EP1745061A1 - Nouveaux composes amphiphiles, leur procede de preparation et leurs applications - Google Patents

Nouveaux composes amphiphiles, leur procede de preparation et leurs applications

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Publication number
EP1745061A1
EP1745061A1 EP05767494A EP05767494A EP1745061A1 EP 1745061 A1 EP1745061 A1 EP 1745061A1 EP 05767494 A EP05767494 A EP 05767494A EP 05767494 A EP05767494 A EP 05767494A EP 1745061 A1 EP1745061 A1 EP 1745061A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
formula
compound
group
represent
carbon atoms
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP05767494A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Philippe Barthelemy
Michel Camplo
Mark W. Grinstaff
Louis Moreau
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Aix Marseille Universite
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Universite dAvignon et des Pays de Vaucluse
Original Assignee
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Universite de la Mediterranee Aix Marseille II
Universite dAvignon et des Pays de Vaucluse
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Centre National de la Recherche Scientifique CNRS, Universite de la Mediterranee Aix Marseille II, Universite dAvignon et des Pays de Vaucluse filed Critical Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Publication of EP1745061A1 publication Critical patent/EP1745061A1/fr
Withdrawn legal-status Critical Current

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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation

Definitions

  • the present invention relates to new amphiphilic compounds, their preparation process and their applications in particular to transfection.
  • One method of choice is the introduction of specific genetic material into a cell or transfection.
  • the compounds used for this purpose such as the liposome formulation of a mono cationic lipid (N- [1- (2,3-Dioleoyloxy)] - N, N, N- trimethylammonium propane methylsulfate in sterile water ( concentration 1 mg / ml) called DOTAP), polyethyleneimine (PEI) or lipofectamine, have a low rate of effectiveness.
  • X represents an oxygen or sulfur atom, or a group -CH 2 -
  • B represents a purine or pyrimidine base, such as uracil, adenine, guanine, cytosine, thymine or hypoxanthine, optionally substituted, or a base non-natural mono-or bi-cyclic heterocylic, each cycle comprising 4 to 7 links, optionally substituted, Li and L 2 , identical or different, represent an oxycarbonyl group -O-CO-, thiocarbamate -O-CS-NH-, carbonate -O-CO-O-, carbamate -O-CO-NH-, an oxygen atom, or alternatively, Li and L 2, together, form a ketal group of formula
  • Ri and R 2 represent a linear or branched alkyl chain containing from 2 to 30 carbon atoms, preferably from 6 to 25 carbon atoms, in particular from 8 to 25 carbon atoms, saturated or partially unsaturated, possibly totally or partially fluorinated, optionally substituted on the chain end carbon by a fluorine atom or by a benzyl or naphthyl ester or ether and R 3 represents a hydroxy, amino group, a phosphate, phosphonate, phosphatidylcholine, O-alkylphosphatidylcholine group, phosphatidylethanolamine, O-alkyl-phosphatidylethanolamine, O- alkylphosphate, thiophosphate, phosphonium, a group NH 2 -R 4 , NHR R 5 or NR R 5 R 6 in which R 4l R 5 and R 6 , identical or different, represent an atom d hydrogen or a linear or branched alkyl or hydroxy
  • CO-V- in which V and W identical or different represent a bond -O -, - S-, or -NH-, Z can take the meanings of R 3 , Ri and R 2 , and n can take the values of 1 at 500 and A T and A 2 which are identical or different, represent a linear or branched alkyl radical containing from 1 to 5 carbon atoms or linear or branched acyl radical containing from 2 to 5 carbon atoms, with the exception of the compounds in which: - X represents an oxygen atom,
  • R 3 represents a hydroxy group and either L1 and L2, identical represent an oxycarbonyl group, Ri and R 2 identical represent a C 2 to C ⁇ 7 alkyl, and B represents cytosine, adenosine or a 6-methoxypurine, or Li and L 2 together form a ketal group, identical Ri and R 2 represent methyl and B represents adenosine.
  • X represents an oxygen atom.
  • Preferred compounds of preferred formula (I) are those in which: X represents an oxygen or sulfur atom, - B represents a purine or pyrimidine base such as uracil, adenine, guanine, cytosine, thymine or hypoxanthine, Li and L 2 , identical or different, represent an oxycarbonyl group -O-CO-, thiocarbamate -O-CS-NH-, carbonate -O-CO-O-, carbamate -O-CO-NH-, an oxygen atom, - Ri and R 2 , identical or different, represent a linear or branched alkyl chain containing from 2 to 30 carbon atoms, preferably from 6 to 25 carbon atoms, in particular from 8 to 25 carbon atoms, saturated or partially unsaturated, possibly totally or partially fluorinated, optionally substituted on the chain end carbon by a fluorine atom or by a benzyl or naphthyl ester or ether and R 3 represents a
  • - B represents cytosine, adenosine or 6-methoxypuhne
  • - Ri and R 2 identical represent a C 2 to C 17 alkyl and - R 3 represents a hydroxy group.
  • Other preferred compounds of formula (I) are those in which R 3 represents an amino group, a phosphate, phosphonate, phosphatidylcholine, O-alkylphosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine, O-alkyl-phosphatidylethanolamine, O-alkylphosphate, thiophosphate, phosphonium group.
  • R 4 , R 5 and R 6 identical or different, represent a hydrogen atom or a linear or branched alkyl or hydroxyalkyl radical containing from 1 to 5 carbon atoms, or R 3 represents a cyclodextrin residue or a ZW-CO-CH 2 -CH 2 - (- N-CO-CH 2 -CH 2 -) n - N - A1 CH 2 -V- A2 or - (- CH 2 -CH-) n - I CO-V- in which V and W identical or different represent a bond -0 -, - S-, or -NH-, Z can take the meanings of R 3 , Ri and R 2l and n can take the values from 1 to 500 and Ai and A 2 identical or different represent a linear or branched alkyl radical containing from 1 to 5 atoms of ca linear or branched carbon or acyl containing
  • - B represents a purine or pyrimidine base chosen from uracil, adenine, guanine, cytosine, thymine
  • - X represents an oxygen or sulfur atom
  • - L 1 and L 2 represent an oxycarbonyl, thiocarbamate, carbonate or carbamate group, and are preferably identical
  • - Ri and R 2 represent an undecyl, tridecyl, pentadecyl, heptadecyl radical, nonadecyl, cis, cis, cis, cis-4,7,10,13-nonadec-tetraenyl, arachidonyl, c s-8-heptadecenyl
  • - R 3 represents an amino radical, methylamine, dimethylamine, trimethylamine, O-alkylphosphatidylcholine and - the counterion, if
  • the invention relates to compounds of formula (I) above, in which Li and L 2 , together, form a ketal or thiocetal group, corresponding to the formula (la) below:
  • R 3 represents an amino, phosphate, phosphonate, phosphatidylcholine group, O-alkylphosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine, O-alkylphosphatidylethanolamine, O-alkylphosphate, thiophosphate, phosphonium, an NH 2 -R 4 group , NHR R 5 or NR 4 R 5 R 6 in which R, R 5 and R 6 , identical or different represent a hydrogen atom or a linear or branched alkyl or hydroxyalkyl radical containing 1 to 5 carbon atoms, or R 3 represents a cyclodextrin residue or a ZW-CO-CH 2 -CH 2 - (- N-CO -CH 2 -CH 2 -) n - N
  • n is advantageously between 1 and 500, preferably between 1 and 100, especially between 1 and 50, very particularly between 1 and 10.
  • linear or branched alkyl containing 1 to 5 carbon atoms is meant for example a methyl, ethyl, propyl radical , i-propyl, n-butyl, i-butyl, tert-butyl, preferably methyl or ethyl.
  • the purine or pyrimidine base, or the non-natural heterocyclic base can be substituted with at least one substituent chosen, for example, from a halogen, an amino group, a carboxy group, carbonyl group, carbonylamino group, hydroxy group, azido, cyano, alkyl, cycloalkyl, perfluoroalkyl, alkyloxy (e.g. methoxy), oxy carbonyl, vinyl, ethynyl, propynyl, acyl etc.
  • substituent chosen, for example, from a halogen, an amino group, a carboxy group, carbonyl group, carbonylamino group, hydroxy group, azido, cyano, alkyl, cycloalkyl, perfluoroalkyl, alkyloxy (e.g. methoxy), oxy carbonyl, vinyl, ethynyl, propynyl, acyl etc.
  • non-natural heterocyclic base means a base other than uracil, adenine, guanine, cytosine, thymine or hypoxanthine, which does not exist in nature.
  • R 3 represents a cationic group, for example a phosphonium or NR RsR ⁇ group as defined above
  • the counterion can be chosen, for example, from tosylate, halide, nitrate, sulfate, sulfonate, and thiosulfate anions.
  • the present invention also relates to a process for the preparation of the new compounds of formulas (I) as defined above as of their salts in which Li and L 2 , which are identical, represent an oxycarbonyl, thiocarbonyl, carbamate or carbonate group and R 3 represents an NH-R 4 , NR R 5 or NR 4 R 5 R 6 group in which R 4 , R 5 and R ⁇ , identical or different, represent a hydrogen atom or a linear or branched alkyl radical containing from 1 to 5 atoms carbon, or R 3 represents a cyclodextrin residue or a ZW-CO-CH 2 -CH 2 - (- N-CO-CH 2 -CH 2 -) n - N - ⁇ II CH 2 -V- A 2 or - (- CH 2 -CH-) n -
  • CO-V- in which V and W identical or different-represent a bond -O -, - S-, or -NH-, Z can take the meanings of R 3 , Ri and R 2 , n can take the values of 1 at 500 and Ai and A 2 identical or different represent a linear or branched alkyl radical containing from 1 to 5 carbon atoms or linear or branched acyl radical containing from 2 to 5 carbon atoms, characterized in that a derivative is reacted of formula (II)
  • Ts represents a residue of an activating agent of a hydroxyl such as a tosyl or mesyl residue, which is reacted in an acid medium and then with a compound of formula R ⁇ - LR 7 (V) or R 2 -L 2 -R 7 (V) in which Ri, R 2 , - ⁇ and L 2 have the meaning already indicated and R 7 represents a residue of an activating agent such as carbonyldiimidazole, dicyclohexylcarbodiimide, hydroxybenzotriazole, or thiocarbonyldiimidazole, or a halogen atom, to obtain a compound of formula (VI)
  • R 4 , R 5 and R 6 identical or different, represent a hydrogen atom or a linear or branched alkyl or hydoxyalkyl radical containing from 1 to 5 carbon atoms, to obtain the expected compound of formula (I), that isolate if desired.
  • reaction of the derivative of formula (II) with acetone is carried out in the presence of a catalytic amount of an acid such as sulfuric acid
  • reaction of the derivative of formula (III) with an activating agent of a hydroxyl is carried out in pyridine in particular using a sulfonyl halide which is preferably a tosyl halide, mesyl or trifluoromethanesulfonyl such as their chloride or bromide.
  • a sulfonyl halide which is preferably a tosyl halide, mesyl or trifluoromethanesulfonyl such as their chloride or bromide.
  • reaction of the derivative of formula (IV) with the compound of formula (V) or (V) is preceded by acidification with trifluoroacetic acid and is carried out in water.
  • the present invention also relates to a process for the preparation of the new compounds of formula (I) as defined above, as well as their salts, in which Li and L 2 , identical represent an oxycarbonyl, thiocarbonyl, carbamate, or carbonate group and R 3 represents a phosphate, phosphonate, phosphatidylcholine, O- alkylphosphatidylcholine, O-alkylphosphatidylethanolamine, O-alkylphosphatidylethanolamine, O-alkylphosphate, thiophosphate or phosphonium group what is reacted with a compound of formula (III) above with a compound of formula (VIT)
  • X represents an oxygen or sulfur atom
  • Rs and R 9 identical or different represent a radical, linear or cyclic or branched alkyl or O-alkyl containing from 1 to 20 carbon atoms and Hal represents a halogen atom
  • B has the meaning already indicated
  • R 3 represents a phosphate, O-alkylphosphate, phosphonate, thiophosphate or phosphonium group, which is reacted if necessary with a trialkylamine of formula (VII) as defined above, for obtaining a compound of formula (VIII) in which R 3 represents a phosphatidylcholine or phosphatidylethanolamine group, which is then reacted in an acid medium and then with a compound of formula R1-L 1 -R7 (V) or R 2 -L 2 -R 7 (V) in which Ri, R 2 , L1 and L 2 have the meaning already indicated and R represents an activating agent such as carbonyl
  • the reaction of the compound of formula (III) above with the compound of formula (VIT) is carried out in the presence of triethylamine (approximately 0.5 M) in tetrahydrofuran under an inert atmosphere at 0 ° C for one hour and then at room temperature for about 18 h.
  • concentrations preferably used are approximately 0.3 M for the compound of formula (III) and approximately 0.4 M for the compound VII '.
  • the reaction of the compound of formula (VIII) with the trialkylamine (VII) is carried out with a large excess of trialkylamine (approximately 200 equivalents) in the presence of a binary mixture of acetonitrile / tetrahydrofuran approximately 1/1 at approximately 70 ° C for approximately 48 h.
  • concentration preferably used is approximately 0.2 M for the compound of formula (VII).
  • the present invention also relates to a process for the preparation of the new compounds of formula (I) or (la), as defined above, as well as their salts, in which Li and L 2 , together, form a ketal group or thioketal, in which R 3 represents an NH-R 4 , NR 4 R 5 or NR 4 R 5 R6 group in which R 4 , R5 and R 6 , identical or different, represent a hydrogen atom or a linear alkyl radical or branched containing from 1 to 5 carbon atoms, or R 3 represents a cyclodextrin residue or a residue ZW-CO-CH 2 -CH 2 - (- N-CO-CH 2 -CH 2 -) n - N - A ⁇ II CH 2 -V- A 2 or - (- CH 2 -CH-) n - I CO-V- in which V and W, identical or different, represent a bond -0 -, - S-, or -NH-, Z can take
  • Ts represents a residue of an activating agent of a hydroxyl such as a tosyl or mesyl residue, which is reacted with a compound of formula (VII) as defined previously R 4
  • the reaction of the derivative of formula (II) with hentriacontan-16-one is carried out in the presence of a catalytic amount of an acid, such as paratoluenesulfonic acid (APTS),
  • APTS paratoluenesulfonic acid
  • the reaction of the derivative of formula (III ') with an activating agent of a hydroxyl is carried out in pyridine in particular using a sulfonyl halide which is preferably a halide of tosyle, mesyle or trifluorométhanesulfonyle, like their chloride or bromide.
  • a binary solvent such as a tetrahydrofuran / acetonitrile mixture.
  • the present invention also relates to a process for the preparation of the new compounds of formula (I) in which and L 2 , together, form a ketal or thioketal group or of formula (la), as defined above, as well as of their salts, in which R 3 represents a phosphate, phosphonate, phosphatidylcholine, O- alkylphosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine, O- alkylphosphatidylethanolamine, O-alkylphosphate, thiophosphate or phosphonium group, characterized in that a compound of formula (III) is reacted ') above with a compound of formula (VIT) in which X represents an oxygen or sulfur atom, R 8 and R 9 , identical or different, represent a radical, linear or cyclic or branched alkyl or O-alkyl containing from 1 to 20 carbon atoms and Hal represents an atom halogen, to obtain a compound of formula (I) in which Li and L 2
  • R 3 represents a phosphate, O-alkylphosphate, phosphonate, thiophosphate or phosphonium group, which is reacted if necessary with a trialkylamine of formula (VII) as defined above, for obtaining a phosphate alkylamine compound of formula (Ia) in which R3 represents a phosphatidylcholine or phosphatidylethaloamine group, which is isolated if desired; then, if we want to obtain a compound of formula (la) in which B has the meaning already indicated and R 3 represents an O-alkylphosphatidylcholine or O-alkylphosphatidylethanolamine group, a compound of formula R 10 -J is reacted with the meaning already indicated, with a compound (la) in which B has the meaning already indicated and R 3 represents a phosphatidylcholine or phosphatidylethanolamine group.
  • the preferentially used concentrations are approximately 0.3 M for the compound of formula (III ') and approximately 0.4 M for the compound (VIT), the reaction of the compound of formula (la) with trialkylamine (VII) is carried out with a large excess of trialkylamine (approximately 200 equivalents) in the presence of a binary mixture of acetonitrile / tetrahydrofuran approximately 1/1 at approximately 70 ° C for approximately 48 h.
  • the concentration preferably used is approximately 0.2 M for the compound of formula (la).
