EP3386969A1 - Stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, composition et appât rodonticide le comprenant et procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles - Google Patents

Stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, composition et appât rodonticide le comprenant et procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles

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Publication number
EP3386969A1
EP3386969A1 EP16809707.9A EP16809707A EP3386969A1 EP 3386969 A1 EP3386969 A1 EP 3386969A1 EP 16809707 A EP16809707 A EP 16809707A EP 3386969 A1 EP3386969 A1 EP 3386969A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
difethialone
stereoisomer
homo
dextrorotatory enantiomer
bait
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP16809707.9A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Hervé CARUEL
Etienne Benoit
Isabelle FOUREL
Virginie LATTARD
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Liphatech SA
Institut Enseignement Superieur et Recherche en Alimentation Sante Animale Sciences Agronomiques et Environnement
Novozymes BioAg Inc
Original Assignee
Liphatech SA
Institut Enseignement Superieur et Recherche en Alimentation Sante Animale Sciences Agronomiques et Environnement
LiphaTech Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Liphatech SA, Institut Enseignement Superieur et Recherche en Alimentation Sante Animale Sciences Agronomiques et Environnement, LiphaTech Inc filed Critical Liphatech SA
Publication of EP3386969A1 publication Critical patent/EP3386969A1/fr
Withdrawn legal-status Critical Current

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Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/02—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • A01N43/04—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom
    • A01N43/14—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom six-membered rings
    • A01N43/18—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom six-membered rings with sulfur as the ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
    • A01N25/002—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests containing a foodstuff as carrier or diluent, i.e. baits
    • A01N25/004—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests containing a foodstuff as carrier or diluent, i.e. baits rodenticidal
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D335/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom
    • C07D335/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D335/06—Benzothiopyrans; Hydrogenated benzothiopyrans

Definitions

  • DIETHIALONE CONFIGURATION STEREO-ISOMER COMPOSITION AND RODONTICIDE BAIT COMPRISING THE SAME, AND METHOD OF CONTROLLING HARMFUL TARGET RODENTS
  • the invention relates to a configuration stereoisomer of difethialone as an isolated compound, a composition and a rodenticide bait comprising such a configuration stereoisomer and a method for controlling deleterious target rodents.
  • the invention thus relates to the technical field of the fight against target rodent pest populations.
  • Such bait is likely to be consumed by animals other than harmful target rodents when made available to harmful target rodents. It can be consumed directly (primary consumption) by pets or pets. It can also be accidentally consumed by humans. Such consumption may produce poisoning in these pets, pets, or humans that can be lethal.
  • a fraction of the difethialone of these rodenticide baits may be ingested (secondary consumption) by animals - in particular by weaker rodent-killing predatory birds that have consumed such a rodenticide bait or by dead rodent-killing scavenging animals. have consumed such rodenticide bait.
  • This secondary consumption is likely to eventually lead to the death of these predatory animals or scavengers that may be animals - especially birds - belonging to protected species.
  • the invention therefore aims to overcome these disadvantages by proposing a configuration stereoisomer of difethialone, a composition and a rodenticide bait comprising such a configuration stereo-isomer and a a method of controlling harmful rodent rodents which are at the same time effective in controlling target rodent pest populations and which also limit the risk of poisoning non-target animals - particularly domestic or farmed animals; pets or humans - accidentally consuming such rodenticide bait.
  • the invention therefore aims to overcome these drawbacks by proposing a configuration stereoisomer of difethialone, a composition and a rodenticide bait comprising such a configuration stereo-isomer and a method of combating harmful target rodents which are at the same time effective control of target rodent pest populations and also to minimize the risk of secondary poisoning by animals - for example, foxes or wild birds that are predators of weakened target rodents that have consumed rodenticide bait or 'wild animal rodent scavengers target harmful poisoned dead.
  • the invention also aims at providing a configuration stereoisomer of difethialone, a composition and a rodenticide bait comprising such a configuration stereoisomer and a method for controlling harmful target rodents whose implementation is in accordance with the rules of good practice - especially with respect to the protection of birds, especially raptors.
  • the invention also aims at providing a configuration stereoisomer of difethialone, a composition and a rodenticide bait comprising such a configurational stereoisomer and a method for controlling harmful target rodents that do not require, to control a population harmful rodenticide, use a high-dose rodenticide and are environmentally friendly, human health and non-target animals - especially birds-.
  • the invention also aims to propose a configuration stereoisomer of difethialone, a composition and a rodenticide bait comprising such a configuration stereoisomer and a method for controlling harmful target rodents that are likely to be used to control against target rodents that are resistant to known baits for the control of harmful target rodents.
  • the invention therefore aims to propose an alternative to known rodenticide baits.
  • the invention relates to a dextrorotatory enantiomer of a difethialone configuration stereoisomer, said homo-isomer, of formula 3- (4'-bromobiphenyl-4-yl) -1- (4- hydroxythio coumarin-3-yl) -1,2,3,4-tetrahydronaphthalene, wherein the carbons 1 and 3 of the 1,2,3,4-tetrahydronaphthalene group of said homo-stereoisomer are of the same absolute configuration.
  • diazolethialone designates the compound 3- (4'bromobiphenyl-4-yl) -1- (4-hydroxythiocoumarin-3-yl) -1,2,3,4-tetrahydronaphthalene or 3- [3- [4] - (4-Bromophenyl) phenyl] -1-tetralinyl] -2-hydroxy-4-thiochromenone or 3- [3- (4'-bromo [1,1'-biphenyl] -4-yl) -1,2 3,4-tetrahydro-1-naphthalenyl] -4-hydroxy-2H-1-benzothiopyran-2-one, Formula (I) below:
  • stereoisomers denotes isomers of the same semi-developed formula, but whose relative position of atoms differs in space.
  • configuration stereo-isomers refers to stereoisomers whose conversion of these configuration stereoisomers into one another requires a break / reformation of an interatomic covalent bond.
  • configuration stereo-isomers designates stereoisomers that are not conformational isomers (or “rotamers”, whose conversion from one to the other of the conformational isomers is accompanied only by a rotation of a part of the molecule along the axis of a bond ⁇ (sigma) formed by axial overlap of orbitals);
  • hetero-stereoisomer of difethialone refers to the configuration stereoisomer of the difethialone of formula 3- (4'-bromobiphenyl-4-yl) -1- (4-hydroxythiocoumarin-3-yl) - 1,2,3,4-tetrahydronaphthalene, wherein carbons 1 and 3 of the 1,2,3,4-tetrahydronaphthalene moiety of said hetero-stereoisomer are of distinct absolute configurations (i.e., 1S-3R and 1R-3S), the absolute configurations being determined according to the sequential priority rules and the nomenclature of Cahn, Ingold and Prelog (CIP);
  • homo-stereo-isomer of difethialone refers to the configuration stereoisomer of the difethialone of formula 3- (4'-bromobiphenyl-4-yl) -1- (4-hydroxythiocoumarin-3-yl) - 1,2,3,4-tetrahydronaphthalene, wherein carbons 1 and 3 of the 1,2,3,4-tetrahydronaphthalene moiety of said homo-stereoisomer are of the same absolute configuration (i.e., 1S-3S and 1R-3R);
  • the term "quantity" means a molar amount, a mass quantity or a volume quantity. The proportions are therefore proportions of a molar amount relative to a molar amount, of a mass quantity relative to a mass quantity, or of a volume quantity referred to a volume quantity;
  • high pressure liquid chromatography or “high performance liquid chromatography”("HPLC) refer to “HPLC” or “High Performance Liquid Chromatography” chromatography, and; the expression “retention time” designates the duration, measured at the peak of the chromatogram peak, during which a compound is retained on a chromatography column.
  • the invention relates to the dextrorotatory enantiomer of said ho mo-stereoisomer of difethialone. It relates to the dextrorotatory enantiomer of said ho mo-stereoisomer of difethialone in the isolated state and in particular separated from the levorotatory enantiomer of said homo-isomer of difethialone and of the levorotatory and dextrorotatory enantiomers of a stereo- isomer of configuration of the difethialone, said hetero-stereoisomer, in which the carbons 1 and 3 of the 1,2,3,4-tetrahydronaphthalene group are of distinct absolute configurations.
  • the inventors have discovered that it is possible to separate the levorotatory and dextrorotatory enantiomers of said homo-isomer of difethialone and the levogyre and dextrorotatory enantiomers of said hetero-stereoisomer of difethialone by high pressure liquid chromatography in isocratic and under particular conditions using a chromatography column comprising a chiral stationary phase. It was in fact not known at the time of the invention to be able to separate the configuration stereoisomers of the difethialone and especially the laevorotatory enantiomer and the dextrorotatory enantiomer of said homo-isomer of the difethialone.
  • the inventors have succeeded in achieving this separation by selecting a column LUX ® HPLC particular chromatography Cellulose-3 (Phenomenex, Le Pecq, France) of dimension 150 x 2 mm and comprising a chiral stationary phase consisting of cellulose porous particles tris (4 -methylbenzoate), of a particle size of 3 ⁇ and a porosity of 1000 A. They used, as mobile phase, an eluent formed of a mixture of acetonitrile (A) and water comprising formic acid in a volume proportion of 0.1% in water (B) with an A / B volume ratio of 80/20.
  • the flow rate of the mobile phase in the column is maintained at a value of 0.25 ml / min and the separation is carried out at a temperature of 23.2 ° C.
  • the composition to be analyzed is at a concentration of 1 ⁇ g of difethialone per milliliter in acetonitrile and the volume injected on the column is 1 ⁇ L ⁇ .
  • Detection can be performed by tandem mass spectrometry (MS / MS). Detection can also be performed photometrically or spectrophotometrically by adjusting the difethialone concentration and injection volume to obtain optimal detection and by measuring the area under the peak of each configuration stereoisomer .
  • the value of the retention time (t 4 ) of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer according to the invention may vary according to the operating conditions - in particular according to the temperature conditions of the column - and be understood between 14.0 min and 14.4 min.
  • the value of the retention time (ti) of the laevorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer may vary according to the operating conditions - in particular according to the temperature conditions of the column - and be between 7.8 min and 8.2 min. , so that the dextrorotatory and laevorotatory enantiomers of said homo-stereoisomer can be separated by high pressure liquid chromatography on a chiral column.
  • the value of the retention time (t 3 ) of the dextrorotatory enantiomer of said hetero-stereoisomer of difethialone may vary according to the operating conditions - in particular according to the temperature conditions of the column - and be understood between 11.3 min and 11.8 min.
  • the value of the retention time (t 2 ) of the laevorotatory enantiomer of said hetero-stereoisomer of difethialone may vary according to the operating conditions -particularly according to the temperature conditions of the column-and be between 9.0 min and 9.5 min.
  • the order of elution of the configuration stereoisomers of the difethialone is such that t ⁇ t 2 ⁇ t 3 ⁇ t.
  • the values of the retention times t 15 t 2 , t 3 and t 4 are likely to vary, in particular with the temperature of the chromatography column.
  • the order of elution of the configuration stereoisomers of the difethialone remains unchanged.
  • the invention therefore relates to the dextrorotatory enantiomer of said homo-isomer of difethialone in the isolated state and having the property of being elutable, under the chromatography conditions described above, the last of the four stereoisomers. configuration of difethialone.
  • the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone isolated in the pure state according to the invention, in solution in chloroform (CHCt 3 ) has a specific rotational power [a] C 589 nm measured at 25 ° C. and on the sodium D line (589 nm) with a value of + 19.9 °.
  • the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone isolated in the pure state according to the invention has in magnetic resonance spectroscopy (1H-NMR) of the 500 MHz proton in CDCt 3 a multiplet exhibiting a chemical shift ( ⁇ ) between 4.9 ppm and 5.1 ppm corresponding to the proton carried by carbon 1 of the 1,2,3,4-tetrahydronaphthalene group of said homo-stereoisomer of difethialone.
  • hetero-stereoisomers are distinguished from difethialone and said homo-stereoisomer of difethialone by their proton NMR spectra.
  • the chemical shift of the proton carried by carbon 1 of the 1,2,3,4-tetrahydronaphthalene group of said hetero-stereoisomer of difethialone is of the order of 5.3 ppm.
  • the invention also relates to a composition
  • a composition comprising the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of the difethialone according to the invention, excluding a racemic mixture of dextrorotatory and levorotatory enantiomers of said homo-stereo-isomer of difethialone, that is to say an optically inactive mixture of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone and of the laevorotatory enantiomer of said homo-stereo-isomer of the difethialone.
  • the invention therefore also relates to a composition
  • a composition comprising a dextrorotatory enantiomer of the difethialone configuration stereoisomer, said homo-stereoisomer, of formula 3- (4'-bromobiphenyl-4-yl) -1- (4-hydroxythiocoumarin) 3-yl) -1,2,3,4-tetrahydronaphthalene, wherein carbons 1 and 3 of the 1,2,3,4-tetrahydronaphthalene moiety of said homo-stereoisomer are of the same absolute configuration, excluding a mixture in which the dextrorotatory enantiomer and the laevorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone are in the same amount.
  • said homo-stereoisomer is predominantly in the form of a dextrorotatory enantiomer.
  • homo-stereoisomer is predominantly in the form of a dextrorotatory enantiomer
  • quantity (mass, molar or volume) of dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone is predominant.
  • the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of the difethialone in the composition is such that the ratio of this amount to the (total) amount of said homo-isomer in the composition is greater than 50%.
  • composition according to the invention in particular, in a composition according to the invention:
  • the ratio of the amount of dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone to the sum of the amounts of each of the enantiomers (dextrorotatory and levorotatory) of said homo-stereoisomer of difethialone is greater than 0.5 (greater than at 50%);
  • the ratio of the dextrorotatory enantiomer concentration of said homo-stereoisomer of difethialone to the sum of the concentrations of each of the enantiomers (dextrorotatory and levorotatory) of said homo-stereoisomer of difethialone is greater than 0.5 (greater than at 50%), and; the proportion of dextrorotatory enantiomer of said ho-stereo-isomer of difethialone in the composition is greater than the proportion of the levorotatory enantiomer of said homo-isomer of difethialone.
  • the composition comprises an amount of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone in the composition such as the ratio of this amount to the total amount of said homo-stereoisomer of difethialone in the composition is greater than 50%, in particular greater than 60%, in particular greater than 70%, more particularly greater than 80%, preferably greater than 90%, more preferably greater than 95%, particularly preferably greater than 98%; more preferably greater than 99% or of the order of 100%.
