EP4125876A1 - Nouvelles cibles thérapeutiques à effet anti-inflammatoire et anti-interféron - Google Patents

Nouvelles cibles thérapeutiques à effet anti-inflammatoire et anti-interféron

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Publication number
EP4125876A1
EP4125876A1 EP21713991.4A EP21713991A EP4125876A1 EP 4125876 A1 EP4125876 A1 EP 4125876A1 EP 21713991 A EP21713991 A EP 21713991A EP 4125876 A1 EP4125876 A1 EP 4125876A1
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EP
European Patent Office
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protein kinase
inhibitor
rock
advantageously
pharmaceutical composition
Prior art date
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Pending
Application number
EP21713991.4A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Jean-Philippe Herbeuval
Benoit Schneider
Nassima BEKKADOUR
Vincent BAUDOUIN
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM
Universite Paris Cite
Original Assignee
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale INSERM
Universite Paris Cite
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Publication date
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    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Definitions

  • the present invention relates to an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex and its use as an anti-inflammatory and anti-interferon agent.
  • the present invention also relates to a pharmaceutical composition comprising an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex and its use in the prevention and / or treatment of inflammatory diseases, viral and / or bacterial infections and autoimmune diseases.
  • Inflammation is a physiological process that is beneficial to the organism insofar as it is transient. It makes it possible, for example, to fight against bacterial or viral infections. Nevertheless, many pathologies affecting several organs such as the intestine, the central nervous system, the osteo-articular system, the skin, the lungs, etc. are associated with chronic inflammation of the tissues. Chronic inflammation alters tissue homeostasis, leading to functional abnormalities such as digestive disorders, amplification of neurological or neurodegenerative diseases, motor disability, skin lesions, respiratory failure ...
  • Chronic inflammation tissue results from the continued production of inflammatory cytokines (TNF ⁇ , interleukins, interferons) by immune cells or related cells (microglia cells in the central nervous system) which leads to the deterioration of cells sensitive to inflammatory factors.
  • cytokines TNF ⁇ , interleukins, interferons
  • immune cells or related cells microglia cells in the central nervous system
  • compositions capable of containing the inflammatory response in particular by preventing or blocking the synthesis of inflammatory cytokines, in order to prevent and / or treat inflammatory diseases, viral and / or bacterial infections and diseases. autoimmune, while reducing the risk of side effects, when administered to the patient.
  • the inhibitors of the ROCK-PDK1 protein kinase complex are capable of preventing and / or inhibiting and / or blocking the synthesis of inflammatory cytokines, such as necrosis factor.
  • tumor alpha tumor alpha
  • IL-Ib interleukin 1b
  • IL-6 interleukin 6
  • IFN interferons
  • the subject of the present invention is an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex for its use as an anti-inflammatory and anti-interferon agent.
  • the present invention relates to an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex for its use as an anti-inflammatory and anti-interferon agent, characterized in that said ROCK-PDK1 protein kinase complex inhibitor is an inhibitor of PDK1 protein kinase, and in that the PDK1 protein kinase inhibitor inhibits the production and / or secretion of inflammatory cytokines and interferons by a cell of the immunity, when brought into contact with said immunity cell.
  • ROCK and PDK1 kinases are known to play a deleterious role in neurodegenerative prion and Alzheimer's diseases. Overactivation of ROCK and PDK1 kinases makes diseased neurons highly vulnerable to the inflammatory cytokine TNF ⁇ due to the membrane accumulation of TNF ⁇ receptors (TNFR) on the cell surface.
  • TNFR TNF ⁇ receptors
  • the pharmacological inhibition of ROCK protein kinase or PDK1 protein kinase has the effect of desensitizing diseased neurons from the toxic effects of TNF ⁇ by reducing the amount of TNFR at the plasma membrane of diseased neurons and thus increasing the survival of neurons .
  • the term “inhibitor” is understood to mean a compound capable of inhibiting or blocking or neutralizing the expression of the targeted metabolic activity; the metabolic activity being lower or even zero in the presence of the inhibitor.
  • the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex induces a decrease in the expression of the activity of the ROCK and PDK1 protein kinases by stimulating the dissociation of the ROCK-PDK1 complex.
  • the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex is neutralizing. In particular, it inhibits or neutralizes the biological function of the ROCK-PDK1 protein kinase complex, which has the consequence of protecting cells from TNF ⁇ inflammatory stress.
  • the neutralizing capacity of the inhibitor can be tested by a standard test, in particular by measuring the capacity of the inhibitor to dissociate the ROCK-PDK1 protein kinase complex and reduce the enzymatic activity of the ROCK and PDK1 kinases (IC50).
  • the inhibitor has an IC50 of between 11nM and 30nM.
  • the inventors have shown that the selective inhibition of the interaction between the ROCK and PDK1 protein kinases inhibits the secretion of inflammatory cytokines (TNFa, interleukin 1b (IL-Ib), interleukin 6 (IL6), MCP1 (CCL2 )) and interferons (IFN) by activated immunity cells, showing a beneficial effect of the ROCK or PDK1 inhibitors according to the invention with respect to inflammatory stress without impact on the viability of said immunity cells .
  • TNFa inflammatory cytokines
  • IL-6 interleukin 6
  • CCL2 MCP1
  • IFN interferons
  • the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex inhibits the secretion of inflammatory cytokines and interferons by an immunity cell activated in vitro and ex-vivo, in particular when the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex is brought into contact with the immunity cell.
  • the inventors have shown that bringing immunity cells into contact with an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention inhibits the secretion of inflammatory cytokines (TNFa, interleukin 1b (IL-Ib), interleukin 6 (IL6), MCP1 (CCL2)) and interferons (IFN) by said immunity cells in comparison with immunity cells which would not have been in contact with said inhibitor of the ROCK protein kinase complex - PDK1 according to the invention.
  • TNFa inflammatory cytokines
  • IL-Ib interleukin 1b
  • IL6 interleukin 6
  • CCL2 MCP1
  • IFN interferons
  • the inventors have shown that bringing immunity cells into contact with an inhibitor of the PDK1 protein kinase according to the invention inhibits the secretion of inflammatory cytokines (TNFa, interleukin 1b (IL-Ib), interleukin 6 (IL6 ), MCP1 (CCL2)) and interferons (IFN) by said immunity cells in comparison with immunity cells which would not have been brought into contact with said PDK1 protein kinase inhibitor according to the invention.
  • TNFa inflammatory cytokines
  • IL-Ib interleukin 1b
  • IL6 interleukin 6
  • CCL2 MCP1
  • IFN interferons
  • a PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) also called BX912 inhibits the secretion of inflammatory cytokines (TNFa, interleukin 1b (IL-Ib ), interleukin 6 (IL6), MCP1 (CCL2)) and interferons (IFN) by said immunity cells in comparison with immunity cells which would not have been brought into contact with said protein inhibitor PDK1 kinase according to the invention.
  • the inhibitors of the ROCK-PDK1 protein kinase complex allow the selective inhibition of the interaction between the ROCK and PDK1 protein kinases.
  • the inventors have shown that the selective inhibition of the interaction between the ROCK and PDK1 protein kinases also prevents the synthesis of inflammatory cytokines (TNFa, Interleukins 1b and 6 (IL-Ib and IL6), MCP1 (CCL2) ) and interferons, showing a beneficial effect of the ROCK or PDK1 inhibitors according to the invention with respect to inflammatory stress without toxic impact.
  • anti-inflammatory agent means an agent capable of preventing and / or blocking and / or inhibiting the synthesis of inflammatory cytokines, and in particular an agent capable of preventing and / or block and / or inhibit the synthesis of tumor necrosis factor alpha (TNFa), interleukin 1b (IL-Ib), MCP1 (CCL2) and interleukin 6 (IL-6).
  • TNFa tumor necrosis factor alpha
  • IL-Ib interleukin 1b
  • CCL2 MCP1
  • IL-6 interleukin 6
  • anti-inflammatory agent means an agent capable of preventing and / or of blocking and / or of inhibiting the secretion of inflammatory cytokines and in particular an agent capable of preventing and / or of blocking and / or of inhibiting the secretion of inflammatory cytokines. or to inhibit the secretion of tumor necrosis factor alpha (TNFa), interleukin 1b (IL-Ib), interleukin 6 (IL-6), MCP1 (CCL2), by a cell of the immunity, when said agent is brought into contact with an immunity cell.
  • TNFa tumor necrosis factor alpha
  • IL-Ib interleukin 1b
  • IL-6 interleukin 6
  • CCL2 MCP1
  • anti-interferon agent means an agent capable of preventing and / or blocking and / or inhibiting the synthesis of interferons (IFN), and in particular an agent capable of prevent and / or block and / or inhibit the synthesis of interferon alpha (type I), interferon gamma (type II) and interferon lambda (type III).
  • anti-interferon agent means an agent capable of preventing and / or blocking and / or inhibiting the secretion of interferons and in particular an agent capable of preventing and / or blocking and / or to inhibit the secretion of interferon alpha (type I), interferon gamma (type II) and interferon lambda (type III) by an immunity cell, when said agent is brought into contact with an immunity cell.
  • anti-inflammatory agent and anti-interferon agent is understood to mean an agent capable of preventing and / or blocking and / or inhibiting the synthesis of inflammatory cytokines and of interferons and in particular an agent capable of preventing and / or blocking and / or inhibiting the synthesis of tumor necrosis factor alpha (TNFa), interleukin 1b (IL-Ib), interleukin 6 (IL-6) , MCP1 (CCL2), interferon alpha (type I), interferon gamma (type II) and interferon lambda (type III).
  • TNFa tumor necrosis factor alpha
  • IL-Ib interleukin 1b
  • IL-6 interleukin 6
  • MCP1 CCL2
  • interferon alpha type I
  • interferon gamma type II
  • interferon lambda type III
  • anti-inflammatory agent and anti-interferon agent means an agent capable of preventing and / or blocking and / or inhibiting the secretion of inflammatory cytokines and in particular an agent capable of preventing and / or or block and / or inhibit the secretion of tumor necrosis factor alpha (TNFa), interleukin 1b (IL-Ib), interleukin 6 (IL-6), MCP1 (CCL2), interferon alpha (type I), gamma interferon (type II) and lambda interferon (type III) by an immunity cell, when said agent is brought into contact with an immunity cell.
  • TNFa tumor necrosis factor alpha
  • IL-Ib interleukin 1b
  • IL-6 interleukin 6
  • MCP1 CCL2
  • interferon alpha type I
  • gamma interferon type II
  • lambda interferon type III
  • the term “immunity cell” or “immune system cell” or “immune cell” is understood to mean any cell of the immune system which originates from a hematopoietic stem cell in the bone marrow.
  • the immunity cells according to the invention are peripheral blood mononuclear cells (PBMC).
  • PBMC peripheral blood mononuclear cells
  • the term "peripheral blood mononuclear cells (PBMC)" refers to peripheral blood cells having a round nucleus. These mononuclear blood cells recirculate between tissues and blood and are an essential part of the immune system to fight infections and adapt to intruders.
  • lymphocyte cells There are two main types of mononuclear cells: lymphocyte cells and myeloid cells.
  • the lymphocyte population of PBMCs generally consists of T cells, B cells and NK cells.
  • the myeloid population of PBMCs consists of dendritic cells (myeloid and plasmacytoid) and monocytes / macrophages.
  • PBMCs can be isolated from whole blood samples by methods well known in the art (eg, Ficoll gradient).
  • the immunity cell is a T lymphocyte.
  • the immunity cell is a B lymphocyte.
  • T lymphocyte and “T cell” are used interchangeably and refer to a main type of white blood cell, which completes its maturation in the thymus and which plays various roles in the immune system. , including identifying specific foreign antigens in the body and activating and / or deactivating other immune cells.
  • the T lymphocyte can be any T cell selected from: a cultured T cell, for example, a primary T cell, or a T cell of a cultured T cell line, for example Jurkat, SupTI, etc., or a T cell obtained from a mammal.
  • T cells can be CD3 + cells.
  • the T cell can be any type of T cell and can be at any stage of development including, but not limited to, double positive CD4 + / CD8 + T cells, helper T cells CD4 + (eg, Th1 and Th2 cells), CD8 + T cells (eg, cytotoxic T cells), a T cell found among peripheral blood mononuclear cells (PBMC), peripheral blood leukocytes (PBL) , a T cell which is part of tumor infiltrating lymphocytes (TIL), memory T cells, naive T cells, regulatory T cells, gamma delta T cells (Tyô cells). Additional types of helper T cells include cells such as Th3, Th17, Th9, or Tfh cells.
  • helper T cells include cells such as Th3, Th17, Th9, or Tfh cells.
  • T cell can also refer to a genetically modified T cell, such as a T cell modified to express a T cell receptor (TCR) or a chimeric antigen receptor (CAR).
  • T cell can also be differentiated from a stem cell or a progenitor cell.
  • B cell or “B lymphocyte cell” or “B lymphocyte” means a lymphocyte cell which is produced in the bone marrow, produces immunoglobulins and is involved in the production of antibodies during the humoral immune response.
  • the B lymphocyte can be any B cell, chosen from a B stem cell, a pro-B cell, a pre-B cell, a naive B cell, an activated B cell, a memory GC B cell, a late plasma cell and a plasma cell.
  • the term “bringing into contact”, when used with reference to an action performed on an immune cell, is used interchangeably to denote the cultivation, incubation or exposure of. an immune cell with one or more of the inhibitors of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention.
  • the term “bringing into contact”, when used in reference to an action performed on an immune cell is used interchangeably to denote the cultivation, incubation or exposure of an immune cell with an immune cell. or more of the PDK1 protein kinase inhibitors according to the invention.
  • a “non-contacted” or “untreated” cell is a cell which has not been treated, for example, cultured, brought into contact or incubated with one or more of the inhibitors of the complex of. ROCK-PDK1 protein kinases according to the invention.
  • Cells contacted with a stimulating agent, such as R848, CpG-A, or contacted with another vehicle are examples of cells contacted.
  • the term “synthesis of inflammatory cytokines” or “production of inflammatory cytokines” or “secretion of inflammatory cytokines” means the release into the external medium of inflammatory cytokines by a cell, advantageously a cell of the. immunity.
  • the expression “synthesis of interferon” or “production of interferon” or “secretion of interferon” is understood to mean the release into the external medium of interferon by a cell, advantageously a cell of the. immunity.
  • the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex is chosen from an inhibitor of ROCK protein kinase, an inhibitor of PDK1 protein kinase, an agent dissociating the ROCK protein kinase complex. -PDK1 and a combination of these.
  • the term “ROCK protein kinase inhibitor” is understood to mean a compound capable of inhibiting or blocking or neutralizing the expression of the metabolic activity of the ROCK protein kinase.
  • the capacity of the inhibitor to neutralize the ROCK protein kinase (IC50) is between 11nM and 30nM.
  • the ROCK protein kinase inhibitor is a compound capable of inhibiting or blocking or neutralizing the expression of the metabolic activity of the ROCK protein kinase of an immunity cell.
  • the capacity of the inhibitor to neutralize the ROCK protein kinase of an immunity cell is between 11nM and 30nM.
  • the term “PDK1 protein kinase inhibitor” is intended to mean a compound capable of inhibiting or blocking or neutralizing the expression of the metabolic activity of the PDK1 protein kinase.
  • the capacity of the inhibitor to neutralize the PDK1 protein kinase (IC50) is between 11nM and 30nM.
  • the PDK1 protein kinase inhibitor is a compound capable of inhibiting or blocking or neutralizing the expression of the metabolic activity of the PDK1 protein kinase of an immunity cell.
  • the capacity of the inhibitor to neutralize the PDK1 protein kinase of an immunity cell is between 11nM and 30nM.
  • the term “agent dissociating the ROCK-PDK1 protein kinase complex” is understood to mean an intercalating agent capable of dissociating the ROCK-PDK1 protein kinase complex, binding in the zone of interaction between the ROCK protein kinases. -PDK1, causing a steric clash and separating the ROCK protein kinase from the PDK1 protein kinase.
  • the agent dissociating the ROCK-PDK1 protein kinase complex is an intercalating agent capable of dissociating the ROCK-PDK1 protein kinase complex from an immunity cell, by attaching itself to the zone of interaction between the proteins. ROCK-PDK1 kinases, causing steric clash and separating the ROCK protein kinase from the PDK1 protein kinase.
  • the term “combination” is understood to mean a mixture of at least two inhibitors of the ROCK-PDK1 protein kinase complex, said inhibitors of the ROCK-PDK1 protein kinase complex possibly being different inhibitors but belonging to the same class of inhibitors (for example: ROCK protein kinase inhibitors, PDK1 protein kinase inhibitors or ROCK-PDK1 protein kinase complex dissociators) or inhibitors belonging to different classes of inhibitors.
  • the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention can be a combination of at least two different ROCK protein kinase inhibitors, advantageously at least three different ROCK protein kinase inhibitors. , advantageously at least four different ROCK protein kinase inhibitors, advantageously at least five different ROCK protein kinase inhibitors, advantageously at least six different ROCK protein kinase inhibitors, or more.
  • the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention can be a combination of at least two different inhibitors of the PDK1 protein kinase, advantageously at least three inhibitors of the PDK1 protein kinase. different, advantageously at least four different PDK1 protein kinase inhibitors, advantageously at least five different PDK1 protein kinase inhibitors, advantageously at least six different PDK1 protein kinase inhibitors, or more.
  • the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention can be a combination of at least two agents dissociating the ROCK-PDK1 complex of different protein kinases, advantageously at least three dissociating agents.
  • the complex of different ROCK-PDK1 protein kinases advantageously at least four agents dissociating the complex of different ROCK-PDK1 protein kinases, advantageously at least five agents dissociating the complex of different ROCK-PDK1 protein kinases, advantageously at least six agents dissociating the complex different ROCK-PDK1 protein kinases, or more.
  • the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention can be a combination of at least one inhibitor of ROCK protein kinase and of at least one inhibitor of PDK1 protein kinase.
  • the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention can be a combination of at least one inhibitor of the ROCK protein kinase and of at least one agent dissociating the complex of proteins.
  • the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention can be a combination of at least one inhibitor of the PDK1 protein kinase and of at least one agent dissociating the complex of proteins. ROCK-PDK1 kinases.
  • the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention can be a combination of at least one inhibitor of ROCK protein kinase, of at least one inhibitor of PDK1 protein kinase. and at least one agent for dissociating the ROCK-PDK1 protein kinase complex.
  • the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex is chosen from the compounds of formulas (I) to (XIV): or one of its acceptable pharmaceutical salts. or one of its acceptable pharmaceutical salts or one of its acceptable pharmaceutical salts.
  • the compounds of formulas (I) to (VI) are inhibitors of the PDK1 protein kinase.
  • the compound of formula (I) is the compound BX320.
  • the compound of formula (II) is the compound BX517.
  • the compound of formula (III) is the compound BX795.
  • the compound of formula (IV) is the compound BX912.
  • the compound of formula (V) is the compound GSK2334470.
  • the compound of formula (VI) is the compound MP7.
  • the compounds of formulas (VII) to (X) are inhibitors of the ROCK protein kinase.
  • the compound of formula (VII) is the compound Y-27632 (or Y27632).
  • the compound of formula (VIII) is dimethylfasudil.
  • the compound of formula (IX) is fasudil.
  • the compound of formula (X) is hydroxyfasudil.
  • the compounds of formulas (XI) to (XIV) are agents which dissociate the ROCK-PDK1 protein kinase complex.
  • the inventors have shown that the inhibition of the ROCK protein kinase by the compound of formula (VII) or the compound of formula (VIII) restores a “normal” level of TNF ⁇ in the culture medium of the neurons infected with the prions. . These results show that the inhibition of the ROCK kinase opposes the production / secretion of a pro-inflammatory factor, TNF ⁇ .
  • the inventors have also shown that the incubation of human peripheral blood mononuclear cells with a ROCK protein kinase inhibitor chosen from the compound of formula (VII) or the compound of formula (VIII), before being stimulated with an activator (R848) of Toll-Like Receptors (TLR) 7/8 to mimic infection by a single-stranded RNA virus, inhibits the production of TNF ⁇ induced by TLR7 / 8 stimulation, but also the production and secretion of pro cytokines -inflammatory, such as IL-6, IL-Ib and interferons induced by TLR7 / 8 stimulation.
  • a ROCK protein kinase inhibitor chosen from the compound of formula (VII) or the compound of formula (VIII)
  • the inventors have also shown that the inhibitor of the PDK1 protein kinase of formula (IV) inhibits the expression of the CD69 marker induced by the CD3 / CD28 beads on the surface of the T lymphocytes, revealing an anti-inflammatory effect of the compound. of formula (IV) on the activation of T lymphocytes without affecting their viability.
  • the inventors have also shown that the inhibitor of the PDK1 protein kinase of formula (IV) inhibits the expression of the CD69 marker induced by CpG-A, TLR9 ligand on the surface of B lymphocytes, revealing an anti- inflammatory action of the PDK1 inhibitor of formula (IV) on the activation of B lymphocytes without affecting their viability.
  • the inventors have also shown that the incubation of purified human monocytes with an inhibitor of the PDK1 protein kinase (compound of formula (IV)), before being stimulated with an activator of Toll-Like Receptors (TLR) 2 / 4 to mimic a bacterial infection, inhibits the production of TNF ⁇ induced by TLR2 / 4 stimulation, but also the secretion of pro-inflammatory cytokines on mononuclear cells of human peripheral blood, such as IL-6, IL-Ib, GM- CSF and interferons induced by stimulation of TLR4 by lipopolysaccharide (LPS) or TLR2 by lipoteichoic acids, two bacterial agents inducing an inflammatory response.
  • an inhibitor of the PDK1 protein kinase compound of formula (compound of formula (IV)
  • TLR Toll-Like Receptors
  • an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex in particular an inhibitor of the protein kinase ROCK or a PDK1 protein kinase inhibitor has a preventive effect on the increased production of inflammatory cytokines induced by stimulation of TLR2 / 4 or TLR7 / 8.
  • an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex in particular an inhibitor of ROCK protein kinase or an inhibitor of PDK1 protein kinase, has a curative effect. on the production of interferon induced by stimulation of TLR2 / 4 or TLR7 / 8.
  • the inhibitors of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention can be used in the form of a pharmaceutically acceptable salt and can comprise salts, hydrates and solvates prepared according to standard methods, well known to those skilled in the art. job.
  • a pharmaceutically acceptable salt can comprise salts, hydrates and solvates prepared according to standard methods, well known to those skilled in the art. job.
  • salts derived from carboxylic acids such as carboxylates (COO-), but also sulphonates (-S03-), phosphonates (P032-), quaternary ammoniums (NR4 +). or sulfonamines (SO2-NH3 +).
  • suitable salts include pharmaceutically or physiologically acceptable acid addition salts.
  • suitable salts comprise acid addition salts formed with various pharmaceutically or physiologically acceptable free acids.
  • acids can include, but are not limited to, hydrochloric acid, bromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, citric acid, acetic acid, lactic acid, l 'tartaric acid, fumaric acid, formic acid, propionic acid, oxalic acid, trifluoroacetic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, maleic acid, benzoic acid, l 'gluconic acid, glycolic acid, succinic acid, 4-morpholineethanesulfonic acid, camphorsulfonic acid, nitrobenzenesulfonic acid, hydroxy-O-sulfonic acid, 4-toluenesulfonic acid, ruktu knife, EMBO acid, glutamic acid, aspartic acid, etc.
  • hydrochloric acid bromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, citric acid, acetic acid, lactic acid, l 'tartaric acid, fumaric acid, formic
  • metal salts can be prepared using bases.
  • alkali metal or alkaline earth metal salts can be obtained by dissolving the compound in an excess of an alkali metal hydroxide or alkaline earth metal hydroxide solution, filtering the compound salts. undissolved and evaporating and drying the filtrate.
  • sodium, potassium, lithium, cesium, magnesium or calcium salts are pharmaceutically suitable metal salts, but not limited to them.
  • silver salts corresponding to metal salts can be obtained by reacting alkali metals or alkaline earth metals with suitable silver salts (eg nitrates). Mention may also be made of ammoniums (NH4 +) or amines in ammonium form such as diethylamine (EDTA), pyrrolidine, piperidine and pyridine.
  • the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex is the compound of formula (IV) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • Another aspect of the present invention relates to a pharmaceutical composition comprising at least one inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as described above or an acceptable pharmaceutical salt thereof, as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or a pharmaceutically acceptable carrier and / or diluent and / or vehicle.
  • At least one inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex is chosen from an inhibitor of ROCK protein kinase, an inhibitor of PDK1 protein kinase and an agent dissociating the ROCK-PDK1 protein kinase complex or a combination of these. this.
  • the pharmaceutical composition comprises at least one ROCK protein kinase inhibitor as described above or an acceptable pharmaceutical salt thereof, as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or a carrier and / or a carrier and / or a carrier. or a pharmaceutically acceptable diluent and / or vehicle.
  • the pharmaceutical composition according to the invention can comprise a combination of at least two different ROCK protein kinase inhibitors, advantageously at least three different ROCK protein kinase inhibitors, advantageously at least four different ROCK protein kinase inhibitors, preferably at least five different ROCK protein kinase inhibitors, more preferably at least six different ROCK protein kinase inhibitors, or more.
  • the pharmaceutical composition comprises at least one PDK1 protein kinase inhibitor as described above or an acceptable pharmaceutical salt thereof, as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or a carrier and / or a pharmaceutically acceptable diluent and / or vehicle.
  • the pharmaceutical composition according to the invention can comprise a combination of at least two different PDK1 protein kinase inhibitors, advantageously at least three different PDK1 protein kinase inhibitors, advantageously at least four different PDK1 protein kinase inhibitors, advantageously at least five different PDK1 protein kinase inhibitors, more preferably at least six different PDK1 protein kinase inhibitors, or more.
  • the pharmaceutical composition comprises at least one agent dissociating the ROCK-PDK1 protein kinase complex as described above or an acceptable pharmaceutical salt thereof, as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or a carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle.
  • the pharmaceutical composition according to the invention can comprise a combination of at least two agents dissociating the complex of different ROCK-PDK1 protein kinases, advantageously at least three agents dissociating the complex of different ROCK-PDK1 protein kinases, advantageously at least four.
  • agents dissociating the complex of different ROCK-PDK1 protein kinases preferably at least five agents dissociating the complex of different ROCK-PDK1 protein kinases, preferably at least six agents dissociating the complex of different ROCK-PDK1 proteins, or more.
  • the pharmaceutical composition comprises a combination comprising at least one inhibitor of ROCK protein kinases and at least one inhibitor of PDK1 protein kinases or one of their pharmaceutically acceptable salts as described. previously, as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or a carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle.
  • the pharmaceutical composition comprises a combination comprising at least one inhibitor of ROCK protein kinases and at least one agent for dissociating the complex of ROCK-PDK1 protein kinases or one of their pharmaceutically acceptable salts as described above, such as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or a carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle.
  • the pharmaceutical composition comprises a combination comprising at least one inhibitor of PDK1 protein kinases and at least one agent for dissociating the ROCK-PDK1 protein kinase complex or one of their pharmaceutically acceptable salts as described above, such as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or a carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle.
  • the pharmaceutical composition comprises a combination comprising at least one ROCK protein kinase inhibitor, at least one PDK1 protein kinase inhibitor and at least one agent for dissociating the ROCK-PDK1 protein kinase complex or one of theirs.
  • acceptable pharmaceutical salts as described above, as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or a carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle.
  • the invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically active amount of at least one ROCK protein kinase inhibitor or an acceptable pharmaceutical salt thereof as described above and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or a carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle.
  • the pharmaceutical composition according to the invention can comprise a combination of at least two different ROCK protein kinase inhibitors, advantageously at least three different ROCK protein kinase inhibitors, advantageously at least four different ROCK protein kinase inhibitors, preferably at least five different ROCK protein kinase inhibitors, more preferably at least six different ROCK protein kinase inhibitors, or more.
  • the invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically active amount of at least one inhibitor of PDK1 protein kinases or an acceptable pharmaceutical salt thereof as described above and at least one pharmaceutically acceptable excipient. and / or a carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle.
  • the pharmaceutical composition according to the invention can comprise a combination of at least two different PDK1 protein kinase inhibitors, advantageously at least three different PDK1 protein kinase inhibitors, advantageously at least four different PDK1 protein kinase inhibitors, advantageously at least five different PDK1 protein kinase inhibitors, more preferably at least six different PDK1 protein kinase inhibitors, or more.
  • the invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically active amount of at least one agent for dissociating the complex. of ROCK-PDK1 protein kinases or a pharmaceutically acceptable salt thereof as described above and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or a carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the pharmaceutical composition according to the invention can comprise a combination of at least two agents dissociating the complex of different ROCK-PDK1 protein kinases, advantageously at least three agents dissociating the complex of different ROCK-PDK1 protein kinases, advantageously at least four.
  • agents dissociating the complex of different ROCK-PDK1 protein kinases preferably at least five agents dissociating the complex of different ROCK-PDK1 protein kinases, preferably at least six agents dissociating the complex of different ROCK-PDK1 proteins, or more.
  • the invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically active amount of a combination comprising at least one ROCK protein kinase inhibitor and at least one PDK1 protein kinase inhibitor as described above or one of theirs. acceptable pharmaceutical salts and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or a carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically active amount of a combination comprising at least one ROCK protein kinase inhibitor and at least one agent for dissociating the ROCK-PDK1 protein kinase complex as described. previously or one of their acceptable pharmaceutical salts and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or a carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle.
  • the invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically active amount of a combination comprising at least one inhibitor of PDK1 protein kinases and at least one agent for dissociating the ROCK-PDK1 protein kinase complex as described. previously or one of their acceptable pharmaceutical salts and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or a carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle.
  • the invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically active amount of a combination comprising at least one ROCK protein kinase inhibitor, at least one PDK1 protein kinase inhibitor and at least one complex dissociating agent.
  • ROCK-PDK1 protein kinases as described above or one of their pharmaceutically acceptable salts and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or a carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle.
  • the pharmaceutical composition comprising at least one inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above is particularly effective for the prevention and / or treatment of inflammatory diseases, viral infections and autoimmune diseases.
  • the pharmaceutical composition comprising the at least one ROCK protein kinase inhibitor or a pharmaceutically acceptable salt thereof as defined above is particularly effective for prevention and / or treatment. inflammatory diseases, viral infections and autoimmune diseases.
  • the pharmaceutical composition according to the invention can comprise a combination of at least two different ROCK protein kinase inhibitors, advantageously at least three different ROCK protein kinase inhibitors, advantageously at least four different ROCK protein kinase inhibitors, preferably at least five different ROCK protein kinase inhibitors, more preferably at least six different ROCK protein kinase inhibitors, or more.
  • the pharmaceutical composition comprising the at least one inhibitor of PDK1 protein kinases or a pharmaceutically acceptable salt thereof as defined above is particularly effective for prevention and / or treatment.
  • inflammatory diseases e.g., pulmonary embolism, diabetes fibrosis, diabetes fibrosis, neurological disorders, neurological disorders, neurological disorders, neurological disorders, neurological disorders, neurological disorders, neurological disorders, neurological disorders, neurological disorders, neurological disorders, neurological disorders, neurological disorders, neurological disorders, neurological disorders, or more.
  • the pharmaceutical composition comprising at least one agent dissociating the ROCK-PDK1 protein kinase complex or a pharmaceutically acceptable salt thereof as defined above is particularly effective for the prevention and / or the treatment of inflammatory diseases, viral infections and autoimmune diseases.
  • the pharmaceutical composition according to the invention can comprise a combination of at least two agents dissociating the complex of different ROCK-PDK1 protein kinases, advantageously at least three agents dissociating the complex of different ROCK-PDK1 protein kinases, advantageously at least four.
