EP3729091A1 - Detection of autoantibodies for diagnosing degenerative diseases of the skeletal system - Google Patents

Detection of autoantibodies for diagnosing degenerative diseases of the skeletal system

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EP3729091A1
EP3729091A1 EP18814627.8A EP18814627A EP3729091A1 EP 3729091 A1 EP3729091 A1 EP 3729091A1 EP 18814627 A EP18814627 A EP 18814627A EP 3729091 A1 EP3729091 A1 EP 3729091A1
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EP
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fragment
degradation product
detecting
osteoarthritis
autoantibody
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EP18814627.8A
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Andreas R. Klatt
Johannes Ruthard
Benedikt Ostendorf
Matthias Schneider
Georg Pongratz
Gabriele Hermes
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Universitaet zu Koeln
Original Assignee
Universitaet zu Koeln
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Abstract

The invention relates to a method for diagnosing arthritis, comprising the detection of an autoantibody, which is associated with arthritis, to a method for diagnosing a degenerative disease of the skeletal system, comprising the detection of an autoantibody against thrombospondin-4 or COMP, to a method for diagnosing arthritis, comprising excluding the presence of an autoantibody against collagen II, to a kit for diagnosing arthritis or a degenerative disease of the skeletal system, comprising a detection agent for an autoantibody, to the use of the kit for diagnosing arthritis or a degenerative disease of the skeletal system, to an active ingredient for use for treatment or preventing autoimmune-associated arthritis and to the diagnostic method for selection of subjects for therapy.

Description

Nachweis von Autoantikörpern zur Diagnose von degenerativen Erkrankungen des Skelettsystems  Detection of autoantibodies for the diagnosis of degenerative diseases of the skeletal system
Bei der Arthrose handelt es sich um die häufigste degenerative Gelenkerkrankung weltweit. Etwa zwei Drittel der Menschen über 65 Jahre sind von der Erkrankung betroffen. Die Ätiologie der Arthrose ist weitestgehend unbekannt. Zu den wichtigsten Risikofaktoren der Arthrose zählen Alter, Überbelastung und genetische Prädisposition. Derzeit existiert keine krankheitsmodifizierende, medikamentöse Therapie und grundlegende Probleme bei der Entwicklung von Medikamenten sind die unbekannte Ätiologie und die komplexen Pathomechanismen der Arthrose. Osteoarthritis is the most common degenerative joint disease worldwide. About two-thirds of people over the age of 65 are affected by the disease. The etiology of arthrosis is largely unknown. The most important risk factors for osteoarthritis include age, overwork and genetic predisposition. There is currently no disease modifying drug therapy and basic drug development problems are the unknown aetiology and the complex pathomechanisms of osteoarthritis.
Ein weiteres Problem bei der Entwicklung eines krankheitsmodifizierenden Medikaments für die Arthrose ist das Fehlen sensitiver biochemischer Marker, mit denen der Erfolg einer Therapie geprüft werden kann. Die Diagnose der Arthrose erfolgt derzeit durch anamnestische Daten, Ausschluss anderer Gelenkerkrankungen, radiologische Untersuchungen und Athroskopie. Die bildgebenden Untersuchungen führen zu einer Belastung des Patienten, sind mit hohem Aufwand und Kosten verbunden, liefern jedoch nur eine grobe Aussage über das Erkrankungsstadium und können nur die späteren Krankheitsstadien darstellen. Eine Therapie- bzw. Verlaufskontrolle sowie Einteilung des Krankheitsstadiums ist mit den bisherigen Methoden kaum möglich. Die Identifikation und Validierung eines knorpel- oder knochenspezifischen Moleküls als biochemischen Marker der Arthrose ist bisher nicht gelungen. Somit existieren derzeit keine validen biochemischen Marker zur Diagnose der Arthrose.  Another problem with the development of a disease-modifying drug for osteoarthritis is the lack of sensitive biochemical markers that can be used to test the success of a therapy. The diagnosis of arthrosis is currently based on anamnestic data, exclusion of other joint diseases, radiological examinations and atheroscopy. The imaging studies lead to a burden on the patient, are associated with high costs and costs, but provide only a rough statement about the disease stage and can only represent the later stages of disease. A therapy or follow-up and classification of the disease stage is hardly possible with the previous methods. The identification and validation of a cartilage or bone specific molecule as a biochemical marker of osteoarthritis has not been successful. Thus, there are currently no valid biochemical markers for the diagnosis of osteoarthritis.
Dean et al. (2014) beschreiben die Messung von Autoantikörper im präklinischen Stadium von rheumatoider Arthritis.  Dean et al. (2014) describe the measurement of autoantibodies in the preclinical stage of rheumatoid arthritis.
Stoll et al. (2011 ) beschreiben die Autoantikörper-Produktion bei juveniler idiopathischer Arthritis als Marker für den Krankheitsverlauf. Es wurden Autoantikörper gegen eine Vielzahl von Antigenen bestimmt, darunter auch Proteine der extrazellulären Matrix.  Stoll et al. (2011) describe autoantibody production in juvenile idiopathic arthritis as a marker of disease progression. Autoantibodies to a variety of antigens have been identified, including extracellular matrix proteins.
Jescke et al. beschreiben Thrombospondin-4 als Bestandteil von Gelenkknorpel. Die Autoren haben auch die Konzentration von Thrombospondin-4 im Serum von Jescke et al. describe thrombospondin-4 as a component of articular cartilage. The authors also have the concentration of thrombospondin-4 in the serum of
Patienten mit Arthrose gemessen. Die Thrombospondin-4-Konzentration ist gegenüber gesunden Kontroll-Probanden nicht signifikant verschieden und daher kein valider Biomarker. Patients with osteoarthritis measured. The thrombospondin-4 concentration is not significantly different from healthy control subjects and therefore not a valid biomarker.
Somit ist im Stand der Technik die Bestimmung von Autoantikörpern zur Diagnose von rheumatoider Arthritis, nicht jedoch von Arthrose bekannt. Während es sich bei den klassischen Rheumafaktoren um Antikörper (meist der Klasse IgM) handelt, welche die Fc-Region anderer Antikörper erkennen, sind in letzter Zeit vermehrt Autoantikörper in den Fokus gerückt, die gegen Antigene gerichtet sind, welche im Laufe von Degenerationsprozessen von Proteinen freigesetzt werden. Flierzu gehören, wie in Stoll et al. (2011 ) beschrieben, auch Komponenten der extrazellulären Matrix. Die wesentlichen Merkmale der vorliegenden Erfindung, nämlich die Bestimmung von Autoantikörper gegen Thrombospondin-4, COMP und/oder CLEC3A bei der Arthrose, sind jedoch nicht im Stand der Technik beschrieben.  Thus, the determination of autoantibodies for the diagnosis of rheumatoid arthritis but not osteoarthritis is known in the art. While classical rheumatoid factors are antibodies (usually IgM class) that recognize the Fc region of other antibodies, autoantibodies targeting antigens in the course of protein degeneration processes have recently come into focus be released. Belong to Flierzu, as in Stoll et al. (2011), also components of the extracellular matrix. However, the essential features of the present invention, namely the determination of autoantibodies against thrombospondin-4, COMP and / or CLEC3A in osteoarthritis, are not described in the prior art.
Somit besteht ein Bedarf an Verfahren, die die Bestimmung von Arthrose bzw. von degenerativen Erkrankungen des Skelettsystems im Allgemeinen bei einem Subjekt erlauben. Weiterhin besteht ein Bedarf an Verfahren, die eine Beurteilung des Erkrankungsstadiums sowie eine Therapie- bzw. Verlaufskontrolle erlauben.  Thus, there is a need for methods that allow for the determination of osteoarthritis or degenerative diseases of the skeletal system generally in a subject. Furthermore, there is a need for methods that allow assessment of the stage of disease as well as a therapy or follow-up.
Die vorliegende Erfindung beschreibt Verfahren, die den Nachweis von Arthrose bei einem Individuum sowie die Beurteilung des Stadiums und Fortschritts der Arthrose erlauben. Die hier genannten Erfinder haben überraschenderweise entdeckt, dass Arthrose mit der Bildung von Autoantikörpern gegen Bestandteile von Knorpel oder Knochen und deren Degradationsprodukte assoziiert ist. Bei der Degeneration des Knorpels oder des Knochens kommt es zur kontinuierlichen Freisetzung von Matrixbestandteilen wie z. B. Thrombospondin-4 (TSP-4), COMP und CLEC3A. Da das Knorpelgewebe dem Immunsystem nur minder präsentiert wird, kann es im Verlauf der Erkrankung zur Stimulierung und Bildung von Autoantikörpern gegen Bestandteile von Knorpel oder Knochen bzw. gegen Neoepitope, die im Verlauf der Erkrankung bei der proteolytischen Degradation dieser Bestandteile entstehen, kommen. Dabei gehen die Erfinder davon aus, dass es in Abhängigkeit von der Menge der Freisetzung von Knorpelmatrixproteinen, z. B. TSP-4, COMP und/oder CLEC3A, zu einer Bildung von Autoantikörpern gegen diese Matrixproteine kommt. Die hier genannten Erfinder konnten im Serum von Arthrose-Patienten überraschenderweise anti-TSP-4-Autoantikörper nachweisen. Zudem wurden im Serum von weiteren Arthrose-Patienten autoreaktive Banden nachgewiesen, die deutlich kleiner als Volllängen-TSP-4 sind. Hierbei handelt es sich wahrscheinlich um Degradationsprodukte von TSP-4. Alternativ oder zusätzlich konnten die hier genannten Erfinder im Blut von Arthrose-Patienten überraschenderweise anti-COMP- Autoantikörper und/oder anti-CLEC3A-Autoantikörper nachweisen, wobei ein kombinierter Nachweis von anti-TSP-4-Autoantikörpern und anti-COMP- Autoantikörpern und/oder anti-CLEC3A-Autoantikörpern im Vergleich zu Einzelnachweisen der Autoantikörper zu einer erhöhten Nachweisrate von Arthrose führte. Bei gesunden Probanden konnten keine anti-TSP-4- und anti-CLEC3A- Autoantikörper nachgewiesen werden, und anti-COMP-Autoantikörper wurden mit sehr geringer Häufigkeit nachgewiesen. Darüber hinaus fanden die hier genannten Erfinder, dass bei keinem der Subjekte, bei denen Arthrose mit herkömmlichen Verfahren diagnostiziert worden war, anti-Kollagen Il-Autoantikörper nachgewiesen werden konnten, während bei Subjekten, bei denen Arthrose mit herkömmlichen Verfahren nicht diagnostiziert worden war, anti-Kollagen Il-Autoantikörper nachgewiesen werden konnten. Diese Befunde sind deswegen so überraschend, als bei Arthrose bisher kein Zusammenhang mit der Bildung von Autoantikörpern gefunden wurde und Autoantikörpern keine pathomechanistische Bedeutung zugemessen wurde. The present invention describes methods that permit the detection of osteoarthritis in an individual as well as the assessment of the stage and progress of osteoarthritis. The present inventors have surprisingly discovered that osteoarthritis is associated with the formation of autoantibodies to components of cartilage or bone and their degradation products. In the degeneration of cartilage or bone, there is a continuous release of matrix components such. Thrombospondin-4 (TSP-4), COMP and CLEC3A. Since the cartilage tissue is presented only to the immune system, it can come in the course of the disease for the stimulation and formation of autoantibodies against components of cartilage or bone or against neoepitopes, which arise in the course of the disease in the proteolytic degradation of these components. The inventors assume that it depends on the amount of release of cartilage matrix proteins, eg. As TSP-4, COMP and / or CLEC3A, comes to a formation of autoantibodies to these matrix proteins. Surprisingly, the present inventors were able to detect anti-TSP-4 autoantibodies in the serum of osteoarthritis patients. In addition, autoreactive bands were detected in the serum of other arthritis patients, the significantly smaller than full-length TSP-4. These are probably degradation products of TSP-4. Alternatively or additionally, the present inventors have surprisingly been able to detect in the blood of osteoarthritis patients anti-COMP autoantibodies and / or anti-CLEC3A autoantibodies, with combined detection of anti-TSP-4 autoantibodies and anti-COMP autoantibodies and / or anti-CLEC3A autoantibodies resulted in an increased detection rate of osteoarthritis compared to single detection of autoantibodies. In healthy subjects, no anti-TSP-4 and anti-CLEC3A autoantibodies could be detected and anti-COMP autoantibodies were detected at very low frequency. In addition, the present inventors found that none of the subjects diagnosed with osteoarthritis by conventional methods could detect anti-collagen II autoantibodies, whereas in subjects in whom arthritis had not been diagnosed by conventional methods, anti Collagen II autoantibodies could be detected. These findings are therefore so surprising, as in osteoarthritis so far no connection with the formation of autoantibodies has been found and autoantibodies no pathomechanistic importance was attributed.
Die hier genannten Erfinder konnten außerdem anti-TSP-4-Autoantikörper oder anti- COMP-Autoantikörper im Serum von Patienten mit durch herkömmliche Verfahren diagnostizierter rheumatoider Arthritis nachweisen, wobei manche Patienten extrem hohe Konzentrationen verglichen mit anderen RA-Patienten aufwiesen.  The present inventors were also able to detect anti-TSP-4 autoantibodies or anti-COMP autoantibodies in the serum of patients with rheumatoid arthritis diagnosed by conventional methods, with some patients having extremely high concentrations compared to other RA patients.
Somit können anti-TSP-4-Autoantikörper, anti-COMP-Autoantikörper oder anti- CLEC3A-Autoantikörper oder Autoantikörper gegen andere Bestanteile des Knorpels oder des Knochens sowie Degradationsprodukte oder Fragmente davon alleine oder in Kombination als biochemische Marker von Arthrose dienen. Der Nachweis von anti-TSP-4-Autoantikörpern, anti-COMP-Autoantikörpern oder anti-CLEC3A- Autoantikörpern oder Autoantikörpern gegen andere Bestandteile des Knorpels oder des Knochens oder von Degradationsprodukten davon alleine oder in Kombination sowie Autoantikörper-Titerbestimmungen in Proben eines Subjekts erlauben neben der Diagnose der Erkrankung eine Therapie- bzw. Verlaufskontrolle sowie eine Diagnose des Stadiums von Arthrose. Da anti-TSP-4-Autoantikörper oder anti- COMP-Autoantikörper auch in Seren von RA-Patienten nachgewiesen wurden, ist es bei der Diagnose von Arthrose unter Nachweis dieser Autoantikörper zunächst erforderlich, RA-Patienten auszuschließen. Erst dann kann eine Diagnose von Arthrose gemäß dem Verfahren der vorliegenden Erfindung erfolgen. Die Sensitivität des Nachweises kann noch erhöht werden, wenn das Subjekt auf das Vorhandensein von anti-Kollagen Il-Autoantikörpern getestet wird. Wurde bei dem Subjekt aufgrund des Vorhandenseins von anti-TSP-4-Autoantikörpern, anti-COMP- Autoantikörpern und/oder anti-CLEC3A-Autoantikörpern oder Autoantikörpern gegen andere Bestanteile des Knorpels oder des Knochens sowie Degradationsprodukten oder Fragmenten davon alleine oder in Kombination Arthrose diagnostiziert, so kann die Abwesenheit des Nachweises von anti-Kollagen Il-Autoantikörpern als weiteres Indiz gewertet werden, dass Arthrose vorliegt. Darüberhinaus kann das der Nachweis von anti-Kollagen Il-Autoantikörpern in einem Subjekt als Indiz gewertet werden, dass keine Arthrose oder kein Risiko, Arthrose zu entwickeln, bei dem Subjekt vorliegt. Thus, anti-TSP-4 autoantibodies, anti-COMP autoantibodies or anti-CLEC3A autoantibodies or autoantibodies to other cartilage or bone components and degradation products or fragments thereof alone or in combination may be used as biochemical markers of osteoarthritis. The detection of anti-TSP-4 autoantibodies, anti-COMP autoantibodies or anti-CLEC3A autoantibodies or autoantibodies against other components of cartilage or bone or degradation products thereof alone or in combination, as well as autoantibody titer determinations in a subject's specimens the diagnosis of the disease a therapy or follow-up and a diagnosis of the stage of osteoarthritis. Since anti-TSP-4 autoantibodies or anti-COMP autoantibodies have also been detected in sera from RA patients, it is initially used in the diagnosis of osteoarthritis with detection of these autoantibodies required to exclude RA patients. Only then can a diagnosis of osteoarthritis be made according to the method of the present invention. The sensitivity of the detection can be further increased if the subject is tested for the presence of anti-collagen II autoantibodies. Was diagnosed in the subject due to the presence of anti-TSP-4 autoantibodies, anti-COMP autoantibodies and / or anti-CLEC3A autoantibodies or autoantibodies to other cartilage or bone components, and degradation products or fragments thereof alone or in combination osteoarthritis Thus, the absence of evidence of anti-collagen II autoantibodies can be taken as a further indication that osteoarthritis is present. In addition, the detection of anti-collagen II autoantibodies in a subject may be interpreted as an indication that there is no arthritis or risk of developing osteoarthritis in the subject.
Die vorliegende Erfindung betrifft in einem 1 . Aspekt ein Verfahren zur Diagnose von Arthrose (inklusive Osteochondrose) oder des Risikos, Arthrose zu entwickeln, bei einem Subjekt, wobei das Subjekt keine rheumatoide Arthritis aufweist, umfassend das Nachweisen eines Autoantikörpers, der mit Arthrose assoziiert ist, in einer von dem Subjekt stammenden Probe.  The present invention relates in a 1. Aspect A method of diagnosing osteoarthritis (including osteochondrosis) or the risk of developing osteoarthritis in a subject wherein the subject does not have rheumatoid arthritis, comprising detecting an autoantibody associated with osteoarthritis in a subject-derived sample ,
In einer Ausführungsform davon betrifft die vorliegende Erfindung dieses Verfahren, wobei das Verfahren das Ausschließen von rheumatoider Arthritis bei dem Subjekt umfasst.  In one embodiment thereof, the present invention relates to this method, which method comprises excluding rheumatoid arthritis in the subject.
In einer Ausführungsform davon betrifft die vorliegende Erfindung dieses Verfahren, wobei dieses Verfahren weiterhin das Ausschließen des Vorliegens eines Autoantikörpers gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst, bevorzugt wobei dieses Verfahren das Nachweisen eines Autoantikörpers gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst, stärker bevorzugt wobei dieses Verfahren das Nachweisen eines Autoantikörpers gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon mit einem Nachweisagens zum Nachweisen eines Autoantikörpers gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst.  In one embodiment thereof, the present invention relates to this method, which method further comprises excluding the presence of an autoantibody against collagen II or a degradation product or a fragment thereof, preferably wherein said method comprises detecting an autoantibody against collagen II or a degradation product or a fragment More preferably, this method comprises detecting an autoantibody against collagen II or a degradation product or a fragment thereof with a detection agent for detecting an autoantibody against collagen II or a degradation product or a fragment thereof.
In einer Ausführungsform davon betrifft die vorliegende Erfindung dieses Verfahren, wobei dieses Verfahren das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen Thrombospondin-4 (TSP-4) oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon oder das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen COMP oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst. In one embodiment thereof, the present invention relates to this method, which method comprises detecting an autoantibody against thrombospondin-4 (TSP-4) or a degradation product or a fragment thereof or detecting an autoantibody against COMP or a degradation product or a fragment thereof.
In einer Ausführungsform davon betrifft die vorliegende Erfindung dieses Verfahren, wobei der Verlauf von Arthrose überwacht wird, umfassend den Nachweis des Autoantikörpers zu verschiedenen Zeitpunkten; oder wobei das Stadium von Arthrose diagnostiziert wird.  In one embodiment thereof, the present invention relates to this method of monitoring the course of osteoarthritis, comprising detecting the autoantibody at various times; or where the stage of osteoarthritis is diagnosed.
In einer Ausführungsform davon betrifft die vorliegende Erfindung dieses Verfahren, wobei dieses Verfahren das Nachweisen von mindestens zwei Autoantikörpern umfasst, bevorzugt wobei dieses Verfahren das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen Thrombospondin-4 (TSP-4) oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon und das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen COMP oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst; oder bevorzugt wobei dieses Verfahren das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen Thrombospondin-4 (TSP-4) oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon und das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen CLEC3A oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst; stärker bevorzugt wobei dieses Verfahren das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen Thrombospondin-4 (TSP-4) oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon, das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen COMP oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon und das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen CLEC3A oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst.  In one embodiment thereof, the present invention relates to this method, which method comprises detecting at least two autoantibodies, preferably wherein said method comprises detecting an autoantibody against thrombospondin-4 (TSP-4) or a degradation product or fragment thereof and detecting from an autoantibody against COMP or a degradation product or a fragment thereof; or preferably wherein said method comprises detecting an autoantibody against thrombospondin-4 (TSP-4) or a degradation product or a fragment thereof and detecting an autoantibody against CLEC3A or a degradation product or a fragment thereof; more preferably, wherein said method comprises detecting an autoantibody against thrombospondin-4 (TSP-4) or a degradation product or fragment thereof, detecting an autoantibody against COMP or a degradation product or a fragment thereof and detecting an autoantibody against CLEC3A or a degradation product or a fragment thereof.
In einer Ausführungsform davon betrifft die vorliegende Erfindung dieses Verfahren, wobei der Autoantikörper gegen ein Neoepitop eines Degradationsprodukts eines Proteins, gegen das der Autoantikörper gerichtet ist.  In one embodiment thereof, the present invention relates to this method wherein the autoantibody is directed against a neoepitope of a degradation product of a protein against which the autoantibody is directed.
In einer Ausführungsform davon betrifft die vorliegende Erfindung dieses Verfahren, wobei das Nachweisen mit einem Nachweisagens erfolgt, bevorzugt wobei das Nachweisagens fähig ist, an die Antigenbindungsregion des Autoantikörpers zu binden, stärker bevorzugt wobei das Nachweisagens TSP-4 oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon, COMP oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon und/oder CLEC3A oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon ist. In einer Ausführungsform davon betrifft die vorliegende Erfindung dieses Verfahren, wobei die Probe Körperflüssigkeit, bevorzugt Blut, Serum, Blutplasma, Synovialflüssigkeit oder Urin, Muskel- oder Knorpelgewebe, Synovialmembran oder Sehne ist. In one embodiment thereof, the present invention relates to this method, wherein the detection is with a detection agent, preferably wherein the detection agent is capable of binding to the antigen binding region of the autoantibody, more preferably wherein the detection agent is TSP-4 or a degradation product or a fragment thereof, COMP or a degradation product or a fragment thereof and / or CLEC3A or a degradation product or a fragment thereof. In one embodiment thereof, the present invention relates to this method wherein the sample is body fluid, preferably blood, serum, blood plasma, synovial fluid or urine, muscle or cartilage tissue, synovial membrane or tendon.
Der Begriff “umfasst”“umfassen”,“umfassend” etc., wie hierin verwendet, bedeutet das Einschließen der offenbarten Merkmale und weiterer Merkmale, die nicht spezifisch erwähnt sind. Der Begriff “umfasst” “umfassen”, “umfassend” etc. wird auch in dem Sinn von „bestehend aus“ den offenbarten Merkmalen verstanden, wobei weitere Merkmale als die offenbarten nicht eingeschlossen sind. So kann das Verfahren der vorliegenden Erfindung weitere Verfahrensschritte umfassen, kann aber auch nur aus den spezifizierten Schritten bestehen. Auch der Kit der vorliegenden Erfindung kann weitere Bestandteile umfassen, kann aber auch nur aus den spezifizierten Bestandteilen bestehen.  The term "comprising" means "comprising", "comprising" etc. as used herein means including the disclosed features and other features that are not specifically mentioned. The term "comprising" "comprising", "comprising", etc. is also understood in the sense of "consisting of" the disclosed features, other features than those disclosed are not included. Thus, the method of the present invention may comprise further method steps, but may also consist only of the specified steps. Also, the kit of the present invention may comprise other ingredients, but may consist only of the specified ingredients.