  • it comprises an amount of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of the difethialone in the composition such that the ratio of this amount to the total amount of said homo-stereoisomer of the difethialone in the composition is between 85.degree. % and 100%, more preferably between 90% and 98%.
  • it comprises an amount of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of the difethialone in the composition such that the ratio of this amount to the total amount of said homo-stereoisomer of the difethialone in the composition is between 98. % and 100%.
  • the composition may also comprise the levorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone, but with a proportion in the composition which is less than 50%, especially less than 25%, preferably between 0% and 25%. , in particular less than 10% - with respect to the homo-stereoisomer of difethialone.
  • the difethialone is predominantly in the form of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone.
  • the composition comprises an amount of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone in the composition such as the ratio of that amount to the amount of each of the enantiomers (said hetero-isomer and said homo-stereoisomer ) of the difethialone is greater than 25%.
  • the ratio of the amount of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone to the sum of the amounts of each of the enantiomers of said homo-stereoisomer of difethialone and of each of the enantiomers of said hetero-stereoisomer of difethialone is greater than 0.25 (greater than 25%);
  • the ratio of the concentration of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone relative to the sum of the concentrations of each of the enantiomers of said homo-stereoisomer of difethialone and of each of the enantiomers of said heterois stereoisomer difethialone is greater than 0.25 (greater than 25%), and;
  • the proportion of dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone in the composition is greater than the proportion of each of the enantiomers of said homo-stereoisomer of difethialone and of said hetero-stereoisomer of difethialone.
  • the proportion of dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone is more than 25% relative to difethialone (total).
  • the composition comprises an amount of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone in the composition such that the ratio of this amount to the amount of total difethialone in the composition is greater than 25. % -particularly greater than 50%, in particular greater than 70%, more particularly greater than 80%, preferably greater than 90%, particularly preferably greater than 95%, more preferably greater than 98%, still more preferably greater than 99% or in the order of 100% -.
  • a composition according to the invention therefore comprises difethialone predominantly in the form of a dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone.
  • the composition comprises an amount of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone such as that the ratio of this amount to the amount of the total difethialone is greater than 70%, preferably between 80% and 100, more preferably between 90% and 100.
  • the composition comprises an amount of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone such that the ratio of this amount to the amount of total difethialone is between 95% and 99%.
  • the composition comprises an amount of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone such that the ratio of this amount to the amount of total difethialone is between 98% and 100%.
  • the composition comprises an amount of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone such that the ratio of this amount to the amount of the total difethialone is substantially of the order of 100%.
  • the composition comprises an amount of the dextrorotatory enantiomer of said homo-isomer of difethialone in the composition such that the ratio of this amount to the amount of total difethialone in the composition is greater than 97. %.
  • a composition according to the invention may be substantially free of the levorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone, that is to say that the levorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone may be present in the composition but only in the form of traces. It may also be substantially free of said hetero-stereoisomer of difethialone, that is to say that said hetero-stereoisomer of difethialone may be present in the composition but only in the form of traces.
  • the composition is in the liquid state and comprises a liquid solvent of difethialone.
  • a liquid solvent of difethialone may be a solution of difethialone in a solvent of difethialone, excluding a racemic mixture of said levogyre and dextrorotatory enantiomers of said homo-stereoisomer of difethialone.
  • It may also be a solution comprising difethialone in a solvent of difethialone and wherein said homo-stereoisomer of difethialone is predominantly in the form of of dextrorotatory enantiomer.
  • the composition is in the solid state. It may also be a solid comprising difethialone, excluding a racemic mixture of dextrorotatory and levorotatory enantiomers of said ho-stereoisomer of difethialone. It may also be a solid comprising difethialone and wherein said ho-stereo-isomer of difethialone is predominantly in the form of dextrorotatory enantiomer. It may also be a solid comprising difethialone and in which the difethialone is predominantly in the dextrorotatory enantiomer form of said homo-stereoisomer of difethialone.
  • the invention therefore also relates to a composition
  • a composition comprising the dextrorotatory enantiomer according to the invention, with the exclusion of a racemic mixture of the levorotatory and dextrorotatory enantiomers of said homo-isomer of difethialone, the difethialone of the composition being optically active and dextrorotary.
  • composition according to the invention comprising dextrorotatory enantiomer according to the invention, to the exclusion of a racemic mixture of the levorotatory and dextrorotatory enantiomers of said homo-stereoisomer of difethialone, is itself optically active and levorotatory, or optically inactive.
  • the invention also relates to the use of a composition according to the invention for the preparation of a rodenticide bait for harmful target rodents.
  • the invention also relates to a rodenticide bait comprising a composition according to the invention, and at least one edible excipient for harmful target rodents.
  • a rodenticide bait according to the invention comprises:
  • the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone and the laevorotatory enantiomer of said homo-isomer of difethialone are in distinct amounts.
  • a bait according to the invention comprises an edible excipient for harmful target rodents and said homo-stereoisomer of difethialone mainly in the form of a dextrorotatory enantiomer.
  • the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of the residual difethialone in the body of a poisoned rodent disappears more rapidly than the other enantiomer (laevorotatory) of said homo-stereoisomer of the difethialone.
  • the harmful or dead target rodent having ingested the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone is therefore of low toxicity to non-rodent mammals and to birds consuming the harmful target rodent - dead or alive. and in particular vis-à-vis predators (including non-rodent mammals and birds) who preferentially consume the viscera of their prey and in particular their liver.
  • the inventors have also observed that the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone, although having low hepatic persistence in harmful target rodents, makes it possible, and in a completely surprising manner to date, to effectively fight against harmful target rodents.
  • the rodenticide bait comprises a mass quantity of difethialone such that the ratio (mass proportion) of this mass quantity of difethialone to the mass quantity of rodenticide bait is less than 200 ppm-that is less than 200 mg of difethialone per kilogram of bait.
  • the mass proportion of the difethialone in the rodenticide bait is between 1 ppm and 100 ppm (1 mg to 100 mg of difethialone per kilogram of rodenticide bait), in particular between 5 ppm and 100 ppm (5 mg to 100 ppm).
  • mg of difethialone per kilogram of rodenticide bait preferably of between 5 ppm and 50 ppm (5 mg to 50 mg of difethialone per kilogram of rodenticide bait), more preferably between 10 ppm and 50 ppm (10 mg to 50 ppm).
  • mg of difethialone per kilogram of rodenticide bait more preferably between 15 ppm and 50 ppm (15 mg to 50 mg of difethialone per kilogram of rodenticide bait), for example of the order of 15 ppm (15 mg of difethialone per kilogram of bait).
  • the edible excipient comprises at least one food selected from the group consisting of cereal seeds-notably dehulled cereal seeds-cereal seed mills, cereal seed flours, flakes cereal seeds, cereal bran and non-cereal seeds, for Alfalfa seeds - in particular in shell form, in the form of flour, in the form of flour, in the form of flakes or bran.
  • the edible carrier may include any carrier that may be consumed by harmful target rodents.
  • the edible carrier comprises at least one food selected from the group consisting of plant foods and foods of animal origin.
  • the edible carrier comprises at least one food chosen to stimulate the appetite of harmful target rodents.
  • this food is selected from the group consisting of seeds of one or more cereals, seeds of one or more grains, seeds of one or more grains, seed flakes of one or more cereals, the sound of one or more cereals, and the grain meal of one or more cereals.
  • cereals are selected from the group consisting of oats, wheat, barley, corn, soybeans and rice.
  • the food is selected from the group consisting of sweet foods.
  • these may be foods comprising at least one sugar selected from the group consisting of sucrose, lactose, fructose and glucose.
  • It may be a sugar syrup-for example, a sugar syrup obtained by hydrolysis of the starch-or a sugar syrup obtained by hydrolysis of sucrose (invert sugar syrup), or beet sugar syrup, or maple syrup or sugar cane syrup, or syrup obtained from a plant of the genus stevia.
  • the food is chosen from the group consisting of flakes and coconut albumen flour (copra).
  • the food is selected from the group consisting of nuts, hazelnuts and almonds-shredded and / or powdered.
  • the food is chosen from the group consisting of vegetable fats, vegetable oils (for example rapeseed oil, soy fat, sunflower oil, cocoa butter, peanut oil, butter peanuts, corn oil, palm oil), animal fats and animal oils (butter, lard, fish oil).
  • vegetable oils for example rapeseed oil, soy fat, sunflower oil, cocoa butter, peanut oil, butter peanuts, corn oil, palm oil
  • animal fats and animal oils (butter, lard, fish oil).
  • the food is selected from the group consisting of proteins of plant origin and proteins of animal origin.
  • proteins of plant origin and proteins of animal origin.
  • the edible carrier for harmful target rodents is selected to allow bait consumption by harmful target rodents.
  • each edible excipient is non-lethal for harmful target rodents.
  • the edible carrier is not a rodenticide in itself.
  • the rodenticide bait is chosen from the group consisting of solid baits comprising difethialone and a solid edible excipient.
  • the rodenticide bait is a solid in the divided state, for example in the form of pellets or granules.
  • the rodenticide bait can be a solid in the form of a block or paste that can be consumed by the target harmful rodents or a solid material that can be eaten by the target harmful rodents.
  • the solid rodenticide bait according to the invention can be in the form of a rigid block, a semi-rigid block, a foam, a powder or a gel.
  • the rodenticide bait in the form of a powder, in the form of a foam or in the form of a gel is adapted to be able to soil the fur of the target rodent (s) harmful (s) ) and to be ingested by him (them) during his (their) grooming.
  • the rodenticide bait is chosen from the group consisting of liquid baits comprising difethialone and a liquid edible excipient.
  • the rodenticide bait is then a drink for harmful target rodents.
  • the rodenticide bait is chosen from the group consisting of liquid baits comprising difethialone and a liquid edible excipient.
  • the rodenticide bait is then a drink for harmful target rodents. It may be a solution of difethialone in a solvent of difethialone, excluding a racemic mixture of dextrorotatory enantiomers and levorotatory of said homo-stereoisomer of difethialone.
  • the invention thus also relates to a rodenticide bait in which the difethialone is optically active.
  • the difethialone of the rodenticide bait according to the invention is optically inactive.
  • the rodenticide bait comprises at least one dye.
  • a dye makes it possible in particular to give said rodenticide bait a color easily detectable and identifiable by a person handling the rodenticide bait.
  • the rodenticide bait comprises at least one preservative able to ensure its conservation during storage.
  • the rodenticide bait includes at least one compound bittering agent denatonium benzoate type, also known under the name of "Bitrex ®" for reduce the risk of accidental consumption by non-target organisms.
  • the composition and the rodenticide bait according to the invention comprise exclusively difethialone-in which the homo-stereoisomer is not a racemic mixture-as rodenticide substance.
  • the composition and the rodenticide bait according to the invention are free of any other anticoagulant substance for rodenticide use.
  • the composition and rodenticide bait may include any harmful substance other than a rodenticide, such as an insecticide and / or acaricide.
  • composition and the rodenticidal bait according to the invention comprise difethialone excluding a racemic mixture of levogyre and dextrorotatory enantiomers of said homo-stereoisomer and at least one other substance. distinct from difethialone as a rodenticide.
  • This other rodenticide substance, distinct from difethialone may be another anticoagulant, particularly anti-vitamin K or non-anticonagulant, or another non-anticoagulant rodenticide.
  • the invention also relates to a method for controlling harmful target rodents in which a quantity of rodenticide bait comprising is dispersed comprising:
  • At least one edible carrier for harmful target rodents at least one edible carrier for harmful target rodents
  • the invention also relates to a method for controlling harmful target rodents in which a quantity of rodenticide bait according to the invention is dispersed, said quantity of bait being sufficient to be rodenticide.
  • a quantity of rodenticide bait comprising said homo-isomer of difethialone predominantly in the form of a dextrorotatory enantiomer, having decreased hepatic persistence in the target rodent and, surprisingly, at least one rodenticide efficacy.
  • the method according to the invention therefore makes it possible to limit the secondary poisoning of non-rodent mammals and of birds capable of feeding with poisoned rodents, dead or alive, but comprising a reduced amount, and especially a non-lethal amount, of difethialone.
  • the method according to the invention also makes it possible to limit such secondary poisoning of non-rodent mammals and birds likely to preferentially consume the viscera, in particular the liver, of said dead or alive poisoned rodents.
  • said homo-stereoisomer of difethialone is predominantly in the form of a dextrorotatory enantiomer.
  • the difethialone is predominantly in the form of dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone.
  • a rodenticide bait according to this variant of the invention is a deadly bait in a single catch or "one-shot" in English.
  • the mass proportion of difethialone in the rodenticide bait is between 2 ppm and 200 ppm, in particular between 5 ppm and 100 ppm, preferably between 10 ppm and 50 ppm, more preferably between 15 ppm and 50 ppm.
  • non-lethal for harmful target rodents i.e., generally non-lethal to harmful target rodents, consuming said bait for a period of 24 consecutive hours, and;
  • the 24-hour periods are consecutive.
  • This other variant of the invention therefore also relates to a method for controlling harmful target rodents in which a quantity of lethal rodenticide bait is dispersed for the rodent harmful rodents consuming this rodenticide and non-lethal rodent bait for a long time. or non-target animals accidentally consuming this rodenticide bait.
  • This is called a "multi-dose” or "multi-feeding" control method.
  • the consumption of rodenticide bait by a target rodent harmful for a period of 24 hours is generally insufficient to cause the death of said rodent, while a repeated consumption of rodenticide bait for at least two days will result in the death of the target rodent.
  • the invention therefore relates to a method for controlling a target rodent nuisance population in which rodenticide rodent bait capable of being ingested by the target harmful rodent is made available to harmful target rodents, said quantity of rodenticide bait being sufficient to kill harmful target rodents consuming the rodenticide bait for several days.
  • a quantity of rodenticide bait is dispersed so that harmful target rodents consume a quantity of difethialone sufficient to be lethal to said harmful target rodents consuming said bait for several periods of 24 hours. said periods being consecutive.
  • the mass proportion of difethialone is between 5 ppm and 50 ppm, in particular between 5 ppm and 30 ppm - in particular of the order of 15 ppm - relative to the rodenticide bait.
