ES2243783T3 - Derivados de sulfona apropiadas para el tratamiento de enfermedades autoinmunes y alergias. - Google Patents
Derivados de sulfona apropiadas para el tratamiento de enfermedades autoinmunes y alergias.Info
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Abstract
Según un aspecto adicional, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I) para la producción de un medicamento para el tratamiento o la profilaxis de trastornos tales como alergia, asma alérgica, dermatitis atópica y otras enfermedades atópicas; trastornos inflamatorios y enfermedades autoinmunes en las que está implicada la sobreproducción de CD23s. La invención proporciona también una composición farmacéutica para el tratamiento o la profilaxis de trastornos tales como alergia, asma alérgica, dermatitis atópica y otras enfermedades atópicas; trastornos inflamatorios y enfermedades autoinmunes en los que está implicada la sobreproducción de CD23s, que comprende un compuesto de fórmula (I) y opcionalmente un vehículo farmacéuticamente aceptable para el mismo. Los trastornos inflamatorios particulares incluyen trastornos del SNC tales como enfermedad de Alzheimer, esclerosis múltiple y demencia multiinfarto, así como la secuela mediada por inflamación de apoplejía ytraumatismo cerebral. Los presentes inventores han encontrado sorprendentemente que el compuesto de la invención es un inhibidor altamente potente y selectivo del procesamiento de CD23, teniendo poca o ninguna actividad como inhibidor de metaloproteasas de matriz. Ha de entenderse que las sales farmacéuticamente aceptables, solvatos y otros derivados farmacéuticamente aceptables del compuesto de fórmula (I) están también incluidos en la presente invención. Las sales de los compuestos de fórmula (I) incluyen, por ejemplo, sales de adición de ácido derivadas de ácidos inorgánicos u orgánicos, tales como clorhidratos, bromhidratos, yodhidratos, p-toluenosulfonatos, fosfatos, sulfatos,
Description
Derivados de sulfona apropiadas para el
tratamiento de enfermedades autoinmunes y alergias.
Esta invención se refiere a nuevos inhibidores de
la formación de CD23 humana soluble y a su uso en el tratamiento de
afecciones asociadas a un exceso de producción de CD23 soluble
(CD23s), tales como enfermedades autoinmunes y alergias.
CD23 (el receptor de baja afinidad de IgE FceRII,
Blast 2) es una proteína integral de tipo II de 45 kDa expresada en
la superficie de una serie de células maduras, incluyendo linfocitos
B y T, macrófagos, células asesinas naturales, células de
Langerhans, monocitos y plaquetas (Delespesse et al., Adv.
Immunol., 49 [1991], 149-191). Existe también
una molécula similar a CD23 en eosinófilos (Grangette et al.,
J. Immunol., 143 [1989], 3580-3588). CD23 se
ha implicado en la regulación de la respuesta inmune (Delespesse
et al., Immunol. Rev., 125 [1992],
77-97). La CD23 humana existe en forma de dos
isoformas reguladas diferencialmente, a y b, que difieren sólo en
los aminoácidos de la terminación intracelular N (Yokota, et
al., Cel, 55 [1988], 611-618). En el
hombre, la isoforma constitutiva se encuentra sólo en linfocitos B,
mientras que el tipo b, inducible por IL-4, se
encuentra en todas las células capaces de expresar CD23.
Es sabido que la CD23 intacta unida a célula
(CD23i) experimenta escisión de la superficie celular, conduciendo a
la formación de una serie de fragmentos solubles bien definidos
(CD23s), que se producen como resultado de una secuencia compleja de
eventos proteolíticos, cuyo mecanismo se comprende escasamente aún
(Bourget et al., J. Biol. Chem. 269 [1994],
6927-6930). Aunque aún no probado, se postula que
los fragmentos solubles mayores (Mr 37, 33, 29 y 25 kDa) de estos
eventos proteolíticos, todos los cuales retienen el dominio
C-terminal de lectina común a CD23i, ocurren
secuencialmente mediante la formación inicial del fragmento de 37
kDa (Letellier et al., J. Exp. Med., 172 [1990],
693-700). Una ruta de escisión intracelular
alternativa conduce a un fragmento estable de 16 kDa que difiere en
el dominio C-terminal de CD23i
(Grenier-Brosette et al., Eur. J.
Immunol., 22 [1992], 1573-1577).
Se han adscrito varias actividades a la CD23i
unida a membrana en seres humanos, todas las cuales han mostrado
desempeñar un papel en la regulación de IgE. Las actividades
particulares incluyen: a) presentación de antígeno, b) citotoxicidad
de eosinófilo mediada por IgE, c) alojamiento de células B en
centros germinales de nódulos linfáticos y bazo, y d) regulación
negativa de la síntesis de IgE (Delespesse et al., Adv.
Immunol., 49, [1991], 149-191). Los tres
fragmentos de CD23 soluble de mayor peso molecular (Mr 37, 33 y 29
kDa) tienen propiedades de citoquina multifuncional que parecen
desempeñar un papel importante en la producción de IgE. Por tanto,
la formación excesiva de CD23s se ha implicado en la sobreproducción
de IgE, la marca de enfermedades alérgicas tales como asma
extrínseca, rinitis, conjuntivitis alérgica, eccema, dermatitis
atópica y anafilaxia (Sutton y Gould, Nature, 366, [1993],
421-428).
Otras actividades biológicas atribuidas a CD23s
incluyen la estimulación del crecimiento de células B y la inducción
de la liberación de mediadores de monocitos. Por tanto, se han
observado niveles elevados de CD23s en el suero de pacientes que
tienen leucemia linfocítica crónica de células B (Sarfati et
al., Blood, 71 [1988], 94-98), y en los
fluidos sinoviales de pacientes con artritis reumatoide (Chomarat
et al., Arthritis and Rheumatism, 36 [1993],
234-242). Que hay un papel para la CD23 en la
inflamación se ha sugerido por una serie de fuentes. En primer
lugar, se ha reseñado que CD23s se une a receptores extracelulares
que, cuando se activan, están implicados en eventos de inflamación
mediados por célula. Por tanto, se ha reseñado que CD23s activa
directamente la liberación de TNF, IL-1 e
IL-6 de monocito (Armant et al., vol. 180,
J. Exp. Med., 1005-1011 (1994)). Se ha
reseñado que CD23 interacciona con las moléculas de adhesión a
integrina-B2, CD11b y CD11c, en monocito/macrófago
(S. Lecoanet-Henchoz et al., Immunity,
vol. 3; 119-125 (1995)) que desencadenan la
liberación de NO_{2}^{-}, peróxido de hidrógeno y citoquina
(IL-1, IL-6 y TNF). Finalmente,
IL-4 o IFN inducen la expresión de CD23 y su
liberación en forma de CD23s por monocitos humanos. El ligamiento
del receptor CD23 unido a membrana a complejos inmunes
IgE/anti-IgE o mAb anti-CD23 activa
la producción de AMPc e IL-6 y la formación de
tromboxano B2, demostrando un papel mediado por receptor de CD23 en
la inflamación.
