ES2214436T3

ES2214436T3 - Macrolidos.

Info

Publication number: ES2214436T3
Application number: ES01956441T
Authority: ES
Inventors: Gerhard Fleissner; Helmut Hacker; Ernst Kusters; Gerhard Penn
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2000-05-22
Filing date: 2001-05-21
Publication date: 2004-09-16
Anticipated expiration: 2021-05-21
Also published as: JP2007254483A; CN1229381C; US6706727B1; HK1054945A1; EP1289997B1; GB0012383D0; WO2001090110A1; CN1430620A; TR200400723T4; AU2001278428A1; CA2405593A1; CA2405593C; DK1289997T3; JP2003534345A; DE60101739D1; JP4043239B2; PT1289997E; EP1289997A1; DE60101739T2; ATE257481T1

Abstract

Un compuesto de fórmula I en la que R1 es hidroxi en la configuración a; y R2 es metilo y uno de R3 y R4 es etilo y el otro es metilo; o R1 es cloro en la configuración ; y uno de R2, R3 y R4 es etilo y los otros son metilo; en forma libre y, cuando existen tales formas, en forma de sal.

Description

Macrólidos.

La invención se refiere a macrólidos, particularmente a macrólidos de macrolactama. Trata de los compuestos de fórmula I

1

en la que

R_{1} es hidroxi en la configuración \beta; y

R_{2} es metilo y

uno de R_{3} y R_{4} es etilo y el otro es metilo;

o

R_{1} es cloro en la configuración \alpha; y

uno de R_{2}, R_{3} y R_{4} es etilo y los otros son metilo;

en forma libre y, cuando existen tales formas, en forma de sal,

abreviados aquí en lo sucesivo "los compuestos de la invención".

Cuando R_{1} en la fórmula I está en la configuración \alpha, está por encima, y cuando está en la configuración \beta, está por debajo, del plano del papel. R_{1} preferiblemente es cloro en la configuración \alpha. R_{3} o R_{4}, particularmente R_{3}, preferiblemente es etilo.

Los compuestos de la invención se abrevian en lo sucesivo aquí como sigue:

-: cuando R_{1} es hidroxi y

: R_{3} es etilo: 21-etil-ascomicina; o

: R_{4} es etilo: 27-etil-ascomicina;

-: cuando R_{1} es cloro y

: R_{2} es etilo: 19-etil-ASM; o

: R_{3} es etilo: 21-etil-ASM; o

: R_{4} es etilo: 27-etil-ASM;

es decir, son, respectivamente:

-: (1R,9S,12S,13R,14S,17R,18E,21S,23S,24R,25S,27R)-12-[(1E-2-[(1R,3R,4R)-4-hidroxi-3-metoxiciclohexil] -1-metilvinil]-17,21-dietil-1,14-dihidroxi-23,25-dimetoxi-13,19,27-trimetil-11,28-dioxa-4-azatriciclo-[22.3.1. 0 ^{4,9}]octacos-18-eno-2,3,10,16-tetrona;

-: (1R,9S,12S,13R,14S,17R,18E,21S,23S,24R,25S,27R)-12-[(1E-2-[(1R,3R,4R)-4- hidroxi-3-metoxiciclohexil]-1-metilvinil]-17,27-dietil-1,14-dihidroxi-23,25- dimetoxi-13,19,21-trimetil-11,28-dioxa-4-azatriciclo-[22.3.1. 0^{4,9}]octacos- 18-eno-2,3,10,16-tetrona;

-: (1R,9S,12S,13R,14S,17R,18E,21S,23S,24R,25S,27R)-12-[(1E-2-[(1R,3R,4S)-4- cloro-3-metoxiciclohexil]-1-metilvinil]-17,19-dietil-1,14-dihidroxi-23,25- dimetoxi-13,21,27-trimetil-11,28-dioxa-4-azatriciclo-[22.3.1. 0^{4,9}]octacos- 18-eno-2,3,10,16-tetrona;

-: (1R,9S,12S,13R,14S,17R,18E,21S,23S,24R,25S,27R)-12-[(1E-2-[(1R,3R,4S)-4- cloro-3-metoxiciclohexil]-1-metilvinil]-17,21-dietil-1,14-dihidroxi-23,25- dimetoxi-13,19,27-trimetil-11,28-dioxa-4-azatriciclo-[22.3.1. 0^{4,9}]octacos- 18-eno-2,3,10,16-tetrona; y

-: (1R,9S,12S,13R,14S,17R,18E,21S,23S,24R,25S,27R)-12-[(1E-2-[(1R,3R,4S)-4- cloro-3-metoxiciclohexil]-1-metilvinil]-17,27-dietil-1,14-dihidroxi-23,25- dimetoxi-13,19,21-trimetil-11,28-dioxa-4-azatriciclo-[22.3.1. 0^{4,9}]octacos-18-eno-2,3,10,16-tetrona.

