EP2334773A1 - Verfahren zur isolierung von ölen aus zellen und biomasse - Google Patents

Verfahren zur isolierung von ölen aus zellen und biomasse

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EP2334773A1
EP2334773A1 EP09797428A EP09797428A EP2334773A1 EP 2334773 A1 EP2334773 A1 EP 2334773A1 EP 09797428 A EP09797428 A EP 09797428A EP 09797428 A EP09797428 A EP 09797428A EP 2334773 A1 EP2334773 A1 EP 2334773A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
oil
oils
demulsification
biomass
dha
Prior art date
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Withdrawn
Application number
EP09797428A
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Lothar Ott
Matthias Ruesing
Thomas Gruetzner
Florian Enzenberger
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Lonza AG
Original Assignee
Lonza AG
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Filing date
Publication date
Application filed by Lonza AG filed Critical Lonza AG
Priority to EP09797428A priority Critical patent/EP2334773A1/de
Publication of EP2334773A1 publication Critical patent/EP2334773A1/de
Withdrawn legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
    • C11B1/00—Production of fats or fatty oils from raw materials
    • C11B1/06—Production of fats or fatty oils from raw materials by pressing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
    • C11B1/00—Production of fats or fatty oils from raw materials
    • C11B1/10—Production of fats or fatty oils from raw materials by extracting
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
    • C11B1/00—Production of fats or fatty oils from raw materials
    • C11B1/10—Production of fats or fatty oils from raw materials by extracting
    • C11B1/108—Production of fats or fatty oils from raw materials by extracting after-treatment, e.g. of miscellae

Definitions

  • the present invention comprises a process for the isolation of oils and / or fats with a specific oil or fatty acid spectrum from cells and / or biomass, and oils, fats and oil mixtures obtainable according to this process.
  • Biologically produced in cells products often have to be laboriously isolated. For this it is necessary to destroy the cells. This can be done in different ways. Methods of cell disruption described in the prior art are e.g. chemical or biological treatment, exposure to osmotic pressure, freezing and thawing, ultrasound, freeze dispersion, pressing, wet milling in stirred ball mills or high pressure homogenization (S. Schultz et al., High Pressure Homogenization as a Method of Emulsion Preparation, Chem. Ing. 7), 901-909).
  • the fluid to be disrupted is forced through a narrow gap at high pressure. Due to the low gap height according to the law of Bernoulli a very high speed and a very low pressure are reached. Due to the abruptly building up high energy density, the pressure drop and the resulting cavitation, the cell membrane is damaged.
  • the disadvantage of this method is that, in addition to the desired destruction of the cell membranes, it also leads to an undesirable stabilization of the resulting emulsion due to the fine distribution of oil droplets in the continuous aqueous phase.
  • the homogenized broth contains finely divided cell components, which is why one speaks of a suspo-emulsion.
  • the cell components can additionally exert a stabilizing effect on the emulsion.
  • an emulsion is stabilized by water-soluble salts of fatty acids or proteins, both of which are to be expected in the fermentation broth.
  • PUFAs polyunsaturated fatty acids
  • oil-containing material is an oil-containing biomass or oil, which means oil for humans and / or animals edible oil.
  • oil-containing biomass By mixing two or more different oil-containing biomass in any proportions can be obtained by skillful selection of biomass, or the corresponding oil compositions of the biomass, almost all desired specific oil or fatty acid spectra.
  • Preferred are e.g. Mixtures of omega-3 DHA-containing and omega-6 arachidonic acid (ARA) -containing biomass, e.g. from Ulkenia spec. and Mortierella alpina, optionally with the addition of further oil-containing biomasses.
  • ARA arachidonic acid
  • biomass or cell material may be extracted from one or more sources together with the addition of further oils.
  • biomass (s) and the other oils, as well as the ratios used many desired oil compositions can also be obtained in one step.
  • biomasses or cells with a high PUFA content are added with an excess of oils having a lower PUFA content extracted, whereby a stabilization (protection against oxidation) of the PUFA takes place.
  • oils are, in particular, vegetable oils such as sunflower oil, olive oil, palm oil, thistle oil, borage oil, evening primrose oil, corn oil, soybean oil, linseed oil, rapeseed oil, but also animal oils, such as fish oil, krill oil, etc., as well as fractionated oils on this basis, and any further oil mixtures.