Debido a estas diversas propiedades de CD23, los
compuestos que inhiben la formación de CD23s deberían tener acciones
duales de a) potenciar la inhibición por realimentación negativa de
la síntesis de Ig al mantener los niveles de CD23i sobre la
superficie de células B, y b) inhibir las actividades
inmunoestimulantes de citoquina de los fragmentos solubles de mayor
peso molecular (Mr 37, 33 y 29 kDa) de CD23s. Además, la inhibición
de la escisión de CD23 debería mitigar la activación de monocito
inducida por CD23s y la formación de mediador, reduciendo así la
respuesta inflamatoria.
Los documentos WO 99/06361 (Abbott) y WO 00/12478
(Zeneca Limited) describen un intervalo de compuestos que incluye
hidroxamatosulfonilo y compuestos de sulfonamida, para uso como
inhibidores de metaloproteinasa.
El documento WO 99/38843 (Darwin Discovery
Limited) da a conocer un alcance genérico de compuestos útiles en el
tratamiento de, entre otras, afecciones mediadas por enzimas
implicadas en la segregación de CD23, que cubre compuestos de
fórmula (A):
en la que B, R^{1} y R^{2} se
seleccionan de un intervalo de grupos
orgánicos.
El documento PCT EP01/05798 (SmithKline Beecham
p.l.c.) da a conocer compuestos útiles en el tratamiento y la
profilaxis de afecciones mediadas por enzimas implicadas en la
segregación de CD23, que cubre compuestos de fórmula (B):
en la que R es hidrógeno, alquilo,
alquenilo, alquinilo, arilo, heteroarilo o heterociclilo; y R^{1}
es biciclilo o
heterobiciclilo.
Según la presente invención, se proporciona un
compuesto de fórmula (I):
Según un aspecto adicional, la presente invención
proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I) para la producción
de un medicamento para el tratamiento o la profilaxis de trastornos
tales como alergia, asma alérgica, dermatitis atópica y otras
enfermedades atópicas; trastornos inflamatorios y enfermedades
autoinmunes en las que está implicada la sobreproducción de
CD23s.
La invención proporciona también una composición
farmacéutica para el tratamiento o la profilaxis de trastornos tales
como alergia, asma alérgica, dermatitis atópica y otras enfermedades
atópicas; trastornos inflamatorios y enfermedades autoinmunes en los
que está implicada la sobreproducción de CD23s, que comprende un
compuesto de fórmula (I) y opcionalmente un vehículo
farmacéuticamente aceptable para el mismo.
Los trastornos inflamatorios particulares
incluyen trastornos del SNC tales como enfermedad de Alzheimer,
esclerosis múltiple y demencia multiinfarto, así como la secuela
mediada por inflamación de apoplejía y traumatismo cerebral.
Los presentes inventores han encontrado
sorprendentemente que el compuesto de la invención es un inhibidor
altamente potente y selectivo del procesamiento de CD23,
teniendo poca o ninguna actividad como inhibidor de metaloproteasas
de matriz.
Ha de entenderse que las sales farmacéuticamente
aceptables, solvatos y otros derivados farmacéuticamente aceptables
del compuesto de fórmula (I) están también incluidos en la presente
invención.
Las sales de los compuestos de fórmula (I)
incluyen, por ejemplo, sales de adición de ácido derivadas de ácidos
inorgánicos u orgánicos, tales como clorhidratos, bromhidratos,
yodhidratos, p-toluenosulfonatos, fosfatos, sulfatos,
acetatos, trifluoroacetatos, propionatos, citratos, maleatos,
fumaratos, malonatos, succinatos, lactatos, oxalatos, tartratos y
benzoatos.
Las sales pueden formarse también con bases.
Dichas sales incluyen sales derivadas de bases inorgánicas u
orgánicas, por ejemplo, sales de metales alcalinos tales como sales
de sodio o potasio, y sales de amina orgánica tales como sales de
morfolina, piperidina, dimetilamina o dietilamina.
Los compuestos de la invención pueden prepararse
mediante el uso de cualquier procedimiento convencional
adecuado.
En un aspecto adicional, la presente invención
proporciona un procedimiento para preparar compuestos de fórmula (I)
como se definen anteriormente en la presente memoria, comprendiendo
dicho procedimiento:
(a) desproteger un compuesto de fórmula (II):
\vskip1.000000\baselineskip
en la que P es un grupo protector
seleccionado de bencilo, tetrahidropiranilo o
p-metoxibencilo,
o
(b) formilar un compuesto de fórmula (III):
\vskip1.000000\baselineskip
o
(c) oxidar un compuesto de fórmula (X):
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos de fórmulas (II), (III) y (X) son
nuevos y forman un aspecto adicional de la invención.
Los siguientes esquemas de reacción ilustran los
procedimientos que pueden utilizarse para preparar compuestos de
fórmula (I).
Se muestra en el esquema 1 un procedimiento para
preparar compuestos de fórmula (I). El tiol (VIII) puede prepararse
a partir del correspondiente haluro, tal como el bromuro (IX),
utilizando los procedimientos descritos por Choi y Yoon,
Synthesis, 1995, 373, y convertirse en (VII) mediante
reacción con una halometilcetona adecuada, tal como bromometilcetona
en presencia de una base tal como trietilamina. La cetona (VII)
puede hacerse reaccionar con una hidroxilamina adecuadamente
protegida en O. Por ejemplo, cuando el grupo protector (P) es
bencilo, puede utilizarse la reacción con
O-bencilhidroxilamina en condiciones estándar para
preparar la oxima (VI), que puede reducirse a (V) con un agente
reductor adecuado, por ejemplo, borohidruro de sodio o
cianoborohidruro de sodio en ácido acético. La formilación de (V)
utilizando anhídrido fórmico y acético seguido de oxidación con
ácido meta-cloroperbenzoico proporciona (II), que puede
desprotegerse en condiciones adecuadas.
