ES2268441T3 - 3-ariltio-3-tiazolil-alquilaminas antiinflamatorias. - Google Patents

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Abstract

Un compuesto de fórmula (I) (Ver fórmula) en la que: T y W representan independientemente CR 1 o N; y cuando hay más de un grupo R 1 , cada uno se puede seleccionar independientemente; X y R I representan independientemente H, alquilo de C1 a 4, alcoxi de C1 a 4, halógeno, CN, C equivalente CH, NO2, CHO, COCH3 o NHCHO; estando dicho grupo alquilo o alcoxi op-cionalmente sustituido además con uno o más átomos de flúor; Y representa alquilo de C1 a 4, alcoxi de C1 a 4, halógeno, CN, C equivalente CH, NO2, CHO, COCH3 o NHCHO; estando dicho grupo alquilo o alcoxi opcionalmente sustituido además con uno o más átomos de flúor; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

3-Ariltio-3-tiazolil-alquilaminas antiinflamatorias.
Campo de la invención
La presente invención se refiere a nuevos derivados de ariltiazoliltioalquilaminas, a procedimientos para su preparación, a composiciones que los contienen, y a su uso en terapia.
Antecedentes de la invención
El óxido nítrico se produce en células de mamíferos a partir de L-arginina mediante la acción de óxido nítrico sintasas (NOS) específicas. Estas enzimas se encuadran en dos clases distintas - NOS constitutivas (cNOS) y NOS inducibles (iNOS). Actualmente, se han identificado dos NOS constitutivas y una NOS inducible. De las NOS constitutivas, una enzima endotelial (ecNOS) está implicada en la relajación del músculo liso y en la regulación de la tensión arterial y del flujo sanguíneo, mientras que la enzima neuronal (ncNOS) sirve como un neurotransmisor y parece que está implicada en la regulación de diversas funciones biológicas tales como la isquemia cerebral. La NOS inducible se ha implicado particularmente en la patogénesis de enfermedades inflamatorias. Por lo tanto, la regulación de estas enzimas debería de ofrecer un potencial considerable en el tratamiento de una amplia variedad de enfermedades (J. E. Macdonald, Ann. Rep. Med. Chem., 1996, 31, 221-230).
Se ha dedicado un esfuerzo considerable para identificar compuestos que actúan como inhibidores específicos de una o más isoformas de la enzima óxido nítrico sintasa. El uso de tales compuestos en terapia también se ha reivindicado ampliamente.
La Solicitud de Patente WO 02/090332 describe ciertos derivados de arilheteroalquilaminas que son útiles como inhibidores de NOS. Ahora se ha encontrado que ciertos compuestos que están dentro del alcance genérico de esta Solicitud, pero que no están ejemplificados específicamente allí, poseen propiedades ventajosas sorprendentes. Estos compuestos son el objeto de la presente Solicitud.
Descripción de la invención
Según la presente invención, se proporciona un compuesto de fórmula (I)
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1 
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en la que:
T y W representan independientemente CR^{1} o N; y cuando hay más de un grupo R^{1}, cada uno se puede seleccionar independientemente;
X y R^{1} representan independientemente H, alquilo de C1 a 4, alcoxi de C1 a 4, halógeno, CN, C\equivCH, NO_{2}, CHO, COCH_{3} o NHCHO; estando dicho grupo alquilo o alcoxi opcionalmente sustituido además con uno o más átomos de flúor;
Y representa alquilo de C1 a 4, alcoxi de C1 a 4, halógeno, CN, C\equivCH, NO_{2}, CHO, COCH_{3} o NHCHO; estando dicho grupo alquilo o alcoxi opcionalmente sustituido además con uno o más átomos de flúor;
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En una realización, Y representa CN o halógeno.
En una realización, X y R^{1} representan independientemente H, halógeno o CF_{3}.
Los compuestos de fórmula (I), y sus sales farmacéuticamente aceptables, tienen la ventaja de que son inhibidores de la enzima óxido nítrico sintasa (NOS). En particular, los compuestos de fórmula (I), y sus sales farmacéuticamente aceptables, tienen la ventaja de que son inhibidores de la isoforma inducible de la enzima óxido nítrico sintasa
(iNOS).
La invención proporciona además un procedimiento para la preparación de compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable, enantiómero o racemato de los mismos.
Según la invención, también se proporciona un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso como un medicamento.
Otro aspecto de la invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento, para el tratamiento o profilaxis de enfermedades o patologías en las que es beneficiosa la inhibición de la actividad de la óxido nítrico sintasa.
Un aspecto más particular de la invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento, para el tratamiento o profilaxis de una enfermedad inflamatoria.
Según la invención, también se proporciona un método para tratar o reducir el riesgo de enfermedades o patologías en las que es beneficiosa la inhibición de la óxido nítrico sintasa, que comprende administrar, a una persona que sufre o tiene riesgo de sufrir dicha enfermedad o patología, una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Más particularmente, también se proporciona un método para tratar, o reducir el riesgo de, una enfermedad inflamatoria en una persona que sufre o tiene riesgo de sufrir dicha enfermedad, en el que el método comprende administrar a la persona una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Los compuestos de la presente invención también se pueden usar ventajosamente en combinación con una segunda sustancia farmacéuticamente activa; particularmente, en combinación con un inhibidor de ciclooxigenasa; más particularmente en combinación con un inhibidor selectivo de la isoforma inducible de ciclooxigenasa (COX-2). De este modo, en un aspecto adicional de la invención, se proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un inhibidor de COX-2 para el tratamiento de la inflamación, de la enfermedad inflamatoria y de trastornos relacionados con la inflamación. Y también se proporciona un método para tratar, o reducir el riesgo de, una inflamación, una enfermedad inflamatoria y trastornos relacionados con la inflamación, en una persona que sufre o tiene riesgo de sufrir dicha enfermedad o patología, en el que el método comprende administrar a la persona una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un inhibidor de COX-2.