  • agents dissociating the complex of different ROCK-PDK1 protein kinases preferably at least five agents dissociating the complex of different ROCK-PDK1 protein kinases, preferably at least six agents dissociating the complex of different ROCK-PDK1 proteins, or more.
  • the pharmaceutical composition comprising the combination comprising at least one inhibitor of ROCK protein kinases and at least one inhibitor of PDK1 protein kinases or one of their pharmaceutically acceptable salts, as described above, is particularly effective for the prevention and / or treatment of inflammatory diseases, viral infections and autoimmune diseases.
  • the pharmaceutical composition comprising the combination comprising at least one inhibitor of ROCK protein kinases and at least one agent dissociating the complex of ROCK-PDK1 protein kinases or one of their pharmaceutically acceptable salts, such as as described above, is particularly effective for the prevention and / or treatment of inflammatory diseases, viral infections and autoimmune diseases.
  • the pharmaceutical composition comprising the combination comprising at least one PDK protein kinase inhibitor and at least one agent dissociating the ROCK-PDK1 protein kinase complex or one of their pharmaceutically acceptable salts, as described above, are particularly effective for the prevention and / or treatment of inflammatory diseases, viral infections and autoimmune diseases.
  • the pharmaceutical composition comprising the combination comprising at least one inhibitor of ROCK protein kinases, at least one inhibitor of PDK1 protein kinases and at least one agent for dissociating the ROCK-PDK1 protein kinase complex. , or one of their pharmaceutically acceptable salts, as described above, is particularly effective for the prevention and / or treatment of inflammatory diseases, viral infections and autoimmune diseases.
  • the patient can be a human.
  • the patient can be a non-human animal, in particular a dog, a cat, a horse, a cow, a pig, a sheep, a goat, a deer or a primate.
  • a therapeutically effective amount of at least one inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention, as provided herein, "therapeutically effective” or “an effective to treat” or “pharmaceutically effective” amount of the ROCK-PDK1 protein kinase complex inhibitor or composition required to inhibit or reverse a disease (e.g., to treat inflammation , viral infections and autoimmune diseases).
  • a disease e.g., to treat inflammation , viral infections and autoimmune diseases.
  • the determination of a therapeutically effective amount depends specifically on factors such as the toxicity and effectiveness of the drug. These factors will differ depending on other factors such as potency, relative bioavailability, patient body weight, severity of side effects, and preferred mode of administration. Toxicity can be determined using methods well known in the art.
  • Efficacy can be determined using the same indications. Efficacy can be measured by a decrease in inflammation or infection, for example in a juvenile idiopathic arthritis model. A pharmaceutically effective amount is therefore an amount which the clinician considers toxicologically tolerable, but effective.
  • the dosage can be suitably adjusted to achieve the desired drug (eg, an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex of the invention) at local or systemic levels, depending on the mode of administration. In the event that the response in a patient is insufficient at such doses, even higher doses (or higher effective doses by a different and more localized route of administration) may be used as long as the patient is tolerated. permits. Multiple doses per day can also be used to achieve appropriate systemic levels of the ROCK-PDK1 protein kinase complex inhibitor according to the invention. Appropriate systemic levels can be determined, for example, by measuring the patient's peak or prolonged plasma level. "Dose" and “dosage” are used interchangeably herein.
  • the amount of inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention or of pharmaceutical composition comprising at least one inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as active principle administered to a patient is 0.5 mg to 30 mg per kg of body weight, depending on the intensity of the inflammation.
  • the amount of inhibitor of the ROCK- protein kinase complex PDK1 according to the invention or of a pharmaceutical composition comprising at least one inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as an active principle administered to a patient is 1.0 mg, advantageously 1.5 mg, advantageously 2.0 mg, advantageously 2.5 mg, advantageously 3.0 mg, advantageously 3.5 mg, advantageously 4.0 mg, advantageously 4.5 mg, advantageously 5.0 mg, advantageously 5.5 mg , advantageously 6.0 mg, advantageously 6.5 mg, advantageously 7.0 mg, advantageously 7.5 mg, advantageously 8.0 mg, advantageously 8.5 mg, advantageously 9.0 mg, advantageously 9.5 mg, advantageously 10.0 mg, advantageously 10.5 mg, advantageously 11.0 mg, advantageously 11.5 mg, advantageously 12.0 mg, advantageously 12.5 mg, advantageously 13.0 mg, advantageously 13.5 mg, advantageously 14.0 mg, advantageously 14.5 mg, advantageously 15.0 mg, advantageously 15.5 mg, before advantageously 16.0 mg, advantageously 16.5 mg, advantageously
  • the amount of inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention or of a pharmaceutical composition comprising at least one inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as an active principle administered to a patient is between 0, 5 mg to 30.0 mg per kg of body weight, advantageously between 0.5 mg and 29.0 mg per kg of body weight, advantageously between 0.5 mg and 28.0 mg per kg of body weight, advantageously between 0 , 5 mg and 27.0 mg per kg of body weight, advantageously between 0.5 mg and 26.0 mg per kg of body weight, advantageously between 0.5 mg and 25.0 mg per kg of body weight, advantageously between 0.5 mg and 24.0 mg per kg of body weight, advantageously between 0.5 mg and 23.0 mg per kg of body weight, advantageously between 0.5 mg and 22.0 mg per kg of body weight, advantageously between 0.5 mg and 21 mg per kg of body weight, advantageously between 0.5 mg and 20.0 mg per kg of body weight, advantageously between 0.5 mg and 19.0 mg per kg of body
  • the amount of inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention or of pharmaceutical composition comprising at least one inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as active principle administered to a patient is 0.5 mg to 30 mg per kg of body weight, depending on the intensity of the infection.
  • the amount of inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention or of a pharmaceutical composition comprising at least one inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as an active principle administered to a patient is 1.0.
  • the amount of inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention or of a pharmaceutical composition comprising at least one inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as an active principle administered to a patient is between 0, 5 mg to 30.0 mg per kg of body weight, advantageously between 0.5 mg and 29.0 mg per kg of body weight, advantageously between 0.5 mg and 28.0 mg per kg of body weight, advantageously between 0 , 5 mg and 27.0 mg per kg of body weight, advantageously between 0.5 mg and 26.0 mg per kg of body weight, advantageously between 0.5 mg and 25.0 mg per kg of body weight, advantageously between 0.5 mg and 24.0 mg per kg of body weight, advantageously between 0.5 mg and 23.0 mg per kg of body weight, advantageously between 0.5 mg and 22.0 mg per kg of body weight, advantageously between 0.5 mg and 21 mg per kg of body weight, advantageously between 0.5 mg and 20.0 mg per kg of body weight, advantageously between 0.5 mg and 19.0 mg per kg of body
  • this unit dose can be repeated if necessary.
  • the pharmaceutical composition according to the invention is administered to the patient at a rate of one, two, three, four, five, six or seven times per week.
  • the pharmaceutical composition according to the invention is administered to the patient at a rate of seven times per week, ie one administration per day for seven consecutive days.
  • the pharmaceutical composition according to the invention is administered to the patient at a rate of six times per week.
  • the pharmaceutical composition according to the invention is administered to the patient at a rate of five times per week.
  • the pharmaceutical composition according to the invention is administered to the patient at a rate of four times per week.
  • the pharmaceutical composition according to the invention is administered to the patient at a rate of three times per week.
  • the pharmaceutical composition according to the invention is administered to the patient at a rate of twice a week.
  • the pharmaceutical composition according to the invention is administered to the patient at a rate of once a week.
  • the pharmaceutical compositions provided are used for in vivo applications.
  • the pharmaceutical compositions used may be in solid, semi-solid or liquid dosage form such as, for example, tablets, pills, powders, capsules, gels, ointments, liquids, suspensions.
  • the pharmaceutical compositions are administered in unit dosage forms suitable for a single administration of precise doses.
  • the pharmaceutical compositions can also comprise, depending on the desired formulation, at least one pharmaceutically acceptable carrier or diluent, which are defined as water-based vehicles commonly used to formulate pharmaceutical compositions for animal or human administration.
  • the diluent is chosen so as not to affect the biological activity of the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention.
  • examples of such diluents are distilled water, physiological saline, Ringer's solution, dextrose solution and Hank's solution.
  • the pharmaceutical composition may also include other medicinal agents, pharmaceutical agents, carriers, adjuvants, non-toxic, non-therapeutic, non-immunogenic stabilizers, etc. Effective amounts of such diluent or vehicle are amounts effective to obtain a pharmaceutically acceptable solution in terms of formulation, solubility of components, biological activity, etc.
  • the pharmaceutical compositions provided herein are sterile.
  • At least one inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the present invention in an amount of 0.5 to 98% by weight, expressed by weight, or even more, relative to the total weight of the pharmaceutical composition considered.
  • the pharmaceutical composition according to the invention comprises only at least one inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex, as a single active principle.
  • the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex of the pharmaceutical composition is chosen from the compounds of formulas (I) to (XIV): or one of its acceptable pharmaceutical salts or one of its acceptable pharmaceutical salts. or one of its acceptable pharmaceutical salts or one of its acceptable pharmaceutical salts.
  • the pharmaceutical composition comprises the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex of formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, as the sole active principle. or one of its acceptable pharmaceutical salts and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or a carrier or a diluent or a pharmaceutically acceptable vehicle.
  • the pharmaceutical composition comprises the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex of formula (II) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, as the sole active principle. or one of its acceptable pharmaceutical salts and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or a carrier or a diluent or a pharmaceutically acceptable vehicle.
  • the pharmaceutical composition comprises the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex of formula (III) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, as the sole active principle. or one of its acceptable pharmaceutical salts and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or a carrier or a diluent or a pharmaceutically acceptable vehicle.
  • the pharmaceutical composition comprises the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex of formula (IV) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, as the sole active principle. or one of its acceptable pharmaceutical salts and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or a carrier or a diluent or a pharmaceutically acceptable vehicle.
  • the pharmaceutical composition comprises the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex of formula (V) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, as the sole active principle. or one of its acceptable pharmaceutical salts and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or a carrier or a diluent or a pharmaceutically acceptable vehicle.
  • the pharmaceutical composition comprises the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex of formula (VI) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, as the sole active principle. or one of its acceptable pharmaceutical salts and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or a carrier or a diluent or a pharmaceutically acceptable vehicle.
  • the pharmaceutical composition comprises the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex of formula (VII) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, as the sole active principle. or one of its acceptable pharmaceutical salts and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or a carrier or a diluent or a pharmaceutically acceptable vehicle.
  • the pharmaceutical composition comprises the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex of formula (VIII) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, as the sole active principle. or one of its acceptable pharmaceutical salts and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or a carrier or a diluent or a pharmaceutically acceptable vehicle.
  • the pharmaceutical composition comprises the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex of formula (IX) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, as the sole active principle. or one of its acceptable pharmaceutical salts and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or a carrier or a diluent or a pharmaceutically acceptable vehicle.
  • the pharmaceutical composition comprises the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex of formula (X) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, as the sole active principle.
  • the pharmaceutical composition comprises the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex of formula (XI) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, as the sole active ingredient acceptable and / or a pharmaceutically acceptable carrier or diluent or vehicle.
  • the pharmaceutical composition comprises the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex of formula (XII) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, as the sole active principle.
  • the pharmaceutical composition comprises the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex of formula (XIII) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, as the sole active principle. or one of its acceptable pharmaceutical salts and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or a carrier or a diluent or a pharmaceutically acceptable vehicle.
  • the pharmaceutical composition comprises the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex of formula (XIV) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, as the sole active ingredient or one of its acceptable pharmaceutical salts and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or a carrier or a diluent or a pharmaceutically acceptable vehicle.
  • the pharmaceutical composition according to the invention further comprises at least one second active principle.
  • the at least one second active principle can interact synergistically with the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention.
  • the second active principle can be a corticosteroid, advantageously prednisone.
  • the pharmaceutical composition when the pharmaceutical composition comprises a second active principle, the pharmaceutical composition is suitable for simultaneous administration or sequential administration of the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention. and the second active ingredient.
  • the term “simultaneous administration” is understood to mean administration of the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention and of the second active principle at the same time, at the same time, to a patient in therapeutically effective amounts to allow the synergistic effect of the pharmaceutical composition.
  • the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention and the second active principle are necessarily administered in the form of a mixture; they can in fact be administered simultaneously but separately, in the form of separate compositions.
  • compositions By “present in two distinct compositions” is meant that the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention and the second active principle are physically separated. They are then used, administered separately in therapeutically effective amounts to allow the synergistic effect of the pharmaceutical composition, without prior mixing, in several (at least two) dosage forms (for example two distinct compositions).
  • the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention and the second active principle can be present in the same composition in therapeutically effective amounts to allow the synergistic effect. of the pharmaceutical composition.
  • the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention and the second active principle are then necessarily administered simultaneously since they are administered together, in the form of a mixture, in the same dosage form (for example in a only composition containing the genetically modified human stem cells and the anti-cancer agent) and in therapeutically effective amounts to allow the synergistic effect of the pharmaceutical composition.
  • the expression “sequential administration” means that the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention and the second active principle are administered in therapeutically effective amounts to allow the synergistic effect. of the pharmaceutical composition, not simultaneously but separately in time, one after the other.
  • the terms “precede” or “preceding” and “follow” or “following” then apply.
  • the term “precede” or “preceding” is used when a compound of the pharmaceutical composition according to the invention is administered a few minutes or several hours, or even several days before the administration of the other compound (s) of the composition. pharmaceutical.
  • the term “follow” or “next” is used when a compound of the pharmaceutical composition is administered a few minutes or several hours, or even several days after the administration of the other compound (s) of the. pharmaceutical composition.
  • the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention is administered a few days before the second active principle.
  • the pharmaceutical composition when the pharmaceutical composition comprises a second active principle, the pharmaceutical composition is suitable for sequential administration of the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention and of the second principle.
  • the second active principle can be a corticosteroid, advantageously prednisone.
  • the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex according to the invention is administered to the patient, then two to three days after administration of the inhibitor of the ROCK protein kinase complex.
  • the second active principle is administered to this same patient, for at least one week, advantageously at least two weeks, advantageously at least three weeks, advantageously at least four weeks, advantageously at least five weeks, advantageously at least at least six weeks, preferably at least seven weeks.
  • Administration during in vivo treatment can be by any route including oral, parenteral, transdermal, intramuscular, intranasal, sublingual, intratracheal, inhalation, ocular, vaginal and rectal.
  • Intracapsular, intravenous and intraperitoneal routes of administration can also be used.
  • the route of administration varies depending on the disorder to be treated.
  • the pharmaceutical compositions according to the invention or the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex of the present invention can be administered to a patient by oral, parenteral or topical administration.
  • the pharmaceutical compositions according to the invention or the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex of the present invention is in a form suitable for its oral, parenteral or topical administration.
  • the pharmaceutical compositions according to the invention or the inhibitor of the complex of ROCK-PDK1 protein kinases of the present invention, optionally in the form of nanoparticles, are administered by intravenous infusion.
  • compositions when it is desirable to be administered systemically, can be formulated for parenteral administration by injection, for example by bolus injection or continuous infusion.
  • Formulations for injection may be presented in unit dosage form, for example in ampoules or in multiple dose containers, with a preservative added.
  • the pharmaceutical compositions can take forms such as suspensions, solutions or emulsions in oily or aqueous vehicles and can contain formulating agents such as suspending agents, stabilizers and / or dispersants.
  • compositions for parenteral administration include aqueous solutions of the active pharmaceutical compositions in water soluble form.
  • suspensions of the active pharmaceutical compositions can be prepared as suitable oily injection suspensions.
  • suitable lipophilic solvents or vehicles include fatty oils such as sesame oil, or synthetic fatty acid esters, such as ethyl oleate or triglycerides, or liposomes.
  • Aqueous injection suspensions may contain substances which increase the viscosity of the suspension, such as sodium carboxymethylcellulose, sorbitol or dextran.
  • the suspension may also contain suitable stabilizers or agents which increase the solubility of the pharmaceutical compositions to allow the preparation of highly concentrated solutions.
  • the active compositions may be in powder form to provide a suitable vehicle, eg sterile pyrogen-free water, before use.
  • the pharmaceutical compositions may take the form, for example, of tablets or capsules prepared by conventional means with pharmaceutically acceptable excipients such as binding agents (eg, pregelatinized corn starch, polyvinylpyrrolidone, methylcellulose or hydroxypropylmethylcellulose); fillers (eg, lactose, microcrystalline cellulose or calcium hydrogen phosphate); lubricants (eg magnesium stearate, talc or silica); disintegrants (eg potato starch or sodium starch glycolate); or wetting agents (eg, sodium lauryl sulfate). Tablets can be coated by methods well known in the art.
  • pharmaceutically acceptable excipients such as binding agents (eg, pregelatinized corn starch, polyvinylpyrrolidone, methylcellulose or hydroxypropylmethylcellulose); fillers (eg, lactose, microcrystalline cellulose or calcium hydrogen phosphate); lubricants (eg magnesium stearate, talc or silica); disintegrants (eg potato
  • Liquid preparations for oral administration may take the form, for example, of solutions, syrups or suspensions, or may be presented as a dry product for reconstitution with water or other suitable vehicle before use.
  • These liquid preparations can be prepared by conventional means with pharmaceutically acceptable additives such as suspending agents (eg, sorbitol syrup, cellulose derivatives or hydrogenated edible fats); emulsifying agents (eg lecithin or gum arabic); non-aqueous vehicles (eg almond oil, oily esters, ethyl alcohol or fractionated vegetable oils); and preservatives (eg, methyl or propyl-p-hydroxybenzoates or sorbic acid).
  • the preparations may also contain buffer salts, flavors, colors and sweeteners, as appropriate.
  • polyethylene glycol examples include: polyethylene glycol, copolymers of ethylene glycol and propylene glycol, carboxymethyl cellulose, dextran, polyvinyl alcohol, polyvinyl pyrrolidone and polyproline.
  • Other polymers which can be used are poly-1,3-dioxolane and poly-1,3,6-tioxocane.
  • polyethylene glycol molecules are preferred for pharmaceutical use.
  • the place of release can be the stomach, the small intestine (duodenum, jejunum or ileum) or the large intestine.
  • Those skilled in the art will have formulations which will not dissolve in the stomach, but which will release material into the duodenum or elsewhere in the intestine. Preferably, the release will avoid the deleterious effects of the stomach environment or by the release of the biologically active material beyond the stomach environment, such as in the intestine.
  • compositions may take the form of tablets or lozenges formulated in a conventional manner.
  • compositions to be used according to the present invention may suitably be delivered as an aerosol spray from pressurized packages or from a nebulizer, using a suitable propellant, for example. dichlorodifluoromethane, trichlorofluoromethane, dichlorotetrafluoroethane carbon dioxide or other suitable gas.
  • a suitable propellant for example. dichlorodifluoromethane, trichlorofluoromethane, dichlorotetrafluoroethane carbon dioxide or other suitable gas.
  • the dosage unit can be determined by providing a valve to deliver a measured quantity.
  • the compositions according to the invention can be reduced to powder form for administration by inhalation.
  • compositions according to the invention in powder form can be mixed with a second powder, called a base powder such as a lactose or starch powder, the mixture of the two powders being packaged in the form of cartridges or of capsules intended for use in an inhaler or insufflator.
  • a base powder such as a lactose or starch powder
  • the present invention also relates to pulmonary administration.
  • the pharmaceutical compositions can be delivered to the lungs of a mammal while inhaling and passing through the epithelial lining of the lung to the bloodstream.
  • a wide range of mechanical devices designed for the pulmonary delivery of therapeutic products including, but not limited to, nebulizers, metered-dose inhalers and powder inhalers, all known to those skilled in the art, are contemplated for use. in the present invention.
  • Nasal delivery of a pharmaceutical composition described herein is also contemplated.
  • Nasal delivery allows passage of a pharmaceutical composition of the present invention to the blood stream directly after administration of the therapeutic product to the nose, without the need to deposit the product in the lungs.
  • Formulations for nasal administration include those with dextran or cyclodextrin, as well as bioadhesive excipients such as, for example, chitosan.
  • compositions can also be formulated in rectal or vaginal compositions such as suppositories or retention enemas, for example containing conventional suppository bases such as cocoa butter or other glycerides.
  • compositions may also include suitable solid or gel phase carriers or excipients.
  • suitable solid or gel phase carriers or excipients include, without limitation, calcium carbonate, calcium phosphate, various sugars, starches, cellulose derivatives, gelatin and polymers such as polyethylene glycols.
  • Suitable liquid or solid pharmaceutical preparation forms are, for example, aqueous or saline solutions for inhalation, microencapsulated, notched, applied to microscopic gold particles, contained in liposomes, nebulized, aerosols, pellets for implantation in the skin.
  • Pharmaceutical compositions also include granules, powders, tablets, coated tablets, (micro) capsules, suppositories, syrups, emulsions, suspensions, creams, skin or transdermal patches, drops or preparations. sustained release active compositions and / or auxiliaries such as disintegrants, binders, coating agents, blowing agents, lubricants, flavors, sweeteners or solubilizers are usually used as described above.
  • the pharmaceutical compositions are suitable for use in a variety of drug delivery systems.
  • Another object of the invention relates to a method of preventive treatment of inflammatory diseases, comprising the administration to the patient of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above or of a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount.
  • an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above.
  • prevention or “prophylaxis” or “preventive treatment” or “prophylactic treatment” comprises a treatment leading to the prevention of a disease as well as a treatment reducing and / or delaying the incidence. disease or the risk of disease occurrence.
  • the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above is particularly effective for preventing the appearance of inflammatory diseases, by inhibiting the production of inflammatory cytokines, thus inducing a protective effect against inflammatory diseases.
  • the compounds of formulas (IV) and (VII) are capable of inhibiting the production of inflammatory cytokines by the immune cells (monocytes) of healthy donors in response to the activation of the. inflammasome by uric acid crystals (mimetic of "gout").
  • the present invention relates to a method of preventive treatment of inflammatory diseases, comprising the administration to the patient of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above or of a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically carrier acceptable as defined above and a second active principle as defined above.
  • the inflammatory disease can be chosen from: amyloid neurodegenerative diseases, such as Alzheimer's disease, prions, Parkinson's disease, Amyotrophic Lateral Sclerosis; inflammatory bowel disease, such as sickness chronic inflammatory bowel disease (IBD), irritable bowel syndrome (IBS), Crohn's disease, ulcerative colitis, haemorrhagic rectal ulcer, the concomitant lesions of Behçet's disease, pouchitis, ulcerative colitis, ileitis and enteritis; acute inflammatory diseases such as gout and septic shock, chronic inflammatory back pain, inflammatory skin diseases or dermatitis, such as psoriasis, atopic dermatitis, rosacea, rosacea, acne, common warts, bullous skin diseases, contact eczema, skin cancer, redness, erythema, telangiectasia, skin inflammation linked to UV exposure, such as photo-irritation, photo-sensitization, photoaging, phototherapy,
  • the present invention relates to a method of preventive treatment of amyloid neurodegenerative diseases, comprising the administration to the patient of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above or of a pharmaceutical composition.
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle such than defined previously.
  • amyloid neurodegenerative diseases can be chosen from: Alzheimer's disease, prions, Parkinson's disease, Amyotrophic Lateral Sclerosis, the list not being exhaustive.
  • the present invention relates to a method of preventive treatment of acute inflammatory diseases, comprising the administration to the patient of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above or of a pharmaceutical composition.
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle such than defined previously.
  • the acute inflammatory diseases can be chosen from: gout and septic shock, the list not being limiting.
  • the present invention relates to the use of a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle in the manufacture of 'a medicament for the prevention of inflammatory diseases.
  • the present invention relates to the use of a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above in the manufacture of a medicament intended for the prevention of inflammatory diseases.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the prevention of inflammatory diseases.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of a ROCK protein kinase inhibitor as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the prevention of inflammatory diseases.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of a PDK1 protein kinase inhibitor as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the prevention of inflammatory diseases.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of a combination comprising an inhibitor of ROCK protein kinase and an inhibitor of PDK1 protein kinase as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the prevention of inflammatory diseases.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an agent dissociating the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the prevention of inflammatory diseases.
  • Another object of the invention relates to a method of preventive treatment of autoimmune diseases, comprising the administration to the patient of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above or of a pharmaceutical composition comprising a therapeutically amount. effective of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as active principle and at least one excipient pharmaceutically acceptable and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above.
  • the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above is particularly effective in preventing the appearance of autoimmune diseases, by inhibiting the production of inflammatory cytokines, thus inducing a protective effect against diseases. autoimmune.
  • the present invention relates to a method of preventive treatment of autoimmune diseases, comprising the administration to the patient of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above or d 'a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above and a second active principle as defined above.
  • the autoimmune disease can be chosen from: systemic lupus erythematosus, systemic lupus erythematosus, multiple sclerosis, rheumatoid arthritis, insulin-dependent diabetes, thrombotic thrombocytopenic purpura (ITP), rejection of transplants or organs, graft versus host disease, different types of sclerosis, primary Sjôgren syndrome (or Gougerot-Sjôgren syndrome), autoimmune polyneuropathies such as multiple sclerosis, type I diabetes, autoimmune hepatitis, ankylosing spondylitis, Reiter's syndrome, arthritis of gout, chronic Hashimoto thyroiditis (hypothyroidism), Adisson's disease, autoimmune hepatitis, Graves' disease (hyperthyroidism) , autoimmune cytopenias and other haematological complications in adults and children, such as acute or chronic autoimmune thrombocytopenia, autoimmune haemolytic anemia, newborn
  • MHN neonate
  • MSN cold agglutinin disease
  • thrombotic thrombocytopenic purpura acquired autoimmune hemophilia
  • Goodpasture's syndrome extra-membranous nephropathies, autoimmune bullous skin disorders, refractory myasthenia gravis, mixed cryoglobulinemia, inflammatory myositis, dermatomyositis and autoimmune systemic disorders in children including antiphospholipid syndrome, the disease connective tissues, different types of sclerosis, autoimmune lung inflammation, Guillain-Barre syndrome, chronic inflammatory demyelizing polyradiculoneuropathy (PDCI), autoimmune thyroiditis, mellitis, myasthenia gravis, autoimmune inflammatory disease of the eye, neuromyelitis optic (Devie's disease), scleroderma, pemphigus, diabetes by insulin resistance, polymyositis, Biermer's anemia, glomerulonephritis, Wegener's disease, Horton's disease,
  • the present invention relates to a method of preventive treatment of rheumatoid arthritis, comprising administration to the patient of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above or of a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above.
  • the present invention relates to a method of preventive treatment of systemic lupus erythematosus, comprising the administration to the patient of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above or of a pharmaceutical composition.
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle such than defined previously.
  • the present invention relates to the use of a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle in the manufacture of 'a medicament for the prevention of autoimmune diseases.
  • the present invention relates to the use of a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above in the manufacture of a medicament intended for the prevention of autoimmune diseases.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or a carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the prevention of autoimmune diseases.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of a ROCK protein kinase inhibitor as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the prevention of autoimmune diseases.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of a PDK1 protein kinase inhibitor as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the prevention of autoimmune diseases.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of a combination comprising an inhibitor of ROCK protein kinase and an inhibitor of PDK1 protein kinase as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the prevention of autoimmune diseases.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an agent dissociating the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the prevention of autoimmune diseases.
  • Another subject of the invention relates to a method of preventive treatment of viral and / or bacterial infections, comprising the administration to the patient of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above or of a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle such as previously defined.
  • the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex is particularly effective in preventing the onset, development, amplification, persistence of viral and / or bacterial infections, by inhibiting the production of inflammatory cytokines. , thus inducing a protective effect against viral and / or bacterial infections.
  • the compounds of formulas (IV) and (VII) are capable of inhibiting the production of inflammatory cytokines by the immune cells (PBMC and purified monocytes) of healthy donors in response to the stimulation of the cells.
  • Toll-like receptor 2/4 by bacterial agents (respectively by lipoteichoic acid / LPS).
  • the inventors have shown that the compounds of formulas (IV) and (VII) are capable of inhibiting the production of inflammatory cytokines by the immune cells (PBMC and purified monocytes) of healthy donors in response to the stimulation of the cells. Toll-like receptor 7/8 (R848). It has also been shown that the compound of formula (IV) is capable of inhibiting the production of inflammatory cytokines and interferons in response to the Human Immunodeficiency Virus (HIV) on purified plasmacytoid dendritic cells and on mononuclear cells of the peripheral blood (PBMC).
  • HIV Human Immunodeficiency Virus
  • the present invention provides a method of preventive treatment of viral and / or bacterial infections, comprising the administration to the patient of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above or of a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above and a second active principle as defined above.
  • the viral infections can be chosen from infections due to the influenza virus, the Human Immunodeficiency Virus (HIV), the herpes virus or Herpes Simplex Virus (HSV), the coronavirus, the COVID-19 , encephalomyocarditis virus, arboviruses, such as, Chikungunya, O'Nyong Nyong, Ross River, Sindbis, Mayaro, yellow fever virus, dengue, Japanese encephalitis, West Nile virus, Temperate Eurasian tick-borne encephalitis viruses, Kyasianur forest disease viruses, Omsk haemorrhagic fever Bunyaviridae, Bunyamwera virus, Rift Valley Fever virus, the Crimean Congo hemorrhagic fever virus, hepatitis A, B and C virus and influenza virus, the list not being exhaustive.
  • HCV Human Immunodeficiency Virus
  • HSV Herpes Simplex Virus
  • the coronavirus the coronavirus
  • COVID-19
  • the bacterial infections can be chosen from: infections due to Gram-positive bacteria, such as bacteria of the Staphylococcus genus, in particular Staphylococcus aureus, and bacteria of the Enterococcus genus, in particular Enterococcus faecalis; infections due to Gram-negative bacteria, such as bacteria of the genus Escherichia, in particular Escherichia coli, bacteria of the genus Pseudomonas, in particular Pseudomonas aeruginosa, and bacteria of the genus Acinetobacter, in particular Acinetobacter baumanii, list no. being not limiting.
  • Gram-positive bacteria such as bacteria of the Staphylococcus genus, in particular Staphylococcus aureus
  • infections due to Gram-negative bacteria such as bacteria of the genus Escherichia, in particular Escherichia coli, bacteria of the genus
  • the present invention relates to a method of preventive treatment of coronavirus infections, comprising the administration to the patient of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above or of a pharmaceutical composition.
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle such than defined previously.
  • the present invention relates to a method of preventive treatment of infections due to influenza virus, comprising administering to the patient an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex or a pharmaceutical composition.
  • a method of preventive treatment of infections due to influenza virus comprising administering to the patient an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex or a pharmaceutical composition.
  • the present invention relates to a method of preventive treatment of human immunodeficiency virus (HIV) infections, comprising administering to the patient an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex such as defined above or of a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above.
  • HIV human immunodeficiency virus
  • the present invention relates to the use of a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above. as an active principle in the manufacture of a medicament intended for the prevention of viral and / or bacterial infections.
  • the present invention relates to the use of a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above in the manufacture of a medicament intended for the prevention of viral and / or bacterial infections.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the prevention of viral and / or bacterial infections.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of a ROCK protein kinase inhibitor as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the prevention of viral and / or bacterial infections.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of a PDK1 protein kinase inhibitor as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the prevention of viral and / or bacterial infections.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of a combination comprising an inhibitor of ROCK protein kinase and an inhibitor of PDK1 protein kinase as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the prevention of viral and / or bacterial infections.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an agent dissociating the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the prevention of viral and / or bacterial infections.