  • the invention also relates to the use of the compounds of formula (I)
  • - X represents an oxygen or sulfur atom, or a group -CH 2 -
  • B represents a purine or pyrimidine base, such as uracil, adenine, guanine, cytosine, thymine or hypoxanthine, optionally substituted, or a non-natural mono-or bi-cyclic heterocylic base each cycle of which has 4 to 7 links, optionally substituted, - Li and L 2 , identical or different, represent an oxycarbonyl group -O-CO-, thiocarbamate -O-CS-NH- , carbonate -O-CO-O-, carbamate -O-CO-NH-, an oxygen atom, or else, Li and L 2 ⁇ together, form a ketal group of formula or a thiocetal group of formula
  • Ri and R 2 represent a linear or branched alkyl hydrophobic chain containing from 2 to 30 carbon atoms, preferably from 6 to 25 carbon atoms, in particular from 8 to 25 carbon atoms, saturated or partially unsaturated, optionally totally or partially fluorinated, optionally substituted on the chain end carbon by a fluorine atom or by a benzyl or naphthyl ester or ether and R 3 represents a hydroxy, amino group, a phosphate, phosphonate, phosphatidylcholine, O-alkylphosphatidylcholine group , phosphatidylethanolamine, O-alkylphosphatidylethanolamine, thiophosphate, phosphonium, an NH 2 -R 4 group , NHR 4 R 5 or NR 4 R 5 R 6 in which R 4 , R 5 and R ⁇ , which are identical or different, represent a hydrogen atom or a linear or branched alkyl or hydroxyalky
  • said biologically active molecules or macromolecules can be chosen from active principles, nucleic acids such as DNA or RNA molecules, antisense DNA, PNA, messenger RNA, RNA interference (siRNA's), plasmids, duplex oligonucleotides, single-stranded oligonucleotides, triplex oligonucleotides, peptides, polysaccharides, etc.
  • nucleic acids such as DNA or RNA molecules, antisense DNA, PNA, messenger RNA, RNA interference (siRNA's), plasmids, duplex oligonucleotides, single-stranded oligonucleotides, triplex oligonucleotides, peptides, polysaccharides, etc.
  • - anticancer agents such as taxol derivatives, AraC (cytarabine), troxacitabine, navelbine, vinflunine, acronycin and its derivatives , analogs of rebeccamycin, anti-angiogenic molecules, retinoic acid, arsenic, cis platinum and its derivatives, intercalating agents, 5-FU, Idoxuridine (IdU) or DMDC;
  • - antiviral agents such as, for example, cyclic nucleoside derivatives such as BVDU (anti-herpes), TFT (anti-herpes), ribavirin and analogues (anti-HCV,) AZT, ddC, d4T, 3TC, CBV, ddl, abacavir (anti-HIV, anti-HBV), lavidarabine or AraA (anti-HBV, anti-HZV, anti-HSV); acyclic taxol derivatives, AraC (cytar
  • the compounds of formula (I) can also forming covalent complexes, with different stoichiometries, with certain active principles, such as cis-platinum and its derivatives.
  • the compounds of formula (I) above also have very interesting properties. They are capable of forming supramolecular assemblies such as micelles, inverted micelles, liposomes (uni lamellar, multi lamellar, small or giant), hexagonal phases, gel phases, toroids, emulsions, micro emulsions, helices, tubes, fibers or disks, alone or in combination with an active principle or a genetic material, said supramolecular assemblies also being an object of the invention.
  • the use of said assemblies for the transport and / or in-vitro, ex-vivo and in-vivo delivery of biologically active molecules or macromolecules, in particular biologically active molecules or macromolecules as defined above, represents a subsequent subject of the invention.
  • the compounds of formula (I) or said supramolecular assemblies can enter into the formulation of pharmaceutical compositions. These can in particular be in solid form, solutions, emulsions or gels. In these pharmaceutical compositions, they can be present at concentrations by weight generally ranging from 0.01 to almost 100%, in particular from 0.05 to 5%, and from 0.01 to almost 100% for the solutions and emulsions. and from 1 to 50% for gels.
  • the compounds of formula (I) above as well as the supramolecular assemblies as defined above) can be used alone or included in a formulation in which they can represent from 1 to 99%, comprising known amphiphilic compounds, nonionic , for example polyethylene glycol, cationic, anionic, zwitterionic derivatives (DMPC, DLPC, DPPC, DSPC, DOPC, DMPE, DOPE, DPPE, etc.) including cationic lipids (such as DOTAP), polycationic compounds (like the PEI).
  • DOTAP cationic lipids
  • the present application also relates to a composition for the transfer of genes comprising a gene and a compound of formula (I) as defined above.
  • said compound of formula (I) is in the form of a supramolecular assembly as defined above.
  • the above formulations can be used according to different protocols for gene transfer as for transfection as electroporation, particle bombardment, delivery by liposomes, delivery by gel, delivery by vector. no viral and receptor-mediated genes.
  • they can be used in solution or gel, for example as a culture medium, or deposited on a support surface such as on mica or silica in particular for growing cells.
  • the genes can in particular be used in the form of plasmids.
  • the gel form is particularly advantageous for the purposes of the invention.
  • the present application also relates to a method for the transfer of genes in which a gene is transferred into a host organism using a compound of formula (I) as defined above.
  • the compounds of formula (I) and the above supramolecular formulations or assemblies, in particular the gel form can be used for the transfection of nonadherent cells.
  • the invention also relates, according to a subsequent aspect, to the use of compounds of formula (I) above and supramolecular assemblies of said compounds as described above for the delivery and / or transport in vitro, ex vivo and in vivo of marker molecules and / or having biological activity, in particular lanthanide or actinide salts.
  • the supramolecular assemblies of compounds according to the invention mentioned above can be used to complex salts of actinides or lanthanides, in particular salts of cerium, thorium or uranium, in particular in the form of microspheres.
  • said microspheres are formed in an aqueous phase.
  • - B represents cytosine, adenosine or a 6-methoxypurine
  • R 3 represents a hydroxy group
  • active principle also called pro-drug
  • the substituent B may represent a base corresponding to a base present in the chemical structure of said active principle, for example a purine or pyrimidine base, optionally substituted, or an unnatural heterocyclic base, mono- or bicyclic, optionally substituted, for example , triazole, thiazole benzimidazole or pyridine-2-one.
  • 5-fluorouridine 5-FU
  • 5-trifluorouridine TFT
  • 5-lodouridine 5 -IU
  • the compounds of formula (I) can also be used as a carrier structure for a luminescent probe, for example when the substituent B represents a fluorescent molecule, for example a purine derivative such as 2-aminopurine.
  • Preferred compounds for the purposes of the uses mentioned above are compounds of formula (I) in which: X represents an oxygen or sulfur atom, B represents a purine or pyrimidine base such as uracil, adenine, guanine, cytosine, thymine or hypoxanthine, Li and L 2 , identical or different, represent an oxycarbonyl group -O-CO-, thiocarbamate -O-CS-NH-, carbonate -O-CO-O-, carbamate -O-CO-NH-, an oxygen atom, and Ri, R 2 , and R 3 are as defined above.
  • Stage A 5'-dimethoxytrityluridine 2 g of chlorodimethoxytrityl, 1.1 g of uridine and a catalytic amount of N, N-dimethyl aminopyridine (DMAP) are dissolved in 25 ml of pyridine. Mix for 24 h at room temperature. The pyridine is removed under reduced pressure and the resulting crude product is purified on silica gel (eluent DCM / methanol 95/5) to obtain 2.14 g of the expected product.
  • DMAP N, N-dimethyl aminopyridine
  • Stage B 5'-dimethoxytrityl-2 ', 3'-dimyristoyl uridine.
  • 0.50 g of the product obtained in Stage A is dissolved in 100 ml of freshly distilled dichloromethane (DCM), 0.46 g of myristic acid, 0.41 g of dicyclohexylecarbodiimide (DCC), and 0.24 g of N, N-dimethylaminopyridine (DMAP).
  • DCM dichloromethane
  • DCC dicyclohexylecarbodiimide
  • DMAP N, N-dimethylaminopyridine
  • Stage C 2 ', 3'-dimyristoyl uridine An excess of a 3% solution of trichloroacetic acid is dissolved in 50 ml of freshly distilled DCM 0.78 g of the product obtained in Stage B of Example 1 from DCM. The mixture is brought under stirring for 30 min at room temperature under an inert atmosphere. 3 ml of methanol are then added to the reaction mixture. The organic phase is washed 3 times with 20 ml of water, and dried over sodium sulfate. The residual methylene chloride is removed under reduced pressure. It is further dried under very reduced pressure for 1 h. The resulting white powder is then recrystallized from 20 ml of freshly distilled DCM. 0.464 g of the expected product is obtained.
  • Example 2 2 ′, 3′-distearoyl uridine 1.30 g of the product obtained in Stage A of Example 1 are dissolved in 100 ml of freshly distilled DCM, 2.37 g of stearic acid, 1.71 g of DCC, and 1.00 g of DMAP. The mixture is brought under stirring for 48 h at room temperature under an inert atmosphere. After filtration, the organic phase is washed 3 times with 20 ml of water, and dried over sodium sulfate. The residual methylene chloride is removed under reduced pressure. It is further dried under high vacuum for 1 h.
  • the resulting white powder was dissolved in 50 ml of freshly distilled dichloromethane and a 3% excess of trichloroethylacetic acid in DCM is added to the solution under an inert atmosphere. After 15 min, 5 ml of methanol are added to the solution. The organic phase is washed 3 times with 20 ml of water, and dried over sodium sulfate. The solvent is removed under reduced pressure and 1.1 g of the expected product are obtained after crystallization from methylene chloride.
  • Example 3 bis (2 ', 3'-myristoyl) -5' - (phosphocholine) -uridine
  • Stage A 1- (6-hvdroxymethyl-2.2-dimethyltetrahvdro-furo f3.4-d ⁇ 1, 31dioxol-4-yl) -1 H-pyrimidine-2,4-dione
  • 2.33 g of paratoluene sulfonic acid are added to 1g of uridine in 180 ml of anhydrous acetone. After 4 h at room temperature, the acetone is evaporated and the residual crude product is dissolved in 200 ml of ethyl acetate.
  • Stage B Uridine-oxo-dioxaphospholane 30 ml of freshly distilled tetrahydrofuran (THF) and 803 ⁇ l of triethanolamine (TEA) are added to 0.8 g of the compound obtained in Stage A, under an inert atmosphere. The mixture is cooled to 0 ° C. and 414 ⁇ l of 2-chloro-2-oxo-1, 3,2-dioxaphospholane are added dropwise. The reaction mixture is stirred at room temperature for 15 h. Then, the triethanolamine salts are removed by filtration under suction at 0 ° C. Most of the solvent is evaporated under reduced pressure at 0 ° C and
  • Stage C Uridine acetonide phosphocholine 4 ml of anhydrous trimethylamine are condensed at -50 ° C. under an inert atmosphere. 10 ml of dry acetonitrile at -40 ° C and the crude product obtained in stage B are added to the cold trimethylamine. The reaction mixture is stirred at 60 ° C for 48 h. After evaporation of the residual trimethylamine at room temperature and filtration, a solid is isolated. White. The raw material was successively triturated with ethyl acetate and dichloromethane. 1.35 g of the expected product are thus obtained in the form of a hygroscopic solid after drying under very reduced pressure.
  • Stage D Uridine phosphocholine 0.20 g of the compound obtained in Stage C are mixed for 24 h at room temperature in 1.5 ml of 98% formic acid. The excess formic acid is evaporated together with ethanol. Crystallization from a methanol-ethanol binary mixture produces 0.127 g of the expected product in the form of a white hygroscopic solid.
  • RF 0.72 (reverse phase, MeOH / H 2 O: 8/2).
  • Stage E Bis- (2 ', 3'-myristoyl) -5' - (phosphocholine) -uridine 185 mg of myristic acid, 148 mg of DCC and 88 mg of DMAP in 20 ml of anhydrous dimethylformamide. After 70 h at room temperature, the dicyclohexylurea (DCU) is removed by filtration. The solvent is evaporated and the residual solid is triturated twice in 25 ml of ether. 123 mg of expected product, after chromatography (LH 20 DCM / MeOH 5/5). RF: 0.26 (reverse phase, DCM / MeOH 5/5).
  • Example 4 bis- (2 ', 3'-stearoyl) -5' - (phosphocholine) uridine
  • uridine phosphocholine 555 mg of stearic acid, 402 mg of DCC, 238 mg of DMAP in 20 ml are added. anhydrous dimethylformamide. After 72 h at room temperature, the solvent is evaporated and the residual solid is dissolved in 20 ml of methylene chloride. The DCU is removed by filtration and the solvent is evaporated.
  • Example 5 bis- (2 ', 3'-arachidoyl) -5' - (phosphocholine) uridine
  • Example 6 bis- (2 ', 3'-oleoyl) -5' - (phosphocholine) uridine
  • Example 7 O-Ethyl-bis- (2 ', 3'-oleoyl) -5' - (phosphocholine) -uridine (O-Ethyl DOUPC) 90 mg of bis- (2 ', 3'-oleoyl) -5' - (phosphocholine) uridine of Example 6 are dissolved in 2 ml of anhydrous DCM under an inert atmosphere and protected from light. 25 ⁇ l of ethyl triflate are added to the mixture and the reaction medium is stirred, protected from light for 12 h. The solvent is then evaporated and the residual ethyl triflate is removed under reduced pressure.
  • Example 8 Bis- (2 ', 3'-oleoyl) -5' - (phosphocholine) -adenosine (DQAPC) Stage A: 5 '- (phosphocholine) -adenosine 150 mg of 2', 3 '- (isopropylidene) - 5 '- (phosphocholine) -adenosine and 181 mg of paratoluenesulfonic acid monohydrate are dissolved in 25 ml of methanol. The mixture is heated to reflux. After 4 h, the solvent is evaporated under reduced pressure, and the crude product is dissolved in 4 ml of anhydrous ethanol and crystallized after addition of ethyl acetate.
  • Stage B Bis- (2 ', 3'-oleoyl) -5' - (phosphocholine) -adenosine (DOAPC) 172 mg of carbonyl diimidazole are added to 337 ⁇ l of oleic acid dissolved in 5 ml of anhydrous dimethylformamide (DMF) under argon. After 5 h of stirring at room temperature, the reaction medium is transferred to a flask containing 320 mg of 5 'tosylate (phosphocholine) -adenosine and 274 mg of paratoluenesulfonic acid in 5 ml of anhydrous DMF. The mixture is stirred for 24 hours at room temperature under argon (the pH is kept below 7).
  • DMF dimethylformamide
  • the DMF is distilled under reduced pressure and the crude product is purified on an exclusion column, Sephadex LH20, DCM: MeOH 5/5. 123 mg of a highly hygroscopic product are isolated. (Yield: 23%).
  • Example 9 Bis- (2 ', 3'-C ⁇ H5Fr7 ⁇ ) -5' - (phosphocholine) -uridine 720 mg of acid 4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8,9 , 9,10,10,11, 11, 11-heptadecafluoro-undecanoic, 303 mg of DCC and 180 mg of DMAP are added to 200 mg of uridine phosphocholine in 12 ml of anhydrous DMF. After 24 h at room temperature, the DMF is evaporated and the residual solid is dissolved in 20 ml of a dichloromethane /: methanol mixture 1: 1. The DCU is removed by filtration and the solvent is evaporated.
  • Uridine Palmitonide In a 50 ml two-necked flask, 1 g of hentriacontan-16-one (2.22 mmol), 2.7 g of uridine (11, 11 mmol) and 0.42 g of are weighed. APTS (2.22 mmol). The reactor is placed under an atmosphere of anhydrous nitrogen, then 20 ml of anhydrous THF and 1.85 ml of triethyl orthoformate are added. The reaction medium is stirred and brought to reflux. After 18 h, the reaction is stopped by the addition of 0.6 ml of TEA. The reaction medium is poured into 50 ml of water containing 50 g of ice and 4 g of sodium hydrogencarbonate.
  • Example 11 Uridine-oxo-dioxaphospholane palmitonide To 0.5 g of uridine palmitonide obtained in Example 9, 7 ml of freshly distilled THF and 187 ⁇ l of triethylamine are added under an inert atmosphere. The mixture is cooled to 0 ° C. and 109 ⁇ l of 2-chloro-2-oxo-1, 3,2-dioxaphospholane are added dropwise. The reaction mixture is stirred at room temperature for 15 h. Then, the triethylamine salts are removed by filtration under suction at 0 ° C. Most of the solvent is evaporated under reduced pressure at 0 ° C and 3 ml of the residual solution are used directly without purification additional to the next stage.
  • Example 13 Adenosine palmitonide In a 25 ml two-necked flask, 1.17 g of palmitone diethoxycetal (2.22 mmol), 0.975 g of adenosine paratoluenesulfonate (2.22 mmol) and 0.042 g of APTS are placed. , 22 mmol). The reactor is placed under an atmosphere of anhydrous nitrogen, then 8 ml of anhydrous THF and 2 ml of anhydrous dimethylformamide (DMF) are added. The reaction medium is stirred and brought to reflux. After 15 hours, the reaction is stopped by the addition of 5 ml of anhydrous TEA.
  • DMF dimethylformamide
  • the reaction medium is poured into 50 ml of a saturated sodium hydrogen carbonate solution, the aqueous phase is extracted with twice 60 ml of dichloromethane. The organic phase is washed with 30 ml of water, dried over sodium sulfate and the solvent is evaporated under reduced pressure.
  • EXAMPLE 14 Adenosine-oxo-dioxaphospholane palmitonide 8 ml of adenosine palmitonide is added to 0.5 g (0.71 mmol) of adenosine palmitonide.
