ES2233340T3 - Metodo para la preparacion de un beta-aminoester quiral. - Google Patents

Metodo para la preparacion de un beta-aminoester quiral.

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ES2233340T3 ES00910040T ES00910040T ES2233340T3 ES 2233340 T3 ES2233340 T3 ES 2233340T3 ES 00910040 T ES00910040 T ES 00910040T ES 00910040 T ES00910040 T ES 00910040T ES 2233340 T3 ES2233340 T3 ES 2233340T3
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Abstract

Un método para la preparación de un beta-aminoéster quiral de la fórmula **(Fórmula)** en la que R es alquilo de 1 a 10 átomos de carbono; X e Y son halógenos iguales o diferentes seleccionados del grupo que consiste en Cl, Br e I; que comprende proteger el grupo amino de un éster de aminoácido racémico de la fórmula **(Fórmula)** con un grupo protector CBZ para producir un compuesto de aminoácido protegido de la fórmula **(Fórmula)** someter el compuesto de aminoácido protegido así obtenido a cromatografía quiral para obtener un éster de aminoácido protegido quiral de la fórmula **(Fórmula)**.

Description

Método para la preparación de un \beta-aminoéster quiral.
Derivados de la misma
La presente solicitud reivindica la prioridad de la Solicitud de Patente de Estados Unidos Nº de Serie 09/034.270, presentada el 4 de Marzo de 1998.
Campo de la invención
La presente invención se refiere a un método de separación quiral útil para preparar \beta-aminoésteres quirales que son útiles para la preparación de antagonistas de integrina \alpha_{v}\beta_{3}. Tales antagonistas de integrina \alpha_{v}\beta_{3} son útiles en composiciones farmacéuticas y en métodos para tratar estados mediados por \alpha_{v}\beta_{3}, inhibiendo o antagonizando integrinas.
Antecedentes de la invención
Las integrinas son un grupo de glicoproteínas de la superficie celular que median la adhesión celular y por lo tanto son mediadores útiles de interacciones de adhesión celular que se producen durante diversos procesos biológicos. Las integrinas son heterodímeros compuestos por subunidades polipeptídicas \alpha y \beta conectadas no covalentemente. Actualmente, se han identificado once subunidades \alpha diferentes y se han identificado seis subunidades \beta diferentes. Las diversas subunidades \alpha pueden combinarse con las diversas subunidades \beta para formar integrinas distintas.
La integrina identificada como \alpha_{v}\beta_{3} (también conocida como el receptor de vitronectina) se ha identificado como una integrina que representa un papel en diversas condiciones o estados de enfermedad incluyendo metástasis tumorales, crecimiento de tumores sólidos (neoplasia), osteoporosis, enfermedad de Paget, hipercalcemia humoral maligna, angiogénesis, incluyendo angiogénesis tumoral, retinopatía, incluyendo degeneración macular, artritis, incluyendo artritis reumatoide, enfermedad periodontal, psoriasis y migración de las células de los músculos lisos (por ejemplo, restenosis). Adicionalmente, se ha encontrado que tales agentes serían útiles como antivirales, antifúngicos y antimicrobianos. Los compuestos que inhiben o antagonizan selectivamente \alpha_{v}\beta_{3} serían beneficiosos para tratar tales condiciones.
Se ha observado que la integrina \alpha_{v}\beta_{3} y otras integrinas que contienen \alpha_{v} se unen a un número de macromoléculas de matriz que contienen Arg-Gly-Asp (RGD). Los compuestos que contienen la secuencia RGD imitan ligandos de matriz extracelulares a fin de unirse a receptores de la superficie celular. Sin embargo, también se sabe que los péptidos RGD en general son no selectivos para integrinas dependientes de RGD. Por ejemplo, la mayoría de los péptidos RGD que se unen a \alpha_{v}\beta_{3} también se unen a \alpha_{v}\beta_{5}, \alpha_{v}\beta_{1} y \alpha_{IIb}\beta_{3}. Se sabe que el antagonismo de \alpha_{IIb}\beta_{3} plaquetaria (también conocida como el receptor de fibrinógeno) bloquea la agregación de plaquetas en seres humanos. Para evitar efectos secundarios hemorrágicos cuando se tratan las condiciones o estados de enfermedad asociados con la integrina \alpha_{v}\beta_{3}, sería beneficioso desarrollar compuestos que fueran antagonistas selectivos de \alpha_{v}\beta_{3} en oposición a \alpha_{IIb}\beta_{3}.
La invasión de células tumorales se produce mediante un proceso en tres etapas: 1) ligazón de las células tumorales a la matriz extracelular; 2) disolución proteolítica de la matriz; y 3) movimiento de las células a través de la barrera disuelta. Este proceso puede producirse repetidamente y puede dar como resultado metástasis en sitios distantes del tumor original.
Seftor y otros (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 89 (1992) 1557-1561) han mostrado que la integrina \alpha_{v}\beta_{3} tiene una función biológica en la invasión de células de melanoma. Montgomery y otros, (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Vol. 91 (1994) 8856-60) han demostrado que la integrina \alpha_{v}\beta_{3} expresada sobre células de melanoma humanas promueve una señal de supervivencia, protegiendo las células de la apoptosis. La mediación de la ruta metastática de células tumorales mediante interferencia con el receptor de la adhesión celular integrina \alpha_{v}\beta_{3} para impedir la metástasis tumoral sería beneficiosa.
Brooks y otros (Cell. Vol. 79 (1994) 1157-1164) han demostrado que los antagonistas de \alpha_{v}\beta_{3} proporcionan un sistema terapéutico para el tratamiento de la neoplasia (inhibición del crecimiento de tumores sólidos) ya que la administración sistémica de antagonistas de \alpha_{v}\beta_{3} provoca una regresión drástica de diversos tumores humanos histológicamente diferentes.
El receptor de la adhesión integrina \alpha_{v}\beta_{3} se identificó como un marcador de vasos sanguíneos angiogénicos en el pollo y el hombre y por lo tanto tal receptor representa un papel crítico en la angiogénesis o la neovascularización. La angiogénesis se caracteriza por la invasión, la migración y la proliferación de células del músculo liso y endoteliales. Los antagonistas de \alpha_{v}\beta_{3} inhiben este proceso promoviendo selectivamente la apoptosis de células en la neovasculatura. El crecimiento de nuevos vasos sanguíneos, o angiogénesis, también contribuye a condiciones patológicas tales como la retinopatía diabética y la degeneración macular (Adonis y otros, Amer. J. Ophthal., Vol. 118 (1994) 445-450) y la artritis reumatoide (Peacock y otros, J. Exp. Med., Vol. 175, (1992), 1135-1138). Por lo tanto, los antagonistas de \alpha_{v}\beta_{3} serían agentes terapéuticos útiles para tratar tales condiciones asociadas con la neovascularización (Brooks y otros, Science, Vol. 264, (1994), 569-571).
Se ha presentado que el receptor de la superficie celular \alpha_{v}\beta_{3} es la principal integrina en osteoclastos responsables de la ligazón al hueso. Los osteoclastos provocan la resorción ósea y, cuando tal actividad de resorción ósea supera la actividad de formación ósea, da como resultado la osteoporosis (una pérdida de hueso), que conduce a un número incrementado de fracturas óseas, incapacitación y mortalidad incrementada. Se ha observado que los antagonistas de \alpha_{v}\beta_{3} son inhibidores potentes de la actividad osteoclástica tanto in vitro [Sato y otros, J. Cell. Biol., Vol. 111 (1990) 1713-1723] como in vivo [Fisher y otros, Endocrinology, Vol. 132 (1993) 1411-1413]. El antagonismo de \alpha_{v}\beta_{3} conduce a una resorción ósea disminuida y por lo tanto restaura un equilibrio normal de actividad de formación y resorción ósea. Así, sería beneficioso proporcionar antagonistas de \alpha_{v}\beta_{3} de osteoclastos que fueran inhibidores eficaces de la resorción ósea y por lo tanto fueran útiles en el tratamiento o la prevención de la osteoporosis.
El papel de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} en la migración de células del músculo liso también le convierte en un objetivo terapéutico para la prevención o la inhibición de la hiperplasia neointimal que es una causa principal de la restenosis después de procedimientos vasculares (Choi y otros, J. Vasc. Surg. Vol. 19(1) (1994) 125-34). La prevención o la inhibición de la hiperplasia neointimal mediante agentes farmacéuticos para prevenir o inhibir la restenosis sería beneficiosa.
White (Current Biology, Vol. 3(9) (1993) 596-599) ha presentado que el adenovirus usa \alpha_{v}\beta_{3} para entrar en las células huésped. La integrina parece requerirse para la endocitosis de la partícula vírica y puede requerirse para la penetración del genoma viral en el citoplasma de la célula huésped. Así, los compuestos que inhiben \alpha_{v}\beta_{3} encontrarían utilidad como agentes antivirales.
El documento Número de Serie 09/034.270 de Estados Unidos describe compuestos de la siguiente fórmula general
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en la que X e Y son un grupo halo igual o diferente; R es H o alquilo; y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Tales compuestos encuentran uso como antagonistas de integrina \alpha_{v}\beta_{3}.
Más específicamente, el documento Número de Serie 09/034.270 de Estados Unidos describe los siguientes compuestos:
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en los que R es H o alquilo; o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. Cada uno de estos compuestos contiene un resto de \beta-aminoácido/éster quiral que está substituido por halógenos. Para preparar tales antagonistas de \alpha_{v}\beta_{3}, por lo tanto es útil tener una metodología para preparar eficazmente un \beta-aminoácido/éster quiral.
Por otra parte, la solicitud de patente internacional WO 97/08145 describe ciertos derivados de meta-guanidina, urea, tiourea o ácido aminobenzoico azacíclico como antagonistas de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} y productos intermedios usados en su producción. Sin embargo, este documento no contiene una descripción de métodos de resolución óptica para \beta-aminoésteres.
Se conoce la cromatografía quiral para separar enantiómeros [Péter y otros, Analytica Chimica Acta, 352 (1997) 335-356] y es un método posible para preparar tales compuestos quirales. La presente invención proporciona un nuevo método para la preparación de \beta-aminoésteres quirales que son útiles en la preparación de los antagonistas de \alpha_{v}\beta descritos previamente.
Sumario de la invención
La presente invención se refiere a un método para la preparación de \beta-aminoésteres quirales de la fórmula
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que comprende proteger el grupo amino de un éster de aminoácido racémico de la fórmula
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con CBZ para formar un éster de aminoácido protegido de la fórmula
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someter el éster de aminoácido protegido de la fórmula III a cromatografía quiral para obtener un éster de aminoácido protegido de la fórmula
14
desproteger el éster de aminoácido de la fórmula IV haciendo reaccionar dicho éster de aminoácido con yoduro de trimetilsililo en diclorometano;
y aislar el éster de aminoácido de la fórmula I.
Descripción detallada
La presente invención se refiere a un método para la preparación de \beta-aminoésteres quirales de la fórmula
15
La invención comprende un procedimiento que parte del \beta-aminoéster racémico. La primera etapa comprende la etapa de proteger el grupo amino del \beta-aminoéster racémico de la fórmula
16
Preferiblemente, la presente invención proporciona la protección del \beta-aminoéster con CBZ. La etapa de protección da como resultado un \beta-aminoéster racémico protegido de la fórmula
17
y permite la separación quiral de los \beta-aminoésteres (R) y (S) de la mezcla racémica.
Se realiza una separación quiral del compuesto de fórmula II, usando metodología conocida por los expertos en la especialidad, para dar cada enantiómero como el CBZ-\beta-aminoéster de la fórmula
18
El grupo protector CBZ se retira a continuación para dar un \beta-aminoéster como un solo isómero. Aunque existen métodos establecidos estándar bien conocidos para retirar grupos protectores, incluyendo el grupo CBZ, tales metodologías de desprotección daban como resultado pérdida de los halógenos aromáticos. Debido a la estructura única de los \beta-aminoácidos necesaria para la preparación de los antagonistas de integrina descritos previamente, la etapa de desprotección empleando metodologías de desprotección estándar estaba acompañada por pérdida de los halógenos aromáticos. La pérdida de tales halógenos no daba como resultado los \beta-aminoésteres quirales necesarios para la preparación de los antagonistas de integrina \alpha_{v}\beta_{3} peptidomiméticos descritos previamente. Después de mucha investigación, se encontró que podía usarse el tratamiento con yoduro de trimetilsililo en diclorometano de los \beta-aminoésteres protegidos para desproteger las aminas mientras que quedaban los halógenos aromáticos intactos.
Las condiciones preferidas se describen en el Ejemplo K de esta solicitud y en el Ejemplo K del documento Número de Serie 09/034.270 de Estados Unidos, y también en el Ejemplo Q, Etapa I, el Ejemplo R y el Ejemplo S de la presente solicitud. Tal desprotección da como resultado \beta-aminoésteres de las siguientes fórmulas:
19
Lo siguiente es una lista de definiciones de diversos términos usados aquí.
Según se usan aquí, los términos "alquilo" o "alquilo inferior" se refieren a radicales hidrocarbúricos de cadena lineal o cadena ramificada que tienen de aproximadamente 1 a aproximadamente 10 átomos de carbono, y más preferiblemente de 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono. Ejemplos de tales radicales alquilo son metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, t-butilo, pentilo, neopentilo, hexilo, isohexilo y similares.
Según se usa aquí, el término "halo" o "halógeno" se refieren a bromo, cloro o yodo.
El término "composición", según se usa aquí, significa un producto que resulta de la mezcladura o la combinación de más de un elemento o ingrediente.
El término "portador farmacéuticamente aceptable", según se usa aquí, significa un material, una composición o un vehículo farmacéuticamente aceptable, tal como una carga, un diluyente, un excipiente, un disolvente o un material encapsulante, líquido o sólido, implicado en soportar o transportar un agente químico.
El término "cantidad terapéuticamente eficaz" significará la cantidad de fármaco o agente farmacéutico que provocará la respuesta biológica o médica de un tejido, un sistema o un animal que está siendo buscada por un investigador o médico.
Lo siguiente es una lista de abreviaturas y los significados correspondientes que se usan intercambiablemente aquí:
^{1}H-NMR = resonancia magnética nuclear de protón
AcOH = ácido acético
Ar = argón
BOC = t-Butoxicarbonilo
CBZ = 20
CH_{3}CN = acetonitrilo
Análisis de CHN = análisis elemental de carbono/hidrógeno/nitrógeno
Análisis de CHNCl = análisis elemental de carbono/hidrógeno/nitrógeno/cloro
Análisis de CHNS = análisis elemental de carbono/hidrógeno/nitrógeno/azufre
Agua DI = agua desionizada
DMA = N,N-dimetilacetamida
DMAP = 4-(N,N-dimetilamino)piridina
DMF = N,N-dimetilformamida
EDCl = hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
EtOAc = acetato de etilo
EtOH = etanol
FAB MS = espectroscopía de masas con bombardeo atómico rápido
g = gramo(s)
HOBT = hidrato de 1-hidroxibenzotriazol
HPLC = cromatografía líquida de alta resolución
IBCF = cloroformiato de isobutilo
KSCN = tiocianato potásico
l = litro
LiOH = hidróxido de litio
MEM = metoxietoximetilo
MEMCl = cloruro de metoxietoximetilo
MeOH = metanol
mg = miligramos
MgSO_{4} = sulfato magnésico
ml = mililitros
MS = espectroscopía de masas
MTBE = metil-terc-butil-éter
N_{2} = nitrógeno
NaHCO_{3} = bicarbonato sódico
NaOH = hidróxido sódico
Na_{2}SO_{4} = sulfato sódico
NMM = N-metilmorfolina
NMP = N-metilpirrolidinona
NMR = resonancia magnética nuclear
P_{2}O_{5} = pentóxido de fósforo
PTSA = ácido para-toluenosulfónico
RPHPLC = cromatografía líquida de alta resolución en fase inversa
RT = temperatura ambiente
TFA = ácido trifluoroacético
THF = tetrahidrofurano
TMS = trimetilsililo
\Delta = calentamiento de la mezcla de reacción
Los compuestos descritos aquí pueden existir en diversas formas isómeras y se entiende que han de incluirse todas estas formas isómeras. También se incluyen las formas tautómeras así como las sales farmacéuticamente aceptables de tales isómeros y tautómeros.