Los compuestos particulares de la invención incluyen:
2-[[(1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1-(5-tiazolil)butil]tio]-5-cloro-3-piridincarbonitrilo;
2-[[(1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1-(5-tiazolil)butil]tio]-4-cloro-benzonitrilo;
(2S,4R)-2-amino-4-[[2-cloro-5-(trifluorometil)fenil]-tio]-5-tiazolbutanol;
2-[[(1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1-(5-tiazolil)butil]tio]-6-(trifluorometil)-3-piridincarbonitrilo;
2-[[(1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1-(5-tiazolil)butil]tio]-5-cloro-benzonitrilo;
y sus sales farmacéuticamente aceptables.
Excepto que se indique de otro modo, la expresión "alquilo de C1 a 4" citada aquí significa un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada, que tiene de 1 a 4 átomos de carbono. Los ejemplos de tales grupos incluyen metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, i-butilo y t-butilo.
Excepto que se indique de otro modo, la expresión "alcoxi de C1 a 4", citada aquí, significa un grupo alcoxi de cadena lineal o ramificada, que tiene de 1 a 4 átomos de carbono. Los ejemplos de tales grupos incluyen metoxi, etoxi, n-propoxi, i-propoxi y t-butoxi.
Excepto que se indique de otro modo, el término "halógeno" citado aquí significa fluoro, cloro, bromo y yodo.
Los ejemplos de un "alquilo de C1 a 4 o alcoxi de C1 a 4 opcionalmente sustituido además con uno o más átomos de flúor" incluyen CH_{2}F, CHF_{2}, CF_{3}, CF_{3}CF_{2}, CF_{3}CH_{2}, CH_{2}FCH_{2}, CH_{3}CF_{2}, CF_{3}CH_{2}CH_{2}, OCF_{3} y OCH_{2}CF_{3}.
Según la invención, se proporciona además un procedimiento para la preparación de compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable, enantiómero o racemato del mismo, que comprende:
(a)
hacer reaccionar un compuesto de fórmula (II)
2
en la que T, X, Y y W son como se definen en la fórmula (I), y L^{1} representa un grupo saliente, con un compuesto de fórmula (III)
3 
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4
o
(b)
hacer reaccionar un compuesto de fórmula (IV)
5
en la que T, W, X e Y son como se definen en la fórmula (I), con un compuesto de fórmula (V)
6
en la que L^{2} es un grupo saliente;
y, cuando se desee o sea necesario, convertir el compuesto resultante de fórmula (I), u otra sal del mismo, en una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o convertir un compuesto de fórmula (I) en otro compuesto de fórmula (I); y, cuando se desee, convertir el compuesto resultante de fórmula (I) en un isómero óptico del mismo.
En el procedimiento (a), la reacción se realiza tratando un nucleófilo de fórmula (III) con un electrófilo de fórmula (II), en un disolvente inerte. Los grupos salientes L^{1} adecuados incluyen sulfonatos y haluros, particularmente fluoruro o cloruro. La reacción se realiza generalmente en presencia de una base no nucleófila, tal como hidruro de sodio o carbonato de cesio. Los disolventes orgánicos adecuados son aquellos tales como N,N-dimetilformamida, N-metil-2-pirrolidinona, tetrahidrofurano y dimetilsulfóxido. La reacción se realiza generalmente a una temperatura entre 0ºC y el punto de ebullición del disolvente.
En el procedimiento (b), los agentes reaccionantes (IV) y (V) se acoplan entre sí, en un disolvente inerte adecuado, tal como tetrahidrofurano, usando, por ejemplo, las condiciones de Mitsunobu. De este modo, por ejemplo, los agentes reaccionantes se tratan con un derivado de fosfina y un derivado azo a una temperatura adecuada, generalmente entre 0ºC y el punto de ebullición del disolvente. Los derivados de fosfina adecuados incluyen trifenilfosfina y tributilfosfina. Los azoderivados adecuados incluyen azodicarboxilato de dietilo, azodicarboxilato de diisopropilo y 1,1'-(azodicarbonil)dipiperidina. Los grupos salientes L^{2} adecuados incluyen hidroxi.
Como alternativa, en el procedimiento (b), la reacción se realiza tratando un nucleófilo de fórmula (IV) con un electrófilo de fórmula (V), en un disolvente inerte. Los grupos salientes L^{2} adecuados incluyen sulfonatos y haluros, particularmente cloruro o bromuro. La reacción se realiza generalmente en presencia de una base no nucleófila, tal como hidruro de sodio o carbonato de cesio. Los disolventes orgánicos adecuados son aquellos tales como N,N-dimetilformamida, N-metil-2-pirrolidinona, tetrahidrofurano y dimetilsulfóxido. La reacción se realiza generalmente a una temperatura entre 0ºC y el punto de ebullición del disolvente.
Será manifiesto para la persona experta en la técnica que, en los procedimientos anteriores, puede ser deseable o necesario proteger un grupo amina o hidroxilo u otro grupo potencialmente reactivo. Los grupos protectores adecuados, y los detalles de los procedimientos para añadir y eliminar tales grupos, se pueden encontrar haciendo referencia al texto estándar "Protective Groups in Organic Synthesis", 3ª Edición (1999) de Greene y Wuts.
En una realización preferida, los grupos amina se protegen como derivados de carbamato, por ejemplo como t-butiloxicarbamatos.
En otra realización particularmente preferida, los grupos amina e hidroxilo de los compuestos de fórmula (I) se protegen simultáneamente como hemiaminales cíclicos, como en la fórmula (VI).
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En la sección de Ejemplos se dan ejemplos específicos del uso de grupos protectores.