  • Palm olein fractionated palm oil
  • Palm olein contains a mixture of PUFA, monounsaturated and saturated fatty acids.
  • the relative composition is about 44% oleic acid, 10% linoleic acid, 40% palmitic acid and 5% stearic acid.
  • DHA and ARA-containing biomass is in the ratio of 5: 1 to 1: 5 (based on ARA or DHA content) with an up to twenty-fold excess of vegetable or animal oils, such as sunflower oil. Olive oil, palm olein oil, fish oil etc. extracted.
  • the demulsification according to the invention can be carried out mechanically, physically, (electro-) chemically or by any combination of these demulsification methods.
  • the mechanical demulsification is preferably carried out by means of centrifugation
  • the mechanical demulsification preferably takes place in a temperature range of 0-
  • the physical demulsification is preferably carried out by physisorbtion or extraction of the resulting suspo-emulsion with one or more linear, cyclic or aromatic hydrocarbons, e.g. Propane, hexane, cyclohexane or toluene.
  • a particularly preferred solvent is hexane.
  • the physical demulsification is preferably carried out in a temperature range of 0- 100 0 C.
  • the electrochemical demulsification is preferably carried out by means of electrocoagulation or electrophoresis.
  • the chemical demulsification is preferably carried out by chemisorption, addition of electrolyte or a surface-active auxiliary.
  • Preferred is the chemical demulsification by means of a surfactant, more preferably with a fatty alcohol ethoxylate, in particular with Thethylenglycolmonodecylether.
  • the surfactant according to the invention is used in a concentration of up to 25 g / l, preferably of 10-20 g / l and particularly preferably of 20 g / l.
  • the chemical demulsification is preferably carried out in a temperature range of 0- 100 0 C.
  • the invention further includes oils obtainable according to the process of the invention.
  • these oils contain omega-3 and / or omega-6 fatty acids, e.g. Docosahexaenoic acid (DHA), docosapentaenoic acid (DPA), eicosapentaenoic acid (EPA), alphalinolenic acid (ALA), arachidonic acid (ARA), gamma-linolenic acid (GLA), dihomogammalinolenic acid (DHGLA), linolenic acid (LA), or mixtures of said fatty acids.
  • Tab. 1 shows an example of a DHA rich oil according to the present invention. Mixtures of one or more of said omega-3 and / or omega-6 fatty acids with saturated or monounsaturated fatty acids form a further preferred embodiment.
  • the oil obtainable by the process according to the invention is characterized by a particularly high quality, which manifests itself in a peroxide value of ⁇ 5 meq / kg and an anisidine value of ⁇ 30, compared with the oil produced by means of the processes known in the prior art.
  • microorganisms which are suitable for obtaining PUFA.
  • These microorganisms can be found, for example, in the bacteria under the genus WMo (for example: Vibrio marinus) or under the dinoflagellates (Dinophyta), there in particular the genus Crypthecodinium, such as C. cohnii or under the stramenopiles, such as the Pinguiophyceae such as Glossomastix , Phaeomonas, Pinguiochrysis, Pinguiococcus and Polydochrysis.
  • WMo for example: Vibrio marinus
  • Dinophyta dinoflagellates
  • the genus Crypthecodinium such as C. cohnii or under the stramenopiles
  • Pinguiophyceae such as Glossomastix , Phaeomonas, Pinguiochrysis, Pinguiococcus and Polydochrysis.
  • Preferred microorganisms for the fermentative production of PUFA belong to the Stramenopiles (or Labyrinthulomycota), in particular to the order Thraustochytriales, (Thraustchytriidea) and there especially to the genera Japonochytrium, Schizochytrium, Thraustochytrium, Althornia, Labyrinthuloides, Aplanochytrium and Ulkenia, and Zygomycetes such as Mortierella alpina, Mortierella elongata or other species, Pythium insidiosum, Pythium irregular or other species.
  • Aqueous fermentation broth with DHA-containing ulkenia (strain SAM2179) Biomass (oil content about 50%, DHA content in the oil about 44%) was with ARA-containing biomass (Mortierella alpina, oil content about 55%, ARA content in the oil about 40%) in the ratio 1: 1 (in each case based on biomass dry weight content) continuously fed to a high pressure homogenizer (eg APV 2000).
