EP3969020A1 - Procédé d'isolation des molécules contenues dans les couches organo-minérales des coquilles de mollusques marins bivalves - Google Patents

Procédé d'isolation des molécules contenues dans les couches organo-minérales des coquilles de mollusques marins bivalves

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EP3969020A1
EP3969020A1 EP20740708.1A EP20740708A EP3969020A1 EP 3969020 A1 EP3969020 A1 EP 3969020A1 EP 20740708 A EP20740708 A EP 20740708A EP 3969020 A1 EP3969020 A1 EP 3969020A1
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EP
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aragonite
powder
calcite
calcitic
supercritical
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Pending
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EP20740708.1A
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Serge Camprasse
Georges Camprasse
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MBP Mauritius Ltd
Original Assignee
MBP Mauritius Ltd
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Publication date
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Definitions

  • the invention relates to the implementation of simultaneous and / or sequential steps aimed at separating, extracting and / or isolating all or part of the components contained in the internal aragonitic organo-mineral layer and in the calcitic organo-mineral layer outer shell of marine bivalve molluscs such as: Pinctada Maxima- Margaritifera- Martensi- Fucata, as well as Tridacnae Gigas- Maxima- Hippopus Hippopus- Derasa- Tevaroa- Crocea- Squamosa, Porcelanus.
  • the external calcitic organo-mineral layer of the shell of these same mollusks also consists of a mineral fraction, composed of prisms of calcite, another polymorphic form of calcium carbonate, crystallizing in the rhombohedral system and of a fraction organic also consisting of soluble and insoluble protein and non-protein components, pigments and metals.
  • the outer calcitic organo-mineral layer is richer than the inner aragonitic organo-mineral layer in melanin pigments and in metals associated with porphyrins and enzymes.
  • the active molecules contained in the organic fractions of the internal organo-mineral aragonitic and external calcitic layers of the shells of the molluscs mentioned above are protein and non-protein components extracted by cold hydrolysis. These components are soluble and insoluble biopolymers which group together proteins, polypeptides and polysaccharides, as well as bio-monomers, amino acids and monosaccharides. All of them have many biological and pharmacological, osteo-inducing and healing properties among others. These properties are due to the presence of glycoproteins related to growth factors.
  • the methods conventionally used to extract these molecules do not make it possible to extract all of the molecules, in particular those of low molecular weight having interesting properties, mainly antibiomimetics such as glycosamines, as well as lipids and polyunsaturated fatty acids, without forget about pigments, metalloenzymes and metalloporphyrins.
  • the organic fraction of the internal aragonite organo-mineral layer of the shell of the molluscs mentioned contains, inter alia, fatty acids and total lipids (palmitic acid, stearic acid); it is the richest natural marine biomaterial in polyunsaturated fatty acids, in proportions of 0.2 to 3%. They are mostly polar and non-polar compounds represented by hydroxylated and non-hydroxylated ceramides, sulfate and / or acetate cholesterols, triglycerides and omega 3s.
  • fatty acids have anti-inflammatory and immune properties, that they seem to play an inhibitory role in the development of certain tumor processes, in rheumatoid arthritis and in autoimmune diseases, and that these same lipids and fatty acids induce overexpression of filaggrin, a protein of the surface layer of the skin which has inhibitory properties of membrane transglutaminase (set of insoluble protein polymers involved in certain dermatoses), we can therefore understand their interest in the formulation of preparations for therapeutic purposes.
  • filaggrin a protein of the surface layer of the skin which has inhibitory properties of membrane transglutaminase (set of insoluble protein polymers involved in certain dermatoses)
  • a first object of the invention is a method of isolating molecules contained in an aragonitic organo-mineral layer and / or in a calcitic organo-mineral layer of a shell of a bivalve marine mollusk comprising the steps following:
  • saturated aragonite solution comprising an aragonite liquid phase and an aragonite solid phase
  • saturated calcite solution comprising a calcite liquid phase and a calcite solid phase
  • the term “aragonite powder treated with supercritical CO 2 ” is understood to mean a powder free of all or part of the soluble molecules contained in the aragonite organo-mineral layer.
  • calcite powder treated with supercritical CO 2 is understood to mean a powder free of all or part of the soluble molecules contained in the calcitic organo-mineral layer.
  • the bivalve marine mollusk can be chosen from Pinctada Maxima, Pinctada Margaritifera, Pinctada Martensi, Pinctada Fucata, Tridacnae Gigas, Tridacnae Maxima, Tridacnae Hippopus Hippopus, Tridacnae Derasa, Tridacnae Squadamosae Cridamosae, Cridamosae , Tridacnae Porcelanus and mixtures thereof.
  • the shell can undergo, before step (a) of grinding, a grinding step to obtain on the one hand the aragonite organo-mineral layer and on the other hand the organo-mineral layer calcitic, said grinding step being optionally preceded by a step of pretreatment of the shell chosen from cleaning, ultrasonic treatment, rinsing, sterilization, drying, immersion in an isotonic bath and their mixtures.
  • the calcitic organo-mineral layer obtained during the grinding step and / or used in step (a) of grinding can be pulverulent and have a particle size between 2 mm and 500 ⁇ m.
  • the grinding step (a) can be carried out by planetary grinding.
  • the planetary grinding of step (a) can comprise one or more cycles, in particular two cycles.
  • Each planetary grinding cycle can, for example, be carried out dry or wet, in particular the first grinding cycle can be dry and the second cycle can be wet.
  • the grinding step (a) can be carried out by:
  • the grinding of the crushed aragonite powder and / or of the crushed calcite powder can be carried out by planetary grinding as described above.
  • the crushed aragonite powder and / or the crushed calcite powder may have a particle size of between 10 ⁇ m and 2 mm.
  • the aragonite powder and / or the calcite powder obtained during step (a) of grinding may have a particle size of 50 nm to 300 ⁇ m.
  • the hot percolation step (b) can be carried out by wet sieving with a liquid whose temperature is greater than 30 ° C, in particular from 35 ° C to 75 ° C. , especially from 40 ° C to
  • the liquid used in the hot percolation step (b) can be an aqueous solution, in particular an aqueous solution comprising methanol, an aqueous solution comprising a urea solution or their mixture.
  • the aqueous solution can comprise from 1% to 10% of methanol, in particular from 2% to 7% of methanol, more particularly from 4.5% to 5.5% of methanol.
  • step (b) of hot percolation can be carried out with a sieve machine comprising:
  • a collection bottom equipped with a pipe which collects the saturated aragonite solution and / or the saturated calcite solution.
  • the sieve may include 6 sieves whose pore diameter is, in the direction of flow of the liquid, 315 miti, 250 miti, 125 miti, 45 miti, 20 miti and 10 miti .
  • the aragonite percolating powder and / or the calcitic percolating powder may have a particle size greater than the diameter of the sieve, the diameter of which is the smallest among the diameters of the sieves of the sieve, in particular a particle size greater than 10 ⁇ m, more particularly from 10 ⁇ m to 300 ⁇ m.
  • the aragonite liquid phase of the aragonite saturated solution may comprise water-soluble and fat-soluble molecules contained in the aragonite organo-mineral layer.
  • the aragonite solid phase of the aragonite saturated solution can comprise: - insoluble molecules contained in the aragonite organo-mineral layer, such as insoluble protein and non-protein molecules, and
  • the calcitic liquid phase of the saturated calcitic solution may comprise water-soluble and fat-soluble molecules contained in the calcitic organo-mineral layer.
  • the calcitic solid phase of the saturated calcitic solution can comprise:
  • insoluble molecules contained in the calcitic organo-mineral layer such as insoluble protein and non-protein molecules
  • the separation step (c) is carried out by centrifugation and the recovered liquid phase is called the supernatant and the recovered solid phase is called the pellet.
  • the powder of the aragonite base and / or the powder of the calcite base, in particular the powder of the aragonite base may undergo a spheronization step.
  • the aragonite pellet and / or the calcite pellet, in particular the calcite pellet can undergo step (d) of treatment with supercritical CO 2.
  • step (d) of treatment with supercritical CO2 can be implemented in an installation comprising:
  • the soluble molecules obtained during step (d) of treatment with supercritical CO 2 are at least those from soluble biopolymers, fatty acids, lipids, soluble pigments and their mixture.
  • the particle size of the aragonite powder treated with supercritical CO 2 is less than or equal to the particle size of the percolating aragonite powder, in particular equal to the particle size of the percolating aragonite powder.
  • the particle size of the calcite powder treated with supercritical CO 2 is less than or equal to the particle size of the percolation calcite powder, in particular equal to the particle size of the percolation calcite powder.
  • the isolation method may comprise, after step (c) of separation carried out by centrifugation, the following steps:
  • the filtration step (e) can be carried out on a bed of Celite or a membrane.
  • the aragonite concentrate and / or the calcite concentrate can comprise at least one metal chosen from Mn, Fe, Zn, Ba, Sr, Mg, Cu, Al, Ni, V, Cr, Mo and their mixtures.
  • step (g) of sonication can be implemented with a sonotrode at a frequency between 20 kHz and 200 kHz.
  • the method may comprise, after step (d) of treatment with supercritical CO 2, the following steps:
  • the insoluble molecules recovered during stages (h) of cold acid hydrolysis and (i) washing and super-centrifugation are at least those from insoluble biopolymers, insoluble organic pigments and their mixture.
  • step (h) of cold acid hydrolysis can be carried out:
  • aqueous solution comprising acetic acid and whose pH is acidic, in particular less than 6, more particularly less than 4.5.
  • the steps (h) of cold acid hydrolysis and (i) of washing and super-centrifugation can be carried out one or more times.
  • the insoluble molecules recovered can then be dried to obtain a dry extract of insoluble molecules.
  • step (a) of grinding is carried out separately on the aragonitic organo-mineral layer and on the calcitic organo-mineral layer to obtain the aragonite powder and the calcite powder.
  • step (b) is carried out separately on the aragonite powder and on the calcite powder to obtain:
  • step (c) of separation is carried out separately on the saturated aragonite solution and the saturated calcite solution in order to recover:
  • the separation step (c) is carried out by centrifugation and separately on the saturated aragonite solution and the saturated calcite solution to recover:
  • step (d) of treatment with supercritical CO2 is carried out separately on the percolating aragonite powder and on a mixture of the percolating calcite powder and the calcite base.
  • step (a) of grinding is carried out separately on the aragonitic organo-mineral layer and on the calcitic organo-mineral layer to obtain the aragonite powder and the calcite powder;
  • step (b) of hot percolation is carried out separately on the aragonite powder and on the calcite powder to obtain:
  • step (c) is carried out by centrifugation and separately on the saturated aragonite solution and the saturated calcite solution in order to recover:
  • step (d) of treatment with supercritical CO 2 is carried out separately on the aragonite percolation powder and on a mixture of the percolation calcite powder and the calcite base.
  • the filtration step (e) is carried out separately on the aragonite supernatant and on the calcite supernatant to obtain the filtered aragonite supernatant and the filtered calcite supernatant.
  • the concentration step (f) is carried out on a mixture of the filtered aragonite supernatant and of the filtered calcite supernatant to obtain a mixture of concentrates.
  • step (g) of sonication is carried out on a mixture of concentrates to obtain a mixture of colloidal emulsions.
  • step (h) of cold acid hydrolysis is carried out on a mixture of aragonite powder treated with supercritical CO2 and calcitic powder treated with supercritical CO2 to extract the insoluble molecules from the mixture of said powders.
  • step (i) of washing and super centrifugation is carried out to isolate and recover the insoluble molecules extracted from the mixture of aragonite powder treated with supercritical CO2 and calcite powder treated with CO2 during step (h) of cold acid hydrolysis.
  • - filtration step (e) is performed separately on the aragonite supernatant and on the filtered calcite supernatant to obtain the filtered aragonite supernatant and the filtered calcite supernatant;
  • - step (f) of concentration is carried out on a mixture of the filtered aragonite supernatant and of the filtered calcite supernatant to obtain a mixture of concentrates;
  • step (g) of sonication is carried out on a mixture of concentrates to obtain a mixture of colloidal emulsions
  • step (h) of cold acid hydrolysis is carried out on a mixture of aragonite powder treated with supercritical CO 2 and calcite powder treated with supercritical CO 2 in order to extract the insoluble molecules from the mixture of said powders;
  • step (i) of washing and super-centrifugation is carried out to isolate and recover the insoluble molecules extracted from the mixture of aragonitic powder treated with supercritical CO 2 and calcitic powder treated with CO 2 during step (h) d cold acid hydrolysis.
  • step (a) of grinding is carried out separately on the aragonitic organo-mineral layer and on the calcitic organo-mineral layer to obtain the aragonite powder and the calcite powder;
  • step (b) of hot percolation is carried out separately on the aragonite powder and on the calcite powder to obtain:
  • step (c) is carried out by centrifugation and separately on the saturated aragonite solution and the saturated calcite solution in order to recover:
  • step (d) of treatment with supercritical CO 2 is carried out separately on the aragonitic percolation powder and on a mixture of the calcitic percolation powder and the calcite base;
  • step (e) is carried out separately on the aragonite supernatant and on the filtered calcite supernatant to obtain the filtered aragonite supernatant and the filtered calcite supernatant;
  • step (f) of concentration is carried out on a mixture of the filtered aragonite supernatant and of the filtered calcite supernatant to obtain a mixture of concentrates;
  • step (g) of sonication is carried out on a mixture of concentrates to obtain a mixture of colloidal emulsions
  • step (h) of cold acid hydrolysis is carried out on a mixture of aragonite powder treated with supercritical CO 2 and calcite powder treated with supercritical CO 2 in order to extract the insoluble molecules from the mixture of said powders;
  • step (i) of washing and super-centrifugation is carried out to isolate and recover the insoluble molecules extracted from the mixture of aragonitic powder treated with supercritical CO 2 and calcitic powder treated with CO 2 during step (h) d cold acid hydrolysis.
  • the isolation method of the invention makes it possible to obtain:
  • the soluble molecules obtained during step (d) of treatment with supercritical CO 2 in particular at least those from soluble biopolymers, fatty acids, lipids, soluble pigments and their mixtures,
  • insoluble molecules recovered during stages (h) of cold acid hydrolysis and (i) of washing and super-centrifugation, in particular at least those from soluble biopolymers, fatty acids, lipids, soluble pigments and their mixtures.
  • the isolation method of the invention makes it possible to obtain:
  • the soluble molecules obtained during step (d) of treatment with supercritical CO2 in particular at least those from soluble biopolymers, fatty acids, lipids, soluble pigments and their mixtures, and
  • insoluble molecules recovered during stages (h) of cold acid hydrolysis and (i) of washing and super-centrifugation, in particular at least those from soluble biopolymers, fatty acids, lipids, soluble pigments and their mixtures.
  • the isolation method of the invention makes it possible to obtain the aragonite pellet instead of the aragonite solid phase and / or the calcite pellet at the instead of the calcitic solid phase, said pellets optionally being spheronized.
  • Another object of the invention is a composition comprising:
  • the soluble molecules obtained during step (d) of treatment with supercritical CO2 as described above in connection with the isolation process in particular at least those from soluble biopolymers, fatty acids, lipids, soluble pigments and their mixtures,
  • step (g) of sonication as described above in connection with the isolation process
  • insoluble molecules recovered during stages (h) of cold acid hydrolysis and (i) of washing and super-centrifugation, in particular at least those from soluble biopolymers, fatty acids, lipids, soluble pigments and their mixtures.
  • the composition can comprise:
  • aragonite solid phase recovered during separation step (c) as described above in connection with the isolation process, said aragonite solid phase being optionally spheronized, and at least one component chosen from:
  • the soluble molecules obtained during step (d) of treatment with supercritical CO2 as described above in connection with the isolation process in particular at least those from soluble biopolymers, fatty acids, lipids, soluble pigments and their mixtures,
  • insoluble molecules recovered during stages (h) of cold acid hydrolysis and (i) of washing and super-centrifugation, in particular at least those from soluble biopolymers, fatty acids, lipids, soluble pigments and their mixtures.
  • the composition can result from the mixture of these compounds.
  • the composition may further comprise a mixture of essential and vegetable oils.
  • the composition comprises:
  • step (g) of sonication as described above in connection with the isolation process.
  • the composition can comprise:
  • step (g) of sonication sonication as described above in connection with the isolation process.
  • the composition can comprise: the aragonite solid phase and / or the calcitic solid phase recovered during the separation step (c) as described above in connection with the process insulation, said solid phases optionally being spheronized,
  • the soluble molecules obtained during step (d) of treatment with supercritical CO2 as described above in connection with the isolation process in particular at least those from soluble biopolymers, fatty acids, lipids, soluble pigments and their mixtures, and
  • step (g) of sonication as described above in connection with the isolation process.
  • the composition can comprise:
  • the soluble molecules obtained during step (d) of treatment with supercritical CO2 as described above in connection with the isolation process in particular at least those from soluble biopolymers, fatty acids, lipids, soluble pigments and their mixtures, and
  • step (g) of sonication sonication as described above in connection with the isolation process.
  • the composition can comprise:
  • the soluble molecules obtained during step (d) of treatment with supercritical CO2 as described above in connection with the isolation process in particular at least those from soluble biopolymers, fatty acids, lipids, soluble pigments and their mixtures
  • step (g) of sonication as described above in connection with the isolation process
  • the composition can comprise:
  • the soluble molecules obtained during step (d) of treatment with supercritical CO2 as described above in connection with the isolation process in particular at least those from soluble biopolymers, fatty acids, lipids, soluble pigments and their mixtures,
  • insoluble molecules recovered during stages (h) of cold acid hydrolysis and (i) of washing and super-centrifugation, in particular at least those from soluble biopolymers, fatty acids, lipids, soluble pigments and their mixtures.
  • the aragonite solid phase recovered during step (c) of separation included in the composition which is the subject of the invention can be replaced by the aragonite pellet recovered during step (c) separation carried out by centrifugation, said aragonite pellet optionally being spheronized.
