ES2234013T3 - Fluido de almacenamiento corneal que comprende acido hialuronico. - Google Patents
Fluido de almacenamiento corneal que comprende acido hialuronico.Info
- Publication number
- ES2234013T3 ES2234013T3 ES97916438T ES97916438T ES2234013T3 ES 2234013 T3 ES2234013 T3 ES 2234013T3 ES 97916438 T ES97916438 T ES 97916438T ES 97916438 T ES97916438 T ES 97916438T ES 2234013 T3 ES2234013 T3 ES 2234013T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- corneal
- hyaluronic acid
- solution
- storage
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
- A61K31/728—Hyaluronic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0205—Chemical aspects
- A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
- A01N1/0215—Disinfecting agents, e.g. antimicrobials for preserving living parts
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0205—Chemical aspects
- A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
- A01N1/0226—Physiologically active agents, i.e. substances affecting physiological processes of cells and tissue to be preserved, e.g. anti-oxidants or nutrients
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Physiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Prostheses (AREA)
Abstract
SOLUCION PARA ALMACENAR TEJIDO CORNEAL, ESPECIALMENTE A UNA TEMPERATURA DE 2 A 8 C, CONSTITUIDO POR ACIDO HIALURONICO CON UN PESO MOLECULAR MEDIO INFERIOR A 6.000.000 DA (PREFERENTEMENTE DE 50.000 A 250.000 DA).
Description
Fluido de almacenamiento corneal que comprende
ácido hialurónico.
El objetivo de la presente invención es mejorar y
simplificar el almacenamiento de córneas destinadas a una
queratoplastia penetrante en el intervalo de tiempo entre la
extracción del donante y el transplante, mediante la utilización de
formulaciones de fluidos de almacenamiento que contienen ácido
hialurónico.
La queratoplastia penetrante se utiliza
ampliamente para recuperar la visión en un gran número de
enfermedades corneales. En procesos corneales severos de distrofia,
inflamación o degenerativos, la queratoplastia penetrante es la
única terapia eficaz para obtener la rehabilitación visual. Una de
las cuestiones principales en esta terapia es el método utilizado
para conservar un tejido corneal viable después de su extracción del
donante.
La córnea es un tejido avascular con una
organización bien definida, con 1 mm de grosor periférico y 0,5 mm
de grosor central. La parte expuesta al medio externo está cubierta
por epitelio estratificado no queratinizado formado por 3 ó 4 capas
de células escamosas planas, de 1 a 3 capas de células aladas y una
única capa de células basales columnares unida a la membrana basal y
al estroma subyacente mediante un complejo de adhesión. Durante el
almacenamiento corneal, se puede perder el epitelio, pero si la
membrana basal no se daña, la reepitelización tras el transplante
suele ser rápida. El estroma se organiza en tres capas diferentes de
matriz extracelular. Empezando por el epitelio, éstas incluyen una
capa fina de Bowman, un estroma medio lamelar y una membrana basal
(membrana de Descemet) que se genera por las células endoteliales
que se alinean en la parte del tejido dirigida hacia el humor
acuoso. Las otras partes del estroma se producen y se mantienen
mediante los fibroblastos estromales, que son células planas
denominadas normalmente como queratocitos.
Debido a la presencia de sales, colágeno y
proteoglicanos, el estroma es hipertónico con respecto tanto a las
lágrimas como al humor acuoso. El agua está menos concentrada en la
zona epitelial debido, probablemente, al secado a través de las
capas epiteliales. De forma similar, la glucosa está menos
concentrada en la zona epitelial debido a que este metabolito fluye
desde el humor acuoso para ser utilizado, en su mayor parte, por el
epitelio. El estroma contiene proteoglicanos (sulfato de dermatano y
queratano) con el primero más concentrado en la zona epitelial y el
segundo, en la zona endotelial. El endotelio corneal es un endotelio
de una sola capa, cuboidal, que forma un mosaico hexagonal que se
sitúa sobre la membrana de Descemet vista desde la cámara anterior.
Las células hexagonales se unen mediante uniones estrechas que, sin
embargo, no forman un sellado completo alrededor de las células. En
cambio, se concentran en la membrana apical de la célula. La
integridad de las uniones depende de la presencia de ^{2+}Ca en el
medio circundante. Esta organización permite que el humor acuoso y
sus solutos tengan acceso al espacio paracelular. En condiciones
normales, tras el influjo del fluido no se produce el hinchamiento
de la córnea debido a que un volumen equivalente de fluido es
extraído activamente por el complejo de bombeo del endotelio. La
Na^{+} - K^{+} ATPasa es una parte esencial de este sistema de
bombeo que, por tanto, requiere del ATP producido por la actividad
metabólica de las células endoteliales.
