemplo el hígado y el páncreas, se observan bandas adicionales de 7
kb y 1,3 kb.
Se usaron técnicas basadas en PCR para extender
regiones que eran sumamente similares a EST y regiones identificadas
mediante software de predicción de exones (GRAIL). La técnica
utilizada es una variación de la amplificación rápida de extremos
de ADNc (RACE) denominado análisis de ADNc de complejidad reducida
(RCCA), se han notificado procedimientos similares por Munroe et
al. (1995) PNAS 92:2209-2213 y Wilfinger et
al. (1997) BioTechniques 22: 481-486. Esta
técnica se basa en un molde de PCR que es una combinación de
aproximadamente 20.000 clones de ADNc, lo que reduce la complejidad
del molde y aumenta la probabilidad de obtener mayores extensiones
de PCR. Una segunda técnica que se usó para extender los ADNc fue
PCR entre regiones que se identificaron en la secuencia genómica
como que tenían el potencial de ser partes de un gen por ejemplo
secuencias que eran muy similares a EST o secuencias que se
identificaron mediante GRAIL. Estas reacciones de PCR se realizaron
sobre ADNc preparado a partir de aproximadamente 5 \mug de ARNm
(Clontech, Palo Alto, CA) con el sistema de elección SuperScript™
(Gibco/BRL, Gaithersburg, MD). La síntesis de ADNc de primera cadena
se cebó usando 1 \mug de cebador
oligo(dT)_{12-18} y 25 ng de
hexámeros aleatorios por reacción. La síntesis de ADNc de segunda
cadena se realizó según las instrucciones del fabricante.
Se exploraron 96 pocillos de una biblioteca de
plásmido de cerebro fetal humano, 20.000 clones por pocillo,
amplificando un producto de PCR de 366 pb usando cebadores 256F y
622R. La mezcla de reacción estaba constituida por 4 \mul de ADN
de plásmido (0,2 ng/ml), Tris-HCl 10 mM pH 8,3, KCl
50 mM, sacarosa al 10%, MgCl_{2} 2,5 mM, tetrazina al 0,1%, dNTP
200 mM, 100 ng de cada cebador y 0,1 \mul de Taq Gold
(Perkin-Elmer, Norwalk, CT). Se incubó un volumen
de reacción total de 11 \mul a 95ºC durante 12 min seguido por 32
ciclos de 95ºC durante 30 seg, 60ºC, durante 30 seg y 72ºC durante
30 seg. Se encontró que aproximadamente 20 pocillos contenían el
fragmento de 366 pb correcto mediante análisis por PCR.
Posteriormente se realizó una RACE en 5' y 3' sobre varios de los
pocillos positivos que contenían la biblioteca de ADNc de plásmido
usando un cebador específico de vector y un cebador específico de
gen. Los cebadores específicos de vector, PBS 543R y PBS 873F se
emplearon ambos en combinación con los cebadores específicos de gen
117F y 518R porque se desconocía la orientación del inserto. Las
condiciones de amplificación por PCR consistían en 1X tampón TaKaRa
LA, MgCl_{2} 2,5 mM, dNTP 500 mM, 0,2 \mul de TaKaRa LA Taq
polimerasa (PanVera, Madison WI), 100 ng de cada cebador y 5 \mul
de la biblioteca del plásmido a 0,2 ng/ml. En un volumen de reacción
total de 20 ml, las condiciones de ciclación térmica fueron tal
como sigue: 92ºC durante 30 seg, seguido por 32 ciclos de 92ºC
durante 30 seg, 1 min a 60ºC y 10 min a 68ºC. Tras la amplificación
por PCR inicial, se realizó una reacción por PCR anidada o
semianidada usando cebadores de vector anidados PBS 578R y PBS 838F
y diversos cebadores específicos de gen (256F, 343F, 623R y 657R).
Los productos de PCR se separaron de los dNTP no incorporados y
cebadores usando columnas de centrifugación de purificación por PCR
QIAquick de QIAGEN, usando protocolos habituales y volvieron a
suspenderse en 30 \mul de agua. Las condiciones de amplificación
para la PCR anidada y semianidada fueron las mismas que las de la
amplificación por PCR inicial salvo que se usaron 3 \mul del
fragmento de PCR purificado como molde y que las condiciones de
ciclación fueron sólo durante 20 ciclos. Se analizaron los productos
obtenidos de esta amplificación por PCR sobre geles de agarosa al
1%, se purificaron los fragmentos escindidos usando columnas de
centrifugación QIAquick de QIAGEN y se secuenciaron usando kits de
secuenciación de terminación de colorante ABI. Se analizaron los
productos sobre secuenciadores ABI 377 según protocolos
habituales.
Tal como se analizó anteriormente es posible que
cada agrupación de EST represente a un único gen, como alternativa
las agrupaciones de EST pueden ser partes del mismo gen. Para
distinguir entre estas dos posibilidades, se diseñaron cebadores
para las otras dos agrupaciones de EST en la región representada por
números de acceso EST F07016 (agrupación 2, que contiene 272
nucleótidos) y R50627 (agrupación 3, que contiene 1177 nucleótidos).
Los cebadores de la agrupación 1 (117F y 499F) se emparejaron con
un cebador de la agrupación 3 de EST (4034R) en una reacción de
PCR. Se realizó una reacción de 50 \mul usando Takara LA Taq
polimerasa (Panvera, Madison, WI) en el tampón de reacción
suministrado por el fabricante con la adición de dNTP 0,32 mM,
cebadores, y aproximadamente 30 ng de ADNc de ganglio linfático. Se
amplificaron los productos PCR durante 35 ciclos de 94ºC durante 30
seg, 60ºC durante 30 seg, y 72ºC durante 4 minutos. Se sometieron
los productos a electroforesis sobre un gel de agarosa al 1% y se
escindieron bandas de 2,5 a 3 kb, se subclonaron en pCR 2.1
(Invitrogen, Carlsbad, CA), y se preparó ADN de plásmido para
análisis de secuencia de ADN.
La reacción primaria descrita anteriormente
generada por un cebador en la agrupación 1 de EST (638F) y
agrupación 3 de EST (4173R) se utilizó como el molde para una
reacción con un cebador de la agrupación 1 de EST (638F) y de la
agrupación 2 de EST (3556R). Se realizó esta reacción de PCR
semianidada con Takara LA Taq polimerasa tal como se describió en
el párrafo anterior. Se generó un producto de aproximadamente 2 kb y
se subclonó para análisis de secuencia de ADN. El ensamblaje de los
resultados de la secuencia de ADN de estos productos de PCR indicó
que las agrupaciones de 1 a 3 de EST eran parte del mismo gen y
establecían su orientación relativa una con respecto a la otra en
el transcrito de ARNm producido por este gen.
También se realizaron reacciones de PCR entre
las agrupaciones 2 y 3 de EST. La amplificación a partir de ADNc de
hígado usando Takara LA Taq polimerasa (Panvera, Madison, WI) con
los cebadores 2519F, 3011F, o 3154F (agrupación 2 de EST) en
combinación con 5061R (agrupación 3 de EST) se realizó durante 35
ciclos de 95ºC durante 30 seg, 60ºC durante 60 seg, y 72ºC durante
3 minutos. Los productos de PCR se purificaron en gel, se
subclonaron, y se determinó la secuencia de ADN. El análisis de la
secuencia de ADN de los extremos de todos estos productos de PCR
dio como resultado la mayoría de la secuencia de ADNc, sin embargo
para proporcionar secuencia de ADN completa de ambas cadenas se
diseñaron cebadores de oligonucleótidos y se usaron para la
secuenciación de ADN (figura 5(a)).
Se utilizó análisis RCCA para obtener varios
clones extendidos en 5' usando los cebadores específicos de gen
internos tal como se describió anteriormente. Se aislaron varias
extensiones clonales, sin embargo la mayoría de los clones
analizados se detuvieron dentro del exón A. Un clon se extendió
pasado el extremo 5' del exón A pero la secuencia era contigua a
ADN genómico, dado que un conjunto de pruebas indica un límite
intrón/exón en el extremo 5' del exón A parecía probable que esta
extensión era el resultado de una secuencia intrónica no tratada.
Un segundo clon h10 se extendió pasado este punto pero divergía de
la secuencia de ADN genómico. Se concluyó que éste representaba un
clon quimérico que estaba presente en la biblioteca de ADNc de
cerebro fetal original.
Tal como se describió anteriormente los
resultados de los experimentos de RCCA produjeron varios clones
independientes que terminaban en el extremo 5' del exón A. Esto
sugería que el gen LRP5 humano contiene una región que la
transcriptasa inversa tiene dificultad para transcribir. Para salvar
este problema se decidió aislar el ortólogo de ratón de
LRP5, dado que diferencias sutiles en el contenido de la
secuencia de ADN pueden alterar la capacidad de una enzima para
transcribir una región. Para aumentar la probabilidad de aislar la
parte en 5' del gen de ratón, se usó una sonda humana de 366
nucleótidos, descrita anteriormente y derivada de exones A y B.
Se construyó una biblioteca de ADNc a partir de
ARNm de hígado de ratón comprado de Clontech (Palo Alto, CA). Se
preparó ADNc usando el sistema de elección SuperScript (Gibco/BRL
Gaithersburg, MD) según las instrucciones del fabricante. Se
acoplaron los adaptadores fosforilados Bst XI (Invitrogen, San
Diego, CA) a aproximadamente 2 \mug de ADNc de hígado de ratón.
Se diluyó la mezcla de acoplamiento y se fraccionó por tamaños sobre
una columna de exclusión por tamaño de ADNc (Gibco/BRL
Gaithersburg, MD). Se recogieron las gotas de la columna y se
determinó el volumen eluído de la columna tal como se describió para
la construcción de bibliotecas al azar. El ADNc fraccionado por
tamaños con los conectores Bst XI se ligó en el vector pSHOT II,
descrito anteriormente, se cortó con la endonucleasa de restricción
Bst XI, se purificó en gel, y se desfosforiló con fosfatasa
intestinal de ternera (Gibco/BRL, Gaithersburg, MD). El
acoplamiento que contenía aproximadamente 10-20 ng
de ADNc y aproximadamente 100 ng de vector se incubó durante la
noche a 14ºC. El acoplamiento se transformó en células
ultracompetentes XL-2 Blue (Stratagene, La Jolla,
CA.). Las células transformadas se esparcieron sobre veinte filtros
de 133 mm de colonia/pantalla de placa (Dupont/NEN, Boston, MA.) a
una densidad de aproximadamente 30.000 colonias por placa sobre
placas de agar con caldo Luria complementadas con 100 \mug/ml de
ampicilina (Sigma, St. Louis, MO.). Se hicieron crecer las colonias
durante la noche y luego se sembraron en placas las réplicas sobre
dos filtros duplicados. Se hicieron crecer los filtros replicados
durante varias horas a 37ºC hasta que las colonias fueron visibles
y se trataron para la hibridación in situ de colonias según
procedimientos establecidos (Maniatis, Fritsch y Sambrook, 1982).
Se usó un Stratalinker (Stratagene, LaJolla, CA.) para reticular el
ADN al filtro. Se hibridaron los filtros durante la noche con más de
1.000.000 cpm/ml de sonda en 1X tampón de hibridación (Gibco/BRL,
Gaithersburg, MD) que contenía formamida al 50% a 42ºC. Se generó
la sonda a partir de un producto de PCR derivado de ADNc de LRP5
humano usando cebadores 512F y 878R. Se marcó la sonda
aleatoriamente con cebador con el kit Rediprime de Amersham
(Arlington Heights, IL) en presencia de 50-100
\muCi de 3000 Ci/mmol [alfa 32P]dCTP (Dupont/NEN, Boston,
MA) y se purificó usando una columna de centrifugación SondaQuant
G-50 (Pharmacia/Biotech, Piscataway, NJ). Se lavaron
los filtros con 0,1X SSC, SDS al 0,1% a 42ºC. Tras realizar
autoradiografías de regiones individuales que contenían colonias
positivas para la hibridación se escindieron del filtro maestro y
se colocaron en 0,5 ml de caldo Luria más glicerol al 20%. Cada
positivo volvió a sembrarse en placas a una densidad de
aproximadamente 50-200 colonias por 100 mm placa y
se seleccionaron mediante hibridación tal como se describió
anteriormente. Se aislaron colonias únicas y se preparó el ADN de
plásmido para análisis de secuencia de ADN.
Se aislaron tres clones de la biblioteca de ADNc
de ratón, la secuencia ensamblada de los clones (figura 16 (a)) que
tenía un alto grado de similitud (idéntico en un 87% sobre una parte
de aproximadamente 1700 nucleótidos) con el gen LRP5 humano
y por tanto representan probablemente el ortólogo de ratón de
LRP5. Los 500 aminoácidos de la parte de LRP5 de ratón
(figura 16(d)) que se obtuvo inicialmente era idéntica en un
96% a LRP5 humana. De manera significativa dos de estos clones
tenían secuencia que estaba en 5' de la región correspondiente al
exón A, el clon 19a contenía otros 200 pb y el colon 9a contenía
otros 180 pb (figura 16(b)). Los otros 200 pb contienen un
marco de lectura abierto que empieza en el pb 112
(figura16(c)). El codón de iniciación tiene nucleótidos
consenso para una iniciación eficaz de la traducción tanto en la
posición -3 (purina) como en la +4 (nucleótido G) (Kozak, M. 1996,
Mamalian Genome 7:563-574). Este marco de lectura
abierto codifica un péptido con el potencial de actuar como una
secuencia señal eucariota para la exportación de proteína (von
Heijne, 1994, Ann. Rev. Biophys. Biomol. Struc.
