EP4167744A1 - Agent de biocontrole et son utilisation pour la lutte contre des maladies fongiques de plantes - Google Patents

Agent de biocontrole et son utilisation pour la lutte contre des maladies fongiques de plantes

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Publication number
EP4167744A1
EP4167744A1 EP21733457.2A EP21733457A EP4167744A1 EP 4167744 A1 EP4167744 A1 EP 4167744A1 EP 21733457 A EP21733457 A EP 21733457A EP 4167744 A1 EP4167744 A1 EP 4167744A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
plant
strain
spp
tal
trichoderma atroviride
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
EP21733457.2A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Sophie LEPORINI
Christian BELLOY
Najat NASSR
Aude LANGENFELD NARDIN
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Rittmo Agroenvironnement
Agro Industrie Recherches et Developpements ARD
Original Assignee
Rittmo Agroenvironnement
Agro Industrie Recherches et Developpements ARD
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Rittmo Agroenvironnement, Agro Industrie Recherches et Developpements ARD filed Critical Rittmo Agroenvironnement
Publication of EP4167744A1 publication Critical patent/EP4167744A1/fr
Pending legal-status Critical Current

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Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/30Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/38Trichoderma

Definitions

  • the present invention relates to a novel biocontrol agent and its use for the control of fungal diseases of plants.
  • Damping-off (also known as root rot) is a plant disease caused by the pathogen Pythium spp. (mushroom). One of the main visible symptoms is rotting of young shoots during germination. By acting on the emergence of the plant, this complex disease allows the establishment of other phytopathogenic fungi such as Phytophthora spp. or Rhizoctonia spp., themselves responsible for damping-off. Damping-off, which affects among others the cultivation of tomato (Solanaceae family), potato (Solanaceae family), beet (Amaranthaceae family) and soybean (Fabaceae family), constitutes therefore a major agronomic problem both in greenhouse cultivation and in the field, with high economic consequences.
  • the genus Pythium spp. is represented by more than 130 species among which can be cited: P. acanthicum, P. afertile, P. aphanidermatum, P. aquatile, P. deharyanum, P. elongatum, P. gracile, P. imperfectum, P. inflatum, P intermedium, P. irregulare, P. marinum, P. maritimum, P. middletoni, P. monospermum, P. myriotylum, P. ostracodes, P. pulchrum, P. salinum, P. thallassium and P. ultimum.
  • Rhizoctonia spp. Also responsible for rhizoctonia rhizoctonia, is represented by more than twenty species among which can be cited: R. alpine, R. anomala, R. callae, R. dichotoma, R. ferruginea, R. floccosa, R. fragariae, R. fraxini, R. fumigata, R. lanuginosa, R. leguminicola, R. menthae, R. mucoroides, R. muneratii, R. oryzae-sativae, R. pini-insignis, R. quercus, R. rubi, R. rubiginosa, R. silvestris, R. solani, R. stahlii, R. tuliparum and R. versicolor.
  • Gray rot is a disease caused by the pathogen Botrytis cinerea. This fungus is able to develop on a very large number of host plants including the tomato (Solanaceae family), both in the open field and under shelter. Due to the high humidity in greenhouses, a factor favorable to the development of the pathogen, severe attacks will affect the crops. B. cinerea can infect seeds as well as several organs, namely the stem, leaves, flowers as well as fruits, making it a pathogen of great economic importance. Whatever parts of the plant are attacked by the pathogen, the tissues become covered with a gray felting, characteristic of an attack by B. cinerea. The main means of controlling gray rot remains, as with damping-off, the use of fungicides. However, strains have developed, following repeated use of phytosanitary products, resistance to these products.
  • microorganisms also called direct microbiological control, consists of introducing specific microbial antagonists into the soil or into the plant material.
  • These antagonists also called biological control agents or BCA (Biological Control Agent)
  • BCA biological Control Agent
  • BCA biological Control Agent
  • - antibiosis which corresponds to interactions involving at least one diffusible low molecular weight compound or an antibiotic produced by a microorganism which inhibits the growth of another microorganism; - parasitism and the production of hydrolytic enzymes and / or antibiotic metabolites to the detriment of another host organism; and or
  • Trichoderma comprises various species of fungi capable of being biocontrol agents, their mode of action has been the subject of much work. Since then, the Trichoderma genus has been known for its biocontrol activity against telluric pathogens (living in the soil) but with low competitiveness at the level of the rhizosphere of plants (soil-root zone).
  • a first aim of the invention therefore consists in providing an effective strain and its use as a biological control agent (or biocontrol agent).
  • a second aim of the invention is to provide phytosanitary compositions for the prevention and / or treatment of fungal diseases of plants.
  • a third aim of the invention is also to provide phytosanitary coating compositions where, in association with a plant seed, the strain of the invention is used as an agent for accelerating the germination of said seed.
  • Another object of the invention is to provide methods for manufacturing said compositions and for implementing the prevention and / or treatment of fungal diseases of plants, and the acceleration of germination.
  • the latter relates to the isolated strain of Trichoderma atroviride TAL-17 deposited on July 3, 2018 at the National Collection of Cultures of Microorganisms (CNCM; Institut Pasteur, 25-28 rue du Dondel Roux , F-75724 PARIS CEDEX 15) under the number CNCM 1-5333 and / or one of its mutants.
  • this strain of Trichoderma atroviride TAL-17 developed by the inventors has excellent growth stimulating properties, antagonistic properties useful in agriculture as well as great stability in terms of viability. In fact, it constitutes an ideal biocontrol agent for effectively combating fungal diseases of plants such as damping-off and / or rhizoctonia.
  • isolated strain is meant the culture of a single microorganism which has been isolated from various microorganisms present on and / or in the tissues of a fragment of a wheat leaf grown in fields.
  • one of its mutants is meant functional mutant strains obtained by genetic mutations or manipulations of a reference strain, which in the context of the invention is the isolated strain of Trichoderma atroviride TAL-17 filed on July 03, 2018 at the CNCM under number CNCM 1-5333.
  • the term “functional mutant strains” is understood to mean that these mutants retain the same physiological properties as the reference strain (ie. TAL-17) or even may exhibit improved physiological properties, in particular for mutants overexpressing genes involved in the synthesis of metabolites. 'interests (eg improvement of biocontrol capacities).
  • one of the objects of the invention relates to an isolated strain of Trichoderma atroviride, said isolated strain being a mutant strain of the isolated strain of Trichoderma atroviride TAL-17 deposited on July 3, 2018 at the CNCM under number CNCM 1-5333.
  • One of the other subjects of the invention also relates to the overproduction of metabolites in the production matrix by an isolated strain of Trichoderma atroviride whose metabolite biosynthetic potential has been improved by genetic manipulation, said isolated strain being a mutant strain of the strain. isolated from Trichoderma atroviride TAL-17 deposited on July 3, 2018 at the CNCM under number CNCM 1-5333.
  • mutants By “one of its mutants” is also meant, alternatively or cumulatively, functional mutant strains (see above) which have a sequence identity of at least 98% with the sequence SEQ ID NO: 5 of the gene. ech42 of the TAL-17 strain deposited on July 3, 2018 at the CNCM under the number CNCM 1-5333.
  • sequence identity of at least 98% with the sequence SEQ ID NO: 5" is meant a sequence identity of at least 98.5%, at least 99% or even at least 99, 5% with the sequence SEQ ID NO: 5 represented by the following nucleic acid sequence: knowing that within the meaning of the invention, the sequence identity is measured by conventional tools for comparison of sequences known to those skilled in the art such as the algorithms of the BLAST platform or the MatGat program (Campanella, Bitincka and Smalley , 2003).
  • the isolated strain of Trichoderma atroviride TAL-17 is meant that the invention relates either to the isolated strain TAL-17, or one of its mutants, or the TAL-17 strain in combination with one of its mutants. All of these strains (ie TAL-17 and its mutants) can moreover be easily identified via the so-called real-time Polymerase Chain Reaction (qPCR) method.
  • the inventors have developed specific thereof namely tools, TaqMan ® probe GS285741-P1 and a pair of nucleotide primers associated GS285741-F1 and GS285741-R1 (Table 1), which can amplify a sequence specific to the strains of the invention ⁇ cf. Table 2).
  • FAM 6-carboxyfluorescein
  • MGB minor groove binder
  • Table 2 Target sequence of oligonucleotides and of the TaqMan ® probe in the TAL-17 strain and / or its mutants
  • a subject of the invention is also the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention as described above and / or one of its mutants in the form of spores, said spores being produced by fermentation in solid or liquid medium and which may be in purified form or in the production matrix, said production matrix being solid or liquid.
  • spores in the form of spores
  • conidiospores or chlamydospores more particularly conidiospores
  • FMS solid medium
  • liquid fermentation is understood to mean any process allowing the development of the microorganism using a production matrix with the presence of free water.
  • production matrix is meant any natural and / or synthetic substrate, which allows the development of the microorganism and induces the production of biomass, and / or enzymes, and / or primary and / or secondary metabolites ( eg pyrone 6-pentyl-2H-pyran-2-one).
  • enzyme or enzyme families produced by the fungus are proteases, chitinases and beta-1,3-glucanase.
  • sporestiti in the production matrix is meant the spores that remain in the production matrix after the manufacturing process, without a purification step.
  • the subject of the invention is the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention as described above as a biological control agent.
  • biological control agent is meant that a strain of Trichoderma atroviride according to the invention can interfere with the growth and / or the survival of pathogens, thus making it possible to control them, via one or more of the methods. action described above (eg via the development of its biomass and / or its production of enzymes and / or secondary metabolites).
  • one of the means of demonstrating that a strain of Trichoderma atroviride according to the invention is a biological control agent is by carrying out a Dual culture test on culture medium in a Petri dish.
  • Double culture test means a test on a Petri dish in the laboratory on culture medium, where the strain of the microorganism, biological control agent, and the strain of the pathogen are cultured on the same dish in order to '' observe the effect of one strain on another over time and vice versa.
  • the subject of the invention is the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention as described above as an antifungal agent for plants.
  • plant antifungal agent is meant that a strain of Trichoderma atroviride according to the invention is capable of combating phytopathogenic fungi.
  • one of the means of demonstrating that a strain of Trichoderma atroviride according to the invention is an antifungal agent for plants is by carrying out a Dual culture test.
  • various telluric fungi responsible for damping off seedlings such as fungi of the genera Pythium (eg P. ultimum), Rhizoctonia (eg R. solani), Alternaria (eg A. dauci especially in carrots), Fusarium (eg F. culmorum in particular in cereals and F. oxysporum in particular in tomato) and Phoma (eg P. exigua in particular in potato); and
  • Botrytis e.g. B. cinerea
  • tomatoes responsible for gray rot in tomatoes in particular.
  • the subject of the invention is therefore the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention as described above as a biological control agent, in particular as an antifungal agent for plants directed against a pathogenic fungus for plants chosen from fungi of the genera Pythium, Rhizoctonia, Alternaria, Fusarium, Phoma and Botrytis.
  • the subject of the invention is the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention as described above as a biological control agent, in particular as an antifungal agent for plants directed against a pathogenic fungus for plants:
  • said pathogenic fungus belonging in particular to a species chosen from: P. acanthicum, P. afertile, P. aphanidermatum, P. aquatile, P. deharyanum, P. elongatum, P. gracile, P. imperfectum, P. inflatum, P. intermedium, P. irregulare, P. marinum, P. maritimum, P. middletoni, P. monospermum, P. myriotylum, P. ostracodes, P. pulchrum, P. salinum, P. thallassium and P. ultimum, and in particular said pathogenic fungus being P. ultimum; and or
  • Rhizoctonia spp. said pathogenic fungus belonging in particular to a species chosen from: R. alpine, R. anomala, R callae, R. dichotoma, R. ferruginea, R floccosa, //. fragariae, //. fraxini, //. fumigata, //. lanuginosa, R. leguminicola, //. menthae, //. mucoroides, //. muneratii, R oryzae-sativae, R. pini-insignis, //. quercus, //. rubi, //. rubiginosa, R silvestris, //. solani, //. stahlii, //. tuliparum and //. versicolor, and in particular said pathogenic fungus being //. solani; and or
  • the subject of the invention is the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention as described above as a biological control agent, in particular as an antifungal agent for plants directed against a plant pathogenic fungus of the genus Pythium spp. , said pathogenic fungus belonging in particular to a species chosen from: I ⁇ acanthicum, I ⁇ afertile, I ⁇ aphanidermatum, I ⁇ aquatile, I ⁇ debaryanum, I ⁇ elongatum, I ⁇ gracile, I ⁇ imperfectum, I ⁇ inflatum, I ⁇ intermedium, I ⁇ irregulare, I ⁇ marinum, I ⁇ maritimum, P.
  • the subject of the invention is the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention as described above as a biological control agent, in particular as an antifungal agent for plants directed against a pathogenic fungus of the genus Rhizoctonia spp. , said pathogenic fungus belonging in particular to a species chosen from: //. alpine, //. anomala, //. callae, //. dichotoma, //. ferruginea, //. floccosa, //. fragariae, //. fraxini, //. fumigata, //. lanuginosa, //. leguminicola, //. menthae, //. mucoroides, //. muneratii, //.
  • the subject of the invention is the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention as described above as a biological control agent, in particular as an antifungal agent for plants directed against a pathogenic fungus of the genus Botrytis spp., in particular the said pathogenic fungus being B. cinerea.
  • the subject of the invention is the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention as described above as a biological control agent, in particular as an antifungal agent for plants directed against a pathogenic fungus for plants:
  • Rhizoctonia spp. said pathogenic fungus being R. solani;
  • the subject of the invention is the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention as described above as a biological control agent, in particular as an antifungal agent for plants directed against a pathogenic fungus for plants. of the genus Pythium spp., said pathogenic fungus being P. ultimum.
  • a subject of the invention is also the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention as described above as a biological control agent, in particular as an antifungal agent for plants directed against a fungus pathogenic for plants of the genus Rhizoctonia spp., said pathogenic fungus being / ?, solani.
  • a subject of the invention is also the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention as described above as a biological control agent, in particular as an antifungal agent for plants directed against a fungus pathogenic for plants of the genus Botrytis spp., said pathogenic fungus being B. cinerea ..
  • the latter relates to the use of an isolated strain of Trichoderma atroviride in the prevention and / or treatment of infection in a plant caused by a pathogenic fungus chosen from among the fungi of genera Pythium, Rhizoctonia, Alternaria, Fusarium, Phoma and Botrytis, said isolated strain of Trichoderma atroviride being the TAL-17 strain deposited on July 3, 2018 at the CNCM under number CNCM 1-5333 and / or one of its mutants.
  • the subject of the invention is the use of an isolated strain of Trichoderma atroviride in the prevention and / or treatment of infection in a plant caused by a pathogenic fungus of the genus Pythium spp. and / or of the genus Rhizoctonia spp. and / or of the genus Botrytis spp. , said isolated strain of Trichoderma atroviride being the TAL-17 strain deposited on July 3, 2018 at the CNCM under the number CNCM 1-5333 and / or one of its mutants.
  • the invention relates to the use as described above of the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention (ie the TAL-17 strain deposited on July 3, 2018 at the CNCM under the CNCM number 1-5333 and / or one of its mutants), in which the said pathogenic fungus belongs to:
  • the subject of the invention is the use as described above of the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention, in which said pathogenic fungus belongs to the genus Pythium spp. and to a species selected from: P. acanthicum, P. afertile, P. aphanidermatum, P. aquatile, P. debaryanum, P. elongatum, P. gracile, P. imperfection, P. inflatum, P intermedium, P irregulare, P marinum, P. maritimum, P middletoni, P monospermum, P myriotylum, P ostracodes, P. pulchrum, P salinum, P thallassium and P '. ultimum, and in particular said pathogenic fungus is P. ultimum.
  • the invention relates to the use as described above of the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention, in which said pathogenic fungus belongs to the genus Rhizoctonia spp. and to a species chosen from: R. alpine, R. anomala, R. callae, R. dichotoma, R. ferruginea, R. floccosa, R. fragariae, R. fraxini, R. fumigata, R. lanuginosa, R. leguminicola , R. menthae, R mucoroides, R. muneratii, R. oryzae-sativae, R. pini-insignis, R. quercus, R. rubi, R. rubiginosa, R. silvestris, R. solani, R. stahlii, R. tuliparum and R. versicolor, and in particular said pathogenic fungus is R solani.
  • the invention relates to the use as described above of the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention, in which said pathogenic fungus belongs to the genus Botrytis spp. and in particular said pathogenic fungus is B. cinerea.
  • the subject of the invention is the use as described above of the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention, in which said pathogenic fungus is P. ultimum and / or R. solani and / or B. cinerea.
  • the subject of the invention is the use as described above of the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention, in which said pathogenic fungus is P. ultimum.
  • a subject of the invention is also the use as described above of the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention, in which said pathogenic fungus is R. solani.
  • the subject of the invention is also use as described above of the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention, wherein said pathogenic fungus is B. cinerea.
  • the invention relates to the use as described above of the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention, in which said plant belongs to a family chosen from:
  • Beta vulgaris (beet)
  • ⁇ Apiaceae such as Daucus carota (carrot);
  • Asteraceae such as Lactuca sativa (lettuce) or Gerbera spp. (Gerbera);
  • Cucurbits such as Cuccumis sativus (cucumber);
  • ⁇ Fabaceae such as Glycine max (soybean);
  • Rosaceae such as Pyrus spp. (pear), Prunus spp. (cherry), Fragaria spp. (strawberry), or Posa spp. (pink) ;
  • Solanaceae such as Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Malus domestica (apple) or Capsicum spp. (pepper) ; and
  • Valerianaceae in particular said plant belongs to a family chosen from:
  • Beta vulgaris (beet)
  • ⁇ Fabaceae such as Glycine max (soybean).
  • Solanaceae such as Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Malus domestica (apple) or Capsicum spp. (pepper), and preferably said plant is Beta vulgaris (beet), Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Glycine max (soybean).
  • the invention relates to the use as described above of the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention, in which said plant belongs to a family chosen from:
  • ⁇ Amaranthaceae such as Beta vulgaris (beet); ⁇ Fabaceae such as Glycine max (soybean); and
  • Solanaceae such as Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Malus domestica (apple) or Capsicum spp. (pepper), and in particular said plant is Beta vulgaris (beet), Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Glycine max (soybean).
  • the invention relates to the use as described above of the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention, in which said plant is Beta vulgaris (beet), Solanum lycopersicum (tomato) , Solanum tuberosum (potato) and / or Glycine max (soybean).
  • the invention relates to the use as described above of the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention, in which said plant is Beta vulgaris (beet).
  • a subject of the invention is also the use as described above of the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention, in which said plant is Solanum lycopersicum (tomato).
  • a subject of the invention is also the use as described above of the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention, in which said plant is Solanum tuberosum (potato).
  • a subject of the invention is also the use as described above of the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention, in which said plant is Glycine max (soybean).
  • the invention relates to the use as described above of the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention, in which said pathogenic fungus is P. ultimum and / or R. solani and / or B. cinerea and said plant is Beta vulgaris (beet), Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato) and / or Glycine max (soybean).
  • the subject of the invention is the use as described above of the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention, wherein said pathogenic fungus is P. ultimum and said plant is Beta vulgaris (beet), Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato) and / or Glycine max (soybean).
  • the invention relates to the reuse as described above of the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention, in which said pathogenic fungus is R. solani and said plant is Beta vulgaris (beet). , Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato) and / or Glycine max (soybean).
  • the invention relates to the use as described above of the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention, in which said pathogenic fungus is B. cinerea and said plant is Beta vulgaris ( beet), Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato) and / or Glycine max (soybean).
  • the invention relates to the use as described above of the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention, in which:
  • said pathogenic fungus is P. ultimum and said plant is Beta vulgaris (beet);
  • said pathogenic fungus is P. ultimum and said plant is Solanum lycopersicum (tomato);
  • said pathogenic fungus is P. ultimum and said plant is Solanum tuberosum (potato);
  • said pathogenic fungus is P. ultimum and said plant is and / or Glycine max (soybean);
  • said pathogenic fungus is R. solani and said plant is Beta vulgaris (beet);
  • said pathogenic fungus is R. solani and said plant is Solanum lycopersicum (tomato);
  • - said pathogenic fungus is R. solani and said plant is Solanum tuberosum (potato); Where - said pathogenic fungus is R. solani and said plant is Glycine max (soya); Where
  • said pathogenic fungus is B. cinerea and said plant is éla vulgaris (beet);
  • said pathogenic fungus is B. cinerea and said plant is Solanum lycopersicum (tomato);
  • said pathogenic fungus is B. cinerea and said plant is Solanum tuberosum (potato);
  • said pathogenic fungus is B. cinerea and said plant is Glycine max (soya).
  • the invention relates to G use of a phytosanitary composition in the prevention and / or treatment in a plant of infection caused by a pathogenic fungus chosen from fungi of the genera Pythium, Rhizoctonia, Alternaria, Fusarium , Phoma and Botrytis, said phytosanitary composition comprising:
  • the subject of the invention is the use of a phytosanitary composition in the prevention and / or treatment in a plant of infection caused by a pathogenic fungus of the genus Pythium spp. and / or of the genus Rhizoctonia spp. and / or of the genus Botrytis spp., said phytosanitary composition comprising:
  • metabolites emitted during the production of the strain or “its metabolites emitted during its production” is meant any molecule produced in the production matrix by the strain of the invention and / or one of its mutants during its production. its development in the presence (co-culture) or not of the pathogenic fungus of the genus Pythium spp. and / or of the genus Rhizoctonia spp. and / or of the genus Botrytis spp.
  • metabolites can be:
  • biological control agent is meant a microorganism capable of interfering with the growth and / or survival of pathogens, thus making it possible to control them.