En las estructuras y fórmulas presentes, un enlace trazado a través de un enlace de un anillo puede ser con cualquier átomo disponible del anillo.
El término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a una sal preparada poniendo en contacto un compuesto descrito previamente con un ácido cuyo anión se considera generalmente adecuado para el consumo humano. Ejemplos de sales farmacológicamente aceptables incluyen las sales de hidrocloruro, hidrobromuro, hidroyoduro, sulfato, fosfato, acetato, propionato, lactato, maleato, malato, succinato, tartrato y similares. Todas las sales farmacológicamente aceptables pueden prepararse por medios convencionales. (Véase Berge y otros, J. Pharm. Sci., 66(1), 1-19 (1977) para ejemplos adicionales de sales farmacéuticamente aceptables).
Para la inhibición o el antagonismo selectivo de integrinas \alpha_{v}\beta_{3}, los compuestos antagonistas de integrina \alpha_{v}\beta_{3} descritos aquí pueden administrarse oralmente, parenteralmente o mediante un aerosol de inhalación, o tópicamente en formulaciones de dosificación unitaria que contienen portadores, adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables. El término parenteral, según se usa aquí, incluye, por ejemplo, subcutáneo, intravenoso, intramuscular, intraesternal, técnicas de infusión o intraperitonealmente.
Los compuestos antagonistas de integrina \alpha_{v}\beta_{3} descritos aquí se administran mediante cualquier ruta adecuada en la forma de una composición farmacéutica adaptada a tal ruta, y en una dosis eficaz para el tratamiento pretendido. Dosis terapéuticamente eficaces de los compuestos requeridas para prevenir o detener el avance de o para tratar la condición médica son determinadas fácilmente por un experto normal en la especialidad usando sistemas preclínicos y clínicos familiares para los técnicos médicos.
El antagonista de integrina \alpha_{v}\beta_{3} descrito aquí proporciona un método para tratar condiciones mediadas inhibiendo o antagonizando selectivamente el receptor de la superficie celular \alpha_{V}\beta_{3}, método que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto descrito seleccionado de la clase de compuestos descritos previamente, en donde uno o más compuestos se administran en asociación con uno o más portadores y/o diluyentes y/o adyuvantes (denominados aquí colectivamente materiales "portadores") farmacéuticamente aceptables atóxicos y, si se desea, otros ingredientes activos. La administración de un antagonista de integrina \alpha_{v}\beta_{3} proporciona un método para la inhibición del receptor de la superficie celular \alpha_{v}\beta_{3}. Lo más preferiblemente, la administración del antagonista de \alpha_{v}\beta_{3} proporciona un método para inhibir la resorción ósea, tratar la osteoporosis, inhibir la hipercalcemia humoral maligna, tratar la enfermedad de Paget, inhibir metástasis tumorales, inhibir la neoplasia (crecimiento de tumores sólidos), inhibir la angiogénesis, incluyendo angiogénesis tumoral, tratar la retinopatía diabética y la degeneración macular, inhibir la artritis, la psoriasis y la enfermedad periodontal e inhibir la migración de células del músculo liso, incluyendo restenosis.
La presente invención proporciona un método para preparar los \beta-aminoésteres quirales útiles para la preparación de los antagonistas de integrina \alpha_{v}\beta_{3} descritos aquí. El método proporciona la preparación de los \beta-aminoésteres quirales a partir de la materia prima racémica. Los métodos ofrecen ventajas sobre una síntesis quiral en la que ambos isómeros del \beta-aminoéster pueden prepararse en una sola secuencia y el método comienza con el material racémico en oposición a necesitar una sola materia prima enantiómera.
Basándose en técnicas experimentales de laboratorio estándar y en procedimientos bien conocidos y apreciados por los expertos en la especialidad, así como en comparaciones con compuestos de utilidad conocida, los compuestos antagonistas de \alpha_{v}\beta_{3} descritos previamente pueden usarse en el tratamiento de pacientes que sufren las condiciones patológicas previas. Un experto en la especialidad reconocerá que la selección del compuesto antagonista de \alpha_{v}\beta_{3} de la invención más apropiado está dentro de la capacidad de un experto normal en la especialidad y dependerá de una variedad de factores, incluyendo la determinación de los resultados obtenidos en un ensayo estándar y modelos animales.
El tratamiento de un paciente que sufre una de las condiciones patológicas comprende administrar a tal paciente una cantidad de compuesto descrito previamente que es terapéuticamente eficaz para controlar la condición o para prolongar la supervivencia del paciente más allá de la esperada en ausencia de tal tratamiento. Según se usa aquí, el término "inhibición" de la condición se refiere a frenada, interrupción, obstaculización o detención de la condición y no indica necesariamente una eliminación total de la condición. Se cree que prolongar la supervivencia de un paciente, además de ser un efecto ventajoso significativo por sí mismo, también indica que la condición es controlada beneficiosamente en alguna extensión.
Las secuencias sintéticas generales para preparar los antagonistas de integrina \alpha_{v}\beta_{3} descritos previamente y las materias primas útiles para preparar los ésteres de \beta-aminoácido se esbozan en los Esquemas I-III. Los Esquemas y los Ejemplos descritos más adelante aquí describen 1) la preparación de las materias primas racémicas usadas en la presente invención; 2) los detalles de la metodología de separación quiral de la presente invención; 3) la metodología sintética quiral alternativa usada para preparar un solo enantiómero de los \beta-aminoésteres; y 4) el uso de los \beta-aminoésteres preparados mediante la metodología de separación quiral para preparar antagonistas de integrina \alpha_{v}\beta_{3}. Se describen cuando es apropiado tanto una explicación de como los procedimientos reales para los diversos aspectos de la presente invención. Los siguientes Esquemas y Ejemplos pretenden ser meramente ilustrativos de la presente invención y no limitativos de la misma en su alcance y espíritu. Los expertos en la especialidad entenderán fácilmente que pueden usarse en la presente invención variaciones de las condiciones y los procedimientos descritos en los Esquemas y Ejemplos.
A no ser que se indique otra cosa, todos los materiales de partida y el equipo empleado estaban disponibles comercialmente.
Esquema I
21
El Esquema I ilustra una metodología útil para preparar la porción de ácido tetrahidropirimidinobenzoico de los antagonistas de integrina \alpha_{v}\beta_{3} descritos aquí, que puede acoplarse a un éster de gly-\beta-aminoácido. Brevemente, en el Esquema I, se convierte ácido 3,5-dihidroxibenzoico en ácido 3-amino-5-hidroxibenzoico usando el procedimiento descrito en Austr. J. Chem., 34 (6), 1319-24 (1981). El producto se hace reaccionar con tiocianato amónico en ácido clorhídrico diluido caliente para dar ácido 3-tiourea-5-hidroxibenzoico después del tratamiento normal. Este producto intermedio de tiourea se convierte en el derivado S-metílico mediante la reacción con yoduro de metilo en etanol a reflujo. Se hace reaccionar 1,3-diamino-2-hidroxipropano con este producto intermedio resultante en DMA caliente. Al enfriar se forma un precipitado y el producto zwitteriónico se aísla mediante filtración. La sal de HCl puede obtenerse mediante liofilización en ácido clorhídrico diluido. Alternativamente, el producto puede aislarse de la mezcla de reacción original retirando materias volátiles y concentrando. El producto resultante se recoge en agua y el pH se ajusta hasta aproximadamente 5-7 donde el producto zwitteriónico precipita y se aísla mediante filtración. La sal de HCl puede obtenerse según se indica previamente o simplemente disolviendo en ácido clorhídrico diluido y concentrando hasta un sólido y secando.
Esquema IA
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22 
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El Esquema IA ilustra una metodología útil para preparar la porción de ácido tetrahidropirimidinobenzoico de los antagonistas de integrina \alpha_{v}\beta_{3} descritos aquí, que puede acoplarse a un éster de gly-\beta-aminoácido. Brevemente, en el Esquema IA, se hace reaccionar 1,3-diamino-2-hidroxipropano con disulfuro de carbono en un disolvente apropiado tal como etanol-agua, se somete a reflujo, se enfría, se añade ácido clorhídrico, se somete a reflujo de nuevo, se enfría y el producto, 5-hidroxitetrahidropirimidin-2-tiona, se recoge mediante filtración y se seca. Este producto intermedio de tiourea cíclica se convierte en el derivado S-metílico mediante la reacción de la tiona y yoduro de metilo en etanol a reflujo. El hidroyoduro de 2-metiltioéter-5-hidroxipirimidina deseado se aísla fácilmente retirando materias volátiles a presión reducida. Así, hidroyoduro de 2-metiltioéter-5-hidroxipirimidina en cloruro de metileno:DMA (aproximadamente 10:1) y un equivalente de trietilamina se enfrían hasta aproximadamente la temperatura del baño de hielo y se añade un equivalente de bicarbonato de di-terc-butilo (anhídrido de BOC). El tratamiento convencional da la BOC-2-metiltioéter-5-hidroxipirimidina como un aceite.
Se convierte ácido 3,5-dihidroxibenzoico en ácido 3-amino-5-hidroxibenzoico usando el procedimiento de Aust. J. Chem., 34 (6), 1319-24 (1981).
El producto final deseado, sal de hidrocloruro de ácido 3-hidroxi-5-[(5-hidroxi-1,4,5,6-tetrahidro-2-pirimidinil)amino]benzoico, se prepara haciendo reaccionar BOC-2-metiltioéter-5-hidroxipirimidina y ácido 3-amino-5-hidroxibenzoico en DMA caliente. Al enfriar, se forma un precipitado y el producto zwitteriónico se aísla mediante filtración. La sal de HCl puede obtenerse liofilizando en ácido clorhídrico diluido, por ejemplo.
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Esquema II
23
Y y X son grupos halo.
El Esquema II ilustra una metodología útil para preparar el N-gly-amino-3-(3,5-dihalo-2-hidroxi)fenilpropionato de etilo que puede acoplarse al resto de ácido tetrahidropirimidinobenzoico. Brevemente, pueden prepararse salicilaldehídos substituidos con halo en 3,5 mediante halogenación directa como, por ejemplo, sería el caso cuando se suspende 5-bromosalicilaldehído en ácido acético y se añade un equivalente o más de cloro para dar 3-cloro-5-bromo-2-hidroxibenzaldehído. Algo de producto precipita y puede recuperarse mediante filtración. El resto puede recuperarse diluyendo el filtrado con agua y aislando el precipitado. Combinar los sólidos y secar da 3-cloro-5-bromo-2-hidroxibenzaldehído. Puede prepararse 3-yodo-5-clorosalicilaldehído haciendo reaccionar 5-clorosalicilaldehído con N-yodosuccinimida en DMF y sometiendo la mezcla de reacción a condiciones de tratamiento habituales. Puede prepararse 3-yodo-5-bromosalicilaldehído haciendo reaccionar 5-bromosalicilaldehído en acetonitrilo con yoduro potásico y cloramina T. El tratamiento da un material que cuando se trata con hexanos da el 3-yodo-5-clorosalicilaldehído deseado.
Las cumarinas se preparan fácilmente a partir de salicilaldehídos usando una reacción de Perkin modificada (por ejemplo, Vogel's Textbook of Practical Organic Chemistry, 5ª Ed., 1989, p. 1040). Las cumarinas substituidas con halo se convierten en 3-aminohidrocumarinas (véase J.G. Rico, Tett. Let., 1994, 35, 6599-6602) que se abren fácilmente en alcohol ácido para dar ésteres de ácido 3-amino-3-(3,5-halo-2-hidroxi)fenilpropanoico.
Los ésteres de ácido 3-amino-3-(3,5-halo-2-hidroxi)fenilpropanoico se convierten en ésteres de ácido N-gly-3-amino-3-(3,5-halo-2-hidroxi)fenilpropanoico mediante reacción de Boc-N-gly-N-hidroxisuccinimida para dar ésteres de ácido Boc-N-gly-3-amino-3-(3,5-halo-2-hidroxi)fenilpropanoico que se convierten en sales de HX de ésteres de ácido N-gly-3-amino-3-(3,5-halo-2-hidroxi)fenilpropanoico (en los que X es un grupo halo), por ejemplo, mediante la retirada del grupo protector BOC usando HCl en etanol.
Los compuestos de aminoácido usados al preparar los compuestos antagonistas de \alpha_{v}\beta_{3} pueden prepararse alternativamente de acuerdo con los procedimientos sintéticos quirales indicados aquí y más adelante y de acuerdo con la metodología descrita y reivindicada en USSN 60/076.710 en tramitación conjunta, presentada el 4 de Marzo de 1998.
Esquema III
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Y y X son grupos halo.
El Esquema III es ilustrativo de una metodología útil para preparar diversos compuestos antagonistas de \alpha_{v}\beta_{3}. El ácido 3-hidroxi-5-[(1,4,5,6-tetrahidro-5-hidroxi-2-pirimidinil)amino]benzoico se activa para el acoplamiento usando métodos conocidos. Así, después de disolverse en un disolvente adecuado tal como DMA, se añade un equivalente de NMM. La mezcla de reacción se enfría hasta temperaturas del baño de hielo y se añade IBCF. Se añaden al producto intermedio de anhídrido mixto el éster de gly-\beta-aminoácido y NMM. Al terminar la reacción, el producto se purifica mediante HPLC preparativa y el éster se hidroliza hasta el ácido tratando con una base, tal como LiOH, en un disolvente adecuado (dioxano/agua o acetonitrilo/agua). Alternativamente, puede usarse un ácido adecuado, tal como TFA. El producto se aísla mediante HPLC preparativa o aislando el zwitterión a pH 5-7 y convirtiendo la sal deseada mediante procedimientos estándar.
Ejemplo A Preparación de
25
Etapa 1
Preparación de
26
Se añadieron a un matraz de fondo redondo de 2 l equipado con un agitador mecánico y un condensador 3,5-diclorosalicilaldehído (200 g, 1,05 moles, 1 equivalente), anhídrido acético (356 g, 3,49 moles) y trietilamina (95,0 g, 0,94 moles, 0,90 equivalentes). La solución de reacción se calentó a reflujo durante la noche. La mezcla de reacción de color marrón oscuro se enfrió hasta 50ºC y se añadió agua (1 l) con agitación. Después de una hora, la mezcla se filtró y el filtrado se combinó con EtOH (1 l). Esta mezcla se calentó hasta 45ºC durante 1 hora, se enfrió hasta temperatura ambiente, se filtró y el sólido (fracción A) se lavó con EtOH (0,5 l). Las soluciones de EtOH combinadas se concentraron mediante evaporación giratoria hasta un aceite (fracción B). El sólido de la fracción A se disolvió en cloruro de metileno (1,5 l) y la solución resultante se hizo pasar a través de un bloque de gel de sílice (1300 ml de volumen). La solución de color marrón oscuro resultante se concentró hasta un aceite que se trituró con hexanos (1,3 l) para dar un sólido que se aisló mediante filtración y se lavó (hexanos) para dar 6,8-diclorocumarina substancialmente pura (163 g). Se obtuvieron 31 g adicionales de producto tratando el aceite, fracción B, de un modo similar; el aceite se disolvió en cloruro de metileno (0,5 l), se hizo pasar a través de un bloque de sílice (0,5 l de volumen) y se trituró con hexanos. El rendimiento aislado total era 194 g u 86% de rendimiento del sólido marrón.