23:167-192). La mayor puntuación para la secuencia
señal tal como se determina usando el programa SigCleave en el
paquete de análisis del GCG (Genetics Computer Group, Madison WI)
genera un péptido maduro que empieza en el residuo 29 de isoforma 1.
Otros sitios que pueden utilizarse producen péptidos maduros que
empiezan en el residuo de aminoácido 31 (el primer aminoácido
codificado por el exón A) o residuos de aminoácido 32, 33, ó 38.
Los clones de ADNc de ratón aislados mediante
hibridación de ácido nucleico contienen 1,7 Kb del extremo 5' del
ADNc de Lrp3 (figura 16(a)). Esto representa
aproximadamente un tercio del ADNc de longitud completa cuando se
compara con la secuencia de ADNc humana. Se aisló el resto del ADNc
de Lrp3 de ratón usando PCR para amplificar productos de
ADNc de hígado de ratón. Se diseñaron cebadores de PCR, tabla 9,
basándose en secuencias de ADN identificadas por la discriminación
de secuencias de clones genómicos de ratón, BAC
53-d-8 y
131-p-15, que contienen el gen
Lrp3 de ratón. Se mapeó BAC
53-d-8 mediante análisis FISH para
determinar el cromosoma 19 de ratón que es sintético con 11q13. La
discriminación de secuencias de estos clones identificó secuencias
de ADN que correspondían con la región codificante de LRP5
humano así como la región no traducida en 3'. Esta estrategia dio
como resultado la determinación de una secuencia de ADNc de ratón de
5059 nucleótidos (figura 18(a)) que contiene un marco de
lectura abierto de 4842 nucleótidos (figura 18(b)) que
codifica una proteína de 1614 aminoácidos (figura 18(c)). La
posible ATG está en un contexto de secuencia favorable para el
inicio de la traducción (Kozak, M. 1996, Mamalian Genome
7:563-574).
Las secuencias de ADNc de LRP5 humano y
de ratón presentan una identidad del 87%. El marco de lectura
abierto del ADNc de LRP5 humano codifica una proteína de 1615
aminoácidos que es idéntica en un 94% a la proteína de 1614
aminoácidos codificada por Lrp3 de ratón (figura
18(d)). La diferencia de longitud se debe a una deleción de
un único aminoácido en la secuencia de péptido señal de Lrp3
de ratón. La secuencia de péptido señal no está muy conservada
siendo idéntica en menos de un 50% entre el ser humano y el ratón.
La ubicación del posible sitio de ruptura de la secuencia señal está
en el residuo de aminoácido 25 en el ser humano y en el aminoácido
29 en el ratón. La ruptura en estos sitios dará como resultado
proteínas maduras humanas y de ratón de 1591 y 1586 aminoácidos,
respectivamente, que son idénticos en un 95% (figura 18(e)).
El alto grado de similitud de secuencia global sugiere fuertemente
que las secuencias identificadas son ortólogas del gen LRP5.
Esta hipótesis se apoya adicionalmente por los resultados de los
experimentos de tipo Southern genómico (datos no mostrados).
Se aisló el exón humano que codifica un péptido
señal a partir de ADNc de hígado mediante PCR. Se usó el cebador
directo 1F (tabla 9) en combinación con uno de los siguientes
cebadores inversos: 218R, 265R, 318R, y 361R en una reacción de PCR
usando Taq Gold polimerasa (Perkin-Elmer, Norwalk,
CT) y complementada con DMSO al 3, 5, o bien 7%. Se amplificaron
los productos durante 40 ciclos de 30 seg a 95ºC, 30 seg a 58ºC, y 1
min a 72ºC. Se analizaron los productos sobre gel de agarosa y se
seleccionaron algunas de las reacciones que contenían bandas del
tamaño predicho para el análisis de secuencia de ADN y subclonación
en pCR2.1 (Invitrogen, San Diego, CA).
La secuencia de ADN derivada de 139 nucleótidos
en sentido 5' de exón 2 (también conocido como exón A) contiene una
ATG que está en un contexto para la iniciación eficaz de la
traducción: un residuo de adenina (A) en la posición -3 y un
residuo de guanina (G) en la posición +4 (Kozak, M. 1996, Mamalian
Genome 7:563-574). El marco de lectura abierto para
esta ATG continua durante 4854 nucleótidos (figura 5(b)) lo
que codifica un polipéptido de 1615 aminoácidos (figura
5(c)
La secuencia que sigue el codón de ATG iniciador
codifica un péptido con el potencial para actuar como una señal
para la exportación de proteínas. La mayor puntuación para la
secuencia señal (15,3) indicada por el programa SigCleave en el
paquete de análisis de GCG (Genetics Computer Group, Madison WI)
genera un polipéptido maduro que empieza en el residuo de
aminoácido 25 (figura 5(d, e). Otros posibles sitios de
ruptura que pueden usarse para producir una proteína LRP5 madura se
predicen para los residuos 23, 24, 26, 27, 28, 30 y 32 (el primer
aminoácido codificado por exón A).
La región que contenía la secuencia de ADN
genómico idéntica a la secuencia de ADNc que codifica un péptido
señal estaba en un hueco entre dos extensiones de secuencia de ADN
genómico contiguas conocidas como cóntigos 57 y 58. Para cerrar
este hueco se eligieron cuatro clones de la biblioteca al azar que
se determinaron para extender este hueco según el análisis por el
programa Phrapview autorizado del Dr. Phil Green de la Universidad
de Washington (Seattle, WA). La secuenciación de ADN directa de
estos clones no fue satisfactoria, es decir el alto contenido en GC
redujo significativamente la eficacia de la secuenciación en ciclo.
Para salvar este problema se generaron productos de PCR
incorporando 7-desaza-dGTP
(Pharmacia, Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ). Las condiciones
para estas reacciones consistían en una modificación del kit Klentaq
Advantage-GC polimerasa (Clontech, Palo Alto, CA).
Se modificó el protocolo de reacción habitual complementando la
mezcla de reacción con
7-desaza-dGTP 200 \muM. Se
amplificaron los insertos con cebadores directos e inversos M13
durante 32 ciclos de 30 seg a 92ºC, 1 min a 60ºC, y 5 min a 68ºC.
Se purificaron en gel los productos usando un kit de extracción en
gel Qiaquick (Qiagen Inc., Santa Clarita, CA) y se secuenciaron tal
como se describió previamente. El montaje de las secuencias
resultantes cerró el hueco y generaron una secuencia contigua de
aproximadamente 78.000 pb de ADN genómico.
El paquete de software GRAIL (citado
anteriormente) predice exones y secuencias promotoras a partir de
secuencias de ADN genómico. Una región identificada por GRAIL es un
exón originalmente denominado G1 y posteriormente denominado exón 1
que está aproximadamente 55 kb en sentido 5' del principio del exón
A (figura 12(c)). Se diseñaron tres cebadores denominados G1
1f a 3f basándose en esta secuencia. Este exón era de interés
particular porque GRAIL también predijo un promotor inmediatamente
en sentido 5' de la secuencia exónica (figura 12(e)). Además
uno de los marcos de lectura abiertos en G1 codificó un péptido que
tenía las características de una secuencia señal eucariota.
Para determinar si el exón predicho G1 era o no
parte del gen LRP5, se realizó una PCR de transcriptasa
inversa (RT) PCR usando el kit de PCR de ARN Taqara (Panvera,
Madison WI). Se usó ARNm de hígado humano (50 ng) como molde para
una reacción de transcriptasa inversa de 10 \mul. Se incubó la
reacción de transcriptasa inversa usando uno de los cebadores
específicos de LRP5 (622R, 361R, o 318R) a 60ºC durante 30
min, seguido por 99ºC durante 5 min, y luego se colocó la muestra
en hielo. Se añadió uno de los cebadores directos, tabla 2, (G1 If,
2f, o 3f) junto con los reactivos para amplificación por PCR y se
amplificó la reacción durante 30 ciclos de 30 seg a 94ºC, 30 seg a
60ºC, y 2 min a 72ºC. Luego se diluyó esta reacción de PCR primaria
1:2 en agua y se usó 1 \mul de la reacción en una segunda
reacción de 20 \mul usando cebadores anidados. Las condiciones de
reacción condiciones para la segunda ronda de amplificación fueron
30 ciclos de 94ºC durante 30 seg, 60ºC durante 30 seg y 72ºC
durante 2 min. Se separaron los productos sobre un gel de agarosa y
se escindieron. Se subclonaron los fragmentos purificados en pCR
2.1 (Invitrogen, Carlsbad, CA), se preparó ADN de plásmido y se
determinó la secuencia de ADN.
La secuencia de ADN de estos productos indicó
que G1 (exón 1) estaba presente en al menos una parte de los
transcritos de LRP5. Se identificaron dos isoformas
diferentes. La primera, isoforma 2 (figura 11(a)),
identificada en este experimento está compuesta por el exón 1
seguido de un exón al que se ha denominado exón 5. Esta variante de
corte y empalme tiene un marco de lectura abierto que se inicia en
el nucleótido 402 del exón B (figura 11(a)), la metionina
iniciadora en esta ubicación no se ajusta a las secuencias consenso
para el inicio de la traducción (Kozak, M. (1996) Mamalian Genome
7:563-574). Una segunda metionina iniciadora
potencial está presente en el nucleótido 453, este codón está en
contexto para iniciación eficaz del inicio de la traducción (Kozak,
M. (1996) Mamalian Genome 7:563-574). El mayor marco
de lectura abierto potencial para la isoforma 2 (figura
11(c)) codifica una variante de corte y empalme que contiene
una secuencia señal eucariota en el aminoácido 153. El péptido
maduro generado por esta variante de corte y empalme carecerá de
los cinco primeros dominios espaciadores y una parte del primer
motivo de tipo EGF.
La segunda isoforma (isoforma 3) está
constituida por exón 1 seguido por exón A (figura 12(a)). Se
desconoce si el exón 1 es el primer exón de la isoforma 2. Sin
embargo, la ubicación de un promotor predicho por GRAIL en sentido
5' de G1 sugiere la posibilidad de que el exón 1 sea el primer exón.
Es más, existe un marco de lectura abierto que se extiende pasado
el límite intrón/exón en 5' postulado por GRAIL (figura
12(b)). Por tanto se ha examinado la posibilidad de
incorporar este marco de lectura abierto extendido en el transcrito
de LRP5. El marco de lectura abierto resultante (figura
12(c)) codifica una proteína de 1639 aminoácidos (figura
12(d). El codón de metionina iniciadora no contiene ninguno
de los nucleótidos consenso que se piensa que son importantes para
la traducción eficaz (Kozak, M. 1996, Mamalian Genome
7:563-574). La proteína predicha tampoco contiene
una secuencia señal eucariota predicha dentro de los 100 primeros
aminoácidos. Como alternativa puede haber otros exones en sentido
5' del exón 1 que proporcionan el codón de metionina iniciadora y/o
una secuencia señal potencial.
RACE es un protocolo establecido para el
análisis de los extremos de ADNc. Se realizó este procedimiento
usando el molde de RACE Marathon comprado en Clontech (Palo Alto,
CA). Esto se realizó según las instrucciones usando ADNc
"Marathon" de Clontech tejido de cerebro fetal y de mama. Se
realizaron dos amplificaciones por PCR "anidadas" usando la
mezcla enzimática de PCR larga ELONGASE™ y el tampón de
Gibco-BRL (Gaithersburg, MD).
Cebadores Marathon
| AP1: | CCATCCTAATACGACTCACTATAGGGC | |
| AP2: | ACTCACTATAGGGCTCGAGCGGC |
La PCR de primera ronda usó 2 microlitros de
molde de ADNc de placenta Marathon y 10 pmoles de cada uno de los
cebadores L217 y AP1. La ciclación térmica fue: 94ºC 30 seg, 68ºC 6
min, 5 ciclos; 94ºC 30 seg, 64ºC 30 seg, 68ºC 4 min, 5 ciclos; 94ºC
30 seg, 62ºC 30 seg, 68ºC 4 min, 30 ciclos. Se añadió un microlitro
de una dilución 1/20 de esta reacción a una segunda reacción de PCR
reacción como molde de ADN. Esta reacción de PCR también difirió de
la primera reacción de PCR en que se usaron los cebadores anidados
L120 y AP2. Se observaron dos productos de aproximadamente 1600 pb
y 300 pb y se clonaron en pCR2.1 (Invitrogen, Carlsbad CA). La
secuencia de ADN de estos clones indicó que se habían generado
mediante corte y empalme de secuencias de exón A. El fragmento de
1,6 kb mayor (figura 13) identificó una región de aproximadamente
4365 nucleótidos en sentido 5' del exón A y parecía ser contiguo al
ADN genómico durante 1555 pares de bases. La secuencia identificada
por el fragmento de 300 pb estaba aproximadamente 5648 nucleótidos
en sentido 5' del exón A (figura 14). Esta secuencia tenía
similitud con las repeticiones de Alu. La región identificada por el
fragmento de 300 pb era interna con respecto a la región
identificada por el fragmento de 1,6 kb. El marco de lectura abierto
para estas isoformas denominadas 4 y 5 es el mismo que el descrito
para la isoforma 2 (figura 11(b)).
Se usó análisis GRAIL (citado anteriormente)
para predecir regiones promotoras potenciales para el gen. Se
diseñaron cebadores para la secuencia promotora de isoforma 6
(figura 15(b)) que se definió por GRAIL y está
aproximadamente 4 kb centromérica del exón A. Esta región se
denominó promotor-1 de GRAIL
(Gp-1).