  • the strain of the TAL-17 invention (filed on July 03, 2018 at the CNCM under the number CNCM 1-5333) is an example thereof, but within the meaning of the invention it is a question here of combining the strain of the invention and / or one of its mutants to at least one other biological control agent, which is therefore different from the strain of the invention and / or one of its mutants.
  • At least one other biological control agent is meant that the plant protection composition of the invention can contain 2 biological control agents (that of the invention and another), just as it can contain 3, 4 or more. 5 (that of the invention and 2, 3 or 4 others).
  • the subject of the invention is the use as described above of the aforementioned phytosanitary composition, said phytosanitary composition being at the base (on purchase) in the form of a solid composition. or concentrated liquid.
  • a solid or concentrated liquid composition can be, for example, obtained by means of a particular formulation of the spores of the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention and / or one of its mutants produced by fermentation in solid or liquid medium, said spores. which may be in purified form or in the production matrix, said production matrix being solid or liquid.
  • another particular object of the invention relates to the use as described above of the aforementioned phytosanitary composition, said phytosanitary composition being in the form of a solid or concentrated liquid composition in which the concentration of the active principle is greater than an effective amount of 10 7 spores / g.
  • greater than an effective amount of 10 7 spores / g is also meant greater than an effective amount of 10 8 spores / g, greater than an effective amount 10 9 spores / g, greater than an effective amount 10 10 spores / g. g, greater than an effective amount of 10 11 spores / g or greater than an effective amount of 10 12 spores / g.
  • the user of the aforesaid composition must then, before its use, incorporate it into a solid medium (eg.
  • aqueous medium eg water
  • a dilute composition comprising a quantity effective from 10 4 to 10 12 spores of the Trichoderma atroviride strain of the invention and / or one of its mutants per gram of solid medium or of aqueous medium (spores / g).
  • the composition, solid or liquid, diluted obtained can then be applied to plants for which the prevention and / or treatment of a fungal plant disease is desired.
  • the spreading of the aforesaid composition comprises in particular the conventional spreading techniques known to those skilled in the art, which are used to spread solid materials (eg sewage sludge, manure over an area to be treated). , etc.) or liquid (eg pesticides, etc.) of agronomic interest.
  • solid materials eg sewage sludge, manure over an area to be treated. , etc.
  • liquid eg pesticides, etc.
  • the subject of the invention is the use as described above of the aforementioned phytosanitary composition, said phytosanitary composition comprising an effective amount of 10 4 to 10 12 spores / g (of phytosanitary composition), more particularly from 10 7 to 10 9 spores / g (of phytosanitary composition), said phytosanitary composition optionally being obtained after a preparation step (eg dilution by suspension or mixing) making it ready for spreading.
  • a preparation step eg dilution by suspension or mixing
  • spores / g By “effective amount of spores / g” is meant the number of spores capable of forming a colony on culture medium per g (gram) of product.
  • the expression "from 10 4 to 10 12 spores / g” can also mean from 10 4 to 10 5 spores / g, from 10 4 to 10 6 spores / g, from 10 4 to 10 7 spores / g, from 10 4 to 10 8 spores / g, from 10 4 to 10 9 spores / g, from 10 4 to 10 10 spores / g, from 10 4 to 10 11 spores / g, from 10 5 to 10 6 spores / g, from 10 5 to 10 7 spores / g, from 10 5 to 10 8 spores / g, from 10 5 to 10 9 spores / g, from 10 5 to 10 10 spores / g,
  • the subject of the invention is the use as described above of the above-mentioned phytosanitary composition, in which said plant belongs to a family chosen from:
  • Beta vulgaris (beet)
  • ⁇ Apiaceae such as Daucus carota (carrot);
  • Asteraceae such as Lactuca sativa (lettuce) or Gerbera spp. (Gerbera);
  • Cucurbits such as Cuccumis sativus (cucumber);
  • ⁇ Fabaceae such as Glycine max (soybean);
  • Rosaceae such as Pyrus spp. (pear), Prunus spp. (cherry), Fragaria spp. (strawberry), or // asc / .s ////, (pink);
  • Solanaceae such as Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Malus domestica (apple) or Capsicum spp. (pepper) ; and ⁇ Valerianaceae, in particular said plant belongs to a family chosen from:
  • Beta vulgaris (beet)
  • ⁇ Fabaceae such as Glycine max (soybean).
  • Solanaceae such as Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Malus domestica (apple) or Capsicum spp. (pepper), and preferably said plant is Beta vulgaris (beet), Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Glycine max (soybean).
  • the invention relates to the use as described above of the above-mentioned phytosanitary composition, in which said pathogenic fungus is P. ultimum and / or R. solani and / or B. cinerea, and said plant belongs to a family chosen from:
  • Beta vulgaris (beet)
  • ⁇ Fabaceae such as Glycine max (soybean).
  • Solanaceae such as Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Malus domestica (apple) or Capsicum spp. (pepper), and in particular said plant is Beta vulgaris (beet), Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Glycine max (soybean).
  • the invention relates to the use as described above of the above-mentioned phytosanitary composition, in which said pathogenic fungus is P. ultimum and / or R. solani and / or B. cinerea, and said plant is Beta vulgaris (beet), Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato) and / or Glycine max (soybean).
  • said pathogenic fungus is P. ultimum and / or R. solani and / or B. cinerea
  • said plant is Beta vulgaris (beet), Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato) and / or Glycine max (soybean).
  • the invention relates to the use as described above of the above-mentioned phytosanitary composition, in which:
  • said pathogenic fungus is P. ultimum and said plant is Beta vulgaris (beet);
  • pathogenic fungus is P. ultimum and said plant is Solanum lycopersicum (tomato); Where - said pathogenic fungus is P. ultimum and said plant is Solarium tuberosum (potato); Where
  • said pathogenic fungus is P. ultimum and said plant is and / or Glycine max (soybean);
  • said pathogenic fungus is R. solani and said plant is Beta vulgaris (beet);
  • said pathogenic fungus is R. solani and said plant is Solanum lycopersicum (tomato);
  • said pathogenic fungus is R. solani and said plant is Solanum tuberosum (potato);
  • said pathogenic fungus is R. solani and said plant is Glycine max (soya);
  • said pathogenic fungus is B. cinerea and said plant is Beta vulgaris (beet);
  • said pathogenic fungus is B. cinerea and said plant is Solanum lycopersicum (tomato);
  • said pathogenic fungus is B. cinerea and said plant is Solanum tuberosum (potato);
  • said pathogenic fungus is B. cinerea and said plant is Glycine max (soya).
  • the subject of the invention is the phytosanitary composition as described above for its use in the prevention and / or treatment of infection in a plant caused by a pathogenic fungus of the genus Pythium spp. and / or Rhizoctonia spp and / or Botrytis spp.
  • all of the specific uses cited above apply to this alternative.
  • the subject of the invention is therefore the use of an isolated strain of Trichoderma atroviride to promote the germination of a plant seed, said isolated strain of Trichoderma atroviride being the TAL-17 strain deposited on July 03. 2018 at the CNCM under number CNCM 1-5333 and / or one of its mutants and in which said plant seed belongs to a plant of a family chosen from: ⁇ Amaranthaceae such as Beta vulgaris (beet); ⁇ Apiaceae such as Daucus carota (carrot);
  • Asteraceae such as Lactuca sativa (lettuce) or Gerbera spp. (Gerbera);
  • Cucurbits such as Cuccumis sativus (cucumber);
  • ⁇ Fabaceae such as Glycine max (soybean);
  • Rosaceae such as Pyrus spp. (pear), Prunus spp. (cherry), Fragaria spp. (strawberry), or Posa spp. (pink) ;
  • Solanaceae such as Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Malus domestica (apple) or Capsicum spp. (pepper) ; and
  • Valerianaceae in particular said plant seed belongs to a plant of a family chosen from:
  • Beta vulgaris (beet)
  • ⁇ Fabaceae such as Glycine max (soybean).
  • Solanaceae such as Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Malus domestica (apple) or Capsicum spp. (pepper), and preferably said plant is Beta vulgaris (beet), Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Glycine max (soybean).
  • the invention relates to the use as described above of the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention (ie the TAL-17 strain deposited on July 3, 2018 at the CNCM under the CNCM number 1-5333 and / or one of its mutants), in which said plant seed belongs to a plant of a family chosen from:
  • Beta vulgaris (beet)
  • ⁇ Fabaceae such as Glycine max (soybean).
  • Solanaceae such as Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Malus domestica (apple) or Capsicum spp. (pepper), and in particular said plant is Beta vulgaris (beet), Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Glycine max (soybean).
  • the subject of the invention is the use as described above of the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention, in which said plant seed belongs to the plant Beta vulgaris (beet).
  • a subject of the invention is also the use as described above of the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention, in which said plant seed belongs to the plant Solarium lycopersicum (tomato).
  • a subject of the invention is also the use as described above of the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention, in which said plant seed belongs to the plant Solarium tuherosum (potato).
  • a subject of the invention is also the use as described above of the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention, in which said plant seed belongs to the plant Glycine max (soybean).
  • the germination aid advantageously and at the same time allows the prevention and / or treatment of fungal diseases at the time of sowing.
  • the development of a disease after sowing is thus avoided and the yield is optimized via the biostimulant aspect of the strain of the invention.
  • this aspect also makes it possible to avoid a significant slowdown in the development of the crop if a period of drought occurs some time after sowing (which can happen in spring) and therefore to avoid loss of yields at harvest.
  • the biocontrol effect of the strain of the invention ie. TAL-17 strain and / or one of its mutants
  • the plant is thus advantageously more resistant to attacks by subsequent (phyto-) pathogens.
  • one of the subjects of the invention relates to a phytosanitary coating composition
  • a phytosanitary coating composition comprising the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention and / or one of its mutants, and optionally at least one binding agent, said phytosanitary coating composition making it possible to produce a coated seed.
  • a subject of the invention is therefore also a phytosanitary coating composition comprising the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention and / or one of its mutants, said phytosanitary coating composition making it possible to produce a coated seed; a phytosanitary coating composition comprising the isolated strain of Trichoderma atroviride of the invention and / or one of its mutants, and at least one fixing agent, said phytosanitary coating composition making it possible to produce a coated seed.
  • said phytosanitary composition as described above or below, or said phytosanitary coating composition as described above or below comprises:
  • Another of the objects of the invention relates to the use of a phytosanitary (coating) composition for promoting the germination of a plant seed.
  • the invention relates to the use as described above of one of the phytosanitary compositions of the invention (see above).
  • this object of the invention relates to a phytosanitary (coating) composition for promoting the germination of a plant seed.
  • the subject of the invention is also a coated seed comprising a plant seed, in which said plant seed is coated with a phytosanitary coating composition and belongs to a plant of a family chosen from:
  • Beta vulgaris (beet)
  • ⁇ Apiaceae such as Daucus carota (carrot);
  • Asteraceae such as Lactuca sativa (lettuce) or Gerbera spp. (Gerbera);
  • Cucurbits such as Cuccumis sativus (cucumber);
  • ⁇ Fabaceae such as Glycine max (soybean);
  • Rosaceae such as Pyrus spp. (pear), Prunus spp. (cherry), Fragaria spp. (strawberry), or Posa spp. (pink) ;
  • Solanaceae such as Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Malus domestica (apple) or Capsicum spp. (pepper) ; and
  • Beta vulgaris (beet)
  • ⁇ Fabaceae such as Glycine max (soybean).
  • Solanaceae such as Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Malus domestica (apple) or Capsicum spp. (pepper), and preferably said plant is Beta vulgaris (beet), Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Glycine max (soybean).
  • coated seed is meant a seed selected for sowing, said seed having undergone a particular treatment which has enabled it to be coated in a phytosanitary coating composition.
  • the invention relates to the coated seed as described above, said coated seed comprising an effective amount of 10 5 to 10 8 (or 10 6 to 10 7 ) spores / coated seed, preferably 10 6 (or 10 7 ) spores / coated seed.
  • the invention relates to the coated seed as described above, in which said plant seed belongs to a plant of a family chosen from:
  • Beta vulgaris (beet)
  • ⁇ Fabaceae such as Glycine max (soybean).
  • Solanaceae such as Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Malus domestica (apple) or Capsicum spp. (pepper), and in particular said plant is Beta vulgaris (beet), Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Glycine max (soybean).
  • the subject of the invention is the coated seed as described above, in which said plant seed belongs to the plant Beta vulgaris (beet).
  • a subject of the invention is also the coated seed as described above, in which said plant seed belongs to the plant Solanum lycopersicum (tomato).
  • a subject of the invention is also the coated seed as described above, in which said plant seed belongs to the plant Solanum tuberosum (potato).
  • a subject of the invention is also the coated seed as described above, in which said plant seed belongs to the plant Glycine max (soybean).
  • the subject of the invention is a process for the protection and / or treatment of a plant against a disease caused by a pathogenic fungus chosen from fungi of the genera Pythium, Rhizoctonia, Alternaria, Fusarium, Phoma and Botrytis; in particular a pathogenic fungus of the genus Pythium spp. and / or of the genus Rhizoctonia spp. and / or of the genus Botrytis spp. ; comprising the application of a phytosanitary composition to at least part of said plant or of the soil near said plant.
  • the subject of the invention is the method as described above, in which said at least part of said plant is a leaf, a fruit or a seed.
  • the subject of the invention is a method of protecting and / or treating a plant against a disease caused by a pathogenic fungus chosen from fungi of the genera Pythium, Rhizoctonia, Alternaria, Fusarium, Phoma and Botrytis comprising the application of a phytosanitary composition to at least part of said plant or of the soil near said plant, said at least part of said plant being in particular a leaf, a fruit, a seed, said phytosanitary composition comprising: - the isolated strain of Trichoderma atroviride TAL-17 deposited on July 3, 2018 at the CNCM under the number CNCM 1-5333 and / or one of its mutants as active principle;
  • Beta vulgaris (beet)
  • ⁇ Apiaceae such as Daucus carota (carrot);
  • Asteraceae such as Lactuca sativa (lettuce) or Gerbera spp. (Gerbera);
  • Cucurbits such as Cuccumis sativus (cucumber);
  • ⁇ Fabaceae such as Glycine max (soybean);
  • Rosaceae such as Pyrus spp. (pear), Prunus spp. (cherry), Fragaria spp. (strawberry), or Rosa spp. (pink) ;
  • Solanaceae such as Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Malus domestica (apple) or Capsicum spp. (pepper) ; and
  • ⁇ Valerianaceae in particular said plant belonging to a family chosen from: ⁇ Amaranthaceae such as Beta vulgaris (beet);
  • ⁇ Fabaceae such as Glycine max (soybean).
  • Solanaceae such as Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Malus domestica (apple) or Capsicum spp. (pepper), and preferably said plant being Beta vulgaris (beet), Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Glycine max (soybean).
  • the subject of the invention is a process for the protection and / or treatment of a plant against a disease caused by a pathogenic fungus of the genus Pythium spp. and / or of the genus Rhizoctonia spp. and / or Botrytis spp. comprising the application of a phytosanitary composition to at least part of said plant or of the soil near said plant, said at least part of said plant being in particular a leaf, a fruit, a seed, said phytosanitary composition comprising:
  • Beta vulgaris (beet)
  • ⁇ Apiaceae such as Daucus carota (carrot); ⁇ Asteraceae such as Lactuca sativa (lettuce) or Gerbera spp. (Gerbera);
  • Cucurbits such as Cuccumis sativus (cucumber);
  • ⁇ Fabaceae such as Glycine max (soybean);
  • Rosaceae such as Pyrus spp. (pear), Prunus spp. (cherry), Fragaria spp. (strawberry), or Posa spp. (pink) ;
  • Solanaceae such as Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Malus domestica (apple) or Capsicum spp. (pepper) ; and
  • Valerianaceae in particular said plant belonging to a family chosen from:
  • Beta vulgaris (beet)
  • ⁇ Fabaceae such as Glycine max (soybean).
  • Solanaceae such as Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Malus domestica (apple) or Capsicum spp. (pepper), and preferably said plant being Beta vulgaris (beet), Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Glycine max (soybean).
  • this aspect includes the application of a phytosanitary composition, which has moreover been described previously through a use thereof, it is important to note that all of the aforementioned particular characteristics apply. to this aspect.
  • the invention has in particular for the process as described above, in which said phytosanitary composition comprises an effective amount of 10 4 to 10 12 spores / g (of phytosanitary composition), more particularly 10 7 to 10 9 spores / g (of phytosanitary composition), said phytosanitary composition optionally being obtained after a preparation step (eg dilution by suspending or mixing) making it ready for application (eg spreading).
  • the subject of the invention is therefore the process as described above, in which said phytosanitary composition is spread at a rate of 10 to 500 L / ha, in particular 50 to 250 L / ha, especially for aerial spraying; or in an effective amount of 10 10 to 10 14 spores / ha, in particular 10 10 to 10 12 spores / ha, in particular for aerial application of the foliar spray type.
  • 10 to 500 L / ha also means 10 to 400 L / ha, 10 to 300 L / ha, 10 to 200 L / ha, 10 to 100 L / ha , 100 to 500 L / ha, 200 to 500 L / ha, 300 to 500 L / ha, 400 to 500 L / ha, 50 to 500 L / ha, 50 to 250 L / ha or 250 to 500 L / ha.
  • the expression "from 10 10 to 10 14 spores / ha” also means from 10 10 to 10 11 spores / ha, from 10 10 to 10 12 spores / ha, from 10 10 to 10 13 spores / ha, from 10 11 to 10 12 spores / ha, 10 11 to 10 13 spores / ha, 10 11 to 10 14 spores / ha, 10 12 to 10 13 spores / ha, 10 12 to 10 14 spores / ha or 10 13 to 10 14 spores / ha.
  • the subject of the invention is the method as described above, in which said pathogenic fungus belongs to:
  • a species chosen from: R. alpine, R. anomala, R. callae, R. dichotoma, R. ferruginea, R. floccosa, R. fragariae, R. fraxini, R. fumigata, //. lanuginosa, R. leguminicola, //. menthae, //. mucoroides, //. muneratii, R oryzae-sativae, R. pini-insignis, //. quercus, //. rubi, //. rubiginosa, R silvestris, //. solani, //. stahlii, //. tuliparum and //. versicolor, and in particular belongs to the species //.
  • P. ultimum is meant the pathogen responsible for damping-off also called root rot or kPythium rot.
  • R. solani is meant the pathogen responsible for damping-off and / or rhizoctonia.
  • B. cinerea is meant the pathogen responsible for gray rot.
  • the subject of the invention is the process as described above, in which said plant belongs to a family chosen from:
  • Beta vulgaris (beet)
  • ⁇ Apiaceae such as Daucus carota (carrot);
  • Asteraceae such as Lactuca sativa (lettuce) or Gerbera spp. (Gerbera);
  • Cucurbits such as Cuccumis sativus (cucumber);
  • ⁇ Fabaceae such as Glycine max (soybean);
  • Rosaceae such as Pyrus spp. (pear), Prunus spp. (cherry), Fragaria spp. (strawberry), or Rasa spp. (pink) ;
  • Solanaceae such as Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Malus domestica (apple) or Capsicum spp. (pepper) ; and
  • Valerianaceae in particular said plant belongs to a family chosen from:
  • Beta vulgaris (beet)
  • ⁇ Fabaceae such as Glycine max (soybean).
  • Solanaceae such as Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Malus domestica (apple) or Capsicum spp. (pepper), and preferably said plant is Beta vulgaris (beet), Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Glycine max (soybean).
  • the subject of the invention is the method as described above, in which said pathogenic fungus is P. ultimum and / or R. solani and / or B. cinerea and said plant belongs to a family chosen from: ⁇ Amaranthaceae such as Beta vulgaris (beet);
  • ⁇ Fabaceae such as Glycine max (soybean).
  • Solanaceae such as Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Malus domestica (apple) or Capsicum spp. (pepper), and in particular said plant is Beta vulgaris (beet), Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato), Glycine max (soybean).
  • the subject of the invention is the method as described above, in which said pathogenic fungus is P. ultimum and / or R. solani and / or B. cinerea and said plant is Beta vulgaris ( beet), Solanum lycopersicum (tomato), Solanum tuberosum (potato) and / or Glycine max (soybean).
  • the subject of the invention is the process as described above, in which:
  • said pathogenic fungus is P. ultimum and said plant is Beta vulgaris (beet);
  • said pathogenic fungus is P. ultimum and said plant is Solanum lycopersicum (tomato);
  • said pathogenic fungus is P. ultimum and said plant is Solanum tuberosum (potato);
  • said pathogenic fungus is P. ultimum and said plant is and / or Glycine max (soybean);
  • said pathogenic fungus is R. solani and said plant is Beta vulgaris (beet);
  • said pathogenic fungus is R. solani and said plant is Solanum lycopersicum (tomato);
  • said pathogenic fungus is R. solani and said plant is Solanum tuberosum (potato);
  • said pathogenic fungus is A. solani and said plant is Glycine max (soya);
  • said pathogenic fungus is B. cinerea and said plant is Beta vulgaris (beet);
  • - said pathogenic fungus is B. cinerea and said plant is Solanum lycopersicum (tomato); Where - said pathogenic fungus is B. cinerea and said plant is Solanum tuberosum (potato); Where
  • said pathogenic fungus is B. cinerea and said plant is Glycine max (soya).
  • a subject of the invention is also the method as described above, in which said disease is damping-off and / or rhizoctonia and / or gray rot.
  • the invention also relates to the method as described above, in which said disease is damping-off, also called kPythium rot.
  • a subject of the invention is also the method as described above, in which said disease is rhizoctonia rhizoctonia.
  • the invention also relates to the method as described above, in which said disease is gray rot.