La presente invención incluye compuestos de fórmula (I) en forma de sales, en particular sales de adición de ácidos. Las sales adecuadas incluyen las formadas tanto con ácidos orgánicos como inorgánicos. Tales sales de adición de ácidos normalmente serán sales farmacéuticamente aceptables, aunque pueden ser de utilidad las sales de ácidos no farmacéuticamente aceptables en la preparación y purificación del compuesto en cuestión. De este modo, las sales preferidas incluyen las formadas a partir de ácidos clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, fosfórico, cítrico, tartárico, láctico, pirúvico, acético, succínico, fumárico, maleico, metanosulfónico y bencenosulfónico.
Las sales de los compuestos de fórmula (I) se pueden formar haciendo reaccionar la base libre, o una sal, enantiómero o racemato de la misma, con uno o más equivalentes del ácido apropiado. La reacción se puede llevar a cabo en un disolvente o en un medio en el que la sal sea insoluble, o en un disolvente en el que la sal sea soluble, por ejemplo, agua, dioxano, etanol, tetrahidrofurano o éter dietílico, o una mezcla de disolventes, que se puede eliminar a vacío o mediante liofilización. La reacción también puede ser un proceso metatético, o se puede llevar a cabo en una resina de intercambio iónico.
Los compuestos intermedios se pueden usar como tales o en forma protegida. Los grupos protectores y los detalles de los procesos para su eliminación se pueden encontrar haciendo referencia al texto estándar "Protective Groups in Organic Synthesis", 3ª Edición (1999) de Greene y Wuts.
Los compuestos de la invención y los intermedios de los mismos se pueden aislar a partir de sus mezclas de reacción y, si es necesario, se pueden purificar adicionalmente, mediante el uso de técnicas estándares.
El compuesto de fórmula (I) puede existir en formas enantiómeras. Por lo tanto, todos los enantiómeros, diastereómeros, racematos y sus mezclas están incluidos en el alcance de la invención. Los diversos isómeros ópticos se pueden aislar mediante separación de una mezcla racémica de los compuestos, usando técnicas convencionales, por ejemplo cristalización fraccionada, o HPLC.
Los compuestos intermedios también pueden existir en formas enantiómeras, y se pueden usar como enantiómeros puros, diastereómeros, racematos o mezclas.
Los compuestos de fórmula (I), y sus sales farmacéuticamente aceptables, son útiles debido a que poseen actividad farmacológica en animales. En particular, los compuestos son activos como inhibidores de la enzima óxido nítrico sintasa. Más particularmente, son inhibidores de la isoforma inducible de la enzima óxido nítrico sintasa, y, como tales, se predice que son útiles en terapia, por ejemplo como agentes antiinflamatorios. También pueden tener utilidad como inhibidores de la isoforma neuronal de la enzima óxido nítrico sintasa.
Los compuestos y sus sales farmacéuticamente aceptables están indicados para uso en el tratamiento o profilaxis de enfermedades o patologías en las que la síntesis o la sobresíntesis de la óxido nítrico sintasa forma una parte importante. En particular, los compuestos están indicados para uso en el tratamiento de estados inflamatorios en mamíferos, incluyendo el hombre.
Las patologías que se pueden mencionar específicamente son:
osteoartritis, artritis reumatoide, espondilitis reumatoide, artritis gotosa y otras patologías artríticas, articulaciones inflamadas;
eccema, psoriasis, dermatitis y otras enfermedades inflamatorias de la piel, tales como quemaduras solares;
patologías inflamatorias de los ojos, incluyendo uveítis, glaucoma y conjuntivitis;
trastornos pulmonares en los que está implicada la inflamación, por ejemplo asma, bronquitis, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, alveolitis alérgica de los avicultores, pulmón del granjero, síndrome disneico agudo;
bacteriemia, endotoxemia (choque séptico), úlceras aftosas, gingivitis, piresis, dolor, meningitis y pancreatitis; enfermedades del tubo digestivo, incluyendo enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn, gastritis atrófica, gastritis varialoforme, colitis ulcerosa, celiaquía, ileitis regional, ulceración péptica, síndrome de intestino irritable, esofagitis de reflujo, daño al tubo digestivo que resulta de infecciones, por ejemplo por Helicobacter pylori, o de tratamientos con fármacos antiinflamatorios no esteroideos;
y otras patologías asociadas con inflamación.
Los compuestos también serán útiles en el tratamiento y el alivio de dolor agudo o dolor inflamatorio persistente o dolor neuropático o dolor de origen central.
Son de particular interés las patologías de enfermedad inflamatoria del intestino, artritis reumatoide, osteoartritis, enfermedad pulmonar obstructiva crónica y dolor.
Los compuestos de fórmula (I) y sus sales farmacéuticamente aceptables también pueden ser útiles en el tratamiento o profilaxis de enfermedades o patologías además de las mencionadas anteriormente. Por ejemplo, los compuestos pueden ser útiles en el tratamiento de aterosclerosis, fibrosis cística, hipotensión asociada con choque séptico y/o tóxico, en el tratamiento de la disfunción del sistema inmunitario, como un adyuvante para la inmunosupresión a corto plazo en la terapia de transplante de órganos, en el control del comienzo de la diabetes, en el mantenimiento de la función pancreática en la diabetes, en el tratamiento de complicaciones vasculares asociadas con diabetes, y en la coterapia con citoquinas, por ejemplo TNF o interleuquinas.
