ES2199239T3 - Frasco de cultivo microbiano y metodo para fabricar y usar este envase. - Google Patents
Frasco de cultivo microbiano y metodo para fabricar y usar este envase.Info
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Abstract
UN CONTENEDOR (10) ADAPTADO PARA SU USO EN LA DETECCION DE MICROORGANISMOS AEROBICOS EN UNA MUESTRA INCLUYE UN INSERTO NO TOXICO (22) DISPUESTO DENTRO DEL CONTENEDOR (10) PARA EL SOPORTE DE MICROORGANISMOS ADHERIDOS AL MISMO Y PARA INCREMENTAR LA EXPOSICION MICROBIANA A MEDIOS DE CRECIMIENTO OXIGENADO PARA AUMENTAR EL METABOLISMO MICROBIANO. UN METODO PARA FABRICAR EL CONTENEDOR (10) INCLUYE LOS PASOS DE INTRODUCIR UN INSERTO NO TOXICO (22) EN EL CONTENEDOR (10) Y AÑADIR MEDIOS DE CRECIMIENTO (14). TAMBIEN UN METODO PARA DETECTAR EL CRECIMIENTO MICROBIOLOGICO AEROBICO EN UN CONTENEDOR DE MUESTRA SELLADO (10) QUE TIENE LA ZONA SUPERIOR VACIA (16) Y QUE CONTIENE UNA MUESTRA QUE PUEDE CONTENER UN MICROORGANISMO DESCONOCIDO QUE INCLUYE LOS PASOS DE PROPORCIONAR UN CONTENEDOR DE MUESTRA SELLADO (10) QUE TIENE LA ZONA SUPERIOR VACIA (16) Y UN INSERTO NO TOXICO (22) SATURADO CON MEDIOS DE CRECIMIENTO MICROBIOLOGICO (24), INOCULANDO EL INSERTO (22) EN EL CONTENEDOR DE MUESTRA SELLADO (10), Y CONTROLANDO EL METABOLISMO EN EL CONTENEDOR (10) COMO UN INDICADOR DE LA PRESENCIA DE MICROOORGANISMOS PARA DETECTAR MICROORGANISMOS EN LA MUESTRA.
Description
Frasco de cultivo microbiano y método para
fabricar y usar este envase.
La presente invención en general se refiere a un
método de monitorización de la presencia de microorganismos
aerobios en una muestra de fluidos.
El cultivo de fluidos corporales como sangre,
esputo, y orina es de uso habitual en medicina para establecer de
la presencia o ausencia de microorganismos.
Habitualmente, la muestra de fluido corporal que
se va a estudiar se obtiene del paciente. A continuación, la
muestra se analiza para determinar la presencia o ausencia de
microorganismos. Habitualmente se emplean varios métodos para
determinar la presencia o ausencia de microorganismos. La técnica
más habitual implica la preparación de un cultivo por inoculación en
un medio de crecimiento de una muestra del fluido corporal e
incubación de dicho cultivo. Después de una incubación suficiente,
se realiza la inspección visual por un técnico para observar y
evaluar la presencia o ausencia del crecimiento bacteriano.
Es práctica estándar en microbiología detectar la
presencia y evaluar el número de microorganismos en las muestras.
Las muestras médicas en estudio incluyen fluidos corporales como
sangre, líquido cefalorraquídeo y orina. Las muestras industriales
incluyen productos farmacéuticos, alimentos y otras muestras en las
que se deben estudiar la presencia o niveles de microorganismos.
Todas estas muestras se cultivan introduciéndolas en un recipiente
con un medio de crecimiento estéril. El medio de crecimiento
contiene los nutrientes apropiados para soportar el crecimiento de
los microorganismos buscados.