  • Example 15 Adenosine phosphocholine palmitonide (PAPC)
  • PAPC Adenosine phosphocholine palmitonide
  • 4 ml of anhydrous trimethylamine is condensed at -50 ° C. under an inert atmosphere.
  • 2 ml of dry acetonitrile and 4 ml of crude adenosine-oxo-dioxaphospholane palmitonide obtained in Example 14 are added to the cold trimethylamine.
  • the tube is sealed and the reaction mixture is stirred at 65 ° C. for 48 hours. h.
  • Example 16 Use of 2 ', 3'-dioleoyl-5' - (N, N, N-trimethylammonium) uridine tosylate for transfection
  • Preliminary transfection studies were carried out taking into account the published work [M. C. Pedroso de Lima et al., Advance Drug Delivery Reviews 47 (2001) 277-294]. These tests carried out on cell lines of HCT 116, Calu 6, Hela, HEK 293 types with the plasmid p-TRACER have shown for the 2 ', 3'-dioleoyl-5' - (N, N, N-trimethylammonium) tosylate ) uridine with similar efficacy to that of DOTAP. In addition, cytotoxicity was found to be less or almost nonexistent in the case of 2 ', 3'-dioleoyl-5' - (N, N, N-trimethylammonium) uridine tosylate.
  • Example 17 Formation of a gel usable for transfection 1- A mixture in aqueous phase of the compound (la) Uridine phosphocholine stearonide (SUPC) also called 2 ', 3'-pentatriacontan-18-onide-5' - ( phosphocholine), prepared analogously to the palmitonide PUPC compound of Example 12 (at concentrations between 0.001 and 10%) and of a cationic compound (PEI, lipofectamine, DOTAP, DOTAU etc). The suspension obtained is then heated then cooled over 5 cycles of rise and fall over temperature ranges from -20 ° C to + 60 ° C.
  • SUPC Uridine phosphocholine stearonide
  • DOTAP DOTAU
  • Tm phase transition temperatures
  • the suspension obtained is heated and then cooled over 5 temperature cycles from -20 ° C. to 60 ° C.
  • the transfection can then be carried out as described in D. Luo, K. Haverstick, N. Belcheva, E. Han and WM Saltzman, Macromolecules, 2002, 35, 3456.
  • the plasmid can be added to the mixture obtained at the end of the first step at a temperature below Tm.
  • a gel can be produced from the DSUPC compound of Example 4 or the PUPC compound of Example 12.
  • Example 18 Formation of a gel of a compound of formula (which can be used for transfection The procedure is as in Example 17, except that the plasmid / cationic compound complex is produced independently of the gel. complex is then added at a temperature higher than Tm to the gel previously formed. In this case the gel was produced by suspending SUPC (at concentrations between 0.001 and 10%) in the aqueous phase. heated then cooled over 5 cycles of rise and fall over temperature ranges from -20 ° C. to 60 ° C. According to the same protocol, a gel can be produced from the DSUPC compound of Example 4 or from the PUPC compound from example 12.
  • SUPC at concentrations between 0.001 and 10%
  • Example 19 Preparation of microspheres comprising actinides or lanthanides 25 mg of bis- (2 ', 3'-stearoyl) -5' - (phosphocholine) uridine prepared in Example 4 (DSUPC) lyophilized are hydrated for 2 min at 75 ° C by
  • microspheres can be prepared with cerium III nitrate or uranium nitrate.

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Abstract

Composé de formule (I) où X = O, S ou -CH2- ; B = base purique ou pyrimidique ; L1, L2, = groupement oxycarbonyl, thiocarbamate, carbonate et carbamate, un atome d'oxygène ou forment ensemble un groupement cétal ou thiocétal ; R1, R2 = alkyle linéaire ou ramifié ; R3 = groupement hydroxy, amino, phosphate, phosphonate, 0-alkyl phosphatidylcholine, phosphatidyléthanolamine, 0-alkyl­phosphatidyléthanolamine, 0-alkylphosphate, thiophosphate, phosphonium, NH2-R4, reste cyclodextrine, NHR4R5 ou NR4R5R6 où R4, R5 et R6, = H ou radical alkyle ou hydroxyalkyle ou reste formule (II)­ où V et W = liaison -0-,-S-, ou -NH-, Z = R3, R1 ou R2, n = 1 à 500 et A1 et A2 = alkyle en C1-C5 ou acyle en C1-C5 et, le cas échéant, le contre-ion est choisi parmi tosylate, halogénure, nitrate, sulfate, sulfonate et thiosulfate. L'invention concerne également l'utilisation des composés de formule (I) pour le tarnsport et/ ou la délivrance de molécules ou macromolécules biologiquement actives.

Description

Nouveaux composés amphiphiles, leur procédé de préparation et leurs applications
La présente invention concerne de nouveaux composés amphiphiles, leur procédé de préparation et leurs applications notamment à la transfection. On cherche toujours à mettre au point des vecteurs synthétiques capables de transférer des gènes dans le noyau des cellules. Une méthode de choix est l'introduction de matériel génétique spécifique dans une cellule ou transfection. Mais les composés utilisés à cette fin, comme la formulation de liposome d'un lipide mono cationique (N-[1-(2,3-Dioléoyloxy)]-N,N,N- triméthylammonium propane méthylsulfate dans de l'eau stérile (concentration 1 mg/ml) appelée DOTAP), la polyéthylènimine (PEI) ou la lipofectamine, présentent un faible taux d'efficacité. On peut citer notamment les lipides cationiques dérivés du cholestérol et possédant une tête polaire à base de groupes guanidinium.De plus, ces molécules présentent donc une toxicité non négligeable puisqu'elles peuvent provoquer l'éclatement des membranes cellulaires et en conséquence la mort des cellules. Il serait donc souhaitable de disposer de vecteurs synthétiques capables de transférer des gènes dans le milieu intracellulaire avec un bon taux d'efficacité. Il serait également souhaitable de disposer de tels vecteurs synthétiques pas ou peu toxiques. Il serait aussi souhaitable que le vecteur reste stable au moment du transfert des gènes dans le milieu intracellulaire. II serait par ailleurs souhaitable de disposer de formulations composées de ces vecteurs pour la délivrance et/ou le transport in vitro, ex vivo et in vivo de molécules, macromolécules biologiquement actives telles que des principes actifs, des acides nucléiques, des peptides, des polysaccharides. Enfin, il était également souhaitable de disposer de formulations composées de ces vecteurs permettant la délivrance et/ou le transport in vitro, ex vivo et in vivo de molécules marqueurs et/ou ayant une activité biologique, en particulier des sels de lanthanides ou d'actinides. Or, après de longues recherches, la demanderesse a découvert avec etonnement que de nouveaux composés amphiphiles apportaient une réponse aux problèmes évoqués ci-dessus. C'est pourquoi la présente demande a pour objet un composé de formule (I)
dans laquelle X représente un atome d'oxygène, de soufre, ou un groupe -CH2-, B représente une base purique ou pyrimidique, telle que uracile, adénine, guanine, cytosine, thymine ou hypoxanthine, éventuellement substituée, ou encore une base hétérocylique mono-ou bi-cyclique non naturelle dont chaque cycle comporte 4 à 7 chaînons, éventuellement substituée, Li et L2, identiques ou différents, représentent un groupement oxycarbonyl -O-CO-, thiocarbamate -O-CS-NH-, carbonate -O-CO-O-, carbamate -O-CO-NH-, un atome d'oxygène, ou encore, Li et L2, ensemble, forment un groupement cétal de formule
ou un groupement thiocétal de formule
R-i et R2, identiques ou différents représentent une chaîne alkyle linéaire ou ramifiée renfermant de 2 à 30 atomes de carbone, de préférence de 6 à 25 atomes de carbone, notamment de 8 à 25 atomes de carbone, saturée ou partiellement insaturée, éventuellement totalement ou partiellement fluorée, éventuellement substituée sur le carbone d'extrémité de chaîne par un atome de fluor ou par un ester ou éther benzylique ou naphtylique et R3 représente un groupement hydroxy, amino, un groupement phosphate, phosphonate, phosphatidylcholine, O-alkylphosphatidylcholine, phosphatidyléthanolamine, O-alkyl-phosphatidyléthanolamine, O- alkylphosphate, thiophosphate, phosphonium, un groupement NH2-R4, NHR R5 ou NR R5R6 dans lesquels R4l R5 et R6, identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène ou un radical alkyle ou hydroxyalkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, ou R3 représente un reste cyclodextrine ou un reste Z-W-CO-CH2-CH2-(- N-CO-CH2-CH2-)n- N - AT I I CH2-V- A2 ou -(-CH2-CH-)n-
CO-V- dans lesquels V et W identiques ou différents représentent une liaison -O-,-S-, ou -NH-, Z peut prendre les significations de R3, Ri et R2, et n peut prendre les valeurs de 1 à 500 et AT et A2 identiques ou différents représentent un radical alkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone ou acyle linéaire ou ramifié renfermant de 2 à 5 atomes de carbone, à l'exception des composés dans lesquels : - X représente un atome d'oxygène ,
- R3 représente un groupe hydroxy et soit L1 et L2, identiques représentent un groupement oxycarbonyl, Ri et R2 identiques représentent un alkyle en C2 à Cι7, et B représente la cytosine, l'adénosine ou une 6-méthoxypurine , soit Li et L2 ensemble forment un groupement cétal, Ri et R2 identiques représentent un méthyle et B représente l'adénosine. De préférence, X représente un atome d'oxygène. Des composés préférés de formule (I) préférés sont ceux dans laquelle : X représente un atome d'oxygène ou de soufre, - B représente une base purique ou pyrimidique telle que uracile, adénine, guanine, cytosine, thymine ou hypoxanthine, L-i et L2, identiques ou différents, représentent un groupement oxycarbonyl -O-CO-, thiocarbamate -O-CS-NH-, carbonate -O-CO-O-, carbamate -O-CO-NH-, un atome d'oxygène, - Ri et R2, identiques ou différents représentent une chaîne alkyle linéaire ou ramifiée renfermant de 2 à 30 atomes de carbone, de préférence de 6 à 25 atomes de carbone, notamment de 8 à 25 atomes de carbone, saturée ou partiellement insaturée, éventuellement totalement ou partiellement fluorée, éventuellement substituée sur le carbone d'extrémité de chaîne par un atome de fluor ou par un ester ou éther benzylique ou naphtylique et R3 représente un groupement hydroxy, amino, un groupement phosphate, phosphonate, O-alkylphosphatidylcholine, thiophosphate, phosphonium, un groupement NH2-R , NHR4R5 ou NR4R5R6 dans lesquels R , R5 et Rβ, identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène ou un radical alkyle ou hydroxyalkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, ou R3 représente un reste cyclodextrine ou un reste Z-W-CO-CH2-CH2-(-N-CO-CH2-CH2-)n- N - Ai CH2-V- A2 ou -(-CH2-CH-)n- I CO-V- dans lesquels V et W identiques ou différents représentent une liaison -O-.-S-, ou -NH-, Z peut prendre les significations de R3, Ri et R2, et n peut prendre les valeurs de 1 à 500 et Ai et A2 identiques ou différents représentent un radical alkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone ou acyle linéaire ou ramifié renfermant de 2 à 5 atomes de carbone, à l'exception des composés dans lesquels : - X représente un atome d'oxygène ,
- B représente la cytosine, l'adénosine ou la 6-méthoxypuhne ,
- Li et L2, identiques, représentent un groupement oxycarbonyl,
- Ri et R2 identiques représentent un alkyle en C2 à C17 et - R3 représente un groupe hydroxy. D'autres composés de formule (I) préférés sont ceux dans lesquels R3 représente un groupement amino, un groupement phosphate, phosphonate, phosphatidylcholine, O-alkylphosphatidylcholine, phosphatidyléthanolamine, O- alkyl-phosphatidyléthanolamine, O-alkylphosphate, thiophosphate, phosphonium, un groupement NH2-R , NHR4R5 ou NR R5R6 dans lesquels R4, R5 et R6, identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène ou un radical alkyle ou hydroxyalkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, ou R3 représente un reste cyclodextrine ou un reste Z-W-CO-CH2-CH2-(-N-CO-CH2-CH2-)n- N - A1 CH2-V- A2 ou -(-CH2-CH-)n- I CO-V- dans lesquels V et W identiques ou différents représentent une liaison -0-,-S-, ou -NH-, Z peut prendre les significations de R3, Ri et R2l et n peut prendre les valeurs de 1 à 500 et Ai et A2 identiques ou différents représentent un radical alkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone ou acyle linéaire ou ramifié renfermant de 2 à 5 atomes de carbone. Parmi les composés ci-dessus décrits, on retient notamment les dérivés de formule (I), dans laquelle : - B représente une base purique ou pyrimidique choisie parmi l'uracile, l'adénine, la guanine, la cytosine, la thymine, - X représente un atome d'oxygène ou de soufre, - L1 et L2 représentent un groupement oxycarbonyl, thiocarbamate, carbonate ou carbamate, et sont de préférence identiques, - Ri et R2 représentent un radical undécyle, tridécyle, pentadécyle, heptadécyle, nonadécyle, cis,cis,cis,cis-4,7,10,13-nonadec-tétraènyle, arachidonyle, c s-8-heptadécènyle, - R3 représente un radical aminé, méthylamine, diméthylamine, triméthylamine, O-alkylphosphatidylcholine et - le contre-ion, le cas échéant, est un iodure ou un tosylate. On retient plus particulièrement les composés de formule (I) ci- dessus, dans laquelle : - B représente l'uracile ou l'adénine, - X représente un atome d'oxygène, - Li et L2 représentent un groupement oxycarbonyl, et sont de préférence identiques, et - R3 représente un radical triméthyl aminé ou O-éthyl phosphocholine. Parmi les composés de l'invention, on peut citer de plus
- le tosylate de 2', 3'-dioléoyl-5'-(N,N,N-triméthylammonium) uridine (DOTAU)
- le tosylate de 2', 3'-dioléoyl-5'-(N,N,N-triméthylammonium) adénosine
- le tosylate de2', 3'-dimyristoyl-5'-(N,N,N-triméthylammonium) uridine
- le triflate de 2', 3'-dioléoyl-5'-(O-éthyl phosphocholine) uridine (O-éthylDOUPC).
Selon un aspect préféré, l'invention concerne des composés de formule (I) ci-dessus, dans laquelle Li et L2, ensemble, forment un groupement cétal ou thiocétal, répondant à la formule (la) ci -dessous :
dans laquelle X, B, Ri, R2 et R3 sont tels que définis ci-dessus pour la formule (I), et
- Y représente un atome d'oxygène ou de soufre à l'exception des composés dans lesquels :
- X et Y représentent un atome d'oxygène , B représente l'adénosine, Ri et R2 identiques représentent un méthyle et R3 représente un groupe hydroxy. Des composés de formule (la) préférés sont ceux dans lesquels R3 représente un groupement amino, phosphate, phosphonate, phosphatidylcholine, O-alkylphosphatidylcholine, phosphatidyléthanolamine, O-alkyl- phosphatidyléthanolamine, O-alkylphosphate, thiophosphate, phosphonium, un groupement NH2-R4, NHR R5 ou NR4R5R6 dans lesquels R , R5 et R6, identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène ou un radical alkyle ou hydroxyalkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, ou R3 représente un reste cyclodextrine ou un reste Z-W-CO-CH2-CH2-(-N-CO-CH2-CH2-)n- N - A1 I I CH2-V- A2 ou -(-CH2-CH-)n- I CO-V- dans lesquels V et W identiques ou différents représentent une liaison -O-,-S-, ou -NH-, Z peut prendre les significations de R , Ri et R2, et n peut prendre les valeurs de 1 à 500 et Ai et A2 identiques ou différents représentent un radical alkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone ou acyle linéaire ou ramifié renfermant de 2 à 5 atomes de carbone. Parmi les composés ci-dessus décrits, les dérivés de formule (la) dans laquelle - B représente une base purique ou pyrimidique choisie parmi l'uracile, l'adénine, la guanine, la cytosine, la thymine, - X représente un atome d'oxygène ou de soufre, - Ri et R2 représentent un radical undécyle, tridécyle, pentadécyle, heptadécyle, nonadécyle, cis,cis,cis,cis-4,7,10,13-nonadec-tétraènyle, arachidonyle, c/s-8-heptadécènyle, - R3 représente un radical aminé, méthyl aminé, diméthyl aminé, triméthyl aminé, O-alkyl phosphatidylcholine et - le contre ion, le cas échéant, est un iodure ou un tosylate, sont des composés préférés de l'invention. On retient plus particulièrement les composés de formule (la) ci- dessus dans laquelle - B représente l'uracile ou l'adénine, - X représente un atome d'oxygène, et - R3 représente un radical phosphocholine, O-éthylphosphocholine ou triméthylamine. Parmi les composés préférés de formule (la), on peut citer, de plus : - le 2', 3'- hentriacontan-16-onide-5'-( phosphocholine) uridine - le 2', 3'- hentriacontan-16-onide-5'-( phosphocholine) adénine - le tosylate de 2',3'-hentriacontan-16-onide-5'-(N,N,N-triméthylammonium) uridine - le tosylate de 2',3'-hentriacontan-16-onide-5'-(O-éthylphosphocholine) uridine Dans les formules (I) et (la) définies ci-dessus, n est avantageusement compris entre 1 et 500, de préférence compris entre 1 et 100, notamment compris entre 1 et 50 , tout particulièrement compris entre 1 et 10. Dans les formules (I) et (la) définies ci-dessus, par alkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, on entend par exemple un radical méthyle, éthyle, propyle, i-propyle, n-butyle, i-butyle, tert-butyle, de préférence méthyle ou éthyle. Egalement, dans les formules (I) et (la) ci-dessus, la base purique ou pyrimidique, ou la base hétérocyclique non naturelle peut être substituée par au moins un substituant choisi, par exemple, parmi un halogène, un groupe amino, un groupe carboxy , un groupe carbonyl, un groupe carbonylamino, un groupe hydroxy, azido, cyano, alkyle, cycloalkyle, perfluoroalkyle, alkyloxy (par exemple, méthoxy), oxy carbonyle, vinyl, ethynyl, propynyl, acyle etc. On entend par « base hétérocyclique non naturelle » une base autre que uracile, adénine, guanine, cytosine, thymine ou hypoxanthine, qui n'existe pas dans la nature. Lorsque, dans les formules (I) et (la) définies ci-dessus, R3 représente un groupement cationique, par exemple un groupement phosphonium ou NR RsRβ tel que défini plus haut, le contre-ion peut être choisi, par exemple, parmi les anions tosylate, halogénure, nitrate, sulfate, sulfonate, et thiosulfate.