  • the calcitic solid phase recovered during step (c) of separation included in the composition which is the subject of the invention can be replaced by the calcite pellet recovered during step (c) separation carried out by centrifugation as described above in connection with the isolation process, said calcite pellet optionally being spheronized.
  • Another subject of the invention is a composition as described above for its use as a medicament.
  • Another object of the invention is a method of therapeutic treatment in which the composition as described above is administered to a subject in need thereof.
  • the therapeutic treatment is chosen from the treatment of a skin disease, the prevention of a skin disease.
  • the skin disease is chosen from dermatitis, dermatoses such as vitiligo and psoriasis.
  • the composition can be administered topically.
  • the composition can also be used as a bone substitute, cement, implant, osteosynthesis devices, medical device in therapy.
  • the bone substitute can be chosen from an extrudable bone substitute, in particular packaged in a vacuum syringe, a bone substitute with a porous collagen support, a bone substitute with a mineral frame of animal or human origin and theirs. mixtures.
  • the cement is chosen from stent sealing cement, injectable cement for minimally invasive surgery in vertebroplasty and kyphoplasty.
  • Another subject of the invention is a non-therapeutic use of a composition as described above.
  • Another object of the invention is a method of non-therapeutic treatment in which the composition as described above is applied to a person who needs it.
  • the composition can be used in cosmetics, in particular in the treatment of ptosis, dermocutaneous depressions, deep and superficial wrinkles, and prevention of body aging.
  • compositions as described above as a culture medium, in particular as a culture medium for the maturation and / or proliferation of stem cells or progenitor cells.
  • composition used as culture medium can comprise:
  • the soluble molecules obtained during step (d) of treatment with supercritical CO2 as described above in connection with the isolation process in particular at least those from soluble biopolymers, fatty acids, lipids, soluble pigments and their mixtures, and
  • step (g) of sonication as described above in connection with the isolation process.
  • composition used as culture medium can comprise:
  • the soluble molecules obtained during step (d) of treatment with supercritical CO2 as described above in connection with the isolation process in particular at least those from soluble biopolymers, fatty acids, lipids, soluble pigments and their mixtures, and
  • step (g) of sonication as described above in connection with the isolation process.
  • Another subject of the invention is another composition comprising:
  • the soluble molecules obtained during step (d) of treatment with supercritical CO2 as described above in connection with the isolation process in particular at least those from soluble biopolymers, fatty acids, lipids, soluble pigments and their mixtures,
  • step (g) of sonication as described above in connection with the isolation process.
  • the other composition can comprise:
  • the soluble molecules obtained during step (d) of treatment with CO2 supercritical as described above in connection with the isolation process in particular at least those from soluble biopolymers, fatty acids, lipids, soluble pigments and mixtures thereof,
  • step (g) of sonication sonication as described above in connection with the isolation process.
  • Another subject of the invention is the other composition as described above for its use as a medicament.
  • Another object of the invention is a method of therapeutic treatment in which the other composition as described above is administered to a subject in need thereof.
  • the therapeutic treatment is chosen from chronic autoimmune pathologies.
  • the chronic autoimmune pathologies can be rheumatoid arthritis, Crohn's disease, arteriosclerosis, type II diabetes, ankylosing spondylitis, ulcerative colitis, psoriasis and psoriatic arthritis. , especially psoriasis.
  • the other composition can be administered by intramuscular, intravenous and / or subcutaneous injection.
  • the invention consists of a method implementing a step (b) of hot percolation of the aragonitic and calcitic powders, ie of the internal aragonitic and external organo-mineral layers of the shells reduced to powder during a step ( a) grinding.
  • the saturated solution resulting from hot percolation step (b) can then undergo a separation step (c) carried out by centrifugation, then optionally a concentration step (f) and a sonication step (g). All or part of the powder which has been the subject of hot percolation step (b) undergoes a supercritical CO 2 treatment step (d).
  • the shells of the molluscs concerned after having been cleaned are subjected to an ultrasonic treatment for, for example, 30 minutes in a solution of network water at 50 ° C supplemented with a bactericidal, disinfectant, virucidal preparation of UC38 type .
  • the shells thus treated are then rinsed, for example, with mains water at a temperature of approximately 50 ° C then immersed in a solution of sodium hypochlorite stabilized at 2.5% for 30 minutes, rinsed with water network for 5 minutes. They are then immersed in a solution of surgical Calbenium® for 1 hour, dried by a flow of air, then conditioned in autoclavable bags.
  • the shells can then undergo one or more sterilization steps.
  • the sterilization step can consist of three successive “Medical prion” sterilizations at 132 ° C for 85 minutes each.
  • the sterilized shells can then be air-dried and set aside.
  • the shells can be immersed in an isotonic "marine plasma" bath.
  • This step can advantageously rebalance the initial water and mineral content of the aragonitic and calcitic organo-mineral layers of the shells, which would possibly have been modified by a prolonged stay of the shells outside the marine environment and / or by the successive treatments.
  • This immersion step can last 48 hours.
  • the mineral content in isotonic "marine plasma” can be as follows: either Na 12.88 mg / L, Br 66.3 mg / L, Zn 0.083 mg / L, K 493 mg / L, P 0.707 mg / l, Ca 442 mg / L, Mg 1.29 mg / L, Cu 0.007 mg / L.
  • the shells are then dried in a draft and then set aside.
  • the calcitic organo-mineral layer can undergo a grinding step.
  • This grinding step can be performed using a coarse-grained diamond grinding wheel, for example, under current filtered and refrigerated seawater at a temperature between 2 and 4 ° C.
  • a pulverulent grinding product is then obtained, with a particle size of 2 mm to 500 ⁇ m.
  • the grinding product is reserved as well as the aragonitic organo-mineral layer freed from the calcitic organo-mineral layer.
  • the aragonite organo-mineral layer can be crushed in a crusher with jaws and zirconium oxide walls of the Pulverisette 1 Premium Line type, FRITSCH, until a crushed aragonite powder is obtained, the particle size of which can be included. between 10 pm and 2 mm.
  • This crushed aragonite powder can then be ground by planetary grinding.
  • Planetary grinding can be carried out using a zirconia bowl and zirconia balls.
  • 25 zirconium beads 20 mm in diameter and 300 g of crushed aragonite powder are placed in two zirconium bowls with a capacity of 500 ml each, previously frozen for 24 hours at a temperature of minus 30 ° C.
  • the bowls are then introduced into the grinding chamber of a planetary mill of the 5 PL, FRITSCH Pulverisette type for 2 grinding cycles, at a speed of 400 rpm, of 5 minutes each.
  • the second grinding cycle can be carried out by wet process, for example by adding additives in the form of liquid, high boiling point and low vapor pressure, for example ppi water or alcohols such as isopropanol or ethanol.
  • the product of grinding the calcitic organo-mineral layer can undergo the same grinding step as that undergone by the organo-mineral layer.
  • aragonite at the end of which it is also possible to obtain a calcite powder with a particle size of between 50 nm and 300 ⁇ m.
  • the aragonite and calcite powders obtained by grinding can be sterilized with gamma radiation at 25 KGy before undergoing a hot percolation step.
  • Step (b) of hot percolation [0110] Step (b) of hot percolation.
  • Hot percolation is a method of filtration through a permeable medium which makes it possible to wet extract soluble components.
  • Hot percolation has been found to be advantageous for two reasons. On the one hand, the optical microscope observation of the aragonite powder after grinding, showed agglomerates of grains of different diameters stuck together by organic residues. On the other hand, hot percolation, for example in the presence of methanol, makes it possible to solubilize the lipids bound to the proteins of the organic fraction of the aragonite organo-mineral layer.
  • the wet sieving can be carried out with a Filtra type sieve machine, which comprises, from top to bottom:
  • the parameters of the sieve are set to the maximum amplitude, the vibration time for a period of approximately 5 minutes.
  • a defined quantity of aragonite powder from 500 g to 1 kg, can be placed in the upper sieve so as to produce a permeable filter of variable thickness; a tank overhanging the sieve is filled with water p.p.i at 45 ° C supplemented with 5% methanol in order to dissolve the lipids.
  • a solution of urea as chaotropic agent, at a concentration of 4 mol / L, in order to split the proteins of high molecular weight. .
  • the solution is sprayed onto the powder which behaves like a filtration membrane, the filtering power of which is optimized by the vibrations of the sieve by creating a vortex.
  • the grains of the aragonite powder of smaller diameters can be entrained by the ppi water solution from the first sieve, the diameter of which is the largest, towards the lower sieves. on which they are deposited according to their diameters, up to the last sieve with the smallest diameter.
  • the last sieve may have a diameter of 10 ⁇ m which retains grains with diameters greater than 10 ⁇ m, allowing grains of 10 ⁇ m and less to pass.
  • the product of the percolation is a saturated solution composed of a liquid phase and a solid phase, said liquid phase contains all or part of the water-soluble and liposoluble components of the aragonite organo-mineral layer, said solid phase contains the insoluble components of the aragonite organo-mineral layer and of the aragonite grains the diameter of which is less than or equal to the diameter of the last sieve, in particular from 50 nm to 10 ⁇ m.
  • Hot percolation step (b) also produces a percolating aragonite powder containing aragonite grains whose diameter may be greater than the diameter of the last sieve, in particular greater than 10 ⁇ m.
  • the hot percolation step (b) can be applied in an identical manner to the calcite powder resulting from the step (a) of grinding the calcitic organo-mineral layer.
  • Step (c) of separation In order to separate the liquid phase and the solid phase from the saturated solution resulting from the hot percolation step (b), a separation step (c) can be applied to the saturated solution to recover on the one hand the liquid phase and on the other hand the solid phase.
  • this separation step (c) can be carried out by centrifugation and the liquid phase recovered is called the supernatant and the solid phase recovered is called the pellet. Only this example is described here, but those skilled in the art will know how to implement separation techniques other than centrifugation to carry out this step (c).
  • the separation step (c) carried out by centrifugation can be carried out in a Lisa-type centrifuge, 2 liters, equipped with 4 buckets which can receive 4 vials with a unit capacity of 300 ml of solution.
  • the rotation speed can be increased to 18,000 rpm, the temperature fixed at 5 ° C and the rotation time fixed at 20 minutes.
  • the aragonite pellet and / or the calcite pellet can, for their part, be dried, for example in an oven at 25 ° C. for 12 hours.
  • the aragonite pellet and / or the calcite pellet can have a particle size between 10 ⁇ m and 50 nm and contain the insoluble protein and non-protein components.
  • the aragonite pellet can then be spheronized and reserved for sterilization with gamma radiation at 25 kGy.
  • the calcite base can, for its part, be reserved.
  • Step (c) of separation carried out by centrifugation can be carried out one or more times.
  • CO2 in the supercritical state has very specific properties: a coefficient of diffusivity, the possibility of extracting the soluble components rather of low molecular weight and nonpolar, as well as the materials. greasy, without generating polluting residues. It also has disinfectant properties vis-à-vis viruses and bacteria. In addition, the addition of co-solvents makes it possible to increase the solvent power thereof. It also has a low coefficient of viscosity and an absence of surface tension, which increases its penetrating power, facilitated by the physico-chemical nature of aragonite and calcite biocrystals, hydrophilic biomaterials, permeable to gases, including CO 2 , a fortiori when it is supercritical.
  • the installation of a reactor for treatment with supercritical CO 2 comprises 5 main elements:
  • Step (d) of treatment with supercritical CO 2 can be applied to the percolating aragonite powder according to the following procedure:
  • the aragonite percolation powder collected in the screens after hot percolation step (b) is placed.
  • the exchanger valve opens, releasing the supercritical CO 2 , it is injected into the reactor where the reaction for extracting the molecules of interest (soluble biopolymers, fatty acids, lipids, pigments) takes place.
  • the dissolved substances are recovered according to their nature in one or two extractors connected to the reactor, where the lowering of the temperature and the pressure cause them to precipitate in dry form.
  • the CO 2 becomes gaseous again when it leaves to be recovered, in order to be used for a new extraction cycle.
  • Step (d) of treatment with supercritical CO 2 can be applied in an identical manner to the calcite percolation powder and optionally to the calcite base.
  • Step (e) of filtration [0134]
  • the aragonite supernatant and / or the calcite supernatant can be filtered during a filtration step (f) to obtain a filtered aragonite supernatant and / or a filtered calcitic supernatant which can then be reserved.
  • filtration step (f) can be carried out on a Celite bed or a membrane.
  • the filtered aragonitic supernatant and / or the filtered calcitic supernatant can be concentrated, for example, in a Buchi-type Rotavapor at a temperature of 40 ° C, the speed of rotation of the heating flask set at 10 rpm and a vacuum of 23.33 mbar.
  • This concentration step (f) makes it possible to obtain an aragonite concentrate and / or a calcite concentrate, the concentration factor of which may be 1/4.
  • This concentrate may exhibit an allochromatic coloration varying from yellow to orange, from red to brown or gray, colors due to the presence of pigments originating from the metals which are contained therein either Mn, Fe, Zn, Ba, Sr, Mg, Cu, Al, Ni, V, Cr, Mo.
  • Step (g) of sonication [0140] Step (g) of sonication.
  • Sonication is a process using mechanical and acoustic waves in a liquid medium, for example using a sonotrode, at a frequency between 20 kHz and 200 kHz depending on the initial viscosity of the concentrate.
  • sonication makes it possible to trigger and accelerate the reactions and hence, to modify and potentiate the pharmacological and pharmacodynamic properties of the active soluble molecules.
  • cavitation causes the formation of highly reactive hydroxyl radicals, which results in an improvement in the yield of the reactions, a reduction in the reaction time of the molecules of interest between them and an exponential potentiation of the anti-radical properties of some of them.
  • the solution to be treated can be placed in an ultrasonic tank in which is immersed a sonotrode whose tip is located at least 1 cm from the surface and from the walls, in order to avoid the formation of electric arcs.
  • Sonication step (g) can be applied for 30 min at the end of which an increase in the viscosity of the concentrate can be observed.
  • the concentrate is then in the form of a stable colloidal emulsion thanks to the physicochemical modification and the arrangement of the collagen components.
  • the colloidal emulsion can then be sterilized either by microfiltration, sterilizing filtration, or by 25 kGy gamma radiation.
  • the product can be reserved at a temperature of 5 ° C.
  • Step (h) of cold acid hydrolysis and step (i) of washing and supercentrifugation [0146] Step (h) of cold acid hydrolysis and step (i) of washing and supercentrifugation.
  • the aragonite powder treated with supercritical CO 2 and the calcitic powder treated with supercritical CO 2 can be combined and placed in a hydrolysis reactor, refrigerated, of adequate capacity, filled with pyrogen-free water at 2 ° C.
  • An adjustment of the ionic strength can first be carried out in order to weaken any ionic interactions, mineral matrix / proteins.
  • the solution is added with 0.5 mol NaCl with stirring for 30 min, ie, depending on the ratio, 1 kg of powder per 25 liters of water and 5 liters of NaCl.
  • a first centrifugation is then carried out, for example at 18,000 G.
  • the pellet is taken up by a adequate amount of pyrogen-free water to which 80% acetic acid is added at the same ratio.
  • the whole is maintained at a temperature between 1 and 4 ° C. for a pH below 4.5, with constant stirring.
  • An emulsion is obtained which is diluted with pyrogen-free water to break it; the presence or absence of undissolved calcium carbonate is checked using oxalic acid. This is removed through gauze and by settling.
  • a suspension of insoluble proteins and other components is obtained, in particular insoluble pigments, which is centrifuged continuously, for example, at 18,000 G.
  • the centrifugation pellet is taken up with stirring in the same quantity of acetic acid diluted to 5%, intended to dissolve any residue of calcium carbonate.
  • the centrifugation pellet undergoes two successive washings in the same quantity of pyrogen-free water, the pH is adjusted to 7 by adding sodium hydroxide.
  • a colloidal emulsion obtained from step (g) of sonication composed of soluble polymers, soluble organic pigments (beta-carotene), metals, metalloproteins, metalloenzymes, growth factors, glycoproteins, glycosamines, lipids and polyunsaturated fatty acids,
  • EXAMPLE 1 Formulation of a sealing cement which can be used in arthroplasty
  • the cartilaginous coating of the articular surfaces wears out and the progressive deterioration reveals changes resulting in pain and functional impotence characterizing, for example, hip disease, which ultimately require the fitting of a prosthesis.
  • This generally consists of a hemispherical cup implanted at the acetabulum of the iliac bone, a rod implanted in the femoral shaft ending in a hemispherical head. These two parts are articulated by means of a polyethylene or ceramic insert.
  • the stem of the femoral prosthesis and the cup are usually either sealed with a surgical cement based on methyl methacrylate or impacted.
  • the use of the spheronized aragonite powder, with a particle size between 50 nm and 10 ⁇ m, is justified for the following reasons: the spheronization is intended initially to ensure better injectability and flowability of the cement and to promote the creation of an interconnected porosity with pores of 10 to 100 ⁇ m essential for osteoconduction.
  • Soluble and insoluble proteins which stimulate cell differentiation and proliferation as well as osteogenesis, play a capital role in building bone architecture.
  • the addition of the carbonated calcium carbonate confers on the whole plasticity, adhesiveness and malleability, favored by the spheronization of the aragonite grains, making handling and insertion easier.
  • the addition of a setting accelerator makes it possible to modify the preparation time, the initial setting time and the final setting time.
  • the colloidal emulsion obtained during sonication step (g), added to the mixture makes it possible to obtain a fluid, homogeneous and stable paste.
  • Cement was used for the experimental cementation of a stent stem in the femoral shaft of a calf.
  • Postoperative X-ray showed densification around the tail of the prosthesis, characteristic of the presence of calcium carbonate, the major component of the mineral fraction of the internal aragonite organo-mineral layer, densification which will gradually diminish during processing. cement in newly formed bone and merge with that of the recipient bone. The prosthesis then behaves like an impacted prosthesis.