  • the quantity of disseminated rodenticide bait, the mass proportion of difethialone relative to the rodenticide bait and the proportion of dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone relative to the difethialone are adapted so that the consumption of the rodenticide bait is lethal to harmful target rodents consuming bait daily for at least 2 24-hour periods, especially 3 to 7 periods, at least two-especially every period-being consecutive.
  • the proportion of dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone being greater than 95%, in particular of the order of 100%, relative to the difethialone , the mass proportion of difethialone relative to the rodenticide bait is between 5 ppm and 50 ppm -in particular of the order of 15 ppm-.
  • harmful target rodents are provided with a quantity of rodenticide bait sufficient to satisfy daily the appetite of harmful target rodents, said rodenticidal bait comprising a major proportion of dextrorotatory enantiomer of said homo-steroid. isomer of difethialone.
  • the amount of disseminated rodenticide bait, the proportion of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone relative to the difethialone and the mass proportion of difethialone relative to the rodenticide bait to allow rodenticide bait consumption for several days by harmful target rodents, while limiting:
  • the amount of disseminated bait, the mass proportion of difethialone relative to the bait and the proportion of dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone are adapted to limit the amount of difethialone ( total) in the liver of rodents killed by consumption of said bait.
  • the invention also relates to a chromatographic process for obtaining a dextrorotatory enantiomer of a configuration stereoisomer of the homo-stereo-isomer difethialone of formula 3- (4'-bromobiphenyl-4- yl) -1- (4-hydroxythio coumarin-3-yl) -1,2,3,4-tetrahydronaphthalene, wherein carbons 1 and 3 of the 1,2,3,4-tetrahydronaphthalene moiety of said homo-stereoisomer are of the same absolute configuration, wherein
  • a mixture of acetonitrile (A) and water comprising 0.1% by volume of formic acid (B) is chosen as liquid mobile phase, with an A / B volume ratio of 80/20; and with a flow rate of the liquid mobile phase in the chromatography column of 0.25 mL / min;
  • a liquid composition comprising said dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone is introduced at the top of the chromatography column, and then;
  • the liquid composition is entrained with the mobile phase in the column for chromatography under conditions suitable for separating the configuration stereoisomers from the difethialone, and;
  • the invention also relates to said dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone obtained by a process according to the invention.
  • the invention also relates to a configuration stereoisomer of difethialone, a process for obtaining such a configuration stereo-isomer, a composition comprising such a configuration stereo-isomer, a rodenticide bait and a method of controlling harmful target rodents characterized in combination by all or some of the characteristics mentioned above or hereafter.
  • FIG. 1 is a chromatogram of analysis by high pressure liquid chromatography on a chiral column of difethialone (top) and of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of purified difethialone (bottom);
  • FIG. 2 is a 300 MHz proton NMR spectrum of said homo-stereoisomer of difethialone
  • FIG. 3 is a 300 MHz proton NMR spectrum of said hetero-stereoisomer of difethialone
  • FIG. 4 is a 500 MHz proton NMR spectrum of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone according to the invention.
  • FIG. 5 is a 13 C-carbon NMR spectrum at 500 MHz of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone;
  • FIG. 6 is a 500 MHz proton NMR correlation spectroscopy analysis (1H-NMR) of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone
  • FIG. 7 is a circular dichroism spectrum of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone
  • FIG. 8 is a graphical representation of the temporal evolution of the hepatic concentration in rats (males and females) of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone ( ⁇ ) and of the levorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of -steroisomer of difethialone (O);
  • FIG. 9 is a graphical representation of the temporal evolution of the hepatic concentration in rats (males and females) of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone ( ⁇ ), said homo-stereo-isomer of difethialone ( ⁇ ) and said hetero-stereoisomer of difethialone ( ⁇ ), and;
  • FIG. 10 is a graphical representation of the temporal evolution of the mean hepatic concentration in rats of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone ( ⁇ ) and of total difethialone ( ⁇ ).
  • the homo-stereoisomer of the difethialone is identified by proton magnetic resonance spectroscopy (1H NMR).
  • the homo-stereoisomer difethialone dissolved in CPDC 3 shows a multiplet at a chemical shift ( ⁇ ) of between 4.9 ppm and 5.1 ppm corresponding to the proton borne by the carbon of group 1 1.2 3,4-tetrahydronaphthalene of difethialone as illustrated in FIG.
  • the inventors have solved the complex and unresolved problem to date of the separation of the configuration stereoisomers of the difethialone and in particular of the levorotatory and dextrorotatory enantiomers of said homo-stereoisomer of the difethialone.
  • the flow rate of the mobile phase in the column is 0.25 ml / min and the separation is carried out at a temperature of 23.2 ° C.
  • the solution containing the sample to be analyzed is at a concentration of 1 ⁇ g of difethialone per milliliter in acetonitrile and is filtered on a regenerated cellulose membrane with a cut-off of 0.2 ⁇ .
  • the volume of solution containing the sample to be analyzed injected on the column is 1 ⁇ L ⁇ .
  • the value of the retention time (t 4 ) of said dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer according to the invention is of the order of 14.4 min as described in FIG. 1.
  • the value the retention time 3 ⁇ 4) of the levorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer is of the order of 8.1 min as described in FIG. 1, so that the dextrorotatory and laevorotatory enantiomers of said homo-stereoisomer can be effectively separated by high pressure liquid chromatography on a chiral column.
  • the value of the retention time (t 3 ) of the dextrorotatory enantiomer of said hetero-stereoisomer of difethialone is of the order of 11.7 min and the value of the retention time (t 2 ) of the levorotatory enantiomer of said hetero-stereoisomer of difethialone is of the order of 9.4 min.
  • the elution order of the configuration stereoisomers of the difethialone is such that ⁇ t 2 ⁇ t 3 ⁇ t 4 .
  • the UV spectrum of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone in chloroform solution (CHCt 3 ) has absorbance peaks centered at 238.2 nm and 259.5 nm.
  • the inventors have characterized the dextrorotatory enantiomer of said homo-isomer of difethialone in the isolated state by its power.
  • rotary also called optical activity or circular birefringence
  • a deflection of the plane of polarization of the polarized light in the clockwise direction of rotation by facing the polarized light beam characterizes a dextrorotatory solution
  • a deflection of the plane of polarization of the polarized light in the anticlockwise direction of rotation facing the Polarized light beam characterizes a solution and a levorotatory compound.
  • the rotatory power of a dextrorotatory enantiomer solution of said homo-stereoisomer of difethialone in chloroform (CHCt 3 ) is measured at a concentration of 11.6 g / L.
  • the rotary power of this solution is measured by means of a P 2000 digital polarimeter (JASCO, Bouguenais, France) operating with excitation light with a wavelength of 589 nm.
  • the mean rotary power obtained over two series of 10 measurements is 2.308 °.
  • the specific rotation power at 25 ° C [ ⁇ ] 25 C 589 nm of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone in solution in chloroform, measured on the sodium D-line (589 nm) is +19 , 9 °.
  • FIGS. 2 and 3 respectively represent a nuclear magnetic resonance spectrum of the proton (1 H NMR) at 300 MHz of the homo-stereoisomer of difethialone in CDCC 3 (FIG. 2) and a nuclear magnetic resonance spectrum of the proton at 300 MHz in CDCC 3 of the hetero-stereoisomer of difethialone in CDCC 3 ( Figure 3).
  • Said homo-stereoisomer of difethialone has (FIG. 2) a multiplet whose chemical shift ( ⁇ ) is between 4.9 ppm and 5.1 ppm corresponding to carbon 1 of the 1,2,3,4-tetrahydronaphthalene group.
  • said homo-stereoisomer of difethialone has (Figure 3) a multiplet whose chemical shift ( ⁇ ) is between 5.2 ppm and 5.4 ppm.
  • Figure 4 shows a 500 MHz proton NMR spectrum of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone in CDCC 3 .
  • the proton NMR spectra of the dextrorotatory and levorotatory enantiomers of said homo-stereoisomer of difethialone are indistinguishable from each other.
  • FIG. 6 is a two-dimensional (1H-NMR) two-dimensional proton NMR spectrum obtained by correlation spectroscopy of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone in solution in CDCt 3 at a concentration of 40 mg / mL performed on a Brucker AVANCE III HD (500 MHz) spectrometer equipped with a PRODIGY motorized multi-core direct cryoprobe.
  • FIG. 5 is a 13 C NMR spectrum of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone in solution in CDCt 3 at a concentration of 40 mg / ml produced on a Brucker AVANCE III HD (500 MHz) spectrometer equipped a motorized multi-core direct cryoprobe PRODIGY. It allows an identification of the 31 carbon atoms of the difethialone.
  • the 13 C-NMR spectrum of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone is indistinguishable from the 13 C-NMR spectrum of the levorotatory enantiomer of said ho-stereoisomer of difethialone.
  • said homo-isomer of difethialone has a signal between 34 ppm and 38 ppm characteristic and distinctive of said hetero-stereoisomer of difethialone.
  • 0.525 g ( ⁇ 0.025 g) of rat liver are weighed accurately and placed in a 50 ml polypropylene tube. 10 mL of acetone was added and the suspension is subjected to homogenization using a homogenizer / disperser ® Ultra-Turrax for a period of about 30 sec. The rod of the homogenizer / disperser is rinsed with hot water and then twice with 20 ml of acetone in a polypropylene tube. The homogenate is centrifuged for 5 minutes at a centrifugation rate of 3000 rpm (rotation per minute). The supernatant is collected and decanted into a test tube. The sample is evaporated under a stream of nitrogen (N 2 ) at a temperature of 40 ° C to form a dry extract.
  • N 2 nitrogen
  • the cartridge is dried by vacuum suction connected at the bottom of the cartridge.
  • 1 mL of elution solution consisting of dichloromethane and methanol in a volume proportion of 90/10 is then deposited at the top of the cartridge and an eluate comprising difethialone is collected at the bottom of the cartridge.
  • the eluate solvent is evaporated under a stream of nitrogen (N 2 ) at a temperature of 40 ° C.
  • the sample is taken up in 0.5 ml of acetonitrile and the acetonitrile solution containing the difethialone is filtered on a 0.2 ⁇ filter.
  • rats were administered gavage solution so that the amount of difethialone ingested by each rat was in the order of 3.4 mg per kilogram of rat.
  • fed rats are treated daily by subcutaneous administration of a dose of vitamin K1 (as an antidote to bleeding) at the rate of 0.1U per 200g of rat's weight.
  • the content of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone in the liver (average of the contents measured in 6 rats expressed in nanogram of said enantiomer per gram of liver (ng / g)) is represented by solid circles ( ⁇ ) and the content of the laevorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone in the liver (average of the contents measured on 6 rats expressed in nanograms of said enantiomer per gram of liver (ng / g)) is represented by open circles (O).
  • the hepatic content of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone decreases more rapidly than the hepatic content of the laevorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone, whereas the initial proportion of the two enantiomers ingested by the rats is identical (20%).
  • the relative content of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone in the liver (average of the contents measured in 6 rats) expressed in arbitrary units for comparison is represented by solid circles ( ⁇ )
  • the relative content of said homo-stereo isomer is represented by open squares ( ⁇ )
  • the relative content of said hetero-stereoisomer is represented by solid squares ( ⁇ ).
  • the hepatic content of the dextrorotatory enantiomer of the homo-isomer of the difethialone according to the invention decreases more rapidly than the hepatic content of said ho-stereoisomer of difethialone and the hepatic content of said hetero-stereoisone. isomer of difethialone.
  • the hepatic content of said homo-stereoisomer of difethialone decreases more rapidly than the hepatic content of said hetero-stereoisomer of difethialone.
  • the evolution over time of the dextrorotatory enantiomer content of said homo-stereoisomer of difethialone in the liver is represented (left scale) by solid circles ( ⁇ ) and the evolution over time of the content of the total difethialone is represented (right scale) by open triangles ( ⁇ ).
  • the hepatic content of the dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of the difethialone according to the invention decreases more rapidly than the hepatic content of the total difethialone.
  • a pasty rodenticide bait according to the invention is produced by dispersing a quantity of difethialone in an edible excipent comprising vegetable fat and cereal flour.
  • the measured proportion of difethialone relative to the bait is 14.7 ppm (14.65 mg of dextrorotatory enantiomer of said homo-stereoisomer of difethialone per kilogram of bait) and the proportion of dextrorotatory enantiomer of said homo - stereoisomer to difethialone is 99.7%.
  • the bait further comprises a mass proportion of 0.3% levorotatory enantiomer of said hetero-stereoisomer of difethialone relative to difethialone.
  • the hepatic content of the dextrorotatory enantiomer of the ⁇ ho mo-stereoisomer of difethialone (“DFN-Homo-dextro") according to the invention is measured for each of the rats that died between D9 and D10 by analysis by high-performance liquid chromatography. pressure on a chiral column.
  • the values, expressed in micro-gram of "DFN-Homo-dextro" and difethialone per gram of liver are given in Table 3 below.
  • the average amount of "DFN-Homo-dextro" enantiomer retained in the liver of each rodent (males and females) at their death corresponds to 4.7% of the amount of difethialone ingested by each rodent.
  • the difethialone content retained in the liver of rats having consumed a bait comprising 15 ppm of difethialone of the state of the art is of the order of 110 ⁇ g / gram.
  • Bait dosed at 14.7 ppm difethialone achieves a 100% mortality rate by minimizing the risk of secondary intoxication of animals - in particular, predatory birds or scavengers of weakened target rodents having consumed a rodenticide bait.
  • a composition, a rodenticide bait and a method for controlling harmful target rodents are subject to infinity of variants both in the formulation of the bait and in the methods of implementation of the method.

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Abstract

L'invention concerne un énantiomère dextrogyre du stéréo- isomère de configuration de la diféthialone, dit homo-stéréo-isomère, de formule 3-(4'-bromobiphenyl-4-yl)-1-(4-hydroxythiocoumarin-3-yl)-1,2,3,4- tétrahydronaphtalène, dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène dudit homo-stéréo-isomère sont de même configuration absolue.

Description

STÉRÉO-ISOMÈRE DE CONFIGURATION DE LA DIFÉTHIALONE, COMPOSITION ET APPÂT RODONTICIDE LE COMPRENANT ET PROCÉDÉ DE LUTTE CONTRE DES RONGEURS CIBLES NUISIBLES
L'invention concerne un stéréo-isomère de configuration de la diféthialone comme composé isolé, une composition et un appât rodonticide comprenant un tel stéréo-isomère de configuration et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles. L'invention concerne donc le domaine technique de la lutte contre des populations de rongeurs cibles nuisibles.