  • Another object of the invention relates to a method of curative treatment of inflammatory diseases in patients requiring administration, comprising the administration to said patients of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above or of a composition pharmaceutical comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above.
  • treatment or “curative treatment” is defined as a treatment leading to a cure or a treatment which alleviates, improves and / or eliminates, reduces and / or stabilizes the symptoms of a disease or the suffering it causes.
  • the inventors have shown that the inhibition of the PDK1 protein kinase by the inhibitor of formula (IV) makes it possible to drastically reduce the spontaneous production of inflammatory cytokines by the monocytes originating from patients suffering from Juvenile Idiopathic Arthritis.
  • the inventors have shown that the inhibition of the PDK1 protein kinase by the inhibitor of formula (IV) administered orally at a dose of 10 mg / kg of body weight in model mice for rheumatoid arthritis blocked the progression of this pathology by attenuating the production of inflammatory cytokines.
  • Another object of the invention relates to a method of curative treatment of inflammatory diseases in patients requiring administration, comprising the administration to patients of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above or of a composition pharmaceutical comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above and a second active principle as defined above.
  • the inflammatory disease can be chosen from: amyloid neurodegenerative diseases, such as Alzheimer's disease, prions, Parkinson's disease, Amyotrophic Lateral Sclerosis; inflammatory bowel disease, such as chronic inflammatory bowel disease (IBD), irritable bowel syndrome (IBS), Crohn's disease, ulcerative colitis, hemorrhagic rectal ulcer, concomitant lesions of Behçet's disease, pouchitis, ulcerative colitis, ileitis and enteritis; acute inflammatory diseases such as gout and septic shock, chronic inflammatory back pain, inflammatory skin diseases or dermatitis, such as psoriasis, atopic dermatitis, rosacea, rosacea, acne, common warts, bullous skin diseases, contact eczema, skin cancer, redness, erythema, telangiectasia, skin inflammation linked to UV exposure, such as photo-irritation, photo-sensitization, photoaging, photo-carcino
  • the present invention relates to a method of curative treatment of amyloid neurodegenerative diseases, comprising the administration to the patient of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above or of a pharmaceutical composition.
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle such than defined previously.
  • amyloid neurodegenerative diseases can be chosen from: Alzheimer's disease, prions, Parkinson's disease, Amyotrophic Lateral Sclerosis, the list not being exhaustive.
  • the present invention relates to a method of curative treatment of acute inflammatory diseases, comprising the administration to the patient of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above or of a pharmaceutical composition.
  • a method of curative treatment of acute inflammatory diseases comprising the administration to the patient of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above or of a pharmaceutical composition.
  • the inflammatory diseases can be chosen from: gout and septic shock, the list not being limiting.
  • the present invention relates to the use of a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle in the manufacture of a medicament for the treatment of inflammatory diseases.
  • the present invention relates to the use of a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above in the manufacture of a medicament intended for the treatment of inflammatory diseases.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the treatment of inflammatory diseases.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor.
  • ROCK protein kinase as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the treatment of inflammatory diseases .
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of a PDK1 protein kinase inhibitor as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the treatment of inflammatory diseases.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of a combination comprising an inhibitor of ROCK protein kinase and an inhibitor of PDK1 protein kinase as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the treatment of inflammatory diseases.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an agent dissociating the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the treatment of inflammatory diseases.
  • Another subject of the invention relates to a method of curative treatment of autoimmune diseases, comprising the administration to the patient of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above or of a pharmaceutical composition comprising a therapeutically amount effective inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above.
  • the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex is particularly effective in treating autoimmune diseases, by inhibiting the production of inflammatory cytokines, thus inducing a curative effect against autoimmune diseases.
  • the present invention relates to a method of curative treatment of autoimmune diseases, comprising the administration to the patient of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above or of 'a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above and a second active principle as defined above.
  • the autoimmune disease can be chosen from: systemic lupus erythematosus, systemic lupus erythematosus, multiple sclerosis, rheumatoid arthritis, insulin-dependent diabetes, thrombotic thrombocytopenic purpura (ITP), rejection of transplants or organs, graft versus host disease, different types of sclerosis, primary Sjôgren syndrome (or Gougerot-Sjôgren syndrome), autoimmune polyneuropathies such as multiple sclerosis, type I diabetes, autoimmune hepatitis, ankylosing spondylitis, Reiter's syndrome, arthritis of gout, chronic Hashimoto thyroiditis (hypothyroidism), Adisson's disease, autoimmune hepatitis, Graves' disease (hyperthyroidism) , autoimmune cytopenias and other haematological complications in adults and children, such as acute or chronic autoimmune thrombocytopenia, autoimmune haemolytic anemia, newborn
  • MHN neonate
  • MSN cold agglutinin disease
  • thrombotic thrombocytopenic purpura acquired autoimmune hemophilia
  • Goodpasture's syndrome extra-membranous nephropathies, autoimmune bullous skin disorders, refractory myasthenia gravis, mixed cryoglobulinemia, inflammatory myositis, dermatomyositis and autoimmune systemic disorders in children including antiphospholipid syndrome, the disease connective tissue, different types of sclerosis, autoimmune lung inflammation, Guillain-Barre syndrome, chronic inflammatory demyelizing polyradiculoneuropathy (PDCI), autoimmune thyroiditis, mellitis, myasthenia gravis, inflammatory autoimmune disease of the eye, neuromyelitis optic (Devie's disease), scleroderma, pemphigus, diabetes by insulin resistance, polymyositis, Biermer's anemia, glomerulonephritis, Wegener's disease, Horton's disease,
  • the present invention relates to a method of curative treatment of rheumatoid arthritis, comprising the administration to the patient of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above or of a pharmaceutical composition.
  • a method of curative treatment of rheumatoid arthritis comprising the administration to the patient of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above or of a pharmaceutical composition.
  • the present invention relates to a method of curative treatment of systemic lupus erythematosus, comprising the administration to the patient of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above or of a pharmaceutical composition.
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle such than defined previously.
  • the present invention relates to the use of a pharmaceutical composition comprising a therapeutically amount effective of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle in the manufacture of a medicament for the treatment of autoimmune diseases.
  • the present invention relates to the use of a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above in the manufacture of a medicament intended for the treatment of autoimmune diseases.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the treatment of autoimmune diseases.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of a ROCK protein kinase inhibitor as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the treatment of autoimmune diseases.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of a PDK1 protein kinase inhibitor as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the treatment of autoimmune diseases.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of a combination comprising an inhibitor of ROCK protein kinase and an inhibitor of PDK1 protein kinase as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the treatment of autoimmune diseases.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an agent dissociating the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the treatment of autoimmune diseases.
  • Another subject of the invention relates to a method of curative treatment of viral and / or bacterial infections, comprising the administration to the patient of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above or of a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle such as previously defined.
  • the inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above is particularly effective for treating autoimmune diseases, by inhibiting the production of inflammatory cytokines, thus inducing a curative effect against viral infections and / or bacterial.
  • the present invention provides a method of curative treatment of viral and / or bacterial infections, comprising the administration to the patient of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above or of a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above and a second active principle as defined above.
  • the viral infections can be chosen from infections due to the influenza virus, the Human Immunodeficiency Virus (HIV), the herpes virus or Herpes Simplex Virus (HSV), the coronavirus, the COVID-19 , encephalomyocarditis virus, arboviruses, such as, Chikungunya, O'Nyong Nyong, Ross River, Sindbis, Mayaro, yellow fever virus, dengue, Japanese encephalitis, West Nile virus, Temperate Eurasian tick-borne encephalitis viruses, Kyasianur forest disease viruses, Omsk haemorrhagic fever Bunyaviridae, Bunyamwera virus, Rift Valley Fever virus, the Crimean Congo hemorrhagic fever virus, hepatitis A, B and C virus and influenza virus, the list not being exhaustive.
  • HCV Human Immunodeficiency Virus
  • HSV Herpes Simplex Virus
  • the coronavirus the coronavirus
  • COVID-19
  • the bacterial infections can be chosen from: infections due to Gram-positive bacteria, such as bacteria of the Staphylococcus genus, in particular Staphylococcus aureus, and bacteria of the Enterococcus genus, in particular Enterococcus faecalis; infections due to Gram-negative bacteria, such as bacteria of the genus Escherichia, in particular Escherichia coli, bacteria of the genus Pseudomonas, in particular Pseudomonas aeruginosa, and bacteria of the genus Acinetobacter, in particular Acinetobacter baumanii, list no. being not limiting.
  • Gram-positive bacteria such as bacteria of the Staphylococcus genus, in particular Staphylococcus aureus
  • infections due to Gram-negative bacteria such as bacteria of the genus Escherichia, in particular Escherichia coli, bacteria of the genus
  • the present invention relates to a method of curative treatment of coronavirus infections, comprising the administration to the patient of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above or of a pharmaceutical composition.
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle such than defined previously.
  • the present invention relates to a method of curative treatment of infections due to the influenza virus, comprising the administration to the patient of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above or of 'a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above
  • the present invention relates to a method of curative treatment of human immunodeficiency virus (HIV) infections, comprising administering to the patient an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex such as defined above or of a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above.
  • HIV human immunodeficiency virus
  • the present invention relates to the use of a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle in the manufacture of 'a medicament for the treatment of viral and / or bacterial infections.
  • the present invention relates to the use of a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as an active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above in the manufacture of a medicament intended for the treatment of viral and / or bacterial infections.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an inhibitor of the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the treatment of viral and / or bacterial infections.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of a ROCK protein kinase inhibitor as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the treatment of viral and / or bacterial infections.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of a PDK1 protein kinase inhibitor as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a vehicle pharmaceutically acceptable as defined above for its use in the treatment of viral and / or bacterial infections.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of a combination comprising an inhibitor of ROCK protein kinase and an inhibitor of PDK1 protein kinase as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the treatment of viral and / or bacterial infections.
  • the present invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of an agent dissociating the ROCK-PDK1 protein kinase complex as defined above as active principle and at least one pharmaceutically acceptable excipient and / or carrier and / or a diluent and / or a pharmaceutically acceptable vehicle as defined above for its use in the treatment of viral and / or bacterial infections.
  • Figure 1 shows the blockade by a ROCK protein kinase inhibitor of formula (VII) (also called Y-27632) of the intracellular production of TNF ⁇ in monocytes from healthy donors in response to stimulation of Toll receptors. like receptor TLR7 / 8 (Résiquimod-R848), results obtained by flow cytometry.
  • VII ROCK protein kinase inhibitor of formula
  • Figure 2 shows the blockade by a PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) (also called BX912) of the intracellular production of TNF ⁇ in monocytes from healthy donors in response to stimulation of the Toll-like receptor TLR7 / 8 (Résiquimod-R848), results obtained by flow cytometry.
  • IV protein kinase inhibitor of formula (IV)
  • Figure 3 shows the blockade by a PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) (also called BX912) of the secretion of inflammatory cytokines and interferons on peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of healthy donors in response to stimulation of Toll-like receptor TLR7 / 8. Results obtained by LegendPlex.
  • IV protein kinase inhibitor of formula (IV)
  • BX912 peripheral blood mononuclear cells
  • Figure 4 shows the absence of toxicity of the PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) (also called BX912) on peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of healthy donors.
  • IV protein kinase inhibitor of formula (IV)
  • PBMC peripheral blood mononuclear cells
  • Figure 5 shows the blockade of intracellular production of TNF ⁇ in monocytes from healthy donors by a PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) (also called BX912) in response to stimulation of Toll-like receptor 4 (lipopolysaccharides-LPS), results obtained by flow cytometry.
  • PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) also called BX912
  • Toll-like receptor 4 lipopolysaccharides-LPS
  • Figure 6 shows the blockade of intracellular production of TNF ⁇ in monocytes from healthy donors by a PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) (also called BX912) in response to stimulation of Toll-like receptor 2 (lipoteichoic acid-LTA), results obtained by flow cytometry.
  • Figure 7 shows the blockade by a PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) (also called BX912) of the secretion of inflammatory cytokines and interferons on peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of healthy donors in response to stimulation of Toll-like receptorTLR4 receptors. Results obtained by LegendPlex.
  • PBMC peripheral blood mononuclear cells
  • Figure 8 shows the absence of toxicity of the PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) (also called BX912) on peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from healthy donors.
  • PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) also called BX912
  • PBMC peripheral blood mononuclear cells
  • Figure 9 shows the blockade of the intracellular production of ILi in monocytes from healthy donors by a PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) (also called BX912) in response to activation of the inflammasome by uric acid crystals (MSU) ("drop" model), results obtained by flow cytometry.
  • PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) also called BX912
  • MSU uric acid crystals
  • Figure 10 shows the blockade of intracellular production of TNF ⁇ in monocytes from healthy donors by a PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) (also called BX912) in response to activation of the inflammasome by crystals uric acid (MSU) (“gout” model), results obtained by flow cytometry.
  • PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) also called BX912
  • MSU crystals uric acid
  • Figure 11 shows the blockade of intracellular production of IFN ⁇ on pDCs from healthy donors by a PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) (also called BX912) in response to HIV infection, results obtained by flow cytometry.
  • IV protein kinase inhibitor of formula (IV)
  • Figure 12 shows the blocking of intracellular production of TNF ⁇ on pDCs from healthy donors by a PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) (also called BX912) in response to HIV infection, results obtained by flow cytometry.
  • PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) also called BX912
  • Figure 13 shows the blockade by a PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) (also called BX912) of the secretion of inflammatory cytokines and interferons on peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of healthy donors in response to HIV infection.
  • PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) also called BX912
  • PBMC peripheral blood mononuclear cells
  • Figure 14 shows the absence of toxicity of the PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) (also called BX912) on peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from healthy donors.
  • PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) also called BX912
  • PBMC peripheral blood mononuclear cells
  • Figure 15A shows the blockade by the inhibitor of formula (IV) (also called BX912) of the secretion of interferons on peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of healthy donors, in a preventive manner, 1 h before stimulation by Toll-like TLR 7/8 receptors. Results obtained with the reporter line STING-37.
  • inhibitor of formula (IV) also called BX912
  • PBMC peripheral blood mononuclear cells
  • Figure 15B shows the blockade by the inhibitor of formula (IV) (also called BX912) of the secretion of interferons on peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of healthy donors, during stimulation by Toll receptors. like TLR 7/8. Results obtained with the reporter line STING-37.
  • inhibitor of formula (IV) also called BX912
  • PBMC peripheral blood mononuclear cells
  • Figure 15C shows the blockade by the inhibitor of formula (IV) (also called BX912) of the secretion of interferons on peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of healthy donors, curatively, 1 h after stimulation by Toll-like TLR 7/8 receptors. Results obtained with the reporter line STING-37.
  • Figure 16 shows the blockade by the inhibitor of formula (IV) (also called BX912) of the spontaneous production of TNF ⁇ on monocytes of patients with juvenile idiopathic arthritis. Results obtained by SIMOA assay (digital ELISA)
  • Figure 17 shows the effect of administration of vehicle, prednisolone and BX912 on the weight of mice with human rheumatoid arthritis.
  • Figure 18 shows the effect of administration of vehicle, prednisolone and BX912 on the progression of rheumatoid arthritis.
  • Figure 19 shows the effect of administration of vehicle, prednisolone and BX912 on terminal plasma TNF ⁇ level.
  • Figure 20 shows the effect of administration of vehicle, prednisolone and BX912 on terminal plasma level of IFN ⁇ .
  • Figure 21 shows the effect of administration of vehicle, prednisolone and BX912 on terminal IL-6 plasma level.
  • Figure 22 shows the effect of administration of vehicle, prednisolone and BX912 on terminal IL-Ib plasma level.
  • Figure 23 shows the effect of administration of vehicle, prednisolone and BX912 on the histological parameters of rheumatoid arthritis (inflammation, pannus, cartilage damage, bone resorption / damage).
  • Figure 24 shows the inhibition of the activation of T lymphocytes by the inhibitor of the PDK1 protein kinase of formula (IV) (also called BX912).
  • T lymphocytes purified from healthy donors were treated for 1 h with the PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) at 1 and 5 mM then activated with CD3 / CD28 beads for 3 days.
  • Graphical representation of the percentage of T lymphocytes expressing CD69 (A) and graphical representation of MFI (B) (results obtained by flow cytometry).
  • Figure 25 shows the inhibition of the activation of B lymphocytes by the inhibitor of the PDK1 protein kinase of formula (IV) (also called BX912).
  • B lymphocytes purified from healthy donors were treated for 1 h with the PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) at 1 mM then activated with CpG-A (lpg / ml) for 24 h.
  • CpG-A lpg / ml
  • Figure 26 shows the immunosuppressive effect of the PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) (also called BX912) in immune and non-immune cells.
  • A Human PBMCs from healthy donors were treated for 1 hour with the PDK1 inhibitor (compound BX912) according to the doses indicated and then activated with cGAMP for 24 hours. The interferons in the culture supernatants of the PBMCs were assayed with the reporter line STING-37.
  • B THP1-dual and (C) of HEK293 were treated for 1 h with the PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) according to the doses indicated and then activated with cGAMP for 24 h.
  • Figure U shows the immunosuppressive effect of the PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) (also called BX912) in immune and non-immune cells.
  • A Dual THP1,
  • B 1C11 neuroectodermal stem cells and
  • C 1C11 5 HT serotonergic neurons were treated for 1 h with the PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) following the doses indicated then activated with LPS for 1 hour.
  • the mRNAs encoding TNF ⁇ , IL6 and MCP1 were quantified by RT-qPCR.
  • Example 1 Isolation and culture of blood leukocytes.
  • PBMC peripheral blood mononuclear cells
  • STMCELL Technologies Human peripheral blood mononuclear cells
  • the plasmacytoid dendritic cells were purified by negative selection with the “EasySep Human Plasmacytoid DC” Enrichment Kit (STEMCELL Technologies).
  • PBMC Peripheral blood mononuclear cells
  • monocytes and plasmacytoid dendritic cells (pDC) were cultured in RPMI 1640 (Sigma) containing 10% inactivated fetal calf serum and 1 mM glutamine (Hyclone, Logan, UT).
  • Example 2 Preventive effect of the inhibition of the protein kinase PDK1 by the inhibitor of formula (IV) (also called BX912) or of the inhibition of the protein kinase ROCK by the inhibitor of formula (VII) (also called Y-27632) in response to the simulation of Toll 7/8 receivers
  • PBMCs were grown at 2.10 th cells / ml. Monocytes were grown at 1.10 6 / ml. The cells were then incubated with the PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) (also called BX912) or the ROCK protein kinase inhibitor of formula (VII) (also called Y27632) at the concentrations indicated for 1 h before stimulation. They were stimulated for 16 h (flow cytometry) or 24 h (LegendPlex) with the TLR7 / 8 agonist Resiquimod - R848 at 5 pg / ml.
  • IV PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV)
  • ROCK protein kinase inhibitor of formula (VII) also called Y27632
  • BFA Brefeldin A
  • the cells were rinsed in PBS and then incubated with a viability marker (Zombie Aqua, Biolegend) for 30 min at room temperature. After washing, the cells were resuspended in PBS containing 2% FCS and 2 mM EDTA and then labeled with the APC Vio770 anti-CD14 antibody (clone REA599) from Miltenyi Biotec, used at 1/100 °.
  • the “Inside Stain” kit (Miltenyi Biotec) was used according to the manufacturer's protocol.
  • the cells were fixed for 20 min at room temperature with 250 ⁇ L of the Inside Fix solution then labeled in 100 ⁇ L of the Inside Perm solution containing the anti PE antibody.
  • TNFa (clone cA2, Milteniy Bioec) and / or anti-IL-Ib APC (clone REA1172, Miltenyi Biotec) at 1/50 ° for 30 min at room temperature.
  • Data acquisition was performed on the Canto II flow cytometer using Diva software (BD Biosciences, San Jose, CA). Kaluza software was used to analyze the data.
  • PBMC peripheral blood mononuclear cells
  • cell viability was determined using the CelITiter-Glo reagent (Promega), which evaluates the amount of ATP by luminescence using EnSpire.
  • the inhibition of the PDK1 protein kinase by the compound of formula (IV) (also called BX912) inhibits the secretion of inflammatory cytokines (IL-6, IL-Ib, TNFa, IP10, GM-CSF, IL-10) and interferons (IFNI1, IFNI2 / 3, IRNb, IFNg) by peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of healthy donors in response to stimulation of Toll-like receptor TLR 7/8 (see Figure 3).
  • the compound of formula (IV) (also called BX912) exhibits no toxicity on the immune cells (PBMC) of healthy donors in response to stimulation of TLR 7/8 receptors (see FIG. 4).
  • the compounds of formula (VII) also called Y27632 and of formula (IV) (also called BX912) have a preventive effect on the production of inflammatory cytokines (TNFa) by monocytes from healthy donors in response to stimulation of Toll-like receptor TLR 7/8.
  • TNFa inflammatory cytokines
  • the compound of formula (IV) (also called BX912) is non-toxic. It has a preventive effect on the secretion of inflammatory cytokines (IL-6, IL-Ib, TNFa, IP10, GM-CSF, IL-10) and interferons (IFNI1, I FN 12/3, IRNb, IFNg) by Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from healthy donors in response to stimulation of Toll-like receptor TLR 7/8.
  • PBMCs Peripheral blood mononuclear cells
  • Example 3 Preventive effect of the inhibition of the protein kinase PDK1 by the inhibitor of formula (IV) (also called BX912) in response to the simulation of TLR2 / 4 receptors
  • PBMCs were grown at 2.10 th cells / ml.
  • the monocytes were cultured at 1.10 6 / ml.
  • the cells were then incubated with the PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) (also called BX912) or the ROCK protein kinase inhibitor of formula (VII) (also called Y27632) at the concentrations indicated for 1 h before stimulation. They were stimulated for 16 h (flow cytometry) or 24 h (LegendPlex) with the TLR4 agonist Lipopolysaccharide - LPS at 100 ng / ml and the agonist TLR2 lipoteichoic acid - LTA at 1 pg / ml, respectively.
  • BFA Brefeldin A
  • the cells were rinsed in PBS and then incubated with a viability marker (Zombie Aqua, Biolegend) for 30 min at room temperature. After washing, the cells were resuspended in PBS containing 2% FCS and 2 mM EDTA and then labeled with the APC Vio770 anti-CD14 antibody (clone REA599) from Miltenyi Biotec, used at 1/100 °.
  • the “Inside Stain” kit (Miltenyi Biotec) was used according to the manufacturer's protocol.
  • the cells were fixed for 20 min at room temperature with 250 ⁇ L of the Inside Fix solution then labeled in 100 ⁇ L of the Inside Perm solution containing the PE anti TNFa antibody (clone cA2, Milteniy Bioec) and / or APC anti-IL -Ib (clone REA1172, Miltenyi Biotec) at 1/50 ° for 30 min at room temperature.
  • Data acquisition was performed on the Canto II flow cytometer using Diva software (BD Biosciences, San Jose, CA). Kaluza software was used to analyze the data.
  • cell viability was determined using the CelITiter-Glo reagent (Promega), which evaluates the amount of ATP by luminescence using EnSpire.
  • the inhibition of the PDK1 protein kinase by the compound of formula (IV) (also called BX912), according to a dose effect, inhibits the production of inflammatory cytokines (TNFa) by monocytes from healthy donors in response to stimulation of TLR4 receptors (see Figure 5).
  • the inhibition of the PDK1 protein kinase by the compound of formula (IV) (also called BX912), according to a dose effect, inhibits the production of inflammatory cytokines (TNFa) by monocytes from healthy donors in response to stimulation of TLR2 receptors (see Figure 6).
  • the compound of formula (IV) (also called BX912) exhibits no toxicity on peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of healthy donors in response to stimulation of TLR4 receptors (see Figure 8).
  • the compound of formula (IV) (also called BX912) has a preventive effect on the production of inflammatory cytokines (TNFa) by monocytes and immunity cells (PBMC) of healthy donors in response to stimulation of receptors.
  • TNFa inflammatory cytokines
  • PBMC monocytes and immunity cells
  • the compound of formula (IV) (also called BX912) is non-toxic. It has a preventive effect on the secretion of inflammatory cytokines (IL-6, IL-Ib, TNFa, GM-CSF, IL-10) and interferons (IFNI2 / 3, IRNb, IFNg) by peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from healthy donors in response to stimulation of TLR 4 receptors.
  • IL-6, IL-Ib, TNFa, GM-CSF, IL-10 interferons
  • IFNI2 / 3, IRNb, IFNg interferons
  • Example 4 Preventive effect of the inhibition of the protein kinase PDK1 by the inhibitor of formula (IV) (also called BX912) in response to the activation of the inflammasome by uric acid crystals (mimetic of " gout ”)
  • the monocytes were cultured at 1.10 6 / ml.
  • the cells were then incubated with the PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) (also called BX912) or the ROCK protein kinase inhibitor of formula (VII) (also called Y27632) at the concentrations indicated for 1 h before stimulation. They were stimulated for 16 h (flow cytometry) with droplet-mimicking uric acid crystals (MSU) at 50 pg / ml.
  • MSU droplet-mimicking uric acid crystals
  • the cells were collected for flow cytometry.
  • Brefeldin A BFA was added to cells 30 minutes after stimulation.
  • the cells were rinsed in PBS and then incubated with a viability marker (Zombie Aqua, Biolegend) for 30 min at room temperature. After washing, the cells were resuspended in PBS containing 2% FCS and 2 mM EDTA and then labeled with the APC Vio770 anti-CD14 antibody (clone REA599) from Miltenyi Biotec, used at 1/100 °.
  • the “Inside Stain” kit (Miltenyi Biotec) was used according to the manufacturer's protocol.
  • the cells were fixed for 20 min at room temperature with 250 ⁇ L of the Inside Fix solution then labeled in 100 ⁇ L of the Inside Perm solution containing the PE anti TNFa antibody (clone cA2, Milteniy Bioec) and / or APC anti-IL -Ib (clone REA1172, Miltenyi Biotec) at 1/50 ° for 30 min at room temperature.
  • Data acquisition was performed on the cytometer in Canto II stream using Diva software (BD Biosciences, San Jose, CA). Kaluza software was used to analyze the data.
  • the compound of formula (IV) (also called BX912) has a preventive effect on the intracellular production of IL1b and TNFa on monocytes from healthy donors in response to activation of the inflammasome by uric acid crystals ( "drop" model).
  • Example 5 Preventive effect of the inhibition of the protein kinase PDK1 by the inhibitor of formula (IV) (also called BX912) in response to an infection by the Human Immunodeficiency Virus (HIV).
  • the inhibitor of formula (IV) also called BX912
  • HAV Human Immunodeficiency Virus
  • PBMCs were grown at 2.10 th cells / ml.
  • the plasmacytoid dendritic cells were cultured at 1.10 6 / ml.
  • the cells were then incubated with the PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) (also called BX912) or the ROCK protein kinase inhibitor of formula (VII) (also called Y27632) at the concentrations indicated for 1 h before stimulation. They were stimulated for 16 h (flow cytometry) or 24 h (LegendPlex) with HIV-1MN inactivated aldrithiol-2 (AT-2), specific for the CXCR4 co-receptor.
  • PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) also called BX912
  • ROCK protein kinase inhibitor of formula (VII) also called Y27632
  • BFA Brefeldin A
  • the cells were rinsed in PBS and then incubated with a viability marker (Zombie Aqua, Biolegend) for 30 min at room temperature. After washing, the cells were resuspended in PBS containing 2% FCS and 2 mM EDTA and then labeled with the APC Vio770 anti-CD14 antibody (clone REA599) from Miltenyi Biotec, used at 1/100 °.
  • the “Inside Stain” kit (Miltenyi Biotec) was used according to the manufacturer's protocol.
  • the cells were fixed for 20 min at room temperature with 250 ⁇ L of the Inside Fix solution then labeled in 100 ⁇ L of the Inside Perm solution containing the anti-TNFa APC antibody (Milteniy Bioec) and / or anti-IFNE1 PE (Miltenyi Biotec ) at 1/50 ° for 30 min at ambient temperature.
  • Data acquisition was performed on the Canto II flow cytometer using Diva software (BD Biosciences, San Jose, CA). Kaluza software was used to analyze the data Cytokine detection
  • cell viability was determined using the CelITiter-Glo reagent (Promega), which evaluates the amount of ATP by luminescence using EnSpire.
  • the compound of formula (IV) (also called BX912) exhibits no toxicity on peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from healthy donors infected with HIV (see Figure 14).
  • the compound of formula (IV) (also called BX912) has a preventive effect on the intracellular production of interferon IFNa and TNFa on plasmacytoid dendritic cells (pDCs) of healthy donors in response to an HIV infection.
  • the compound of formula (IV) (also called BX912) is non-toxic. It has a preventive effect on the secretion of inflammatory cytokines (IL-6, IL-Ib, TNFa, IP10) and interferons (IFNa2, IRNb, I FN 11) by peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of healthy donors in response to HIV infection.
  • IL-6 inflammatory cytokines
  • IL-Ib interferons
  • IFNa2 interferons
  • Example 6 Curative effect of the inhibition of the protein kinase PDK1 by the inhibitor of formula (IV) (also called BX912) in response to the simulation of TLR7 / 8 receptors
  • PBMCs were grown at 2.10 th cells / ml. The cells were then incubated with the PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) (also called BX912 at the concentrations indicated for 1 hour before stimulation, at the same time as the stimulation or 1 hour after the stimulation. stimulation. The PBMCs were stimulated for 24 hours with the TLR7 / 8 agonist Resiquimod - R848 at 5 ⁇ g / ml.
  • formula (IV) also called BX912
  • the supernatants were collected for the detection of cytokines.
  • the assay of the interferons secreted by the PBMCs was carried out using the reporter line STING-37. These are human HEK293 cells transfected with a reporter gene expressing luciferase under the control of the ISRE response element. The luciferase produced was revealed by the “Bright-Glo TM Luciferase Assay System” kit from promega.
  • PBMC peripheral blood mononuclear cells
  • cell viability was determined using the CelITiter-Glo reagent (Promega), which evaluates the amount of ATP by luminescence using EnSpire.
  • Example 7 Curative effect of the inhibition of the protein kinase PDK1 by the inhibitor of formula (IV) (also called BX912) in patients suffering from Juvenile Idiopathic Arthritis
  • PBMCs were grown at 2.10 th cells / ml.
  • the monocytes were cultured at 1.10 6 / ml.
  • the cells were then incubated with the PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) (also called BX912) for 24 hours.
  • the supernatants were collected for the detection of cytokines.
  • the assay of TNFa secreted by the monocytes of patients suffering from juvenile idiopathic arthritis was carried out by SIMOA (digital ELISA)
  • BX912 Inhibition of PDK1 by BX912 drastically reduces the spontaneous production of inflammatory cytokines by monocytes from patients suffering from Juvenile Idiopathic Arthritis. This indicates that the compound of formula (IV) (also called BX912) can be used curatively in patients suffering from chronic auto-inflammation (auto-inflammatory disease, autoimmune diseases, interferonopathies).
  • Example 8 Evaluation of the efficacy of the inhibitor of formula (IV) (also called BX912) in a mouse model of human rheumatoid arthritis.
  • mice Seventy DBA / 1J mice (Jackson Laboratories, R # 4379, PO 797038, male, 7-8 weeks) were received, examined individually and housed in nine cages of ten mice each. No clinical signs of illness or distress were observed. The mice were quarantined with daily inspections and tagged by ear (SOP 810) with unique numbers for identification purposes.
  • bovine type II collagen (Chondrex, Cat. 20021, lot 200078) were dissolved in 5 ml of 0.01 M acetic acid by stirring overnight at 4-8 "C. 3 ml of collagen were dissolved.