Thrombospondin-4 ist ein Protein, das in Menschen von dem TSP-4-Gen codiert wird. Das Protein gehört zur Thrombospondin-Proteinfamilie. Thrombospondin- Familienmitglieder sind extrazelluläre, adhäsive glykosylierte Matrixproteine, die verbreitet in Vertebraten exprimiert werden (Lawler et al., 1995). Es sind fünf Thrombospondin-Proteine, Thrombospondin-1 bis Thrombospondin-4 und Oligomeres Knorpelmatrix-Protein (COMP), bekannt. Die Mitglieder der Thrombospondin-Familie werden während Zellumbauprozessen aktiviert und vermitteln Zell-zu-Zell- und Zell-zu-Matrix-lnteraktionen. Thrombospondin-4, eine pentameres Protein, spielt bei zellulärer Migration, Adhäsion sowie Proliferation eine Rolle, wobei es an Fleparin und Calcium binden kann. Es wird unter anderem in Muskel- und Knochengewebe gebildet.  Thrombospondin-4 is a protein encoded in humans by the TSP-4 gene. The protein belongs to the thrombospondin protein family. Thrombospondin family members are extracellular, adhesive glycosylated matrix proteins that are widely expressed in vertebrates (Lawler et al., 1995). Five thrombospondin proteins, Thrombospondin-1 to Thrombospondin-4 and Oligomeric Cartilage Matrix Protein (COMP) are known. Members of the thrombospondin family are activated during cell remodeling processes and mediate cell-to-cell and cell-to-matrix interactions. Thrombospondin-4, a pentameric protein, plays a role in cellular migration, adhesion, and proliferation, allowing it to bind to fleparin and calcium. It is formed among other things in muscle and bone tissue.
TSP-4 hat eine Länge von 961 Aminosäuren, wobei die Aminosäuren 1 bis 26 das Signalpeptid und die Aminosäuren 27 bis 961 das reife Protein bilden. Für veranschaulichende Zwecke, ohne darauf beschränkt zu sein, wird auf die Aminosäuresequenz von Thrombospondin-4 Bezug genommen, die hierin als SEQ ID NR: 1 offenbart ist. Die entsprechende Nukleotid- und Aminosäuresequenzen sind von der NCBI (National Centre for Biotechnology Information; National Library of Medicine, Bethesda, MD20894, USA; www.ncbi.nlm.nih.gov) unter der Zugangsnummer UniProtKB - P35443.2 (SEQ ID NR: 1 ) erhältlich.  TSP-4 has a length of 961 amino acids, with amino acids 1 to 26 forming the signal peptide and amino acids 27 to 961 the mature protein. For illustrative purposes, but not limited to, reference is made to the amino acid sequence of thrombospondin-4, which is disclosed herein as SEQ ID NO: 1. The corresponding nucleotide and amino acid sequences are available from the NCBI (National Center for Biotechnology Information, National Library of Medicine, Bethesda, MD20894, U.S.A., www.ncbi.nlm.nih.gov) under the accession number UniProtKB-P35443.2 (SEQ ID NO : 1) available.
1 MLAPRGAAVL LLHLVLQRWL AAGAQATPQV FDLLPSSSQR LNPGALLPVL TDPALNDLYV 1 MLAPRGAAVL LLHLVLQRWL AAGAQATPQV FDLLPSSSQR LNPGALLPVL TDPALNDLYV
61 ISTFKLQTKS SATIFGLYSS TDNSKYFEFT VMGRLNKAIL RYLKNDGKVH LWFNNLQLA61 ISTFKLQTKS SATIFGLYSS TDNSKYFEFT VMGRLNKAIL RYLKNDGKVH LWFNNLQLA
121 DGRRHRILLR LSNLQRGAGS LELYLDCIQV DSVHNLPRAF AGPSQKPETI ELRTFQRKPQ 181 DFLEELKLW RGSLFQVASL QDCFLQQSEP LAATGTGDFN RQFLGQMTQL NQLLGEVKDL 241 LRQQVKETSF LRNTIAECQA CGPLKFQSPT PSTWPPAPP APPTRPPRRC DSNPCFRGVQ 301 CTDSRDGFQC GPCPEGYTGN GITCIDVDEC KYHPCYPGVH CINLSPGFRC DACPVGFTGP 361 MVQGVGISFA KSNKQVCTDI DECRNGACVP NSICVNTLGS YRCGPCKPGY TGDQIRGCKA 421 ERNCRNPELN PCSVNAQCIE ERQGDVTCVC GVGWAGDGYI CGKDVDIDSY PDEELPCSAR 481 NCKKDNCKYV PNSGQEDADR DGIGDACDED ADGDGILNEQ DNCVLIHNVD QRNSDKDIFG 541 DACDNCLSVL NNDQKDTDGD GRGDACDDDM DGDGIKNILD NCPKFPNRDQ RDKDGDGVGD 601 ACDSCPDVSN PNQSDVDNDL VGDSCDTNQD SDGDGHQDST DNCPTVINSA QLDTDKDGIG 661 DECDDDDDND GIPDLVPPGP DNCRLVPNPA QEDSNSDGVG DICESDFDQD QVIDRIDVCP 721 ENAEVTLTDF RAYQTWLDP EGDAQIDPNW WLNQGMEIV QTMNSDPGLA VGYTAFNGVD 781 FEGTFHVNTQ TDDDYAGFIF GYQDSSSFYV VMWKQTEQTY WQATPFRAVA EPGIQLKAVK 841 SKTGPGEHLR NSLWHTGDTS DQVRLLWKDS RNVGWKDKVS YRWFLQHRPQ VGYIRVRFYE 901 GSELVADSGV TIDTTMRGGR LGVFCFSQEN IIWSNLKYRC NDTIPEDFQE FQTQNFDRFD 961 N 121 DGRRHRILLR LSNLQRGAGS LELYLDCIQV DSVHNLPRAF AGPSQKPETI ELRTFQRKPQ 181 DFLEELKLW RGSLFQVASL QDCFLQQSEP LAATGTGDFN RQFLGQMTQL NQLLGEVKDL 241 LRQQVKETSF LRNTIAECQA CGPLKFQSPT PSTWPPAPP APPTRPPRRC DSNPCFRGVQ 301 CTDSRDGFQC GPCPEGYTGN GITCIDVDEC KYHPCYPGVH CINLSPGFRC DACPVGFTGP 361 MVQGVGISFA KSNKQVCTDI DECRNGACVP NSICVNTLGS YRCGPCKPGY TGDQIRGCKA 421 ERNCRNPELN PCSVNAQCIE ERQGDVTCVC GVGWAGDGYI CGKDVDIDSY PDEELPCSAR 481 NCKKDNCKYV PNSGQEDADR DGIGDACDED ADGDGILNEQ DNCVLIHNVD QRNSDKDIFG 541 DACDNCLSVL NNDQKDTDGD GRGDACDDDM DGDGIKNILD NCPKFPNRDQ RDKDGDGVGD 601 ACDSCPDVSN PNQSDVDNDL VGDSCDTNQD SDGDGHQDST DNCPTVINSA QLDTDKDGIG 661 DECDDDDDND GIPDLVPPGP DNCRLVPNPA QEDSNSDGVG DICESDFDQD QVIDRIDVCP 721 ENAEVTLTDF RAYQTWLDP EGDAQIDPNW WLNQGMEIV QTMNSDPGLA VGYTAFNGVD 781 FEGTFHVNTQ TDDDYAGFIF GYQDSSSFYV VMWKQTEQTY WQATPFRAVA EPGIQLKAVK 841 SKTGPGEHLR NSLWHTGDTS DQVRLLWKDS RNVGWKDKVS YRWFLQHRPQ VGYIRVRFYE 901 GSELVADSGV TIDTTMRGGR LGVFCFSQEN IIWSNLKYRC NDTIPEDFQE FQTQNFDRFD 961 N
(SEQ ID NR: 1 )  (SEQ ID NO: 1)
Ein anderes Protein der Thrombospondin-Proteinfamilie ist das Oligomere Knorpelmatrix-Protein (COMP), auch als Thrombospondin-5 bekannt. Es ist ein extrazelluläres Matrix (ECM)-Protein, das hauptsächlich im Knorpel vorkommt. Spezifisch kommt COMP in der extrazellulären Matrix, die Zellen umgibt, die Bänder und Sehnen ausmachen, und nahe Knorpel-bildenden Zellen (Chondrozyten) vor. Im Menschen wird das COMP-Protein von dem COMP-Ge n codiert. Bindung an andere ECM-Proteins wie Kollagen scheint von divalenten Kationen abzuhängen. COMP ist ein Marker für Knorpel-Turnover. Es scheint eine Rolle bei der vaskulären Wandummodellierung zu haben. Darüber hinaus scheint es eine Rolle bei Zellwachstum und Zellteilung und der Apoptose sowie der Regulierung von Zellbewegung und Zellanheftung zu spielen. Es kann die Interaktion von Chondrozyten mit extrazellulärer Knorpelmatrix durch Interaktion mit Zelloberflächen- Integrinrezeptoren vermitteln. Das Protein besteht aus fünf identischen Glykoprotein- Untereinheiten, jede mit EGF-ähnlichen und Calcium-bindenden (Thrombospondin- ähnlichen) Domänen, die stark an Calcium binden (1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9).  Another protein of the thrombospondin protein family is the oligomeric cartilage matrix protein (COMP), also known as thrombospondin-5. It is an extracellular matrix (ECM) protein found mainly in cartilage. Specifically, COMP occurs in the extracellular matrix surrounding cells that make up ligaments and tendons, and near cartilage-forming cells (chondrocytes). In humans, the COMP protein is encoded by the COMP gene. Binding to other ECM proteins, such as collagen, appears to depend on divalent cations. COMP is a marker for cartilage turnover. It seems to have a role in vascular wall modeling. In addition, it appears to play a role in cell growth and cell division and apoptosis as well as the regulation of cell movement and attachment. It can mediate the interaction of extracellular cartilage matrix chondrocytes through interaction with cell surface integrin receptors. The protein consists of five identical glycoprotein subunits, each with EGF-like and calcium-binding (thrombospondin-like) domains that bind strongly to calcium (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9) ,
COMP hat eine Länge von 757 Aminosäuren. Für veranschaulichende Zwecke, ohne darauf beschränkt zu sein, wird auf die Aminosäuresequenz von COMP Bezug genommen, die hierin als SEQ ID NR: 2 offenbart ist. Die entsprechende Nukleotid- und Aminosäuresequenzen sind von der NCBI (National Center for Biotechnology Information; National Library of Medicine, Bethesda, MD20894, USA; www.ncbi.nlm.nih.gov) unter der Zugangsnummer UniProtKB - P49747.2 (SEQ ID NR: 2) erhältlich. COMP has a length of 757 amino acids. For illustrative purposes, but not limited to, reference is made to the amino acid sequence of COMP disclosed herein as SEQ ID NO: 2. The corresponding nucleotide and amino acid sequences are available from the NCBI (National Center for Biotechnology Information, National Library of Medicine, Bethesda, MD20894, U.S.A., www.ncbi.nlm.nih.gov) under the accession number UniProtKB-P49747.2 (SEQ ID NO : 2) available.
1 MVPDTACVLL LTLAALGASG QGQSPLGSDL GPQMLRELQE TNAALQDVRE LLRQQVREIT 1 MVPDTACVLL LTLAALGASG QGQSPLGSDL GPQMLRELQE TNAALQDVRE LLRQQVREIT
61 FLKNTVMECD ACGMQQSVRT GLPSVRPLLH CAPGFCFPGV ACIQTESGAR CGPCPAGFTG61 FLKNTVMECD ACGMQQSVRT GLPSVRPLLH CAPGFCFPGV ACIQTESGAR CGPCPAGFTG
121 NGSHCTDVNE CNAHPCFPRV RCINTSPGFR CEACPPGYSG PTHQGVGLAF AKANKQVCTD121 NGSHCTDVNE CNAHPCFPRV RCINTSPGFR CEACPPGYSG PTHQGVGLAF AKANKQVCTD
181 INECETGQHN CVPNSVCINT RGSFQCGPCQ PGFVGDQASG CQRRAQRFCP DGSPSECHEH181 INECETGQHN CVPNSVCINT RGSFQCGPCQ PGFVGDQASG CQRRAQRFCP DGSPSECHEH
241 ADCVLERDGS RSCVCAVGWA GNGILCGRDT DLDGFPDEKL RCPERQCRKD NCVTVPNSGQ241 ADCVLERDGS RSCVCAVGWA GNGILCGRDT DLDGFPDEKL RCPERQCRKD NCVTVPNSGQ
301 EDVDRDGIGD ACDPDADGDG VPNEKDNCPL VRNPDQRNTD EDKWGDACDN CRSQKNDDQK 361 DTDQDGRGDA CDDDIDGDRI RNQADNCPRV PNSDQKDSDG DGIGDACDNC PQKSNPDQAD301 EDVDRDGIGD ACDPDADGDG VPNEKDNCPL VRNPDQRNTD EDKWGDACDN CRSQKNDDQK 361 DTDQDGRGDA CDDDIDGDRI RNQADNCPRV PNSDQKDSDG DGIGDACDNC PQKSNPDQAD
421 VDHDFVGDAC DSDQDQDGDG HQDSRDNCPT VPNSAQEDSD HDGQGDACDD DDDNDGVPDS421 VDHDFVGDAC DSDQDQDGDG HQDSRDNCPT VPNSAQEDSD HDGQGDACDD DDDNDGVPDS
481 RDNCRLVPNP GQEDADRDGV GDVCQDDFDA DKWDKIDVC PENAEVTLTD FRAFQTWLD481 RDNCRLVPNP GQEDADRDGV GDVCQDDFDA DKWDKIDVC PENAEVTLTD FRAFQTWLD
541 PEGDAQIDPN WWLNQGREI VQTMNSDPGL AVGYTAFNGV DFEGTFHVNT VTDDDYAGFI541 PEGDAQIDPN WWLNQGREI VQTMNSDPGL AVGYTAFNGV DFEGTFHVNT VTDDDYAGFI
601 FGYQDSSSFY WMWKQMEQT YWQANPFRAV AEPGIQLKAV KSSTGPGEQL RNALWHTGDT601 FGYQDSSSFY WMWKQMEQT YWQANPFRAV AEPGIQLKAV KSSTGPGEQL RNALWHTGDT
661 ESQVRLLWKD PRNVGWKDKK SYRWFLQHRP QVGYIRVRFY EGPELVADSN WLDTTMRGG661 ESQVRLLWKD PRNVGWKDKK SYRWFLQHRP QVGYIRVRFY EGPELVADSN WLDTTMRGG
721 RLGVFCFSQE NI IWANLRYR CNDTIPEDYE THQLRQA 721 RLGVFCFSQE NI IWANLRYR CNDTIPEDYE THQLRQA
(SEQ ID NR: 2)  (SEQ ID NO: 2)
C-Typ-Lektindomänen-Familie 3-Mitglied A (CLEC3A; englisch: C-type lectin domain family 3 member A) ist ein knorpelspezifisches Protein, welches in arthrotischem Knorpel verstärkt exprimiert wird. Neben Knorpel wurde es bisher nur in Brustkrebsgewebe nachgewiesen. CLEC3A besteht aus drei Domänen: einer stark positiv geladenen N-terminalen Domäne, gefolgt von einer alpha-helikalen Oligomerisierungsdomäne und einer C-terminalen Kohlenhydrat-Erkennungsdomäne (CRD; englisch: Carbohydrate Recognition Domain). CLEC3A bindet an Laminin und Fibronektin und wird von Matrilysin (MMP-7) und anderen Matrixproteasen geschnitten (Tsunezumi, 2009). Vor kurzem wurde eine schnellere Aktivierung von Plasminogen durch tissue-Plasminogenaktivator in der Gegenwart von CLEC3A gezeigt (10, 11 , 12, 13).  C-type lectin domain family 3 member A (CLEC3A: C-type lectin domain family 3 member A) is a cartilage-specific protein that is expressed more extensively in arthrotic cartilage. In addition to cartilage, it has so far only been detected in breast cancer tissue. CLEC3A consists of three domains: a highly positively charged N-terminal domain, followed by an alpha-helical oligomerization domain and a C-terminal carbohydrate recognition domain (CRD). CLEC3A binds to laminin and fibronectin and is cut by matrilysin (MMP-7) and other matrix proteases (Tsunezumi, 2009). Recently, more rapid activation of plasminogen by tissue plasminogen activator in the presence of CLEC3A has been demonstrated (10, 11, 12, 13).
CLEC3A hat eine Länge von 197 Aminosäuren, wobei die Aminosäuren 1 bis 22 das Signalpeptid und die Aminosäuren 23 bis 197 das reife Protein bilden. Für veranschaulichende Zwecke, ohne darauf beschränkt zu sein, wird auf die Aminosäuresequenz von CLEC3A Bezug genommen, die hierin als SEQ ID NR: 3 offenbart ist. Die entsprechende Nukleotid- und Aminosäuresequenzen sind von der NCBI (National Centre for Biotechnology Information; National Library of Medicine, Bethesda, MD20894, USA; www.ncbi.nlm.nih.gov) unter der Zugangsnummer UniProtKB - 075596.1 SEQ ID NR: 3) erhältlich.  CLEC3A has a length of 197 amino acids, with amino acids 1 to 22 forming the signal peptide and amino acids 23 to 197 the mature protein. For illustrative purposes, but not limited to, reference is made to the amino acid sequence of CLEC3A disclosed herein as SEQ ID NO: 3. The corresponding nucleotide and amino acid sequences are available from the NCBI (National Center for Biotechnology Information, National Library of Medicine, Bethesda, MD20894, U.S.A., www.ncbi.nlm.nih.gov) under the accession number UniProtKB-075596.1 SEQ ID NO: 3). available.
1 MAKNGLVICI LVITLLLDQT TSHTSRLKAR KHSKRRVRDK DGDLKTQIEK LWTEVNALKE 1 MAKNGLVICI LVITLLLDQT TSHTSRLKAR KHSKRRVRDK DGDLKTQIEK LWTEVNALKE
61 IQALQTVCLR GTKVHKKCYL ASEGLKHFHE ANEDCISKGG ILVIPRNSDE INALQDYGKR61 IQALQTVCLR GTKVHKKCYL ASEGLKHFHE ANEDCISKGG ILVIPRNSDE INALQDYGKR
121 SLPGVNDFWL GINDMVTEGK FVDVNGIAIS FLNWDRAQPN GGKRENCVLF SQSAQGKWSD121 SLPGVNDFWL GINDMVTEGK FVDVNGIAIS FLNWDRAQPN GGKRENCVLF SQSAQGKWSD
181 EACRSSKRYI CEFTIPQ 181 EACRSSKRYI CEFTIPQ
(SEQ ID NR: 3)  (SEQ ID NO: 3)
Kollagen (Vorstufe Tropokollagen) ist ein nur bei vielzelligen Tieren (einschließlich Menschen) vorkommendes Strukturprotein hauptsächlich des Bindegewebes, genauer der extrazellulären Matrix). Kollagen besteht aus einzelnen, langen Kollagenmolekülen, die eine linksgängige Helix ausbilden. Jeweils drei dieser Helices sind in einer rechtsgängigen Superhelix arrangiert. Die Tripelhelix wird durch Wasserstoffbrücken zwischen den einzelnen Strängen stabilisiert. Kollagen Typ II, das in der vorliegenden Anmeldung für die Diagnose von Arthrose oder des Risikos, Arthrose zu entwickeln, eine Rolle spielt, kommt hauptsächlich im Knorpel vor und fungiert als Strukturprotein des hyalinen und des elastischen Knorpels. Die Gewinnung von Kollagen II erfolgt durch Isolierung aus Knorpel nach dem Verfahren von Vogel und Paulsson (1984) (14). Die entsprechende Nukleotid- und Aminosäuresequenzen sind von der NCBI (National Centre for Biotechnology Information; National Library of Medicine, Bethesda, MD20894, USA; www.ncbi.nlm.nih.gov) unter der Zugangsnummer UniProtKB - P02458.3 (SEQ ID NR: 4) erhältlich. Collagen (precursor tropocollagen) is a structural protein found mainly in connective tissue, more specifically the extracellular matrix, only in multicellular animals (including humans). Collagen consists of single, long collagen molecules that form a left-handed helix. Three of these helices each are arranged in a right-handed superhelix. The triple helix is stabilized by hydrogen bonding between the individual strands. Type II collagen used in the present application for the diagnosis of osteoarthritis or the risk Osteoarthritis, which plays a role, occurs mainly in cartilage and acts as a structural protein of hyaline and elastic cartilage. Collagen II is recovered by isolation from cartilage according to the method of Vogel and Paulsson (1984) (14). The corresponding nucleotide and amino acid sequences are available from the NCBI (National Center for Biotechnology Information, National Library of Medicine, Bethesda, MD20894, U.S.A., www.ncbi.nlm.nih.gov) under the accession number UniProtKB-P02458.3 (SEQ ID NO : 4) available.