Il est connu d'utiliser des poisons sous forme d'appâts rodonticides contre des rongeurs cibles nuisibles. On sait de EP 2 090 164 que la diféthialone est un anticoagulant de deuxième génération agissant à simple dose. US 2005/181003 décrit un appât rodonticide sous forme de gel comprenant de la diféthialone en proportion massique de 25 ppm.
Un tel appât est susceptible d'être consommé par des animaux autres que des rongeurs cibles nuisibles lorsqu'il est mis à la disposition de rongeurs cibles nuisibles. Il peut être consommé directement (consommation primaire) par des animaux domestiques ou des animaux de compagnie. Il peut aussi être consommé accidentellement par des humains. Une telle consommation peut produire chez ces animaux domestiques, chez ces animaux de compagnie ou chez des humains un empoisonnement qui peut être létal.
En outre, une fraction de la diféthialone de ces appâts rodonticides peut être ingérée (consommation secondaire) par des animaux -notamment par des oiseaux- prédateurs de rongeurs nuisibles affaiblis ayant consommé un tel appât rodonticide ou par des animaux charognards de rongeurs nuisibles morts d'avoir consommé un tel appât rodonticide. Cette consommation secondaire est susceptible d'entraîner à terme la mort de ces animaux prédateurs ou charognards qui peuvent être des animaux -notamment des oiseaux- appartenant à des espèces protégées.
L'invention vise donc à pallier ces inconvénients en proposant un stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, une composition et un appât rodonticide comprenant un tel stéréo-isomère de configuration et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont en même temps efficaces pour contrôler les populations de rongeurs cibles nuisibles et qui permettent aussi de limiter les risques d'empoisonnement d'animaux non-cibles -notamment des animaux domestiques ou d'élevage, des animaux de compagnie ou des humains- consommant accidentellement un tel appât rodonticide.
L'invention vise donc à pallier ces inconvénients en proposant un stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, une composition et un appât rodonticide comprenant un tel stéréo-isomère de configuration et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont en même temps efficaces pour contrôler les populations de rongeurs cibles nuisibles et qui permettent aussi de limiter les risques d'empoisonnement secondaire d'animaux - par exemple de renards ou d'oiseaux- sauvages prédateurs de rongeurs cibles nuisibles affaiblis ayant consommé de l'appât rodonticide ou d'animaux sauvages charognards de rongeurs cibles nuisibles morts empoisonnés.
L'invention vise aussi à proposer un stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, une composition et un appât rodonticide comprenant un tel stéréo-isomère de configuration et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles dont la mise en œuvre est en accord avec les règles de bon usage -notamment vis à vis de la protection des oiseaux, et en particulier des rapaces-.
L'invention vise aussi à proposer un stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, une composition et un appât rodonticide comprenant un tel stéréo-isomère de configuration et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui ne nécessitent pas, pour contrôler une population de rongeur cibles nuisibles, d'utiliser un agent rodonticide à forte dose et qui sont respectueux de l'environnement, de la santé humaine et des animaux non cibles -notamment des oiseaux-.
L'invention vise aussi à proposer un stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, une composition et un appât rodonticide comprenant un tel stéréo-isomère de configuration et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles qui sont susceptibles d'être utilisés pour lutter contre des rongeurs cibles nuisibles résistants à des appâts connus de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles.
L'invention vise donc à proposer une alternative à des appâts rodonticides connus.
Pour ce faire, l'invention concerne un énantiomère dextrogyre d'un stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, dit homo- stéréo-isomère, de formule 3-(4'-bromobiphenyl-4-yl)-l-(4-hydroxythio coumarin-3-yl)-l,2,3,4-tétrahydronaphtalène, dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène dudit homo- stéréo-isomère sont de même configuration absolue.
Dans tout le texte :
- le terme « diféthialone » désigne le composé 3-(4'bromobiphenyl-4- yl)-l-(4-hydroxythiocoumarin-3-yl)- 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène ou 3-[3-[4-(4- bromophényl)phenyl]- l-tétralinyl]-2-hydroxy-4-thiochroménone ou 3-[3-(4'- bromo[ 1 , 1 '-biphényl]-4-yl)- 1 ,2,3,4-tétrahydro- l-naphthalényl]-4-hydroxy-2H- 1- benzothiopyran-2-on formule (I) ci-après :
dans laquelle sont présentés les numéros des carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène ;
- le terme « stéréo-isomères » désigne des isomères de même formule semi-développée, mais dont la position relative des atomes diffère dans l'espace. L'expression « stéréo-isomères de configuration » désigne des stéréo-isomères dont la conversion de l'un en l'autre de ces stéréo-isomères de configuration nécessite une rupture/reformation d'une liaison covalente interatomique. Ainsi, l'expression « stéréo-isomères de configuration » désigne des stéréo-isomères qui ne sont pas des isomères de conformation (ou « rotamères », dont la conversion de l'un en l'autre des isomères de conformation s'accompagne uniquement d'une rotation d'une partie de la molécule selon l'axe d'une liaison σ (sigma) formée par recouvrement axial d'orbitales) ;
- le terme « hétéro- stéréo-isomère » de la diféthialone désigne le stéréo- isomère de configuration de la diféthialone de formule 3-(4'-bromobiphenyl-4- yl)-l-(4-hydroxythiocoumarin-3-yl)-l,2,3,4-tétrahydronaphtalène, dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène dudit hétéro- stéréo- isomère sont de configurations absolues distinctes (c'est-à-dire 1S-3R et 1R-3S), les configurations absolues étant déterminées selon les règles séquentielles de priorité et la nomenclature de Cahn, Ingold et Prelog (CIP) ;
- le terme « homo-stéréo-isomère » de la diféthialone désigne le stéréo- isomère de configuration de la diféthialone de formule 3-(4'-bromobiphenyl-4- yl)-l-(4-hydroxythiocoumarin-3-yl)-l,2,3,4-tétrahydronaphtalène, dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène dudit homo-stéréo- isomère sont de même configuration absolue (c'est-à-dire 1S-3S et 1R-3R) ;
- le terme « quantité » s'entend d'une quantité molaire, d'une quantité massique ou d'une quantité volumique. Les proportions sont donc des proportions d'une quantité molaire rapportée à une quantité molaire, d'une quantité massique rapportée à une quantité massique, ou d'une quantité volumique rapportée à une quantité volumique ;
- le terme « sensiblement » indique, de façon habituelle, qu'une caractéristique structurelle ou fonctionnelle ne doit pas être prise comme marquant une discontinuité abrupte, qui n'aurait pas de sens physique, mais couvre non seulement cette structure ou cette fonction, mais également des variations légères de cette structure ou de cette fonction qui produisent, dans le contexte technique considéré, un effet de même nature, sinon de même degré ;
- les expressions « chromatographie liquide à haute pression » ou « chromatographie liquide à haute performance » (« CLHP ») désignent la chromatographie « HPLC » ou « High Performance Liquid Chromatography », et ; - l'expression « temps de rétention » désigne la durée, mesurée au sommet du pic de chromatogramme, pendant laquelle un composé est retenu sur une colonne de chromatographie.
L'invention concerne l'énantiomère dextrogyre dudit ho mo- stéréo-isomère de la diféthialone. Elle concerne l'énantiomère dextrogyre dudit ho mo- stéréo-isomère de la diféthialone à l'état isolé et en particulier séparé de l'énantiomère lévogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone et des énantiomères lévogyre et dextrogyre d'un stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, dit hétéro- stéréo-isomère, dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène sont de configurations absolues distinctes.
Les inventeurs ont découvert qu'il est possible de séparer les énantiomères lévogyre et dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone et les énantiomères lévogyre et dextrogyre dudit hétéro- stéréo- isomère de la diféthialone par chromatographie liquide à haute pression en mode isocratique et dans des conditions particulières en utilisant une colonne de chromatographie comprenant une phase stationnaire chirale. Il n'était en effet pas connu au jour de l'invention de pouvoir séparer les stéréo-isomères de configuration de la diféthialone et notamment l'énantiomère lévogyre et l'énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone.
Les inventeurs ont réussi à réaliser cette séparation en choisissant une colonne pour chromatographie particulière HPLC LUX® Cellulose-3 (phenomenex, Le Pecq, France) de dimension 150 x 2 mm et comprenant une phase stationnaire chirale constituée de particules poreuses de cellulose tris(4-méthylbenzoate), d'une granulométrie de 3 μπι et d'une porosité de 1000 A. Ils ont utilisé, à titre de phase mobile, un éluant formé d'un mélange d'acétonitrile (A) et d'eau comprenant de l'acide formique en proportion volumique de 0,1% dans l'eau (B) avec un rapport volumique A/B de 80/20. Le débit de la phase mobile dans la colonne est maintenu à une valeur de 0,25 mL/min et la séparation est réalisée à la température 23,2°C. La composition à analyser est à une concentration de 1 μg de diféthialone par millilitre dans l'acétonitrile et le volume injecté sur la colonne est de 1 μL·. La détection peut être effectuée par spectrométrie de masse en tandem (MS/MS). La détection peut aussi être effectuée par photométrie ou par spectrophotométrie en ajustant la concentration en diféthialone et le volume d'injection aux fins d'obtenir une détection optimale et en mesurant la valeur de l'aire sous le pic de chaque stéréo- isomère de configuration.
Dans ces conditions expérimentales, la valeur du temps de rétention (t4) de l'énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère selon l'invention peut varier selon les conditions opératoires -notamment selon les conditions de température de la colonne- et être comprise entre 14,0 min et 14,4 min. La valeur du temps de rétention (ti) de l'énantiomère lévogyre dudit homo- stéréo-isomère peut varier selon les conditions opératoires -notamment selon les conditions de température de la colonne- et être comprise entre 7,8 min et 8,2 min, de sorte que les énantiomères dextrogyre et lévogyre dudit homo-stéréo- isomère peuvent être séparés par chromatographie liquide à haute pression sur une colonne chirale.
Dans ces mêmes conditions expérimentales, la valeur du temps de rétention (t3) de l'énantiomère dextrogyre dudit hétéro- stéréo-isomère de la diféthialone peut varier selon les conditions opératoires -notamment selon les conditions de température de la colonne- et être comprise entre 11,3 min et 11,8 min. La valeur du temps de rétention (t2) de l'énantiomère lévogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone peut varier selon les conditions opératoires -notamment selon les conditions de température de la colonne- et être comprise entre 9,0 min et 9,5 min.
Ainsi, dans ces conditions analytiques, l'ordre d'élution des stéréo-isomères de configuration de la diféthialone est tel que ti < t2 < t3 < t . Les valeurs des temps de rétention tl5 t2, t3 et t4 sont susceptibles de varier, notamment avec la température de la colonne de chromatographie. Cependant, dans ces conditions chromatographiques, l'ordre d'élution des stéréo-isomères de configuration de la diféthialone reste inchangé. L'invention concerne donc l'énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone à l'état isolé et présentant la propriété de pouvoir être élué, dans les conditions de chromatographie décrites ci-dessus, le dernier parmi les quatre stéréo-isomères de configuration de la diféthialone.
L'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone isolé à l'état pur selon l'invention, mis en solution dans du méthanol à une concentration de 0,96 g/L et placé dans une cuve en quartz pour spectrophotomètre, présente un spectre de dichroïsme circulaire réalisé à 25°C de valeurs de dichroïsme circulaire positives entre 220 nm et 300 nm.
L'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone isolé à l'état pur selon l'invention, en solution dans le chloroforme (CHCt3) présente un pouvoir rotatoire spécifique [a]25 C589nm mesuré à 25°C et sur la raie D du sodium (589 nm) d'une valeur de +19,9°.
L'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone isolé à l'état pur selon l'invention présente en spectroscopie par résonnance magnétique (1H-RMN) du proton à 500 MHz dans CDCt3 un multiplet présentant un déplacement chimique (δ) compris entre 4,9 ppm et 5,1 ppm correspondant au proton porté par le carbone 1 du groupement 1,2,3,4- tétrahydronaphtalène dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone.
On distingue ledit hétéro- stéréo-isomère de la diféthialone et ledit homo-stéréo-isomère de la diféthialone par leurs spectres RMN du proton. Sur le spectre RMN du proton réalisé dans CDCt3, le déplacement chimique du proton porté par le carbone 1 du groupement 1,2,3,4- tétrahydronaphtalène dudit hétéro- stéréo-isomère de la diféthialone est de l'ordre de 5,3 ppm.
L'invention concerne aussi une composition comprenant de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone selon l'invention, à l'exclusion d'un mélange racémique d'énantio mères dextrogyre et lévogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone, c'est-à-dire d'un mélange optiquement inactif de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone et de l'énantiomère lévogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone.
L'invention concerne donc aussi une composition comprenant un énantiomère dextrogyre du stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, dit homo- stéréo-isomère, de formule 3-(4'-bromobiphenyl-4-yl)-l- (4-hydroxythiocoumarin-3-yl)-l,2,3,4-tétrahydronaphtalène, dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène dudit homo-stéréo- isomère sont de même configuration absolue, à l'exclusion d'un mélange dans lequel l'énantiomère dextrogyre et l'énantiomère lévogyre dudit homo-stéréo- isomère de la diféthialone sont en même quantité.
Avantageusement et selon l'invention, ledit homo-stéréo- isomère est majoritairement sous forme d' énantiomère dextrogyre.
Dans tout le texte, l'expression « ledit homo- stéréo-isomère est majoritairement sous forme d' énantiomère dextrogyre » signifie que la quantité (massique, molaire ou volumique) d' énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone est majoritaire -supérieure à 50 %- dans la totalité dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone présente dans la composition (sous toutes ses formes énantiomères dextrogyre et lévogyre), c'est- à-dire que la quantité (massique, molaire ou volumique) d' énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone dans la composition est telle que le rapport de cette quantité sur la quantité (totale) dudit homo-stéréo- isomère dans la composition est supérieur à 50%.
En particulier, dans une composition selon l'invention :
- le rapport de la quantité d'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo- isomère de la diféthialone sur la somme des quantités de chacun des énantiomères (dextrogyre et lévogyre) dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone est supérieur à 0,5 (supérieur à 50 %) ;
- le rapport de la concentration d'énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone sur la somme des concentrations de chacun des énantiomères (dextrogyre et lévogyre) dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone est supérieur à 0,5 (supérieur à 50 %), et ; - la proportion d'énantiomère dextrogyre dudit ho mo- stéréo-isomère de la diféthialone dans la composition est supérieure à la proportion de l'énantiomère lévogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone.
