ES2242740T3 - Proteina c activada para el tratamiento de pancreatitis. - Google Patents
Proteina c activada para el tratamiento de pancreatitis.Info
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Abstract
El uso de proteína C activada o derivados de la misma en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad o afección patológica en el que la enfermedad es pancreatitis.
Description
Proteína C activada para el tratamiento de
pancreatitis.
Esta invención está definida en las
reivindicaciones y se refiere particularmente a la ciencia médica,
al uso de la proteína C activada para el tratamiento de enfermedades
o condiciones patológicas asociadas con la inducción o represión de
genes específicos.
La proteína C es una serino proteasa y
anticoagulante natural que juega un rol en la regulación de la
hemostasis vascular al inactivar los Factores Va y VIIIa en la
cascada de la coagulación. La proteína C humana es sintetizada in
vivo principalmente en el hígado como un polipéptido único de
461 aminoácidos. La molécula precursora sufre modificaciones post
traduccionales para dar como resultado un zimógeno de 2 cadenas
circulante que es activado in vivo por la trombina en
complejo con trombomodulina en una superficie fosfolipídica en
presencia de iones calcio. La activación se produce como resultado
de la remoción de un dodecapéptido en el N-terminal
de la cadena pesada, para dar proteína C activada (aPC).
En conjunción con otras proteínas, aPC funciona
probablemente como el regulador negativo más importante de la
coagulación sanguínea, dando como resultado una protección contra
la trombosis. Además de sus funciones anticoagulantes, la aPC tiene
efectos antiinflamatorios a través de la inhibición de la generación
de citoquinas (por ej. TNF y IL-1) y también tiene
propiedades profibrinolíticas que facilitan la lisis del coágulo.
Por consiguiente, el sistema enzimático proteína C representa un
mecanismo fisiológico importante de anticoagulación,
antiinflamación y fibrinolisis.
El mecanismo(s) por el cual la proteína C
ejerce sus varias actividades ha sido un área activa de
investigación durante años. Se sabe que la proteína C se une al
receptor de proteína C endotelial (EPCR). Esta interacción facilita
la activación más eficiente de la proteína C por la trombina y la
propagación de la respuesta anticoagulante
(Stearns-Kurosawa, y col. Blood, 94(10):
2878, 1999). También se ha postulado que la actividad
antiinflamatoria de la proteína C esta relacionada, en parte, a la
interacción de la porción oligosacárida de la proteína con
selectinas (Yan, y col., Glycobiology (3) 957-608,
1993). Además, la aPC ha demostrado tener efectos antiinflamatorios
directos en monocitos. Además, los datos sugieren que la proteína C
activada exhibe sus efectos profibrinolíticos por estimulación o
por liberación de activadores de plasminógeno dentro de la sangre
y/o por neutralización del inhibidor del activador de plasminógeno
(PAI-1) (Castellino, F. J., Trends in Cardiovasc.
Med. (5) 55-62, 1995) y generación disminuida del
inhibidor de fibrinolisis activado por trombina [TAFI] (Nesheim y
col., Throm. and Haem., 78 (1): 386-391, 1997).
No obstante, el efecto de la proteína C a nivel
molecular no ha sido dilucidado. Por consiguiente, existe una
necesidad en la técnica de descubrir el efecto directo de la
proteína C en la inducción o represión de genes asociados con varias
enfermedades o condiciones patológicas. Por lo tanto, la
dilucidación de tales genes regulados por la proteína C provee
información útil y valiosa que conduce a nuevos tratamientos
terapéuticos para aPC.
En una forma de realización se provee un
procedimiento para tratar una enfermedad o afección patológica
asociada con muerte celular apoptótica que comprende la
administración de una cantidad farmacéuticamente eficaz de proteína
C activada o un compuesto que tiene actividad de proteína C
activada.
Otro aspecto es un procedimiento para incrementar
la actividad de Bcl-2 en células afectadas por una
enfermedad o afección patológica asociada con apoptosis que
comprende la administración de una cantidad farmacéuticamente eficaz
de proteína C activada o un compuesto que tiene actividad de
proteína C activada.
Otra forma de realización es un procedimiento
para incrementar la actividad del homólogo B de IAP humana en
células afectadas por una enfermedad o afección patológica asociada
con apoptosis que comprende la administración de una cantidad
farmacéuticamente eficaz de proteína C activada o un compuesto que
tiene actividad de proteína C activada.
Otra forma más de realización es un procedimiento
para tratar a un paciente que sufre de una enfermedad o afección
patológica inducida por NF-kB que comprende la
administración de una cantidad farmacéuticamente eficaz de proteína
C activada o un compuesto que tiene actividad de proteína C
activada.
Otro aspecto más provee un procedimiento para
tratar una enfermedad o afección patológica en la que
TNF-\alpha es un modulador primario de
patofisiología que comprende la administración de una cantidad
farmacéuticamente eficaz de proteína C activada o un compuesto que
tiene actividad de proteína C activada.
Otro aspecto provee un procedimiento para tratar
una enfermedad o afección patológica en la que PCNA o proteína Gu
es un regulador de crecimiento y supervivencia celular que
comprende la administración de una cantidad farmacéuticamente eficaz
de proteína C activada o un compuesto que tiene actividad de
proteína C activada.
En otro aspecto más se provee un procedimiento
para tratar una enfermedad o afección patológica en la que la
adhesión célula-célula es un modulador de
patofisiología que comprende la administración de una cantidad
farmacéuticamente eficaz de proteína C activada o un compuesto que
tiene actividad de proteína C activada.
Otra forma de realización prevé el uso de
proteína C activada o un compuesto que tiene actividad de proteína
C activada en la fabricación de un medicamento para el tratamiento
de una enfermedad o afección patológica asociada con muerte celular
apoptótica.
Otra forma más de realización prevé el uso de
proteína C activada o un compuesto que tiene actividad de proteína
C activada en la fabricación de un medicamento para el tratamiento
de una enfermedad o afección patológica en la que
TNF-\alpha es un modulador primario de
patofisiología; en la que PCNA o proteína Gu es un regulador de
crecimiento o supervivencia celular; en la que la adhesión
célula-célula es un modulador de patofisiología y en
la que una enfermedad o afección patológica es inducida por
NF-kB.
Se contempla que la proteína C activada como está
indicada para los tratamientos anteriores es proteína C activada
humana.
En otra forma de realización, se provee un
procedimiento de rastreo para identificar sustancias de prueba que
inducen o reprimen la expresión de genes que son inducidos o
reprimidos por la proteína C activada. El nivel de expresión de un
ARN transcrito o su producto de traducción en una primera muestra
es comparado con el nivel de expresión inducido por la proteína C
activada. El nivel de expresión de un ARN transcrito o su producto
de traducción en una segunda muestra es comparada con el nivel de
expresión reprimido por la proteína C activada.