Esquema
1
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos de fórmula (I) pueden prepararse
también como se describe en el esquema 2. La cetona (VII) puede
hacerse reaccionar con hidroxilamina en condiciones estándar,
proporcionando una oxima (XII) que, tras reducción con un agente
reductor adecuado tal como cianoborohidruro de sodio en ácido
acético, proporciona la hidroxilamina (XI), que puede formilarse
mediante tratamiento con anhídrido fórmico y acético seguido de
carbonato de potasio y metanol, y oxidarse como se describe
anteriormente para el esquema 1.
\newpage
Esquema
2
El compuesto de la presente invención puede
prepararse en forma de una mezcla de isómeros o de un isómero
individual. El isómero individual puede prepararse mediante
cualquier procedimiento apropiado, por ejemplo, pueden prepararse
estereoisómeros individuales mediante síntesis química
estereoespecífica partiendo de sustratos quirales o separando
mezclas de enantiómeros o mezclas de diastereómeros utilizando
procedimientos conocidos, tales como HPLC preparativa quiral. Por
ejemplo, la separación de compuestos de fórmula (I) que son
racémicos en enantiómeros individuales puede conseguirse mediante la
conversión en un derivado de éster adecuado, tal como el derivado de
ácido O-metilmandélico, seguido de separación
utilizando procedimientos cromatográficos estándar y después
desprotección.
En un aspecto preferido, la invención proporciona
un compuesto de fórmula (IA):
En otro aspecto preferido, la invención
proporciona un compuesto de fórmula (IB):
Los compuestos de fórmula (I) pueden prepararse
en forma quiral pura utilizando el procedimiento descrito en el
esquema 3. Por ejemplo, en la preparación de compuestos de fórmula
(IA), puede convertirse un aminoalcohol (XIXA) quiral protegido
adecuadamente en el correspondiente tioacetato (XVIIIA) en
condiciones de Mitsunobu, por ejemplo, utilizando trifenilfosfina o
tributilfosfina en combinación con azodicarboxilato de
di-terc-butilo o azodicarboxilato de dietilo. El tioacetato
(XVIIIA) puede convertirse in situ en un tiol, y desde allí
en el sulfuro (XVIIA). Como alternativa, el grupo alcohol en (XIXA)
puede convertirse en un grupo saliente tal como un tosilato o
bromuro, y hacerse reaccionar con el tioacetato o tiol apropiado,
tales como quinolin-3-ilmetanotiol o
tioacetato, en presencia de una base adecuada tal como hidróxido de
sodio, proporcionando (XVIIA). La oxidación de (XVIIA) a la sulfona
(XVIA) puede llevarse a cabo con un agente oxidante adecuado tal
como MCPBA, seguido de desprotección. La desprotección en
condiciones estándar, tales como ácido trifluoroacético o cloruro de
hidrógeno en dioxano, proporciona (XVA), que puede convertirse en
(XIVA) y oxidarse a la oxaziridina (XIIIA) utilizando procedimientos
establecidos, por ejemplo, ácido meta-perbenzoico. La
conversión de la oxaziridina (XIIIA) en (IIIA) se lleva a cabo
preferiblemente utilizando ácido clorhídrico. La formilación de
(IIIA) puede llevarse a cabo utilizando metodología de formilación
estándar, tal como reacción con anhídrido fórmico y acético.
Esquema
3
Se muestra en el esquema 4 un procedimiento
alternativo para preparar compuestos de fórmula (IIIA) en forma
quiral pura. La amina quiral (XVA) puede alquilarse con bromuro de
cianometilo o yoduro de cianometilo, proporcionando la
cianometilamina (XXA), que se convierte en (IIIA) utilizando los
procedimientos descritos por Tokuyama et al.,
Synthesis, 2000, 9, 1299.
Esquema
4
Como alternativa, la amina (XVA) puede oxidarse
directamente con peróxido de benzoílo, proporcionando una
benzoilhidroxilamina (XXIA) como se muestra en el esquema 5,
utilizando el procedimiento descrito por Phanstiel, J. Org.
Chem., 1997, 62, 8104. Este último compuesto puede formularse
con anhídrido fórmico y acético y después desprotegerse, por
ejemplo, con amoniaco en metanol, proporcionando (IA)
Esquema
5
\vskip1.000000\baselineskip
Los compuestos de fórmula (IB) pueden
sintetizarse de manera análoga a partir de los precursores quirales
apropiados.
Los compuestos de fórmula (III) pueden prepararse
también utilizando la ruta mostrada en el esquema 6. El alcohol
(XXIV) puede obtenerse mediante reducción de la cetona (VII) en
condiciones estándar, por ejemplo, borano en THF. Cuando es
apropiado, el alcohol (XXIV) puede prepararse mediante reacción del
haloalcohol (XXVI) con (XXV). La oxidación a la sulfona (XXIII)
puede llevarse a cabo como se describe anteriormente, seguido de
eliminación utilizando cloruro de metanosulfonilo y trietilamina, o
condiciones de Mitsunobu, proporcionando (XXII). La adición de
hidroxilamina a la sulfona insaturada (XXII) proporciona (III).
Esquema
6
Las halometilcetonas pueden obtenerse mediante
bromación de una metilcetona utilizando bromo en metanol, como se
describe por Gaudry y Marquet Org. Synth., 1976, 55, 24. Como
alternativa, pueden obtenerse bromometilcetonas a partir de las
correspondientes diazocetonas mediante reacción con bromuro de
halógeno utilizando procedimientos estándar. Los compuestos de
fórmula (IX) pueden obtenerse mediante procedimientos estándar, por
ejemplo, mediante bromación de 3-metilquinolina con
N-bromosuccinimida en tetracloruro de carbono. La bromación
de precursores que contienen quinolina con N-bromosuccinimida
se lleva a cabo preferiblemente en presencia de un ácido tal como
ácido acético. Como alternativa, el
quinolin-3-ilmetanol puede
convertirse en un compuesto de fórmula (IX) utilizando
procedimientos estándar de halogenación, por ejemplo, utilizando
pentacloruro de fósforo o cloruro de tionilo, o mediante conversión
en el mesilato, seguido de tratamiento con bromuro de litio en
acetona.