Avantageusement et selon l'invention, la composition comprend une quantité de l'énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone dans la composition telle que le rapport de cette quantité sur la quantité totale dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone dans la composition est supérieur à 50%, notamment supérieur à 60%, en particulier supérieur à 70%, plus particulièrement supérieur à 80%, de préférence supérieur à 90%, plus préférentiellement supérieur à 95%, particulièrement préférentiellement supérieur à 98%, encore plus préférentiellement supérieur à 99% ou de l'ordre de 100%. Avantageusement, elle comprend une quantité de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone dans la composition telle que le rapport de cette quantité sur la quantité totale dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone dans la composition est compris entre 85 % et 100 %, plus préférentiellement compris entre 90 % et 98 %. Avantageusement, elle comprend une quantité de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone dans la composition telle que le rapport de cette quantité sur la quantité totale dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone dans la composition est compris entre 98 % et 100 %.
Avantageusement, la composition peut aussi comprendre de l'énantiomère lévogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone, mais avec une proportion dans la composition qui est inférieure à 50 % -notamment inférieure à 25 %, préférentiellement comprise entre 0 % et 25 %, en particulier inférieure à 10 %- par rapport à l'homo-stéréo-isomère de la diféthialone.
Avantageusement et selon l'invention, la diféthialone est majoritairement sous forme de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo- isomère de la diféthialone. La composition comprend une quantité de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone dans la composition telle que le rapport de cette quantité sur la quantité de chacun des énantiomères (dudit hétéro- stéréo-isomère et dudit homo-stéréo-isomère) de la diféthialone est supérieur à 25%.
Avantageusement, dans une composition selon l'invention :
- le rapport de la quantité de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo- isomère de la diféthialone sur la somme des quantités de chacun des énantiomères dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone et de chacun des énantiomères dudit hétéro- stéréo-isomère de la diféthialone est supérieure à 0,25 (supérieur à 25 %) ;
- le rapport de la concentration de l'énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone rapportée à la somme des concentrations de chacun des énantiomères dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone et de chacun des énantiomères dudit hétéro- stéréo-isomère de la diféthialone est supérieure à 0,25 (supérieur à 25 %), et ;
- la proportion d'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone dans la composition est supérieure à la proportion de chacun des énantiomères dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone et dudit hétéro- stéréo- isomère de la diféthialone. Dans une composition selon l'invention, la proportion d'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone est de plus de 25 % par rapport à la diféthialone (totale).
Avantageusement et selon l'invention, la composition comprend une quantité de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone dans la composition telle que le rapport de cette quantité sur la quantité de la diféthialone totale dans la composition est supérieur à 25% -notamment supérieur à 50%, en particulier supérieur à 70%, plus particulièrement supérieur à 80%, de préférence supérieur à 90%, particulièrement préférentiellement supérieur à 95%, plus préférentiellement supérieur à 98%, encore plus préférentiellement supérieur à 99% ou de l'ordre de 100%-. Une composition selon l'invention, comprend donc de la diféthialone majoritairement sous forme d'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo- isomère de la diféthialone.
Avantageusement, la composition comprend une quantité de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone telle que le rapport de cette quantité sur la quantité de la diféthialone totale est supérieur à 70 %, de préférence compris entre 80 % et 100 , plus préférentiellement compris entre 90 % et 100 . Avantageusement, la composition comprend une quantité de l'énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone telle que le rapport de cette quantité sur la quantité de la diféthialone totale est compris entre 95 % et 99 %. Avantageusement, elle comprend une quantité de l'énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone telle que le rapport de cette quantité sur la quantité de la diféthialone totale est compris entre 98% et 100 %. Avantageusement, la composition comprend une quantité de l'énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone telle que le rapport de cette quantité sur la quantité de la diféthialone totale est sensiblement de l'ordre de 100 %.
Avantageusement et selon l'invention, la composition comprend une quantité de l'énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone dans la composition telle que le rapport de cette quantité sur la quantité de la diféthialone totale dans la composition est supérieur à 97%.
Une composition selon l'invention peut être sensiblement exempte d'énantiomère lévogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone, c'est à dire que l'énantiomère lévogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone peut être présent dans la composition mais uniquement à l'état de traces. Elle peut aussi être sensiblement exempte dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone c'est à dire que ledit hétéro- stéréo-isomère de la diféthialone peut être présent dans la composition mais uniquement à l'état de traces.
Avantageusement et selon l'invention, la composition est à l'état liquide et comprend un solvant liquide de la diféthialone. Il peut s'agir d'une solution de diféthialone dans un solvant de la diféthialone, à l'exclusion d'un mélange racémique desdits énantiomères lévogyre et dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone. Il peut aussi s'agir d'une solution comprenant de la diféthialone dans un solvant de la diféthialone et dans laquelle ledit homo- stéréo-isomère de la diféthialone est majoritairement sous forme d'énantiomère dextrogyre. Il peut aussi s'agir d'une solution comprenant de la diféthialone dans un solvant de la diféthialone et dans laquelle la diféthialone est majoritairement sous forme d'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo- isomère de la diféthialone.
Avantageusement et selon l'invention, la composition est à l'état solide. Il peut aussi s'agir d'un solide comprenant de la diféthialone, à l'exclusion d'un mélange racémique des énantiomères dextrogyre et lévogyre dudit ho mo- stéréo-isomère de la diféthialone. Il peut aussi s'agir d'un solide comprenant de la diféthialone et dans lequel ledit ho mo- stéréo-isomère de la diféthialone est majoritairement sous forme d'énantiomère dextrogyre. Il peut aussi s'agir d'un solide comprenant de la diféthialone et dans lequel la diféthialone est majoritairement sous forme d'énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone.
L'invention concerne donc aussi une composition comprenant de l'énantiomère dextrogyre selon l'invention, à l'exclusion d'un mélange racémique des énantiomères lévogyre et dextrogyre dudit homo- stéréo- isomère de la diféthialone, la diféthialone de la composition étant optiquement active et dextrogyre. Il n'est cependant pas exclu que la composition selon l'invention, comprenant de l'énantiomère dextrogyre selon l'invention à l'exclusion d'un mélange racémique des énantiomères lévogyre et dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone, soit elle-même optiquement active et lévogyre, ou encore optiquement inactive.
L'invention concerne aussi l'utilisation d'une composition selon l'invention pour la préparation d'un appât rodonticide pour des rongeurs cibles nuisibles.
L'invention concerne aussi un appât rodonticide comprenant une composition selon l'invention, et au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles.
Un appât rodonticide selon l'invention comprend :
- au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles, - de l'énantiomère dextrogyre d'un stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, dit homo-stéréo-isomère, de formule 3-(4'-bromobiphenyl-4-yl)- l-(4-hydroxythiocoumarin-3-yl)-l,2,3,4-tétrahydronaphtalène, dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène dudit homo-stéréo- isomère sont de même configuration absolue, à l'exclusion d'un mélange racémique d'énantiomères dextrogyre et lévogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone. Dans un appât selon l'invention, l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone et l'énantiomère lévogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone sont en quantités distinctes.
Avantageusement, un appât selon l'invention comprend un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles et dudit homo-stéréo- isomère de la diféthialone majoritairement sous forme d'énantiomère dextrogyre.
Les inventeurs qui sont parvenus à séparer l'énantiomère dextrogyre de l'énantiomère lévogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone et dudit hétéro- stéréo-isomère de la diféthialone et à isoler l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone, ont aussi observé de façon totalement surprenante que l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone et l'énantiomère lévogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone ne présentent pas la même rémanence dans le foie de rongeurs cibles nuisibles et que l'énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone est en fait l'énantiomère dudit homo-stéréo- isomère de la diféthialone qui est le moins rémanent dans le foie de rongeurs cibles, notamment de rongeurs cibles nuisibles.
Ils ont observé que l'énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone qui est moins rémanent et disparait du foie du rongeur cible nuisible ayant consommé un appât selon l'invention plus rapidement que ne disparait l'énantiomère lévogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone, est cependant rodonticide.
L'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone résiduel dans l'organisme d'un rongeur empoisonné disparait plus rapidement que l'autre énantiomère (lévogyre) dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone. Le rongeur cible nuisible mort ou vif ayant ingéré l'énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone est donc peu toxique vis-à-vis de mammifères non-rongeurs et d'oiseaux consommant le rongeur cible nuisible -mort ou vif- et en particulier vis-à-vis de prédateurs (notamment de mammifères non-rongeurs et d'oiseaux) qui consomment préférentiellement les viscères de leurs proies et en particulier leur foie.
Les inventeurs ont aussi observé que l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone, bien que présentant une faible rémanence hépatique chez des rongeurs cibles nuisibles, permet en fait, et de façon totalement surprenante à ce jour, de lutter efficacement contre des rongeurs cibles nuisibles.
Avantageusement et selon l'invention, l'appât rodonticide comprend une quantité massique de diféthialone telle que le rapport (proportion massique) de cette quantité massique de diféthialone sur la quantité massique d'appât rodonticide est inférieur à 200 ppm -c'est-à-dire inférieur à 200 mg de diféthialone par kilogramme d'appât-. Avantageusement, la proportion massique de la diféthialone dans l'appât rodonticide est comprise entre 1 ppm et 100 ppm (1 mg à 100 mg de diféthialone par kilogramme d'appât rodonticide), notamment comprise entre 5 ppm et 100 ppm (5 mg à 100 mg de diféthialone par kilogramme d'appât rodonticide), de préférence comprise entre 5 ppm et 50 ppm (5 mg à 50 mg de diféthialone par kilogramme d'appât rodonticide), plus préférentiellement comprise entre 10 ppm et 50 ppm (10 mg à 50 mg de diféthialone par kilogramme d'appât rodonticide), encore plus préférentiellement comprise entre 15 ppm et 50 ppm (15 mg à 50 mg de diféthialone par kilogramme d'appât rodonticide), par exemple de l'ordre de 15 ppm (15 mg de diféthialone par kilogramme d'appât).
Avantageusement et selon l'invention, l'excipient comestible comprend au moins un aliment choisi dans le groupe formé des graines de céréale -notamment des graines de céréale décortiquées-, des moutures de graines de céréale, des farines de graines de céréale, des flocons de graines de céréale, du son de céréales et des graines non céréalières, par exemple des graines de luzerne -notamment sous forme décortiquée, sous forme de mouture, sous forme de farine, sous forme de flocons ou de son-. L'excipient comestible peut comprendre tout support susceptible d'être consommé par des rongeurs cibles nuisibles.
Avantageusement, l'excipient comestible comprend au moins un aliment choisi dans le groupe formé des aliments d'origine végétale et des aliments d'origine animale. Avantageusement, l'excipient comestible comprend au moins un aliment choisi pour stimuler l'appétit des rongeurs cibles nuisibles. En particulier, cet aliment est choisi dans le groupe formé de graines d'une ou de plusieurs céréales, de graines décortiquées d'une ou de plusieurs céréales, des moutures de graines d'une ou de plusieurs céréales, des flocons de graines d'une ou de plusieurs céréales, du son d'une ou de plusieurs céréales et des farines de graines d'une ou de plusieurs céréales. À titre d'exemple, on choisit les céréales dans le groupe formé de l'avoine, du blé, de l'orge, du maïs, du soja et du riz.
Avantageusement, l'aliment est choisi dans le groupe formé des aliments sucrés. Par exemple, il peut s'agir d'aliments comprenant au moins un sucre choisi dans le groupe formé du saccharose, du lactose, du fructose et du glucose. Il peut s'agir d'un sirop de sucre -par exemple, d'un sirop de sucre obtenu par hydrolyse de l'amidon- ou d'un sirop de sucre obtenu par hydrolyse de saccharose (sirop de sucre inverti), ou d'un sirop de sucre de betterave, ou d'un sirop d'érable ou d'un sirop de canne à sucre, ou d'un sirop obtenu à partir d'une plante du genre stevia.
Avantageusement, l'aliment est choisi dans le groupe formé des flocons et de la farine de l'albumen de noix de coco (coprah). Avantageusement, l'aliment est choisi dans le groupe formé des noix, des noisettes et des amandes -râpées et/ou en poudre-.
Avantageusement, l'aliment est choisi dans le groupe formé des graisses végétales, des huiles végétales (par exemple huile de colza, graisse de soja, huile de tournesol, beurre de cacao, huile d'arachides, beurre d'arachides, huile de maïs, huile de palme), des graisses animales et des huiles animales (beurre, saindoux, huile de poisson).
Avantageusement, l'aliment est choisi dans le groupe formé des protéines d'origine végétale et des protéines d'origine animale. À titre d'exemple, on peut citer par exemple le lait en poudre -notamment le lait écrémé en poudre-, les œufs -notamment les œufs en poudre-, les hydrolysats de protéines d'origine animale et les hydrolysats de protéines d'origine végétale.
L'excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles est choisi pour permettre une consommation de l'appât par des rongeurs cibles nuisibles. Avantageusement et selon l'invention, chaque excipient comestible est non létal pour des rongeurs cibles nuisibles. L'excipient comestible n'est pas rodonticide en lui-même.
Avantageusement et selon l'invention, l'appât rodonticide est choisi dans le groupe formé des appâts solides comprenant de la diféthialone et un excipient comestible solide. Avantageusement, l'appât rodonticide est un solide à l'état divisé, par exemple sous forme de boulettes ou de granulés.
Avantageusement, l'appât rodonticide peut être un solide sous forme de bloc ou de pâte susceptibles d'être consommés par les rongeurs cibles nuisibles ou d'un matériau solide susceptible d'être rongé par les rongeurs cibles nuisibles. Avantageusement, l'appât rodonticide solide selon l'invention peut se présenter sous forme d'un bloc rigide, d'un bloc semi-rigide, d'une mousse, d'une poudre ou d'un gel.
Avantageusement, l'appât rodonticide se présentant sous forme d'une poudre, sous forme d'une mousse ou sous forme d'un gel est adapté pour pouvoir souiller la fourrure du(de) rongeur(s) cible(s) nuisible(s) et pour pouvoir être ingérée par celui(ceux)-ci lors de son(leur) toilettage.