La présente invention a également pour objet un procédé de préparation des nouveaux composés de formules (I) tels que définis ci-dessus que de leurs sels dans laquelle Li et L2, identiques, représentent un groupement oxycarbonyl, thiocarbonyl, carbamate, ou carbonate et R3 représente un groupement NH-R4, NR R5 ou NR4R5R6 dans lesquels R4, R5 et Rβ, identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène ou un radical alkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, ou R3 représente un reste cyclodextrine ou un reste Z-W-CO-CH2-CH2-(- N-CO-CH2-CH2-)n- N - ^ I I CH2-V- A2 ou -(-CH2-CH-)n-
CO-V- dans lesquels V et W identiques ou différents-représentent une liaison -O-,-S-, ou -NH-, Z peut prendre les significations de R3, Ri et R2, n peut prendre les valeurs de 1 à 500 et Ai et A2 identiques ou différents représentent un radical alkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone ou acyle linéaire ou ramifié renfermant de 2 à 5 atomes de carbone, caractérisé en ce que l'on fait réagir un dérivé de formule (II)
(il) dans laquelle B et X ont la signification déjà indiquée, avec l'acétone pour obtenir un composé de formule (III)
<'">
dans laquelle B et X ont la signification déjà indiquée, que l'on fait réagir avec un agent d'activation d'un hydroxyle comme un halogénure de sulfonyle, pour obtenir un composé de formule (IV)
dans laquelle B et X ont la signification déjà indiquée et Ts représente un reste d'un agent d'activation d'un hydroxyle comme un reste tosyle ou mésyle, que l'on fait réagir en milieu acide puis avec un composé de formule Rι-L R7 (V) ou R2-L2-R7 (V) dans laquelle Ri, R2, -\ et L2 ont la signification déjà indiquée et R7 représente un reste d'un agent activant tel que le carbonyldiimidazole, le dicyclohexylcarbodiimide, l'hydroxybenzotriazole, ou le thiocarbonyldiimidazole, ou un atome d'halogène, pour obtenir un composé de formule (VI)
que l'on fait réagir avec un composé de formule (VII)
dans laquelle R4, R5 et R6, identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène ou un radical alkyle ou hydoxyalkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, pour obtenir le composé de formule (I) attendu, que l'on isole si désiré. Dans des conditions préférentielles de mise en oeuvre du procédé ci-dessus décrit, - la réaction du dérivé de formule (II) avec l'acétone est réalisée en présence d'une quantité catalytique d'un acide tel que l'acide sulfurique, - la réaction du dérivé de formule (III) avec un agent d'activation d'un hydroxyle est réalisée dans la pyridine notamment à l'aide d'un halogénure de sulfonyle qui est de préférence un halogénure de tosyle, de mésyle ou de trifluorométhanesulfonyle comme leur chlorure ou bromure. - la réaction du dérivé de formule (IV) avec le composé de formule (V) ou (V) est précédée d'une acidification par l'acide trifluoroacétique et est réalisée dans l'eau. - la réaction du dérivé de formule (VI) avec un composé de formule (VII) est réalisée dans un solvant binaire comme un mélange tétrahydrofurane/acétonitrile. Les composés de formule (II) sont des dérivés naturels connus appelés nucléosides et non naturels, décrits dans la littérature par exemple par
J.A. Secrist, R.M. Riggs, K.N. Tiwari and J.A. Montgomery dans Synthesis and anti-HIV activity of 4'-thio-2',3'-didéoxynucleosides. J. Med. Chem. 1992, 35(3), p. 533-538." ou pouvant être préparés de manière analogue. La présente invention a également pour objet un procédé de préparation des nouveaux composés de formule (I) tels que définis ci-dessus, ainsi que de leurs sels, dans laquelle Li et L2, identiques représentent un groupement oxycarbonyl, thiocarbonyl, carbamate, ou carbonate et R3 représente un groupement phosphate, phosphonate, phosphatidylcholine, O- alkylphosphatidylcholine, phosphatidyléthanolamine, O-alkyl- phosphatidyléthanolamine, O-alkylphosphate, thiophosphate , thiophosphate ou phosphonium, caractérisé en ce que l'on fait réagir un composé de formule (III) ci-dessus avec un composé de formule (VIT)
dans laquelle X représente un atome d'oxygène ou de soufre, Rs et R9 identiques ou différents représentent un radical, alkyle ou O-alkyle linéaire, cyclique ou ramifié renfermant de 1 à 20 atomes de carbone et Hal représente un atome d'halogène, pour obtenir un composé de formule (VIII) dans laquelle B a la signification déjà indiquée et R3 représente un groupement phosphate, O-alkylphosphate, phosphonate, thiophosphate ou phosphonium, que l'on fait réagir le cas échéant avec une trialkylamine de formule (VII) telle que définie plus haut, pour obtenir un composé de formule (VIII) dans laquelle R3 représente un groupement phosphatidylcholine ou phosphatidyléthanolamine, que l'on fait ensuite réagir en milieu acide puis avec un composé de formule R1-L1-R7 (V) ou R2-L2-R7 (V) dans lesquelles Ri, R2, L1 et L2 ont la signification déjà indiquée et R représente un agent activant tel que le carbonyl diimidazole, le dicyclohexylcarbodiimide, l'hydroxybenzotriazole, ou le thiocarbonyldiimidazole, ou un atome d'halogène, pour obtenir le composé de formule (I) attendu que l'on isole si désiré ; puis, si on veut obtenir un composé de formule (I) dans laquelle B a la signification déjà indiquée et R3 représente un groupement O-alkyl phosphatidylcholine, O-alkyl phosphatidyléthanolamine, on fait réagir un composé de formule Rio-J, dans laquelle R10 représente une chaîne alkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 10 atomes de carbone et J est un groupement activant de type halogénure, tosylate ou triflate avec un composé (I) dans laquelle B a la signification déjà indiquée et R3 représente un groupement phosphatidylcholine ou phosphatidyléthanolamine.
Dans des conditions préférentielles de mise en oeuvre du procédé ci-dessus décrit : - la réaction du composé de formule (III) ci-dessus avec le composé de formule (VIT) est réalisée en présence de triéthylamine (environ 0,5 M) dans le tétrahydrofurane sous atmosphère inerte à 0°C pendant une heure puis à température ambiante pendant environ 18 h. Les concentrations préférentiellement utilisées sont de 0,3 M environ pour le composé de formule (III) et 0,4 M environ pour le composé VII'. - la réaction du composé de formule (VIII) avec la trialkylamine (VII) est réalisée avec un large excès de trialkylamine (environ 200 équivalents) en présence d'un mélange binaire acétonitrile/ tétrahydrofurane environ 1/1 à environ 70°C pendant approximativement 48 h. La concentration préférentiellement utilisée est de 0,2 M environ pour le composé de formule (VII). - la réaction du composé de formule (VIII) à la concentration de 0,05 M avec un composé de formule (V) ou (V) à la concentration de 0,2 M en présence de 0,2 M de dicyclohexylcarbodiimide, de 0,2 M de diméthylaminopyridine dans le dimethylformamide est précédée d'une acidification par de l'HCI 1,2 N dans un mélange méthanol/eau à température ambiante, pour obtenir un composé de formule (I). Dans un deuxième temps la réaction du composé de formule (I) à la concentration de 0,05 M dans le dichlorométhane anhydre sous azote (une atmosphère) et à température ambiante en présence d'un triflate d'alkyle à la concentration de 0,1 M, pendant 24 h pour obtenir un composé de formule (I) ou (la).
La présente invention a également pour objet un procédé de préparation des nouveaux composés de formule (I) ou (la), telles que définies ci-dessus, ainsi que de leurs sels, dans laquelle Li et L2, ensemble, forment un groupement cétal ou thiocétal, dans lesquelles R3 représente un groupement NH-R4, NR4R5 ou NR4R5R6 dans lesquels R4, R5 et R6, identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène ou un radical alkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, ou R3 représente un reste cyclodextrine ou un reste Z-W-CO-CH2-CH2-(-N-CO-CH2-CH2-)n- N - A^ I I CH2-V- A2 ou -(-CH2-CH-)n- I CO-V- dans lesquels V et W, identiques ou différents, représentent une liaison -0-,-S-, ou -NH-, Z peut prendre les significations de R3, Ri et R2, n peut prendre les valeurs de 1 à 500 et AT et A2ι identiques ou différents, représentent un radical alkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone ou acyle linéaire ou ramifié renfermant de 2 à 5 atomes de carbone, caractérisé en ce que l'on fait réagir un dérivé de formule (II) tel que défini précédemment
(il) dans laquelle B et X ont la signification déjà indiquée, avec une cétone de formule Rι-CO-R2 ou un diméthoxycétai de formule Rι-C(OMe)2-R2 pour obtenir un composé de formule (III')
H
("π dans laquelle B et X ont la signification déjà indiquée, que l'on fait réagir avec un agent d'activation d'un hydroxyle comme un halogénure de sulfonyle, pour obtenir un composé de formule (IV)'
dans laquelle B et X ont la signification déjà indiquée et Ts représente un reste d'un agent d'activation d'un hydroxyle comme un reste tosyle ou mésyle, que l'on fait réagir avec un composé de formule (VII) tel que défini précédemment R4
-N. R6 R5 (VII) dans laquelle R , R5 et R6, identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène ou un radical alkyle ou hydoxyalkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, pour obtenir le composé de formule (I) dans laquelle L1 et L2, ensemble, forment un groupement cétal ou thiocétal ou de formule (la) attendu, que l'on isole si désiré. Dans des conditions préférentielles de mise en oeuvre du procédé ci-dessus décrit, - la réaction du dérivé de formule (II) avec la hentriacontan-16-one est réalisée en présence d'une quantité catalytique d'un acide, tel que l'acide paratoluènesulfonique (APTS), - la réaction du dérivé de formule (III') avec un agent d'activation d'un hydroxyle est réalisée dans la pyridine notamment à l'aide d'un halogénure de sulfonyle qui est de préférence un halogénure de tosyle, de mésyle ou de trifluorométhanesulfonyle, comme leur chlorure ou bromure. - la réaction du dérivé de formule (IV) avec un composé de formule (VII) est réalisée dans un solvant binaire comme un mélange tétrahydrofurane/acétonitrile.
La présente invention a également pour objet un procédé de c préparation des nouveaux composés de formule (I) dans laquelle et L2, ensemble, forment un groupement cétal ou thiocétal ou de formule (la), telles que définies ci-dessus, ainsi que de leurs sels, dans lesquelles R3 représente un groupement phosphate, phosphonate, phosphatidylcholine, O- alkylphosphatidylcholine, phosphatidyléthanolamine, O- alkylphosphatidyléthanolamine, O-alkylphosphate, thiophosphate ou phosphonium, caractérisé en ce que l'on fait réagir un composé de formule (III') ci-dessus avec un composé de formule (VIT) dans laquelle X représente un atome d'oxygène ou de soufre, R8 et R9, identiques ou différents, représentent un radical, alkyle ou O-alkyle linéaire, cyclique ou ramifié renfermant de 1 à 20 atomes de carbone et Hal représente un atome d'halogène, pour obtenir un composé de formule (I) dans laquelle Li et L2, ensemble, forment un groupement cétal ou thiocétal ou de formule (la) attendu
dans laquelle B a la signification déjà indiquée et R3 représente un groupement phosphate, O-alkylphosphate, phosphonate, thiophosphate ou phosphonium, que l'on fait réagir le cas échéant avec une trialkylamine de formule (VII) telle que définie plus haut, pour obtenir un composé de type phosphate alkylamine de formule (la) dans laquelle R3 représente un groupe phosphatidylcholine ou phosphatidyléthaloamine, que l'on isole si désiré ; puis, si on veut obtenir un composé de formule (la) dans laquelle B à la signification déjà indiquée et R3 représente un groupement O-alkylphosphatidylcholine ou O-alkylphosphatidyléthanolamine, on fait réagir un composé de formule R10-J, à la signification déjà indiquée, avec un composé (la) dans laquelle B a la signification déjà indiquée et R3 représente un groupement phosphatidylcholine ou phosphatidyléthanolamine.
Dans des conditions préférentielles de mise en oeuvre du procédé ci-dessus décrit : - la réaction du composé de formule (III') ci-dessus avec le composé de formule (VIT) est réalisée en présence de triéthylamine (environ 0,5 M) dans le tétrahydrofurane sous atmosphère inerte à 0°C pendant une heure puis à température ambiante pendant environ 18 h. Les concentrations préférentiellement utilisées sont de 0,3 M environ pour le composé de formule (III') et 0,4 M environ pour le composé (VIT), la réaction du composé de formule (la) avec la trialkylamine (VII) est réalisée avec un large excès de trialkylamine (environ 200 équivalents) en présence d'un mélange binaire acétonitrile/ tétrahydrofurane environ 1/1 à environ 70°C pendant approximativement 48 h. La concentration préférentiellement utilisée est de 0,2 M environ pour le composé de formule (la). Dans un deuxième temps la réaction du composé de formule (la) à la concentration de 0,05 M dans le dichlorométhane anhydre sous azote (une atmosphère) et à température ambiante en présence d'un triflate d'alkyle à la concentration de 0,1 M, pendant 24 h pour obtenir un composé de formule (la).