En otro aspecto de la invención se provee un
procedimiento de rastreo para identificar sustancias de prueba que
modulan la actividad de la proteína C activada en la inducción o
represión de genes. Se pone en contacto una célula con una sustancia
prueba en combinación con proteína C activada y se compara el nivel
de expresión de un ARN transcrito o su producto de traducción en una
primera muestra con el nivel de expresión inducido por la proteína
C activada sola. Se pone en contacto una célula con una sustancia
prueba en combinación con proteína C activada y se compara el nivel
de expresión de un ARN transcrito o su producto de traducción en
una segunda muestra con el nivel de expresión reprimido por la
proteína C activada sola.
La primera muestra en las formas de realización
anteriores es un gen transcrito seleccionado del grupo constituido
por gen números 1-5 como se muestra en la Figura 1.
La segunda muestra en las formas de realización anteriores es un
gen transcrito seleccionado del grupo constituido por gen números
1-15 como se muestra en la Figura 2.
La Figura 1 es una Tabla que muestra los genes
inducidos por la proteína C activada.
La Figura 2 es una Tabla que muestra los genes
reprimidos por la proteína C activada.
Para los objetos de la presente invención, como
se describe y reivindica en este documento, los siguientes términos
están definidos a continuación.
aPC o proteína C activada se refiere a proteína C
activada recombinante (rhAPC). De preferencia aPC es proteína C
humana (Zovant^{TM}, proteína C activada humana recombinante, Eli
Lilly & Co.) o derivados que tienen las actividades
características proteolítica, amidolítica, esterolítica y biológica
(anticoagulante, antiinflamatoria, o profibrinolítica) de la aPC
humana. Se describen ejemplos de derivados de proteína C en Gerlitz
y col., Patente de EEUU Nº 5.453.373 y en Foster, y col., Patente de
EEUU Nº 5.516.650, cuyas enseñanzas están incorporadas en su
totalidad como referencia en este documento. La proteína C activada
recombinante puede ser producida por activación del zimógeno de
proteína C humana recombinante in vitro o por secreción
celular directa de la forma activada de proteína C. La proteína C
puede ser producida en animales transgénicos, plantas transgénicas
o en una variedad de células eucariotas, incluyendo por ejemplo la
secreción por parte de células de riñón humano 293 como un zimógeno,
luego purificada y activada por técnicas conocidas por los expertos
en la materia.
Tratamiento - describe el manejo y cuidado
de un paciente con la finalidad de combatir una enfermedad,
afección o trastorno, o de manera profiláctica para prevenir la
aparición de síntomas o complicaciones de la enfermedad, afección
patológica o trastorno.
Infusión continua - la introducción
ininterrumpida sustancialmente continua de una solución o
suspensión por vía endovenosa durante un periodo de tiempo
especificado.
Inyección en bolo - la inyección de un
fármaco en una cantidad determinada (llamada bolo) durante un
periodo de tiempo de hasta aproximadamente 120 minutos.
Adecuado para administración - una
formulación liofilizada o solución que es apropiada para ser
administrada como agente terapéutico.
Estados hipercoagulables - coagulabilidad
excesiva asociada con coagulación intravascular diseminada,
condiciones pretrombóticas, activación de la coagulación o
deficiencias congénitas o adquiridas de factores de coagulación
como aPC.
Zimógeno - zimógeno de proteína C, como es
usado en este documento, se refiere a las formas secretadas,
inactivas, sean de una o dos cadenas, de proteína C.
Cantidad farmacéuticamente eficaz - una
cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto farmacológico. La
dosis particular del compuesto administrado de acuerdo con esta
invención debe, por supuesto, ser determinado por el médico
interviniente evaluando las circunstancias particulares que rodean
el caso, incluyendo el compuesto administrado, la afección
particular que es tratada, las características del paciente y
consideraciones similares.
Es un descubrimiento que la proteína C modula una
multitud de genes, aumentando y disminuyendo la expresión de sus
ARNm y productos proteicos. Estos genes no han sido previamente
identificados como genes modulados por proteína C activada. La
modulación establecida ahora por la proteína C activada indica que
los genes están involucrados en la progresión o inhibición de
varias enfermedades o condiciones patológicas.
La modulación de los genes indicados fue
determinada por medio del perfil transcripcional, que es el
monitoreo simultáneo de la expresión genética para una gran parte
del genoma de un organismo. El análisis de los perfiles
transcripcionales provee información de las bases moleculares
esenciales del desarrollo y diferenciación celular, identifica vías
biológicas y de transducción de señales, determina genes que son
expresados de forma coordinada, identifica la función de genes
nuevos y provee puntos de vista en la patofisiología de
enfermedades (Lander, E.S., Science 274:536-539,
1996; Lander, E.S., Nat. Genet., 21(Supl.):
3-4, 1999; Lockhart, y col., Nature Genetics
21(Supl.): 20-24, 1999)
Un muestreo de 6800 genes humanos fueron
analizados en los efectos de la proteína C en su expresión. Un
rastreo tan extenso e imparcial permite la identificación de muchos
genes que hasta el momento no eran reconocidos como genes modulados
por proteína C activada.
El nivel de expresión de un ARN transcrito o su
producto de traducción (proteína) puede ser determinado usando
cualquiera de las técnicas conocidas en la materia. Las sondas de
oligonucleótidos específicas para los genes relevantes pueden ser
usadas en experimentos de hibridación, como es conocido en la
técnica. Puede ser usado cualquier formato de hibridación para
determinar los niveles de ARN, incluyendo pero no limitando a
micromatrices ADNc, RT-PCR, hibridación sustractiva,
transferencia tipo Northern (Northern blot), hibridación puntual,
hibridación en ranura e hibridación a matrices de oligonucleótidos.
La especificidad de la hibridación puede ser calculada variando los
grados de rigurosidad en las condiciones de hibridación. Además, la
comparación de las sondas emparejadas perfectamente y no
emparejadas puede ser usada para la determinación de la
especificidad de la unión. Para evaluar los niveles de expresión del
producto de traducción específico, pueden usarse fácilmente
anticuerpos específicos para la proteína. También, puede ser usado
cualquier procedimiento conocido en la técnica para medir los
niveles de la proteína específica, incluyendo ensayos tipo sándwich,
ELISAs, inmunoprecipitación y transferencia tipo Western. En tales
ensayos pueden ser usados anticuerpos monoclonales, anticuerpos
policlonales, anticuerpos de cadena única y fragmentos de
anticuerpos. La especificidad de las reacciones inmunológicas puede
calcularse usando proteínas o anticuerpos competidores, así como
también por medio de la variación de las condiciones de
inmunorreacción. El monitoreo de los niveles del producto de
expresión involucra la determinación de las cantidades de un
producto de expresión específico. Las cantidades determinadas no
necesitan ser cantidades absolutas, sino que pueden ser cantidades
relativas determinadas bajo diferentes condiciones, por ejemplo, en
presencia y en ausencia de un compuesto de prueba.