La 21-etil-ascomicina y la 27-etil-ascomicina son homólogos superiores de ascomicina. La 19-etil-ASM, la 21-etil-ASM y la 27-etil-ASM son homólogos superiores de pimecrolimus (ASM) (33-epicloro-33-desoxi-ascomicina).

Los compuestos de la invención pueden prepararse mediante un procedimiento que comprende

a): para la preparación de los compuestos de fórmula I que se definen previamente, en la que R_{1} es hidroxi en la configuración \beta, cultivar un microorganismo apropiado y aislar del medio de cultivo resultante los compuestos correspondientes de fórmula I en la que R_{1} es hidroxi en la configuración \beta; o

b): para la preparación de los compuestos de fórmula I que se definen previamente, en la que R_{1} es cloro en la configuración \alpha, reemplazar, por epimerizado, hidroxi por cloro en un compuesto correspondiente de fórmula I en la que R_{1} es hidroxi en la configuración \beta,

y recuperar los compuestos resultantes en forma libre o, cuando existen tales formas, en forma de sal.

El procedimiento de la invención se efectúa de manera convencional.

En la variante a), puede usarse cualquier cepa de microorganismo productora de ascomicina que produzca homólogos superiores de ascomicina, por ejemplo como impurezas, preferiblemente una cepa de Streptomyces hygroscopicus. Tales cepas son conocidas y están disponibles en depósitos públicos. Preferiblemente, se usan cepas que producen cantidades significativas de homólogos superiores de ascomicina, o se eligen condiciones de cultivo que permiten la preparación de cantidades aumentadas de homólogos superiores de ascomicina. Tales cepas son conocidas y fácilmente accesibles, tales como la subespecie de Streptomyces hygroscopicus, ascomyceticus (por ejemplo ATCC 14891, ATCC 53855, ATCC 55087, ATCC 55276, ATCC 55558, DSM 5085), Streptomyces tsukubaensis Nº 9993 (FERM BP-927), la subespecie de Streptomyces hygroscopicus yakushimaensis Nº 7238 (FERM BP-928, NRRL 18488); o mutantes naturales o artificiales de las mismas, y las condiciones de cultivo para la producción aumentada de homólogos superiores son conocidas o pueden determinarse fácilmente de manera convencional a partir de las mismas. Convenientemente, pueden crearse cepas mutantes apropiadas que exhiben producción aumentada de homólogos superiores, o seleccionarse, de manera convencional, o puede efectuarse el cultivo bajo condiciones modificadas, tales como con una concentración incrementada del precursor de 4 átomos de carbono butirato sódico en el medio de cultivo.

La variante b) es una reacción de substitución por epimerizado simultánea o concomitante. Se efectúa, por ejemplo, según se describe en EP 427680. Se efectúa preferiblemente en un disolvente inerte tal como tetrahidrofurano o tolueno. Preferiblemente, la reacción se efectúa con tetraclorometano o N-clorosuccinimida en presencia de trifenilfosina, convenientemente en un medio alcalino tal como colidina.

Los compuestos resultantes de la invención pueden aislarse del medio de cultivo o reacción y purificarse de acuerdo con métodos conocidos. Sin embargo, se ha encontrado que, sorprendentemente, el uso de una fase estacionaria quiral, tal como Kromasil®, durante la purificación cromatográfica puede facilitar mucho el aislamiento de, en particular, los compuestos de la invención en los que R_{1} es cloro.

Los materiales de partida y los compuestos intermedios son conocidos o pueden prepararse de acuerdo con métodos conocidos o análogamente a métodos conocidos o análogamente según se describe en los Ejemplos.

Los siguientes Ejemplos ilustran la invención. No son limitativos. Todas las temperaturas son en grados Celsius. Los compuestos están en forma libre a no ser que se especifique otra cosa. Se usan las siguientes abreviaturas:

HPLC	cromatografía líquida de alta presión
I.D.	diámetro interno
THF	tetrahidrofurano
tlc	cromatografía en capa fina
%	porcentaje p/p