L'invention concerne également l'utilisation des composés de formule (I)
dans laquelle - X représente un atome d'oxygène, de soufre, ou un groupe -CH2-, B représente une base purique ou pyrimidique, telle que uracile, adénine, guanine, cytosine, thymine ou hypoxanthine, éventuellement substituée, ou encore une base héterocylique mono-ou bi-cyclique non naturelle dont chaque cycle comporte 4 à 7 chaînons, éventuellement substituée, - Li et L2, identiques ou différents, représentent un groupement oxycarbonyl -O-CO-, thiocarbamate -O-CS-NH-, carbonate -O-CO-O-, carbamate -O-CO-NH-, un atome d'oxygène, ou encore, Li et L2ι ensemble, forment un groupement cétal de formule ou un groupement thiocétal de formule
Ri et R2, identiques ou différents représentent une chaîne hydrophobe alkyle linéaire ou ramifiée renfermant de 2 à 30 atomes de carbone, de préférence de 6 à 25 atomes de carbone, notamment de 8 à 25 atomes de carbone, saturée ou partiellement insaturée, éventuellement totalement ou partiellement fluorée, éventuellement substituée sur le carbone d'extrémité de chaîne par un atome de fluor ou par un ester ou éther benzylique ou naphtylique et R3 représente un groupement hydroxy, amino, un groupement phosphate, phosphonate, phosphatidylcholine, O-alkylphosphatidylcholine, phosphatidyléthanolamine, O-alkylphosphatidyléthanolamine, thiophosphate, phosphonium, un groupement NH2-R4, NHR4R5 ou NR4R5R6 dans lesquels R4, R5 et Rβ, identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène ou un radical alkyle ou hydroxyalkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, ou R3 représente un reste cyclodextrine ou un reste Z-W-CO-CH2-CH2-(-N-CO-CH2-CH2-)n- N - A I ! CH2-V- A2 ou -(-CH2-CH-)n- I CO-V- dans lesquels V et W identiques ou différents représentent une liaison -O-,-S-, ou -NH-, Z peut prendre les significations de R3, Ri et R2, et n peut prendre les valeurs de 1 à 500 et Ai et A2 identiques ou différents représentent un radical alkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone ou acyle linéaire ou ramifié renfermant de 2 à 5 atomes de carbone, pour le transport et/ou la délivrance in-vitro, ex-vivo et in-vivo de molécules ou de macromolécules biologiquement actives. En particulier, lesdites molécules ou macromolécules biologiquement actives peuvent être choisies parmi des principes actifs, des acides nucléiques tels que des molécules d'ADN ou d'ARN, d'ADN anti-sens, de PNA, d'ARN messager, d'ARN interférence (siRNA's), des plasmides, des oligonucléotides duplex, des oligonucléotides simple brin, des oligonucléotides triplex, des peptides, des polysaccharides, etc. A titre d'illustrations de principes actifs, on peut citer, par exemple : - des agents anti cancéreux tels que les dérivés du taxol, l'AraC (cytarabine), la troxacitabine, la navelbine, la vinflunine, l'acronycine et ses dérivés, les analogues de la rébeccamycine, les molécules anti-angiogéniques, l'acide rétinoïque, I' arsenic, le cis platine et ses dérivés, les agents intercalants, le 5-FU, l'Idoxuridine (IdU) ou le DMDC ; - des agents antiviraux tels que, par exemple, les dérivés nucléosidiques cycliques tels que BVDU (anti-herpès), TFT (anti-herpès), ribavirine et analogues (anti-HCV,) l'AZT, la ddC, la d4T, la 3TC, la CBV, la ddl, l'abacavir (anti-HIV, anti-HBV), lavidarabine ou l'AraA (anti-HBV, anti-HZV, anti-HSV) ; des dérivés nucléosides acycliques tels que l'acyclovir, le gancyclovir, le penciclovir, le cidofovir, le tenofovir (anti-HSV) ; ou encore d'autres molécules telles que, par exemple, l'nterferon (anti-(HCV), ou les acides nucléiques tels que l'ADN, l'ARN, l'ARNi, les ARN aptamers, les ARN antisens ; - des agents anti-radicaux libres tels que, par exemple, des dérivés polyphénoliques d'origine végétale tels que l'acide gallique, l'acide caféique, l'anthocyane, le resvératrol, les flavonoides etc. Les composés de formule (I) peuvent également former des complexes covalents, avec différentes stoechiométries, avec certains principes actifs, comme par exemple le cis-platine et ses dérivés. Les composés de formule (I) ci-dessus possèdent également de très intéressantes propriétés. Ils sont capables de former des assemblages supramoléculaires tels que des micelles, des micelles inversées, des liposomes (uni lamellaires, multi lamellaires, petits ou géants), phases hexagonales, phases gel, toroïdes, émulsions, micro émulsions, hélices, tubes, fibres ou disques, seuls ou en combinaison avec un principe actif ou un matériel génétique, lesdits assemblages supramoléculaires étant également un objet de l'invention. L'utilisation des dits assemblages pour le transport et/ou la délivrance in-vitro, ex-vivo et in-vivo de molécules ou de macromolécules biologiquement actives, en particulier des molécules ou de macromolécules biologiquement actives telles que définies plus haut, représente un objet ultérieur de l'invention. En vue de cette utilisation, les composés de formule (I) ou lesdits assemblages supramoléculaires peuvent entrer dans la formulation de compositions pharmaceutiques. Celles-ci peuvent notamment se présenter sous forme solide, de solutions, d'émulsions ou de gels. Dans ces compositions pharmaceutiques, ils peuvent être présents à des concentrations en poids allant généralement de 0,01 à près de 100 %, notamment de 0,05 à 5 %, et de 0,01 à près de 100 % pour les solutions et émulsions et de 1 à 50 % pour les gels. Les composés de formule (I) ci-dessus ainsi que les assemblages supramoléculaires tels que définis ci- dessus) peuvent être utilisés seuls ou inclus dans une formulation dans laquelle ils peuvent représenter de 1 à 99 %, comprenant des composés amphiphiles connus, non ioniques, par exemple des dérivés de polyéthylène glycol, cationiques, anioniques, zwitterioniques (DMPC, DLPC, DPPC, DSPC, DOPC, DMPE, DOPE, DPPE, etc. ...) incluant les lipides cationiques (comme le DOTAP), les composés polycationiques (comme le PEI). C'est pourquoi la présente demande a aussi pour objet une composition pour le transfert de gènes comprenant un gène et un composé de formule (I) tel que définie ci-dessus. Avantageusement, ledit composé de formule (I) se trouve sous la forme d'un assemblage supramoléculaire tel que défini plus haut. En vue de leur mise en œuvre, les formulations ci-dessus peuvent être utilisées selon différents protocoles de transfert de gènes comme de transfection comme l'électroporation, le bombardement de particules, la délivrance par liposomes, la délivrance par gel, la délivrance par vecteur non viral et les gènes médiés par des récepteurs. Dans ce but, ils peuvent être utilisés en solution ou gel, par exemple comme milieu de culture, ou déposés sur surface support comme sur mica ou silice notamment pour faire pousser des cellules. Les gènes peuvent notamment être utilisés sous forme de plasmides. La forme gel est particulièrement intéressante aux fins de l'invention . Elle peut être utilisée, par exemple, pour le transport et/ou la délivrance in-vitro, ex-vivo et in-vivo de molécules ou de macromolécules biologiquement actives telles que définies plus haut, en particulier de principes actifs, ou, notamment, pour le transfert de gènes dans un organisme hôte. C'est pourquoi la présente demande a également pour objet un procédé pour le transfert de gènes dans lequel on transfère un gène dans un organisme hôte à l'aide d'un composé de formule (I) tel que défini ci-dessus. Selon un aspect avantageux de l'invention, les composés de formule (I) et les formulations ou assemblages supramoléculaires ci-dessus , en particulier la forme gel, peuvent être utilisées pour la transfection de cellules non adhérentes . L'invention concerne également, selon un aspect ultérieur, l'utilisation de composés de formule (I) ci-dessus et des assemblages supramoléculaires desdits composés tels que décrits plus haut pour la délivrance et/ou le transport in vitro, ex vivo et in vivo de molécules marqueurs et/ou ayant une activité biologique, en particulier des sels de lanthanides ou d'actinides. En particulier, les assemblages supramoléculaires de composés selon l'invention mentionnés plus haut peuvent être utilisés pour complexer des sels d'actinides ou de lanthanides, en particulier des sels de cérium, de thorium ou d'uranium, notamment sous forme de microsphères . Avantageusement, lesdites microsphères sont formées dans une phase aqueuse. Ces structures trouvent des applications intéressantes dans divers domaines, comme par exemple pour la fabrication de nano- ou micro-objets utilisable pour la radiothérapie, par exemple, dans le traitement de tumeurs, par émission d'une radiation létale localisée, ou pour la décorporation d'éléments contaminants comme des éléments radioactifs (élimination par chélation d'éléments contaminants dans un organisme vivant). Dans le cadre de l'utilisation des composés de formule (I) pour le transport et/ou la délivrance in-vitro, ex-vivo et in-vivo de molécules ou de macromolécules biologiquement actives, les composés de formule (I), à l'exception des composés dans lesquels : - X représente un atome d'oxygène ,
- B représente la cytosine, l'adénosine ou une 6-méthoxypurine ,
- Li et L2, identiques représentent un groupement oxycarbonyl ou, ensemble, forment un groupement cétal, et
- R3 représente un groupe hydroxy, peuvent être utilisés en tant que précurseurs de principe actif (également appelés pro-drogue). A cette fin, on peut, par exemple, utiliser les différentes configurations des liaisons du cycle furanosyl, sur lesquelles des groupements supplémentaires peuvent éventuellement être ajoutés ou les groupements existants peuvent être modifiés chimiquement . Alternativement, le substituant B peut représenter une base correspondant à une base présente dans la structure chimique dudit principe actif par exemple une base purique ou pyrimidique, éventuellement substituée, ou encore une base hétérocyclique non naturelle, mono- ou bicyclique, éventuellement substituée, par exemple, le triazole, le thiazole le benzimidazole ou la pyridine-2-one. A titre d'illustration de principes actifs pour lesquels les composés de formule (I) peuvent être utilisés comme pro-drogues, on peut citer, par exemple, la ribavirine (B = 1 ,2,4-triazole-3-carboxamide), le 2- bromo-5,6-dichloro-1 -β-D-ribofuranosyl-benzimidazole(B = benzimidazole), la 5-fluorouridine (5-FU), le 5-trifluorouridine (TFT), le 5-lodouridine (5-IU), le 5-Bromovinyluridine (BVU), la nevitudine (B = 5-(prop-2-yn-1-yl)) ou la thiazofurine (B = thiazole-4-carboxamide) . Les composés de formule (I) peuvent également être utilisés comme structure porteuse d'une sonde luminescente, par exemple lorsque le substituant B représente une molécule fluorescente, par exemple un dérivé de purine comme la 2-aminopurine . Des composés préférés aux fins des utilisations mentionnées ci- dessus sont des composés de formule (I) dans laquelle : X représente un atome d'oxygène ou de soufre, B représente une base purique ou pyrimidique telle que uracile, adénine, guanine, cytosine, thymine ou hypoxanthine, Li et L2, identiques ou différents, représentent un groupement oxycarbonyl -O-CO-, thiocarbamate -O-CS-NH-, carbonate -O-CO-O-, carbamate -O-CO-NH-, un atome d'oxygène, et Ri, R2, et R3 sont tels que définis plus haut.
Les conditions préférentielles relatives aux molécules amphiphiles dérivées de nucléosides, telles que décrites plus haut, s'appliquent également aux autres objets de l'invention visés ci-dessus, notamment aux compositions pharmaceutiques, compositions pour le transfert de gènes, procédés pour le transfert de gènes et utilisations mentionnées ci-dessus. Les exemples qui suivent illustrent la présente demande.
Exemple 1 : 2', 3'- dimyristoyl uridine
Stade A : 5'-diméthoxytrityluridine On dissout, dans 25 ml de pyridine, 2 g de chlorodiméthoxytrityle, 1 ,1 g d'uridine et une quantité catalytique de N,N-diméthyl aminopyridine (DMAP). On mélange pendant 24 h à température ambiante. On élimine sous pression réduite la pyridine et on purifie le brut résultant sur silicagel (éluant DCM/méthanol 95/5) pour obtenir 2,14 g du produit attendu. H NMR (CDCI3) δ in ppm: 3,48 (m, 2H, 2H5'), 3,7 (s, 6H, 2 OCH3), 4,17 (m, 1H, H4'), 4,35 (m, 1H, H3'), 4,42 (m, 1 H, OH), 5,24 (s, 1 H, H2'), 5,31 (d, J=8,2Hz, 1H, CH), 6,00 (m, 1 H, HV), 6,8 (d, J=8,9Hz 4H, Harom), 7,24 (m, 9H, Harom), 7,95 (d, J=8,2Hz, 1H, CH), 8,6(m, 1 H, NH).13C NMR (CDCI3) δ en ppm: 55,25 (OCH3), 61 ,80 (C5'), 69,57 (C3'), 72,90 (C4'), 83,46 (C2'), 86,90 (CV), 90,14 (Ctrit), 102,18 (CH uridine), 113,21 (Carom), 140,43 (CH uridine), 123,82-149,41 (Carom), 151 ,17 (CO, uridine), 158,57 (OCH3), 163,94 (CO, uridine).
Stade B 5'-diméthoxytrityl-2', 3'-dimyristoyl uridine. On dissout, dans 100 ml de dichlorométhane (DCM) fraîchement distillé 0,50 g du produit obtenu au stade A, 0,46 g d'acide myristique, 0,41 g de dicyclohexylecarbodiimide (DCC), et 0,24 g de N,N-diméthylaminopyridine (DMAP). On porte le mélange sous agitation pendant 24 h à température ambiante sous atmosphère inerte. Après filtration, on lave la phase organique 3 fois par 20 ml d'eau, on sèche sur sulfate de sodium. Le dichlorométhane résiduel est éliminé sous pression réduite. Après chromatographie sur silicagel (éluant DCM / méthanol 95/5), on obtient 79 g du produit attendu. 1H NMR (CDCI3) δ in ppm : 0,8 (t, J = 7Hz, 6H, 2 CH3), 1 ,2 (m,
40H, 20CH2), 2,3 (m, 4H, 2CH2), 3,4 (m, 2H, 2H5'), 3,8 (m, 6H, 2 OCH3), 4,2 (s, 1 H, H4'), 5,25 (m, 2H, CH et H2'), 5,6 (m, 1H, H3'), 6,2 (m, 1 H, HT), 6,8 (d, J = 9Hz 4H, Harom), 7,24 (m, 9H, Harom), 7,7 (d, J = 8 Hz, 1H, CH), 8,2 (m, 1 H, NH)
Stade C : 2',3'-dimyristoyl uridine On dissout, dans 50 ml de DCM fraîchement distillé 0,788 g du produit obtenu au stade B de l'exemple 1 , un excès de d'une solution à 3% d'acide trichloracétique dans du DCM. On porte le mélange sous agitation pendant 30 min à température ambiante sous atmosphère inerte. 3 ml de méthanol sont ensuite ajoutés au mélange réactionnel. On lave la phase organique 3 fois par 20 ml d'eau, et on sèche sur sulfate de sodium. Le chlorure de méthylène résiduel est éliminé sous pression réduite. On sèche encore sous pression très réduite pendant 1 h. La poudre blanche résultante est ensuite recristallisée dans 20 ml de DCM fraîchement distillé.0,464 g du produit attendu est obtenu. 1H NMR (CDCI3) δ en ppm: 0,8 (t, J=6,6Hz, 6 H, 2CH3), 1 ,2 (m, 40H, 20CH2), 2,3 (m, 4H, 2CH2), 3,4 (m, 1 H, OH), 3,84 (dd, J=12Hz, J=2Hz, 1 H, H5'), 3,93 (dd, 1H, H5'), 4,17 (m, 1H, H4'), 5,27 (s, 1H, H2'), 5,44 (m, 1H, H3'), 5,74 (dd, J=8Hz, J=2Hz, 1 H, CH), 6,00 (m, 1 H, HV), 7,65 (d, J=8Hz, 1 H, CH), 8,2(m, 1 H, NH).13C NMR (CDCI3) δ en ppm: 14,07 (CH3), 22,65 (CH2), 24,67 (CH2), 24,87 (CH2), 29,04-29,62 (CH2), 31 ,88 (CH2), 33,83 (CH2CO), 33,99 (CH2CO), 61 ,80 (C5'), 71 ,04 (C3'), 72,90 (C4'), 83,66 (C2'), 87,61 (CV), 103,15 (CH), 140,71 (CH), 150,40 (CO, uridine), 163,06 (CO, uridine), 172,46 (CO, ester), 172,84 (CO, ester). High Resolution MS: [M+H]+, théorique m/z=665,4663, observé m/z=665.4731 .
Exemple 2 : 2',3'-distéaroyl uridine On dissout, dans 100 ml de DCM fraîchement distillé 1 ,30 g du produit obtenu au stade A de l'exemple 1 , 2,37 g d'acide stéarique, 1 ,71 g de DCC, et 1 ,00 g de DMAP. On porte le mélange sous agitation pendant 48 h à température ambiante sous atmosphère inerte. Après filtration, on lave la phase organique 3 fois par 20 ml d'eau, et on sèche sur sulfate de sodium. Le chlorure de méthylène résiduel est éliminé sous pression réduite. On sèche encore sous vide poussé pendant 1 h. La poudre blanche résultante a été dissoute dans 50 ml de dichlorométhane fraîchement distillé et un excès de 3 % d'acide trichloréthylacetique dans le DCM est ajouté sous atmosphère inerte à la solution. Après 15 min, on ajoute 5 ml de méthanol dans la solution. La phase organique est lavée 3 fois avec 20 ml d'eau, et séchée sur sulfate de sodium. On élimine le solvant sous pression réduite et on obtient 1 ,1 g du produit attendu après cristallisation dans le chlorure de méthylène. 1H NMR (CDCI3) δ en ppm H NMR (CDCI3) δ en ppm : 0,8 (t, J=6,6Hz, 6 H, 2CH3), 1 ,2 (m, 60H, 30CH2), 2,3 (m, 4H, 2CH2), 3,6 (m, 1 H, OH), 3,85 (dd, J=12,1 Hz, J=2,2Hz, 1H, H5'), 3,93 (dd, 1 H, H5'), 4,17 (d, , J=2,2Hz, 1 H, H4'), 5,28 (s, 1 H, H2'), 5,44 (m, 1 H, H3'), 5,75 (d, J=8,2Hz, 1H, CH), 6,00 (m, 1H, HV), 7,7 (d, J=8,2Hz, 1 H, CH), 8,4(m, 1H, NH).13C NMR NMR (CDCI3) δ en ppm : 14,01 (CH3), 22,65 (CH2), 24,75 (CH2), 24,88 (CH2), 29,09-29,68 (CH2), 31 ,91 (CH2), 33,84 (CH2CO), 34,04 (CH2CO), 61 ,94 (C5'), 70,84 (C31), 72,91 (C4'), 83,54 (C2'), 88,17 (CV), 103,20 (CH), 140,49 (CH), 150,21 (CO, uridine), 162,45 (CO, uridine), 172,36 (CO, ester), 172,76 (CO, ester). High Resolution MS: [M-H], théorique m/z=775,5915, observé m/z=775,5874.