1 MIRLGAPQTL VLLTLLVAAV LRCQGQDVQE AGSCVQDGQR YNDKDVWKPE PCRICVCDTG 61 TVLCDDI ICE DVKDCLSPEI PFGECCPICP TDLATASGQP GPKGQKGEPG DIKDIVGPKG 121 PPGPQGPAGE QGPRGDRGDK GEKGAPGPRG RDGEPGTPGN PGPPGPPGPP GPPGLGGNFA 181 AQMAGGFDEK AGGAQLGVMQ GPMGPMGPRG PPGPAGAPGP QGFQGNPGEP GEPGVSGPMG 241 PRGPPGPPGK PGDDGEAGKP GKAGERGPPG PQGARGFPGT PGLPGVKGHR GYPGLDGAKG 301 EAGAPGVKGE SGSPGENGSP GPMGPRGLPG ERGRTGPAGA AGARGNDGQP GPAGPPGPVG 361 PAGGPGFPGA PGAKGEAGPT GARGPEGAQG PRGEPGTPGS PGPAGASGNP GTDGIPGAKG 1 MIRLGAPQTL VLLTLLVAAV LRCQGQDVQE AGSCVQDGQR YNDKDVWKPE PCRICVCDTG 61 TVLCDDI ICE DVKDCLSPEI PFGECCPICP TDLATASGQP GPKGQKGEPG DIKDIVGPKG 121 PPGPQGPAGE QGPRGDRGDK GEKGAPGPRG RDGEPGTPGN PGPPGPPGPP GPPGLGGNFA 181 AQMAGGFDEK AGGAQLGVMQ GPMGPMGPRG PPGPAGAPGP QGFQGNPGEP GEPGVSGPMG 241 PRGPPGPPGK PGDDGEAGKP GKAGERGPPG PQGARGFPGT PGLPGVKGHR GYPGLDGAKG 301 EAGAPGVKGE SGSPGENGSP GPMGPRGLPG ERGRTGPAGA AGARGNDGQP GPAGPPGPVG 361 PAGGPGFPGA PGAKGEAGPT GARGPEGAQG PRGEPGTPGS PGPAGASGNP GTDGIPGAKG
421 SAGAPGIAGA PGFPGPRGPP GPQGATGPLG PKGQTGEPGI AGFKGEQGPK GEPGPAGPQG 481 APGPAGEEGK RGARGEPGGV GPIGPPGERG APGNRGFPGQ DGLAGPKGAP GERGPSGLAG 541 PKGANGDPGR PGEPGLPGAR GLTGRPGDAG PQGKVGPSGA PGEDGRPGPP GPQGARGQPG 601 VMGFPGPKGA NGEPGKAGEK GLPGAPGLRG LPGKDGETGA AGPPGPAGPA GERGEQGAPG 661 PSGFQGLPGP PGPPGEGGKP GDQGVPGEAG APGLVGPRGE RGFPGERGSP GAQGLQGPRG 721 LPGTPGTDGP KGASGPAGPP GAQGPPGLQG MPGERGAAGI AGPKGDRGDV GEKGPEGAPG 781 KDGGRGLTGP IGPPGPAGAN GEKGEVGPPG PAGSAGARGA PGERGETGPP GPAGFAGPPG 841 ADGQPGAKGE QGEAGQKGDA GAPGPQGPSG APGPQGPTGV TGPKGARGAQ GPPGATGFPG 901 AAGRVGPPGS NGNPGPPGPP GPSGKDGPKG ARGDSGPPGR AGEPGLQGPA GPPGEKGEPG 961 DDGPSGAEGP PGPQGLAGQR GIVGLPGQRG ERGFPGLPGP SGEPGKQGAP GASGDRGPPG421 SAGAPGIAGA PGFPGPRGPP GPQGATGPLG PKGQTGEPGI AGFKGEQGPK GEPGPAGPQG 481 APGPAGEEGK RGARGEPGGV GPIGPPGERG APGNRGFPGQ DGLAGPKGAP GERGPSGLAG 541 PKGANGDPGR PGEPGLPGAR GLTGRPGDAG PQGKVGPSGA PGEDGRPGPP GPQGARGQPG 601 VMGFPGPKGA NGEPGKAGEK GLPGAPGLRG LPGKDGETGA AGPPGPAGPA GERGEQGAPG 661 PSGFQGLPGP PGPPGEGGKP GDQGVPGEAG APGLVGPRGE RGFPGERGSP GAQGLQGPRG 721 LPGTPGTDGP KGASGPAGPP GAQGPPGLQG MPGERGAAGI AGPKGDRGDV GEKGPEGAPG 781 KDGGRGLTGP IGPPGPAGAN GEKGEVGPPG PAGSAGARGA PGERGETGPP GPAGFAGPPG 841 ADGQPGAKGE QGEAGQKGDA GAPGPQGPSG APGPQGPTGV TGPKGARGAQ GPPGATGFPG 901 AAGRVGPPGS NGNPGPPGPP GPSGKDGPKG ARGDSGPPGR AGEPGLQGPA GPPGEKGEPG 961 DDGPSGAEGP PGPQGLAGQR GIVGLPGQRG ERGFPGLPGP SGEPGKQGAP GASGDRGPPG
1021 PVGPPGLTGP AGEPGREGSP GADGPPGRDG AAGVKGDRGE TGAVGAPGAP GPPGSPGPAG 1081 PTGKQGDRGE AGAQGPMGPS GPAGARGIQG PQGPRGDKGE AGEPGERGLK GHRGFTGLQG 1141 LPGPPGPSGD QGASGPAGPS GPRGPPGPVG PSGKDGANGI PGPIGPPGPR GRSGETGPAG 1201 PPGNPGPPGP PGPPGPGIDM SAFAGLGPRE KGPDPLQYMR ADQAAGGLRQ HDAEVDATLK 1261 SLNNQIESIR SPEGSRKNPA RTCRDLKLCH PEWKSGDYWI DPNQGCTLDA MKVFCNMETG1021 PVGPPGLTGP AGEPGREGSP GADGPPGRDG AAGVKGDRGE TGAVGAPGAP GPPGSPGPAG 1081 PTGKQGDRGE AGAQGPMGPS GPAGARGIQG PQGPRGDKGE AGEPGERGLK GHRGFTGLQG 1141 LPGPPGPSGD QGASGPAGPS GPRGPPGPVG PSGKDGANGI PGPIGPPGPR GRSGETGPAG 1201 PPGNPGPPGP PGPPGPGIDM SAFAGLGPRE KGPDPLQYMR ADQAAGGLRQ HDAEVDATLK 1261 SLNNQIESIR SPEGSRKNPA RTCRDLKLCH PEWKSGDYWI DPNQGCTLDA MKVFCNMETG
1321 ETCVYPNPAN VPKKNWWSSK SKEKKHIWFG ETINGGFHFS YGDDNLAPNT ANVQMTFLRL 1381 LSTEGSQNIT YHCKNSIAYL DEAAGNLKKA LLIQGSNDVE IRAEGNSRFT YTALKDGCTK 1441 HTGKWGKTVI EYRSQKTSRL PI IDIAPMDI GGPEQEFGVD IGPVCFL 1321 ETCVYPNPAN VPKKNWWSSK SKEKKHIWFG ETINGGFHFS YGDDNLAPNT ANVQMTFLRL 1381 LSTEGSQNIT YHCKNSIAYL DEAAGNLKKA LLIQGSNDVE IRAEGNSRFT YTALKDGCTK 1441 HTGKWGKTVI EYRSQKTSRL PI IDIAPMDI GGPEQEFGVD IGPVCFL
(SEQ ID NR: 4)  (SEQ ID NO: 4)
Der Begriff„TSP-4“,„COMP“,„CLEC3A” oder„Kollagen II“, wie hierin verwendet, ist jegliches Protein, das als TSP-4, COMP, CLEC3A bzw. Kollagen II bekannt ist. Der Begriff umfasst auch ein Protein, das gleiche oder ähnliche Funktionen wie TSP-4, COMP, CLEC3A bzw. Kollagen II, identifiziert durch SEQ ID NR: 1 , SEQ ID NR: 2, SEQ ID NR: 3 und SEQ ID NR: 4, aufweist. Dabei können die Proteine auch unter einem anderen Namen bekannt sein. Alternativ bezieht sich der Begriff TSP-4, COMP, CLEC3A bzw. Kollagen II auf jedes Protein, das eine Aminosäureidentität zu der Sequenz von SEQ ID NR: 1 , SEQ ID NR: 2, SEQ ID NR: 3 und SEQ ID NR: 4 von mindestens 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, oder 99% hat. Alternativ bezieht sich der Begriff TSP-4, COMP, CLEC3A bzw. Kollagen II auf jedes Protein, das eine Aminosäurehomologie zu der Sequenz von SEQ ID NR: 1 , SEQ ID NR: 2, SEQ ID NR: 3 und SEQ ID NR: 4 von mindestens 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% oder 100% hat. Funktionen bzw. Eigenschaften von TSP-4, COMP, CLEC3A bzw. Kollagen II sind: TSP-4 bildet Pentamere und bindet an Heparin. COMP bildet auch Pentamere, bindet an Kollagen II und ist offenbar an der Fibrillogenese von Kollagen II beteiligt. Mutationen im COMP-Gen können PSACH (osteochondrodysplasias pseudoachondroplasia) und MED (multiple epiphyseal dysplasia) verursachen. CLEC3A führt zu einer schnelleren Aktivierung von Plasminogen durch tissue-Plasminogenaktivator. Kollagen II ist Strukturbestandteil der extrazellulären Knorpelmatrix, bildet das Knorpelgrundgerüst und gibt dem Knorpel seine Zugfestigkeit. Unter den Begriff TSP-4, COMP, CLEC3A bzw. Kollagen II fallen jegliche Proteine, an die Autoantikörper, die in Subjekten gegen TSP-4, COMP, CLEC3A bzw. Kollagen II gebildet werden, binden. The term "TSP-4", "COMP", "CLEC3A" or "collagen II" as used herein is any protein known as TSP-4, COMP, CLEC3A and collagen II, respectively. The term also includes a protein having the same or similar functions as TSP-4, COMP, CLEC3A or collagen II, identified by SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 and SEQ ID NO: 4 , having. The proteins may also be known under a different name. Alternatively, the term TSP-4, COMP, CLEC3A or collagen II refers to any protein having an amino acid identity to the sequence of SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 and SEQ ID NO: 4 of at least 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99%. Alternatively, the term TSP-4, COMP, CLEC3A or collagen II refers to any protein having an amino acid homology to the sequence of SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3 and SEQ ID NO: 4 has at least 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% or 100%. Functions or properties of TSP-4, COMP, CLEC3A or collagen II are: TSP-4 forms pentamers and binds to heparin. COMP also forms pentamers, binds to collagen II and is apparently involved in the fibrillogenesis of collagen II. Mutations in the COMP gene can cause PSACH (osteochondrodysplasias pseudoachondroplasia) and MED (multiple epiphyseal dysplasia). CLEC3A leads to a faster activation of plasminogen by tissue plasminogen activator. Collagen II is a structural component of the extracellular cartilage matrix, forms the cartilage framework and gives the cartilage its tensile strength. The term TSP-4, COMP, CLEC3A or collagen II includes any proteins to which autoantibodies formed in subjects against TSP-4, COMP, CLEC3A and collagen II, respectively.
Der Begriff „TSP-4“,„COMP“ ,„CLEC3A” oder„Kollagen II“, wie hierin verwendet, bezieht sich auch auf ein Fragment von TSP-4, COMP, CLEC3A bzw. Kollagen II, solange dieses Fragment die Fähigkeit besitzt, an Autoantikörper, die in Subjekten gegen TSP-4, COMP, CLEC3A bzw. Kollagen II gebildet werden, zu binden. Bevorzugt enthalten solche Fragmente Epitope, gegen die die Autoantikörper gerichtet sind. Stärker bevorzugt haben Fragmente von TSP-4, COMP, CLEC3A bzw. Kollagen II eine Länge von mindestens 5 Aminosäuren, noch stärker bevorzugt eine Länge von 5 bis 100, noch stärker bevorzugt eine Länge von 5 bis 50, noch stärker bevorzugt eine Länge von 10 bis 50, noch stärker bevorzugt eine Länge von 15 bis 50 noch stärker bevorzugt eine Länge von 15 bis 25 oder 40 bis 50, Aminosäuren.  The term "TSP-4", "COMP", "CLEC3A" or "collagen II" as used herein also refers to a fragment of TSP-4, COMP, CLEC3A and collagen II, respectively, as long as that fragment has the ability to bind to autoantibodies formed in subjects against TSP-4, COMP, CLEC3A and collagen II, respectively. Such fragments preferably contain epitopes against which the autoantibodies are directed. More preferably, fragments of TSP-4, COMP, CLEC3A and collagen II, respectively, have a length of at least 5 amino acids, more preferably a length of 5 to 100, even more preferably a length of 5 to 50, even more preferably a length of 10 to 50, more preferably a length of 15 to 50, even more preferably a length of 15 to 25 or 40 to 50, amino acids.
Der Prozentsatz der„Aminosäureidentität“, wie hierin verwendet, bezieht sich auf den Prozentsatz von Aminosäureresten, die an entsprechenden Positionen in zwei optimal zueinander ausgerichteten Sequenzen identisch sind. Er wird durch Vergleich von zwei optimal zueinander ausgerichteten Sequenzen über ein Vergleichsfenster, wobei das Fragment der Aminosäuresequenz in dem Vergleichsfenster Additionen oder Deletionen (z. B. Lücken oder Überhänge) umfassen kann, im Vergleich zu der Referenzsequenz SEQ ID NR: 1 , SEQ ID NR: 2, SEQ ID NR: 3 und SEQ ID NR: 4, die diese Additionen oder Deletionen nicht enthält, zur optimalen Ausrichtung der zwei Sequenzen bestimmt. Der Prozentsatz wird berechnet durch Bestimmen der Anzahl von Positionen, an denen der identische Aminosäurerest in beiden Sequenzen vorkommt, um die Anzahl an gleichen Positionen zu erhalten, Teilen der Anzahl der gleichen Positionen durch die Gesamtzahl der Positionen in dem Vergleichsfenster und Multiplizieren des Ergebnisses mit 100. Optimale Ausrichtung der Sequenzen für den Vergleich kann durch den Homologiealgorithmus von Smith und Waterman, 1981 , durch den Homologie-Alignment-Algorithmus von Needleman und Wunsch, 1970, durch die Suche nach Ähnlichkeitsverfahren von Pearson und Lipman, 1988, durch den Algorithmus von Karlin und Altschul, 1990, modifiziert durch Karlin und Altschul, 1993, oder durch Computerimplementationen dieser Algorithmen (GAP, BESTFIT, BLAST, PASTA und TFASTA in dem Wisconsin Genetics Software-Packet, Genetics Computer Group (GCG), 575 Science Dr., Madison, Wl) durchgeführt werden. GAP und BESTFIT werden bevorzugt verwendet, um die optimale Ausrichtung zu bestimmen. Typischerweise werden die Standardeinstellungswerte von 5,00 für„gap weight“ und 0,30 für„gap weight“-Länge verwendet. The percentage of "amino acid identity" as used herein refers to the percentage of amino acid residues that are identical at corresponding positions in two optimally aligned sequences. It is constructed by comparing two optimally aligned sequences over a comparison window, wherein the fragment of the amino acid sequence in the comparison window may comprise additions or deletions (eg, gaps or overhangs) compared to the reference sequence SEQ ID NO: 1, SEQ ID NR: 2, SEQ ID NO: 3 and SEQ ID NO: 4, which does not contain these additions or deletions, are determined for optimal alignment of the two sequences. The percentage is calculated by determining the number of positions where the identical amino acid residue occurs in both sequences by the same number Obtaining positions, dividing the number of equal positions by the total number of positions in the comparison window and multiplying the result by 100. Optimal alignment of the sequences for comparison can be achieved by the homology algorithm of Smith and Waterman, 1981, by the homology alignment algorithm by Needleman and Wunsch, 1970, by the search for similarity methods of Pearson and Lipman, 1988, by the algorithm of Karlin and Altschul, 1990, modified by Karlin and Altschul, 1993, or by computer implementations of these algorithms (GAP, BESTFIT, BLAST, PASTA and TFASTA in the Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group (GCG), 575 Science Dr., Madison, WI). GAP and BESTFIT are preferably used to determine the optimal alignment. Typically, the default setting values of 5.00 are used for "gap weight" and 0.30 for "gap weight" length.
Der Begriff "Prozent Homologie", wie hierin verwendet, bezieht sich auf den Prozentsatz von Aminosäureresten, die an entsprechenden Positionen in zwei optimal zueinander ausgerichteten Sequenzen homolog sind. Der "Prozent Homologie" zwischen zwei Sequenzen ist in einer Weise etabliert, die dem, was vorstehend in Bezug auf die Bestimmung des „Prozentsatzes an Identität“ beschrieben wurde, im Wesentlichen identisch ist, außer der Tatsache, dass bei der Berechnung auch homologe Positionen und nicht nur identische Positionen berücksichtigt werden. Zwei homologe Aminosäuren sind entweder zwei identische oder zwei homologe Amoinosäuren. Homologe Aminosäurereste haben ähnliche chemisch-physikalische Eigenschaften, zum Beispiel Aminosäuren, die zu der gleichen Gruppe gehören: aromatisch (Phe, Trp, Tyr), sauer (Glu, Asp), polar (Gin, Asn) , basisch (Lys, Arg, His), aliphatisch (Ala, Leu, lie, Val), mit einer The term "percent homology" as used herein refers to the percentage of amino acid residues that are homologous at corresponding positions in two optimally aligned sequences. The "percent homology" between two sequences is established in a manner substantially identical to what has been described above in relation to the determination of the "percentage of identity", except for the fact that homologous positions and not only identical positions are taken into account. Two homologous amino acids are either two identical or two homologous amino acids. Homologous amino acid residues have similar chemical and physical properties, for example, amino acids belonging to the same group: aromatic (Phe, Trp, Tyr), acidic (Glu, Asp), polar (Gin, Asn), basic (Lys, Arg, His ), aliphatic (Ala, Leu, lie, Val), with a
Hydroxylgruppe (Ser, Thr) oder mit einer kurzen Seitenkette (Gly, Ala, Ser, Thr, Met). Es wird erwartet, dass Substitutionen zwischen solchen homologen Aminosäuren den Proteinphänotyp nicht verändern (konservative Substitutionen). Hydroxyl group (Ser, Thr) or with a short side chain (Gly, Ala, Ser, Thr, Met). It is expected that substitutions between such homologous amino acids will not alter the protein phenotype (conservative substitutions).
Der Begriff „Arthrose“ bezeichnet eine nicht-entzündliche, mit einer Zustandsänderung verbundene Gelenkerkrankung, kurz Gelenkverschleiß oder Gelenkabnutzung. Dabei wird der Gelenkknorpel meistens über einen längeren Zeitraum chronisch geschädigt, was Arthrose als degenerative Erkrankung ausweist. Die Erkrankung hinterlässt mit der Zeit auch im benachbarten Gewebe, der Gelenkkapsel, dem Knochen und der Muskulatur Spuren. Oft werden auch die Ausdrücke Arthrosis deformans, Osteoarthrose, degenerative Arthropathie oder Osteoarthritis verwendet, die das gleiche Krankheitsbild beschreiben. Dabei weist die Vorsilbe„Osteo“ darauf hin, dass auch der Gelenkknochen an der Krankheit beteiligt ist. Als Ursache werden ein Übermaß an Belastung (etwa erhöhtes Körpergewicht), angeborene oder traumatisch bedingte Ursachen wie Fehlstellungen der Gelenke oder auch knöcherne Deformierung durch Knochenerkrankungen wie Osteoporose gesehen. Grundsätzlich können alle Gelenke von arthrotischen Veränderungen betroffen sein. Man unterscheidet mehrere Arten von Arthrose. Bei der primären Arthrose wird eine biologische Minderwertigkeit des Knorpelgewebes unklarer Ursache angenommen. Sekundäre Arthrosen entstehen durch mechanische Überlastung (etwa bei Hüftgelenksdysplasie), entzündliche Veränderungen (etwa bei Arthritiden) oder metabolische Störungen (etwa bei Chondrokalzinose). Die Arthrose kann auch mit überlastungsbedingter Ergussbildung (sekundäre Entzündungsreaktion) einhergehen (aktivierte Arthrose). In dem Begriff„Arthrose“ ist Osteochondrose eingeschlossen. The term "osteoarthritis" refers to a non-inflammatory, associated with a change in state joint disease, short joint wear or joint wear. The articular cartilage is usually chronically damaged over a longer period of time, which indicates osteoarthritis as a degenerative disease. The disease also leaves its mark on neighboring tissue, the capsule, the bone and the muscles over time. Often, too Arthrosis deformans, osteoarthrosis, degenerative arthropathy or osteoarthritis are used which describe the same condition. The prefix "Osteo" indicates that the joint bone is also involved in the disease. The cause is an excess of stress (such as increased body weight), congenital or traumatic causes such as malalignment of the joints or bony deformity seen by bone diseases such as osteoporosis. Basically, all joints can be affected by arthritic changes. There are several types of osteoarthritis. In the case of primary osteoarthritis a biological inferiority of cartilaginous tissue of unknown cause is assumed. Secondary arthrosis is caused by mechanical overload (such as in hip dysplasia), inflammatory changes (such as in arthritis) or metabolic disorders (such as chondrocalcinosis). Osteoarthritis may also be associated with overgrowth-related effusion (secondary inflammatory reaction) (activated osteoarthritis). The term "osteoarthritis" includes osteochondrosis.
Die Arthrose wird nach dem Röntgenbefund in die Kellgren-Lawrence-Scores 1 bis 4 oder nach dem Ausmaß der Knorpelschädigung in die Outerbridge-Klassifikationen I bis IV eingeteilt. Bei der Arthrose führt eine anfängliche Knorpelschädigung im weiteren Verlauf zu Veränderungen am Knochen. Im Stadium I der Outerbridge- Klassifikation kommt es zu Rauigkeiten und Ausdünnung der Knorpelschicht, tangentiale Fissuren treten auf. Im Stadium II wird hyaliner Knorpel durch Granulationsgewebe und minderwertigere Faserknorpel ersetzt. Es bilden sich Pseudozysten aus nekrotischem Knorpel- und Knochengewebe (Geröllzyste). Im Stadium III treten bereits Ulcerationen auf, das Bindegewebe und die Chondrozyten proliferieren. Im Stadium IV flacht die Knochenplatte eines Gelenkes ab. Um den Druck auf dem Gelenk dennoch abzufangen, bilden sich Randwülste am Knochen (Osteophyten).  Osteoarthritis is classified into the Kellgren Lawrence scores 1 to 4 or the extent of cartilage damage in the Outerbridge Classifications I to IV, as determined by X-ray. In osteoarthritis, initial damage to the cartilage leads to changes in the bone. In stage I of the Outerbridge classification, there is roughness and thinning of the cartilaginous layer, tangential fissures occur. In stage II, hyaline cartilage is replaced by granulation tissue and inferior fibrocartilage. It forms pseudocysts from necrotic cartilage and bone tissue (rubble cyst). In stage III, ulcerations already occur, the connective tissue and the chondrocytes proliferate. In stage IV, the bone plate of a joint flattens out. To catch the pressure on the joint nevertheless, marginal ridges form on the bone (osteophytes).
Tabelle 1 : Übersicht über röntgenologische Veränderungen zur Bestimmung der Kellgren-Lawrence-Scores. Die jeweils zutreffende Zeile bestimmt den Grad.  Table 1: Overview of radiographic changes to determine Kellgren Lawrence scores. The respective applicable line determines the degree.
Die Diagnose der Arthrose erfolgt herkömmlicherweise abhängig vom Gelenkbefall (Hand, Hüfte, Knie) unterschiedlich. Hauptkriterium ist der Gelenkschmerz (Belastungs-, Anlauf-, Ermüdungs-, Dauer-, Nacht-, Endphasenschmerz und Schmerzausstrahlung). Weitere Kriterien sind typische Röntgenbefunde (siehe Kellgren-Lawrence-Score), Bewegungseinschränkungen (z.B. Einschränkung der Innenrotation auf unter 15° in der Hüfte), kurze Phase der Morgensteifigkeit (< 30 min Knie, < 60 min Hüfte), GelenkvergrößerungA/eränderung ohne weitere klinischen Entzündungszeichen, Krepitationen unter Palpation der befallenen Gelenke, höheres Alter (> 50 Jahre), BSG < 40 mm/h, normales CRP (< 5 mg/l), negativer RF und Anti- CCP. Die Diagnose Arthrose darf gestellt werden, wenn das Hauptkriterium und weitere klinische oder serologische Kriterien erfüllt sind (für Details siehe: https://www.hopkinsarthritis.org/physician-corner/education/arthritis-education- diagnostic-guidelines/(15-17)). The diagnosis of osteoarthritis is conventionally different depending on the joint involvement (hand, hip, knee). The main criterion is joint pain (stress, onset, fatigue, permanent, night, end phase pain and pain radiation). Further criteria are typical radiographic findings (see Kellgren-Lawrence score), restricted mobility (eg restriction of internal rotation to below 15 ° in the hip), short phase of morning stiffness (<30 min knee, <60 min hips), joint enlargement A / change without further clinical signs of inflammation, crepitations with palpation of the affected joints, older age (> 50 years), BSG <40 mm / h, normal CRP (<5 mg / l), negative RF and anti-CCP. The diagnosis of osteoarthritis may be made if the main criterion and other clinical or serological criteria are met (for details see: https://www.hopkinsarthritis.org/physician-corner/education/arthritis-education- diagnostic-guidelines / (15- 17)).
Die „rheumatoide Arthritis“ (RA) ist die häufigste entzündliche Erkrankung der Gelenke. Sie kommt bei ca. 1 % der erwachsenen Bevölkerung vor. Der Krankheitsbeginn ist oft schleichend und geht mit Schmerzen in den kleinen Finger- oder Zehengelenken einher, wobei aber auch andere Gelenke betroffen sein können, insbesondere Hand-, Knie-, Schulter, Fuß- und Hüftgelenke. Typischerweise werden bevorzugt die Handwurzelknochen, die Fingergrundgelenke und die proximalen Interphalangealgelenke befallen. Die betroffenen Gelenke schwellen an und sind überwärmt. Eine Rötung der betroffenen Gelenke kann hinzukommen. Morgens sind diese Symptome meist am stärksten ausgeprägt (Morgensteifigkeit). Im Krankheitsverlauf werden immer mehr Gelenke befallen. Meist verläuft die Krankheit schubweise; ein Schub dauert typischerweise zwischen einigen Wochen und Monaten an. Zwischen den einzelnen Schüben lassen die Beschwerden nach. Die Diagnose von RA ist relativ sicher und erfolgt durch Labordiagnostik, Klinikdiagnostik und bildgebende Verfahren entsprechend der ACR/EULAR- Klassifikationskriterien (Aletaha et al ., 2010) Rheumatoid arthritis (RA) is the most common inflammatory disease of the joints. It occurs in about 1% of the adult population. The onset of the disease is often insidious and is associated with pain in the little finger or toe joints, but other joints may be affected, especially the hand, knee, shoulder, foot and hip joints. Typically, the carpal bones, the metacarpophalangeal joints and the proximal interphalangeal joints are preferentially affected. The affected joints swell and are overheated. Redness of the affected joints may be added. In the morning, these symptoms are usually most pronounced (morning stiffness). In the course of the disease, more and more joints are affected. Mostly the disease progresses in batches; a boost typically lasts between a few weeks and months. Between the attacks, the complaints subsided. Diagnosis of RA is relatively safe and is done by laboratory diagnostics, clinical diagnostics, and imaging procedures according to the ACR / EULAR classification criteria (Aletaha et al., 2010).