  • the high-pressure homogenization can take place in one or two stages, wherein the pressure of the last stage is chosen so high that the majority of the cells is destroyed.
  • the pressure of the high-pressure homogenizer necessary for the above fermentation broth for the quantitative digestion of the cells was at least 60 MPa.
  • the resulting suspo-emulsion can now according to the invention be demulsified by mechanical, physical or chemical methods and thus a release of the PUFA-containing oil can be achieved.
  • Aqueous fermentation broth with DHA-containing ulkenia (strain SAM2179)
  • Biomass was continuously fed to a high pressure homogenizer (e.g., APV 2000) with the addition of sunflower oil in excess.
  • a high pressure homogenizer e.g., APV 2000
  • the following mixing ratio was chosen: i) fermentation broth of DHA-containing Ulkenia biomass (5.5 liters, corresponding to about 335 g dry biomass, oil content about 50%, DHA content in
  • ARA-containing biomass with the addition of fish oil (DHA content 25%) and plambitin oil in excess by high pressure homogenizer (e.g., APV 2000).
  • high pressure homogenizer e.g., APV 2000.
  • the following mixing ratio was chosen: i) ARA-containing Mortierella alpina biomass (corresponding to about 225 g dry biomass, oil content about 55%, ARA content in the oil about 40%) ii) 0.3 kg palmitoleic oil. iii) 0.2 kg fish oil (DHA 25%)
  • the high-pressure homogenization was carried out according to Ex. 2.
  • Example 4 50 ml of the high pressure homogenized aqueous suspension were stirred with 0.75 g of the fatty alcohol ethoxylate Dehydol D3 for six hours at room temperature. Thereafter, this solution was centrifuged for 10 minutes at 3300 revolutions per minute and thus contain about 5 g of oil, corresponding to an oil yield of about 95% and an ARA content of about 8% and a DHA content of about 8%.
  • Aqueous fermentation broth with DHA-containing ulkenia (strain SAM2179) Biomass (oil content about 50%, DHA content in the oil about 44%) was with ARA-containing biomass (Mortierella alpina, oil content about 55%, ARA content in the oil about 40%) in the ratio 1: 2 (in each case based on dry biomass) with the addition of palm olein in excess continuously fed to a high-pressure homogenizer (eg APV 2000).
  • the following mixing ratio was chosen: i) fermentation broth of DHA-containing Ulkenia biomass (5.5 liters, corresponding to about 335 g dry biomass, oil content about 50%, DHA content in

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Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Isolierung von Ölen mit einem spezifischen Öl- bzw. Fettsäurespektrum aus Zellen, dadurch gekennzeichnet, dass a) mindestens eine Art PUFA-haltiger Zellen und/oder Biomasse mit mindestens einem weiteren Öl-haltigen Material gemischt werden; b) die Zellen bzw. die Biomasse mittels Hochdruckhomogenisation zerstört wird; und c) die entstandene Emulsion demulgiert wird.

Description

Verfahren zur Isolierung von Ölen aus Zellen und Biomasse
Die vorliegende Erfindung umfasst ein Verfahren zur Isolierung von Ölen und/oder Fetten mit einem spezifischen Öl- bzw. Fettsäurespektrum aus Zellen und/oder Biomasse sowie gemäss diesem Verfahren erhältliche Öle, Fette und Ölmischungen.
Biologisch in Zellen erzeugte Produkte müssen oft aufwendig isoliert werden. Hierzu ist es nötig, die Zellen zu zerstören. Dies kann auf unterschiedliche Art und Weise geschehen. Im Stand der Technik beschriebene Methoden des Zellaufschlusses sind z.B. chemische oder biologische Behandlung, Einwirken von osmotischem Druck, Gefrieren und Auftauen, Ultraschall, Gefrierdispersion, Pressen, Nassvermahlung in Rührwerkskugelmühlen oder Hochdruckhomogenisation (S. Schultz et al., Hochdruckhomogenisation als ein Verfahren zur Emulsionsherstellung, Chem. Ing. Tech. 2002, 74 (7), 901-909).