Las sondas pueden ser marcadas o no marcadas,
ligadas a otra sustancia o en solución, sintéticas o aisladas de la
naturaleza. Las sondas pueden ser ácidos nucleicos, ARN o ADN, que
contienen bases nucleotídeas de aparición natural o modificadas. Las
sondas pueden contener uniones de nucleótidos normales o uniones
peptídicas. Las sondas de oligonucleótidos pueden ser de una
longitud que provee una significativa especificidad de hibridación.
De esta manera, las sondas pueden ser tan pequeñas como 10
nucleótidos y de preferencia tienen entre 12 y 30 nucleótidos de
longitud. No obstante, las sondas de oligonucleótidos pueden ser
significativamente más largas, en el intervalo desde 30 hasta 100
nucleótidos, desde 100 hasta 500 nucleótidos o desde 500 hasta 2000
nucleótidos. Las sondas pueden estar unidas a polímeros, solubles o
no solubles. Las sondas pueden estar fijadas a sustratos sólidos
tales como filtros, láminas, chips, portaobjetos o bolitas.
Las matrices de alta densidad son particularmente
útiles para monitorear el control de expresión en el nivel
transcripcional, de procesamiento y degradación de ARN (perfil
transcripcional). La fabricación y aplicación de matrices de alta
densidad en el monitoreo de expresión genética han sido previamente
descritas en, por ejemplo la Patente de EEUU Nº 6.020.135, la que
es incorporada en este documento como referencia. Cada nucleótido
ocupa una localización conocida en un sustrato. Una muestra blanco
de ácido nucleico es hibridizada con una matriz de alta densidad de
oligonucleótidos y luego se cuantifica la cantidad de ácido
nucleico blanco hibridizado a cada sonda en la matriz. Un
procedimiento de cuantificación, de preferencia es el uso de
microscopía confocal y marcadores fluorescentes. El sistema
GeneChip® (Affymetrix, Santa Clara, Calif.) es particularmente
adecuado para cuantificar la hibridación: no obstante, será
evidente para los expertos en la técnica, que puede también ser
usado cualquier sistema similar u otro procedimiento de detección
equivalente en eficacia.
Pueden ser usadas una variedad de líneas
celulares primarias de mamífero para realizar el perfil
transcripcional para analizar el efecto de la proteína C activada en
la modulación de genes específicos. Tales líneas celulares de
mamíferos pueden incluir, pero no están limitadas a: leucocitos de
sangre periférica, células de médula ósea, células endoteliales,
células epiteliales pulmonares, macrófagos pulmonares, epitelio
intestinal, queratinocitos, poblaciones de células neuronales,
células sinoviales, células hepáticas, células renales, poblaciones
de células derivadas del bazo, osteoblastos, osteoclastos, células
de músculo liso, miocitos (esqueléticos y cardíacos), células
dendríticas o células prostáticas. En la presente invención, el
perfil transcripcional fue usado para analizar cómo aPC modula la
respuesta inflamatoria en células endoteliales. El ARN fue aislado
de células endoteliales de vena umbilical humana (HUVEC), HUVEC con
aPC, HUVEC tratadas con factor de necrosis tumoral \alpha
(TNF-\alpha) para inducir un estado de activación
celular o simular una respuesta inflamatoria y HUVEC tratadas con
aPC y TNF-\alpha. Los genes cuya transcripción
fue inducida por proteína C activada son mostrados en la Figura 1.
De manera similar, los genes cuya transcripción fue reprimida por
proteína C activada son mostrados en la Figura 2 y en el Ejemplo
2.
La proteína C activada induce la expresión
genética de A1 homólogo B humano (homólogo bcl-2) y
IAP humana (MIHB), Figura 1 y Ejemplo 1. Los miembros de la familia
bcl-2 inhiben la mayoría de los tipos de muerte
celular apoptótica y se cree que funcionan regulando una vía
antioxidante en sitios de generación de radicales libres
(Hockenbery y col. Cell 75:241-251, 1993). Apoptosis
es el término usado para describir un tipo de muerte celular que
ocurre en muchos tejidos como un proceso fisiológico normal.
También llamada "muerte celular programada", esta forma de
muerte celular involucra la activación en las células de un
programa construido para el suicidio celular por el cual las
células esencialmente se autodigieren. Un aspecto de la presente
invención es la inhibición de la apoptosis por medio de la proteína
C activada. Esto ha sido ejemplificado en varios tipos celulares
como se muestra en el Ejemplo 3.
En contraste con el efecto de la apoptosis en el
fenómeno celular normal, cuando está regulada de manera aberrante,
la muerte de las células por apoptosis puede llevar a una variedad
de enfermedades y condiciones patológicas. Por ejemplo la muerte de
neuronas que ocurre en enfermedades como la demencia de Alzheimer y
la enfermedad de Parkinson muestran muchas características de
apoptosis. Las enfermedades autoinmunes, en las que las células
inmunológicas atacan de manera inapropiada a los tejidos normales,
en parte es debido, a que no ocurre apoptosis. Adicionalmente, la
muerte celular causada por infección viral puede ocurrir en muchos
casos por apoptosis, incluyendo la muerte de células T inducida por
el Virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH) que causa el SIDA.