  • the invention relates to the method as described above, in which the protection of said plant comprises a step of coating the seed with said phytosanitary composition; and / or the protection of said plant comprises a step of spraying said phytosanitary composition at the time of sowing or at the germination of said plant; and / or the protection of said plant comprises either a preventive application at soil level before sowing said phytosanitary composition with the contribution of organic amendment, or a preventive application at soil level before sowing said phytosanitary composition on the crop former ; and / or the treatment of said plant comprises a step of spraying said phytosanitary composition during different phenological stages of the plant (to prevent a risk of infection of said pathogenic fungus of the whole or part of the plant).
  • FIG. 2 represents the measurement of the growth diameter of R. solani in the presence (bottom gray line) or not (top black line) of the TAL-17 strain (abbreviated TAL).
  • Figure 3 shows photographs of tomato seedlings according to the classification of symptoms due to the pathogen P. ultimum on a scale of 0 to 5. Plants rated 0 are healthy, plants rated 5 are dead, intermediate ratings reflect the appearance of symptoms: leaves yellowed, crown attacked, seedling lying down.
  • Figure 4 shows the observation of symptoms of infection of tomato seedlings by Pythium ultimum after 21 days of culture in the presence or absence of TAL-17 (abbreviated TAL) and in comparison to uninfected controls.
  • TAL-17 abbreviated TAL
  • FIG. 5 represents the observation of the germination of tomato seeds in the presence or not of TAL-17 and in the presence or not of Pythium ultimum.
  • FIG. 6 represents the measurement of the growth diameter of A. dauci in the presence (bottom gray line) or not (top black line) of the TAL-17 strain.
  • FIG. 7 represents the measurement of the growth diameter of F. culmorum in the presence (bottom gray line) or not (top black line) of the TAL-17 strain.
  • Figure 8 represents the measurement of the growth diameter of F. oxysporum f. sp. lycopersici in the presence (bottom gray line) or not (top black line) of the TAL-17 strain.
  • FIG. 9 represents the measurement of the growth diameter of P. exigua in the presence (bottom gray line) or not (top black line) of the TAL-17 strain.
  • Figure 13 represents a photograph of the development of the TAL-17 strain, of two strains of T. atroviride derived from commercial products (Vintec ® and Esquive ® WP) as well as a strain of T. harzanium (isolated by ARD according to the same process as the TAL-17 strain) after 48 h (broken lines) and 72 h (continuous lines) of growth on PDA medium. From left to right: Vintec ® , Esquive ® WP, T. harzanium and TAL-17.
  • Figure 14 represents the measurement of the growth diameter of TAL-17, of two strains of T. atroviride derived from commercial products (Vintec ® and Esquive ® WP) as well as a strain of T. harzanium (isolated by ARD according to the same process than the TAL-17 strain).
  • FIG. 15 represents histograms representing the effect of the strain TAL-17 (abbreviated TaL) on the development of gray rot induced by the pathogen Botrytis cinerea Bel.
  • the TAL-17 strain arriving at the stage of sporulation on a dish was placed in liquid culture with gentle stirring at 1.10 7 sp / mL in 1 ⁇ 2 PDB.
  • the liquid culture of the TAL-17 strain was sprayed / sprayed on the tomato leaves at D0 (immediate effect - Figure 15A) and after 2 days of agitation (effect after 2 days - Figure 15B) 3 hours before the inoculation of the leaves by a deposit of 10 ⁇ L of a solution of Bel spores at 1.10 6 spores / mL.
  • the size of the necrotic lesions was measured on each leaflet from 2 or 3 days after inoculation (dpi for day post inoculation) and this up to a maximum of 7 days.
  • the values represent the mean size of necrotic lesions in 12 leaflets per treatment modality ⁇ standard deviation.
  • FIG 16 is a photograph showing the absence and presence of necrotic lesions induced by B. cinerea Bel on single tomato leaflets (white arrows).
  • the left Petri dish corresponds to the TAL-17 modality (abbreviated TaL) + Bel at 3 dpi and the right dish corresponds to the Bel modality.
  • Figure 17 shows histograms representing the severity of gray rot in whole tomato plants 3 days after inoculation.
  • the TAL-17 strain (abbreviated TaL) arriving at the stage of sporulation on a dish was placed in liquid culture for 2 days with stirring at 1.10 7 sp / mL in 1 ⁇ 2 PDB.
  • the liquid culture of the TAL-17 strain was sprayed / sprayed on whole plants approximately 16 hours before inoculation of the leaves by a deposit of 10 ⁇ l of a solution of Bel spores at 1.10 6 spores / mL.
  • the size of the necrotic lesions was measured on each leaflet from 3 days after inoculation. The values represent the mean size of the necrotic lesions of 4 tomato pots (2 inoculated leaf stages) per treatment modality ⁇ the standard deviation.
  • the leaf sample from the wheat crop was ground and then brought into contact with an infinitely mixed PDA (Potato Dextrose Agar) agar at 50 ° C which contains spores of Fusarium graminearum.
  • PDA Pantotato Dextrose Agar
  • the dish was cultured at 25 ° C. under a light hood. Thus only the strains being able to reproduce in the presence of Fusarium graminearum developed on the dish. Among these strains TAL-17 was present.
  • FIG. 1A Several dual-culture tests (FIG. 1A) with the TAL-17 vs P. ultimum strain were carried out in proximity on PDA medium (Potato Dextrose Agar). 30 ⁇ L containing 1.10 4 spores / mL (sp / mL) of P. ultimum are inoculated in the center of a Petri dish 8.5 cm in diameter, containing PDA medium, and 30 ⁇ L containing 1.10 6 spores / mL of strain TAL-17 2 cm from the left and right end of the Petri dish (see Figure IA).
  • PDA medium Potato Dextrose Agar
  • FIG. 2 Several dual-culture tests (FIG. 2) with the TAL-17 vs R. solani strain were carried out in proximity on PDA medium (Potato Dextrose Agar). 30 ⁇ L containing 1.10 4 spores / mL (sp / mL) of R. solani are inoculated in the center of a Petri dish 8.5 cm in diameter, containing PDA medium, and 30 ⁇ L containing 1.10 6 spores / mL of strain TAL-17 2 cm from the left and right end of the Petri dish. The Petri dishes were incubated at 23-27 ° C under artificial light (24 hours a day) (fluorescent tube F36WT8 / 2084 BriteGro ® ). Macroscopic observations were made every day after inoculation and the growth diameter of R. solani is measured daily for 5 days. Witnesses with R. solani alone were also made.
  • PDA medium Potato Dextrose Agar
  • the strain was cultured on millet for 4 days at 25 ° C.
  • the strain originates from the laboratory: Eidgenôssisches Departement für Boat, ceremonies und Anlagen WBF / Agroscope / Müller-Thurgau-Strasse 29, 8820 Wàdenswil.
  • the strain was cultured on millet for 4 days at 25 ° C. 250 g of millet were placed in 100 mL of water. The concentration was measured by observation on a Malassez cell. The concentration was adjusted to 10 8 spores / mL.
  • the tomato seeds are placed to germinate in a growing medium for 3 weeks in a seedling plate.
  • patho dose 1 (D1), patho dose 2 (D2), and patho dose 2 (D2) + the TAL-17 strain.
  • Each modality is repeated 4 times.
  • the culture medium used is Klassmann ® peat. Each plant is placed in a 1.5 L pot. This contains 400 g of substrate (1 L).
  • the pathogen is mixed with the substrate, two doses are tested: 20 g and 80 g of millet with pathogen / L of substrate (respectively Patho Dl and Patho D2 modalities).
  • pathogen / L of substrate for the modalities with the pathogen, the weight of millet added is subtracted from the quantity of substrate to be added.
  • Pathogen-free modalities contain only substrate.
  • the substrate / millet mixture is homogenized and then placed in the pot. Hydration is carried out by sub-irrigation. A planting hole is prepared in the center of the pot. The tomato seedling is taken out of the seedling plate and placed in the planting hole.
  • the culture is carried out in a phytotron with the following instructions: 12 h in the dark at 20 ° C and 12 h in light at 23 ° C, the substrate is watered at 80% of the max CR in water.
  • Symptoms were rated on a scale of 0 to 5. Plants rated 0 are healthy, plants rated 5 are dead, intermediate ratings reflect the onset of symptoms: yellow leaves, crown attacked, seedling lying down (see Figure 3). .
  • the seedlings treated with strain TAL-17 ( TAL) only are healthy, with yellowing of the cotyledons as in the control modality.
  • TAL-17 TAL
  • Adding the pathogen to the two doses tested causes the onset of strong symptoms, with dead seedlings in both doses tested.
  • the modality treated with both the pathogen at dose 2 (D2) and with the TAL-17 strain shows healthier seedlings than the modality with the pathogen at dose 2 (D2) without the TAL-17 strain.
  • the objective of this trial is to evaluate the efficacy of strain TAL-17 in limiting damping-off in tomato seeds treated with Pythium ultimum.
  • Fong + Pu Plants treated with a fungicide and inoculated with P. ultimum
  • the strains are cultured on PDA then the dishes are used to prepare spore solutions.
  • the seeds are soaked for 1 hour: in water for modalities 1 and 2, in solutions of spores of the TAL-17 strain (BCA 2D1) for modalities 4 and 5, in a fungicide solution for modality 3 (Previcur ENERGY ® : mixture of fosetyl aluminum / propamocarb).
  • the seeds are soaked in a solution of Pythium ultimum spores at a concentration of 10 7 spores / ml.
  • the seeds are placed together in filter paper which is rolled up on itself. These rollers are placed in water to ensure good hydration of the seedlings throughout the test. Each modality is represented by 3 rolls of 5 seeds. After 15 days of culture, the rolls are unrolled for observation of the germination of the seeds. Results
  • the fungicidal treatment has a positive effect on the germination of seeds.
  • Treatment with the TAL-17 strain had a positive effect on germination at the two concentrations tested.
  • An internal control standard is also produced with genomic DNA extracted from the strain of the invention, which has been serially diluted.
  • lycopersici or Phoma exigua in the center of a Petri dish 8.5 cm in diameter, containing PDA medium, and 30 pL containing 1.10 6 spores / mL of the TAL-17 strain 2 cm from the left and right extremity of the Petri dish.
  • the Petri dishes were incubated at 23-27 ° C under artificial light (24 hours a day) (fluorescent tube F36WT8 / 2084 BriteGro ® ). Macroscopic observations were made daily after inoculation and growth diameter of Alternaria dauci, Fusarium culmorum, Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici and Phoma exigua is measured daily.
  • witnesseses with Alternaria dauci, Fusarium culmorum, Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici and Phoma exigua alone have also been produced.
  • strain TAL-17 The ability of strain TAL-17 to limit the development of three different phytopathogens (P. ultimum, R. solani and Fusarium oxysporum f. Sp. Lycopersici) was compared with that of other strains of Trichoderma spp. during a test under controlled conditions. Protocol
  • T. atroviride from commercial products (Vintec ® and Esquive ® WP) as well as a strain of T. harzanium (isolated by A RD according to the same method as strain TAL-17) us Pythium ultimum, Rhizoctonia solani and Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici were carried out in proximity on PDA medium (Potato Dextrose Agar). 30 ⁇ L containing 1.10 4 spores / mL (sp / mL) of Pythium ultimum, Rhizoctonia solani or Fusarium oxysporum f. sp.
  • the Petri dishes were incubated at 23-27 ° C under artificial light (16h / 8h) (fluorescent tube F36WT8 / 2084 BriteGro ® ). Controls with Pythium ultimum, Rhizoctonia solani and Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici as well as with TAL-17, the two strains of T.
  • PICP (DI - D2) / D1 x 100, where DI corresponds to the diameter of the pathogen and D2 to that of the pathogen in the presence of l one of the strains of Trichoderma spp. studied.
  • the presence of the TAL-17 strain leads to a rapid inhibition of the growth of the pathogen P. ultimum of the order of 20%, 80% and 95% after respectively 2, 4 and 6 days of growth (see Figure 10).
  • the TAL-17 strain demonstrates superior efficacy against the pathogen P. ultimum. Indeed, the results obtained with the TAL-17 strain are statistically different from those of the three other strains of Trichoderma spp. tested (two strains of T. atroviride from the products Esquive ® WP and Vintec ® and the strain of T. harzanium). It is observed that the presence of the TAL-17 strain leads to an inhibition of the growth of the pathogen R.
  • the TAL-17 strain leads to an inhibition of the pathogen R. solani of the order of 40%, a result statistically different only from the strain derived from the commercial product Esquive ® WP.
  • the TAL-17 strain exhibits at least 5% more efficacy than the other two strains of Trichoderma spp. tested (the T. atroviride strain from Vintec ® products and the T. harzanium strain).
  • the percentage inhibition of the growth of the pathogen A. solani varies from 65 to 85% depending on the strains studied, the highest percentage of inhibition being that due to the TAL-17 strain.
  • the presence of the TAL-17 strain leads to an inhibition of the growth of the pathogen F. oxysporum f. sp. lycopersici on the order of 15% more from the second day compared to the three other strains of Trichoderma spp. tested (see Figure 12).
  • the TAL-17 strain demonstrates similar efficacy to the strain derived from the commercial product Esquive ® WP while the other two strains of Trichoderma spp. (the T. atroviride strain from Vintec ® products and the T. harzanium strain) show lower activity against the pathogen A. oxysporum f. sp. lycopersici of the order of 8 to 14%.
  • the presence of the TAL-17 strain leads to an inhibition of the growth of the pathogen of the order of 5 to 10% more depending on the strains of Trichoderma spp. studied.
  • the percentages of inhibition obtained with the pathogen F. oxysporum f. sp. lycopersici are lower than with the pathogens P. ultimum and R. solani, as are the differences between the strains of Trichoderma spp. tested (the TAL-17 strain, the two strains of T. atroviride derived from the Esquive ® WP and Vintec ® products and the strain of T. harzanium), are less marked.
  • the minimally invasive character of the pathogen F. oxysporum f. sp. lycopersici. can explain this.
  • the development of the 4 strains of Trichoderma spp. tested alone was studied (see Figure 14).
  • the strain of the invention, TAL-17 exhibits a development similar to the strain derived from the commercial product Vintec ® while the growth of the other two strains of Trichoderma spp. (strain of T. atroviride derived from the product Esquive ® WP and T. harzanium), the development of which does not differ, is much lower than that of the TAL-17 strain. Finally, it emerges from the tests carried out that the presence of the TAL-17 strain led to an inhibition of the growth of the pathogens P. ultimum, R. solani and Fusarium oxysporum f. sp.
  • the strain of the invention has demonstrated greater efficacy than other Trichoderma spp. studied against the three pathogens P. ultimum, R. solani and F. oxysporum f. sp. lycopersici from the first days of growth, which was also observed throughout the duration of the tests carried out.
  • a faster mycelial development as well as a sporulation (asexual reproduction) of the TAL-17 strain was also observed, which gives it a definite advantage in the fight against the three pathogens P. ultimum, R. solani and F. oxysporum f. sp. Lycopersici (space competition).
  • Clodano variety is a fast growing variety suitable for greenhouse cultivation. In addition, it is the crop variety most affected by gray rot.
  • the sowings were carried out in plates of 50 seeds in the substrate TS3 404, Klasman.
  • the plates are placed in a climatic chamber at 25 ° C with a photoperiod of 16h until the seeds have germinated, then the seedlings were placed in a greenhouse under a natural photoperiod at 18 ° C at night and 23 ° C during the day. .
  • the seedlings were repotted in 3L pots in the same potting soil and the same growing conditions as specified previously until they reached the 5/7 leaf developed stage (5-6 weeks maximum). Two to three times a week the seedlings and plants were watered with distilled water.
  • the plant pathogen Botrytis cinerea Bel.
  • the Bel strain was cultured on Potato Dextrose Agar (PDA) at room temperature 20-23 ° C, under indirect ambient light until the stage of sporulation (for a maximum of 15 days). Two weeks before the start of the tests, the Bel strain was systematically returned to culture on PDA from cryostocks stored at -20 ° C (mixture of spores + mycelium in phosphate buffer, 20% glycerol). When the sporulation stage was reached, a spore solution was prepared in 1 ⁇ 4 Potato Dextrose Broth (PDB) and the concentration adjusted to 1.10 5 or 1.10 6 spores / mL depending on the tests.
  • PDA Potato Dextrose Agar
  • Trichoderma atroviride Three strains of Trichoderma atroviride were tested, that of the TAL-17 invention and two others from commercial products (Esquive ® and Vintec ® ). They were cultured on PDA medium at 25 ° C. with a 16h day / 8h night cycle. They were subcultured every week by studs and / or freshly thawed from cryostocks stored at -20 ° C. (PDB mixture, 20% glycerol).
  • a spore suspension was prepared in 1 ⁇ 2 PDB at a concentration of 1.10 7 spores / mL.
  • the TAL-17 strain if necessary, was also put back into liquid culture for 40-48 hours (mixture comprising the spores, the mycelium + a set of metabolites).
  • a liquid culture of TAL-17 was prepared in an Erlenmeyer flask in PDB 1 ⁇ 2 at 1.10 7 spores / mL and stirred gently at ambient temperature and indirect light for 40 at 48 h max (preparation of a culture of liquid TAL-17 with its metabolites).
  • each leaflet was sprayed with the Trichoderma solution at 1.10 7 spores / mL using a small hand-held sprayer (1 spray on each side of the leaflet). The leaflets were then placed on 0.8% agar medium in a square Petri dish at the rate of 4 leaflets / Petri dish. The Petri dishes with the half-open lid were left under PSM for 3 hours before inoculation of the leaflets with the Bel strain. Each treatment modality comprises on average 8 to 12 leaflets or 2 to 3 Petri dishes.
  • the pathogenic strain Bel was introduced in the form of a drop of 10 ⁇ L at 1.10 3 , 1.10 5 or 1.10 6 spores / mL deposited on the upper surface of the leaf, at the rate of one drop per leaflet.
  • the Petri dishes were put in airtight and transparent plastic bags containing 1-2 cotton pads soaked in distilled water to maintain saturated humidity favoring the development of the pathogen.
  • the whole was incubated flat in a Phytotron at 20 ° C with 12h day and 12h of darkness.
  • the tomatoes grown in the greenhouse were placed approximately 7 hours before the treatment with the TAL-17 strain in climatic chambers at 23 ° C. and were slightly humidified.
  • the methods tested were as follows:
  • Chamber 1 4 control plants (untreated, uninoculated);
  • Chamber 2 4 plants inoculated with the strain Botrytis cinerea Bel at 1.10 6 spores / mL
  • Chamber 3 4 plants treated with the TAL-17 strain at 1.10 7 spores / mL (liquid culture of TAL-17 for 48 hours max);
  • Chamber 4 4 plants treated with TAL-17 at 1.10 7 spores / mL and inoculated with the strain Botrytis cinerea Be 1 at 1.10 6 spores / mL.
  • the liquid solution of TAL-17 (the entire liquid culture in Erlenmeyer flasks for 40-48 hours) was supplied by manual spraying of the aerial parts without going to the point of runoff.
  • the tomatoes were incubated for 16h max before adding Bel at 23 ° C, 80-95% humidity, the incubation cycle was started with 8h of darkness. Control plants were sprayed with 1 ⁇ 2 PDB.
  • the leaflets were inoculated with the Bel strain by adding 10 ⁇ L of a spore solution at 1.10 6 sp / mL per leaflet, and this over 2 leaf stages ( inoculation of 5 leaflets / leaf stage).
  • the tomatoes were incubated in humid rooms at 19 ° C. with 8 hours of darkness and 16 hours of daylight, in saturated humidity for 3 days. After 3 days the diameter of the necrotic lesions was measured daily and up to 5 days / mst-inoculation maximum.
  • the effect of the TAL-17 strain after 2 days of culture is therefore greater, in particular due to its re-growth (production of spores) and the synthesis of metabolites.
  • a maximum biocontrol effect of the TAL-17 strain was observed in response to a concentration of 1.10 5 sp / mL in Bel. Indeed from 3 dpi was observed a reduction of 100% for the concentration at 1.10 5 sp / mL followed by a reduction of the order of 66.67% for the concentration at 1.10 3 sp / mL in Bel and 32 , 35% for the last concentration. This effect is retained for up to 7 days of reading.
  • the tomato leaves were treated with the TAL-17 strain after 2 days of liquid culture in Erlens and the inoculum of the other two strains was prepared directly from a Petri dish arriving at the sporulation stage (i.e. around 8 days). .
  • the values represent the mean size of the necrotic lesions of 12 leaflets by treatment modality ⁇ the standard deviation as well as the percentage reduction in symptoms on the leaf.

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Abstract

La présente invention concerne un agent de biocontrôle et son utilisation pour la lutte contre des maladies fongiques de plantes.

Description

NOUVEL AGENT DE BIOCONTROLE ET SON UTILISATION POUR LA LUTTE CONTRE DES MALADIES FONGIQUES DE PLANTES
DOMAINE DE L’INVENTION
La présente invention concerne un nouvel agent de biocontrôle et son utilisation pour la lutte contre des maladies fongiques de plantes.
ART ANTERIEUR
La fonte de semis (également appelée pourriture des racines) est une maladie des plantes causée notamment par l’agent pathogène Pythium spp. (champignon). L’un des principaux symptômes visibles est un pourrissement des jeunes pousses en cours de germination. En agissant sur l’émergence de la plante, cette maladie complexe permet ainsi l’installation d’autres champignons phytopathogènes comme Phytophthora spp. ou Rhizoctonia spp., eux-mêmes responsables de la fonte de semis. La fonte du semis, laquelle touche entre autres, la culture de la tomate (famille des Solanacées), de la pomme de terre (famille des Solanacées), de la betterave (famille des Amaranthacées) et du soja (famille des Fabacées), constitue de ce fait un problème agronomique majeur à la fois en serre de culture et en plein champ, avec des conséquences économiques élevées.