  • EXAMPLE 2 Modelable bone substitute for the resumption of osteoarticular prostheses
  • the particle size of the aragonite powder is chosen to promote the creation of an open and interconnected porosity, conducive to rapid osteo-conduction, associated with the osteoinductive properties of the bone substitute, and also with its antibiomimetic properties.
  • the bone substitute was used after removal of the fractured orthopedic material, trimming of necrotic tissue and placement of an osteosynthesis plate, without antibiotic prophylaxis.
  • the antibiomimetic properties were confirmed by microbial load checks on the product according to the invention before use, which demonstrated an inhibition of microbial proliferation in particular on strains of Candida albicans, Aspergillus brasilensis, Staphilococus aureus , Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis.
  • the postoperative follow-up showed sedation of the infectious episode and the postoperative X-rays at 3 months demonstrated ad integrum restitution of the bone tissue.
  • the bone substitute was also used in a hospital environment in another critical clinical case of resumption of treatment of a comminuted fracture with small fragments of the lower third of the femur, 15 cm long, after failure of the orthopedic treatment by nail. intramedullary and two attempts at iliac transplants over a period of 2 years, with the following clinical picture: rhabdomyolysis, coma and vital prognosis.
  • the exemplified bone substitute was molded into a cylinder shape to the dimensions of the loss of substance and placed between the distal and proximal fragments.
  • the postoperative period at 4 months allowed unipodal support and almost normal walking at 7 months.
  • Radiological control showed reconstruction not only of the cortex of normal thickness but also the permeabilization of the medullary canal between the proximal and distal fragments of the restored femur.
  • the inventors also propose the use of the bone substitute in minimally invasive surgery, in kyphoplasty, in vertebroplasty, in the treatment of osteoporosis, fractures and vertebral compression.
  • the bone substitute of the example can also be used in maxillofacial surgery and in stomatology.
  • EXAMPLE 3 Topical preparation for the treatment of severe rebellious dermatoses
  • the formulation of the topical preparation of the example is:
  • a mixture containing 5 g of urea, 10 g of allantoin, 3 g of salicylic acid and 30 ml of colloidal emulsion is also prepared.
  • Vitiligo is a non-contagious, serious, difficult and long-to-treat dermatosis, with very significant psycho-social repercussions, which affects 0.5 to 2% of the world population and whose evolution is unpredictable. It results in depigmentation of the skin, either by diffuse plaques, by zones or generalized. It is manifested by the appearance of white patches due to the disappearance of melanocytes, cells that make melanin, the main pigment in the skin.
  • the therapeutic possibilities are limited. They range from UVB use, topical corticosteroids and biosimilars, to topical preparations, and as a last resort to surgical melanocyte grafts or thin skin grafts.
  • most of the treatments offered can have bothersome or serious side effects.
  • Vitiligo is often accompanied by an alteration and thinning of the skin coating, due to a fragility of the keratinocytes which are accidentally eliminated by microtrauma in the areas of friction.
  • melanocytes and hair bulbs, melanin reservoirs due to their maturation dysfunction, due to a problem of cohesion and attachment with the basement membrane and the adjacent keratinocytes.
  • the inventors propose a topical preparation intended to modify the metabolism of the area. dermocutaneous by inducing the maturation, recruitment, proliferation and differentiation of stem cells of all types, in particular melanocytes, keratinocytes and fibroblasts.
  • the formulation of the topical preparation of the example is as follows:
  • the components of the topical preparation are, among others, low molecular weight glycoproteins having BMP like properties, including TNEb, EGF, TGF, which have biological activities in the synthesis, proliferation, maturation of all the cell lines of the basal layer of the epidermis and more particularly on the melanocytes. It also naturally contains free pigments such as beta-carotene, a precursor of vitamin A, which plays an essential role in the synthesis of melanin; also melanin pigments associated with porphyrins, with enzymes, in the form of metalloporphyrins, metalloenzymes, which are involved in the coloring of biological tissues.
  • BMP like properties including TNEb, EGF, TGF, which have biological activities in the synthesis, proliferation, maturation of all the cell lines of the basal layer of the epidermis and more particularly on the melanocytes. It also naturally contains free pigments such as beta-carotene, a precursor of vitamin A, which plays an essential role in the synthesis of melanin; also
  • the mixture of essential and vegetable oils of the topical preparation of the example has the following formulation for 100ml:
  • the pharmacological properties and the interactions of the natural components of the topical preparation also have an action on the stimulation and the multiplication of the melanosomes as well as on the transfer of the matrix melanin present in the melanosomes towards the surrounding keratinocytes, which ensure the turn-over of the epidermal population as well as the regeneration of hair follicles, melanin reservoirs.
  • the soluble molecules of interest contained in the colloidal emulsion after sonication such as among others the proteins of low molecular weight related to growth factors or that cytokines, which otherwise have pleiotropic properties, inhibit lipid peroxidation by preventing the attachment of singlet oxygen (102) to the double bonds of polyunsaturated fatty acids.
  • This has the consequence of preventing the deterioration of these acids, proteins and biomolecules in general, deterioration responsible for the production of new free radicals harmful to the skin coating.
  • the topical preparation is recommended in the treatment of vitiligo na ⁇ ve to any prior treatment; however during old vitiligos or having been the subject of iterative treatments without visible results, which generally cause the migration of melanocytes and keratinocytes as well as the disappearance of the hair bulbs, it is possible, in order to cause a more active penetration and from the topical according to the invention to the basal layer, to combine the application of the latter with the use of an iontophoresis medical device whose principle is to promote the transcutaneous penetration of a product that can be ionized by the application to the skin of a galvanic current of low intensity using an electrode causing the migration of ions in the direction chosen according to the polarity of the electrode.
  • EXAMPLE 5 Cosmetic preparation for correcting wrinkles and dermal depressions.
  • the inventors propose the cosmetic use of the composition according to the invention for the correction of ptosis, skin depression, deep and superficial wrinkles, prevention of body aging.
  • composition of the example is as follows:
  • 68 ml of colloidal emulsion obtained during step (g) of sonication and 2 g of sodium carboxylmethyl cellulose In practice, a solution of sodium carboxylmethyl cellulose is first prepared: in a mixer, 68 ml of colloidal emulsion, 2 g of sodium carboxylmethyl cellulose are placed. The whole is stirred for 20 minutes and left in the cold at 5 ° C. for 12 hours until a gel forms.
  • composition is packaged in 1 ml syringes fitted with 0.4 mm / 20 mm screwed needles, then placed in double packaging before being sterilized with gamma radiation at 25 kGy.
  • composition has significant advantages through its physicochemical composition, the properties of its natural components which result in an absence of postoperative pain and inflammatory phenomena.
  • composition exemplified is subject to the local systemic regulation of the recipient and produces its orrective effects for a prolonged period.
  • Tanning is a reaction of defense and adaptation of the skin to the attacks of the sun and more precisely to UVA and UVB rays, by coloring the skin by an increased production of melanin by the melanocytes: this is tanning.
  • Excessive exposure to the sun causes the system to run away, and the resulting oxidative stress induces sunburn, allergies, pigment spots, burns, skin aging, not to mention the fact that repeated exposure and exaggerated eventually causes an alteration of microRNAs cells which can lead to their deterioration and the appearance of skin cancer.
  • composition of this example for the preparation of a sunscreen has the following formulation:
  • Excipient qsp per 100 ml 10 g of spheronized aragonite powder, 5 g of insoluble biopolymers, 1 g of soluble biopolymers, 20 ml of colloidal emulsion, 10 ml of concentrated Coco Nucifera solution, 0.05 ml of palmitate are prepared. ascorbyl. The whole is placed in a blender and mixed for 1 hour. The excipient is then added to this assembly: the whole is mixed for 1 hour until a cream is obtained.
  • the protection index noted under experimental conditions is between 10 and 40.
  • composition was tested on about ten individuals with fair skin ranging from red to blond, whose sun exposure always resulted in erythema, even burns and an absence of tanning.
  • the application of the composition of the example over a period of 10 days with summer sunshine enabled all of the individuals tested not only to avoid the occurrence of erythema or burns but also to ensure a uniform tan. resulting from stimulation of melanogenesis.
  • the hot percolation, centrifugation, concentration, sonication and supercritical CO2 treatment steps make it possible to extract active molecules such as cytokines and growth factors. These molecules have pleiotropic properties which determine several phenotypic characters and with local systemic activity, participating in tissue homeostatic regulation, in particular anti-inflammatory, on cytokines of inflammation such as TNFa, interleukins IL-23, IL-17 , common to many pathologies.
  • the injectable solution of this example which can be used in biotherapy by intramuscular, intravenous and / or subcutaneous injections, can be formulated as follows:
  • the soluble biopolymers are added to the colloidal emulsion and then placed in an oven at 25 ° C for 12 h, with stirring every 6 h until complete dissolution.
  • the assembly is then packaged in crimped ampoules which are sterilized with gamma radiation at 25 kGy.
  • EXAMPLE 8 Culture medium for the maturation and proliferation of animal and human stem cells and progenitor cells
  • Progenitor cells are an advanced stage of stem cells, although having limited dividing properties; they are the basis of tissue repair and, due to their reduced mobility, are found close to target tissues.
  • the inventors therefore also propose the preparation of culture media for the maturation and proliferation of animal and human stem cells and progenitor cells.
  • Such a medium comprises:
  • a culture medium is placed in a bioreactor, which can be aerobic or anaerobic, into which autologous progenitor cells, muscle cells or those originating from the periosteum, are introduced for the purpose of multiplying them.
  • a bioreactor which can be aerobic or anaerobic, into which autologous progenitor cells, muscle cells or those originating from the periosteum, are introduced for the purpose of multiplying them.
  • ci for an incubation period of 0 to 15 days.
  • the progenitor cells are obtained by biopsies, extracted by enzymatic digestion according to the usual method.
  • the preparation can be used in the donor subject for indications such as tissue regeneration of all types: major burns, extensive wounds, muscle destruction, extensive loss of substance, periodontal disease. The use can be made during a common surgical act, either by injection or in minimally invasive surgery.
  • EXAMPLE 9 Production of a capsule for "per os" administration
  • the aragonite powder, the soluble and insoluble biopolymers, as well as the acerola powder are mixed with the colloidal emulsion. The whole is mixed for 10 minutes, then placed in an oven at 30 ° C. for 3 hours until a paste with a viscosity of 10 2 Pa.S.

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Abstract

La présente invention est un procédé comprenant des étapes simultanées et/ou séquentielles visant à séparer, extraire et/ou isoler tout ou partie des composants contenus dans la couche organo-minérale aragonitique interne et dans la couche organo-minérale calcitique externe des coquilles de mollusques bivalves marins

Description

Description
Procédé d'isolation des molécules contenues dans les couches organo-minérales des coquilles de mollusques marins bivalves Domaine technique
[0001] L’invention concerne la mise en œuvre d'étapes simultanées et/ou séquentielles visant à séparer, extraire et/ou isoler tout ou partie des composants contenus dans la couche organo-minérale aragonitique interne et dans la couche organo-minérale calcitique externe des coquilles de mollusques bivalves marins tels que : Pinctada Maxima- Margaritifera- Martensi- Fucata, ainsi que Tridacnae Gigas- Maxima- Hippopus Hippopus- Derasa- Tevaroa- Crocea- Squamosa, Porcelanus. Les combinaisons et les réagencements entre eux de ces composants extraits, servent à la formulation de dispositifs médicaux et de préparations à visée thérapeutique utilisables en chirurgie orthopédique, en chirurgie mini-invasive, en stomatologie et chirurgie maxillo-faciale, en dermatologie, en médecine esthétique et en dermocosmétique.
Contexte de l'Invention
[0002] On trouve dans la structure et dans la composition physico-chimique de la couche organo-minérale aragonitique interne de la coquille des mollusques cités ci-dessus, deux fractions : une fraction minérale constituée de biocristaux d’aragonite, forme métastable, polymorphe, biogénique du carbonate de calcium CaC03, cristallisant dans le système orthorhombique, et une fraction organique constituée principalement de composants protéiniques et non protéiniques, de pigments (mélanine, bêtacarotène...), des acides gras et des lipides totaux, notamment polyinsaturés.
[0003] La couche organo-minérale calcitique externe de la coquille de ces mêmes mollusques est également constituée d’une fraction minérale, composée de prismes de calcite, autre forme polymorphe du carbonate de calcium, cristallisant dans le système rhomboédrique et d’une fraction organique constituée également de composants protéiniques et non protéiniques solubles et insolubles, de pigments et de métaux. La couche organo-minérale calcitique externe est plus riche que la couche organo-minérale aragonitique interne en pigments mélaniques et en métaux associés à des porphyrines et à des enzymes.
[0004] Généralement, les molécules actives contenues dans les fractions organiques des couches organo-minérales aragonitiques internes et calcitiques externes des coquilles des mollusques cités ci-dessus, sont des composants protéiniques et non protéiniques extraits par hydrolyse à froid. Ces composants sont des biopolymères solubles et insolubles qui regroupent les protéines, les polypeptides et polysaccharides, ainsi que les bio-monomères, les acides aminés et les monosaccharides. Tous ont de nombreuses propriétés biologiques et pharmacologiques, ostéo-inductrices et cicatrisantes entre autres. Ces propriétés sont dues à la présence de glycoprotéines apparentées aux facteurs de croissance. Toutefois les procédés classiquement employés pour extraire ces molécules ne permettent pas d’extraire la totalité des molécules, notamment celles de faible poids moléculaire ayant des propriétés intéressantes, principalement antibiomimétiques telles que les glycosamines, de même que les lipides et les acides gras polyinsaturés, sans oublier les pigments, les métalloenzymes et les métallo-porphyrines. On sait que la fraction organique de la couche organo- minérale aragonitique interne de la coquille des mollusques cités contient entre autres des acides gras et des lipides totaux (acide palmitique, acide stéarique) ; c’est le biomatériau naturel marin le plus riche en acides gras polyinsaturés, dans des proportions de 0,2 à 3%. Ce sont pour la plupart des composés polaires et apolaires représentés par des céramides hydroxylés et non hydroxylés, des cholestérols sulfate et/ou acétate, des triglycérides et des oméga 3.
[0005] Quand on sait que les acides gras ont des propriétés anti-inflammatoires, immunitaires, qu’ils semblent jouer un rôle inhibiteur dans le développement de certains processus tumoraux , dans la polyarthrite rhumatoïde et dans les maladies auto-immunes, et que ces mêmes lipides et acides gras induisent une surexpression de la filaggrine, protéine de la couche superficielle de la peau qui possède des propriétés inhibitrices de la transglutaminase membranaire (ensemble de polymères protéiniques insolubles impliqués dans certaines dermatoses), on comprend dès lors leur intérêt dans la formulation de préparations à visée thérapeutique.
Problème technique
[0006] C'est la raison pour laquelle il existe le besoin d'un procédé permettant d'optimiser l'isolation des molécules contenues dans les couches organo- minérales aragonitiques internes et calcitiques externes des coquilles de mollusques marins bivalves.
[0007] Il est du mérite des inventeurs d'avoir répondu à ce besoin grâce à un procédé pouvant mettre en œuvre une succession d'étapes mécaniques, acoustiques, physiques et chimiques afin d’optimiser la séparation, la purification, la réactivité physico-chimique des molécules contenues dans les couches organo- minérales aragonitiques internes et calcitiques externes des coquilles, et d’en potentialiser les propriétés.
Résumé
[0008] Ainsi un premier objet de l'invention est un procédé d'isolation des molécules contenues dans une couche organo-minérale aragonitique et/ou dans une couche organo-minérale calcitique d'une coquille d'un mollusque marin bivalve comprenant les étapes suivantes :
(a) Broyage de la couche organo-minérale aragonitique et/ou de la couche organo-minérale calcitique pour obtenir une poudre aragonitique et/ou une poudre calcitique ;
(b) Percolation à chaud de la poudre aragonitique et/ou de la poudre calcitique pour obtenir :
- d'une part une solution saturée aragonitique et/ou une solution saturée calcitique, ladite solution saturée aragonitique comprenant une phase liquide aragonitique et une phase solide aragonitique et ladite solution saturée calcitique comprenant une phase liquide calcitique et une phase solide calcitique, et
- d'autre part une poudre aragonitique de percolation et/ou une poudre calcitique de percolation ;
(c) Séparation de la solution saturée aragonitique et/ou de la solution saturée calcitique pour récupérer : - d'une part la phase liquide aragonitique et/ou la phase liquide calcitique, et
- d'autre part la phase solide aragonitique et/ou la phase solide calcitique ; et
(d) Traitement par CO2 supercritique de la poudre aragonitique de percolation et/ou de la poudre calcitique de percolation pour obtenir :
- d'une part une poudre aragonitique traitée par CO2 supercritique et/ou une poudre calcitique traitée par CO2 supercritique, et
- d'autre part tout ou partie des molécules solubles contenues dans la couche organo-minérale aragonitique et/ou dans la couche organo-minérale calcitique.
[0009] Au sens de la présente invention, on entend par "poudre aragonitique traitée par CO2 supercritique" une poudre débarrassée de tout ou partie des molécules solubles contenues dans la couche organo-minérale aragonitique.
[0010] Au sens de la présente invention, on entend par "poudre calcitique traitée par CO2 supercritique" une poudre débarrassée de tout ou partie des molécules solubles contenues dans la couche organo-minérale calcitique.
[0011] Selon un mode de réalisation, le mollusque marin bivalve peut être choisi parmi Pinctada Maxima, Pinctada Margaritifera, Pinctada Martensi, Pinctada Fucata, Tridacnae Gigas, Tridacnae Maxima, Tridacnae Hippopus Hippopus, Tridacnae Derasa, Tridacnae Tevaroa, Tridacnae Crocea, Tridacnae Squamosa, Tridacnae Porcelanus et leurs mélanges.