Se usó el cebador de PCR Gp 1f (tabla 2) en una
reacción de PCR con cebador 574r y 599r usando la polimerasa Taq
Gold en el tampón de reacción suministrado por el fabricante (Perkin
Elmer, Norwalk, CT). Las condiciones de reacción fueron 12 min a
95ºC seguido por 35 ciclos de 95ºC durante 30 seg, 60ºC durante 30
seg, y 72ºC durante 1 min 30 seg con aproximadamente 10 ng de ADNc
de hígado por 20 \mul de reacción. Se diluyeron las reacciones
primarias 20 veces en agua y se realizó una segunda ronda de PCR
usando cebador Gp 1f en combinación con 474r o bien 521r. Se
analizaron los productos sobre un gel de agarosa al 2% y se
subclonaron bandas de aproximadamente 220 a 400 pb en pCR 2.1
(Invitrogen, Carlsbad, CA) y se analizaron mediante análisis de
secuencia de ADN. El marco de lectura abierto presente en la
isoforma 4 es el mismo que el descrito para la isoforma 2
anteriormente
(figura 11(b)).
(figura 11(b)).
Se preparó una biblioteca de tipo vectorette a
partir de cada clon restringiendo cada clon y acoplándolo sobre un
conector de burbuja específico (Munroe, D.J. et al. (1994)
Genomics 19, 506). Se llevó a cabo PCR entre un cebador (Not
1-A) específico para el conector, y un motivo de
repetición (AC) 11N, (en el que N no es A), a una temperatura de
reasociación de 65ºC. Se purificaron en gel los productos de PCR y
se secuenciaron usando el kit de secuenciación de ciclo terminador
de colorante ABI PRISM tal como se describió previamente. A partir
de esta secuencia, se diseñó un cebador, que se usó en PCR con el
cebador Not 1-A. Éste también se secuenció, y se
diseñó un segundo cebador de PCR, (tabla 8) de manera que ambos
cebadores flanqueaban el motivo de repetición y se usaron para
determinar el genotipo.
Se identificaron polimorfismos de un único
nucleótido (SNP) en pacientes con diabetes tipo 1 usando un enfoque
de exploración por secuenciación (tabla 5).
Se diseñaron cebadores para amplificar
específicamente fragmentos genómicos, aproximadamente de 500 a 800
pb de longitud, que contenían regiones de interés específicas (es
decir regiones que contenían exones de LRP5, SNP previamente
identificados o exones predichos por GRAIL). Para facilitar la
secuenciación del cebador de colorante fluorescente, se pusieron al
final pares de cebadores directos e inversos con secuencias que
corresponden con el cebador universal M13
(5'-TGTAAAACGACGGCCAGT-3') y un
cebador inverso M13 modificado
(5'-GCTATGAC
CATGATTACGCC-3'), respectivamente. Los productos de PCR producidos usando los conjuntos de cebadores, anteriormente mencionados, se amplificaron en reacciones de 50 \mul constituidas por 10 x tampón de PCR de Perkin-Elmer, dNTP 200 mM, 0,5 \mul de Taq Gold (Perkin-Elmer Corp., Foster City, CA), 50 ng de ADN de paciente y 20 pmol/ml de cebadores directo e inverso. Las condiciones de ciclación fueron 95ºC durante 12 min; 35 ciclos de 95ºC durante 30 seg, 57ºC durante 30 seg y 68ºC durante 2 min, seguido por una extensión de 72ºC durante 6 min y un mantenimiento a 4ºC.
CATGATTACGCC-3'), respectivamente. Los productos de PCR producidos usando los conjuntos de cebadores, anteriormente mencionados, se amplificaron en reacciones de 50 \mul constituidas por 10 x tampón de PCR de Perkin-Elmer, dNTP 200 mM, 0,5 \mul de Taq Gold (Perkin-Elmer Corp., Foster City, CA), 50 ng de ADN de paciente y 20 pmol/ml de cebadores directo e inverso. Las condiciones de ciclación fueron 95ºC durante 12 min; 35 ciclos de 95ºC durante 30 seg, 57ºC durante 30 seg y 68ºC durante 2 min, seguido por una extensión de 72ºC durante 6 min y un mantenimiento a 4ºC.
Se optimizaron las condiciones de manera que
sólo se produjeran mediante esta reacción fragmentos de ADN único.
Después se purificaron los productos de PCR para su secuenciación
usando tiras QiaQuick o placas de 96 pocillos QiaQuick en el robot
Qiagen (Qiagen Inc., Santa Clarita, CA). Esta etapa de purificación
elimina los nucleótidos y cebadores no incorporados.
El procedimiento usado para analizar los
productos de PCR fue la secuenciación en ciclo de cebador de
colorante BODIPY directa (Metzker et. al. (1996) Science
271, 1420-1422). Un robot Tecan (Tecan, Research
Triangle Park, NC) realizó las reacciones de secuenciación usando
protocolos de secuenciación de cebador de colorante habituales
(secuenciación en ciclo de cebador de colorante ABI con AmpliTaq ADN
Polimerasa FS, Perkin-Elmer Corp., Foster City,
CA). Se generaron las reacciones usando las siguientes condiciones
de ciclación en un ciclador térmico de motor de ADN (M. J. Research
Inc., Watertown, MA), 15 ciclos de 95ºC durante 4 seg, 55ºC durante
10 seg, y 70ºC durante 60 seg; seguido por 15 ciclos de 95ºC durante
4 seg, y 70ºC durante 60 seg. Tras la ciclación, se combinaron las
muestras, se precipitaron, y se secaron. Volvieron a suspenderse las
muestras en 3 \mul de tampón de carga y se hicieron pasar 2 ml en
un secuenciador de ADN automatizado ABI 377.
Una vez se han identificado los SNP, se emplean
las tecnologías de exploración para evaluar su informatividad como
marcadores para ayudar en la determinación de la asociación del gen
con enfermedad en familias con diabetes tipo 1. Están usándose
polimorfismos de longitud de fragmento de restricción (RFLP) para
evaluar SNP que cambian un sitio de endonucleasa de restricción.
Además, está usándose PCR de RFLP forzada (Li y Hood (1995) Genomics
26, 199-206; Haliassos et. al. (1989) Nuc.
Acids Res. 17, 3608) y ARMS (Gibbs et.al. (1989) Nuc. Acids
Res. 17, 2437-2448; Wu et al. (1989) Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 86, 2757-2760) para evaluar SNP
que no cambian un sitio de endonucleasa de restricción. También se
esta tratando de explorar mayores regiones del locus mediante
desarrollando ensayos de Cleavase basado en fluorescencia (CFLP)
(Life Technologies, Gaithersburg, MD) y Resolvase, (Avitech
Diagnostics, Malvern, PA).
Se ha usado el mapeo de haplotipo (o mapeo de
identidad por descendencia) junto con el mapeo por asociación para
identificar regiones de identidad por descendencia (IBD) en
poblaciones fundadoras, en las que (algunos de) los individuos
afectados en una población fundadora comparten no sólo la mutación,
sino también un haplotipo genómico bastante grande (por tanto
partes de ADN idénticas) que rodean el locus de enfermedad. Pueden
utilizarse haplotipos recombinantes para delinear la región que
contiene la mutación. Se han usado estos procedimientos para mapear
los genes de los trastornos recesivos: enfermedad de Wilson,
enfermedad de Batten, enfermedad de Hirschsprung y hemocromatosis
hereditaria (Tanzi, R., et al. (1993) Nature Genet 5,
344-350; The International Batten Disease
Consortium. (1995) Cell 82, 949-957; Puffenberger,
E., et al. (1994) Hum Mol Genet 3,1217-1225;
y Feder, J., et al. (1996) Nature Genet 13,
399-408). De manera similar, en diabetes tipo 1,
para IDDM1, el mapeo del haplotipo de MHC comparativo entre
caucásicos específicos y haplotipos de origen africano tanto
HLA-DQA1 como HLA-DQB1
como los locus de susceptibilidad para este trastorno (Todd, J.
et al (1989) Nature 338, 587-589; y Todd, J.
et al (1987) Nature 329, 599-604).
El análisis del haplotipo en el cromosoma 11q13
se realizó junto con análisis de asociación con el fin de
identificar regiones de IBD entre haplotipos que se transmiten más a
menudo de lo esperado, que contienen por tanto un alelo susceptible
en el locus etiológico; por el contrario los haplotipos protectores
se transmitirán menos a menudo de lo esperado y contendrán un alelo
diferente (protector) en el locus etiológico. Se demostraron
evidencias de una desviación en la transmisión esperada de alelos
con los dos marcadores polimórficos D11S1917 y
H0570POLYA. En 2024 familias con diabetes tipo 1 del RU,
EE.UU., Noruega, Cerdeña, Rumania, Finlandia, Italia y Dinamarca,
la transmisión de haplotipo 3-2
D11S1917-H0570POLYA a descendencia afectadas
fue negativa (46%), con una prueba de heterogeneidad 2X2 entre
transmisión afectada y sin afectar produjo \chi^{2}=23, df=1,
p<1,5 x 10^{-6}, proporcionando buena evidencia de que es un
haplotipo protector. Por el contrario, el haplotipo
2-3 se transmitió más a descendencia afectada que a
no afectada (%T=51,3; prueba de contingencia 2X2; \chi^{2}=5,5,
df=1, p<0,02), lo que indica que éste era un cromosoma
susceptible (o posiblemente neutro). Se ha identificado otro
haplotipo, que es raro, que parece ser susceptible a diabetes tipo 1
(D11S1917-H0570POLYA, 3-3,
%T afectados= 62,4, prueba de contingencia 2X2, afectados frente a
no afectados; chi^{2}=6,7, df=1, p<0,009). Por tanto, el
análisis de asociación en esta región ha proporcionado evidencias de
un haplotipo que contiene un alelo protector frente a diabetes tipo
1, dado que se transmite significativamente menos a la descendencia
afectada en comparación con la descendencia no afectada, y evidencia
de dos haplotipos no protectores, que tienen un efecto neutral o
susceptible sobre la diabetes tipo 1.
Extendiendo este análisis de haplotipo para
incluir los 14 marcadores de microsatélites flanqueantes 255ca5,
D11S987, 255ca6, 255ca3, D11S1296, E0864CA, TAA, L3001CA, D11S1337,
14LCA5, D11S4178, D11S970, 14LCA1, 18018, así como los
polimorfismos de un único nucleótido (SNP) 58-1,
Exón E (intrónico, 8 pb en 3' del exón 6) y Exón R
(Ala^{1330}, exón 18) (figura 19), revelaron haplotipos sumamente
conservados dentro de este intervalo en los individuos diabéticos.
Se ha identificado un haplotipo protector distinto (A) (que engloba
el haplotipo 3-2 en
D11S1917-H0570POLYA), así como un haplotipo
susceptible distinto (B) (que engloba el haplotipo
2-3 en D11S1917-H0570POLYA).
El haplotipo susceptible es IBD con el haplotipo protector, en 3'
del marcador D11S1337, lo que indica que la variante
etiológica que desempeña un papel en la diabetes tipo1 no cae
dentro de la región idéntica, localizándola en 5' del Exón E
del gen LRP-5. Esta región que es IBD entre
los haplotipos protector y susceptible evita que se realice el
análisis de asociación, dado que no se detectará ninguna desviación
en la transmisión a la descendencia afectada. El haplotipo
susceptible raro (C), 3-3 en
D11S1917-H0570POLYA, también puede
identificarse. El análisis de haplotipo con los otros marcadores en
la región revela que este haplotipo susceptible raro es idéntico al
haplotipo susceptible entre UT5620 y 14L15CA,
localizando potencialmente la variante etiológica entre
UT5620 y Exón E, que es de aproximadamente 100 kb.
Por tanto, los haplotipos susceptibles y susceptibles raros pueden
llevar un alelo (o alelos separados) lo que confiere un efecto
susceptible sobre la diabetes tipo 1, mientras que el haplotipo
protector contiene un alelo protector frente a IDDM. La
región en 5' del gen LRP5 cae dentro de este intervalo,
englobando la regiones reguladoras en 5' del gen LRP5 y
exones de 1 a 6.
El análisis de los haplotipos italiano y de
Cerdeña reveló otros dos haplotipos susceptibles. En
D11S1917-H0570POLYA en el haplotipo
1-3 de familias italianas, 63% T, 2X2 afectados
frente a no afectados p=0,03 (haplotipo D). En
H0570POLYA-L3001 en el haplotipo
1-2 de familias de Cerdeña 58% T, 2X2 afectados
frente a no afectados, p=0,05 (haplotipo E).
Se determinó el genotipo de muestras que
contenían los cinco haplotipos anteriores con SNP de la región de
IDDM4 con el fin de investigar regiones de IBD (figura B).
Estos SNP confirmaron la región de IBD entre los haplotipos
susceptibles B y C entre UT5620 y 14L15CA. También
confirmaron que la región de IBD entre los haplotipos protectores y
susceptibles A y B en 3' del marcador D11S1337, excluyendo
que esta región contenga la variante etiológica. El análisis de SNP
también reveló una región de IBD potencial entre UT5620 y
TAA, entre los haplotipos susceptibles B, C, D y E, que es
distinta del haplotipo protector A (una región de 25 kb). El
marcador H0570POLYA cae dentro de este intervalo, y no es
idéntico en haplotipo E comparado con otros haplotipos
susceptibles; posiblemente esto se debe a una mutación en este
polimorfismo, o delinea un límite dentro de esta región y la
variante etiológica está en 5' o bien en 3' de este marcador. Será
necesario otro análisis de otros SNP dentro de este intervalo.
Por tanto el mapeo de haplotipo dentro de la
región de IDDM4 ha identificado una región de IBD entre los
haplotipos susceptibles B y C de 100kb, en la región en 5' del gen
de LRP5. El mapeo del haplotipo de SNP posiblemente ha delineado
adicionalmente éste a un intervalo de 25 kb que engloba la región en
5' de LRP5 que incluye posibles secuencias reguladoras para este
gen; un posible promotor, y regiones de homología con la región
sintética de ratón (tabla 12), así como el exón 1 de LRP5.