Le genre Pythium spp. est représenté par plus de 130 espèces parmi lesquelles peuvent être citées : P. acanthicum , P. afertile , P. aphanidermatum , P. aquatile , P. deharyanum , P. elongatum , P. gracile , P. imperfectum , P. inflatum , P. intermedium , P. irregulare , P. marinum , P. maritimum , P. middletoni , P. monospermum , P. myriotylum , P. ostracodes, P. pulchrum , P. salinum , P. thallassium et P. ultimum. Le genre Rhizoctonia spp., également responsable du rhizoctone brun, est quant à lui représenté par plus d’une vingtaine d’espèces parmi lesquelles peuvent être citées : R. alpine, R. anomala, R. callae, R. dichotoma, R. ferruginea, R. floccosa, R. fragariae, R. fraxini, R. fumigata, R. lanuginosa, R. leguminicola, R. menthae, R. mucoroides, R. muneratii, R. oryzae-sativae, R. pini-insignis, R. quercus, R. rubi, R. rubiginosa, R. silvestris, R. solani, R. stahlii, R. tuliparum et R. versicolor.
Ces deux genres ( Pythium et Rhizctonia ) ont des habitats très variés (environnements terrestres ou aquatiques, sols cultivés ou jachères, etc) et ont une forte diversité d’hôtes. C’est pourquoi ils sont mondialement connus pour être des pathogènes généralistes qui peuvent causer des dégâts étendus et dévastateurs des systèmes racinaires et sont connus pour être extrêmement difficile à contrôler et à éradiquer.
Même si des fongicides ont montré des résultats positifs pour contrôler la fonte de semis causée par Pythium spp. et/ ou Rhizoctonia spp. , la phytotoxicité de ces produits et les éventuels résidus sont de réels problèmes induisant un impact environnemental et des risques pour la santé humaine. L’apparition de résistance à ces molécules est également un problème.
La pourriture grise est une maladie causée par l’agent pathogène Botrytis cinerea. Ce champignon est capable de se développer sur un très grand nombre de plantes hôtes dont la tomate (famille des Solanacées), aussi bien en plein champs que sous abris. En raison de la forte humidité en serres, facteur favorable au développement du pathogène, d’importantes attaques vont toucher les cultures. B. cinerea peut infecter les graines ainsi que plusieurs organes, à savoir la tige, les feuilles, les fleurs ainsi que les fruits, en faisant un pathogène d’une grande importance économique. Quel que soit les parties de la plante attaquées par le pathogène, les tissus se couvrent d’un feutrage gris, caractéristique d’une attaque par B. cinerea. Le principal moyen de lutte contre la pourriture grise demeure comme pour la fonte des semis, l’usage de fongicides. Cependant, des souches ont développées suite à l’usage répété de produits phytosanitaires, une résistance envers ces produits.
Dans un souci de respect de l’environnement, il a alors été développé des moyens de lutte biologique naturelle à l’aide de microorganismes. Cette dernière, également appelée lutte microbiologique directe, consiste à introduire des antagonistes microbiens spécifiques dans le sol ou sur le matériel végétal. Ces antagonistes, également appelés agents de lutte biologique ou BCA ( Biological Control Agent ), peuvent interférer avec la croissance et/ou la survie des agents pathogènes permettant ainsi de les contrôler. Pour ce faire, les agents de lutte biologique ou BCA peuvent contrôler les pathogènes cibles grâce à un ou plusieurs modes d’action :
- la compétition laquelle peut avoir lieu entre le BCA et l’agent pathogène pour l’oxygène, pour l’espace, ou encore pour les nutriments ;
- l’antibiose. laquelle correspond aux interactions impliquant au moins un composé diffusible de faible masse moléculaire ou un antibiotique produit par un microorganisme qui inhibe la croissance d’un autre microorganisme; - le parasitisme et la production d’enzymes hydrolytiques et/ou de métabolites antibiotiques au détriment d’un autre organisme hôte ; et/ou
- l’induction de résistance chez la plante hôte (« élicitation ») à l’image des bactéries de la rhizosphère, connues sous le nom de PGPR {Plant Growth Promoting Rhizobacteria), lesquelles sont capables d’induire chez la plante une résistance systémique induite (ISR, Induced Systemic Résistance) qui permet d’accroître la résistance aux pathogènes grâce à un phénomène de potentialisation (ou priming ), qui correspond à un état de veille permettant une réponse immunitaire plus rapide et plus intense de la plante.
Le genre Trichoderma comprenant diverses espèces de champignons susceptibles d’être des agents de biocontrôle, leur mode d’action a fait l’objet de nombreux travaux. Depuis, le genre Trichoderma est connu pour son activité de biocontrôle vis-à-vis des agents pathogènes telluriques (vivants dans le sol) mais avec une faible compétitivité au niveau de la rhizosphère des plantes (zone sol-racine).
BREF APERÇU
Dans ce contexte de lutte contre des maladies fongiques, telles que la fonte de semis et/ou le rhizoctone brun et la pourriture grise, un premier but de l’invention consiste donc à la mise à disposition d’une souche efficace et son utilisation comme un agent de lutte biologique (ou agent de biocontrôle). Un second but de l’invention est de fournir des compositions phytosanitaires pour la prévention et/ou le traitement de maladies fongiques de végétaux. Un troisième but de l’invention est également de fournir des compositions phytosanitaires d’enrobage où, en association avec une semence de plante, la souche de l’invention est utilisée comme un agent d’accélération de la germination de ladite semence. Un autre but de l’invention est la mise à disposition des procédés permettant de fabriquer lesdites compositions et de mettre en œuvre la prévention et/ou le traitement de maladies fongiques de végétaux, et l’accélération de la germination.
DESCRIPTION DETAILLEE
Selon un premier aspect de l’invention, celle-ci a pour objet la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM ; Institut Pasteur, 25-28 rue du Docteur Roux, F-75724 PARIS CEDEX 15) sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants. De manière surprenante, cette souche de Trichoderma atroviride TAL-17 développée par les inventeurs possède d’excellentes propriétés stimulatrices de croissance, des propriétés antagonistes utiles en agriculture ainsi qu’une grande stabilité en matière de viabilité. De fait, elle constitue un agent de biocontrôle idéal pour lutter efficacement contre des maladies fongiques de plantes telles que la fonte de semis et/ou le rhizoctone brun.
Par « souche isolée », on entend la culture d’un microorganisme unique qui a été isolée à partir de différents microorganismes présents sur et/ou dans les tissus d’un fragment de feuille de blé cultivé en champs.
Par « un de ses mutants », on entend des souches mutantes fonctionnelles obtenues par mutations ou manipulations génétiques d’une souche de référence, laquelle dans le contexte de l’invention est la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333. Par « souches mutantes fonctionnelles », on entend que ces mutants conservent les mêmes propriétés physiologiques que la souche de référence ( i.e . TAL-17) voire peuvent présenter des propriétés physiologiques améliorées notamment pour les mutants surexprimant des gènes impliqués dans la synthèse de métabolites d’intérêts (e.g. amélioration des capacités de biocontrôle). Aussi, un des objets de l’invention concerne une souche isolée de Trichoderma atroviride , ladite souche isolée étant une souche mutante de la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333. Un des autres objets de l’invention concerne également la surproduction de métabolites dans la matrice de production par une souche isolée de Trichoderma atroviride dont le potentiel de biosynthèse de métabolites a été amélioré par manipulations génétiques, ladite souche isolée étant une souche mutante de la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333.
Par « un de ses mutants », on entend également et ce, de manière alternative ou cumulative, des souches mutantes fonctionnelles ( cf supra) lesquelles possèdent une identité de séquence d’au moins 98% avec la séquence SEQ ID NO : 5 du gène ech42 de la souche TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333. Par « une identité de séquence d’au moins 98% avec la séquence SEQ ID NO : 5 », on entend une identité de séquence d’au moins 98,5%, d’au moins 99% voire d’au moins 99,5% avec la séquence SEQ ID NO : 5 représentée par la séquence d’acide nucléique suivante : sachant qu’au sens de l’Invention, l’identité de séquence est mesurée par les outils classiques de comparaison de séquences connues de l’homme du métier tels que les algorithmes de la plateforme BLAST ou le programme MatGat (Campanella, Bitincka and Smalley, 2003).
Par ailleurs et aux fins de l’Invention, il est entendu que les expressions « la souche de l’invention », « la souche isolée de l’invention », « la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention », « la souche isolée TAL-17 et/ou un de ses mutants », « la souche de l’invention et/ou un de ses mutants » et « la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention et/ou un de ses mutants » sont interchangeables et désignent toutes la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants. De plus, par « la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 [...] et/ou un de ses mutants », on entend que l’invention concerne soit la souche isolée TAL-17, soit un de ses mutants, soit la souche TAL-17 en combinaison avec un de ses mutants. L’ensemble de ces souches (i.e. TAL-17 et ses mutants), peuvent par ailleurs être facilement identifiées via la méthode dite de Polymerase Chain Reaction en temps réel (qPCR). Les inventeurs ont en effet développé des outils spécifiques de celles-ci à savoir, une sonde TaqMan® GS285741-P1 et un couple d’amorces nucléotidiques associé GS285741-F1 et GS285741-R1 ( cf. Tableau 1), lesquelles permettent d’amplifier une séquence spécifique aux souches de l’invention {cf. Tableau 2).
Tableau 1 : Amorces nucléotidiques (Fl et RI) et Sonde TaqMan® (PI)
FAM : 6-carboxyfluorescéine, MGB : minor groove binder
Tableau 2 : Séquence cible des oligonucléotides et de la sonde TaqMan® chez la souche TAL-17 et/ou ses mutants
Selon ce même aspect, invention a également pour objet la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention telle que décrite ci-dessus et/ou un de ses mutants sous forme de spores, lesdites spores étant produites par fermentation en milieu solide ou liquide et pouvant être sous forme purifiée ou dans la matrice de production, ladite matrice de production étant solide ou liquide.
Par « sous forme de spores », on entend sous forme de conidiospores ou chlamydospore, (plus particulièrement conidiospores) assurant la fonction de multiplication asexuée chez le champignon.
Par « fermentation en milieu solide (FMS) », on entend tout procédé permettant le développement du micro-organisme à la surface et/ou à l’intérieur d’une matrice de production poreuse solide et humidifiée, en absence d’eau libre.
Par « fermentation liquide », on entend tout procédé permettant le développement du micro organisme à l’aide d’une matrice de production avec présence d’eau libre. Par « matrice de production », on entend tout substrat naturel et/ou synthétique, qui permet le développement du micro-organisme et induit la production de biomasse, et/ou d’enzymes, et/ou de métabolites primaires et/ou secondaires ( e.g . le pyrone 6-pentyl-2H-pyran-2-one). Des exemples de familles d’enzyme ou d’enzyme produites par le champignon sont des protéases, des chitinases et la bêta-l,3-glucanase.
Par « spores [...] sous forme purifiées », on entend les spores concentrées suite à l’élimination de la majeure partie du reste de la matrice après production n’ayant pas servi à la formation des spores, avec l’aide d’un procédé de tamisage par exemple.
Par « spores [...] dans la matrice de production », on entend les spores restées dans la matrice de production à l’issue du procédé de fabrication, sans étape de purification.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention telle que décrite ci-dessus en tant qu’ agent de lutte biologique.
Par « agent de lutte biologique », on entend qu’une souche de Trichoderma atroviride selon l’invention peut interférer avec la croissance et/ou la survie des agents pathogènes permettant ainsi de les contrôler et ce, via l’un ou plusieurs des modes d’action décrits précédemment (e.g. via le développement de sa biomasse et/ou sa production d’enzymes et/ou de métabolites secondaires). Par exemple, un des moyens de mettre en évidence qu’une souche de Trichoderma atroviride selon l’invention est un agent de lutte biologique est la réalisation d’un test Dual culture sur milieu de culture en boîte de Pétri. Plus précisément par « test Dual culture », on entend un test sur boîte de Pétri en laboratoire sur milieu de culture, où la souche du microorganisme, agent de lutte biologique, et la souche du pathogène sont mises en culture sur la même boîte afin d’observer l’effet d’une souche sur une autre au cours du temps et vice versa.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention telle que décrite ci-dessus en tant qu’ agent antifongique de végétaux. Par « agent antifongique de végétaux », on entend qu’une souche de Trichoderma atroviride selon l’invention est capable de lutter contre les champignons phytopathogènes. Par exemple, un des moyens de mettre en évidence qu’une souche de Trichoderma atroviride selon l’invention est un agent antifongique de végétaux est la réalisation d’un test Dual culture.
Il convient notamment de noter que parmi les champignons phytopathogènes contre lesquels une souche de Trichoderma atroviride selon l’invention a un véritable effet inhibiteur on retrouve :
- divers champignons telluriques responsables de la fonte des semis comme les champignons des genres Pythium (e.g. P. ultimum ), Rhizoctonia (e.g. R. solani ), Alternaria (e.g. A. dauci notamment chez la carotte), Fusarium (e.g. F. culmorum notamment chez les céréales et F. oxysporum notamment chez la tomate) et Phoma (e.g. P. exigua notamment chez la pomme de terre) ; et
- l’agent pathogène Botrytis (e.g. B. cinerea ), responsable de la pourriture grise chez la tomate notamment.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a donc pour objet la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention telle que décrite ci-dessus en tant qu’ agent de lutte biologique, en particulier en tant qu’ agent antifongique de végétaux dirigé contre un champignon pathogène pour végétaux choisi parmi les champignons des genres Pythium , Rhizoctonia , Alternaria , Fusarium , Phoma et Botrytis.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention telle que décrite ci-dessus en tant qu’ agent de lutte biologique, en particulier en tant qu’ agent antifongique de végétaux dirigé contre un champignon pathogène pour végétaux :
- du genre Pythium spp ., ledit champignon pathogène appartenant notamment à une espèce choisie parmi : P. acanthicum , P. afertile , P. aphanidermatum , P. aquatile , P. deharyanum , P. elongatum , P. gracile , P. imperfectum , P. inflatum , P. intermedium , P. irregulare , P. marinum , P. maritimum , P. middletoni , P. monospermum , P. myriotylum , P. ostracodes, P. pulchrum , P. salinum , P. thallassium et P. ultimum , et en particulier ledit champignon pathogène étant P. ultimum ; et/ou
- du genre Rhizoctonia spp. , ledit champignon pathogène appartenant notamment à une espèce choisie parmi : R. alpine , R. anomala , R callae , R. dichotoma , R. ferruginea, R floccosa , //. fragariae , //. fraxini , //. fumigata , //. lanuginosa, R. leguminicola , //. menthae , //. mucoroides , //. muneratii, R oryzae-sativae, R. pini-insignis , //. quercus , //. rubi , //. rubiginosa, R silvestris , //. solani , //. stahlii , //. tuliparum et //. versicolor, et en particulier ledit champignon pathogène étant //. solani ; et/ou
- du genre Botrytis spp., et en particulier le dit champignon pathogène étant cinerea.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention telle que décrite ci-dessus en tant qu’ agent de lutte biologique, en particulier en tant qu’ agent antifongique de végétaux dirigé contre un champignon pathogène pour végétaux du genre Pythium spp. , ledit champignon pathogène appartenant notamment à une espèce choisie parmi : I\ acanthicum , I\ afertile , I\ aphanidermatum , I\ aquatile , I\ debaryanum , I\ elongatum , I\ gracile , I\ imperfectum , I\ inflatum , I\ intermedium , I\ irregulare , I\ marinum , I\ maritimum , P. middletoni , I\ monospermum , I\ myriotylum , I\ ostracodes, P. pulchrum , I\ salinum , I\ thallassium et // ultimum , et en particulier ledit champignon pathogène étant/1, ultimum.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention telle que décrite ci-dessus en tant qu’ agent de lutte biologique, en particulier en tant qu’ agent antifongique de végétaux dirigé contre un champignon pathogène pour végétaux du genre Rhizoctonia spp. , ledit champignon pathogène appartenant notamment à une espèce choisie parmi : //. alpine , //. anomala , //. callae , //. dichotoma , //. ferruginea , //. floccosa , //. fragariae , //. fraxini , //. fumigata , //. lanuginosa , //. leguminicola , //. menthae , //. mucoroides , //. muneratii , //. oryzae- sativae , //. pini-insignis , //. quercus , //. rubi , //. rubiginosa , //. silvestris , //. solani , //. stahlii , //. tuliparum et //. versicolor , et en particulier ledit champignon pathogène étant //. solani. Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention telle que décrite ci-dessus en tant qu’agent de lutte biologique, en particulier en tant qu’agent antifongique de végétaux dirigé contre un champignon pathogène pour végétaux du genre Botrytis spp ., en particulier le dit champignon pathogène étant B. cinerea.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention telle que décrite ci-dessus en tant qu’agent de lutte biologique, en particulier en tant qu’agent antifongique de végétaux dirigé contre un champignon pathogène pour végétaux :
- du genre Pythium spp., ledit champignon pathogène étant P. ultimum ; et/ou
- du genre Rhizoctonia spp., ledit champignon pathogène étant R. solani ; et/ou
- du genre Botrytis spp., le dit champignon pathogène étant B. cinerea.
Avantageusement, l’invention a pour objet la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention telle que décrite ci-dessus en tant qu’agent de lutte biologique, en particulier en tant qu’agent antifongique de végétaux dirigé contre un champignon pathogène pour végétaux du genre Pythium spp., ledit champignon pathogène étant P. ultimum.
Avantageusement, l’invention a également pour objet la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention telle que décrite ci-dessus en tant qu’agent de lutte biologique, en particulier en tant qu’agent antifongique de végétaux dirigé contre un champignon pathogène pour végétaux du genre Rhizoctonia spp., ledit champignon pathogène étant/?, solani.
Avantageusement, l’invention a également pour objet la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention telle que décrite ci-dessus en tant qu’agent de lutte biologique, en particulier en tant qu’agent antifongique de végétaux dirigé contre un champignon pathogène pour végétaux du genre Botrytis spp., ledit champignon pathogène étant B. cinerea.. Selon un deuxième aspect de l’invention, celle-ci a pour objet l’utilisation d’une souche isolée de Trichoderma atroviride dans la prévention et/ou le traitement d’infection chez un végétal provoquée par un champignon pathogène choisi parmi les champignons des genres Pythium , Rhizoctonia, Alternaria, Fusarium , Phoma et Botrytis, ladite souche isolée de Trichoderma atroviride étant la souche TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants.
En particulier, l’invention a pour objet l’utilisation d’une souche isolée de Trichoderma atroviride dans la prévention et/ou le traitement d’infection chez un végétal provoquée par un champignon pathogène du genre Pythium spp. et/ou du genre Rhizoctonia spp. et/ou du genre Botrytis spp. , ladite souche isolée de Trichoderma atroviride étant la souche TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet l’utilisation telle que décrite ci- dessus de la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention (i.e. la souche TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants), dans laquelle ledit champignon pathogène appartient à :
- une espèce choisie parmi : P. acanthicum , P. afertile , P. aphanidermatum , P. aquatile , P. deharyanum , P. elongatum , P. gracile , P. imperfectum , P. inflatum , P. intermedium , P. irregulare , P. marinum , P. maritimum , P. middletoni , P. monospermum , P. myriotylum , P. ostracodes, P. pulchrum , P. salinum , P. thallassium et P. ultimum , et en particulier appartient à l’espèce P. ultimum ; et/ou
- une espèce choisie parmi : R. alpine , R. anomala , R. callae , R. dichotoma , R. ferruginea, R. floccosa , R. fragariae , R. fraxini , R. fumigata , R. lanuginosa, R. leguminicola , //. menthae , //. mucoroides , //. muneratii, R oryzae-sativae, R. pini-insignis , //. quercus , //. rubi , //. rubiginosa, R silvestris , //. solani , //. stahlii , //. tuliparum et //. versicolor, et en particulier appartient à l’espèce i?. solani ; et/ou l’espèce B. cinerea. Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet Γ utilisation telle que décrite ci- dessus de la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention, dans laquelle ledit champignon pathogène appartient au genre Pythium spp. et à une espèce choisie parmi : P. acanthicum , P. afertile , P. aphanidermatum , P. aquatile , P. debaryanum , P. elongatum , P. gracile , P. imperfection, P. inflatum , P intermedium , P irregulare , P marinum , P. maritimum , P middletoni , P monospermum , P myriotylum , P ostracodes, P. pulchrum , P salinum , P thallassium et P’. ultimum , et en particulier ledit champignon pathogène est P . ultimum.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet I' utilisation telle que décrite ci- dessus de la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention, dans laquelle ledit champignon pathogène appartient au genre Rhizoctonia spp. et à une espèce choisie parmi : R. alpine , R. anomala , R. callae , R. dichotoma , R. ferruginea , R. floccosa , R. fragariae , R. fraxini , R. fumigata , R. lanuginosa, R. leguminicola , R. menthae , R mucoroides , R. muneratii, R. oryzae-sativae, R. pini-insignis , R. quercus , R. rubi , R. rubiginosa, R. silvestris , R. solani , R. stahlii , R. tuliparum et R. versicolor, et en particulier ledit champignon pathogène est R solani.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet l’utilisation telle que décrite ci- dessus de la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention, dans laquelle ledit champignon pathogène appartient au genre Botrytis spp. et en particulier ledit champignon pathogène est B. cinerea.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet I' utilisation telle que décrite ci- dessus de la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention, dans laquelle ledit champignon pathogène est P. ultimum et/ou R. solani et/ou B. cinerea.