Para evaluar completamente la función de las
células endoteliales, es de interés observar que estas células
tienen, en la zona dirigida hacia el humor acuoso, el miembro de la
familia de las inmunoglobulinas, ICAM-1
(molécula-1 de adhesión intercelular), que actúa
como correceptor para la integrina LFA-1 (\alpha
L, \beta 2), localizada en la superficie del leucocito. La
ICAM-1 también puede funcionar como receptor del
ácido hialurónico (McCourt, P.A.G. y otros (1994) J. Biol. Chem.
269, 30081-30084). Esto indica que las células
endoteliales interaccionan con los leucocitos cuando alcanzan el
humor acuoso. También puede indicar que, en condiciones normales y
en ausencia de leucocitos, el ácido hialurónico se asocia con este
receptor para preservar la integridad de la capa endotelial.
Hinchamiento de córneas: Cuando se pierde
la función de bombeo del endotelio, la hipertonicidad del estroma
provoca que el tejido corneal se hinche. Este hinchamiento da lugar
al incremento del grosor corneal y una disminución de la claridad.
Además, hay una pérdida de proteoglicanos desde el estroma hacia el
medio circundante. La pérdida de la función endotelial es la
consecuencia de cuadros patológicos (por ejemplo, distrofias,
degeneraciones, glaucoma). El envejecimiento puede favorecer la
descompensación endotelial, ya que el número de células endoteliales
disminuye con la edad (aproximadamente el 50% desde el nacimiento
hasta la vejez). Dado que las células endoteliales tienen una
capacidad regenerativa limitada, el daño a la integridad del
endotelio sólo puede compensarse mediante el aumento de las células
residuales que se vuelven más estrechas. El daño endotelial es
también el principal riesgo en el almacenamiento de córneas antes
del transplante. Este hecho da lugar a un hinchamiento corneal con
pérdida de claridad y la muerte progresiva de las células
endoteliales. La conservación de una capa endotelial intacta es, de
hecho, un objetivo principal en la creación de métodos para
conservar córneas antes de la queratoplastia penetrante.
Almacenamiento de córneas: Los globos
oculares completos de los donantes se pueden almacenar en una cámara
de humedad a 4ºC, pero deberían utilizarse en 24 horas. La
conservación de córneas en estado congelado se ha explotado
satisfactoriamente (Kaufman, H.E. y Capella J.A. (1968) J. Cryosurg.
1, 125-129). Antes de congelarse, las córneas se
tratan con concentraciones crecientes de DMSO y sacarosa para evitar
la formación de hielo intracelular. Las dificultades en la
manipulación y el transporte de córneas congeladas a una temperatura
baja constante impiden la difusión de esta técnica.
Alternativamente, las córneas se pueden almacenar a 37ºC en un medio
de cultivo de órgano (Doughman D.J. y otros (1976) Trans. Am. Acad.
Ophtalmol. Otolaringol. 81, 778-793). Dado que los
medios de cultivo se complementan con suero para una conservación
óptima de la célula, este método tiene la desventaja de que el ojo
receptor se expone a una cantidad residual de suero transportado por
la córnea en el momento del transplante. El suero animal puede
provocar una respuesta inmune mientras que el suero humano puede
transmitir enfermedades virales.
Actualmente, el método más adecuado para la
conservación corneal parece ser el almacenamiento a corto plazo en
un medio sin suero a 4ºC. A esta temperatura, la actividad
metabólica de las células endoteliales es mínima. De este modo, se
pierde la función de bombeo.
El hinchamiento de la córnea se puede evitar
mediante la adición de compuestos retenedores de agua del medio de
conservación. Entre éstos, uno de los más utilizados es el compuesto
deturgescente, dextrano, solo (McKarey, B.E. y Kaufman, H.E. (1974)
Invest. Ophtalmol. Vis. Sci. 13, 165) o bien en asociación con el
glucosaminoglicano, sulfato de condroitina (Kaufman H.E. y otros
(1991) Arch. Ophtalmol. 109, 864-868). Sin embargo,
el sulfato de condroitina es un compuesto heterogéneo debido a la
variada distribución de las moléculas de sulfato en el interior del
polímero (Scott, 1995). Como resultado, las composiciones a utilizar
para el almacenamiento corneal pueden variar entre lotes. Además,
debido a las moléculas de sulfato, el sulfato de condroitina
transporta una fuerte carga negativa.
Recientemente se ha sugerido que esta fuerte
carga negativa es perjudicial para la conservación de la córnea
debido a que las fuertes cargas negativas disminuyen la capacidad de
adhesión del endotelio corneal (Chen y otros 1996). Además, se ha
observado que el sulfato de condroitina puede penetrar en la córnea
y favorecer su hinchamiento, particularmente tras el recalentamiento
del tejido desde 4ºC hasta temperatura ambiente, antes del
transplante (Kaufman y otros 1992). En un intento por disminuir el
hinchamiento corneal inducido por el sulfato de condroitina, se
formularon composiciones para la conservación de la córnea, que
contenían agentes deturgescentes, tales como el dextrano, en
combinación con el sulfato de condroitina (Patente EP 0 517 972).