La presencia microbiana se detecta a través de
cambios en el medio líquido o en la atmósfera que cubre el
espécimen después de un periodo de tiempo. Por ejemplo, en la
Patente de los Estados Unidos N° 4.812.656 de Ahnell y cols. se usa
un medio con sustrato marcado con carbono 13. Después de someter la
muestra a condiciones que conducen al crecimiento microbiano, se
determina la relación entre el carbono 13 y el carbono 12 en la
atmósfera gaseosa. En la Patente de los Estados Unidos N° 5.232.839
de Eden y cols., asignada al asignatario de la presente invención
se revela un método para la detección oportuna del crecimiento
microbiológico en un envase sellado monitorizando el consumo de
oxígeno en el espacio de cabeza o la producción de CO_{2} o
cualquier otro gas como indicación del metabolismo microbiano. En
la Patente de los Estados Unidos N° 5.217.876 se describe un sensor
de CO_{2} presente en el fondo de un vial, que detecta la
presencia de microorganismos por la detección de los cambios de pH
del espécimen o por la producción de CO_{2}. En la Patente de los
Estados Unidos N° 5.047.331 de Swaine y cols. se revela un frasco
de hemocultivo con un envase estéril y el medio de crecimiento con
nutriente en el que se monitoriza el aumento de la presión en el
espacio de cabeza.
Otros métodos conocidos de medición de la
contaminación microbiana de las muestras incluye la medición de los
mínimos cambios de temperatura, pH, turbidez, color,
bioluminescencia e impedancia. Todos estos métodos determinan la
contaminación microbiana determinando los productos microbianos
finales o metabolitos.
Con fines diagnósticos, es una ventaja determinar
con la mayor rapidez posible si los microorganismos están presentes
o no en la muestra clínica. El diagnóstico y el comienzo de una
terapia farmacológica eficaz mejoran en gran medida por la rápida
evaluación de la presencia o ausencia de microorganismos en una
muestra clínica. Por tanto, si se optimiza el crecimiento del
microorganismo se acelera el proceso diagnóstico. Para conseguir
unas tasas de crecimiento óptimas de microorganismos aerobios, se
puede aumentar la concentración del oxígeno disuelto en el cultivo.
En otras palabras, si se impide que el medio de cultivo se
convierta en anaerobio se potencia el crecimiento de los microbios
aerobios.
El oxígeno tiene una baja solubilidad en agua y
una mala difusión a través de la interfase
aire-agua limita conseguir una concentración
alcanzable de oxígeno en el medio de cultivo. Se puede usar la
agitación, sacudida o paso de burbujas de aire a través de un
vástago poroso para aumentar el contenido de oxígeno disuelto en el
cultivo. La agitación, sacudida o paso de burbujas de aire a través
del cultivo aumenta la cantidad de oxígeno en el medio de
crecimiento y, por lo tanto, aumenta la oxigenación de las bacterias
aerobias mejorando su metabolismo y crecimiento a la vez que se
previene que el medio de cultivo se convierta en anaerobio. Para
conseguir unas mejores concentraciones de oxígeno en el medio de
crecimiento se requiere agitar los frascos durante el crecimiento.
(Patente de los Estados Unidos N° 5.047.331 y Patente de los
Estados Unidos N° 5.217.876). No obstante, la agitación o sacudida
de un cultivo requiere la ayuda de aparatos más complejos y caros,
dando la posibilidad de la rotura o contaminación del frasco o tubo
de cultivo, y puede causar salpicaduras del cultivo. Además, el
aparato de agitación es habitualmente caro y propenso a
dificultades o fallos mecánicos.
Otro método más para la detección de la presencia
de bacterias que consumen oxígeno se revela en la Patente de los
EE.UU. N° 4.152.213 de Anhell. En la Patente de los EE.UU. N°
4.152.213 se revela la introducción de una muestra de material
objeto de la detección en un envase, el sellado del envase que
tiene la muestra en su interior, la agitación de la muestra para
aumentar la exposición microbiana al medio oxigenado y la
monitorización de la producción del vacío (que indica la presencia
de bacterias, ya que el oxígeno presente en el envase es utilizado
por ellas, si están presentes). No obstante, tal método supone una
desventaja, ya que la agitación se realiza habitualmente utilizando
aparatos costosos que habitualmente son propensos a fallos.
Por tanto, sería una ventaja proporcionar medios
para aumentar la oxigenación de cualquier bacteria presente al
aumentar la cantidad de oxígeno disponible para el microorganismo
en el medio, aumentando con ello la oxigenación de las bacterias
aerobias y potenciando su metabolismo y velocidad de crecimiento
sin necesidad de agitar, sacudir o pasar burbujas de aire a través
del medio.