[0012] Selon un mode de réalisation, la coquille peut subir, avant l'étape (a) de broyage, une étape de meulage pour obtenir d'une part la couche organo-minérale aragonitique et d'autre part la couche organo-minérale calcitique, ladite étape de meulage étant précédée optionnellement d'une étape de prétraitement de la coquille choisie parmi un nettoyage, un traitement ultrasonique, un rinçage, une stérilisation, un séchage, une immersion dans un bain isotonique et leurs mélanges.
[0013] Selon un mode de réalisation, la couche organo-minérale calcitique obtenue lors de l'étape de meulage et/ou mise en œuvre dans l'étape (a) de broyage peut être pulvérulente et présenter une granulométrie comprise entre 2 mm et 500 pm.
[0014] Selon un mode de réalisation particulier, l'étape (a) de broyage peut être réalisée par broyage planétaire.
[0015] Selon un mode réalisation très particulier, le broyage planétaire de l'étape (a) peut comprendre un ou plusieurs cycles, en particulier deux cycles. Chaque cycle de broyage planétaire peut, par exemple, être réalisé par voie sèche ou voie humide, en particulier le premier cycle de broyage peut être réalisé par voie sèche et le deuxième cycle peut être réalisé par voie humide.
[0016] Selon un mode de réalisation, l'étape (a) de broyage peut être réalisée par :
- concassage de la couche organo-minérale aragonitique et/ou de la couche organo-minérale calcitique pour obtenir une poudre aragonitique concassée et/ou une poudre calcitique concassée, puis
- broyage de la poudre aragonitique concassée et/ou de la poudre calcitique concassée pour obtenir la poudre aragonitique et/ou la poudre calcitique.
[0017] Selon un mode de réalisation particulier, le broyage de la poudre aragonitique concassée et/ou de la poudre calcitique concassée peut être réalisé par le broyage planétaire tel que décrit ci-dessus.
[0018] Selon un mode de réalisation, la poudre aragonitique concassée et/ou la poudre calcitique concassée peuvent présenter une granulométrie comprise entre 10 pm et 2 mm.
[0019] Selon un mode de réalisation, la poudre aragonitique et/ou la poudre calcitique obtenues lors de l'étape (a) de broyage peuvent présenter une granulométrie de 50 nm à 300 pm.
[0020] Selon un mode de réalisation, l'étape (b) de percolation à chaud peut être réalisée par tamisage par voie humide avec un liquide dont la température est supérieure à 30°C, en particulier de 35°C à 75°C, tout particulièrement de 40°C à [0021] Selon un mode de réalisation, le liquide mis en œuvre dans l'étape (b) de percolation à chaud peut être une solution aqueuse, en particulier une solution aqueuse comprenant du méthanol, une solution aqueuse comprenant une solution d'urée ou leur mélange.
[0022] Selon un mode de réalisation particulier, la solution aqueuse peut comprendre de 1 % à 10% de méthanol, en particulier de 2% à 7% de méthanol, plus particulièrement de 4,5% à 5,5% de méthanol.
[0023] Selon un mode de réalisation particulier l'étape (b) de percolation à chaud peut être réalisée avec une tamiseuse comprenant :
- un couvercle équipé d’un orifice permettant de recevoir une canalisation pour l’arrivée du liquide,
- plusieurs tamis qui permettent de recueillir la poudre aragonitique de percolation et/ou la poudre calcitique de percolation, en particulier de 2 à 10 tamis, plus particulièrement de 5 à 7 tamis, plus particulièrement encore 6 tamis, et le diamètre des pores de deux tamis successifs dans le sens d'écoulement du liquide diminue,
- un fond de collecte équipé d’un conduit qui permet de recueillir la solution saturée aragonitique et/ou la solution saturée calcitique.
[0024] Selon un mode de réalisation très particulier, la tamiseuse peut comprendre 6 tamis dont le diamètre des pores est, dans le sens d'écoulement du liquide, 315 miti, 250 miti, 125 miti, 45 miti, 20 miti et 10 miti.
[0025] Selon un mode de réalisation, la poudre aragonitique de percolation et/ou la poudre calcitique de percolation peuvent présenter une granulométrie supérieure au diamètre du tamis dont le diamètre est le plus petit parmi les diamètres des tamis de la tamiseuse, en particulier une granulométrie supérieure à 10 miti, plus particulièrement de 10 pm à 300 miti.
[0026] Selon un mode de réalisation, la phase liquide aragonitique de la solution saturée aragonitique peut comprendre des molécules hydrosolubles et liposolubles contenues dans la couche organo-minérale aragonitique.
[0027] Selon un mode de réalisation, la phase solide aragonitique de la solution saturée aragonitique peut comprendre : - des molécules insolubles contenues dans la couche organo-minérale aragonitique, telles que des molécules protéiniques et non protéiniques insolubles, et
- une poudre dont la granulométrie est inférieure ou égale au diamètre du tamis dont le diamètre est le plus petit parmi les diamètres des tamis de la tamiseuse, en particulier dont la granulométrie est inférieure ou égale à 10 miti, en particulier de 50 nm à 10 pm.
[0028] Selon un mode de réalisation, la phase liquide calcitique de la solution saturée calcitique peut comprendre des molécules hydrosolubles et liposolubles contenues dans la couche organo-minérale calcitique.
[0029] Selon un mode de réalisation, la phase solide calcitique de la solution saturée calcitique peut comprendre :
- des molécules insolubles contenues dans la couche organo-minérale calcitique, telles que des molécules protéiniques et non protéiniques insolubles, et
- une poudre dont la granulométrie est inférieure ou égale au diamètre du tamis dont le diamètre est le plus petit parmi les diamètres des tamis de la tamiseuse, en particulier dont la granulométrie est inférieure ou égale à 10 pm, en particulier de 50 nm à 10 pm.
[0030] Selon un mode de réalisation préféré, l'étape (c) de séparation est réalisée par centrifugation et la phase liquide récupérée est nommée surnageant et la phase solide récupérée est nommée culot.
[0031] Selon un mode de réalisation, la poudre du culot aragonitique et/ou la poudre du culot calcitique, en particulier la poudre du culot aragonitique, peuvent subir une étape de sphéronisation.
[0032] Selon un mode de réalisation, le culot aragonitique et/ou le culot calcitique, en particulier le culot calcitique, peut subir l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique.
[0033] Selon un mode de réalisation, l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique peut être mise en œuvre dans une installation comprenant :
- un réservoir d’arrivée et de stockage de CO2 à l’état gazeux,
- un condenseur pour la transformation du CO2 gazeux en CO2 liquide, - un réservoir de stockage de CO2 liquide,
- un échangeur de chaleur pour la transformation du CO2 liquide en CO2 supercritique,
- un réacteur où se produit l’extraction des molécules solubles, et
- un ou plusieurs extracteurs.
[0034] Les molécules solubles obtenues lors de l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique sont au moins celles parmi les biopolymères solubles, les acides gras, les lipides, les pigments solubles et leur mélange.
[0035] Les acides gras, les lipides et les pigments solubles ne peuvent pas être obtenus par le procédé d'extraction des biopolymères solubles décrit dans FR 3 037 801 déposée par les inventeurs de la présente demande de brevet.
[0036] Selon un mode de réalisation particulier, la granulométrie de la poudre aragonitique traitée par CO2 supercritique est inférieure ou égale à la granulométrie de la poudre aragonitique de percolation, en particulier égale à la granulométrie de la poudre aragonitique de percolation.
[0037] Selon un mode de réalisation particulier, la granulométrie de la poudre calcitique traitée par CO2 supercritique est inférieure ou égale à la granulométrie de la poudre calcitique de percolation, en particulier égale à la granulométrie de la poudre calcitique de percolation.
[0038] Selon un mode de réalisation particulier, le procédé d'isolation peut comprendre, après l'étape (c) de séparation réalisée par centrifugation, les étapes suivantes :
(e) Filtration du surnageant aragonitique et/ou du surnageant calcitique pour obtenir un surnageant aragonitique filtré et/ou un surnageant calcitique filtré ;
(f) Concentration du surnageant aragonitique filtré et/ou du surnageant calcitique filtré pour obtenir un concentrât aragonitique et/ou un concentrât calcitique ;
(g) Sonication du concentrât aragonitique et/ou du concentrât calcitique pour obtenir une émulsion colloïdale aragonitique et/ou une émulsion colloïdale calcitique.
[0039] Selon un mode de réalisation, l'étape (e) de filtration peut être réalisée sur un lit de Celite ou une membrane. [0040] Selon un mode de réalisation le concentrât aragonitique et/ou le concentrât calcitique peuvent comprendre au moins un métal choisi parmi Mn, Fe, Zn, Ba, Sr, Mg, Cu, Al, Ni, V, Cr, Mo et leurs mélanges.
[0041] Selon un mode de réalisation, l'étape (g) de sonication peut être mise en œuvre avec une sonotrode à une fréquence comprise en 20 kHz et 200 kHz.
[0042] Selon un mode de réalisation, le procédé peut comprendre, après l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique, les étapes suivantes :
(h) Hydrolyse acide à froid de la poudre aragonitique traitée par CO2 supercritique et/ou de la poudre calcitique traitée par CO2 supercritique pour extraire les molécules insolubles présentes dans lesdites poudres ; et
(i) Lavage et super-centrifugation pour isoler et récupérer lesdites molécules insolubles.
[0043] Les molécules insolubles récupérées lors des étapes (h) d'hydrolyse acide à froid et (i) de lavage et de super-centrifugation sont au moins celles parmi les biopolymères insolubles, les pigments organiques insolubles et leur mélange.
[0044] Selon un mode de réalisation, l'étape (h) d'hydrolyse acide à froid peut être réalisée :
- à une température inférieure à 10°C, en particulier inférieure à 5°C, plus particulièrement entre 1 et 4°C, et
- avec une solution aqueuse comprenant de l'acide acétique et dont le pH est acide, en particulier inférieur à 6, plus particulièrement inférieur à 4,5.
[0045] Selon un mode de réalisation particulier, les étapes (h) d'hydrolyse acide à froid et (i) de lavage et de super-centrifugation peuvent être réalisées une ou plusieurs fois.
[0046] Selon un mode de réalisation les molécules insolubles récupérées peuvent ensuite être séchées pour obtenir un extrait sec de molécules insolubles.
[0047] Selon un mode de réalisation très particulier, l'étape (a) de broyage est réalisée séparément sur la couche organo-minérale aragonitique et sur la couche organo-minérale calcitique pour obtenir la poudre aragonitique et la poudre calcitique. [0048] Selon un mode de réalisation très particulier, l'étape (b) de percolation à chaud est réalisée séparément sur la poudre aragonitique et sur la poudre calcitique pour obtenir :
- d'une part la solution saturée aragonitique et d'autre part la poudre aragonitique de percolation, et
- d'une part la solution saturée calcitique et d'autre part la poudre calcitique de percolation.
[0049] Selon un mode de réalisation très particulier l'étape (c) de séparation est réalisée séparément sur la solution saturée aragonitique et la solution saturée calcitique pour récupérer :
- d'une part la phase liquide aragonitique et d'autre part la phase solide aragonitique, et
- d'une part la phase liquide calcitique et d'autre part la phase solide calcitique.
[0050] Selon un mode de réalisation très particulier l'étape (c) de séparation est réalisée par centrifugation et séparément sur la solution saturée aragonitique et la solution saturée calcitique pour récupérer :
- d'une part le surnageant aragonitique et d'autre part le culot aragonitique, et
- d'une part le surnageant calcitique et d'autre part le culot calcitique.
[0051] Selon un mode de réalisation très particulier, l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique est réalisée séparément sur la poudre aragonitique de percolation et sur un mélange de la poudre calcitique de percolation et du culot calcitique.
[0052] Selon un mode de réalisation spécifique :
- l'étape (a) de broyage est réalisée séparément sur la couche organo-minérale aragonitique et sur la couche organo-minérale calcitique pour obtenir la poudre aragonitique et la poudre calcitique ;
- l'étape (b) de percolation à chaud est réalisée séparément sur la poudre aragonitique et sur la poudre calcitique pour obtenir :
- d'une part la solution saturée aragonitique et d'autre part la poudre aragonitique de percolation, et - d'une part la solution saturée calcitique et d'autre part la poudre calcitique de percolation ;
- l'étape (c) de séparation est réalisée par centrifugation et séparément sur la solution saturée aragonitique et la solution saturée calcitique pour récupérer :
- d'une part le surnageant aragonitique et d'autre part le culot aragonitique, et
- d'une part le surnageant calcitique et d'autre part le culot calcitique ; et
- l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique est réalisée séparément sur la poudre aragonitique de percolation et sur un mélange de la poudre calcitique de percolation et du culot calcitique.
[0053] Selon un mode de réalisation très particulier, l'étape (e) de filtration est réalisée séparément sur le surnageant aragonitique et sur le surnageant calcitique pour obtenir le surnageant aragonitique filtré et le surnageant calcitique filtré.
[0054] Selon un mode de réalisation très particulier, l'étape (f) de concentration est réalisée sur un mélange du surnageant aragonitique filtré et du surnageant calcitique filtré pour obtenir un mélange de concentrais.
[0055] Selon un mode de réalisation très particulier, l'étape (g) de sonication est réalisée sur un mélange de concentrais pour obtenir un mélange d'émulsions colloïdales.
[0056] Selon un mode de réalisation très particulier, l'étape (h) d'hydrolyse acide à froid est réalisée sur un mélange de poudre aragonitique traitée par CO2 supercritique et de poudre calcitique traitée par CO2 supercritique pour extraire les molécules insolubles du mélange desdites poudres.
[0057] Selon un mode de réalisation très particulier, l'étape (i) de lavage et super centrifugation est réalisée pour isoler et récupérer les molécules insolubles extraites du mélange de poudre aragonitique traitée par CO2 supercritique et de poudre calcitique traitée par CO2 lors de l'étape (h) d'hydrolyse acide à froid.
[0058] Selon un mode de réalisation spécifique :
- l'étape (e) de filtration est réalisée séparément sur le surnageant aragonitique et sur le surnageant calcitique filtré pour obtenir le surnageant aragonitique filtré et le surnageant calcitique filtré ; - l'étape (f) de concentration est réalisée sur un mélange du surnageant aragonitique filtré et du surnageant calcitique filtré pour obtenir un mélange de concentrais ;
- l'étape (g) de sonication est réalisée sur un mélange de concentrais pour obtenir un mélange d'émulsions colloïdales ;
- l'étape (h) d'hydrolyse acide à froid est réalisée sur un mélange de poudre aragonitique traitée par CO2 supercritique et de poudre calcitique traitée par CO2 supercritique pour extraire les molécules insolubles du mélange desdites poudres ; et
- l'étape (i) de lavage et super-centrifugation est réalisée pour isoler et récupérer les molécules insolubles extraites du mélange de poudre aragonitique traitée par CO2 supercritique et de poudre calcitique traitée par CO2 lors de l'étape (h) d'hydrolyse acide à froid.
[0059] Selon un mode de réalisation préféré :
- l'étape (a) de broyage est réalisée séparément sur la couche organo-minérale aragonitique et sur la couche organo-minérale calcitique pour obtenir la poudre aragonitique et la poudre calcitique ;
- l'étape (b) de percolation à chaud est réalisée séparément sur la poudre aragonitique et sur la poudre calcitique pour obtenir :
- d'une part la solution saturée aragonitique et d'autre part la poudre aragonitique de percolation, et
- d'une part la solution saturée calcitique et d'autre part la poudre calcitique de percolation ;
- l'étape (c) de séparation est réalisée par centrifugation et séparément sur la solution saturée aragonitique et la solution saturée calcitique pour récupérer :
- d'une part le surnageant aragonitique et d'autre part le culot aragonitique, et
- d'une part le surnageant calcitique et d'autre part le culot calcitique ;
- l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique est réalisée séparément sur la poudre aragonitique de percolation et sur un mélange de la poudre calcitique de percolation et du culot calcitique ;
- l'étape (e) de filtration est réalisée séparément sur le surnageant aragonitique et sur le surnageant calcitique filtré pour obtenir le surnageant aragonitique filtré et le surnageant calcitique filtré ;
- l'étape (f) de concentration est réalisée sur un mélange du surnageant aragonitique filtré et du surnageant calcitique filtré pour obtenir un mélange de concentrais ;
- l'étape (g) de sonication est réalisée sur un mélange de concentrais pour obtenir un mélange d'émulsions colloïdales ;
- l'étape (h) d'hydrolyse acide à froid est réalisée sur un mélange de poudre aragonitique traitée par CO2 supercritique et de poudre calcitique traitée par CO2 supercritique pour extraire les molécules insolubles du mélange desdites poudres ; et
- l'étape (i) de lavage et super-centrifugation est réalisée pour isoler et récupérer les molécules insolubles extraites du mélange de poudre aragonitique traitée par CO2 supercritique et de poudre calcitique traitée par CO2 lors de l'étape (h) d'hydrolyse acide à froid.
[0060] Selon un mode de réalisation particulier, le procédé d'isolation de l'invention permet d'obtenir :
- la phase solide aragonitique et/ou la phase solide calcitique récupérées lors de l'étape (c) de séparation, lesdites phases solides étant éventuellement sphéronisées,
- les molécules solubles obtenues lors de l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique, en particulier au moins celles parmi les biopolymères solubles, les acides gras, les lipides, les pigments solubles et leurs mélanges,
- l'émulsion colloïdale aragonitique et/ou l'émulsion colloïdale calcitique obtenues lors de l'étape (g) de sonication, ou
- les molécules insolubles récupérées lors des étapes (h) d'hydrolyse acide à froid et (i) de lavage et de super-centrifugation, en particulier au moins celles parmi les biopolymères solubles, les acides gras, les lipides, les pigments solubles et leurs mélanges.