El gen LRP5 humano de longitud completa
se clonó en el vector de transferencia de adenovirus
pde1E1sp1A-CMV-bGHPA que contenía
el promotor temprano inmediato de citomegalovirus humano y la señal
de poliadenilación de la hormona de crecimiento bovina para crear
pdehlrp3. Se usó este vector para construir un adenovirus que
contenía el gen LRP5 insertado en la región E1 del virus
dirigido hacia ITR en 5'. Con el fin de acomodar un ADNc de esta
longitud, se delecionó completamente la región E3 del virus tal como
se ha descrito para pBHG10 (Bett et al.1994 Proc Natl Acad
Sci 91: 8802-8806). Se usó una estrategia idéntica
para construir un vector adenoviral que contenía el gen Lrp5
de ratón de longitud completa.
Se construyó una versión soluble de Lrp5
de ratón en el que una etiqueta de His y una señal de parada de
traducción sustituyó un posible domino de expansión transmembrana
(cebadores enumerados en la tabla 9). Esto dará como resultado la
secreción del dominio extracelular de Lrp5 y facilitara la
caracterización bioquímica del posible dominio de unión a ligando
de Lrp5. De manera similar puede construirse una versión soluble de
LRP5 humana usando cebadores mostrados en la tabla 9. El dominio
extracelular se extiende hasta el aminoácido 1385 de la secuencia de
proteína (inmadura) precursora.
LRP5 demuestra la capacidad para unirse a y
captar LDL (véase a continuación), pero esta actividad no está a
alto nivel. Por tanto, es probable que LRP5 tenga la capacidad para
unirse ligando(s) adicional(es). Para identificar
ligandos de LRP5 se purificará el dominio extracelular que está
constituido por los primeros 1399 aminoácidos de LRP5 humana, o la
región correspondiente de Lrp5 de ratón. Pueden usarse varios
sistemas de expresión que incluyen sistemas basados en plásmidos de
células S2 de Drosophila, levadura y E.coli y
sistemas basados en virus en células de mamífero y células SF9 de
insecto. Se usará una etiqueta de histidina para purificar LRP5 en
una columna de níquel (Novagen, Madison WI). Puede usarse una
variedad de resinas en cromatografía en columna para enriquecer
adicionalmente LRP5 soluble. LRP5 se unirá a un soporte sólido por
ejemplo una columna de níquel. Se fraccionarán disoluciones que
contienen ligandos de fracciones de suero, fracciones de orina, o
fracciones de extractos tisulares sobre la columna de LRP5. Se
eluirá LRP5 complejada con ligando unido de la columna de níquel
con imidizol. La naturaleza del/de los ligando(s) unidos a
LRP5 se caracterizará mediante electroforesis en gel, secuencia de
aminoácidos, composición de aminoácidos, cromatografía de gases, y
espectrofotómetro de masas.
La unión de LRP5 purificada a un chip BiaCore
2000 (BiaCore, Uppsula Suecia) se usará para determinar si los
ligandos que se unen a LRP5 están presentes en las disoluciones de
prueba. Una vez se identifican los ligandos para LRP5 el chip de
LRP5 se usará para caracterizar la cinética de interacción del
ligando de LRP5.
Se usarán vectores adenovirales que contienen
versiones solubles de LRP5 para infectar animales, el aislamiento
de complejos ligando/LRP5 a partir de suero o extractos de hígado se
facilitará mediante el uso de una etiqueta de histidina y
anticuerpos dirigidos frente a esta parte de LRP5.
Puede tratarse una amplia variedad de especies
con vectores de adenovirus que llevan un transgén. Los ratones son
la especie preferida para realizar experimentos debido a la
disponibilidad de una variedad de cepas de ratones alteradas
genéticamente, es decir ratones inactivados, transgénicos y
consanguíneos. Sin embargo pueden usarse animales más grandes por
ejemplo ratas o conejos cuando sea apropiado. Un modelo de animal
preferido para someter a prueba la capacidad de LRP5 para
modificar el desarrollo de la diabetes tipo 1 es el ratón diabético
no obeso (NOD). Modelos de animales preferidos para examinar un
papel potencial para LRP5 en el metabolismo de lipoproteínas
son los ratones en los que se han alterado elementos de la familia
de receptores de LDL, por ejemplo el receptor de LDL (LDLR),
o en los que se han alterado genes implicados en el metabolismo de
lipoproteínas, por ejemplo Apo-E.
Se administran adenovirus inyectando
aproximadamente 1 x 10^{9} de unidades formadoras de placas en la
vena de la cola de un ratón. Basándose en estudios previos esta
forma de tratamiento da como resultado la infección de hepatocitos
a una frecuencia relativamente alta. Se prepararon tres tratamientos
de adenovirus diferentes, 1.) adenovirus que no contenía inserto
(control negativo), 2.) adenovirus que contenía LDLR humano
(control positivo) o 3.) adenovirus que contenía LRP5. Cada
uno de estos virus se usó para infectar cinco ratones C57 de tipo
natural y cinco ratones C57 inactivados para LDLR. Se usó un
sangrado previo al tratamiento, 8 días antes de la inyección del
virus se usó para examinar los valores de química de suero antes del
tratamiento. Se inyectó el virus a los animales. El día cinco tras
la administración del virus se realizó un segundo (tratamiento)
sangrado y se sacrificaron los animales para la recolección de suero
para el fraccionamiento de lipoproteínas. Además, se cultivaron
tejidos para análisis in situ, histoquímica inmunológica, e
histopatología.
A lo largo del experimento, se mantuvieron los
animales en un ciclo luz/oscuridad habitual y se les administró una
dieta de comida regular. Se sometió a ayuno a los animales antes de
extraer el suero. En ciertas condiciones experimentales puede ser
deseable administrar a los animales una dieta rica en grasas.
Se realizaron ensayos clínicos habituales de
química de suero para determinar: triglicéridos séricos, colesterol
total, fosfatasa alcalina, aspartato aminotransferasa, alanina
aminotransferasa, nitrógeno en urea, y creatinina. Se realizó una
hematología para examinar los niveles circulantes de leucocitos,
neutrófilos, el porcentaje de linfocitos, monocitos y eosinófilos,
eritrocitos, plaquetas, hemoglobina y porcentaje de
hematocritos.
Se fraccionaron lipoproteínas séricas en clases
de tamaños usando una columna de exclusión por tamaño Superose 6
FPLC y las modificaciones menores del procedimiento descritas por
Gerdes et al. (Clin. Chim. Acta 205:1-9
(1992)), siendo la diferencia más significativa del procedimiento de
Gerdes que sólo se usó una columna. Se recogieron fracciones de
columna y se analizaron para determinar colesterol y triglicéridos.
Se calculó el "área bajo la curva" para cada clase de
lipoproteínas. Las fracciones de pico aproximadas que corresponden
a cada una de las clases definidas por densidad son: fracción 24
para VLDL, fracción 36 para LDL y fracción 51 para HDL.
El análisis estadístico de los datos de química
de suero indican que con respecto al virus control había una
disminución del 30%, valor de p = 0,025, en niveles de triglicéridos
en animales tratados con virus que contenía LRP5 (tabla 10).
Esta disminución de triglicéridos se produjo a un nivel similar
tanto en ratones de tipo natural como en ratones KO. Por
comparación, el virus de LDLR redujo los triglicéridos
séricos en aproximadamente un 55%, con respecto al virus control.
Este resultado indica que LRP5 tiene el potencial para
modular niveles de triglicéridos séricos.
El perfil de lipoproteínas séricas indicó que la
clase de partículas de VLDL disminuía en ratones de tipo natural
tratados con virus de LRP5. Aunque el número de muestras
analizadas no era suficiente para análisis estadísticos, este
resultado concuerda con la disminución observada de triglicéridos
séricos. Estos resultados sugieren que LRP5 tiene el potencial para
unirse e internar partículas ricas en lípidos, provocando la
disminución en triglicéridos séricos y partículas de VLDL. Por
tanto, el tratamiento con LRP5 o con agentes terapéuticos
que aumentan la expresión de LRP5 o la actividad biológica de
LRP5 pueden ser útiles para reducir partículas ricas en lípidos y
triglicéridos en pacientes con enfermedades que aumentan los niveles
de triglicéridos, por ejemplo diabetes tipo 2 y obesidad.
Aunque no estadísticamente significativa,
existía una tendencia observada hacia una reducción de los niveles
de colesterol sérico como consecuencia de tratamiento con LRP5 (28%,
p = 0,073) en ratones que tienen un nivel alto de colesterol sérico
(aproximadamente 220 mg/dl), debido a una alteración (inactivación)
del receptor de LDL (tabla 10). No se observó una tendencia
opuesta, en la que el tratamiento con LRP5 aumentó el colesterol
sérico (30%, p = 0,08) en ratones de tipo natural que tienen un
nivel relativamente bajo de colesterol sérico (aproximadamente 70
mg/dl). Los grupos de tratamiento pequeños, n = 4, en estos
conjuntos de datos limitan la interpretación de estos resultados e
indica que es necesaria más experimentación. No obstante, estos
resultados sugieren que en un estado de colesterol elevado un
aumento en la actividad de LRP5 puede reducir niveles de colesterol
sérico. Por tanto, el tratamiento con LRP5 o con agentes
terapéuticos que aumentan la expresión de LRP5 o bien la
actividad biológica de LRP5 puede ser útil para reducir colesterol
en pacientes con hipercolesterolemia.
Los niveles de fosfatasa alcalina sérica pueden
aumentarse drásticamente, por ejemplo aumento de 20 veces, como
consecuencia de una obstrucción del canal biliar (Jaffe, M. S. y
McVan, B., 1997, Davis's laboratory y diagnostic test handbook.
pub.F.A. Davis Philadelphia PA). Sin embargo, niveles inferiores,
hasta un aumento de tres veces de fosfatasa alcalina puede ser el
resultado de la respuesta inflamatoria que tiene lugar en respuesta
a un agente infeccioso en el hígado, por ejemplo adenovirus. En
animales tratados con un virus control había un aumento de
aproximadamente 2 veces en los niveles de fosfatasa alcalina. Por el
contrario, sólo había un ligero aumento en los niveles de fosfatasa
alcalina en animales tratados con el virus de LRP5. Con
respecto al control el nivel de fosfatasa alcalina disminuía en un
49% en los animales tratados con LRP5, valor de p = 0,001
(tabla 10).
El aumento en los niveles de fosfatasa alcalina
puede ser una consecuencia del nivel de infección con el adenovirus,
por tanto, una posible explicación para la disminución en los
animales tratados con el virus de LRP5 puede simplemente
deberse a menos virus en este grupo de tratamiento. Un indicador del
nivel de infección vírica es la aparición en el suero de las
enzimas hepáticas aspartato aminotransferasa y alanina
aminotransferasa. Estas enzimas normalmente se encuentran en el
citoplasma de células y están elevadas en el suero cuando se
produce daño celular (Jaffe, M. S. y McVan, B., 1997, Davis's
laboratory and diagnostic test handbook. pub. F.A. Davis
Philadelphia PA). Por tanto, estas enzimas sirven como marcadores
del nivel de toxicidad que es una consecuencia de la infección
adenoviral. Estas enzimas están presentes a un nivel normalmente
inferior antes de la infección y en animales que no recibieron el
virus. De manera importante, los niveles de aspartato
aminotransferasa y alanina aminotransferasa son superiores en los
animales a los que se les administró el virus de LRP5 lo que
indica que estos animales tienen más daño celular y por tanto una
infección más extensa que los animales a los que se les administró
el virus control (tabla 11). Por tanto, es poco probable que el
nivel reducido de fosfatasa alcalina se deba simplemente a que se
esté administrando menos virus de LRP5. Una segunda posible
explicación es que LRP5 modifica la naturaleza de la respuesta
inflamatoria que resulta de la infección por adenovirus. Un posible
papel para LRP5 en la modulación de la respuesta inflamatoria
concuerda con los datos genéticos lo que indica que este gen está
asociado con el riesgo de desarrollar diabetes tipo 1. La insulitis
crónica o inflamación es un precursor del comienzo clínico de la
diabetes tipo 1 por lo que el tratamiento con LRP5 o bien el
tratamiento con agentes terapéuticos que pueden aumentar la
transcripción de LRP5 pueden ser de utilidad para evitar la
diabetes tipo 1. La diabetes tipo 1 es una enfermedad
autoinmunitaria, por lo que el tratamiento con LRP5 o con
agentes terapéuticos que aumentan la expresión de LRP5 o
bien la actividad biológica de LRP5 puede ser útiles para tratar
otras enfermedades autoinmunitarias.
La sobreexpresión de LRP5 bajo el control
de un promotor heterólogo puede lograrse mediante infección con un
adenovirus que contiene LRP5 o bien mediante transfección con
un vector de plásmido que contiene LRP5. La transfección con
un vector de plásmido puede dar como resultado la expresión
transitoria o bien estable del transgén.