Bei der Hochdruckhomogenisation wird das aufzuschliessende Fluid mit hohem Druck durch einen engen Spalt gepresst. Durch die geringe Spalthöhe werden nach dem Gesetz von Bernoulli eine sehr hohe Geschwindigkeit und ein sehr niedriger Druck erreicht. Durch die sich schlagartig aufbauende hohe Energiedichte, den Druckabfall und der daraus resultierenden Kavitation kommt es zu einer Beschädigung der Zellmembran.
Der Nachteil dieser Methode besteht darin, dass sie neben der erwünschten Zerstörung der Zellmembranen auch zu einer unerwünschten Stabilisierung der entstehenden Emulsion aufgrund der feinen Verteilung von Öltröpfchen in der kontinuierlichen wässrigen Phase führt. Zudem enthält die homogenisierte Brühe fein verteilte Zellbestandteile, weswegen man auch von einer Suspo-Emulsion spricht. Die Zellbestandteile können dabei zusätzlich einen stabilisierenden Effekt auf die Emulsion ausüben. Weiterhin wird eine Emulsion durch wasserlösliche Salze von Fettsäuren oder Proteinen stabilisiert, welche beide in der Fermentationsbrühe zu erwarten sind.
Des Weiteren ist bei Methoden gemäß dem Stand der Technik von Nachteil, dass ein Öl mit einem spezifischen Öl- bzw. Fettsäurespektrum nicht in einem einzigen Isolationsverfahren gewonnen werden kann. Vielmehr muss entweder das Verfahren mit zwei oder mehreren Zellen bzw. Biomassen durchgeführt werden oder alternativ dazu das in dem Isolationsverfahren gewonnene Öl anschliessend mit einem oder
BESTATIGUNGSKOPIE mehreren weiteren Ölen versetzt werden um eine spezifische, gewünschte Zusammensetzung zu erhalten.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es daher, ein Verfahren bereitzustellen, welches die Isolation von Ölen mit mehrfach ungesättigte Fettsäuren (engl: polyunsaturated fatty acids (PUFAs)) mit einem spezifischen Öl- bzw. Fettsäurespektrum aus Zellen oder Biomasse in einer verfahrenstechnisch simpleren Weise als mit aus dem Stand der Technik bekannten Verfahren ermöglicht.
Diese Aufgabe wird durch das erfindungsgemässe Verfahren gelöst, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass
a) mindestens eine Art PUFA-haltiger Zellen und/oder Biomasse mit mindestens einem weiteren Öl-haltigen Material gemischt werden; b) die Zellen bzw. die Biomasse mittels Hochdruckhomogenisation zerstört wird; und c) die entstandene Emulsion demulgiert wird.
Es ist erfindungsgemäß bevorzugt, dass es sich bei dem Öl-haltigen Material um eine Öl-haltige Biomasse oder Öl handelt, wobei unter Öl für Menschen und/oder Tiere verzehrsfähiges Öl zu verstehen ist.
Durch Mischung von zwei oder mehr verschiedenen Öl-haltigen Biomassen in beliebigen Verhältnissen können durch geschickte Auswahl der Biomassen, bzw. der entsprechenden Ölzusammensetzungen der Biomassen, nahezu alle gewünschten spezifischen Öl- bzw.- Fettsäurespektren gewonnen werden. Bevorzugt sind z.B. Mischungen von omega-3 DHA-haltiger und omega-6 Arachidonsäure (ARA)-haltiger Biomasse, z.B. von Ulkenia spec. und Mortierella alpina, gegebenenfalls unter Zugabe weiterer Öl-haltiger Biomassen.
In einer weiteren Ausführungsform kann Biomasse oder Zellmaterial von ein oder mehr Quellen gemeinsam unter Zugabe von weiteren Ölen extrahiert werden. Durch die Auswahl der Biomasse(n) und der weiteren Öle, sowie der eingesetzten Verhältnisse, können ebenfalls viele gewünschte Ölzusammensetzungen in einem Schritt gewonnen werden.