Ejemplo 1 21-Etil-ascomicina y 27-etil-ascomicina

[variante del procedimiento a)]

a): Se prepara ascomicina en bruto a escala semiindustrial (kg) mediante la fermentación de una cepa de Streptomyces (ATCC 14891), según se describe en el Ejemplo 4 de EP 184162, y se purifica parcialmente mediante extracción en contracorriente (Res. Discl. 402 [Octubre de 1997] 725-726). Se obtiene un producto en bruto, que contiene aproximadamente 35% de ascomicina, 15% de 21-etil-ascomicina y 10% de 27-etil-ascomicina. Este material se purifica adicionalmente en una etapa de filtración en gel de sílice usando acetato de isopropilo/n-heptano 7/3 (v/v) como un eluyente para retirar ascomicina. El producto en bruto adicional resultante obtenido contiene aproximadamente 25% de 21-etil- ascomicina y 15% de 27-etil- ascomicina.

b): Se disuelve 1 g de 21-etil- ascomicina en bruto de a) previo en 3,5 ml de acetato de isopropilo/heptano 7/3 (v/v) y la solución de alimentación se inyecta en una columna preparativa (36 cm x 5 cm de I.D.) que contiene 300 g de gel de sílice [Kromasil® 100-5 SIL (Eka Nobel)] como fase estacionaria. La mezcla se eluye con acetato de isopropilo/heptano 7/3 (v/v) como fase móvil con un caudal de 100 ml/minuto a temperatura ambiente. La detección UV se produce a 245 nm. Los derivados de ascomicina se eluyen después de 34,5 minutos y se fraccionan en intervalos de 1,1 minutos. Se recoge 21-etil-ascomicina en las fracciones 13-28. Las fracciones reunidas se recogen y se evaporan hasta sequedad a 40ºC bajo vacío. Quince pasos preparativos dan más de 1 g del compuesto del título 21-etil- ascomicina:

: FAB-MS: fragmentos en orden decreciente: 812 [M+Li]^{-}, 602, 794, 425;

: 2D-^{1}H-NMR: 21-etilo = 1,21 ppm, 1,50 ppm (metileno) y 0,87 ppm (metilo).

c): Se trata 1 g de 27-etil-ascomicina en bruto de a) previo según se describe bajo b) previamente, excepto que se recogen las fracciones coeluyentes 1-7. Las fracciones reunidas se recogen y se evaporan hasta sequedad a 40ºC bajo vacío. Se disuelven 379 mg del residuo resultante en 30 ml de n-hexano/etanol/metanol 90/5/5 (v/v) y la solución de alimentación se inyecta en una columna preparativa (40 cm x 10 cm de I.D.) que contiene 2,0 kg de tris(3,5-dimetilfenilcarbamato) de amilosa (revestido sobre gel de sílice) (Chiralpak-AD®). La elución se efectúa con n-hexano/etanol/metanol 90/5/5 (v/v/v) como fase móvil con un caudal de 150 ml/minuto a temperatura ambiente. La detección UV se produce a 210 nm. La 27-etil-ascomicina se eluye entre 60 y 80 minutos. Las fracciones que contienen 27-etil-ascomicina se recogen y se evaporan hasta sequedad a 40ºC bajo vacío, dando 120 mg del compuesto del título 27-etil-ascomicina:

: FAB-MS: fragmentos en orden decreciente: 828,6 [M+Na]^{-}, 508,3, 4323,0,563,6;

: 2D-^{1}H-NMR: 27-etilo = 1,59 ppm, 1,19 ppm (metileno) y 0,92 ppm (metilo).

Ejemplo 2 19-Etil-ASM

[variante del procedimiento b)]

a): Se prepara ASM a escala semiindustrial (kg) usando el procedimiento descrito en EP 427680, Ejemplo 66a, partiendo de ascomicina en bruto, y se somete a purificación cromatográfica sobre gel de sílice a 40-45ºC usando heptano/terc-butil-metil- éter (saturado con agua)/isopropanol 200/50/8 (v/v) como un eluyente. Se obtiene una fracción lateral del paso cromatográfico que tiene un contenido de 56% de 19-etil-ASM en bruto.

b): Se efectúa tcl preparativa sobre 17 mg de producto en bruto de a) previo, disueltos en 1 ml de cloruro de metileno y cargados en una placa de tlc (Merck 5715, 20 x 20 cm de I.D.). El cromatograma se desarrolla usando una mezcla de pentano/isopropanol 9/1 (v/v) como fase móvil dentro de una distancia de 18 cm. La zona que contiene 19-etil-ASM (Rf = 0,35) se retira de la placa de tlc y se lava con 2 ml de pentano. El producto se extrae con 5 ml de acetonitrilo y se seca a 60ºC bajo vacío, dando 4,4 mg de compuesto en bruto con una pureza de \geq 90%:

: FAB-MS: fragmentos en orden decreciente: 830 [M+Li]^{+}, 602, 313, 578, 788;

: 2D-^{1}H -NMR: 19-etil = 2,17 ppm, 1,82 ppm (metileno) y 0,98 ppm (metilo)].