Il peut s'agir d'un appât rodonticide solide comprenant de la diféthialone, à l'exclusion d'un mélange racémique d'énantiomères dextrogyre et lévogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone. Il peut aussi s'agir d'un appât rodonticide solide comprenant de la diféthialone et dans lequel ledit homo- stéréo-isomère de la diféthialone est majoritairement sous forme d'énantiomère dextrogyre. Il peut aussi s'agir d'un appât rodonticide solide comprenant de la diféthialone dans lequel la diféthialone est majoritairement sous forme d'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone.
Avantageusement et selon l'invention, l'appât rodonticide est choisi dans le groupe formé des appâts liquides comprenant de la diféthialone et un excipient comestible liquide. L'appât rodonticide est alors une boisson pour des rongeurs cibles nuisibles.
Avantageusement et selon l'invention, l'appât rodonticide est choisi dans le groupe formé des appâts liquides comprenant de la diféthialone et un excipient comestible liquide. L'appât rodonticide est alors une boisson pour des rongeurs cibles nuisibles. Il peut s'agir d'une solution de diféthialone dans un solvant de la diféthialone, à l'exclusion d'un mélange racémique d'énantio mères dextrogyre et lévogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone. Il peut aussi s'agir d'une solution de diféthialone dans un solvant de la diféthialone et dans laquelle ledit homo-stéréo-isomère de la diféthialone est majoritairement sous forme d'énantiomère dextrogyre. Il peut aussi s'agir d'une solution de diféthialone dans un solvant de la diféthialone et dans laquelle la diféthialone est majoritairement sous forme d'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo- isomère de la diféthialone. Il peut aussi s'agir d'une suspension ou d'une émulsion de diféthialone dans un milieu liquide.
L'invention concerne donc aussi un appât rodonticide dans lequel la diféthialone est optiquement active. Il n'est cependant pas exclu que la diféthialone de l'appât rodonticide selon l'invention soit optiquement inactive.
Avantageusement, l'appât rodonticide comprend au moins un colorant. Un tel colorant permet en particulier de donner audit appât rodonticide une couleur aisément détectable et identifiable par une personne manipulant l'appât rodonticide.
Avantageusement, l'appât rodonticide comprend au moins un conservateur apte à assurer sa conservation lors de son stockage. Avantageusement, l'appât rodonticide comprend au moins un composé amérisant de type benzoate de dénatonium, aussi connu sous le nom de « Bitrex® » destiné à réduire les risques de consommation accidentelle par des organismes non cibles.
Avantageusement, dans une variante particulière, la composition et l'appât rodonticide selon l'invention comprennent exclusivement de la diféthialone -dans laquelle l'homo- stéréo-isomère n'est pas un mélange racémique- à titre de substance rodonticide. En particulier, la composition et l'appât rodonticide selon l'invention sont exempts de toute autre substance anticoagulante à usage rodonticide. Cependant, dans cette variante selon l'invention, la composition et l'appât rodonticide peuvent comprendre toute substance anti-nuisible autre qu'un rodonticide, telle qu'une substance insecticide et/ou acaricide.
Avantageusement, dans une autre variante particulière, la composition et l'appât rodonticide selon l'invention comprennent de la diféthialone à l'exclusion d'un mélange racémique d'énantiomères lévogyre et dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère et au moins une autre substance distincte de la diféthialone à titre de substance rodonticide. Cette autre substance rodonticide distincte de la diféthialone peut être une autre substance anticoagulante -notamment du type anti-vitamine K ou non- ou une autre substance rodonticide non anticoagulante.
L'invention concerne aussi un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles dans lequel on dissémine une quantité d'appât rodonticide comprenant :
- au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles, et ;
- de l'énantiomère dextrogyre du stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, dit homo-stéréo-isomère, de formule 3-(4'-bromobiphenyl-4-yl)-l- (4-hydroxythiocoumarin-3-yl)-l,2,3,4-tétrahydronaphtalène, dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène dudit homo-stéréo- isomère sont de même configuration absolue ;
à l'exclusion d'un mélange racémique d'énantiomères dextrogyre et lévogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone. L'invention concerne aussi un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles dans lequel on dissémine une quantité d'appât rodonticide selon l'invention, ladite quantité d'appât étant suffisante pour être rodonticide.
On dissémine donc une quantité d'appât rodonticide comprenant dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone majoritairement sous forme d'énantiomère dextrogyre, présentant une rémanence hépatique diminuée chez le rongeur cible nuisible et, de façon surprenante, une efficacité rodonticide au moins maintenue. Le procédé selon l'invention permet donc de limiter l'empoisonnement secondaire de mammifères non-rongeurs et d'oiseaux susceptibles de s'alimenter avec des rongeurs empoisonnés morts ou vifs mais comprenant une quantité réduite -et notamment une quantité non létale- de diféthialone. Le procédé selon l'invention permet aussi de limiter un tel empoisonnement secondaire de mammifères non-rongeurs et d'oiseaux susceptibles de consommer préférentiellement les viscères -en particulier le foie- desdits rongeurs empoisonnés morts ou vifs.
Avantageusement et selon l'invention, ledit homo-stéréo- isomère de la diféthialone est majoritairement sous forme d'énantiomère dextrogyre. Avantageusement et selon l'invention la diféthialone est majoritairement sous forme d'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo- isomère de la diféthialone.
Avantageusement et en variante selon l'invention, on choisit en combinaison :
- l'excipient comestible ;
- une proportion d'énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone par rapport à Γ homo- stéréo-isomère de la diféthialone ;
- une proportion d'énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone par rapport à la diféthialone ;
- une proportion massique de diféthialone par rapport à l'appât rodonticide, et ;
- une quantité d'appât disséminé ; de façon que des rongeurs cibles nuisibles consomment une quantité de diféthialone suffisante pour être létale pour lesdits rongeurs cibles nuisibles consommant dudit appât au cours d'une période unique de 24 heures consécutives.
Un appât rodonticide selon cette variante de l'invention est un appât mortel en une seule prise ou « one-shot » en anglais. Avantageusement et selon cette variante de l'invention, la proportion massique de diféthialone dans l'appât rodonticide est comprise entre 2 ppm et 200 ppm, notamment comprise entre 5 ppm et 100 ppm, de préférence comprise entre 10 ppm et 50 ppm, plus préférentiellement comprise entre 15 ppm et 50 ppm.
Avantageusement et dans une autre variante selon l'invention, on choisit en combinaison :
- l'excipient comestible ;
- une proportion d'énantiomère dextrogyre dudit ho mo- stéréo-isomère de la diféthialone par rapport à Γ ho mo- stéréo-isomère de la diféthialone ;
- une proportion massique de diféthialone par rapport à l'appât rodonticide, et ;
- une quantité d'appât disséminé ;
de façon que des rongeurs cibles nuisibles consomment une quantité de diféthialone ;
o non létale pour des rongeurs cibles nuisibles, c'est-à-dire généralement non létale pour les rongeurs cibles nuisibles, consommant dudit appât pendant une période de 24 heures consécutives, et ;
o suffisante pour être létale pour des rongeurs cibles nuisibles consommant dudit appât pendant plusieurs périodes de 24 heures.
Avantageusement, les périodes de 24 heures sont consécutives.
Cette autre variante de l'invention vise donc aussi un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles dans lequel on dissémine une quantité d'appât rodonticide létale pour les rongeurs cibles nuisibles consommant durablement cet appât rodonticide et non létale pour des rongeurs ou des animaux non cibles consommant accidentellement cet appât rodonticide. On parle alors d'un procédé de lutte « multi-doses » ou, en anglais, « multi- feeding ». Dans un tel procédé selon l'invention, la consommation d'appât rodonticide par un rongeur cible nuisible pendant une durée de 24 heures est généralement insuffisante pour entraîner la mort dudit rongeur, alors qu'une consommation répétée d'appât rodonticide pendant au moins deux jours permet d'entraîner la mort du rongeur cible nuisible.
L'invention vise donc un procédé de lutte contre une population de rongeurs cibles nuisibles dans lequel on met à disposition des rongeurs cibles nuisibles une quantité d'appât rodonticide susceptible d'être ingérée par les rongeurs cibles nuisibles, ladite quantité d'appât rodonticide étant suffisante pour tuer des rongeurs cibles nuisibles consommant ledit appât rodonticide pendant plusieurs jours.
Avantageusement, dans cette autre variante de l'invention, on dissémine une quantité d'appât rodonticide de façon que des rongeurs cibles nuisibles consomment une quantité de diféthialone suffisante pour être létale pour lesdits rongeurs cibles nuisibles consommant dudit appât pendant plusieurs périodes de 24 heures, lesdites périodes étant consécutives.
Avantageusement et dans cette autre variante selon l'invention la proportion massique de diféthialone est comprise entre 5 ppm et 50 ppm, notamment comprise entre 5 ppm et 30 ppm -notamment de l'ordre de 15 ppm- par rapport à l'appât rodonticide.
Avantageusement, on adapte la quantité d'appât rodonticide disséminé, la proportion massique de diféthialone par rapport à l'appât rodonticide et la proportion d'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo- isomère de la diféthialone par rapport à la diféthialone pour que la consommation de l'appât rodonticide soit létale pour des rongeurs cibles nuisibles consommant quotidiennement de l'appât pendant au moins 2 périodes de 24 heures -notamment de 3 à 7 périodes-, au moins deux -notamment toutes les- périodes étant consécutives. Avantageusement, dans cette autre variante d'un procédé selon l'invention, la proportion d'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo- isomère de la diféthialone étant supérieure à 95% -notamment de l'ordre de 100%- par rapport à la diféthialone, la proportion massique de diféthialone par rapport à l'appât rodonticide est comprise entre 5 ppm et 50 ppm -notamment de l'ordre de 15 ppm-.
Dans un procédé selon l'invention, on met à disposition des rongeurs cibles nuisibles une quantité d'appât rodonticide suffisante pour satisfaire quotidiennement l'appétit des rongeurs cibles nuisibles, ledit appât rodonticide comprenant une proportion majoritaire d'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone.
Dans un procédé selon l'invention, on adapte la quantité d'appât rodonticide disséminé, la proportion de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone par rapport à la diféthialone et la proportion massique de diféthialone par rapport à l'appât rodonticide de façon à permettre une consommation d'appât rodonticide pendant plusieurs jours par des rongeurs cibles nuisibles, tout en limitant :
- les risques d'intoxication primaire de mammifères et oiseaux non cibles susceptibles de ne consommer qu'occasionnellement et accidentellement un tel appât rodonticide ;
- les risques d'intoxication secondaire, par exemple des prédateurs des rongeurs cibles, susceptibles de consommer des rongeurs -morts ou vifs- cibles ayant ingéré une quantité dudit appât.
Avantageusement et selon l'invention, on adapte la quantité d'appât disséminé, la proportion massique de diféthialone par rapport à l'appât et la proportion d'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone pour limiter la quantité de diféthialone (totale) dans le foie des rongeurs morts par consommation dudit appât.
L'invention concerne aussi un procédé chromatographique d'obtention d'un énantiomère dextrogyre d'un stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, dit homo-stéréo-isomère, de formule 3-(4'-bromobiphenyl-4- yl)-l-(4-hydroxythio coumarin-3-yl)-l,2,3,4-tétrahydronaphtalène, dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène dudit homo- stéréo-isomère sont de même configuration absolue, procédé dans lequel :
- on choisit une colonne pour chromatographie liquide à haute pression de dimensions 150 x 2 mm, et comprenant une phase stationnaire chirale constituée de particules de cellulose tris(4-méthylbenzoate), lesdites particules étant d'une taille moyenne de 3 μπι et présentant une taille moyenne de pores de 1000 À ;
- on choisit, à titre de phase mobile liquide, un mélange formé d'acétonitrile (A) et d'eau comprenant 0,1% en volume d'acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 80/20 et avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 mL/min ;
- on réalise une séparation des stéréo-isomères de configuration de la diféthialone à température ambiante lors de laquelle ;
- on introduit en tête de la colonne pour chromatographie une composition liquide comprenant dudit énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone, puis ;
- on entraîne la composition liquide avec la phase mobile dans la colonne pour chromatographie dans des conditions propres à séparer les stéréo-isomères de configuration de la diféthialone, et ;
- on collecte une fraction de la phase mobile comprenant ledit énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone avec un temps de rétention t4 de valeur telle que ti < t2 < t3 < t ; tl5 12 et t3 représentant les temps de rétention de chacun des stéréo-isomères de configuration de la diféthialone distincts de l'énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone, séparément d'un énantiomère lévogyre dudit homo-stéréo- isomère de la diféthialone de temps de rétention ^ et séparément des énantiomères lévogyre et dextrogyre d'un stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, dit hétéro- stéréo-isomère, dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène dudit hétéro- stéréo-isomère sont de configurations absolues distinctes, et de temps de rétention t2 et t3, puis ; - on élimine la phase mobile liquide de ladite fraction de façon à obtenir ledit énantiomère dextrogyre dudit ho mo- stéréo-isomère de la diféthialone.
L'invention concerne aussi ledit énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone obtenu par un procédé selon l'invention.
L'invention concerne également un stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, un procédé d'obtention d'un tel stéréo-isomère de configuration, une composition comprenant un tel stéréo-isomère de configuration, un appât rodonticide et un procédé de lutte contre les rongeurs cibles nuisibles caractérisés en combinaison par tout ou partie des caractéristiques mentionnées ci-dessus ou ci-après.
D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront à la lecture de la description suivante et des exemples donnés à titre uniquement non limitatif et qui se réfèrent aux figures annexées, dans lesquelles :
- la figure 1 est un chromatogramme d'analyse par chromatographie liquide à haute pression sur une colonne chirale de la diféthialone (haut) et de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone purifié (bas) ;
- la figure 2 est un spectre de RMN du proton à 300 MHz dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone ;
- la figure 3 est un spectre de RMN du proton à 300 MHz dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone ;
- la figure 4 est un spectre de RMN du proton à 500 MHz de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone selon l'invention ;
- la figure 5 est un spectre de RMN du carbone 13C à 500 MHz de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone ;
- la figure 6 est une analyse par spectroscopie de corrélation en RMN du proton (1H-RMN) à 500 MHz de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo- isomère de la diféthialone ; - la figure 7 est un spectre de dichroïsme circulaire de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone ;
- la figure 8 est une représentation graphique de l'évolution temporelle de la concentration hépatique chez des rats (mâles et femelles) de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone (·) et de l'énantiomère lévogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone (O) ;
- la figure 9 est une représentation graphique de l'évolution temporelle de la concentration hépatique chez des rats (mâles et femelles) de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone (·), dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone (□) et dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone (■), et ;
- la figure 10 est une représentation graphique de l'évolution temporelle de la concentration hépatique moyenne chez des rats de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone (·) et de la diféthialone totale (Δ).