In einer bevorzugten Ausführung werden Biomassen oder Zellen mit einem hohen PUFA-Gehalt unter Zugabe eines Überschuss an Ölen mit niedrigerem PUFA-Gehalt extrahiert, wodurch eine Stabilisierung (Schutz vor Oxidation) der PUFA erfolgt. Als Öle eignen sich insbesondere Pflanzenöle wie Sonnenblumenöl, Olivenöl, Palmöl, Distelöl, Boregöl, Nachtkerzenöl, Maisöl, Sojaöl, Leinöl, Rapsöl, aber auch tierische Öle, wie Fischöl, Krillöl, etc. sowie fraktionierte Öle auf dieser Basis, sowie darüber hinaus beliebige Ölmischungen.
In einer besonders bevorzugten Form wird mit einem Überschuss von Palm Olein extrahiert. Palm Olein (fraktioniertes Palm Öl) enthält ein Gemisch aus PUFA, einfach ungesättigten und gesättigten Fettsäuren. Die relative Zusammensetzung ist ca. 44% Ölsäure, 10% Linolsäure, 40% Palmitinsäure und 5% Stearinsäure. In einer ganz besonders bevorzugten Form wird DHA und ARA-haltige Biomasse im Verhältnis von 5:1 bis 1 :5 (bezogen auf ARA bzw. DHA-Gehalt) mit einem bis zu zwanzigfachen Überschuss von pflanzlichen oder tierischen Ölen, wie Sonnenblumenöl. Olivenöl, Palmolein-Öl, Fischöl etc. extrahiert.
Die erfindungsgemässe Demulgation kann mechanisch, physikalisch, (elektro-)chemisch oder durch beliebige Kombination dieser Demulgationsmethoden erfolgen.
Die mechanische Demulgation erfolgt bevorzugt mittels Zentrifugation,
Sedimentation, Flotation, Ultra-Filtration mit Kapillar-Membranen oder anderen
Membranen.
Die mechanische Demulgation erfolgt bevorzugt in einem Temperaturbereich von 0-
1000C.
Die physikalische Demulgation erfolgt bevorzugt mittels Physisorbtion oder Extraktion der erhaltenen Suspo-Emulsion mit einem oder mehreren linearen, zyklischen oder aromatischen Kohlenwasserstoffen, wie z.B. Propan, Hexan, Cyclohexan oder Toluol. Ein besonders bevorzugtes Lösemittel ist Hexan.
Die physikalische Demulgation erfolgt bevorzugt in einem Temperaturbereich von 0- 1000C.
Die elektrochemische Demulgation erfolgt bevorzugt mittels Elektrokoagulation oder Elektrophorese. Die chemische Demulgation erfolgt bevorzugt mittels Chemisorption, Elektrolytzugabe oder eines oberflächenaktiven Hilfsstoffes. Bevorzugt ist die chemische Demulgation mittels eines Tensids, besonders bevorzugt mit einem Fettalkoholethoxylat, insbesondere mit Thethylenglycolmonodecylether.
Das erfindungsgemässe Tensid wird in einer Konzentration von bis zu 25 g/l, bevorzugt von 10-20 g/l und besonders bevorzugt von 20 g/l eingesetzt.
Die chemische Demulgation erfolgt bevorzugt in einem Temperaturbereich von 0- 1000C.
Die Erfindung umfasst des Weiteren Öle erhältlich gemäss dem erfindungsgemässen Verfahren. In einer bevorzugten Ausführungsform enthalten diese Öle omega-3 und/oder omega-6 Fettsäuren wie z.B. Docosahexaensäure (DHA), Docosapentaensäure (DPA), Eicosapentaensäure (EPA), Alphalinolensäure (ALA), Arachidonsäure (ARA), Gammalinolensäure (GLA), Dihomogammalinolensäure (DHGLA), Linolensäure (LA), oder Mischungen der genannten Fettsäuren. Tab. 1 zeigt ein Beispiel für ein DHA reiches Öl gemäss der vorliegenden Erfindung. Mischungen von einer oder mehrerer der genannten omega-3 und/oder omega-6 Fettsäuren mit gesättigten oder einfach ungesättigten Fettsäuren bilden eine weitere bevorzugte Ausführungsform.