  • emulsified with 3 ml of complete Freund's adjuvant (CFA, Chondrex, Inc., Cat. 7001, lot 180692, 4 mg / ml of Mycobacterium tuberculosis) on an ice bath in three batches. The stability of the emulsion was tested by floating a drop on water; the emulsion did not disperse.
  • mice On day 0, the mice were weighed, and injected subcutaneously (SC, SOP 1610) at the base of the tail with 50 ⁇ l of the collagen / CFA emulsion. Mice were weighed weekly and scored for signs of arthritis daily. Each paw was scored and the sum of the four scores was recorded as arthritic evidence (IA). The maximum possible AI was 16.
  • mice were divided into five treatment groups, according to Table 1 below.
  • mice were weighed and assessed for signs of disease. On day 42, the mice in groups 1 to 3 were anesthetized (SOP 1810) and exsanguinated (SOP 1686) in pre-cooled EDTA tubes (Becton Dickinson, Cat. 365974, lot 9266867, exp. 02/28/21) .
  • the blood was transformed into plasma (SOP 6200) which was stored in four aliquots of 55 ⁇ l each in labeled Eppendorf tubes at -80 ° C (SOP 7020). The limbs were individually removed in 15 ml of 10% neutral buffered formalin (Richard-Allan Scientific, Cat. 5701, lot 537633, exp. 05/2024). Carcasses were disposed of appropriately (SOP 1790).
  • mice On day 45, group 4 mice were anesthetized and exsanguinated in precooled EDTA tubes. The blood was transformed into plasma which was stored in four aliquots of 55 mI each in labeled Eppendorf tubes at -80 ° C. The limbs were individually removed in 15 ml of 10% neutral buffered formalin. Carcasses have been disposed of in an appropriate manner.
  • mice On day 46, group 5 mice were anesthetized and exsanguinated in precooled EDTA tubes. The blood was transformed into plasma which was stored in four aliquots of 55 mI each in labeled Eppendorf tubes at -80 ° C. The limbs were individually removed in 15 ml of 10% neutral buffered formalin. Carcasses have been disposed of in an appropriate manner.
  • limbs from each mouse were submitted for histopathology and processed routinely.
  • Two sections per block were collected at different depths in order to capture the appropriate sections of as many finger and tarsal joints as possible; the depths between the sections varied depending on the conformance and thickness of the leg. Both sections were applied to a single glass slide and stained with toluidine blue (TB). Histopathological sections were evaluated by a board-certified veterinary pathologist, using light microscopy. Histological lesions of all captured joints were classified according to their severity, according to the following criteria below. Each section captured different joints in the leg, so both sections were used to accurately assess the entire sample.
  • Inflammation, pannus, cartilage damage, and bone resorption scores for each paw were added to obtain a total arthritis score (range 0-20).
  • the disease was induced by subcutaneous injection of bovine type II collagen emulsified in CFA on DAY 0 followed 21 days later by subcutaneous injection of bovine type II collagen emulsified in ICFA. The first signs of disease were recorded on DAY 27. Mice were recruited into the treatment regimen with a mean group disease score (A1) of 2.8 (range - 2-4). Oral administration once daily with vehicle (0.1 N HCL, group 1) was initiated on day 28. At the end of the study on day 42, a maximum disease score of 12.8 was recorded. .
  • Terminal plasma TNF ⁇ 8.7 pg / ml
  • IL-Ib 5.4 pg.ml
  • IL-6 ⁇ 49 pg / ml
  • IFNy ⁇ 9 pg / ml.
  • Histologic lesions associated with collagen-induced arthritis were present in the interphalangeal (finger) and tarsal (ankle) joints. Lesions consisted of subacute intra-articular and peri-articular / soft tissue inflammation, pannus, cartilage damage, and bone resorption / injury.
  • BX 912 results in a dose-dependent reduction in the rate of disease progression and severity of disease. At the lowest dose (0.5 mg / kg, group 3), no ameliorative effect was observed. At the median dose (2 mg / kg, group 4), a significant reduction in the rate of disease progression resulted in a significant 56% reduction in overall disease severity at the end of the study. At the highest dose (10 mg / kg, group 5) disease progression was stopped, resulting in a significant 82% reduction in overall disease severity at the end of the study, which was associated with a significant reduction in terminal plasma levels of IL-Ib (37%) and IL-6 (62%).
  • Example 9 Effect of the inhibition of the protein kinase PDK1 by the inhibitor of formula (IV) (also called BX912) on the cells of immunity (T lymphocytes and B lymphocytes)
  • PBMC peripheral blood mononuclear cells isolated by density with centrifugation using a peripheral blood leukocyte separation medium (STEMCELL Technologies). Blood from healthy donors was obtained at the “Etableau für du Sang” (convention # 07 / CABAN EL / 106; Paris, France). Studies on patient material have been approved by the Human Protection Committee (ID-RCB / EUDRACT: 2014-A01017-40 and 2018-A01358-47).
  • the T lymphocytes were purified by negative selection using the “Pan T Cell Isolation Kit” from Miltenyi.
  • the B lymphocytes were purified by negative selection using the “Pan B Cell Isolation Kit” from Miltenyi. T cells and B cells were cultured in RPMI 1640 (Sigma) containing 10% inactivated fetal calf serum and 1 mM glutamine (Hyclone, Logan, UT).
  • T lymphocytes and B lymphocytes were cultured at 1.10 6 / ml.
  • the cells were then incubated with the PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) (also called BX912) at the concentrations indicated for 1 h before stimulation.
  • the T lymphocytes were stimulated for 3 days with the beads of the “Dynabeads human T activator CD3 / CD28” kit from ThermoFisher scientific by following their instructions.
  • the cells were collected for flow cytometry.
  • the B lymphocytes were stimulated for 24 hours with CpG-A at 1 pg.ml.
  • the cells were collected for flow cytometry.
  • the cells were rinsed in PBS and then incubated with a viability marker (Zombie Aqua, Biolegend) for 30 min at room temperature. After washing, the cells were put back into suspension in PBS containing 2% FCS and 2 mM EDTA.
  • the cells were suspended in PBS containing 2% FCS and 2 mM EDTA then labeled with the anti-CD69 PE antibody and anti-CD3 APC from Miltenyi Biotec, used at 1/100 °. After 30 min of incubation, the cells were rinsed with PBS 2% FCS and 2 mM EDTA. Data acquisition was performed on the Attune NxT flow cytometer from Thermo Fisher. FlowJo software was used to analyze the data.
  • the cells were resuspended in PBS containing 2% FCS and 2 mM EDTA then labeled with the anti-CD69 PE antibody and anti-CD19 PE.Vio770 from Miltenyi Biotec, used in 1 / 100 °. After 30 min of incubation, the cells were rinsed with PBS 2% FCS and 2 mM EDTA. Data acquisition was performed on the Attune NxT flow cytometer from Thermo Fisher. FlowJo software was used to analyze the data.
  • the inhibition of the protein kinase PDK1 by the compound of formula (IV) inhibits, according to a dose effect, the expression of the CD69 marker induced by the CD3 / CD28 beads, according to a dose effect , on the surface of T lymphocytes, without affecting their viability ( Figure 24).
  • the inhibition of the PDK1 protein kinase by the compound of formula (IV) inhibits, according to a dose effect, the expression of the CD69 marker induced by induced by CpG-A, ligand of TLR9, according to a dose effect dose, on the surface of B lymphocytes, without affecting their viability (FIG. 25).
  • the compound of formula (IV) (also called BX912) has a preventive effect on the activation of T and B lymphocytes.
  • the compound of formula (IV) (also called BX912) has an anti-inflammatory and anti-interferon effect on T and B lymphocytes.
  • the compound of formula (IV) (also called BX912) has an immunosuppressive effect on T and B lymphocytes.
  • Example 10 Specific anti-inflammatory effect of the PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) (also called BX912) on immune cells compared with non-immune cells
  • PBMC peripheral blood mononuclear cells
  • STMCELL Technologies Human peripheral blood mononuclear cells isolated by density with centrifugation using a peripheral blood leukocyte separation medium (STEMCELL Technologies). Blood from healthy donors was obtained at the “Etableau für du Sang” (convention # 07 / CABAN EL / 106; Paris, France).
  • PBMC peripheral blood mononuclear cells
  • THP1-dual monocytes were cultured in RPMI 1640 (Sigma) containing 10% inactivated fetal calf serum and 1 mM glutamine (Hyclone, Logan, UT).
  • the 1C11 neuroectodermal stem cells were cultured in DMEM-Glutamax (Life Sciences) containing 10% fetal calf serum (Biochrom).
  • the 1C11 cells are induced to differentiate into 1C11 5 HT serotonergic neurons by addition of dibutyril-cyclic AMP (dbcAMP, ImM, Sigma).
  • dbcAMP dibutyril-cyclic AMP
  • the complete serotonergic neuronal phenotype is obtained after 4 days of differentiation.
  • HEK293 were cultured in DMEM (sigma) containing 10% inactivated fetal calf serum and 1% penicillin and streptomycin.
  • PBMCs were grown at 2.10 th cells / ml.
  • the THP1-dual, HEK293, 1C11 and 1C11 5 HT lines were cultured at 1.10 th cells / ml.
  • the cells were then incubated with the PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) (also called BX912) at the concentrations indicated for 1 h before stimulation.
  • the PBMCs and the HEK293s were stimulated for 24 hours with the STING agonist, cGAMP at 3 ⁇ g / ml.
  • PBMC culture supernatants were collected for cytokine detection.
  • the THP1-dual (invivogen) were stimulated for 24 hours with the STING agonist at 3 pg / ml or the TLR4 agonist at 100 ng.ml.
  • the interferon response of THP1-dual which possess the ISRE-ISG-Luciferase construct was revealed by means of the detection agent Quanti-Luc by following the instructions of the supplier.
  • the 1C11 stem cells and the 1C11 5 HT serotonergic neurons were activated for 1 hour with the TLR4 agonist: LPS at 100 ng.ml 1 .
  • the cells were washed in PBS and lysed to prepare mRNAs for analysis by RT-qPCR.
  • the assay of the interferons secreted by the PBMCs was carried out using the reporter line STING-37. These are human HEK293 cells transfected with a reporter gene expressing luciferase under the control of the ISRE response element. The culture supernatants of the PBMCs were added to STING-37 cultures at 0.4 ⁇ 10 e cells / ml for 24 h. The luciferase produced was revealed by the “Bright-GIo TM Luciferase Assay System” kit from promega.
  • the cellular toxicity of the compounds was measured by quantifying ATP with CelITiter Glo (promega).
  • RNAs are extracted from the cells with the E.Z.N.A. kit. Total RNA Kit 1 (Omega Bio-tek) according to the supplier's instructions. The RNA concentration is measured using a spectrophotometer (Nanodrop ND-1000). Total RNAs are back-transcribed into cDNA using the Prime Script RT Master Mix kit (Takara RR036A) according to the supplier's instructions.
  • Quantitative real-time PCR is carried out under the following conditions: the cDNA diluted to 1/10 is added to the following mixture: 3.8 ⁇ L of H 2 0, 0.1 ⁇ l of sense and antisense primers (10 mM) (Table 1), 5 ml of the Absolute qPCR SYBR green mixture containing the DNA polymerase thermostart, MgCl 2 , SYBR green and the dNTPs (Eurogentec). The tests are carried out in triplicate in a 384-well plate (ThermoScientific).
  • the amplification of the DNA by quantitative PCR is carried out in the CFX384 device (BioRad) with the following program: 3 min at 95 ° C / 5 sec at 95 ° C and 30 sec at 60 ° C repeated 40 cycles / 2 min at 72 ° C and 30 sec at 95 ° C followed by a dissociation step which makes it possible to verify the specificity of the amplification product.
  • DNA amplification data is analyzed with Bio-Rad CFX Manager software.
  • PBMC peripheral blood mononuclear cells isolated from the blood of healthy individuals
  • THP1 Figure 24B
  • HEK293 the human monocytic cell line HEK293
  • Figure 24C an embryonic human kidney cell line
  • cGAMP cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate
  • the inhibitor of the PDK1 protein kinase of formula (IV) blocks the production of interferons (IFN) induced by cGAMP according to a dose effect. from ImM without affecting the viability of PBMCs (FIG. 24A) and of THP1-dual (FIG. 24B). On the non-immune HEK293 cells, the PDK1 inhibitor at ImM does not block the production of interferon induced by the STING ligand (FIG. 24C).
  • the anti-inflammatory activity of the PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) was tested on different cell types which were activated with LPS, ligand of Toll-Like type 4 receptors (TLR4 ), an agent that mimics a bacterial infection.
  • the 1C11 neuroectodermal stem cells (FIG. 25B) and the 1C11 5 HT serotonergic neurons derived from the differentiation of 1C11 stem cells were activated with the TLR4 ligand.
  • the PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) reduces the transcription of the gene encoding TNFa, IL6 and MCP1 induced by LPS, according to a dose effect, from 0.5 mM in THP1-dual monocytes ( figure 25A).
  • the PDK1 protein kinase inhibitor of formula (IV) (compound BX912) does not block the transcription of the genes encoding TNF ⁇ , IL6 and MCP1 induced by LPS in non-immune cells, ie, stem cells 1C11 ( Figure 25B) and serotonergic neurons 1C11 5 HT ( Figure 25C).

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Abstract

La présente invention concerne un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 pour son utilisation en tant qu'agent anti-inflammatoire et anti-interféron. La présente invention concerne également une composition pharmaceutique comprenant un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 comme principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable. La présente invention concerne également l'utilisation de ladite une composition pharmaceutique dans la prévention et/ou le traitement des maladies inflammatoires, des infections virales et/ou bactériennes et des maladies auto-immunes.

Description

DESCRIPTION
Titre : « Nouvelles cibles thérapeutiques à effet anti-inflammatoire et anti-interféron ».
Domaine technique
La présente invention concerne un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 et son utilisation en tant qu'agent anti-inflammatoire et anti-interféron. La présente invention concerne également une composition pharmaceutique comprenant un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 et son utilisation dans la prévention et/ou le traitement des maladies inflammatoires, des infections virales et/ou bactériennes et des maladies auto-immunes.
Art antérieur
L'inflammation est un processus physiologique bénéfique pour l'organisme dans la mesure où elle est transitoire. Elle permet par exemple de lutter contre les infections bactériennes ou virales. Néanmoins, de nombreuses pathologies affectant plusieurs organes tels que l'intestin, le système nerveux central, l'appareil ostéo-articulaire, la peau, les poumons... sont associées à une inflammation chronique des tissus. L'inflammation chronique altère l'homéostasie des tissus, conduisant à des anomalies fonctionnelles comme des troubles de la digestion, l'amplification de maladies neurologiques ou neurodégénératives, un handicap moteur, des lésions cutanées, une insuffisance respiratoire... L'inflammation chronique des tissus résulte de la production continue de cytokines inflammatoires (TNFa, interleukines, interférons) par les cellules de l'immunité ou cellules apparentées (cellules de la microglie dans le système nerveux central) qui mène à la détérioration des cellules sensibles aux facteurs inflammatoires. Très peu de médicaments (stéroïdiens et non- stéroïdiens) permettent actuellement de contenir la réponse inflammatoire (aspirine, ibuprofène, paracétamol, corticoïdes) dont certains génèrent des effets secondaires non négligeables chez l'homme.
Par conséquent, il apparaît nécessaire de disposer de nouvelles compositions capables de contenir la réponse inflammatoire, notamment en empêchant ou bloquant la synthèse des cytokines inflammatoires, afin de prévenir et /ou traiter les maladies inflammatoires, les infections virales et/ou bactériennes et les maladies auto-immunes, tout en diminuant les risques d'effets secondaires, lorsqu'elles sont administrées au patient.
De manière tout à fait surprenante, les inventeurs ont montré que les inhibiteurs du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 sont capables d'empêcher et/ou d'inhiber et/ou de bloquer la synthèse des cytokines inflammatoires, tels que le facteur de nécrose tumoral alpha (TNFa), l'interleukine 1b (IL-Ib) et l'interleukine 6 (IL-6) mais également les différents sous types d'interférons (IFN), tels que l'interféron alpha (type I), de l'interféron gamma (type II) et de l'interféron lambda (type III).
Ainsi la présente invention a pour objet un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 pour son utilisation en tant qu'agent anti-inflammatoire et anti-interféron.
Ainsi la présente invention a pour objet un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 pour son utilisation en tant qu'agent anti-inflammatoire et anti-interféron, caractérisé en ce que ledit inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 est un inhibiteur de la protéine kinase PDK1, et en ce que l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 inhibe la production et/ou la sécrétion de cytokines inflammatoires et des interférons par une cellule de l'immunité, lors de sa mise en contact avec ladite cellule de l'immunité.
Les kinases ROCK et PDK1 sont connues pour jouer un rôle délétère dans les maladies neurodégénératives à prions et d'Alzheimer. La suractivation des kinases ROCK et PDK1 rend les neurones malades très vulnérables à la cytokine inflammatoire TNFa en raison de l'accumulation membranaire des récepteurs au TNFa (TNFR) à la surface cellulaire. L'inhibition pharmacologique de la protéine kinase ROCK ou de la protéine kinase PDK1 a pour effet de désensibiliser les neurones malades des effets toxiques du TNFa en diminuant la quantité de TNFR à la membrane plasmique des neurones malades et ainsi d'augmenter la survie des neurones.
Au sens de la présente, on entend par «inhibiteur», un composé capable d'inhiber ou de bloquer ou de neutraliser l'expression de l'activité métabolique ciblée ; l'activité métabolique étant plus faible, voire nulle en présence de l'inhibiteur. Avantageusement, l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 induit une diminution de l'expression de l'activité des protéines kinases ROCK et PDK1 en stimulant la dissociation du complexe ROCK-PDK1. Avantageusement, l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 est neutralisant. En particulier, il inhibe ou neutralise la fonction biologique du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1, ce qui a pour conséquence de protéger les cellules du stress inflammatoire TNFa. La capacité de neutralisation de l'inhibiteur peut être testée par un test standard, notamment en mesurant la capacité de l'inhibiteur à dissocier le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 et réduire l'activité enzymatique des kinases ROCK et PDK1 (IC50). Avantageusement, l'inhibiteur présente une IC50 comprise entre llnM et 30nM.
Avantageusement, les inventeurs ont montré que l'inhibition de manière sélective de l'interaction entre les protéines kinases ROCK et PDK1 inhibe la sécrétion des cytokines inflammatoires (TNFa, interleukine 1b (IL-Ib), interleukine 6 (IL6), MCP1 (CCL2)) et des interférons (IFN) par les cellules de l'immunité activées, montrant un effet bénéfique des inhibiteurs de ROCK ou PDK1 selon l'invention vis-à-vis du stress inflammatoire sans impact sur la viabilité desdites cellules de l'immunité. Avantageusement, l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 inhibe la sécrétion de cytokines inflammatoires et des interférons par une cellule de l'immunité activée in vitro et ex-vivo, notamment lorsque l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 est mis en contact avec la cellule de l'immunité.
Avantageusement, les inventeurs ont montré que la mise en contact de cellules de l'immunité avec un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'invention inhibe la sécrétion des cytokines inflammatoires (TNFa, interleukine 1b (IL-Ib), interleukine 6 (IL6), MCP1 (CCL2)) et des interférons (IFN) par lesdites cellules de l'immunité en comparaison avec des cellules de l'immunité qui n'auraient pas mises été en contact avec ledit inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK- PDK1 selon l'invention.
Avantageusement, les inventeurs ont montré que la mise en contact de cellules de l'immunité avec un inhibiteur de la protéines kinase PDK1 selon l'invention inhibe la sécrétion des cytokines inflammatoires (TNFa, interleukine 1b (IL-Ib), interleukine 6 (IL6), MCP1 (CCL2)) et des interférons (IFN) par lesdites cellules de l'immunité en comparaison avec des cellules de l'immunité qui n'auraient pas été mises en contact avec ledit inhibiteur de la protéines kinase PDK1 selon l'invention.
Avantageusement, les inventeurs ont montré que la mise en contact de cellules de l'immunité avec un inhibiteur de la protéines kinase PDK1 de formule (IV) (également appelé BX912) inhibe la sécrétion des cytokines inflammatoires (TNFa, interleukine 1b (IL-Ib), interleukine 6 (IL6), MCP1 (CCL2)) et des interférons (IFN) par lesdites cellules de l'immunité en comparaison avec des cellules de l'immunité qui n'auraient pas été mises en contact avec ledit inhibiteur de la protéines kinase PDK1 selon l'invention.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, les inhibiteurs du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 permettent l'inhibition de manière sélective de l'interaction entre les protéines kinases ROCK et PDK1. Avantageusement, les inventeurs ont montré que l'inhibition de manière sélective de l'interaction entre les protéines kinases ROCK et PDK1 empêche aussi la synthèse des cytokines inflammatoires (TNFa, Interleukines 1b et 6 (IL-Ib et IL6), MCP1 (CCL2)) et des interférons, montrant un effet bénéfique des inhibiteurs de ROCK ou PDK1 selon l'invention vis- à-vis du stress inflammatoire sans impact toxique.
Au sens de la présente invention, on entend par « agent anti-inflammatoire », un agent capable d'empêcher et/ou de bloquer et/ou d'inhiber la synthèse des cytokines inflammatoires, et en particulier un agent capable d'empêcher et/ou de bloquer et/ou d'inhiber la synthèse du facteur de nécrose tumoral alpha (TNFa), de l'interleukine 1b (IL-Ib), de MCP1 (CCL2) et de l'interleukine 6 (IL- 6).
Avantageusement, on entend par « agent anti-inflammatoire», un agent capable d'empêcher et/ou de bloquer et/ou d'inhiber la sécrétion des cytokines inflammatoires et en particulier un agent capable d'empêcher et/ou de bloquer et/ou d'inhiber la sécrétion du facteur de nécrose tumoral alpha (TNFa), de l'interleukine 1b (IL-Ib), de l'interleukine 6 (IL-6), de MCP1 (CCL2), par une cellule de l'immunité, lorsque ledit agent est mis en contact avec une cellule de l'immunité.
Au sens de la présente invention, on entend par « agent anti-interféron », un agent capable d'empêcher et/ou de bloquer et/ou d'inhiber la synthèse des interférons (IFN), et en particulier un agent capable d'empêcher et/ou de bloquer et/ou d'inhiber la synthèse de l'interféron alpha (type I), de l'interféron gamma (type II) et de l'interféron lambda (type III). Avantageusement, on entend par «agent anti-interféron », un agent capable d'empêcher et/ou de bloquer et/ou d'inhiber la sécrétion des interférons et en particulier un agent capable d'empêcher et/ou de bloquer et/ou d'inhiber la sécrétion de l'interféron alpha (type I), de l'interféron gamma (type II) et de l'interféron lambda (type III) par une cellule de l'immunité, lorsque ledit agent est mis en contact avec une cellule de l'immunité.
Au sens de la présente invention, on entend par « agent anti-inflammatoire et agent anti-interféron », un agent capable d'empêcher et/ou de bloquer et/ou d'inhiber la synthèse des cytokines inflammatoires et des interférons et en particulier un agent capable d'empêcher et/ou de bloquer et/ou d'inhiber la synthèse du facteur de nécrose tumoral alpha (TNFa), de l'interleukine 1b (IL-Ib) , de l'interleukine 6 (IL-6), de MCP1 (CCL2), de l'interféron alpha (type I), de l'interféron gamma (type II) et de l'interféron lambda (type III). Avantageusement, on entend par « agent anti-inflammatoire et agent anti-interféron », un agent capable d'empêcher et/ou de bloquer et/ou d'inhiber la sécrétion des cytokines inflammatoires et en particulier un agent capable d'empêcher et/ou de bloquer et/ou d'inhiber la sécrétion du facteur de nécrose tumoral alpha (TNFa), de l'interleukine 1b (IL-Ib), de l'interleukine 6 (IL-6), de MCP1 (CCL2), de l'interféron alpha (type I), de l'interféron gamma (type II) et de l'interféron lambda (type III) par une cellule de l'immunité, lorsque ledit agent est mis en contact avec une cellule de l'immunité.
Au sens de la présente invention, on entend par « cellule de l'immunité » ou « cellule du système immunitaire » ou « cellule immunitaire », toute cellule du système immunitaire qui provient d'une cellule souche hématopoïétique dans la moelle osseuse.
Avantageusement, les cellules de l'immunité selon l'invention sont des cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC). Le terme «cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC)» se réfère à des cellules sanguines périphériques ayant un noyau rond. Ces cellules sanguines mononucléées recirculent entre les tissus et le sang et sont un élément essentiel du système immunitaire pour lutter contre les infections et s'adapter aux intrus. Il existe deux principaux types de cellules mononucléées : les cellules lymphocytaires et les cellules myéloïdes. La population lymphocytaire des PBMC se compose généralement de cellules T, de cellules B et de cellules NK. La population myéloïde des PBMC se compose de cellules dendritiques (myéloïdes et plasmacytoïdes) et de monocytes/macrophages. Les PBMC peuvent être isolées à partir d'échantillons de sang total par des procédés bien connus dans l'art (par exemple, gradient de Ficoll). Avantageusement, la cellule de l'immunité est un lymphocyte T. Avantageusement, la cellule de l'immunité est un lymphocyte B.
Au sens de la présente invention, les termes «lymphocyte T» et «cellule T» sont utilisés de manière interchangeable et se réfèrent à un type principal de globules blancs, qui achève sa maturation dans le thymus et qui joue divers rôles dans le système immunitaire, y compris l'identification antigènes étrangers spécifiques dans le corps et l'activation et/ou la désactivation d'autres cellules immunitaires. Le lymphocyte T peut être n'importe quelle cellule T choisie parmi : une cellule T cultivée, par exemple, une cellule T primaire, ou une cellule T d'une lignée cellulaire T cultivée, par exemple Jurkat, SupTI, etc., ou une cellule T obtenue à partir d'un mammifère. Les cellules T peuvent être des cellules CD3 +. La cellule T peut être n'importe quel type de cellule T et peut être à n'importe quel stade de développement, y compris, mais sans s'y limiter, les cellules T CD4 +/CD8 + doublement positives, les cellules T auxiliaires CD4 + (par exemple, les cellules Thl et Th2), les cellules T CD8 + (par exemple , cellules T cytotoxiques), une cellule T présente parmi les cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC), les leucocytes du sang périphérique (PBL), une cellule T faisant partie des lymphocytes infiltrant la tumeur (TIL), les cellules T mémoire, les cellules T naïves, les cellules T régulatrices, les cellules T gamma delta (cellules Tyô). Des types supplémentaires de cellules T auxiliaires comprennent des cellules telles que les cellules Th3, Thl7, Th9 ou Tfh. Des types supplémentaires de cellules T à mémoire comprennent des cellules telles que les cellules T à mémoire centrale (cellules Tcm), les cellules T à mémoire effectrice (cellules Tem et cellules TEMRA). La cellule T peut également désigner une cellule T génétiquement modifiée, telle qu'une cellule T modifiée pour exprimer un récepteur de cellule T (TCR) ou un récepteur d'antigène chimérique (CAR). La cellule T peut également être différenciée d'une cellule souche ou d'une cellule progénitrice.
Au sens de la présente invention, on entend par « cellule B » ou « cellule lymphocytaire B » ou « lymphocyte B », une cellule lymphocytaire qui est produite dans la moelle osseuse, produit des immunoglobulines et est impliquée dans la production d'anticorps lors la réponse immunitaire humorale. Le lymphocyte B peut être n'importe quelle cellule B, choisie parmi une cellule souche B, une cellule pro-B, une cellule pré-B, une cellule B naïve, une cellule B activée, une cellule GC B mémoire, une cellule plasmablastique tardive et une cellule à plasma.
Au sens de la présente invention, le terme «mise en contact», lorsqu'il est utilisé en référence à une action effectuée sur une cellule immunitaire, est utilisé de manière interchangeable pour désigner la culture, l'incubation ou l'exposition d'une cellule immunitaire avec un ou plusieurs des inhibiteurs du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'invention. Avantageusement, le terme «mise en contact», lorsqu'il est utilisé en référence à une action effectuée sur une cellule immunitaire, est utilisé de manière interchangeable pour désigner la culture, l'incubation ou l'exposition d'une cellule immunitaire avec un ou plusieurs des inhibiteurs de la protéine kinase PDK1 selon l'invention.
Au sens de la présente invention, une cellule «non mise en contact» ou « non traitée » est une cellule qui n'a pas été traitée, par exemple, cultivée, mise en contact ou incubée avec un ou plusieurs des inhibiteurs du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'invention. Les cellules mises en contact avec un agent de stimulation, tel que le R848, le CpG-A, ou mises en contact avec un autre véhicule sont des exemples de cellules mise en contact.
Au sens de la présente invention, on entend par « synthèse de cytokines inflammatoires» ou « production de cytokines inflammatoires» ou « sécrétion de cytokines inflammatoires», la libération dans le milieu extérieur de cytokines inflammatoires par une cellule, avantageusement une cellule de l'immunité.
Au sens de la présente invention, on entend par «synthèse d'interféron» ou « production d'interféron» ou «sécrétion d'interféron», la libération dans le milieu extérieur d'interféron par une cellule, avantageusement une cellule de l'immunité.
Dans un mode de réalisation avantageux de l'invention, l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 est choisi parmi un inhibiteur de la protéine kinase ROCK, un inhibiteur de la protéine kinase PDK1, un agent dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 et une combinaison de ceux-ci.
Au sens de la présente, on entend par «inhibiteur de la protéine kinase ROCK», un composé capable d'inhiber ou de bloquer ou de neutraliser l'expression de l'activité métabolique de la protéine kinase ROCK. Avantageusement, la capacité de l'inhibiteur à neutraliser la protéine kinase ROCK (IC50) est comprise entre llnM et 30nM. Avantageusement, l'inhibiteur de la protéine kinase ROCK est un composé capable d'inhiber ou de bloquer ou de neutraliser l'expression de l'activité métabolique de la protéine kinase ROCK d'une cellule de l'immunité. Avantageusement, la capacité de l'inhibiteur à neutraliser la protéine kinase ROCK d'une cellule de l'immunité (IC50) est comprise entre llnM et 30nM.
Au sens de la présente, on entend par «inhibiteur de la protéine kinase PDK1», un composé capable d'inhiber ou de bloquer ou de neutraliser l'expression de l'activité métabolique de la protéine kinase PDK1. Avantageusement, la capacité de l'inhibiteur à neutraliser la protéine kinase PDK1 (IC50) est comprise entre llnM et 30nM. Avantageusement, l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 est un composé capable d'inhiber ou de bloquer ou de neutraliser l'expression de l'activité métabolique de la protéine kinase PDK1 d'une cellule de l'immunité. Avantageusement, la capacité de l'inhibiteur à neutraliser la protéine kinase PDK1 d'une cellule de l'immunité (IC50) est comprise entre llnM et 30nM. Au sens de la présente, on entend par «agent dissociant le complexe de protéines kinases ROCK- PDK1», un agent intercalant capable de dissocier le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1, se fixant dans la zone d'interaction entre les protéines kinases ROCK-PDK1, entraînant un clash stérique et séparant la protéine kinase ROCK de la protéine kinase PDK1. Avantageusement, l'agent dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 est un agent intercalant capable de dissocier le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 d'une cellule de l'immunité, en se fixant dans la zone d'interaction entre les protéines kinases ROCK-PDK1, entraînant un clash stérique et séparant la protéine kinase ROCK de la protéine kinase PDK1.
Au sens de la présente invention, on entend par « combinaison », un mélange d'au moins deux inhibiteurs du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1, lesdits inhibiteurs du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 pouvant être des inhibiteurs différents mais appartenant à la même classe d'inhibiteurs (par exemple : inhibiteurs de la protéine kinase ROCK, inhibiteurs de la protéine kinase PDK1 ou agents dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1) ou des inhibiteurs appartenant à des classes d'inhibiteurs différentes.