Los precursores protegidos de aminoalcohol están
comercialmente disponibles o pueden prepararse mediante rutas
estándar, por ejemplo, a partir de los correspondientes aminoácidos
como se describen por Ho et al., Tet. Lett., 1993,
34(41), 6513.
Los derivados adecuados de aminoácidos pueden
prepararse a partir de precursores de aziridina, por ejemplo, como
se describe por Nakajima et al., Bull. Soc. Chim.
Japan, 1982, 55, 3049.
Los materiales de partida y otros reactivos están
disponibles comercialmente o pueden sintetizarse mediante
procedimientos bien conocidos y convencionales.
Se prefiere que los compuestos se aíslen en forma
sustancialmente pura.
Como se indica en la presente memoria, un
inhibidor de la formación de CD23 humana soluble tiene propiedades
médicas útiles. Preferiblemente, los compuestos activos se
administran en forma de composiciones farmacéuticamente
aceptables.
Las composiciones se adaptan preferiblemente para
administración oral. Sin embargo, pueden adaptarse a otros modos de
administración, por ejemplo, en forma de un pulverizador, aerosol u
otro procedimiento convencional para inhalación, para tratar
trastornos del tracto respiratorio; o administración parenteral para
pacientes que padecen insuficiencia cardiaca. Otros modos
alternativos de administración incluyen administración sublingual o
transdérmica.
Las composiciones pueden estar en forma de
comprimidos, cápsulas, polvos, gránulos, pastillas masticables,
supositorios, polvos reconstituibles o preparaciones líquidas, tales
como soluciones o suspensiones orales o parenterales estériles.
Para obtener consistencia en la administración,
se prefiere que la composición de la invención esté en forma de una
dosis unitaria.
Las formas de presentación de dosis unitaria para
administración oral pueden ser comprimidos y cápsulas, y pueden
contener excipientes convencionales tales como agentes aglutinantes,
por ejemplo, jarabe, goma arábiga, gelatina, sorbitol, tragacanto o
polivinilpirrolidona; cargas, por ejemplo, lactosa, azúcar, almidón
de maíz, fosfato de calcio, sorbitol o glicina; lubricanes de
compresión, por ejemplo, estearato de magnesio; disgregantes, por
ejemplo, almidón, polivinilpirrolidona, glicolato sódico de almidón
o celulosa microcristalina; o agentes humectantes farmacéuticamente
aceptables tales como laurilsulfato de sodio.
Las composiciones orales sólidas pueden
prepararse mediante procedimientos convencionales de mezclado,
relleno o formación de comprimidos. Pueden utilizarse operaciones de
mezclado repetidas para distribuir el agente activo por estas
composiciones empleando grandes cantidades de cargas. Por supuesto,
dichas operaciones son convencionales en la técnica. Los comprimidos
pueden ser recubiertos según procedimientos bien conocidos en la
práctica farmacéutica normal, en particular con un recubrimiento
entérico.
Las preparaciones líquidas orales pueden estar en
forma, por ejemplo, de emulsiones, jarabes o elixires, o pueden
presentarse en forma de un producto seco para reconstitución con
agua u otro vehículo adecuado antes del uso. Dichas preparaciones
líquidas pueden contener aditivos convencionales tales como agentes
de suspensión, por ejemplo, sorbitol, jarabe, metilcelulosa,
gelatina, hidroxietilcelulosa, carboximetilcelulosa, gel de
estearato de aluminio, grasas hidrogenadas comestibles; agentes
emulsionantes, por ejemplo, lecitina, monooleato de sorbitán o goma
arábiga; vehículos no acuosos (que pueden incluir aceites
comestibles), por ejemplo, aceite de almendra, aceite de coco
fraccionado, ésteres oleosos tales como ésteres de glicerina,
propilenglicol o alcohol etílico; conservantes, por ejemplo,
p-hidroxibenzoato de metilo o propilo o ácido
sórbico; y si se desea, agentes aromatizantes o colorantes
convencionales.
convencionales.
Para administración parenteral, las formas de
dosificación unitaria fluidas se preparan utilizando el compuesto y
un vehículo estéril y, dependiendo de la concentración utilizada,
pueden suspenderse o disolverse en el vehículo. Al preparar
soluciones, el compuesto puede disolverse en agua para inyecciones y
esterilizarse por filtración antes de rellenar un vial o ampolla
adecuado y sellar. Ventajosamente, pueden disolverse en el vehículo
coadyuvantes tales como un anestésico local, un conservante y
agentes de tamponación. Para potenciar la estabilidad, la
composición puede congelarse después de rellenar el vial y retirar
el agua a vacío. Las suspensiones parenterales se preparan
sustancialmente de la misma manera, excepto porque el compuesto se
suspende en el vehículo en lugar de disolverse, y la esterilización
no puede realizarse por filtración. El compuesto puede esterilizarse
mediante exposición a óxido de etileno antes de suspenderlo en el
vehículo estéril. Ventajosamente, se incluye en la composición un
tensioactivo o agente humectante para facilitar la distribución
uniforme del compuesto.
Las composiciones de esta invención pueden
presentarse también adecuadamente para administración al tracto
respiratorio en forma de una aspiración de un aerosol o solución
para un nebulizador, o en forma de polvo microfino para insuflación,
solo o en combinación con un vehículo inerte tal como lactosa. En
dicho caso, las partículas de compuesto activo tienen adecuadamente
diámetros menores de 50 micrómetros, preferiblemente menores de 10
micrómetros, por ejemplo, diámetros en el intervalo de
1-50 micrómetros, 1-10 micrómetros ó
1-5 micrómetros. Cuando sea apropiado, pueden
incluirse pequeñas cantidades de otros antiasmáticos y
broncodilatadores, por ejemplo, aminas simpaticomiméticas tales como
isoprenalina, isoetarina, salbutamol, fenilefrina y efedrina;
derivados de xantina tales como teofilina y aminofilina, y
corticosteroides tales como prednisolona y estimulantes adrenales
tales como
ACTH.
ACTH.