Ejemplo 3 19-Etil-ASM

[variante del procedimiento b)]

El compuesto del título se obtiene análogamente según se describe en el Ejemplo 4 más adelante aquí, partiendo de 19-etil-ascomicina, es decir (1R,9S,12S,13R,14S,17R,18E,21S,23S,24R,25S,27R)-12-[(1E-2-[(1R,3R,4R)-4-hidroxi- 3-metoxiciclohexil]-1-metilvinil]-17,19-dietil-1,14-dihidroxi-23,25-dimetboxi- 13,21,27-trimetil-11,28-dioxa-4-azatriciclo-[22.3.1.0^{4,9}]octacos-18-eno- 2,3,10,16-tetrona (B. Junker y otros, Biotechnol. Bioeng. 59 [1998] 595-604):

FAB-MS: fragmentos en orden decreciente: 830 [M+Li]^{-}, 602, 313, 578, 788;

2D-^{1}H-NMR: 19-etilo = 2,17 ppm, 1,82 ppm (metileno) y 0,98 ppm (metilo)].

Ejemplo 4 21-Etil-ASM

[variante del procedimiento b)]

a): Se disuelven dos veces 0,733 g de 21-etil-ascomicina [véase el Ejemplo 1b) previamente] y se evaporan a 50ºC bajo vacío. En un matraz de 25 ml separado, se disuelven 0,298 g de trifenilfosfina en 4,7 ml de tetrahidrofurano. Se añaden 0,152 g de N-clorosuccinimida y la suspensión se agita durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se añaden a esa suspensión 0,202 ml de s-colidina, seguido por la solución de la 21-etil-ascomicina secada previa en 3,9 ml de tetrahidrofurano. La solución se calienta finalmente hasta 50ºC durante 1,5 h y a continuación se enfría hasta temperatura ambiente. Se añaden 16,6 ml de ciclohexano y la fase orgánica se extrae con 0,18 g de ácido cítrico en una mezcla de 3,5 ml de agua y 3,5 ml de metanol. La fase orgánica se extrae de nuevo dos veces con 7 ml de metanol/agua 1/1 (v/v) y la fase acuosa combinada se extrae de nuevo con 10 ml de ciclohexano. El disolvente se evapora a 50ºC dando 0,79 g de 21- etil-ASM en bruto.

b): Se disuelven 0,1 g de producto en bruto de a) previo en 1,0 ml de etanol y la solución de alimentación se inyecta en una columna preparativa (25 cm x 2 cm de I.D.) que contiene 55 g de gel de sílice en fase inversa [Kromasil® RP-18 (5 \mum)] como fase estacionaria. El producto se eluye con disolvente B al 70% [disolvente A = agua/ácido fosfórico 1000/1 (v/v); disolvente B = acetonitrilo/terc-butil-metil-éter 825/175 (v/v)] como fase móvil con un caudal de 15 ml/minuto a 60ºC. La detección UV se produce a 210 nm. Se eluye 21-etil-ASM entre 11,5 minutos y 12,0 minutos. Los disolventes orgánicos de la fracción de productos se evaporan a 50ºC bajo vacío y la fase acuosa restante se extrae dos veces con 15 ml de cloruro de metileno cada una. El cloruro de metileno se evapora finalmente a 50ºC bajo vacío, dando 30 mg de compuesto del titulo:

: FAB-MS: fragmentos en orden decreciente: 830 [M+Li]^{-}, 397, 149;

: 2D-^{1}H-NMR: 21-etilo = 1,30 ppm, 1,20 ppm (metileno) y 0,90 ppm (metilo).

Ejemplo 5 27-Etil-ASM

[variante del procedimiento b)]

a): Se disuelven 135 mg de 27-etil-ascomicina [véase el Ejemplo 1c) previamente] en 1,4 ml de tolueno y el disolvente se separa por destilación a 60ºC/80-20 milibares. El residuo se disuelve en 0,36 ml de THF (< 0,01% de H_{2}O). En un matraz separado, 41,4 mg de trifenilfosfina y 21,1 mg de N-clorosuccinimida en 0,4 ml de THF se agitan a 20ºC durante 0,5 horas, a continuación se añaden 27,4 mg de s-colidina, seguido por la adición de la solución de 27-etil-ascomicina, que se enjuaga con 30 \mul de THF. La solución se calienta hasta 50-53ºC durante 2 horas y se realiza un análisis de HPLC. Cuando la reacción se completa, la mezcla se enfría hasta 30ºC y se añaden 1,25 ml de ciclohexano, seguido por 26,1 mg de ácido cítrico anhidro disuelto en 0,53 ml de agua/metanol 1/1 (v/v). La capa superior se separa y se lava con 2 x 0,3 ml de agua/metanol 1/1 (v/v). Las capas acuosas se extraen con 2 x 0,3 ml de ciclohexano. Las fases orgánicas combinadas se evaporan a 50ºC/80-20 milibares para dar 109 mg de 27-etil-ASM en bruto (resina marrón).