Sin embargo, el dextrano puede penetrar en el estroma durante el
almacenamiento y puede incrementar la presión de hinchamiento en el
recalentamiento. Además, actualmente, también está claro que el
dextrano puede ser tóxico para la córnea, induciendo la senescencia
y la degeneración (Chen y otros 1996).
Ogino y otros (Nokugan Zan-shi,
Effect of a Newly Developed Corneal Storage Medium on Corneal
Endothelium - Morphological Study by Scanning Electron Microscopy,
1995) describen un medio de almacenamiento que contiene ácido
hialurónico (AH). Sin embargo, el ácido hialurónico utilizado por
Ogino y otros tenía un peso molecular de 800.000. Un AH con un peso
molecular tan elevado es demasiado viscoso para ser adecuado como
componente del medio de almacenamiento y se debe utilizar en
combinación con otros componentes retenedores de agua para evitar el
hinchamiento de la córnea sin aumentar la viscosidad de la
solución.
Böhnke y otros dan a conocer la utilización de
ácido hialurónico con un peso molecular de 250.000 ó 500.000 como
aditivo osmótico para un medio de conservación corneal. Böhnke y
otros muestran que el ácido hialurónico con un peso molecular de
500.000 Da tiene propiedades equivalentes al ácido hialurónico con
un peso molecular de 250.000 Da, tal como se demuestra en la Tabla
1. De este modo, Böhnke y otros no dicen nada con respecto a la
elección de un peso molecular deseado del ácido hialurónico.
La Patente JP 107 538 muestra que cuando el ácido
hialurónico se utiliza como una solución de conservación del ojo
para el transplante de córnea, debería tener un peso molecular
superior a 600.000 Da y una presión osmótica ajustada dentro del
intervalo de 260 a 350 mOsm.
Por lo tanto, es un objetivo de la presente
invención proporcionar un fluido para el almacenamiento de córnea
capaz de proporcionar unas condiciones de almacenamiento adecuadas
para córneas viables, a la vez que se evitan las desventajas de los
fluidos anteriores.
Por tanto, la presente invención está dirigida a
una composición del fluido de la córnea que comprende ácido
hialurónico, y a la utilización de una formulación que comprende
ácido hialurónico, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,
presente en una concentración de un 2% p/v, sobre el total de la
solución, y con un peso molecular promedio de 50.000 a 150.000 Da y
a la utilización de esta formulación de ácido hialurónico para la
conservación de córnea viable a bajas temperaturas, especialmente
entre 2-8ºC. La presente invención se basa en las
siguientes suposiciones, las cuales están en línea con las
consideraciones sobre la organización y la función corneal descritas
anteriormente:
(i) Durante el almacenamiento de las córneas a
bajas temperaturas, la actividad metabólica de las células
endoteliales se muestra silenciosa. De este modo, no se necesitan
los nutrientes ni los factores de crecimiento (suero u otros). La
función de bombeo no se realiza y no se necesita soporte.
(ii) Debería ser suficiente una solución salina
equilibrada complementada con un compuesto retenedor de agua para
mantener la integridad de la córnea. Si un único compuesto retenedor
de agua es apropiado, otros compuestos, tales como el dextrano, ya
no son necesarios.
(iii) Se necesita una película protectora sobre
las células endoteliales para evitar que se dañen durante el
almacenamiento. Parece adecuado utilizar un ligando natural capaz de
asociarse con el coreceptor ICAM-1.
Tal como se indicó anteriormente, se ha
identificado el ÁCIDO HIALURÓNICO como el compuesto apropiado que
cumple los requisitos para un almacenamiento óptimo de la córnea a
bajas temperaturas.
El ácido hialurónico pertenece al grupo de los
glucosaminoglicanos que también incluye a compuestos que contienen
grupos sulfatos (condroitinas, queratanos y los heparanos). Como
consecuencia de la distribución variable de los residuos de sulfato,
este grupo de glucosaminoglicanos es un ensamblaje heterogéneo de
diferentes moléculas. En cambio, el ácido hialurónico sólo contiene
la unidad de disacárido N-acetil glucosamina y
glucuronato. De este modo, el ácido hialurónico es un compuesto
homogéneo con una estructura primaria definida: cadenas lineales que
contienen centenares de unidades de disacáridos y centenares de
aniones fijados a cada cadena (los grupos carboxilato).
Recientemente, se ha identificado una estructura
secundaria ordenada en el ácido hialurónico (Scott, J.E. (1995) Eur.
J. Rheumatol. Inflamm. 15, 3-8). Esto se apoya en la
existencia de extensos enlaces de hidrógeno entre las unidades de
azúcar y una estructura de doble hélice provocada por el giro de
180º entre las unidades de disacáridos. La estructura secundaria
produce amplias zonas hidrofóbicas en las cadenas de ácido
hialurónico de aproximadamente 8 unidades de CH (la longitud de un
ácido graso de cadena corta), que son capaces de asociarse con los
fosfolípidos de membrana u otros lípidos. De hecho, el efecto
beneficioso del ácido hialurónico en articulaciones inflamadas puede
ser resultado de su asociación con citocinas inflamatorias similares
a lípidos, tales como el factor activador de plaquetas.