Das mit dem erfindungsgemässen Verfahren erhältliche Öl ist gegenüber dem mittels der im Stand der Technik bekannten Verfahren erzeugten Öl durch eine besonders hohe Qualität, welche sich in einer Peroxidzahl von < 5 meq/kg und einem Anisidinwert von < 30 manifestiert, gekennzeichnet.
Erfindungsgemäss können Mikroorganismen verwendet werden, welche sich zur Gewinnung von PUFA eignen. Diese Mikroorganismen finden sich beispielsweise bei den Bakterien unter der Gattung WMo (z. B.: Vibrio marinus) oder unter den Dinoflagellaten (Dinophyta), dort insbesondere die Gattung Crypthecodinium, wie C. cohnii oder unter den Stramenopiles, wie die Pinguiophyceae wie z.B. Glossomastix, Phaeomonas, Pinguiochrysis, Pinguiococcus und Polydochrysis. Bevorzugte Mikroorganismen zur fermentativen Herstellung von PUFA gehören zu den Stramenopiles (oder Labyrinthulomycota), insbesondere zur Ordnung Thraustochytriales, (Thraustchytriidea) und dort wieder insbesondere zu den Gattungen Japonochytrium, Schizochytrium, Thraustochytrium, Althornia, Labyrinthuloides, Aplanochytrium und Ulkenia, sowie Zygomycetes wie Mortierella alpina, Mortierella elongata oder andere Spezies, Pythium insidiosum, Pythium irreguläre oder andere Spezies.
Die Erfindung wird durch folgende, nicht limitierende Beispiele erläutert.
Beispiel 1
Wässrige Fermentationsbrühe mit DHA-haltiger Ulkenia (Stamm SAM2179) Biomasse (Ölgehalt ca. 50%, DHA-Gehalt im Öl ca. 44%) wurde mit ARA-haltiger Biomasse (Mortierella alpina, Ölgehalt ca. 55%, ARA-Gehalt im Öl ca. 40%) im Verhältnis 1 :1 (jeweils bezogen auf Biomassetrockengewichtgehalt) kontinuierlich einem Hochdruckhomogenisator (z.B. APV 2000) zugeführt. Die Hochdruckhomogenisation kann dabei ein- oder zweistufig erfolgen, wobei der Druck der letzten Stufe so hoch gewählt wird, dass der überwiegende Teil der Zellen zerstört wird. Der für die obige Fermentationsbrühe notwendige Druck des Hochdruckhomogenisators zum quantitativen Aufschluss der Zellen betrug dabei mindestens 60MPa. Die dabei entstehende Suspo-Emulsion kann nun erfindungsgemäss durch mechanische, physikalische oder chemische Methoden demulgiert und somit eine Freisetzung des PUFA-haltigen Öls erreicht werden.
50 mL der hochdruckhomogenisierten wässrigen Suspension wurden mit 0.75 g des Fettalkoholethoxylats Dehydol D3 sechs Stunden bei Zimmertemperatur gerührt. Danach wurde diese Lösung für 10 Minuten bei 3300 Umdrehungen pro Minute zentrifugiert und so ca. 1 g Öl enthalten, entsprechend einer Ölausbeute von ca. 90- 95% und einem Verhältnis von DHA zu ARA von ca. 1 :1.
Beispiel 2
Wässrige Fermentationsbrühe mit DHA-haltiger Ulkenia (Stamm SAM2179)
Biomasse wurde unter Zugabe von Sonnenblumenöl im Überschuss kontinuierlich einem Hochdruckhomogenisator (z.B. APV 2000) zugeführt. Es wurde folgendes Mischungsverhältnis gewählt: i) Fermentationsbrühe von DHA-haltiger Ulkenia Biomasse (5,5 Liter, entsprechend ca. 335 g Biotrockenmasse, Ölgehalt ca. 50%, DHA-Gehalt im
Öl ca. 50%) ii) 0.095 kg Sonnenblumenöl. Die Hochdruckhomogenisation erfolgte gemäss Bsp. 2. 50 ml_ der hochdruckhomogenisierten wässrigen Suspension wurden mit 0.75 g des Fettalkoholethoxylats Dehydol D3 sechs Stunden bei Zimmertemperatur gerührt. Danach wurde diese Lösung für 10 Minuten bei 3300 Umdrehungen pro Minute zentrifugiert und so ca. 2.3 g Öl enthalten, entsprechend einer Ölausbeute von ca. 95% und einem DHA-Gehalt von 32%.