Las composiciones pueden contener de 0,1 a 99% en
peso, preferiblemente de 10-60% en peso, del
material activo, dependiendo del procedimiento de administración. Es
un intervalo preferido para administración inhalada
10-99%, especialmente 60-99%, por
ejemplo, 90, 95 ó 99%.
Las formulaciones en polvo microfino pueden
administrarse adecuadamente en un aerosol en forma de una dosis
medida o mediante un dispositivo adecuado activado por la
respiración.
Las formulaciones adecuadas de aerosol de dosis
medida comprenden propelentes convencionales, codisolventes tales
como etanol, tensioactivos tales como alcohol oleílico, lubricantes
tales como alcohol oleílico, desecantes tales como sulfato de calcio
y modificadores de la densidad tales como cloruro de sodio.
Las soluciones adecuadas para un nebulizador son
soluciones esterilizadas isotónicas, opcionalmente tamponadas por
ejemplo a entre pH 4-7, que contienen hasta 20 mg/ml
de compuesto, pero más generalmente 0,1 a 10 mg/ml, para uso con
equipo estándar de nebulización.
La cantidad eficaz dependerá de la eficacia
relativa de los compuestos de la presente invención, de la gravedad
del trastorno que se esté tratando y del peso del paciente.
Adecuadamente, una forma de dosificación unitaria de una composición
de la invención puede contener de 0,1 a 1000 mg de un compuesto de
la invención (0,001 a 10 mg por inhalación), y más habitualmente de
1 a 500 mg, por ejemplo 1 a 25 ó 5 a 500 mg. Dichas composiciones
pueden administrarse de 1 a 6 veces al día, más habitualmente de 2 a
4 veces al día, de tal manera que la dosis diaria sea de 1 mg a 1 g
para un humano adulto de 70 kg y, más particularmente, de 5 a 500
mg. Es decir, en el intervalo de aproximadamente 1,4 x 10^{-2}
mg/kg/día a 14 mg/kg/día y, más particularmente, en el intervalo de
aproximadamente 7 x 10^{-2} mg/kg/día a 7 mg/kg/día.
Los siguientes ejemplos ilustran la invención,
pero no la limitan en modo alguno.
\newpage
Preparación
1
Etapa
1
Se enfrió a 0ºC
quinolin-3-carboxaldehído (13,18 g)
en etanol (260 ml), seguido de la adición en porciones de
borohidruro de sodio (1,62 g). Se mantuvo la temperatura a 0ºC
durante 15 min, seguido de la adición de HCl 6 N (28 ml), durante
dicho tiempo se mantuvo la temperatura de la reacción a entre
0-5ºC. Se neutralizó después la solución con NaOH 1
M. Se destiló la mezcla de reacción bruta hasta sequedad, para
retirar el etanol, y se repartió el residuo entre agua y AcOEt. Se
secó después la capa de AcOEt (MgSO_{4}), se absorbió sobre gel de
sílice y se sometió a cromatografía (gel de sílice ultrarrápido,
gradiente en etapas: 0-100% AcOEt/hexano),
proporcionando el compuesto del subtítulo en forma de un sólido
blanco (9,58 g).
Etapa
2
Se suspendió 3-quinolilmetanol
(9,85 g) en benceno seco (200 ml) y se agitó, seguido de la adición
de cloruro de tionilo (14,69 ml). Se obtuvo un precipitado amarillo
inmediato. Se mantuvo la agitación a ta durante 2 h. Se separó por
filtración un sólido amarillo claro y se secó, proporcionando el
compuesto del subtítulo (13 g).
Etapa
1
Se trató una solución enfriada con hielo de ácido
(2S,3R)-2-amino-3-metoxibutanoico
(1,04 g) en solución de 1,4-dioxano (10 ml) e
hidróxido de sodio 1 M (7,82 ml) con dicarbonato de
di-terc-butilo (1,88 g). Se dejó que la mezcla alcanzase la
temperatura ambiente y se agitó durante una noche. Se lavó la
solución con hexano (3 x 5 ml), se acidificó con ácido cítrico al 5%
durante una noche y se extrajo con acetato de etilo (25 ml). Se secó
la fase orgánica (MgSO_{4}) y se evaporó, proporcionando el
compuesto del subtítulo (1,81 g). ^{1}H
\delta(CDCl_{3}) 5,3 (1H, m), 4,35 (1H, m), 3,98 (1H, d,
J= 6,5 Hz), 3,39 (3H, s), 1,46 (9H, s), 1,21 (3H, d, J= 6,5 Hz).
Etapa
2
Se trató una solución agitada de ácido
(2S,3R)-2-N-terc-butoxicarbonilamino-3-metoxibutanoico
(1,75 g) en THF seco (20 ml) a -10ºC con N-metilmorfolina
(0,83 ml) y cloroformiato de isobutilo (0,98 ml). Después de 30
minutos, se filtró la mezcla y se volvió a enfriar en hielo. Se
añadió una solución de borohidruro de sodio (0,285 g) en agua (5 ml)
y se agitó la mezcla durante 1 h. Después de acidificación a pH 3
con ácido clorhídrico 1 M, se extrajo la mezcla con acetato de etilo
(20 ml). Se lavó el extracto con agua (2 x 10 m), salmuera saturada
(10 ml), se secó (MgSO_{4}) y se evaporó, proporcionando el
compuesto del subtítulo (1,2 g). ^{1}H-RMN
\delta(CDCl_{3}): 5,1 (1H, m), 3,59-3,75
(4H, m), 3,33 (3H, s), 1,45 (9H, t), 1,18 (3H, d, J= 6,8 Hz).
Etapa
3
Se trató gota a gota con azodicarboxilato de
diisopropilo (2,07 ml) una solución enfriada con hielo de
trifenilfosfina (2,75 g) en THF (40 ml), y se agitó durante 30 min.
Se añadió gota a gota una solución de
(2R,3R)-2-N-terc-butoxicarbonilamino-3-metoxibutanol
(1,15 g) y ácido tioacético (0,75 ml) en THF (10 ml). Se dejó que la
reacción alcanzase la ta durante una noche, y se evaporó. Se extrajo
el residuo con hexano (150 ml), se evaporó y se sometió a
cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, gradiente en etapas:
0-5% AcOEt/MDC), proporcionando el compuesto del
subtítulo (1,24 g). ^{1}H-RMN
\delta(CDCl_{3}): 4,82 (1H, d ancho), 3,66 (1H, m), 3,42
(1H, m), 3,31 (3H, s), 2,96-3,18 (2H, m), 2,32 (3H,
s), 1,42 (9H, s), 1,13 (3H, d, J= 6,3 Hz).