Tabelle 2: Diagnoseschema nach den ACR/EULAR-Kriterien. Pro Spalte wird der höchste erreichte Punktwert vergeben. Die Spaltenpunkte werden summiert. Eine Rheumatoide Arthritis ist gesichert bei >6 Punkte und gesicherter Synovitis in einem typischen Gelenk (sofern für das entzündete Gelenk keine andere Ursache für die Synovitis vorliegt). RF=Rheuma Faktor, Anti-CCP-AK=Antikörper gegen cyclisch- citrullinierte Peptide, CRP=C-Reaktives Protein, BSG=Blutsenkungsgeschwindigkeit. Table 2: Diagnostic scheme according to the ACR / EULAR criteria. For each column, the highest score is awarded. The column points are summed. Rheumatoid arthritis is assured at> 6 points and assured synovitis in a typical joint (unless there is another cause of synovitis for the inflamed joint). RF = rheumatoid factor, anti-CCP-AK = antibody to cyclic citrullinated peptides, CRP = C-reactive protein, BSG = erythrocyte sedimentation rate.
Bei den bildgebenden Verfahren werden Röntgen- oder MRT-Untersuchungen verwendet, um Schädigungen der Knochen (Erosionen) abschätzen zu können. Typische radiologische Befunde sind subchondrale Osteoporose, Destruktionen des umliegenden Knochens, Ankylosen und Gelenkfehlstellungen (Knopflochdeformität, Schwanenhalsdeformität, Ulnardeviation). Mit der Weichteil- und Knochenszintigraphie kann das Verteilungsmuster der Entzündungsaktivität der verschiedenen Gelenke recht gut dargestellt werden. Um gemäß dem Verfahren der vorliegenden Erfindung Arthrose oder das Risiko, Arthrose zu entwickeln, bei einem Subjekt zu diagnostizieren, muss RA bei diesem Subjekt ausgeschlossen werden. Dies erfolgt unter Verwendung von im Fachgebiet bekannten Verfahren. Der Begriff „wobei das Subjekt keine rheumatoide Arthritis aufweist“ bedeutet deshalb, dass das Subjekt mit den gängigen Methoden auf RA untersucht wird. Wenn mit diesen Methoden RA nicht festgestellt wird, dann weist das Subjekt im Sinne der Erfindung keine RA auf und kann dem Verfahren der vorliegenden Erfindung zur Diagnose von Arthrose oder zur Diagnose des Risikos, Arthrose zu entwickeln, zugeführt werden. Der Ausschluss von RA kann vor, während oder nach dem Nachweis von Autoantikörpern, die mit Arthrose assoziiert sind, erfolgen, erfolgt bevorzugt aber, bevor die Diagnose von Arthrose oder des Risikos, Arthrose zu entwickeln, durchgeführt wird. X-ray or MRI examinations are used in the imaging procedures in order to be able to estimate damage to the bones (erosions). Typical radiological findings are subchondral osteoporosis, destruction of the surrounding bone, ankylosis and joint deformity (buttonhole deformity, gooseneck deformity, ulnar deviation). With soft tissue and bone scintigraphy, the distribution pattern of the inflammatory activity of the various joints can be displayed quite well. In order to diagnose osteoarthritis or the risk of developing osteoarthritis in a subject according to the method of the present invention, RA must be excluded in this subject. This is done using techniques known in the art. The term "the subject does not have rheumatoid arthritis" therefore means that the subject is examined for RA by common methods. If RA is not detected with these methods, then the subject does not have RA in the meaning of the invention and can be supplied to the method of the present invention for the diagnosis of osteoarthritis or for the diagnosis of the risk of developing arthrosis. The exclusion of RA may occur before, during, or after the detection of autoantibodies associated with osteoarthritis, but is preferably done before the diagnosis of osteoarthritis or the risk of developing osteoarthritis is made.
Autoantikörper sind Antikörper, die von einem Subjekt in Reaktion auf ein natives Protein (Autoantigen) erzeugt werden. In der Regel erzeugen Individuen keine Immunantwort auf native Proteine und produzieren deshalb keine Antikörper gegen sie. Doch in seltenen Fällen werden die eigenen nativen Proteine als Antigene erkannt, woraufhin B-Zellen, die solche Autoantikörper bilden, stimuliert und Autoantikörper produziert werden. Dies kann zu verschiedenen Autoimmunerkrankungen führen. Die geringe Präsentation von Knochen- und Knorpelgewebe gegenüber dem Immunsystem kann der Grund für die Bildung von Autoantikörpern gegen Bestandteile von Knorpel oder Knochen bzw. gegen Neoepitope, die bei der proteolytischen Degradation dieser Bestandteile neu entstehen, sein. In der vorliegenden Erfindung wird der Nachweis von Autoantikörper gegen extrazelluläre Matrixproteine, deren Degradationsprodukte oder Fragmente davon zur Diagnose von Arthrose oder einer degenerativen Erkrankung des Skelettsystems verwendet.  Autoantibodies are antibodies produced by a subject in response to a native protein (autoantigen). In general, individuals do not produce an immune response to native proteins and therefore do not produce antibodies to them. However, in rare cases, native proteins are recognized as antigens, whereupon B cells that produce such autoantibodies are stimulated and autoantibodies are produced. This can lead to various autoimmune diseases. The poor presentation of bone and cartilage tissue to the immune system may be the cause of the formation of autoantibodies against components of cartilage or bone or against neoepitopes, which are newly formed in the proteolytic degradation of these components. In the present invention, the detection of autoantibodies against extracellular matrix proteins, their degradation products or fragments thereof is used for the diagnosis of osteoarthritis or a degenerative disease of the skeletal system.
Der Begriff „Autoantikörper, der mit Arthrose assoziiert ist“, wie hierin verwendet, bezieht sich auf Autoantikörper in Subjekten, die an einer Arthrose leiden oder die eine Arthrose entwickeln werden, während ein solcher Autoantikörper in Subjekten ohne Arthrose oder die keine Arthrose entwickeln werden, z. B. mit den hier in Bezug genommenen Verfahren, z. B. einem Antikörper-basiertem Testverfahren, z. B. einem Immunblottest, nicht nachgewiesen werden kann. Autoantikörper, die mit Arthrose assoziiert sind, sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung solche, die gegen Proteine der extrazellulären Knorpelmatrix, Proteine der subchondralen extrazellulären Knochenmatrix, Proteine der Gelenkkapsel oder Proteine der extrazellulären Muskel und Sehnenmatrix, folglich alle Proteine, die im Rahmen der Degradations/Enzündungsprozesse am Gelenk freigesetzt werden können, gerichtet sind. Bevorzugt sind die Autoantikörper gegen Knorpelmatrixproteine außer Kollagen II gerichtet, wobei stärker bevorzugt die Autoantikörper gegen TSP-4, COMP und/oder CLEC3A gerichtet sind. Im Tierversuch wurde nachgewiesen, dass Autoantikörper gegen Knorpelmatrixproteine wie COMP eine pathophysiologische Bedeutung haben und zu schwerer chronischer Arthritis führen können. Somit ist das Vorliegen von Autoantikörpern, die mit Arthrose assoziiert sind, oder von Autoantikörpern, die mit einer degenerativen Erkrankung des Skelettsystems assoziiert sind, bei einem Subjekt ein Hinweis auf eine pathophysiologische Rolle dieser Autoantikörper beim Entstehen, beim Aufweisen und bei der Progression von Arthrose bzw. der degenerativen Erkrankung des Skelettsystems. The term "autoantibody associated with osteoarthritis" as used herein refers to autoantibodies in subjects suffering from osteoarthritis or who will develop osteoarthritis, while such autoantibodies will develop in non-arthritic subjects or those that do not develop arthrosis, z. B. with the methods referred to here, for. B. an antibody-based test method, for. B. an immunoblot test, can not be detected. In the context of the present invention, autoantibodies associated with osteoarthritis are those which are resistant to proteins of the extracellular cartilage matrix, proteins of the subchondral Extracellular bone matrix, proteins of the capsule or proteins of the extracellular muscle and tendon matrix, thus all proteins that can be released in the context of degradation / inflammatory processes at the joint, are directed. Preferably, the autoantibodies are directed against cartilage matrix proteins other than collagen II, more preferably the autoantibodies are directed against TSP-4, COMP and / or CLEC3A. Animal studies have shown that autoantibodies to cartilage matrix proteins such as COMP have a pathophysiological significance and can lead to severe chronic arthritis. Thus, the presence of autoantibodies associated with osteoarthritis or autoantibodies associated with a degenerative disease of the skeletal system is indicative of a pathophysiological role of these autoantibodies in the development, production and progression of arthritis in a subject of the degenerative disease of the skeletal system.
Wie hierin verwendet, beinhaltet der Begriff „ein Autoantikörper“ ein oder mehrere Autoantikörper. Somit umfasst der Begriff „Nachweisen eines Autoantikörpers“ das Nachweisen von einem (1 ) spezifischen Autoantikörper mit z. B. einem (1 ) Nachweisagens als auch das Nachweisen von mehr als einem (1 ) spezifischen Autoantikörper wie 2, 3, 4, 5 oder mehr Autoantikörpern mit z. B. mehr als einem (1 ) Nachweisagens wie 2, 3, 4, 5 bzw. mehr Nachweisagentien.  As used herein, the term "an autoantibody" includes one or more autoantibodies. Thus, the term "autoantibody detection" encompasses the detection of one (1) specific autoantibody with, e.g. As one (1) detection agent as well as the detection of more than one (1) specific autoantibodies such as 2, 3, 4, 5 or more autoantibodies with z. B. more than one (1) detection agent such as 2, 3, 4, 5 or more detection agents.
Knorpelmatrixproteine sind Proteine, die in der Knorpelmatrix Vorkommen. Als Knorpelmatrix bezeichnet man die zwischen den Knorpelzellen gelegene extrazelluläre Matrix (EZM) des Knorpelgewebes. Die Knorpelmatrix besteht aus einer unstrukturierten Grundsubstanz und einem organisierten Netz aus Kollagenfasern. Sie kann in zwei Bereiche unterteilt werden: die territoriale Matrix (Knorpelhof) und die interterritoriale Matrix (Interterritorien, Interterritorialzone). Sie besteht aus einem dichten Netzwerk von Kollagenfasern und bildet zusammen mit den Chondrozyten die Chondrone ("Territorien"). Die territoriale Matrix umgibt die Chondrozyten und schließt sie dadurch ein. Typische Proteine der Knorpelmatrix sind Kollagene (Kollagen I, II und III), Proteine der Thrombospondinfamilie und CLEC3A. Cartilage matrix proteins are proteins that occur in the cartilage matrix. A cartilage matrix is the extracellular matrix (ECM) of the cartilaginous tissue located between the cartilage cells. The cartilage matrix consists of an unstructured ground substance and an organized network of collagen fibers. It can be subdivided into two areas: the territorial matrix (cartilaginous artery) and the interterritorial matrix (inter-territorial, interterritorial zone). It consists of a dense network of collagen fibers and together with the chondrocytes forms the chondrons ("territories"). The territorial matrix surrounds the chondrocytes and encloses them. Typical proteins of the cartilage matrix are collagens (collagen I, II and III), proteins of the thrombospondin family and CLEC3A.
Der Begriff “Degradationsprodukt”, wie hierin verwendet, bezeichnet ein Fragment eines Proteins, z.B. TSP-4, COMP oder CLEC3A, das auf natürliche Weise in einem Subjekt durch Abbauprozesse, z.B. unter Einwirkung von Proteasen, aus dem Volllängenprotein hervorgegangen ist. TSP-4, COMP und CLEC3A unterliegen dabei, wie auch andere Proteine der extrazellulären Matrix, dem Abbau durch sezernierte oder membranständige Proteasen auf zellulärer Ebene. Ein Degradationsprodukt kann ein Epitop umfassen, das bei dem nativen Protein bereits vorhanden ist und deshalb von einem Autoantikörper erkannt wird, der auch das native Protein aufgrund des Epitops erkennt. Alternativ kann einThe term "degradation product" as used herein refers to a fragment of a protein, eg, TSP-4, COMP, or CLEC3A naturally derived in a subject from degradation processes, eg, by the action of proteases, from the full-length protein. TSP-4, COMP and CLEC3A as well as other proteins of the extracellular matrix, the degradation by secreted or membrane-bound proteases at the cellular level. A degradation product may comprise an epitope that is already present in the native protein and therefore recognized by an autoantibody that also recognizes the native protein due to the epitope. Alternatively, a
Degradationsprodukt ein Neoepitop umfassen, das aufgrund der Degradation neu gebildet wird. Solche Neoepitope werden normalerweise nicht durch Autoantikörper gegen die nativen Volllängenproteine erkannt, sondern können die Bildung neuer Autoantikörper stimulieren. Degradation product include a neoepitope, which is newly formed due to the degradation. Such neoepitopes are not normally recognized by autoantibodies to the native full-length proteins, but can stimulate the production of new autoantibodies.
Wie hierin verwendet, versteht man unter„Nachweisagens“ ein beliebiges Molekül, eine beliebige Substanz oder ein beliebiges Reagenz, das/die spezifisch an den Autoantikörper bindet oder mit ihm interagiert. Bevorzugt ist das Nachweisagens fähig, an die Antigenbindungsregion des Autoantikörpers zu binden. Folglich ist in einer bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung das Nachweisagens das Volllängen-Autoantigen, gegen das der Autoantikörper gerichtet ist, oder ein Fragment davon. Zum Beispiel ist das Nachweisagens das Knorpelmatrixprotein (Autoantigen) selbst, gegen das der Autoantikörper gerichtet ist. So kann der Autoantikörper gegen TSP-4 durch Verwendung von Volllängen-TSP-4, gegen COMP durch Verwendung von Volllängen-COMP oder gegen CLEC3A durch Verwendung von Volllängen-CLEC3A detektiert werden. Das Nachweisagens kann auch ein Fragment des Volllängen-Autoantigens sein, sofern das Fragment von dem Autoantikörper gebunden wird (antigenes Fragment). Ein solches Fragment kann aus mindestens 5, mindestens 6, mindestens 7, mindestens 8, mindestens 9, mindestens 10, mindestens 15, mindestens 20, mindestens 25, mindestens 30, mindestens 35, mindestens 40, mindestens 45, mindestens 50 oder mehr als 50 Aminosäureresten des Volllängenautoantigens bestehen. Ein solches Fragment kann auch ein Degradationsprodukt sein, wie vorstehend definiert. Ein solches Degradationsprodukt kann ein Neoepitop umfassen, das durch die Degradation neu gebildet wird und bei dem nativen Protein nicht vorhanden ist. Zum Nachweis von anti-Kollagen II- Autoantikörpern umfasst die vorliegende Erfindung ein Nachweisagens, wie vorstehend definiert, das spezifisch gegen anti-Kollagen Il-Autoantikörper gerichtet ist. Dieses kann ein Volllängen-Kollagen Il-Protein oder ein Fragment davon, einschließlich eines Degradationsprodukts, sein. Alternativ ist ein weiteres Nachweisagens ein Protein oder Peptid mit einem Epitop, das eine Aminosäureidentität oder Aminosäurehomologie zu einem Epitop eines Volllängenautoantigens von mindestens 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% oder 100% aufweist, sofern dieses Epitop des Proteins oder Peptids spezifisch an einen Autoantikörper bindet, an den das Volllängenautoantigen (z. B. SEQ ID NR: 1 , 2, 3 oder 4) bindet. As used herein, "detection agent" means any molecule, substance, or reagent that specifically binds to or interacts with the autoantibody. Preferably, the detection agent is capable of binding to the antigen binding region of the autoantibody. Thus, in a preferred embodiment of the present invention, the detection agent is the full length autoantigen against which the autoantibody is directed, or a fragment thereof. For example, the detection agent is the cartilage matrix protein (autoantigen) itself against which the autoantibody is directed. Thus, the autoantibody against TSP-4 can be detected by using full-length TSP-4, against COMP using full-length COMP, or against CLEC3A using full-length CLEC3A. The detection agent may also be a fragment of the full-length autoantigen, provided that the fragment is bound by the autoantibody (antigenic fragment). Such a fragment may comprise at least 5, at least 6, at least 7, at least 8, at least 9, at least 10, at least 15, at least 20, at least 25, at least 30, at least 35, at least 40, at least 45, at least 50 or more than 50 Consist of amino acid residues of full-length car antigen. Such a fragment may also be a degradation product as defined above. Such a degradation product may include a neoepitope which is newly formed by the degradation and is absent from the native protein. For the detection of anti-collagen II autoantibodies, the present invention comprises a detection agent as defined above that is specifically directed against anti-collagen II autoantibodies. This may be a full-length collagen II protein or a fragment thereof, including a degradation product. Alternatively, another detection agent is a protein or peptide having an epitope that has a Amino acid identity or amino acid homology to an epitope of a full length autoantigen of at least 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% or 100%, provided that this epitope of the protein or peptide binds specifically to an autoantibody, to the the full length autoantigen (eg SEQ ID NO: 1, 2, 3 or 4) binds.
Das Autoantigen oder ein antigenes Fragment davon kann durch dem Fachmann bekannte Verfahren hergestellt werden. Beispielsweise können rekombinante DNA- Techniken verwendet werden, wobei ein DNA-Molekül, das das Autoantigen oder ein Fragment davon kodiert, gentechnisch in einen geeigneten Expressionsvektor eingeführt werden kann. Es kann auch vorteilhaft sein, Fusionsproteine zu konstruieren, die die Markierung, Immobilisierung oder Detektion des Antigens erleichtern (vgl. A Laboratory Manual (4. Auflage), Cold Spring Flarbor Laboratory Press, 2012). Alternativ kann das Autoantigen oder ein antigenes Fragment davon aus natürlichen Quellen gereinigt werden, z.B. unter Verwendung von Proteintrennungstechniken, die im Stand der Technik gut bekannt sind. Solche The autoantigen or an antigenic fragment thereof may be prepared by methods known to those skilled in the art. For example, recombinant DNA techniques may be used wherein a DNA molecule encoding the autoantigen or a fragment thereof may be engineered into a suitable expression vector. It may also be advantageous to construct fusion proteins that facilitate the labeling, immobilization or detection of the antigen (see A Laboratory Manual (4th Edition), Cold Spring Flarbor Laboratory Press, 2012). Alternatively, the autoantigen or an antigenic fragment thereof can be purified from natural sources, e.g. using protein separation techniques well known in the art. Such
Reinigungstechniken umfassen, sind aber nicht beschränkt auf, Molekularsiebchromatographie und/oder lonenaustauschchromatographie. Die Identifikation von antigenen Fragmenten des Autoantigens kann durch Verfahren erfolgen, die im Stand der Technik bekannt sind. Z.B. können Degradationsprodukte, die durch Autoantikörper erkannt werden, durch Immunblots identifiziert, gereinigt und sequenziert werden. Da Knorpelmatrixproteine im Stand der Technik bekannt sind, sind diese Proteine auch kommerziell erhältlich. Z.B. können TSP-4 und COMP von R & D Systems, CLEC3A DNA von Sino Biological und Kollagen II von Merck erworben werden. Purification techniques include, but are not limited to, molecular sieve chromatography and / or ion exchange chromatography. The identification of antigenic fragments of the autoantigen can be accomplished by methods known in the art. For example, Degradation products recognized by autoantibodies can be identified, purified and sequenced by immunoblots. Since cartilage matrix proteins are known in the art, these proteins are also commercially available. For example, For example, TSP-4 and COMP can be purchased from R & D Systems, CLEC3A DNA from Sino Biological, and Collagen II from Merck.
Der Nachweis von einem Autoantikörper in einer Probe, die einem Subjekt entnommen wurde, kann durch eine Vielzahl von Arten erreicht werden, wie sie einem Fachmann bekannt sind. Beispielhafte Verfahren umfassen, sind jedoch nicht beschränkt auf, Antikörper-basierte (Immuntest-basierte) Testverfahren, einschließlich Western-Blot-Verfahren, Immunblot-Verfahren, Enzym-verknüpften Immunsorptionstest (ELISA), Sandwich-Immuntest, Radioimmuntest (RIA),Detection of an autoantibody in a sample taken from a subject may be accomplished by a variety of ways known to those of skill in the art. Exemplary methods include, but are not limited to, antibody-based (immunoassay-based) assays, including Western blotting, immunoblotting, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), sandwich immunoassay, radioimmunoassay (RIA),
Immunpräzipitations- und Dissoziations-verstärkten Lanthanidfluor-Immuntest (DELFIA), Präzipitin-Reaktion, Geldiffusions-Präzipitin-Reaktion,Immunoprecipitation and dissociation-enhanced lanthanide fluorine immunoassay (DELFIA), precipitin reaction, money-diffusion precipitin reaction,
Immundiffusionstest, immunradiometrischen Test, Protein-A-Immuntest, Proteomics- Verfahren, Oberflächenplasmonresonanz (SPR), Chemilumineszenz, Fluoreszenzpolarisation, Phosphoreszenz, Immunhistochemie, Immunfluoreszenz, Mikrocytometrie, Mikroskopie, Fluoreszenz-aktivierte Zellsortierung (FACS), Durchflusszytometrie, Protein-Mikroarrays, Massenspektrometrie-basierten Techniken (einschließlich Flüssigkeitschromatographie, gekoppelt mit Tandem- Massenspektrometrie (LC-MS/MS), Nano-LC-MS/MS, Matrix-unterstützte Laser- Desorption/Ionisations-Massenspektrometrie (MALDI-MS), Matrix-unterstützte Laser- Desorption/Ionisation-Flugzeit (MALDI-TOF)-Massenspektrometrie, oberflächenverstärkte Laser-Desorptions/Ionisations-Massenspektrometrie (SELDI- MS), oberflächenverstärkte Laser-Desorptions/Ionisations-Flugzeit (SELDI-TOF)- Massenspektrometrie, oberflächenverstärktes Affinitätseinfangen (SEAC), oberflächenverstärkte Reindesorption (SEND) oder oberflächenverstärkte photolabile Anheftungs- und Freisetzungs (SEPAR)-Massenspektrometrie. Immunodiffusion test, immunoradiometric assay, protein A immunoassay, proteomics procedure, surface plasmon resonance (SPR), chemiluminescence, Fluorescence polarization, phosphorescence, immunohistochemistry, immunofluorescence, microcytometry, microscopy, fluorescence activated cell sorting (FACS), flow cytometry, protein microarrays, mass spectrometry based techniques (including liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry (LC-MS / MS), nano-LC -MS / MS, matrix-assisted laser desorption / ionization mass spectrometry (MALDI-MS), matrix-assisted laser desorption / ionization time-of-flight (MALDI-TOF) mass spectrometry, surface-enhanced laser desorption / ionization mass spectrometry (SELDI) MS), Surface Enhanced Laser Desorption / Ionization Time of Flight (SELDI-TOF) Mass Spectrometry, Surface Enhanced Affinity Capture (SEAC), Surface Enhanced Reindisorption (SEND), or Surface Enhanced Photolabile Attachment and Release (SEPAR) Mass Spectrometry.
Bevorzugt wird der Nachweis mit Hilfe eines Nachweisagens durchgeführt. Dabei wird eine Probe von einem Subjekt mit dem Antigen unter Bedingungen in Kontakt gebracht, die eine immunspezifische Antigen-Antikörper-Bindungsreaktion erlauben. Das Antigen kann in Lösung sein oder kann auf einem Träger immobilisiert sein. Umgekehrt kann der Autoantikörper auf einem Träger immobilisert sein. Falls in der Probe des Subjekts Autoantikörper vorhanden sind, erfolgt eine Bindung an das Antigen. Das bevorzugte Nachweisverfahren ist dabei ein Antikörper-basiertes Testverfahren, insbesondere ein Immunblot-Verfahren, bei dem z. B. das Matrixprotein in einem Gel aufgetrennt, auf eine Membran transferiert und mit einem Nachweisagens und markiertem anti-lgG-Antikörper detektiert wird. Weitere bevorzugte Nachweisverfahren sind Immunoassays,, Slot/Dotblot-Verfahren, Lineblot-Verfahren, Fluoreszenznachweis auf Zellen oder Gewebe, Oberflächenplasmonresonanz-Verfahren oder Biochip/Proteinarray-Verfahren.  The detection is preferably carried out with the aid of a detection agent. In doing so, a sample from a subject is contacted with the antigen under conditions permitting an immunospecific antigen-antibody binding reaction. The antigen may be in solution or may be immobilized on a support. Conversely, the autoantibody can be immobilized on a support. If autoantibodies are present in the subject's sample, binding to the antigen occurs. The preferred detection method is an antibody-based test method, in particular an immunoblot method in which z. B. the matrix protein is separated in a gel, transferred to a membrane and detected with a detection agent and labeled anti-IgG antibody. Further preferred detection methods are immunoassays, slot / dot blot methods, line blot methods, fluorescence detection on cells or tissue, surface plasmon resonance methods or biochip / protein array methods.