La MS y la NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 2
Preparación de
27
Se añadieron a un matraz de fondo redondo de 2 l de 3 bocas equipado con un agitador mecánico 6,8-diclorocumarina (160 g, 0,74 moles) (preparada en la Etapa 1) y THF seco (375 ml, Aldrich Sure Seal). La mezcla resultante se enfrió hasta -40ºC (baño de hielo seco/acetona) y se añadió bis(trimetilsilil)amida de litio (0,80 moles, 800 ml de 1M en THF) mientras se mantenía la temperatura por debajo de -40ºC. Después de la terminación de la adición, el baño de enfriamiento se retiró. Después de 0,5 horas, la mezcla se había calentado hasta -5ºC. La reacción se extinguió mediante la adición de una solución de HCl (0,5 l de 4M en dioxano) en EtOH (1,25 l). La temperatura se mantuvo por debajo de 0ºC durante la noche. La mezcla de reacción se concentró hasta aproximadamente la mitad de su volumen original y se sometió a reparto entre EtOAc (3 l) y agua (2 l). La capa orgánica se lavó con HCl acuoso (3 x 1 l de HCl 0,5 N). El pH de las capas acuosas combinadas se ajustó hasta aproximadamente 7 mediante la adición de NaOH acuoso al 10% y se extrajo con cloruro de metileno (3 x 2 l). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO_{4}), se filtraron y se añadió HCl 4M en dioxano (210 ml) con agitación. Al terminar la precipitación el sólido se retiró mediante filtración. El filtrado se concentró hasta un volumen pequeño y se añadió metil-t-butil-éter. El sólido obtenido se combinó con el sólido inicialmente formado y el producto combinado se lavó con metil-t-butil-éter, se aisló mediante filtración y se secó (horno de vacío durante un fin de semana) para obtener el producto deseado (172 g, 74% de rendimiento).
La MS y la NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 3
Preparación de
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Se añadieron éster N-hidroxisuccinimídico de N-t-Boc-glicina (Sigma, 15,0 g, 0,055 moles), DMF seca (Aldrich Sure Seal, 200 ml) y el producto de la Etapa 2 (21,67 g, 0,055 moles) bajo una atmósfera inerte (Ar) a un matraz de fondo redondo (0,5 l) secado a la llama equipado con barra de agitación magnética. La mezcla de reacción se enfrió hasta aproximadamente 0ºC (baño de sal-hielo) y se añadieron N-metilmorfolina (5,58 g, 0,056 moles) y una cantidad catalítica de MAP y la reacción se dejó avanzar durante la noche. La mezcla de reacción se concentró hasta un fango y se sometió a reparto entre EtOAc (0,4 l) y base acuosa (2 x 0,2 l, NaHCO_{3} acuoso saturado). La capa orgánica se lavó consecutivamente con ácido cítrico acuoso (2 x 0,2 l, 10% p/v), de nuevo con bicarbonato sódico acuoso (2 x 0,2 l), salmuera y se secó (Na_{2}SO_{4}).Las materias volátiles se retiraron bajo vacío a 55ºC para dar un aceite (22,5 g, 92% de rendimiento) que se solidificaba al reposar.
La MS y la NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 4
Preparación de
29
El producto obtenido en la Etapa 3 se desprotegió para dar la sal de hidrocloruro de amina usando el siguiente procedimiento. Se añadió dioxano seco (40 ml) al producto de la Etapa 3 (14,0 g, 0,032 moles) en un matraz de fondo redondo (0,1 l) secado a la llama, con barra de agitación. Se añadió a esto HCl 4,0 N en dioxano (2 equivalentes, 6,32 ml) a 0ºC y la reacción se dejó avanzar hasta que el desprendimiento de gas cesaba y la reacción era completa. Las materias volátiles se retiraron bajo vacío y el residuo se trituró con éter etílico (50 ml). Los sólidos se recogieron mediante filtración y se lavaron con éter y se secaron para dar el producto deseado (12,5 g).
La MS y la NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Ejemplo B Preparación de 
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30 
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Etapa 1
Preparación de 
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31 
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Se añadió trietilamina (103,6 ml, 743,2 milimoles) a una suspensión de 3-bromo-5-clorosalicilaldehído (175,0 g, 743,2 milimoles) en anhídrido acético (280,5 ml, 3,0 moles). La solución de reacción se calentó a reflujo durante 4,5 horas. La solución se enfrió y se concentró a vacío. Se añadió etanol absoluto (730 ml) al residuo marrón. La mezcla se almacenó a 0ºC durante 14 horas. El sólido marrón se recogió mediante filtración y se lavó con etanol frío. El sólido se secó a vacío para dar el producto deseado (123,0 g, 64% de rendimiento). La ^{1}H NMR estaba de acuerdo con la estructura propuesta.
Etapa 2
Preparación de
32 
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Se añadió, gota a gota con agitación, bis(trimetilsilil)amida de litio (154,1 ml de una solución 1M en THF) a una solución de la cumarina (40,0 g, 154,1 milimoles) en THF (40 ml) a -76ºC. La adición se completó en 10 minutos. La mezcla de reacción se agitó a continuación durante 5 minutos, se calentó hasta -20ºC y se agitó durante 15 minutos. Se añadió a esta solución ácido acético (9,25 g, 154,1 milimoles) en THF (28 ml) durante 5 minutos. La mezcla se calentó hasta temperatura ambiente y las materias volátiles se retiraron a vacío. El residuo se disolvió en éter (850 ml), se lavó con NaHCO_{3} acuoso saturado (2 x 100 ml), salmuera (2 x 40 ml) y se secó (MgSO_{4}). La solución de éter se concentró hasta aproximadamente 160 ml y se enfrió hasta 0ºC. Se añadió a esta suspensión HCl 4M en dioxano (56,3 ml, 225 milimoles) y la mezcla se agitó a 0ºC durante 30 minutos. La suspensión se filtró y la torta filtrante se lavó con éter. El sólido se secó a vacío para dar el producto deseado como el solvato de dioxano de la sal de HCl (45,0 g). La ^{1}H NMR estaba de acuerdo con la estructura propuesta.
Etapa 3
Preparación de
33
Se añadió HCl 4M en dioxano (157,8 ml, 631,1 milimoles) durante 10 minutos a una suspensión de la lactona (142,2 g, 354,5 milimoles) en etanol absoluto (533 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2,5 horas. Las materias volátiles se retiraron a vacío. El residuo se disolvió en acetato de etilo (450 ml) y la solución se mantuvo a 0ºC durante 15 horas. El precipitado de color canela se recogió mediante filtración y se lavó con acetato de etilo frío. El sólido se secó a vacío para dar el producto deseado como la sal de hidrocloruro (100,4 g, 79% de rendimiento). La ^{1}H NMR estaba de acuerdo con la estructura propuesta.
Etapa 4
Preparación de
34
Se añadieron éster N-hidroxisuccinimídico de N-t-Boc-glicina (Sigma, 2,72 g, 0,010 moles), THF seco (Aldrich Sure Seal, 50 ml) y el producto de la Etapa 3 (3,10 g, 0,01 moles de secado a vacío durante la noche sobre P_{2}O_{5}) bajo una atmósfera inerte (Ar) a un matraz de fondo redondo (0,1 l) secado a la llama equipado con una barra de agitación magnética. La mezcla de reacción se enfrió hasta aproximadamente 0ºC (baño de sal-hielo) y se añadió trietilamina (1,01 g, 0,010 moles). La reacción se dejó avanzar durante la noche. La mezcla de reacción se concentró hasta un semisólido y se trató de un modo similar al Ejemplo A, Etapa 3. Las materias volátiles se retiraron de la capa orgánica bajo vacío a 55ºC para dar un aceite (4 g, 83% de rendimiento) que se solidificaba al reposar.
La MS y la NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 5
Preparación de
35
El producto obtenido en la Etapa 4 se desprotegió para dar la sal de hidrocloruro de amina usando el siguiente procedimiento. Se añadió dioxano seco (20 ml) al producto de la Etapa 4 (4,0 g, 0,0084 moles) en un matraz de fondo redondo (0,1 l) secado a la llama, con barra de agitación. Se añadió a esto HCl 4,0 N en dioxano (20 ml) y la reacción se dejó avanzar hasta que cesaba el desprendimiento de gas y la reacción era completa (aproximadamente una hora). Las materias volátiles se retiraron bajo vacío y el residuo se trituró con éter etílico (50 ml). Los sólidos se recogieron mediante filtración y se lavaron con éter y se secaron para dar un sólido marrón claro (2,7 g, 78% de rendimiento).
La MS y la NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Ejemplo C Preparación de 
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36 
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Etapa 1
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37 
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Se añadió trietilamina (45 ml, 375 milimoles) a una suspensión de 3,5-dibromosalicilaldehído (100 g, 357 milimoles) en anhídrido acético (164,8 ml, 1,8 moles). La solución de reacción se calentó durante la noche a reflujo bajo argón. La solución se enfrió hasta temperatura ambiente y se formó una masa sólida. La mezcla de reacción de color marrón oscuro se lavó con hexanos calientes (3 x 300 ml) y bicarbonato sódico saturado acuoso. El sólido resultante se disolvió en EtOAc (2 l) y se lavó con agua. La capa orgánica se secó (sulfato sódico) y se concentró para dar un sólido marrón que se recogió mediante filtración. El sólido se secó a vacío para dar 6,8-dibromocumarina substancialmente pura (94,2 g, 87% de rendimiento).
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 2
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38 
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Se añadió gota a gota con agitación bis(trimetilsilil)amida de litio (66 ml de una solución 1M en THF) a 6,8-dibromocumarina (20,0 g, 0,066 moles) (preparada en la Etapa 1) en THF (100 ml) a -78ºC. La adición se completó en 10 minutos. La mezcla de reacción se agitó a continuación durante 5 minutos, se calentó hasta 0ºC y se agitó durante 15 minutos. Se añadió a esta solución ácido acético (3,95 g) durante 1 minuto. La mezcla se calentó hasta temperatura ambiente y las materias volátiles se retiraron a vacío. El residuo se disolvió en hexanos (500 ml), se lavó con NaHCO_{3} acuoso saturado (2 x 100 ml) y se secó (Na_{2}SO_{4}). La solución orgánica se concentró para dar un aceite que se recogió inmediatamente en éter dietílico (400 ml) y se añadió con agitación a 0ºC durante 30 minutos HCl 4M en dioxano (30 ml). El HCl en exceso se retiró a vacío, la suspensión se filtró y la torta filtrante se lavó con éter. El sólido se secó a vacío para dar el producto deseado como el solvato de dioxano de la sal de HCl (19,9 g).
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 3
39
La lactona preparada en la Etapa 2 previa (15 g) se disolvió en etanol absoluto (400 ml) y se hizo pasar HCl gaseoso anhidro a su través durante 1 minuto. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2,5 horas. La RPHPLC mostraba la reacción completa. Las materias volátiles se retiraron a vacío para dar un residuo obscuro. El residuo se trituró con éter dietílico (500 ml) y la mezcla se agitó durante la noche. El precipitado de color canela se recogió mediante filtración y se lavó con éter dietílico. El sólido se secó a vacío para dar el producto deseado como la sal de hidrocloruro (15,2 g).
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 4
40
Se añadieron éster N-hidroxisuccinimídico de N-t-Boc-glicina (Sigma, 8,1 g, 0,030 moles), DMF seca (Aldrich Sure Seal, 50 ml) y el producto de la Etapa 3 (12 g, 0,03 moles de secado a vacío durante la noche sobre P_{2}O_{5}) bajo una atmósfera inerte (Ar) a un matraz de fondo redondo (0,2 l) secado a la llama equipado con una barra de agitación magnética. La mezcla de reacción se enfrió hasta aproximadamente 0ºC (baño de sal-hielo) y se añadieron N-metilmorfolina (3,03 g, 0,030 moles) y DMPA catalítica. La reacción se dejó avanzar durante la noche calentando hasta temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró hasta un semisólido y se trató de un modo similar al Ejemplo A, Etapa 3. Las materias volátiles se retiraron de la capa orgánica bajo vacío a 55ºC para dar un aceite (15,7 g, 93% de rendimiento) que solidificaba al reposar.
La MS y la NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 5
41
El producto obtenido en la Etapa 4 se desprotegió para dar la sal de hidrocloruro de amina usando el siguiente procedimiento. Se añadió dioxano seco (40 ml) al producto de la Etapa 4 (13,0 g, 0,0084 moles) en un matraz de fondo redondo (0,1 l) secado a la llama, con barra de agitación. Se añadió a esto HCl 4,0 N en dioxano (23 ml) y la reacción se dejó avanzar hasta que cesaba el desprendimiento de gas y la reacción era completa (aproximadamente una hora). Las materias volátiles se retiraron bajo vacío y el residuo se trituró con éter dietílico (50 ml). Los sólidos se recogieron mediante filtración y se lavaron con éter y se secaron para dar un sólido (10,6 g, 93% de rendimiento).
La MS y la NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Ejemplo D Preparación de 
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42 
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Etapa 1
Preparación de 3-cloro-5-bromosalicilaldehído 
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Se añadieron 5-bromosalicilaldehído (495 g, 2,46 moles) y ácido acético a un matraz de fondo redondo de 5 l equipado con un agitador mecánico y un tubo de adición de gas, a temperatura ambiente, para formar una suspensión. Se añadió a esta mezcla cloro gaseoso a una velocidad moderada hasta que se había disuelto un ligero exceso molar de cloro (183 g, 1,05 moles). Después de que la adición se detuviera, la reacción se dejó avanzar durante la noche. El sólido formado se recuperó mediante filtración y el filtrado se diluyó en agua (2,5 l). La mezcla se agitó vigorosamente durante 10 minutos, el producto se recogió mediante filtración y se lavó con agua. Los sólidos combinados se secaron a vacío para dar el 3-cloro-5-bromosalicilaldehído deseado (475 g, 82% de rendimiento).
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 2
Preparación de 6-bromo-8-clorocumarina 
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44 
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Se pusieron 3-cloro-5-bromosalicilaldehído (554,1 g, 2,35 moles, 1 equivalente), anhídrido acético (1203 g, 11,8 moles, 5 equivalentes) y trietilamina (237,4 g, 2,35 moles, 1 equivalente) en un matraz de fondo redondo de 5 l equipado con un agitador mecánico y un condensador. La solución de reacción se calentó a reflujo (131-141ºC) durante la noche. La mezcla de reacción de color marrón oscuro se enfrió hasta 50ºC y se añadió hielo (2 l) (enfriamiento con baño de hielo) con agitación. Después de una hora, la mezcla se filtró y el filtrado se combinó con EtOH (1 l). Se añadió a esta mezcla EtOH (300 ml) y la mezcla de reacción se agitó durante 1 hora. El precipitado que se formaba se recogió mediante filtración y se lavó con agua:EtOH (3 x 1,3 l), se secó a vacío y a continuación se secó sobre un secador de lecho fluido. El rendimiento aislado total es 563 g o 92%.