Avantageusement, l’invention a pour objet l’utilisation telle que décrite ci-dessus de la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention, dans laquelle ledit champignon pathogène est P. ultimum. Avantageusement, l’invention a également pour objet l’utilisation telle que décrite ci-dessus de la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention, dans laquelle ledit champignon pathogène est R. solani. Avantageusement, l’invention a également pour objet utilisation telle que décrite ci-dessus de la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention, dans laquelle ledit champignon pathogène est B. cinerea.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet 1’utilisation telle que décrite ci- dessus de la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention, dans laquelle ledit végétal appartient à une famille choisie parmi :
les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ;
les Apiacées telles que Daucus carota (carotte) ;
les Astéracées telles que Lactuca sativa (laitue) ou Gerbera spp. (Gerbera) ;
les Brassicacées ;
les Chénopadiacées ;
les Cucurbitacées telles que Cuccumis sativus (concombre) ;
les Fabacées telles que Glycine max (soja) ;
les Liliacées ;
les Primulacées telles que Cyclamen spp. (cyclamen) ;
les Rosacées telles que Pyrus spp. (poire), Prunus spp. (cerise), Fragaria spp. (fraise), ou Posa spp. (rose) ;
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron) ; et
les Valérianacées, en particulier ledit végétal appartient à une famille choisie parmi :
les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ;
les Fabacées telles que Glycine max (soja) ; et
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron), et de préférence ledit végétal est Beta vulgaris (betterave), Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Glycine max (soja).
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet l’utilisation telle que décrite ci- dessus de la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention, dans laquelle ledit végétal appartient à une famille choisie parmi :
les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ; les Fabacées telles que Glycine max (soja) ; et
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron), et en particulier ledit végétal est Beta vulgaris (betterave), Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Glycine max (soja).
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet l’utilisation telle que décrite ci- dessus de la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention, dans laquelle ledit végétal est Beta vulgaris (betterave), Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre) et/ou Glycine max (soja).
Avantageusement, l’invention a pour objet l’utilisation telle que décrite ci-dessus de la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention, dans laquelle ledit végétal est Beta vulgaris (betterave). Avantageusement, l’invention a également pour objet l’utilisation telle que décrite ci-dessus de la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention, dans laquelle ledit végétal est Solanum lycopersicum (tomate). Avantageusement, l’invention a également pour objet l’utilisation telle que décrite ci-dessus de la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention, dans laquelle ledit végétal est Solanum tuberosum (pomme de terre). Avantageusement, l’invention a également pour objet l’utilisation telle que décrite ci-dessus de la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention, dans laquelle ledit végétal est Glycine max (soja).
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet l’utilisation telle que décrite ci- dessus de la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention, dans laquelle ledit champignon pathogène est P. ultimum et/ou R. solani et/ou B. cinerea et ledit végétal est Beta vulgaris (betterave), Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre) et/ou Glycine max (soja).
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet l’utilisation telle que décrite ci- dessus de la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention, dans laquelle ledit champignon pathogène est P. ultimum et ledit végétal est Beta vulgaris (betterave), Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre) et/ou Glycine max (soja).
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet rutilisation telle que décrite ci- dessus de la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention, dans laquelle ledit champignon pathogène est R. solani et ledit végétal est Beta vulgaris (betterave), Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre) et/ou Glycine max (soja).
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet l’utilisation telle que décrite ci- dessus de la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention, dans laquelle ledit champignon pathogène est B. cinerea et ledit végétal est Beta vulgaris (betterave), Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre) et/ou Glycine max (soja).
Avantageusement, l’invention a pour objet l’utilisation telle que décrite ci-dessus de la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention, dans laquelle :
- ledit champignon pathogène est P. ultimum et ledit végétal est Beta vulgaris (betterave) ; ou
- ledit champignon pathogène est P. ultimum et ledit végétal est Solanum lycopersicum (tomate) ; ou
- ledit champignon pathogène est P. ultimum et ledit végétal est Solanum tuberosum (pomme de terre) ; ou
- ledit champignon pathogène est P. ultimum et ledit végétal est et/ou Glycine max (soja) ; ou
- ledit champignon pathogène est R. solani et ledit végétal est Beta vulgaris (betterave) ; ou
- ledit champignon pathogène est R. solani et ledit végétal est Solanum lycopersicum (tomate) ; ou
- ledit champignon pathogène est R. solani et ledit végétal est Solanum tuberosum (pomme de terre) ; ou - ledit champignon pathogène est R. solani et ledit végétal est Glycine max (soja) ; ou
- ledit champignon pathogène est B. cinerea et ledit végétal est êla vulgaris (betterave) ; ou
- ledit champignon pathogène est B. cinerea et ledit végétal est Solanum lycopersicum (tomate) ; ou
- ledit champignon pathogène est B. cinerea et ledit végétal est Solanum tuberosum (pomme de terre) ; ou
- ledit champignon pathogène est B. cinerea et ledit végétal est Glycine max (soja).
Selon un troisième aspect, l’invention a pour objet G utilisation d’une composition phytosanitaire dans la prévention et/ou le traitement chez un végétal d’infection provoquée par un champignon pathogène choisi parmi les champignons des genres Pythium , Rhizoctonia, Alternaria, Fusarium, Phoma et Botrytis, ladite composition phytosanitaire comprenant :
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants en tant que principe actif ; ou
- les métabolites émis lors de la production de la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants en tant que principe actif ; ou
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants et ses métabolites émis lors de sa production en tant que principe actif ; ou
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants en association avec au moins un autre agent de lutte biologique en tant que principe actif ; ou
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants et ses métabolites émis lors de la production de la souche en association avec au moins un autre agent de lutte biologique en tant que principe actif. En particulier, l’invention a pour objet l’utilisation d’une composition phytosanitaire dans la prévention et/ou le traitement chez un végétal d’infection provoquée par un champignon pathogène du genre Pythium spp. et/ou du genre Rhizoctonia spp. et/ou du genre Botrytis spp ., ladite composition phytosanitaire comprenant :
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants en tant que principe actif ; ou
- les métabolites émis lors de la production de la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants en tant que principe actif ; ou
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants et ses métabolites émis lors de sa production en tant que principe actif ; ou
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants en association avec au moins un autre agent de lutte biologique en tant que principe actif ; ou
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants et ses métabolites émis lors de la production de la souche en association avec au moins un autre agent de lutte biologique en tant que principe actif.
Par « métabolites émis lors de la production de la souche » ou « ses métabolites émis lors de sa production », on entend toute molécule produite dans la matrice de production par la souche de l’invention et/ou un de ses mutants au cours de son développement en présence (co-culture) ou non du champignon pathogène du genre Pythium spp. et/ou du genre Rhizoctonia spp. et/ou du genre Botrytis spp. Par exemple et de manière non limitative, de tels métabolites peuvent être :
- des enzymes produites par le champignon telles que des protéases, des chitinases, la èêto-l,3-glucanase ; ou
- le pyrone 6-pentyl-2H-pyran-2-one (6PP).
Par « agent de lutte biologique », on entend un microorganisme pouvant interférer avec la croissance et/ou la survie des agents pathogènes permettant ainsi de les contrôler. La souche de l’invention TAL-17 (déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333) en est un exemple, mais au sens de l’invention il s’agit ici de combiner la souche de l’invention et/ou un de ses mutants à au moins un autre agent de lutte biologique, lequel est donc différent de la souche de l’invention et/ou un de ses mutants.
Par « au moins un autre agent de lutte biologique », on entend que la composition phytosanitaire de l’invention peut contenir 2 agents de lutte biologique (celui de l’invention et un autre), tout comme elle peut en contenir 3, 4 ou 5 (celui de l’invention et 2, 3 ou 4 autres).
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet l’utilisation telle que décrite ci- dessus de la composition phytosanitaire susmentionnée, ladite composition phytosanitaire se présentant à la base (à l’achat) sous la forme d’une composition solide ou liquide concentrée. Une telle composition solide ou liquide concentrée peut être, par exemple, obtenue grâce à une formulation particulière des spores de la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention et/ou un de ses mutants produites par fermentation en milieu solide ou liquide, lesdites spores pouvant être sous forme purifiée ou dans la matrice de production, ladite matrice de production étant solide ou liquide.
Par « composition [...] concentrée », on entend une composition dans laquelle la concentration du principe actif (i.e. la souche de l’invention et/ou un de ses mutants, lesquels peuvent être sous forme de spores) est supérieure à une quantité efficace de 107 spores/g de composition solide ou liquide concentrée soit 107 UFC/g (UFC= unité formant colonie) de composition solide ou liquide concentrée. Aussi, un autre objet particulier de l’invention concerne l’utilisation telle que décrite ci-dessus de la composition phytosanitaire susmentionnée, ladite composition phytosanitaire se présentant sous la forme d’une composition solide ou liquide concentrée dans laquelle la concentration du principe actif est supérieure à une quantité efficace de 107 spores/g.
Par « supérieure à une quantité efficace de 107 spores/g », on entend également supérieure à une quantité efficace de 108 spores/g, supérieure à une quantité efficace 109 spores/g, supérieure à une quantité efficace 1010 spores/g, supérieure à une quantité efficace 1011 spores/g ou supérieure à une quantité efficace 1012 spores/g. L’utilisateur de la susdite composition doit alors, avant son utilisation, l’incorporer dans un milieu solide ( e.g . terreau, etc.) ou la mettre en suspension dans un milieu aqueux (e.g. eau) pour obtenir une composition diluée comprenant une quantité efficace de 104 à 1012 spores de la souche Trichoderma atroviride de l’invention et/ou un de ses mutants par gramme de milieu solide ou de milieu aqueux (spores/g). La composition, solide ou liquide, diluée obtenue peut alors être épandue sur les plantes dont la prévention et/ou le traitement d’une maladie fongique de plante est souhaité.
Au sens de l’Invention, l’épandage de la susdite composition comprend notamment les techniques d’épandage classiques connues de l’Homme du métier, lesquelles servent à répandre sur une zone à traiter des matières solide (e.g. boues d’épuration, fumier, etc.) ou liquide (e.g. pesticides, etc.) présentant un intérêt agronomique.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet l’utilisation telle que décrite ci- dessus de la composition phytosanitaire susmentionnée, ladite composition phytosanitaire comprenant une quantité efficace de 104 à 1012 spores/g (de composition phytosanitaire), plus particulièrement de 107 à 109 spores/g (de composition phytosanitaire), ladite composition phytosanitaire étant éventuellement obtenue après une étape de préparation (e.g. dilution par mise en suspension ou mélange) la rendant prête à l’épandage.
Par « quantité efficace de spores/g », on entend le nombre de spores capables de former une colonie sur milieu de culture par g (gramme) de produit. De plus, l’expression « de 104 à 1012 spores/g » peut également signifier de 104 à 105 spores/g, de 104 à 106 spores/g, de 104 à 107 spores/g, de 104 à 108 spores/g, de 104 à 109 spores/g, de 104 à 1010 spores/g, de 104 à 1011 spores/g, de 105 à 106 spores/g, de 105 à 107 spores/g, de 105 à 108 spores/g, de 105 à 109 spores/g, de 105 à 1010 spores/g, de 105 à 1011 spores/g, de 105 à 1012 spores/g, de 106 à 107 spores/g, de 106 à 108 spores/g, de 106 à 109 spores/g, de 106 à 1010 spores/g, de 106 à 1011 spores/g, de 106 à 1012 spores/g, de 107 à 108 spores/g, de 107 à 109 spores/g, de 107 à 1010 spores/g, de 107 à 1011 spores/g, de 107 à 1012 spores/g, de 108 à 109 spores/g, de 108 à 1010 spores/g, de 108 à 1011 spores/g, de 108 à 1012 spores/g, de 109 à 1010 spores/g, de 109 à 1011 spores/g, de 109 à 1012 spores/g, de 1010 à 1011 spores/g, de 1010 à 1012 spores/g ou de 1011 à 1012 spores/g. Selon un autre mode de réalisation, I' utilisation telle que décrite ci-dessus de la composition phytosanitaire susmentionnée, dans laquelle ledit champignon pathogène appartient à :
- une espèce choisie parmi : P. acanthicum , P. afertile , P. aphanidermatum , P. aquatile , P. debaryanum , P. elongatum , P. gracile , P imperfection, P. inflatum , P intermedium , P. irregulare , P marinum , P maritimum , P middletoni , P monospermum , P myriotylum , P ostracodes, P. pulchrum , P salinum , P thallassium et P’. ultimum , et en particulier appartient à l’espèce I\ ultimum ; et/ou
- une espèce choisie parmi : //. alpine , //. anomala , //. callae , //. dichotoma , R. ferruginea, R. floccosa , //. fragariae , //. fraxini , //. fumigata , //. lanuginosa, R. leguminicola , //. menthae , //. mucoroides , //. muneratii, R oryzae-sativae, R. pini-insignis , //. quercus , //. rubi , //. rubiginosa, R silvestris , //. solani , //. stahlii , //. tuliparum et //. versicolor, et en particulier appartient à l’espèce //. solani ; et/ou
- l’espèce cinerea.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet l’utilisation telle que décrite ci- dessus de la composition phytosanitaire susmentionnée, dans laquelle ledit végétal appartient à une famille choisie parmi :
les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ;
les Apiacées telles que Daucus carota (carotte) ;
les Astéracées telles que Lactuca sativa (laitue) ou Gerbera spp. (Gerbera) ;
les Brassicacées ;
les Chénopadiacées ;
les Cucurbitacées telles que Cuccumis sativus (concombre) ;
les Fabacées telles que Glycine max (soja) ;
les Liliacées ;
les Primulacées telles que Cyclamen spp. (cyclamen) ;
les Rosacées telles que Pyrus spp. (poire), Prunus spp. (cerise), Fragaria spp. (fraise), ou //asc/ .s////, (rose) ;
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron) ; et les Valérianacées, en particulier ledit végétal appartient à une famille choisie parmi :
les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ;
les Fabacées telles que Glycine max (soja) ; et
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron), et de préférence ledit végétal est Beta vulgaris (betterave), Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Glycine max (soja).
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet l’utilisation telle que décrite ci- dessus de la composition phytosanitaire susmentionnée, dans laquelle ledit champignon pathogène est P. ultimum et/ou R. solani et/ou B. cinerea , et ledit végétal appartient à une famille choisie parmi :
les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ;
les Fabacées telles que Glycine max (soja) ; et
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron), et en particulier ledit végétal est Beta vulgaris (betterave), Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Glycine max (soja).
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet l’utilisation telle que décrite ci- dessus de la composition phytosanitaire susmentionnée, dans laquelle ledit champignon pathogène est P. ultimum et/ou R. solani et/ou B. cinerea , et ledit végétal est Beta vulgaris (betterave), Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre) et/ou Glycine max (soja).
Avantageusement, l’invention a pour objet l’utilisation telle que décrite ci-dessus de la composition phytosanitaire susmentionnée, dans laquelle :
- ledit champignon pathogène est P. ultimum et ledit végétal est Beta vulgaris (betterave) ; ou
- ledit champignon pathogène est P. ultimum et ledit végétal est Solanum lycopersicum (tomate) ; ou - ledit champignon pathogène est P. ultimum et ledit végétal est Solarium tuberosum (pomme de terre) ; ou
- ledit champignon pathogène est P. ultimum et ledit végétal est et/ou Glycine max (soja) ; ou
- ledit champignon pathogène est R. solani et ledit végétal est Beta vulgaris (betterave) ; ou
- ledit champignon pathogène est R. solani et ledit végétal est Solanum lycopersicum (tomate) ; ou
- ledit champignon pathogène est R. solani et ledit végétal est Solanum tuberosum (pomme de terre) ; ou
- ledit champignon pathogène est R. solani et ledit végétal est Glycine max (soja) ; ou
- ledit champignon pathogène est B. cinerea et ledit végétal est Beta vulgaris (betterave) ; ou
- ledit champignon pathogène est B. cinerea et ledit végétal est Solanum lycopersicum (tomate) ; ou
- ledit champignon pathogène est B. cinerea et ledit végétal est Solanum tuberosum (pomme de terre) ; ou
- ledit champignon pathogène est B. cinerea et ledit végétal est Glycine max (soja).
Alternativement, l’invention a pour objet la composition phytosanitaire telle que décrite ci- dessus pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement d’infection chez un végétal provoquée par un champignon pathogène du genre Pythium spp. et/ou Rhizoctonia spp et/ou Botrytis spp. A cet égard, l’ensemble des utilisations particulières cité ci-dessus s’applique à cette alternative.
Selon un quatrième aspect, l’invention a donc pour objet l’utilisation d’une souche isolée de Trichoderma atroviride pour favoriser la germination d’une semence de végétaux, ladite souche isolée de Trichoderma atroviride étant la souche TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants et dans laquelle ladite semence de végétaux appartient à un végétal d’une famille choisie parmi : ■ les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ; les Apiacées telles que Daucus carota (carotte) ;
les Astéracées telles que Lactuca sativa (laitue) ou Gerbera spp. (Gerbera) ;
les Brassicacées ;
les Chénopadiacées ;
les Cucurbitacées telles que Cuccumis sativus (concombre) ;
les Fabacées telles que Glycine max (soja) ;
les Liliacées ;
les Primulacées telles que Cyclamen spp. (cyclamen) ;
les Rosacées telles que Pyrus spp. (poire), Prunus spp. (cerise), Fragaria spp. (fraise), ou Posa spp. (rose) ;
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron) ; et
les Valérianacées, en particulier ladite semence de végétaux appartient à un végétal d’une famille choisie parmi :
les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ;
les Fabacées telles que Glycine max (soja) ; et
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron), et de préférence ledit végétal est Beta vulgaris (betterave), Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Glycine max (soja).
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet l’utilisation telle que décrite ci- dessus de la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention (i.e. la souche TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants), dans laquelle ladite semence de végétaux appartient à un végétal d’une famille choisie parmi :
les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ;
les Fabacées telles que Glycine max (soja) ; et
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron), et en particulier ledit végétal est Beta vulgaris (betterave), Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Glycine max (soja). Avantageusement, l’invention a pour objet G utilisation telle que décrite ci-dessus de la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention, dans laquelle ladite semence de végétaux appartient au végétal Beta vulgaris (betterave). Avantageusement, l’invention a également pour objet l’utilisation telle que décrite ci-dessus de la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention, dans laquelle ladite semence de végétaux appartient au végétal Solarium lycopersicum (tomate). Avantageusement, l’invention a également pour objet l’utilisation telle que décrite ci-dessus de la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention, dans laquelle ladite semence de végétaux appartient appartient au végétal Solarium tuherosum (pomme de terre). Avantageusement, l’invention a également pour objet l’utilisation telle que décrite ci- dessus de la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention, dans laquelle ladite semence de végétaux appartient appartient au végétal Glycine max (soja).
Concernant cet aspect particulier, il convient de noter que l’aide à la germination permet avantageusement et en même temps la prévention et/ou le traitement de maladies fongiques au moment du semis. Le développement d’une maladie après le semis est ainsi évité et le rendement est optimisé via l’aspect biostimulant de la souche de l’invention.
Avantageusement, cet aspect permet également d’éviter un ralentissement important du développement de la culture si quelques temps après le semis une période de sécheresse se présente (ce qui peut arriver au printemps) et donc d’éviter des pertes de rendements à la récolte. De même, l’effet biocontrôle de la souche de l’invention ( i.e . souche TAL-17 et/ou un de ses mutants) en permettant à la plante de germer rapidement et sans que son métabolisme ne soit affecté par la défense contre le pathogène, ses ressources sont entièrement dédiées à sa croissance. Physiologiquement, la plante est ainsi avantageusement plus résistante à des attaques de (phyto-) pathogènes ultérieures.
En conséquence, on comprend qu’un des objets de l’invention concerne une composition phytosanitaire d’enrobage comprenant la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention et/ou un de ses mutants, et éventuellement au moins un agent de fixation, ladite composition phytosanitaire d’enrobage permettant de produire une semence enrobée. L’invention a donc pour objet aussi bien une composition phytosanitaire d’enrobage comprenant la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention et/ou un de ses mutants, ladite composition phytosanitaire d’enrobage permettant de produire une semence enrobée ; qu’une composition phytosanitaire d’enrobage comprenant la souche isolée de Trichoderma atroviride de l’invention et/ou un de ses mutants, et au moins un agent de fixation, ladite composition phytosanitaire d’enrobage permettant de produire une semence enrobée.
Plus largement, ladite composition phytosanitaire telle que décrite ci-dessus ou ci-dessous, ou ladite composition phytosanitaire d’enrobage telle que décrite ci-dessus ou ci-dessous comprend :
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants en tant que principe actif, et éventuellement au moins un agent de fixation ; ou
- les métabolites émis lors de la production de la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants en tant que principe actif, et éventuellement au moins un agent de fixation ; ou
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants et ses métabolites émis lors de sa production en tant que principe actif, et éventuellement au moins un agent de fixation, et éventuellement au moins un agent de fixation ; ou
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants en association avec au moins un autre agent de lutte biologique en tant que principe actif, et éventuellement au moins un agent de fixation ; ou
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants et ses métabolites émis lors de la production de la souche en association avec au moins un autre agent de lutte biologique en tant que principe actif, et éventuellement au moins un agent de fixation.