Unter„spezifisch bindet“ oder„spezifisch interagiert“ oder„immunspezifisch“ wird hierin verstanden, dass das Nachweisagens im Wesentlichen nur an den Autoantikörper bindet, der nachgewiesen werden soll, oder mit ihm interagiert, während es an andere Substanzen nicht bindet oder nicht mit ihnen interagiert oder dies nur in geringem Ausmaß tut. „Im Wesentlichen“ oder „geringes Ausmaß“ bedeutet, dass das Nachweisagens an die andere Substanz zu weniger als 10, 5, 4, 3, 2 oder 1 % des Ausmaßes bindet, mit dem das Nachweisagens spezifisch an den Autoantikörper bindet. Der Nachweis kann qualitativ und/oder quantitativ erfolgen. Dies kann die Hinzuziehung einer Referenz erfordern, um zu bestimmen, ob und/oder in welcher Konzentration der Autoantikörper in einer bestimmten Probenmenge vorliegt. Eine solche Referenz kann der Autoantikörper von bekannter Konzentration sein, der z. B. in einer Verdünnungsreihe vorliegt. Um die Konzentration des Autoantikörpers in einer Probe von einem Subjekt messen zu können, wird der Nachweis des Autoantikörpers in der Probe und der Verdünnungsreihe unter gleichen Bedingungen durchgeführt. Eine solche Referenz kann alternativ das Nachweisreagenz sein, das z. B. in einer Verdünnungsreihe vorliegt und mit Autoantikörpern definierter Konzentration/en bindet oder interagiert, um die Konzentration des Autoantikörpers von der Probe des Subjekts zu bestimmen. By "specifically binds" or "specifically interacting" or "immunospecific" herein is meant that the detection agent essentially binds only to the autoantibody to be detected or interacts with it, while not binding to other substances or not interacts or does so only to a small extent. By "substantial" or "minor extent" is meant that the detection agent binds to the other substance to less than 10, 5, 4, 3, 2 or 1% of the extent to which the detection agent specifically binds to the autoantibody. The proof can be qualitative and / or quantitative. This may require the inclusion of a reference to determine if and / or at what concentration the autoantibody is present in a particular amount of sample. Such a reference may be the autoantibody of known concentration, e.g. B. is present in a dilution series. In order to be able to measure the concentration of the autoantibody in a sample from a subject, the detection of the autoantibody in the sample and the dilution series is carried out under the same conditions. Such a reference may alternatively be the detection reagent, e.g. B. is in a dilution series and binds or interacts with autoantibodies of defined concentration (s) to determine the concentration of the autoantibody from the sample of the subject.
Weiterhin betrifft die vorliegende Erfindung das Verfahren zur Diagnose von Arthrose oder des Risikos, Arthrose zu entwickeln, der vorliegenden Erfindung, wobei der Verlauf von Arthrose überwacht wird, umfassend den Nachweis des Autoantikörpers zu verschiedenen Zeitpunkten; oder wobei das Stadium von Arthrose diagnostiziert wird. Der Verlauf ist gekennzeichnet durch das unterschiedlich schnelle Voranschreiten der Erkrankung (chronisch progredient) z. B. in Abhängigkeit von der Reduktion der Risikofaktoren oder ggf. in Zukunft in Abhängigkeit von der Therapie mit den Krankheitsverlauf modifizierenden Medikamenten. Das Krankheitsstadium kann mittels Röntgen in Arthrose-Grade (Kellgren-Lawrence-Score) untergliedert werden. Typischerweise durchläuft der Arthrose-Patient im Verlauf seiner Erkrankung die Stadien nach Kellgren-Lawrence nacheinander.  Furthermore, the present invention relates to the method of diagnosing osteoarthritis or the risk of developing osteoarthritis of the present invention, wherein the course of osteoarthritis is monitored, comprising detecting the autoantibody at different times; or where the stage of osteoarthritis is diagnosed. The course is characterized by the different rapid progression of the disease (chronic progressive) z. B. depending on the reduction of the risk factors or possibly in the future depending on the therapy with the disease course modifying drugs. The disease stage can be subdivided by means of X-ray into arthrosis grade (Kellgren Lawrence score). Typically, during the course of his illness, the osteoarthritis patient undergoes Kellgren-Lawrence's stadiums in succession.
Bei der Progression der Arthrose werden durch die Degradation der extrazellulären Knorpelmatrix Knorpel (Gelenkkapsel-, subchondrale Knochen-, Muskel- und Sehnen)-Proteine bzw. ihre Fragmente in die Synovia und den Blutkreislauf freigesetzt und somit dem Immunsystem präsentiert, welches abhängig von der Konzentration der Proteine oder Fragmente Autoantikörper bildet. Folglich deuten ansteigende Konzentrationen von Autoantikörpern auf eine Progression der Arthrose hin, während abnehmende Konzentrationen von Autoantikörpern eine verlangsamte oder gestoppte Progression anzeigen.  In the progression of osteoarthritis, cartilage (joint capsule, subchondral bone, muscle and tendon) proteins or their fragments are released into the synovium and the bloodstream through the degradation of the extracellular cartilage matrix and thus presented to the immune system, which depends on the concentration of proteins or fragments forms autoantibodies. Thus, increasing levels of autoantibodies indicate progression of osteoarthritis, while decreasing levels of autoantibodies indicate slowed or stopped progression.
Die vorliegende Erfindung betrifft in einem 2. Aspekt weiterhin ein Verfahren zur Diagnose einer degenerativen Erkrankung des Skelettsystems oder des Risikos, eine degenerative Erkrankung des Skelettsystems zu entwickeln, bei einem Subjekt, umfassend das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen Thrombospondin-4 (TSP-4) oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon oder dasThe present invention in a second aspect further relates to a method of diagnosing a degenerative disease of the skeletal system or the risk of developing a degenerative disease of the skeletal system in a subject comprising detecting an autoantibody against thrombospondin-4 (TSP-4) or a degradation product or a fragment thereof or the
Nachweisen von einem Autoantikörper gegen COMP oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon in einer von dem Subjekt stammenden Probe. Detecting an autoantibody against COMP or a degradation product or a fragment thereof in a sample derived from the subject.
In einer Ausführungsform davon betrifft die vorliegende Erfindung dieses Verfahren des 2. Aspekts, wobei die degenerative Erkrankung des Skelettsystems rheumatoide Arthritis oder Arthrose umfasst. In einer Ausführungsform davon betrifft die vorliegende Erfindung dieses Verfahren des 2. Aspekts, wobei dieses Verfahren das Nachweisen von mindestens zwei Autoantikörpern umfasst; bevorzugt wobei dieses Verfahren das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen Thrombospondin-4 (TSP-4) oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon und das In one embodiment thereof, the present invention relates to this method of the second aspect, wherein the degenerative disease of the skeletal system comprises rheumatoid arthritis or osteoarthritis. In one embodiment thereof, the present invention relates to this method of the second aspect, which method comprises detecting at least two autoantibodies; Preferably, this method comprises detecting an autoantibody against thrombospondin-4 (TSP-4) or a degradation product or a fragment thereof and the
Nachweisen von einem Autoantikörper gegen COMP oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst; oder bevorzugt wobei dieses Verfahren das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen Thrombospondin-4 (TSP-4) oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon und das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen CLEC3A oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst; stärker bevorzugt wobei dieses Verfahren das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen Thrombospondin-4 (TSP-4) oder einDetecting an autoantibody against COMP or a degradation product or a fragment thereof; or preferably wherein said method comprises detecting an autoantibody against thrombospondin-4 (TSP-4) or a degradation product or a fragment thereof and detecting an autoantibody against CLEC3A or a degradation product or a fragment thereof; more preferably, wherein this method comprises detecting an autoantibody against thrombospondin-4 (TSP-4) or a
Degradationsprodukt oder ein Fragment davon, das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen COMP oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon und das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen CLEC3A oder einA degradation product or a fragment thereof, detecting an autoantibody against COMP or a degradation product or fragment thereof, and detecting or detecting an autoantibody against CLEC3A
Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst. Degradation product or a fragment thereof.
In einer Ausführungsform davon betrifft die vorliegende Erfindung dieses Verfahren des 2. Aspekts, wobei der Autoantikörper gegen ein Neoepitop eines In one embodiment thereof, the present invention relates to this method of the second aspect, wherein the autoantibody against a neoepitope of a
Degradationsprodukts eines Matrixproteins gerichtet ist. Degradation product of a matrix protein is directed.
In einer Ausführungsform davon betrifft die vorliegende Erfindung dieses Verfahren des 2. Aspekts, wobei das Nachweisen mit einem Nachweisagens erfolgt, bevorzugt wobei das Nachweisagens fähig ist, an die Antigenbindungsregion des Autoantikörpers zu binden, stärker bevorzugt wobei das Nachweisagens TSP-4 oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon, COMP oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon und/oder CLEC3A oder einIn one embodiment thereof, the present invention relates to this method of the second aspect, wherein the detection is with a detection agent, preferably wherein the detection agent is capable of binding to the antigen binding region of the autoantibody, more preferably wherein the detection agent is TSP-4 or a degradation product or a fragment thereof, COMP or a degradation product or a fragment thereof and / or CLEC3A or a
Degradationsprodukt oder ein Fragment davon ist. Degradation product or a fragment thereof.
In einer Ausführungsform davon betrifft die vorliegende Erfindung dieses Verfahren des 2. Aspekts, wobei die Probe Körperflüssigkeit, bevorzugt Blut, Serum, Blutplasma, Synovialflüssigkeit oder Urin, Muskel- oder Knorpelgewebe, Synovialmembran oder Sehne ist. In one embodiment thereof, the present invention relates to this method of the second aspect, wherein the sample comprises body fluid, preferably blood, serum, Blood plasma, synovial fluid or urine, muscle or cartilage tissue, synovial membrane or tendon.
Unter „degenerativer Erkrankung“ versteht man allgemein die mit einer fortschreitenden Degeneration einhergehende Erkrankung. Degeneration bezeichnet funktionelle und/oder morphologische Veränderungen einer Zelle, eines Gewebes, eines Organs oder des gesamten Organismus, die im Vergleich zur vollen physiologischen Leistungsfähigkeit eine Verschlechterung zum Beispiel durch Rückbildung, Verfall, Abbau oder Funktionsverlust anlagebedingt oder aufgrund von chronischen Schädigungsfaktoren darstellen. Unter„degenerativer Erkrankung des Skelettsystems“, wie hierin verwendet, versteht man die Degeneration der Wirbelsäule und der Gelenke bzw. ihrer Knorpelbestandteile, bevorzugt RA oder Arthrose.  By "degenerative disease" is generally meant the disease associated with progressive degeneration. Degeneration refers to functional and / or morphological alterations of a cell, tissue, organ or whole organism which, compared to the full physiological performance, are a deterioration, for example due to regression, deterioration, degradation or loss of function due to plant or chronic damage factors. By "degenerative disease of the skeletal system" as used herein is meant the degeneration of the spine and joints or their cartilage components, preferably RA or osteoarthritis.
Die Erfindung betrifft in einem 3. Aspekt weiterhin ein Verfahren zur Diagnose von Arthrose oder des Risikos, Arthrose zu entwickeln, bei einem Subjekt, umfassend das Ausschließen des Vorliegens eines Autoantikörpers gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon, bevorzugt wobei das Verfahren das Nachweisen, d.h. den Schritt des Nachweisens, eines Autoantikörpers gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst, stärker bevorzugt wobei das Verfahren das Nachweisen eines Autoantikörpers gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon mit einem Nachweisagens zum Nachweisen eines Autoantikörpers gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst.  The invention further relates, in a third aspect, to a method of diagnosing osteoarthritis or the risk of developing osteoarthritis in a subject comprising excluding the presence of an autoantibody against collagen II or a degradation product or a fragment thereof, preferably wherein the method comprises Prove, ie the step of detecting an autoantibody against collagen II or a degradation product or a fragment thereof, more preferably wherein the method comprises detecting an autoantibody against collagen II or a degradation product or a fragment thereof with a detection agent for detecting an autoantibody against collagen II Degradation product or a fragment thereof.
In einer Ausführungsform davon betrifft die vorliegende Erfindung dieses Verfahren des 3. Aspekts, wobei die Arthrose zusätzlich durch herkömmliche Methoden diagnostiziert wird.  In one embodiment thereof, the present invention relates to this method of the third aspect, wherein the osteoarthritis is additionally diagnosed by conventional methods.
In einer Ausführungsform davon betrifft die Erfindung das vorstehende Verfahren des 3. Aspekts zur Diagnose von Arthrose oder des Risikos, Arthrose zu entwickeln, bei einem Subjekt, umfassend das Ausschließen des Vorliegens eines Autoantikörpers gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon, wobei bei fehlendem Nachweis eines Autoantikörpers gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon das Subjekt diagnostiziert wird, dass es Arthrose aufweist, während bei Nachweis eines Autoantikörpers gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon das Subjekt diagnostiziert wird, dass es keine Arthrose aufweist. Das vorstehende Verfahren, umfassend den Nachweis eines Autoantikörpers gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon, kann gemäß der vorliegenden Erfindung alleine verwendet werden, um das Vorliegen von Arthrose oder das Nicht-Vorliegen von Arthrose bei einem Subjekt nachzuweisen. Alternativ kann dieses Verfahren zusätzlich zu herkömmlichen Diagnoseverfahren von Arthrose oder zusätzlich zu dem Verfahren zur Diagnose von Arthrose oder des Risikos, Arthrose zu entwickeln, der vorliegenden Erfindung unter Nachweis eines Autoantikörpers, der mit Arthrose assoziiert ist, verwendet werden. Dabei kann der Nicht-Nachweis oder der Nachweis eines Autoantikörpers gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon als zusätzliches Indiz gewertet werden, dass Arthrose (Nicht-Nachweis) bzw. dass keine Arthrose (Nachweis) bei dem Subjekt vorliegt. In one embodiment thereof, the invention relates to the above method of the third aspect for diagnosing osteoarthritis or the risk of developing osteoarthritis in a subject comprising excluding the presence of an autoantibody against collagen II or a degradation product or a fragment thereof, wherein lack of detection of an autoantibody against collagen II, or a degradation product or a fragment thereof, the subject is diagnosed as having arthritis, whereas if an autoantibody against collagen II or a degradation product or a fragment thereof is detected, the subject is diagnosed as having no arthritis. The above method comprising detecting an autoantibody against collagen II or a degradation product or a fragment thereof, according to the present invention, can be used alone to detect the presence of osteoarthritis or the non-existence of osteoarthritis in a subject. Alternatively, this method can be used in addition to conventional diagnostic methods of osteoarthritis or in addition to the method of diagnosing osteoarthritis or the risk of developing osteoarthritis of the present invention by detecting an autoantibody associated with osteoarthritis. In this case, the non-detection or detection of an autoantibody against collagen II or a degradation product or a fragment thereof can be considered as an additional indication that osteoarthritis (non-detection) or that there is no arthritis (detection) in the subject.
In einer Ausführungsform davon betrifft die vorliegende Erfindung dieses Verfahren des 3. Aspekts, wobei die Probe Körperflüssigkeit, bevorzugt Blut, Serum, Blutplasma, Synovialflüssigkeit oder Urin, Muskel- oder Knorpelgewebe, In one embodiment thereof, the present invention relates to this method of the third aspect, wherein the sample comprises body fluid, preferably blood, serum, blood plasma, synovial fluid or urine, muscle or cartilage tissue,
Synovialmembran oder Sehne ist. Synovial membrane or tendon is.
Die vorliegende Erfindung betrifft weiterhin einen Kit zur Diagnose von Arthrose oder des Risikos, Arthrose zu entwickeln, bei einem Subjekt, wobei das Subjekt keine rheumatoide Arthritis aufweist, umfassend ein Nachweisagens zum Nachweisen von einem Autoantikörper, der mit Arthrose assoziiert ist, bevorzugt wobei das Nachweisagens ein Nachweisagens zum Nachweisen von einem Autoantikörper gegen TSP-4 oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon oder ein Nachweisagens zum Nachweisen von einem Autoantikörper gegen COMP oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst.  The present invention further relates to a kit for diagnosing osteoarthritis or the risk of developing osteoarthritis in a subject, wherein the subject does not have rheumatoid arthritis, comprising a detection reagent for detecting an autoantibody associated with osteoarthritis, preferably wherein the detection agent a detection agent for detecting an autoantibody against TSP-4 or a degradation product or a fragment thereof or a detection agent for detecting an autoantibody against COMP or a degradation product or a fragment thereof.
Die vorliegende Erfindung betrifft weiterhin einen Kit zur Diagnose einer degenerativen Erkrankung des Skelettsystems oder des Risikos, eine degenerative Erkrankung des Skelettsystems zu entwickeln, bei einem Subjekt, umfassend ein Nachweisagens zum Nachweisen von einem Autoantikörper gegen TSP-4 oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon oder ein Nachweisagens zum Nachweisen von einem Autoantikörper gegen COMP oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst, bevorzugt wobei die degenerative Erkrankung des Skelettsystems rheumatoide Arthritis oder Arthrose (inklusive Osteochondrose) umfasst. In einer Ausführungsform davon betrifft die vorliegende Erfindung den Kit, wie vorstehend beschrieben, wobei das Nachweisagens mindestens zwei Nachweisagentien zum Nachweisen von mindestens zwei Autoantikörpern umfasst, bevorzugt wobei das Nachweisagens ein Nachweisagens zum Nachweisen von einem Autoantikörper gegen TSP-4 oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon und ein Nachweisagens das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen COMP oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst; oder bevorzugt wobei das Nachweisagens ein Nachweisagens zum Nachweisen von einem Autoantikörper gegen TSP-4 oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon und ein Nachweisagens das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen CLEC3A oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst; stärker bevorzugt wobei das Nachweisagens ein Nachweisagens zum Nachweisen von einem Autoantikörper gegen TSP-4 oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon, ein Nachweisagens zum Nachweisen von einem Autoantikörper gegen COMP oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon und ein Nachweisagens zum Nachweisen von einem Autoantikörper gegen CLEC3A oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst. The present invention further relates to a kit for diagnosing a degenerative disease of the skeletal system or the risk of developing a degenerative disease of the skeletal system in a subject comprising a detecting agent for detecting an autoantibody against TSP-4 or a degradation product or a fragment thereof or a detection agent for detecting an autoantibody against COMP or a degradation product or a fragment thereof, preferably wherein the degenerative disease of the skeletal system comprises rheumatoid arthritis or osteoarthritis (including osteochondrosis). In one embodiment thereof, the present invention relates to the kit as described above, wherein the detection agent comprises at least two detection agents for detecting at least two autoantibodies, preferably wherein the detection agent is a detection agent for detecting an autoantibody against TSP-4 or a degradation product or a fragment and a detection agent comprising detecting an autoantibody against COMP or a degradation product or a fragment thereof; or preferably wherein the detection agent comprises a detection agent for detecting an autoantibody against TSP-4 or a degradation product or a fragment thereof and a detection agent detecting an autoantibody against CLEC3A or a degradation product or a fragment thereof; More preferably, the detection agent is a detection agent for detecting an autoantibody against TSP-4 or a degradation product or a fragment thereof, a detection agent for detecting an autoantibody against COMP or a degradation product or a fragment thereof and a detection agent for detecting an autoantibody against CLEC3A or a degradation product or a fragment thereof.
In einer Ausführungsform davon betrifft die vorliegende Erfindung den Kit, wobei der Kit weiterhin ein Nachweisagens zum Nachweisen von einem Autoantikörper gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst.  In one embodiment thereof, the present invention relates to the kit, wherein the kit further comprises a detection agent for detecting an autoantibody against collagen II or a degradation product or a fragment thereof.
Die vorliegende Erfindung betrifft weiterhin die Verwendung des Kits zur Diagnose von Arthrose oder des Risikos, Arthrose zu entwickeln, bei einem Subjekt, wobei das Subjekt keine rheumatoide Arthritis aufweist; oder zur Diagnose von einer degenerativen Erkrankung des Skelettsystems oder des Risikos, eine degenerative Erkrankung des Skelettsystems zu entwickeln, bei einem Subjekt, bevorzugt wobei die degenerative Erkrankung des Skelettsystems rheumatoide Arthritis oder Arthrose (inklusive Osteochondrose) umfasst.  The present invention further relates to the use of the osteoarthritis diagnostic kit or the risk of developing osteoarthritis in a subject wherein the subject is free of rheumatoid arthritis; or for diagnosing a degenerative disease of the skeletal system or the risk of developing a degenerative disease of the skeletal system in a subject, preferably wherein the degenerative disease of the skeletal system comprises rheumatoid arthritis or osteoarthritis (including osteochondrosis).
Der Kit kann weiterhin zu dem Nachweisagens einen festen Träger wie eine Membran (z.B. PVDF-Membran), einen Chip, einen Sensor, eine Mikrotiterplatte, Kügelchen, Flarz, Glas, Keramik oder Metall, das mit einem synthetischen Polymer, Glas, Keramik, synthetischen Polymeren und Biopolymeren beschichtet ist, z.B. quervernetztem Dextran oder Agarose, Nylon, Polyethylen oder Polystyrol umfassen. Das Nachweisagens kann bereits auf dem festen Träger immobilisiert sein, oder Träger und Nachweisagens sind in getrennten Behältern enthalten und das Nachweisagens wird vor der Verwendung auf den festen Träger aufgetragen und immobilisiert. Das Nachweisagens liegt bevorzugt in einer oder mehreren definierten Mengen vor, um die Abschätzung der Menge des Autoantikörpers in der Subjektprobe zu erlauben. Der Kit kann weiterhin Bestandteile umfassen, die zum Ausführen des Verfahrens der vorliegenden Erfindung geeignet sind, beispielsweise Waschlösungen oder Lösungen oder Vorrichtungen, um ein bestimmtes Nachweisverfahren auszuführen, z.B. Massenspektrometriesonden für SELDI wie ProteinChip®-Arrays oder auf Faser basierende Sensorvorrichtungen, etc. Eine Waschlösung kann zum Abwaschen von Probenresten nach deren Aufträgen auf den festen Träger, an den das Nachweisagens immobilisiert wird, oder zum Abwaschen von Resten des Nachweisagens, das zur Immobilisierung auf einen festen Träger aufgebracht wird, verwendet werden. Der Kit kann mehr als eine Art von Nachweisagens gegen verschiedene Autoantikörper umfassen. Z. B. kann der Kit mehrere Knorpelmatrixproteine, die mit Arthrose assoziiert sind, oder Degradationsprodukte oder Fragmente davon, z.B. Kombinationen von TSP-4 und COMP, von TSP-4 und CLEC3A oder von TSP-4 und COMP und CLEC3A, gegebenenfalls mit Kollagen II, oder Degradationsprodukte oder Fragmente davon, in getrennten oder gleichen Behältern umfassen. The kit may further comprise, for the detection agent, a solid support such as a membrane (eg PVDF membrane), a chip, a sensor, a microtiter plate, beads, flask, glass, ceramic or metal that is synthetic, glass, ceramic, synthetic Polymers and biopolymers, for example cross-linked dextran or agarose, nylon, polyethylene or polystyrene. The detection agent may already be immobilized on the solid support, or support and detection agent are contained in separate containers and the Detecting Agent is applied to the solid support and immobilized prior to use. The detection agent is preferably present in one or more defined amounts to allow the estimation of the amount of autoantibody in the subject sample. The kit may further comprise components suitable for carrying out the method of the present invention, for example, wash solutions or solutions or devices to perform a particular detection method, eg, SELDI mass spectrometry probes such as ProteinChip® arrays or fiber-based sensing devices, etc. A washing solution can be used to wash off any residual samples after their application to the solid support to which the detection agent is immobilized, or to wash away residues of the detection agent applied to a solid support for immobilization. The kit may include more than one type of anti-autoantibody detection agent. For example, the kit may include multiple cartilage matrix proteins associated with osteoarthritis, or degradation products or fragments thereof, eg, combinations of TSP-4 and COMP, TSP-4 and CLEC3A, or TSP-4 and COMP and CLEC3A, optionally with collagen II, or Degradation products or fragments thereof, in separate or equal containers.