Exemple 3: bis(2',3'-myristoyl)-5'-(phosphocholine)-uridine Stade A : 1-(6-hvdroxyméthyl-2.2-diméthyltétrahvdro-furo f3.4-dïï1 ,31dioxol- 4-yl)-1 H-pyrimidine-2,4-dione On ajoute 2,33 g d'acide paratoluène sulfonique à 1g d'uridine dans 180 ml d'acétone anhydre. Après 4 h à la température ambiante, on évapore l'acétone et le produit brut résiduel est dissout dans 200 ml d'acétate d'éthyle. La phase organique est lavée trois fois avec 20 ml d'une solution aqueuse à 10 % d'hydrogénocarbonate, puis séchée sur sulfate de sodium. Le solvant est éliminé sous pression réduite. On obtient ainsi 0,179 g d'une poudre blanche correspondant aux propriétés attendues. RF = 0,58 (DCM/méthanol 9/1) RMN 1H (300 MHz, DMSO) : δ 1 ,27 (s, 3H, CH3), 1 ,49 (s, 3H, CH3), 3,34 (m, 1H, H5), 3,58 (m, 1H, H5), 4,07 (m, 1 H, H4), 4,75 (m, 1 H, H2), 4,91 (m, 1 H, Hz , 5,09 (m, 1 H, OH), 5,64 (d, 1 H, J = 8,1 Hz, H6), 5,84 (m, 1H, Hr), 7,80 (d, 1 H, J = 9,0 Hz, H5), 11 ,37 (m, 1 H, NH)
Stade B : Uridine-oxo-dioxaphospholane On ajoute, à 0,8 g du composé obtenu au stade A, 30 ml de tétrahydrofuranne (THF) fraîchement distillé et 803 μl de triéthanolamine (TEA) sous atmosphère inerte. Le mélange est refroidi à 0°C et on ajoute goutte à goutte 414 μl de 2-chloro-2-oxo-1 ,3,2-dioxaphospholane. Le mélange réactionnel est placé sous agitation à température ambiante pendant 15 h. Ensuite, les sels de triéthanolamine sont éliminés par filtration sous aspiration à 0°C. La plupart du solvant est évaporée sous pression réduite à 0°C et
8 ml de la solution résiduelle sont directement utilisés sans purification supplémentaire au stade suivant.
Stade C : Uridine acétonide phosphocholine On condense 4 ml de triméthylamine anhydre à -50°C sous atmosphère inerte. On ajoute à la triméthylamine froide 10 ml d'acétonitrile sec à -40°C et le produit brut obtenu au stade B. On maintient le mélange réactionnel sous agitation à 60°C pendant 48 h. Après évaporation de la triméthylamine résiduelle à température ambiante et filtration, on isole un solide blanc. Le matériau brut a été trituré successivement avec de l'acétate d'éthyle et du dichlorométhane. On obtient ainsi 1 ,35 g du produit attendu sous forme d'un solide hygroscopique après séchage sous pression très réduite. RF : 0,50 (phase reverse, MeOH/H2O : 8/2). 1H NMR (300 MHz, DMSO) : δ 1 ,29 (s, 3H, CH3), 1 ,49 (s, 3H, CH3), 3,15 (s, 9H, N(CH3)3), 3,56 (t, 2H, J = 4,2 Hz, NCH2), 3,83 (t, 2H, J = 3,9 Hz, CH2O), 4,06 (m, 2H, H5), 4,17 (q, 1 H, J = 7,9/3,6 Hz, H4), 4,81 (m, 1H, H2 or H3), 4,94 (m, 1 H, H2 or H3), 5,62 (d, 1 H, J = 8,1 Hz, H6), 5,84 (d, 1 H, J = 2,4 Hz, Hr), 7,86 (d, 1 H, J = 8,1 Hz, H5). 13C NMR (75 MHz, DMSO) : δ 26,39 (CH3), 28,25 (CH3), 54,30 (N(CH3)3), 59,63 (d, J = 5,2 Hz, NCH2), 65,68 (CH2O), 66,62 (C5<), 82,13 (Cz), 84,73 (C2), 86,49 (d, J = 7,1 Hz, C4), 92,71 (d ), 103,10 (C5), 114,22 (OCO), 143,58 (C6), 151 ,64 (C2), 164,50 (C4). 31P NMR (121 MHz, CD3OD) : -0,537 ppm. Haute résolution FAB MS (MH+) (théorique = 450,1641 , observé = 450,1634)
Stade D : Uridine phosphocholine On mélange pendant 24 h à température ambiante 0,20 g du composé obtenu au stade C dans 1 ,5 ml d'acide formique à 98 %. L'excès d'acide formique est évaporé en même temps que de l'éthanol. La cristallisation dans un mélange binaire méthanol-éthanol produit 0,127 g du produit attendu sous forme d'un solide hygroscopique blanc. RF : 0,72 (phase inverse, MeOH/H2O : 8/2). 1H NMR (300 MHz, D2O) : δ 3,09 (s, 9H, N(CH3)3), 3,55 (m, 2H, NCH2), 3,99 (m, 1 H, H3), 4,06 (m, 1H, H4), 4,12 (m, 1H, H2), 4,19 (m, 4H, CH2O et Hs), 5,78 (m, 2H, Hr et H6), 7,73 (d, J = 8,1 Hz, H5). 3C NMR (75 MHz, D2O) : δ 49,59 (N(CH3)3) 54,67 (N(CH3)3), 60,25 (d, J = 4,8 Hz, NCH2), 65,40 (d, J = 5,7 Hz, CH2O), 66,67 (C5), 70,07 (C3), 74,32 (C2), 83,38 (CV), 89,79 (C ), 103,09 (C5), 142,26 (C6), 152,30 (C2), 166,77 (C4). 3 P NMR (121 MHz, D2O) : 0,392 ppm.
Stade E : Bis-(2',3'-myristoyl)-5'-(phosphocholine)-uridine On ajoute à 100 mg du produit obtenu au stade D, 185 mg d'acide myristique, 148 mg de DCC et 88 mg de DMAP dans 20 ml de diméthylformamide anhydre. Après 70 h à la température ambiante, la dicyclohexylurée (DCU) est éliminé par filtration. Le solvant est évaporé et le solide résiduel est trituré deux fois dans 25 ml d'éther. On obtient 123 mg du produit attendu, après chromatographie (LH 20 DCM/MeOH 5/5). RF: 0.26 (phase inverse, DCM/MeOH 5/5). 1H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,85 (t, j = 7,2 Hz, 6H, CH3), 1 ,23 (m, 40H, CH2), 1 ,54 (quint, ; = 10,2 / 7,2 Hz, 4H, CH2CH2CO2), 2,31 (m, 4H, CH2CO2), 3,39 (s, 9H, N(CH3)3), 3,91 (m, 2H, CH2N), 4,12 (m, 2H, CH2O), 4,21 (m, 2H, Hs), 4,37 (m, 1H, H4), 5,48 (m, 2H, H2 and H3), 5,72 (d, / = 8,1 Hz, 1H, Hi), 5,93 (d, = 5,4 Hz, 1 H, H6), 7,82(d, / = 8,0 Hz, 1 H, H5). 31P NMR (121 MHz, CDCI3) : -0,193 ppm. High-resolution FAB MS (MH+) (théorique = 830,5296, observé = 830,5274)
Exemple 4 bis-(2',3'-stéaroyl)-5'-(phosphocholine) uridine On ajoute à 200 mg d'uridine phosphocholine, 555 mg d'acide stéarique, 402 mg de DCC, 238 mg de DMAP dans 20 ml de diméthylformamide anhydre. Après 72 h à la température ambiante, le solvant est évaporé et le solide résiduel est dissous dans 20 ml de chlorure de méthylène. Le DCU est éliminé par filtration et le solvant est évaporé. Le produit brut est purifié par chromatographie d'exclusion (LH 0, DCM/méthanol 5/5). On obtient 175 mg du produit attendu (RF = 0,17) (phase inverse DCM/méthanol 5/5).
Exemple 5 bis-(2',3'-arachidoyl)-5'-(phosphocholine) uridine On opère comme à l'exemple 3, et à partir de 611 mg d'acide arachidique, 402 mg de DCC, 238 mg de DMAP et 200 mg d'uridine phosphocholine, on obtient 73 mg du produit attendu (RF = 0,15) (phase inverse DCM/méthanol 5/5).
Exemple 6 bis-(2',3'-oléoyl)-5'-(phosphocholine) uridine On opère comme à l'exemple 3 mais sous atmosphère inerte et à l'abri de la lumière, et à partir de 619 μl d'acide oléique, 402 mg de DCC, 238 mg de DMAP et 200 mg d'uridine phosphocholine, on obtient après 72 h 150 mg du produit attendu (RF = 0,30) (phase inverse DCM/méthanol 5/5). Dans ce cas, le mélange est effectué à l'abri de la lumière. 1H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0.76 (t, j = 6.8 Hz, 6H, CH3), 1.15 (m, 40H, CH2), 1.45 (m, 4H, CH2CH2CO2), 1.89 (m, 8H, CH2CHCH), 2.18 (q, J = 16.8/8.7 Hz, 4H, CH2CO2), 3.31 (s, 9H, N(CH3)3), 3.67 (m, 2H, CH2N), 4.96 (m, 1H, Hs), 4.08 (m, 1 H, H5), 4.13 (m, 1H, H4), 4.22 (m, 2H, CH2OP), 5.22 (m, 4H, CH=CH), 5.44 (m, 2H, H2. et H3 <), 5.63 (m, 1 H, H,1), 5.67 (m, 1H, H6), 7.61 (d, ; = 7.7 Hz, 1 H, H5), 11.01 (s, 1 H, NH).31P NMR (121 MHz, CDCI3) : -0.807 ppm.
Exemple 7: O-Ethyl-bis-(2',3'-oléoyl)-5'-(phosphocholine)-uridine (O-Ethyl DOUPC) 90 mg de bis-(2',3'-oléoyl)-5'-(phosphocholine) uridine de l'exemple 6 sont solubilisés dans 2 ml de DCM anhydre sous atmosphère inerte et à l'abri de la lumière. 25 μl de triflate d'éthyle sont ajoutés au mélange et le milieu réactionnel est agité à l'abri de la lumière pendant 12 h. Le solvant est ensuite évaporé et le triflate d'éthyle résiduel est enlevé sous pression réduite. Le produit brut obtenu est purifié par chromatographie sur silice (Silicagel : 1 g, DCM/MeOH 9/1). 60,4 mg de produit pur sont isolés, (rendement : 56 %). RF (deux diastéréoisomères ) : 0,20 et 0,18 (DCM/MeOH 9/1). 1 H NMR (300 MHz, CDCI3) : δ 0,87 (t, j = 6,2 Hz, 6H, CH3), 1.26 (m, 43H, (CH2)n, OCH2CH3), 1 ,57 (m, 4H, CH2CH2CO2), 2,00 (m, 8H, CH2CH=CH), 2,32 (m, 4H, CH2CO2), 3,20 (s, 9H, N(CH3)3), 3,75 (m, 2H, CH2N), 4,26 (m, 4H, H5' and OCH2CH3), 4,44 (m, 1H, H4'), 4,57 (m, 2H, CH2OP), 5,33 (m, 4H, CH=CH), 5,51 (m, 2H, H2' and H3'), 5.70 (m, 1H, H5), 5,94 (m, 1 H, HT), 7,69 (m, 1 H, H6). 13C NMR (75,468 MHz, CDCI3): δ 14,07 (CH3), 15,71 (OCH2CH3), 22,66 (CH2CH3), 24,68 (CH2CH2C=O), 24,75 (CH2CH2C=O), 27,20 (CH2CH), 29,14-29,74 (CH2)n, 31 ,88 (CH2CH2CH3), 33,76 (CH2C=O), 54,14 N+(CH3)3, 59,97 (m, 2C, CH2OP), 64,46 (C5'), 65,97 (N+CH2), 70,25 (C3'), 72,69 (C2'), 80,87 (C4'), 89,91 (CV), 102,89 (C5), 129,61 (CHCH2), 129,99 (CHCH2), 141 ,86 (C6), 150,51 (C2), 164,11 (C4), 172,74 (C=O), 172,79 (C=O). 31 P NMR (121 MHz, CDCI3) : -4,096 ppm.
Exemple 8: Bis-(2',3'-oléoyl)-5'-(phosphocholine)-adénosine (DQAPC) Stade A : 5'-(phosphocholine)-adénosine 150 mg de 2',3'-(isopropylidène)-5'-(phosphocholine)-adénosine et 181 mg d'acide paratoluènesulfonique monohydrate sont solubilisés dans 25 ml de méthanol. Le mélange est chauffé au reflux. Après 4 h, le solvant est évaporé sous pression réduite, et le produit brut est dissous dans 4 ml d'éthanol anhydre et cristallisé après addition d'acétate d'éthyle. Le surnageant est enlevé par décantation. Après séchage sous pression réduite, 113 mg d'une poudre blanche hygroscopique sont isolés. (Rendement : 59 %). RF : 0,75 (phase inverse, MeOH/H2O : 8/2). 1 H NMR (300 MHz, DMSO) : δ 2,28 (s, 3H, CH3), 3,11 (s, 9H, N(CH3)3), 3,63 (t, 2H, J = 4,9 Hz, NCH2), 4,16 (m, 2H, H4' and H3'), 4,22 (m, 1 H, H2'), 4,30 (m, 2H, H5'), 4,56 (t, 2H, J = 4,9 Hz, CH2O), 6,00 (d, 1 H, J = 5,1 Hz, HT), 7,12 (d, 2H, J = 7,7 Hz, H arom), 7,51 (d, 2H, J = 8,1 Hz, H arom), 8,53 (s, 1H, H8), 8,68 (s, 1H, H2). 13C NMR (75 MHz, DMSO) : δ 20,74 (CH3), 52,98 (N(CH3)3), 59,86 (C5'), 64,67 (CH2O), 66,05 ( NCH2), 69,95 (C3'), 73,67 (C2'), 83,06 (C4'), 87,78 (C1')r 118,66 (C5), 125,43 (2C, CH arom.), 128,15 (2C, CH arom.), 137,98 (C8), 142,01 (C arom.), 145,06(C arom.), 145,39 (C4), 148,33 (C2), 150,27 (C6). 31P NMR (121 MHz, DMSO) : -1 ,557 ppm. High resolution FAB MS (MH+) (théorique = 433,1601 , observé =433,1616).
Stade B : Bis-(2',3'-oléoyl)-5'-(phosphocholine)-adénosine (DOAPC) 172 mg de carbonyle diimidazole sont ajoutés à 337 μl d'acide oléique dissous dans 5 ml de diméthylformamide (DMF) anhydre sous argon. Après 5 h d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est transféré dans un ballon contenant 320 mg de tosylate de 5'-(phosphocholine)-adénosine et 274 mg d'acide paratoluènesulfonique dans 5 ml de DMF anhydre. Le mélange est agité pendant 24 heures à température ambiante sous argon (le pH est maintenu en dessous de 7). Le DMF est distillé sous pression réduite et le produit brut est purifié sur colonne d'exclusion, Sephadex LH20, DCM:MeOH 5/5. 123 mg d'un produit hautement hygroscopique sont isolés. (Rendement : 23 %). RF : 0,16 (phase inverse, DCM/MeOH: 5/5). 1 H NMR (300 MHz, CDCI3): δ 0,85 (m, 6H, CH3), 1 ,25 (m, 40H, CH2), 1 ,58 (m, 4H, CH2CH2CO2), 1 ,98 (m, 8H, CH2CH=CH), 2,17 (m, 4H, CH2CO2), 3,20 (s, 9H, N(CH3)3), 3,66 (m, 2H, CH2N+), 4,03 (m, 2H, H5'), 4,24 (m, 3H, H4' et CH2OP), 5,32 (m, 4H, CH=CH), 5,56 (m, 2H, H2' et H3'), 5,81 (m, 1 H, H5), 6,12 (m, 1H, HT), 7,27 (m, 2H, NH2), 8,22 (s, 1H, H8), 8,63 (s, 1H, H2). 13C NMR (75,468 MHz, CDCI3): δ 14,.07 (CH3), 22,62 (CH2CH3), 24,84 (CH2CH2C=O), 24,90 (CH2CH2C=O), 27,18 (CH2CH), 29,03-29,72 (CH2)n, 31 ,85 (CH2CH2CH3), 33,80 (CH2C=O), 33,99 (CH2C=O), 54,13 N+(CH3)3, 59,35 (CH2O), 63,50 (C5'), 65,97 (N+CH2), 69,36 (C3'), 71 ,80 (C2'), 82,94 (C4'), 85,06 (CV), 118,96 (C5), 129,53 (CHCH2), 129,99 (CHCH2), 139,23 (C8), 149,97 (C4), 153,29 (C2), 155,98 (C6), 172,28 (C=O), 172,54 (C=O). 31P NMR (121 MHz, CDCI3) : -0,810 ppm. FAB+ MS (MH+): 961.