b): Se disuelven 0,052 g de producto en bruto de a) en 1,0 ml de acetonitrilo y la solución de alimentación se inyecta en una columna preparativa (25 cm x 2 cm de I.D.) que contiene 55 g de gel de sílice en fase inversa [Kromasil® RP-18 (5 \mum)] como fase estacionaria. El producto se eluye con acetonitrilo/agua/terc-butil-metil-éter 700/300/50 (v/v/v) como fase móvil con un caudal de 15 ml/minuto a 60ºC. La detección UV se produce a 210 nm. La 27-etil-ASM se eluye a entre 15,0 minutos y 25,0 minutos. Los disolventes orgánicos de la fracción de productos se evaporan, dando 12,4 mg de compuesto del título:

: FAB-MS: fragmentos en orden decreciente: 846,7 [M+Na]^{+}, 810,5, 433;

: 2D-^{1}H-NMR: 27-etilo = 1,20 ppm, 1,20 ppm (metileno) y 0,90 ppm (metilo).

Los compuestos de la invención se han detectado inicialmente como impurezas durante el aumento a escala en la preparación de, respectivamente, ascomicina y ASM. Después de su identificación y caracterización, se encontró que, inesperadamente, poseen actividad farmacológica sorprendentemente fuerte significativa. Por lo tanto están indicados para usar como productos farmacéuticos. En particular, poseen actividad inmunosupresora y antihiperproliferativa, y antiinflamatoria.

La actividad antiinflamatoria puede determinarse, por ejemplo, en el siguiente método de prueba:

Dermatitis de contacto alérgica inducida por oxazolona (ratón)

[F.M. Dietrich y R. Hess, Int. Arch. Allergy 38 (1970) 246-259]:

Los compuestos de la invención inhiben el hinchamiento inflamatorio en de aproximadamente 10% a aproximadamente 50% durante una sola aplicación tópica como una solución 0,1 mM y en de aproximadamente 40% a aproximadamente 60% como una solución 1 mM.

La actividad inmunosupresora y antihiperproliferativa puede determinarse, por ejemplo, en el siguiente método de prueba:

Estimulación mediada por alérgenos de un clon de células T cooperadoras mediante células dendríticas

[Br. J. Dermatol. 141 (1999) 264-273]:

Los compuestos de la invención inhiben la estimulación (IC_{50}) en una dosificación de aproximadamente 0,1 nM a aproximadamente 10 nM, particularmente de aproximadamente 0,1 nM a aproximadamente 1 nM en lo que se refiere a los homólogos de ascomicina, y de aproximadamente 1 nM a aproximadamente 10 nM en lo que se refiere a los homólogos de ASM.

Esta actividad se evidencia adicionalmente en una prueba adicional con el clon de células T cooperadoras previo y células dendríticas derivadas de monocitos:

El clon de células T (TCC) cooperadoras humanas específico del antígeno CD4^{+} se establece mediante cultivo con dilución limitativa (Van Reijsen T.C. y otros, J. Allergy Clin. Immunol. 90 [1992] 184-193). El TCC reconoce un péptido derivado del alérgeno principal Der p1 del ácaro del polvo doméstico Dermatophagoides pteronyssinus(Dpt) en asociación con la molécula de restricción del MHC clase II HLA-DPw4 (Baselmanns P.J. y otros, Human Immunol. 61 [2000] 789-798). Para obtener números de células suficientes con propósitos de ensayo, el TCC se expande in vitro mediante activación con anticuerpo monoclonal anti-CD3 inmovilizado (Leu-4, Becton Dickinson, San José, CA, USA) y cultivo en medio completo complementado con rIL-2 y rhIL-4 (50 U/ml de cada una) (Van Reijsen y otros, previamente).