In einer weiteren Ausführungsform kann der Kit Anweisungen für die Ausführung des Verfahrens der vorliegenden Erfindung und/oder die Interpretation der Ergebnisse umfassen, z.B. in Form eines Beipackzettels oder einer Broschüre. Zum Beispiel können die Anweisungen den Verbraucher informieren, wie die Probe zu gewinnen, ggf. das Nachweisagens auf dem festen Träger zu immobilisieren, der Träger zu waschen und/oder die Probe aufzutragen ist. Der Kit kann zusätzlich Referenz- Nachweisagens einer definierten Menge oder in mehreren definierten Mengen enthalten, wobei das Referenz-Nachweisagens die Abschätzung der Konzentration des Autoantikörpers in der Probe erlaubt. Das Referenz-Nachweisagens ist dabei dasselbe wie das eigentliche Nachweisagens, z.B. TSP-4, TSP-4 und COMP, TSP-4 und CLEC3A oder TSP-4 und COMP und CLEC3A, gegebenenfalls mit Kollagen II, oder Degradationsprodukte oder Fragmente davon. Wenn die Referenz ein Referenz-Nachweisagens ist, kann der Kit zusätzlich Autoantikörper einer oder mehrerer bestimmten Konzentrationen enthalten, die ggf. bereits auf einem festen Träger immobilisiert sein können, um den Vergleich mit dem Autoantikörper von der Probe des Subjekts zu erlauben. Oder der Kit kann zusätzlich Referenz- Autoantikörper einer bestimmten Menge oder in mehreren bestimmten Mengen enthalten, ggf. in einem zusätzlichen Behältnis oder bereits auf einem festen Träger immobilisiert, wobei der Autoantikörper die Abschätzung der Konzentration des Autoantikörpers in der Probe erlaubt. Der/die Referenz-Autoantikörper ist/sind dabei derselbe/dieselben wie der/die eigentliche/n Autoantikörper, z.B. gegen TSP-4, TSP- 4 und COMP, TSP-4 und CLEC3A oder TSP-4 und COMP und CLEC3A, und gegebenenfalls gegen Kollagen II, oder Degradationsprodukte oder Fragmente davon. In another embodiment, the kit may include instructions for carrying out the method of the present invention and / or interpreting the results, eg, in the form of a leaflet or booklet. For example, the instructions may inform the consumer how to recover the sample, if necessary immobilize the detection agent on the solid support, wash the support, and / or apply the sample. The kit may additionally contain reference detection agent of a defined amount or in several defined amounts, the reference detection agent allowing the estimation of the concentration of the autoantibody in the sample. The reference detection agent is the same as the actual detection agent, eg TSP-4, TSP-4 and COMP, TSP-4 and CLEC3A or TSP-4 and COMP and CLEC3A, optionally with collagen II, or degradation products or fragments thereof. If the reference is a reference detection agent, the kit may additionally contain autoantibodies of one or more particular concentrations, which may be already immobilized on a solid support to allow comparison with the autoantibody from the subject's sample. Or the kit can also provide reference Containing autoantibodies of a certain amount or in several specific amounts, if necessary in an additional container or already immobilized on a solid support, wherein the autoantibody allows the estimation of the concentration of the autoantibody in the sample. The reference autoantibody (s) are the same as the actual autoantibody (s), eg TSP-4, TSP-4 and COMP, TSP-4 and CLEC3A or TSP-4 and COMP and CLEC3A, and optionally against collagen II, or degradation products or fragments thereof.
Die vorliegende Erfindung betrifft weiterhin einen Wirkstoff zur Verwendung zur Behandlung oder Vorbeugung einer autoimmun-assoziierten Arthrose bei einem Subjekt, bevorzugt wobei der Wirkstoff Rituximab ist. Das Subjekt ist dabei das durch das vorliegende Verfahren diagnostizierte Subjekt.  The present invention further relates to an active ingredient for use in the treatment or prevention of autoimmune-associated osteoarthritis in a subject, preferably wherein the active ingredient is rituximab. The subject is the subject diagnosed by the present method.
Aktuell existiert keine medikamentöse Therapie, welche die Progression der Arthrose beeinflusst. Allerdings kommen nicht steroidale Antirheumatika (z. B. Ibuprofen, Diclofenac, Indometacin und Napropxen und Coxibe) zur Linderung der Beschwerden zum Einsatz, ggf. bei starken Schmerzen auch Opioide. In Phasen der akuten Gelenkentzündung kommt ggf. eine intraartikuläre Gabe von z. B. Triamcinolonhexacetonid (Glukocorticoid) in Frage. Die vorliegende Erfindung ist auf den Nachweis von Autoantikörpern, die mit Arthrose assoziiert sind, gerichtet. Im Tierversuch wurde nachgewiesen, dass Autoantikörper gegen Knorpelmatrixproteine wie COMP eine pathophysiologische Bedeutung haben und zu schwerer chronischer Arthritis führen können. Somit ist das Vorliegen von Autoantikörpern, die mit Arthrose assoziiert sind, bei einem Subjekt ein Hinweis auf eine pathophysiologische Rolle dieser Autoantikörper beim Entstehen, beim Aufweisen und bei der Progression von Arthrose. Die Pathophysiologie der Autoantikörper erlaubt deshalb die Anwendung einer spezifischen, individuellen Therapie (personalisierte Therapie), die eine allgemeine Immuntherapie zur Unterdrückung der Bildung von Autoantikörpern als auch eine Therapie zur Unterdrückung der Bildung von spezifischen Autoantikörpern, die mit Arthrose assoziiert sind, einschließt. Vorstellbar wäre eine „targeted- Therapie“, bei welcher ein Zytostatikum durch spezifische Bindung eines Antigens zur Immunzelle transportiert wird und diese dabei abgetötet wird. Folglich ist bei Patienten, bei denen Autoantikörper, die mit Arthrose assoziiert sind, nachgewiesen werden, jede Art von Therapie wirksam, die die Konzentration der Autoantikörper reduziert, z. B. indem sie die Bildung neuer Autoantikörper hemmt. Deshalb ist eine Form von Therapie im Rahmen der vorliegenden Erfindung die Immuntherapie bzw. die Autoimmuntherapie, da sie gegen Autoantikörper gerichtet ist. Immuntherapien sind Behandlungsformen, bei denen das Immunsystem beeinflusst wird. Hierbei kommen in Abhängigkeit von der Erkrankung modulierende (stimulierende und supprimierende) oder substituierende (ersetzende) Verfahren zur Anwendung. Bei Autoimmunkrankheiten kommen im Allgemeinen supprimierende Verfahren, die immunologische Prozesse unterdrücken, z. B. die Gabe von Immunsuppressiva, zur Anwendung, um unerwünschte Reaktionen des Immunsystems zu hemmen. Gängige Immunsuppressiva sind z. B. Ciclosporin A, Tacrolimus, Sirolimus, Azathioprin und Methotrexat. Immunsuppressive Verfahren finden auch im Rahmen der vorliegenden Erfindung bei der Behandlung von immun-assoziierter Arthrose Anwendung. Bevorzugt ist eine im Rahmen der vorliegenden Erfindung verwendete Therapie auf eine Reduktion der Plasma- oder B-Zellen ausgerichtet, wobei die Therapie bevorzugt durch eine intraartikuläre oder systemische, besonders bevorzugt intraartikuläre, Gabe eines Wirkstoffs erfolgt, der eine solche Reduktion bewirken kann, wie z. B. Rituximab, Ofatumumab, Ocrelizumab und Epratuzumab bevorzugt Rituximab. Eine andere Form der Therapie ist eine Behandlung mit Wirkstoffen wie Antikörper, die B-Zell-stimulierende Zytokine neutraliseren oder hemmen, z. B. Anakinra, Infliximab, Adalimumab Etanercept, Tocilizumab. Eine weitere Form der Therapie ist die Inhibierung der Aktivierung und Proliferation von B- Zellen durch Inhibierung der Signaltransduktion durch z. B. Belimumab und Atacicept. Eine wichtige Rolle bei der Aktivierung und Proliferation von B-Zellen kommt dabei der Wnt-Signaltransduktion zu. Ein wirksamer Inhibitor der Wnt- Signaltransduktionskaskade ist SM04690, von dem in präklinischen Studien gezeigt wurde, dass er eine Wirkung als„disease-modifying drug“ (DMOAD) aufweist. Ein weiteres, bereits zugelassenes Medikament ist Fluoxetin (zugelassen zur Behandlung von Depressionen), welches die Wnt-Siganltransduktionskaskade und damit auch die Proliferation von B-Zellen inhibiert. Folglich ist ein „Wirkstoff zur Verwendung zur Behandlung oder Vorbeugung einer autoimmun-assoziierten Arthrose“ ein Immunsuppressivum, ein Wirkstoff zur Reduktion von Plasma- oder B- Zellen, z. B. Rituximab, ein Wirkstoff wie ein Antikörper, der B-Zell-stimulierende Zytokine neutralisert oder hemmt, und/oder ein Wirkstoff, der die Signaltransduktion hemmt, die zur Aktivierung und Proliferation von B-Zellen führt, z. B. ein Wirkstoff, der die Wnt-Signaltransduktion hemmt, z. B. SM04690 oder Fluoxetin. Bei einer aktivierten Arthrose kommt es nicht selten zur intraartikulären Applikation von Cortisonpräparaten. Cortisonpräparate sorgen für eine Stimulation der T-Helfer- Zellen, u.a. der TH2-Zellen, welche wiederum zur Aktivierung und Proliferation von B-Zellen führen. Daher wäre bei Patienten mit Autoantikörpern, die mit Arthrose assoziiert sind, oder mit mehreren Autoantikörpern, die mit Arthrose assoziiert sind, die Gabe von Cortisonpräparaten eher nachteilig. Subjekte, die von einer Wirkstoffbehandlung profitieren, sind solche, bei denen mit den Diagnoseverfahren der vorliegenden Erfindung Autoantikörper, die mit Arthrose assoziiert sind, nachgewiesen werden. Die vorliegende Erfindung betrifft weiterhin ein Verfahren zur Diagnose von Arthrose oder des Risikos, Arthrose zu entwickeln, oder zur Diagnose einer degenerativen Erkrankung des Skelettsystems oder des Risikos, eine degenerative Erkrankung des Skelettsystems zu entwickeln, gemäß der vorliegenden Erfindung, wobei das Verfahren zur Therapieauswahl eingesetzt wird. Wenn in dem Verfahren der Diagnose von Arthrose oder des Risikos, Arthrose zu entwickeln, oder der Diagnose einer degenerativen Erkrankung des Skelettsystems oder des Risikos, eine degenerative Erkrankung des Skelettsystems zu entwickeln, ein Autoantikörper nachgewiesen wird, der mit Arthrose bzw. der degenerativen Erkrankung des Skelettsystems assoziiert ist, können die betroffenen Subjekte für eine Therapie ausgewählt werden, bei der die Arthrose oder die degenerative Erkrankung des Skelettsystems durch Reduktion der Konzentration der Autoantikörper behandelt oder ihr vorgebeugt wird. Somit bezieht sich der Begriff „Therapieauswahl“ auf die Auswahl von Subjekten, bei denen eine Arthrose oder degenerative Erkrankung des Skelettsystems gemäß der Erfindung diagnostiziert wurde, für eine Therapie, bei der die Konzentration der Autoantikörper reduziert wird, wie vorstehend beschrieben. Insbesondere beinhaltet die Therapie einen Wirkstoff zur Verwendung zur Behandlung oder Vorbeugung einer autoimmun-assoziierten Arthrose bei einem Subjekt, bevorzugt wobei der Wirkstoff ein Antikörper gegen B-Zellen (z.B. Rituximab) oder ein Wnt-Signalisierungs-Inhibitor (z.B. Fluoxetin oder SM04690) ist. Die Behandlung erfolgt bevorzugt intraartikulär. Currently there is no drug therapy that influences the progression of osteoarthritis. However, non-steroidal anti-inflammatory drugs (eg, ibuprofen, diclofenac, indomethacin and napropxen and coxibs) are used to relieve the symptoms, and opioids may also be used in cases of severe pain. In phases of acute joint inflammation may be an intra-articular administration of z. B. triamcinolone hexacetonide (glucocorticoid) in question. The present invention is directed to the detection of autoantibodies associated with osteoarthritis. Animal studies have shown that autoantibodies to cartilage matrix proteins such as COMP have a pathophysiological significance and can lead to severe chronic arthritis. Thus, the presence of autoantibodies associated with osteoarthritis in a subject is an indication of a pathophysiological role of these autoantibodies in the development, presentation, and progression of osteoarthritis. The pathophysiology of autoantibodies, therefore, allows the use of a specific, personalized therapy (personalized therapy) that includes general immunotherapy to suppress the formation of autoantibodies as well as therapy to suppress the formation of specific autoantibodies associated with osteoarthritis. It would be conceivable a "targeted therapy" in which a cytostatic agent is transported by specific binding of an antigen to the immune cell and this is killed. Thus, in patients in which autoantibodies associated with osteoarthritis are detected, any type of therapy that reduces the concentration of autoantibodies, e.g. By inhibiting the formation of new autoantibodies. That's why one Form of therapy in the context of the present invention, the immunotherapy or autoimmune therapy, since it is directed against autoantibodies. Immunotherapies are treatments in which the immune system is affected. Depending on the disease, modulating (stimulating and suppressing) or substituting (replacing) methods are used. In autoimmune diseases, there are generally suppressive methods which suppress immunological processes, e.g. As the use of immunosuppressive agents, used to inhibit unwanted reactions of the immune system. Common immunosuppressants are z. Ciclosporin A, tacrolimus, sirolimus, azathioprine and methotrexate. Immunosuppressive methods are also used in the context of the present invention in the treatment of immune-associated arthritis. Preferably, a therapy used in the context of the present invention is directed to a reduction of the plasma or B cells, wherein the therapy is preferably carried out by an intra-articular or systemic, particularly preferably intra-articular, administration of an active substance, which can bring about such a reduction, such , Rituximab, ofatumumab, ocrelizumab and epratuzumab, preferably rituximab. Another form of therapy is treatment with drugs such as antibodies that neutralize or inhibit B cell-stimulating cytokines, e.g. Anakinra, infliximab, adalimumab etanercept, tocilizumab. Another form of therapy is the inhibition of the activation and proliferation of B cells by inhibiting signal transduction by z. B. belimumab and atacicept. An important role in the activation and proliferation of B cells is the Wnt signal transduction. An effective inhibitor of the Wnt signal transduction cascade is SM04690, which has been shown in preclinical studies to have a disease-modifying drug (DMOAD) effect. Another drug already approved is fluoxetine (approved for the treatment of depression), which inhibits the Wnt signal transduction cascade and thus the proliferation of B cells. Thus, an "active ingredient for use in the treatment or prevention of autoimmune-associated arthritis" is an immunosuppressant, an agent for reducing plasma or B cells, e.g. , Rituximab, an agent such as an antibody that neutralizes or inhibits B cell-stimulating cytokines, and / or an agent that inhibits signal transduction that results in the activation and proliferation of B cells, e.g. B. an agent that inhibits Wnt signal transduction, eg. B. SM04690 or fluoxetine. When arthritis is activated, it is not uncommon for intra-articular administration of cortisone preparations. Cortisone preparations stimulate T helper cells, including TH2 cells, which in turn cause B cell activation and proliferation. Therefore, in patients with autoantibodies associated with osteoarthritis, or with multiple autoantibodies associated with osteoarthritis, administration of cortisone preparations would be rather disadvantageous. Subjects benefiting from drug treatment are those in whom autoantibodies associated with osteoarthritis are detected by the diagnostic methods of the present invention. The present invention further relates to a method for diagnosing osteoarthritis or the risk of developing osteoarthritis, or for diagnosing a degenerative disease of the skeletal system or the risk of developing a degenerative disease of the skeletal system according to the present invention, wherein the method is used for therapy selection becomes. In the art of diagnosing osteoarthritis or the risk of developing osteoarthritis, or the diagnosis of a degenerative disease of the skeletal system or the risk of developing a degenerative disease of the skeletal system, an autoantibody with arthritis or degenerative disease of the skeletal system is detected Skeletal system is associated, the affected subjects can be selected for a therapy in which the arthritis or the degenerative disease of the skeletal system is treated by reducing the concentration of autoantibodies or prevented. Thus, the term "therapy selection" refers to the selection of subjects diagnosed with osteoarthritis or degenerative disease of the skeletal system according to the invention for a therapy in which the concentration of autoantibodies is reduced, as described above. In particular, the therapy includes an active ingredient for use in the treatment or prevention of autoimmune-associated osteoarthritis in a subject, preferably wherein the active ingredient is an antibody to B cells (eg, rituximab) or a Wnt signaling inhibitor (eg, fluoxetine or SM04690). The treatment is preferably intraarticular.
Weitere Aspekte der Erfindung sind: Further aspects of the invention are:
Die vorliegende Erfindung ist auf ein Verfahren zum Nachweis eines Autoantikörpers, der mit Arthrose assoziiert ist, oder zur Diagnose von Arthrose oder des Risikos, Arthrose zu entwickeln, bei einem Subjekt, wobei das Subjekt keine rheumatoide Arthritis aufweist, gerichtet, wobei das Verfahren umfasst: a) Gewinnen einer Probe von dem Subjekt; und The present invention is directed to a method for detecting an autoantibody associated with osteoarthritis, or for diagnosing osteoarthritis or the risk of developing osteoarthritis in a subject wherein the subject does not have rheumatoid arthritis, the method comprising: a) obtaining a sample from the subject; and
b) Nachweisen, ob ein Autoantikörper, der mit Arthrose assoziiert ist, in der Probe vorhanden ist, wobei der Nachweis das Inkontaktbringen der Probe mit einem Nachweisagens und Nachweisen der Bindung zwischen dem Autoantikörper und dem Nachweisagens umfassen kann. b) detecting whether an autoantibody associated with osteoarthritis is present in the sample, which detection may comprise contacting the sample with a detection agent and detecting the binding between the autoantibody and the detection agent.
Das vorstehende Verfahren kann weiterhin die Schritte umfassen:  The above method may further comprise the steps of:
i) Gewinnen einer Probe von dem Subjekt; i) obtaining a sample from the subject;
ii) Nachweisen, ob ein Autoantikörper gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder Fragment davon in der Probe vorhanden ist, wobei der Nachweis das Inkontaktbringen der Probe mit einem Nachweisagens und Nachweisen der Bindung zwischen dem Autoantikörper und dem Nachweisagens umfassen kann. ii) detecting whether an autoantibody against collagen II or a degradation product or fragment thereof is present in the sample, which detection may comprise contacting the sample with a detection agent and detecting the binding between the autoantibody and the detection agent.
Die vorliegende Erfindung ist auch auf ein Verfahren zur Diagnose von Arthrose oder des Risikos, Arthrose zu entwickeln, bei einem Subjekt, wobei das Subjekt keine rheumatoide Arthritis aufweist, gerichtet, wobei das Verfahren umfassen kann;  The present invention is also directed to a method of diagnosing osteoarthritis or the risk of developing osteoarthritis in a subject wherein the subject does not have rheumatoid arthritis, which method may include;
a) Gewinnen einer Probe von dem Subjekt; a) obtaining a sample from the subject;
b) Nachweisen, ob ein Autoantikörper, der mit Arthrose assoziiert ist, in der Probe vorhanden ist, wobei der Nachweis durch Inkontaktbringen der Probe mit einem Nachweisagens und Nachweisen der Bindung zwischen dem Autoantikörper und dem Nachweisagens umfasst; und b) detecting whether an autoantibody associated with osteoarthritis is present in the sample, wherein the detection comprises contacting the sample with a detection agent and detecting the binding between the autoantibody and the detection agent; and
c) Diagnostizieren des Subjekts, dass es Arthrose oder ein Risiko, Arthrose zu entwickeln, aufweist, wenn ein Autoantikörper, der mit Arthrose assoziiert ist, in der Probe nachgewiesen wird. c) Diagnosing the subject to have osteoarthritis or a risk of developing osteoarthritis if an autoantibody associated with osteoarthritis is detected in the sample.
Das vorstehende Verfahren kann weiterhin die Schritte umfassen:  The above method may further comprise the steps of:
i) Gewinnen einer Probe von dem Subjekt; i) obtaining a sample from the subject;
ii) Nachweisen, ob ein Autoantikörper gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder Fragment davon in der Probe vorhanden ist, wobei der Nachweis das Inkontaktbringen der Probe mit einem Nachweisagens und Nachweisen der Bindung zwischen dem Autoantikörper und dem Nachweisagens umfassen kann; iii) Diagnostizieren des Subjekts, dass es Arthrose oder ein Risiko, Arthrose zu entwickeln, aufweist, wenn ein Autoantikörper gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder Fragment davon in der Probe nicht nachgewiesen wird.ii) detecting whether an autoantibody against collagen II or a degradation product or fragment thereof is present in the sample, which detection may comprise contacting the sample with a detection agent and detecting the binding between the autoantibody and the detection agent; iii) diagnosing the subject that it has osteoarthritis or a risk of developing osteoarthritis if an autoantibody against collagen II or a degradation product or fragment thereof is not detected in the sample.
Die vorliegende Erfindung ist auch auf ein Verfahren zur Diagnose von Arthrose oder des Risikos, Arthrose zu entwickeln, und Behandlung von Arthrose bei einem Subjekt, wobei das Subjekt keine rheumatoide Arthritis aufweist, gerichtet, wobei das Verfahren umfasst: The present invention is also directed to a method of diagnosing osteoarthritis or the risk of developing osteoarthritis and treating osteoarthritis in a subject wherein the subject does not have rheumatoid arthritis, the method comprising:
a) Gewinnen einer Probe von einem Subjekt; a) obtaining a sample from a subject;
b) Nachweisen, ob ein Autoantikörper, der mit Arthrose assoziiert ist, in der Probe vorhanden ist; b) detecting whether an autoantibody associated with osteoarthritis is present in the sample;
c) Diagnostizieren des Subjekts, dass es Arthrose oder ein Risiko, Arthrose zu entwickeln, aufweist, wenn ein Autoantikörper, der mit Arthrose assoziiert ist, in der Probe nachgewiesen wird; und c) diagnosing the subject as having osteoarthritis or a risk of developing osteoarthritis when an autoantibody associated with osteoarthritis is detected in the sample; and
d) Verabreichen einer Behandlung von Arthrose an das diagnostizierte Subjekt. Das vorstehende Verfahren kann weiterhin die Schritte umfassen: d) administering a treatment of osteoarthritis to the diagnosed subject. The above method may further comprise the steps of:
i) Gewinnen einer Probe von dem Subjekt; i) obtaining a sample from the subject;
ii) Nachweisen, ob ein Autoantikörper gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder Fragment davon in der Probe vorhanden ist; ii) detecting whether an autoantibody against collagen II or a degradation product or fragment thereof is present in the sample;
iii) Diagnostizieren des Subjekts, dass es Arthrose oder ein Risiko, Arthrose zu entwickeln, aufweist, wenn ein Autoantikörper gegen Kollagen II oder einiii) diagnose the subject that it has osteoarthritis or a risk of developing osteoarthritis if an autoantibodies against collagen II or a
Degradationsprodukt oder Fragment davon in der Probe nicht nachgewiesen wird.Degradation product or fragment thereof is not detected in the sample.