MIHB es un homólogo de IAP que es una proteína
inhibitoria de apoptosis. Por lo tanto la inducción de
bcl-2 y/o MH1B inhibirá la apoptosis lo que a su vez
inhibirá enfermedades o condiciones patológicas asociadas con
apoptosis. La proteína C activada por inducción de la expresión
genética de bcl-2 y/o MH1B es útil para tratar
enfermedades o condiciones patológicas asociadas con apoptosis. De
preferencia, las enfermedades o condiciones patológicas asociadas
con apoptosis para las que la proteína C activada es útil como
tratamiento son: artritis reumatoide, enfermedad intestinal
inflamatoria, vasculitis, fallo renal isquémico, diabetes mellitus
insulino dependiente, pancreatitis, soriasis, esclerosis múltiple,
tiroiditis de Hashimoto, enfermedad de Graves, lupus eritematoso
sistémico, gastritis autoinmune, fibrosis de pulmón, linfoma
inducido por VIH, hepatitis B viral fulminante, hepatitis C viral
fulminante, hepatitis crónica, cirrosis crónica, ulceración
asociada a H. pylori, aterosclerosis, citoprotección durante
el tratamiento de cáncer, glomerulonefritis crónica, osteoporosis,
anemia aplásica, mielodisplasia, enfermedad de Alzheimer,
enfermedad de Parkinson. La proteína C activada induce la expresión
genética de antígeno nuclear celular de proliferación humano (PCNA)
y proteína Gu humana, Figura 1 y Ejemplo 1. El antígeno nuclear de
proliferación celular (PCNA) juega un papel esencial en el
metabolismo del ácido nucleico como un componente de la maquinaria
de replicación y reparación. Una de las funciones bien establecidas
para PCNA es su papel como el factor de capacidad de procesamiento
para ADN polimerasa \delta y \varepsilon. El PCNA liga la
unidad catalítica polimerasa al modelo ADN para la síntesis rápida y
procesiva de ADN y así es asociada con el crecimiento y
supervivencia celular. La proteína Gu es un miembro de un nuevo
subgrupo de helicasas de ARN y ácidos asociados con el crecimiento y
supervivencia celular. Por lo tanto, la proteína C activada es útil
para tratar una enfermedad o afección patológica en la que PCNA o
la proteína Gu es un regulador del crecimiento y supervivencia
celular. Ejemplos de tal regulación incluyen, pero no están
limitados a, la regulación del crecimiento celular en células
endoteliales y aumento de la angiogénesis, lo que es necesario en
la curación de heridas y en el reestablecimiento del flujo
sanguíneo en tejidos luego de daño o lesión.
La proteína C activada induce la expresión
genética de óxido nítrico sintetasa endotelial (ENOS), Figura 1.
ENOS está involucrada en el control de la función plaquetaria tanto
in vitro como in vivo. La hemostasis plaquetaria es
mantenida por la liberación de ENOS desde el endotelio, endocardio
y las plaquetas mismas. La ENOS generada en este sistema inhibe la
adhesión y agregación plaquetaria y promueve la disgregación de los
agregados plaquetarios preformados. Además, ENOS ha sido asociada
con la relajación del músculo liso.
La actividad inhibitoria de ENOS es debida
fundamentalmente a su interacción con la ciclasa de guanilato
soluble y el incremento resultante en GMPc. Las reacciones
subsecuentes mediadas por GMPc son menos claras, pero llevan a la
inhibición de la expresión de las glicoproteínas plaquetarias,
incluyendo IIb/IIIa y P-selectina. La generación
disminuida de ENOS endotelial ha sido asociada con un efecto
perjudicial en la integridad de las paredes de los vasos debido a la
activación de la célula endotelial y la adhesión plaquetaria. De
este modo, induciendo la expresión genética del ENOS endotelial, la
proteína C activada es útil para el tratamiento de enfermedades o
condiciones patológicas debidas a activación de la células
endoteliales y adhesión plaquetarias. Ejemplos de tales
enfermedades incluyen, pero no están limitadas a, aterosclerosis
arterial coronaria, reestenosis arterial posterior a angioplastia
con balón, hipertensión, fallo cardíaco, enfermedad coronaria
posterior a trasplante e hipertensión inducida por el embarazo y
preeclampsia.
Inesperadamente, la proteína C activada reprimió
la expresión del gen para el factor nuclear kappa B
(NF-kB), Figura 2.NF-kB es un factor
transcripcional activado por una amplia variedad de agentes
incluyendo las citoquinas inflamatorias IL-1 y TNF.
Como factor de transcripción, NF-kB regula la
expresión de genes involucrados en la activación de células
inmunes, desarrollo de células B y T, respuestas antiviral y
antimicrobiana. La capacidad de aPC para inhibir los efectos
mediados por NF-kB es útil para el tratamiento de
enfermedades o condiciones patológicas en las que es inducido
NF-kB. Ejemplos de enfermedades específicas o
condiciones patológicas asociadas con la inducción de
NF-kB incluyen, pero no están limitadas a,
enfermedades de degeneración neuronal, reacciones injerto versus
huésped, condiciones inflamatorias agudas, respuestas inflamatorias
sistémicas, respuestas de fase aguda, lesión por
isquemia-reperfusión, aterosclerosis, infección VIH
y cáncer.
Los efectos de TNF-\alpha como
una citoquina inflamatoria son bien conocidos en la técnica. La
capacidad de aPC para inhibir efectos mediados por
TNF-\alpha, como se muestra en la Figura 2 y
Ejemplo 1, es útil para el tratamiento de enfermedades o condiciones
patológicas en las que TNF-\alpha es un modulador
primario de patofisiología. Ejemplos de enfermedades específicas o
condiciones patológicas asociadas con la inducción de
TNF-\alpha incluyen, pero no están limitadas a,
enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa, artritis, inflamación
peritoneal aguda y fallo cardíaco.
La proteína C activada suprimió la inducción por
TNF-\alpha de genes MHC clase 1, Figura 2. En
todos los vertebrados hay una región genética que tiene una
influencia mayor en la supervivencia de injertos. Esta región es
llamada Complejo Mayor de Histocompatibilidad (MHC). Los individuos
idénticos para esta región pueden intercambiar injertos más
exitosamente que aquellas combinaciones de MHC no idénticas. Los
productos MHC juegan un papel importante en el reconocimiento de
antígenos por las células T. Por lo tanto, aPC es útil en el
tratamiento de enfermedades o condiciones patológicas en las que
MHC clase 1 o HLA-B alelo nulo son moduladores de la
función inmune. Ejemplos de tales enfermedades o condiciones
patológicas incluyen, pero no están limitadas a, transplante de
órgano, enfermedad infecciosa o enfermedad autoinmune.
La proteína C activada reprimió la transcripción
de B61 y la variante de la isoforma de la linfotoxina beta, Figura
2. Los productos de estos genes son citoquinas proinflamatorias.
Así, la proteína C activada es útil para el tratamiento de
enfermedades o condiciones patológicas de naturaleza inflamatoria.
Ejemplos de tales enfermedades o condiciones patológicas incluyen,
pero no están limitadas a, condiciones inflamatorias agudas,
respuestas inflamatorias sistémicas, respuesta de fase aguda e
inflamación peritoneal aguda.
La proteína C activada reprimió la transcripción
de ELAM-1, VCAM-1,
PECAM-1 y el precursor de la quemoquina CX3C humana,
Figura 2 y Ejemplo 2. Los productos de estos genes están
involucrados en la adhesión célula-célula y la
interacción célula-célula. De este modo, la
proteína C activada es útil para el tratamiento de enfermedades o
condiciones patológicas en las que la adhesión
célula-célula es un modulador de
patofisiología.