On comprend également qu’un autre des objets de l’invention concerne l’utilisation d’une composition phytosanitaire (d’enrobage) pour favoriser la germination d’une semence de végétaux. En particulier, l’invention a pour objet l’utilisation telle que décrite ci-dessus d’une des compositions phytosanitaires de l’invention ( cf supra). Alternativement, cet objet de l’invention concerne une composition phytosanitaire (d’enrobage) pour favoriser la germination d’une semence de végétaux.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a également pour objet une semence enrobée comprenant une graine de végétal, dans laquelle ladite graine de végétal est enrobée par une composition phytosanitaire d’enrobage et appartient à un végétal d’une famille choisie parmi :
les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ;
les Apiacées telles que Daucus carota (carotte) ;
les Astéracées telles que Lactuca sativa (laitue) ou Gerbera spp. (Gerbera) ;
les Brassicacées ;
les Chénopadiacées ;
les Cucurbitacées telles que Cuccumis sativus (concombre) ;
les Fabacées telles que Glycine max (soja) ;
les Liliacées ;
les Primulacées telles que Cyclamen spp. (cyclamen) ;
les Rosacées telles que Pyrus spp. (poire), Prunus spp. (cerise), Fragaria spp. (fraise), ou Posa spp. (rose) ;
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron) ; et
les Valérianacées, et dans laquelle ladite composition phytosanitaire d’enrobage comprend :
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants en tant que principe actif, et éventuellement au moins un agent de fixation ; ou
- les métabolites émis lors de la production de la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants en tant que principe actif, et éventuellement au moins un agent de fixation ; ou
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants et ses métabolites émis lors de sa production en tant que principe actif, et éventuellement au moins un agent de fixation, et éventuellement au moins un agent de fixation ; ou - la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants en association avec au moins un autre agent de lutte biologique en tant que principe actif, et éventuellement au moins un agent de fixation ; ou
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants et ses métabolites émis lors de la production de la souche en association avec au moins un autre agent de lutte biologique en tant que principe actif, et éventuellement au moins un agent de fixation, en particulier ledit végétal appartenant à une famille choisie parmi :
les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ;
les Fabacées telles que Glycine max (soja) ; et
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron), et de préférence ledit végétal est Beta vulgaris (betterave), Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Glycine max (soja).
Par « semence enrobée », on entend une graine sélectionnée pour être semée, ladite graine ayant subi un traitement particulier lequel a permis son enrobage dans une composition phytosanitaire d’enrobage.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la semence enrobée telle que décrite ci-dessus, ladite semence enrobée comprenant une quantité efficace de 105 à 108 (ou de 106 à 107) spores/semence enrobée, préférentiellement 106 (ou 107) spores/semence enrobée.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la semence enrobée telle que décrite ci-dessus, dans laquelle ladite graine de végétal appartient à un végétal d’une famille choisie parmi :
les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ;
les Fabacées telles que Glycine max (soja) ; et
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron), et en particulier ledit végétal est Beta vulgaris (betterave), Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Glycine max (soja).
Avantageusement, l’invention a pour objet la semence enrobée telle que décrite ci-dessus, dans laquelle ladite graine de végétal appartient au végétal Beta vulgaris (betterave). Avantageusement, l’invention a également pour objet la semence enrobée telle que décrite ci- dessus, dans laquelle ladite graine de végétal appartient au végétal Solanum lycopersicum (tomate). Avantageusement, l’invention a également pour objet la semence enrobée telle que décrite ci-dessus, dans laquelle ladite graine de végétal appartient au végétal Solanum tuberosum (pomme de terre). Avantageusement, l’invention a également pour objet la semence enrobée telle que décrite ci-dessus, dans laquelle ladite graine de végétal appartient au végétal Glycine max (soja).
Selon autre aspect de l’invention, celle-ci a pour objet un procédé de protection et/ou de traitement d’un végétal contre une maladie provoquée par un champignon pathogène choisi parmi les champignons des genres Pythium , Rhizoctonia, Alternaria, Fusarium , Phoma et Botrytis ; en particulier un champignon pathogène du genre Pythium spp. et/ou du genre Rhizoctonia spp. et/ou du genre Botrytis spp. ; comprenant l’application d’une composition phytosanitaire sur au moins une partie dudit végétal ou du sol à proximité dudit végétal. En particulier, l’invention a pour objet le procédé tel que décrit ci-dessus, dans lequel ladite au moins une partie dudit végétal est une feuille, un fruit, une graine.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet un procédé de protection et/ou de traitement d’un végétal contre une maladie provoquée par un champignon pathogène choisi parmi les champignons des genres Pythium , Rhizoctonia , Alternaria , Fusarium , Phoma et Botrytis comprenant l’application d’une composition phytosanitaire sur au moins une partie dudit végétal ou du sol à proximité dudit végétal, ladite au moins une partie dudit végétal étant en particulier une feuille, un fruit, une graine, ladite composition phytosanitaire comprenant : - la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants en tant que principe actif ; ou
- les métabolites émis lors de la production de la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants en tant que principe actif ; ou
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants et ses métabolites émis lors de sa production en tant que principe actif ; ou
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants en association avec au moins un autre agent de lutte biologique en tant que principe actif ; ou
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants et ses métabolites émis lors de la production de la souche en association avec au moins un autre agent de lutte biologique en tant que principe actif, et ledit végétal appartenant notamment à une famille choisie parmi :
les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ;
les Apiacées telles que Daucus carota (carotte) ;
les Astéracées telles que Lactuca sativa (laitue) ou Gerbera spp. (Gerbera) ;
les Brassicacées ;
les Chénopadiacées ;
les Cucurbitacées telles que Cuccumis sativus (concombre) ;
les Fabacées telles que Glycine max (soja) ;
les Liliacées ;
les Primulacées telles que Cyclamen spp. (cyclamen) ;
les Rosacées telles que Pyrus spp. (poire), Prunus spp. (cerise), Fragaria spp. (fraise), ou Rosa spp. (rose) ;
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron) ; et
les Valérianacées, en particulier ledit végétal appartenant à une famille choisie parmi : les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ;
les Fabacées telles que Glycine max (soja) ; et
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron), et de préférence ledit végétal étant Beta vulgaris (betterave), Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Glycine max (soja).
En particulier, l’invention a pour objet un procédé de protection et/ou de traitement d’un végétal contre une maladie provoquée par un champignon pathogène du genre Pythium spp. et/ou du genre Rhizoctonia spp. et/ou Botrytis spp. comprenant l’application d’une composition phytosanitaire sur au moins une partie dudit végétal ou du sol à proximité dudit végétal, ladite au moins une partie dudit végétal étant en particulier une feuille, un fruit, une graine, ladite composition phytosanitaire comprenant :
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants en tant que principe actif ; ou
- les métabolites émis lors de la production de la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants en tant que principe actif ; ou
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants et ses métabolites émis lors de sa production en tant que principe actif ; ou
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants en association avec au moins un autre agent de lutte biologique en tant que principe actif ; ou
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants et ses métabolites émis lors de la production de la souche en association avec au moins un autre agent de lutte biologique en tant que principe actif, et ledit végétal appartenant notamment à une famille choisie parmi :
les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ;
les Apiacées telles que Daucus carota (carotte) ; les Astéracées telles que Lactuca sativa (laitue) ou Gerbera spp. (Gerbera) ;
les Brassicacées ;
les Chénopadiacées ;
les Cucurbitacées telles que Cuccumis sativus (concombre) ;
les Fabacées telles que Glycine max (soja) ;
les Liliacées ;
les Primulacées telles que Cyclamen spp. (cyclamen) ;
les Rosacées telles que Pyrus spp. (poire), Prunus spp. (cerise), Fragaria spp. (fraise), ou Posa spp. (rose) ;
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron) ; et
les Valérianacées, en particulier ledit végétal appartenant à une famille choisie parmi :
les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ;
les Fabacées telles que Glycine max (soja) ; et
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron), et de préférence ledit végétal étant Beta vulgaris (betterave), Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Glycine max (soja).
Dans la mesure où cet aspect comprend l’application d’une composition phytosanitaire, laquelle a par ailleurs été décrite précédemment au travers d’une utilisation de celle-ci, il est important de noter que l’ensemble des caractéristiques particulières susmentionné s’applique à cet aspect. De fait, l’invention a notamment pour le procédé tel que décrit ci-dessus, dans lequel ladite composition phytosanitaire comprend une quantité efficace de 104 à 1012 spores/g (de composition phytosanitaire), plus particulièrement de 107 à 109 spores/g (de composition phytosanitaire), ladite composition phytosanitaire étant éventuellement obtenue après une étape de préparation (e.g. dilution par mise en suspension ou mélange) la rendant prête à l’application (e.g. épandage). Selon un autre mode de réalisation, l’invention a donc pour objet le procédé tel que décrit ci- dessus, dans lequel ladite composition phytosanitaire est épandue à raison de 10 à 500 L/ha, en particulier de 50 à 250 L/ha, notamment pour la pulvérisation aérienne ; ou à raison d’une quantité efficace de 1010 à 1014 spores/ha, en particulier de 1010 à 1012 spores/ha, notamment pour les épandages aériens de type pulvérisation foliaire.
L’expression « de 10 à 500 L/ha (litre/hectare) » signifie également de 10 à 400 L/ha, de 10 à 300 L/ha, de 10 à 200 L/ha, de 10 à 100 L/ha, de 100 à 500 L/ha, de 200 à 500 L/ha, de 300 à 500 L/ha, de 400 à 500 L/ha, de 50 à 500 L/ha, de 50 à 250 L/ha ou de 250 à 500 L/ha. L’expression « de 1010 à 1014 spores/ha » signifie également de 1010 à 1011 spores/ha, de 1010 à 1012 spores/ha, de 1010 à 1013 spores/ha, de 1011 à 1012 spores/ha, de 1011 à 1013 spores/ha, de 1011 à 1014 spores/ha, de 1012 à 1013 spores/ha, de 1012 à 1014 spores/ha ou de 1013 à 1014 spores/ha.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet le procédé tel que décrit ci-dessus, dans laquelle ledit champignon pathogène appartient à :
- une espèce choisie parmi : P. acanthicum , P. afertile , P. aphanidermatum , P. aquatile , P. debaryanum , P. elongatum , P. gracile , P. imperfection, P. inflatum , P. intermedium , P. irregulare , P. marinum , P. maritimum , P. middletoni , P. monospermum , P. myriotylum , P. ostracodes, P. pulchrum , P. salinum , P. thallassium et P. ultimum , et en particulier appartient à l’espèce P. ultimum ; et/ou
- une espèce choisie parmi : R. alpine , R. anomala , R. callae , R. dichotoma , R. ferruginea, R. floccosa , R. fragariae , R. fraxini , R. fumigata , //. lanuginosa, R. leguminicola , //. menthae , //. mucoroides , //. muneratii, R oryzae-sativae, R. pini-insignis , //. quercus , //. rubi , //. rubiginosa, R silvestris , //. solani , //. stahlii , //. tuliparum et //. versicolor, et en particulier appartient à l’espèce //. solani ; et/ou l’espèce B. cinerea. Par « P. ultimum », on entend l’agent pathogène responsable de la fonte de semis également appelée pourriture des racines ou pourriture due kPythium. Par « R. solani », on entend l’agent pathogène responsable de la fonte de semis et/ou du rhizoctone brun. Par « B. cinerea », on entend l’agent pathogène responsable de la pourriture grise.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet le procédé tel que décrit ci-dessus, dans lequel ledit végétal appartient à une famille choisie parmi :
les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ;
les Apiacées telles que Daucus carota (carotte) ;
les Astéracées telles que Lactuca sativa (laitue) ou Gerbera spp. (Gerbera) ;
les Brassicacées ;
les Chénopadiacées ;
les Cucurbitacées telles que Cuccumis sativus (concombre) ;
les Fabacées telles que Glycine max (soja) ;
les Liliacées ;
les Primulacées telles que Cyclamen spp. (cyclamen) ;
les Rosacées telles que Pyrus spp. (poire), Prunus spp. (cerise), Fragaria spp. (fraise), ou Rasa spp. (rose) ;
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron) ; et
les Valérianacées, en particulier ledit végétal appartient à une famille choisie parmi :
les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ;
les Fabacées telles que Glycine max (soja) ; et
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron), et de préférence ledit végétal est Beta vulgaris (betterave), Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Glycine max (soja).
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet le procédé tel que décrit ci-dessus, dans lequel ledit champignon pathogène est P. ultimum et/ou R. solani et/ou B. cinerea et ledit végétal appartient à une famille choisie parmi : les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ;
les Fabacées telles que Glycine max (soja) ; et
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron), et en particulier ledit végétal est Beta vulgaris (betterave), Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Glycine max (soja).
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet le procédé tel que décrit ci-dessus, dans lequel ledit champignon pathogène est P. ultimum et/ou R. solani et/ou B. cinerea et ledit végétal est Beta vulgaris (betterave), Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre) et/ou Glycine max (soja).
Avantageusement, l’invention a pour objet le procédé tel que décrit ci-dessus, dans lequel :
- ledit champignon pathogène est P. ultimum et ledit végétal est Beta vulgaris (betterave) ; ou
- ledit champignon pathogène est P. ultimum et ledit végétal est Solanum lycopersicum (tomate) ; ou
- ledit champignon pathogène est P. ultimum et ledit végétal est Solanum tuberosum (pomme de terre) ; ou
- ledit champignon pathogène est P. ultimum et ledit végétal est et/ou Glycine max (soja) ; ou
- ledit champignon pathogène est R. solani et ledit végétal est Beta vulgaris (betterave) ; ou
- ledit champignon pathogène est R. solani et ledit végétal est Solanum lycopersicum (tomate) ; ou
- ledit champignon pathogène est R. solani et ledit végétal est Solanum tuberosum (pomme de terre) ; ou
- ledit champignon pathogène est A. solani et ledit végétal est Glycine max (soja) ; ou
- ledit champignon pathogène est B. cinerea et ledit végétal est Beta vulgaris (betterave) ; ou
- ledit champignon pathogène est B. cinerea et ledit végétal est Solanum lycopersicum (tomate) ; ou - ledit champignon pathogène est B. cinerea et ledit végétal est Solanum tuberosum (pomme de terre) ; ou
- ledit champignon pathogène est B. cinerea et ledit végétal est Glycine max (soja).
Avantageusement, l’invention a également pour objet le procédé tel que décrit ci-dessus, dans lequel ladite maladie est la fonte de semis et/ou le rhizoctone brun et/ou la pourriture grise. En particulier, l’invention a également pour objet le procédé tel que décrit ci-dessus, dans lequel ladite maladie est la fonte de semis, également appelée pourriture due kPythium. En particulier, l’invention a également pour objet le procédé tel que décrit ci-dessus, dans lequel ladite maladie est le rhizoctone brun. En particulier, l’invention a également pour objet le procédé tel que décrit ci-dessus, dans lequel ladite maladie est la pourriture grise.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet le procédé tel que décrit ci-dessus, dans lequel la protection dudit végétal comprend une étape d’enrobage de la semence avec ladite composition phytosanitaire ; et/ou la protection dudit végétal comprend une étape de pulvérisation de ladite composition phytosanitaire au moment du semis ou à la germination dudit végétal ; et/ou la protection dudit végétal comprend soit une application préventive au niveau du sol avant le semis de ladite composition phytosanitaire avec l’apport d’amendement organique, soit une application préventive au niveau du sol avant le semis de ladite composition phytosanitaire sur la culture précédente ; et/ou le traitement dudit végétal comprend une étape de pulvérisation de ladite composition phytosanitaire aux cours de différents stades phénologiques de la plante (en prévention d’un risque d’infection dudit champignon pathogène de l’ensemble ou une partie de la plante).
Par « différents stades phénologiques », on entend de la graine jusqu’à la floraison (BBCH000 à BBCH619 selon l’échelle BBCH des stades phénologiques des légumes dans la famille des Solanacées (Feller et al., 1995 - Phànologische entwicklungsstadien von gemüsepflanzen: II. Fruchtgemüse und hülsenfrüchte ; Nachrichtenbl. Deut. Pflanzenschutzd)). A tout égard, il convient de noter que les différents aspects de l’invention, tout comme les différents modes de réalisation de celle-ci sont interdépendants. Ces derniers peuvent donc être combinés entre eux à foison pour obtenir des aspects et/ou des modes de réalisation préférés de l’invention non explicitement décrits. Ceci est également valable pour l’ensemble des définitions fourni dans la présente description, lequel s’applique à tous les aspects de l’invention et ses modes de réalisation.
En outre, la présente invention est illustrée, sans toutefois s’y limiter, par les Figures et Exemples suivants.
LISTE DES FIGURES
La Figure 1 représente une illustration du test dit Dual-culture (A ; BCA = Biological Control Agent ) et la mesure du diamètre de croissance de P. ulltimum en présence (ligne grise du bas) ou non (ligne noire du haut) de la souche TAL-17 (abrégée TAL) (B).
La Figure 2 représente la mesure du diamètre de croissance de R. solani en présence (ligne grise du bas) ou non (ligne noire du haut) de la souche TAL-17 (abrégée TAL).
La Figure 3 représente des photographies de plantules de tomates suivant la classification des symptômes dus au pathogène P. ultimum selon une échelle de 0 à 5. Les plantes notées 0 sont saines, les plantes notées 5 sont mortes, les notations intermédiaires reflètent T apparition des symptômes : feuilles jaunies, collet attaqué, plantule couchée.
La Figure 4 représente l’observation des symptômes d’infection des plantules de tomates par Pythium ultimum après 21 jours de culture en présence ou non de TAL-17 (abrégée TAL) et en comparaison à des témoins non infectés.
La Figure 5 représente l’observation de la germination des graines de tomates en présence ou non de TAL-17 et en présence ou non de Pythium ultimum. La Figure 6 représente la mesure du diamètre de croissance de A. dauci en présence (ligne grise du bas) ou non (ligne noire du haut) de la souche TAL-17.
La Figure 7 représente la mesure du diamètre de croissance de F. culmorum en présence (ligne grise du bas) ou non (ligne noire du haut) de la souche TAL-17.
La Figure 8 représente la mesure du diamètre de croissance de F. oxysporum f. sp. lycopersici en présence (ligne grise du bas) ou non (ligne noire du haut) de la souche TAL-17.
La Figure 9 représente la mesure du diamètre de croissance de P. exigua en présence (ligne grise du bas) ou non (ligne noire du haut) de la souche TAL-17.
La Figure 10 représente le pourcentage d’inhibition de la croissance de P. ultimum en présence de la souche TAL-17, de deux souches de Trichoderma atroviride issues de produits commerciaux (Vintec® et Esquive® WP) et d’une souche de Trichoderma harzanium (collection ARD). Les résultats ont été analysés selon un test de Student avec un seuil de significativité de 5% par rapport à la souche TAL-17 (* = p ≤ 0,05 ; ** = p ≤ 0,01 ; *** = p ≤ 0,001).
La Figure 11 représente le pourcentage d’inhibition de la croissance de R. solani en présence de la souche TAL-17, de deux souches de Trichoderma atroviride issues de produits commerciaux (Vintec® et Esquive® WP) et d’une souche de Trichoderma harzanium (collection ARD). Les résultats ont été analysés selon un test de Student avec un seuil de significativité de 5% par rapport à la souche TAL-17 (* = p ≤ 0,05 ; ** = p ≤ 0,01 ; *** = p ≤ 0,001).
La Figure 12 représente le pourcentage d’inhibition de la croissance de F. oxysporum f. sp. lycopersici en présence de la souche TAL-17, de deux souches de Trichoderma atroviride issues de produits commerciaux (Vintec® et Esquive® WP) et d’une souche de Trichoderma harzanium (collection ARD). Les résultats ont été analysés selon un test de Student avec un seuil de significativité de 5% par rapport à la souche TAL-17 (* = p ≤ 0,05 ; ** = p ≤ 0,01 ; ***
= p ≤ 0,001). La Figure 13 représente une photographie du développement de la souche TAL-17, de deux souches de T. atroviride issues de produits commerciaux (Vintec® et Esquive® WP) ainsi qu’une souche de T. harzanium (isolée par ARD selon le même procédé que la souche TAL-17) après 48h (traits discontinus) et 72h (traits continus) de croissance sur milieu PDA. De gauche à droite : Vintec®, Esquive® WP, T. harzanium et TAL-17.
La Figure 14 représente la mesure du diamètre de croissance de TAL-17, de deux souches de T. atroviride issues de produits commerciaux (Vintec® et Esquive® WP) ainsi qu’une souche de T. harzanium (isolée par ARD selon le même procédé que la souche TAL-17).
La Figure 15 représente des histogrammes représentant l’effet de la souche TAL-17 (abrégée TaL) sur le développement de la pourriture grise induite par le pathogène Botrytis cinerea Bel . La souche TAL-17 arrivant au stade de sporulation sur boîte a été mise en culture liquide sous agitation douce à 1.107 sp/mL dans du PDB ½. La culture liquide de la souche TAL-17 a été sprayée/pulvérisée sur les feuilles de tomates à JO (effet immédiat - Figure 15 A) et après 2 jours d’agitation (effet après 2 jours - Figure 15B) 3 heures avant l’inoculation des feuilles par un dépôt de 10 pL d’une solution de spores de Bel à 1.106 spores/mL. La taille des lésions nécrotiques a été mesurée sur chaque foliole à partir de 2 ou 3 jours après inoculation (dpi pour day post inoculation ) et ceci jusqu’à 7 jours maximum. Les valeurs représentent la taille moyenne des lésions nécrotiques de 12 folioles par modalité de traitement ± l’écart type.
La Figure 16 représente une photographie montrant l’absence et la présence de lésions nécrotiques induite B. cinerea Bel sur folioles de tomates isolées (flèches blanches). La boîte de Pétri de gauche correspond à la modalité TAL-17 (abrégée TaL) + Bel à 3 dpi et la boîte de droite correspond à la modalité Bel.
La Figure 17 représente des histogrammes représentant la sévérité de la pourriture grise sur plants de tomates entières 3 jours après inoculation. La souche TAL-17 (abrégée TaL) arrivant au stade de sporulation sur boîte a été mise en culture liquide durant 2 jours sous agitation à 1.107 sp/mL dans du PDB ½. La culture liquide de la souche TAL-17 a été sprayée/pulvérisée sur plantes entières environ 16h avant l’inoculation des feuilles par un dépôt de 10 pL d’une solution de spores de Bel à 1.106 spores/mL. La taille des lésions nécrotiques a été mesurée sur chaque foliole à partir de 3 jours après inoculation. Les valeurs représentent la taille moyenne des lésions nécrotiques de 4 pots de tomates (2 étages foliaires inoculées) par modalité de traitement ± l’écart type.