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 3
Preparación de éster etílico de ácido 3-amino-3-(2-hidroxi-3-cloro-5-bromo)fenilpropanoico
45 
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadieron 6-bromo-8-clorocumarina (300 g, 1,16 moles) (preparada en la Etapa 2) y THF seco (900 ml, Aldrich Sure Seal) a un matraz de fondo redondo de 5 l de 3 bocas equipado con un agitador mecánico. La mezcla resultante se enfrió hasta menos de -45ºC (baño de hielo seco/acetona) y se añadió bis(trimetilsilil)amida de litio (0,80 moles, 800 ml de 1M en THF y 0,6 l en hexanos, 1,2 equivalentes) mientras se mantenía la temperatura por debajo de -45ºC durante 0,5 horas. En un matraz de 5 l separado, se combinaron a -15ºC EtOH (2,5 l) y HCl (HCl 4N en dioxano, 1l). La reacción de la cumarina se extinguió mediante la adición de la solución de HCl/EtOH enfriada. Después de 0,5 horas, la temperatura de la mezcla de reacción resultante era -8,3ºC. La mezcla de reacción se mantuvo a 0ºC durante la noche, se concentró hasta aproximadamente 2,5 l y se sometió a reparto entre EtOAc (3 l) y agua (4 l). La capa orgánica se lavó con HCl acuoso (4 x 1,2 l, HCl 0,5 N). El pH de las capas acuosas combinadas se ajustó hasta aproximadamente 8 mediante la adición de NaOH acuoso al 10% y se extrajo con cloruro de metileno (1 x 7 l y 3 x 2 l). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO_{4}, 900 g), se filtraron y se añadió con agitación HCl 4M en dioxano (400 ml). Al terminar la precipitación, el sólido se retiró mediante filtración. La mezcla se concentró hasta 2,5 l, se añadieron hexanos (2,5 l) y el precipitado se aisló mediante filtración. La torta filtrante se lavó con cloruro de metileno/hexanos (1:2), se secó por succión y se secó en horno de vacío a 40ºC para obtener el producto deseado (251 g, 60% de rendimiento).
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 4
Preparación de
46 
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto previo se preparó usando esencialmente los mismos procedimiento y cantidades relativas que se especifican para su isómero en el Ejemplo B, Etapa 4.
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 5
Preparación de
47 
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto previo se preparó usando esencialmente los mismos procedimiento y cantidades relativas que se especifican para su isómero en el Ejemplo B, Etapa 5.
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Ejemplo E Preparación de 
\vskip1.000000\baselineskip
48 
\vskip1.000000\baselineskip
Etapa 1
Preparación de 3-yodo-5-clorosalicilaldehído 
\vskip1.000000\baselineskip
49 
\vskip1.000000\baselineskip
Se añadió N-yodosuccinimida (144,0 g, 0,641 moles) a una solución de 5-clorosalicilaldehído (100 g, 0,638 moles) en dimetilformamida (400 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 2 días a temperatura ambiente. Se añadió N-yodosuccinimida adicional (20,0 g) y la agitación se continuó durante 2 días adicionales. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (1 l), se lavó con ácido clorhídrico (300 ml, 0,1N), agua (300 ml), tiosulfato sódico (5%, 300 ml), salmuera (300 ml), se secó (MgSO_{4}) y se concentró hasta sequedad para proporcionar el aldehído deseado (162 g, 92% de rendimiento) como un sólido amarillo claro.
La MS y la NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 2
Preparación de 6-cloro-8-yodocumarina 
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50
Una mezcla de 3-yodo-5-clorosalicilaldehído (100 g, 0,354 moles), anhídrido acético (300 ml) y trietilamina (54 ml) se calentó a reflujo durante 18 horas. Al enfriar, la cumarina deseada precipitaba como un material cristalino de color marrón claro. Este se filtró, se lavó con hexano/acetato de etilo (4:1, 200 ml) y se secó al aire. Rendimiento: 60 g (55%).
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 3
Preparación de hidrocloruro de 4-amino-3,4-dihidro-6-cloro-8-yodocumarina (R,S)
51
Se añadió hexametildisilazano de litio (21,62 ml, 1M, 21,62 milimoles) a una solución de 6-cloro-8-yodocumarina (6,63 g, 21,62 milimoles) en tetrahidrofurano (100 ml) a -78ºC. La mezcla de reacción se agitó a esta temperatura durante 30 minutos y a continuación a 0ºC durante 1 hora. Se añadió ácido acético (1,3 g, 21,62 milimoles) a la mezcla de reacción. La mezcla de reacción se vertió en acetato de etilo (300 ml) y solución saturada de carbonato sódico (200 ml). La capa orgánica se separó, se lavó con salmuera (200 ml), se secó (MgSO_{4}) y se concentró para proporcionar un residuo. El residuo se añadió a éter anhidro (200 ml) seguido por dioxano/HCl (4N, 30 ml) a 0ºC. La mezcla de reacción se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente, se filtró y se secó a vacío para proporcionar el producto deseado (4,6 g, 59% de rendimiento) como un polvo. (RPHPLC: Rf 6,8 minutos; Gradiente acetonitrilo al 10%-acetonitrilo al 90% durante 15 minutos y a continuación hasta acetonitrilo al 100% durante los siguientes 6 minutos. Tanto el agua como el acetonitrilo contienen 0,1% de TFA. Columna para proteínas-péptidos Vydac C18, 2 ml/minuto de caudal, controlada a 254 nm).
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 4
Preparación de hidrocloruro de 3-amino-3-(5-cloro-2-hidroxi-3-yodo)fenilpropionato de etilo (R,S)
52
Se burbujeó cloruro de hidrógeno gaseoso en una solución de hidrocloruro de 4-amino-3,4-dihidro-6-cloro-8-yodocumarina (22,0 g, 61,09 milimoles) en etanol (250 ml) manteniendo la mezcla de reacción a 0-10ºC hasta la saturación. Después de 6 horas a reflujo, la mayoría del disolvente se retiraba por destilación. El residuo enfriado se añadió a éter anhidro y se agitó durante 2 horas. La goma inicial se convertía en un material cristalino. El producto cristalino se filtró y se secó para proporcionar el producto deseado (20 g, 81% de rendimiento) como un polvo cristalino blanquecino. (Rf 7,52 minutos, condiciones como la Etapa 3).
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 5
Preparación de 3-(N-BOC-gly)-amino-3-(5-cloro-2-hidroxi-3-yodo)fenilpropionato de etilo (R,S)
53
Una mezcla de BOC-gly (2,16 g, 12,31 milimoles), HOBT (1,67 g, 12,31 de rendimiento), EDCl (2,36 g, 12,31 milimoles) y DMF (50 ml) se agitó a 0ºC durante 1 hora. Se añadió a la mezcla de reacción hidrocloruro de 3-amino-3-(5-cloro-2-hidroxi-3-yodo)propionato de etilo (5,0 g, 12,31 milimoles) seguido por trietilamina (3,5 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente. La DMF se retiró a vacío y el residuo se sometió a reparto entre acetato de etilo (300 ml) y bicarbonato sódico (200 ml). La capa orgánica se lavó con ácido clorhídrico (1N, 100 ml), salmuera (200 ml), se secó (MgSO_{4}) y se concentró para proporcionar el producto deseado como un sólido (6 g, 93% de rendimiento).
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 6
Preparación de hidrocloruro de 3-(N-gly)-amino-3-(5-cloro-2-hidroxi-3-yodo)fenilpropionato de etilo (R,S)
54
Se añadió dioxano/HCl (4N, 20 ml) a 3-(N-BOC-gly)-amino-3-(5-cloro-2-hidroxi-3-yodo)fenilpropionato de etilo (6,0 g, 11,39 milimoles) a 0ºC y se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla de reacción se concentró y se concentró una vez más después de la adición de tolueno (100 ml). El residuo obtenido se suspendió en éter y se filtró y se secó para proporcionar el producto deseado como un polvo cristalino (5,0 g, 95% de rendimiento). (RPHPLC: Rf 8,3 minutos, condiciones como en la Etapa 3).
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Ejemplo F Preparación de
55
Etapa 1
Preparación de 3-yodo-5-bromosalicialdehído
Se añadió cloramina T (23 g, 0,1 mol) a una solución de 5-bromosalicilaldehído (2,0 g, 0,1 moles) y yoduro potásico (17 g, 0,1 moles) en acetonitrilo (150 ml) y agua (50 ml) en un matraz de fondo redondo de 500 ml con agitador magnético. La mezcla se dejó reaccionar durante 1 hora. La mezcla de reacción se sometió a reparto entre ácido clorhídrico (10%, 200 ml) y acetato de etilo. La capa orgánica se secó (Na_{2}SO_{4}), se filtró y se concentró a vacío. Se añadieron hexanos al residuo y la mezcla de reacción se calentó hasta 50ºC durante 15 minutos. El material no disuelto se retiró mediante filtración. El filtrado se concentró a vacío para dejar 3-yodo-5-bromosalicilaldehído de color amarillo canario (26 g).
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 2
56
El compuesto previo se preparó usando esencialmente el mismo procedimiento del Ejemplo E, Etapas 2-6, donde en la Etapa 2, el 3-yodo-5-clorosalicilaldehído se substituía por una cantidad equivalente de producto de la Etapa 1, 3-yodo-5-bromosalicilaldehído.
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Ejemplo H Preparación de
57
Etapa 1
Se añadieron etanol (375 ml) y agua desionizada (375 ml) a un matraz de fondo redondo de 3 bocas de 2 l equipado con un agitador mecánico, un adaptador de Claisen, un embudo de adición, un condensador de reflujo y un termopar. Se añadió al matraz de reacción 1,3-diamino-2-hidroxipropano (125,4 g, 1,39 moles) (Aldrich) y se agitó para disolver. Se añadió disulfuro de carbono (84 ml, 1,39 moles) gota a gota a través del embudo de adición a 25-33ºC durante un período de 35 minutos para proporcionar una mezcla blanca como la leche. La temperatura se mantuvo con un baño de hielo. La mezcla de reacción se sometió a reflujo a 73,4ºC durante 2 horas para proporcionar una solución amarilla. La mezcla de reacción se enfrió con un baño de hielo hasta 25ºC y se añadió HCl concentrado (84 ml) gota a gota mientras se mantenía la temperatura a 25-26ºC. La mezcla de reacción se sometió a reflujo durante 21 horas a 78,4ºC. La solución de reacción se enfrió hasta 2ºC y el producto se recogió a través de filtración a vacío. El sólido blanco se lavó tres veces con etanol:agua (1:1) (50 ml) refrigerados con baño de hielo y se secó a vacío a 40ºC para proporcionar 5-hidroxitetrahidropirimidin-2-tiona (63,75 g, 34,7% de rendimiento) como un sólido blanco.
La MS y la NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 2
Se añadieron 5-hidroxitetrahidropirimidin-2-tiona (95 g, 0,72 moles) preparada en la Etapa 1, etanol absoluto (570 ml) y yoduro de metilo (45 ml, 0,72 moles) a un matraz de fondo redondo de 2 l equipado con un agitador mecánico y un termopar. La mezcla de reacción se sometió a reflujo a 78ºC durante 5 horas y a continuación se enfrió hasta temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró a vacío para proporcionar un sólido blanco (194,72 g). El sólido blanco se trituró tres veces con éter etílico (500 ml) y se secó a vacío para proporcionar hidroyoduro de 2-metiltioéter-5-hidroxipirimidina (188,22 g, 95,4% de rendimiento) como un sólido blanco.
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 3
Se añadieron hidroyoduro de 2-metiltioéter-5-hidroxipirimidina (150,81 g, 0,55 moles), cloruro de metileno (530 ml), dimetilacetamida (53 ml) y trietilamina (76,7 ml, 0,55 moles) a un matraz de fondo redondo de 3 bocas de 2 l equipado con condensador de reflujo, un agitador mecánico y una atmósfera estática de nitrógeno. La mezcla se enfrió con un baño de hielo y se añadió bicarbonato de di-terc-butilo (120,12 g, 0,55 moles) a 4ºC. La mezcla de reacción se calentó a 42,5ºC durante 18 horas para proporcionar una solución de color amarillo claro. La solución de reacción se transfirió a un embudo separador de 2 l y se lavó 3 veces con agua DI (200 ml), se secó con MgSO_{4}, se filtró y se concentró a vacío para proporcionar Boc-2-metiltioéter-5-hidroxipirimidina (134,6 g, 99,35% de rendimiento) como un aceite viscoso de color amarillo claro.
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 4
Se calentaron a 100ºC con agitación durante 2 días Boc-2-metiltioéter-5-hidroxipirimidina (50,3 g, 0,204 moles), ácido 3-amino-5-hidroxibenzoico (Aust. J. Chem. (1981) 34(6), 1319-24) (25,0 g, 0,1625 moles) y 50 ml de DMA anhidra. Resultaba un precipitado en forma de suspensión. La reacción se enfrió hasta temperatura ambiente y el precipitado se filtró, se lavó con CH_{3}CN, a continuación éter etílico y se secó. Este sólido se suspendió en H_{2}O y se acidificó con HCl concentrado dando como resultado una solución. Esta se congeló y se liofilizó para dar el producto deseado como un sólido blanco (14,4 g).
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Ejemplo I Preparación de
58
Etapa 1
Preparación del Reactivo de Reformatsky
59
Un matraz de 4 l equipado con un condensador, una sonda de temperatura y un agitador mecánico se cargó con Zn metálico (180,0 g, 2,76 moles, malla -30-100) y THF (1,25 l). Mientras se agitaba, se añadió 1,2-dibromoetano (4,74 ml, 0,05 moles) a través de una jeringa [alternativamente, puede substituirse por TMS Cl (0,1 equivalentes) a temperatura ambiente durante 1 hora]. Después de la purga del gas inerte (3 ciclos de N_{2}/vacío) la suspensión de zinc en THF se calentó hasta reflujo (65ºC) y se mantuvo a esta temperatura durante 1 hora. La mezcla se enfrió hasta 50ºC antes de cargar bromoacetato de terc-butilo (488 g, 369 ml, 2,5 moles) a través de una jeringa de 50 ml y una bomba de jeringa (dispositivo fijado a 4,1 ml/minuto) durante 1,5 horas. Una temperatura de reacción de 50ºC +/-5ºC se mantuvo a lo largo de la adición. La mezcla de reacción se dejó agitar a 50ºC durante 1 hora después de que la adición fuera completa. Subsiguientemente, la mezcla se dejó enfriar hasta 25ºC y el producto precipitado se dejó sedimentar. Las aguas madres de THF se decantaron en un matraz de fondo redondo de 2 l usando una varilla filtrante fritada gruesa y transferencia con vacío parcial (20 mm de Hg). Esto retiraba aproximadamente 65% del THF de la mezcla. Se añadió 1-metil-2-pirrolidinona (NMP, 800 ml) y la agitación se reanudó durante 5 minutos. La mezcla de reacción puede filtrarse para retirar cualquier zinc restante. El análisis indicaba una concentración de reactivo de Reformatsky deseado de 1,57 M con un rendimiento molar de 94%. Alternativamente, el reactivo sólido puede aislarse mediante filtración de la mezcla de reacción original. La torta puede lavarse con THF hasta que se obtiene un sólido blanco y se seca bajo N_{2} para obtener el producto deseado como un monosolvato de THF que puede almacenarse a -20ºC (desecado) durante períodos prolongados. Las recuperaciones típicas son 85-90%.