A. Purification de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone isolé
A.l. Identification dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone et dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone
On identifie Γ homo-stéréo-isomère de la diféthialone par spectroscopie par résonnance magnétique (1H-RMN) du proton. L'homo-stéréo- isomère de la diféthialone en solution dans CDCt3 présente un multiplet à un déplacement chimique (δ) compris entre 4,9 ppm et 5,1 ppm et correspondant au proton porté par le carbone 1 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène de la diféthialone comme illustré en figure 2.
Il est possible de distinguer l'hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone et Γ homo-stéréo-isomère de la diféthialone par leurs spectres RMN du proton. Sur le spectre RMN du proton réalisé dans CDCt3, le déplacement chimique du proton porté par le carbone 1 du groupement 1,2,3,4- tétrahydronaphtalène dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone (figure 3) est compris entre 5,2 ppm et 5,4 ppm. A.2. Séparation des énantiomères lévogyre et dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone par chromato graphie liquide à haute pression sur une colonne chirale
Les inventeurs ont résolu le problème complexe et non résolu à ce jour de la séparation des stéréo-isomères de configuration de la diféthialone et en particulier des énantiomères lévogyre et dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone. Ils sont parvenus à réaliser une séparation des énantiomères dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone par chromatographie liquide à haute pression (haute performance) sur une colonne LUX® Cellulose-3 (Phenomenex, Le Pecq, France) de dimension 150 x 2 mm et comprenant une phase stationnaire chirale constituée de particules poreuses de cellulose tris(4-méthylbenzoate), d'une granulométrie de 3 μπι et d'une porosité de 1000 A et en utilisant, à titre de phase mobile, un mélange formé de d'acétonitrile (A) et d'eau comprenant de l'acide formique en proportion volumique de 0,1% (B), la proportion volumique A/B étant de 80/20. Le débit de la phase mobile dans la colonne est de 0,25 mL/min et la séparation est réalisée à la température de 23,2°C. La solution contenant l'échantillon à analyser est à une concentration de 1 μg de diféthialone par millilitre dans l'acétonitrile et est filtrée sur une membrane de cellulose régénérée de seuil de coupure de 0,2 μιη. Le volume de solution contenant l'échantillon à analyser injecté sur la colonne est de 1 μL·.
Dans un procédé de séparation des énantiomères dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone, il est possible de détecter lesdits énantiomères en sortie de colonne de chromatographie liquide à haute pression par spectrométrie de masse en tandem (MS/MS) en mode d'ionisation négative par électronébulisation (ESI, « ElectroSpray Ionization »). La température du gaz nébuliseur est de 350°C et son débit est de 8 L/min. La pression du gaz nébuliseur est portée à 2700 hPa. En particulier, on détecte les transitions MRM {« Multiple Reaction Monitoring » m/z 537,1 → 151,0 et m/z 537,1 → 78,9 correspondants aux signaux de la diféthialone. La figure 1 représente les chromatogrammes de la diféthialone (haut) et de l'énantiomère dextrogyre de Γ ho mo- stéréo-isomère de la diféthialone (bas) isolé.
Dans ces conditions expérimentales, la valeur du temps de rétention (t4) dudit énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère selon l'invention est de l'ordre de 14,4 min comme décrit figure 1. À titre de comparaison, la valeur du temps de rétention ¾) de l'énantiomère lévogyre dudit homo- stéréo-isomère est de l'ordre de 8,1 min comme décrit figure 1, de sorte que les énantio mères dextrogyre et lévogyre dudit homo- stéréo-isomère peuvent être efficacement séparés par chromatographie liquide à haute pression sur une colonne chirale.
La valeur du temps de rétention (t3) de l'énantiomère dextrogyre dudit hétéro- stéréo-isomère de la diféthialone est de l'ordre de 11,7 min et la valeur du temps de rétention (t2) de l'énantiomère lévogyre dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone est de l'ordre de 9,4 min. Ainsi, dans ces conditions expérimentales, l'ordre d'élution des stéréo-isomères de configuration de la diféthialone est tel que < t2 < t3 < t4.
Il est possible de réaliser dans ces conditions expérimentales (phase stationnaire, phase mobile, température) une séparation préparative des énantiomères lévogyre et dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone en utilisant une phase stationnaire similaire et de granulométrie supérieure à 3 μπι, et une colonne chromatographique de plus grandes dimensions, notamment d'un diamètre de 20 mm.
B. Caractérisation structurelle de l'énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone
B.l. Spectroscopie UV
Le spectre UV de l'énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone en solution dans le chloroforme (CHCt3) présente des pics d'absorbance centrés à 238,2 nm et 259,5 nm.
B.2. Pouvoir rotatoire
Les inventeurs ont caractérisé l'énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone à l'état isolé par son pouvoir rotatoire (aussi appelé activité optique ou biréfringence circulaire), c'est-à-dire par sa propriété à dévier le plan de polarisation d'une lumière polarisée. Une déviation du plan de polarisation de la lumière polarisée dans le sens horaire de rotation en faisant face au faisceau de lumière polarisée caractérise une solution dextrogyre, et une déviation du plan de polarisation de la lumière polarisée dans le sens antihoraire de rotation en faisant face au faisceau de lumière polarisée caractérise une solution et un composé lévogyre.
On mesure le pouvoir rotatoire d'une solution d'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone dans le chloroforme (CHCt3) à une concentration de 11,6 g/L. On mesure le pouvoir rotatoire de cette solution au moyen d'un polarimètre digital P 2000 (JASCO, Bouguenais, France) opérant avec une lumière excitatrice de longueur d'onde de 589 nm. Le pouvoir rotatoire a moyen obtenu sur deux séries de 10 mesures est de 2,308°. Le pouvoir rotatoire spécifique à 25°C [a]25 C589nm de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone en solution dans le chloroforme, mesuré sur la raie D du sodium (589 nm) est de +19,9°.
B.3. Dichroïsme circulaire
Le spectre de dichroïsme circulaire de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone isolé traduit la différence d'absorbance (AA=AG-AD) des deux ondes de polarisation circulaire gauche (PCG) d'intensité AG et de polarisation circulaire droite (PCD) d'intensité AD. Il permet de distinguer les énantiomères dextrogyre et lévogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone. On mesure cette différence d'absorbance des deux ondes de polarisation circulaire dans un spectromètre de dichroïsme circulaire J-815 (JASCO, Bouguenais, France). On prépare 2 mL de solution d'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone dans du méthanol (CH3-OH) à une concentration de 0,96 mg/mL. On transfère la solution dans une cuvette en quartz pour spectrophoto mètre. On mesure à 25 °C le spectre de dichroïsme circulaire de la solution entre 210 nm et 400 nm. Le spectre de dichroïsme circulaire de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone mesuré dans ces conditions est représenté en figure 7. La valeur de dichroïsme circulaire est positive entre les longueurs d'onde comprises entre 220 nm et 300 nm.
B.4. Résonnance Magnétique Nucléaire
Les figures 2 et 3 représentent respectivement un spectre de résonnance magnétique nucléaire du proton (1H-RMN) à 300 MHz de l'homo- stéréo-isomère de la diféthialone dans CDCC3 (figure 2) et un spectre de résonnance magnétique nucléaire du proton à 300 MHz dans CDCC3 de l'hétéro- stéréo-isomère de la diféthialone dans CDCC3 (figure 3). Ledit homo-stéréo- isomère de la diféthialone présente (figure 2) un multiplet dont le déplacement chimique (δ) est compris entre 4,9 ppm et 5,1 ppm correspondant au carbone 1 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone. Ledit hétéro- stéréo-isomère de la diféthialone présente (figure 3) un multiplet dont le déplacement chimique (δ) est compris entre 5,2 ppm et 5,4 ppm.
La figure 4 représente un spectre de RMN du proton à 500 MHz de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone dans CDCC3. Les spectres RMN du proton des énantiomères dextrogyre et lévogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone ne sont pas distinguables l'un de l'autre.
La figure 6 est un spectre (1H-RMN 2D) RMN du proton en deux dimensions obtenu par spectroscopie de corrélation de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone en solution dans CDCt3 à une concentration de 40 mg/mL réalisé sur un spectromètre Brucker AVANCE III HD (500 MHz) équipé d'une cryosonde directe multi-noyaux motorisée PRODIGY. Il permet une identification du couplage du proton porté par le carbone 1 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène dudit homo-stéréo- isomère de la diféthialone (5,1 ppm) avec les protons portés par le carbone 2 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène à 2,4 ppm.
La figure 5 est un spectre RMN du 13C de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone en solution dans CDCt3 à une concentration de 40 mg/mL réalisé sur un spectromètre Brucker AVANCE III HD (500 MHz) équipé d'une cryosonde directe multi-noyaux motorisée PRODIGY. Il permet une identification des 31 atomes de carbone de la diféthialone. Le spectre en 13C-RMN de l'énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone ne se distingue pas du spectre en 13C-RMN de l'énantiomère lévogyre dudit ho mo- stéréo-isomère de la diféthialone. Cependant, ledit homo- stéréo-isomère de la diféthialone présente un signal compris entre 34 ppm et 38 ppm caractéristique et distinctif dudit hétéro- stéréo-isomère de la diféthialone.
C. Extraction de la diféthialone de foies de rats traités à la diféthialone en vue de l'analyse des stéréo-isomères de configuration de la diféthialone
Cl. Homogénéisation de l'échantillon de foie
On pèse avec précision de l'ordre de 0,525 g (±0,025 g) de foie de rat que l'on place dans un tube en polypropylène de 50 mL. On ajoute 10 mL d'acétone et on soumet la suspension à une homogénéisation au moyen d'un homogénéisateur/disperseur Ultra- Turrax® pendant une durée de l'ordre de 30 sec. On rince la tige de l'homogénéisateur/disperseur à l'eau chaude puis 2 fois avec 20 mL d'acétone dans un tube en polypropylène. On centrifuge l'homogénat pendant 5 min à une vitesse de centrifugation de 3000 rpm (rotation par minute). On collecte et on transvase le surnageant dans un tube à essai. On soumet l'échantillon à une évaporation sous un flux d'azote (N2) à la température de 40° C de façon à former un extrait sec.
C.2. Élimination des lipides
Dans le tube contenant l'extrait sec, on ajoute 1 mL d'acétonitrile de façon à solubiliser l'extrait sec. On lave la solution d'acétonitrile 2 fois successivement avec 1 mL d'hexane. L'extrait débarrassé des lipides est séché sous un flux d'azote (N2) à la température de 40°C, puis repris avec 0,5 mL de méthanol et solubilisé par agitation sous vortex. On ajoute ensuite 0,5 mL d'eau ultra-pure (Milli-Q). L'échantillon est homogénéisé sous vortex. C.3. Extraction de la diféthialone sur phase solide (« SPE, Solid Phase Extraction »)
On fait passer 1 mL de dichlorométhane (CH2C 2), puis 1 mL de méthanol (CH3OH), puis 1 mL d'eau ultra-pure (Milli-Q) sur une cartouche Oasis HLB lcc (WAT094225, Waters). On dépose ensuite l'extrait de foie débarrassé des lipides (lmL MeOH/H2O Milli-Q) et contenant la diféthialone en tête de la cartouche préalablement conditionnée. L'extrait de foie pénètre dans la cartouche par gravité au contact de la phase solide de la cartouche. On dépose en tête de cartouche 1 mL de solution de lavage formée de méthanol et d'eau ultra-pure en proportion volumique de 90/10. On sèche la cartouche par aspiration sous vide connectée en partie basse de la cartouche. On dépose ensuite en tête de cartouche 1 mL de solution d'élution formée de dichlorométhane et de méthanol en proportion volumique de 90/10 et on collecte en bas de cartouche un éluat comprenant la diféthialone. On évapore le solvant de éluat sous un flux d'azote (N2) à la température de 40°C. On reprend l'échantillon dans avec 0,5 mL d'acétonitrile et on filtre la solution d'acétonitrile contenant la diféthialone sur filtre 0,2 μπι.
C.4. Analyse
On analyse la solution d'acétonitrile contenant la diféthialone par chromatographie liquide à haute pression sur une colonne chirale (150 x 2 mm, granulométrie de 3 μπι) LUX® Cellulose-3 (phenomenex, Le Pecq, France) comme décrit au point A2) ci-dessus.
D. Étude de la rémanence hépatique des stéréo-isomères de configuration de la diféthialone chez le rat
On administre par gavage ("per os") à des rats (Rattus norvegicus mâles et femelles) sensibles au coumafène, âgés de 8 semaines et pesant de l'ordre de 200 g, une solution d'un mélange d'homo-stéréo-isomère (DFN-Homo-SI) et d'hétéro-stéréo-isomère (DFN-Hétéro-SI) de la diféthialone dans un mélange d'huile végétale et de DMSO à 5 . La proportion molaire d'homo-stéréo-isomère est de 40% et la proportion molaire d'hétéro-stéréo- isomère est de 60%. Chaque stéréo-isomère de configuration de la diféthialone est formé d'un mélange racémique des deux énantiomères dudit stéréo-isomère de configuration correspondant.
À J0, on administre aux rats de la solution de gavage de façon que la quantité de diféthialone ingérée par chaque rat soit de l'ordre de 3,4 mg par kilogramme de rat. Pour éviter l'hémorragie, les rats gavés sont traités quotidiennement par administration par voie sous cutanée d'une dose de vitamine Kl (à titre d'antidote vis-à-vis de l'hémorragie) à raison de 0,1U pour 200g de poids de rat vif.
À 4 heures (H+4), 9 heures (H+9), 24 heures (H+24), 120 heures (H+120), 168 heures (H+168) et 216 heures (H+216) après le gavage, on euthanasie 3 rats mâles et 3 rats femelles préalablement anesthésiés à l'isoflurane, on prélève le foie des rats euthanasiés puis on extrait la diféthialone du foie et on dose la quantité de chacun des stéréo-isomères de configuration de la diféthialone, on mesure de l'aire sous les pics du chromatogramme obtenu et on quantifie chaque stéréo-isomère de configuration par comparaison avec une courbe d'étalonnage. On dose :
- l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère;
- l'énantiomère lévogyre dudit homo-stéréo-isomère ;
- l'énantiomère dextrogyre dudit hétéro-stéréo-isomère ;
- l'énantiomère lévogyre dudit hétéro- stéréo-isomère ;
présents dans le foie des rats gavés.