Etapa
4
Se trató gota a gota con hidróxido de sodio 1 M
(5,7 ml) una mezcla agitada de tioacetato de
(2S,3R)-2-N-terc-butoxicarbonilamino-3-metoxibutilo
(1,05 g) y clorhidrato de 3-clorometilquinolina
(0,61 g) en metanol (50 ml) a ta, y se agitó durante una noche. Se
evaporó la mezcla a bajo volumen y se diluyó con una solución
saturada de hidrogenocarbonato de sodio (10 ml). Después de la
extracción con MDC (2 x 10 m), se secaron los extractos combinados
(MgSO_{4}) y se evaporaron. Se sometió el residuo a cromatografía
ultrarrápida (gel de sílice, gradiente en etapas:
15-30% AcOEt/MDC), proporcionando el compuesto del
subtítulo (1,31 g). EM (ión IQPA +ve) 377 (MH^{+});
^{1}H-RMN \delta(CDCl_{3}): 8,9 (1H,
m), 8,1 (2H, m), 7,79 (1H, d, J= 8 Hz), 7,69 (1H, t, J= 8 Hz), 7,56
(1H, t, J= 8 Hz), 4,87 (1H, d ancho), 3,91 (2H, s), 3,68 (2H, m),
3,27 (3H, s), 2,55 (2H, m), 1,46 (9H, s), 1,15 (3H, d, J= 6,3
Hz).
Etapa
5
Se trató con ácido
3-cloroperoxibenzoico al 50% (2,1 g) una solución
enfriada con hielo de
(2S,3R)-2-(N-terc-butoxicarbonilamino)-3-metoxi-1-(3-quinolilmetanosulfanil)butano
(1,3 g) en MDC (20 ml), y se agitó la mezcla durante 1 h. Se
inactivó la mezcla de reacción con tiosulfato de sodio al 10% (10
ml), seguido de una solución saturada de bicarbonato de sodio (10
ml). Después de 5 min, se recogió la fase orgánica, se secó
(MgSO_{4}) y se evaporó. Se cristalizó el residuo con mezclas de
acetato de etilo-hexano, proporcionando el compuesto
adecuado (1 g). EM (ión IQPA +ve): 397 (MNa^{+});
^{1}H-RMN \delta(CDCl_{3}): 8,9 (1H,
m), 8,3 (1H, d, J= 2 Hz), 8,1 (1H, d, J= 8 Hz), 7,83 (1H, d, J= 8
Hz), 7,75 (1H, t, J= 8 Hz), 7,53 (1H, d, J= 8 Hz), 5,04 (1H, ancho),
4,6 (2H, m), 4,2 (1H, m), 3,71 (1H, m), 3,31 (3H, s), 3,17 (2H, m),
1,55 (9H, m), 1,19 (3H, d, J= 6,3 Hz).
Etapa
6
Se trató una solución agitada de
(2S,3R)-2-(N-terc-butoxicarbonilamino)-3-metoxi-1-(3-quinolilmetanosulfonil)butano
(1 g) en MDC (10 ml) a ta con cloruro de hidrógeno 4 M en dioxano
(10 ml). Después de 1 h, se evaporó la mezcla, proporcionando el
compuesto del subtítulo (0,93 g). EM (ión IQPA +ve) 309 (MH^{+}),
^{1}H-RMN
\delta(DMSO-d_{6}) 9,04 (1H, m), 8,71
(1H, s), 8,3 (3H, s ancho), 8,2 (2H, m), 7,91 (1H, t, J= 8 Hz), 7,78
(1H, t, J= 8 Hz), 5,08 (2H, m), 3,3-3,88 (4H, m),
3,31 (3H, s), 1,7 (2H, m), 1,19 (3H, d, J= 6,3 Hz).
Etapa
7
Se calentó a reflujo durante 16 h una mezcla de
diclorhidrato de
(2S,3R)-2-amino-3-metoxi-1-(3-quinolilmetanosulfonil)butano
(0,93 g), bromoacetonitrilo (0,41 ml) y
N-etildiisopropilamina (1,7 ml) en acetonitrilo (15 ml), se
enfrió y se evaporó. Se repartió el residuo entre MDC (15 ml) y una
solución saturada de hidrogenocarbonato de sodio (15 ml). Se recogió
la fase orgánica y se reextrajo la acuosa con MDC (15 ml). Se
secaron las fases combinadas de MDC (MgSO_{4}) y se evaporaron. Se
sometió a cromatografía ultrarrápida el residuo (gel de sílice,
gradiente en etapas: 70-100% AcOEt/hexano),
proporcionando el compuesto del subtítulo (0,59 g). EM (ión IQPA
+ve) 348 (MH^{+}); ^{1}H-RMN
\delta(CDCl_{3}): 8,91 (1H, m), 8,3 (1H, d, J= 2 Hz),
8,14 (1H, d, J= 8 Hz), 7,87 (1H, d, = 8 Hz), 7,78 (1H, t, J= 8 Hz),
7,60 (1H, t, J= 8 Hz), 4,55 (2H, s), 3,4-3,88 (4H,
m), 3,33 (3H, s), 2,93-3,28 (2H, m), 2,18 (1H, m),
0,93 (3H, d, J= 6,3 Hz).