Die vorliegende Erfindung ist auch auf ein Verfahren zur Behandlung oder Vorbeugung von Arthrose bei einem Subjekt, wobei das Subjekt keine rheumatoide Arthritis aufweist, gerichtet, wobei das Verfahren das Verabreichen einer Behandlung von Arthrose an ein im Rahmen der vorliegenden Erfindung diagnostiziertes Subjekt umfasst. The present invention is also directed to a method of treating or preventing osteoarthritis in a subject wherein the subject does not have rheumatoid arthritis, the method comprising administering a treatment for osteoarthritis to a subject diagnosed in the present invention.
Die vorliegende Erfindung ist auch auf die Verwendung eines Wirkstoffs zur Fierstellung eines Arzneimittels zur Behandlung einer autoimmun-assoziierten Arthrose bei einem Subjekt gerichtet.  The present invention is also directed to the use of a drug for the production of a medicament for the treatment of autoimmune-associated osteoarthritis in a subject.
Die Behandlung kann dabei eine Behandlung umfassen, bei der die Konzentration der Autoantikörper, die mit Arthrose assoziiert sind, reduziert wird. Zum Beispiel umfasst die Behandlung ein Immunsuppressivum (z. B. Ciclosporin A, Tacrolimus, Sirolimus, Azathioprin und Methotrexat), einen Wirkstoff zur Reduktion von Plasma- oder B-Zellen, z. B. Rituximab, Ofatumumab, Ocrelizumab und Epratuzumab, einen Wirkstoff wie einen Antikörper, der B-Zell-stimulierende Zytokine neutralisert oder hemmt, z. B. Anakinra, Infliximab, Adalimumab Etanercept, Tocilizumab, und/oder einen Wirkstoff, der die Signaltransduktion hemmt, die zur Aktivierung und Proliferation von B-Zellen führt, z. B. einen Wirkstoff, der die Signaltransduktion hemmt, (z.B. Belimumab und Atacicept) wie z. B. einen Wirkstoff, der die Wnt- Signaltransduktion hemmt, z. B. SM04690 oder Fluoxetin. The treatment may include a treatment in which the concentration of autoantibodies associated with osteoarthritis is reduced. For example For example, the treatment includes an immunosuppressant (e.g., ciclosporin A, tacrolimus, sirolimus, azathioprine, and methotrexate), an agent for reducing plasma or B cells, e.g. , Rituximab, ofatumumab, ocrelizumab and epratuzumab, an agent such as an antibody that neutralizes or inhibits B-cell-stimulating cytokines, e.g. Anakinra, infliximab, adalimumab etanercept, tocilizumab, and / or an agent that inhibits signal transduction leading to the activation and proliferation of B cells, e.g. B. an agent that inhibits signal transduction, (eg Belimumab and Atacicept) such. B. an agent that inhibits Wnt signal transduction, eg. B. SM04690 or fluoxetine.
Die vorliegende Erfindung ist auf ein Verfahren zum Nachweis eines Autoantikörpers, der mit einer degenerativen Erkrankung des Skelettsystems assoziiert ist, oder zur Diagnose von einer degenerativen Erkrankung des Skelettsystems oder des Risikos, eine degenerative Erkrankung des Skelettsystems zu entwickeln, bei einem Subjekt gerichtet, wobei das Verfahren umfasst: The present invention is directed to a method for detecting an autoantibody associated with a degenerative disease of the skeletal system, or for diagnosing a degenerative disease of the skeletal system or the risk of developing a degenerative disease of the skeletal system, in a subject Method includes:
a) Gewinnen einer Probe von dem Subjekt; und a) obtaining a sample from the subject; and
b) Nachweisen, ob ein Autoantikörper, der mit einer degenerativen Erkrankung des Skelettsystems assoziiert ist, in der Probe vorhanden ist, wobei der Nachweis das Inkontaktbringen der Probe mit einem Nachweisagens und Nachweisen der Bindung zwischen dem Autoantikörper und dem Nachweisagens umfassen kann. Die vorliegende Erfindung ist auch auf ein Verfahren zur Diagnose von einer degenerativen Erkrankung des Skelettsystems oder des Risikos, eine degenerative Erkrankung des Skelettsystems zu entwickeln, bei einem Subjekt gerichtet, wobei das Verfahren umfasst: b) detecting whether an autoantibody associated with a degenerative disease of the skeletal system is present in the sample, which detection may comprise contacting the sample with a detection agent and detecting the binding between the autoantibody and the detection agent. The present invention is also directed to a method of diagnosing a degenerative disease of the skeletal system or the risk of developing a degenerative disease of the skeletal system in a subject, the method comprising:
a) Gewinnen einer Probe von dem Subjekt; a) obtaining a sample from the subject;
b) Nachweisen, ob ein Autoantikörper, der mit einer degenerativen Erkrankung des Skelettsystems assoziiert ist, in der Probe vorhanden ist, wobei der Nachweis das Inkontaktbringen der Probe mit einem Nachweisagens und Nachweisen der Bindung zwischen dem Autoantikörper und dem Nachweisagens umfassen kann; und b) detecting whether an autoantibody associated with a degenerative disease of the skeletal system is present in the sample, which detection may comprise contacting the sample with a detection agent and detecting the binding between the autoantibody and the detection agent; and
c) Diagnostizieren des Subjekts, dass es eine degenerative Erkrankung des Skelettsystems oder ein Risiko, eine degenerative Erkrankung des Skelettsystems zu entwickeln, aufweist, wenn ein Autoantikörper, der mit einer degenerativen Erkrankung des Skelettsystems assoziiert ist, in der Probe nachgewiesen wird. Die vorliegende Erfindung ist auch auf ein Verfahren zur Diagnose von einer degenerativen Erkrankung des Skelettsystems oder des Risikos, eine degenerative Erkrankung des Skelettsystems zu entwickeln, und Behandlung von einer degenerativen Erkrankung des Skelettsystems bei einem Subjekt gerichtet, wobei das Verfahren umfasst: c) diagnosing the subject to have a degenerative disease of the skeletal system or a risk of developing a degenerative disease of the skeletal system when an autoantibody associated with a degenerative disease of the skeletal system is detected in the sample. The present invention is also directed to a method of diagnosing a degenerative disease of the skeletal system or the risk of developing a degenerative disease of the skeletal system and treating a degenerative disease of the skeletal system in a subject, the method comprising:
a) Gewinnen einer Probe von einem Subjekt; a) obtaining a sample from a subject;
b) Nachweisen, ob ein Autoantikörper, der mit einer degenerativen Erkrankung des Skelettsystems assoziiert ist, in der Probe vorhanden ist, wobei der Nachweis das Inkontaktbringen der Probe mit einem Nachweisagens und Nachweisen der Bindung zwischen dem Autoantikörper und dem Nachweisagens umfassen kann; c) Diagnostizieren des Subjekts, dass es eine degenerative Erkrankung des Skelettsystems oder ein Risiko, eine degenerative Erkrankung des Skelettsystems zu entwickeln, aufweist, wenn ein Autoantikörper, der mit einer degenerativen Erkrankung des Skelettsystems assoziiert ist, in der Probe nachgewiesen wird; und d) Verabreichen einer Behandlung der degenerativen Erkrankung des Skelettsystems an das diagnostizierte Subjekt. b) detecting whether an autoantibody associated with a degenerative disease of the skeletal system is present in the sample, which detection may comprise contacting the sample with a detection agent and detecting the binding between the autoantibody and the detection agent; c) diagnosing the subject as having a degenerative disease of the skeletal system or a risk of developing a degenerative disease of the skeletal system when an autoantibody associated with a degenerative disease of the skeletal system is detected in the sample; and d) administering treatment of the degenerative disease of the skeletal system to the diagnosed subject.
Die vorliegende Erfindung ist auch auf ein Verfahren zur Behandlung von oder Vorbeugung einer degenerativen Erkrankung des Skelettsystems bei einem Subjekt gerichtet, wobei das Verfahren das Verabreichen einer Behandlung der degenerativen Erkrankung des Skelettsystems an ein im Rahmen der vorliegenden Erfindung diagnostiziertes Subjekt umfasst.  The present invention is also directed to a method of treating or preventing a degenerative disease of the skeletal system in a subject, the method comprising administering a treatment of the degenerative disease of the skeletal system to a subject diagnosed in the present invention.
Die vorliegende Erfindung ist auch auf die Verwendung eines Wirkstoffs zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung einer degenerativen Erkrankung des Skelettsystems bei einem Subjekt gerichtet. Ein Arzneimittel umfasst den Wirkstoff zur Behandlung einer Krankheit und einen pharmazeutisch verträglichen Träger, der im Fachgebiet bekannt ist. Das Arzneimittel kann für verschiedene Verabreichungsformen formuliert sein, z. B. für eine lokale intraartikuläre oder systemische Gabe (oral, intravenös, subkutan, intramuskulär). Der Wirkstoff wird in einer wirksamen Menge verabreicht, die vom Fachmann bestimmt werden kann oder dem Fachmann bekannt ist, wobei sich die Menge des Wirkstoffs an bereits bekannten Mengen dieses Wirkstoffs zur Behandlung anderer Krankheiten orientieren kann. Dabei hängt die wirksame Menge von verschiedenen Faktoren wie Dosierungsform, Alter, Körpergewicht, Geschlecht, Dauer der Behandlung und ähnlichen Faktoren ab. Das Arzneimittel kann als Lösung, Suspension, Tablette, Kapseln oder Pulver, desweiteren noch als Paste, Salbe, Öl, Creme, Lotion, Schaum, Gel oder Zäpfchen, vorliegen. Die Behandlung kann dabei eine Behandlung umfassen, bei der die Konzentration der Autoantikörper, die mit der degenerativen Erkrankung des Skelettsystems assoziiert sind, reduziert wird. Zum Beispiel umfasst die Behandlung ein Immunsuppressivum, einen Wirkstoff zur Reduktion von Plasma- oder B-Zellen, z. B. Rituximab, einen Wirkstoff wie einen Antikörper, der B-Zell-stimulierende Zytokine neutralisert oder hemmt, und/oder einen Wirkstoff, der die Signaltransduktion hemmt, die zur Aktivierung und Proliferation von B-Zellen führt, z. B. einen Wirkstoff, der die Wnt-Signaltransduktion hemmt, z. B. SM04690 oder Fluoxetin. Diese Art der Behandlung ist insbesondere für die Behandlung von Arthrose wirksam. Auch im Falle von RA erfolgt gemäß der Erfindung bei Nachweis eines Autoantikörpers gegen TSP-4 oder ein Degradationsprodukt oder Fragment davon oder gegen COMP oder ein Degradationsprodukt oder Fragment davon die Behandlung, wie vorstehend aufgezeigt, also mit einem Immunsuppressivum, einem Wirkstoff zur Reduktion von Plasma- oder B-Zellen, z. B. Rituximab, einem Wirkstoff wie einen Antikörper, der B- Zell-stimulierende Zytokine neutralisert oder hemmt, und/oder einem Wirkstoff, der die Signaltransduktion hemmt, die zur Aktivierung und Proliferation von B-Zellen führt, z. B. einen Wirkstoff, der die Wnt-Signaltransduktion hemmt, z. B. SM04690 oder Fluoxetin. Dabei ist eine solche Behandlung, bevorzugt mit Rituximab, gegenüber der gegenwärtigen Behandlung mit, in dieser Reihenfolge, (1 ) Methotrexat (MTX) als Monotherapie oder (2) in Kombination mit oder alternativ zu der Gabe von Biologicals (völlig oder nahezu mit körpereigenen Substanzen identische Präparate) und (3) Gabe von Rituximab bevorzugt, um Gelenkschäden in der Initialphase zu vermeiden, zu bevorzugen. The present invention is also directed to the use of a drug for the manufacture of a medicament for treating a degenerative disease of the skeletal system in a subject. A pharmaceutical composition comprises the active ingredient for the treatment of a disease and a pharmaceutically acceptable carrier known in the art. The drug may be formulated for various administration forms, e.g. For local intra-articular or systemic administration (oral, intravenous, subcutaneous, intramuscular). The active ingredient is administered in an effective amount which can be determined by one skilled in the art or is known to the person skilled in the art, wherein the amount of the active ingredient can be based on already known amounts of this active ingredient for the treatment of other diseases. The effective amount depends on this different factors such as dosage form, age, body weight, sex, duration of treatment and similar factors. The drug may be in the form of a solution, suspension, tablet, capsule or powder, further as a paste, ointment, oil, cream, lotion, foam, gel or suppository. The treatment may include a treatment in which the concentration of autoantibodies associated with the degenerative disease of the skeletal system is reduced. For example, the treatment comprises an immunosuppressant, an agent for reducing plasma or B cells, e.g. , Rituximab, an agent such as an antibody that neutralizes or inhibits B cell-stimulating cytokines, and / or an agent that inhibits signal transduction that results in the activation and proliferation of B cells, e.g. B. an agent that inhibits Wnt signal transduction, eg. B. SM04690 or fluoxetine. This type of treatment is particularly effective for the treatment of osteoarthritis. Also in the case of RA according to the invention is carried out in the detection of an autoantibody against TSP-4 or a degradation product or fragment thereof or against COMP or a degradation product or fragment thereof, the treatment, as indicated above, ie with an immunosuppressant, a drug for the reduction of plasma or B cells, e.g. , Rituximab, a drug such as an antibody that neutralizes or inhibits B cell-stimulating cytokines, and / or an agent that inhibits signal transduction that results in the activation and proliferation of B cells, e.g. B. an agent that inhibits Wnt signal transduction, eg. B. SM04690 or fluoxetine. One such treatment, preferably with rituximab, over the current treatment with, in this order, is (1) methotrexate (MTX) as monotherapy or (2) in combination with or alternatively to the administration of biologicals (wholly or nearly with endogenous substances identical preparations) and (3) administration of rituximab is preferred, to avoid joint damage in the initial phase, to prefer.
Die vorliegende Erfindung ist auf ein Verfahren zum Nachweis eines Autoantikörpers gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder Fragment davon oder zur Diagnose von Arthrose oder des Risikos, Arthrose zu entwickeln, bei einem Subjekt, wobei das Subjekt keine rheumatoide Arthritis aufweist, gerichtet, wobei das Verfahren umfasst: The present invention is directed to a method for detecting an autoantibody against collagen II or a degradation product or fragment thereof or for diagnosing osteoarthritis or the risk of developing osteoarthritis in a subject wherein the subject does not have rheumatoid arthritis includes:
i) Gewinnen einer Probe von dem Subjekt; ii) Nachweisen, ob ein Autoantikörper gegen Kollagen II oder eini) obtaining a sample from the subject; ii) To establish whether an autoantibody against collagen II or a
Degradationsprodukt oder Fragment davon in der Probe vorhanden ist, wobei der Nachweis das Inkontaktbringen der Probe mit einem Nachweisagens undDegradation product or fragment thereof is present in the sample, the detection comprising contacting the sample with a detection agent and
Nachweisen der Bindung zwischen dem Autoantikörper und dem Nachweisagens umfassen kann. Detecting the binding between the autoantibody and the detection agent can include.
Die vorliegende Erfindung ist auch auf ein Verfahren zur Diagnose von Arthrose oder des Risikos, Arthrose zu entwickeln, bei einem Subjekt, wobei das Subjekt keine rheumatoide Arthritis aufweist, gerichtet, wobei das Verfahren umfasst:  The present invention is also directed to a method of diagnosing osteoarthritis or the risk of developing osteoarthritis in a subject wherein the subject does not have rheumatoid arthritis, the method comprising:
i) Gewinnen einer Probe von dem Subjekt; i) obtaining a sample from the subject;
ii) Nachweisen, ob ein Autoantikörper gegen Kollagen II oder einii) To establish whether an autoantibody against collagen II or a
Degradationsprodukt oder Fragment davon in der Probe vorhanden ist, wobei der Nachweis das Inkontaktbringen der Probe mit einem Nachweisagens undDegradation product or fragment thereof is present in the sample, the detection comprising contacting the sample with a detection agent and
Nachweisen der Bindung zwischen dem Autoantikörper und dem Nachweisagens umfassen kann; Detecting the binding between the autoantibody and the detection agent;
iii) Diagnostizieren des Subjekts, dass es Arthrose oder ein Risiko, Arthrose zu entwickeln, aufweist, wenn ein Autoantikörper gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder Fragment davon in der Probe nicht nachgewiesen wird.iii) diagnosing the subject that it has osteoarthritis or a risk of developing osteoarthritis if an autoantibody against collagen II or a degradation product or fragment thereof is not detected in the sample.
Die vorliegende Erfindung ist auch auf ein Verfahren zur Diagnose von Arthrose oder des Risikos, Arthrose zu entwickeln, und Behandlung von Arthrose bei einem Subjekt, wobei das Subjekt keine rheumatoide Arthritis aufweist, gerichtet, wobei das Verfahren umfasst: The present invention is also directed to a method of diagnosing osteoarthritis or the risk of developing osteoarthritis and treating osteoarthritis in a subject wherein the subject does not have rheumatoid arthritis, the method comprising:
i) Gewinnen einer Probe von dem Subjekt; i) obtaining a sample from the subject;
ii) Nachweisen, ob ein Autoantikörper gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder Fragment davon in der Probe vorhanden ist, wobei der Nachweis das Inkontaktbringen der Probe mit einem Nachweisagens und Nachweisen der Bindung zwischen dem Autoantikörper und dem Nachweisagens umfassen kann; ii) detecting whether an autoantibody against collagen II or a degradation product or fragment thereof is present in the sample, which detection may comprise contacting the sample with a detection agent and detecting the binding between the autoantibody and the detection agent;
iii) Diagnostizieren des Subjekts, dass es Arthrose oder ein Risiko, Arthrose zu entwickeln, aufweist, wenn ein Autoantikörper gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder Fragment davon in der Probe nicht nachgewiesen wird; iv) Verabreichen einer Behandlung von Arthrose an das Subjekt. Die Behandlung ist, wie vorstehend beschrieben, und/oder eine herkömmliche Behandlung zur Linderung der Beschwerden. iii) diagnosing the subject as having osteoarthritis or a risk of developing osteoarthritis if an autoantibody against collagen II or a degradation product or fragment thereof is not detected in the sample; iv) administering a treatment of osteoarthritis to the subject. The treatment is as described above and / or a conventional treatment for relieving the symptoms.
MATERIAL UND METHODEN MATERIAL AND METHODS
Patienten und Kontrollgruppenselektion Patients and control group selection
Die Studienpopulation setzt sich aus zwei Patientengruppen und einer gesunden Kontrollgruppe (HD = healthy donors) zusammen. Bei den Untersuchungsgruppen handelt es sich entweder um Arthrose- oder rheumatoide Arthritis (RA)-Patienten. Die Einschlusskriterien für die Arthrose-Gruppe sind eine klinisch gesicherte Osteoarthritis (OA) der großen Gelenke. Ausschlusskriterien sind Hinweise auf eine rheumatoide Gelenkerkrankung oder andere autoimmune oder maligne Grunderkrankungen. Einschlusskriterien für die RA-Gruppe sind eine gesicherte RA entsprechend der ACR/EULAR-Klassifikationskriterien. Ausschlusskriterien sind eine Arthrose oder andere autoimmune oder maligne Grunderkrankungen. Zum Einschluss in die Kontrollgruppe müssen die Probanden artikular symptomfrei sein. Ausschlusskriterien sind diagnostische Hinweise auf eine Arthrose, RA, autoimmune oder maligne Grunderkrankungen. Untersucht wurde das Serum von 10 Arthrose- Patienten, 10 RA-Patienten und 10 gesunden Kontrollen. Alle Proben wurden von unserem Kooperationspartner Prof. Pongratz, Rheumatologie der Universitätsklinik Düsseldorf, zur Verfügung gestellt.  The study population consists of two patient groups and a healthy control group (HD = healthy donors). The research groups are either osteoarthritis or rheumatoid arthritis (RA) patients. The inclusion criteria for the osteoarthritis group are clinically proven osteoarthritis (OA) of the large joints. Exclusion criteria are indications of rheumatoid arthritis or other underlying autoimmune or malignant diseases. Inclusion criteria for the RA group are a secured RA according to the ACR / EULAR classification criteria. Exclusion criteria are osteoarthritis or other underlying autoimmune or malignant diseases. For inclusion in the control group the subjects must be articularly symptom-free. Exclusion criteria are diagnostic evidence of osteoarthritis, RA, autoimmune or malignant underlying diseases. The serum was examined in 10 osteoarthritis patients, 10 RA patients and 10 healthy controls. All samples were provided by our cooperation partner Prof. Pongratz, rheumatology of the University Hospital Dusseldorf.
Klonierung, rekombinante Expression und Proteinaufreinigung  Cloning, recombinant expression and protein purification
Das Gen von humanem CLEC3A wurde in einen modifizierten pCEP-Pu-Vektor kloniert und in HEK-293 EBNA Zellen transfiziert. Das rekombinante Protein wurde affinitätschromatographisch aus dem Überstand der Zellen aufgereinigt. Humanes Kollagen II wurde aus humanem Knorpel aufgereinigt (PMID: 6439184). Rekombinantes humanes TSP-4 (R&D) und rekombinantes humanes COMP (R&D) wurden beim jeweiligen Hersteller bestellt.  The gene of human CLEC3A was cloned into a modified pCEP-Pu vector and transfected into HEK-293 EBNA cells. The recombinant protein was purified by affinity chromatography from the supernatant of the cells. Human collagen II was purified from human cartilage (PMID: 6439184). Recombinant human TSP-4 (R & D) and recombinant human COMP (R & D) were ordered from the respective manufacturer.
SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-PAGE) und Immunblot  SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and immunoblot
Zum Nachweis von Autoantikörpern im Serum der Probanden wurden die Matrixproteine mittels SDS-PAGE aufgetrennt und mittels Immunblot nachgewiesen. Hierfür wurden die Proteine (je 1 pgA/ertiefung) nach Durchführung der SDS-PAGE (4-12% Bis-Tris-Gels: 12 Vertiefungen, 1 mm Dicke, MOPS Puffer, 200 V für 50 min) auf eine PVDF-Membran transferiert (0,45 miti, Invitrogen), freie Bindungsstellen mit 5% Milchpulver und 1 % bovinem Serumalbumin in TBS-T (Tris-gepufferte Salzlösung, 0,1 % Tween) abgesättigt, nacheinander mit 50 mI Patientenserum in 10 ml Blockierungs-Lösung, über Nacht bei 4°C) und einem HRP (Meerrettich- Peroxidase)-konjugiertem anti-human-lgG-Antikörper (SantaCruz, 1 :200.000 in Blocking für 1 h Raumtemperatur) inkubiert. Als Referenz wurde Serum einer gesunden Person verwendet. Die Konzentration von IgG im Serum wurde bestimmt und es wurde jeweils 0,3, 3 oder 30 ng IgG pro Referenzspur auf das SDS-PAGE aufgetragen. Signale wurden nach Inkubation mit ECL Plus (Amersham Pharmacia Biotech) mit dem ChemiDoc XRS+ (BioRad) Westernblot-Imager detektiert und die Bildsequenzen mit der ImageLab (BioRad)-Software ausgewertet. For the detection of autoantibodies in the serum of the subjects, the matrix proteins were separated by SDS-PAGE and detected by immunoblot. For this, the proteins (1 pgA / well each) were performed after SDS-PAGE (4-12% Bis-Tris gel: 12 wells, 1 mm thickness, MOPS buffer, 200 V for 50 min). transferred to a PVDF membrane (0.45 ml, Invitrogen), free binding sites with 5% milk powder and 1% bovine serum albumin in TBS-T (Tris-buffered saline, 0.1% Tween), sequentially with 50 ml patient serum in 10 ml of blocking solution, overnight at 4 ° C) and an HRP (horseradish peroxidase) -conjugated anti-human IgG antibody (Santa Cruz, 1: 200,000 in blocking for 1 h room temperature). As a reference, serum from a healthy person was used. The concentration of IgG in serum was determined and 0.3, 3 or 30 ng IgG per reference lane was plotted on SDS-PAGE. Signals were detected after incubation with ECL Plus (Amersham Pharmacia Biotech) with the ChemiDoc XRS + (BioRad) Western Blot Imager, and the image sequences were evaluated with the ImageLab (BioRad) software.