La proteína C activada reprimió la transcripción
de calreticulina, Figura 2. Auto anticuerpos contra calreticulina
han sido asociados con numerosos trastornos autoinmunes. Por lo
tanto, disminuyendo la cantidad de calreticulina por represión
transcripcional resultará en una producción menor de
autoanticuerpos. Así, la proteína C activada es útil para el
tratamiento de enfermedades o condiciones patológicas en las que los
anticuerpos anti-calreticulina son un modulador de
patofisiología. Ejemplos de tales enfermedades o condiciones
patológicas incluyen, pero no están limitadas a, lupus eritematoso
sistémico, síndrome de Sjogren, oncocerciasis, artritis reumatoide,
enfermedad mixta del tejido conectivo y bloqueo cardíaco congénito
completo.
La proteína C activada reprimió la transcripción
de trombospondina (TSP-1), Ejemplo 2.
TSP-1 es una glicoproteína de la matriz extracelular
que es sintetizada y secretada por una variedad de tipos celulares,
incluyendo células endoteliales y tumorales. TSP-1
liberada por plaquetas activadas participa en la formación de
puentes moleculares entre plaquetas y leucocitos que son reclutados
como parte del proceso inflamatorio. TSP-1 también
regula la angiogénesis a través de su efecto en la adhesión y
proliferación de células endoteliales y se piensa que juega un
papel en la progresión de tumores. TSP-1 es un
activador de TGF-\beta, una citoquina involucrada
en el crecimiento celular, diferenciación y modulación inmune. La
inducción de TGF-\beta es asociada con fibrosis
renal e hipertrofia cardiaca posterior a infarto de miocardio. De
este modo, la proteína C activada es útil para el tratamiento de
enfermedades o condiciones patológicas asociadas con niveles
elevados de TSP-1 y TGF-\beta.
Ejemplos de tales enfermedades o condiciones patológicas incluyen,
pero no están limitadas a, cáncer de mama, enfermedades malignas
gastrointestinales, cánceres ginecológicos, cáncer de pulmón,
fibrosis renal e hipertrofia cardiaca posterior a infarto de
miocardio.
La proteína C activada reprime la transcripción
de RDC1, Figura 2. RDC1 está relacionada con la familia de
proteínas conocidas como receptores acoplados a proteína G. Está
bien establecido que muchos procedimientos biológicos significativos
son mediados por la participación en vías de transducción de
señales que involucran proteínas-G. Por lo tanto, a
proteína C activada es útil para el tratamiento de enfermedades o
condiciones patológicas asociadas con niveles elevados de RDC1.
Ejemplos de tales enfermedades o condiciones patológicas incluyen,
pero no están limitadas a, infecciones bacterianas, fúngicas, por
protozoos y virales, particularmente infecciones causadas por
VIH-1 o VIH-2; dolor; cánceres;
anorexia; bulimia; asma; enfermedad de Parkinson; fallo cardíaco
agudo; hipotensión; hipertensión; retención urinaria; osteoporosis;
angina de pecho; úlceras; alergias; hipertrofia prostática benigna;
y trastornos sicóticos y neurológicos incluyendo ansiedad,
esquizofrenia, depresión maníaca, delirio, demencia, retardo mental
severo y disquinesias, tales como la enfermedad de Huntington o el
síndrome de Gilles de la Tourett.
En otra forma de realización se provee un
procedimiento para el rastreo para identificar compuestos o
sustancias de prueba que inducen o reprimen la expresión de genes
que son inducidos o reprimidos por proteína C activada. El nivel de
expresión de un transcrito de ARN o su producto de traducción en
una primera muestra es comparado con el nivel de expresión inducido
por proteína C activada. El nivel de expresión de un transcrito de
ARN o su producto de traducción en una segunda muestra es comparado
con el nivel de expresión reprimido por proteína C activada.
El tipo celular de preferencia para la forma de
realización anterior es la célula endotelial aunque otros tipos
celulares pueden ser considerados y son contemplados por la
presente invención. La primera muestra en la forma de realización
anterior es un transcrito de un gen de uno o más genes, de
preferencia 2 a 5 genes, de más preferencia 5 genes, seleccionados
del grupo constituido por los genes descritos en la Figura 1. La
segunda muestra en la forma de realización anterior es un
transcrito de un gen de uno o más genes, de preferencia 2 a 14
genes, aún de más preferencia 7 a 14 genes, de mayor preferencia 14
genes, seleccionados del grupo constituido por los genes descritos
en la Figura 2.
En otro aspecto se provee un procedimiento para
rastreo para identificar sustancias de prueba que modulan la
actividad de la proteína C activada en la inducción o represión de
genes. Una célula es puesta en contacto con una sustancia de prueba
en combinación con proteína C activada y el nivel de expresión de
un transcrito de un RNA o su producto de traducción en una primera
muestra es comparado con el nivel de expresión inducido solamente
por proteína C activada.
Una célula es puesta en contacto con una
sustancia de prueba en combinación con proteína C activada y el
nivel de expresión de un transcrito de un ARN o su producto de
traducción en una segunda muestra es comparado con el nivel de
expresión reprimido solamente por proteína C activada.
El tipo celular de preferencia para la forma de
realización anterior es la célula endotelial aunque otros tipos
celulares pueden ser considerados y son contemplados por la
presente invención. La primera muestra en la forma de realización
anterior es un transcrito de un gen de uno o más genes, de
preferencia 2 a 5 genes, de más preferencia 5 genes, seleccionados
del grupo constituido por los genes descritos en la Figura 1. La
segunda muestra en la forma de realización anterior es un
transcrito de un gen de uno o más genes, de preferencia 2 a 14
genes, aún de más preferencia 7
a 14 genes, de mayor preferencia 14 genes, seleccionados del grupo constituido por los genes descritos en la Figura 2.
a 14 genes, de mayor preferencia 14 genes, seleccionados del grupo constituido por los genes descritos en la Figura 2.
Los compuestos identificados en uno o más de los
rastreos anteriores deberían tener actividad de proteína C activada
o deberían modular la actividad de proteína C y deberían ser útiles
para tratar enfermedades o condiciones patológicas que son tratadas
con eficacia con proteína C activada como se ha descrito en este
documento. Los compuestos identificados pueden ser administrados
solos o en combinación con proteína C activada. La frase "en
combinación con" se refiere a la administración de un compuesto
con proteína C activada, de manera simultánea, secuencial o una
combinación de las mismas.
La proteína C puede ser formulada de acuerdo con
procedimientos conocidos para preparar composiciones farmacéuticas
que comprenden como agente activo aPC y un vehículo sólido
farmacéuticamente aceptable. Por ejemplo, una formulación deseada
debería ser un producto liofilizado estable de alta pureza que
comprende un agente productor de volumen tal como sucrosa, una sal
como el cloruro de sodio, un tampón como el citrato de sodio y
proteína C activada humana. Una formulación liofilizada estable de
preferencia comprende una razón de pesos de alrededor de una parte
de proteína C activada entre 7 a 8 partes de sal y entre alrededor
de 5 y 7 partes de agente productor de volumen. Ejemplos de
formulaciones liofilizadas estables incluyen: 5,0 mg/ml de proteína
C activada, pH 6,0; y, 20 mg/vial de proteína C activada, 120 mg/ml
de sucrosa, 152 mg/vial NaCl, 30,2 mg/vial de citrato, pH 6,0.