Los receptores de LDL endógenos reducen la
capacidad para detectar la incorporación de LDL por otros miembros
de la familia de receptores de LDL. Para estudiar la incorporación
de lipoproteína en ausencia del receptor de LDL, se usaron líneas
celulares primarias de pacientes humanos con hipercolesterolemia
familiar (FH). Estas líneas celulares con FH carecen de cualquier
receptor de LDL endógeno. Se infectaron fibroblastos con FH en un
MOI de 500 unidades formadoras de placas por célula durante 24 horas
a 37ºC. Tras la infección, se incubaron las células con 40
\mug/ml de ^{125}I-LDL a 37ºC. Tras 4 horas, se
lavaron las células y se midió la incorporación de LDL. Se observó
un aumento modesto (aproximadamente del 60%) en el nivel de
incorporación de LDL. Comparando, la infección de células con FH
con un receptor de LDL que contenía un adenovirus dio como resultado
un aumento de 20 veces en la incorporación de LDL (p < 0,0001, n
= 3). Para determinar si este nivel modesto de actividad mediada
por LRP5 era estadísticamente significativo, se infectaron 24
pocillos individuales con virus de LRP5 y se analizaron. El
análisis estadístico de este experimento indicó que el aumento en la
incorporación de LDL era sumamente significativo, p< 0,0001. Por
tanto LRP5 puede mediar la incorporación de LDL. Sin embargo,
basándose en el nivel modesto de actividad, con respecto al receptor
de LDL, no parece que la actividad primaria de LRP5 vaya a mediar la
incorporación de LDL.
Existen otras líneas celulares que carecen tanto
del receptor de LDL como de otros miembros de la familia de
receptores de LDL. La línea celular PEA-13 (ATCC
2216-CRL) carece de receptor LRP1. Kingsley y
Krieger han descrito células de CHO mutantes que carecen de
receptor de LDL (Proceedings National Academy Sciences USA (1984)
81:5454). Esta línea celular, conocida como ldlA_{7}, es
particularmente útil para la creación líneas celulares
transfectantes estables que expresan LRP5 recombinante.
Se evaluaron mediante análisis por
inmunotransferencia tipo Western antisueros preparados en conejos
inmunizados con los péptidos LRP5 MAP humanos
SYFHLFPPPPSPCTDSS
VDGRQNIKRAKDDGT
EVLFTTGLIRPVALVVDN
IQGHLDFVMDILVFHS
Se infectaron células COS con un adenovirus que
contenía ADNc de LRP5. Tres días después de la infección se
recolectaron las células mediante rascado en solución salina
tamponada con fosfato (Gibco/BRL Gaithersburg, MD) que contenía los
inhibidores de proteasa PMSF (100 \mug/ml), aprotinina (2
\mug/ml), y pepstatina A (1 \mug/ml). Se sedimentaron las
células mediante una centrifugación de baja velocidad, se
resuspendieron en solución salina tamponada con fosfato que
contenía inhibidores de proteasa y se lisó mediante homogeneización
Dounce. Se eliminaron los núcleos con una centrifugación de baja
velocidad, 1000 rpm durante 5 min en un rotor J-9
de Beckman. Se recogió el sobrenadante y se centrifugó a alta
velocidad, 100.000 x g durante 3 horas, para sedimentar las
membranas. Se resuspendieron las membranas en tampón de muestra SDS
(Novex, San Diego CA).
Se fraccionaron las proteínas de membrana
mediante electroforesis en un gel de acrilamida
Tris-glicina al 10% (Novex, San Diego CA). Las
proteínas fraccionadas se transfirieron a papel PVDF (Novex, San
Diego CA) según las instrucciones del fabricante. Se realizó un
análisis por inmunotransferencia tipo Western habitual sobre la
membrana siendo el anticuerpo primario una dilución 1:200 de
antisueros brutos y el anticuerpo secundario una dilución 1:3000 de
IgG anticonejo congudada con HRP (Amersham, Arlington Heights, IL).
Se usaron reactivos ECL (Amersham, Arlington Heights, IL) para
visualizar las proteínas reconocidas por los anticuerpos presentes
en los sueros.
Se detectó una banda de aproximadamente
170-180 kD por sueros de un conejo inmunizado con el
péptido SYFHLFPPPPSPCTDSS. Esta banda sólo se detectó en las
células afectadas con el adenovirus que contenía LRP5 humano
y no estaba presente en las células que estaban infectadas con un
virus control virus. Además, la detección de esta banda de 170 kD
se bloqueó por la preadsorción de una dilución 1:500 de los sueros
con 0,1 \mug/ml del péptido SYFHLFPPPPSPCTDSS pero no con 0,1
\mug/ml del péptido VDGRQNIKRAKDDGT. Por tanto esta banda proteica
de aproximadamente 170 kD detectada por el anticuerpo dirigido
contra el péptido SYFHLFPPPPSPCTDSS es LRP5 humana. El tamaño
predicho para la proteína LRP5 humana madura es de 176 kD.
Los antisueros de un conejo inmunizado con el
péptido SYFHLFPPPPSPCTDSS se purificó por afinidad con una columna
Affigel 10 (BioRad, Hercules CA) a la que se había unido
covalentemente el péptido MAPSYFHLFPPPPSPC
TDSS. Esto da como resultado un antisuero con mayor especificidad para LRP5.
TDSS. Esto da como resultado un antisuero con mayor especificidad para LRP5.
El antisuero de un conejo inmunizado con el
péptido IQGHLDFVMDILVFHS puede detectar una banda de aproximadamente
170 kD que está presente en células infectadas con un virus que
contiene LRP5 pero no células infectadas con un virus control. Este
anticuerpo reconoce un péptido que está presente en el supuesto
dominio extracelular de LRP5 y por tanto será útil para detectar la
versión soluble de LRP5. Sin embargo, existe mayor fondo observado
cuando se usa esta antisuero con respecto al de conejo inmunizado
con el péptido SYFHLFPPPPSPCTDSS.
Se usó el antisuero bruto y purificado por
afinidad frente al péptido de LRP5 SYFHLFPPPPSPCTDSS para estudios
inmunocitoquímicos en hígado humano. El anticuerpo reconoció
macrófagos tisulares, denominados células de Kupfer en el hígado,
que tiñeron positivo para LRP5 y positivo para el marcador RFD7
(Harlan Bioproducts, Indianapolis EN) que reconoce fagocitos
tisulares maduros y negativos para un marcador MHC de clase II, RFD1
(Harlan Bioproducts, Indianapolis EN). Este patrón de tinción (RFD1
- RFD7+) identifica una subpoblación de macrófagos, los fagocitos
efectores. Esta clase de macrófagos ha estado implicada en la
progresión de enfermedad en un modelo de enfermedad
autoinmunitaria, neuritis autoinmunitaria experimental (Jung. S.
et al., 1993, J Neurol Sci 119: 195-202). La
expresión en macrófagos tisulares fagocíticos apoya el papel de LRP3
en la modulación del componente inflamatorio de la respuesta
inmunitaria. Este resultado concuerda con el papel propuesto
basándose en las diferencias observadas en los niveles de fosfatasa
alcalina en animales tratados con virus de LRP5 y los datos
genéticos que indican que LRP5 es un gen de riesgo para la
diabetes.
Se usó secuenciación de ADN de alto rendimiento
de bibliotecas al azar preparadas a partir de clones BAC de ratón
131-p-15 y
53-d-8 para identificar regiones del
gen LRP5 que están conservadas entre el ratón y el hombre.
Para identificar estas regiones el ADN genómico de ratón, secuencias
no montadas o bien cóntigos montados, se comparó frente a un
montaje de ADN genómico humano. Se realizó la comparación usando el
algoritmo BLAST con un corte del 80%. Este análisis dio como
resultado la identificación de una mayoría de los exones del gen
LRP5 y se identificaron varios de parches de secuencias
conservadas en otras localizaciones en el gen (tabla 12).
Existen secuencias conservadas entre el ser
humano y el ratón localizadas en 4,3 kb y 168 pb en sentido 5' de
una supuesta ATG. Estas secuencias pueden representar secuencias no
traducidas en 5' del transcrito de ARNm o elementos promotores.
Dentro del supuesto primer intrón de 36 kb hay
doce parches que muestran un grado de conservación de secuencia de
ADN. Algunas de estas regiones, por ejemplo
41707-41903, son bastante extensas y tienen un alto
grado de conservación de secuencia, similar a la observada para los
exones del gen LRP5. Dado que estas regiones no parecen
estar transcritas es probable que las regiones conservadas
desempeñen un papel en la regulación de la transcripción del gen
LRP5 o bien en el procesamiento del transcrito de ARNm de
LRP5. Independientemente de la naturaleza exacta de su
papel, estas regiones recientemente identificadas representan áreas
en las que el polimorfismo de secuencia puede afectar la actividad
biológica de LRP5.
Se secuenció extensamente el clon BAC
131-p-15 que contiene los dos
primeros exones de LRP5, es decir aproximadamente cobertura
6X. El clon BAC 53-d-8 contiene
secuencias del exón D al exón V, sin embargo el nivel de cobertura
de secuencia de este clon fue sólo aproximadamente 1X (secuenciación
por discriminación). La secuenciación por discriminación de BAC de
ratón 53-d-8 dio como resultado la
detección de un 76% de los exones, sin embargo en algunos casos
sólo estaba presente una parte de un exón en los datos de secuencia
del ratón. Además de los exones, había tres parches en las
secuencias BAC 53-d-8 que mostraban
un grado de conservación de secuencia con las secuencias humanas
(tabla 12). Todos ellos estaban colocados en el gran intrón de 20
kb entre los exones D y E. Estas secuencias pueden representar
regiones que son importantes para el procesamiento de este gran
intrón y por tanto los polimorfismos en estas secuencias pueden
afectar el nivel de expresión de LRP5.
Pueden usarse varias técnicas para determinar la
abundancia relativa de las isoformas diferentes de corte y empalme
alternativo de LRP5.
Los análisis por transferencia de tipo Northern
de sondas derivadas de transcritos específicos se usan para
investigar tejidos para determinar la abundancia de un transcrito
particular. Se aplicarán técnicas más sensibles tales como ensayos
de protección frente a ARNasa. Se usan reactivos de kits disponibles
comercialmente (Ambion, Inc. Austin TX) para preparar sondas. La
abundancia relativa de transcrito que hibrida con una sonda
radiomarcada con
[alfa]^{32}P-UTP se analiza mediante geles de acrilamida nativos y desnaturalizantes (NovexInc., San Diego, CA). Se realizan ensayos de extensión de cebador según procedimientos establecidos (Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning, Cold Spring Harbour Press, NY) usando cebadores inversos derivados de la parte en 5' del transcrito.
[alfa]^{32}P-UTP se analiza mediante geles de acrilamida nativos y desnaturalizantes (NovexInc., San Diego, CA). Se realizan ensayos de extensión de cebador según procedimientos establecidos (Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning, Cold Spring Harbour Press, NY) usando cebadores inversos derivados de la parte en 5' del transcrito.
Se aísla el gen LRP5 de diferentes
especies, por ejemplo rata, perro, examinando una biblioteca de ADNc
con partes del gen que se han obtenido del ADNc de las especies de
interés usando cebadores de PCR diseñados a partir de la secuencia
de LRP5 humano. Se realiza PCR degenerada diseñando cebadores
de 17-20 nucleótidos con una degeneración de
32-128 veces seleccionando regiones que codifican
aminoácidos que tienen una degeneración de codones baja por ejemplo
Met y Trp. Cuando se seleccionan estos cebadores se da preferencia a
regiones que están conservadas en la proteína por ejemplo los
motivos mostrados en la figura 6b. Se analizan los productos de PCR
mediante análisis de secuencia de ADN para confirmar su similitud
con LRP5 humano. Se usa el producto correcto para examinar
bibliotecas de ADNc mediante hibridación de colonia o en placa con
alta rigurosidad. Alternativamente se usan sondas derivadas
directamente del gen LRP5 humano para aislar la secuencia de
ADNc de LRP5 de diferentes especies mediante hibridación a
rigurosidad reducida. Se genera una biblioteca de ADNc tal como se
describió
anteriormente.
anteriormente.
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| (UT5620) | |||||
| 328 | 104 | 539 | 474 | ||
| Protector | 332 | 103 | 427 | 521 | 0,002 |
| Susceptible | 332 | 104 | 60 | 33 | 0,005 |
| Protector | 328 | 103 | 16 | 31 | 0,03 |
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Cebadores colocados en el ADNc de LRP5: los
cebadores están numerados empezando en el nucleótido 1 en la figura
5(a)
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\newpage
Cebadores diseñados por rescate de
microsatélites para determinación de genotipo y mapeo de restricción
de la región IDDM4 en el cromosoma 11q13. Los otros cebadores usados
están publicados, y también están en la base de datos del
genoma.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip0.5cmE0864CA se obtuvo a partir del cósmido E0864
\hskip0.5cmH0570POLYA se obtuvo a partir del cósmido H0570
\hskip0.5cm255CA5, 255CA3 y 255CA6 se obtuvieron a partir del PAC255_m_19
\hskip0.5cm14LCA5 y L15CA1 se obtuvieron a partir del BAC 14_1_15
\hskip0.5cm18018AC se obtuvo a partir del PAC 18_o_18
\newpage
A.) Cebadores localizados en el ADNc de
LRP-3 humano:
Los cebadores están enumerados empezando en el
nucleótido 1 de la figura 5(a)
\vskip1.000000\baselineskip
B.) Cebadores de ADNc de Lrp-3
de ratón.
Los cebadores están numerados empezando en el
nucleótido 1 en la figura 18(a).
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
A.) Cebadores localizados en el ADNc de
LRP-3 humano:
Los cebadores están enumerados empezando e el
nucleótido 1 de la figura 5(a)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\global\parskip0.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(1) INFORMACIÓN GENERAL:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- SOLICITANTE:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: The Wellcome Trust Limited as Trustee to the Wellcome Trust
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: 183 Euston Road
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: Londres
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Reino Unido
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL (ZIP): NW1 2BE
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: Merck & Co., Inc.