Los compuestos de fórmula (I) también pueden ser útiles en el tratamiento de hipoxia, por ejemplo en casos de parada cardíaca y apoplejía, trastornos neurodegenerativos que incluyen degeneración de nervios y/o necrosis de nervios en trastornos tales como isquemia, hipoxia, hipoglicemia, epilepsia, y en heridas externas (tales como lesión de la médula espinal y de la cabeza), convulsiones por oxígeno hiperbárico y toxicidad, demencia, por ejemplo demencia presenil, enfermedad de Alzheimer y demencia relacionada con SIDA, corea de Syndenham, enfermedad de Parkinson, síndrome de Tourette, enfermedad de Huntington, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, distrofia muscular, enfermedad de Korsakoffs, retraso mental relacionado con un trastorno de vasos cerebrales, trastornos del sueño, esquizofrenia, depresión, dolor, autismo, trastorno afectivo estacional, desajuste horario, depresión u otros síntomas asociados con síndrome premenstrual (PMS), ansiedad y choque séptico. También es de esperar que los compuestos de fórmula (I) muestren actividad en la prevención e inversión de la adición o tolerancia a fármacos, tales como tolerancia a opiáceos y diazepinas, tratamiento de la adición a fármacos, tratamiento de la migraña y de otras cefaleas vasculares, inflamación neuralgénica, en el tratamiento de trastornos de la movilidad gastrointestinal, cáncer, y en la inducción del parto.
Son de particular interés las patologías como apoplejía, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, esclerosis múltiple, esquizofrenia, migraña, cáncer, choque séptico y dolor.
Es de esperar que la profilaxis sea particularmente pertinente para el tratamiento de personas que han sufrido un episodio previo, o que de otro modo se considera que tienen un riesgo mayor, de la enfermedad o patología en cuestión. Las personas que tienen un riesgo de desarrollar una enfermedad o patología particular incluyen generalmente aquellas que tienen un historial familiar de la enfermedad o de la patología, o aquellas que han sido identificadas mediante ensayos genéticos o identificación como particularmente susceptibles a desarrollar la enfermedad o patología.
Para las indicaciones terapéuticas mencionadas anteriormente, la dosis administrada variará, por supuesto, con el compuesto empleado, el modo de administración y el tratamiento deseado. Sin embargo, en general, se obtienen resultados satisfactorios cuando los compuestos se administran a una dosis de la forma sólida entre 1 mg y 2000 mg por día.
Los compuestos de fórmula (I), y sus derivados farmacéuticamente aceptables, se pueden usar por sí mismos, o en forma de composiciones farmacéuticas apropiadas en las que el compuesto o derivado está en mezcla con un adyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable. La administración puede ser, pero no se limita a, entérica (incluyendo oral, sublingual o rectal), intranasal, mediante inhalación, intravenosa, tópica o mediante otras vías parenterales. Los procedimientos convencionales para la selección y preparación de formulaciones farmacéuticas adecuadas se describen en, por ejemplo, "Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs", M. E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988. La composición farmacéutica comprende preferiblemente menos de 80%, y más preferiblemente menos de 50%, de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Según la invención, se proporciona además una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en mezcla con un adyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.
También se proporciona un procedimiento para la preparación de tal composición farmacéutica, que comprende mezclar los ingredientes.
Los compuestos de fórmula (I), y sus derivados farmacéuticamente aceptables, también se pueden usar ventajosamente en combinación con un inhibidor de COX, más particularmente en combinación con un inhibidor de COX-2. Los inhibidores de COX-2 particularmente preferidos son Celecoxib y MK-966. El inhibidor de NOS y el inhibidor de COX-2 se pueden formular juntos en la misma composición farmacéutica para la administración en una única dosis unitaria, o cada componente se puede formular individualmente de forma que se pueden administrar dosis separadas, ya sea simultánea o secuencialmente.
La invención se ilustra, pero de ningún modo se limita, mediante los siguientes ejemplos.
Se usan las siguientes abreviaturas: DMSO (dimetilsulfóxido), DMF (N,N-dimetilformamida), THE (tetrahidrofurano), NMP (N-metilpirrolidinona).
Ejemplo 1
Etanodiato de 2-[[(1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1-(5-tiazolil)butil]tio]-5-cloro-3-piridincarbonitrilo a) Éster 1,1-dimetiletílico del ácido (4S)-4-[(2R)-2-hidroxi-2-(2-cloro-5-tiazolil)etil]-2,2-dimetil-3-oxazolidincarboxílico, y éster 1,1-dimetiletílico del ácido (4S)-4-[(2S)-2-hidroxi-2-(2-cloro-5-tiazolil)etil]-2,2-dimetil-3-oxazolidincarboxílico
Se añadió gota a gota n-butil-litio (2,0 M en hexanos, 21,6 ml) a una disolución de 2-clorotiazol (5,4 g) en THF (400 ml) a -78ºC, en una atmósfera de nitrógeno. Después de 15 minutos, se añadió gota a gota una disolución del éster 1,1-dimetiletílico del ácido (4S)-2,2-dimetil-4-(2-oxoetil)-3-oxazolidincarboxílico (7,0 g) en THE (140 ml), y la mezcla de reacción se agitó durante otros 60 minutos. Después se retiró el enfriamiento, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 60 minutos. La mezcla de reacción se vertió en cloruro amónico acuoso saturado, y los productos se extrajeron con éter dietílico. Los extractos combinados se lavaron con salmuera, se secaron (sulfato de magnesio), se filtraron y se evaporaron. La purificación mediante cromatografía (sílice, 20% en acetato de etilo/isohexano como eluyente) dio el compuesto del subtítulo (4S,2S) (5,2 g) como un aceite incoloro.
MS APCI +ve ^{m}/_{z} 363 [(M+H]^{+}).
RMN ^{1}H 400 MHz (DMSO-d_{6}, 90ºC) 7,49 (1H, s), 5,69 (1H, d), 4,85 (1H, dd), 3,96-3,86 (2H, m), 3,84-3,77 (1H, m), 2,10-1,99 (1H, m), 1,90 (1H, dt), 1,47 (3H, s), 1,40 (12H, s).
Una elución posterior dio el compuesto del subtítulo (4S,2R) (5,1 g, 42%) como un aceite incoloro.
MS APCI +ve ^{m}/_{z} 363 ([M+H]^{+}).