En la patente FR 403203A se revela un aparato
dispuesto para cultivar, desarrollar, preservar, envasar y
despachar microorganismos aerobios o anaerobios conocidos
específicos. No obstante, en la patente FR 403203A no se revela un
método de detección del crecimiento aerobio de microorganismos
dentro de un receptáculo.
Por tanto, de acuerdo con la presente invención
se proporciona un método de detección del crecimiento aerobio de
microorganismos, cuyo método consiste en:
proporcionar un envase esterilizable de la
muestra (10), que tiene un espacio de cabeza (16);
proporcionar un inserto no tóxico, poroso e
hidratable (22) dentro del envase;
proporcionar un medio de crecimiento microbiano
(24) dentro de dicho envase de forma que dicho inserto (22) está
hidratado en el interior;
el sellado de dicho envase (10) con dicho inserto
(22), hidratado por dicho medio de crecimiento (24), junto con una
atmósfera de oxígeno en dicho envase (10);
introducción aséptica de una muestra de fluido en
dicho envase; conexión del envase a un dispositivo de detección de
la presión en el espacio de cabeza;
y monitorización de los cambios de presión en el
espacio de cabeza por la cual se pueden obtener indicios del
metabolismo microbiano dentro de dicho envase sellado (10) como
indicador de la presencia de microorganismos en dicha muestra, en
la cual el envase y el inserto se mantienen en un estado
sustancialmente estático a la vez que se están monitorizando los
cambios de presión en el espacio de cabeza.
Se prefiere que el envase y los contenidos del
envase se esterilicen antes de la introducción aséptica de la
muestra de fluido en el envase.
Habitualmente, el inserto es de esponja, algodón,
fibra de vidrio, cuentas de vidrio, plásticos, material resinoso,
cuentas de esponja, o un material en espuma.
Otras ventajas de la presente invención se
apreciarán fácilmente a medida que se entienda mejor haciendo
referencia a la siguiente descripción detallada cuando se considera
en relación con los dibujos acompañantes, en los cuales:
la Figura 1 es una visión en perspectiva del
frasco de cultivo microbiológico usado en el método de detección
del crecimiento aerobio de organismos de acuerdo con la presente
invención;
la Figura 2a es una ilustración gráfica de un
cambio de presión en una muestra con M. tuberculosis en una
atmósfera con un 20% de oxígeno sin el inserto de esponja;
la Figura 2b es una ilustración gráfica del
cambio de presión en una muestra con M. tuberculosis en una
atmósfera con un 20% de oxígeno con el inserto de esponja;
la Figura 3a es una ilustración gráfica del
cambio de presión en una muestra con M. tuberculosis en una
atmósfera con un 40% de oxígeno sin el inserto de esponja; y
la Figura 3b es una ilustración gráfica del
cambio de presión en una muestra con M. tuberculosis en una
atmósfera con un 40% de oxígeno con el inserto de esponja;
la Figura 4a es una ilustración gráfica del
cambio de presión en una muestra con C. neoformans en una
atmósfera con un 20% de oxígeno sin el inserto de esponja;
la Figura 4b es una ilustración gráfica del
cambio de presión en una muestra con C. neoformans en una
atmósfera con un 20% de oxígeno con el inserto de esponja;
la Figura 5a es una ilustración gráfica del
cambio de presión en una muestra con C. neoformans en una
atmósfera con un 40% de oxígeno sin el inserto de esponja; y
la Figura 5b es una ilustración gráfica del
cambio de presión en una muestra con C. neoformans en una
atmósfera con un 40% de oxígeno con el inserto de esponja.
La Figura 1 muestra un envase 10 para usarse en
el método de detección de microorganismos aerobios de acuerdo con
la presente invención como Mycobacterium tuberculosis,
Mycobacterium avium y hongos u otros microorganismos capaces de
crecer dentro de un ambiente oxigenado. El envase o vial 10
consiste en un frasco que tiene una cámara interna 12 que tiene una
superficie inferior 14, un espacio de cabeza 16, una tapa 18 con un
tapón de goma elástico 20, y un inserto no tóxico 22 hidratado con
medio de promoción de crecimiento bacteriano 24 dispuesto dentro de
la cámara interna 12 para una mejor dispersión de los
microorganismos y para aumentar la exposición microbiana al medio
oxigenado 24 y mejorar el metabolismo microbiano. Además, el envase
tiene una porción de cuello 26 y una porción de la joroba 28.