[0061] Selon un mode de réalisation très particulier, le procédé d'isolation de l'invention permet d'obtenir :
- la phase solide aragonitique récupérée lors de l'étape (c) de séparation, ladite phase solide aragonitique étant éventuellement sphéronisée,
- le mélange d'émulsions colloïdales obtenu lors de l'étape (g),
- les molécules solubles obtenues lors de l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique, en particulier au moins celles parmi les biopolymères solubles, les acides gras, les lipides, les pigments solubles et leurs mélanges, et
- les molécules insolubles récupérées lors des étapes (h) d'hydrolyse acide à froid et (i) de lavage et de super-centrifugation, en particulier au moins celles parmi les biopolymères solubles, les acides gras, les lipides, les pigments solubles et leurs mélanges.
[0062] Lorsque l'étape (c) de séparation est réalisée par centrifugation, alors le procédé d'isolation de l'invention permet d'obtenir le culot aragonitique à la place de la phase solide aragonitique et/ou le culot calcitique à la place de la phase solide calcitique, lesdits culots étant éventuellement sphéronisés.
[0063] Un autre objet de l'invention est une composition comprenant :
- la phase solide aragonitique et/ou la phase solide calcitique récupérées lors de l'étape (c) de séparation telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation, lesdites phases solides étant éventuellement sphéronisées,
et au moins un composant choisi parmi :
- les molécules solubles obtenues lors de l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation, en particulier au moins celles parmi les biopolymères solubles, les acides gras, les lipides, les pigments solubles et leurs mélanges,
- l'émulsion colloïdale aragonitique et/ou calcitique obtenues lors de l'étape (g) de sonication telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation, et
- les molécules insolubles récupérées lors des étapes (h) d'hydrolyse acide à froid et (i) de lavage et de super-centrifugation, en particulier au moins celles parmi les biopolymères solubles, les acides gras, les lipides, les pigments solubles et leurs mélanges.
[0064] Selon un mode de réalisation particulier, la composition peut comprendre :
- la phase solide aragonitique récupérée lors de l'étape (c) de séparation telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation, ladite phase solide aragonitique étant éventuellement sphéronisée, et au moins un composant choisi parmi :
- les molécules solubles obtenues lors de l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation, en particulier au moins celles parmi les biopolymères solubles, les acides gras, les lipides, les pigments solubles et leurs mélanges,
- le mélange d'émulsions colloïdales obtenu lors de l'étape (g) de sonication de sonication telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation,
- les molécules insolubles récupérées lors des étapes (h) d'hydrolyse acide à froid et (i) de lavage et de super-centrifugation, en particulier au moins celles parmi les biopolymères solubles, les acides gras, les lipides, les pigments solubles et leurs mélanges.
[0065] Selon un mode de réalisation, la composition peut résulter du mélange de ces composés.
[0066] Selon un mode de réalisation, la composition peut comprendre en outre un mélange d'huiles essentielles et végétales.
[0067] Selon un mode de réalisation particulier, la composition comprend :
- la phase solide aragonitique et/ou la phase solide calcitique récupérées lors de l'étape (c) de séparation telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation, lesdites phases solides étant éventuellement sphéronisées,
- l'émulsion colloïdale aragonitique et/ou calcitique obtenues lors de l'étape (g) de sonication telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation.
[0068] Selon un mode de réalisation très particulier, la composition peut comprendre :
- la phase solide aragonitique récupérée lors de l'étape (c) de séparation telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation, ladite phase solide aragonitique étant éventuellement sphéronisée, et
- le mélange d'émulsions colloïdales obtenu lors de l'étape (g) de sonication de sonication telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation.
[0069] Selon un mode de réalisation particulier, la composition peut comprendre : - la phase solide aragonitique et/ou la phase solide calcitique récupérées lors de l'étape (c) de séparation telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation, lesdites phases solides étant éventuellement sphéronisées,
- les molécules solubles obtenues lors de l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation, en particulier au moins celles parmi les biopolymères solubles, les acides gras, les lipides, les pigments solubles et leurs mélanges, et
- l'émulsion colloïdale aragonitique et/ou calcitique obtenues lors de l'étape (g) de sonication telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation.
[0070] Selon un mode de réalisation très particulier, la composition peut comprendre :
- la phase solide aragonitique récupérée lors de l'étape (c) de séparation telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation, ladite phase solide aragonitique étant éventuellement sphéronisée,
- les molécules solubles obtenues lors de l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation, en particulier au moins celles parmi les biopolymères solubles, les acides gras, les lipides, les pigments solubles et leurs mélanges, et
- le mélange d'émulsions colloïdales obtenu lors de l'étape (g) de sonication de sonication telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation.
[0071] Selon un mode de réalisation particulier, la composition peut comprendre :
- la phase solide aragonitique et/ou la phase solide calcitique récupérées lors de l'étape (c) de séparation telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation, lesdites phases solides étant éventuellement sphéronisées,
- les molécules solubles obtenues lors de l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation, en particulier au moins celles parmi les biopolymères solubles, les acides gras, les lipides, les pigments solubles et leurs mélanges
- l'émulsion colloïdale aragonitique et/ou calcitique obtenues lors de l'étape (g) de sonication telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation, et
- les molécules insolubles récupérées lors des étapes (h) d'hydrolyse acide à froid et (i) de lavage et de super-centrifugation, en particulier au moins celles parmi les biopolymères solubles, les acides gras, les lipides, les pigments solubles et leurs mélanges. [0072] Selon un mode de réalisation très particulier, la composition peut comprendre :
- la phase solide aragonitique récupérée lors de l'étape (c) de séparation telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation, ladite phase solide aragonitique étant éventuellement sphéronisée,
- les molécules solubles obtenues lors de l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation, en particulier au moins celles parmi les biopolymères solubles, les acides gras, les lipides, les pigments solubles et leurs mélanges,
- le mélange d'émulsions colloïdales obtenu lors de l'étape (g) de sonication de sonication telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation, et
- les molécules insolubles récupérées lors des étapes (h) d'hydrolyse acide à froid et (i) de lavage et de super-centrifugation, en particulier au moins celles parmi les biopolymères solubles, les acides gras, les lipides, les pigments solubles et leurs mélanges.
[0073] Selon un mode de réalisation spécifique, la phase solide aragonitique récupérée lors de l'étape (c) de séparation comprise dans la composition objet de l'invention peut être remplacée par le culot aragonitique récupéré lors de l'étape (c) de séparation réalisée par centrifugation, ledit culot aragonitique étant éventuellement sphéronisé.
[0074] Selon un mode de réalisation spécifique, la phase solide calcitique récupérée lors de l'étape (c) de séparation comprise dans la composition objet de l'invention peut être remplacée par le culot calcitique récupéré lors de l'étape (c) de séparation réalisée par centrifugation telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation, ledit culot calcitique étant éventuellement sphéronisé.
[0075] Un autre objet de l'invention est une composition telle que décrite ci-dessus pour son utilisation comme médicament.
[0076] Un autre objet de l'invention est une méthode de traitement thérapeutique dans laquelle la composition telle que décrite ci-dessus est administrée à un sujet qui en a besoin. [0077] Selon un mode de réalisation, le traitement thérapeutique est choisi parmi le traitement d'une maladie de la peau, la prévention d'une maladie de la peau.
[0078] Selon un mode de réalisation, la maladie de la peau est choisie parmi les dermatites, les dermatoses telles que le vitiligo et le psoriasis.
[0079] Selon un mode de réalisation, la composition peut être administrée par voie topique.
[0080] Selon un autre mode de réalisation, la composition peut également être utilisée comme substitut osseux, ciment, implant, dispositifs d’ostéosynthèse, dispositif médical en thérapie.
[0081] Selon un mode de réalisation, le substitut osseux peut être choisi parmi un substitut osseux extrudable, notamment conditionné en seringue sous vide, un substitut osseux à support collagénique poreux, un substitut osseux à trame minérale d’origine animale ou humaine et leurs mélanges.
[0082] Selon un mode de réalisation, le ciment est choisi parmi le ciment de scellement d’endoprothèses, le ciment injectable pour chirurgie mini-invasive en vertébroplastie et cyphoplastie.
[0083] Un autre objet de l'invention est une utilisation non-thérapeutique d'une composition telle que décrite ci-dessus.
[0084] Un autre objet de l'invention est une méthode de traitement non- thérapeutique dans laquelle la composition telle que décrite ci-dessus est appliquée à une personne qui en a besoin.
[0085] Selon un mode de réalisation, on peut utiliser la composition en cosmétique, en particulier dans le traitement des ptoses, des dépressions dermocutanées, des rides profondes et superficielles, de la prévention du vieillissement corporel .
[0086] Un autre objet de l'invention est une utilisation de la composition telle que décrite ci-dessus comme milieu de culture, en particulier comme milieu de culture pour la maturation et/ou la prolifération des cellules souches ou cellules progénitrices. [0087] Selon un mode de réalisation, la composition utilisée comme milieu de culture peut comprendre :
- la phase solide aragonitique et/ou la phase solide calcitique récupérées lors de l'étape (c) de séparation telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation, lesdites phases solides étant éventuellement sphéronisées,
- les molécules solubles obtenues lors de l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation, en particulier au moins celles parmi les biopolymères solubles, les acides gras, les lipides, les pigments solubles et leurs mélanges, et
- l'émulsion colloïdale aragonitique et/ou calcitique obtenues lors de l'étape (g) de sonication telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation.
[0088] Selon un mode de réalisation, la composition utilisée comme milieu de culture peut comprendre :
- le culot aragonitique et/ou le culot calcitique récupérés lors de l'étape (c) de séparation réalisée par centrifugation telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation, lesdits culots étant éventuellement sphéronisés,
- les molécules solubles obtenues lors de l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation, en particulier au moins celles parmi les biopolymères solubles, les acides gras, les lipides, les pigments solubles et leurs mélanges, et
- l'émulsion colloïdale aragonitique et/ou calcitique obtenues lors de l'étape (g) de sonication telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation.
[0089] Un autre objet de l'invention est une autre composition comprenant :
- les molécules solubles obtenues lors de l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation, en particulier au moins celles parmi les biopolymères solubles, les acides gras, les lipides, les pigments solubles et leurs mélanges,
- l'émulsion colloïdale aragonitique et/ou calcitique obtenues lors de l'étape (g) de sonication telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation.
[0090] Selon un mode de réalisation particulier, l'autre composition peut comprendre :
- les molécules solubles obtenues lors de l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation, en particulier au moins celles parmi les biopolymères solubles, les acides gras, les lipides, les pigments solubles et leurs mélanges,
- le mélange d'émulsions colloïdales obtenu lors de l'étape (g) de sonication de sonication telle que décrite ci-dessus en lien avec le procédé d'isolation.
[0091] Un autre objet de l'invention est l'autre composition telle que décrite ci- dessus pour son utilisation comme médicament.
[0092] Un autre objet de l'invention est une méthode de traitement thérapeutique dans laquelle l'autre composition telle que décrite ci-dessus est administrée à un sujet qui en a besoin.
[0093] Selon un mode de réalisation, le traitement thérapeutique est choisi parmi les pathologies auto-immunes chroniques.
[0094] Selon un mode de réalisation, les pathologies auto-immunes chroniques peuvent être la polyarthrite rhumatoïde, la maladie de Crohn, l’artériosclérose, le diabète de type II, la spondylarthrite ankylosante, la rectocolite hémorragique, le psoriasis et le rhumatisme psoriasique, en particulier le psoriasis.
[0095] Selon un mode de réalisation, l'autre composition peut être administrée par injection intra-musculaire, intra-veineuse et/ou sous-cutanée.
Description des modes de réalisation
[0096] L’invention consiste dans un procédé mettant en œuvre une étape (b) de percolation à chaud des poudres aragonitiques et calcitiques, i.e. des couches organo-minérales aragonitiques internes et calcitiques externes des coquilles réduites en poudre lors d'une étape (a) de broyage. La solution saturée issue de l'étape (b) de percolation à chaud peut ensuite subir une étape (c) de séparation réalisée par centrifugation, puis éventuellement une étape (f) de concentration et une étape (g) de sonication. Toute ou partie de la poudre ayant fait l’objet de l'étape (b) de percolation à chaud subit une étape (d) de traitement par CO2 supercritique. Les poudres aragonitiques et calcitiques réservées lors des étapes (b) de percolation à chaud et (d) de traitement par CO2 supercritique, ainsi que les poudres issues de l'étape (c) de séparation réalisée par centrifugation de la solution liquide issue de l'étape (b) de percolation à chaud de la couche organo- minérale aragonitique et/ou de la couche organo-minérale calcitique (ci-après culot aragonitique et/ou calcitique), peuvent subir une hydrolyse acide à froid (étape (h)).
[0097] Prétraitement des coquilles.
[0098] Les coquilles des mollusques concernés après avoir été nettoyées sont soumises à un traitement ultrasonique pendant, par exemple, 30 minutes dans une solution d’eau du réseau à 50°C additionnée d’une préparation bactéricide, désinfectante, virucide de type UC38. Les coquilles ainsi traitées sont ensuite rincées, par exemple, à l’eau du réseau à une température de 50°C environ puis immergées dans une solution d’hypochlorite de sodium stabilisée à 2,5% pendant 30 minutes, rincées à l’eau du réseau pendant 5 minutes. Elles sont ensuite immergées dans une solution de Calbenium® chirurgical pendant 1 heure, séchées par un flux d’air, puis conditionnées dans des poches autoclavables.
[0099] Les coquilles peuvent ensuite subir une ou plusieurs étapes de stérilisation. L'étape de stérilisation peut consister en trois stérilisations successives « Médical prion » à 132°C pendant 85mn chacune. Les coquilles stérilisées peuvent ensuite être séchées dans un flux d’air et réservées.
[0100] Les coquilles peuvent être immergées dans un bain de "Plasma marin" isotonique. Cette étape peut avantageusement rééquilibrer la teneur initiale en eau et en minéraux des couches organo-minérales aragonitiques et calcitiques des coquilles, qui aurait éventuellement été modifiée par un séjour prolongé des coquilles hors du milieu marin et/ou par les traitements successifs. Cette étape d'immersion peut durer 48 heures. Par exemple la teneur en minéraux dans le "Plasma marin" isotonique peut être la suivante : soit Na 12,88 mg/L, Br 66,3 mg/L, Zn 0,083 mg/L, K 493 mg/L, P 0,707 mg/l, Ca 442 mg/L, Mg 1 , 29 mg/L, Cu 0,007 mg/L. Les coquilles sont ensuite séchées sous courant d’air puis réservées.
[0101] Meulage des coquilles, concassage et étape (a) de broyage.
[0102] Afin de traiter séparément la couche organo-minérale aragonitique et la couche organo-minérale calcitique des coquilles, la couche organo-minérale calcitique peut subir une étape de meulage. Cette étape de meulage peut être réalisée à l’aide d’une meule diamantée à gros grains, par exemple, sous courant d’eau de mer filtrée et réfrigérée à une température comprise entre 2 et 4°C. On obtient alors un produit de meulage pulvérulent, d’une granulométrie de 2 mm à 500 pm. Le produit de meulage est réservé ainsi que la couche organo-minérale aragonitique débarrassée de la couche organo-minérale calcitique.
[0103] La couche organo-minérale aragonitique peut être concassée dans un concasseur à mâchoires et parois en oxyde de zirconium de type Pulverisette 1 Premium Line, FRITSCH, jusqu’à l’obtention d’une poudre aragonitique concassée dont la granulométrie peut être comprise entre 10 pm et 2 mm.
[0104] Cette poudre aragonitique concassée peut ensuite être broyée par broyage planétaire. Le broyage planétaire peut être mis en œuvre à l'aide d'un bol en zirconium et de billes en zirconium. Par exemple, 25 billes en zirconium de 20 mm de diamètre et 300 g de poudre aragonitique concassée sont placés dans deux bols en zirconium d’une contenance de 500 ml chacun, préalablement congelés pendant 24 heures à une température de moins 30°C. Les bols sont ensuite introduits dans la chambre de broyage d’un broyeur planétaire de type Pulvérisette 5 PL, FRITSCH pour 2 cycles de broyage, à une vitesse de 400 tr/min, de 5 minutes chacun.
[0105] Afin d’optimiser le broyage et de prévenir le colmatage de la poudre sur les parois des bols et à la surface des billes, le deuxième cycle de broyage peut être effectué par voie humide, par exemple par adjonction d’additifs sous forme liquide, à point d’ébullition élevé et à faible pression de vapeur, par exemple l’eau p.p.i ou des alcools tels que l’isopropanol ou l’éthanol.
[0106] De l’eau p.p.i., réfrigérée entre 2 et 4°C, peut être ajoutée dans chaque bol jusqu’à l’obtention d’une solution colloïdale ayant une viscosité de 3,5 MPa. A la fin du deuxième cycle de broyage, une poudre aragonitique d’une granulométrie comprise entre 50 nm et 300 pm peut être obtenue et réservé.
[0107] Ces opérations permettent notamment de séparer et de fracturer les biocristaux de la fraction minérale de la couche organo-minérale aragonitique.
[0108] Le produit de meulage de la couche organo-minérale calcitique peut subir la même étape de broyage que celle subie par la couche organo-minérale aragonitique, au terme duquel on peut également obtenir une poudre calcitique d’une granulométrie comprise entre 50 nm et 300 pm.
[0109] Les poudres aragonitique et calcitique obtenues par broyage peuvent être stérilisées aux rayonnements Gamma à 25 KGy avant de subir une étape de percolation à chaud.
[0110] Etape (b) de percolation à chaud.
[0111] La percolation à chaud est un procédé de filtration à travers un milieu perméable qui permet d’extraire par voie humide des composants solubles.
[0112] La percolation à chaud s’est avérée avantageuse pour deux raisons. D’une part, l’observation au microscope optique de la poudre aragonitique après broyage, a montré des agglomérats de grains de diamètres différents collés entre eux par des résidus organiques. D’autre part, la percolation à chaud, par exemple en présence de méthanol, permet de solubiliser les lipides liés aux protéines de la fraction organique de la couche organo-minérale aragonitique.