De preferencia, la proteína C será administrada
por vía parenteral para asegurar la administración dentro del
torrente sanguíneo en una forma eficaz inyectando una dosis de
entre 0,01 mg/kg/día y 10 mg/kg/día, B.I.D. (dos veces al día),
durante 1 a 10 días. De más preferencia, la proteína C será
administrada B.I.D. durante 3 días.
En variante, la proteína C será administrada como
infusión continua durante 1 a 240 horas. De más preferencia, la
proteína C será administrada como infusión continua durante 1 a 196
horas. Aún de más preferencia, la proteína C será administrada como
infusión continua durante 1 a 144 horas. Aún de mayor preferencia,
la proteína C será administrada como infusión continua durante 1 a
96 horas.
La cantidad de proteína C administrada por
infusión continua será de aproximadamente desde 0,01 mcg/kg/h hasta
aproximadamente 50 mcg/kg/h. De más preferencia, la cantidad de
derivado de proteína C administrada será desde aproximadamente 0,1
mcg/kg/h hasta aproximadamente 40 mcg/kg/h. Aún de más preferencia,
la proteína C será administrada será desde aproximadamente desde 1
mcg/kg/h hasta aproximadamente 30 mcg/kg/h. La cantidad de proteína
C administrada será de mayor preferencia de aproximadamente 24
mcg/kg/h.
Las concentraciones en plasma de preferencia
obtenidas con la cantidad de proteína C administrada será desde
0,02 ng/ml hasta menos de 100 ng/ml. De más preferencia las
concentraciones en plasmas van desde aproximadamente 0,2 ng/ml hasta
50 ng/ml. De mayor preferencia las concentraciones en plasma van
desde aproximadamente 2 ng/ml hasta aproximadamente 60 ng/ml y aún
de mayor preferencia desde 40 ng/ml hasta 50 ng/ml.
En otra variante, la proteína C será administrada
inyectando una porción (1/3 a ½) de la dosis por hora apropiada
como una inyección en bolo durante un tiempo desde aproximadamente 5
minutos hasta aproximadamente 120 minutos, seguido por infusión
continua de la dosis apropiada durante hasta 240 horas.
En otra variante, la proteína C será suministrada
mediante administración local por medio de un catéter
intracoronario como un agregado a una angioplastia de alto riesgo
(con y sin colocación de muelles, y con o sin combinación de terapia
antitrombótica con o sin agentes antiplaquetarios). La cantidad de
proteína C administrada será desde 0,01 mg/kg/día hasta
aproximadamente 10,0 mg/kg/día por infusión continua, inyección en
bolo o combinación de las mismas.
En otra variante, la aPC será inyectada
directamente dentro de las articulaciones.
En aún otra variante, la proteína C será
administrada de manera subcutánea a una dosis de entre 0,01
mg/kg/día hasta aproximadamente 10,0 mg/kg/día, para asegurar una
liberación lenta dentro del torrente sanguíneo. La formulación para
preparaciones subcutáneas será realizada usando procedimientos
conocidos para la preparación de tales composiciones
farmacéuticas.
Los siguientes ejemplos son provistos solamente
para ilustrar más la presente invención. El alcance de la invención
no deberá ser interpretado como constituido únicamente por los
siguientes Ejemplos ilustrativos.
Preparación
1
La proteína C humana recombinante
(r-hPC) fue producida en células de Riñón Humano
293 por técnicas bien conocidas por los expertos en la materia tales
como las que se describen en Yan, Patente de EEUU Nº 4.981.952,
Bang, y col., Patentes de EEUU Nº 4.775.624 y Nº 4.992.373, y en
Grinnell, y col., 1987, Bio/Technology
5:1189-1192.
La proteína C humana recombinante
(r-hPC) fue activada por procedimientos bien
conocidos en la técnica. Específicamente, la r-hPC
fue activada con trombina bovina como es descrito en Carlson y
col., Patente de EEUU Nº 6.159.468.
Se usó el perfil transcripcional obtenido con
tecnología chip ADN Affymetrix para analizar cómo la aPC modula los
genes asociados con apoptosis usando células endoteliales humanas
primarias. Se aisló ARN de células Endoteliales de Vena Umbilical
Humana (HUVEC) y HUVEC tratadas con aPC como se describe a
continuación. Se obtuvo un pool de células HUVEC P096 en una
primera pasada de Clonetics (catálogo Nº CC-2591,
lote Nº 6F0081) y se las cultivó en medio base EBM Clonetics
suplementado con 2% de suero bovino fetal, 12 mcg/ml de gentamicina
y 50 ng/ml de anfotericina B (Clonetics EGM BulletKit, catálogo Nº
CC3124). Las células fueron pasadas tres veces y luego dejadas
crecer hasta una confluencia de aproximadamente
80-90% en 60 ml de medio antes del tratamiento. El
medio fue cambiado aproximadamente seis horas antes del
tratamiento. Se dividieron cincuenta y dos frascos T225 en 4 grupos
de tratamiento de trece frascos cada uno; control, aPC,
TNF-\alpha y aPC + TNF-\alpha.
Las células fueron tratadas con 183 nM de aPC recombinante humana
(Lilly lote Nº PPD02890) o un volumen igual de vehículo (Tris 20 mM,
pH 7,5, NaCl 150 mM) durante nueve horas, o 1 ng/ml de
TNF-\alpha (R & D Systems) o un volumen igual
de vehículo (BSA 0,1% en PBS) durante siete horas. Las células
fueron lavadas una vez con PBS y retiradas con un tratamiento con
tripsina (6 ml 0,025% tripsina/ EDTA por frasco durante 5 minutos).
Luego de inhibir la tripsina con 6 ml de Solución Neutralizadora de
Tripsina, fueron centrifugadas durante cinco minutos a 1000 rpm.
Los pellets celulares fueron mantenidos en hielo durante un máximo
de treinta minutos hasta la resuspensión en Trizol (10 ml de Trizol
total por 13 frascos de cada condición). El poli (A) ARN fue
aislado por procedimientos tradicionales, fue marcado e hibridizado
a matrices de oligonucleótidos para permitir el análisis de la
expresión genética. El experimento fue llevado a cabo por duplicado.