El envase 10 puede estar fabricado con cualquier
material adecuado como vidrio o plástico. Los plásticos adecuados
incluyen los poliestirenos, polipropilenos y policarbonatos.
Evidentemente, cualquier material adecuado debe ser no tóxico para
los microorganismos y debe poder ser esterilizado por los medios
adecuados como un autoclave o irradiación. Preferentemente, el
envase 10 estará fabricado con un material transparente para
facilitar no sólo la detección visual de los microorganismos sino
también permitirá que el técnico o usuario confirme visualmente,
antes de la introducción de una muestra, como un fluido corporal,
que el envase 10 está libre de contaminación.
El inserto no tóxico 22 se dispone dentro de la
cámara interna 12 del envase 10. En la realización preferida, el
inserto está elaborado con un material muy poroso que aumenta en
gran medida la superficie de exposición microbiana al medio de
cultivo oxigenado 24. El aumento de la exposición microbiana al
medio de cultivo oxigenado es una característica fundamental del
inserto no tóxico 22. Al aumentar la exposición al medio oxigenado
de esta forma no es necesaria la agitación del envase. En otras
palabras, el inserto 22 proporciona la suficiente oxigenación del
medio de crecimiento 24 para promover y mantener la proliferación
microbiana sin necesidad de otros métodos de oxigenación
suplementaria.
En la realización preferida, el inserto no tóxico
22 se ha elaborado con una esponja. Una esponja es un material
ideal como medio del inserto 22 porque su alta porosidad
proporciona una mayor oxigenación del medio de crecimiento. La gran
superficie que proporciona la porosidad de la esponja permite el
mejor intercambio de oxígeno entre el aire y el medio de crecimiento
24. Otros materiales para el inserto incluyen algodón; fibra de
vidrio; cuentas de vidrio, plástico (material resinoso) y cuentas
de esponja y plásticos porosos Porex^{TM} (elaborados de
polietileno, polipropileno, fluoruro de polivinilideno, acetato de
etileno-vinilo, estirenoacrilonitrilo, etc.). Debe
señalarse que sea cual sea el material seleccionado para servir como
inserto 22, el material debe ser no tóxico para los
microorganismos, es decir, el material debe ser esencialmente
inerte y no afectar al crecimiento microbiano.
Cuando se hidrata con suficiente medio de cultivo
24, el inserto no tóxico 22 ocupa entre el 25-80%
aproximadamente del volumen de la cámara interna 12. Al ocupar un
volumen en este rango de volúmenes dentro de la cámara interna 12,
se optimizan las condiciones de crecimiento dentro del envase 10.
En otras palabras, la relación entre el medio de cultivo 24, la
superficie y el oxígeno es óptima cuando el inserto hidratado 22
ocupa un volumen del envase 10 dentro del rango expuesto
anteriormente y, por tanto, se aumenta el metabolismo de los
microorganismos. Como determinados microorganismos aerobios crecen
mejor suspendidos en la interfase líquido- aire, en la cual el
O_{2} está más disponible, el inserto 22 mejora en gran medida
la oxigenación del medio de cultivo microbiano y, en consecuencia,
la oxigenación de los microorganismos aerobios. Otro medio que
aumenta la disponibilidad del oxígeno consiste en aumentar la
concentración de oxígeno en el espacio de cabeza.
En esencia, el inserto 22 establece una atmósfera
con condiciones similares a las encontradas en los pulmones. Al
establecerse una atmósfera de "pulmón artificial" se permite
el crecimiento in vitro de microorganismos, como M.
tuberculosis y M. avium, que eran previamente difíciles de
cultivar in vitro. Este efecto también se observa con los
microorganismos que necesitan oxígeno, como los hongos. Este
microentorno expone a los microorganismos a un medio de cultivo muy
oxigenado 24 que favorece y apoya el crecimiento microbiano.