[0113] Ce phénomène peut s’expliquer par la structure et la nature physico chimique des constituants de la couche organo-minérale aragonitique.
[0114] Des essais de solubilité ont montré que ces résidus organiques aux propriétés adhésives étaient constitués par les composants organiques solubles et insolubles intra-cristallins et inter-lamellaires de la couche organo-minérale aragonitique et de la couche organo-minérale calcitique. La percolation à chaud permet le lavage des grains de la poudre aragonitique qui, à l’observation microscopique de la poudre aragonitique de percolation, ont repris leur aspect brillant. La percolation peut être réalisée lors d’un tamisage par voie humide.
[0115] Le tamisage par voie humide peut être réalisé avec une tamiseuse de type Filtra, qui comprend, de haut en bas :
- un couvercle équipé d’un orifice permettant de recevoir une canalisation pour l’arrivée d’eau,
- 6 tamis dont le diamètre des pores est de haut en bas : 315, 250,125, 45, 20 et 10 pm,
- un fond de collecte équipé d’un conduit qui permet de recueillir l’eau de la percolation. [0116] Les paramètres de la tamiseuse sont réglés à l’amplitude maximum, le temps de vibration pour une durée de 5 minutes environ.
[0117] Une quantité définie de poudre aragonitique, de 500 g à 1 Kg, peut être placée dans le tamis supérieur de manière à réaliser un filtre perméable d’une épaisseur variable ; un réservoir surplombant la tamiseuse est rempli d’eau p.p.i à 45°C additionnée de 5% de méthanol afin de solubiliser les lipides. Selon un autre mode de réalisation, on peut ajouter à l’eau p.p.i., avant la percolation, une solution d’urée, comme agent chaotrope, à une concentration de 4 mol/L, dans le but de scinder les protéines de poids moléculaire élevé. La solution est pulvérisée sur la poudre qui se comporte comme une membrane de filtration, dont le pouvoir filtrant est optimisé par les vibrations de la tamiseuse en créant un vortex.
[0118] Lors de l'étape (b) de percolation à chaud, les grains de la poudre aragonitique de diamètres inférieurs peuvent être entraînés par la solution d’eau p.p.i du premier tamis dont le diamètre est le plus grand, vers les tamis inférieurs sur lesquels ils se déposent selon leurs diamètres, jusqu’au dernier tamis dont le diamètre est le plus faible. Par exemple le dernier tamis peut présenter un diamètre de 10 pm qui retient les grains de diamètres supérieurs à 10 miti, laissant passer les grains de 10 pm et moins.
[0119] Le produit de la percolation est une solution saturée composée d'une phase liquide et d'une phase solide, ladite phase liquide contient toute ou partie des composants hydro et liposolubles de la couche organo-minérale aragonitique, ladite phase solide contient les composants insolubles de la couche organo- minérale aragonitique et des grains d’aragonite dont le diamètre est inférieur ou égal au diamètre du dernier tamis, en particulier de 50 nm à 10 pm.
[0120] L'étape (b) de percolation à chaud produit également une poudre aragonite de percolation contenant des grains d'aragonite dont le diamètre peut être supérieur au diamètre du dernier tamis, en particulier supérieur à 10 pm.
[0121] L'étape (b) de percolation à chaud peut être appliquée de manière identique à la poudre calcitique issue de l'étape (a) de broyage de la couche organo-minérale calcitique.
[0122] Etape (c) de séparation. [0123] Afin de séparer la phase liquide et la phase solide de la solution saturée issue de l'étape (b) de percolation à chaud, une étape (c) de séparation peut être appliquée à la solution saturée pour récupérer d'une part la phase liquide et d'autre part la phase solide. Par exemple cette étape (c) de séparation peut être réalisée par centrifugation et la phase liquide récupérée est nommée surnageant et la phase solide récupérée est nommée culot. Seul cet exemple est décrit ici mais l'homme du métier saura mettre en œuvre des techniques de séparation différentes de la centrifugation pour réaliser cette étape (c).
[0124] L'étape (c) de séparation réalisée par centrifugation peut s’effectuer dans une centrifugeuse de type Lisa, de 2 Litres, équipée de 4 nacelles pouvant recevoir 4 flacons d’une contenance unitaire de 300 ml de solution. La vitesse de rotation peut être portée à 18 000 tr/min, la température fixée à 5°C et le temps de rotation fixé à 20 minutes.
[0125] Le culot aragonitique et/ou le culot calcitique peuvent, quant à eux, être séchés, par exemple dans une étuve à 25°C pendant 12 heures. Le culot aragonitique et/ou le culot calcitique peuvent présenter une granulométrie comprise entre 10 pm et 50 nm et contenir les composants protéiniques et non protéiniques insolubles. Le culot aragonitique peut être ensuite sphéronisé et réservé pour être stérilisé aux rayonnements Gamma à 25 kGy. Le culot calcitique peut, quant à lui, être réservé.
[0126] L'étape (c) de séparation réalisée par centrifugation peut être réalisée une ou plusieurs fois.
[0127] Etape (d) de traitement par CO2 supercritique.
[0128] On sait que les molécules solubles d’intérêt sont le plus souvent intra- cristallines et nécessitent la dissolution par hydrolyse acide des biocristaux de carbonate de calcium, qu’ils soient aragonitiques ou calcitiques. C’est la raison pour laquelle le procédé de l'invention comprend l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique.
[0129] On sait que le CO2 à l’état supercritique possède des propriétés très particulières : un coefficient de diffusivité, la possibilité d’extraire les composants solubles plutôt de faible poids moléculaire et apolaires, ainsi que les matières grasses, sans générer de résidus polluants. Il présente par ailleurs des propriétés désinfectantes vis-à-vis des virus et des bactéries. De plus, l’adjonction de co solvants permet d’en augmenter le pouvoir solvant. Il possède en outre un faible coefficient de viscosité et une absence de tension de surface, ce qui augmente son pouvoir de pénétration, facilité par la nature physico-chimique des biocristaux d’aragonite et de calcite, biomatériaux hydrophiles, perméables aux gaz, dont le CO2, a fortiori lorsqu’il est supercritique.
[0130] L’installation d’un réacteur pour traitement au CO2 supercritique comprend 5 éléments principaux :
- un réservoir d’arrivée et de stockage de CO2 à l’état gazeux,
- un condenseur pour la transformation du CO2 gazeux en CO2 liquide,
- un réservoir de stockage de CO2 liquide,
- un échangeur de chaleur pour la transformation du CO2 liquide en CO2 supercritique,
- un réacteur où se produit l’extraction des molécules solubles, et
- un ou plusieurs extracteurs.
[0131] L'étape (d) de traitement par CO2 supercritique peut être appliquée à la poudre aragonitique de percolation selon le mode opératoire suivant :
dans le réacteur d’une taille adéquate, relié à l’échangeur de CO2 supercritique, on dispose la poudre aragonitique de percolation recueillie dans les tamis après l'étape (b) de percolation à chaud. A l’ouverture de la vanne de l’échangeur libérant le CO2 supercritique, celui-ci est injecté dans le réacteur où se produit la réaction d’extraction des molécules d’intérêt (biopolymères solubles, acides gras, lipides, pigments). A la sortie, les substances dissoutes sont récupérées selon leurs natures dans un ou deux extracteurs reliés au réacteur, où l’abaissement de la température et de la pression les font précipiter sous forme sèche. Le CO2 redevient gazeux à sa sortie pour être récupéré, afin d’être utilisé pour un nouveau cycle d’extraction.
[0132] On obtient donc d'une part une poudre aragonitique traitée par CO2 supercritique et d'autre part des composants solubles provenant de la couche organo-minérale aragonitique, qui peuvent ensuite être stérilisés aux rayonnements gamma à 25 kGy et réservés. [0133] L'étape (d) de traitement par CO2 supercritique peut être appliquée de manière identique à la poudre calcitique de percolation et éventuellement au culot calcitique.
[0134] Etape (e) de filtration.
[0135] Au terme de l'étape (c) de séparation réalisée par centrifugation, le surnageant aragonitique et/ou le surnageant calcitique peuvent être filtrés au cours d'une étape (f) de filtration pour obtenir un surnageant aragonitique filtré et/ou un surnageant calcitique filtré qui peuvent ensuite être réservés.
[0136] Par exemple, l'étape (f) de filtration peut être réalisée sur un lit de Celite ou une membrane.
[0137] Etape (f) de concentration.
[0138] Le surnageant aragonitique filtré et/ou le surnageant calcitique filtré peuvent être concentrés, par exemple, au Rotavapor de type Buchi à une température de 40°C, la vitesse de rotation du ballon de chauffe fixée à 10 tr/min et un vide de 23,33 mbar.
[0139] Cette étape (f) de concentration permet d'obtenir un concentrât aragonitique et/ou un concentrât calcitique dont le facteur de concentration peut être de 1/4. Ce concentrât peut présenter une coloration allochromatique variant du jaune à l’orange, du rouge au brun ou au gris, couleurs dues à la présence de pigments provenant des métaux qui y sont contenus soit Mn, Fe, Zn, Ba, Sr, Mg, Cu, Al, Ni, V, Cr, Mo.
[0140] Etape (g) de sonication.
[0141] De façon avantageuse, il est possible de modifier et d’optimiser les propriétés physico-chimiques du concentrât aragonitique et/ou du concentrât calcitique résultant de l'étape (f) de concentration en le soumettant à une étape (g) de sonication par sonochimie.
[0142] La sonication est un procédé utilisant les ondes mécaniques et acoustiques dans un milieu liquide, à l’aide par exemple d’une sonotrode, à une fréquence située entre 20 kHz et 200 kHz selon la viscosité initiale du concentrât. De façon avantageuse la sonication permet de déclencher et d’accélérer les réactions et partant, de modifier et potentialiser les propriétés pharmacologiques et pharmacodynamiques des molécules solubles actives.
[0143] En effet, la cavitation provoque la formation de radicaux hydroxylés hautement réactifs, ce qui a pour résultat une amélioration du rendement des réactions, une diminution du temps de réaction des molécules d’intérêt entre elles et une potentialisation exponentielle des propriétés antiradicalaires de certaines d’entre elles.
[0144] La solution à traiter peut être placée dans une cuve à ultrasons dans laquelle est plongée une sonotrode dont la pointe est située au minimum à 1 cm de la surface et des parois, afin d’éviter la formation d’arcs électriques.
[0145] L'étape (g) de sonication peut être appliquée pendant 30 mn au terme desquelles une augmentation de la viscosité du concentrât peut être constatée. Le concentrât se présente alors sous la forme d’une émulsion colloïdale stable grâce à la modification physico-chimique et à l’agencement des composants collagéniques. L’émulsion colloïdale peut ensuite être stérilisée soit par microfiltration, soit par filtration stérilisante, soit par rayonnement Gamma 25 kGy. Le produit peut être réservé à une température de 5°C.
[0146] Etape (h) d'hydrolyse acide à froid et étape (i) de lavage et supercentrifugation.
[0147] Afin de recueillir les biopolymères et autres composants insolubles contenus dans la poudre aragonitique traitée par CO2 supercritique et/ou la poudre calcitique traitée par CO2 supercritique, ladite poudre peut ensuite être soumise à une hydrolyse acide à froid.
[0148] La poudre aragonitique traitée par CO2 supercritique et la poudre calcitique traitée par CO2 supercritique peuvent être réunies et placées dans un réacteur à hydrolyse, réfrigéré, d’une contenance adéquate, rempli d’eau apyrogène à 2°C. On pourra procéder au préalable à un ajustement de la force ionique afin d’affaiblir les éventuelles interactions ioniques, matrice minérale/protéines. La solution est additionnée de NaCI à 0,5 mole sous agitation pendant 30 mn soit, selon le ratio, 1 kg de poudre pour 25 litres d’eau et 5 litres de NaCI. On procède alors à une première centrifugation par exemple à 18 000 G. Le culot est repris par une quantité adéquate d’eau apyrogène à laquelle on ajoute de l’acide acétique à 80% selon le même ratio. L’ensemble est maintenu à une température comprise entre 1 et 4°C pour un pH en dessous de 4,5, sous agitation constante. On obtient une émulsion que l’on dilue avec de l’eau apyrogène pour la casser ; on contrôle la présence ou non de carbonate de calcium non dissout à l’aide d’acide oxalique. Celui-ci est éliminé à travers une gaze et par décantation. A ce stade, on obtient une suspension de protéines insolubles et autres composants, notamment des pigments insolubles, que l’on centrifuge en continu, par exemple, à 18 000 G. Le culot de centrifugation est repris sous agitation dans une même quantité d’acide acétique diluée à 5%, destinée à dissoudre tout résidu de carbonate de calcium. Le culot de centrifugation subit deux lavages successifs dans la même quantité d’eau apyrogène, le pH est ajusté à 7 par l’adjonction de soude.
[0149] Chaque lavage est suivi d’une super-centrifugation au terme de laquelle on obtient une pâte humide de protéines insolubles qui est séchée soit par lyophilisation soit par atomisation. Le produit sec obtenu subit un broyage jusqu’à l’obtention d’une poudre grisâtre d’une granulométrie comprise entre 10 pm et 50 nm, qui est stérilisée aux rayonnements gamma à 25 kGy et réservée.
[0150] A la fin de ces différentes étapes on peut obtenir :
- une poudre stérilisée de grains d’aragonitiques sphéronisés, d’une granulométrie comprise entre 50 nm et 10 pm provenant des culots récupérés lors de l'étape (c) de séparation réalisée par centrifugation après l'étape (b) de percolation à chaud de la poudre aragonitique,
- une émulsion colloïdale provenant de l'étape (g) de sonication composée de polymères solubles, de pigments organiques solubles (bêta-carotène), de métaux, de métalloprotéines, de métalloenzymes, de facteurs de croissance, de glycoprotéines, de glycosamines, de lipides et acides gras polyinsaturés,
- des biopolymères et pigments organiques solubles provenant de l’étape (d) de traitement par CO2 supercritique, et
- des biopolymères insolubles, dits de soutien et de structure, des pigments insolubles récupérés des étapes (h) d’hydrolyse et (i) de lavage et super centrifugation. [0151] Tous ces extraits sont destinés à entrer en totalité ou en partie dans la formulation de dispositifs médicaux, de préparations à visée thérapeutique, utilisables en chirurgie orthopédique, en chirurgie mini invasive, en dermatologie, en stomatologie, en chirurgie maxillo-faciale, en médecine esthétique et dans la formulation de produits dermocosmétiques.
[0152] Les exemples suivants, sans qu’ils soient limitatifs, illustrent les applications de l’invention telle qu’elle a été décrite précédemment.
Exemples
[0153] EXEMPLE 1 : Formulation d’un ciment de scellement utilisable en arthroplastie
[0154] On sait que l’arthrose, de la hanche, de l’épaule, du genou ou toute autre articulation, est la plus fréquente des pathologies articulaires sous l’action conjuguée du vieillissement et des contraintes articulaires.
[0155] En effet, le revêtement cartilagineux des surfaces articulaires s’use et l’altération progressive fait apparaitre des modifications se traduisant par des douleurs et une impotence fonctionnelle caractérisant par exemple la maladie de la hanche, qui nécessitent à terme la pose d’une prothèse. Celle-ci se compose généralement d’une cupule hémisphérique implantée au niveau du cotyle de l’os iliaque, d’une tige implantée dans le fût fémoral se terminant par une tête hémisphérique. Ces deux parties s’articulent entre elles par l’intermédiaire d’un insert en polyéthylène ou en céramique. La tige de la prothèse fémorale et la cupule sont généralement soit scellées à l’aide d’un ciment chirurgical à base de méthacrylate de méthyle, soit impactées.
[0156] Compte tenu des complications post opératoires parfois rencontrées lors de l’utilisation du ciment chirurgical à base de méthacrylate de méthyle (réaction de prise avec élévation de la température à plus de 70°C), vieillissement et rétraction du ciment, complications qui se terminent généralement par une reprise de la prothèse qui est scellée à nouveau ou quelquefois impactée, sans ciment ; le but étant de réaliser un ancrage mécanique physiologique par la repousse osseuse autour de l’implant, lui-même étant quelquefois recouvert d’un biomatériau synthétique favorisant le processus de repousse. [0157] C’est la raison pour laquelle cet exemple est un ciment de scellement dont la formulation centésimale est la suivante :
95 g poudre aragonitique obtenue lors de l'étape (c) de séparation réalisée par centrifugation et sphéronisée (granulométrie comprise entre 50 nm et 10 pm),
4 g carbonate de calcium carbonaté,
1 g hydrogénophosphate de sodium,
90 ml émulsion colloïdale obtenue lors de l'étape (g) de sonication,
5 g carboxylmethyl cellulose sodium
[0158] L’utilisation de la poudre aragonitique sphéronisée, d’une granulométrie comprise entre 50 nm et 10 pm, est justifiée pour les raisons suivantes : la sphéronisation est destinée dans un premier temps à assurer une meilleure injectabilité et coulabilité du ciment et à favoriser la création d’une porosité interconnectée avec des pores de 10 à 100 pm indispensables à l’ostéo- conduction.
[0159] On sait qu’un ciment de scellement, une fois sec, doit présenter une résistance à la compression au moins égale à celle de l’os receveur. Sachant que le module de Young en compression de la couche organo-minérale aragonitique est de 141 MPa et que celui de l’os cortical est de 131 MPa, on comprend dès lors que le ciment est parfaitement adapté pour procurer un meilleur ancrage et une meilleure répartition des charges, ainsi qu’une meilleure résistance que les ciments classiques
[0160] La présence du carbonate de calcium carbonaté dans la formulation du ciment se justifie, en raison des propriétés de plasticité, d’adhésivité et de cohésion acquises par le carbonate de calcium lors de la mise en œuvre du procédé de carbonatation.