Etapa 2
2A. Preparación de
60
Se añadió carbonato potásico (polvo, secado en el horno a 100ºC bajo vacío, 8,82 g, 60 milimoles) a una solución de 3,5-diclorosalicilaldehído (11,46 g, 60 moles) en DMF (40 ml) a temperatura ambiente para dar una suspensión de color amarillo brillante. Se añade a continuación MEMCl (puro, 7,64 g, 61 moles) mientras se mantiene la temperatura del baño a 20ºC. La mezcla se agitó a continuación a 22ºC durante 6 horas y se añadió MEMCl (0,3 g, 2,4 milimoles). La mezcla se agitó durante otras 0,5 horas y la mezcla de reacción se vertió en agua fría (200 ml) para precipitar el producto. La suspensión se filtró sobre un filtro de presión y la torta se lavó con agua (2 x 50 ml) y se secó bajo N_{2}/vacío para proporcionar el producto (14,94 g, 89%) como un sólido blanquecino. ^{1}H NMR (CDCl_{3}, TMS) 3,37 (s, 3H), 3,54 a 3,56 (m, 2H), 3,91 a 3,93 (m, 2H), 5,30 (s, 2H), 7,63 (d, 1H), 7,73 (d, 1H), 10,30 (s, 1H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}, TMS) d (ppm): 59,03, 70,11, 99,57, 126,60, 129,57, 130,81, 132,07, 135,36, 154,66, 188,30. DSC: 48,24ºC (endo 90,51 J/g);
Microanalítica: calculado para C_{11}H_{12}Cl_{2}O_{4}: C: 47,33%; H: 4,33%; Cl: 25,40%;
encontrado: C: 47,15%; H: 4,26%; Cl: 25,16%.
2B. Preparación de
61
El producto de la Etapa 2A (35,0 g, 0,125 moles) se cargó a un matraz de fondo redondo de 3 bocas de 1 l equipado con un agitador mecánico y un embudo de adición, seguido por la adición de THF (200 ml). La solución se agitó a 22ºC y a continuación se añadió de una vez (S)-fenilglicinol (17,20 g, 0,125 moles). Después de 30 minutos a 22ºC, se añadió MgSO_{4} (20 g). La mezcla se agitó durante 1 hora a 22ºC y se filtró sobre un filtro fritado grueso. El filtrado se concentró bajo presión reducida. No se realizó purificación adicional y la imina en bruto se usó directamente en la reacción de acoplamiento, Etapa 2, C.
2C. Preparación de
62
Un matraz de fondo redondo de 3 bocas de 1 l equipado con un agitador mecánico y un embudo de adición se cargó con el reactivo sólido producido en la Etapa 1 (91,3 g, 0,275 moles) y NMP (200 ml) bajo nitrógeno. La solución se enfrió a continuación hasta -10ºC y se agitó a 350 rpm. Se preparó una solución de imina (preparada en la Etapa 2B) en NMP bajo nitrógeno y a continuación se añadió durante 20 minutos a la mezcla de reacción previa mientras la temperatura se mantenía a -5ºC (temperatura de la camisa -10ºC). La mezcla se agitó durante 1,5 horas adicionales a -8ºC y 1 hora a -5ºC después de que la adición fuera completa. Después del enfriamiento hasta -10ºC, una mezcla de HCl concentrado/solución saturada de NH_{4}Cl (8,1 ml/200 ml) se añadió en 10 minutos. Se añadió MTBE (200 ml) y la mezcla se agitó 15 minutos a 23ºC a 200 rpm. La agitación se detuvo y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con MTBE (100 ml). Las dos capas orgánicas se combinaron, se lavaron sucesivamente con una solución saturada de NH_{4}Cl (100 ml), agua (100 ml) y salmuera (100 ml). La solución se secó con MgSO_{4} (30 g), se filtró y se concentró para proporcionar un aceite naranja (66,3 g) (solidifica al reposar) que contiene el producto deseado como un solo diastereoisómero (confirmado mediante nmr de protón y carbono). Una muestra se purificó para el análisis mediante recristalización en heptano para proporcionar el producto como un sólido blanquecino.
Los espectros de NMR de protón y carbono e IR estaban de acuerdo con la estructura deseada. [\alpha]^{D}_{25} = +8,7º (c = 1,057, MeOH).
Microanalítica: calculado para C_{25}H_{33}Cl_{2}NO_{6}:
C: 58,77%; H: 6,47%; N: 2,72%; Cl: 13,78%
encontrado: C: 58,22%; H: 6,54%; N: 2,70%; Cl: 13,66%.
Etapa 3
Preparación de 
\vskip1.000000\baselineskip
63 
\vskip1.000000\baselineskip
3A. Una solución del éster en bruto preparado en la Etapa 2 [17,40 g, 0,033 moles (teoría)] y EtOH (250 ml) se cargó a un reactor de 3 bocas de 1 l con camisa. La solución se enfrió hasta 0ºC y se añadió de una vez Pb(OAc)_{4} (14,63 g, 0,033 moles). Después de 2 horas se añadió una solución al 15% de NaOH (30 ml) y el etanol se retiró bajo presión reducida. Se añadió otra porción de NaOH al 15% (100 ml) y la mezcla se extrajo con MTBE (2 x 100 ml), se lavó con H_{2}O (2 x 100 ml) y salmuera (50 ml), se secó con Na_{2}SO_{4}, se filtró sobre celita y se concentró bajo presión reducida para proporcionar un aceite naranja (12,46 g). El aceite era homogéneo mediante cromatografía en capa fina (tlc) y se usó sin purificación adicional.
3B. El aceite de 3A se diluyó con EtOH (30 ml) y se añadió ácido paratoluenosulfónico (1,3 equivalentes, 0,043 moles, 8,18 g). La solución se calentó hasta reflujo durante 8 horas, se enfrió hasta temperatura ambiente y se concentró bajo presión reducida. El residuo se trató con THF (20 ml) y se calentó hasta reflujo para formar una solución. La solución se enfrió hasta temperatura ambiente y el compuesto se cristalizó. Se añadieron heptano (30 ml) y THF (10 ml) para formar una suspensión fluida que se filtró. La torta se lavó con THF/heptano (40 ml, 1/1) y se secó a vacío durante 2 horas en un filtro de presión bajo nitrógeno para proporcionar un sólido blanco (7,40 g).
Los espectros de NMR de protón y carbono e IR estaban de acuerdo con el producto deseado como substancialmente un solo enantiómero.
Microanalítica: calculado para C_{18}H_{21}Cl_{2}NO_{6}S, 0,25 C_{4}H_{8}O:
C: 48,73%; H: 4,95%; N: 2,99%; Cl: 15,14%.
encontrado: C: 48,91%; H: 4,95%; N: 2,90%; Cl: 14,95%.
Etapa 4
Preparación de
64
Se cargaron la base libre del producto producido en la Etapa 3 (21,7 g, 0,065 moles), éster N-hidroxisuccinimídico de N-t-Boc-glicina (17,7 g, 0,065 moles) y DMF (200 ml) a un matraz de fondo redondo de 500 ml equipado con una barra de agitación magnética y un burbujeador de nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó bajo nitrógeno a temperatura ambiente durante 3,25 horas y se formaba una solución de color naranja claro. La mezcla de reacción se vertió en acetato de etilo (1,2 l) enfriado con hielo. La solución orgánica se lavó con HCl 1M (250 ml) y a continuación con salmuera (500 ml), se secó (MgSO_{4}) y se concentró bajo vacío casi hasta sequedad para obtener un aceite que subsiguientemente se secó a 50ºC para obtener el producto como un aceite incoloro (28,12 g, 99%). Se prepararon cristales seminales en acetato de etilo/hexanos. El producto (aproximadamente 28 g) se disolvió en acetato de etilo (35 ml) y hexanos (125 ml). La solución se sembró con los cristales seminales y se formó un precipitado. Los sólidos se filtraron y se secaron durante la noche bajo vacío a 55ºC para dar un sólido incoloro (27,0 g, 95%).
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 5
Preparación de
65
La glicinamida protegida con Boc preparada en la Etapa 4 (27,0 g, 0,062 moles) se secó durante la noche sobre P_{2}O_{5} y nódulos de NaOH. El sólido se disolvió en dioxano (40 ml) y la solución se enfrió hasta 0ºC. Se añadió un volumen equivalente de HCl 4N/dioxano (0,062 moles) y la reacción se llevó a cabo durante 2 horas. En este punto la conversión era 80% mediante RPHLC. La mezcla de reacción se concentró a 40ºC hasta una espuma que se trituró con éter (200 ml). El sólido blanco que se formaba se filtró y se secó sobre P_{2}O_{5} para dar el compuesto de éster etílico de glicino-\beta-aminoácido deseado, como una sal de HCl (20,4 g, 88,5% de rendimiento aislado).
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Ejemplo J Preparación de
66
Etapa 1
Preparación de
67
3-Bromo-5-clorosalicilaldehído protegido con MEM (129,42 g, 0,4 moles) preparado de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo I, Etapa 2A. Se substituyó el 3,5-diclorosalicilaldehído por una cantidad equivalente de 3-bromo-5-clorosalicilaldehído, que se cargó a un matraz de fondo redondo de 3 bocas de 2 l equipado con un agitador mecánico, seguido por la adición de THF (640 ml) y (S)-fenilglicinol (54,86 g, 0,4 moles). Después de 30 minutos a 22ºC, se añadió MgSO_{4} (80 g). La mezcla se agitó durante 2 horas a 22ºC y se filtró sobre un filtro fritado grueso. El filtrado se concentró bajo presión reducida para producir un aceite amarillo claro (180,0 g) que contenía la imina deseada. No se realizó purificación adicional y el producto en bruto se usó directamente en la reacción de acoplamiento, Etapa 2.
Microanalítica: calculado para C_{19}H_{21}BrClNO_{4}:
C: 51,54%; H: 4,78%; N: 3,16%; Br: 18,04%; Cl: 8,00%
encontrado: C: 50,22%; H: 4,94%; N: 2,93%; Br: 17,15%; Cl: 7,56%
Etapa 2
Preparación de 
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68 
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En un matraz de fondo redondo de 3 bocas de 5 l equipado con un agitador mecánico, el reactivo del Ejemplo I, Etapa 1 (332,0 g, 0,8 moles) se recogió en NMP (660 ml) bajo nitrógeno. La solución se enfrió a continuación hasta -10ºC. Se preparó una solución de la imina de la Etapa 1 en NMP (320 ml) bajo nitrógeno y a continuación se añadió durante 30 minutos a la mezcla de reacción previa mientras la temperatura se mantenía a -5ºC. La mezcla se agitó durante una hora adicional a -8ºC y a -5ºC durante 2 horas después de que la adición fuera completa y a continuación se enfrió hasta -10ºC. Una mezcla de HCl concentrado/solución saturada de NH_{4}Cl (300 ml/720 ml) se añadió durante 10 minutos. Se añadió MTBE (760 ml) y la mezcla se agitó durante 30 minutos a 23ºC. La agitación se detuvo y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con MTBE (320 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron sucesivamente con NH_{4}Cl acuoso saturado (320 ml), agua DI (320 ml) y salmuera (320 ml). La solución se secó con MgSO_{4} (60 g), se filtró y se concentró para proporcionar un aceite amarillo (221,0 g) que contenía el producto deseado como un solo diastereoisómero según se determinaba mediante NMR de protón.
Microanalítica: calculado para C_{25}H_{33}BrClNO_{6}:
C: 53,72%; H: 5,95%; N: 2,50%; Br: 14,29%; Cl: 6,33%
encontrado: C: 52,11%; H: 6,09%; N: 2,34%; Br: 12,84%; Cl: 6,33%.
Etapa 3
Preparación de 
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69 
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Una solución de éster en bruto, preparado en la Etapa 2 (\sim111 g) en etanol (1500 ml) se cargó bajo una atmósfera de argón a un matraz de fondo redondo de 3 bocas de 3 l equipado con un agitador mecánico. La mezcla de reacción se enfrió hasta 0ºC y se añadió tetraacetato de plomo (88,67 g, 0,2 moles) en una porción. La mezcla de reacción se agitó durante 3 horas a 0ºC y a continuación se añadió a la mezcla de reacción NaOH acuoso al 15% (150 ml) por debajo de 5ºC. El metanol se retiró bajo presión reducida en un rotavapor. Se añadieron otros 150 ml de NaOH acuoso al 15% y la mezcla de reacción se extrajo con acetato de etilo (3 x 300 ml) y se lavó con agua DI (2 x 100 ml) y salmuera (2 x 100 ml) y se secó sobre MgSO_{4} anhidro (30 g). Se filtró a continuación sobre celite y se concentró bajo presión reducida para dar el producto deseado (103 g) como un aceite rojo.
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Etapa 4
Preparación de
70
El compuesto previo se preparó de acuerdo con el procedimiento empleado para el Ejemplo I, Etapa 4 y Etapa 5, substituyendo una cantidad equivalente del producto de la Etapa 3 en el Ejemplo I, Etapa 4. La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Ejemplo K Metodología de la Separación Quiral
Etapa 1
Preparación de
71
Se añadieron CH_{2}Cl_{2} (500 ml) y agua (335 ml) al producto del Ejemplo B, Etapa 3 (50,0 g, 139,2 milimoles) y NaHCO_{3} (33,5 g, 398,3 milimoles). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos. Una solución de cloroformiato de bencilo (38,0 g, 222,8 milimoles) en CH_{2}Cl_{2} (380 ml) se añadió durante 20 minutos con agitación rápida. Después de 50 minutos, la mezcla de reacción se vertió en un embudo separador y la capa orgánica se recogió. La fase acuosa se lavó con CH_{2}Cl_{2} (170 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron a vacío. El sólido gomoso resultante se trituró con hexano y se recogió mediante filtración. El sólido de color canela se secó a vacío para dar el producto racémico deseado (61,2 g, 96% de rendimiento). Este material se sometió a HPLC usando una columna quiral para dar cada enantiómero puro. La columna empleada era una Whelk-O (R,R), tamaño de partícula 10 micras, usando una fase móvil de heptano:etanol 90:10. Se determinó que la pureza óptica era >98% usando HPLC analítica usando condiciones de columna y disolvente similares. La ^{1}H NMR estaba de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 2
72
Se añadió yoduro de trimetilsililo (25,5 g, 127,4 milimoles) en CH_{2}Cl_{2} (100 ml) a través de una cánula a una solución del compuesto obtenido en la Etapa 1 (48,5 g, 106,2 milimoles) en CH_{2}Cl_{2} (450 ml). La solución naranja se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadió gota a gota metanol (20,6 ml, 509,7 milimoles) y la solución se agitó durante 15 minutos. La solución de reacción se concentró a vacío para dar un aceite naranja. El residuo se disolvió en metil-t-butil-éter (500 ml) y se extrajo con HCl 1N (318 ml) y agua (1 x 200 ml, 1 x 100 ml). Los extractos acuosos se lavaron de nuevo con MTBE (100 ml). Se añadió a la solución acuosa NaHCO_{3} sólido (40,1 g, 478 milimoles) en pequeñas porciones. La mezcla acuosa basificada se extrajo con MTBE (1 x 1 l, 2 x 200 ml). La solución orgánica combinada se lavó con salmuera y se concentró a vacío para dar el producto deseado (23,3 g, 68% de rendimiento). La ^{1}H NMR estaba de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 3
Preparación de
73
Se añadió éster N-hidroxisuccinimídico de N-t-Boc-glicina (17,9 g, 65,9 milimoles) a una solución del producto de la Etapa 2 (23,3 g, 72,1 milimoles) en DMF (200 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas. La mezcla se vertió en acetato de etilo (1,2 l) y se lavó con HCl 1M (2 x 250 ml), solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (2 x 250ml) y salmuera (2 x 250 ml). La solución se secó (MgSO_{4}) y se concentró para dar el producto deseado (32,0 g, 100% de rendimiento).