Dans un mode de réalisation particulier, l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'invention peut être une combinaison d'au moins deux inhibiteurs de la protéine kinase ROCK différents, avantageusement au moins trois inhibiteurs de la protéine kinase ROCK différents, avantageusement au moins quatre inhibiteurs de la protéine kinase ROCK différents, avantageusement au moins cinq inhibiteurs de la protéine kinase ROCK différents, avantageusement au moins six inhibiteurs de la protéine kinase ROCK différents, ou plus.
Dans un autre mode de réalisation particulier, l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK- PDK1 selon l'invention peut être une combinaison d'au moins deux inhibiteurs de la protéine kinase PDK1 différents, avantageusement au moins trois inhibiteurs de la protéine kinase PDK1 différents, avantageusement au moins quatre inhibiteurs de la protéine kinase PDK1 différents, avantageusement au moins cinq inhibiteurs de la protéine kinase PDK1 différents, avantageusement au moins six inhibiteurs de la protéine kinase PDK1 différents, ou plus.
Dans un autre mode de réalisation particulier, l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK- PDK1 selon l'invention peut être une combinaison d'au moins deux agents dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 différents, avantageusement au moins trois agents dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 différents, avantageusement au moins quatre agents dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 différents, avantageusement au moins cinq agents dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 différents, avantageusement au moins six agents dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 différents, ou plus.
Dans un autre mode de réalisation particulier, l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK- PDK1 selon l'invention peut être une combinaison d'au moins un inhibiteur de la protéine kinase ROCK et d'au moins un inhibiteur de la protéine kinase PDK1.
Dans un autre mode de réalisation particulier, l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK- PDK1 selon l'invention peut être une combinaison d'au moins un inhibiteur de la protéine kinase ROCK et d'au moins un agent dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK- PDK1 selon l'invention peut être une combinaison d'au moins un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 et d'au moins un agent dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1.
Dans un autre mode de réalisation particulier, l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK- PDK1 selon l'invention peut être une combinaison d'au moins un inhibiteur de la protéine kinase ROCK, d'au moins un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 et d'au moins un agent dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1.
Dans un mode de réalisation avantageux de l'invention, l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 est choisi parmi les composés de formule (I) à (XIV) : ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables. ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables.
ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables. ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables, ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables,
ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables, ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables,
ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables, ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables. Avantageusement, les composés de formules (I) à (VI) sont des inhibiteurs de la protéine kinase PDK1. Avantageusement, le composé de formule (I) est le composé BX320. Avantageusement, le composé de formule (II) est le composé BX517. Avantageusement, le composé de formule (III) est le composé BX795. Avantageusement, le composé de formule (IV) est le composé BX912. Avantageusement, le composé de formule (V) est le composé GSK2334470. Avantageusement, le composé de formule (VI) est le composé MP7.
Avantageusement, les composés de formules (VII) à (X) sont des inhibiteurs de la protéine kinase ROCK. Avantageusement, le composé de formule (VII) est le composé Y-27632 (ou Y27632). Avantageusement, le composé de formule (VIII) est le diméthylfasudil. Avantageusement, le composé de formule (IX) est le fasudil. Avantageusement, le composé de formule (X) est l'hydroxyfasudil.
Avantageusement, les composés de formules (XI) à (XIV) sont des agents dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1.
Avantageusement, les inventeurs ont montré que l'inhibition de la protéine kinase ROCK par le composé de formule (VII) ou le composé de formule (VIII) rétablit un niveau « normal » de TNFa dans le milieu de culture des neurones infectés par les prions. Ces résultats montrent que l'inhibition de la kinase ROCK s'oppose à la production/sécrétion d'un facteur pro-inflammatoire, le TNFa.
Avantageusement, les inventeurs ont également montré que l'incubation de cellules mononucléées du sang périphérique humain avec un inhibiteur de la protéine kinase ROCK choisi parmi le composé de formule (VII) ou le composé de formule (VIII), avant d'être stimulées avec un activateur (R848) des Toll-Like Récepteurs (TLR) 7/8 pour mimer une infection par un virus à ARN simple brin, inhibe la production de TNFa induite par la stimulation TLR7/8, mais également la production et sécrétion de cytokines pro-inflammatoire, telles que IL-6, IL-Ib et les interférons induite par la stimulation TLR7/8.
Avantageusement, les inventeurs ont également montré que l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) inhibe l'expression du marqueur CD69 induite par les billes CD3/CD28 à la surface des lymphocytes T, révélant un effet anti-inflammatoire du composé de formule (IV) sur l'activation des lymphocytes T sans en affecter la viabilité.
Avantageusement, les inventeurs ont également montré que l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) inhibe l'expression du marqueur CD69 induite par le CpG-A, ligand de TLR9 à la surface des lymphocytes B, révélant un effet anti-inflammatoire de l'inhibiteur de PDK1 de formule (IV) sur l'activation des lymphocytes B sans en affecter la viabilité.
Avantageusement, les inventeurs ont également montré que l'incubation de monocytes purifiés humaines avec un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 (composé de formule (IV)), avant d'être stimulées avec un activateur des Toll-Like Récepteurs (TLR) 2/4 pour mimer une infection bactérienne, inhibe la production de TNFa induite par la stimulation TLR2/4, mais également la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires sur des cellules mononuclées du sang périphérique humain, telles que IL-6, IL-Ib, GM-CSF et les interférons induite par la stimulation des TLR4 par le lipopolysaccharide (LPS) ou des TLR2 par les acides lipotéichoïques, deux agents bactériens inducteurs d'une réponse inflammatoire.
Ainsi, les inventeurs ont montré de manière tout à fait surprenante que l'utilisation d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1, en particulier un inhibiteur de la protéine kinase ROCK ou un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 a un effet préventif sur l'augmentation de production de cytokines inflammatoires induite par la stimulation de TLR2/4 ou TLR7/8.
Ainsi, les inventeurs ont montré de manière tout à fait surprenante que l'utilisation d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1, en particulier un inhibiteur de la protéine kinase ROCK ou un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 a un effet curatif sur la production d'interféron induite par la stimulation de TLR2/4 ou TLR7/8.
Les inhibiteurs du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'invention peuvent être utilisés sous la forme d'un sel pharmaceutiquement acceptable et peuvent comprendre des sels, des hydrates et des solvatés préparés selon des procédés classiques, bien connus de l'homme du métier. À titre d'exemples, on peut notamment citer les sels dérivés d'acides carboxyliques, tels que les carboxylate (COO-), mais également les sulfonates (-S03-), les phosphonates (P032-), les ammoniums quaternaires (NR4+) ou les sulfonamines (S02-NH3+). Avantageusement, les sels appropriés comprennent les sels d'addition d'acide pharmaceutiquement ou physiologiquement acceptables. Avantageusement, les sels appropriés comprennent des sels d'addition d'acide formés avec divers acides libres pharmaceutiquement ou physiologiquement acceptables. Des exemples d'acides peuvent comprendre, sans s'y limiter, l'acide chlorhydrique, l'acide bromique, l'acide sulfurique, l'acide phosphorique, l'acide citrique, l'acide acétique, l'acide lactique, l'acide tartrique, l'acide fumarique, l'acide formique, l'acide propionique, l'acide oxalique, l'acide trifluoroacétique, l'acide méthanesulfonique, l'acide benzènesulfonique, l'acide maléique, l'acide benzoïque, l'acide gluconique, l'acide glycolique, l'acide succinique, l'acide 4-morpholineéthanesulfonique, l'acide camphorsulfonique, l'acide nitrobenzènesulfonique, l'acide hydroxy-O-sulfonique, l'acide 4- toluènesulfonique, l'acide couteau ruktu, l'acide EMBO, l'acide glutamique, l'acide aspartique, etc.
De plus, des sels métalliques pharmaceutiquement acceptables peuvent être préparés en utilisant des bases. Par exemple, des sels de métaux alcalins ou de métaux alcalino-terreux peuvent être obtenus en dissolvant le composé dans un excès d'une solution d'hydroxyde de métal alcalin ou d'hydroxyde de métal alcalino-terreux, en filtrant les sels de composé non dissous et en évaporant et en séchant le filtrat. Ici, les sels de sodium, de potassium, de lithium, de césium, de magnésium ou de calcium sont des sels métalliques pharmaceutiquement appropriés, mais non limités à ceux-ci. De plus, des sels d'argent correspondant aux sels métalliques peuvent être obtenus en faisant réagir des métaux alcalins ou des métaux alcalino-terreux avec des sels d'argent appropriés (par exemple des nitrates). On peut également citer les ammoniums (NH4+) ou des amines sous forme ammonium telles que la diéthylamine (EDTA), la pyrrolidine, la pipéridine et la pyridine.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 est le composé de formule (IV) ou un sel pharmaceutique acceptable de celui-ci. Un autre aspect de la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant au moins un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que décrit précédemment ou un sel pharmaceutique acceptable de celui-ci, comme principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Avantageusement, au moins un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 est choisi parmi un inhibiteur de la protéine kinase ROCK, un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 et un agent dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 ou une combinaison de ceux-ci.
Dans un mode de réalisation particulier, la composition pharmaceutique comprend au moins un inhibiteur de protéines kinases ROCK tel que décrit précédemment ou un sel pharmaceutique acceptable de celui-ci, comme principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Avantageusement, la composition pharmaceutique selon l'invention peut comprendre une combinaison d'au moins deux inhibiteurs de la protéine kinase ROCK différents, avantageusement au moins trois inhibiteurs de la protéine kinase ROCK différents, avantageusement au moins quatre inhibiteurs de la protéine kinase ROCK différents, avantageusement au moins cinq inhibiteurs de la protéine kinase ROCK différents, avantageusement au moins six inhibiteurs de la protéine kinase ROCK différents, ou plus.
Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition pharmaceutique comprend au moins un inhibiteur de protéines kinases PDK1 tel que décrit précédemment ou un sel pharmaceutique acceptable de celui-ci, comme principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Avantageusement, la composition pharmaceutique selon l'invention peut comprendre une combinaison d'au moins deux inhibiteurs de la protéine kinase PDK1 différents, avantageusement au moins trois inhibiteurs de la protéine kinase PDK1 différents, avantageusement au moins quatre inhibiteurs de la protéine kinase PDK1 différents, avantageusement au moins cinq inhibiteurs de la protéine kinase PDK1 différents, avantageusement au moins six inhibiteurs de la protéine kinase PDK1 différents, ou plus.
Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition pharmaceutique comprend au moins un agent dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que décrit précédemment ou un sel pharmaceutique acceptable de celui-ci, comme principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Avantageusement, la composition pharmaceutique selon l'invention peut comprendre une combinaison d'au moins deux agents dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 différents, avantageusement au moins trois agents dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 différents, avantageusement au moins quatre agents dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 différents, avantageusement au moins cinq agents dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 différents, avantageusement au moins six agents dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 différents, ou plus.
Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition pharmaceutique comprend une combinaison comprenant au moins un inhibiteur de protéines kinases ROCK et au moins un inhibiteur de protéines kinases PDK1 ou un de leurs sels pharmaceutiques acceptables tels que décrit précédemment, comme principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition pharmaceutique comprend une combinaison comprenant au moins un inhibiteur de protéines kinases ROCK et au moins un agent dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 ou un de leurs sels pharmaceutiques acceptables tels que décrit précédemment, comme principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition pharmaceutique comprend une combinaison comprenant au moins un inhibiteur de protéines kinases PDK1 et au moins un agent dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 ou un de leurs sels pharmaceutiques acceptables tels que décrit précédemment, comme principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Dans un autre mode de réalisation particulier, la composition pharmaceutique comprend une combinaison comprenant au moins un inhibiteur de protéines kinases ROCK, au moins un inhibiteur de protéines kinases PDK1 et au moins un agent dissociant le complexe de protéines kinases ROCK- PDK1 ou un de leurs sels pharmaceutiques acceptables tels que décrit précédemment, comme principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Dans un mode de réalisation particulier, l'invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité pharmaceutiquement active d'au moins un inhibiteur de protéines kinases ROCK ou un sel pharmaceutique acceptable de celui-ci tel que décrit précédemment et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Avantageusement, la composition pharmaceutique selon l'invention peut comprendre une combinaison d'au moins deux inhibiteurs de la protéine kinase ROCK différents, avantageusement au moins trois inhibiteurs de la protéine kinase ROCK différents, avantageusement au moins quatre inhibiteurs de la protéine kinase ROCK différents, avantageusement au moins cinq inhibiteurs de la protéine kinase ROCK différents, avantageusement au moins six inhibiteurs de la protéine kinase ROCK différents, ou plus.
Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité pharmaceutiquement active d'au moins un inhibiteur de protéines kinases PDK1 ou un sel pharmaceutique acceptable de celui-ci tel que décrit précédemment et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Avantageusement, la composition pharmaceutique selon l'invention peut comprendre une combinaison d'au moins deux inhibiteurs de la protéine kinase PDK1 différents, avantageusement au moins trois inhibiteurs de la protéine kinase PDK1 différents, avantageusement au moins quatre inhibiteurs de la protéine kinase PDK1 différents, avantageusement au moins cinq inhibiteurs de la protéine kinase PDK1 différents, avantageusement au moins six inhibiteurs de la protéine kinase PDK1 différents, ou plus.
Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité pharmaceutiquement active d'au moins un agent dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 ou un sel pharmaceutique acceptable de celui-ci tel que décrit précédemment et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Avantageusement, la composition pharmaceutique selon l'invention peut comprendre une combinaison d'au moins deux agents dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 différents, avantageusement au moins trois agents dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 différents, avantageusement au moins quatre agents dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 différents, avantageusement au moins cinq agents dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 différents, avantageusement au moins six agents dissociant le complexe de protéines kinases ROCK- PDK1 différents, ou plus.
Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité pharmaceutiquement active d'une combinaison comprenant au moins un inhibiteur de protéines kinases ROCK et au moins un inhibiteur de protéines kinases PDK1 tels que décrits précédemment ou un de leurs sels pharmaceutiques acceptables et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité pharmaceutiquement active d'une combinaison comprenant au moins un inhibiteur de protéines kinases ROCK et au moins un agent dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tels que décrits précédemment ou un de leurs sels pharmaceutiques acceptables et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité pharmaceutiquement active d'une combinaison comprenant au moins un inhibiteur de protéines kinases PDK1 et au moins un agent dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tels que décrits précédemment ou un de leurs sels pharmaceutiques acceptables et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Dans un autre mode de réalisation particulier, l'invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité pharmaceutiquement active d'une combinaison comprenant au moins un inhibiteur de protéines kinases ROCK, au moins un inhibiteur de protéines kinases PDK1 et au moins un agent dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tels que décrits précédemment ou un de leurs sels pharmaceutiques acceptables et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de la présente invention, la composition pharmaceutique comprenant l'au moins un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment est particulièrement efficace pour la prévention et/ou le traitement des maladies inflammatoires, des infections virales et des maladies auto-immunes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de la présente invention, la composition pharmaceutique comprenant l'au moins un inhibiteur de protéines kinases ROCK ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci tel que défini précédemment est particulièrement efficace pour la prévention et/ou le traitement des maladies inflammatoires, des infections virales et des maladies auto-immunes. Avantageusement, la composition pharmaceutique selon l'invention peut comprendre une combinaison d'au moins deux inhibiteurs de la protéine kinase ROCK différents, avantageusement au moins trois inhibiteurs de la protéine kinase ROCK différents, avantageusement au moins quatre inhibiteurs de la protéine kinase ROCK différents, avantageusement au moins cinq inhibiteurs de la protéine kinase ROCK différents, avantageusement au moins six inhibiteurs de la protéine kinase ROCK différents, ou plus.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de la présente invention, la composition pharmaceutique comprenant l'au moins un inhibiteur de protéines kinases PDK1 ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci tel que défini précédemment est particulièrement efficace pour la prévention et/ou le traitement des maladies inflammatoires, des infections virales et des maladies auto-immunes. Avantageusement, la composition pharmaceutique selon l'invention peut comprendre une combinaison d'au moins deux inhibiteurs de la protéine kinase PDK1 différents, avantageusement au moins trois inhibiteurs de la protéine kinase PDK1 différents, avantageusement au moins quatre inhibiteurs de la protéine kinase PDK1 différents, avantageusement au moins cinq inhibiteurs de la protéine kinase PDK1 différents, avantageusement au moins six inhibiteurs de la protéine kinase PDK1 différents, ou plus.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de la présente invention, la composition pharmaceutique comprenant l'au moins un agent dissociant le complexe de protéines kinases ROCK- PDK1 ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci tel que défini précédemment est particulièrement efficace pour la prévention et/ou le traitement des maladies inflammatoires, des infections virales et des maladies auto-immunes. Avantageusement, la composition pharmaceutique selon l'invention peut comprendre une combinaison d'au moins deux agents dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 différents, avantageusement au moins trois agents dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 différents, avantageusement au moins quatre agents dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 différents, avantageusement au moins cinq agents dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 différents, avantageusement au moins six agents dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 différents, ou plus.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de la présente invention, la composition pharmaceutique comprenant la combinaison comprenant au moins un inhibiteur de protéines kinases ROCK et au moins un inhibiteur de protéines kinases PDK1 ou un de leurs sels pharmaceutique acceptables, tels que décrit précédemment, est particulièrement efficace pour la prévention et/ou le traitement des maladies inflammatoires, des infections virales et des maladies auto-immunes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de la présente invention, la composition pharmaceutique comprenant la combinaison comprenant au moins un inhibiteur de protéines kinases ROCK et au moins un agent dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 ou un de leurs sels pharmaceutique acceptables, tels que décrit précédemment, est particulièrement efficace pour la prévention et/ou le traitement des maladies inflammatoires, des infections virales et des maladies auto-immunes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de la présente invention, la composition pharmaceutique comprenant la combinaison comprenant au moins un inhibiteur de protéines kinases PDKlet au moins un agent dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 ou un de leurs sels pharmaceutique acceptables, tels que décrit précédemment, est particulièrement efficace pour la prévention et/ou le traitement des maladies inflammatoires, des infections virales et des maladies auto-immunes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de la présente invention, la composition pharmaceutique comprenant la combinaison comprenant au moins un inhibiteur de protéines kinases ROCK, au moins un inhibiteur de protéines kinases PDK1 et au moins un agent dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1, ou un de leurs sels pharmaceutique acceptables, tels que décrit précédemment, est particulièrement efficace pour la prévention et/ou le traitement des maladies inflammatoires, des infections virales et des maladies auto-immunes.
Dans un mode de réalisation selon l'invention, le patient peut être un humain. Dans un autre mode de réalisation de l'invention, le patient peut être un animal non-humain, en particulier un chien, un chat, un cheval, une vache, un cochon, un mouton, une chèvre, un cervidé ou un primate.
Selon des modes de réalisation qui impliquent l'administration à un patient nécessitant un traitement, une quantité thérapeutiquement efficace d'au moins un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'invention, telle que fournie ici, "thérapeutiquement efficace" ou "une quantité efficace pour traiter" ou "efficace sur le plan pharmaceutique", la quantité d'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 ou d'une composition nécessaire pour inhiber ou inverser une maladie (par exemple, pour traiter l'inflammation, des infections virales et des maladies auto-immunes). La détermination d'une quantité thérapeutiquement efficace dépend spécifiquement de facteurs tels que la toxicité et l'efficacité du médicament. Ces facteurs différeront en fonction d'autres facteurs tels que la puissance, la biodisponibilité relative, le poids corporel du patient, la gravité des effets indésirables et le mode d'administration préféré. La toxicité peut être déterminée en utilisant des procédés bien connus dans la technique. L'efficacité peut être déterminée en utilisant les mêmes indications. L'efficacité peut être mesurée par une diminution de l'inflammation ou de l'infection, par exemple dans un modèle d'arthrite juvénile idiopathique. Une quantité pharmaceutiquement efficace est donc une quantité que le clinicien considère comme tolérable sur le plan toxicologique, mais efficace.
Le dosage peut être ajusté de manière appropriée pour obtenir le médicament souhaité (par exemple, un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 de l'invention) à des niveaux locaux ou systémiques, en fonction du mode d'administration. Dans le cas où la réponse chez un patient est insuffisante à de telles doses, des doses encore plus élevées (ou des doses efficaces plus élevées par une voie d'administration différente et plus localisée) peuvent être utilisées dans la mesure où la tolérance du patient le permet. Des doses multiples par jour peuvent également être utilisées pour atteindre des taux systémiques appropriés de l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'invention. Des niveaux systémiques appropriés peuvent être déterminés, par exemple, par la mesure du taux plasmatique maximal ou prolongé du patient. "Dose" et "dosage" sont utilisés ici de manière interchangeable.
Dans un mode de réalisation avantageux de l'invention, la quantité d'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'invention ou de composition pharmaceutique comprenant au moins un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 en tant que principe actif administrée à un patient est de 0,5 mg à 30 mg par kg de poids corporel, en fonction de l'intensité de l'inflammation. Avantageusement, la quantité d'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK- PDK1 selon l'invention ou de composition pharmaceutique comprenant au moins un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 en tant que principe actif administrée à un patient est de 1,0 mg, avantageusement de 1,5 mg, avantageusement de 2,0 mg, avantageusement de 2,5 mg, avantageusement de 3,0 mg, avantageusement de 3,5 mg, avantageusement de 4,0 mg, avantageusement de 4,5 mg, avantageusement de 5,0 mg, avantageusement de 5,5 mg, avantageusement de 6,0 mg, avantageusement de 6,5 mg, avantageusement de 7,0 mg, avantageusement de 7,5 mg, avantageusement de 8,0 mg, avantageusement de 8,5 mg, avantageusement de 9,0 mg, avantageusement de 9,5 mg, avantageusement de 10,0 mg, avantageusement de 10,5 mg, avantageusement de 11,0 mg, avantageusement de 11,5 mg, avantageusement de 12,0 mg, avantageusement de 12,5 mg, avantageusement de 13,0 mg, avantageusement de 13,5 mg, avantageusement de 14,0 mg, avantageusement de 14,5 mg, avantageusement de 15,0 mg, avantageusement de 15,5 mg, avantageusement de 16,0 mg, avantageusement de 16,5 mg, avantageusement de 17,0 mg, avantageusement de 17,5 mg, avantageusement de 18,0 mg, avantageusement de 18,5 mg, avantageusement de 19,0 mg, avantageusement de 19,5 mg, avantageusement de 20,0 mg, avantageusement de 20,5 mg, avantageusement de 21,0 mg, avantageusement de 21,5 mg, avantageusement de 22,0 mg, avantageusement de 22,5 mg, avantageusement de 23,0 mg, avantageusement de 23,5 mg, avantageusement de 24,0 mg, avantageusement de 24,5 mg, avantageusement de 25,0 mg, avantageusement de 25,5 mg, avantageusement de 26,0 mg, avantageusement de 26,5 mg, avantageusement de 27,0 mg, avantageusement de 27,5 mg, avantageusement de 28,0 mg, avantageusement de 28,5 mg, avantageusement de 29,0 mg, avantageusement de 29,5 mg, avantageusement de 30,0 mg par kg de poids corporel, en fonction de l'intensité de l'inflammation.
Avantageusement, la quantité d'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'invention ou de composition pharmaceutique comprenant au moins un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 en tant que principe actif administrée à un patient est comprise entre 0,5 mg à 30,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 29,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 28,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 27,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 26,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 25,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 24,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 23,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 22,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 21 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 20,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 19,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 18,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 17,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 16,0 mg par kg de poids corporel avantageusement entre 0,5 mg et 15,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 14,0 mg par kg de poids corporel avantageusement entre 0,5 mg et 13,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 12,0 mg par kg de poids corporel avantageusement entre 0,5 mg et 11,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 10,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 9,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 8,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 7,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 6,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 1,0 mg et 6,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 1,5 mg et 6,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 1,5 mg et 5,5 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 2,0 mg et 5,0 mg par kg de poids corporel, en fonction de l'intensité de l'inflammation.
Dans un mode de réalisation avantageux de l'invention, la quantité d'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'invention ou de composition pharmaceutique comprenant au moins un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 en tant que principe actif administrée à un patient est de 0,5 mg à 30 mg par kg de poids corporel, en fonction de l'intensité de l'infection. Avantageusement, la quantité d'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'invention ou de composition pharmaceutique comprenant au moins un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 en tant que principe actif administrée à un patient est de 1,0 mg, avantageusement de 1,5 mg, avantageusement de 2,0 mg, avantageusement de 2,5 mg, avantageusement de 3,0 mg, avantageusement de 3,5 mg, avantageusement de 4,0 mg, avantageusement de 4,5 mg, avantageusement de 5,0 mg, avantageusement de 5,5 mg, avantageusement de 6,0 mg, avantageusement de 6,5 mg, avantageusement de 7,0 mg, avantageusement de 7,5 mg, avantageusement de 8,0 mg, avantageusement de 8,5 mg, avantageusement de 9,0 mg, avantageusement de 9,5 mg, avantageusement de 10,0 mg, avantageusement de 10,5 mg, avantageusement de 11,0 mg, avantageusement de 11,5 mg, avantageusement de 12,0 mg, avantageusement de 12,5 mg, avantageusement de 13,0 mg, avantageusement de 13,5 mg, avantageusement de 14,0 mg, avantageusement de 14,5 mg, avantageusement de 15,0 mg, avantageusement de 15,5 mg, avantageusement de 16,0 mg, avantageusement de 16,5 mg, avantageusement de 17,0 mg, avantageusement de 17,5 mg, avantageusement de 18,0 mg, avantageusement de 18,5 mg, avantageusement de 19,0 mg, avantageusement de 19,5 mg, avantageusement de 20,0 mg, avantageusement de 20,5 mg, avantageusement de 21,0 mg, avantageusement de 21,5 mg, avantageusement de 22,0 mg, avantageusement de 22,5 mg, avantageusement de 23,0 mg, avantageusement de 23,5 mg, avantageusement de 24,0 mg, avantageusement de 24,5 mg, avantageusement de 25,0 mg, avantageusement de 25,5 mg, avantageusement de 26,0 mg, avantageusement de 26,5 mg, avantageusement de 27,0 mg, avantageusement de 27,5 mg, avantageusement de 28,0 mg, avantageusement de 28,5 mg, avantageusement de 29,0 mg, avantageusement de 29,5 mg, avantageusement de 30,0 mg par kg de poids corporel, en fonction de l'intensité de l'infection.
Avantageusement, la quantité d'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'invention ou de composition pharmaceutique comprenant au moins un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 en tant que principe actif administrée à un patient est comprise entre 0,5 mg à 30,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 29,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 28,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 27,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 26,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 25,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 24,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 23,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 22,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 21 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 20,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 19,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 18,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 17,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 16,0 mg par kg de poids corporel avantageusement entre 0,5 mg et 15,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 14,0 mg par kg de poids corporel avantageusement entre 0,5 mg et 13,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 12,0 mg par kg de poids corporel avantageusement entre 0,5 mg et 11,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 10,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 9,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 8,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 7,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 0,5 mg et 6,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 1,0 mg et 6,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 1,5 mg et 6,0 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 1,5 mg et 5,5 mg par kg de poids corporel, avantageusement entre 2,0 mg et 5,0 mg par kg de poids corporel, en fonction de l'intensité de l'infection.
Bien entendu, cette dose unitaire peut être répétée si nécessaire.
Dans un mode de réalisation avantageux, l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 en tant que principe actif administré au patient à raison de 100 mg à 500 mg par jour. Avantageusement, l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 en tant que principe actif administré au patient à raison de 100 mg à 450 mg par jour, avantageusement à raison de 100 mg à 400 mg par jour, avantageusement à raison de 100 mg à 350 mg par jour, avantageusement à raison de 100 mg à 300 mg par jour, avantageusement à raison de 100 mg à 250 mg par jour, avantageusement à raison de 100 mg à 200 mg par jour, avantageusement à raison de 100 mg à 150 mg par jour, avantageusement à raison de 140 mg par jour. Bien entendu, cette dose unitaire peut être répétée si nécessaire.
Dans un mode de réalisation avantageux, la composition pharmaceutique selon l'invention est administrée au patient à raison d'une, deux, trois, quatre, cinq, six ou sept fois par semaine.
Avantageusement, la composition pharmaceutique selon l'invention est administrée au patient à raison de sept fois par semaine, soit une administration par jour pendant sept jours consécutifs. Avantageusement, la composition pharmaceutique selon l'invention est administrée au patient à raison de six fois par semaine. Avantageusement, la composition pharmaceutique selon l'invention est administrée au patient à raison de cinq fois par semaine. Avantageusement, la composition pharmaceutique selon l'invention est administrée au patient à raison de quatre fois par semaine. Avantageusement, la composition pharmaceutique selon l'invention est administrée au patient à raison de trois fois par semaine. Avantageusement, la composition pharmaceutique selon l'invention est administrée au patient à raison de deux fois par semaine. Avantageusement, la composition pharmaceutique selon l'invention est administrée au patient à raison d'une fois par semaine.
Dans un mode de réalisation avantageux de l'invention, les compositions pharmaceutiques fournies sont utilisées pour des applications in vivo. En fonction du mode d'administration prévu in vivo, les compositions pharmaceutiques utilisées peuvent être sous la forme posologique solide, semi-solide ou liquide telle que, par exemple, comprimés, pilules, poudres, capsules, gels, pommades, liquides, suspensions. De préférence, les compositions pharmaceutiques sont administrées sous des formes posologiques unitaires appropriées pour une administration unique de doses précises. Les compositions pharmaceutiques peuvent également comprendre, en fonction de la formulation souhaitée, au moins un support ou diluant pharmaceutiquement acceptable, qui sont définis comme des véhicules à base aqueuse couramment utilisés pour formuler des compositions pharmaceutiques pour une administration animale ou humaine. Le diluant est choisi de manière à ne pas affecter l'activité biologique de l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'invention. Des exemples de tels diluants sont l'eau distillée, le sérum physiologique, la solution de Ringer, la solution de dextrose et la solution de Hank. De plus, la composition pharmaceutique peut également comprendre d'autres agents médicinaux, agents pharmaceutiques, supports, adjuvants, stabilisants non toxiques, non thérapeutiques, non immunogènes, etc. Des quantités efficaces d'un tel diluant ou véhicule sont des quantités efficaces pour obtenir une solution pharmaceutiquement acceptable en termes de formulation, solubilité des composants, activité biologique, etc. Dans certains modes de réalisation, les compositions pharmaceutiques fournies ici sont stériles.
On peut envisager de formuler au moins un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon la présente invention à raison de 0,5 à 98% en poids, exprimé en poids, voire plus, par rapport au poids total de la composition pharmaceutique considérée.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de la présente invention, la composition pharmaceutique selon l'invention comprend uniquement au moins un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1, en tant que principe actif unique.
Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 de la composition pharmaceutique est choisi parmi les composés de formule (I) à (XIV) : ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables. ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables.
ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables. ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables, ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables,
HCI xH20
(X) ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables, ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables,
ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables, ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables. Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique comprend l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 de formule (I) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, en tant que principe actif unique ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support ou un diluant ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique comprend l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 de formule (II) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, en tant que principe actif unique ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support ou un diluant ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique comprend l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 de formule (III) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, en tant que principe actif unique ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support ou un diluant ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique comprend l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 de formule (IV) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, en tant que principe actif unique ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support ou un diluant ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique comprend l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 de formule (V) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, en tant que principe actif unique ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support ou un diluant ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique comprend l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 de formule (VI) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, en tant que principe actif unique ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support ou un diluant ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique comprend l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 de formule (VII) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, en tant que principe actif unique ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support ou un diluant ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable. Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique comprend l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 de formule (VIII) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, en tant que principe actif unique ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support ou un diluant ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique comprend l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 de formule (IX) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, en tant que principe actif unique ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support ou un diluant ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique comprend l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 de formule (X) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, en tant que principe actif unique
HCl xH20
(X) ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support ou un diluant ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique comprend l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 de formule (XI) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, en tant que principe actif unique acceptable et/ou un support ou un diluant ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique comprend l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 de formule (XII) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, en tant que principe actif unique
ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support ou un diluant ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique comprend l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 de formule (XIII) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, en tant que principe actif unique ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support ou un diluant ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, la composition pharmaceutique comprend l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 de formule (XIV) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de celui-ci, en tant que principe actif unique ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou un support ou un diluant ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Dans un mode de réalisation avantageux, la composition pharmaceutique selon l'invention comprend en outre au moins un second principe actif. Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, l'au moins un second principe actif peut interagir de manière synergique avec l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'invention. Avantageux, le second principe actif peut être un corticostéroïde, avantageusement la prednisone.
Dans un mode de réalisation avantageux de l'invention, lorsque la composition pharmaceutique comprend un second principe actif, la composition pharmaceutique est adaptée pour une administration simultanée ou une administration séquentielle de l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'invention et du second principe actif.
Au sens de la présente invention, on entend par « administration simultanée », une administration de l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'invention et du second principe actif en même temps, au même moment, à un patient en des quantités thérapeutiquement efficaces pour permettre l'effet synergique de la composition pharmaceutique. Cela ne signifie pas pour autant que l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'invention et le second principe actif sont nécessairement administrés sous la forme d'un mélange ; ils peuvent en effet être administrés simultanément mais séparément, sous la forme de compositions distinctes.
Par « présents dans deux compositions distinctes », on entend que de l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'invention et le second principe actif sont physiquement séparés. Ils sont alors mis en oeuvre, administrés séparément en des quantités thérapeutiquement efficaces pour permettre l'effet synergique de la composition pharmaceutique, sans mélange préalable, dans plusieurs (au moins deux) formes posologiques (par exemple deux compositions distinctes).
Dans un autre mode de réalisation particulier de l'invention, l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'invention et le second principe actif peuvent être présents dans une même composition en des quantités thérapeutiquement efficaces pour permettre l'effet synergique de la composition pharmaceutique. Au sens de la présente invention, on entend par « présents dans une même composition », la combinaison physique de l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'invention et le second principe actif. L'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'invention et le second principe actif sont alors nécessairement administrés simultanément puisqu'ils sont administrés ensemble, sous la forme d'un mélange, dans une même forme posologique (par exemple dans une seule composition contenant les cellules souches humaines génétiquement modifiées et l'agent anti-cancéreux) et en des quantités thérapeutiquement efficaces pour permettre l'effet synergique de la composition pharmaceutique.
Au sens de la présente invention, l'expression « administration séquentielle », signifie que l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'invention et le second principe actif sont administrés en des quantités thérapeutiquement efficaces pour permettre l'effet synergique de la composition pharmaceutique, non pas simultanément mais séparément dans le temps, l'un après l'autre. Les termes « précéder » ou « précédant » et « suivre » ou « suivant » s'appliquent alors. Le terme « précéder » ou « précédant » est utilisé lorsqu'un composé de la composition pharmaceutique selon l'invention est administré quelques minutes ou plusieurs heures, voire plusieurs jours avant l'administration des autre(s) composé(s) de la composition pharmaceutique. À l'inverse, le terme « suivre » ou « suivant » est utilisé lorsqu'un composé de la composition pharmaceutique est administré quelques minutes ou plusieurs heures, voire plusieurs jours après l'administration des autre(s) composé(s) de la composition pharmaceutique. Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'invention, l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'invention est administré quelques jours avant le second principe actif.
Dans un mode de réalisation avantageux de l'invention, lorsque la composition pharmaceutique comprend un second principe actif, la composition pharmaceutique est adaptée pour une administration séquentielle de l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'invention et du second principe actif. Avantageusement, le second principe actif peut être un corticostéroïde, avantageusement la prednisone.
Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'invention est administré au patient, puis deux à trois jours après l'administration de l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'invention, le second principe actif est administré à ce même patient, pendant au moins une semaine, avantageusement au moins deux semaines, avantageusement au moins trois semaines, avantageusement au moins quatre semaines, avantageusement au moins cinq semaines, avantageusement au moins six semaines, avantageusement au moins sept semaines.
L'administration pendant le traitement in vivo peut se faire par n'importe quelle voie, y compris orale, parentérale, transdermique, intramusculaire, intranasale, sublinguale, intratrachéale, par inhalation, oculaire, vaginale et rectale. Des voies d'administration intracapsulaire, intraveineuse et intrapéritonéale peuvent également être utilisées. L'homme du métier reconnaît que la voie d'administration varie en fonction du trouble à traiter. Par exemple, les compositions pharmaceutiques selon l'invention ou l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 de la présente invention, peuvent être administrées à un patient par administration orale, parentérale ou topique. Dans un mode de réalisation, les compositions pharmaceutiques selon l'invention ou l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 de la présente invention est sous une forme adaptée pour son administration par voie orale, parentérale ou topique. Dans un mode de réalisation, les compositions pharmaceutiques selon l'invention ou l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 de la présente invention, éventuellement sous la forme de nanoparticules, sont administrées par perfusion intraveineuse.
Les compositions pharmaceutiques, lorsqu'il est souhaitable de les administrer par voie systémique, peuvent être formulées pour une administration parentérale par injection, par exemple par injection de bolus ou perfusion continue. Les formulations pour injection peuvent être présentées sous une forme posologique unitaire, par exemple dans des ampoules ou dans des récipients à doses multiples, avec un conservateur ajouté. Les compositions pharmaceutiques peuvent prendre des formes telles que des suspensions, des solutions ou des émulsions dans des véhicules huileux ou aqueux et peuvent contenir des agents de formulation tels que des agents de suspension, des stabilisants et / ou des dispersants.
Les formulations pharmaceutiques pour administration parentérale comprennent les solutions aqueuses des compositions pharmaceutiques actives sous forme soluble dans l'eau. De plus, des suspensions des compositions pharmaceutiques actives peuvent être préparées sous forme de suspensions pour injection huileuse appropriées. Les solvants ou véhicules lipophiles appropriés comprennent les huiles grasses telles que l'huile de sésame, ou les esters d'acides gras synthétiques, tels que l'oléate d'éthyle ou les triglycérides, ou les liposomes. Les suspensions d'injection aqueuses peuvent contenir des substances qui augmentent la viscosité de la suspension, telles que la carboxyméthylcellulose de sodium, le sorbitol ou le dextrane.
De manière optionnelle, la suspension peut également contenir des stabilisants ou agents appropriés qui augmentent la solubilité des compositions pharmaceutiques pour permettre la préparation de solutions hautement concentrées. En variante, les compositions actives peuvent être sous forme de poudre pour constituer un véhicule approprié, par exemple de l'eau stérile apyrogène, avant utilisation.
Pour l'administration orale, les compositions pharmaceutiques peuvent prendre la forme, par exemple, de comprimés ou de capsules préparés par des moyens classiques avec des excipients pharmaceutiquement acceptables tels que des agents liants (par exemple, amidon de maïs prégélatinisé, polyvinylpyrrolidone, méthylcellulose ou hydroxypropylméthylcellulose); des charges (par exemple, du lactose, de la cellulose microcristalline ou de l'hydrogénophosphate de calcium); des lubrifiants (par exemple du stéarate de magnésium, du talc ou de la silice); des délitants (par exemple l'amidon de pomme de terre ou le glycolate d'amidon sodique); ou des agents mouillants (par exemple, le laurylsulfate de sodium). Les comprimés peuvent être enrobés par des procédés bien connus dans la technique. Les préparations liquides pour l'administration orale peuvent prendre la forme, par exemple, de solutions, de sirops ou de suspensions, ou peuvent être présentées sous forme de produit sec pour reconstitution avec de l'eau ou un autre véhicule approprié avant utilisation. Ces préparations liquides peuvent être préparées par des moyens classiques avec des additifs pharmaceutiquement acceptables tels que des agents de suspension (par exemple, sirop de sorbitol, dérivés de cellulose ou graisses comestibles hydrogénées); des agents émulsifiants (par exemple la lécithine ou la gomme arabique); des véhicules non aqueux (par exemple de l'huile d'amande, des esters huileux, de l'alcool éthylique ou des huiles végétales fractionnées); et des conservateurs (par exemple, méthyl ou propyl-p-hydroxybenzoates ou acide sorbique). Les préparations peuvent également contenir des sels tampons, des arômes, des colorants et des édulcorants, selon le cas. On souhaite également augmenter la stabilité globale des composés de formule (I) tels que définis et augmenter le temps de circulation dans le corps. Des exemples de telles molécules comprennent : le polyéthylène glycol, les copolymères d'éthylène glycol et de propylène glycol, la carboxyméthyl cellulose, le dextrane, l'alcool polyvinylique, la polyvinyl pyrrolidone et la polyproline. D'autres polymères pouvant être utilisés sont le poly-l,3-dioxolane et le poly-1,3,6- tioxocane. Comme indiqué ci-dessus, les molécules de polyéthylèneglycol sont préférées pour un usage pharmaceutique. Pour les compositions orales, le lieu de libération peut être l'estomac, l'intestin grêle (duodénum, jéjunum ou iléon) ou le gros intestin. L'homme du métier dispose de formulations qui ne se dissoudront pas dans l'estomac, mais qui libéreront le matériau dans le duodénum ou ailleurs dans l'intestin. De préférence, la libération évitera les effets délétères de l'environnement de l'estomac ou par la libération de la matière biologiquement active au-delà de l'environnement de l'estomac, comme dans l'intestin.
Pour l'administration buccale, les compositions peuvent prendre la forme de comprimés ou de pastilles formulés de manière classique.
Pour une administration par inhalation, les compositions à utiliser selon la présente invention peuvent être délivrées de manière appropriée sous la forme d'une pulvérisation aérosol à partir d'emballages sous pression ou d'un nébuliseur, en utilisant un agent propulseur approprié, par exemple dichlorodifluorométhane, trichlorofluorométhane, dichlorotétrafluoroéthane dioxyde de carbone ou autre gaz approprié. Dans le cas d'un aérosol sous pression, l'unité de dosage peut être déterminée en fournissant une valve pour délivrer une quantité mesurée. Les compositions selon l'invention peuvent être réduites sous la forme de poudre en vue d'une administration par inhalation. Dans ce cas, les compositions selon l'invention sous forme de poudre peuvent être mélangées à une seconde poudre, dite poudre de base telle que une poudre de lactose ou d'amidon, le mélange des deux poudres étant conditionné sous formes de cartouches ou de capsules destinées à être utilisées dans un inhalateur ou un insufflateur.
La présente invention concerne également l'administration pulmonaire. Les compositions pharmaceutiques peuvent être délivrées aux poumons d'un mammifère tout en inspirant et traversant la muqueuse épithéliale du poumon jusqu'à la circulation sanguine. Une gamme étendue de dispositifs mécaniques conçus pour la délivrance pulmonaire de produits thérapeutiques, comprenant, mais sans s'y limiter, les nébuliseurs, les inhalateurs-doseurs et les inhalateurs de poudre, tous connus des spécialistes de la technique, sont envisagés pour être utilisés dans la présente invention.
La délivrance nasale d'une composition pharmaceutique décrite ici est également envisagée. La délivrance nasale permet le passage d'une composition pharmaceutique de la présente invention au flux sanguin directement après l'administration du produit thérapeutique au nez, sans qu'il soit nécessaire de déposer le produit dans les poumons. Les formulations pour administration nasale comprennent celles avec du dextran ou de la cyclodextrine, ainsi que des excipients bioadhésifs tels que, par exemple, le chitosan.
Les compositions pharmaceutiques peuvent également être formulées dans des compositions rectales ou vaginales telles que des suppositoires ou des lavements de rétention, par exemple contenant des bases de suppositoires classiques tels que le beurre de cacao ou d'autres glycérides.
Les compositions pharmaceutiques peuvent également comprendre des supports ou excipients solides ou en phase de gel appropriés. Des exemples de tels supports ou excipients comprennent, sans s'y limiter, le carbonate de calcium, le phosphate de calcium, divers sucres, les amidons, les dérivés de la cellulose, la gélatine et les polymères tels que les polyéthylèneglycols.
Des formes de préparation pharmaceutique liquides ou solides convenables sont, par exemple, des solutions aqueuses ou salines pour inhalation, microencapsulées, encochées, appliquées sur des particules d'or microscopiques, contenues dans des liposomes, nébulisées, aérosols, pastilles pour implantation dans la peau. Les compositions pharmaceutiques comprennent également des granules, des poudres, des comprimés, des comprimés enrobés, des (micro)capsules, des suppositoires, des sirops, des émulsions, des suspensions, des crèmes, des timbres cutanés ou transdermiques, des gouttes ou des préparations à libération prolongée de compositions actives et / ou des auxiliaires tels que des délitants, des liants, des agents de revêtement, des agents gonflants, des lubrifiants, des arômes, des édulcorants ou des solubilisants sont habituellement utilisés comme décrit ci-dessus. Les compositions pharmaceutiques conviennent à une utilisation dans divers systèmes d'administration de médicaments.
Un autre objet de l'invention concerne une méthode de traitement préventif des maladies inflammatoires, comprenant l'administration au patient d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment ou d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK- PDK1 telle que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment.
Au sens de la présente invention, le terme « prévention » ou « prophylaxie » ou « traitement préventif » ou « traitement prophylactique » comprend un traitement conduisant à la prévention d'une maladie ainsi qu'un traitement réduisant et/ou retardant l'incidence d'une maladie ou le risque de survenue de la maladie.
Selon la présente invention, l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment est particulièrement efficace pour empêcher l'apparition de maladies inflammatoires, en inhibant la production de cytokines inflammatoires, induisant ainsi un effet protecteur contre les maladies inflammatoires. Avantageusement, les inventeurs ont montré que les composés de formules (IV) et (VII) sont capables d'inhiber la production de cytokines inflammatoires par les cellules de l'immunité (monocytes) de donneurs sains en réponse à l'activation de l'inflammasome par des cristaux d'acide urique (mimétique de la « goutte »).
Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la présente invention concerne une méthode de traitement préventif des maladies inflammatoires, comprenant l'administration au patient d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment ou d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 telle que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment et un second principe actif tel que défini précédemment.
Avantageusement, la maladie inflammatoire peut être choisie parmi : les maladies neurodégénératives amyloïdes, telles la maladie d'Alzheimer, les prions, la maladie de Parkinson, la Sclérose Amyotrophique Latérale ; les maladies inflammatoires de l'intestin, telles que la maladie inflammatoire chronique de l'intestin (MICI), le syndrome du côlon irritable (IBS), la maladie de Crohn, la colite ulcéreuse, l'ulcère rectal hémorragique, les lésions concomitantes de la maladie de Behçet, la pouchite, la rectocolite hémorragique, l'iléite et l'entérite ; les maladies inflammatoires aigües telle que la goutte et le choc septique, les lombalgies inflammatoires chroniques, les maladies inflammatoires de la peau ou dermite, telles que le psoriasis, la dermatite atopique, la rosacée, la couperose, l'acné, les verrues vulgaires, les maladies cutanée bulleuses, l'eczéma de contact, les cancers de la peau, les rougeurs, les érythèmes, les télangiectasies, les inflammations de la peau liées à une exposition aux UV, telles que la photo-irritation, la photo-sensibilisation, le photo vieillissement, la photo-carcinogénèse, les insuffisances veineuses lymphatiques ou syndrome de jambes lourdes ; l'arthrite, telles que l'ostéoarthrite, l'arthrite rhumatoïde, l'arthrite juvénile idiopathique et l'arthrite psoriasique ; la maladie pulmonaire obstructive chronique (MPOC) ; la maladie coeliaque ; la pancréatite chronique ; la thyroïdite de Hashimoto ; la cirrhose biliaire primitive ; la cholangite sclérosante ; l'hépatite auto-immune ; les vascularites comme les vascularites systémiques associées aux ANCA (anticorps anti-cytoplasme des neutrophiles); les spondylarthropathies ; la polychondrite chronique atrophiante ; les diabètes ; la sclérodermie et le cancer, la liste n'étant pas limitative.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une méthode de traitement préventif des maladies neurodégénératives amyloïdes, comprenant l'administration au patient d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment ou d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 telle que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment.
Avantageusement, les maladies neurodégénératives amyloïdes peuvent être choisies parmi : la maladie d'Alzheimer, les prions, la maladie de Parkinson, la Sclérose Amyotrophique Latérale, la liste n'étant pas limitative.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une méthode de traitement préventif des maladies inflammatoires aigües, comprenant l'administration au patient d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment ou d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 telle que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment.
Avantageusement, les maladies inflammatoires aigües peuvent être choisies parmi : la goutte et le choc septique, la liste n'étant pas limitative.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne l'utilisation d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif dans la fabrication d'un médicament destiné à la prévention des maladies inflammatoire. Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne l'utilisation d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment dans la fabrication d'un médicament destiné à la prévention des maladies inflammatoires.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans la prévention des maladies inflammatoires.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur de la protéine kinase ROCK tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans la prévention des maladies inflammatoires.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans la prévention des maladies inflammatoires.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'une combinaison comprenant un inhibiteur de la protéine kinase ROCK et un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans la prévention des maladies inflammatoires.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un agent dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans la prévention des maladies inflammatoires.
Un autre objet de l'invention concerne une méthode de traitement préventif des maladies auto immunes, comprenant l'administration au patient d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment ou d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 telle que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment.
Selon la présente invention, l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment est particulièrement efficace pour empêcher l'apparition de maladies auto-immunes, en inhibant la production de cytokines inflammatoires, induisant ainsi un effet protecteur contre les maladies auto-immunes.
Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la présente invention concerne une méthode de traitement préventif des maladies auto-immunes, comprenant l'administration au patient d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment ou d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 telle que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment et un second principe actif tel que défini précédemment.
Avantageusement, la maladie auto-immune peut être choisie parmi : le lupus érythémateux disséminé, le lupus érythémateux systémique, la sclérose en plaques, la polyarthrite rhumatoïde, le diabète insulino-dépendant, le purpura thrombotique thrombocytopénique (PTI), le rejet de greffes ou d'organes, la maladie du greffon contre l'hôte, les différents types de sclérose, le syndrome de Sjôgren primitif (ou syndrome de Gougerot-Sjôgren), les polyneuropathies auto-immunes comme la sclérose en plaques, le diabète de type I, les hépatites auto-immunes, la spondylarthrite ankylosante, le syndrome de Reiter, l'arthrite de goutte, la thyroïdite chronique d'Hashimoto (hypothyroïdie), la maladie d'Adisson, les hépatites auto-immunes, la maladie de Basedow (hyperthyroïdie), les cytopénies auto-immunes et autres complications hématologiques de l'adulte et de l'enfant, telles que les thrombopénies autoimmunes aiguës ou chroniques, les anémies hémolytiques auto immunes, la maladie hémolytique du nouveau-né (MHN), la maladie des agglutinines froides, le purpura thrombotique thrombocytopénique et l'hémophilie acquise auto-immune ; le syndrome de Goodpasture, les néphropathies extra-membraneuses, les affections cutanées bulleuses autoimmunes, la myasthénie réfractaire, les cryoglobulinémies mixtes, les myosites inflammatoires, les dermatomyosites et les affections systémiques auto-immunes de l'enfant incluant le syndrome des antiphospholipides, la maladie des tissus conjonctifs, les différents types de sclérose, l'inflammation auto-immune pulmonaire, le syndrome Guillain-Barre, la polyradiculonévrite inflammatoire demyélisante chronique (PDCI), la thyroïdite auto-immune, le mellitis, le myasthenia gravis, la maladie autoimmune inflammatoire de l'oeil, la neuromyélite optique (maladie de Dévie), les sclérodermies, le pemphigus, le diabète par insulinorésistance, la polymyosite, l'anémie de Biermer, la glomérulonéphrite, la maladie de Wegener, la maladie de Horton, la périarthrite noueuse et le syndrome de Churg et Strauss, la maladie de Still, la polychondrite atrophiante, la maladie de Behçet, la gammapathie monoclonale, la granulomatose de Wegener, le lupus, le rhumatisme psoriasique, la sarcoïdose, la colite collagène, la dermatite herpétiforme, la fièvre méditerranéenne familiale, la glomérulonéphrite à dépôts d'IgA, le syndrome myasthénique de Lambert-Eaton, l'ophtalmie sympathique, le syndrome de Fiessinger-Leroy-Reiter et le syndrome uvéo-méningo- encéphalique, la liste n'étant pas limitative.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une méthode de traitement préventif de la polyarthrite rhumatoïde, comprenant l'administration au patient d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment ou d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 telle que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une méthode de traitement préventif du lupus érythémateux disséminé, comprenant l'administration au patient d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment ou d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 telle que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne l'utilisation d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif dans la fabrication d'un médicament destiné à la prévention des maladies auto-immunes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne l'utilisation d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment dans la fabrication d'un médicament destiné à la prévention des maladies auto-immunes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans la prévention des maladies auto-immunes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur de la protéine kinase ROCK tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans la prévention des maladies auto-immunes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans la prévention des maladies auto-immunes. Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'une combinaison comprenant un inhibiteur de la protéine kinase ROCK et un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans la prévention des maladies auto-immunes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un agent dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans la prévention des maladies auto-immunes.
Un autre objet de l'invention concerne une méthode de traitement préventif des infections virales et/ou bactériennes, comprenant l'administration au patient d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment ou d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 telle que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment.
Selon la présente invention, l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 est particulièrement efficace pour empêcher l'apparition, le développement, l'amplification, la persistance d'infections virales et/ou bactériennes, en inhibant la production de cytokines inflammatoires, induisant ainsi un effet protecteur contre les infections virales et/ou bactériennes. Avantageusement, les inventeurs ont montré que les composés de formules (IV) et (VII) sont capables d'inhiber la production de cytokines inflammatoires par les cellules de l'immunité (PBMC et monocytes purifiés) de donneurs sains en réponse à la stimulation des récepteurs Toll-like receptor 2/4 par des agents bactériens (respectivement par l'acide lipotéichoïque / le LPS). Avantageusement, les inventeurs ont montré que les composés de formules (IV) et (VII) sont capables d'inhiber la production de cytokines inflammatoires par les cellules de l'immunité (PBMC et monocytes purifiés) de donneurs sains en réponse à la stimulation des récepteurs Toll-like receptor 7/8 (R848). Il a aussi été démontré que le composé de formule (IV) est capable d'inhiber la production de cytokines inflammatoires et des interférons en réponse au Virus de l'Immunodéficience Humaine (VIH) sur des cellules dendritiques plasmacytoides purifiés et sur des cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC).
Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la présente invention une méthode de traitement préventif des infections virales et/ou bactériennes, comprenant l'administration au patient d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment ou d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 telle que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment et un second principe actif tel que défini précédemment. Avantageusement, les infections virales peuvent être choisie parmi les infections dues au virus de la grippe, le Virus de l'Immunodéficience Humaine (VIH), au virus de l'herpès ou Herpès Simplex Virus (HSV), au coronavirus, au COVID-19, au virus de l'encéphalomyocardite, aux arbovirus, tels que ,1e Chikungunya, l'O'Nyong Nyong, le Ross River, le Sindbis, le Mayaro, le virus de la fièvre jaune, la dengue, l'encéphalite japonaise, le virus West Nile, les virus des encéphalites à tiques d'Eurasie tempérée, les virus de la maladie de la forêt de Kyasianur, la fièvre hémorragique d'Omsk les Bunyaviridae, le virus Bunyamwera, le virus de la Fièvre de la Vallée du Rift, le virus de la fièvre hémorragique de Crimée Congo, au virus des hépatites A, B et C et au virus influenza, la liste n'étant pas limitative.
Avantageusement, les infections bactériennes peuvent être choisie parmi : les infections dues à des bactéries à Gram positif, telles que les bactéries de genre Staphylococcus en particulier Staphylococcus aureus, et les bactéries de genre Enterococcus, en particulier Enterococcus faecalis ; les infections dues à des bactéries à Gram négatif, telles que les bactéries de genre Escherichia, en particulier Escherichia coli, les bactéries de genre Pseudomonas, en particulier Pseudomonas aeruginosa, et les bactéries de genre Acinetobacter, en particulier Acinetobacter baumanii, la liste n'étant pas limitative.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une méthode de traitement préventif des infections au coronavirus, comprenant l'administration au patient d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment ou d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 telle que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une méthode de traitement préventif des infections dues au virus de la grippe, comprenant l'administration au patient d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 ou d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une méthode de traitement préventif des infections au virus de l'immunodéficience humaine (VIH), comprenant l'administration au patient d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment ou d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 telle que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne l'utilisation d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif dans la fabrication d'un médicament destiné à la prévention des infections virales et/ou bactériennes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne l'utilisation d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment dans la fabrication d'un médicament destiné à la prévention des infections virales et/ou bactériennes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans la prévention des infections virales et/ou bactériennes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur de la protéine kinase ROCK tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans la prévention des infections virales et/ou bactériennes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans la prévention des infections virales et/ou bactériennes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'une combinaison comprenant un inhibiteur de la protéine kinase ROCK et un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans la prévention des infections virales et/ou bactériennes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un agent dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans la prévention des infections virales et/ou bactériennes. Un autre objet de l'invention concerne une méthode de traitement curatif des maladies inflammatoires chez des patients nécessitants une administration, comprenant l'administration auxdits patients d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment ou d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 telle que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment.
Au sens de la présente invention, le terme « traitement » ou « traitement curatif » est défini comme un traitement conduisant à une guérison ou un traitement qui allège, améliore et/ou élimine, réduit et/ou stabilise les symptômes d'une maladie ou la souffrance qu'elle provoque.
Avantageusement, les inventeurs ont montré que l'inhibition de la protéine kinase PDK1 par l'inhibiteur de formule (IV) permet de réduire drastiquement la production spontanée de cytokines inflammatoires par les monocytes provenant de patients souffrant d'Arthrite Juvénile Idiopathique.
Avantageusement, les inventeurs ont montré que l'inhibition de la protéine kinase PDK1 par l'inhibiteur de formule (IV) administré par voie orale à une dose de 10mg/kg de poids corporel chez les souris modèles pour la polyarthrite rhumatoïde bloquait la progression de cette pathologie en atténuant la production de cytokines inflammatoires.
Un autre objet de l'invention concerne une méthode de traitement curatif des maladies inflammatoires chez des patients nécessitants une administration, comprenant l'administration aux patients d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment ou d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 telle que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment et un second principe actif tel que défini précédemment.
Avantageusement, la maladie inflammatoire peut être choisie parmi : les maladies neurodégénératives amyloïdes, telles la maladie d'Alzheimer, les prions, la maladie de Parkinson, la Sclérose Amyotrophique Latérale ; les maladies inflammatoires de l'intestin, telles que la maladie inflammatoire chronique de l'intestin (MICI), le syndrome du côlon irritable (IBS), la maladie de Crohn, la colite ulcéreuse, l'ulcère rectal hémorragique, les lésions concomitantes de la maladie de Behçet, la pouchite, la rectocolite hémorragique, l'iléite et l'entérite ; les maladies inflammatoires aigues telle que la goutte et le choc septique, les lombalgies inflammatoires chroniques, les maladies inflammatoires de la peau ou dermite, telles que le psoriasis, la dermatite atopique, la rosacée, la couperose, l'acné, les verrues vulgaires, les maladies cutanée bulleuses, l'eczéma de contact, les cancers de la peau, les rougeurs, les érythèmes, les télangiectasies, les inflammations de la peau liées à une exposition aux UV, telles que la photo-irritation, la photo-sensibilisation, le photo vieillissement, la photo-carcinogénèse, les insuffisances veineuses lymphatiques ou syndrome de jambes lourdes ; l'arthrite, telles que l'ostéoarthrite, l'arthrite rhumatoïde, l'arthrite juvénile idiopathique et l'arthrite psoriasique ; la maladie pulmonaire obstructive chronique (MPOC) ; la maladie coeliaque ; la pancréatite chronique ; la thyroïdite de Hashimoto ; la cirrhose biliaire primitive ; la cholangite sclérosante ; l'hépatite auto-immune ; les vascularites comme les vascularites systémiques associées aux ANCA (anticorps anti-cytoplasme des neutrophiles); les spondylarthropathies ; la polychondrite chronique atrophiante ; les diabètes ; la sclérodermie et le cancer, la liste n'étant pas limitative.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une méthode de traitement curatif des maladies neurodégénératives amyloïdes, comprenant l'administration au patient d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment ou d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 telle que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment.
Avantageusement, les maladies neurodégénératives amyloïdes peuvent être choisies parmi : la maladie d'Alzheimer, les prions, la maladie de Parkinson, la Sclérose Amyotrophique Latérale, la liste n'étant pas limitative.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une méthode de traitement curatif des maladies inflammatoires aigües, comprenant l'administration au patient d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment ou d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 telle que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment.
Avantageusement, les maladies inflammatoires peuvent être choisies parmi : la goutte et le choc septique, la liste n'étant pas limitative.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne l'utilisation d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif dans la fabrication d'un médicament destiné au traitement des maladies inflammatoire.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne l'utilisation d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment dans la fabrication d'un médicament destiné au traitement des maladies inflammatoires.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans le traitement des maladies inflammatoires.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur de la protéine kinase ROCK tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans le traitement des maladies inflammatoires.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans le traitement des maladies inflammatoires.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'une combinaison comprenant un inhibiteur de la protéine kinase ROCK et un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans le traitement des maladies inflammatoires.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un agent dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans le traitement des maladies inflammatoires.
Un autre objet de l'invention concerne une méthode de traitement curatif des maladies auto immunes, comprenant l'administration au patient d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment ou d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 telle que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment.
Selon la présente invention, l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 est particulièrement efficace pour traiter les maladies auto-immunes, en inhibant la production de cytokines inflammatoires, induisant ainsi un effet curatif contre les maladies auto-immunes.
Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la présente invention concerne une méthode de traitement curatif des maladies auto-immunes, comprenant l'administration au patient d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment ou d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 telle que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment et un second principe actif tel que défini précédemment. Avantageusement, la maladie auto-immune peut être choisie parmi : le lupus érythémateux disséminé, le lupus érythémateux systémique, la sclérose en plaques, la polyarthrite rhumatoïde, le diabète insulino-dépendant, le purpura thrombotique thrombocytopénique (PTI), le rejet de greffes ou d'organes, la maladie du greffon contre l'hôte, les différents types de sclérose, le syndrome de Sjôgren primitif (ou syndrome de Gougerot-Sjôgren), les polyneuropathies auto-immunes comme la sclérose en plaques, le diabète de type I, les hépatites auto-immunes, la spondylarthrite ankylosante, le syndrome de Reiter, l'arthrite de goutte, la thyroïdite chronique d'Hashimoto (hypothyroïdie), la maladie d'Adisson, les hépatites auto-immunes, la maladie de Basedow (hyperthyroïdie), les cytopénies auto-immunes et autres complications hématologiques de l'adulte et de l'enfant, telles que les thrombopénies autoimmunes aiguës ou chroniques, les anémies hémolytiques auto immunes, la maladie hémolytique du nouveau-né (MHN), la maladie des agglutinines froides, le purpura thrombotique thrombocytopénique et l'hémophilie acquise auto-immune ; le syndrome de Goodpasture, les néphropathies extra-membraneuses, les affections cutanées bulleuses autoimmunes, la myasthénie réfractaire, les cryoglobulinémies mixtes, les myosites inflammatoires, les dermatomyosites et les affections systémiques auto-immunes de l'enfant incluant le syndrome des antiphospholipides, la maladie des tissus conjonctifs, les différents types de sclérose, l'inflammation auto-immune pulmonaire, le syndrome Guillain-Barre, la polyradiculonévrite inflammatoire demyélisante chronique (PDCI), la thyroïdite auto-immune, le mellitis, le myasthenia gravis, la maladie autoimmune inflammatoire de l'oeil, la neuromyélite optique (maladie de Dévie), les sclérodermies, le pemphigus, le diabète par insulinorésistance, la polymyosite, l'anémie de Biermer, la glomérulonéphrite, la maladie de Wegener, la maladie de Horton, la périarthrite noueuse et le syndrome de Churg et Strauss, la maladie de Still, la polychondrite atrophiante, la maladie de Behçet, la gammapathie monoclonale, la granulomatose de Wegener, le lupus, le rhumatisme psoriasique, la sarcoïdose, la colite collagène, la dermatite herpétiforme, la fièvre méditerranéenne familiale, la glomérulonéphrite à dépôts d'IgA, le syndrome myasthénique de Lambert-Eaton, l'ophtalmie sympathique, le syndrome de Fiessinger-Leroy-Reiter et le syndrome uvéo-méningo- encéphalique, la liste n'étant pas limitative.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une méthode de traitement curatif de la polyarthrite rhumatoïde, comprenant l'administration au patient d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment ou d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 telle que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une méthode de traitement curatif du lupus érythémateux disséminé, comprenant l'administration au patient d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment ou d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 telle que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne l'utilisation d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif dans la fabrication d'un médicament destiné au traitement des maladies auto-immunes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne l'utilisation d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment dans la fabrication d'un médicament destiné au traitement des maladies auto-immunes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans le traitement des maladies auto-immunes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur de la protéine kinase ROCK tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans le traitement des maladies auto-immunes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans le traitement des maladies auto-immunes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'une combinaison comprenant un inhibiteur de la protéine kinase ROCK et un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans le traitement des maladies auto-immunes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un agent dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans le traitement des maladies auto-immunes. Un autre objet de l'invention concerne une méthode de traitement curatif des infections virales et/ou bactériennes, comprenant l'administration au patient d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment ou d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 telle que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment.
Selon la présente invention, l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment est particulièrement efficace pour traiter les maladies auto-immunes, en inhibant la production de cytokines inflammatoires, induisant ainsi un effet curatif contre les infections virales et/ou bactériennes.
Dans un mode de réalisation particulier de l'invention, la présente invention une méthode de traitement curatif des infections virales et/ou bactériennes, comprenant l'administration au patient d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment ou d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 telle que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment et un second principe actif tel que défini précédemment.
Avantageusement, les infections virales peuvent être choisie parmi les infections dues au virus de la grippe, le Virus de l'Immunodéficience Humaine (VIH), au virus de l'herpès ou Herpès Simplex Virus (HSV), au coronavirus, au COVID-19, au virus de l'encéphalomyocardite, aux arbovirus, tels que ,1e Chikungunya, l'O'Nyong Nyong, le Ross River, le Sindbis, le Mayaro, le virus de la fièvre jaune, la dengue, l'encéphalite japonaise, le virus West Nile, les virus des encéphalites à tiques d'Eurasie tempérée, les virus de la maladie de la forêt de Kyasianur, la fièvre hémorragique d'Omsk les Bunyaviridae, le virus Bunyamwera, le virus de la Fièvre de la Vallée du Rift, le virus de la fièvre hémorragique de Crimée Congo, au virus des hépatites A, B et C et au virus influenza, la liste n'étant pas limitative.
Avantageusement, les infections bactériennes peuvent être choisie parmi : les infections dues à des bactéries à Gram positif, telles que les bactéries de genre Staphylococcus en particulier Staphylococcus aureus, et les bactéries de genre Enterococcus, en particulier Enterococcus faecalis ; les infections dues à des bactéries à Gram négatif, telles que les bactéries de genre Escherichia, en particulier Escherichia coli, les bactéries de genre Pseudomonas, en particulier Pseudomonas aeruginosa, et les bactéries de genre Acinetobacter, en particulier Acinetobacter baumanii, la liste n'étant pas limitative.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une méthode de traitement curatif des infections au coronavirus, comprenant l'administration au patient d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment ou d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 telle que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment. Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une méthode de traitement curatif des infections dues au virus de la grippe, comprenant l'administration au patient d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment ou d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 telle que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une méthode de traitement curatif des infections au virus de l'immunodéficience humaine (VIH), comprenant l'administration au patient d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment ou d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 telle que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne l'utilisation d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif dans la fabrication d'un médicament destiné au traitement des infections virales et/ou bactériennes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne l'utilisation d'une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment dans la fabrication d'un médicament destiné au traitement des infections virales et/ou bactériennes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans le traitement des infections virales et/ou bactériennes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur de la protéine kinase ROCK tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans le traitement des infections virales et/ou bactériennes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans le traitement des infections virales et/ou bactériennes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'une combinaison comprenant un inhibiteur de la protéine kinase ROCK et un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans le traitement des infections virales et/ou bactériennes.
Dans un mode de réalisation particulièrement avantageux, la présente invention concerne une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement efficace d'un agent dissociant le complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 tel que défini précédemment en tant que principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable tel que défini précédemment pour son utilisation dans le traitement des infections virales et/ou bactériennes.
Figures
Figure 1 : La figure 1 montre le blocage par un inhibiteur de la protéine kinase ROCK de formule (VII) (appelé également Y-27632) de la production intracellulaire du TNFa sur des monocytes de donneurs sains en réponse à une stimulation des récepteurs Toll-like receptor TLR7/8 (Résiquimod-R848), résultats obtenus par cytométrie de flux.
Figure 2 : La figure 2 montre le blocage par un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (appelé également BX912) de la production intracellulaire du TNFa sur des monocytes de donneurs sains en réponse à une stimulation des récepteurs Toll-like receptor TLR7/8 (Résiquimod-R848), résultats obtenus par cytométrie de flux.
Figure 3 : La figure 3 montre le blocage par un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (appelé également BX912) de la sécrétion des cytokines inflammatoires et des interférons sur des cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC) de donneurs sains en réponse à une stimulation des récepteurs Toll-like receptor TLR7/8. Résultats obtenus par LegendPlex.
Figure 4 : La figure 4 montre l'absence de toxicité de l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (appelé également BX912) sur des cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC) de donneurs sains.
Figure 5 : La figure 5 montre le blocage de la production intracellulaire du TNFa sur des monocytes de donneurs sains par un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (appelé également BX912) en réponse à une stimulation des récepteurs Toll-like receptor 4 (lipopolysaccharides-LPS), résultats obtenus par cytométrie de flux.
Figure 6 : La figure 6 montre le blocage de la production intracellulaire du TNFa sur des monocytes de donneurs sains par un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (appelé également BX912) en réponse à une stimulation des récepteurs Toll-like receptor 2 (acide lipoteichoïque-LTA), résultats obtenus par cytométrie de flux. Figure 7 : La figure 7 montre le blocage par un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (appelé également BX912) de la sécrétion des cytokines inflammatoires et des interférons sur des cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC) de donneurs sains en réponse à une stimulation des récepteurs Toll-like receptorTLR4. Résultats obtenus par LegendPlex.
Figure 8 : La figure 8 montre l'absence de toxicité de l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (appelé également BX912) sur des cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC) de donneurs sains.
Figure 9 : La figure 9 montre le blocage de la production intracellulaire d'ILi sur des monocytes de donneurs sains par un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (appelé également BX912) en réponse une activation de l'inflammasome par des cristaux d'acide urique (MSU) (modèle de la « goutte »), résultats obtenus par cytométrie de flux.
Figure 10 : La figure 10 montre le blocage de la production intracellulaire de TNFa sur des monocytes de donneurs sains par un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (appelé également BX912) en réponse une activation de l'inflammasome par des cristaux d'acide urique (MSU) (modèle de la « goutte »), résultats obtenus par cytométrie de flux.
Figure 11 : La figure 11 montre le blocage de la production intracellulaire d'IFNa sur des pDC de donneurs sains par un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (appelé également BX912) en réponse à une infection par le VIH, résultats obtenus par cytométrie de flux.
Figure 12 : La figure 12 montre le blocage de la production intracellulaire de TNFa sur des pDC de donneurs sains par un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (appelé également BX912) en réponse à une infection par le VIH, résultats obtenus par cytométrie de flux.
Figure 13 : La figure 13 montre le blocage par un inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (appelé également BX912) de la sécrétion des cytokines inflammatoires et des interférons sur des cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC) de donneurs sains en réponse à une infection par le VIH. Résultats obtenus par LegendPlex
Figure 14 : La figure 14 montre l'absence de toxicité de l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (appelé également BX912) sur des cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC) de donneurs sains.
Figure 15A : La figure 15A montre le blocage par l'inhibiteur de formule (IV) (appelé également BX912) de la sécrétion des interférons sur des cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC) de donneurs sains, de manière préventive, lh avant la stimulation par des récepteurs Toll-like TLR 7/8. Résultats obtenus avec la lignée rapportrice STING-37.
Figure 15B : La figure 15B montre le blocage par l'inhibiteur de formule (IV) (appelé également BX912) de la sécrétion des interférons sur des cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC) de donneurs sains, pendant la stimulation par des récepteurs Toll-like TLR 7/8. Résultats obtenus avec la lignée rapportrice STING-37.
Figure 15C : La figure 15C montre le blocage par l'inhibiteur de formule (IV) (appelé également BX912) de la sécrétion des interférons sur des cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC) de donneurs sains, de manière curative, lh après la stimulation par des récepteurs Toll-like TLR 7/8. Résultats obtenus avec la lignée rapportrice STING-37. Figure 16 : La figure 16 montre le blocage par l'inhibiteur de formule (IV) (appelé également BX912) de la production spontanée de TNFa sur des monocytes de patients atteints d'arthrite juvénile idiopathique. Résultats obtenus par dosage SIMOA (ELISA digital)
Figure 17 : La figure 17 représente l'effet de l'administration de véhicule, de prednisolone et de BX912 sur le poids de souris atteintes de la polyarthrite rhumatoïde humaine.
Figure 18 : La figure 18 représente l'effet de l'administration de véhicule, de prednisolone et de BX912 sur la progression de la polyarthrite rhumatoïde.
Figure 19 : La figure 19 représente l'effet de l'administration de véhicule, de prednisolone et de BX912 sur la teneur plasmatique terminale de TNFa.
Figure 20 : La figure 20 représente l'effet de l'administration de véhicule, de prednisolone et de BX912 sur la teneur plasmatique terminale de IFNy.
Figure 21 : La figure 21 représente l'effet de l'administration de véhicule, de prednisolone et de BX912 sur la teneur plasmatique terminale d'IL-6.
Figure 22 : La figure 22 représente l'effet de l'administration de véhicule, de prednisolone et de BX912 sur la teneur plasmatique terminale d'IL-Ib.
Figure 23 : La figure 23 représente l'effet de l'administration de véhicule, de prednisolone et de BX912 sur les paramètres histologiques de la polyarthrite rhumatoïde (inflammation, pannus, dommage au cartilage, résorption/dommages osseux).
Figure 24 : La figure 24 montre l'inhibition de l'activation des lymphocytes T par l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (appelé également BX912). Des lymphocytes T purifiés à partir de donneurs sains ont été traités pendant lh avec l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) à 1 et 5 mM puis activés avec des billes CD3/CD28 pendant 3 jours. Représentation graphique du pourcentage des lymphocytes T exprimant le CD69 (A) et représentation graphique de la MFI (B) (résultats obtenus par cytométrie de flux).
Figure 25 : La figure 25 montre l'inhibition de l'activation des lymphocytes B par l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (appelé également BX912). Des lymphocytes B purifiés à partir de donneurs sains ont été traités pendant lh avec l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) à 1 mM puis activés avec du CpG-A (lpg/ml) pendant 24h. Représentation graphique du pourcentage des lymphocytes T exprimant le CD69 (A) et représentation graphique de la MFI (B) (résultats obtenus par cytométrie de flux).
Figure 26 : La figure 26 montre l'effet immunosuppresseur de l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (appelé également BX912) dans des cellules immunitaires et non-immunitaires. (A) Des PBMC humains de donneurs sains ont été traités pendant lh avec l'inhibiteur de PDK1 (composé BX912) suivant les doses indiquées puis activés avec du cGAMP pendant 24h. Les interférons dans les surnageants de culture des PBMC ont été dosés avec la lignée rapportrice STING-37. (B) Des THP1- dual et (C) des HEK293 ont été traités pendant lh avec l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) suivant les doses indiquées puis activés avec du cGAMP pendant 24h. La production d'IFN a été mesurée via la luciférase. Figure 27 : La figure U montre l'effet immunosuppresseur de l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (appelé également BX912) dans des cellules immunitaires et non-immunitaires. (A) Des THPl-dual, (B) les cellules souches neuroectodermiques 1C11 et (C) les neurones sérotoninergiques 1C115 HT ont été traités pendant lh avec l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) suivant les doses indiquées puis activés avec du LPS pendant lh. Les ARNm codant TNFa, IL6 et MCP1 ont été quantifiés par RT-qPCR.
Exemples
Exemple 1 : Isolement et culture de leucocytes sanguins.
Les expériences in vitro ont été réalisées en utilisant des cellules mononucléaires du sang périphérique humain (PBMC) isolées par densité avec une centrifugation grâce à un milieu de séparation des leucocytes du sang périphérique (Technologies STEMCELL). Le sang des donneurs sains a été obtenu à l'« Etablissement Français du Sang » (convention # 07/CABAN EL/106; Paris, France). Les études sur du matériel de patients ont été approuvé par le comité de protection des personnes (ID-RCB/EUDRACT : 2014-A01017-40 and 2018-A01358-47). Les monocytes humains ont été purifiés par sélection positive avec des microbilles CD14 humaines (Miltenyi). Les cellules dendritiques plasmacytoides (pDC) ont été purifiés par sélection négative avec le Kit d'enrichissement « EasySep Human Plasmacytoid DC » (STEMCELL Technologies). Les cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC), monocytes et cellules dendritiques plasmacytoides (pDC) ont été cultivés dans du RPMI 1640 (Sigma) contenant 10% de sérum de veau foetal inactivé et 1 mM de glutamine (Hyclone, Logan, UT).
Exemple 2 : Effet préventif de l'inhibition de la protéine kinase PDK1 par l'inhibiteur de formule (IV) (appelé également BX912) ou de l'inhibition de la protéine kinase ROCK par l'inhibiteur de formule (VII) (appelé également Y-27632) en réponse à la simulation des récepteurs Toll 7/8
Stimulation cellulaire
Les PBMC ont été cultivés à 2.10e cellules/ml. Les monocytes ont été cultivés à l,106/ml. Les cellules ont ensuite été incubées avec de l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (appelé également BX912) ou l'inhibiteur de la protéine kinase ROCK de formule (VII) (appelé également Y27632) aux concentrations indiquées pendant lh avant stimulation. Elles ont été stimulées pendant 16h (cytométrie en flux) ou 24h (LegendPlex) avec l'agoniste TLR7/8 Resiquimod - R848 à 5 pg/ml.
Les cellules ont été récupérées pour la cytométrie en flux et les surnageants ont été collectés pour la détection des cytokines. Pour le marquage intracellulaire du TNFa et de l'IL-Ib, de la Brefeldin A (BFA) a été ajoutée aux cellules 30 minutes après la stimulation.
Cytométrie en flux
Les cellules ont été rincées dans du PBS puis incubées avec un marqueur de viabilité (Zombie Aqua, Biolegend) pendant 30 min à température ambiante. Après lavage, les cellules ont été remises en suspension dans du PBS contenant 2% de SVF et 2 mM d'EDTA puis marquées avec l'anticorps APC Vio770 anti-CD14 (clone REA599) de Miltenyi Biotec, utilisé au 1/100°. Pour le marquage intracellulaire du TNFa et IL-Ib, le kit « Inside Stain » (Miltenyi Biotec) a été utilisé selon le protocole du fabricant. Les cellules ont été fixées pendant 20 min à température ambiante avec 250 pL de la solution Inside Fix puis marquées dans 100 pL de la solution Inside Perm contenant l'anticorps PE anti TNFa (clone cA2, Milteniy Bioec) et/ou APC anti-IL-Ib (clone REA1172, Miltenyi Biotec) au 1/50° pendant 30 min à température ambiante. L'acquisition des données a été réalisée sur le cytomètre en flux Canto II en utilisant le logiciel Diva (BD Biosciences, San José, CA). Le logiciel Kaluza a été utilisé pour analyser les données.
Détection des cytokines
Un dosage des cytokines dans les surnageants des cultures cellulaires a été réalisé en utilisant le kit « LegendPlex Antivirus Human Panel » ou « legendplex human inflammation panel » (Biolegend, San Diego, USA) selon les instructions du fabricant.
Test de toxicité des composés sur les cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC)
Après 24h de culture cellulaire, la viabilité cellulaire a été déterminée en utilisant le réactif CelITiter- Glo (Promega), qui évalue la quantité d'ATP par luminescence en utilisant l'EnSpire.
Les résultats sont présentés dans les figures 1 à 4.
Résultats :
Il ressort que :
• l'inhibition de la protéine kinase ROCK par le composé de formule (VII) (également appelé Y27632) inhibe selon un effet dose, la production intracellulaire de cytokines inflammatoires (TNFa) par les monocytes de donneurs sains en réponse à la stimulation des récepteurs Toll- like receptor TLR 7/8 (voir Figure 1).
• l'inhibition de la protéine kinase PDK1 par le composé de formule (IV) (également appelé BX912) inhibe selon un effet dose, la production intracellulaire de cytokines inflammatoires (TNFa) par monocytes de donneurs sains en réponse à la stimulation des récepteurs Toll-like receptor TLR 7/8 (voir Figure 2).
• l'inhibition de la protéine kinase PDK1 par le composé de formule (IV) (également appelé BX912) inhibe la sécrétion des cytokines inflammatoires (IL-6, IL-Ib, TNFa, IP10, GM-CSF, IL- 10) et des interférons (IFNI1, IFNI2/3, IRNb, IFNg) par les cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC) de donneurs sains en réponse à la stimulation des récepteurs Toll-like receptor TLR 7/8 (voir Figure 3).
• le composé de formule (IV) (également appelé BX912) ne présente aucune toxicité sur les cellules de l'immunité (PBMC) de donneurs sains en réponse à la stimulation des récepteurs TLR 7/8 (voir Figure 4).
Ainsi, les composés de formule (VII) (également appelé Y27632) et de formule (IV) (également appelé BX912) ont un effet préventif sur la production de cytokines inflammatoires (TNFa) par les monocytes de donneurs sains en réponse à la stimulation des récepteurs Toll-like receptor TLR 7/8.
De plus, le composé de formule (IV) (également appelé BX912) est non toxique. Il a un effet préventif sur la sécrétion des cytokines inflammatoires (IL-6, IL-Ib, TNFa, IP10, GM-CSF, IL-10) et des interférons (IFNI1, I FN 12/3, IRNb, IFNg) par les cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC) de donneurs sains en réponse à la stimulation des récepteurs Toll-like receptor TLR 7/8. Exemple 3 : Effet préventif de l'inhibition de la protéine kinase PDK1 par l'inhibiteur de formule (IV) (appelé également BX912) en réponse à la simulation des récepteurs TLR2/4
Stimulation cellulaire
Les PBMC ont été cultivés à 2.10e cellules/ml. Les monocytes ont été cultivés à 1.106/ml. Les cellules ont ensuite été incubées avec de l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (appelé également BX912) ou l'inhibiteur de la protéine kinase ROCK de formule (VII) (appelé également Y27632) aux concentrations indiquées pendant lh avant stimulation. Elles ont été stimulées pendant 16h (cytométrie en flux) ou 24h (LegendPlex) respectivement avec l'agoniste TLR4 Lipopolysaccharide - LPS à 100 ng/ml et l'agoniste TLR2 acide lipotéichoïque - LTA à 1 pg/ml.
Les cellules ont été récupérées pour la cytométrie en flux et les surnageants ont été collectés pour la détection des cytokines. Pour le marquage intracellulaire du TNFa et de l'IL-Ib, de la Brefeldin A (BFA) a été ajoutée aux cellules 30 minutes après la stimulation.
Cytométrie en flux
Les cellules ont été rincées dans du PBS puis incubées avec un marqueur de viabilité (Zombie Aqua, Biolegend) pendant 30 min à température ambiante. Après lavage, les cellules ont été remises en suspension dans du PBS contenant 2% de SVF et 2 mM d'EDTA puis marquées avec l'anticorps APC Vio770 anti-CD14 (clone REA599) de Miltenyi Biotec, utilisé au 1/100°. Pour le marquage intracellulaire du TNFa et IL-Ib, le kit « Inside Stain » (Miltenyi Biotec) a été utilisé selon le protocole du fabricant. Les cellules ont été fixées pendant 20 min à température ambiante avec 250 pL de la solution Inside Fix puis marquées dans 100 pL de la solution Inside Perm contenant l'anticorps PE anti TNFa (clone cA2, Milteniy Bioec) et/ou APC anti-IL-Ib (clone REA1172, Miltenyi Biotec) au 1/50° pendant 30 min à température ambiante. L'acquisition des données a été réalisée sur le cytomètre en flux Canto II en utilisant le logiciel Diva (BD Biosciences, San José, CA). Le logiciel Kaluza a été utilisé pour analyser les données.
Détection des cytokines
Un dosage des cytokines dans les surnageants des cultures cellulaires a été réalisé en utilisant le kit « LegendPlex Antivirus Human Panel » ou « legendplex human inflammation panel » (Biolegend, San Diego, USA) selon les instructions du fabricant.
Test de toxicité des composés sur PBMC
Après 24h de culture cellulaire, la viabilité cellulaire a été déterminée en utilisant le réactif CelITiter- Glo (Promega), qui évalue la quantité d'ATP par luminescence en utilisant l'EnSpire.
Les résultats sont présentés dans les figures 5 à 8.
Résultats :
Il ressort que :
• l'inhibition de la protéine kinase PDK1 par le composé de formule (IV) (également appelé BX912) inhibe selon un effet dose, la production de cytokines inflammatoires (TNFa) par les monocytes de donneurs sains en réponse à la stimulation des récepteurs TLR4 (voir Figure 5). • l'inhibition de la protéine kinase PDK1 par le composé de formule (IV) (également appelé BX912) inhibe selon un effet dose, la production de cytokines inflammatoires (TNFa) par les monocytes de donneurs sains en réponse à la stimulation des récepteurs TLR2 (voir Figure 6).
• l'inhibition de la protéine kinase PDK1 par le composé de formule (IV) (également appelé BX912) inhibe la sécrétion des cytokines inflammatoires (IL-6, IL-Ib, TNFa, GM-CSF, IL-10) et des interférons (IFNI2/3, IRNb, IFNg) par les cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC) de donneurs sains en réponse à la stimulation des récepteurs TLR4 (voir Figure 7).
• le composé de formule (IV) (également appelé BX912) ne présente aucune toxicité sur les cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC) de donneurs sains en réponse à la stimulation des récepteurs TLR4 (voir Figure 8).
Ainsi, le composé de formule (IV) (également appelé BX912) a un effet préventif sur la production de cytokines inflammatoires (TNFa) par les monocytes et les cellules de l'immunité (PBMC) de donneurs sains en réponse à la stimulation des récepteurs TLR 4 et TLR 2.
De plus, le composé de formule (IV) (également appelé BX912) est non toxique. Il a un effet préventif sur la sécrétion des cytokines inflammatoires (IL-6, IL-Ib, TNFa, GM-CSF, IL-10) et des interférons (IFNI2/3, IRNb, IFNg) par les cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC) de donneurs sains en réponse à la stimulation des récepteurs TLR 4.
Exemple 4 : Effet préventif de l'inhibition de la protéine kinase PDK1 par l'inhibiteur de formule (IV) (appelé également BX912) en réponse à l'activation de l'inflammasome par des cristaux d'acide urique (mimétique de la « goutte »)
Stimulation cellulaire
Les monocytes ont été cultivés à 1.106/ml. Les cellules ont ensuite été incubées avec de l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (appelé également BX912) ou l'inhibiteur de la protéine kinase ROCK de formule (VII) (appelé également Y27632) aux concentrations indiquées pendant lh avant stimulation. Elles ont été stimulées pendant 16h (cytométrie en flux) avec des cristaux d'acide urique mimant la goutte (MSU) à 50 pg/ml.
Les cellules ont été récupérées pour la cytométrie en flux. Pour le marquage intracellulaire du TNFa et de l'IL-Ib, de la Brefeldin A (BFA) a été ajoutée aux cellules 30 minutes après la stimulation.
Cytométrie en flux
Les cellules ont été rincées dans du PBS puis incubées avec un marqueur de viabilité (Zombie Aqua, Biolegend) pendant 30 min à température ambiante. Après lavage, les cellules ont été remises en suspension dans du PBS contenant 2% de SVF et 2 mM d'EDTA puis marquées avec l'anticorps APC Vio770 anti-CD14 (clone REA599) de Miltenyi Biotec, utilisé au 1/100°. Pour le marquage intracellulaire du TNFa et IL-Ib, le kit « Inside Stain » (Miltenyi Biotec) a été utilisé selon le protocole du fabricant. Les cellules ont été fixées pendant 20 min à température ambiante avec 250 pL de la solution Inside Fix puis marquées dans 100 pL de la solution Inside Perm contenant l'anticorps PE anti TNFa (clone cA2, Milteniy Bioec) et/ou APC anti-IL-Ib (clone REA1172, Miltenyi Biotec) au 1/50° pendant 30 min à température ambiante. L'acquisition des données a été réalisée sur le cytomètre en flux Canto II en utilisant le logiciel Diva (BD Biosciences, San José, CA). Le logiciel Kaluza a été utilisé pour analyser les données.
Les résultats sont présentés dans les figures 9 à 10.
Résultats :
Il ressort que :
• l'inhibition de la protéine kinase PDK1 par le composé de formule (IV) (également appelé BX912) inhibe la production intracellulaire d'ILi par les monocytes de donneurs sains en réponse à une activation de l'inflammasome par des cristaux d'acide urique (modèle de la « goutte ») (voir Figure 9).
• l'inhibition de la protéine kinase PDK1 par le composé de formule (IV) (également appelé BX912) inhibe la production de TNFa par les monocytes de donneurs sains en réponse à une activation de l'inflammasome par des cristaux d'acide urique (modèle de la « goutte ») (voir Figure 10).
Ainsi, le composé de formule (IV) (également appelé BX912) a un effet préventif sur la production intracellulaire d'ILlb et de TNFa sur des monocytes de donneurs sains en réponse une activation de l'inflammasome par des cristaux d'acide urique (modèle de la « goutte »).
Exemple 5 : Effet préventif de l'inhibition de la protéine kinase PDK1 par l'inhibiteur de formule (IV) (appelé également BX912) en réponse à une infection par le Virus de l'Immunodéficience Humaine (VIH).
Stimulation cellulaire
Les PBMC ont été cultivés à 2.10e cellules/ml. Les cellules dendritiques plasmacytoides ont été cultivées à 1.106/ml. Les cellules ont ensuite été incubées avec de l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (appelé également BX912) ou l'inhibiteur de la protéine kinase ROCK de formule (VII) (appelé également Y27632) aux concentrations indiquées pendant lh avant stimulation. Elles ont été stimulées pendant 16h (cytométrie en flux) ou 24h (LegendPlex) avec de l'aldrithiol-2 inactivé (AT-2) VIH-1MN, spécifique du corécepteur CXCR4.
Les cellules ont été récupérées pour la cytométrie en flux et les surnageants ont été collectés pour la détection des cytokines. Pour le marquage intracellulaire du TNFa et de l'IFNa, de la Brefeldin A (BFA) a été ajoutée aux cellules 30 minutes après la stimulation.
Cytométrie en flux
Les cellules ont été rincées dans du PBS puis incubées avec un marqueur de viabilité (Zombie Aqua, Biolegend) pendant 30 min à température ambiante. Après lavage, les cellules ont été remises en suspension dans du PBS contenant 2% de SVF et 2 mM d'EDTA puis marquées avec l'anticorps APC Vio770 anti-CD14 (clone REA599) de Miltenyi Biotec, utilisé au 1/100°. Pour le marquage intracellulaire du TNF0 et IFN0, le kit « Inside Stain » (Miltenyi Biotec) a été utilisé selon le protocole du fabricant. Les cellules ont été fixées pendant 20 min à température ambiante avec 250 pL de la solution Inside Fix puis marquées dans 100 pL de la solution Inside Perm contenant l'anticorps APC anti TNFa (Milteniy Bioec) et/ou PE anti-IFNEl (Miltenyi Biotec) au 1/50° pendant 30 min à température ambiante. L'acquisition des données a été réalisée sur le cytomètre en flux Canto II en utilisant le logiciel Diva (BD Biosciences, San José, CA). Le logiciel Kaluza a été utilisé pour analyser les données.Détection des cytokines
Un dosage des cytokines dans les surnageants des cultures cellulaires a été réalisé en utilisant le kit « LegenPIex Antivirus Human Panel » ou « legendplex human inflammation panel » (Biolegend, San Diego, USA) selon les instructions du fabricant.
Test de toxicité des composés sur PBMC
Après 24h de culture cellulaire, la viabilité cellulaire a été déterminée en utilisant le réactif CelITiter- Glo (Promega), qui évalue la quantité d'ATP par luminescence en utilisant l'EnSpire.
Les résultats sont présentés dans les figures 11 à 14.
Résultats :
Il ressort que :
• l'inhibition de la protéine kinase PDK1 par le composé de formule (IV) (également appelé BX912) inhibe la production intracellulaire d'interféron IFNa sur des cellules dendritiques plasmacytoides (pDC) de donneurs sains en réponse à une infection VIH (voir Figure 11).
• l'inhibition de la protéine kinase PDK1 par le composé de formule (IV) (également appelé BX912) inhibe la production de TNFa sur des cellules dendritiques plasmacytoides (pDC) de donneurs sains en réponse à une infection VIH (voir Figure 12).
• l'inhibition de la protéine kinase PDK1 par le composé de formule (IV) (également appelé BX912) inhibe la sécrétion des cytokines inflammatoires (IL-6, IL-Ib, TNFa, IP10) et des interférons (IFNa2, IFN , I FN 11) par les cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC) de donneurs sains en réponse à une infection VIH (voir Figure 13).
• le composé de formule (IV) (également appelé BX912) ne présente aucune toxicité sur les cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC) de donneurs sains infectées par le VIH (voir Figure 14).
Ainsi, le composé de formule (IV) (également appelé BX912) a un effet préventif sur la production intracellulaire d'interféron IFNa et de TNFa sur des cellules dendritiques plasmacytoides (pDC) de donneurs sains en réponse à une infection VIH
De plus, le composé de formule (IV) (également appelé BX912) est non toxique. Il a un effet préventif sur la sécrétion des cytokines inflammatoires (IL-6, IL-Ib, TNFa, IP10) et des interférons (IFNa2, IRNb, I FN 11) par les cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC) de donneurs sains en réponse à une infection VIH.