RMN ^{1}H 400 MHz (DMSO-d_{6} 90ºC) 7,49 (1H, s), 5,70 (1H, d), 4,92 (1H, quint. aparente), 4,05-3,98 (1H, m), 3,91-3,84 (2H, m), 2,16-2,07 (1H, m), 1,84 (1H, ddd), 1,48 (3H, s), 1,41 (12H, s).
b) Éster 1,1-dimetiletílico del ácido (4S)-4-[(2S)-2-hidroxi-2-(5-tiazolil)etil]-2,2-dimetil-3-oxazolidincarboxílico
Se añadió 10% de paladio sobre carbón a una disolución del producto (4S,2S) procedente del Ejemplo 1, etapa (a) (5,2 g), y acetato de sodio (2,9 g) en metanol (120 ml). La mezcla de reacción se agitó a 50ºC en 5 atmósferas de hidrógeno, durante 16 h. La mezcla se filtró y se evaporó. El residuo se disolvió entonces en diclorometano, se volvió a filtrar y se evaporó para dar el compuesto del subtítulo (4,8 g) como un aceite incoloro.
MS APCI +ve ^{m}/_{z} 329 ([M+H]^{+}).
RMN ^{1}H 400 MHz (DMSO-d_{6}, 90ºC) 8,90 (1H, d), 7,73 (1H, d), 5,49 (1H, d), 4,94 (1H, dt), 3,93-3,91 (2H, m), 3,85-3,78 (1H, m), 2,09 (1 H, ddd), 1,94-1,89 (1H, m), 1,47 (3H, s), 1,41 (3H, s), 1,40 (9H, s).
c) Éster 1,1-dimetiletílico del ácido (4S)-4-[(2R)-2-(Benzoiltio)-2-(5-tiazolil)etil]-2,2-dimetil-3-oxazolidincarboxílico
A una disolución de trifenilfosfina (7,9 g) en THF seco (100 ml), a 0ºC, se añadió gota a gota azodicarboxilato de diisopropilo (5,9 ml), durante 5 minutos. Después de que la adición estuvo terminada, la mezcla se agitó durante 20 minutos, y después se añadió una disolución del producto procedente del Ejemplo 1, etapa (b) (4,8 g), y ácido tiobenzoico (3,5 ml) en THF (50 ml). Se retiró el baño de enfriamiento, y la agitación se continuó a temperatura ambiente toda la noche. La mezcla se concentró y el residuo se purificó mediante cromatografía (sílice, 10% de éter dietílico/isohexano como eluyente) para dar el compuesto del subtítulo (4,4 g) como un sólido amarillo.
MS APCI +ve ^{m}/_{z} 449 ([M+H]^{+}).
d) Éster 1,1-dimetiletílico del ácido (4S)-4-[(2R)-2-[(5-cloro-3-ciano-2-piridinil)tio]-2-(5-tiazolil)etil]-2,2-dimetil-3-oxazolidincarboxílico
El producto del Ejemplo 1, etapa (c) (290 mg), se trató con amoníaco 7 M en metanol (5 ml), y se agitó a temperatura ambiente durante 6 h. El disolvente se evaporó, el residuo se disolvió en DMF seca (5 ml), y se trató con 2,5-dicloro-3-piridincarbonitrilo (112 mg), seguido de carbonato de cesio (210 mg) en nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó durante 18 h, se vertió en salmuera y acetato de etilo, y la capa orgánica se separó, se lavó con agua (2 x), con salmuera, y se secó (sulfato de magnesio). El disolvente se evaporó, y el residuo se purificó mediante cromatografía (sílice, 25% de acetato de etilo/diclorometano como eluyente) para dar el compuesto del subtítulo (160 mg) como un aceite viscoso.
MS APCI +ve ^{m}/_{z} 481 ([M+H]^{+}).
e) Etanodiato de 2-[[(1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1-(5-tiazolil)butil]tio]-5-cloro-3-piridincarbonitrilo
El producto del Ejemplo 1, etapa (d) (160 mg), se agitó en HCl 4 M en dioxano (1 ml) y metanol (1 ml), durante 1 h. La mezcla de reacción se evaporó, se destiló azeotrópicamente con éter dietílico (3 x), después se trató con 1 equivalente de ácido oxálico en etanol (10 ml). La disolución clara se trató con éter dietílico hasta la precipitación completa, y el sólido se recogió por filtración, se lavó con éter dietílico y se secó a vacío a 40ºC durante 2 h para dar el compuesto del título (60 mg) como un sólido marrón pálido.
MS APCI + ve ^{m}/_{z} 341 ([M+H]^{+}).
RMN ^{1}H 400 MHz (DMSO-d_{6}) 9,07 (1H, s), 8,87 (1H, d), 8,56 (1H, d), 8,07 (2H, bs), 8,00 (1H, s), 5,71 (1H, t), 3,57 (1H, dd), 3,49 (1H, dd), 3,12-3,04 (1H, m), 2,45-2,32 (2H, m).
\newpage
Ejemplo 2
Dihidrocloruro de 2-[[(1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1-(5-tiazolil)butil]tio]-4-cloro-benzonitrilo a) Éster 1,1-dimetiletílico del ácido (4S)-4-[(2R)-2-[(5-cloro-2-cianofenil)tio]-2-(5-tiazolil)etil]-2,2-dimetil-3-oxazolidincarboxílico
El producto del Ejemplo 1, etapa (c) (290 mg), se trató con 2-fluoro-4-clorobenzonitrilo (101 mg) y carbonato de cesio (211 mg) según el procedimiento del Ejemplo 1, etapa (d) para dar el compuesto del subtítulo (160 mg) como un aceite viscoso.
MS APCI +ve ^{m}/_{z} 480 ([M+H]^{+}).
b) Dihidrocloruro de 2-[[1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1-(5-tiazolil)butil]tio]-4-cloro-benzonitrilo
El producto del Ejemplo 2, etapa (a) se agitó en HCl 4 M en dioxano (1 ml) y metanol (1 ml), durante 1 h. La mezcla de reacción se evaporó, se destiló azeotrópicamente con éter dietílico (3 x), y se secó a vacío a 40ºC durante 2 h para dar el compuesto del título (113 mg) como un sólido amarillo pálido.