Los datos resultantes fueron analizados usando un programa
informático disponible comercialmente (GeneChip Affymetrix). Se usó
PCR de transcripción inversa (RT-PCR) para confirmar
las observaciones iniciales de los chips Gene. Como se muestra en
la Tabla, se encontró que tanto el factor Bcl-2
antiapoptótico como el marcador PCNA fueron regulados positivamente
por el tratamiento de HUVECs con
APC.
APC.
| Nivel Relativo de Expresión | ||||
| PCNA | GU | IAP | Bcl-2 | |
| Sin tratar | 1 | 1 | 1 | 1 |
| Tratada con APC | 2,8 | 5,1 | 1,8 | 2 |
También hemos observado genes que fueron
suprimidos por aPC incluyendo el gen B6, un gen de endotelio de
respuesta inmediatamente temprana que ha sido sugerido como
participante en la mediación de la respuesta del endotelio vascular
a citoquinas proinflamatorias (Holzman y col., 1990, MCB 10:5830).
Observamos una supresión significativa como queda evidenciada por la
pérdida de señal detectable de ARNm después del tratamiento con aPC
(Tabla 2). En contraste, las células tratadas con TNF como control
para la respuesta genética, mostraron un incremento de 11 veces en
B-6.
| Nivel Relativo de Expresión | |
| Sin tratar | 1 |
| Tratado con TNF (control) | 11,3 |
| Tratado con APC | Bajo límites de detección |
La hibridización sustractiva es una técnica
poderosa que permite a los investigadores comparar dos poblaciones
de ARNm y obtener clones de genes que son expresados en una
población pero no en otra. La hibridización sustractiva fue usada
para identificar genes que son regulados positivamente o regulados
negativamente por proteína C activada. Se trataron células HUVEC
con aPC como se describe en el Ejemplo 1. Se aisló el poli (A) ARN
de células por técnicas convencionales y se lo usó para la
construcción inversa (genoteca de genes regulados negativamente por
aPC) y además genotecas de ADNc sustraído (genoteca de genes
regulados positivamente por aPC) usando un kit comercial disponible
(Kit de Sustracción de ADNc Clontech PCR-Select).
Fueron identificados varios genes al ser expresados de manera
diferencial en la genoteca de sustracción inversa, incluyendo pero
no limitándose a trombospondina-1 y
PECAM-1. La regulación negativa de estos genes por
aPC fue evaluada usando análisis RT-PCR estándar del
ARN original aislado para control y HUVECs tratadas con aPC. La
regulación negativa de estos genes por aPC fue confirmada por
transferencia tipo Western y análisis de citometría de flujo.
La inhibición de apoptosis por rhAPC en células
endoteliales venosas umbilicales primarias (HUVEC) o la línea
celular endotelial inmortalizada (Eahy926) es mostrada a
continuación utilizando el Ensayo de Apoptosis APOPercentage™. El
Ensayo de Apoptosis APOPercentage™ es realizado según las
instrucciones del fabricante (Biocolor Ltd., Belfast, N. Ireland).
Las células adherentes (HUVEC, Eahy926, o 293) son sembradas
brevemente hasta 3x10^{4} células por pocillo y tratadas con
estaurosporina, 1 mcg/ml (Sigma, St. Louis, MO), durante una hora o
con estaurosporina rhAPC (pretratamiento de 16 horas). La
estaurosporina es un alcaloide aislado de un caldo de cultivo de
Streptomyces staurospores y un potente inhibidor de proteína
quinasa C e inductor de apoptosis. Se prepararon y tiñeron células
según las instrucciones del fabricante. Se observa inhibición
significativa de la apoptosis por rhAPC en ambas líneas celulares
endoteliales, HUVEC (Tabla 3) y Eahy926 (Tabla 4).
| Inhibición de la Apoptosis en Células HUVEC | ||
| Tratamiento | Porcentaje de Apoptosis | Error estándar |
| Sin tratar | 16,3 | 2,1 |
| Estaurosporina 1 mcM | 100,0 | 1,61 |
| Estaurosporina + rhAPC 0,5 mcg/ml | 59,0 | 16,7 |
| Inhibición de la Apoptosis en Células EAhy926 | ||
| Tratamiento | Porcentaje de Apoptosis | Error stándar |
| Sin tratar | 20,0 | 0053 |
| Estaurosporina 1 mcM | 100,0 | 3,3 |
| Estaurosporina + rhAPC 0,5 mcg/ml | 21,0 | 0,41 |
La inhibición de la apoptosis por rhAPC en
monocitos U937 utilizando el ensayo de teñido intracelular Caspasa 3
es mostrado en la Tabla 5.
La tinción intracelular de Caspasa 3 es llevado a
cabo de la siguiente manera. Se cultivan células U937 hasta 1 x
10^{6} células por ml. Las células son pretratadas con rhAPC
durante 16 horas. Se agrega 1mcg/ml de estaurosporina durante 3
horas. Las células son lavadas en HBSS, libre de calcio y magnesio,
centrifugadas y lavadas con PBS/albúmina 1% con azida sódica 0,02%.
Las células son luego fijadas y permeabilizadas con el Kit
Cytofix/Cytoperm™ (PharMingen/BD, San Diego, CA.). La tinción
intracelular con caspasa 3 antiactiva (PharMingen/BD, San Diego,
CA.) a 1 x 10^{6} células en 10 mcl la tinción es durante 30
minutos a 4 grados Celsius. Las células son centrifugadas,
resuspendidas en tampón PBS/albúmina, 2 x 10^{6} células/ml, y
analizadas con un citómetro de flujo Coulter (Coulter™). Se observa
inhibición significativa de la apoptosis por rhAPC en la línea
celular U937.
| Porcentaje de Inhibición de Apoptosis en Células U937 | ||
| Ensayo Caspasa 3 | ||
| rhAPC mcg/ml | % de Apoptosis | Error estándar |
| 0 | 100 | 2,06 |
| 0,1 | 22,5 | 0,41 |
| 1,0 | 18,8 | 0,04 |
| 5,0 | 21,9 | 0,12 |
La inhibición de la apoptosis por rhAPC en
células U937 y células 293 utilizando un ensayo Anexina V es
mostrado en las Tablas 6 y 7 respectivamente. El ensayo de tinción
de Anexina V se lleva a cabo como se explica a continuación. Se
cultivan células no adherentes (monocitos U937 y células renales
293) hasta una concentración de 1 x 10^{6} células por ml de
medio. Las células son pretratadas con rhAPC durante 16 horas. Se
agrega 1 mcg/ml de estaurosporina durante 3 a 3,5 horas. Las células
son diluidas hasta 5 x 10^{5} células y teñidas con antianexina
V-FITC y ioduro de propidio como lo indica el Kit de
Detección de Apoptosis Anexina V- FITC (Oncogene Research Products,
Boston, MA). Se realiza la detección de la fluorescencia de la
tinción de Anexina V usando un citómetro de flujo Coulter
(Coulter™). Se observa inhibición significativa de la apoptosis por
rhAPC tanto en las células U937 como en las células 293.