Exemple 6 : Effet curatif de l'inhibition de la protéine kinase PDK1 par l'inhibiteur de formule (IV) (appelé également BX912) en réponse à la simulation des récepteurs TLR7/8
Stimulation cellulaire
Les PBMC ont été cultivés à 2.10e cellules/ml. Les cellules ont ensuite été incubées avec de l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (appelé également BX912 aux concentrations indiquées pendant lh avant stimulation, en même tempts que la stimulation ou lh après la stimulation. Les PBMC ont été stimulées pendant 24h avec l'agoniste TLR7/8 Resiquimod - R848 à 5 pg/ml.
Les surnageants ont été collectés pour la détection des cytokines.
Détection des cytokines
Le dosage des interférons sécrétés par les PBMC a été réalisé grâce à la lignée rapportrice STING-37. Il s'agit de cellules humaines HEK293 transfectées par un gène rapporteur exprimant la luciférase sous contrôle de l'élément de réponse ISRE. La luciférase produite a été révélé par le kit « Bright- Glo™ Luciférase Assay System » de chez promega.
Test de toxicité des composés sur les cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC)
Après 24h de culture cellulaire, la viabilité cellulaire a été déterminée en utilisant le réactif CelITiter- Glo (Promega), qui évalue la quantité d'ATP par luminescence en utilisant l'EnSpire.
Les résultats sont présentés dans la figure 15.
Exemple 7 : Effet curatif de l'inhibition de la protéine kinase PDK1 par l'inhibiteur de formule (IV) (appelé également BX912) chez des patients atteints d'Arthrite Juvénile Idiopathique
Culture cellulaire
Les PBMC ont été cultivés à 2.10e cellules/ml. Les monocytes ont été cultivés à 1.106/ml. Les cellules ont ensuite été incubées avec de l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (appelé également BX912) pendant 24h. Les surnageants ont été collectés pour la détection des cytokines.
Détection des cytokines
Le dosage du TNFa sécrété par les monocytes de patient atteint d'arthrite juvénile idiopathique a été réalisé par SIMOA (ELISA digital)
Les résultats sont présentés dans la figure 16.
Résultats :
Il ressort que :
• l'inhibition de la protéine kinase PDK1 par le composé de formule (IV) (également appelé BX912) inhibe la production spontanée de TNFa sur des monocytes de patients atteints d'arthrite juvénile idiopathique (figure 16).
L'inhibition de PDK1 par BX912 permet de réduire drastiquement la production spontanée de cytokines inflammatoires par les monocytes provenant de patients souffrant d'Arthrite Juvénile Idiopathique. Ceci indique que le composé de formule (IV) (également appelé BX912) peut être utilisé en curatif chez patients souffrant d'une auto-inflammation chronique (maladie auto inflammatoire, maladies auto-immunes, interféronopathies).
Exemple 8 : Évaluation de l'efficacité de l'inhibiteur de formule (IV) (appelé également BX912) dans un modèle murin de polyarthrite rhumatoïde humaine.
Protocole expérimental : Animaux :
Soixante-dix souris DBA/1J (Jackson Laboratories, R # 4379, PO 797038, mâle, 7-8 semaines) ont été reçues, examinées individuellement et logées dans neuf cages de dix souris chacune. Aucun signe clinique de maladie ou de détresse n'a été observé. Les souris ont été placées en quarantaine avec des inspections quotidiennes et étiquetées à l'oreille (SOP 810) avec des numéros uniques à des fins d'identification.
Préparation d'une émulsion collagène/CFA
20 mg de collagène bovin de type II (Chondrex, Cat. 20021, lot 200078) ont été dissous dans 5 ml d'acide acétique 0,01 M par agitation pendant une nuit à 4-8 " C. 3 ml de collagène ont été émulsionnés avec 3 ml d'adjuvant complet de Freund (CFA, Chondrex, Inc., Cat. 7001, lot 180692, 4 mg/ml de Mycobacterium tuberculosis) sur un bain de glace en trois lots. La stabilité de l'émulsion a été testée en faisant flotter une goutte sur l'eau; l'émulsion ne s'est pas dispersée.
Expérimentation :
Au jour 0, les souris ont été pesées, et injectées par voie sous-cutanée (SC, SOP 1610) à la base de la queue avec 50 pl de l'émulsion collagène/CFA. Les souris ont été pesées chaque semaine et notées pour les signes d'arthrite par jour. Chaque patte a été notée et la somme des quatre scores a été enregistrée en tant qu'indicé arthritique (IA). L'IA maximale possible était de 16.
Les souris ont été réparties en cinq groupes de traitement, selon le tableau 1 ci-dessous.
Tableau 1 : Groupes de traitement
Les souris ont été pesées et évaluées pour les signes de maladie. Au jour 42, les souris des groupes 1 à 3 ont été anesthésiées (SOP 1810) et exsanguinées (SOP 1686) dans des tubes EDTA pré-refroidis (Becton Dickinson, Cat. 365974, lot 9266867, exp. 28/02/21). Le sang a été transformé en plasma (SOP 6200) qui a été stocké en quatre aliquotes de 55 pl chacun dans des tubes Eppendorf étiquetés à -80 ° C (SOP 7020). Les membres ont été individuellement prélevés dans 15 ml de formaline tamponnée neutre à 10% (Richard-Allan Scientific, Cat. 5701, lot 537633, exp. 05/2024). Les carcasses ont été éliminées de manière appropriée (SOP 1790).
Au jour 45, les souris du groupe 4 ont été anesthésiées et exsanguinées dans des tubes EDTA pré refroidis. Le sang a été transformé en plasma qui a été stocké en quatre aliquotes de 55 mI chacun dans des tubes Eppendorf étiquetés à -80 ° C. Les membres ont été individuellement prélevés dans 15 ml de formaline tamponnée neutre à 10%. Les carcasses ont été éliminées de manière appropriée.
Au jour 46, les souris du groupe 5 ont été anesthésiées et exsanguinées dans des tubes EDTA pré refroidis. Le sang a été transformé en plasma qui a été stocké en quatre aliquotes de 55 mI chacun dans des tubes Eppendorf étiquetés à -80 ° C. Les membres ont été individuellement prélevés dans 15 ml de formaline tamponnée neutre à 10%. Les carcasses ont été éliminées de manière appropriée.
Trois aliquotes de plasma ont été décongelées à température ambiante et testées par ELISA pour le TNFa (R&D Systems, Cat. MTA00B, lot P253770), IFNy (R&D Systems, Cat. MIF00, lot P247106) et IL-6 (R&D Systems, Cat. M6000B, lot P256377, exp. 20SEP21). Un aliquote de plasma a été décongelée à température ambiante et dosée par ELISA pour IL-Ib (R&D Systems, Cat. MLB00C, lot P260121).
Les membres représentatifs de chaque souris, conservés dans du formol tamponné neutre à 10%, ont été soumis pour histopathologie et traités en routine. Deux coupes par bloc ont été collectées à des profondeurs différentes afin de capturer les coupes appropriées du plus grand nombre d'articulations digitales et tarsiennes possibles; les profondeurs entre les sections variaient en fonction de la conformité et de l'épaisseur de la patte. Les deux coupes ont été appliquées sur une seule lame de verre et colorées avec du bleu de toluidine (TB). Les coupes histopathologiques ont été évaluées par un pathologiste vétérinaire certifié par le conseil d'administration, en utilisant la microscopie optique. Les lésions histologiques de toutes les articulations capturées ont été classées en fonction de leur gravité, selon les critères suivants ci-dessous. Chaque section a capturé différentes articulations dans la patte, de sorte que les deux sections ont été utilisées pour évaluer avec précision l'intégralité de l'échantillon.
Evaluation de l'inflammation
Evaluation du Pannus
Evaluation du dommage au cartillage Evaluation de la Résorption / Dommages osseux
Les scores d'inflammation, de pannus, de lésions cartilagineuses et de résorption osseuse pour chaque patte ont été additionnés pour obtenir un score total d'arthrite (intervalle de 0 à 20).
Les résultats sont présentés aux Figures 17 à 23.
Conclusions:
Développement de la maladie:
La maladie a été induite par injection sous-cutanée de collagène bovin de type II émulsionné dans CFA le JOUR 0 suivi 21 jours plus tard par injection sous-cutanée de collagène bovin de type II émulsionné dans ICFA. Les premiers signes de maladie ont été enregistrés le JOUR 27. Les souris ont été recrutées dans le régime de traitement avec un score moyen de maladie de groupe (Al) de 2,8 (intervalle - 2-4). Une administration orale une fois par jour avec le véhicule (HCL 0,1 N, groupe 1) a été initiée le jour 28. A la fin de l'étude le jour 42, un score de maladie maximal de 12,8 a été enregistré. TNFa plasmatique terminal = 8,7 pg / ml, IL-Ib = 5,4 pg.ml, IL-6 = ~ 49 pg / ml et IFNy = ~ 9 pg / ml. Des lésions histologiques associées à l'arthrite induite par le collagène étaient présentes dans les articulations interphalangiennes (doigt) et tarsiennes (cheville). Les lésions consistaient en une inflammation subaiguë intra-articulaire et péri-articulaire / des tissus mous, un pannus, des lésions cartilagineuses et une résorption / lésion osseuse.
Effet du traitement thérapeutique avec la prednisolone (groupe 2):
L'administration orale quotidienne de 10 mg / kg à partir du JOUR 28 n'a eu aucun effet significatif sur le poids de la souris. Ce schéma de traitement a entraîné une réduction immédiate de la gravité des signes de la maladie, de sorte qu'à la fin de l'étude, une réduction significative de 95% de la gravité de la maladie a été observée. Ce schéma thérapeutique a entraîné une diminution significative du TNFa plasmatique (54%), de l'IL-6 (70%) et de l'IFNy (49%). Les scores moyens d'arthrite totaux étaient les plus bas chez les animaux traités à la prednisolone. Effet du traitement thérapeutique avec BX 912 (groupes 3-5):
Une administration orale quotidienne de BX 912 a entraîné une réduction dose-dépendante du taux de progression de la maladie et de la gravité de la maladie. À la dose la plus faible (0,5 mg / kg, groupe 3), aucun effet d'amélioration n'a été observé. À la dose médiane (2 mg / kg, groupe 4), une réduction significative du taux de progression de la maladie a abouti à une réduction significative de 56% de la gravité globale de la maladie à la fin de l'étude. À la dose la plus élevée (10 mg / kg, groupe 5), la progression de la maladie a été stoppée, entraînant une réduction significative de 82% de la gravité globale de la maladie à la fin de l'étude, ce qui était associé à une réduction significative des taux plasmatiques terminaux d'IL-Ib (37 %) et IL-6 (62%). Le traitement avec les doses moyennes (2 mg / kg; groupe 4) et élevées (10 mg / kg; groupe 5) de BX 912 a entraîné des réductions similaires marquées des scores moyens d'arthrite somme par rapport au véhicule témoin (groupe 1); le traitement avec la faible dose (0,5 mg / kg; groupe 3) a entraîné de légères réductions par rapport au véhicule témoin. Les réductions observées avec les traitements BX 912 à dose moyenne et élevée (groupes 4 et 5, respectivement) n'ont pas tout à fait atteint le degré d'efficacité observé avec le traitement à la prednisolone (groupe 2), mais les réductions avec ces schémas thérapeutiques étaient encore substantielles. Des tendances globales similaires ont été observées avec les composantes histopathologiques individuelles du score total.
Exemple 9 : Effet de l'inhibition de la protéine kinase PDK1 par l'inhibiteur de formule (IV) (appelé également BX912) sur les cellules de l'immunité (lymphocytes T et lymphocytes B)
Isolement et culture de leucocytes humains.
Les expériences in vitro ont été réalisées en utilisant des cellules mononucléaires du sang périphérique humain (PBMC) isolées par densité avec une centrifugation grâce à un milieu de séparation des leucocytes du sang périphérique (Technologies STEMCELL). Le sang des donneurs sains a été obtenu à l'« Etablissement Français du Sang » (convention # 07/CABAN EL/106; Paris, France). Les études sur du matériel de patients ont été approuvé par le comité de protection des personnes (ID-RCB/EUDRACT : 2014-A01017-40 and 2018-A01358-47). Les Lymphocytes T ont été purifiés par sélection négative en utilisant le « Pan T Cell Isolation Kit » de chez Miltenyi. Les Lymphocytes B ont été purifiés par sélection négative en utilisant le « Pan B Cell Isolation Kit » de chez Miltenyi. Les lymphocytes T et les lymphocytes B ont été cultivés dans du RPMI 1640 (Sigma) contenant 10% de sérum de veau foetal inactivé et 1 mM de glutamine (Hyclone, Logan, UT).
Stimulation cellulaire
Les lymphocytes T et les lymphocytes B ont été cultivés à 1.106/ml. Les cellules ont ensuite été incubées avec l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (appelé également BX912) aux concentrations indiquées pendant lh avant stimulation. Les lymphocytes T ont été stimulés pendant 3 jours avec les billes du kit « Dynabeads human T activator CD3/CD28 » de chez ThermoFisher scientific en suivant leurs instructions. Les cellules ont été récupérées pour la cytométrie en flux. Les Lymphocytes B ont été stimulés pendant 24h avec du CpG-A à 1 pg.ml. Les cellules ont été récupérées pour la cytométrie en flux.
Cytométrie en flux
Les cellules ont été rincées dans du PBS puis incubées avec un marqueur de viabilité (Zombie Aqua, Biolegend) pendant 30 min à température ambiante. Après lavage, les cellules ont été remises en suspension dans du PBS contenant 2% de SVF et 2 mM d'EDTA. Pour les lymphocytes T, les cellules ont été mis en suspension dans du PBS contenant 2% de SVF et 2 mM d'EDTA puis marquées avec l'anticorps PE anti-CD69 et APC anti-CD3 de Miltenyi Biotec, utilisé au 1/100°. Après 30 min d'incubation, les cellules ont été rincées au PBS 2% de SVF et 2 mM d'EDTA. L'acquisition des données a été réalisée sur le cytomètre en flux Attune NxT de chez Thermo Fisher. Le logiciel FlowJo a été utilisé pour analyser les données. Pour les lymphocytes B, les cellules ont été remises en suspension dans du PBS contenant 2% de SVF et 2 mM d'EDTA puis marquées avec l'anticorps PE anti-CD69 et PE.Vio770 anti-CD19 de Miltenyi Biotec, utilisé au 1/100°. Après 30 min d'incubation, les cellules ont été rincées au PBS 2% de SVF et 2 mM d'EDTA. L'acquisition des données a été réalisée sur le cytomètre en flux Attune NxT de chez Thermo Fisher. Le logiciel FlowJo a été utilisé pour analyser les données.
Les résultats sont présentés dans les figures 24 et 25.
Résultats :
Il ressort que : l'inhibition de la protéine kinase PDK1 par le composé de formule (IV) (également appelé BX912) inhibe, selon un effet dose, l'expression du marqueur CD69 induite par les billes CD3/CD28, selon un effet dose, à la surface des lymphocytes T, sans en affecter la viabilité (figure 24). l'inhibition de la protéine kinase PDK1 par le composé de formule (IV) (également appelé BX912) inhibe, selon un effet dose, l'expression du marqueur CD69 induite par induite par le CpG-A, ligand de TLR9, selon un effet dose, à la surface des lymphocytes B, sans en affecter la viabilité (figure 25).
Ainsi, le composé de formule (IV) (également appelé BX912) a un effet préventif sur l'activation des lymphocytes T et B. Le composé de formule (IV) (également appelé BX912) a un effet anti inflammatoire et anti-interféron sur les lymphocytes T et B. Le composé de formule (IV) (également appelé BX912) a un effet immunosuppresseur sur les lymphocytes T et B.
Exemple 10 : Effet anti-inflammatoire spécifique de l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (appelé également BX912) sur les cellules de l'immunité en comparaison avec les cellules non-immunitaires
Isolement et culture de leucocytes humains.
Les expériences in vitro ont été réalisées en utilisant des cellules mononucléaires du sang périphérique humain (PBMC) isolées par densité avec une centrifugation grâce à un milieu de séparation des leucocytes du sang périphérique (Technologies STEMCELL). Le sang des donneurs sains a été obtenu à l'« Etablissement Français du Sang » (convention # 07/CABAN EL/106; Paris, France). Les cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC) et les monocytes THPl-dual ont été cultivés dans du RPMI 1640 (Sigma) contenant 10% de sérum de veau foetal inactivé et 1 mM de glutamine (Hyclone, Logan, UT).
Culture des cellules souches neuronales 1C11 et différenciation en neurones sérotoninergiques 1C115 HT. Les cellules souches neuroectodermiques 1C11 ont été cultivées dans du DMEM-Glutamax (Life Sciences) contenant 10% de sérum de veau foetal (Biochrom). Les cellules 1C11 sont induites à se différencier en neurones sérotoninergiques 1C115 HT par addition de dibutyril-cyclic AMP (dbcAMP, ImM, Sigma). Le phénotype neuronal sérotoninergique complet est obtenu au bout de 4 jours de différenciation.
Culture des cellules embryonnaires humaines de rein (lignée HEK293)
Les HEK293 ont été cultivés dans du DMEM (sigma) contenant 10% de sérum de veau foetal inactivé et 1% pénicilline et streptomycine.
Stimulation cellulaire
Les PBMC ont été cultivés à 2.10e cellules/ml. Les lignées THPl-dual, HEK293, 1C11 et 1C115 HT ont été cultivés à 1.10e cellules/ml. Les cellules ont ensuite été incubées avec l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (appelé également BX912) aux concentrations indiquées pendant lh avant stimulation. Les PBMC et les HEK293 ont été stimulés pendant 24h avec l'agoniste STING, le cGAMP à 3 pg/ml. Les surnageants de cultures des PBMC ont été collectés pour la détection des cytokines. Les THPl-dual (invivogen) ont été stimulés pendant 24h avec l'agoniste de STING à 3 pg/ml ou l'agoniste TLR4 à 100 ng.ml. La réponse interférons des THPl-dual qui possèdent la construction ISRE-ISG-Luciférase a été révélé grâce à l'agent de détection Quanti-Luc en suivant les instructions du fournisseur. Les cellules souches 1C11 et les neurones sérotoninergiques 1C115 HT ont été activés pendant lh avec l'agoniste des TLR4 : le LPS à 100 ng.ml 1. Les cellules ont été lavées en PBS et lysées pour préparer les ARNm en vue d'une analyse par RT-qPCR.
Détection des cytokines
Le dosage des interférons sécrétés par les PBMC a été réalisé grâce à la lignée rapportrice STING-37. Il s'agit de cellules humaines HEK293 transfectées par un gène rapporteur exprimant la luciférase sous contrôle de l'élément de réponse ISRE. Les surnageants de culture des PBMC ont rajouté sur des cultures de STING-37 à 0,4x10e cellules/ml durant 24h. La luciférase produite a été révélée par le kit « Bright-GIo™ Luciférase Assay System » de chez promega.
Les expériences sur les cellules non-immunitaires HEK293 ont été réalisées sur les STING-37 (HEK293 contenant la construction ISRE-Luciférase). La production d'interférons a été révélée avec le kit « Bright-GIo™ Luciférase Assay System » de chez promega.
Test de toxicité
La toxicité cellulaire des composés a été mesurée en quantifiant l'ATP avec du CelITiter Glo (promega).
Détection des ARNm codant TNFa, IL6 et MCP1 par RT-qPCR
Les ARN totaux sont extraits des cellules avec le kit E.Z.N.A. Total RNA Kit 1 (Oméga Bio-tek) selon les instructions du fournisseur. La concentration en ARN est mesurée à l'aide d'un spectrophotomètre (Nanodrop ND-1000). Les ARN totaux sont rétro-transcrits en ADNc à l'aide du kit Prime Script RT Master Mix (Takara RR036A) selon les instructions du fournisseur.
La PCR quantitative en temps réel est réalisée selon les conditions suivantes: l'ADNc dilué au l/10ème est ajouté au mélange suivant: 3.8 pL d'H20, 0.1 pl amorces sens et antisens (10 mM) (Tableau 1), 5 mI du mélange Absolute qPCR SYBR green contenant la thermostart ADN polymerase, MgCI2, SYBR green et les dNTPs (Eurogentec). Les essais sont réalisés en triplicat dans une plaque 384 puits (ThermoScientific). L'amplification de l'ADN par PCR quantitative est réalisée dans l'appareil CFX384 (BioRad) avec le programme suivant : 3 min à 95°C / 5 sec à 95°C et 30 sec à 60°C répété 40 cycles / 2 min à 72°C et 30 sec à 95°C suivi d'une étape de dissociation qui permet de vérifier la spécificité du produit d'amplification. Les données d'amplification d'ADN sont analysées avec le logiciel Bio-Rad CFX Manager.
Tableau 2 : Séquences des amorces utilisées
Résultats :
L'activité anti-inflammatoire de l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (composé BX912) a été testée sur différents types cellulaires : des cellules mononuclées du sang périphérique (PBMC) isolées à partir du sang d'individus sains (figure 24A), la lignée cellulaire monocytaire humaine THP1 (figure 24B) et la lignée cellulaire non-immunitaire HEK293, une lignée cellulaire embryonnaire de rein humain (figure 24C). Ces cellules ont été stimulées par de la guanosine monophosphate-adénosine monophosphate cyclique (cGAMP), un agent mimant une infection virale en se fixant sur le senseur anti-viral STING. L'activation de cette voie induit la production d'interféron de type I. L'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (composé BX912) bloque la production d'interférons (IFN) induite par le cGAMP selon un effet dose dès ImM sans affecter la viabilité des PBMC (figure 24A) et des THPl-dual (figure 24B). Sur les cellules non immunitaires HEK293, l'inhibiteur de PDK1 à ImM ne bloque pas la production d"interféron induite par le ligand de STING (figure 24C). Ces résultats démontrent que l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (composé BX912) exerce un effet immunosuppresseur, qui, de manière dose dépendante, est spécifique des cellules immunitaires.
L'activité anti-inflammatoire de l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (composé BX912) a été testé sur différents types cellulaires qui ont été activés avec du LPS, ligand des récepteurs Toll-Like de type 4 (TLR4), un agent qui mime une infection bactérienne. La lignée cellulaire monocytaire humaine THPl-dual (figure 25A) ainsi qu'une lignée non-immunitaire, la lignée neuroectodermique 1C11. Les cellules souches neuroectodermiques 1C11 (figure 25B) et les neurones sérotoninergiques 1C115 HT issus de la différenciation des cellules souches 1C11 (figure 25C) ont été activés avec le ligand de TLR4. L'activation de cette voie induit la production de cytokines pro-inflammatoires dont le TNFa, IL6 et MCP1 en conséquence de la stimulation transcriptionnelle du gène codant TNFa, IL6 et MCP1. L'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (composé BX912) réduit la transcription du gène codant TNFa, IL6 et MCP1 induite par le LPS, selon un effet dose, dès 0,5 mM dans les monocytes THPl-dual (figure 25A). En revanche, l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (composé BX912) ne bloque pas la transcription des gènes codant le TNFa, IL6 et MCP1 induite par le LPS dans les cellules non-immunitaires, i.e., les cellules souches 1C11 (figure 25B) et les neurones sérotoninergiques 1C115 HT (figure 25C). Ces résultats confirment que l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 de formule (IV) (composé BX912) exerce un effet immunosuppresseur, qui, de manière dose dépendante, est spécifique des cellules immunitaires.

Claims

REVENDICATIONS
1. Inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 pour son utilisation en tant qu'agent anti-inflammatoire et anti-interféron, caractérisé en ce que ledit inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 est un inhibiteur de la protéine kinase PDK1, et en ce que l'inhibiteur de la protéine kinase PDK1 inhibe la sécrétion de cytokines inflammatoires et des interférons par une cellule de l'immunité, lors sa mise en contact avec ladite cellule de l'immunité.
2. Inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 pour son utilisation selon la revendication 1, dans laquelle l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 est choisi parmi les composés de formule (I) à (VI) : ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables, ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables, ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables,
ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables, ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables.
3. Inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 pour son utilisation selon l'une des revendications 1 à 2, dans laquelle l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 est le composé ou un sel pharmaceutique acceptable de celui-ci.
4. Composition pharmaceutique comprenant au moins un inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon l'une des revendications 1 à 3 comme principe actif et au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable et/ou support et/ou un diluant et/ou un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
5. Composition pharmaceutique selon la revendication 4, dans laquelle l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 est choisi parmi les composés de formule (I) à (VI) : ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables, ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables, ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables, ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables,
ou un de ses sels pharmaceutiques acceptables.
6. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 4 à 5, dans laquelle l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 en tant que principe actif administré au patient à une dose de 0,5 mg à 30 mg par kg de poids corporel.
7. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 4 à 6, dans laquelle l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 en tant que principe actif administré au patient à raison de 100 mg à 500 mg par jour.
8. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 4 à 7, caractérisée en ce que la composition pharmaceutique est administrée à raison d'une, deux, trois, quatre, cinq, six ou sept fois par semaine.
9. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 4 à 8, caractérisée en ce que la composition pharmaceutique comprend en outre au moins un second principe actif.
10. Composition pharmaceutique selon la revendication 9, caractérisée en ce que la composition pharmaceutique est adaptée pour une administration simultanée ou une administration séquentielle de l'inhibiteur du complexe de protéines kinases ROCK-PDK1 selon la revendication 5 et du second principe actif.
11. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 4 à 10, dans laquelle la composition pharmaceutique est sous une forme adaptée pour son administration par voie orale, parentérale ou topique.
12. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 4 à 11 pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement des maladies inflammatoires.
13. Composition pharmaceutique pour son utilisation selon la revendication 12, dans laquelle la maladie inflammatoire est choisie parmi : les maladies neurodégénératives amyloïdes, telles la maladie d'Alzheimer, les prions, la maladie de Parkinson, la Sclérose Amyotrophique Latérale ; les maladies inflammatoires de l'intestin, telles que la maladie inflammatoire chronique de l'intestin (MICI), le syndrome du côlon irritable (IBS), la maladie de Crohn, la colite ulcéreuse, l'ulcère rectal hémorragique, les lésions concomitantes de la maladie de Behçet, la pouchite, la rectocolite hémorragique, l'iléite et l'entérite ; les maladies inflammatoires aigües telle que la goutte et le choc septique, les lombalgies inflammatoires chroniques, les maladies inflammatoires de la peau ou dermite, telles que le psoriasis, la dermatite atopique, la rosacée, la couperose, l'acné, les verrues vulgaires, les maladies cutanée bulleuses, l'eczéma de contact, les cancers de la peau, les rougeurs, les érythèmes, les télangiectasies, les inflammations de la peau liées à une exposition aux UV, telles que la photo-irritation, la photo-sensibilisation, le photo-vieillissement, la photo-carcinogénèse, les insuffisances veineuses lymphatiques ou syndrome de jambes lourdes ; l'arthrite, telles que l'ostéoarthrite, l'arthrite rhumatoïde, l'arthrite juvénile idiopathique et l'arthrite psoriasique ; la maladie pulmonaire obstructive chronique (MPOC) ; la maladie coeliaque ; la pancréatite chronique ; la thyroïdite de Hashimoto ; la cirrhose biliaire primitive ; la cholangite sclérosante ; l'hépatite auto-immune ; les vascularites comme les vascularites systémiques associées aux ANCA (anticorps anti-cytoplasme des neutrophiles); les spondylarthropathies ; la polychondrite chronique atrophiante ; les diabètes ; la sclérodermie et le cancer.
14. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 4 à 11 pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement des infections virales et/ou bactériennes.
15. Composition pharmaceutique pour son utilisation selon la revendication 14, dans laquelle les infections virales sont choisies parmi : les infections dues au virus de la grippe, le Virus de l'Immunodéficience Humaine (VIH), au virus de l'herpès ou Herpès Simplex Virus (HSV), au coronavirus, au COVID-19, au virus de l'encéphalomyocardite, aux arbovirus, tels que ,1e Chikungunya, l'O'Nyong Nyong, le Ross River, le Sindbis, le Mayaro, le virus de la fièvre jaune, la dengue, l'encéphalite japonaise, le virus West Nile, les virus des encéphalites à tiques d'Eurasie tempérée, les virus de la maladie de la forêt de Kyasianur, la fièvre hémorragique d'Omsk les Bunyaviridae, le virus Bunyamwera, le virus de la Fièvre de la Vallée du Rift, le virus de la fièvre hémorragique de Crimée Congo, au virus des hépatites A, B et C et au virus influenza.
16. Composition pharmaceutique pour son utilisation selon la revendication 14, dans laquelle les infections bactériennes sont choisies parmi : les infections dues à des bactéries à Gram positif, telles que les bactéries de genre Staphylococcus en particulier Staphylococcus aureus, et les bactéries de genre Enterococcus, en particulier Enterococcus faecalis ; les infections dues à des bactéries à Gram négatif, telles que les bactéries de genre Escherichia, en particulier Escherichia coli, les bactéries de genre Pseudomonas, en particulier Pseudomonas aeruginosa, et les bactéries de genre Acinetobacter, en particulier Acinetobacter baumanii.
17. Composition pharmaceutique selon l'une des revendications 4 à 11 pour son utilisation dans la prévention et/ou le traitement des maladies auto-immunes.
18. Composition pharmaceutique pour son utilisation selon la revendication 17, dans laquelle la maladie auto-immune est choisie parmi : le lupus érythémateux disséminé, le lupus érythémateux systémique, la sclérose en plaques, la polyarthrite rhumatoïde, le diabète insulino-dépendant, le purpura thrombotique thrombocytopénique (PTI), le rejet de greffes ou d'organes, la maladie du greffon contre l'hôte, les différents types de sclérose, le syndrome de Sjôgren primitif (ou syndrome de Gougerot-Sjôgren), les polyneuropathies auto-immunes comme la sclérose en plaques, le diabète de type I, les hépatites auto immunes, la spondylarthrite ankylosante, le syndrome de Reiter, l'arthrite de goutte, la thyroïdite chronique d'Hashimoto (hypothyroïdie), la maladie d'Adisson, les hépatites auto- immunes, la maladie de Basedow (hyperthyroïdie), les cytopénies auto-immunes et autres complications hématologiques de l'adulte et de l'enfant, telles que les thrombopénies autoimmunes aiguës ou chroniques, les anémies hémolytiques auto-immunes, la maladie hémolytique du nouveau-né (MHN), la maladie des agglutinines froides, le purpura thrombotique thrombocytopénique et l'hémophilie acquise auto-immune ; le syndrome de Goodpasture, les néphropathies extra-membraneuses, les affections cutanées bulleuses autoimmunes, la myasthénie réfractaire, les cryoglobulinémies mixtes, les myosites inflammatoires, les dermatomyosites et les affections systémiques auto-immunes de l'enfant incluant le syndrome des antiphospholipides, la maladie des tissus conjonctifs, les différents types de sclérose, l'inflammation auto-immune pulmonaire, le syndrome Guillain-Barre, la polyradiculonévrite inflammatoire demyélisante chronique (PDCI), la thyroïdite auto immune, le mellitis, le myasthenia gravis, la maladie autoimmune inflammatoire de l'oeil, la neuromyélite optique (maladie de Dévie), les sclérodermies, le pemphigus, le diabète par insulinorésistance, la polymyosite, l'anémie de Biermer, la glomérulonéphrite, la maladie de Wegener, la maladie de Horton, la périarthrite noueuse et le syndrome de Churg et Strauss, la maladie de Still, la polychondrite atrophiante, la maladie de Behçet, la gammapathie monoclonale, la granulomatose de Wegener, le lupus, le rhumatisme psoriasique, la sarcoïdose, la colite collagène, la dermatite herpétiforme, la fièvre méditerranéenne familiale, la glomérulonéphrite à dépôts d'IgA, le syndrome myasthénique de Lambert-Eaton, l'ophtalmie sympathique, le syndrome de Fiessinger-Leroy-Reiter et le syndrome uvéo- méningo-encéphalique.
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