El medio de crecimiento microbiano 24 comprende
todos los nutrientes requeridos para el crecimiento del
microorganismo buscado. Por ejemplo, el medio de crecimiento
microbiológico como el material comercializado con la marca
Middlebrook 7H9 se usa para el crecimiento de Mycobacterium
sp. Los expertos en el tema entienden que el medio de
crecimiento microbiológico 24 se elige según el microorganismo en
particular que se va a seleccionar. En otras palabras, el medio de
crecimiento microbiano en particular 24 se selecciona sobre la base
de requisitos bioquímicos o nutricionales del microorganismo que se
desea cultivar.
Además del medio de cultivo líquido, el medio de
crecimiento microbiano 24 puede incluir otros aditivos selectivos o
aditivos diferenciales como antibióticos. Estos aditivos
adicionales se pueden usar para seleccionar la presencia o
diferenciar microorganismos en particular según características
específicas y exclusivas, es decir, la resistencia o sensibilidad a
antibióticos o los requisitos de crecimiento.
El inserto no tóxico no expandido 22 es
preferentemente un material de esponja deshidratado o comprimido.
Además, el inserto no tóxico 22 puede ser un material no espumoso o
no expandido como poliuretano, que se inserta en el envase 10. Una
vez dentro del envase 10, el inserto no tóxico no expandido 22 se
expande por medios conocidos en el campo de la formación de espumas.
También se pueden añadir a los envases cuentas de vidrio o plástico
(resina), así como cuentas de esponja. Todos los materiales de
inserto sirven para el objetivo de aumentar la interfase del medio
con el oxígeno, permitiendo así que el oxígeno esté más disponible
para los microorganismos.
Cuando se usa espuma para el inserto, la
expansión del inserto no tóxico no expandido 22 dentro del envase
10 incluye el paso de rehidratar el material de esponja con el
medio de cultivo microbiano 24 como el medio Middlebrook 7H9 u otro
medio de cultivo adecuado. Por tanto, tras la expansión, todo el
inserto 22 se hidrata con el medio proporcionando así un medio
homogéneo promotor del crecimiento a través de todo el material.
El material capaz de formar una espuma se puede
introducir dentro de un frasco seguido por la adición del medio. Es
fundamental que el material usado para el inserto 22 no sea tóxico
para los microorganismos según se ha descrito más arriba.
En el método de acuerdo con la invención el
inserto no tóxico 22 saturado con el medio de crecimiento
microbiológico 24. El inserto 22 situado dentro de un envase de la
muestra sellado 10 se inocula con una muestra, como un fluido
corporal, en la que se va a analizar la presencia o ausencia de
microorganismos. El envase sellado de la muestra 10 con el inserto
22 inoculado se monitoriza en busca de signos de metabolismo
microbiano.
El envase sellado de la muestra 10 con el inserto
22 saturado con medio de crecimiento microbiológico se puede
proporcionar en una forma estéril lista para su uso. Además, el
envase sellado de la muestra 10 con el inserto 22 se puede obtener
en una forma en la que se proporciona un envase estéril sellado 10
que tiene un inserto deshidratado 22 y el usuario añade
asépticamente su propio medio de crecimiento microbiológico
específico o preferido 24 en el envase sellado 10 a través del
tapón de goma 20.
La inoculación del inserto 22 dentro del envase
10 se realiza en general inyectando una muestra, como fluido
corporal mediante una jeringa y aguja estériles. La aguja se
introduce perforando el tapón de goma elástica 20 y los contenidos
de la jeringa se inyectan en el inserto poroso 22.
En envase inoculado 10 se monitoriza a
continuación en busca de indicios del metabolismo microbiano, a
saber, un cambio de presión en el espacio de cabeza del envase 10
en función de la velocidad de los cambios de presión en el espacio
de cabeza.
Debe señalarse que la presente invención no se
limita a la detección de microorganismos en el fluido corporal. Se
pueden inocular en el envase 10 varios tipos de muestras, como
productos alimenticios u otras muestras industriales comprobadas
mediante procedimientos bien conocidos en este campo.
Los siguientes ejemplos ilustran la preparación,
uso y utilidad de la presente invención.