A concentraciones diluidas de ácido hialurónico
en medio acuoso (1 \mug/ml o más), se forma una estructura
terciaria (Scott, J.E. y otros (1991) Biochem. J. 274,
699-705). Esta es una malla en forma de panal
formada mediante la agregación de las cadenas de ácido hialurónico
que establecen un contacto dinámico entre todas las moléculas de
ácido hialurónico. La malla atrapa en su interior agua y solutos,
restringiendo así su interacción con el medio externo. Las células
con receptores para el ácido hialurónico pueden anclar extensas
mallas alrededor de ellas mismas. Esto puede tener un efecto
protector ya que se evita que las sustancias químicas se aproximen a
las células. Resulta interesante la observación de que esta
organización se vuelve menos compacta y puede ser realmente
interrumpida por la acción de radicales libres OH que inducen a la
degradación de las cadenas de ácido hialurónico. En conclusión, a
continuación se muestran las propiedades del ácido hialurónico
relacionadas con la presente invención y con el objetivo de mantener
una córnea viable.
1. La presencia de aniones fijos en las cadenas
de ácido hialurónico, los cuales actúan como intercambiadores de
cationes solubles y, por tanto, limitan el movimiento de cationes
monovalentes y divalentes hacia el tejido corneal.
2. La presencia de zonas hidrofóbicas en la
estructura secundaria de las cadenas de ácido hialurónico que
permiten al compuesto entrar en contacto y proteger los puntos
hidrofóbicos posiblemente expuestos en la membrana celular.
3. La formación de una red por parte de las
cadenas de ácido hialurónico que encierra agua y solutos y produce
un efecto retentivo de agua máximo.
4. La interacción con la ICAM-1
localizada en la superficie de las células endoteliales que asegura
la formación de una película protectora de ácido hialurónico
alrededor de las propias células.
En principio, estas propiedades son suficientes
para obtener la conservación de las células endoteliales a bajas
temperaturas y para evitar el hinchamiento corneal. Dado que el
ácido hialurónico de peso molecular elevado (1.000.000 Daltons o
más) forma soluciones viscosas, se debería utilizar ácido
hialurónico con un peso molecular inferior. En particular, el ácido
hialurónico debería tener un peso molecular promedio dentro del
intervalo de 50.000 a 150.000 Daltons. Con este tamaño molecular aún
se forma una malla de ácido hialurónico, aunque que la organización
puede ser menos compacta.
Para las soluciones médicas que abarca la
presente invención, los ácidos hialurónicos se pueden obtener a
partir de varias fuentes. Por ejemplo, el ácido hialurónico se puede
purificar a partir de fuentes convencionales, tales como crestas de
gallo, utilizando los procesos descritos en la Patente EP 0 138 572.
Alternativamente, el ácido hialurónico se puede obtener a través de
un proceso de fermentación, tal como se describe en la Patente WO
95/04132, o mediante una síntesis enzimática utilizando un factor
proteico purificado que contiene hialuronato sintasa, tal como se
describe en la Patente WO 95/24497.
La solución médica sin suero propuesta en la
presente invención debería contener:
1. Una solución de electrolitos equilibrada
tamponada a pH 7,2-7,4 con fosfato, bicarbonato y
Hepes (ácido hidroxietilpiperazina etanosulfónico). Para los
objetivos de la presente invención, es satisfactorio un medio
esencial mínimo (por ejemplo TC 199, tal como el obtenible de Gibco
BRL, Maryland; Signa, Missouri; Flow Laboratories, Maryland). Este
medio se utiliza ampliamente en el cultivo de tejidos y en su
formulación contiene sales inorgánicas esenciales, aminoácidos,
vitaminas y precursores de ATP.
2. Antibióticos, tales como, pero no limitados a,
gentamicina, estreptomicina, penicilina G y combinaciones de los
mismos, para evitar contaminaciones microbianas.
3. Una sal sódica del ácido hialurónico con un
peso molecular de 50.000-150.000 Da, en un 2% p/v en
base al total de la solución.
Se pueden realizar variaciones en la elección de
las soluciones salinas tamponadas y en los antibióticos. Esta
composición sencilla debería ser suficiente para cumplir todos los
requisitos de un almacenamiento corneal óptimo a bajas temperaturas
durante, como mínimo, una semana.
La composición de medio sin suero que comprende
la sal sódica del ácido hialurónico se describe en la Tabla 1, en
comparación con el medio de almacenamiento corneal disponible
comercialmente que contiene sulfato de condroitina y dextrano
(Optisol-GS) o únicamente dextrano
(McKarey-Kaufman).