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: 126 Lincoln Avenue
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: Rahway
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- ESTADO: Nueva Jersey
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Estados Unidos de América
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL (ZIP): 07065-0907
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: TODD, John Andrew
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: 64 Rousham Road
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: Tackley
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- ESTADO: Oxon
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Reino Unido
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL (ZIP): OX5 3AJ
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: HESS, John Wilfred
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: 566 Constitution Road
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: Lansdale
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- ESTADO: Pennsylvania
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Estados Unidos de América
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL(ZIP): 19446
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: CASKEY, Charles Thomas
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: 6402 Belmont
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: Houston
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- ESTADO: Texas
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Estados Unidos de América
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL (ZIP): 66005
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: COX, Roger David
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: Peace Cottages, 7 Park Road
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: Banbury
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- ESTADO: Oxon
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Reino Unido
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL (ZIP): OX16 ODW
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: GERHOLD, David
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: 730 Tranquility Lane
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: Lansdale
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- ESTADO: Pennsylvania
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Estados Unidos de América
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL(ZIP): 19446
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: HAMMOND, Holly
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: 621 Melvins Road
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: Telford
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- ESTADO: Pennsylvania
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Estados Unidos de América
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL (ZIP): 18969
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: HEY, Patricia
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: 1133 Bloomfield Circle
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: Lansdale
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- ESTADO: Pennsylvania
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Estados Unidos de América
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL (ZIP): 19446
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: KAWAGUCHI, Yoshihiko
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: Yamadanishi 3-33-B-206, Suita Shi
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: Osaka
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Japón
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL (ZIP): 565
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: MERRIMAN, Tony Raymond
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: 16A Cromwell Close
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: Marston
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- ESTADO: Oxford
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Reino Unido
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL(ZIP): OX3 ORW
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: METZKER, Michael Lee
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: 7400 Encampment Road
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: Lansdale
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- ESTADO: Pennsylvania
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Estados Unidos de América
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL(ZIP): 19446
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: NAKAGAWA, Yusuke
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: 17 Latimer Grange, Latimer Road
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: Headington
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- ESTADO: Oxford
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Reino Unido
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL (ZIP): OX3 7PQ
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: PHILLIPS, Michael Sean
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: 608 Poplar Court
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: Lansdale
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- ESTADO: Pennsylvania
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Estados Unidos de América
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL (ZIP): 19446
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NOMBRE: TWELLS, Rebecca Christina Joan
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- CALLE: 75 Park Street
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- CIUDAD: Thame
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- ESTADO: Oxon
\vskip0.500000\baselineskip
- (E)
- PAÍS: Reino Unido
\vskip0.500000\baselineskip
- (F)
- CÓDIGO POSTAL (ZIP): OX9 3HU
\vskip0.800000\baselineskip
- (ii)
- TÍTULO DE LA INVENCIÓN: Receptor Novedoso
\vskip0.800000\baselineskip
- (iii)
- NUMBER DE SECUENCIAS: 455
\vskip0.800000\baselineskip
- (iv)
- COMPUTER READABLE FORM:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- TIPO DE MEDIO: Disquete
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- ORDENADOR: IBM PC compatible
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- SOFTWARE: Patent En Release #1,0, Version #1,25 (EPO)
\vskip0.800000\baselineskip
- (v)
- DATOS ACTUALES DE LA SOLICITUD:
\vskip0.500000\baselineskip
- NÚMERO DE SOLICITUD: PCT/GB98/01102
\vskip0.800000\baselineskip
- (vi)
- DATOS ANTERIORES DE LA SOLICITUD:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NÚMERO DE LA SOLICITUD: US 60/043,553
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- FECHA DE PRESENTACIÓN: 15-ABR-1997
\vskip0.800000\baselineskip
- (vi)
- DATOS ANTERIORES DE LA SOLICITUD:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- NÚMERO DE SOLICITUD: US 60/048,740
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- FECHA DE PRESENTACIÓN: 05-JUN-1997
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:1:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 5098 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:1:
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:2:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 4843 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:2:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:3:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1615 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:3:
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:4:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1591 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:4:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:5:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 432 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:5:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:6:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 443 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:6:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:7:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 550 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:7:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:8:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 533 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:8:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:9:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:9:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:10:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 37 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:10:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:11:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 41 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:11:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:12:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 41 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:12:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:13:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:13:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:14:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:14:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:15:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 39 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:15:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:16:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 39 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:16:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:17:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 39 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:17:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:18:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 37 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:18:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:19:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 36 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:19:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:20:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 36 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:20:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:21:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 35 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:21:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:22:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 35 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:22:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:23:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 5166 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:23:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:24:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 4351 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:24:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:25:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1451 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:25:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:26:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 5125 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:26:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:27:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 167 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:27:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:28:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 4915 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:28:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:29:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1639 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:29:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:30:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 91 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:30:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:31:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 5263 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:31:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:32:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 5022 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:32:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:33:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 5162 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:33:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:34:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 114 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:34:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:35:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1711 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:35:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:36:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 200 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:36:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:37:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1599 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:37:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:38:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 4959 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:38:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:39:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1584 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:39:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:40:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 5117 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:40:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:41:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 4843 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:41:
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:42:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1614 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:42:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:43:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1591 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:43:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:44:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 1586 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:44:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:45:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 4 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:45:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Asn Pro Xaa Tyr}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:46:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 4 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:46:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Tyr Trp Thr Asp}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:47:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 4 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:47:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Asn Gly Gly Cys}
\newpage
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:48:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 4 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:48:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Val Pro Leu Tyr}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:49:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 17 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:49:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipATGGAGCCCG AGTGAGC
\hfill17
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:50:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:50:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipATGGTGGACT CCAGCTTGAC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:51:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:51:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTCCAGTTTT CCAAGGGAG
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:52:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:52:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAAAACTGGAA GTCCACTGCG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:53:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 18 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:53:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGTCTGCTT ATGGCCTC
\hfill18
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:54:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:54:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTGCAGAACG TGGTCATCT
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:55:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:55:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGTCCACAAT GATCTTCCGG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:56:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:56:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCAATGGACT GACCATCGAC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:57:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:57:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTCGATGGTC AGTCCATTGG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:58:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:58:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTGTCCTCCT CACAGCGAG
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:59:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:59:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGACTTCATC TACTGGACTG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:60:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:60:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCAGTCTGTCC AGTACATGAG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:61:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:61:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCCTTCTTGG TCTTCACCAG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:62:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:62:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGACCAACAG AATCGAAGTG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:63:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 17 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:63:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTCAATGGTG AGGTCGT
\hfill17
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:64:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:64:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipACACCAACAT GATCGAGTCG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:65:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:65:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipACAAGTTCAT CTACTGGGTG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:66:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:66:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCGGACACTGT TCTGGACGTG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:67:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:67:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCACGTCCAGA ACAGTGTCCG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:68:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:68:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCCAGTAGAG ATGCTTGCCA
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:69:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:69:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipATCGAGCGTG TGGAGAAGAC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:70:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:70:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCCTCATCAA ACAGCAGTGC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:71:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:71:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCGGCTTGGTG ATTTCACAC
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:72:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:72:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTGTGTGACA GCGACTACAG C
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:73:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:73:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTGTAGTCG CTGTCACACA C
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:74:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:74:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTACAAAGTT CTCCCAGCCC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:75:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:75:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCTTCTCCAG AGGATGCAGC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:76:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:76:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTCGTCTTGA ACTTCCCAGC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:77:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:77:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCTTCTTCTC CAGAGGATGC A
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:78:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:78:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGGCTGGTCT CAAACTCCTG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:79:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:79:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGGGATGTGC TGCAAGGCGA
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:80:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 22 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:80:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCAGGGTTTT CCCAGTCACG AC
\hfill22
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:81:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 25 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:81:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTGTGTGGAA TTGTGAGCGG ATAAC
\hfill25
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:82:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 25 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:82:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCCAGGCTTT ACACTTTATG CTTCC
\hfill25
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:83:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:83:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCAGGGTTTCA TCCTTTGTGG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:84:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:84:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTCA GGGTTTCATC CTTTGTGG
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:85:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:85:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC CAGGGTTTCA TCCTTTGTGG
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:86:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:86:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGACGGGAAG AGTTCCTCAG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:87:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:87:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC TGACGGGAAG AGTTCCTCAG
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:88:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:88:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCTGCTCTTC CTGAACTGCC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:89:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:89:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTTC TGCTCTTCCT GAACTGCC
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:90:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:90:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTGAGTCCTT CAACAAGCCC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:91:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:91:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACC TGATTACGCC TTGAGTCCTT CAACAAGCCC
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:92:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:92:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTTT CCCCACTCAT AGAGGCTC
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:93:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:93:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC GCTCCCAACT CGCCAAGT
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:94:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 36 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:94:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTGG TCAACATGGA GGCAGC
\hfill36
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:95:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:95:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC CAGGTGTCAG TCCGCTTG
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:96:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 35 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:96:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTGC AGAGAAGTTC TGAGC
\hfill35
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:97:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 39 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:97:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC CACTTGGCCA GCCATACTC
\hfill39
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:98:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:98:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTCA AGCAAGCCTC TTGCTACC
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:99:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:99:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC ACTGCAATGA GGTGAAAGGC
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:100:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:100:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTCA GGTGAGAACA AGTGTCCG
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:101:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:101:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC GCTGCCTCCA TGTTGACC
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:102:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 37 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:102:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTTG TGCCTGGGTG AGATTCT
\hfill37
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:103:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:103:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC TGTGGAGCCT CTATGAGTGG
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:104:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 37 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:104:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTGG GTGACAGGTG GCAGTAG
\hfill37
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:105:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:105:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC GGAAGGAAGG ACACTTGAGC
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:106:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:106:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTCC TGGTGTGTTT GAGAACCC
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:107:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 39 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:107:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC CAATGGGAAG CCAGGCTAG
\hfill39
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:108:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:108:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipATCTTGCTGG CTTAGCCAGT
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:109:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:109:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTAT CTTGCTGGCT TAGCCAGT
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:110:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:110:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC ATCTTGCTGG CTTAGCCAGT
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:111:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:111:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTCATGCAA ATTCGAGAGA G
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:112:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 41 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:112:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC GCTCATGCAA ATTCGAGAGA G
\hfill41
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:113:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:113:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCTGTTGGTT ATTTCCGATG G
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:114:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 39 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:114:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTCC TGTTGGTTAT TTCCGATGG
\hfill39
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:115:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 41 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:115:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC CCTGTTGGTT ATTTCCGATG G
\hfill41
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:116:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:116:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCTGAGTTAA GAAGGAACGC C
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:117:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 41 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:117:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC CCTGAGTTAA GAAGGAACGC C
\hfill41
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:118:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:118:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAATTGGGTCA GCAGCAATG
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:119:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 39 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:119:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGTTACGCC AATTGGGTCA GCAGCAATG
\hfill39
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:120:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:120:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAATTGGGTCA GCAGCAATG
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:121:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 37 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:121:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTAA TTGGGTCAGC AGCAATG
\hfill37
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:122:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:122:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTGGATCGCT AGAGATTGGG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:123:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:123:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC TTGGATCGCT AGAGATTGGG
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:124:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:124:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCACCCTAAT TGGCACTCA
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:125:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 39 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:125:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC GCACCCTAAT TGGCACTCA
\hfill39
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:126:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:126:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGACGGTCCT CTTCTGGAAC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:127:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:127:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC TGACGGTCCT CTTCTGGAAC
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:128:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:128:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCGAGGCAGGA TGTGACTCAT
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:129:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:129:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTCG AGGCAGGATG TGACTCAT
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:130:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:130:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC CGAGGCAGGA TGTGACTCAT
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:131:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:131:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGTGGATCAT TTCGAACGG
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:132:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 39 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:132:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC AGTGGATCAT TTCGAACGG
\hfill39
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:133:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:133:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCAACTCAGC TTCCCGAGTA
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:134:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:134:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC CCAACTCAGC TTCCCGAGTA
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:135:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:135:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGGCTGAGTA TTTCCCTTGC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:136:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:136:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTTG GCTGAGTATT TCCCTTGC
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:137:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:137:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC TGGCTGAGTA TTTCCCTTGC
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:138:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:138:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTTAACAAGC CCTCCTCCG
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:139:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 39 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:139:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC TTTAACAAGC CCTCCTCCG
\hfill39
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:140:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:140:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCAACGCCAGC ATCTACTGA
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:141:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 37 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:141:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTCA ACGCCAGCAT CTACTGA
\hfill37
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:142:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 39 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:142:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC CAACGCCAGC ATCTACTGA