Análisis calculado para C_{18}H_{24}BrClN_{2}O: C, 45,06; H, 5,04; N, 5,84
Encontrado: C, 45,17; H, 5,14; N, 6,12.
La ^{1}H NMR estaba de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 4
74
Se añadió una solución etanólica de HCl (111 ml de una solución 3M, 332,4 milimoles) a una solución del producto de la Etapa 3 (31,9 g, 66,5 milimoles) en etanol absoluto (205 ml). La solución de reacción se calentó a 58ºC durante 30 minutos. La solución se enfrió y se concentró a vacío. El residuo se disolvió en acetato de etilo (250 ml) y se agitó a 0ºC durante 2 horas. Un precipitado blanco se recogió mediante filtración y se lavó con acetato de etilo frío. El sólido se secó a vacío para dar el producto deseado (23,5 g, 85% de rendimiento).
Análisis calculado para C_{13}H_{16}BrClN_{2}O + 1,0 HCl: C, 37,53; H, 4,12; N, 6,73
Encontrado: C, 37,29; H, 4,06; N, 6,68.
La ^{1}H NMR estaba de acuerdo con la estructura deseada.
Ejemplo L Preparación de 
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75 
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Etapa 1
Preparación de 
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76 
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Se añadió carbonato potásico (polvo, secado en horno a 100ºC bajo vacío, 22,1 g, 0,16 moles) a una solución de 3-cloro-5-bromosalicilaldehído (35,0 g, 0,15 moles) en DMF (175 ml) a temperatura ambiente para dar una suspensión de color amarillo brillante. Se añadió a continuación MEMCl (puro, 25,0 g, 0,2 moles) mientras se mantenía la temperatura del baño a 20ºC. La mezcla se agitó a continuación a 22ºC durante 6 horas y se vertió en agua DI (1200 ml) para precipitar el producto. La suspensión se filtró sobre un filtro de presión y la torta se lavó con agua DI (2 x 400 ml) y se seco bajo N_{2}/vacío para proporcionar el producto (46,0 g, 95% de rendimiento) como un sólido blanquecino. ^{1}H NMR (CDCl_{3}, TMS) 3,35 (s, 3H), 3,54 a 3,56 (m, 2H), 3,91 a 3,93 (m, 2H), 5,30 (s, 2H), 7,77 (d, 1H), 7,85 (d, 1H), 10,30 (s, 1H); ^{13}C NMR (CDCl_{3}, TMS) (ppm): 59,05, 70,11, 71,49, 99,50, 117,93, 126,69, 129,78, 132,37, 138,14, 155,12, 188,22. DSC: 48,24ºC (endo 90,51 J/g);
Microanalítica: calculado para C_{11}H_{12}BrClO_{4}:
C: 40,82%; H: 3,74%; Cl: 10,95%; Br: 24,69%;
encontrado: C: 40,64%; H: 3,48%; Cl: 10,99%; Br: 24,67%.
Etapa 2
Preparación de 
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77
El producto de la Etapa 1 (32,35 g, 0,1 moles) se cargó a un matraz de fondo redondo 3N de 500 ml equipado con un agitador mecánico, seguido por la adición de THF (160 ml) y (S)-fenilglicinol (13,71 g, 0,1 moles). Después de 30 minutos a 22ºC, se añadió MgSO_{4} (20 g). La mezcla se agitó durante 1 hora a 22ºC y se filtró sobre un filtro fritado grueso. El filtrado se concentró bajo presión reducida para dar un aceite amarillo claro (48,0 g) que contenía la imina deseada. No se realizó purificación adicional y el producto en bruto se usó directamente en la siguiente etapa de reacción.
Microanalítica: calculado para C_{19}H_{12}BrClNO_{4}:
C: 51,54%; H: 4,78%; N: 3,16%; Br: 18,04%; Cl: 8,00%
encontrado: C: 51,52%; H: 5,02%; N: 2,82%; Br: 16,31%; Cl: 7,61%.
Etapa 3
Preparación de
78
En un matraz de fondo redondo 3N de 5 l equipado con un agitador mecánico, el reactivo del Ejemplo I, Etapa 1 (332,0 g, 0,8 moles) se recogió en NMP (660 ml) bajo nitrógeno. La solución se enfrió a continuación hasta -10ºC. Una solución de la imina producida de la Etapa 2 en NMP (320 ml) se preparó bajo nitrógeno y a continuación se añadió durante 30 minutos a la mezcla de reacción previa mientras la temperatura se mantenía a -5ºC. La mezcla se agitó durante una hora adicional después de que la adición fuera completa y se enfrió hasta -10ºC. Una mezcla de HCl concentrado/solución saturada de NH_{4}Cl (30 ml/720 ml) se añadió durante 10 minutos. Se añadió MTBE (760 ml) y la mezcla se agitó durante 1 hora a 23ºC. La agitación se detuvo y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con MTBE (320 ml). Las dos capas orgánicas se combinaron, se lavaron sucesivamente con una solución saturada de NH_{4}Cl (320 ml), agua DI (320 ml) y salmuera (320 ml). La solución se secó con MgSO_{4} (60 g), se filtró y se concentró para proporcionar un aceite amarillo (228 g) que contenía el producto deseado como un solo diastereoisómero. DSC: 227,54ºC (endo. 61,63 J/g);
Microanalítica: calculado para C_{25}H_{33}BrClNO_{6}:
C: 53,72%; H: 5,95%; N: 2,50%; Br: 14,29%; Cl: 6,33%
encontrado: C: 53,80%; H: 6,45%; N: 2,23%; Br: 12,85%; Cl: 6,12%.
Etapa 4
Preparación de
79
Una solución de éster en bruto producido en la Etapa 3 (\sim111 g) en etanol (1500 ml) se cargó bajo una atmósfera de nitrógeno a un matraz de fondo redondo de 3 bocas de 3 l equipado con un agitador mecánico. La mezcla de reacción se enfrió hasta 0ºC y se añadió en una porción tetraacetato de plomo (88,67 g, 0,2 moles). La mezcla de reacción se agitó durante 3 horas a 0ºC y a continuación se añadió a la mezcla de reacción por debajo de 5ºC NaOH acuoso al 15% (150 ml). El etanol se retiró bajo presión reducida sobre un rotavapor. Se añadieron otros 600 ml de NaOH acuoso al 15% y la mezcla de reacción se extrajo con acetato de etilo (2 x 300 ml), MTBE (2 x 200 ml) y acetato de etilo (2 x 200 ml). Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con agua DI (2 x 100 ml) y salmuera (2 x 100 ml) y se secaron sobre MgSO_{4} anhidro (30 g). La solución se filtró a continuación sobre celita y se concentró bajo presión reducida para dar el producto como un aceite naranja (96 g) que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Microanalítica: calculado para C_{24}H_{29}BrClNO_{5}:
C: 54,71%; H: 5,54%; N: 2,65%; Br: 15,16%; Cl: 6,72%
encontrado: C: 52,12%; H: 5,40%; N: 2,47%; Br: 14,77%; Cl: 6,48%.
Etapa 5
Preparación de
80
El producto en bruto de la Etapa 4 (\sim94 g) se recogió en etanol absoluto (180 ml) y se añadió monohidrato de ácido para-toluenosulfónico (50,0 g, 0,26 moles). La mezcla de reacción se calentó a continuación hasta reflujo durante 8 horas, después de lo cual el disolvente se retiró bajo presión reducida. El sólido residual se recogió en THF (100 ml) y el THF se separó a continuación por arrastre bajo presión reducida. El residuo se disolvió en acetato de etilo (500 ml) y se enfrió hasta \sim5ºC. El sólido se filtró y se lavó con heptano (2 x 50 ml) para dar un sólido blanco. El sólido se secó a continuación al aire para dar el producto deseado como un sólido blanco (38 g) como un isómero simple. ^{1}H NMR (DMSO, TMS) (ppm) 1,12 (t, 3H), 2,29 (s, 3H), 3,0 (m, 2H), 4,05 (q, 2H), 4,88 (t, 1H), 7,11 (d, 2H), 7,48 (d, 2H), 7,55 (d, 1H), 7,68 (1H, d), 8,35 (s ancho, 3H); ^{13}C NMR (DMSO, TMS) (ppm): 13,82, 20,75, 37,13, 45,59, 60,59, 110,63, 122,47, 125,44, 127,87, 128,06, 129,51, 131,59, 137,77, 145,33, 150,14, 168,98; DSC: 69,86ºC (end., 406,5 J/g), 165,72ºC (end. 62,27 J/g), 211,24ºC (exo. 20,56 J/g) [\alpha]^{D}_{25} = +4,2º (c=0,960, MeOH); IR (MIR) (cm-1) 2922, 1726, 1621, 1494, 1471, 1413, 1376, 1324, 1286, 1237, 1207;
Microanalítica: calculado para C_{18}H_{21}BrClNO_{6}S:
C: 43,69%; H: 4,27%; N: 2,83%; Br: 16,15%; Cl: 7,16%; S: 6,48%
encontrado: C: 43,40%; H: 4,24%; N: 2,73%; B3: 16,40%; Cl: 7,20%; S: 6,54%.
Etapa 6
Preparación de
81
El compuesto previo se preparó de acuerdo con los procedimientos esbozados en el Ejemplo I, Etapa 4 y Etapa 5, donde una cantidad equivalente del producto intermedio preparado en la Etapa 5 como la base libre se substituye en el Ejemplo I, Etapa 4.
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Ejemplo M Preparación de
82
Etapa 1
Preparación de 3-yodo-5-clorosalicilaldehído
Se añadió N-yodosuccinimida (144,0 g, 0,641 moles) a una solución de 5-clorosalicilaldehído (100 g, 0,638 moles) en dimetilformamida (400 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 2 días a temperatura ambiente. Se añadió N-yodosuccinimida adicional (20,0 g) y la agitación se continuó durante 2 días adicionales. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (1 l), se lavó con ácido clorhídrico (300 ml, 0,1N), agua (300 ml), tiosulfato sódico (5%, 300 ml), salmuera (300 ml), se secó (MgSO_{4}) y se concentró hasta sequedad para proporcionar el aldehído deseado como un sólido amarillo claro (162 g, 905 de rendimiento).
La MS y la NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 2
Preparación de 2-O-(MEM)-3-yodo-5-clorosalicilaldehído
Se añadió carbonato potásico (41,4 g, 0,30 moles) a una solución de 3-yodo-5-clorosalicilaldehído (8,74 g, 0,30 moles) en DMF (200 ml) a 20ºC. Esto daba como resultado una suspensión amarilla y se añadió MEM-Cl (38,2 g, 0,305 moles) manteniendo la temperatura de reacción. Después de 2 horas, se añadió MEM-Cl adicional (1,5 g). Después de agitar durante 1 hora, la mezcla de reacción se vertió en una mezcla de hielo-agua y se agitó. El precipitado formado se filtró y se secó a vacío para proporcionar el aldehído protegido deseado. Rendimiento: 95 g (85%).
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 3
Preparación de
83
Se añadió (S)-fenilglicinol (15,37 g, 0,112 moles) a una solución de 2-O-(MEM)-3-yodo-5-clorosalicilaldehído (41,5 g, 0,112 moles) en THF (200 ml) a temperatura ambiente. Después de 1 hora de agitación, se añadió MgSO_{4} (16 g) y la agitación se continuó durante 2 horas. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se concentró y se secó a vacío durante 2 horas para obtener la imina intermedia deseada. Un matraz de fondo redondo de 2 bocas se cargó con el reactivo de Reformatsky del Ejemplo I, Etapa 1 (81,8 g, 0,2464 moles) y N-metilpirrolidona (300 ml) y se agitó a -10ºC. Una solución de la imina en N-metilpirrolidona (100 ml) se añadió lentamente manteniendo la temperatura a -10ºC. La mezcla se mantuvo a esta temperatura durante 2 horas y durante 1 hora a -5ºC. Después de enfriar la mezcla de reacción hasta -10ºC, se añadió una solución de HCl concentrado en cloruro amónico saturado (16 ml/200 ml). Se añadió éter etílico (500 ml) y se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. La capa de éter se separó y la capa acuosa se extrajo adicionalmente con éter (300 ml). Las capas de éter combinadas se lavaron con cloruro amónico saturado (200 ml), agua (200 ml), salmuera (200 ml), se secó (MgSO_{4}) y se concentró para proporcionar un aceite (61,0 g, 90% de rendimiento). La ^{1}H NMR indicaba que la estructura deseada era substancialmente un diastereoisómero y la MS estaba de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 4
Preparación de 
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84 
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Una solución del éster en bruto producido en la Etapa 3 (48,85 g, 80,61 milimoles) se disolvió en etanol (500 ml) y se enfrió hasta 0ºc. Se añadió tetraacetato de plomo (35,71 g, 80,61 milimoles). Después de 3 horas, se añadió a la mezcla de reacción solución al 15% de NaOH (73 ml). La mayoría del etanol se retiró bajo presión reducida. Se añadió al residuo una solución al 15% de NaOH (200 ml) y que se extrajo a continuación con éter (400 ml). La capa de éter se lavó con agua (100 ml), salmuera (100 ml), se secó y se concentró para proporcionar un aceite naranja. El aceite se disolvió en etanol (100 ml) y se añadió ácido para-toluenosulfónico (19,9 g). La solución se calentó a reflujo durante 8 horas y se concentró bajo presión reducida. El residuo se diluyó con THF (60 ml) y se calentó a reflujo y se enfrió. El precipitado se filtró, se lavó con hexano/THF (300 ml, 1:1) y se secó para proporcionar el producto
deseado.
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 5
3-(N-BOC-gly)-amino-3-(S)-(5-cloro-2-hidroxi-3-yodo)fenilpropionato de etilo S
Se añadió trietilamina (4,8 ml) a una mezcla de BOC-gly-OSu (9,4 g, 34,51 milimoles) y sal de PTSA de 3-(S)-amino-3-(5-cloro-2-hidroxi-3-yodo)propionato de etilo (17,0 g, 31,38 milimoles) en DMF (200 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente. La DMF se retiró a vacío y el residuo se sometió a reparto entre acetato de etilo (600 ml) y ácido clorhídrico diluido (100 ml). La capa orgánica se lavó con bicarbonato sódico (200 ml) y salmuera (200 ml), se secó (MgSO_{4}) y se concentró para proporcionar el producto deseado como un sólido (14,2 g, 86% de rendimiento).