Se extrajeron una pareja de ojos de donante
humano dentro de las 9-10 horas posteriores a la
muerte. Se aislaron las córneas de los globos con un borde escleroso
de 2 mm y se comprobaron la viabilidad de células endoteliales, la
densidad de células endoteliales, el grosor corneal y la claridad.
La viabilidad de células endoteliales se valoró mediante la tinción
con azul de tripano al 0,3%. La muerte celular normalmente se
distribuye en dos patrones: conjuntos regulares de células teñidas
que corresponden a pliegues producidos mediante la tensión mecánica
de las córneas durante la extracción y una mortalidad difusa,
indicativa de una disfunción metabólica de las células endoteliales.
El análisis se completó al final de cada experimento mediante la
tinción con rojo de Alizarina para evaluar la morfología de la
célula y las áreas de la membrana de Descemet no cubiertas por el
endotelio. La muerte celular se expresó como el porcentaje de las
células teñidas en relación con el total de células. La densidad de
células endoteliales se evaluó contando las células en 5 campos de
la parte central de las córneas utilizando un microscopio óptico
ajustado con una retícula cuadrada de 10x10 mm. Cuando la muerte
celular era inferior a un 2% y el número de células endoteliales era
>2000 mm^{2}, las córneas se consideraban adecuadas para el
transplante. El grosor corneal se midió por medio de un microscopio
vertical ajustado con un micrómetro digital para evaluar la
distancia entre el epitelio y el endotelio. Se obtuvieron tres
lecturas centrales para cada córnea. Se evaluó la claridad con un
microscopio vertical y se clasificó tal como se indica a
continuación: grado 3, excelente; grado 2, buena con alguna
irregularidad en la membrana de Descemet; grado 1, insatisfactorio
debido a un edema estromal o irregularidades pronunciadas en la
membrana de Descemet. Después del análisis, las córneas se
sumergieron en el medio de almacenamiento a 4ºC para las posteriores
pruebas de conservación o utilización en una queratoplastia
penetrante.
Estudios in vitro : Estos
experimentos se llevaron a cabo con córneas de donantes bien
conservadas no adecuadas para el transplante debido a
contraindicaciones o enfermedad del donante.
Se extrajeron una pareja de ojos de donante
humano dentro de las 10 horas posteriores a la muerte. Se aislaron
las córneas de los globos con un borde escleroso de 2 mm y se
comprobaron la viabilidad de células endoteliales, la densidad de
células endoteliales, el grosor corneal y la claridad. La viabilidad
de células endoteliales se valoró mediante la tinción con azul de
tripano al 0,3%. La muerte celular normalmente se distribuye en dos
patrones: conjuntos regulares de células teñidas que corresponden a
pliegues producidos mediante la tensión mecánica de las córneas
durante la extracción y una mortalidad difusa, indicativa de una
disfunción metabólica de las células endoteliales. El análisis se
completó al final de cada experimento con la tinción con rojo de
Alizarina para evaluar la morfología de la célula y las áreas de la
membrana de Descemet no cubiertas por el endotelio. La muerte
celular se expresó como el porcentaje de las células teñidas en
relación con el total de células. La densidad de células
endoteliales se evaluó contando las células en 5 campos de la parte
central de las córneas utilizando un microscopio óptico ajustado con
una retícula cuadrada de 10x10 mm.
Se consideró que una muerte celular por encima
del 10% y una claridad de grado 1 eran incompatibles con el
experimento. El grosor corneal se midió por medio de un microscopio
vertical ajustado con un micrómetro digital para evaluar la
distancia entre el epitelio y el endotelio. Se obtuvieron tres
lecturas centrales para cada córnea. Se evaluó la claridad con un
microscopio vertical y se clasificó tal como se indica a
continuación: grado 3, excelente; grado 2, buena con alguna
irregularidad en la membrana de Descemet; grado 1, insatisfactorio
debido a un edema estromal o irregularidades pronunciadas en la
membrana de Descemet. Después del análisis, las córneas se
almacenaron en 10 ml del medio de prueba (una sal sódica de ácido
hialurónico, Optisol-GS o
McKarey-Kaufman) a 4ºC durante 7-14
días.
Estudios clínicos: Se dirigió un estudio
abierto, no controlado, con córneas evaluadas tal como se describió
anteriormente, y se almacenaron en el medio que contenía ácido
hialurónico. Las córneas almacenadas en un medio
Optisol-GS actuaron como control. Los donantes
tenían de 46 a 86 años de edad. Sus córneas, recogidas entre las 2 y
9 horas posteriores a la muerte, se encontraban en una excelente
condición de conservación, tal como se puede juzgar por su claridad,
grosor, viabilidad de células endoteliales (falta de células
positivas por azul de tripano) y densidad (2200-3000
células/mm^{2}). El tiempo de almacenamiento a 4ºC fue de
25-96 horas (ver tabla 2). Las córneas se calentaron
a temperatura ambiente en el momento del transplante. Se admitieron
un total de 16 receptores que requerían de queratoplastia penetrante
para queratoconos, queratopatía bullosa, distrofia de Groenow,
distrofia endotelial adquirida, y leucomas. El cuidado operatorio y
postoperatorio fue el mismo en todos los casos. Dos semanas después
del transplante se registraron la extensión de la
reepitelialización, la claridad corneal, el grosor (medido mediante
una paquimetría ultrasónica) y la densidad de células endoteliales
(evaluada mediante un análisis de imagen fija de fotografías
especulares). Los pacientes se volvieron a examinar después de dos
meses.