Los envases con material de esponja hidratado con
una cantidad de caldo de cultivo Middlebrook 7H9 suficiente para
humedecer completamente la esponja (aproximadamente 30 ml) se
esterilizaron mediante autoclave. El material de esponja ocupó
aproximadamente el 80% del volumen del envase. Las muestras con 2,0
x 10^{2} UFC/ml (unidades formadoras de colonias/mililitro) de
Mycobacterium tuberculosis H37RV se inocularon en los
envases. En los envases inoculados se encajó un conector ESP (Difco
Laboratories, Inc.) y se conectó con una máquina ESP (dispositivo
de detección de la presión en el espacio de cabeza, Difco
Laboratories, Inc.) y se incubaron estáticamente a 35°C. La
cantidad inicial de oxígeno en el espacio de cabeza fue del 20%. Un
control experimental se analizó junto con el envase experimental y
se varió en que en que no contenía el material de esponja.
Con respecto a las Figuras 2a y 2b, después de
doscientas diez (210) horas de monitorización del cambio de la
presión en el espacio de cabeza, el envase experimental con el
inserto de material de esponja (véase la Figura 2b) mostró una
señal mucho mejor y más rápida indicando la presencia de un
microorganismo que en el envase de control (véase la Figura 2a). El
envase experimental mostró una relación señal-ruido
más definida que el envase de control, es decir, el punto en el que
la detección era posible era mucho más definido en el envase
experimental que en el envase de control. Esto indica que incluso
en ausencia de agitación, la exposición de los microorganismos al
medio oxigenado mejora utilizando el inserto no tóxico.
Los envases con material de esponja hidratado con
una cantidad de caldo de cultivo Middlebrook 7H9 suficiente para
humedecer completamente una esponja (aproximadamente 30 ml) se
esterilizaron mediante autoclave. El material de esponja ocupó
aproximadamente el 80% del volumen del envase. Las muestras con 2,0
x 10^{2} UFC/ml (unidades formadoras de colonias/mililitro) de
Mycobacterium tuberculosis H37RV se inocularon en los
envases. En los envases inoculados se encajó un conector ESP (Difco
Laboratories, Inc.) y se conectó con una máquina ESP (dispositivo
de detección de la presión en el espacio de cabeza, Difco
Laboratories, Inc.) y se incubaron estáticamente a 35°C. La
cantidad inicial de oxígeno en el espacio de cabeza fue del 40%. Un
control experimental se analizó junto con el envase experimental y
se varió en que en que no contenía el material de esponja.
Con respecto a las Figuras 3a y 3b, después de
doscientos treinta (230) horas de monitorización del cambio de la
presión en el espacio de cabeza, el envase experimental con el
inserto de material de esponja (véase la Figura 3b) mostró una
señal mucho mejor y más rápida indicando la presencia de un
microorganismo que en el envase de control (véase la Figura 3a). El
envase experimental mostró una relación señal-ruido
más definida que el envase de control, es decir, el punto en el que
la detección era posible era mucho más definido en el envase
experimental. Estos resultados también indican también que el
crecimiento en una concentración más alta de oxígeno da unos
resultados más rápidos y diferenciados, es decir, una relación
señal- ruido más diferenciada que indica la detección de la
presencia de microorganismos y también indica un metabolismo
microbiano mejorado.
Los envases con material de esponja hidratado con
una cantidad de medio ESP suficiente para humedecer completamente
la esponja (aproximadamente 30 ml) se esterilizaron mediante
autoclave. El material de esponja ocupó aproximadamente el 80% del
volumen del envase. Las muestras con 0,6 UFC/ml (unidades
formadoras de colonias/mililitro) de Cryptococcus neoformans
ATCC 14116 se inocularon en los envases. En los envases
inoculados se encajó un conector ESP (Difco Laboratories, Inc.) y se
conectaron con una máquina ESP (dispositivo de detección de la
presión en el espacio de cabeza, Difco Laboratorios, Inc.) y se
incubaron estáticamente a 35°C. La cantidad inicial de oxígeno en
el frasco en el espacio de cabeza fue del 20%. Un control
experimental se analizó junto con el envase experimental y se varió
en que no contenía el material de esponja.