Exemple 9: Bis-(2',3'-Cι H5Fr7θ)-5'-(phosphocholine)-uridine 720 mg d'acide 4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,9,9,10,10,11 ,11 ,11- heptadécafluoro-undécanoique, 303 mg de DCC et 180 mg de DMAP sont ajoutés à 200 mg d'uridine phosphocholine dans 12 ml de DMF anhydre. Après 24 h à température ambiante, le DMF est évaporé et le solide résiduel est dissous dans 20 mL d'un mélange dichlorométhane/:méthanol 1 :1. La DCU est éliminée par filtration et le solvant est évaporé. Le produit brut est purifié sur colonne d'exclusion (LH 20, DCM/MeOH 5/5). 280 mg de produit sont isolés. RF: 0,30 (phase inverse, DCM/MeOH 5/5). 1 H NMR (300,130 MHz, CD3OD): δ 2,31 (m, 4H, -CF2CH2-), 3,64 (m, 4H, -CO2CH2-), 4,23 (s, 9H, N(CH3)3), 4,65 (m, 2H, CH2N+), 5,09 (m, 2H, H5'), 5.28 (m, 2H, CH2O), 5,40 (m, 1H, H4'), 6,47 (m, 1 H, H3'), 6,58 (m, 1H, H2'), 6,79 (d, j = 8.12 Hz, 1 H, H5), 7,14 (d, j = 6,61 Hz, 1 H, HT), 8,90 (d, j = 8,12 Hz, 1 H, H6). 13C NMR (75,468 MHz, CD3OD): δ 26,03 (-C=OCH2-), 26,99 (-C=OCH2-), 31 ,91 (-CF2CH2-), 33,22 (-CF2CH2-), 54,78 N+(CH3)3, 60,64 (CH2O), 66,13 (C5'), 67,58 (N+CH2), 73,08 (C3'), 74,97 (C2'), 83,12 (C4'), 87,89 (CV), 103,93 (C5), 106,25 (-CF2-), 107,68 (-CF2-), 108,05 (-CF2-), 108,15 (-CF2-), 111 ,60 (-CF2-), 112,17 (-CF3), 112,67 (-CF2-), 116,62 (-CF2-), 142,30 (C6), 152,40 (C2), 165,82 (C4), 171 ,73 (-C=O-), 171 , .94 (-C=O-). 19F NMR (282 MHz, CD3OD): -82,81 (t, j = 10,31 Hz , 3F, CF3), -82,94 (t, j = 10,31 Hz , 3F, CF3), -116,25 (m, 4F, CF2), -123,38 (m, 12F, CF2), -124,22 (m, 4F, CF2), - 124,92 (m, 4F, CF2), -127,78 (m, 4F, CF2). 31PNMR (121 ,495 MHz, CD3OD) : - 0,557 ppm. FAB+ MS (MH+): 1358.
Exemple 10: Uridine palmitonide Dans un ballon bicol de 50 ml, on pèse 1 g de hentriacontan-16- one (2,22 mmoles), 2,7 g d'uridine (11 ,11 mmoles) et 0,42 g d'APTS (2,22 mmoles). Le réacteur est placé sous atmosphère d'azote anhydre on ajoute alors 20 ml de THF anhydre et 1 ,85 ml de triéthyl orthoformiate. Le milieu réactionnel est agité et porté à reflux. Après 18 h, la réaction est stoppée par l'addition de 0,6 ml de TEA. Le milieu réactionnel est versé dans 50 ml d'eau contenant 50 g de glace et 4 g d'hydrogénocarbonate de sodium. Après 15 min d'agitation à température ambiante, la phase aqueuse est extraite par deus fois 75 ml de dichlorométhane. La phase organique est séchée sur sulfate de sodium et le solvant est évaporé sous pression réduite. Le produit brut obtenu est élue dans 4 ml de dichlorométhane et on ajoute du méthanol jusqu'à l'apparition d'un précipité, on laisse cristalliser le produit à température ambiante. Le produit cristallisé est récupéré par filtration, après séchage sous pression réduite on obtient 0,740 g d'uridine palmitonide sous la forme d'une poudre blanche. (Rendement = 49%).
1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ en ppm : 0,87 (t, J=6,6Hz, 6 H, 2CH3), 1 ,24 (m, 48H, 24CH2), 1 ,41 (m, 4H, 2CH3CH2), 1,56 (m, 2H, CCH2), 1 ,73 (m, 2H, CCH2), 3,05 (m, 1H, OH), 3,80 (dd, J=12,0Hz, J=3,6Hz, 1H, H5'), 3,91 (dd, J=12,0Hz, J=2,7Hz 1 H, H5'), 4,28 (m, 1 H, H4'), 4,95 (dd, J=6,6Hz, J=3,6Hz, 1 H, H3'), 5,04 (dd, J=6,6Hz, J=2,7Hz, 1 H, H2'), 5,55 (d, J=2,7Hz, 1H, HV), 5,72 (d, J=8,1 Hz, 1H, CH), 7,33 (d, J=8,1Hz, 1H, CH), 9,43 (m, 1 H, NH). 13C NMR NMR (75 MHz, CDCI3) δ en ppm : 14,10 (CH3), 22,70 (CH2), 23,54 (CH2), 24,15 (CH2), 29,33- 29,81 (CH2), 31,89 (CH2), 36,85 (CH2COO), 36,98 (CH2COO), 62,65 (C5'), 80,29 (C4'), 83,84 (C2'), 87,29 (C3'), 96,34 (CV), 102,56 (CH), 118,39 (OCO), 143,16 (CH), 150,32 (CO), 163,33 (CO). FAB+ SM=677.
Exemple 11 : Uridine-oxo-dioxaphospholane palmitonide On ajoute, à 0,5 g d'uridine palmitonide obtenu à l'exemple 9, 7 ml de THF fraîchement distillé et 187 μl de triéthylamine sous atmosphère inerte. Le mélange est refroidi à 0°C et on ajoute goutte à goutte 109 μl de 2-chloro-2- oxo-1 , 3,2-dioxaphospholane. Le mélange réactionnel est placé sous agitation à température ambiante pendant 15 h. Ensuite, les sels de triéthylamine sont éliminés par filtration sous aspiration à 0°C. La plupart du solvant est évaporée sous pression réduite à 0°C et 3 ml de la solution résiduelle sont directement utilisés sans purification supplémentaire au stade suivant.
Exemple 12 : Uridine phosphocholine palmitonide (PUPC) On condense 4 ml de triméthylamine anhydre à -50°C sous atmosphère inerte. On ajoute à la triméthylamine froide 4 ml d'acétonitrile sec et l'Uridine-oxo-dioxaphospholane palmitonide brut obtenu à l'exemple 11. On maintient le mélange réactionnel sous agitation à 65°C pendant 48 h. Après évaporation de la triméthylamine résiduelle et des solvants, on isole un solide blanc. Ce solide brut est éluer dans 3 ml de dichlorométhane anhydre et floculé dans de l'acétone anhydre. L'opération est répétée trois fois et on obtient 189 mg d'un solide blanc hygroscopique pur. Rendement = 29,3 %.
Exemple 13 : Adenosine palmitonide Dans un ballon bicol de 25 ml, on place 1 ,17 g de palmitone diethoxycetal (2,22 mmoles), 0,975 g de paratoluenesulfonate d'adenosine (2,22 mmoles) et 0,042 g d'APTS (0,22 mmoles). Le réacteur est placé sous atmosphère d'azote anhydre on ajoute alors 8 ml de THF anhydre et 2 ml de diméthylformamide (DMF) anhydre. Le milieu réactionnel est agité et porté à reflux. Après 15 heures, la réaction est stoppée par l'addition de 5 ml de TEA anhydre. Le milieu réactionnel est versé dans 50 ml d'une solution d'hydrogénocarbonate de sodium saturée, la phase aqueuse est extraite par deux fois 60 ml de dichlorométhane. La phase organique est lavée avec 30 ml d'eau, séchée sur sulfate de sodium et le solvant est évaporé sous pression réduite. Le produit brut obtenu est purifié sur gel de silice neutralisé par 2% de TEA (éluant AcOEt 100%). On obtient 556 mg d'Adénosine palmitonide sous la forme d'un solide blanc. (Rendement = 36%).
1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ en ppm : 0,87 (t, J=6,6Hz, 6 H, 2CH3), 1 ,25 (m, 48H, 24CH2), 1 ,47 (m, 4H, 2CH3CH2), 1 ,57 (m, 2H, CCH2), 1 ,78 (m, 2H, CCH2), 2,10 (m, 1 H, OH), 3,79 (m, 2H, H5'), 4,52 (m, 1 H, H4'), 5,16 (m, 2H, H2' et H3'), 5,89 (d, J= 4,5 Hz, 1 H, HV), 6,01 (s, 2H, NH2), 7,82 (s, 1 H, CH), 8,30 (s, 1 H, CH). 13C NMR NMR (75 MHz, CDCI3) δ en ppm : 14,10 (CH3), 22,66 (CH2), 23,81 (CH2), 24,22 (CH2), 29,34-30,06 (CH2), 31 ,90 (CH2), 36,45 (CH2COO), 37,23 (CH2COO), 63,38 (C5'), 81 ,42 (C4'), 83,19 (C3'), 86,43 (C2'), 94,05 (CV), 118,03 (OCO), 121 ,07 (C5), 140,16 (C6), 148,42 (C8), 152,63 (C2), 155,98 (C4). HR SM [M-H+], théorique = 700,5735, observé = 700, 5741.
Exemple 14: Adénosine-oxo-dioxaphospholane palmitonide On ajoute à 0,5 g (0,71 mmoles) d'adénosine palmitonide 8 ml de
THF fraîchement distillé sous atmosphère inerte. La suspension est refroidie à
0°C et on ajoute goutte à goutte 98 μl de 2-chloro-2-oxo-1 ,3,2- dioxaphospholane. Le mélange réactionnel est placé sous agitation à température ambiante pendant 2 h. La majorité du solvant est évaporée sous pression réduite à 0°C et 4 ml de la solution résiduelle sont directement utilisés sans purification supplémentaire au stade suivant.
Exemple 15 : Adénosine phosphocholine palmitonide (PAPC) Dans un tube à sceller, on condense 4 ml de triméthylamine anhydre à -50°C sous atmosphère inerte. On ajoute à la triméthylamine froide 2 ml d'acétonitrile sec et les 4 ml d'Adénosine-oxo-dioxaphospholane palmitonide brut obtenu à l'exemple 14. Le tube est scellé et le mélange réactionnel est maintenu sous agitation à 65°C pendant 48 h. Après évaporation de la triméthylamine résiduelle et des solvants, on isole un solide blanc. Ce solide brut est élue dans 5 ml de méthanol anhydre et filtré. Le filtrat est concentré sous pression réduite et purifié sur colonne Sephadex LH20,
DCM/méthanol 1/1. On obtient 252 mg d'un solide pur blanc et hygroscopique.
Rendement = 41 %.
1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ en ppm : 0,87 (t, J=6,6Hz, 6 H,
2CH3), 1 ,25 (m, 48H, 24CH2), 1 ,48 (m, 4H, 2CH3CH2), 1 ,55 (m, 2H, CCH2), 1 ,74
(m, 2H, CCH2), 3,20 (s, 9H, N(CH3)3), 3,58 (m, 2H, NCH2), 3,75 (m, 2H, H5'),
4,00 (m, 2H ; CH2O), 4,49 (m, 1 H, H4'), 4,94 (m, 2H, H2' et H3'), 5,46 (m, 1 H, H1 '), 6,19 (s, 2H, NH2), 8,22 (s, 1 H, CH), 8,53 (s, 1 H, CH). 13C NMR NMR (75
MHz, CDCI3) δ en ppm : 14,11 (CH3), 22,69 (CH2), 23,64 (CH2), 24,27 (CH2),
29,39-29,77 (CH2), 31 ,94 (CH2), 36,54 (CH2COO), 36,97 (CH2COO), 54,05
(N(CH3)3), 59,41 (NCH2), 63,00 (C5'), 65,86 (CH2O), 81 ,33 (C4'), 83,17 (C3'),
86,08 (C2'), 95,28 (CV), 117,63 (OCO), 126,61 (C5), 140,46 (C6), 148,35 (C8), 152,29 (C2), 154,80 (C4). FAB+ SM=866.
Exemple 16 : Utilisation du tosylate de 2', 3'-dioléoyl-5'-(N,N,N- triméthylammonium) uridine pour la transfection Des études préliminaires de transfection ont été réalisées en tenant compte des travaux publiés [M. C. Pedroso de Lima et al., Advance Drug Delivery Reviews 47 (2001) 277-294]. Ces essais réalisés sur des lignées cellulaires de types HCT 116, Calu 6, Hela, HEK 293 avec le plasmide p-TRACER ont montré pour le tosylate de 2', 3'-dioléoyl-5'-(N,N,N-triméthylammonium) uridine des efficacités similaires à celles de la DOTAP. En outre, la cytotoxicité s'est avérée moindre voire quasi inexistante dans le cas du tosylate de 2', 3'-dioléoyl-5'-(N,N,N- triméthylammonium) uridine.
Exemple 17 : Formation d'un gel utilisable pour la transfection 1- On constitue un mélange en phase aqueuse du composé (la) Uridine phosphocholine stéaronide (SUPC) également appelé 2', 3'- pentatriacontan-18-onide-5'-(phosphocholine), préparé de manière analogue au composé palmitonide PUPC de l'exemple 12, (à des concentrations comprises entre 0.001 et 10 %) et d'un composé cationique (PEI, lipofectamine, DOTAP, DOTAU etc). La suspension obtenue est ensuite chauffée puis refroidie sur 5 cycles de montée et descente sur des plages de températures allant de -20 °C à + 60°C. 2) La phase colloïdale obtenue est chauffée à une température légèrement supérieure à la températures de transition de phase Tm (par exemple, la phase colloïdale est chauffée à une température de 38-40°C pour SUPC dont Tm = 33°C. On rajoute le plasmide, puis la suspension obtenue est chauffée puis refroidie sur 5 cycles de température de -20°C à 60°C. On peut ensuite procéder à la transfection comme décrit dans D. Luo, K. Haverstick, N. Belcheva, E. Han and W. M. Saltzman, Macromolecules, 2002, 35, 3456. Alternativement, selon une autre procédure, le plasmide peut être ajouté au mélange obtenu à l'issue de la première étape à une température inférieure à la Tm.
Selon le même protocole, on peut réaliser un gel à partir du composé DSUPC de l'exemple 4 ou du composé PUPC de l'exemple 12.
Exemple 18 : Formation d'un gel de d'un composé de formule (la utilisable pour la transfection On procède comme dans l'exemple 17, à l'exception du fait que le complexe plasmide/composé cationique est fabriqué indépendamment du gel. Ce complexe est ensuite rajouté à une température supérieure à la Tm au gel préalablement constitué. Dans ce cas le gel a été fabriqué en mettant en suspension de la SUPC (à des concentrations comprises entre 0.001 et 10 %) en phase aqueuse. Cette suspension est ensuite chauffée puis refroidie sur 5 cycles de montée et descente sur des plages de températures allant de -20°C à 60°C. Selon le même protocole, on peut réaliser un gel à partir du composé DSUPC de l'exemple 4 ou du composé PUPC de l'exemple 12.
Exemple 19 : Préparation de microsphères comprenant des actinides ou des lanthanides 25 mg de bis-(2',3'-stéaroyl)-5'-(phosphocholine)uridine préparée à l'exemple 4 (DSUPC) lyophilisés sont hydratés pendant 2 min à 75 °C par
500 μl d'une solution aqueuse de nitrate de thorium IV (0,16 M) à leur pH acide naturel. Le précipité formé (microsphères) est lavé 2 fois avec 200 μl d'eau distillée puis lyophilisé.
Caractérisation du précipité (microsphères) : RMN 3 P : d = -12,0 ppm
(DSUPC seule, d = -1 ,2 ppm).
FTIR (solide KBr) : vibration d'élongation C=O : 1653 cm"1, vibration d'élongation N-H : 3262 cm"1 . SAXS (Small Angle X-ray Scattering), q = 1 ,10 nm"1 , d = 5,71 nm.
Selon le même protocole, on peut préparer des microsphères avec du nitrate de cérium III ou du nitrate d'uranium.