\hfill39
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:143:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:143:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCAAATAGCAG AGCACAGGCA
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:144:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:144:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC CAAATAGCAG AGCACAGGCA
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:145:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:145:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGAAGTTGCT GCTCTTGGG
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:146:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 37 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:146:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTTG AAGTTGCTGC TCTTGGG
\hfill37
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:147:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 39 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:147:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC TGAAGTTGCT GCTCTTGGG
\hfill39
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:148:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:148:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCACTTCCTCC TCATGCAAGT C
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:149:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 41 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:149:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC CACTTCCTCC TCATGCAAGT C
\hfill41
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:150:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:150:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGACTGGAGC CTCTGTGTTC G
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:151:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 39 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:151:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTAG ACTGGAGCCT CTGTGTTCG
\hfill39
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:152:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 41 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:152:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC AGACTGGAGC CTCTGTGTTC G
\hfill41
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:153:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:153:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTGTGTCTA CCGGACTTGC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:154:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:154:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC TGTGTGTCTA CCGGACTTGC
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:155:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:155:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGAACAGAGGC AAGGTTTTCC C
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:156:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 41 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:156:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC GAACAGAGGC AAGGTTTTCC C
\hfill41
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:157:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:157:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGAATCGCTT GAACCCAGG
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:158:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 39 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:158:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC AGAATCGCTT GAACCCAGG
\hfill39
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:159:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:159:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTGGTTCCT AAAATGTGGC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:160:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:160:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTGC TGGTTCCTAA AATGTGGC
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:161:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:161:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC GCTGGTTCCT AAAATGTGGC
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:162:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 22 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:162:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCATACGAGGT GAACACAAGG AC
\hfill22
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:163:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 42 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:163:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC CATACGAGGT GAACACAAGG AC
\hfill42
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:164:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:164:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGAAGAGGTG GGGACAGTTG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:165:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:165:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC TGAAGAGGTG GGGACAGTTG
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:166:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:166:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTTGTGCCTT CCAGCTACAT C
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:167:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 39 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:167:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTCT TGTGCCTTCC AGCTACATC
\hfill39
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:168:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 41 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:168:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC CTTGTGCCTT CCAGCTACAT C
\hfill41
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:169:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:169:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGTCCTGGCA CAGGGATTAG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:170:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:170:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC AGTCCTGGCA CAGGGATTAG
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:171:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:171:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipATAACTGCAG CAAAGGCACC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:172:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:172:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC ATAACTGCAG CAAAGGCACC
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:173:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:173:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTTCAGTGG ATCTTGCTGG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:174:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:174:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTGC TTCAGTGGAT CTTGCTGG
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:175:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:175:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC GCTTCAGTGG ATCTTGCTGG
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:176:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:176:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTGCAGTGC ACAACCTACC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:177:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:177:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC TGTGCAGTGC ACAACCTACC
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:178:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:178:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTTGTCGAGT GGCGTGCTAT
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:179:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:179:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTGT TGTCGAGTGG CGTGCTAT
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:180:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:180:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGCCA TGATTACGCC GTTGTCGAGT GGCGTGCTAT
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:181:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:181:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAAAAGTCCTG TGGGGTCTGA
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:182:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:182:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC AAAAGTCCTG TGGGGTCTGA
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:183:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:183:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGAAGTGTGG CCTCTGCTGT
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:184:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:184:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTAG AAGTGTGGCC TCTGCTGT
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:185:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:185:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC AGAAGTGTGG CCTCTGCTGT
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:186:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:186:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTGAAAGAGC CTGTGTTTGC T
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:187:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 41 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:187:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC GTGAAAGAGC CTGTGTTTGC T
\hfill41
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:188:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:188:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGACCCTGCT TCCAAATAAG C
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:189:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 39 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:189:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTAG ACCCTGCTTC CAAATAAGC
\hfill39
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:190:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 41 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:190:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC AGACCCTGCT TCCAAATAAG C
\hfill41
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:191:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:191:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipACTCATTTTC TGCCTCTGCC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:192:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:192:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC ACTCATTTTC TGCCTCTGCC
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:193:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:193:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGGCAGTCCT GTCAACCTCT
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:194:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:194:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTTG GCAGTCCTGT CAACCTCT
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:195:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:195:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC TGGCAGTCCT GTCAACCTCT
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:196:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:196:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCACACAGGAT CTTGCACTGG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:197:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:197:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC CACACAGGAT CTTGCACTGG
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:198:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:198:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGGGCCAGTT CTCATGAGTT
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:199:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:199:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTAG GGCCAGTTCT CATGAGTT
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:200:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:200:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC AGGGCCAGTT CTCATGAGTT
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:201:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:201:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGGCAAAGGA AGACACAATC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:202:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:202:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC GGGCAAAGGA AGACACAATC
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:203:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:203:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCAACTTCTGC TTTGAAGCCC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:204:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:204:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTCA ACTTCTGCTT TGAAGCCC
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:205:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:205:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC CAACTTCTGC TTTGAAGCCC
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:206:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:206:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGACAGACTTG GCAATCTCCC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:207:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:207:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC GACAGACTTG GCAATCTCCC
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:208:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:208:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCTGCTCTCT GTTTGGAGTC C
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:209:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 39 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:209:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTTC TGCTCTCTGT TTGGAGTCC
\hfill39
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:210:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 41 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:210:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC TCTGCTCTCT GTTTGGAGTC C
\hfill41
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:211:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:211:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCCTAAACTC CACGTTCCTG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:212:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:212:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC CCCTAAACTC CACGTTCCTG
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:213:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:213:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGGTTAATGT TGGCCACATC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:214:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:214:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC GGGTTAATGT TGGCCACATC
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:215:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:215:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTGGCAGGGA TGTGTTGAG
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:216:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 37 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:216:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTTT GGCAGGGATG TGTTGAG
\hfill37
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:217:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 39 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (XI)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:217:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC TTGGCAGGGA TGTGTTGAG
\hfill39
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:218:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (XI)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:218:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTCTGCCACA TGTGCAAGAG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:219:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (XI)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:219:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC GTCTGCCACA TGTGCAAGAG
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:220:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (XI)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:220:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGGTCTGAGT CTCGTGGGTA
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:221:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (XI)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:221:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTTG GTCTGAGTCT CGTGGGTA
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:222:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (XI)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:222:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC TGGTCTGAGT CTCGTGGGTA
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:223:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (XI)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:223:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGAGGTGGATT TGGGTGAGAT T
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:224:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 41 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (XI)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:224:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC GAGGTGGATT TGGGTGAGAT T
\hfill41
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:225:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (XI)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:225:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGCCCTCTCT GCAAGGAAAG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:226:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (XI)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:226:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTAG CCCTCTCTGC AAGGAAAG
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:227:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:227:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGCCA TGATTACGCC AGCCCTCTCT GCAAGGAAAG
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:228:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:228:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCAGAACGTGG AGTTCTGCTG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:229:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:229:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC CAGAACGTGG AGTTCTGCTG
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:230:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:230:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTACCGAATCC CACTCCTCTG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:231:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:231:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTTA CCGAATCCCA CTCCTCTG
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:232:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:232:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC TACCGAATCC CACTCCTCTG
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:233:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:233:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCATGGTAGAG GTGGGACCAT
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:234:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:234:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTCA TGGTAGAGGT GGGACCAT
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:235:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:235:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGTTACGCC CATGGTAGAG GTGGGACCAT
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:236:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:236:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGATATCCACC TCTGCCCAAG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:237:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:237:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC GATATCCACC TCTGCCCAAG
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:238:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:238:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTACAGGGGC ACAGAGAAGC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:239:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:239:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC TTACAGGGGC ACAGAGAAGC
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:240:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:240:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCAACAGAGC AAGACCCTGT
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:241:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:241:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC GCAACAGAGC AAGACCCTGT
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:242:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:242:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAAATTAGCCA GGCATGGTG
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:243:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 39 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:243:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC AAATTAGCCA GGCATGGTG
\hfill39
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:244:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:244:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTGC AACAGAGCAA GACCCTGT
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:245:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:245:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCTGCAGAAG GAAACCTGAC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:246:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:246:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTCGCC CCTGCAGAAG GAAACCTGAC
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:247:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:247:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTGCATCTTT GCCACCATG
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:248:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 39 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:248:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC CTGCATCTTT GCCACCATG
\hfill39
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:249:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:249:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTCC TGCAGAAGGA AACCTGAC
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:250:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:250:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTCCCAGGAG GCAAGTTATG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:251:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:251:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC TTCCCAGGAG GCAAGTTATG
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:252:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:252:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGGGCTTAGG TGATCCTCAC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:253:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:253:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC TGGGCTTAGG TGATCCTCAC
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:254:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:254:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTTT CCCAGGAGGC AAGTTATG
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:255:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:255:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipACCAAGCCCA ACTAATCAGC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:256:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:256:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC ACCAAGCCCA ACTAATCAGC
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:257:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:257:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipATGCCTGTAA TCCCAGCACT
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:258:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:258:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC ATGCCTGTAA TCCCAGCACT
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:259:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 38 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:259:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGTAC CAAGCCCAAC TAATCAGC
\hfill38
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:260:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:260:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipACTGCAAGCC CTCTCTGAAC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:261:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:261:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCGAAGACTGC GAAACAGACA
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:262:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:262:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTAGTGCCGT GCAGAATGAG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:263:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:263:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGCCACTGCA ATGAGATACA
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:264:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:264:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGAGAAACAGT TCCAGGGTGG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:265:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:265:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC GAGAAACAGT TCCAGGGTGG
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:266:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:266:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAAACTGAGGC TGGGAGAGGT
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:267:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:267:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC AAACTGAGGC TGGGAGAGGT
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:268:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:268:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTTCTTCCT CACAGGGAGG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:269:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:269:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC TGTTCTTCCTT CACAGGGAGG
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:270:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:270:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCCCCAAATC TGTCCGTTC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:271:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:271:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC TCCCCAAATC TGTCCAGTTC
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:272:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:272:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCATACCTGGA GGGATGTTG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:273:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:273:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC CATACCTGGA GGGATGCTTG
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:274:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:274:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTAGGTTGCTG TGTGGCTTCA
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:275:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:275:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC TAGGTTGCTG TGTGGCTTCA
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:276:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:276:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTTCTGACAA AGCAGAGGCC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:277:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:277:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC CTTCTGACAA AGCAGAGGCC
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:278:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:278:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTGTTAGGG TTACCATCGC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:279:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:279:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC GCTGTTAGGG TTACCATCGC
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:280:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:280:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCACAGGGTG ATATGCTGTC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:281:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:281:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC CCACAGGGTG ATATGCTGTC
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:282:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:282:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCGCCTGGCTA CTTTGGTACT
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:283:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:283:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC CGCCTGGCTA CTTTGGTACT
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:284:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:284:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCAAATGAAC CTGGGCAAC
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:285:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 39 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:285:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC CCAAATGAAC CTGGGCAAC
\hfill39
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:286:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:286:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTCTTGGCTC ACTGCAACCT
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:287:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:287:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC GTCTTGGCTC ACTGCAACCT
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:288:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:288:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCCAAGACTG TGCTACTGCA
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:289:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:289:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCAGGGAGCAG ATCTTACCCA
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:290:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:290:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGGGATTAAC TAGGGAGGGG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:291:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:291:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC TGGGATTAAC TAGGGAGGGG
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:292:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:292:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGCTGCTGTC TCCATCTCTG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:293:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:293:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC TGCTGCTGTC TCCATCTCTG
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:294:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:294:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipACAGACCAGC AGTGAAACCT G
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:295:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 41 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:295:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC ACAGACCAGC AGTGAAACCT G
\hfill41
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:296:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:296:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTTCACTGCA ACCTCTGCCT
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:297:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:297:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC GTTCACTGCA ACCTCTGCCT
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:298:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:298:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTTCTCGTAG ATGCTTGCAG G
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:299:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 41 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:299:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC GTTCTCGTAG ATGCTTGCAG G
\hfill41
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:300:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:300:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGAGGCAGGAG GATCACTTGA
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:301:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:301:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC GAGGCAGGAG GATCACTTGA
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:302:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:302:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGAGCTGAGA TCACACCGCT
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:303:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:303:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC TGAGCTGAGA TCACACCGCT
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:304:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:304:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGTTGACACT TTGCTGGCCT
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:305:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:305:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC AGTTGACACT TTGCTGGCCT
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:306:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:306:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTCTGCATGG CTTAGGGACA
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:307:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:307:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC CTCTGCATGG CTTAGGGACA
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:308:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:308:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGCTGCTCTC TGCATTCTCT
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:309:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:309:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC GGCTGCTCTC TGCATTCTCT
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:310:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:310:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTGGCTTTAG CTTGCATTTC C