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 6
Hidrocloruro de 3-(N-gly)-amino-3-(5-cloro-2-hidroxi-3-yodo)fenilpropionato de etilo S
Se añadió dioxano/HCl (4N, 70 ml) a 3-(S)-(N-BOC-gly)-amino-3-(5-cloro-2-hidroxi-3-yodo)fenilpropionato de etilo (37,20 g, 70,62 milimoles) a 0ºC y se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla de reacción se concentró y se concentró una vez más después de la adición de tolueno (100 ml). El residuo obtenido se suspendió en éter, se filtró y se secó para proporcionar el producto deseado como un polvo cristalino (32,0 g, 98% de rendi-
miento).
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Ejemplo N Preparación de 
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85 
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Etapa 1
Preparación de 
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86 
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El compuesto previo se preparó de acuerdo con el Ejemplo I, Etapa 2A, substituyendo el 3,5-diclorosalicilaldehído por una cantidad equivalente de 2-hidroxi-3,5-dibromobenzaldehído.
Rendimiento 88%; Sólido amarillo claro; p.f. 46-47ºC; R_{f} = 0,6 (EtOAc/Hexano 1:1 v/v); ^{1}H-NMR (CDCl_{3}) d 3,37 (s, 3H), 3,56 (m, 2H), 3,92 (m, 2H), 5,29 (s, 2H), 7,91 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 7,94 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 10,27 (s, 1H); FAB-MS m/z 367 (M^{+})
HR-MS calculado para C_{11}H_{12}Br_{2}O 367,9083
encontrado 367,9077
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 2
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87 
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El compuesto previo se preparó usando el procedimiento del Ejemplo I, Etapa 2B y Etapa 2C, substituyendo una cantidad equivalente del compuesto de la Etapa 1 en el Ejemplo I, Etapa 2B.
Rendimiento 90%; Sólido amarillo; p.f. 57-59ºC; R_{f} = 0,46 (EtOAc/Hexano 1:1 v/v); ^{1}H-NMR (CDCl_{3}) d 1,45 (s, 9H); 2,1 (ancho, 1H, intercambiable), 2,51 (d, 1H, J_{1} = 9,9 Hz, J_{2} = 15,3 Hz), 2,66 (d, 1H, J_{1} = 4,2 Hz, J_{2} = 15,3 Hz), 3,02 (ancho, 1H, intercambiable), 3,39 (s, 3H), 3,58-3,62 (m, 4H), 3,81 (m, 1H), 3,93 (m, 2H), 4,63 (dd, 1H, J = 4,2 Hz), 5,15 (s, 2H), 7,17-7,25 (m, 6H), 7,49 (d, 1H); FAB-MS m/z 602 (M+H)
HR-MS calculado para C_{25}H_{34}NBr_{2}O_{6} 602,0753
encontrado 602,0749.
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 3
Preparación de
88
El compuesto previo (sal de p-toluenosulfonato) se preparó de acuerdo con el Ejemplo I, Etapa 3, substituyendo una cantidad equivalente del producto preparado en la Etapa 2 en el Ejemplo I, Etapa 3A. Rendimiento 62%; sólido blanco; ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}) d 1,09 (t, 3H, J = 7,2 Hz), 2,27 (s, 3H), 2,97 (dd, 2H, J_{1} = 3,0 Hz, J_{2} = 7,2 Hz), 4,02 (q, 2H, J = 7,2 Hz), 4,87 (t, 1H, J = 7,2 Hz), 7,08 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 7,45 (m, 3H), 7,57 (d, 1H, J = 2,4 Hz), 8,2 (ancho, 3H); FAB-MS m/z 365 (M+H)
HR-MS calculado para C_{11}H_{14}NBr_{2}O_{3} 365,9340
encontrado 365,9311
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 4
Preparación de
89
El compuesto previo se preparó usando el procedimiento del Ejemplo I, Etapa 4, substituyendo el compuesto preparado en la Etapa 3. El producto intermedio protegido con BOC resultante se convirtió en el compuesto deseado usando el procedimiento del Ejemplo I, Etapa 5.
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Ejemplo P Preparación de
90
El compuesto previo se prepara de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo I, substituyendo el 3,5-diclorosalicilaldehído en el Ejemplo I, Etapa 2A por una cantidad equivalente de 3-yodo-5-bromosalicilaldehído preparado en el Ejemplo F, Etapa 1.
Ejemplo Q Preparación de
91
Etapa 1
92
Se añadió yoduro de trimetilsililo (30,5 g, 152,0 milimoles) en CH_{2}Cl_{2} (100 ml) a través de una cánula a una solución del (R)-(CBZ)-\beta-aminoéster del Ejemplo K, Etapa 1 (55,3 g, 121,0 milimoles) en CH_{2}Cl_{2} (500 ml). La solución de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Se añadió metanol (25,0 ml, 609,2 milimoles) gota a gota y la solución se agitó durante 15 minutos. La solución de reacción se concentró a vacío. El residuo se disolvió en MTBE (550 ml) y se extrajo con HCl 1N (340 ml) y agua (1 x 200 ml, 1 x 150 ml). Los extractos acuosos se lavaron de nuevo con MTBE (150 ml). Se añadió a la solución acuosa NaHCO_{3} sólido (43,0 g, 512 milimoles) en pequeñas porciones. La mezcla acuosa basificada se extrajo con MTBE (1 x 1 l, 2 x 250 ml). La solución orgánica combinada se lavó con salmuera y se concentró a vacío para dar el producto deseado (30,3 g, 76% de rendimiento). La ^{1}H NMR estaba de acuerdo con la estructura propuesta. Análisis Calculado para C_{11}H_{13}BrClNO_{3} + 0,5H_{2}O:
C, 39,84; H, 4,26; N, 4,22
Encontrado: C, 39,49; H, 3,89; N, 4,13 
\newpage
Etapa 2
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93 
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Se añadió éster N-hidroxisuccinimídico de N-t-Boc-glicina (24,7 g, 90,7 milimoles) a una solución de la amina obtenida en la Etapa 1 (29,3 g, 90,7 milimoles) en DMF (250 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 horas. La mezcla se vertió en acetato de etilo (1,2 l) y se lavó con HCl 1M (2 x 250 ml), solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (2 x 250 ml) y salmuera (2 x 250 ml). La solución se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío para dar el producto deseado (43,8 g, 100% de rendimiento). La ^{1}H NMR estaba de acuerdo con la estructura propuesta.
Etapa 3
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94 
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Se añadió una solución etanólica de HCl (105 ml de una solución 4,3 M, 453,5 milimoles) a una solución del producto de la Etapa 2 (43,5 g, 90,7 milimoles) en etanol absoluto (600 ml). La solución de reacción se mantuvo a temperatura ambiente durante 1 hora. La solución se enfrió y se concentró a vacío. El residuo se disolvió en acetato de etilo (300 ml) y se agitó a 0ºC durante 2 horas. Un precipitado blanco se recogió mediante filtración y se lavó con acetato de etilo frío. El sólido se secó a vacío para dar el producto deseado (30,4 g, 81% de rendimiento). La ^{1}H NMR estaba de acuerdo con la estructura propuesta.
Etapa 4
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95 
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Se añadieron IBCF (1,5 ml, 11,4 milimoles) y NMM (1,3 ml, 11,4 milimoles) a una solución del producto del Ejemplo H (3,0 g, 10,3 milimoles) en DMA (10 ml) a -8ºC. La solución de reacción se calentó hasta 8ºC durante 30 minutos. La solución se enfrió hasta -5ºC y se añadió una solución del producto de la Etapa 3 (4,3 g, 10,3 milimoles) en DMA (18 ml) seguido por NMM (1,3 ml, 11,4 milimoles). La mezcla de reacción se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante la noche. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a vacío. El residuo se disolvió en NaOH 2,5N (30 ml) y agua (30 ml). La solución de reacción se mantuvo a temperatura ambiente durante 1,5 horas. El pH se ajustó hasta aproximadamente 5 y el producto se purificó mediante HPLC en fase inversa (H_{2}O/TFA:MeCN 95:5 hasta H_{2}O/TFA:MeCN 80:20) para dar el producto deseado (1,8 g, 22%). Análisis Calculado para C_{22}H_{23}BrClN_{5}O_{7} + 1,6 TFA:
C, 39,45; H, 3,23; N, 9,13
encontrado: C, 39,36; H; 3,32; N, 9,52
La ^{1}H NMR estaba de acuerdo con la estructura propuesta.
Ejemplo R 
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96 
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Etapa 1
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97 
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98 
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Se añadieron CH_{2}Cl_{2} (500 ml) y agua (380 ml) al producto del Ejemplo A, Etapa 2 (50,0 g, 158,9 milimoles) y NaHCO_{3} (38,2 g, 454,5 milimoles). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 10 minutos con desprendimiento vigoroso de gas. Una solución de cloroformiato de bencilo (43,4 g, 222,8 milimoles) en CH_{2}Cl_{2} (435 ml) se añadió durante 20 minutos con agitación rápida. Después de 40 minutos, la mezcla de reacción se vertió en un embudo separador y la solución orgánica se recogió. La fase acuosa se lavó con CH_{2}Cl_{2} (170 ml). La solución orgánica combinada se secó (MgSO_{4}) y se concentró a vacío. El sólido gomoso resultante se trituró con hexano y se recogió mediante filtración. El sólido de color canela se secó a vacío para dar el producto racémico deseado (62,9 g, 96%). Este material se sometió a HPLC en fase inversa usando una columna quiral para dar cada enantiómero puro, A y B. La columna empleada era una Whelk-O (R,R), tamaño de partícula 10 micras, usando una fase móvil de heptano:etanol 90:10. Se determinó que la pureza óptica era >98% usando hplc analítica con un disolvente y unas condiciones similares. El espectro de ^{1}H NMR estaba de acuerdo con la estructura propuesta.
Etapa 2
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99 
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Se añadió yoduro de trimetilsililo (33,7 g, 168,5 milimoles) en CH_{2}Cl_{2} (125 ml) a través de una cánula a una solución del Enantiómero A, Etapa 1 (57,9 g, 140,4 milimoles) en CH_{2}Cl_{2} (600 ml). La solución naranja se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. Se añadió gota a gota metanol (27,3 ml, 674,1 milimoles) y la solución se agitó durante 15 minutos. La solución de reacción se concentró a vacío para dar un aceite naranja. El residuo se disolvió en metil-t-butil-éter (670 ml) y se extrajo con HCl 1M (420 ml) y agua (1 x 230 ml, 1 x 130 ml). Los extractos acuosos se lavaron de nuevo con MTBE (130 ml). Se añadió a la solución acuosa NaHCO_{3} sólido (52,9 g, 630 milimoles) en pequeñas porciones. La mezcla acuosa basificada se extrajo con MTBE (1 x 1,2 l, 2 x 265 ml). La solución orgánica combinada se lavó con salmuera y se concentró a vacío para dar el producto deseado (28,6 g, 73%). El espectro de ^{1}H NMR estaba de acuerdo con la estructura propuesta.
Ejemplo S
100
Se añadió yoduro de trimetilsililo (25,0 g, 123,0 milimoles) en CH_{2}Cl_{2} (80 ml) a través de una cánula a una solución del Enantiómero B, Etapa 1, Ejemplo R (38,5 g, 93,4 milimoles) en CH_{2}Cl_{2} (80 ml). La solución naranja se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Se añadió gota a gota metanol (20,0 ml, 500,0 milimoles) y la solución se agitó durante 20 minutos. La solución de reacción se concentró a vacío para dar un aceite naranja. El residuo se disolvió en éter dietílico (450 ml) y se extrajo con HCl 1M (320 ml) y agua (1 x 200 ml, 1 x 100 ml). Los extractos acuosos se lavaron de nuevo con éter dietílico (100 ml). Se añadió a la solución acuosa NaHCO_{3} sólido (40,1 g, 478 milimoles) en pequeñas porciones. La mezcla acuosa basificada se extrajo con éter dietílico (1 x 1,0 l, 2 x 200 ml). La solución orgánica combinada se lavó con salmuera y se concentró a vacío para dar el producto deseado (20,8 g, 80%). Análisis calculado para C_{11}H_{13}Cl_{2}NO_{3}:
C, 47,50; H, 4,71; N, 5,04
encontrado: C, 47,11; H, 4,66; N, 4,93
Ejemplo 1 Sal de trifluoroacetato de ácido 3-bromo-5-cloro-2-hidroxi-\beta-[[2-[[[3-hidroxi-5-[(1,4,5,6-tetrahidro-5-hidroxipirimidin-2-il)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]bencenopropanoico (\alpha) Preparación de
101
Se añadió EDCl (0,268 g, 0,0014 moles) a la temperatura del baño de hielo a un producto del Ejemplo H (0,4 g, 0,0014 moles), el producto del Ejemplo B (0,58 g, 0,0014 moles), trietilamina (0,142 g, 0,0014 moles), DMAP (17 mg) y DMA anhidra (4 ml). La reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. El producto intermedio de éster resultante se aisló mediante HPLC preparativa en fase inversa. Se añadió LiOH (580 mg, 0,0138 moles) a este éster en H_{2}O (10 ml) y CH_{3}CN (5 ml). Después de agitar a temperatura ambiente durante 1 hora, el pH se disminuyó hasta 2 con TFA y el producto se purificó mediante HPLC preparativa en fase inversa para dar (después de la liofilización) el producto deseado como un sólido blanco (230 mg).
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Ejemplo 2 Preparación de
102
El compuesto previo se preparó de acuerdo con la metodología del Ejemplo 1, substituyendo el producto del Ejemplo B por una cantidad equivalente del producto del Ejemplo A.
El rendimiento, después de la liofilización, era 320 mg como un sólido blanco.
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Ejemplo 3 Preparación de 
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103
El compuesto previo se preparó de acuerdo con la metodología del Ejemplo 1, substituyendo el producto del Ejemplo B por una cantidad equivalente del producto del Ejemplo F. El rendimiento (después de la liofilización) era 180 mg como un sólido blanco.
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Ejemplo 4 Preparación de
104
El compuesto previo se preparó de acuerdo con la metodología del Ejemplo 1, substituyendo el producto del Ejemplo B por una cantidad equivalente del producto del Ejemplo D. El rendimiento (después de la liofilización) era 180 mg como un sólido blanco.
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Ejemplo 5 Preparación de 
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105 
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El compuesto previo se preparó de acuerdo con la metodología del Ejemplo 1, substituyendo el producto del Ejemplo B por una cantidad equivalente del producto del Ejemplo E. El rendimiento (después de la liofilización) era 250 mg como un sólido blanco.
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Ejemplo 6 Preparación de
106
El compuesto previo se preparó de acuerdo con la metodología del Ejemplo 1, substituyendo el producto del Ejemplo B por una cantidad equivalente del producto del Ejemplo C. El rendimiento (después de la liofilización) era 220 mg como un sólido blanco.
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Ejemplo 7 Preparación de 
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107 
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Se añadió lentamente cloroformiato de isobutilo (3,7 g, 0,027 moles) seguido por N-metilmorfolina (2,73 g, 0,027 moles) al producto del Ejemplo H (7,8 g, 0,017 moles) disuelto en DMA anhidra (50 ml) en un matraz secado a la llama bajo N_{2} y a una temperatura del baño de hielo. La solución se agitó a una temperatura del baño de hielo durante 15 minutos. Se añadió a continuación a la mezcla de reacción el producto del Ejemplo L (10,0 g, 0,024 moles) a la temperatura del baño de hielo seguido por N-metilmorfolina (2,43 g, 0,024 moles). La reacción se agitó a continuación a temperatura ambiente durante la noche. El producto intermedio de éster resultante se aisló mediante HPLC preparativa en fase inversa. Se añadió LiOH (10 g, 0,238 moles) al éster en H_{2}O (60 ml) y CH_{3}CN (30 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. El pH se disminuyó a continuación hasta 2 con TFA. El producto se purificó mediante HPLC preparativa en fase inversa para dar (después de la liofilización) el producto deseado como un sólido blanco (9,7 g).