| Porcentaje de Inhibición de la Apoptosis en Células U937 | ||
| Ensayo de Anexina V | ||
| Tratamiento | Porcentaje de Apoptosis | Error estándar |
| Estaurosporina (SS) | 100 | 1,88 |
| rhAPC 0,5 mcg/ml + SS | 10,9 | 0,46 |
| rhAPC 5,0 mcg/ml + SS | 4,2 | 0,84 |
| Porcentaje de Inhibición de la Apoptosis en Células 293 | ||
| Ensayo de Anexina V | ||
| Tratamiento | Porcentaje de Apoptosis | Error estándar |
| Estaurosporina (SS) | 6,08 | 0,58 |
| rhAPC 0,5 mcg/ml + SS | 4,02 | 0,08 |
| rhAPC 5,0 mcg/ml + SS | 4,50 | 0,49 |
| rhAPC 10 mcg/ml + SS | 4,34 | 0,057 |
El efecto de rhAPC en la expresión de moléculas
de adhesión ICAM-1, selectina E y
VCAM-1, es mostrado en la Tabla 8. Células
endoteliales HUVEC o Eahy926 cultivadas en frascos
T-75 hasta una confluencia de 80-90%
son pretratadas con rhAPC (5 mcg/ml) durante 16 horas y/o factor de
necrosis tumoral alfa (TNF 1 ng/ml) durante 7 horas. La expresión de
la proteína de adhesión es evaluada por citometría de flujo. Los
datos para adhesión son comparados con la respuesta máxima promedio
de TNF. Se aplica el anticuerpo primario a 1-2
mcg/ml en 100 mcl de tampón FACS (PBS, albúmina 5%, azida sódica
0,02%) durante 30 minutos a 4ºC. El anticuerpo secundario,
IgG-FITC anti ratón, a 1 mcg/ml en 100 mcl de tampón
FACS es aplicado durante 30 minutos a 4ºC. Se realiza el análisis
FACS usando un citómetro de flujo Coulter (Coulter™). Los
anticuerpos primarios eran contra marcadores de adhesión
ICAM-1, selectina E y VCAM-1 (R
& D Systems, Minneapolis, MN). Se observó una supresión
significativa por rhAPC de la expresión de ICAM-1 y
selectina E.
| Efecto de rhAPC en la Expresión Molecular de Adhesión | ||
| Molécula de Adhesión | Expresión Promedio | Desviación estándar |
| ICAM-1 | 0,36 | 0,098 |
| Selectina E | 0,322 | 0,049 |
| VCAM-1 | 0,61 | 0,330 |
| Control TNF\alpha | 1,0 |
Este protocolo es un ensayo controlado en
pacientes con esclerosis múltiple, la que exhibe muchas
características distintivas de apoptosis y es tratada con rhAPC o
derivados de rhAPC como se describe en este documento.
Para la esclerosis múltiple, el médico
interviniente administra rhAPC o un derivado de rhAPC por vía
subcutánea en una dosis de 0,5 mg/día, para asegurar una liberación
lenta dentro del flujo sanguíneo. El tratamiento es continuado hasta
que el paciente es aliviado de los síntomas del trastorno.
Otro protocolo es un ensayo controlado en
pacientes con tiroiditis de Hashimoto, la que exhibe muchas
características distintivas de apoptosis y es tratada con rhAPC o
derivados de rhAPC como se describe en este documento.
Para la tiroiditis de Hashimoto, el médico
interviniente administra rhAPC o un derivado de rhAPC por vía
subcutánea en una dosis de 0,5 mg/día, para asegurar una liberación
lenta dentro del flujo sanguíneo. El tratamiento es continuado
hasta que el paciente es aliviado de los síntomas del trastorno.
Aún otro protocolo es un ensayo controlado en
pacientes con enfermedad de Graves, la que exhibe muchas
características distintivas de apoptosis y es tratada con rhAPC o
derivados de rhAPC como se describe en este documento.
Para la enfermedad de Graves, el médico
interviniente administra rhAPC o un derivado de rhAPC por vía
subcutánea en una dosis de 0,5 mg/día, para asegurar una liberación
lenta dentro del flujo sanguíneo. El tratamiento es continuado
hasta que el paciente es aliviado de los síntomas del trastorno.
Un protocolo de tratamiento adicional es un
ensayo controlado en pacientes con hepatitis crónica, la que exhibe
muchas características distintivas de apoptosis y es tratada con
rhAPC o derivados de rhAPC como se describe en este documento.
Para la hepatitis crónica, el médico
interviniente administra rhAPC o un derivado de rhAPC por vía
subcutánea en una dosis de 0,5 mg/día, para asegurar una liberación
lenta dentro del flujo sanguíneo. El tratamiento es continuado hasta
que el paciente es aliviado de los síntomas del trastorno.
Otro protocolo es un ensayo controlado en
pacientes con lupus eritematoso sistémico, el que exhibe muchas
características distintivas de apoptosis y es tratado con rhAPC o
derivados de rhAPC como se describe en este documento.
Para el lupus eritematoso sistémico, el médico
interviniente administra rhAPC o un derivado de rhAPC por vía
subcutánea en una dosis de 0,5 mg/día, para asegurar una liberación
lenta dentro del flujo sanguíneo. El tratamiento es continuado hasta
que el paciente es aliviado de los síntomas del trastorno.
Otro protocolo es un ensayo controlado en
pacientes con enfermedad de Alzheimer o enfermedad de Parkinson, las
que exhiben muchas características distintivas de apoptosis y son
tratadas con rhAPC o derivados de rhAPC como se describe en este
documento.
Para la enfermedad de Alzheimer o enfermedad de
Parkinson, el médico interviniente administra rhAPC o un derivado de
rhAPC por vía subcutánea en una dosis de 0,5 mg/día, para asegurar
una liberación lenta dentro del flujo sanguíneo. El tratamiento es
continuado hasta que el paciente es aliviado de los síntomas del
trastorno.
Para todos los protocolos de tratamiento
mencionados anteriormente, la dosis particular de rhAPC o derivados
de rhAPC administrada y la vía de administración es ajustada por el
médico interviniente evaluando las circunstancias particulares que
rodean al caso, incluyendo el compuesto administrado, la afección
particular que está siendo tratada, las características del paciente
y consideraciones similares.
Claims (2)
1. El uso de proteína C activada o derivados de
la misma en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de
una enfermedad o afección patológica en el que la enfermedad es
pancreatitis.
2. El uso de acuerdo con la reivindicación 1 en
el que dicha proteína C activada es proteína C activada humana.
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