Estudios in vitro : Se almacenaron
cinco pares de córneas en un medio McKarey-Kaufman,
Optisol-GS o de una sal sódica del ácido
hialurónico. Se evaluaron la claridad, el grosor y la mortalidad de
células endoteliales a los 3, 7 ó 14 días y se muestran los
resultados en la Tabla 3. Se observó una excelente conservación de
córnea en medio Optisol-GS y de ácido hialurónico.
Incluso después de 14 días la pérdida de células endoteliales no
sobrepasaba el 7%. La tinción con rojo de alizarina y azul de
tripano a los 7 días confirmó la integridad del endotelio. De
acuerdo con esto, la claridad corneal y el grosor estaban bien
conservados. En cambio, el medio McKarey-Kaufman era
menos eficaz. La claridad empezó a perderse el día 3, mientras que
el grosor se incrementó hasta un máximo del 40% el día 7. La pérdida
de células endoteliales alcanzó el 22-25% el día 14.
Estos resultados confirmaron el pobre carácter del dextrano para
actuar como conservante corneal e indicaban la mayor eficacia tanto
del sulfato de condroitina como de la sal sódica del ácido
hialurónico. Sin embargo, la sal sódica del ácido hialurónico era
capaz de conseguir una conservación corneal satisfactoria en
ausencia de dextrano, el cual se requiere en el medio
Optisol-GS. Tal como se afirmó anteriormente, el
dextrano puede penetrar el tejido corneal y puede incrementar la
presión de hinchamiento tras el recalentamiento.
Estudios clínicos: Un grupo de ocho
pacientes programados para una queratoplastia penetrante recibieron
córneas almacenadas en el medio de ácido hialurónico, un grupo
paralelo de ocho pacientes recibieron córneas almacenadas en
Optisol-GS. Tras la intervención quirúrgica, la
reepitelialización de las córneas se completó en 3 días. Después de
dos semanas, la claridad y el grosor de las córneas se conservaban
bien. En 10 pacientes se llevó a cabo un análisis de la densidad de
las células endoteliales y se confirmó la eficacia de los dos
medios. Después de dos meses, todos los injertos estaban en buenas
condiciones cuando mostraron una reepitelialización y una claridad
de grado 3 (Tabla 4).
En general, los resultados del presente estudio
demuestran que el ácido hialurónico es una agente eficaz para la
conservación corneal, incluso en ausencia de otras sustancias en el
medio de almacenamiento. Su principal ventaja es la eficacia en
ausencia de otras adiciones al medio de almacenamiento. Esto hace
que la composición del medio sea sencilla y barata, evitando mezclas
de nutrientes complejas. Además, la ausencia de componentes lábiles,
tales como péptidos o proteínas (factores de crecimiento),
incrementa la estabilidad del medio de almacenamiento y evita la
formación de productos de degradación. Una ventaja adicional del
medio de ácido hialurónico es que se conserva un tejido fino en el
momento de la intervención quirúrgica. Esto permite una evaluación
precisa de las condiciones del tejido y una mejor manipulación
durante el transplante.
Estando la presente invención descrita de este
modo, quedará claro que la misma se puede variar de muchas maneras.
Dichas variaciones y todas las modificaciones, como sería obvio para
un técnico del sector, se pretende que se incluyan dentro del
alcance de las siguientes reivindicaciones.
Claims (8)
1. Solución de almacenamiento corneal que
comprende ácido hialurónico o una sal farmacéuticamente aceptable
del mismo presente en una concentración del 2% p/v en base al total
de la solución y que tiene un peso molecular promedio de 50.000 a
150.000 Da.
2. Solución de almacenamiento corneal, según la
reivindicación 1, que además comprende
una solución de electrolitos equilibrada y,
como mínimo, un antibiótico.
3. Solución, según la reivindicación 2, en la que
el pH de la solución de electrolitos equilibrada es
7,2-7,4.
4. Solución, según la reivindicación 2, en la que
el antibiótico es, como mínimo, un miembro seleccionado del grupo
que consiste en gentamicina, penicilina G y estreptomicina.
5. Método de almacenamiento de tejido corneal que
comprende la exposición del tejido corneal a la solución, según
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4.