Etapa
8
Se trató una solución enfriada con hielo de
(2S,3R)-3-metoxi-2-(N-cianometilamino)-1-(3-quinolilmetanosulfonil)butano
(590 mg) en MDC (20 ml) con ácido 4-toluenosulfónico
monohidratado (50 mg) y ácido 3-cloroperoxibenzoico
al 70% (281 mg). Después de 45 minutos, se inactivó la reacción con
tiosulfato de sodio al 10% (5 ml), seguido de una solución saturada
de hidrogenocarbonato de sodio (5 ml). Después de 5 min, se recogió
la fase orgánica y se reextrajo la acuosa con MDC (10 ml). Se
secaron las fases combinadas de MDC (MgSO_{4}) y se evaporaron. Se
redisolvió el residuo en metanol (10 ml), se trató con ácido
4-toluenosulfónico monohidratado y clorhidrato de
hidroxilamina (2,36 g), y se calentó a 60ºC durante 1,5 h. Se
evaporó la solución enfriada, después se disolvió en agua (5 ml) y
una solución saturada de hidrogenocarbonato de sodio (5 ml). Después
de la extracción con MDC (2 x 5 ml), se secaron los extractos
combinados (MgSO_{4}) y se evaporaron. Se sometió a cromatografía
ultrarrápida el residuo (gel de sílice, gradiente en etapas:
80-100% acetato de etilo en hexano) proporcionando
el compuesto del subtítulo (305 mg). EM (ión IQPA+ve) 325
(MH^{+}); ^{1}H-RMN \delta(CDCl_{3}):
8,91 (1H, m), 8,32 (1H, d, J= 2Hz), 8,14 (1H, d, J= 8 Hz), 7,85 (1H,
d, J= 8 Hz), 7,76 (1H, t, J= 8 Hz), 7,6 (1H, t, J= 8 Hz), 4,83 (1H,
ancho), 4,58 (2H, m), 3,0-3,7 (4H, m), 3,38 (3H, s),
0,92 (3H, d, J= 6,3 Hz).
Etapa
9
Se disolvió
(2S,3R)-N-[3-metoxi-1-(3-quinolilmetanosulfonil)-2-butil]hidroxilamina
(300 mg) en una solución premezclada de anhídrido acético (2 ml) y
ácido fórmico (6 ml), y se dejó reposar una noche. Se evaporó la
reacción y después se reevaporó con cloroformo (2 x 5 ml). Se
redisolvió el residuo en metanol (5 ml), se trató con carbonato de
potasio (639 mg), se agitó durante 45 min y después se evaporó. Se
redisolvió el residuo en agua (5 ml) y se ajustó e pH a 7 con ácido
clorhídrico 1 M. Después de la extracción con MDC (2 x 5 ml), se
secaron los extractos combinados (MgSO_{4}) y se evaporaron. Se
sometió a cromatografía el residuo (gel de sílice lavado con ácido,
3% de MeOH/DMC), proporcionando el compuesto del título (232 mg). EM
(ión IQPA +ve): 353 (MH^{+}); ^{1}H-RMN
\delta[(CD_{3})_{2}
SO] 9,9 y 9,7 (1H, diastereoisómeros 2 x s), 8,83 (1H, m), 8,38 (1H, d, J= 2 Hz), 8,32 y 8,0 (1H, diastereoisómeros 2 x s), 8,03 (2H, m), 7,81 (1H, t, J= 8 Hz), 7,66 (1H, t, J= 8 Hz), 4,85 y 4,22 (1H, diastereoisómeros 2 x s), 4,76 (2H, m), 3,7-3,33 (3H, m), 3,25 (3H, s), 1,15 (3H, diastereoisómeros m).
SO] 9,9 y 9,7 (1H, diastereoisómeros 2 x s), 8,83 (1H, m), 8,38 (1H, d, J= 2 Hz), 8,32 y 8,0 (1H, diastereoisómeros 2 x s), 8,03 (2H, m), 7,81 (1H, t, J= 8 Hz), 7,66 (1H, t, J= 8 Hz), 4,85 y 4,22 (1H, diastereoisómeros 2 x s), 4,76 (2H, m), 3,7-3,33 (3H, m), 3,25 (3H, s), 1,15 (3H, diastereoisómeros m).
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\vskip1.000000\baselineskip
Se preparó el compuesto del ejemplo 2 a partir de
ácido
(2R,3S)-2-amino-3-metoxibutanoico
utilizando un procedimiento similar al descrito en el ejemplo 1.
Procedimiento
1
Se investigó la capacidad de los compuestos de
ensayo de inhibir la liberación de CD23 soluble mediante el uso del
siguiente procedimiento:
Se purifican membranas plasmáticas de células
RPMI 8866, una línea de células B transformadas por el virus de
Epstein-Barr humano (Sarfati et al.,
Immunology 60 [1987], 539-547) que expresan
altos niveles de CD23, utilizando un procedimiento de extracción
acuosa. Se disgregan las células resuspendidas en tampón de
homogeneización (HEPES 20 mM, pH 7,4, NaCl 150 mM, MgCl_{2} 1,5
mM, DTT 1 mM) mediante cavitación con N_{2} en una bomba Parr, y
se recupera la fracción de membrana plasmática mezclada con otras
membranas mediante centrifugación a 10.000 x g. Se resuspende el
sedimento ligero en fosfato de potasio 0,2 M, pH 7,2 utilizando 2 ml
por 1-3 g de células húmedas, y se desecha el
sedimento nuclear. Se fraccionan adicionalmente las membranas
mediante reparto entre dextrano 500 (6,4% p/p) y polietilenglicol
(PEG) 5000 (6,4% p/p) (ref.) a sacarosa 0,25 M en un total de 16 g
por 10-15 mg de proteínas de membrana [Morre y
Morre, BioTechniques 7, 946-957 (1989)]. Se separan
las fases mediante una breve centrifugación a 1000 x g y se recoge
la fase de PEG (superior), se diluye 3-5 veces con
tampón fosfato de potasio 20 mM pH 7,4, y se centrifuga a 100.000 x
g para recuperar las membranas en esa fase. Se resuspende el
sedimento en solución salina tamponada con fosfato, que consiste en
membranas plasmáticas enriquecidas 3-4 veces, así
como algunas otras membranas celulares (por ejemplo, lisosomas,
Golgi). Se dividen en alícuotas las membranas y se almacenan a
-80ºC. El fraccionamiento a 6,6% de dextrano/PEG proporciona
membranas plasmáticas enriquecidas 10 veces.