ERGEBNISSE UND DISKUSSION RESULTS AND DISCUSSION
Nachweis von TSP-4-, CLEC3A-, COMP- und Kollagen Il-Autoantikörper zur Diagnostik einer Arthrose - In unsere Studie haben wir mittels SDS-PAGE und Immunblot das Serum von 10 Arthrose (OA)-Patienten, 10 Rheumatoide-Arthritis (RA)-Patienten und 10 gesunden Probanden (Healthy Donors, HD) auf IgG-lsotyp- Antikörper gegen TSP-4, CLEC3A, COMP und Kollagen II untersucht (Tabelle 1 ). Der Nachweis von TSP4-, CLEC3A-, COMP- und Kollagen-Il-Autoantikörpern im Blut und/oder in Synovialflüssigkeit kann zur Diagnostik, speziell auch zu einer frühen Diagnostik, einer Arthrose oder einer aktivierten Arthrose sowie zur Stadiendiagnose, Verlaufs- und Therapiekontrolle einer Arthrose genutzt werden (Tabelle 1 ).  Detection of TSP-4, CLEC3A, COMP and collagen II autoantibodies for the diagnosis of osteoarthritis - In our study we analyzed the serum of 10 osteoarthritis (OA) patients, 10 rheumatoid arthritis (RA ) And 10 healthy volunteers (HD) on IgG isotype antibodies to TSP-4, CLEC3A, COMP and collagen II (Table 1). The detection of TSP4, CLEC3A, COMP and collagen II autoantibodies in the blood and / or in synovial fluid can be used for diagnostics, especially for early diagnosis, osteoarthritis or activated osteoarthritis as well as for the diagnosis, monitoring and therapy of a Arthrosis are used (Table 1).
Tabelle 1 a: Anzahl der positiven Antikörper-Reaktivitäten gegen die verschiedenen Matrixproteine im Vergleich von OA und HD. Häufigkeiten wurden jeweils in Relation zur Gruppenstärke angegeben. Signifikante Unterschiede sind mit * markiert. (Quelle: http://www.socscistatistics.com/tests/fisher/Default2.aspx). Table 1 a: Number of positive antibody reactivities against the various matrix proteins in comparison of OA and HD. Frequencies were given in relation to group strength. Significant differences are marked with * . (Source: http://www.socscistatistics.com/tests/fisher/Default2.aspx).
Tabelle 1 b: Individuelle Antikörperintensitäten gegen verschiedene Antigene. Patienten 1 bis 10 repräsentieren die OA-Gruppe, Patienten 11 bis 20 die gesunde Kontrollgruppe. Die Mittelwerte und Standardabweichungen wurden für die entsprechende Gruppe berechnet, in denen für das respektive Antigen > zwei Werte Vorlagen. Signale des Immunblots wurden densitometrisch ausgewertet und im Verhältnis zur zugehörigen 0,3 ng-lgG-Referenzbande (=1 ) quantifiziert (x-fach IgG) oder im Verhältnis zum Gruppenmittelwert (x-fach MW) angegeben. Wenn in einem Kästchen keine Werte eingetragen wurden, konnte im Immunblot keine Bande nachgewiesen werden. MW = Mittelwert, StdAbw = Standardabweichung. Table 1 b: Individual antibody intensities against various antigens. Patients 1 to 10 represent the OA group, patients 11 to 20 the healthy control group. The means and standard deviations were calculated for the corresponding group in which for the respective antigen> two values templates. Signals of the immunoblot were evaluated by densitometry and quantified in relation to the corresponding 0.3 ng IgG reference band (= 1) (x-fold IgG) or in relation to the group mean (x-times MW). If no values were entered in a box, no band could be detected in the immunoblot. MW = mean, StdAbw = standard deviation.
Durch die Kombination der Antikörper kann die diagnostische Aussagekraft noch deutlich erhöht werden (Tabelle 2). By combining the antibodies, the diagnostic value can be significantly increased (Table 2).
Tabelle 2: Anzahl positiver Antikörper-Reaktivitäten, kumuliert gegen mehrere Proteine in den Gruppen OA und HD. Häufigkeiten wurden jeweils in Relation zur Gruppenstärke angegeben. Für die kumulativen Vergleiche sind die Unterschiede in der Verteilung der absoluten Häufigkeiten auf die zwei Gruppen hochsignifikant. Kollagen Il-Autoantikörper konnten nur in der HD-Gruppe nachgewiesen werden. OA-Patienten zeigten keine Kollagen Il-Autoantikörper. Der fehlende Nachweis von Kollagen Il-Autoantikörpern dient daher als positives Ergebnis für OA. Table 2: Number of positive antibody reactivities cumulatively against several proteins in the groups OA and HD. Frequencies were in each case in relation to Group strength specified. For the cumulative comparisons, the differences in the distribution of the absolute frequencies among the two groups are highly significant. Collagen II autoantibodies could only be detected in the HD group. OA patients did not show collagen II autoantibodies. The lack of detection of collagen II autoantibodies therefore serves as a positive result for OA.
Nachweis von TSP-4-, CLEC3A- und COMP-Antikörpern zur Therapieauswahl bei Arthrose - In verschiedenen Studien wurde gezeigt, dass es durch die Immunisierung von Tieren mit Kollagen II (CIA, Collagen ll-induced arthritis) oder COMP (COMPIA) zu einer schweren, chronischen Arthritis bei den Tieren kommt. Antikörper gegen Matrixproteine haben in diesen Tiermodellen (der RA) eine pathophysiologische Bedeutung. Dies zeigt, dass auch humane Autoantikörper gegen Matrixproteine eine pathophysiologische Wirkung entfalten können und deshalb Patienten mit Autoantikörpern gegen Matrixproteine einer immunsuppressiven Therapie zugänglich sind. Dabei scheint ein wichtiges Kriterium für die Pathogenität die Anzahl von verschiedenen Autoantikörpern und/oder die Autoantikörperkonzentration (Autoantikörpertiter) im Blut zu sein. In unserer Studie liegen bei zwei OA-Patienten mehrere Autoantikörper vor und auch die Antikörperintensitäten gegen die verschiedenen Antigene sind unterschiedlich. Detection of TSP-4, CLEC3A and COMP Antibodies for Therapy Selection in Osteoarthritis - Several studies have shown that it can be obtained by immunizing animals with collagen II (CIA, collagen ll-induced arthritis) or COMP (COMPIA) severe, chronic arthritis occurs in the animals. Antibodies against matrix proteins have a pathophysiological significance in these animal models (the RA). This shows that even human autoantibodies against matrix proteins can develop a pathophysiological effect and therefore patients with autoantibodies to matrix proteins are susceptible to immunosuppressive therapy. An important criterion for the pathogenicity seems to be the number of different autoantibodies and / or the autoantibody concentration (autoantibody titer) in the blood. In our study, two autoantibodies are present in two OA patients and the antibody intensities against the different antigens are different.
Nachweis von anti-TSP-4- und anti-COMP-Antikörpern bei rheumatoider Arthritis - In unserem Studienkollektiv fanden wir bei drei RA-Patienten um den Faktor 30-fach bis 130-fach höhere Konzentrationen von TSP-4- und COMP- Autoantikörpern (RA-Patient Nr. 21 , 22, 29), verglichen mit den Intensitäten der anderen RA-Patienten (Tabelle 3). Detection of anti-TSP-4 and anti-COMP antibodies in rheumatoid arthritis - In our study population, we found that the levels of TSP-4 and COMP were 30 to 130 fold higher in three RA patients. Autoantibodies (RA patients # 21, 22, 29) compared with the intensities of other RA patients (Table 3).
Tabelle 3: Mittelwerte der Antikörperintensitäten in der RA-Gruppe. Zur Mittelwertberechnung wurden Patienten 21 , 22, 29 ausgeschlossen, da sie statistisch gesehen (Ausreißertest nach Grubbs) signifikante Ausreißer waren. MW = Mittelwert, StdAbw = Standardabweichung. Signale des Immunblots wurden densitometrisch ausgewertet und im Verhältnis zur zugehörigen 0,3 ng-lgG-Referenzbande (=1 ) quantifiziert (x-fach IgG) oder im Verhältnis zum Gruppenmittelwert (x-fach MW) angegeben.  Table 3: Mean values of the antibody intensities in the RA group. For the calculation of mean values, patients 21, 22, 29 were excluded because they were statistically significant (outlier test after Grubbs) significant outliers. MW = mean, StdAbw = standard deviation. Signals of the immunoblot were evaluated by densitometry and quantified in relation to the corresponding 0.3 ng IgG reference band (= 1) (x-fold IgG) or in relation to the group mean (x-times MW).
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13. Neame, P.J., H. Tapp, and D.R. Grimm, The cartilage-derived, C-type lectin (CLECSF1 ): structure of the gene and chromosomal location. Biochim13. Neame, P.J., H. Tapp, and D.R. Grimm, The cartilage-derived, C-type lectin (CLECSF1): structure of the gene and chromosomal location. Biochim
Biophys Acta, 1999. 1446(3): p. 193-202. Biophys Acta, 1999. 1446 (3): p. 193-202.
14. Vogel, K.G., M. Paulsson, and D. Heinegard, Specific Inhibition of type I and type II Collagen fibrillogenesis by the small proteoglycan of tendon. Biochem J, 1984. 223(3): p. 587-97.  14. Vogel, K.G., M. Paulsson, and D. Heinegard, Specific Inhibition of Type II Collagen fibrillogenesis by the small proteoglycan of tendon. Biochem J, 1984. 223 (3): p. 587-97.
15. Altman, R.D. Classification of disease: Osteoarthritis in Seminars in arthritis and rheumatism. 1991. Elsevier. 15. Altman, R.D. Classification of disease: Osteoarthritis in seminars in arthritis and rheumatism. 1991. Elsevier.
16. Altman, R., et al., Development of criteria for the Classification and reporting of Osteoarthritis. Classification of Osteoarthritis of the knee. Diagnostic and Therapeutic Criteria Committee of the American Rheumatism Association. Arthritis Rheum, 1986. 29(8): p. 1039-49.  16. Altman, R., et al., Development of criteria for the classification and reporting of osteoarthritis. Classification of Osteoarthritis of the knee. Diagnostic and Therapeutic Criteria Committee of the American Rheumatism Association. Arthritis Rheum, 1986. 29 (8): p. 1039-49.
17. Altman, R., et al., The American College of Rheumatology criteria for the Classification and reporting of Osteoarthritis of the hand. Arthritis Rheum, 1990. 33(11 ): p. 1601 -10.  17. Altman, R., et al., The American College of Rheumatology criteria for the classification and reporting of osteoarthritis of the hand. Arthritis Rheum, 1990. 33 (11): p. 1601 -10.

Claims

Patentansprüche claims
1. Verfahren zur Diagnose von Arthrose oder des Risikos, Arthrose zu entwickeln, bei einem Subjekt, wobei das Subjekt keine rheumatoide Arthritis aufweist, umfassend das Nachweisen eines Autoantikörpers, der mit Arthrose assoziiert ist, in einer von dem Subjekt stammenden Probe. A method of diagnosing osteoarthritis or the risk of developing osteoarthritis in a subject, wherein the subject does not have rheumatoid arthritis, comprising detecting an autoantibody associated with osteoarthritis in a sample derived from the subject.
2. Verfahren nach Anspruch 1 , wobei das Verfahren das Ausschließen von 2. The method of claim 1, wherein the method excludes
rheumatoider Arthritis bei dem Subjekt umfasst.  rheumatoid arthritis in the subject.
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, weiterhin umfassend das Ausschließen des Vorliegens eines Autoantikörpers gegen Kollagen II oder ein The method of claim 1 or 2, further comprising precluding the presence of an autoantibody against collagen II or a
Degradationsprodukt oder ein Fragment davon,  Degradation product or a fragment thereof,
bevorzugt wobei das Verfahren das Nachweisen eines Autoantikörpers gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst, stärker bevorzugt wobei das Verfahren das Nachweisen eines Autoantikörpers gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon mit einem Nachweisagens zum Nachweisen eines Autoantikörpers gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst.  preferably wherein the method comprises detecting an autoantibody against collagen II or a degradation product or a fragment thereof, more preferably wherein the method comprises detecting an autoantibody against collagen II or a degradation product or a fragment thereof with a detection agent for detecting an autoantibody against collagen II or a degradation product or a fragment thereof.
4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei das Verfahren das 4. The method according to any one of claims 1 to 3, wherein the method
Nachweisen von einem Autoantikörper gegen Thrombospondin-4 (TSP-4) oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon oder das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen COMP oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst.  Detecting an autoantibody against thrombospondin-4 (TSP-4) or a degradation product or a fragment thereof or detecting an autoantibody against COMP or a degradation product or a fragment thereof.
5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, wobei der Verlauf von Arthrose überwacht wird, umfassend den Nachweis des Autoantikörpers zu verschiedenen Zeitpunkten; oder The method of any one of claims 1 to 4, wherein the course of osteoarthritis is monitored, comprising detecting the autoantibody at different times; or
wobei das Stadium von Arthrose diagnostiziert wird. where the stage of osteoarthritis is diagnosed.
6. Verfahren zur Diagnose einer degenerativen Erkrankung des Skelettsystems oder des Risikos, eine degenerative Erkrankung des Skelettsystems zu entwickeln, bei einem Subjekt, umfassend das Nachweisen von einem 6. A method of diagnosing a degenerative disease of the skeletal system or the risk of developing a degenerative disease of the skeletal system in a subject comprising detecting one
Autoantikörper gegen Thrombospondin-4 (TSP-4) oder ein  Autoantibodies to thrombospondin-4 (TSP-4) or a
Degradationsprodukt oder ein Fragment davon oder das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen COMP oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon in einer von dem Subjekt stammenden Probe,  Degradation product or a fragment thereof or detecting an autoantibody against COMP or a degradation product or a fragment thereof in a sample derived from the subject,
bevorzugt wobei die degenerative Erkrankung des Skelettsystems rheumatoide Arthritis oder Arthrose umfasst.  wherein the degenerative disease of the skeletal system comprises rheumatoid arthritis or arthrosis.
7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, wobei das Verfahren das Nachweisen von mindestens zwei Autoantikörpern umfasst; The method of any one of claims 1 to 6, wherein the method comprises detecting at least two autoantibodies;
bevorzugt wobei das Verfahren das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen Thrombospondin-4 (TSP-4) oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon und das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen COMP oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst; oder bevorzugt wobei das Verfahren das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen Thrombospondin-4 (TSP-4) oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon und das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen CLEC3A oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst;  preferably, the method comprising detecting an autoantibody against thrombospondin-4 (TSP-4) or a degradation product or a fragment thereof and detecting an autoantibody against COMP or a degradation product or a fragment thereof; or preferably wherein the method comprises detecting an autoantibody against thrombospondin-4 (TSP-4) or a degradation product or a fragment thereof and detecting an autoantibody against CLEC3A or a degradation product or a fragment thereof;
stärker bevorzugt wobei das Verfahren das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen Thrombospondin-4 (TSP-4) oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon, das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen COMP oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon und das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen CLEC3A oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst.  More preferably, the method comprises detecting an autoantibody against thrombospondin-4 (TSP-4) or a degradation product or a fragment thereof, detecting an autoantibody against COMP or a degradation product or a fragment thereof and detecting an autoantibody against CLEC3A or a degradation product or a fragment thereof.
8. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 7, wobei der Autoantikörper gegen ein Neoepitop eines Degradationsprodukts eines Proteins, gegen das der Autoantikörper gerichtet ist, gerichtet ist. The method of any one of claims 1 to 7, wherein the autoantibody is directed against a neoepitope of a degradation product of a protein against which the autoantibody is directed.
9. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8, wobei das Nachweisen mit einem Nachweisagens erfolgt, bevorzugt wobei das Nachweisagens fähig ist, an die Antigenbindungsregion des Autoantikörpers zu binden, 9. The method according to any one of claims 1 to 8, wherein the detection is carried out with a detection agent, preferred wherein the detection agent is capable of binding to the antigen binding region of the autoantibody,
stärker bevorzugt wobei das Nachweisagens TSP-4 oder ein more preferably wherein the detection agent is TSP-4 or a
Degradationsprodukt oder ein Fragment davon, COMP oder einDegradation product or a fragment thereof, COMP or a
Degradationsprodukt oder ein Fragment davon und/oder CLEC3A oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon ist. Degradation product or a fragment thereof and / or CLEC3A or a degradation product or a fragment thereof.
10. Verfahren zur Diagnose von Arthrose oder des Risikos, Arthrose zu entwickeln, bei einem Subjekt, umfassend das Ausschließen des Vorliegens eines Autoantikörpers gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon in einer von dem Subjekt stammenden Probe; A method of diagnosing osteoarthritis or the risk of developing osteoarthritis in a subject comprising excluding the presence of an autoantibody against collagen II or a degradation product or fragment thereof in a subject-derived sample;
bevorzugt wobei das Verfahren das Nachweisen eines Autoantikörpers gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst; stärker bevorzugt wobei das Verfahren das Nachweisen eines Autoantikörpers gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon mit einem Nachweisagens zum Nachweisen eines Autoantikörpers gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst.  preferably wherein the method comprises detecting an autoantibody against collagen II or a degradation product or a fragment thereof; more preferably wherein the method comprises detecting an autoantibody against collagen II or a degradation product or a fragment thereof with a detection agent for detecting an autoantibody against collagen II or a degradation product or a fragment thereof.
1 1 . Verfahren nach Anspruch 10, wobei die Arthrose zusätzlich durch herkömmliche Methoden diagnostiziert wird. 1 1. The method of claim 10, wherein the osteoarthritis is additionally diagnosed by conventional methods.
12. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 1 1 , wobei die Probe Körperflüssigkeit, bevorzugt Blut, Serum, Blutplasma, Synovialflüssigkeit, Urin, Muskel- oder Knorpelgewebe, Synovialmembran oder Sehne ist. 12. The method according to any one of claims 1 to 1 1, wherein the sample is body fluid, preferably blood, serum, blood plasma, synovial fluid, urine, muscle or cartilage tissue, synovial membrane or tendon.
13. Kit zur Diagnose von Arthrose oder des Risikos, Arthrose zu entwickeln, bei einem Subjekt, wobei das Subjekt keine rheumatoide Arthritis aufweist, umfassend ein Nachweisagens zum Nachweisen von einem Autoantikörper, der mit Arthrose assoziiert ist, 13. A kit for diagnosing osteoarthritis or the risk of developing osteoarthritis in a subject, wherein the subject does not have rheumatoid arthritis, comprising a detection kit for detecting an autoantibody associated with osteoarthritis,
bevorzugt wobei das Nachweisagens ein Nachweisagens zum Nachweisen von einem Autoantikörper gegen TSP-4 oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon oder ein Nachweisagens zum Nachweisen von einem  preferably wherein the detection agent is a detection agent for detecting an autoantibody against TSP-4 or a degradation product or a fragment thereof or a detection agent for detecting a
Autoantikörper gegen COMP oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst; oder Kit zur Diagnose einer degenerativen Erkrankung des Skelettsystems oder des Risikos, eine degenerative Erkrankung des Skelettsystems zu entwickeln, bei einem Subjekt, umfassend ein Nachweisagens zum Nachweisen von einem Autoantikörper gegen Thrombospondin-4 (TSP-4) oder ein Autoantibodies to COMP or a degradation product or a fragment thereof; or A kit for diagnosing a degenerative disease of the skeletal system or the risk of developing a degenerative disease of the skeletal system in a subject comprising a detection reagent for detecting autoantibody to thrombospondin-4 (TSP-4) or a
Degradationsprodukt oder ein Fragment davon oder ein Nachweisagens zum Nachweisen von einem Autoantikörper gegen COMP oder ein  Degradation product or a fragment thereof or a detection agent for detecting an autoantibody against COMP or a
Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst,  Degradation product or a fragment thereof,
bevorzugt wobei die degenerative Erkrankung des Skelettsystems rheumatoide Arthritis oder Arthrose umfasst.  wherein the degenerative disease of the skeletal system comprises rheumatoid arthritis or arthrosis.
14. Kit nach Anspruch 13, wobei das Nachweisagens mindestens zweiThe kit of claim 13, wherein the detection agent is at least two
Nachweisagentien zum Nachweisen von mindestens zwei Autoantikörpern umfasst, Detection means for detecting at least two autoantibodies,
bevorzugt wobei das Nachweisagens ein Nachweisagens zum Nachweisen von einem Autoantikörper gegen Thrombospondin-4 (TSP-4) oder ein preferably wherein the detection agent is a detection agent for detecting autoantibody against thrombospondin-4 (TSP-4) or a
Degradationsprodukt oder ein Fragment davon und ein Nachweisagens das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen COMP oder einDegradation product or a fragment thereof and a detection agent detecting autoantibody against COMP or
Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst; oder Degradation product or a fragment thereof; or
bevorzugt wobei das Nachweisagens ein Nachweisagens zum Nachweisen von einem Autoantikörper gegen Thrombospondin-4 (TSP-4) oder ein preferably wherein the detection agent is a detection agent for detecting autoantibody against thrombospondin-4 (TSP-4) or a
Degradationsprodukt oder ein Fragment davon und ein Nachweisagens das Nachweisen von einem Autoantikörper gegen CLEC3A oder einDegradation product or a fragment thereof and a detection agent detecting an autoantibody against CLEC3A or
Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst; Degradation product or a fragment thereof;
stärker bevorzugt wobei das Nachweisagens ein Nachweisagens zum more preferably wherein the detection agent is a detection agent for
Nachweisen von einem Autoantikörper gegen Thrombospondin-4 (TSP-4) oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon, ein Nachweisagens zum Nachweisen von einem Autoantikörper gegen COMP oder einDetecting an autoantibody against thrombospondin-4 (TSP-4) or a degradation product or a fragment thereof, a detection reagent for detecting an autoantibody against COMP or a
Degradationsprodukt oder ein Fragment davon und ein Nachweisagens zum Nachweisen von einem Autoantikörper gegen CLEC3A oder einA degradation product or a fragment thereof and a detection reagent for detecting an autoantibody against CLEC3A or a
Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst. Degradation product or a fragment thereof.
15. Kit nach Anspruch 13 oder 14, wobei der Kit weiterhin ein Nachweisagens zum Nachweisen von einem Autoantikörper gegen Kollagen II oder ein Degradationsprodukt oder ein Fragment davon umfasst. The kit of claim 13 or 14, wherein the kit further comprises a detection agent for detecting an autoantibody against collagen II or a degradation product or a fragment thereof.
16. Verwendung des Kits nach einem der Ansprüche 13 bis 15 zur Diagnose von Arthrose oder des Risikos, Arthrose zu entwickeln, bei einem Subjekt, wobei das Subjekt keine rheumatoide Arthritis aufweist; oder Use of the kit according to any one of claims 13 to 15 for the diagnosis of osteoarthritis or the risk of developing osteoarthritis in a subject, wherein the subject has no rheumatoid arthritis; or
zur Diagnose von einer degenerativen Erkrankung des Skelettsystems oder des for the diagnosis of a degenerative disease of the skeletal system or the
Risikos, eine degenerative Erkrankung des Skelettsystems zu entwickeln, bei einem Subjekt, Risk of developing a degenerative disease of the skeletal system in a subject
bevorzugt wobei die degenerative Erkrankung rheumatoide Arthritis oder Arthrose umfasst.  preferably wherein the degenerative disease comprises rheumatoid arthritis or osteoarthritis.
17. Wirkstoff zur Verwendung zur Behandlung oder Vorbeugung einer autoimmun- assoziierten Arthrose bei einem Subjekt, bevorzugt wobei der Wirkstoff ein Antikörper gegen B-Zellen, stärker bevorzugt Rituximab, oder ein Wnt- Signalisierungs-Inhibitor, stärker bevorzugt Fluoxetin oder SM04690, ist. A drug for use in the treatment or prevention of autoimmune-associated osteoarthritis in a subject, preferably wherein the drug is an antibody to B cells, more preferably rituximab, or a Wnt signaling inhibitor, more preferably fluoxetine or SM04690.
18. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 13, wobei das Verfahren zur Therapieauswahl eingesetzt wird. 18. The method according to any one of claims 1 to 13, wherein the method is used for therapy selection.
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