6. Método, según la reivindicación 5, en el que
dicha solución médica se mantiene a una temperatura de
2-8ºC.
7. Utilización de la solución, según cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 4, para el almacenamiento de tejido
corneal.
8. Utilización, según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 4, para el almacenamiento de tejidos corneales
a una temperatura de 2-8ºC.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
IT96PD000084A IT1287227B1 (it) | 1996-04-04 | 1996-04-04 | Acido ialuronico quale componente del liquido di conservazione della cornea |
ITPD960084 | 1996-04-04 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ES2234013T3 true ES2234013T3 (es) | 2005-06-16 |
Family
ID=11391368
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES97916438T Expired - Lifetime ES2234013T3 (es) | 1996-04-04 | 1997-04-04 | Fluido de almacenamiento corneal que comprende acido hialuronico. |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6838448B2 (es) |
EP (1) | EP0891133B1 (es) |
JP (1) | JP2000508637A (es) |
CN (1) | CN1128574C (es) |
AT (1) | ATE281761T1 (es) |
AU (1) | AU732648B2 (es) |
BR (1) | BR9708502A (es) |
CA (1) | CA2251032A1 (es) |
DE (1) | DE69731525T2 (es) |
ES (1) | ES2234013T3 (es) |
HK (1) | HK1018583A1 (es) |
IT (1) | IT1287227B1 (es) |
RU (1) | RU2184448C2 (es) |
WO (1) | WO1997037537A1 (es) |
Families Citing this family (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7507723B2 (en) | 2000-07-07 | 2009-03-24 | Seikagaku Corporation | Hyaluronic acid oligosaccharide fractions and drugs containing the same |
AU2002214443B2 (en) | 2000-11-03 | 2005-12-15 | Vitrolife Ab | Evaluation and preservation solution |
KR100518152B1 (ko) * | 2002-05-09 | 2005-09-29 | 메디제네스(주) | 혈장 또는 혈청을 함유한 창상 치료용 약학 조성물 |
US20080176205A1 (en) * | 2003-12-04 | 2008-07-24 | University Of Utah Research Foundation | Process and Formulation to Improve Viability of Stored Cells and Tissue |
BRPI0400935A (pt) * | 2004-04-02 | 2005-11-22 | Ernesto Rodriguez Salas | Solução para conservação de membranas biológicas e seu uso |
EP1868430B1 (en) | 2005-04-12 | 2015-07-08 | Cleo Cosmetic and Pharmaceutical Co., LLC | Composition and method for in vitro preservation of corneal tissues |
US7323184B2 (en) * | 2005-08-22 | 2008-01-29 | Healagenics, Inc. | Compositions and methods for the treatment of wounds and the reduction of scar formation |
US20140371771A1 (en) * | 2006-09-05 | 2014-12-18 | Amo Development, Llc. | System and method for resecting corneal tissue |
DE102006049580A1 (de) * | 2006-10-20 | 2008-04-24 | Rochel, Michael, Dr. med. | Topische Zusammensetzung zur Behandlung von Ekzemen |
US20080141628A1 (en) * | 2006-12-15 | 2008-06-19 | Bausch & Lomb Incorporated | Packaging Solutions |
US20100120013A1 (en) * | 2008-11-07 | 2010-05-13 | Mb Research Laboratories, Inc. | Procedure for long term corneal culture |
FR2948286B1 (fr) * | 2009-07-27 | 2011-08-26 | Jean-Noel Thorel | Composition injectable associant un agent de comblement et un milieu de croissance des fibroblastes |
RU2498570C1 (ru) * | 2012-05-03 | 2013-11-20 | Государственное бюджетное учреждение "Уфимский научно-исследовательский институт глазных болезней Академии наук Республики Башкортостан" | Раствор для хранения роговицы |
CN104094925B (zh) * | 2014-07-18 | 2015-11-18 | 广州优得清生物科技有限公司 | 一种板层角膜保存液 |
CN105284788B (zh) * | 2015-11-20 | 2017-11-07 | 厦门大学 | 一种角膜中期保存液及其制备方法 |
CN106135197B (zh) * | 2016-07-04 | 2018-03-02 | 拜欧迪赛尔(北京)生物科技有限公司 | 一种无血清成分的眼角膜中期保存液 |
RU2690153C2 (ru) * | 2017-06-28 | 2019-05-31 | Альвина Давидовна Мусина | Способ асептического пролонгированного хранения и транспортировки аллогенных имплантатов, донорских тканей, на примере донорской роговицы, в специальном контейнере с наномодифицированной поверхностью |
WO2020056392A1 (en) | 2018-09-14 | 2020-03-19 | University Of Miami | Dual-chamber vial for corneal graft preservation |
EP4368021A1 (en) * | 2022-11-10 | 2024-05-15 | AL.CHI.MI.A. S.r.l. | Preservation solution, preservation system and method for preserving bioological tissues in vitro, in particular corneal tissues |