Se incuban las membranas fraccionadas a 37ºC
durante tiempos de hasta 4 horas para producir fragmentos de CD23,
que se separan de la membrana mediante filtración en placas de
filtro Durapore de 0,2 micrómetros (Millipore) después de inactivar
el ensayo con un inhibidor de MMP no selectivo, por ejemplo, la
preparación 1 5 \muM del documento WO 95/31457 (sal de sodio de
[4-(N-hidroxiamino)-2-(R)-isobutil-3(S)-(2-tiofentiometil)succinil]-(S)-fenilalanina-N-metilamida,
preparada según el procedimiento descrito en el ejemplo 11 del
documento WO 90/05719). Se determina la CD23s liberada de la
membrana utilizando el kit EIA de The Binding Site (Birmingham, RU)
o uno similar utilizando un mAb MHM6 anti-CD23 [Rowe
et al., Int. J. Cancer, 29, 373-382
(1982)] u otro mAb anti-CD23 como anticuerpo de
captura en un EIA sándwich. Se mide la cantidad de CD23 soluble
formada por 0,5 \mug de proteína de membrana en un volumen total
de 50 \mul de solución salina tamponada con fosfato mediante EIA,
y se compara con la cantidad formada en presencia de diversas
concentraciones de inhibidores. Los inhibidores se preparan en
soluciones de agua o dimetilsulfóxido (DMSO), y la concentración
final no es mayor de 2%. Se determinan las CI_{50} mediante ajuste
de curva como la concentración a la que se observa un 50% de
inhibición de la producción de CD23s respecto a la diferencia en
CD23s entre los controles incubados sin inhibidor.
El compuesto del ejemplo 1 mostró un valor de
CI_{50} de 0,02 \muM.
El compuesto del ejemplo 2 mostró un valor de
CI_{50} de 0,04 \muM.
Procedimiento
2
Se investigó la capacidad de los compuestos de
ensayo de inhibir metaloproteasas de matriz utilizando los
siguientes procedimientos.
Se determinó la potencia de los compuestos que
actúan como inhibidores de colagenasa mediante el procedimiento de
Cawston y Barrett (Anal Biochem., 99,
340-345, 1979), incorporado a la presente memoria
como referencia, en el que se incubó una solución 1 mM del inhibidor
que se está ensayando, o diluciones de la misma, a 37ºC durante 18 h
con colágeno y colagenasa recombinante humana de fibroblastos
sinoviales clonados, expresados y purificados de E. coli
(tamponados con Tris 150 mM, pH 7,6, que contiene cloruro de calcio
15 mM, 0,05% de Brij 35, cloruro de sodio 200 mM y 0,02% de azida de
sodio). Se acetiló el colágeno como el colágeno bovino de tipo 1 con
^{3}H preparado mediante el procedimiento de Cawston y Murphy
(Methods in Enzimology, 80, 711, 1981). Se centrifugaron las
muestras para sedimentar el colágeno no digerido y se retiró una
alícuota del sobrenadante radiactivo para ensayo en un contador de
centelleo como medida de la hidrólisis. Se comparó la actividad
colagenasa en presencia de inhibidor 1 mM, o dilución del mismo, con
la actividad en un control desprovisto de inhibidor, y los
resultados se reseñan como la concentración que afecta al 50% de la
colagenasa (CI_{50}).
El compuesto del ejemplo 1 mostró un valor de
CI_{50} >10 \muM en el procedimiento 2.
Se determinó la inhibición de la actividad
metaloproteasa de matriz utilizando un ensayo de inactivación de
fluorescencia con sustrato apropiado. Por ejemplo, se determinó la
actividad MMP utilizando MMP activada utilizando tripsina, según
Lark et al., Connective Tissue Res., 25, 52 (1990). Se
incuba la MMP a temperatura ambiente en una placa de microvaloración
en un volumen total de 100 \mul, que contiene TrisCl 0,15 M,
CaCl_{2} 15 mM, NaCl 0,2 M, pH 7,6 (tampón de ensayo); inhibidor a
concentraciones de hasta 100 \muM, con no más de 2% de
concentración final de DMSO, sustrato 10 \muM (tal como
SDP-3815-PI para
MMP-1, Peptides International). La concentración de
MMP es <10 nM, y se determina empíricamente con el sustrato
apropiado, dando al menos un aumento de 20 veces en la emisión de
fluorescencia en 30 min. La longitud de onda de excitación
fluorescente fue de 355 nm, la longitud de onda de emisión de
400-460 nm, y los puntos de datos se recogen para
generar una pendiente (cambio de fluorescencia con el tiempo). Se
calcula el porcentaje de inhibición para cada concentración a partir
de la pendiente a tiempo cero, y los valores de CI_{50} a partir
de la dependencia de la concentración. MMP-1, 2, 3,
7, 9, 13, 14 pueden ensayarse todas de la misma manera, utilizando
sustratos comercialmente disponibles reseñados por ser eficaces para
cada enzima. Las enzimas se obtuvieron de Calbiochem y se activaron
utilizando el mismo procedimiento de
tripsina.
tripsina.
El compuesto del ejemplo 1 mostró un valor de
CI_{50} >10 \muM frente a MMP-3 y un valor de
CI_{50} de 2,6 \muM frente a MMP-13.
El compuesto del ejemplo 2 mostró un valor de
CI_{50} de 3 \muM frente a MMP-13.
Bn: bencilo
AcOEt: acetato de etilo
h: hora
min: minutos
MCPBA: ácido meta-cloroperbenzoico
MDC: diclorometano
ta: temperatura ambiente
THF: tetrahidrofurano.
Claims (9)
1. Un compuesto de fórmula (I):
\vskip1.000000\baselineskip
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2. Un compuesto de fórmula (IA):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
3. Un compuesto de fórmula (IB):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
4. Uso de un compuesto según cualquiera de las
reivindicaciones precedentes para la producción de un medicamento
para el tratamiento o la profilaxis de trastornos en los que está
implicada la sobreproducción de CD23s.
5. Una composición farmacéutica para el
tratamiento o la profilaxis de trastornos en los que está implicada
la sobreproducción de CD23s, que comprende un compuesto según las
reivindicaciones 1 a 3 y opcionalmente un vehículo farmacéuticamente
aceptable para el mismo.
6. Un procedimiento para preparar un compuesto
según la reivindicación 1 a 3, comprendiendo dicho
procedimiento:
(a) desproteger un compuesto de fórmula (II):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que P es un grupo protector;
o
(b) formilar un compuesto de fórmula (III):
\vskip1.000000\baselineskip
o (c) oxidar un compuesto de
fórmula
(X):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
7. Un compuesto de fórmula (II):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la que P es un grupo protector
seleccionado de bencilo, tetrahidropiranilo o
p-metoxibencilo.
8. Un compuesto de fórmula (III):
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
9. Un compuesto de fórmula (X):
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|---|---|---|---|
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