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:311:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 41 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:311:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC CTGGCTTTAG CTTGCATTTC C
\hfill41
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:312:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:312:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGCCTCAGTT TTCTCACCTG T
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:313:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 41 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:313:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC TGCCTCAGTT TTCTCACCTG T
\hfill41
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:314:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:314:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCAAACAGCCA CTGAGCATGT
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:315:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:315:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC CAAACAGCCA CTGAGCATGT
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:316:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:316:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCCTCCTGTA GATGCCCAAG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:317:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 40 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:317:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC TCCTCCTGTA GATGCCCAAG
\hfill40
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:318:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 22 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:318:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCCGAGAATT GTCATCTTAA CT
\hfill22
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:319:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 22 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:319:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGATTGAAAG CTGCAAACTA CA
\hfill22
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:320:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:320:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGAGCCACCA CATCCAGTTA
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:321:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 18 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:321:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGGAGGGATT GCTTGAGG
\hfill18
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:322:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:322:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGGTGTACAC CACCATGCCT
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:323:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:323:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGGTGCCAAT TATTGCTGC
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:324:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 22 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:324:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGATCTTATA CACATGTGCG CG
\hfill22
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:325:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:325:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGGTGACATC ACTTACAGCG G
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:326:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 18 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:326:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipATTACCCAGG CATGGTGC
\hfill18
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:327:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:327:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCAGGCACTTC TTCCAGGTCT
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:328:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:328:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGGGTTACAC TGGAGTTTGC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:329:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 25 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:329:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAAACCTTCAA TGTGTTCATT AAAAC
\hfill25
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:330:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:330:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCAACTTTAT TGGGGGTTTA
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:331:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:331:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAAGGTAAAAG TCCAAAATGG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:332:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:332:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGACAGTCAG TTATTGAAAT G
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:333:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:333:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTTTCCTCTCT GGGAGTCTCT
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:334:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:334:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCAAGCTGGA GTCCACCATC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:335:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:335:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCACTCGCTGT GAGGAGGAC
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:336:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:336:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipACAACGGCAG GACGTGTAAG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:337:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:337:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipATTGCCATCG ACTACGACC
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:338:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:338:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGGTCAACAC CGAGATCAAC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:339:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:339:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAACCTCTACT GGACCGACAC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:340:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:340:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTCATGTAC GGACAGACT
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:341:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:341:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGAGACGCCAA GACAGACAAG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:342:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:342:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCAGTCCAGTA GATGAAGTCC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:343:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:343:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTGAAGAAGC ACAGGTGGCT
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:344:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:344:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCATGTCACT CAGCAGCTCC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:345:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:345:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCGTTGTTGT GCATACAGTC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:346:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:346:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTGGCACATG CAAACTGGTC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:347:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 28 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:347:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTCTAGAGT ACAAAGTTCT CCCAGCCC
\hfill28
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:348:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 54 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:348:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipATCCTCGGGG TCTTCCGGGG CGAGTTCTGG CTGGCTACTG CTGTGGGCCG GGCT
\hfill54
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:349:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 54 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:349:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGGATATCTC AGTGGTGGTG GTGGTGGTGC TCGACATCCT CGGGGTCTTC CGGG
\hfill54
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:350:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 35 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:350:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTAGAATTCGC CGCCACCATG GAGGCAGCGC CGCCC
\hfill35
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:351:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 17 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:351:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGAGGCGGGAG CAAGAGG
\hfill17
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:352:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 26 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:352:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCAAGCTTCA TGGAGCCCGA GTGAGC
\hfill26
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:353:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 17 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:353:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipATGGAGCCCG AGTGAGC
\hfill17
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:354:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 17 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:354:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCACTCGGGC TCCATGG
\hfill17
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:355:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:355:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGCTGTACTG CAGCTTGGTC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:356:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:356:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipATGCAGCTGC TGTAGACTTC C
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:357:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:357:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTCTGTTTGA TGGCCTCCTC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:358:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:358:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipATGTTCTGTC CAGCACCTCC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:359:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 18 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:359:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCCATCAGGT GACACGAG
\hfill18
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:360:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:360:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAAGGTTCTCT TCTGGCAGGA C
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:361:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:361:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCAGTCAGTC CAGTACATG
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:362:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:362:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCGACCTGGA GGAACAGAAG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:363:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:363:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAAGCTCAGCT TCATCCACCG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:364:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:364:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipATGAAGCTGA GCTTGGCATC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:365:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 22 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:365:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGCAGAGGAA GGAGATCCTT AG
\hfill22
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:366:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:366:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCCATGGGTG AGTACAGAGC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:367:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:367:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipATTGTCCTGC AACTGCACAC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:368:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:368:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCCATTGCCA TTGACTACG
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:369:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:369:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGATCGTAGT CAATGGCAAT G
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:370:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:370:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGAATTGAGGT GACTCGCCTC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:371:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:371:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCTCAATTCT GTAGTGCCTG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:372:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:372:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTGTTGCAC CCTGTGATG
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:373:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:373:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipATCTAGGTTG GCGCATTCG
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:374:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:374:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGGTGTTCAC CAGGACATG
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:375:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 29 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:375:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCGAGCTCCC GTCTATGTTG ATCACCTCG
\hfill29
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:376:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:376:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGACCTGATGG GACTCAAAGC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:377:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:377:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTGGTGAAT ACCAGGAAGG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:378:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:378:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipACGATGTGGC TATCCCACTC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:379:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:379:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGTAGGATCC AGAGCCAGAG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:380:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:380:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGCGCATGGT GATAGCTGAC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:381:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:381:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCGTTCAATGC TATGCAGGTT C
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:382:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:382:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTGCTTCACA CTACACGCTG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:383:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:383:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCAGCCAGAAA TTTGCCATC
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:384:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:384:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCCGGCTGTA GATGTCAATG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:385:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:385:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGGCCACCAA CACTATCAAT G
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:386:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:386:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTACCCTCGCT CAGCATTGAC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:387:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:387:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTGGAAGATG CCAACATCG
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:388:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:388:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGAACCCTAG TCCGCTTGTC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:389:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:389:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTGCAGAACC TGCTGACTTG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:390:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:390:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCAGAGTGAT GAAGAAGGCT G
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:391:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:391:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCACTCTGGT CAGCACACTC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:392:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:392:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCAGGATCGCT CTGATGAAGC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:393:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:393:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCAGTTAGCT TCATCAGAGC G
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:394:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:394:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipACCCTCTGAT GACATCCCAG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:395:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 18 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:395:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAATGGCACTG CTGTGGGC
\hfill18
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:396:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:396:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGGCTCATGG AGCTCATCAC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:397:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:397:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipATAGTGTGGC CTTTGTGCTG
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:398:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:398:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTCATTCGAG GTATGGCACC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:399:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 21 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:399:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGGTAGTATTT GCTGCTCTTC C
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:400:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 27 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:400:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTCTAGAAA AGTTTCCCAG CCCTGCC
\hfill27
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:401:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 19 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:401:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTGGAAGATG CCAACATCG
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:402:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 62 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:402:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:403:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 17 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:403:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Tyr Phe His Leu Phe Pro Pro Pro Pro Ser
Pro Cys Thr Asp Ser}
\sac{Ser}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:404:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 15 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:404:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Val Asp Gly Arg Gln Asn Ile Lys Arg Ala Lys
Asp Asp Gly Thr}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:405:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 18 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:405:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Glu Val Leu Phe Thr Thr Gly Leu Ile Arg Pro
Val Ala Leu Val Val}
\sac{Asp Asn}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:406:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 aminoácidos
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: aminoácido
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:406:
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ile Gln Gly His Leu Asp Phe Val Met Asp Ile
Leu Val Phe His Ser}
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:407:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 27 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:407:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCATCCTAAT ACGACTCACT ATAGGGC
\hfill27
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:408:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 23 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:408:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipACTCACTATA GGGCTCGAGC GGC
\hfill23
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:409:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 18 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:409:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTAAAACGA CGGCCAGT
\hfill18
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:410:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 20 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: sencilla
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:410:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCTATGACCA TGATTACGCC
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:411:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:411:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCGGGTCAAC ATGGAG
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:412:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:412:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCGCGGGTAG GTGGGC
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:413:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:413:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGCCCCACAG CCTCGC
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:414:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:414:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCACGGGTAA ACCCTG
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:415:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:415:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCCGTCACAG GTACAT
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:416:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:416:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTTCCGGTAG GTACCC
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:417:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:417:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTGACTGCAG GCAGAA
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:418:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:418:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTTTCTGTGA GTGCCG
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:419:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:419:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTTTTCCCAG TCCACA
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:420:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:420:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGGCAGGTGA GGCGGT
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:421:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:421:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTCTCCACAG GAGCCG
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:422:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:422:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGATGGGGTAA GACGGG
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:423:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:423:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCTTCTCCAG CCTCAT
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:424:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:424:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipATCGAGGTGA GGCTCC
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:425:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:425:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCGTCCTGCAG GTGATC
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:426:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:426:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCGTCGGTGA GTCCGG
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:427:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:427:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCGCTTCCAG GAACCA
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:428:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:428:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTGAAGGTAG CGTGGG
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:429:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:429:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTGCTGCCAG ACCATC
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:430:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:430:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCAAGGGGTAA GTGTTT
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:431:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:431:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGCCTTCCAG CTACAT
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:432:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:432:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGCTGGGTGA GGGCCG
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:433:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:433:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTTCATGCAG GTCAGG
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:434:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:434:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCAGCCGTAA GTGCCT
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:435:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:435:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCTCCTCTAG CGCCCA
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:436:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:436:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipACCCAGGCAG GTGCCC
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:437:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:437:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTCTTACAG CCCTTT
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:438:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:438:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGCGAGGGTAG GAGGCC
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:439:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:439:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCTCCCGCAG GTACCT
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:440:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:440:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTCAGGTAA GGGGCC
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:441:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:441:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTGCTTGCAG GGGCCA
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:442:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:442:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipAGTTCTGTAC GTGGGG
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:443:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:443:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTCTTTGCAG CAGCCC
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:444:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:444:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTGGAGGTAG GTGTGA
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:445:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:445:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCTCCCCCAG AGCCGC
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:446:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:446:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTGACGGTGA GGCCCT
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:447:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:447:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCCCTTGCAG CCATCT
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:448:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:448:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTGTGTGGTGA GCCAGC
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:449:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:449:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCTCTGGCAG AAATCA
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:450:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:450:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCACAGGTAA GGAGCC
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:451:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:451:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCCCTGCCAG GCATCG
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:452:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:452:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCCGCCGGTGA GGGGCG
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:453:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:453:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipCTCTCCTCAG ATCCTG
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:454:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:454:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipGTACAGGTAG GACATC
\hfill16
\vskip1.000000\baselineskip
(2) INFORMACIÓN PARA LA SEQ ID NO:455:
\vskip0.800000\baselineskip
- (i)
- CARACTERÍSTICAS DE SECUENCIA:
\vskip0.500000\baselineskip
- (A)
- LONGITUD: 16 pares de bases
\vskip0.500000\baselineskip
- (B)
- TIPO: ácido nucleico
\vskip0.500000\baselineskip
- (C)
- TIPO DE CADENA: doble
\vskip0.500000\baselineskip
- (D)
- TOPOLOGÍA: lineal
\vskip0.800000\baselineskip
- (xi)
- DESCRIPCIÓN DE LA SECUENCIA: SEQ ID NO:455:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipTCCCTTTCAG GCCCTA
\hfill16
Claims (24)
1. Una molécula de ácido nucleico aislado que
codifica un polipéptido que incluye la secuencia de aminoácidos
mostrada en la figura 5(e).
2. Una molécula de ácido nucleico según la
reivindicación 1 en la que el polipéptido incluye la secuencia de
aminoácidos mostrada en la figura 5(c).
3. Una molécula de ácido nucleico según la
reivindicación 2 que incluye la secuencia codificante mostrada en la
figura 5(a).
4. Una molécula de ácido nucleico aislado que
codifica una LRP5 que incluye la secuencia de aminoácidos de la
figura 5(e), hibridándose el ácido nucleico en condiciones
rigurosas con la secuencia de ácido nucleico mostrada en la figura
5(a), comprendiendo las condiciones rigurosas la hibridación
durante la noche a 42ºC en Na_{2}HPO_{4} 0,25 M, pH
7-2, SDS al 6,5%, sulfato de dextrano al 10% y
lavado a 55ºC en 0,1xSSC, SDS al 0,1%.
5. Una molécula de ácido nucleico que codifica
un polipéptido en la que dicho polipéptido incluye la secuencia de
aminoácidos de un polipéptido seleccionado de los mostrados en la
figura 11(c), la figura 12(d) y la figura
18(c).
6. Una molécula de ácido nucleico según la
reivindicación 5 que incluye una secuencia codificante seleccionada
de las secuencias de nucleótidos mostradas en la figura
11(b), la figura 12(c), la figura 13, la figura 14, la
figura 15(a) y la figura 18(b).
7. Una molécula de ácido nucleico según la
reivindicación 6 en la que la secuencia codificante es la mostrada
en la figura 11(b), incluida en una molécula que tiene la
secuencia mostrada en la figura 11(a).
8. Un polipéptido aislado que incluye la
secuencia de aminoácidos mostrada en la figura 5(e).
9. Un polipéptido según la reivindicación 8 que
incluye la secuencia de aminoácidos mostrada en la figura
5(c).
10. Un polipéptido según la reivindicación 8 o
la reivindicación 9 en el que dicho polipéptido incluye la secuencia
de aminoácidos de un polipéptido seleccionado del mostrado en la
figura 11(c), la figura 12(d) y la figura
18(c).
11. Un fragmento de un polipéptido según la
reivindicación 9 ó 10 que tiene una secuencia de aminoácidos
seleccionada de:
SYFHLFPPPPSPCTDSS,
VDGRQNIKRAKDDGT,
EVLFTTGLIRPVALVVDN, y
IQGHLDFVMDILVFHS.
12. Un fragmento de un polipéptido según la
reivindicación 9 ó 10 que incluye la secuencia de aminoácidos del
dominio extracelular de LRP5 de los residuos de aminoácidos 25 a
1385 de la secuencia de aminoácidos mostrada en la figura
5(d).
13. Un fragmento de un polipéptido según la
reivindicación 9 ó 10 que incluye la secuencia de aminoácidos del
dominio citoplasmático de LRP5 de los residuos de aminoácidos 1409 a
1615 de la secuencia de aminoácidos mostrada en la figura
5(d).
14. Un procedimiento recombinante de producción
de un polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10
que incluye la expresión del polipéptido del ácido nucleico
codificante.
15. Un procedimiento recombinante según la
reivindicación 14 que además incluye aislar y/o purificar el
polipéptido.
16. Un procedimiento recombinante según la
reivindicación 14 o la reivindicación 15 que además incluye formular
el polipéptido en una composición que incluye al menos un componente
adicional.
17. Una composición que incluye un polipéptido
según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10 y un excipiente
farmacéuticamente aceptable.
18. Un procedimiento de producción de un
fragmento según cualquiera de las reivindicaciones 11 a 13 que
incluye la expresión del fragmento del ácido nucleico
codificante.
19. Un procedimiento según la reivindicación 18
que además incluye aislar y/o purificar el fragmento.
20. Un procedimiento según la reivindicación 18
o la reivindicación 19 que además incluye formular el fragmento en
una composición que incluye al menos un componente adicional.
21. Una composición que incluye una molécula de
ácido nucleico según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y un
excipiente farmacéuticamente aceptable.
22. Un anticuerpo aislado específico para un
polipéptido según cualquiera de las reivindicaciones 8 a 10.
23. Un anticuerpo aislado según la
reivindicación 22 que se une a una secuencia de aminoácidos
seleccionada de:
SYFHLFPPPPSPCTDSS,
VDGRQNIKRAKDDGT,
EVLFTTGLIRPVALVVDN, y
IQGHLDFVMDILVFHS.
24. Una composición que incluye un anticuerpo
según la reivindicación 22 o la reivindicación 23 y un excipiente
farmacéuticamente aceptable.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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