EXEMPLES
(I) Isolement de la souche de Trichoderma atroviride TAL-17
Souche isolée d’une feuille de blé cultivé en champs.
Le prélèvement de feuille de la culture du blé a été broyé puis mis au contact en infiniment mélangé d’une gélose de PDA ( Potato Dextrose Agar ) à 50°C qui contient des spores de Fusarium graminearum. La boîte a été mise en culture à 25°C sous hotte lumineuse. Ainsi seules les souches étant capables de se reproduire en présence de Fusarium graminearum se sont développées sur la boîte. Parmi ces souches TAL-17 était présente. Un prélèvement spécifique d’une zone présentant un intérêt dans la boîte et plusieurs repiquages successifs ont permis d’isoler la souche TAL-17, laquelle a ensuite été déposée le 03 juillet 2018 à la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM ; Institut Pasteur, 25-28 rue du Docteur Roux, F-75724 PARIS CEDEX 15) sous le numéro CNCM 1-5333.
(II) Etude in vitro par test Dual-culture de l’efficacité de la souche TAL-17 sur le pythopathogène Pythium ultimum Protocole
Plusieurs tests de Dual-culture (Figure IA) avec la souche TAL-17 vs P. ultimum ont été réalisés en proximité sur milieu PDA {Potato Dextrose Agar). On inocule 30 pL contenant 1.104 spores/mL (sp/mL) de P. ultimum au centre d’une boîte de Pétri de 8,5 cm de diamètre, contenant du milieu PDA, et 30 pL contenant 1.106 spores/mL de la souche TAL-17 à 2 cm de l’extrémité gauche et droite de la boîte de Pétri (voir Figure IA). Les boîtes de Pétri ont été incubées à 23-27°C sous lumière artificielle (24h/24) (tube fluorescent F36WT8/2084 BriteGro®). Des observations macroscopiques ont été réalisées tous les jours après l’inoculation et le diamètre de croissance de P. ultimum est mesuré quotidiennement pendant 5 jours. Des témoins avec P. ultimum seul ont également été réalisés. Résultats
Il est observé que la présence de la souche TAL-17 conduit à une inhibition de la croissance du pathogène P. ultimum de l’ordre de 50% par rapport au témoin après 5 jours de croissance (voir Figure IB).
(III) Etude in vitro par test Dual-culture de l’efficacité de la souche TAL-17 sur le pythopathogène Rhizoctania solani Protocole
Plusieurs tests de Dual-culture (Figure 2) avec la souche TAL-17 vs R. solani ont été réalisés en proximité sur milieu PDA ( Potato Dextrose Agar). On inocule 30 pL contenant 1.104 spores/mL (sp/mL) de R. solani au centre d’une boîte de Pétri de 8,5 cm de diamètre, contenant du milieu PDA, et 30 pL contenant 1.106 spores/mL de la souche TAL-17 à 2 cm de l’extrémité gauche et droite de la boîte de Pétri. Les boîtes de Pétri ont été incubées à 23-27°C sous lumière artificielle (24h/24) (tube fluorescent F36WT8/2084 BriteGro®). Des observations macroscopiques ont été réalisées tous les jours après l’inoculation et le diamètre de croissance de R. solani est mesuré quotidiennement pendant 5 jours. Des témoins avec R. solani seul ont également été réalisés.
Résultats
Il est observé que la présence de la souche TAL-17 conduit à une inhibition de la croissance du pathogène R. solani de l’ordre de 35% par rapport au témoin après 5 jours de croissance (voir Figure 2).
(IV) Essai mené pour étudier l’effet biocontrôle de la souche TAL-17 sur le patho-système
Pythium ulümum/tomatt sur substrat de culture
L’aptitude de la souche TAL-17 à limiter la contamination de plants de tomates par Pythium ultimum (P. ultimum ) et l’apparition des symptômes associés a été vérifiée par un essai de culture en conditions contrôlées. Mise en culture de Pythium ultimum
La souche a été mise en culture sur millet pendant 4 jours à 25°C. La souche est originaire du laboratoire : Eidgenôssisches Departement für Wirtschaft, Bildung und Forschung WBF/Agroscope/Müller-Thurgau-Strasse 29, 8820 Wàdenswil.
Mise en culture de la souche TAL-17
La souche a été mise en culture sur millet pendant 4 jours à 25°C. 250 g de millet ont été placés dans 100 mL d’eau. La concentration a été mesurée par observation sur cellule de Malassez. La concentration a été ajustée à 108 spores/mL.
Mise en culture préalable du végétal
Les graines de tomates sont placées à germer en support de culture pendant 3 semaines dans une plaque de semis.
Modalités de l’essai
Six modalités ont été étudiées :
- témoin négatif (sans pathogène et sans la souche TAL-17),
- témoin positif (sans pathogène et avec la souche TAL-17), patho dose 1 (Dl), patho dose 2 (D2), et patho dose 2 (D2) + la souche TAL-17.
Chaque modalité est répétée 4 fois.
Lancement de l’essai
Le support de culture utilisé est de la tourbe Klassmann®. Chaque plante est placée dans un pot de 1,5 L. Celui-ci contient 400 g de substrat (1 L).
Le pathogène est apporté en mélange avec le substrat, deux doses sont testées : 20 g et 80 g de millet avec pathogène/L de substrat (respectivement modalités Patho Dl et Patho D2). Pour les modalités avec le pathogène, le poids de millet ajouté est soustrait de la quantité de substrat à ajouter. Les modalités sans pathogène ne contiennent que du substrat.
Pour chaque pot, le mélange substrat/millet est homogénéisé puis placé dans le pot. L’hydratation est effectuée par subirrigation. Un trou de plantation est préparé au centre du pot. La plantule de tomate est sortie de la plaque de semis et placée dans le trou de plantation. Pour la modalité concernée, la souche TAL-17 (= TAL) est apportée par apport de la solution liquide à 108 spores/mL au pied de la plantule (10 mL/pot).
La culture est effectuée en phytotron avec les consignes suivantes : 12h à l’obscurité à 20°C et 12h à la lumière à 23°C, le substrat est arrosé à 80% de la CRmax en eau.
Suivi des symptômes
Les symptômes ont été notés selon une échelle de 0 à 5. Les plantes notées 0 sont saines, les plantes notées 5 sont mortes, les notations intermédiaires reflètent l’apparition des symptômes : feuilles jaunies, collet attaqué, plantule couchée (voir Figure 3).
Résultats
Cette observation des degrés d’infection a été effectuée après 21 jours de culture (voir Figure
4)·
La modalité témoin présente dans plantules en bonne santé, après 3 semaines seul un jaunissement des cotylédons est observé. Les plantules traitées avec la souche TAL-17 (= TAL) uniquement sont saines, avec un jaunissement des cotylédons comme dans la modalité témoin. L’apport du pathogène aux deux doses testées provoque l’apparition de symptômes forts, avec des plantules mortes dans les deux doses testées. L’effet dose semble limité. La modalité traitée à la fois avec le pathogène à la dose 2 (D2) et avec la souche TAL-17 présente des plantules en meilleure santé que la modalité avec le pathogène à la dose 2 (D2) sans la souche TAL-17.
Les grades d’infection ont été utilisés pour une analyse de variance (ANOVA 95%), laquelle est présentée dans le Tableau 3 ci-dessus. Un effet significatif est observé ( P-value = 0,0004), les modalités sont les suivantes :
Tableau 3 : Analyse statistique Modalité Moyenne Groupe statistique Conclusion
Le traitement des plantules lors du rempotage avec une solution de la souche TAL-17 a permis une limitation de G apparition des symptômes d’infection par Pythium ultimum sur plantules de tomate.
IV) Essai mené pour étudier l’effet biocontrôle de la souche TAL-17 sur le patho-système
Pythium ultimum/tomate lors de la germination des graines Protocole
L’objectif de cet essai est l’évaluation de l’efficacité de la souche TAL-17 sur la limitation de la fonte de semis sur des graines de tomates traitées avec Pythium ultimum.
Les modalités de l’essai sont les suivantes :
1. Eau + eau : Plants sains, « inoculés » avec de l’eau stérile,
2. Eau + Pu : Plants non traités inoculés avec P. ultimum ,
3. Fong + Pu : Plants traités par un fongicide et inoculés avec P. ultimum ,
4. 2Dla + Pu : Plants traités par la souche TAL-17 à 106 UFC/mL puis inoculés avec P. ultimum , et
5. 2Dlb + Pu : Plants traités par la souche TAL-17 à 107 UFC/mL puis inoculés avec P. ultimum.
Les souches sont mises en culture sur PDA puis les boîtes sont utilisées pour préparer des solutions de spores.
Les graines sont trempées pendant lh : dans de l’eau pour les modalités 1 et 2, dans les solutions de spores de la souche TAL-17 (BCA 2D1) pour les modalités 4 et 5, dans une solution de fongicide pour la modalité 3 (Previcur ENERGY® : mélange fosétyl d’aluminium/propamocarbe).
Ensuite, les graines sont trempées dans une solution de spores de Pythium ultimum à une concentration de 107 spores/mL.
Après traitement, les graines sont placées ensemble dans du papier filtre qui est enroulé sur lui- même. Ces rouleaux sont placés dans de l’eau pour assurer une bonne hydratation des plantules tout au long de l’essai. Chaque modalité est représentée par 3 rouleaux de 5 graines. Après 15 jours de culture, les rouleaux sont déroulés pour une observation de la germination des graines. Résultats
Après 15 jours, les rouleaux sont déroulés pour une notation de la germination des graines (% de graines germées) (voir Figure 5).
Les plants témoins traités avec Pythium ultimum et de l’eau présentent une germination plus basse que la modalité témoin sans P. ultimum. Le traitement fongicide a un effet positif sur la germination des graines. Le traitement avec la souche TAL-17 a un effet positif sur la germination aux deux concentrations testées.
(VD Essai de spécificité de la sonde TaqMan® GS285741-P1 et du couple de primer associé
GS285741-F1 et GS285741-R1 vis-à-vis de la souche de l’Invention (TAL-17 et/ou un de ses mutants)
Protocole
Afin de tester la spécificité des outils moléculaires (sonde TaqMan® GS285741-P1 et le couple de primer associé GS285741-F1 et GS285741-R1), il a été mis en œuvre une analyse classique par Polymerase Chain Reaction en temps réel (qPCR) sur 3 souches distinctes, à savoir : la souche Trichoderma viride de l’espèce T. asperellum (TV) ; la souche Trichoderma atroviride TAS ; et la souche Trichoderma atroviride de l’invention (TAL-17).
Un étalon interne contrôle est également réalisé avec de F ADN génomique extrait de la souche de l’invention, lequel a été dilué en série.
L’ensemble des essais de qPCR ont été réalisés en utilisant un thermocycleur CFX 96 touch de Biorad®. Le programme d’amplification utilisé est celui recommandé par le fournisseur avec une température d’hybridation de 60°C. Pour la méthode TaqMan®, le mélange réactionnel Luna® universel Probe qPCR Master Mix (NEB®) a été utilisé. Le programme d’amplification est de 95°C 2 min suivi de 40X 95°C 15” et 60°C 30”.
Résultats
Les résultats de cette analyse sont présentés dans le Tableau 4 ci-après.
Tableau 4 : Détection spécifique par qPCR de la souche de l’Invention
Conclusion
La sonde TaqMan® GS285741-P1 et le couple de primer associé GS285741-F1 et GS285741- R1 n’ont permis de détecter que la souche TAL-17. Ces outils permettent donc bien la détection et l’identification dans un échantillon de la présence de la souche de l’Invention TAL-17 et/ou un de ses mutants. (VII) Etude in vitro par test Dual-culture de l’efficacité de la souche TAL-17 sur d’autre pythopathogènes Protocole
Plusieurs tests de Dual-culture avec la souche TAL-17 us Alternaria dauci, Fusarium culmorum, Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici et Phoma exigua ont été réalisés en proximité sur milieu PDA ( Potato Dextrose Agar). On inocule 30 pL contenant 1.104 spores/mL (sp/mL) de Alternaria dauci, Fusarium culmorum, Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici ou Phoma exigua au centre d’une boîte de Pétri de 8,5 cm de diamètre, contenant du milieu PDA, et 30 pL contenant 1.106 spores/mL de la souche TAL-17 à 2 cm de l’extrémité gauche et droite de la boîte de Pétri. Les boîtes de Pétri ont été incubées à 23-27°C sous lumière artificielle (24h/24) (tube fluorescent F36WT8/2084 BriteGro®). Des observations macroscopiques ont été réalisées tous les jours après l’inoculation et le diamètre de croissance de Alternaria dauci, Fusarium culmorum, Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici et Phoma exigua est mesuré quotidiennement. Des témoins avec Alternaria dauci, Fusarium culmorum, Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici et Phoma exigua seul ont également été réalisés.
Résultats
Il est observé que la présence de la souche TAL-17 conduit à une inhibition de la croissance des pathogènes Alternaria dauci, Fusarium culmorum, Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici et Phoma exigua respectivement de l’ordre de 41%, 23%, 26% et 26% par rapport au témoin après 10 jours de croissance (voir Figures 6 à 9).
(VIII) Etude in vitro par test Dual-culture de l’efficacité de la souche TAL-17 sur les pythopathogènes P. ultimum , R. solani et Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici en comparaison d’autres Trichoderma spp.
La capacité de la souche TAL-17 à limiter le développement de trois phytopathogènes différents (P. ultimum, R. solani et Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici ) a été comparée à celles d’autres souches de Trichoderma spp. lors d’un essai en conditions contrôlées. Protocole
Plusieurs tests de Dual-culture avec la souche TAL-17, deux souches de T. atroviride issues de produits commerciaux (Vintec® et Esquive® WP) ainsi qu’une souche de T. harzanium (isolée par A RD selon le même procédé que la souche TAL-17) us Pythium ultimum, Rhizoctonia solani et Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici ont été réalisés en proximité sur milieu PDA ( Potato Dextrose Agar). On inocule 30 pL contenant 1.104 spores/mL (sp/mL) de Pythium ultimum, Rhizoctonia solani ou Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici à 1 cm de l’extrémité droite d’une boîte de Pétri de 8,5 cm de diamètre, contenant du milieu PDA, et 30 pL contenant 1.106 spores/mL de la souche TAL-17, des deux souches commerciales ou de la souche T. harzanium à 1 cm de l’extrémité gauche de la boîte de Pétri. Les boîtes de Pétri ont été incubées à 23-27°C sous lumière artificielle (16h/8h) (tube fluorescent F36WT8/2084 BriteGro®). Des témoins avec Pythium ultimum, Rhizoctonia solani et Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici ainsi que avec TAL-17, les deux souches de T. atroviride issues de produits commerciaux (Vintec® et Esquive® WP) et la souche T. harzanium seules ont également été réalisés. Des observations macroscopiques ont été réalisées tous les jours après l’inoculation et le diamètre de croissance de Pythium ultimum, Rhizoctonia solani et Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici est mesuré quotidiennement afin d’exprimer les résultats en pourcentage d’inhibition de la croissance des pathogènes. Le pourcentage d’inhibition de la croissance des pathogènes (PICP) a été calculé de la façon suivante : PICP = (DI - D2)/D1 x 100, où DI correspond au diamètre du pathogène et D2 à celui du pathogène en présence de l’une des souches de Trichoderma spp. étudiées. Les résultats ont été analysés selon un test de Student avec un seuil de significativité de 5% par rapport à la souche TAL-17 (* = p ≤ 0,05 ; ** = p ≤ 0,01 ; *** = p ≤ 0,001).
Résultats
Il est observé que la présence de la souche TAL-17 conduit à une inhibition rapide de la croissance du pathogène P. ultimum de l’ordre de 20%, 80% et 95% après respectivement 2, 4 et 6 jours de croissance (voir Figure 10). La souche TAL-17 démontre une efficacité supérieure contre le pathogène P. ultimum. En effet, les résultats obtenus avec la souche TAL-17 sont statistiquement différents de ceux des trois autres souches de Trichoderma spp. testées (deux souches de T. atroviride issue des produits Esquive® WP et Vintec® et la souche de T. harzanium). Il est observé que la présence de la souche TAL-17 conduit à une inhibition de la croissance du pathogène R. solani de l’ordre de 20% dès le deuxième jour de croissance contre moins de 10% pour les autres souches de Trichoderma spp. (voir Figure 11). Après 4 jours de croissance, la souche TAL-17 conduit à une inhibition du pathogène R. solani de l’ordre de 40%, résultat statistiquement différent uniquement de la souche issue du produit commercial Esquive® WP. Cependant, la souche TAL-17 présente au minimum 5% de plus d’efficacité que les deux autres souches de Trichoderma spp. testées (la souche T. atroviride issue des produits Vintec® et la souche de T. harzanium). Après 6 jours de croissance, le pourcentage d’inhibition de la croissance du pathogène A. solani varie de 65 à 85% selon les souches étudiées, le pourcentage d’inhibition le plus élevée étant celui dû à la souche TAL-17.
Il est observé que la présence de la souche TAL-17 conduit à une inhibition de la croissance du pathogène F. oxysporum f. sp. lycopersici de l’ordre de 15% de plus dès le deuxième jour comparé aux trois autres souches de Trichoderma spp. testées (voir Figure 12). Après 4 jours, la souche TAL-17 démontre une efficacité similaire à la souche issue du produit commercial Esquive® WP tandis que les deux autres souches de Trichoderma spp. (la souche T. atroviride issue des produits Vintec® et la souche de T. harzanium ) montrent une activité inférieure contre la pathogène A. oxysporum f. sp. lycopersici de l’ordre de 8 à 14%. Après 6 jours de croissance, la présence de la souche TAL-17 conduit à une inhibition de la croissance du pathogène de l’ordre de 5 à 10% de plus selon les souches de Trichoderma spp. étudiées. Les pourcentages d’inhibition obtenus avec le pathogène F. oxysporum f. sp. lycopersici sont moins élevés qu’avec les pathogènes P. ultimum et R. solani , de même, les différences entres les souches de Trichoderma spp. testées (la souche TAL-17, les deux souches de T. atroviride issue des produits Esquive® WP et Vintec® et la souche de T. harzanium ), sont moins marquées. Le caractère peu invasif sur boîte du pathogène F. oxysporum f. sp. lycopersici. peut expliquer ceci.
Il a également été observé uniquement pour la souche TAL-17, une pigmentation verte des spores, typique du genre Trichoderma après 72 heures de croissance (voir Figure 13).
Le développement des 4 souches de Trichoderma spp. testées seules a été étudié (voir Figure 14). La souche de l’invention, TAL-17 présente un développement similaire à la souche issue du produit commercial Vintec® tandis que la croissance des deux autres souches de Trichoderma spp. (souche de T. atroviride issue du produit Esquive® WP et T. harzanium) dont le développement ne diffère, est bien inférieur à celui de la souche TAL-17. Finalement, il ressort des tests réalisés que la présence de la souche TAL-17 a conduit à une inhibition de la croissance des pathogènes P. ultimum, R. solani et Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici respectivement de l’ordre de 97%, 86% et 20% par rapport au témoin après 6 jours de croissance (voir Figures 10 à 12). De plus, la souche de l’invention a démontré une efficacité supérieure aux autres Trichoderma spp. étudiés contre les trois pathogènes P. ultimum , R. solani et F. oxysporum f. sp. lycopersici dès les premiers jours de croissance, ce qui a également été observé pendant toute la durée des tests effectués. Lors de cette étude, un développement mycélien ainsi qu’une sporulation (reproduction asexuée) plus rapide de la souche TAL-17 a aussi été observé, ce qui lui confère un avantage certain pour lutter contre les trois pathogènes P. ultimum , R. solani et F. oxysporum f. sp. Lycopersici (compétition de l’espace).
(IX) Etude de l’effet biocontrôle de la souche TAL-17 sur la pourriture grise de la tomate
1. Matériels et méthodes
1.1. Matériel biologique
1.1.1. Solanum lycopersicum
La variété Clodano, est une variété à croissance rapide, et adaptée à la culture en serre. De plus, il s’agit de la variété en cultures la plus touchée par la pourriture grise.
Les semis ont été réalisés en plaque de 50 graines dans le substrat TS3 404, Klasman. Les plaques sont placées en enceinte climatique à 25°C avec une photopériode de 16h jusqu’à ce que les graines aient germées, puis les semis ont été placées en serre sous une photopériode naturelle à 18°C la nuit et 23 °C le jour. Lorsque les deux premières feuilles sont apparues les plantules ont été rempotées dans des pot de 3L dans le même terreau et les mêmes conditions de culture que précisées précédemment jusqu’à ce qu’elles atteignent le stade 5/7 feuilles développées (5-6 semaines maximum). Deux à trois fois par semaine les semis et les plantes ont été arrosés à l’eau distillée.
1.1.2. Souches
L’agent phytopathogène : Botrytis cinerea Bel.
La souche Bel a été cultivée sur Potato Dextrose Agar (PDA) à température ambiante 20-23 °C, sous lumière ambiante indirecte jusqu’au stade de sporulation (pendant 15 jours maximum). Deux semaines avant le début des essais la souche Bel a été systématiquement remise en culture sur PDA à partir de cryostocks conservés au -20°C (mélange spores+mycélium dans du tampon phosphate, 20% glycérol). Lorsque le stade de sporulation a été atteint, une solution de spores a été préparée dans du Potato Dextrose Broth (PDB) ¼ et la concentration ajustée à 1.105 ou 1.106 spores/mL selon les essais.
L’agent de biocontrôle : Trichoderma atroviride Trois souches de Trichoderma atroviride ont été testées, celle de l’invention TAL-17 et deux autres issues de produits commerciaux (Esquive® et Vintec®). Elles ont été cultivées sur milieu PDA à 25°C avec un cycle 16h jour/8h nuit. Elles ont été repiquées toutes les semaines par plot et/ou décongelées fraîchement à partir de cryostocks conservés au -20°C (mélange PDB, 20% glycérol).
