ES2246614A1 - Procedimiento de identificacion molecular de una variedad de clementinas. - Google Patents
Procedimiento de identificacion molecular de una variedad de clementinas.Info
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Abstract
Procedimiento de identificación molecular de una
variedad de clementinas.
El objeto de esta Patente es un "Procedimiento
de identificación molecular de una variedad de clementinas",
cuya aplicación aparece explícita en el propio enunciado.
El procedimiento se inicia con la marcha
analítica conocida, que comprende las operaciones de:
- Obtención de muestras de hojas (1) de los
cítricos que han de ser analizados.
- Extracción y purificación del ADN de las
hojas.
- Digestión del ADN (2) con enzimas de
restricción específicas y ligación de adaptadores.
- Amplificación preselectiva de parte de los
fragmentos de restricción generados.
El procedimiento reivindicado comprende las
siguientes operaciones específicas, realizadas con la secuencia con
la que se describen:
- Amplificación selectiva del ADN preamplificado,
con la pareja de cebadores Msel-CAC y
EcoRI-TAHex, utilizando un termociclador (3).
- Separación de los fragmentos amplificados, por
electroforesis en acrilamida (4).
- Análisis de los fragmentos amplificados,
mediante un secuenciador automático y un programa específico.
- Identificación del patrón de fragmentos (5)
diferencial específico de la variedad de clementinas MIORO.
Description
Procedimiento de identificación molecular de una
variedad de clementinas.
El objeto al cual se refiere la invención que se
protege en esta Patente, consiste en un "Procedimiento de
identificación molecular de una variedad de clementinas".
La presente solicitud se cursa al amparo de la
Ley 10/2002, de 29 de Abril (B.O.E. 30.04.2002) por la que se
modifican determinados artículos de la Ley de Patentes, para la
"protección jurídica de las invenciones biotecnológicas".
En particular, se acoge a la nueva redacción del
Artículo 4 de la Ley de Patentes, que establece la patentabilidad
de los procedimientos que utilicen materia biológica, como es el
caso del Procedimiento reivindicado.
En la nueva redacción del Artículo 5 de la Ley de
Patentes, se precisa que no se considerarán patentables "los
procedimientos esencialmente biológicos de obtención de vegetales
(...) que consistan íntegramente en fenómenos naturales como el
cruce o la selección" (Apartado 3).
Sin embargo, los propietarios de viveros de
especies vegetales que consiguen por cualquiera de dichos fenómenos
naturales (o incluso por mutación somática espontánea) una variedad
de las especies que cultivan y comercializan que consideran
particularmente apetecible por los agricultores que son sus
clientes naturales, se apresuran a proteger su producto mediante el
registro de marcas y signos de identificación que permitan
distinguirlas.
Es evidente que esta identificación extrínseca
resulta altamente vulnerable en cuanto a la exclusividad de
comercialización del producto, por lo que se ha investigado la
posibilidad de obtener y aplicar un procedimiento de identificación
inequívoco a través de constantes intrínsecas de la variedad, como
es su perfil genético.
Hasta el momento de solicitar el registro de esta
Patente, las citadas investigaciones no habían dado un resultado
positivo, al menos en el campo de la identificación genética de
variedades de clementinas, tanto por su escasa diferenciación como
por la dificultad de encontrar y aplicar cebadores de amplificación
específicos que proporcionen patrones de fragmentos de ADN
específicos.
La finalidad de la invención que constituye el
objeto de esta Patente, consiste en el desarrollo de un
procedimiento que permite y facilita la identificación molecular de
determinada variedad de mandarinas "clementinas", conocida
comercialmente por su marca registrada "MIORO", ya que
proporciona el perfil de fragmentos del ADN que es específico de la
variedad identificada.
La identificación de las variedades de
clementinas en el vivero resulta difícil porque se diferencian
principalmente por las características organolépticas de los frutos.