MS APCI + ve ^{m}/_{z} 340 ([M+H]^{+}).
RMN ^{1}H 400 MHz (DMSO-d_{6}) 9,05 (1H, s), 8,15 (2H, bs), 7,86 (1H, d), 7,83 (1H, s), 7,81 (1H, d), 7,55 (1H, dd), 5,57 (1H, t), 3,59 (1H, dd), 3,51 (1H, dd), 3,07 (1H, br s), 2,31-2,23 (2H, m).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 3
Hidrocloruro de (2S,4R)-2-amino-4[[2-cloro-5-(trifluoro-metil)fenil]tio]-5-tiazolbutanol a) Éster 1,1-dimetiletílico del ácido (4S)-4-[(2R)-2-[[2-cloro-5-(trifluorometil)fenil]tio]-2-(5-tiazolil)etil]-2,2-dimetil-3-oxazolidincarboxílico
El producto del Ejemplo 1, etapa (c) (190 mg), se trató con 4-cloro-3-fluorobenzonitrilo (83 mg) y carbonato de cesio (163 mg), según el procedimiento del Ejemplo 1, etapa (d), para dar el compuesto del subtítulo (105 mg) como un aceite viscoso.
MS APCI +ve ^{m}/_{z} 523 ([M+H]^{+}).
b) Hidrocloruro de (2S,4R)-2-amino-4-[[2-cloro-5-(trifluorometil)fenil]tio]-5-tiazolbutanol
El producto del Ejemplo 3, etapa (a), se hizo reaccionar según el procedimiento del Ejemplo 2, etapa (b), para dar el compuesto del título (58 mg) como un sólido blanco que contiene el diastereómero (2S,4S) como una impureza del 30%.
MS APCI + ve ^{m}/_{z} 383 ([M+H]^{+}).
RMN ^{1}H 300 MHz (DMSO-d_{6}) 9,04 (1H, s), 8,15 (2H, br s), 7,86 (1H, d), 7,77-7,69 (2H, m), 7,61 (1H, s), 5,54 (1H, t), 3,63-3,55 (1H, m), 3,13-3,01 (2H, m), 2,34-2,19 (2H, m).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 4
Dihidrocloruro de 2-[[(1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1-(5-tiazolil)butil]tio]-6-(trifluorometil)-3-piridincarbonitrilo a) Éster 1,1-dimetiletílico del ácido (4S)-4-[(2R)-2-[[3-ciano-6-(trifluorometil)-2-piridinil]tio]-2-(5-tiazolil)-etil]-2,2-dimetil-3-oxazolidincarboxílico
El producto del Ejemplo 1, etapa (c) (190 mg), se trató con 2-cloro-6-trifluorometil-3-piridincarbonitrilo (86 mg) y carbonato de cesio (163 mg), según el procedimiento del Ejemplo 1, etapa (d), para dar el compuesto del subtítulo (117 mg) como un aceite viscoso.
MS APCI +ve ^{m}/_{z} (515 [M+H]^{+}).
b) Dihidrocloruro de 2-[[(1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1-(5-tiazolil)butil]tio]-6-(trifluorometil)-3-piridin-carbonitrilo
El producto del Ejemplo 4, etapa (a) se hizo reaccionar según el procedimiento del Ejemplo 2, etapa (b), para dar el compuesto del título (85 mg) como un sólido blanco.
MS APCI + ve ^{m}/_{z} (375 [M+H]^{+}).
RMN ^{1}H 300 MHz (DMSO-d^{6}) 9,04 (1H, s), 8,57 (1H, d), 8,20 (2H, bs), 7,97 (1H, s), 7,89 (1H, d), 5,68 (1H, t), 3,60-3,56 (1H, m), 3,52 (1H, dd), 3,18-3,09 (1H, m), 2,48-2,41 (2H, m).
Ejemplo 5
Dihidrocloruro de 2-[[(1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1-(5-tiazolil)butil]tio]-5-cloro-benzonitrilo a) Éster 1,1-dimetiletílico del ácido (4S)-4-[(2R)-2-[(4-cloro-2-cianofenil)tio]-2-(5-tiazolil)etil]-2,2-dimetil-3-oxazolidincarboxílico
El producto del Ejemplo 1, etapa (c) (190 mg), se trató con 5-cloro-2-fluorobenzonitrilo (65 mg) y carbonato de cesio (163 mg), según el procedimiento del Ejemplo 1, etapa (d), para dar el compuesto del subtítulo (160 mg) como un aceite viscoso.
MS APCI +ve ^{m}/_{z} 480 ([M+H]^{+}).
b) Dihidrocloruro de 2-[[(1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1-(5-tiazoli)butil]tio]-5-cloro-benzonitrilo
El producto del Ejemplo 5, etapa (a), se hizo reaccionar según el procedimiento del Ejemplo 2, etapa (b), para dar el compuesto del título (97 mg) como un sólido amarillo pálido.
MS APCI + ve ^{m}/_{z} 340 ([M+H]^{+}).
RMN ^{1}H 300 MHz (DMSO d^{6}) 9,04 (1H, s), 8,27 (2H, br s), 8,04 (1H, d), 7,81 (1H, s), 7,77-7,74 (2H, m), 5,58 (1H, t), 3, 57 (1H, dd), 3, 51 (1H, dd), 3,07-3,00 (1H, m), 2,27 (2H, t).
Identificaciones Sistemáticas
La actividad farmacológica de los compuestos según la invención se ensayó en las siguientes identificaciones sistemáticas.