Efindungsgemässes Öl mit verdünntem DHA-Gehalt
Mittelwert aus Doppelbestimmungen
Fettsäure GC-Flächen%
C 14:0 Myristinsäure 2.6
C 15:0 Pentadecansäure 1.3
C 16:0 Palmitinsäure 27.2
C 18:0 Stearinsäure 1.4
C 18:1 Ölsäure 18.3
C 18:2 Linolsäure 2.4
C 20:5, n-3 EPA 0.3
C 22:5, n-6 DPA 7.2
C 22:6, n-3 DHA 32.06
Beispiel 3
Extraktion von ARA-haltiger Biomasse wurde unter Zugabe von Fischöl (DHA-Gehalt 25%) und Plamitolein-Öl im Überschuss mittels Hochdruckhomogenisator (z.B. APV 2000). Es wurde folgendes Mischungsverhältnis gewählt: i) ARA-haltige Mortierella alpina Biomasse (entsprechend ca. 225 g Biotrockenmasse, Ölgehalt ca. 55%, ARA-Gehalt im Öl ca. 40%) ii) 0.3 kg Palmitolein-Öl. iii) 0.2 kg Fischöl (DHA 25%) Die Hochdruckhomogenisation erfolgte gemäss Bsp. 2.
50 ml_ der hochdruckhomogenisierten wässrigen Suspension wurden mit 0.75 g des Fettalkoholethoxylats Dehydol D3 sechs Stunden bei Zimmertemperatur gerührt. Danach wurde diese Lösung für 10 Minuten bei 3300 Umdrehungen pro Minute zentrifugiert und so ca. 5 g Öl enthalten, entsprechend einer Ölausbeute von ca. 95% und einem ARA-Gehalt von ca. 8% und einem DHA Gehalt von ca. 8%. Beispiel 4
Wässrige Fermentationsbrühe mit DHA-haltiger Ulkenia (Stamm SAM2179) Biomasse (Ölgehalt ca. 50%, DHA-Gehalt im Öl ca. 44%) wurde mit ARA-haltiger Biomasse (Mortierella alpina, Ölgehalt ca. 55%, ARA-Gehalt im Öl ca. 40%) im Verhältnis 1 :2 (jeweils bezogen auf trockene Biomasse) unter Zugabe von Palmolein im Überschuss kontinuierlich einem Hochdruckhomogenisator (z.B. APV 2000) zugeführt. Es wurde folgendes Mischungsverhältnis gewählt: i) Fermentationsbrühe von DHA-haltiger Ulkenia Biomasse (5,5 Liter, entsprechend ca. 335 g Biotrockenmasse, Ölgehalt ca. 50%, DHA-Gehalt im
Öl ca. 44%) ii) ARA-haltige Mortierella alpina Biomasse (entsprechend ca. 665 g Biotrockenmasse, Ölgehalt ca. 55%, ARA-Gehalt im Öl ca. 40%) iii) 1.3 kg Palmolein Öl. Die Hochdruckhomogenisation erfolgte gemäss Bsp. 2.
50 mL der hochdruckhomogenisierten wässrigen Suspension wurden mit 0.75 g des Fettalkoholethoxylats Dehydol D3 sechs Stunden bei Zimmertemperatur gerührt. Danach wurde diese Lösung für 10 Minuten bei 3300 Umdrehungen pro Minute zentrifugiert und so ca. 5 g Öl enthalten, entsprechend einer Ölausbeute von ca. 95% und einem Verhältnis von DHA zu ARA von ca. 1 :2.

Claims

Patentansprüche
1. Verfahren zur Isolierung eines Öls mit einem spezifischen Öl- bzw. Fettsäurespektrum aus Zellen und/oder Biomasse, dadurch gekennzeichnet, dass
1. mindestens eine Art PUFA-haltiger Zellen und/oder Biomasse mit mindestens einem weiteren Öl-haltigen Material gemischt werden;
2. die Zellen bzw. die Biomasse mittels Hochdruckhomogenisation zerstört wird; und
3. die entstandene Emulsion demulgiert wird.