Por ello, una esencialidad y una ventaja del procedimiento
reivindicado, consiste en la posibilidad de identificar la variedad
"MIORO" utilizando material vegetativo (hojas) como la materia
biológica que contiene la información genética necesaria para
obtener la pretendida identificación inequívoca.
Por otra parte, mediante la aplicación reiterada
del procedimiento reivindicado se obtienen resultados
reproducibles, por lo que la identificación de la variedad siempre
es posible y comprobable, con independencia de que existan o no
frutos que la faciliten.
En definitiva, el procedimiento muestra su
utilidad y tiene su aplicación preferencial en la identificación
inequívoca de la variedad de clementina "MIORO" mediante el
conocimiento del perfil de fragmentos de su ADN, para comprobar si
es compartido por variedades comercializadas por otros viveristas
distintos y competidores del que es titular y propietario de la
variedad original y prioritaria, con el fin de defender sus derechos
con pruebas fehacientes.
El procedimiento consiste esencialmente en la
amplificación vía PCR (Polimerasa Chain Reaction) de fragmentos de
ADN previamente digeridos con enzimas de restricción y ligados a
adaptadores específicos. Dos cebadores complementarios a los
adaptadores, permiten la amplificación de los fragmentos digeridos,
separándolos después por electroforesis en acrilamida.
Para facilitar su posterior análisis, solamente
se amplifica un subconjunto de fragmentos, utilizando cebadores a
los que se añade alguna base selectiva, separándolos después por
electroforesis en
\hbox{acrilamida.}
El procedimiento se inicia con la marcha
analítica conocida que comprende las operaciones de:
- \ding{226}
- Obtención de muestras de hojas de los cítricos que han de ser analizados para conocer si corresponden o no a la variedad de clementinas "MIORO".
- \ding{226}
- Extracción y purificación del ADN de las hojas.
- \ding{226}
- Digestión del ADN con enzimas de restricción específicas y ligación de adaptadores.
- \ding{226}
- Amplificación preselectiva de parte de los fragmentos de restricción generados.
El desarrollo del procedimiento reivindicado
comprende las siguientes operaciones específicas, realizadas con la
secuencia con la que se describen:
- \ding{226}
- Amplificación selectiva del ADN preamplificado, con la pareja de cebadores Msel-CAC y EcoRl-TAHex, utilizando un termociclador.
- \ding{226}
- Separación de los fragmentos amplificados, por electroforesis en acrilamida.
- \ding{226}
- Análisis de los fragmentos amplificados, mediante un secuenciador automático y un programa específico.
- \ding{226}
- Identificación del patrón de fragmentos diferencial específico de la variedad de clementinas "MIORO", que permitirá dictaminar inequívocamente, por comparación, si determinadas plantas corresponden o no a dicha variedad.
Para complementar la descripción de la invención
y facilitar la comprensión y el seguimiento de las operaciones
comprendidas en el "Procedimiento de identificación molecular de
una variedad de clementinas" que constituye su objeto, se
acompaña como Figura 1 un esquema secuencial de dichas operaciones,
que debe interpretarse como una guía indicativa de su desarrollo
preferencial.
Para mostrar con claridad la entidad y el alcance
del "Procedimiento de identificación molecular de una variedad de
clementinas", que constituye el objeto de la invención
reivindicada, se describen seguidamente las operaciones que
comprende y la secuencia con la que se realizan, ateniéndose a la
esencialidad de las mismas.
El procedimiento se inicia con la marcha
analítica conocida, que comprende las operaciones de:
- \ding{226}
- Obtención de muestras de hojas (1) de los cítricos que han de ser analizados.
- \ding{226}
- Extracción y purificación del ADN de las hojas.
- \ding{226}
- Digestión del ADN (2) con enzimas de restricción específicas y ligación de adaptadores.
- \ding{226}
- Amplificación preselectiva de parte de los fragmentos de restricción generados.