Se generan células dendríticas derivadas de monocitos humanos (M-DC) a partir de monocitos purificados cultivando el medio de cultivo RPMI 1640 a una densidad celular de 7 x 10^{5} células/ml. El medio de cultivo se complementa con 15% de FCS y rh-GM-CSF (300 U/ml) y rh-IL-4 (100 U/ml). El día 7 de cultivo, 90-95% de las células expresan el fenotipo de M-DC según se verifica mediante citometría de flujo y se usan para la estimulación específica para el antígeno del TCC, lo que es usado al menos 14 días después de la última activación por el antígeno o mAb anti-CD3 para asegurar un estado de reposo de las células. Para la estimulación específica para el antígeno, las M-DC se incuban durante la noche (al menos 12 horas) en medio de cultivo que contiene 50 \mug/ml del extracto de Dpt (ARTU Biologicals NV, Lelystad, Países Bajos). El contenido del alérgeno principal Der p1 usado es aproximadamente 18,5 \mug/ml de extracto de Dpt. Las M-DC se lavan dos veces y se añaden partes alícuotas de 50 \mul del número final de M-DC a 5 x 10^{4} células T por pocillo en 100 \mul de medio, dando una relación de M-DC/células T de 1/50. Inmediatamente después, se añaden partes alícuotas de 50 \mul de una concentración final de cuatro veces de compuesto de prueba. Cada muestra se prueba por cuadruplicado. El compuesto de prueba se disuelve en etanol para proporcionar una solución de reserva de 1 mM y se diluye 1/1000 en el medio de cultivo completo que también se usa para preparar la dilución del compuesto de prueba final. La proliferación de células T se determina sometiendo a impulsos con 1 \muCi/20 \mul/pocillo de (metil)-^{3}H-timidina (Amersham, Reino Unido) durante las 16 horas finales de un período de cultivo de 4 días.

Se han obtenido los siguientes valores de IC_{50}:

TABLA

Compuesto	IC_{50} (nM)
21-etil-ascomicina	0,33
27-etil-ascomicina	0,88
19-etil-ASM	6,8
21-etil-ASM	1,6
27-etil-ASM	4,6

Los compuestos de la invención en forma libre y, cuando existen tales formas, en forma de sal farmacéuticamente aceptable están indicados por lo tanto como agentes antiinflamatorios y agentes inmunosupresores y antiproliferativos para usar en la prevención y el tratamiento de estados inflamatorios y de estados que requieren inmunosupresión, tales como:

a): el tratamiento de enfermedades inflamatorias e hiperproliferativas de la piel, tales como psoriasis, dermatitis atópica, dermatitis de contacto y otras dermatosis eczematosas, dermatitis seborreica, liquen plano, pénfigo, penfigoide bulloso, epidermolisis bullosa, vasculitis, eritemas, eosinofilias cutáneas, lupus eritematoso y acné;

b): la prevención y el tratamiento de enfermedades alérgicas tales como asma extrínseca, rinitis, conjuntivitis, eczema atópico, urticaria/angioderma, alergia a alimentos/fármacos y anafilaxis;

c): la prevención y el tratamiento de

-: la resistencia en situaciones de trasplante de órganos o tejidos, por ejemplo de corazón, riñón, hígado, médula ósea y piel,

-: enfermedad del injerto contra el huésped, tal como después de injertos de médula ósea,

-: enfermedades autoinmunes tales como artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, tiroiditis de Hashimoto, esclerosis múltiple, miastenia grave, diabetes tipo I y uveitis,

-: manifestaciones cutáneas de trastornos mediados inmunológicamente;

-: enfermedades intestinales; y

d): alopecia areata.

Los compuestos pueden administrarse sistémicamente o tópicamente. Para las indicaciones previas la dosificación apropiada variará, por supuesto, dependiendo de, por ejemplo, el huésped, el modo de administración y la naturaleza y la gravedad del estado que se trata. Sin embargo, en general, se indica que se obtienen resultados satisfactorios sistémicamente con dosificaciones diarias de aproximadamente 0,15 mg/kg a aproximadamente 1,5 mg/kg de peso corporal del animal. Una dosis diaria indicada en los mamíferos superiores está en el intervalo de aproximadamente 0,01 mg a aproximadamente 100 mg, administrados convenientemente, por ejemplo, en dosis divididas de hasta cuatro veces al día o en forma retardada. Para uso tópico se obtienen resultados satisfactorios con la administración local de una concentración de aproximadamente 1% a aproximadamente 3% en peso de substancia activa varias veces al día, por ejemplo de 2 a 5 veces al día. Ejemplos de formas galénicas indicadas son lociones, geles, cremas, pulverizaciones y soluciones.

Los compuestos de la invención pueden administrarse mediante cualquier ruta convencional, en particular enteralmente, por ejemplo oralmente, por ejemplo en la forma de tabletas o cápsulas, o tópicamente, por ejemplo en la forma de lociones, geles, cremas, pulverizaciones, soluciones oftálmicas o nasales o aerosoles para el tratamiento local de la piel y las membranas mucosas, por ejemplo el ojo, el tracto respiratorio, la vagina, la cavidad oral y nasal.