US20240172743A1 (en) * | 2022-11-10 | 2024-05-30 | Al.Chi.Mi.A. S.R.L. | Preservation solution, preservation system and method for preserving biological tissues in vitro, in particular corneal tissues |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
IT1229075B (it) | 1985-04-05 | 1991-07-17 | Fidia Farmaceutici | Medicamenti per uso topico, ottenuti tramite l'impiego dell'acido ialuronico |
CH666897A5 (fr) | 1983-10-11 | 1988-08-31 | Fidia Spa | Fractions d'acide hyaluronique non inflammatoire, procedes et compositions pharmaceutiques. |
CA2041828A1 (en) * | 1990-03-05 | 1992-11-04 | Richard L. Lindstrom | Viscoelastic solution |
JPH06107538A (ja) * | 1992-03-31 | 1994-04-19 | Shiseido Co Ltd | 角膜移植用眼球保存液 |
-
1996
- 1996-04-04 IT IT96PD000084A patent/IT1287227B1/it active IP Right Grant
-
1997
- 1997-04-04 JP JP9535835A patent/JP2000508637A/ja active Pending
- 1997-04-04 US US09/155,675 patent/US6838448B2/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-04-04 RU RU98119956/14A patent/RU2184448C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1997-04-04 WO PCT/EP1997/001703 patent/WO1997037537A1/en active IP Right Grant
- 1997-04-04 AT AT97916438T patent/ATE281761T1/de not_active IP Right Cessation
- 1997-04-04 CN CN97193593.9A patent/CN1128574C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1997-04-04 CA CA002251032A patent/CA2251032A1/en not_active Abandoned
- 1997-04-04 AU AU25087/97A patent/AU732648B2/en not_active Ceased
- 1997-04-04 EP EP97916438A patent/EP0891133B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-04-04 DE DE69731525T patent/DE69731525T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-04-04 BR BR9708502A patent/BR9708502A/pt not_active IP Right Cessation
- 1997-04-04 ES ES97916438T patent/ES2234013T3/es not_active Expired - Lifetime
-
1999
- 1999-08-24 HK HK99103637A patent/HK1018583A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
IT1287227B1 (it) | 1998-08-04 |
EP0891133A1 (en) | 1999-01-20 |
JP2000508637A (ja) | 2000-07-11 |
US6838448B2 (en) | 2005-01-04 |
ATE281761T1 (de) | 2004-11-15 |
US20010009908A1 (en) | 2001-07-26 |
CN1215306A (zh) | 1999-04-28 |
CA2251032A1 (en) | 1997-10-16 |
EP0891133B1 (en) | 2004-11-10 |
AU732648B2 (en) | 2001-04-26 |
RU2184448C2 (ru) | 2002-07-10 |
ITPD960084A1 (it) | 1997-10-04 |
BR9708502A (pt) | 1999-07-03 |
DE69731525D1 (de) | 2004-12-16 |
ITPD960084A0 (it) | 1996-04-04 |
DE69731525T2 (de) | 2005-10-20 |
AU2508797A (en) | 1997-10-29 |
WO1997037537A1 (en) | 1997-10-16 |
HK1018583A1 (en) | 1999-12-30 |
CN1128574C (zh) | 2003-11-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2234013T3 (es) | Fluido de almacenamiento corneal que comprende acido hialuronico. | |
EP0517972B1 (en) | Define serum-free medical solution and use thereof | |
US10213405B2 (en) | Ophthalmic compositions and methods for treating eyes | |
Brockbank et al. | Tissue preservation | |
JPH0121133B2 (es) | ||
ES2744637T3 (es) | Soluciones para aumentar la estabilidad y la vida útil de una solución de conservación de órganos y tejidos | |
US20220168341A1 (en) | Compositions and methods of treating dry eye syndrome and other traumatized non-keratinized epithelial surfaces | |
CN111955455B (zh) | 维持角膜活性的保存液 | |
CN109258622A (zh) | 一种兽用自体血清角膜中期保存液及其制备方法 | |
Lindstrom et al. | Corneal preservation at 4 degrees C with chondroitin sulfate containing medium. | |
CN115067321B (zh) | 一种角膜组织中长期立体保存营养胶囊及其制备方法 | |
CN111001010A (zh) | 一种外眼手术冲洗液及其制备方法 | |
Peyman et al. | Dextran 40-containing infusion fluids and corneal swelling: a specular microscopic study | |
Brunette et al. | Tolerance of human corneal endothelium to glycerol | |
JPH057619A (ja) | 血清不含医療用規定溶液およびその溶液を用いた角膜の保存方法 | |
Smith | Problem of prolonged storage of the cornea | |
CA2044494C (en) | Methods and apparatus of a defined serumfree medical solution | |
AU2486201A (en) | Corneal storage fluid comprised of hyaluronic acid | |
Hessburg et al. | Ocular irrigating solutions: a comparison between balanced salt solution and L-410 (PO-EIS) |