Les résultats sont représentés en figure 8, 9 et 10, dans lesquelles la teneur dudit énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone exprimée en nano-gramme d' énantiomère par gramme de foie (ng/g) est donnée en fonction du temps (en heures) après le gavage des rats.
En figure 8, la teneur de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone dans le foie (moyenne des teneurs mesurées sur 6 rats exprimée en nano-gramme dudit énantiomère par gramme de foie (ng/g)) est représentée par des cercles pleins (·) et la teneur de l'énantiomère lévogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone dans le foie (moyenne des teneurs mesurées sur 6 rats exprimée en nano-gramme dudit énantiomère par gramme de foie (ng/g)) est représentée par des cercles ouverts (O). La teneur hépatique de l'énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone décroit plus rapidement que la teneur hépatique de l'énantiomère lévogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone, alors que la proportion initiale des deux énantiomères ingérés par les rats est identique (20%). Les valeurs des teneurs hépatiques mesurées sont données au tableau 1 suivant dans lequel « DFN-Homo-SI » représente ledit homo- stéréo-isomère de la diféthialone, « DFN-Homo-dextro » représente l'énantiomère dextrogyre de Γ homo- stéréo-isomère de la diféthialone selon l'invention, « DFN-Homo-lévo » représente l'énantiomère lévogyre de l'homo-stéréo-isomère de la diféthialone, « DFN-Hétéro-SI » représente ledit hétéro- stéréo-isomère de la diféthialone, « DFN-Hétéro-lévo » représente l'énantiomère lévogyre de Γ hétéro- stéréo- isomère de la diféthialone et « DFN-Hétéro-dextro » représente l'énantiomère dextrogyre de Γ hétéro- stéréo-isomère de la diféthialone.
Tableau 1
En figure 9, la teneur relative de l'énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone dans le foie (moyenne des teneurs mesurées sur 6 rats) exprimée en unités arbitraires à titre de comparaison est représentée par des cercles pleins (·), la teneur relative dudit homo-stéréo- isomère est représentée par des carrés ouverts (□) et la teneur relative dudit hétéro-stéréo-isomère est représentée par des carrés pleins (■). La teneur hépatique de l'énantiomère dextrogyre de l'homo- stéréo-isomère de la diféthialone selon l'invention décroit plus rapidement que la teneur hépatique dudit ho mo- stéréo-isomère de la diféthialone et que la teneur hépatique dudit hétéro-stéréo-isomère de la diféthialone. En outre, la teneur hépatique dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone décroit plus rapidement que la teneur hépatique dudit hétéro- stéréo-isomère de la diféthialone. La représentation en figure 9 tient compte du fait que l'énantiomère dextrogyre de l'homo-stéréo- isomère de la diféthialone compte pour 20% de la diféthialone ingérée par les rats et que chacun dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone (DFN-Homo-SI) et dudit hétéro- stéréo-isomère de la diféthialone (DFN-Hétéro-SI) compte pour respectivement 40% et 60% de la diféthialone ingérée par les rats. Les valeurs de teneur hépatique sont rapportées au pourcentage de chaque stéréo-isomère de configuration dans la composition ingérée par les rats.
En figure 10, l'évolution dans le temps de la teneur d'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone dans le foie (moyenne des teneurs mesurées sur 6 rats exprimées en nano-gramme d'énantiomère par gramme de foie (ng/g)) est représentée (échelle de gauche) par des cercles pleins (·) et l'évolution dans le temps de la teneur de la diféthialone totale est représentée (échelle de droite) par des par des triangles ouverts (Δ). La teneur hépatique de l'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone selon l'invention décroit plus rapidement que la teneur hépatique de la diféthialone totale. La représentation en figure 10 tient compte du fait que l'énantiomère dextrogyre de l'homo- stéréo-isomère de la diféthialone compte pour 20% de la diféthialone ingérée par les rats et la diféthialone totale compte pour 100% de la diféthialone ingérée par les rats.
L'énantiomère dextrogyre de l'homo-stéréo-isomère de la diféthialone présente une rémanence hépatique significativement plus faible par rapport à tous les autres stéréo-isomères de configuration de la diféthialone chez les rats. E. Appât rodonticide comprenant une proportion massique de 14,7 ppm de diféthialone
On réalise un appât rodonticide pâteux selon l'invention par dispersion d'une quantité de diféthialone dans un excipent comestible comprenant de la graisse végétale et de la farine de céréale. La proportion mesurée de diféthialone par rapport à l'appât est de 14,7 ppm (14,65 mg d'énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone par kilogramme d'appât) et la proportion d'énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère par rapport à la diféthialone est de 99,7%. L'appât comprend en outre une proportion massique de 0,3% d'énantiomère lévogyre dudit hétéro- stéréo-isomère de la diféthialone par rapport à la diféthialone.
À J0, on place 10 rats Sprague Dawley (SD, 5 rats mâles et 5 rats femelles) sensibles au coumafène dans des cages individuelles avec une alimentation de référence exempte de rodonticide. À J3, on réalise une pesée de chaque rat puis on place à disposition de chaque rat 50 g d'appât rodonticide tel que décrit ci-dessus. On renouvelle quotidiennement cette mise à disposition de 50 g d'appât rodonticide. L'appât consommé par les rats est complété à 50 g d'appât à J4, J5 et J6. À compter de J7, on élimine les appâts rodonticides résiduels et on fournit une alimentation exempte de rodonticide à tous les rats. On prévoit une surveillance des rats pendant 3 semaines.
Les quantités moyennes d'appât consommé quotidiennement par un rat à J4, J5, J6 et J7 exprimées en gramme par jour sont données au tableau 2 ci-après.
Tableau 2
II est à noter qu'aucun rat n'a consommé une quantité quotidienne d'appât inférieure à 1 g/jour. Tous les rats (100%) meurent entre J9 et J10. La mortalité est de 100% à J10. La consommation moyenne d'appât, exprimée en gramme d'appât par kilogramme de rat est de 50,5 g d'appât.
On mesure la teneur hépatique de l'énantiomère dextrogyre de Γ ho mo- stéréo-isomère de la diféthialone (« DFN-Homo-dextro ») selon l'invention de chacun des rats morts entre J9 et J10 par analyse en chromatographie liquide à haute pression sur une colonne chirale. Les valeurs, exprimées en micro-gramme de « DFN-Homo-dextro » et diféthialone par gramme de foie sont données au tableau 3 ci-après. La quantité moyenne d'énantiomère « DFN-Homo-dextro » retenu dans le foie de chaque rongeur (mâles et femelles) à leur mort correspond à 4,7% de la quantité de diféthialone ingérée par chaque rongeur.
Tableau 3
À titre comparatif, la teneur en diféthialone retenue dans le foie de rats ayant consommé un appât comprenant 15 ppm de diféthialone de l'état de la technique est de l'ordre de 110 μg/gramme.
L'appât dosé à 14,7 ppm de diféthialone permet l'obtention d'un taux de mortalité de 100% en minimisant les risques d'intoxication secondaire d'animaux -notamment d'oiseaux- prédateurs ou charognards de rongeurs cibles nuisibles affaiblis ayant consommé un appât rodonticide.
II va de soi que l'invention peut faire l'objet de nombreuses variantes de réalisation et applications. En particulier, une composition, un appât rodonticide et un procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles sont sujets à des infinités de variantes tant dans la formulation de l'appât que dans les modes de mise en œuvre du procédé.

Claims

REVENDICATIONS
1/ - Énantiomère dextrogyre d'un stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, dit homo-stéréo-isomère, de formule 3-(4'- bromobiphenyl-4-yl)- 1 -(4-hydroxythiocoumarin-3-yl)- 1 ,2,3,4- tétrahydronaphtalène, dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4- tétrahydronaphtalène dudit homo-stéréo-isomère sont de même configuration absolue.
21 - Composition comprenant de Γ énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone selon la revendication 1, à l'exclusion d'un mélange racémique d'énantiomères dextrogyre et lévogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone.
3/ - Composition selon la revendication 2, caractérisée en ce que ledit homo-stéréo-isomère est majoritairement sous forme d'énantiomère dextrogyre.
4/ - Composition selon l'une des revendications 2 ou 3, caractérisée en ce que la diféthialone est majoritairement sous forme d'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone.
5/ - Composition selon l'une des revendications 2 à 4, caractérisée en ce qu'elle comprend une quantité d'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone dans la composition telle que le rapport de cette quantité sur la quantité de la diféthialone dans la composition est supérieur à 25%.
6/ - Composition selon l'une des revendications 2 à 5, caractérisée en ce qu'elle comprend une quantité de Γ énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone dans la composition telle que le rapport de cette quantité sur la quantité de la diféthialone dans la composition est supérieur à 97%.
Il - Appât rodonticide comprenant une composition selon l'une des revendications 2 à 6, et au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles. 8/ - Appât selon la revendication 7, caractérisé en ce que l'excipient comestible comprend au moins un aliment choisi dans le groupe formé des graines de céréale, des moutures de graines de céréale, des farines de graines de céréale, des flocons de graines de céréale, du son de céréales et des graines non céréalières.
91 - Appât selon l'une des revendications 7 ou 8, caractérisé en ce qu'il comprend une quantité massique de diféthialone telle que le rapport de cette quantité massique de diféthialone sur la quantité massique d'appât rodonticide est inférieur à 200 ppm.
10/ - Procédé de lutte contre des rongeurs cibles nuisibles, dans lequel on dissémine une quantité d'appât comprenant :
- au moins un excipient comestible pour des rongeurs cibles nuisibles, et ;
- de l'énantiomère dextrogyre du stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, dit ho mo- stéréo-isomère, de formule 3-(4'-bromobiphenyl-4-yl)-l-
(4-hydroxythiocoumarin-3-yl)-l,2,3,4-tétrahydronaphtalène, dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène dudit homo-stéréo- isomère sont de même configuration absolue ;
à l'exclusion d'un mélange racémique d'énantio mères dextrogyre et lévogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone.
11/ - Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que ledit homo-stéréo-isomère de la diféthialone est majoritairement sous forme d'énantio mère dextrogyre.
12/ - Procédé selon l'une des revendications 10 ou 11, caractérisé en ce que la diféthialone est majoritairement sous forme d'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo-isomère de la diféthialone.
13/ - Procédé selon l'une des revendications 10 à 12, caractérisé en ce qu'on choisit en combinaison :
- l'excipient comestible ; - une proportion d'énantiomère dextrogyre dudit ho mo- stéréo- isomère de la diféthialone par rapport à l'homo-stéréo-isomère de la diféthialone ;
- une proportion d'énantiomère dextrogyre dudit homo-stéréo- isomère de la diféthialone par rapport à la diféthialone ;
- une proportion massique de diféthialone par rapport à l'appât rodonticide, et ;
- une quantité d'appât disséminé ;
de façon que des rongeurs cibles nuisibles consomment une quantité de diféthialone suffisante pour être létale pour lesdits rongeurs cibles nuisibles consommant dudit appât au cours d'une période unique de 24 heures consécutives.
14/ - Procédé selon l'une des revendications 10 à 12, caractérisé en ce qu'on choisit en combinaison :
- l'excipient comestible ;
- une proportion d'énantiomère dextrogyre dudit ho mo- stéréo-isomère de la diféthialone par rapport à l'homo-stéréo-isomère de la diféthialone, et ;
- une proportion massique de diféthialone par rapport à l'appât rodonticide ;
de façon que des rongeurs cibles nuisibles consomment une quantité de diféthialone ;
o non létale pour des rongeurs cibles nuisibles consommant dudit appât pendant une période de 24 heures consécutives, et ;
o suffisante pour être létale pour des rongeurs cibles nuisibles consommant dudit appât pendant plusieurs périodes de 24 heures, lesdites périodes étant consécutives.
15/ - Procédé chromatographique d'obtention d'un énantiomère dextrogyre d'un stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, dit homo-stéréo-isomère, de formule 3-(4'-bromobiphenyl-4-yl)-l-(4- hydroxythio coumarin-3-yl)-l,2,3,4-tétrahydronaphtalène, dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène dudit homo-stéréo- isomère sont de même configuration absolue, procédé dans lequel :
- on choisit une colonne pour chromatographie liquide à haute pression de dimensions 150 x 2 mm, et comprenant une phase stationnaire chirale constituée de particules de cellulose tris(4-méthylbenzoate), lesdites particules étant d'une taille moyenne de 3 μπι et présentant une taille moyenne de pores de 1000 À ;
- on choisit, à titre de phase mobile liquide, un mélange formé d'acétonitrile (A) et d'eau comprenant 0,1% en volume d'acide formique (B), avec un rapport volumique A/B de 80/20 et avec un débit de la phase mobile liquide dans la colonne de chromatographie de 0,25 mL/min ;
- on réalise une séparation des stéréo-isomères de configuration de la diféthialone à température ambiante lors de laquelle ;
- on introduit en tête de la colonne pour chromatographie une composition liquide comprenant dudit énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone, puis ;
- on entraîne la composition liquide avec la phase mobile dans la colonne pour chromatographie dans des conditions propres à séparer les stéréo-isomères de configuration de la diféthialone, et ;
- on collecte une fraction de la phase mobile comprenant ledit énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone avec un temps de rétention t4 de valeur telle que ti < t2 < t3 < t4 ; tl5 12 et t3 représentant les temps de rétention de chacun des stéréo-isomères de configuration de la diféthialone distincts de l'énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone, séparément d'un énantiomère lévogyre dudit homo-stéréo- isomère de la diféthialone de temps de rétention ti et séparément des énantiomères lévogyre et dextrogyre d'un stéréo-isomère de configuration de la diféthialone, dit hétéro- stéréo-isomère, dans lequel les carbones 1 et 3 du groupement 1,2,3,4-tétrahydronaphtalène dudit hétéro- stéréo-isomère sont de configurations absolues distinctes, et de temps de rétention t2 et t3, puis ; - on élimine la phase mobile liquide de ladite fraction de façon à obtenir ledit énantiomère dextrogyre dudit homo- stéréo-isomère de la diféthialone.
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