Con respecto a las Figuras 4a y 4b, después de
cincuenta y cuatro (54) horas de monitorización del cambio de la
presión en el espacio de cabeza, el envase experimental con el
inserto de material de esponja (véase la Figura 4b) mostró una
señal mucho mejor y más rápida, indicando la presencia de un
microorganismo, que el envase de control (Figura 4a). El envase
experimental mostró una relación señal-ruido más
definida que el envase de control, es decir, el punto en el que la
detección era posible era mucho más definido en el envase
experimental que en el envase de control. Esto indica que incluso en
ausencia de agitación, la exposición de los microorganismos al
medio oxigenado mejora utilizando el inserto no tóxico.
Los envases con material de esponja hidratado con
una cantidad de medio aerobio ESP suficiente para humedecer
completamente la esponja (aproximadamente 30 ml) se esterilizaron
mediante el autoclave. El material de esponja ocupó aproximadamente
el 80% del volumen del envase. Las muestras con 0,6 UFC/ml
(unidades formadoras de colonias/mililitro) de Cryptococcus
neoformans ATCC 14116 se inocularon en los envases. En los
envases inoculados se encajó un conector ESP (Difco Laboratorios,
Inc.) y se conectaron con una máquina ESP (dispositivo de detección
de la presión en el espacio de cabeza, Difco Laboratorios, Inc.) y
se incubaron sin agitación a 35° C. La cantidad inicial de oxígeno
en el espacio de cabeza fue del 40%. Un control experimental se
analizó junto con el envase experimental y se varió en que no
contenía el material de esponja.
Con respecto a las Figuras 5a y 5b, después de
cincuenta y dos (52) horas de monitorización del cambio de la
presión en el espacio de cabeza, el envase experimental con el
material inserto de esponja (véase la Figura 5b) mostró una señal
mucho mejor y más rápida, indicando la presencia de un
microorganismo, que el envase de control (véase la Figura 5a). El
envase experimental mostró una relación señal-ruido
más definida que el envase de control, es decir, el punto en el que
la detección era posible era mucho más definido en el envase
experimental. Estos resultados también indican que el crecimiento
en concentraciones más altas de oxígeno da unos resultados más
rápidos y más diferenciados, es decir, una relación
señal-ruido más definida que indica la detección de
la presencia de microorganismos y también indica el metabolismo
microbiano mejorado.
La invención se ha descrito de forma ilustrativa,
y se debe entender que la terminología que se ha usado tiene como
intención la naturaleza descriptiva de las palabras y no limita su
ámbito de aplicación.
Evidentemente, son posibles muchas modificaciones
y variaciones de la presente invención en vista de las enseñanzas
mencionadas. Por tanto, se debe entender que dentro del ámbito de
las reivindicaciones anexas, cuyos numerales de referencia son
meramente convencionales y no son limitadores en modo alguno, la
invención puede practicarse de otros modos a los descritos
específicamente.
Claims (3)
1. Un método de detección del crecimiento
aerobio de microorganismos, cuyo método consiste en:
proporcionar un envase esterilizable de la
muestra (10), que tiene un espacio de cabeza (16);
proporcionar un inserto no tóxico, poroso e
hidratable (22) dentro del envase;
proporcionar un medio de crecimiento microbiano
(24) dentro de dicho envase de forma que dicho inserto (22) está
hidratado en el interior;
el sellado de dicho envase (10) con dicho inserto
(22), hidratado por dicho medio de crecimiento (24), junto con una
atmósfera de oxígeno en dicho envase (10);
introducción aséptica de una muestra de fluido en
dicho envase;
conexión del envase a un dispositivo de detección
de la presión en el espacio de cabeza;
y monitorización de los cambios de presión en el
espacio de cabeza de manera que se pueden obtener indicios del
metabolismo microbiano dentro de dicho envase sellado (10) como
indicador de la presencia de microorganismos en dicha muestra, en
la cual dicho envase y el inserto se mantienen en un estado
estático a la vez que se están monitorizando los cambios de presión
en el espacio de cabeza.
2. Un método de acuerdo con la reivindicación 1,
caracterizado porque dicho envase y los contenidos de dicho
envase se esterilizan antes de la introducción aséptica de la
muestra de fluido en el envase
3. Un método de acuerdo con cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, caracterizado porque dicho
inserto (22) es una esponja, algodón, fibra de vidrio, cuentas de
vidrio, plásticos, material resinoso, cuentas de esponja, o un
material en espuma.