Lorsque les souches arrivent au stade de sporulation (entre 8-14 jours max, morphotype vert foncé) une suspension de spores a été préparée dans du PDB ½ à une concentration de 1.107 spores/mL.
La souche TAL-17, si nécessaire, a également été remise en culture liquide durant 40-48h (mélange comprenant les spores, le mycélium + un ensemble de métabolites). Pour ce faire, à partir d’une boîte arrivant au stade de sporulation une culture liquide de TAL-17 a été préparée en Erlenmeyer dans du PDB ½ à 1.107 spores/mL et mise sous agitation douce à température et lumière indirecte ambiante durant 40 à 48 h max (préparation d’une culture de TAL-17 liquide avec ses métabolites).
1.2. Méthodes
1.2.1. Essais sur feuilles isolées de tomates
Lorsque les tomates arrivent au stade de développement désiré, les étages foliaires jeunes ont été découpés afin d’être traitées avec les souches de Trichoderma (TAL-17, Esquive® et Vintec®). Sous PSM, chaque foliole a été pulvérisée avec la solution de Trichoderma à 1.107 spores/mL à l’aide d’un petit pulvérisateur à main (1 spray de chaque côté de la foliole). Puis les folioles ont été déposées sur milieu agar 0,8% en boîte de Pétri carré à raison de 4 folioles/boîte de Pétri. Les boîtes de Pétri couvercle entre-ouvert ont été laissés sous PSM durant 3 heures avant l’inoculation des folioles avec la souche Bel. Chaque modalité de traitement comporte en moyenne 8 à 12 folioles soit 2 à 3 boîtes de Pétri. La souche pathogène Bel a été apportée sous forme de goutte de 10 pL à 1.103, 1.105 ou 1.106 spores/mL déposés sur la face supérieure de la feuille, à raison d’une goutte par foliole.
Les boîtes de Pétri ont été mises dans des sachets plastiques hermétiques et transparents contenant 1-2 cotons imbibés d’eau distillée pour maintenir une humidité saturante favorisant le développement du pathogène. L’ensemble a été incubé à plat en Phytotron à 20°C avec 12h jour et 12h d’obscurité. La mesure des lésions se traduisant par des nécroses sur feuilles (mesure du diamètre et/ou longueur + largeur de la tâche nécrotique) a été effectuée à 3 jours après inoculation (DPI = day post inoculation ) et ceci durant 5 jours maximum (jusqu’à développement complet de la maladie sur les témoins inoculés, non traités).
1.2.2. Essais sur tomates entières
Les tomates cultivées en serre ont été placées environ 7h avant le traitement avec la souche TAL-17 dans les enceintes climatiques à 23°C et ont été légèrement humidifiés. Les modalités testées ont été les suivantes :
Enceinte 1 : 4 plantes témoins (non traitées, non inoculées) ;
Enceinte 2 : 4 plantes inoculées avec la souche Botrytis cinerea Bel à 1.106 spores/mL ; Enceinte 3 : 4 plantes traitées avec la souche TAL-17 à 1.107 spores/mL (culture liquide de TAL-17 de 48h max) ; et
Enceinte 4 : 4 plantes traitées avec la TAL-17 à 1.107 spores/mL et inoculées avec la souche Botrytis cinerea Be l à 1.106 spores/mL.
La solution liquide de TAL-17 (l’ensemble de la culture liquide en erlenmeyers durant 40-48h) a été apportée par pulvérisation manuelle des parties aériennes sans aller jusqu’au point de ruissellement. Les tomates ont été incubées durant 16h max avant l’apport de Bel à 23°C, 80- 95% d’hygrométrie, le cycle d’incubation a été commencé par 8h d’obscurité. Les plantes témoins ont été pulvérisées avec du PDB ½.
Une nuit après l’apport de la souche TAL-17, les folioles ont été inoculées avec la souche Bel par un apport de 10 pL d’une solution de spores à 1.106 sp/mL par foliole, et ceci sur 2 étages foliaires (inoculation de 5 folioles/étage foliaire). Les tomates ont été incubées dans les chambres humides à 19°C avec 8h d’obscurité et 16h de jour, en hygrométrie saturante durant 3 jours. Au bout de 3 jours le diamètre des lésions nécrotiques a été mesuré tous les jours et jusqu’à 5 jours /mst-inoculation maximum. 2. Résultats
2.1. Essais sur feuilles isolées de tomates : apport de la souche TAL-17 sous forme d’une culture liquide - effet immédiat et après 2 jours de culture de la souche TAL-17 L’objectif de ces essais in vitro a été de mesurer une éventuelle réduction/inhibition de la capacité d’infection de B. cinerea Bel et donc du développement de la pourriture grise (= lésions nécrotiques) induite par la souche TAL-17 sur feuilles de tomates isolées.
Des études préliminaires ont montré un effet de la souche TAL-17 lorsqu’elle est mise en culture dans du PDB ½ sous agitation à température et lumière ambiante, comparé à un inoculum de TAL-17 préparé directement à partir d’une culture en boîte de Pétri arrivant au stade de sporulation.
Dans cette essai la souche TAL-17 a été mise en culture liquide dans du PDB ½ à 1.107 sp/mL afin d’évaluer l’effet de cette dernière sur le développement de la pourriture grise immédiatement après la mise en culture (JO) et après 2 jours d’agitation. La taille moyenne des lésions nécrotiques sur feuilles a été mesurés quotidiennement dès 2 ou 3 jours après inoculation (dpi) durant 7 jours (Figures 15 et 16) et le pourcentage de réduction de la maladie a été calculé (Tableau 5).
Tableau 5. Effet de la souche TAL-17 sur le développement de la pourriture grise induite par le pathogène Botrytis cinerea Bel
La méthode est la même que décrite dans la légende de la Figure 15. Les valeurs représentent la taille moyenne des lésions nécrotiques mesurée sur 12 folioles par modalité de traitement ± l’écart type et le pourcentage de réduction de la maladie. Dpi pour pour day post inoculation. A été observé un effet beaucoup plus fort de la souche TAL-17 après 2 jours de culture sur le développement de la maladie induite par Bel (Figure 15B) comparé à l’effet immédiat de la souche (Figure 15 A). A JO (effet immédiat) l’effet est également visible avec une réduction des symptômes de 10,67% dès 2 dpi (Tableau 1). Ceci est également vrai à 7 dpi puisqu’a été observé une réduction de 58,2% des symptômes lorsque la souche TAL-17 a été mise en culture durant 2 jours comparé à une réduction de 32% lorsque celle-ci est prélevée directement après la mise en culture (Tableau 5).
L’effet de la souche TAL-17 après 2 jours de culture est donc plus important notamment du fait de sa remise en croissance (production de spores) et la synthèse de métabolites.
2.2. Essais sur feuilles isolées de tomates : effet de la souche TaL après 2 jours de culture liquide en réponse à concentrations croissantes en Botrytis cinerea Bel Dans cet essai a été testé l’effet de la souche TAL-17 à 1.107 sp/mL après 2 jours de culture liquide dans du PDB ½ en réponse à 3 concentrations en Bel : 1.103, 1.105 et 1.107 sp/mL. La méthode est identique à la précédente et les résultats obtenus sont présentés dans le tableau ci- après.
Tableau 6. Effet de la souche TAL-17 sur le développement de la pourriture grise en réponse à 3 concentrations en Botrytis cinerea Bel La souche TAL-17 arrivant au stade de sporulation sur boîte de Pétri a été mise en culture liquide à 1.107 sp/mL dans du PDB ½ durant 2 jours. L’ensemble de la culture de la souche TAL-17 a été sprayé/pulvérisé sur les feuilles de tomates 3 heures avant l’inoculation des feuilles par un dépôt de 10 pL d’une solution de spores de Bel à 1.103, à 1.105 et 1.107 spores/mL. La taille des lésions nécrotiques a été mesurée sur chaque foliole à partir de 3 jours après inoculation (dpi) et ceci jusqu’à 7 jours. Les valeurs représentent la taille moyenne des lésions nécrotiques de 12 folioles par modalité de traitement ± l’écart type ainsi que le pourcentage de réduction des symptômes sur feuille.
A été observé un effet biocontrôle maximal de la souche TAL-17 en réponse à une concentration de 1.105 sp/mL en Bel. En effet dès 3 dpi a été observé une réduction de 100% pour la concentration à 1.105 sp/mL suivi d’une réduction de l’ordre de 66,67% pour la concentration à 1.103 sp/mL en Bel et de 32,35% pour la dernière concentration. Cet effet est conservé jusqu’à 7 jours de lecture.
2.3. Essais sur feuilles isolées de tomates : comparaison de l’effet de 3 souches de Trichoderma atroviridae sur le développement de la pourriture grise induite par la souche Bel
Dans cet essai a été testé l’effet biocontrôle de 3 souches de Trichoderma atroviride : TAL-17, Esquive® et Vintec®, à 1.107 sp/mL en réponse à une concentration de 1.105 sp/mL en Bel. La méthode est identique à la précédente sont présentés dans le tableau ci-après.
Les feuilles de tomates ont été traitées avec la souche TAL-17 après 2 jours de culture liquide en erlens et l’inoculum des deux autres souches ont été directement préparé à partir de boîte de Pétri arrivant au stade de sporulation (soit environ 8 jours).
Tableau 7. Effet de la souche TAL-17, Esquive® et Vintec® sur le développement de la pourriture grise induite par le pathogène Botrytis cinerea Bel à 3 jours après inoculation (dpi).
Les valeurs représentent la taille moyenne des lésions nécrotiques de 12 folioles par modalité de traitement ± l’écart type ainsi que le pourcentage de réduction des symptômes sur feuille.
Encore une fois a été observé un effet biocontrôle maximal de la souche TAL-17 avec une réduction des symptômes à 3 dpi de l’ordre de 68% comparé à une réduction de 42% pour la souche Esquive® et de 58% pour la souche Vintec®. 2.4. Essai plante entière
Un essai a également été conduit pour évaluer l’effet biocontrôle de la souche TAL-17, en solution liquide après 2 jours de culture, sur tomates entières en condition contrôlées. A l’issue de cet essai, a été observé une réduction de l’ordre de 53,17% des symptômes comparé aux plantes non traitées et inoculées. Cet effet a été observé sur 3 répétitions biologiques indépendantes (Figure 17).

Claims

REVENDICATIONS
1. Utilisation d’une souche isolée de Trichoderma atroviride dans la prévention et/ou le traitement d’infection chez un végétal provoquée par un champignon pathogène choisi parmi les champignons des genres Pythium , Rhizoctonia, Alternaria, Fusarium , Phoma et Botrytis, ladite souche isolée de Trichoderma atroviride étant la souche TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants.
2. Utilisation d’une souche isolée de Trichoderma atroviride selon la revendication 1, dans laquelle ledit champignon pathogène appartient à :
- une espèce choisie parmi : P. acanthicum , P. afertile , P. aphanidermatum , P. aquatile , P. deharyanum , P. elongatum , P. gracile , P. imperfectum , P. inflatum , P. intermedium , P. irregulare , P. marinum , P. maritimum , I\ middletoni , I\ monospermum , I\ myriotylum , I\ ostracodes, P. pulchrum , I\ salinum , I\ thallassium et I’. ultimum , et en particulier appartient à l’espèce I\ ultimum ; et/ou
- une espèce choisie parmi : //. alpine , //. anomala , //. callae , //. dichotoma , //. ferruginea , //. floccosa , //. fragariae , //. fraxini , //. fumigata , //. lanuginosa, R. leguminicola , //. menthae , //. mucoroides , //. muneratii, R. oryzae-sativae, R pini- insignis , //. quercus , //. rubi , //. rubiginosa, R. silvestris , //. solani , //. stahlii , //. tuliparum et //. versicolor, et en particulier appartient à l’espèce //. solani ; et/ou
- l’espèce cinerea.
3. Utilisation d’une souche isolée de Trichoderma atroviride selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle ledit végétal appartient à une famille choisie parmi :
les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ;
les Apiacées telles que Daucus carota (carotte) ;
les Astéracées telles que Lactuca sativa (laitue) ou Gerbera spp. (Gerbera) ; les Brassicacées ;
les Chénopadiacées ;
les Cucurbitacées telles que Cuccumis sativus (concombre) ;
les Fabacées telles que Glycine max (soja) ;
les Liliacées ;
les Primulacées telles que Cyclamen spp. (cyclamen) ;
les Rosacées telles que Pyrus spp. (poire), Prunus spp. (cerise), Fragaria spp. (fraise), ou Rosa spp. (rose) ;
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron) ; et
les Valérianacées, en particulier ledit végétal appartient à une famille choisie parmi :
les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ;
les Fabacées telles que Glycine max (soja) ; et
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron), et de préférence ledit végétal est Beta vulgaris (betterave), Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Glycine max (soja).
4. Utilisation d’une souche isolée de Trichoderma atroviride selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, dans laquelle ledit champignon pathogène est P. ultimum et/ou R. solani et/ou B. cinerea et ledit végétal est Beta vulgaris (betterave), Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre) et/ou Glycine max (soja).
5. Utilisation d’une composition phytosanitaire dans la prévention et/ou le traitement chez un végétal d’infection provoquée par un champignon pathogène choisi parmi les champignons des genres Pythium , Rhizoctonia, Alternaria, Fusarium , Phoma et Botrytis, ladite composition phytosanitaire comprenant :
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants en tant que principe actif ; ou - les métabolites émis lors de la production de la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM I- 5333 et/ou un de ses mutants en tant que principe actif ; ou
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants et ses métabolites émis lors de sa production en tant que principe actif ; ou
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants en association avec au moins un autre agent de lutte biologique en tant que principe actif ; ou
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants et ses métabolites émis lors de la production de la souche en association avec au moins un autre agent de lutte biologique en tant que principe actif.
6. Utilisation d’une composition phytosanitaire selon la revendication 5, ladite composition phytosanitaire comprenant une quantité efficace de 104 à 1012 spores/g, plus particulièrement de 107 à 109 spores/g, ladite composition phytosanitaire étant éventuellement obtenue après une étape de préparation la rendant prête à l’épandage.
7. Utilisation d’une souche isolée de Trichoderma atroviride pour favoriser la germination d’une semence de végétaux, ladite souche isolée de Trichoderma atroviride étant la souche TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants et dans laquelle ladite semence de végétaux appartient à un végétal d’une famille choisie parmi :
les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ;
les Apiacées telles que Daucus carota (carotte) ;
les Astéracées telles que Lactuca sativa (laitue) ou Gerbera spp. (Gerbera) ;
les Brassicacées ;
les Chénopadiacées ;
les Cucurbitacées telles que Cuccumis sativus (concombre) ; les Fabacées telles que Glycine max (soja) ;
les Liliacées ;
les Primulacées telles que Cyclamen spp. (cyclamen) ;
les Rosacées telles que Pyrus spp. (poire), Prunus spp. (cerise), Fragaria spp. (fraise), ou Rosa spp. (rose) ;
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron) ; et
les Valérianacées, en particulier ledit végétal appartient à une famille choisie parmi :
les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ;
les Fabacées telles que Glycine max (soja) ; et
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron), et de préférence ledit végétal est Beta vulgaris (betterave), Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Glycine max (soja).
8. Semence enrobée comprenant une graine de végétal, dans laquelle ladite graine de végétal est enrobée par une composition phytosanitaire d’enrobage et appartient à un végétal d’une famille choisie parmi :
les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ;
les Apiacées telles que Daucus carota (carotte) ;
les Astéracées telles que Lactuca sativa (laitue) ou Gerbera spp. (Gerbera) ;
les Brassicacées ;
les Chénopadiacées ;
les Cucurbitacées telles que Cuccumis sativus (concombre) ;
les Fabacées telles que Glycine max (soja) ;
les Liliacées ;
les Primulacées telles que Cyclamen spp. (cyclamen) ;
les Rosacées telles que Pyrus spp. (poire), Prunus spp. (cerise), Fragaria spp. (fraise), ou Rosa spp. (rose) ;
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron) ; et les Valérianacées, et dans laquelle ladite composition phytosanitaire d’enrobage comprend :
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants en tant que principe actif, et éventuellement au moins un agent de fixation ; ou
- les métabolites émis lors de la production de la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM I- 5333 et/ou un de ses mutants en tant que principe actif, et éventuellement au moins un agent de fixation ; ou
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants et ses métabolites émis lors de sa production en tant que principe actif, et éventuellement au moins un agent de fixation, et éventuellement au moins un agent de fixation ; ou
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants en association avec au moins un autre agent de lutte biologique en tant que principe actif, et éventuellement au moins un agent de fixation ; ou
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants et ses métabolites émis lors de la production de la souche en association avec au moins un autre agent de lutte biologique en tant que principe actif, et éventuellement au moins un agent de fixation, en particulier ledit végétal appartenant à une famille choisie parmi :
les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ;
les Fabacées telles que Glycine max (soja) ; et
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron), et de préférence ledit végétal étant Beta vulgaris (betterave), Solanum lycopersicum
(tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Glycine max (soja).
9. Semence enrobée selon la revendication 8, ladite semence enrobée comprenant une quantité efficace de 105 à 108 spores/semence enrobée, préférentiellement 106 spores/semence enrobée.
10. Procédé de protection et/ou de traitement d’un végétal contre une maladie provoquée par un champignon pathogène choisi parmi les champignons des genres Pythium , Rhizoctonia, Alternaria, Fusarium , Phoma et Botrytis comprenant l’application d’une composition phytosanitaire sur au moins une partie dudit végétal ou du sol à proximité dudit végétal, ladite au moins une partie dudit végétal étant en particulier une feuille, un fruit, une graine, ladite composition phytosanitaire comprenant :
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants en tant que principe actif ; ou
- les métabolites émis lors de la production de la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM I- 5333 et/ou un de ses mutants en tant que principe actif ; ou
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants et ses métabolites émis lors de sa production en tant que principe actif ; ou
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants en association avec au moins un autre agent de lutte biologique en tant que principe actif ; ou
- la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333 et/ou un de ses mutants et ses métabolites émis lors de la production de la souche en association avec au moins un autre agent de lutte biologique en tant que principe actif, et ledit végétal appartenant notamment à une famille choisie parmi :
les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ;
les Apiacées telles que Daucus carota (carotte) ;
les Astéracées telles que Lactuca sativa (laitue) ou Gerbera spp. (Gerbera) ;
les Brassicacées ;
les Chénopadiacées ; les Cucurbitacées telles que Cuccumis sativus (concombre);
les Fabacées telles que Glycine max (soja) ;
les Liliacées ;
les Primulacées telles que Cyclamen spp. (cyclamen) ;
les Rosacées telles que Pyrus spp. (poire), Prunus spp. (cerise), Fragaria spp. (fraise), ou Rosa spp. (rose) ;
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron) ; et
les Valérianacées, en particulier ledit végétal appartenant à une famille choisie parmi :
les Amaranthacées telles que Beta vulgaris (betterave) ;
les Fabacées telles que Glycine max (soja) ; et
les Solanacées telles que Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Malus domestica (pomme) ou Capsicum spp. (poivron), et de préférence ledit végétal étant Beta vulgaris (betterave), Solanum lycopersicum (tomate), Solanum tuberosum (pomme de terre), Glycine max (soja).
11. Procédé selon la revendication 10, dans lequel ladite composition phytosanitaire est épandue
- à raison de 10 à 500 L/ha, en particulier de 50 à 250 L/ha, notamment pour la pulvérisation aérienne ; ou
- à raison d’une quantité efficace de 1010 à 1014 spores/ha, en particulier de 1010 à 1012 spores/ha, notamment pour les épandages aériens de type pulvérisation foliaire.
12. Procédé selon la revendication 10 ou 11, dans laquelle ledit champignon pathogène appartient à :
- une espèce choisie parmi : P. acanthicum , P. afertile , P. aphanidermatum , P. aquatile , P. debaryanum , P. elongatum , P. gracile , P. imperfectum , P. inflatum , P. intermedium , P. irregulare , P. marinum , P. maritimum , P. middletoni , P. monospermum , P. myriotylum , P. ostracodes, P. pulchrum , P. salinum , P. thallassium et P. ultimum , et en particulier appartient à l’espèce P. ultimum ; et/ou
- une espèce choisie parmi : R. alpine , R. anomala , R. callae , R. dichotoma , //. ferruginea , //. floccosa , //. fragariae , //. fraxini , //. fumigata , //. lanuginosa, R. leguminicola , //. menthae , //. mucoroides , //. muneratii, R. oryzae-sativae, R pini- insignis , //. quercus , //. rubi , //. rubiginosa, R. silvestris , //. solani , //. stahlii , //. tuliparum et //. versicolor, et en particulier appartient à l’espèce //. solani ; et/ou
- l’espèce cinerea.
13. Procédé selon l’une quelconque des revendications 10 à 12, dans lequel
- la protection dudit végétal comprend une étape d’enrobage de la semence avec ladite composition phytosanitaire ; et/ou
- la protection dudit végétal comprend une étape de pulvérisation de ladite composition phytosanitaire au moment du semis ou à la germination dudit végétal ; et/ou
- la protection dudit végétal comprend soit une application préventive au niveau du sol avant le semis de ladite composition phytosanitaire avec l’apport d’amendement organique, soit une application préventive au niveau du sol avant le semis de ladite composition phytosanitaire sur la culture précédente ; et/ou
- le traitement dudit végétal comprend une étape de pulvérisation de ladite composition phytosanitaire aux cours de différents stades phénologiques de la plante.
14. Souche isolée de Trichoderma atroviride , ladite souche isolée étant une souche mutante de la souche isolée de Trichoderma atroviride TAL-17 déposée le 03 juillet 2018 à la CNCM sous le numéro CNCM 1-5333.
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