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Ejemplo 8 Monohidrato de monohidrocloruro de ácido 3,5-dicloro-2-hidroxi-\beta-[[2-[[[3-hidroxi-5-[(1,4,5,6-tetrahidro-5-hidroxipirimidin-2-il)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]bencenopropanoico (S) Preparación de
108
Etapa A
Se añade N-metilmorfolina (4,0 ml, 0,0362 moles) al producto del Ejemplo H (9,92 g, 0,345 moles) disuelto en DME anhidro (200 ml). La mezcla de reacción se enfrió hasta -5ºC (baño de sal-hielo). Se añadió durante 1 minuto cloroformiato de isobutilo, IBCF (4,48 ml, 4,713 g, 0,0345 moles) y la mezcla de reacción se agitó a la temperatura del baño de hielo durante 12 minutos. Se añadió a continuación a la mezcla de reacción el producto del Ejemplo I (11,15 g, 0,030 moles) a la temperatura del baño de hielo, seguido por N-metilmorfolina (4,0 ml, 0,0362 moles). La mezcla de reacción se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se llevó a la terminación y a continuación se concentró bajo vacío a 50ºC para dar un residuo oscuro. El residuo se disolvió en acetonitrilo:H_{2}O (aproximadamente 50 ml). El pH se hizo ácido mediante la adición de una pequeña cantidad de TFA. El residuo se puso en una columna C-18 (50 \mu de tamaño de partícula) de 10 x 500 cm y el éster del producto deseado se aisló. (Programa de disolventes: H_{2}O al 100% + TFA al 0,05% hasta H_{2}O + TFA al 0,05%:acetonitrilo + TFA al 0,05% 30:70 durante 1 hora a 100 ml/minuto: el programa de disolventes se inició después de que el frente de disolvente se eluyera. La purificación por RPHPLC preparativa daba como resultado un sólido blanco (10,5 g) después de la liofilización (50%).
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa B
El producto producido en la Etapa A (aproximadamente 11 g) se disolvió en dioxano:agua y el pH de la solución se ajustó hasta aproximadamente 11,5 (pH-metro) mediante la adición de NaOH 2,5N. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente. Periódicamente, el pH se reajustó hasta >11 mediante la adición suplementaria de base. Después de 2-3 horas, la conversión de éster en ácido se consideraba completa mediante RPHPLC. El pH de la mezcla de reacción se ajustó hasta aproximadamente 6 y un aceite viscoso precipitó en solución. El aceite se aisló mediante decantación y se lavó con agua caliente (200 ml). La mezcla acuosa resultante se dejó enfriar y el sólido se recogió mediante filtración para dar el compuesto previo (2,6 g después de la liofilización en solución de HCl). El residuo, que era un aceite viscoso oscuro, se trató con agua caliente para dar durante el enfriamiento un polvo de color canela (4,12 g después de la liofilización en solución de HCl).
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Ejemplo 9 Sal de trifluoroacetato de ácido 3-bromo-5-cloro-2-hidroxi-\beta-[[2-[[[3-hidroxi-5-[(1,4,5,6-tetrahidro-5-hidroxipirimidin-2-il)amino]fenil]carbonil]amino]acetil]amino]bencenopropanoico (S)
Etapa 1
Preparación de
109
Se añadió trietilamina (0,24 g, 2,4 milimoles) a una suspensión del producto del Ejemplo J (1,0 g, 2,4 milimoles), el producto del Ejemplo H (0,75 g, 2,6 milimoles) y 4-dimetilaminopiridina (40 mg) en N,N-dimetilacetamida (10 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos y se añadió hidrocloruro de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (0,60 g, 3,1 milimoles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se concentró a vacío y se purificó mediante HPLC en fase inversa (gradiente de partida H_{2}O/TFA:MeCN 90:10, tiempo de retención 22 minutos) para dar el producto deseado (1,6 g, 52% de rendimiento).
La ^{1}H NMR estaba de acuerdo con la estructura propuesta.
Etapa 2
110
Se añadió hidróxido de litio (148 mg, 6,2 milimoles) a una solución del éster producido en la Etapa 1 (800 mg, 1,2 milimoles) en una solución de MeCN:H_{2}O 1:4 (7 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. Se añadió TFA (0,71 ml, 9,2 milimoles) y la mezcla se purificó mediante HPLC en fase inversa (gradiente de partida H_{2}O/TFA:MeCN 95:5, tiempo de retención 24 minutos) para dar el producto deseado (860 mg, 83% de rendimiento).
Análisis calculado para C_{22}H_{23}BrClN_{5}O_{7} + 1,7 TFA:
C, 39,18; H, 3,20; N, 8,99.
Encontrado: C, 39,11; H, 3,17; N, 9,07.
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Etapa 3
Preparación de la sal de hidrocloruro
El producto de la Etapa 2 se disolvió en un disolvente adecuado (acetonitrilo:agua) y la solución se hizo pasar lentamente a través de una columna de intercambio iónico Bio-Rad AG2-8X (forma de cloruro, malla 200-400, > 5 equivalentes). La liofilización da el producto deseado como una sal de HCl.
Ejemplo 10 Preparación de
111
El compuesto previo se preparó usando el procedimiento del Ejemplo 8 substituyendo el producto del Ejemplo I en el Ejemplo 8, Etapa A, por el producto del Ejemplo N. El producto se aisló mediante RPHPLC preparativa y se liofilizó para dar el producto deseado como una sal de TFA.
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Ejemplo 11 Preparación de
112
El compuesto previo se preparó usando esencialmente los procedimientos del Ejemplo 8 y substituyendo el producto del Ejemplo I en el Ejemplo 8, Etapa A, por el producto del Ejemplo M. El producto se aisló mediante RPHPLC preparativa y se liofilizó para dar el producto deseado como una sal de TFA.
La MS y la ^{1}H NMR estaban de acuerdo con la estructura deseada.
Ejemplo 12 Preparación de
113
El compuesto previo se preparó usando los procedimientos del Ejemplo 8 y substituyendo el producto del Ejemplo I en el Ejemplo 8, Etapa A, por el producto del Ejemplo P. El producto se aisla mediante RPHPLC preparativa y se liofiliza para dar el producto deseado como una sal de TFA.
Ejemplo 13 Preparación de 
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114 
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Etapa 1
Preparación de 2-O-(MEM)-3,5-diyodosalicilaldehído 
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115 
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Se añadió carbonato potásico (18,5 g, 0,134 moles) a una solución de 3,5-diyodosalicilaldehído (50,0 g, 0,134 moles) en DMF (150 ml) a 20ºC. Esto daba como resultado una suspensión amarilla y se añadió MEM-Cl (15,8 ml, 0,134 moles) manteniendo la temperatura de reacción. Después de 2 horas, se añadió MEM-Cl adicional (1,5 g). Después de agitar durante 1 hora más, la mezcla de reacción se vertió en agua de hielo y se agitó. El precipitado formado se filtró y se secó a vacío para proporcionar el aldehído protegido deseado (61 g, 99% de rendimiento). La ^{1}H NMR estaba de acuerdo con el producto deseado.
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Etapa 2
Preparación de 
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116 
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Se añadió (S)-fenilglicinol (17,9 g, 0,13 moles) a una solución de 2-O-(MEM)-3,5-diyodosalicilaldehído (41,5 g, 0,112 moles) en THF (150 ml) a temperatura ambiente. Después de 1 hora de agitación, se añadió MgSO_{4} (20,7 g) y la agitación se continuó durante 2 horas. La mezcla de reacción se filtró y el filtrado se concentró y se secó a vacío durante 2 horas. Un matraz de fondo redondo de 2 bocas se cargó con el reactivo de Reformatsky (96 g, 0,289 moles) y N-metilpirrolidona (250 ml) y se agitó a -10ºC. Una solución de la imina en N-metilpirrolidona (100 ml) se añadió lentamente manteniendo la temperatura a -10ºC. La mezcla se mantuvo a esta temperatura durante 2 horas y durante 1 hora a -5ºC. Después de enfriar la mezcla de reacción hasta -10ºC, se añadió una solución de HCl concentrado en cloruro amónico saturado (16 ml/200 ml). Se añadió éter etílico (500 ml) y la mezcla se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. La capa de éter se separó y la capa acuosa se extrajo adicionalmente con éter (300 ml). Las capas de éter combinadas se lavaron con cloruro amónico saturado (200 ml), agua (200 ml), salmuera (200 ml), se secaron (MgSO_{4}) y se concentraron para proporcionar un aceite (90,0 g, 99% de rendimiento). La NMR indicaba el producto deseado y un diastereoisómero.
Etapa 3
Preparación de 
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117 
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Una solución del éster en bruto de la Etapa 2 (14,0 g, 20,1 milimoles) se disolvió en etanol (100 ml) y se enfrió hasta 0ºC. Se añadió en una porción tetraacetato de plomo (9,20 g, 20,75 milimoles). Después de 3 horas, se añadió a la mezcla de reacción solución al 15% de NaOH (73 ml). La mayoría del etanol se retiró bajo presión reducida. El residuo se añadió a una solución al 15% de NaOH (200 ml) que se extrajo con éter (400 ml). La capa de éter se lavó con agua (100 ml), salmuera (100 ml), se secó y se concentró para proporcionar un aceite naranja. Este se disolvió en etanol (100 ml) y se añadió ácido para-toluenosulfónico (6,08 g). La solución se calentó a reflujo durante 8 horas y se concentró bajo presión reducida. El residuo se diluyó con THF (60 ml), se calentó a reflujo y se enfrió. Durante el almacenamiento no se formaba precipitado. La mezcla de reacción se concentró y se purificó mediante hplc preparativa para proporcionar el aminoácido como su sal de PTSA. El sólido obtenido se disolvió en etanol y se saturó con HCl gaseoso. La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante 6 horas. La mezcla de reacción se concentró para proporcionar la sal de PTSA del aminoácido deseado (12,47 g).
\newpage
Etapa 4
Preparación de 3-(N-BOC-gly)-amino-3-(S)-(3,5-diyodo-2-hidroxifenil)propionato de etilo
118
Se añadió trietilamina (3,8 ml) a una mezcla de BOC-gly-OSu (7,48 g, 27,04 milimoles) y sal de PTSA de 3-(S)-amino-3-(3,5-diyodo-2-hidroxifenil)propionato de etilo (12,47 g, 27,04 milimoles) en DMF (100 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente. La DMF se retiró a vacío y el residuo se sometió a reparto entre acetato de etilo (600 ml) y ácido clorhídrico diluido (100 ml). La capa orgánica se lavó con bicarbonato sódico (200 ml), salmuera (200 ml), se secó (MgSO_{4}) y se concentró para proporcionar el producto deseado como un sólido (17,0 g, 96% de rendimiento). La ^{1}H NMR estaba de acuerdo con el producto deseado.
Etapa 5
Preparación de hidrocloruro de 3-(N-gly)-amino-3-(3,5-diyodo-2-hidroxifenil)propionato de etilo
119
Se añadió 3-(N-BOC-gly)-amino-3-(S)-(3,5-diyodo-2-hidroxifenil)propionato de etilo (17,0 g, 25,97 milimoles) a 0ºC a dioxano/HCl (4N, 40 ml) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. La mezcla de reacción se concentró y se concentró una vez más después de la adición de tolueno (100 ml). El residuo obtenido se secó para proporcionar el producto deseado como un polvo cristalino (8,0 g, 56% de rendimiento). La ^{1}H NMR está de acuerdo con el producto deseado.
Etapa 6
Una solución de ácido m-(5-hidroxipirimidino)hipúrico (3,74 g, 12,98 milimoles) en dimetilacetamida (25 ml) se calentó hasta que todo el material se había disuelto. Este se enfrió a continuación hasta 0ºC y se añadió cloroformiato de isobutilo (1,68 ml) en una porción seguido por N-metilmorfolina (1,45 ml). Después de 10 minutos, se añadió en una porción hidrocloruro de 3-(N-gly)-amino-3-(3,5-diyodo-2-hidroxifenil)propionato de etilo (6,0 g, 10,82 milimoles) seguido por N-metilmorfolina (1,45 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentró, el residuo se disolvió en tetrahidrofurano/agua (1:1, 20 ml) y se cromatografió (fase inversa, agua:acetonitrilo 95:5 durante 60 minutos hasta agua:acetonitrilo 30:70 que contiene 0,1% de TFA). Las fracciones combinadas se concentraron. El residuo se disolvió en acetonitrilo-agua y se añadió hidróxido de litio hasta basicidad. La solución se agitó durante 2 horas. La mezcla de reacción se concentró y se purificó como previamente mediante hplc para proporcionar el ácido deseado como la sal de TFA. La sal de TFA se convirtió en la sal de hidrocloruro correspondiente haciendo pasar a través de una columna de intercambio iónico seguido por liofilización. La ^{1}H NMR estaba de acuerdo con el producto deseado

Claims (6)

1. Un método para la preparación de un \beta-aminoéster quiral de la fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
120
en la que R es alquilo de 1 a 10 átomos de carbono; X e Y son halógenos iguales o diferentes seleccionados del grupo que consiste en Cl, Br e I;
que comprende proteger el grupo amino de un éster de aminoácido racémico de la fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
121
con un grupo protector CBZ para producir un compuesto de aminoácido protegido de la fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
122
someter el compuesto de aminoácido protegido así obtenido a cromatografía quiral para obtener un éster de aminoácido protegido quiral de la fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
123
desproteger el éster de aminoácido protegido quiral así obtenido haciendo reaccionar con yoduro de trimetilsililo en diclorometano; y
aislar el \beta-aminoéster quiral de la fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
124 
\vskip1.000000\baselineskip
2. Un método para la preparación de un \beta-aminoéster quiral de la fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
125
en la que R es alquilo de 1 a 10 átomos de carbono; X e Y son halógenos iguales o diferentes seleccionados del grupo que consiste en Cl, Br e I;
que comprende proteger el grupo amino de un éster de aminoácido racémico de la fórmula
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126
con un grupo protector CBZ para producir un compuesto de aminoácido protegido de la fórmula
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127
someter el compuesto de aminoácido protegido así obtenido a cromatografía quiral para obtener un éster de aminoácido protegido quiral de la fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
128
desproteger el éster de aminoácido protegido quiral así obtenido haciendo reaccionar con yoduro de trimetilsililo en diclorometano; y
aislar el \beta-aminoéster quiral de la fórmula
\vskip1.000000\baselineskip
129
3. Un método para la preparación de un \beta-aminoéster quiral de acuerdo con la reivindicación 1, en el que X representa un átomo de cloro e Y representa un átomo de bromo.
4. Un método para la preparación de un \beta-aminoéster quiral de acuerdo con la reivindicación 2, en el que X representa un átomo de cloro e Y representa un átomo de bromo.
5. Un método para la preparación de un \beta-aminoéster quiral de acuerdo con la reivindicación 1, en el que X e Y representan un átomo de cloro.
6. Un método para la preparación de un \beta-aminoéster quiral de acuerdo con la reivindicación 2, en el que X e Y representan un átomo de cloro.
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