Las composiciones farmacéuticas, por ejemplo para aplicación tópica, que comprenden un compuesto de la invención en forma libre o en las que tales formas existen en forma de sal farmacéuticamente aceptable en asociación con al menos un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable pueden fabricarse de manera convencional mezclando con un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. Las formas de dosificación unitaria contienen, por ejemplo, de aproximadamente 0,0025 mg a aproximadamente 50 mg de substancia activa.

La administración tópica es, por ejemplo, a la piel. Una forma adicional de administración tópica es al ojo, por ejemplo para la prevención o el tratamiento de estados del ojo mediados inmunitariamente, tales como: enfermedades autoinmunes, por ejemplo uveitis, queratoplastia y queratitis crónica; estados alérgicos, por ejemplo conjuntivitis vernal; estados inflamatorios y trasplantes corneales; y glaucoma; mediante la administración tópica a la superficie del ojo de un compuesto de la invención en forma libre o cuando tales formas existen en forma de sal farmacéuticamente aceptable, en un vehículo oftálmico farmacéuticamente aceptable.

El vehículo oftálmico es tal que el compuesto se mantiene en contacto con la superficie ocular durante un período de tiempo suficiente para permitir que el compuesto penetre en las regiones corneales e internas del ojo, por ejemplo la cámara anterior, la cámara posterior, el cuerpo vítreo, el humor acuoso, el humor vítreo, la córnea, el iris/cuerpo ciliar, el cristalino, el coroides/la retina y la esclerótica. El vehículo oftálmico farmacéuticamente aceptable puede ser, por ejemplo, una pomada, un aceite vegetal o un material encapsulante.

Aunque la actividad antiinflamatoria e inmunsupresora y antiproliferativa es la principal actividad de los compuestos de la invención, también poseen algún grado de actividad para incrementar la sensibilidad a, o para incrementar la eficacia de, la terapia con fármacos quimioterapéuticos. Esta actividad puede determinarse, por ejemplo, de acuerdo con los métodos de prueba descritos en EP 360760.

Los compuestos de la invención están indicados por lo tanto para usar para invertir la resistencia a fármacos quimioterapéuticos de diversos tipos, por ejemplo adquirida e innata, o para incrementar la sensibilidad a la terapia con fármacos administrados, por ejemplo, como un medio para reducir los niveles de dosificación quimioterapéutica regulares, por ejemplo en el caso de terapia con fármacos antineoplásticos o citostáticos, como un medio para disminuir la toxicidad global de fármacos y, más especialmente, como un medio para invertir o reducir la resistencia, incluyendo resistencia tanto inherente como adquirida, a la quimioterapia.

La invención trata así del uso de un compuesto de la invención en forma libre o, cuando existen tales formas, en forma de sal farmacéuticamente aceptable como un producto farmacéutico; un compuesto tal de la invención para usar como un producto farmacéutico; el uso de tal compuesto de la invención para la preparación de un medicamento para la prevención o el tratamiento de un estado inflamatorio o de un estado que requiere inmunosupresión; un procedimiento para la preparación de una composición farmacéutica que comprende mezclar tal compuesto de la invención junto con al menos un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable; y un método de prevención o tratamiento de estados inflamatorios y de estados que requieren inmunosupresión, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de tal compuesto de la invención a un sujeto que necesite tal tratamiento.

Los compuestos de la invención pueden administrarse como el único agente activo o, convenientemente, en combinación o asociación con uno o más agentes farmacéuticamente activos y compatibles adicionales, por ejemplo macrólidos de macrolactama, preferiblemente derivados de ascomicina tales como la propia ascomicina o ASM.

La invención trata así de composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la invención en forma libre o, cuando existen tales formas, en forma de sal farmacéuticamente aceptable, junto con al menos un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable, opcionalmente en combinación o asociación con uno o más agentes farmacéuticamente activos y compatibles adicionales, por ejemplo macrólidos de macrolactama, preferiblemente derivados de ascomicina tales como la propia ascomicina o ASM. El compuesto de la invención puede estar presente en tal combinación o asociación en cantidades ampliamente variables, por ejemplo de aproximadamente 99% a aproximadamente 1% o de aproximadamente 90% a aproximadamente 10% generalmente, o, cuando está en combinación o asociación con un macrólido de macrolactama, preferiblemente con un derivado de ascomicina, especialmente la propia ascomicina o ASM, particularmente ASM, en vista de los perfiles farmacológicos similares, de aproximadamente 99,99% a aproximadamente 0,01%, por ejemplo de aproximadamente 99,9% a aproximadamente 0,1%, o de aproximadamente 95% a aproximadamente 5%, en peso de los agentes activos respectivos.