[0161] Les protéines solubles et insolubles, molécules "signal" qui stimulent la différenciation et la prolifération cellulaires ainsi que l’ostéogénèse, jouent un rôle capital dans l’édification de l’architecture osseuse. L’addition du carbonate de calcium carbonaté confère à l’ensemble une plasticité, une adhésivité, une malléabilité, favorisées par la sphéronisation des grains aragonitiques, rendant plus aisées la manipulation et l’insertion. [0162] L’adjonction d’un accélérateur de prise permet de modifier le temps de préparation, le temps de prise initiale et le temps de prise finale. L'émulsion colloïdale obtenue lors de l'étape (g) de sonication, ajoutée au mélange, permet d’obtenir une pâte fluide, homogène et stable.
[0163] Le ciment a été utilisé pour le scellement expérimental d’une tige d’endoprothèse dans le fût fémoral d’un veau. La radio post opératoire a montré une densification autour de la queue de prothèse, caractéristique de la présence du carbonate de calcium, composant majoritaire de la fraction minérale de la couche organo-minérale aragonitique interne, densification qui va progressivement s’atténuer lors de la transformation du ciment en os néoformé et se confondre avec celle de l’os receveur. La prothèse se comporte alors comme une prothèse impactée.
[0164] Les biopsies pratiquées à 4 mois ont montré la présence d’os néoformé autour de la tige de prothèse, sans amincissement de la corticale, signant la transformation du ciment en os spongieux et cortical autologues.
[0165] Ces constatations s’expliquent par la présence, entre autres, de glycoprotéines de faible poids moléculaire ayant des effets « BMP2 like » et par leurs propriétés ostéo-inductrices, des aminoglycosides ayant des propriétés antibiomimétiques, des pigments, des acides aminés et des protéines dont des glycosaminoglycanes.
[0166] EXEMPLE 2 : Substitut osseux modelable pour la reprise de prothèses ostéoarticulaires
[0167] On sait que lors d’une reprise de prothèse de hanche, de l’épaule ou de genou, l’élimination des résidus du ciment de méthacrylate de méthyle peut provoquer des délabrements importants des structures osseuses en raison de la nécessité de pratiquer des voies d’abord permettant d’éliminer la totalité du ciment résiduel. L’ostéosynthèse de reconstruction fait appel soit à des greffons autologues, soit à l’utilisation d’un substitut osseux synthétique, ce qui ne dispense pas de l’utilisation à nouveau, d’un ciment chirurgical pour sceller la prothèse. [0168] C’est la raison pour laquelle cet exemple est un substitut osseux qui sert non seulement à combler les pertes de substances occasionnées par la nécessité de pratiquer des voies d’abord, mais encore à sceller la nouvelle prothèse. La formulation du substitut de l'exemple est la suivante :
85 g poudre aragonitique obtenue lors de l'étape (c) de séparation réalisée par centrifugation et sphéronisée (granulométrie comprise entre 10 pm et 200 pm),
2,5 g biopolymères solubles obtenus lors de l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique,
2,5 g biopolymères insolubles obtenus lors des étapes (h) d'hydrolyse acide à froid et (i) de lavage et de super-centrifugation,
5 g carbonate de calcium carbonaté,
75 ml émulsion colloïdale obtenue lors de l'étape (g) de sonication,
5 g hydrogénophosphate de sodium.
[0169] La granulométrie de la poudre aragonitique est choisie pour favoriser la création d’une porosité ouverte et interconnectée, propice à une ostéo-conduction rapide, associée aux propriétés ostéo-inductrices du substitut osseux, et également à ses propriétés antibiomimétiques.
[0170] Diverses utilisations du substitut osseux de l'exemple sont présentées.
[0171] Reprise en milieu hospitalier d’un cas clinique critique, après échec de réduction de fracture de l’humérus après rupture du clou centro-médullaire avec sepsis à staphylocoques, fistulisé au coude.
[0172] Le substitut osseux a été utilisé, après ablation du matériel orthopédique fracturé, parage des tissus nécrosés et pose d’une plaque d’ostéosynthèse, sans antibioprophylaxie.
[0173] Les propriétés antibiomimétiques ont été confirmées par des contrôles de charges microbiennes portant sur le produit selon l’invention avant utilisation, qui ont mis en évidence une inhibition de la prolifération microbienne notamment sur les souches de Candida albicans, Aspergillus brasilensis, Staphilococus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis. [0174] Les suites opératoires ont montré la sédation de l’épisode infectieux et les radios post opératoires à 3 mois ont objectivé une restitution ad integrum du tissu osseux.
[0175] Le substitut osseux a également été utilisé en milieu hospitalier dans un autre cas clinique critique d’une reprise de traitement de fracture comminutive à petits fragments du tiers inférieur du fémur, de 15 cm de long, après échec du traitement orthopédique par clou centromédullaire et deux tentatives de greffes iliaques sur une durée de 2 ans, avec le tableau clinique suivant : rhabdomyolyse, coma et pronostic vital engagé. Après la pose d’un fixateur externe, l’ablation du matériel orthopédique et des séquestres osseux, le substitut osseux exemplifié a été modelé en forme de cylindre aux dimensions de la perte de substance et placé entre les fragments distal et proximal. Les suites opératoires à 4 mois ont permis un appui unipodal et une marche quasi normale à 7 mois. Le contrôle radiologique a montré la reconstruction non seulement de la corticale d’une épaisseur normale mais encore la perméabilisation du canal médullaire entre les fragments proximal et distal du fémur restauré.
[0176] Toutes ces observations ont mis en évidence les propriétés ostéo- inductrices du substitut osseux, ainsi que ses propriétés ostéo-conductrices et antibiomimétiques, de même que son aptitude à se placer sous la dépendance de la régulation systémique locale du receveur.
[0177] Les inventeurs proposent également l’utilisation du substitut osseux en chirurgie mini invasive, en cyphoplastie, en vertébroplastie, dans le traitement de l’ostéoporose, des fractures et tassements vertébraux.
[0178] Cliniquement on observe un durcissement rapide du substitut osseux à la température corporelle de 37°C en dépit de l’humidité du site opératoire.
[0179] D’autre part, la cohésion, la plasticité et les propriétés adhésives du substitut osseux, limitent considérablement les possibilités de fuites vasculaires dues à une démixtion.
[0180] Le substitut osseux de l'exemple peut être utilisé aussi en chirurgie maxillo- faciale et en stomatologie. [0181] EXEMPLE 3 : Préparation topique pour le traitement de dermatoses sévères rebelles
[0182] On sait que certaines formes de dermatoses telles que le psoriasis des coudes et du cuir chevelu, qui se développent par plaques sont quelques fois rebelles à tout traitement, y compris les topiques dermocorticoïdes. C’est la raison pour laquelle les inventeurs proposent une préparation adaptée au psoriasis en plaques. En effet, l’accélération de la kératogénèse produit un épaississement anarchique de la couche cornée de la peau, aboutissant à la formation de plaques hyperplasiques de kératine qui empêchent toute pénétration topique.
[0183] La formulation de la préparation topique de l'exemple est :
20 g poudre aragonitique obtenue lors de l'étape (c) de séparation réalisée par centrifugation et sphéronisée (granulométrie 50 nm à 10 pm),
2 g biopolymères solubles obtenus lors de l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique,
5 g urée,
10 g allantoïne,
3 g acide salicylique,
60 ml émulsion colloïdale obtenue lors de l'étape (g) de sonication,
1 ml mélange d’huiles essentielles et végétales
Excipients E/H QSP 100g
[0184] La formulation du mélange d’huiles essentielles et végétales entrant dans la composition de la préparation topique de l'exemple est la suivante :
1 ml Lavandula angustifolia
1 ml Chamaemelum nobile
1 ml Melaleuca alternifolia
1 ,5 ml Helychrisum italicum
1 ml Juniperus oxycedrus
1 ,5 ml Myrtus communis
20 ml Argania spinosa
50 ml Persea Americana
10 ml Borago officinal is,
13 ml Germe de blé [0185] Dans la pratique, on prépare une solution contenant 20 g de poudre aragonitique, 2 g de biopolymères solubles, 30 ml d’émulsion colloïdale, jusqu’à obtention d’un gel qui est réservé à une température comprise entre 2° et 5°C.
[0186] On prépare également un mélange contenant 5 g d’urée, 10 g d’allantoïne, 3 g d’acide salicylique et 30 ml d’émulsion colloïdale.
[0187] Le tout est mélangé pendant 30 minutes jusqu’à solubilisation complète, puis placé dans une étuve à 25°C pendant 24 heures et est agitée toutes les 6 heures, afin de contrôler le dégagement de C02. L’ensemble des composants est ensuite placé dans un mélangeur pour être mixé pendant 1 heure.
[0188] EXEMPLE 4 : Préparation topique pour le traitement du Vitiligo
[0189] On sait que le Vitiligo est une dermatose non contagieuse, grave, difficile et longue à traiter, à retentissement psycho-social très important, qui touche 0,5 à 2% de la population mondiale et dont l’évolution est imprévisible. Elle se traduit par une dépigmentation de la peau, soit par plaques diffuses, par zones ou généralisée. Elle se manifeste par l’apparition de plaques blanches dues à la disparition des mélanocytes, cellules qui fabriquent la mélanine, principal pigment de la peau.
[0190] Les possibilités thérapeutiques sont limitées. Elles vont de l’utilisation des UVB, en passant par les dermocorticoïdes et les biosimilaires, les préparations topiques et en dernier recours à des greffes chirurgicales de mélanocytes ou des greffes de peau mince. Il n’existe pas à ce jour de traitement universel efficace contre le Vitiligo. De plus, la plupart des traitement proposés peuvent présenter des effets secondaires gênants ou sérieux. En outre, le Vitiligo s’accompagne souvent d’une altération et d’un amincissement du revêtement cutané, dus à une fragilité des kératinocytes qui sont éliminés accidentellement par microtraumatismes au niveau les zones de frottements. On note aussi la disparition des mélanocytes et des bulbes pileux, réservoirs de mélanine, due au dysfonctionnement de leur maturation, en raison d’un problème de cohésion et d’attachement avec la membrane basale et les kératinocytes adjacents.
[0191] Compte tenu de la physiopathologie du Vitiligo, les inventeurs proposent une préparation topique destinée à modifier le métabolisme de la zone dermocutanée en induisant la maturation, le recrutement, la prolifération et la différenciation des cellules souches de tous types, en particulier les mélanocytes, les kératinocytes et les fibroblastes.
[0192] Ces inductions métaboliques locales se manifestent également par une recoloration progressive du revêtement cutané, résultant d’une angiogenèse capillaire.
[0193] La formulation de la préparation topique de l'exemple est la suivante :
20 g poudre aragonitique obtenue lors de l'étape (c) de séparation réalisée par centrifugation et sphéronisée (Granulométrie comprise entre 50 nm et 10 pm),
2 g biopolymères solubles obtenus lors de l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique,
5 g biopolymères insolubles obtenus des étapes (h) d'hydrolyse acide à froid et (i) de lavage et de super-centrifugation,
40 ml émulsion colloïdale obtenue lors de l'étape (g) de sonication,
0,5 ml mélange d'huiles essentielles et végétales,
5 g urée
Excipient H/E qsp 100 g
[0194] Dans la pratique, 20 g de poudre aragonitique sphéronisée, 2 g de biopolymères solubles, 5 g de biopolymères insolubles, 30 ml d’émulsion colloïdale sont mélangés jusqu’à l’obtention d’un gel qui est réservé à une température comprise entre 2° et 5°C.
[0195] On prépare également 5 g d’urée, 10 ml d’émulsion colloïdale, qui sont mélangés pendant 30 minutes jusqu’à solubilisation complète.
[0196] Tous les composants sont ensuite mixés dans un mélangeur pendant 1 heure : la préparation obtenue est placée dans une étuve à une température de 25°C pendant 24 heures, avec agitation toutes les 6 heures afin de contrôler le dégagement de CO2.
[0197] Les composants de la préparation topique, sont, entre autres, des glycoprotéines de faible poids moléculaire ayant des propriétés BMP like, dont TNEb, EGF, TGF , qui ont des activités biologiques dans la synthèse, la prolifération, la maturation de toutes les lignées cellulaires de la couche basale de l’épiderme et plus particulièrement sur les mélanocytes. Elle contient aussi naturellement des pigments libres comme le bêta-carotène, précurseur de la vitamine A, qui joue un rôle essentiel dans la synthèse de la mélanine ; également des pigments mélaniques associés à des porphyrines, à des enzymes, sous formes de métallo-porphyrines, métalloenzymes, qui interviennent dans la coloration des tissus biologiques.
[0198] D’autre part, le mélange d’huiles essentielles et végétales de la préparation topique de l'exemple a la formulation suivante pour 100ml :
Onagre 45 ml
Germe de blé 50 ml,
Piperine 1 ml,
Helycrisum italicum 1 ml,
Melaleuca alternifolia 1 ml
Lavandula angustifolia 1 ml,
Salvia oficinalis 1 ml
[0199] Ces extraits sont destinés à potentialiser toutes les propriétés des composants du topique selon l’invention.
[0200] On note la présence dans la poudre aragonitique de la quasi -totalité des acides aminés dont la tyrosine et la cystéine indispensables à la synthèse des mélanines. Tous ces éléments associés au calcium ultra pur, jouent un rôle fondamental dans la réduction de l’inflammation, dans le renforcement du système immunitaire local, dans la recoloration des téguments et dans la biodisponibilité des constituants.
[0201] Les propriétés pharmacologiques et les interactions des composants naturels de la préparation topique, ont aussi une action sur la stimulation et la multiplication des mélanosomes ainsi que sur le transfert de la mélanine matricielle présente dans les mélanosomes vers les kératinocytes environnants, qui assurent le turn-over de la population épidermique ainsi que la régénération des follicules pileux, réservoirs de mélanine.
[0202] D’autre part, on sait que les molécules solubles d’intérêt contenues dans l’émulsion colloïdale après sonication, telles entre autres que les protéines de faible poids moléculaire apparentées aux facteurs de croissance ou que les cytokines, qui ont par ailleurs des propriétés pléiotropiques, inhibent la peroxydation des lipides en empêchant la fixation de l’oxygène singulet (102 ) sur les doubles liaisons des acides gras polyinsaturés. Ceci a pour conséquence d’empêcher la détérioration de ces acides, des protéines et des biomolécules en général, détérioration responsable de la production de nouveaux radicaux libres nocifs pour le revêtement cutané.
[0203] La préparation topique est préconisée dans le traitement de vitiligo naïfs de tout traitement préalable ; toutefois lors de vitiligos anciens ou ayant fait l’objet de traitements itératifs sans résultats visibles, qui provoquent généralement la migration des mélanocytes et des kératinocytes ainsi que la disparition des bulbes pileux, il est possible, dans le but de provoquer une pénétration plus active et plus profonde du topique selon l’invention jusqu’à la couche basale, de combiner l’application de ce dernier à l’utilisation d’un dispositif médical de ionophorèse dont le principe est de favoriser la pénétration transcutanée d’un produit ionisable par l’application sur la peau d’un courant galvanique de faible intensité à l’aide d’une électrode provoquant la migration des ions dans la direction choisie selon la polarité de l’électrode.
[0204] EXEMPLE 5 : Préparation cosmétique pour la correction des rides et dépressions dermiques.
[0205] Les inventeurs proposent l’utilisation cosmétique de la composition selon l’invention pour la correction des ptoses, des dépressions dermocutanées, des rides profondes et superficielles, de la prévention du vieillissement corporel.
La formulation de la composition de l'exemple est la suivante :
29 g poudre aragonitique obtenue lors de l'étape (c) de séparation réalisée par centrifugation et sphéronisée (granulométrie de 10 à 45 pm)
1 g biopolymères solubles obtenus lors de l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique,
70 ml de gel de carboxylmethyl cellulose sodium, lui-même composé de :
68 ml émulsion colloïdale obtenue lors de l'étape (g) de sonication et 2 g de carboxylmethyl cellulose sodium. [0206] Dans la pratique, on prépare d’abord une solution de carboxylmethyl cellulose sodium : dans un mélangeur, on met 68 ml d’émulsion colloïdale, 2 g de carboxylmethyl cellulose sodium. L’ensemble est agité pendant 20 minutes et laissé au froid à 5°C pendant 12 heures jusqu’à formation d’un gel.
[0207] Au bout de ce délai, 29 g de poudre aragonitique sphéronisée et 1 g de biopolymères solubles sont ensuite mélangés aux 70 ml de gel précédemment obtenus.
[0208] On conditionne la composition dans des seringues de 1 ml, munies d’aiguilles vissées de 0,4 mm/20 mm, placées ensuite dans un double emballage avant d’être stérilisées aux rayonnements gamma à 25 kGy.
[0209] L’injection de la composition dans les rides profondes ou superficielles, dans les ptoses dermocutanées, induit, en dehors de ses propriétés volumatrices, une stimulation de la maturation et de la prolifération des fibroblastes producteurs de collagène de type I responsable de la tonicité, la souplesse et la fermeté de la peau.
[0210] La composition a des avantages significatifs de par sa composition physico-chimique, les propriétés de ses composants naturels qui se traduisent par une absence de phénomènes douloureux et inflammatoires post opératoires. De plus, la composition exemplifiée se place sous la dépendance de la régulation systémique locale du receveur et produit ses effets orrecteurs pendant une durée prolongée.
[0211] EXEMPLE 6 : Préparation dermocosmétique protectrice et accélératrice de bronzage
[0212] Le bronzage est une réaction de défense et d’adaptation de la peau face aux agressions du soleil et plus précisément aux UVA et UVB, en colorant la peau par une production accrue de mélanine par les mélanocytes : c’est le bronzage. L’exposition immodérée au soleil provoque l’emballement du système, et le stress oxydatif qui en résulte induit le coup de soleil, des allergies, des taches pigmentaires, des brûlures, le vieillissement cutané, sans oublier le fait qu’une exposition répétée et exagérée provoque à terme une altération des micro ARN des cellules qui peut aboutir à leur détérioration et à l’apparition de cancers cutanés.