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|---|---|---|---|---|
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| US7071005B1 (en) * | 1998-08-24 | 2006-07-04 | Centrus International, Inc. | Method and device for concentrating selected groups of microorganisms |
| FR2786782B1 (fr) * | 1998-12-04 | 2001-02-23 | Biomerieux Sa | Procede de detection de micro-organismes et support utilisable dans un tel procede |
| US7144496B2 (en) * | 2000-11-02 | 2006-12-05 | Pall Corporation | Biological fluid analysis device |
| US6395537B1 (en) * | 2001-08-04 | 2002-05-28 | Ruth F. Eden | Double container device and method for detecting and enumerating microorganisms in a sample |
| GB0206275D0 (en) * | 2002-03-16 | 2002-05-01 | Bactest Ltd | Method and apparatus for the non-invasive monitoring of gas exchange by biological material |
| AU2008220791A1 (en) * | 2007-02-28 | 2008-09-04 | Cinvention Ag | High surface cultivation system with surface increasing substrate |
| BRPI0808049A2 (pt) * | 2007-02-28 | 2014-06-24 | Cinv Ag | Sistema de cultivo de alta superfície com enchedor |
| US9012209B2 (en) * | 2008-01-17 | 2015-04-21 | Neogen Corporation | CO2 optical sensor for detection and enumeration of microorganisms |
| EP2658989A4 (en) * | 2010-12-28 | 2014-05-28 | Eino Elias Hakalehto | METHOD AND EQUIPMENT FOR AUTOMATED TESTING OF MICROBIOLOGICAL SAMPLES |
| CN106556599B (zh) * | 2016-10-25 | 2018-10-12 | 上海美凯纯生物科技有限公司 | 一种微生物快速检测方法 |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR403203A (fr) * | 1909-05-21 | 1909-10-28 | Montreux Sa Lab De | Dispositif pour cultiver, développer, conserver, emballer et expédier des germes tels que microbes, levures, bactéries, etc., sous une forme non liquide |
| US2904474A (en) * | 1954-10-04 | 1959-09-15 | Bacto Strip A G | Process and means for carrying out bacteriological operations |
| US3107204A (en) * | 1961-01-23 | 1963-10-15 | Dalde Reagents Inc | Microbiological testing method and structure therefor |
| GB1092634A (en) * | 1964-03-24 | 1967-11-29 | Ici Ltd | Improvements in or relating to supporting media for microbiological fermentation processes |
| US3881993A (en) * | 1971-03-16 | 1975-05-06 | Miles Lab | Testing device for microorganisms |
| JPS5536313B2 (es) * | 1972-06-03 | 1980-09-19 | ||
| US4104127A (en) * | 1974-06-12 | 1978-08-01 | Louis Bucalo | Article for growing cultures in a body cavity in the presence of gas, and package for the article |
| US4152213A (en) * | 1977-03-10 | 1979-05-01 | Johnston Laboratories, Inc. | Vacuum detection of bacteria |
| GB8303096D0 (en) * | 1983-02-04 | 1983-03-09 | Oxoid Ltd | Bacterial testing |
| US5100783A (en) * | 1985-05-10 | 1992-03-31 | Verax Corporation | Weighted microsponge for immobilizing bioactive material |
| IL75554A (en) * | 1985-06-18 | 1993-01-14 | Yeda Res & Dev | Matrix for cell cultivation in vitro |
| US4812656A (en) * | 1986-03-31 | 1989-03-14 | Kabushiki Kaisha Toshiba | Processing of radioisotope-distribution imaging signals in a scintillation camera apparatus |
| US5217876A (en) * | 1988-03-15 | 1993-06-08 | Akzo N.V. | Method for detecting microorganisms |
| US5232839A (en) * | 1990-06-14 | 1993-08-03 | Difco Laboratories Incorporated | Detecting microbiological growth |
-
1995
- 1995-01-30 EP EP95909409A patent/EP0743979B1/en not_active Expired - Lifetime
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| EP0743979B1 (en) | 2003-05-02 |
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