El procedimiento reivindicado comprende las
siguientes operaciones específicas, realizadas con la secuencia con
la que se describen:
- \ding{226}
- Amplificación selectiva del ADN preamplificado, con la pareja de cebadores Msel-CAC y EcoRl-TAHex, utilizando un termociclador (3).
- \ding{226}
- Separación de los fragmentos amplificados, por electroforesis en acrilamida (4).
- \ding{226}
- Análisis de los fragmentos amplificados, mediante un secuenciador automático y un programa específico.
- \ding{226}
- Identificación del patrón de fragmentos (5) diferencial específico de la variedad de clementinas "MIORO".
Claims (1)
1. Procedimiento de identificación molecular de
una variedad de clementinas, que se inicia con la marcha analítica
conocida que comprende las siguientes operaciones de:
- \ding{226}
- Obtención de muestras de hojas (1) de los cítricos que han de ser analizados.
- \ding{226}
- Extracción y purificación del ADN de las hojas.
- \ding{226}
- Digestión del ADN (2) con enzimas de restricción específicas y ligación de adaptadores.
- \ding{226}
- Amplificación preselectiva de parte de los fragmentos de restricción generados.
caracterizado porque
comprende las siguientes operaciones específicas, realizadas con la
secuencia con la que se
describen:
- \ding{226}
- Amplificación selectiva del ADN preamplificado, con la pareja de cebadores Msel-CAC y EcoRl-TAHex, utilizando un termociclador (3).
- \ding{226}
- Separación de los fragmentos amplificados, por electroforesis en acrilamida (4).
- \ding{226}
- Análisis de los fragmentos amplificados, mediante un secuenciador automático y un programa específico.
- \ding{226}
- Identificación del patrón de fragmentos (5) diferencial específico de la variedad de clementinas "MIORO".
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200202844A ES2246614B1 (es) | 2002-12-12 | 2002-12-12 | Procedimiento de identificacion molecular de una variedad de clementinas. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200202844A ES2246614B1 (es) | 2002-12-12 | 2002-12-12 | Procedimiento de identificacion molecular de una variedad de clementinas. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2246614A1 true ES2246614A1 (es) | 2006-02-16 |
| ES2246614B1 ES2246614B1 (es) | 2007-04-01 |
Family
ID=35883573
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES200202844A Expired - Fee Related ES2246614B1 (es) | 2002-12-12 | 2002-12-12 | Procedimiento de identificacion molecular de una variedad de clementinas. |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| ES (1) | ES2246614B1 (es) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0678770A (ja) * | 1992-09-03 | 1994-03-22 | Kirin Bibaretsuji Kk | 遺伝子増幅用プライマー |
| JPH0759577A (ja) * | 1993-08-23 | 1995-03-07 | Kirin Bibaretsuji Kk | プローブ及びプライマーの製造方法 |
| GB2283568A (en) * | 1993-10-13 | 1995-05-10 | Mini Agriculture & Fisheries | Identification of the origin of fruit or fruit juice |
| WO1998014607A1 (en) * | 1996-10-02 | 1998-04-09 | The Minister Of Agriculture Fisheries And Food | Method for detecting a particular plant species in a product |
-
2002
- 2002-12-12 ES ES200202844A patent/ES2246614B1/es not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
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| LURO, F. et al. "DNA amplified fingerprinting, a useful tool for determination of genetic origin and diversity analysis in citrus", HORTSCIENCE, AMERICAN SOCIETY OF HORTICULTURAL SCIENCE, ALEXANDRIA, VA, US, 1995, Vol. 30, N‘ 5, paginas 1063-1067. Ver todo el documento. * |
| LURO, F. et al. "DNA amplified fingerprinting, a useful tool for determination of genetic origin and diversity analysis in citrus", HORTSCIENCE, AMERICAN SOCIETY OF HORTICULTURAL SCIENCE, ALEXANDRIA, VA, US, 1995, Vol. 30, Nº 5, páginas 1063-1067. Ver todo el documento. * |
Also Published As
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|---|---|
| ES2246614B1 (es) | 2007-04-01 |
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