[0213] C’est la raison pour laquelle, il a été mis au point des produits de protection contenant plusieurs types de composants qui aident les mélanocytes à lutter contre le stress oxydatif et à produire davantage de mélanines. Chaque individu produit plus ou moins de mélanines ; celles-ci sont inégalement réparties selon les races et les types de peau. Il existe deux sortes de mélanines produites par les mélanocytes, les eumélanines de couleur noire et les phéomélanines de couleur rouge et jaune : les eumélanines résistent mieux aux agressions du soleil et sont produites en plus grandes quantités par les individus à peau noire ou brune, les phéomélanines prédominent chez les individus à peau claire ou rousse. Elles sont plus rapidement altérées par les agressions du soleil et protègent moins la peau du stress oxydatif occasionné par le soleil.
[0214] Les inventeurs ont mis en évidence dans la description du procédé selon l’invention, la présence d’acides gras polyinsaturés, de tyrosine et de cystine qui favorisent la synthèse des mélanines, des métalloenzymes qui jouent un rôle fondamental dans la coloration de la peau, des cytokines renforçant le système immunitaire local, des mélanines matricielles produites lors de la stimulation des mélanocytes.
[0215] C’est la raison pour laquelle la composition de cet exemple pour la préparation d’une crème solaire présente la formulation suivante :
10 g poudre aragonitique obtenue lors de l'étape (c) de séparation réalisée par centrifugation et sphéronisée (granulométrie entre 50 nm et 10 pm),
5 g biopolymères insolubles obtenus lors des étapes (h) d'hydrolyse acide à froid et (i) de lavage et de super-centrifugation,
1 g biopolymères solubles obtenus lors de l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique,
20 ml émulsion colloïdale obtenue lors de l'étape (g) de sonication,
10 ml solution de Coco Nucifera concentrée
0,05 ml Palmitate d’ascorbyl,
Excipient qsp pour 100 ml [0216] Dans la pratique, on prépare 10 g de poudre aragonitique sphéronisée, 5 g de biopolymères insolubles, 1 g de biopolymères solubles, 20 ml d’émulsion colloïdale, 10 ml de solution de Coco Nucifera concentrée, 0,05 ml de palmitate d’ascorbyl. L’ensemble est placé dans un mélangeur et mixé pendant 1 heure. On rajoute ensuite à cet ensemble l’excipient : le tout est mixé pendant 1 heure jusqu’à l’obtention d’une crème.
[0217] L’indice de protection relevé dans les conditions expérimentales se situe entre 10 et 40.
[0218] La composition a été testée sur une dizaine d’individus à peau claire allant du roux au blond, dont l’exposition solaire se traduisait toujours par des érythèmes, voire des brûlures et une absence de bronzage. L’application de la composition de l'exemple sur une période de 10 jours avec un ensoleillement estival a permis à la totalité des individus testés, non seulement d’éviter la survenue d’érythèmes ou de brûlures mais encore d’assurer un bronzage uniforme résultant d’une stimulation de la mélanogénèse.
[0219] Les étapes du procédé de l’invention, ont permis d’obtenir la totalité des molécules actives contenues dans les couches organo-minérales aragonitiques internes et calcitiques externes des coquilles des mollusques cités en référence.
[0220] EXEMPLE 7 : Production d’un soluté injectable utilisable en biothérapie
[0221] On sait par l’étude de l’anatomie, de la physiopathologie, de la reproduction et l’interaction avec leur biotope que les mollusques bivalves cités dans le présent brevet construisent leurs coquilles en synthétisant les composants organiques et inorganiques qui sont excrétés dans la cavité extra-palléale pour former le fluide extra-palléal selon deux processus séquentiels : un premier processus cellulaire comprenant des transports d’ions, des synthèses de glycoprotéines et un second processus physicochimique.
[0222] En résultat de ces processus, on trouve dans les couches aragonitiques internes et calcitiques externes toutes les molécules actives décrites dans le présent brevet ; c’est ainsi que dans la couche aragonitique interne, on trouve des facteurs de croissance, des glycoprotéines de faible poids moléculaire (8 à 50 kDa), des interleukines, des chimiokines, des TNF (groupe issu d’un gène ancestral commun), des TGF, des prostaglandines, etc...
[0223] Les observations pré-cliniques et cliniques semblent démontrer que les cytokines contenues dans les fractions organiques des couches organo-minérales aragonitiques et calcitiques des mollusques cités ont un mode d’action paracrine en se mettant sous la dépendance systémique locale de l’hôte receveur. Ces cytokines, qui proviennent des activités métaboliques de défenses immunitaires des mollusques bivalves cités, se retrouvent dans le fluide extra-palléal et font partie des molécules solubles des couches aragonitiques internes et calcitiques externes de ces mollusques.
[0224] C’est la raison pour laquelle les inventeurs proposent la mise en œuvre d’une solution injectable utilisable en biothérapie, notamment dans certaines pathologies auto-inflammatoires chroniques telles que la polyarthrite rhumatoïde, la maladie de Crohn, l’artériosclérose, le diabète de type II, la spondylarthrite ankylosante, la rectocolite hémorragique, le psoriasis sévère et le rhumatisme psoriasique.
[0225] On sait que le psoriasis résulte de l’interaction entre les kératinocytes, les cellules dendritiques et les lymphocytes T à l’origine d’un processus d’activation réciproque. Les cytokines inflammatoires produites par ces 3 types cellulaires, le TNFa, NL-23 et l’IL-17 sont prépondérantes dans cette pathologie, par la tempête cytokinique qu’elles produisent. Les traitements immunobiologiques ont pour propriétés de bloquer les effets de ces 3 cytokines dont l’activation favorise l’apparition et la pérennisation du psoriasis, l’étiologie de celui-ci restant multifactorielle. Ces thérapeutiques bloquent l’action des cytokines grâce à des anticorps monoclonaux anti-cytokines qui visent à inhiber les fonctions des cellules dendritiques en empêchant la production d’IL-23, ainsi que les interleukines IL-17 et IL-22.
[0226] Les agents biologiques de la biothérapie dans le traitement des maladies inflammatoires ont prouvé leur efficacité mais ne sont pas dénués d’effets indésirables comme l’a montré une récente méta-analyse qui fait état de réactivation de tuberculose latente, de survenue de lymphome, d’infections atypiques et opportunistes, infections virales (zona), hépatite B ou C, maladie démyélinisante, néoplasique, cardiovasculaire, hépatotoxicité, cytopénie, hypercholestérolémie, ainsi que des réactions au site d’injection et des complications pulmonaires et digestives.
[0227] Les étapes de percolation à chaud, de centrifugation, de concentration, de sonication, de traitement par CO2 supercritique permettent d’extraire des molécules actives telles que des cytokines et des facteurs de croissance. Ces molécules ont des propriétés pléiotropiques qui déterminent plusieurs caractères phénotypiques et à activité systémique locale, participant à la régulation homéostasique tissulaire, notamment anti-inflammatoire, sur des cytokines de l’inflammation telles que le TNFa, les interleukines IL-23, IL-17, communes à de nombreuses pathologies.
[0228] Le soluté injectable de cet exemple, utilisable en biothérapie par injections intra-musculaires, intra-veineuses et/ou sous-cutanées, peut être formulée comme ceci :
2 g biopolymères solubles obtenus lors de l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique,
Emulsion colloïdale obtenue lors de l'étape (g) de sonication qsp pour 100 ml
[0229] Dans la pratique, les biopolymères solubles sont ajoutés à l’émulsion colloïdale puis placés dans une étuve à 25°C pendant 12 h, avec agitation toutes les 6 h jusqu’à dissolution complète. L’ensemble est ensuite conditionné dans des ampoules serties qui sont stérilisées aux rayonnements gamma à 25 kGy.
[0230] EXEMPLE 8 : Milieu de culture pour la maturation et la prolifération de cellules souches et cellules progénitrices animales et humaines
[0231] On sait que l’édification, la croissance et la réparation des tissus, organes et systèmes, dépendent de l’action des différents facteurs de croissance ou cytokines, alertés par les marqueurs des cellules souches en premier lieu, puis par ceux des cellules progénitrices.
[0232] On sait par ailleurs que les cellules souches multipotentes donnent naissance à plusieurs lignées cellulaires destinées aux différents tissus, organes et systèmes. Les cellules progénitrices sont un stade avancé des cellules souches, bien qu’ayant des propriétés de division limitées ; elles sont à la base de la réparation tissulaire et, du fait de leur mobilité réduite, se trouvent à proximité des tissus cibles.
[0233] Des études in vitro ont mis en évidence l’action potentialisatrice des molécules solubles contenues dans les fractions organiques des couches aragonitique interne et calcitique externe des mollusques cités.
[0234] Les inventeurs proposent donc également la préparation de milieux de culture pour la maturation et la prolifération de cellules souches et cellules progénitrices animales et humaines.
[0235] Un tel milieu comprend :
- 5 g poudre aragonitique obtenue lors de l'étape (c) de séparation réalisée par centrifugation et sphéronisée (granulométrie entre 50 nm et 10 pm),
- 2 g biopolymères solubles obtenus lors de l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique,
- 0,4 g glucose,
- 2 ml sérum humain autologue, et
- Emulsion colloïdale obtenue lors de l'étape (g) de sonication : qsp 100 g.
[0236] Dans la pratique, un tel milieu de culture est placé dans un bioréacteur, qui peut être mis en aérobie ou en anaérobie, dans lequel on introduit des cellules progénitrices autologues, musculaires ou provenant du périoste, aux fins de multiplication de celles-ci, pour une incubation d’une durée de 0 à 15 jours.
[0237] Dans la pratique, les cellules progénitrices sont obtenues par biopsies, extraites par digestion enzymatique selon le procédé habituel. Au terme de l’incubation, la préparation est utilisable chez le sujet donneur dans des indications telles que la régénération tissulaire de tous types : grands brûlés, plaies étendues, destructions musculaires, pertes de substance étendues, parodontopathies. L’utilisation peut être faite au cours d’un acte chirurgical courant, soit par injection, soit en chirurgie mini-invasive. [0238] EXEMPLE 9 : Production d’un capsule pour administration "per os"
[0239] Dans le but de poursuivre par une administration "per os" le traitement par injection des pathologies citées plus haut, les inventeurs proposent la composition suivante :
- 60 g poudre d’aragonite sphéronisée,
- 1 g biopolymères solubles,
- 2 g biopolymères insolubles,
- 10 g poudre acerola, et
- Emulsion colloïdale qsp pour 100 g.
[0240] Dans la pratique, on mélange la poudre d’aragonite, les biopolymères solubles et insolubles, ainsi que la poudre d’acerola à l’émulsion colloïdale. L’ensemble est mixé pendant 10 minutes, puis placé dans une étuve à 30°C pendant 3 heures jusqu’à obtention d’une pâte d’une viscosité de 102 Pa.S.
[0241] L’ensemble est conditionné dans des capsules végétales acido-résistantes d’une contenance de 0,8 ml à dissolution retardée.

Claims

Revendications
[Revendication 1] Procédé d'isolation des molécules contenues dans une couche organo-minérale aragonitique et/ou dans une couche organo-minérale calcitique d'une coquille d'un mollusque marin bivalve comprenant les étapes suivantes :
(a) Broyage de la couche organo-minérale aragonitique et/ou de la couche organo-minérale calcitique pour obtenir une poudre aragonitique et/ou une poudre calcitique ;
(b) Percolation à chaud de la poudre aragonitique et/ou de la poudre calcitique pour obtenir :
- d'une part une solution saturée aragonitique et/ou une solution saturée calcitique, ladite solution saturée aragonitique comprenant une phase liquide aragonitique et une phase solide aragonitique et ladite solution saturée calcitique comprenant une phase liquide calcitique et une phase solide calcitique, et
- d'autre part une poudre aragonitique de percolation et/ou une poudre calcitique de percolation ;
(c) Séparation de la solution saturée aragonitique et/ou de la solution saturée calcitique pour récupérer :
- d'une part la phase liquide aragonitique et/ou la phase liquide calcitique, et
- d'autre part la phase solide aragonitique et/ou la phase solide calcitique ; et
(d) Traitement par CO2 supercritique de la poudre aragonitique de percolation et/ou de la poudre calcitique de percolation pour obtenir :
- d'une part une poudre aragonitique traitée par CO2 supercritique et/ou une poudre calcitique traitée par CO2 supercritique, et
- d'autre part tout ou partie des molécules solubles contenues dans la couche organo-minérale aragonitique et/ou dans la couche organo-minérale calcitique.
[Revendication 2] Procédé selon la revendication 1 dans lequel le mollusque marin bivalve est choisi parmi Pinctada Maxima, Pinctada Margaritifera, Pinctada Martensi, Pinctada Fucata, Tridacnae Gigas, Tridacnae Maxima, Tridacnae Hippopus Hippopus, Tridacnae Derasa, Tridacnae Tevaroa, Tridacnae Crocea, Tridacnae Squamosa, Tridacnae Porcelanus et leurs mélanges.
[Revendication 3] Procédé selon l’une des revendications précédentes dans lequel l'étape (b) de percolation à chaud est réalisée par tamisage par voie humide avec un liquide dont la température est supérieure à 30°C.
[Revendication 4] Procédé selon la revendication 3 dans lequel le liquide mis en œuvre dans l'étape (b) de percolation à chaud est une solution aqueuse, en particulier une solution aqueuse comprenant du méthanol, une solution aqueuse comprenant une solution d'urée ou leur mélange.
[Revendication 5] Procédé selon l’une des revendications précédentes dans lequel l'étape (c) de séparation est réalisée par centrifugation et la phase liquide récupérée est nommée surnageant et la phase solide récupérée est nommée culot.
[Revendication 6] Procédé selon la revendication 5 comprenant, après l'étape (c) de séparation réalisée par centrifugation, les étapes suivantes :
(e) Filtration du surnageant aragonitique et/ou du surnageant calcitique pour obtenir un surnageant aragonitique filtré et/ou un surnageant calcitique filtré ;
(f) Concentration du surnageant aragonitique filtré et/ou du surnageant calcitique filtré pour obtenir un concentrât aragonitique et/ou un concentrât calcitique ;
(g) Sonication du concentrât aragonitique et/ou du concentrât calcitique pour obtenir une émulsion colloïdale aragonitique et/ou une émulsion colloïdale calcitique.
[Revendication 7] Procédé selon l’une des revendications précédentes comprenant en outre, après l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique, les étapes suivantes :
(h) Hydrolyse acide à froid de la poudre aragonitique traitée par CO2 supercritique et/ou de la poudre calcitique traitée par CO2 supercritique pour extraire les molécules insolubles présentes dans lesdites poudres ; et
(i) Lavage et super-centrifugation pour isoler et récupérer lesdites molécules insolubles.
[Revendication 8] Composition comprenant :
- la phase solide aragonitique et/ou la phase solide calcitique récupérées lors de l'étape (c) de séparation telle que définie dans la revendication 1 , et au moins un composant choisi parmi :
- les molécules solubles obtenues lors de l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique telle que définie dans la revendication 1 ,
- l'émulsion colloïdale aragonitique et/ou l'émulsion colloïdale calcitique, obtenues lors de l'étape (g) de sonication telle que définie dans la revendication 6, et
- les molécules insolubles récupérées lors des étapes (h) d'hydrolyse acide à froid et (i) de lavage et de super-centrifugation telles que définies dans la revendication 7.
[Revendication 9] Composition selon la revendication 8 pour son utilisation comme médicament.
[Revendication 10] Utilisation de la composition selon la revendication 8 comme milieu de culture, en particulier comme milieu de culture pour la maturation et/ou la prolifération des cellules souches ou cellules progénitrices.
[Revendication 11] Utilisation cosmétique de la composition selon la revendication 8 pour la correction des ptoses, des dépressions dermocutanées, des rides profondes et superficielles, et/ou de la prévention du vieillissement corporel.
[Revendication 12] Composition comprenant :
- les molécules solubles obtenues lors de l'étape (d) de traitement par CO2 supercritique telle que définie dans la revendication 1 , et
- l'émulsion colloïdale aragonitique et/ou l'émulsion colloïdale calcitique obtenues lors de l'étape (g) de sonication telle que définie dans la revendication 6.
[Revendication 13] Composition selon la revendication 12 pour son utilisation comme médicament.
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Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2777190B1 (fr) * 1998-04-14 2001-07-27 Georges Camprasse Procede d'extraction, identification des principes actifs contenus dans la coquille interne et externe des mollusques marins, leur utilisation dans des preparations a visee thera peutique,diagnostic et cosmetique
FR2856303B1 (fr) * 2003-06-20 2007-09-07 Innovation Et De Rech Applique Utilisation therapeutique de lipides extraits de nacre
FR2880277B1 (fr) * 2005-01-04 2007-04-06 Georges Camprasse Preparations a usage orthopedique et dermatologique, destinees aux equides, bovides et autres animaux domestiques a base de biopolymeres marins, solubles et insolubles, et de biocritaux d'aragonite
FR3016293B1 (fr) * 2014-01-10 2019-12-20 Mbp (Mauritius) Ltd Procede de fabrication de dispositifs d'osteosynthese, dispositifs d'osteosynthese et implants en materiau hybride semi-synthetique obtenu par modification structurale des composants d'un biomateriau naturel marin
FR3037801B1 (fr) * 2015-06-23 2017-08-11 Jd Invest Materiau semi-synthetique pulverulent, obtenu par modification de la composition d'un biomateriau naturel marin, son procede de fabrication, ses applications
CN106366156A (zh) * 2016-08-27 2017-02-01 广东澳珍药业有限公司 一种超临界co2萃取珍珠蛋白液的方法

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