Identificación Sistemática 1
La actividad de los compuestos de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, se puede identificar para determinar la actividad inhibidora de óxido nítrico sintasa, mediante un procedimiento basado en el de Fórstermann et al., Eur. J. Pharm., 1992, 225, 161-165. La óxido nítrico sintasa convierte ^{3}H-L-arginina en ^{3}H-L-citrulina, que se puede separar mediante cromatografía de intercambio catiónico, y se puede cuantificar mediante recuento de centelleo de líquidos.
La enzima se prepara, después de la inducción, a partir de la línea celular de macrófagos murinos cultivados J774A-1 (obtenida de los laboratorios del Imperial Cancer Research Fund). Las células J774A-1 se cultivaron en medio de Eagles modificado de Dulbeccos (DMEM), suplementado con 10% de suero bovino fetal, 4 mM de L-glutamina y con antibióticos (100 unidades/ml de penicilina G, 100 mg/ml de estreptomicina y 0,25 mg/ml de anfotericina B). Las células se hicieron crecer de forma habitual en matraces de 225 cm^{3}, que contienen 35 ml de medio mantenido a 37ºC y en una atmósfera humidificada que contiene 5% de CO_{2}.
La óxido nítrico sintasa se produce mediante células en respuesta a interferón-g (IFNg) y lipopolisacárido (LPS). El medio procedente de los matraces de cultivos confluentes se eliminó y se sustituyó por 25 ml (por matraz) de medio reciente que contiene 1 mg/ml de LPS y 10 unidades/ml de IFNg. Después de un período de 17-20 horas en cultivo, se logró el cosechado de las células raspando la lámina celular de la superficie del matraz en el medio de cultivo. Las células se recogieron mediante centrifugación (1000 g durante 10 minutos), y el lisado se preparó añadiendo al pelete celular una disolución que contiene 50 mM de Tris-HCl (pH 7,5 a 20ºC), 10% (v/v) de glicerina, 0,1% (v/v) de Tritón-X-100, 0,1 mM de ditiotreitol, y un cóctel de inhibidores de proteasa que comprende leupeptina (2 mg/ml), inhibidor de tripsina de haba de soja (10 mg/ml), aprotinina (5 mg/ml) y fluoruro de fenilmetilsulfonilo (50 mg/ml).
Para el ensayo, se añadieron 25 \mul de cóctel de sustrato (50 mM de Tris-HCl (pH 7,5 a 20ºC), 400 \muM de NADPH, 20 \muM de flavinadenindinucleótido, 20 \muM de flavinmononucleótido, 4 \muM de tetrahidrobiopeptirina, 12 \muM de L-arginina y 0,025 mCi de L-[^{3}H]-arginina) a los pocillos de una placa de filtro de 96 pocillos (tamaño de poros de 0,45 \mum) que contiene 25 \mul de una disolución de compuesto de ensayo en 50 mM de Tris-HCl. La reacción se inició añadiendo 50 \mul de lisado celular (preparado según lo anterior) y, después de una incubación durante 1 hora a temperatura ambiente, se terminó mediante adición de 50 \mul de una disolución acuosa de 3 mM de nitroarginina y 21 mM de EDTA.
La L-citrulina marcada se separó de la L-arginina marcada usando Dowex AG-50W. Se añadió al ensayo 150 \mul de una suspensión acuosa al 25% de Dowex 50 W (forma de Na^{+}), después de lo cual el conjunto se filtró en las placas de 96 pocillos. Se tomaron 75 \mul del filtrado, y se añadieron a los pocillos de las placas de 96 pocillos que contienen el reactivo de centelleo sólido. Después de dejar que las muestras se secasen, la L-citrulina se cuantificó mediante recuento por centelleo.
En un experimento típico, la actividad basal es 300 dpm por 75 \mul de muestra, que se incrementó hasta 1900 dpm en los controles de reactivo. La actividad del compuesto se expresa como IC_{50} (la concentración de sustancia farmacéutica que da una inhibición de enzima del 50% en el ensayo), y se ensayó la aminoguanidina, que da una IC_{50} (concentración inhibidora del 50%) de 10 \muM, como un patrón para verificar el procedimiento. Los compuestos se estudiaron en un intervalo de concentraciones y, a partir de las inhibiciones obtenidas, se calcularon los valores de IC_{50}. Los compuestos que inhiben la enzima en al menos 25% a 100 \muM se clasifican como activos, y se someten a al menos un nuevo ensayo.
En la identificación sistemática anterior, se estudiaron los compuestos de los Ejemplos 1 a 5, y dieron valores de IC_{50} menores que 10 \muM, indicando que es de esperar que muestren actividad terapéutica útil.
Identificación Sistemática 2
Se expresaron NO sintasas (iNOS, eNOS y nNOS) humanas recombinantes en E. coli, y los lisados se prepararon en tampón de Hepes (pH 7,4) que contiene cofactores (FAD, FMN, H_{4}B), inhibidores de proteasas, lisozima y el detergente CHAPS. Estas preparaciones se usaron, a una dilución adecuada, para evaluar la inhibición de las diversas isoformas. La inhibición de NOS se determinó midiendo la formación de L-[^{3}H]citrulina a partir de L-[^{3}H]arginina, usando una adaptación del método de Fdrstermann et al.^{9}. Se realizaron ensayos enzimáticos en presencia de 3 \mum de [^{3}H]arginina, 1 mM de NADPH y de otros cofactores requeridos para mantener la actividad de NOS (FAD, FMN, H_{4}B, calmodulina, Ca^{2+}). Puesto que se ha informado de que diversos inhibidores de NOS muestran cinéticas de unión bajas, o que inactivan la enzima de manera dependiente del tiempo, se preincubó la enzima y el inhibidor durante 60 minutos en presencia de NADPH antes de la adición de arginina para iniciar la reacción. Las incubaciones se continuaron durante otros 60 minutos antes de que los ensayos se paralizasen y de que la [^{3}H]citrulina se separase del sustrato sin reaccionar mediante cromatografía en una resina Dowex-50W, en un formato de 96 pocillos.