Derivados de ascomicina adecuados son, por ejemplo, como los descritos en EP 184162, EP 315978, EP 323042, EP 423714, EP 427680, EP 465426, EP 474126, WO 91/13889, WO 91/19495, EP 484936, EP 523088, EP 532089, EP 569337, EP 626385, WO 93/5059 y WO 97/8182; en particular:

-: la propia ascomicina;

-: tacrolimus (FK506; Prograf^{R});

-: imidazolilmetoxiascomicina (WO 97/8182 en el Ejemplo 1 y como compuesto de fórmula I);

-: 32-O-(1-hidroxietilindol-5-il)ascomicina (L-732531) (Transplantation 65 [1998] 10-18, 18-26, en la página 11, Figura 1; y

-: (32-desoxi,32-epi-N1-tetrazolil)ascomicina (ABT-281) (J. Invest. Dermatol. 12 [1999] 729-738, en la página 730, Figura 1);

preferiblemente:

-: {1R,5Z,9S,12S-[1E-(1R,3R,4R)],13R,14S,17R,18E,21S,23S,24R,25S,27R}-17- etil-1,14-dihidroxi-12-[2-(4- hidroxi-3-metoxiciclohexil)-1-metilvinil]-23,25-dimetoxi-13,19,21,27-tetrametil-11,28-dioxa-4- azatriciclo [22.3.1.0^{4,9}]octacos-5,18-dieno-2,3,10,16-tetrona (Ejemplo 8 en EP 626385);

-: {1E-(1R,3R,4R)]1R,4S,5R,6S,9R,10E,13S,15S,16R,17S,19S,20S}-9-etil-6,16,20-trihidroxi-4-[2-(4-hidroxi-3-metoxiciclohexil)-1-metilvinil]-15,17-dimetoxi-5,11,13,19-tetrametil-3-oxa-22-azatriciclo[18.6.1.0^{1,22}] heptacos-10-eno- 2,8,21,27-tetrona (Ejemplo 6d y 71 en EP 569337); y especialmente:

-: pimecrolimus (ASM) (Ejemplo 66a en EP 427680; 33-epicloro,33- desoxiascomicina).

Claims

1. Un compuesto de fórmula I

2

en la que

R_{1} es hidroxi en la configuración \beta; y

R_{2} es metilo y

uno de R_{3} y R_{4} es etilo y el otro es metilo;

o

R_{1} es cloro en la configuración \alpha; y

uno de R_{2}, R_{3} y R_{4} es etilo y los otros son metilo;

en forma libre y, cuando existen tales formas, en forma de sal.

2. Un procedimiento para la preparación de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende

a): para la preparación de los compuestos de fórmula I que se definen en la reivindicación 1, en los que R_{1} es hidroxi en la configuración \beta,

: cultivar un microorganismo apropiado y aislar del medio de cultivo resultante los compuestos correspondientes de fórmula I que se definen en la reivindicación 1 en los que R_{1} es hidroxi en la configuración \beta; o

b): para la preparación de los compuestos de fórmula I que se definen en la reivindicación 1 en los que R_{1} es cloro en la configuración \alpha,

: reemplazar por epimerizado hidroxi por cloro en un compuesto correspondiente de fórmula I en la que R_{1} es hidroxi en la configuración \beta,

y recuperar el compuesto resultante en forma libre o, cuando existen tales formas, en forma de sal.

3. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en forma libre o, cuando existen tales formas, en forma de sal farmacéuticamente aceptable, junto con al menos un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable.

4. Una composición de acuerdo con la reivindicación 3, en la que el compuesto está en combinación o asociación con un agente farmacéuticamente activo y compatible adicional.

5. Una composición de acuerdo con la reivindicación 4, en la que el compuesto está en combinación o asociación con ASM.

6. Un procedimiento para la preparación de una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 3, que comprende mezclar el compuesto con al menos un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable.

7. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en forma libre o, cuando existen tales formas, en forma de sal farmacéuticamente aceptable, para usar como un producto farmacéutico.

8. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en forma libre o, cuando existen tales formas, en forma de sal farmacéuticamente aceptable, para usar en la prevención o el tratamiento de estados inflamatorios o de estados que requieren inmunosupresión.

9. El uso de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en forma libre o, cuando existen tales formas, en forma de sal farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para la prevención o el tratamiento de estados inflamatorios o de estados que requieren inmunosupresión.