2. Verfahren gemäß Anspruch 1 , wobei es sich bei dem Öl-haltigen Material um Biomasse oder Öle handelt.
3. Verfahren gemäß Anspruch 2, wobei es sich bei den Ölen um Öle mit einer niedrigeren PUFA-Konzentration handelt.
4. Verfahren gemäß Anspruch 3, wobei es sich um Pflanzenöle, tierische Öle und/oder fraktionierte Öle handelt.
5. Verfahren gemäß Anspruch 4, wobei die Öle ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Sonnenblumenöl, Olivenöl, Palmöl, Distelöl, Boregöl, Nachtkerzenöl, Maisöl, Sojaöl, Leinöl, Rapsöl, Fischöl und/oder Krillöl.
6. Verfahren gemäß Anspruch 2, wobei es sich um eine DHA-haltige und eine ARA-haltige Biomasse im Verhältnis von 5:1 bis 1 :5, bezogen auf DHA und ARA handelt.
7. Verfahren gemäß Anspruch 1 , wobei die Demulgation chemisch erfolgt.
8. Verfahren gemäß Anspruch 7, wobei die Demulgation mittels eines Tensids erfolgt.
9. Verfahren gemäß Anspruch 8, wobei es sich bei dem Tensid um ein Fettalkoholethoxylat handelt.
10. Verfahren gemäß Anspruch 9, wobei es sich bei dem Tensid um Triethylenglycolmonodecylether handelt.
11. Verfahren gemäß mindestens einem der Ansprüche 8-10, wobei das Tensid in einer Konzentration von bis zu 25 g/l, bevorzugt von 10-20 g/l und besonders bevorzugt von 20 g/l eingesetzt wird.
12. Verfahren gemäß mindestens einem der Ansprüche 1-11 , wobei die Demulgation bei einer Temperatur von 0-1000C erfolgt.
13. Verfahren gemäß Anspruch 1 , wobei die Demulgation mechanisch erfolgt.
14. Verfahren gemäß Anspruch 13, wobei die Demulgation mittels einer Zentrifuge erfolgt.
15. Verfahren gemäß den Ansprüchen 13 und/oder 14, wobei die Demulgation bei einer Temperatur von 0-1000C erfolgt.
16. Verfahren gemäß Anspruch 1 , wobei die Demulgation physikalisch erfolgt.
17. Verfahren gemäß Anspruch 7, wobei die Demulgation mittels Extraktion der Suspo-Emulsion mit einem oder mehreren linearen, zyklischen oder aromatischen Kohlenwasserstoffen erfolgt.
18. Verfahren gemäß Anspruch 17, wobei es sich bei dem Lösemittel um
Hexan handelt.
19. Verfahren gemäß Anspruch 17, wobei es sich bei dem Lösemittel um Aceton handelt.
20. Verfahren gemäß mindestens einem der Ansprüche 16-19, wobei die Demulgation bei einer Temperatur von 0-1000C erfolgt.
21. Verfahren gemäß mindestens einem der Ansprüche 1-20, wobei Omega-3 PUFA-produzierende Mikroorganismen verwendet werden, die zur Gruppe von Thraustochytriales gehören, wie z.B. Stämme von Ulkenia, Thraustochytrium und/oder Schizochytrium und/oder omega-6 produzierende Mikroorganismen wie Mortierella oder Pythium
22. Öl, erhältlich gemäß einem Verfahren gemäß mindestens einem der Ansprüche 1-21.
23. Öl gemäß Anspruch 22, enthaltend Docosahexaensäure (DHA) und/oder
Docosapentaensäure (DPA).
24. Öl gemäß Anspruch 23, wobei das Öl einen Gehalt von mindestens 8 Gew.-% DHA und 8 Gew.-% ARA aufweist.
25. Verwendung des Öls gemäß mindesten einem der Ansprüche 22-24 als Zusatz für Lebensmittel, Nahrungsergänzungsmittel, Tierfutter.
26. Verwendung gemäß Anspruch 25, wobei es sich um spezielle Ernährungsprodukte wie z.B. Babymilch, Babynahrung, medizinische
Ernährungsprodukte, dietätische Produkte sowie um Produkte gemäss PARNUTS („foods for particular nutritional uses") handelt.
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