En la identificación sistemática anterior, se estudiaron los compuestos de los Ejemplos 1 a 5, y dieron valores de IC_{50} menores que 10 \mum frente a la enzima de iNOS, indicando que es de esperar que muestren una actividad terapéutica útil.
Identificación Sistemática 3
Los compuestos también muestran actividad frente a la forma humana de la óxido nítrico sintasa inducida, como se puede demostrar en el siguiente ensayo.
La línea celular de carcinoma colorrectal humano, DLD-1 (obtenida de la Colección Europea de Cultivo de Células Animales - número de línea celular 90102540), se hizo crecer de forma habitual en RPMI 1640 suplementado con 10% (v/v) de suero bovino fetal, y 2 mM de L-glutamina, a 37ºC en 5% de CO_{2}.
La óxido nítrico sintasa se indujo en células mediante adición de medio que contiene gamma-IFN recombinante humano (1000 unidades/ml), TNF-alfa (200 U/ml), IL-6 (200 U/ml) e IL-1-beta (250 U/ml). Después de la incubación durante 18 horas a 37ºC, se eliminó el medio, y las células se lavaron con disolución salina tamponada con fosfato tibia. Las células se incubaron durante otras 5 horas a 37ºC/5% de CO_{2} en RPMI 1640 que contiene 100 \muM de L-arginina y 100 \muM de verapamil-HCl, en presencia y en ausencia de compuestos de ensayo.
La acumulación de nitrito se determinó mezclando un volumen igual de medio de cultivo con reactivo de Griess (10 mg/ml de sulfanilamida, 1 mg de N-(1-naftil)etilendiamina en 1 ml de ácido fosfórico al 2,5% (v/v)). La inhibición en presencia de los compuestos se calculó con relación a los niveles de nitrito producidos por las células no tratadas. Los valores de IC_{50} se estimaron a partir de una gráfica semilogarítmica de de inhibición frente a la concentración de compuesto.
En esta identificación sistemática, los compuestos de los Ejemplos 1 a 5 dieron valores de IC_{50} menores que 100 \muM, indicando que se predice que muestren actividad terapéutica útil.

Claims (15)

1. Un compuesto de fórmula (I)
8
en la que:
T y W representan independientemente CR^{1} o N; y cuando hay más de un grupo R^{1}, cada uno se puede seleccionar independientemente;
X y R^{I} representan independientemente H, alquilo de C1 a 4, alcoxi de C1 a 4, halógeno, CN, C\equivCH, NO_{2}, CHO, COCH_{3} o NHCHO; estando dicho grupo alquilo o alcoxi op-cionalmente sustituido además con uno o más átomos de flúor;
Y representa alquilo de C1 a 4, alcoxi de C1 a 4, halógeno, CN, C\equivCH, NO_{2}, CHO, COCH_{3} o NHCHO; estando dicho grupo alquilo o alcoxi opcionalmente sustituido además con uno o más átomos de flúor;
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que Y representa CN o halógeno.
3. Un compuesto según la reivindicación 1 ó 2, en el que X y R^{1} representan independientemente H, halógeno o CF_{3}.
4. Un compuesto de fórmula (I), según la reivindicación 1, que es:
2-[[(1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1-(5-tiazolil)butil]tio]-5-cloro-3-piridincarbonitrilo;
2-[[(1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1-(5-tiazolil)butil]tio]-4-cloro-benzonitrilo;
(2S,4R)-2-amino-4-[[2-cloro-5-(trifluorometil)fenil]-tio]-5-tiazolbutanol;
2-[[(1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1-(5-tiazolil)butil]tio]-6-(trifluorometil)-3-piridincarbonitrilo;
2-[[(1R,3S)-3-amino-4-hidroxi-1-(5-tiazolil)butil]tio]-5-cloro-benzonitrilo; o un sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
5. Un compuesto de fórmula (I), según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para uso como un medicamento.
6. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en mezcla con un coadyuvante, diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable.
7. El uso de un compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de enfermedades o patologías humanas en las que es beneficiosa la inhibición de la actividad de óxido nítrico sintasa.
8. El uso según la reivindicación 7, en el que es la óxido nítrico sintasa predominantemente inducible la que es inhibida.
9. El uso de un compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento, para el tratamiento o profilaxis de enfermedades inflamatorias.
10. El uso según la reivindicación 9, en el que la enfermedad es enfermedad inflamatoria del intestino.
11. El uso según la reivindicación 9, en el que la enfermedad es artritis reumatoide.
12. El uso según la reivindicación 9, en el que la enfermedad es osteoartritis.
13. El uso de un compuesto de fórmula (I) como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento, para el tratamiento o profilaxis del dolor.
14. El uso de un compuesto de fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un inhibidor de COX-2, en la fabricación de un medicamento, para el tratamiento o profilaxis de enfermedades inflamatorias.
15. Un procedimiento para la preparación de un compuesto de fórmula (I), según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o una sal farmacéuticamente aceptable, enantiómero o racemato del mismo, procedimiento el cual comprende:
(a)
hacer reaccionar un compuesto de fórmula (II)
9
en la que T, X, Y y W son como se definen en la reivindicación 1, y L^{1} representa un grupo saliente, con un compuesto de fórmula (III)
10
o
(b)
hacer reaccionar un compuesto de fórmula (IV)
11
en la que T, W, X e Y son como se definen en reivindicación 1, con un compuesto de fórmula (V)
12
en la que L2 es un grupo saliente;
y, cuando se desee o sea necesario, convertir el compuesto resultante de fórmula (I), u otra sal del mismo, en una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; o convertir un compuesto de fórmula (I) en otro compuesto de fórmula (I); y, cuando se desee, convertir el compuesto resultante de fórmula (I) en un isómero óptico del mismo.
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