Claims

REVENDICATIONS
1. Composé de formule (I)
dans laquelle X représente un atome d'oxygène, de soufre, ou un groupe -CH2-, B représente une base purique ou pyrimidique, éventuellement substituée, ou encore une base héterocylique mono-ou bi-cyclique non naturelle dont chaque cycle comporte 4 à 7 chaînons, éventuellement substituée, Li et L2, identiques ou différents, représentent un groupement oxycarbonyl -O-CO-, thiocarbamate -O-CS-NH-, carbonate -O-CO-O-, carbamate -O-CO-NH-, un atome d'oxygène, ou encore, Li et L2, ensemble, forment un groupement cétal de formule
ou un groupement thiocétal de formule
Ri et R2, identiques ou différents représentent une chaîne alkyle linéaire ou ramifiée renfermant de 2 à 30 atomes de carbone, de préférence de 6 à 25 atomes de carbone, notamment de 8 à 25 atomes de carbone, saturée ou partiellement insaturée, éventuellement totalement ou partiellement fluorée, éventuellement substituée sur le carbone d'extrémité de chaîne par un atome de fluor ou par un ester ou éther benzylique ou naphtylique et R3 représente un groupement hydroxy, amino, un groupement phosphate, phosphonate, phosphatidylcholine, O-alkylphosphatidylcholine, phosphatidyléthanolamine, O-alkyl-phosphatidyléthanolamine, O- alkylphosphate, thiophosphate, phosphonium, un groupement NH2-R4, NHR Rδ ou NR4R5R6 dans lesquels R , R5 et Re, identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène ou un radical alkyle ou hydroxyalkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, ou R3 représente un reste cyclodextrine ou un reste Z-W-CO-CH2-CH2-(-N-CO-CH2-CH2-)n- N - Ai
CH2-V- A2 ou -(-CH2-CH-)n- CO-V- dans lesquels V et W identiques ou différents représentent une liaison -O-,-S-, ou -NH-, Z peut prendre les significations de R3, Ri et R2, et n peut prendre les valeurs de 1 à 500 et Ai et A2 identiques ou différents représentent un radical alkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone ou acyle linéaire ou ramifié renfermant de 2 à 5 atomes de carbone, à l'exception des composés dans lesquels :
- X représente un atome d'oxygène , - R3 représente un groupe hydroxy et soit L1 et L2, identiques représentent un groupement oxycarbonyl, Ri et R2 identiques représentent un alkyle en C2 à Cι7, et B représente la cytosine, l'adénosine ou une 6-méthoxypurine , soit L1 et L2 ensemble forment un groupement cétal, Ri et R2 identiques représentent un méthyle et B représente l'adénosine.
2. Composé de formule (I) selon la revendication 1 , dans laquelle X représente un atome d'oxygène ou de soufre, - B représente une base purique ou pyrimidique, Li et L2, identiques ou différents, représentent un groupement oxycarbonyl -O-CO-, thiocarbamate -O-CS-NH-, carbonate -O-CO-O-, carbamate -O-CO-NH-, un atome d'oxygène, Ri et R2, identiques ou différents représentent une chaîne alkyle linéaire ou ramifiée renfermant de 2 à 30 atomes de carbone, de préférence de 6 à 25 atomes de carbone, notamment de 8 à 25 atomes de carbone, saturée ou partiellement insaturée, éventuellement totalement ou partiellement fluorée, éventuellement substituée sur le carbone d'extrémité de chaîne par un atome de fluor ou par un ester ou éther benzylique ou naphtylique et - R3 représente un groupement hydroxy, amino, un groupement phosphate, phosphonate, O-alkylphosphatidylcholine, thiophosphate, phosphonium, un groupement NH2-R , NHR4R5 ou NR4R5R6 dans lesquels R4, R5 et RQ, identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène ou un radical alkyle ou hydroxyalkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, ou R3 représente un reste cyclodextrine ou un reste Z-W-CO-CH2-CH2-(-N-CO-CH2-CH2-)n- N - Ai CH2-V- A2 ou -(-CH2-CH-)n-
CO-V- dans lesquels V et W identiques ou différents représentent une liaison -0-,-S-, ou -NH-, Z peut prendre les significations de R3, Ri et R2, et n peut prendre les valeurs de 1 à 500 et Ai et A2 identiques ou différents représentent un radical alkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone ou acyle linéaire ou ramifié renfermant de 2 à 5 atomes de carbone, à l'exception des composés dans lesquels : - X représente un atome d'oxygène ,
- B représente la cytosine, l'adénosine ou la 6-méthoxypurine ,
- Li et L2, identiques, représentent un groupement oxycarbonyl,
- Ri et R2 identiques représentent un alkyle en C2 à Cι7 et
- R3 représente un groupe hydroxy.
3. Composé selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que B représente une base purique ou pyrimidique choisie parmi l'uracile, l'adénine, la guanine, la cytosine, la thymine, X représente un atome d'oxygène ou de soufre, Li et L2 représentent un groupement oxycarbonyl, thiocarbamate, carbonate ou carbamate, Ri et R2 représentent un radical undécyle, tridécyle, pentadécyle, heptadécyle, nonadécyle, cis,cis,cis,cis-4,7,10,13-nonadec- tétraènyle, arachidonyle, c/s-8-heptadécènyle, R3 représente un radical aminé, méthylamine, diméthylamine, triméthylamine, O-alkylphosphatidylcholine et le contre ion est un iodure ou un tosylate.
4. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que B représente l'uracile ou l'adénine, X représente un atome d'oxygène, Li et L2 représentent un groupement oxycarbonyl et sont identiques, et R3 représente un radical triméthylamine.
5. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, choisi parmi : - le tosylate de 2', 3'-dioléoyl-5'-(N,N,N-triméthylammonium) uridine (DOTAU)
- le tosylate de 2', 3'-dioléoyl-5'-(N,N,N-triméthylammonium) adénosine
- le tosylate de2', 3'-dimyristoyl-5'-(N,N,N-triméthylammonium) uridine
- le triflate de 2', 3'-dioléoyl-5'-(O-éthyl, phosphocholine) uridine.
6. Composé de formule (I) ci-dessus, dans laquelle Li et L2, ensemble, forment un groupement cétal ou thiocétal, répondant à la formule (la) ci -dessous : dans laquelle X, B, Ri, R2 et R3 sont tels que définis dans la revendication 1 et
- Y représente un atome d'oxygène ou de soufre à l'exception des composés dans lesquels :
- X et Y représentent un atome d'oxygène , B représente l'adénosine, Ri et R2 identiques représentent un méthyle et R3 représente un groupe hydroxy.
7. Composé de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, dans laquelle R3 représente un groupement amino, un groupement phosphate, phosphonate, phosphatidylcholine, O- alkylphosphatidylcholine, phosphatidyléthanolamine, O-alkyl- phosphatidyléthanolamine, O-alkylphosphate, thiophosphate, phosphonium, un groupement NH2-R4, NHR4R5 ou NR4R5R6 dans lesquels R4, R5 et R6, identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène ou un radical alkyle ou hydroxyalkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, ou R3 représente un reste cyclodextrine ou un reste Z-W-CO-CH2-CH2-(-N-CO-CH2-CH2-)n- N - A1 CH2-V- A2 ou -(-CH2-CH-)n-
CO-V- dans lesquels V et W identiques ou différents représentent une liaison -O-,-S-, ou -NH-, Z peut prendre les significations de R3, Ri et R2, et n peut prendre les valeurs de 1 à 500 et Ai et A2 identiques ou différents représentent un radical alkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone ou acyle linéaire ou ramifié renfermant de 2 à 5 atomes de carbone.
8. Composé de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, dans laquelle représente R3 représente un groupement cationique, par exemple un groupement phosphonium ou NR4R5R6 tel que défini dans la revendiaction 1 , et le contre-ion est choisi parmi les anions tosylate, halogénure, nitrate, sulfate, sulfonate, et thiosulfate.
9. Composé selon l'une quelconque des revendications 6 à 8, caractérisé en ce B représente l'uracile ou l'adénine, X représente un atome d'oxygène, et R3 représente un radical phosphocholine,
O-éthylphosphocholine ou triméthylamine.
10. Composé selon l'une quelconque des revendications 6 à 8, choisi parmi : - le 2', 3'- hentriacontan-16-onide-5'-( phosphocholine) uridine le 2', 3'- hentriacontan-16-onide-5'-( phosphocholine) adénine le tosylate de 2',3'-hentriacontan-16-onide-5'-(N,N,N-triméthylammonium) uridine le tosylate de 2',3'-hentriacontan-16-onide-5'-(O-éthylphosphocholine) uridine 11. Procédé de préparation d'un composé de formule (I) tel que défini à l'une des revendications 1 à 5, ainsi que de ses sels, dans laquelle Li et L2, identiques représentent un groupement oxycarbonyl, thiocarbonyl, carbamate, ou carbonate et R3 représente un groupement NH-R , NR4R5 ou NR4R5R6 dans lesquels R , R5 et R6, identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène ou un radical alkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, ou R3 représente un reste cyclodextrine ou un reste Z-W-CO-CH2-CH2-(-N-CO-CH2-CH2-)n- N - Ai CH2-V- A2 ou -(-CH2-CH-)n- I CO-V- dans lesquels V et W identiques ou differents-représentent une liaison -0-,-S-, ou -NH-, Z peut prendre les significations de R3, Ri et R2, n peut prendre les valeurs de 1 à 500 et Ai et A2 identiques ou différents représentent un radical alkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone ou acyle linéaire ou ramifié renfermant de 2 à 5 atomes de carbone, caractérisé en ce que l'on fait réagir un dérivé de formule (II) (il) dans laquelle B et X ont la signification déjà indiquée, avec l'acétone pour obtenir un composé de formule (III)
(m)
dans laquelle B et X ont la signification déjà indiquée, que l'on fait réagir avec un agent d'activation d'un hydroxyle comme un halogénure de sulfonyle, pour obtenir un composé de formule (IV)
dans laquelle B et X ont la signification déjà indiquée et Ts représente un reste d'un agent d'activation d'un hydroxyle comme un reste tosyle ou mésyle, que l'on fait réagir que l'on fait réagir en milieu acide puis avec un composé de formule R Lι-R7 (V) ou R2-L2-R7 (V') dans laquelle R1 ( R2, Li et L2 ont la signification déjà indiquée et R7 représente un reste d'un agent activant tel que le carbonyl diimidazole, le dicyclohexylcarbodiimide, l'hydroxybenzotriazole, ou le thiocarbonyldiimidazole, ou un atome d'halogène, pour obtenir un composé de formule (VI)
que l'on fait réagir avec un composé de formule (VII)
dans laquelle R4, R et Rβ, identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène ou un radical alkyle, ou hydoxyalkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, pour obtenir le composé de formule (I) attendu que l'on isole si désiré. 12. Procédé de préparation d'un composé de formule (I) tel que défini à l'une des revendications 1 à 5, ainsi que de ses sels, dans laquelle Li et L2, identiques représentent un groupement oxycarbonyl, thiocarbonyl, carbamate, ou carbonate et R3 représente un groupement phosphate, phosphatidylcholine, O-alkylphosphatidylcholine, phosphatidyléthaloamine, O- alkylphosphatidyléthaloamine, O-alkylphosphate, phosphonate, thiophosphate ou phosphonium, caractérisé en ce que l'on fait réagir un composé de formule (III) ci-dessus avec un composé de formule (VIT)
dans laquelle X représente un atome d'oxygène ou de soufre, R8 et Rg identiques ou différents représentent un radical, alkyle ou O-alkyle linéaire, cyclique ou ramifié renfermant de 1 à 20 atomes de carbone et Hal représente un atome d'halogène, pour obtenir un composé de formule (VIII) dans laquelle B a la signification déjà indiquée et R3 représente un groupement phosphate, O-alkylphosphate, phosphonate, thiophosphate ou phosphonium, que l'on fait réagir le cas échéant avec une trialkylamine de formule (VII) telle que définie plus haut, pour obtenir un composé de formule (VIII) dans laquelle R3 représente un groupement phosphatidylcholine ou phosphatidyléthanolamine, que l'on fait ensuite réagir en milieu acide puis avec un composé de formule Rι-Lι-R7 (V) ou R2-L2-R7 (V) dans lesquelles R1 f R2, Li et L2 ont la signification déjà indiquée et R7 représente un agent activant, pour obtenir le composé de formule (I) attendu que l'on isole si désiré ; puis, si ont veut obtenir un composé de formule (I) dans laquelle B a la signification déjà indiquée et R3 représente un groupement O-alkyl phosphatidylcholine ou O-alkyl phosphatidyléthanolamine, on fait réagir un composé de formule R10-J, dans laquelle R10 représente une chaîne alkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 10 atomes de carbone et J un groupement activant avec un composé (I) dans laquelle B a la signification déjà indiquée et R3 représente un groupement phosphatidylcholine ou phosphatidyléthanolamine. 13. Procédé de préparation des nouveaux composés de formule (I) selon l'une quelconque des revendications 6 à 10, ainsi que de leurs sels, dans laquelle L1 et L2, ensemble, forment un groupement cétal ou thiocétal, dans laquelles R3 représente un groupement NH-R4, NR4R5 ou NR R5R6 dans lesquels R4, R5 et Rβ, identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène ou un radical alkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, ou R3 représente un reste cyclodextrine ou un reste Z-W-CO-CH2-CH2-(- N-CO-CH2-CH2-)n- N - Ai I I CH2-V- A2 ou -(-CH2-CH-)n- I CO-V- dans lesquels V et W identiques ou differents-représentent une liaison -0-,-S-, ou -NH-, Z peut prendre les significations de R3, Ri et R2, n peut prendre les valeurs de 1 à 500 et Ai et A2 identiques ou différents représentent un radical alkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone ou acyle linéaire ou ramifié renfermant de 2 à 5 atomes de carbone, caractérisé en ce que l'on fait réagir un dérivé de formule (II)
(H) dans laquelle B et X sont tels que définis dans la revendication 1 , avec une cétone de formule Rι-CO-R2 ou un diméthoxycétal de formule R C(OMe)2-R2 pour obtenir un composé de formule (III')
(III') que l'on fait réagir avec un agent d'activation d'un hydroxyle comme un halogénure de sulfonyle, pour obtenir un composé de formule (IV)'
dans laquelle Ts représente un reste d'un agent d'activation d'un hydroxyle, que l'on fait réagir avec un composé de formule (VII) tel que défini précédemment R,
-N. R6 R5 (VII) dans laquelle R4, R5 et R6, identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène ou un radical alkyle ou hydoxyalkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, pour obtenir le composé de formule (I) dans laquelle Li et L2, ensemble, forment un groupement cétal ou thiocétal ou de attendu, que l'on isole si désiré. 14. Procédé de préparation d'un composé de formule (I) dans laquelle Li et L2, ensemble, forment un groupement cétal ou thiocétal selon l'une quelconque des revendications 6 à 10, ainsi que de ses sels, dans lesquelles R3 représente un groupement phosphate, phosphonate, phosphatidylcholine, O-alkylphosphatidylcholine, phosphatidyléthanolamine, O- alkyl-phosphatidyléthanolamine, O-alkylphosphate, thiophosphate ou phosphonium, caractérisé en ce que l'on fait réagir un composé de formule (III')
('"') avec un composé de formule (VII')
R8 — P — Hal R9 (VII') dans laquelle X représente un atome d'oxygène ou de soufre, R8 et Rg, identiques ou différents, représentent un radical, alkyle ou O-alkyle linéaire, cyclique ou ramifié renfermant de 1 à 20 atomes de carbone et Hal représente un atome d'halogène, pour obtenir un composé de formule (I) ou (la) dans laquelle L1 et L2, ensemble, forment un groupement cétal ou thiocétal attendu dans laquelle B a la signification déjà indiquée et R3 représente un groupement phosphate, O-alkylphosphate, phosphonate, thiophosphate ou phosphonium, que l'on fait réagir le cas échéant avec une trialkylamine de formule (VII) telle que définie plus haut, pour obtenir un composé de formule (la) dans laquelle R3 représente un groupe phosphatidylcholine ou phosphatidyléthaloamine, que l'on isole si désiré ; puis, si on veut obtenir un composé de formule (la) dans laquelle B à la signification déjà indiquée et R3 représente un groupement O-alkylphosphatidylcholine ou O-alkylphosphatidyléthanolamine, on fait réagir un composé de formule R10-J, dans laquelle R10 représente une chaîne alkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 10 atomes de carbone et J est un groupement activant, avec un composé (la) dans laquelle B a la signification déjà indiquée et R3 représente un groupement phosphatidylcholine ou phosphatidyléthanolamine. 15. Utilisation des composés de formule (I)
dans laquelle X représente un atome d'oxygène, de soufre, ou un groupe -CH2-, B représente une base purique ou pyrimidique, éventuellement substituée, ou encore une base héterocylique mono-ou bi-cyclique non naturelle dont chaque cycle comporte 4 à 7 chaînons, éventuellement substituée, - L1 et L2, identiques ou différents, représentent un groupement oxycarbonyl -O-CO-, thiocarbamate -O-CS-NH-, carbonate -O-CO-O-, carbamate -O-CO-NH-, un atome d'oxygène, ou encore, Li et L2ι ensemble, forment un groupement cétal de formule
ou un groupement thiocétal de formule
Ri et R2, identiques ou différents représentent une chaîne alkyle linéaire ou ramifiée renfermant de 2 à 30 atomes de carbone, de préférence de 6 à 25 atomes de carbone, notamment de 8 à 25 atomes de carbone, saturée ou partiellement insaturée, éventuellement totalement ou partiellement fluorée, éventuellement substituée sur le carbone d'extrémité de chaîne par un atome de fluor ou par un ester ou éther benzylique ou naphtylique et R3 représente un groupement hydroxy, amino, un groupement phosphate, phosphonate, phosphatidylcholine, O-alkylphosphatidylcholine, phosphatidyléthanolamine, O-alkyl-phosphatidyléthanolamine, O-alkylphosphate, thiophosphate , phosphonium, un groupement NH2-R4, NHR4R5 ou NR4R5R6 dans lesquels R4, R5 et Re, identiques ou différents représentent un atome d'hydrogène ou un radical alkyle ou hydroxyalkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone, ou R3 représente un reste cyclodextrine ou un reste Z-W-CO-CH2-CH2-(-N-CO-CH2-CH2-)n- N - A-, I I CH2-V- A2 ou -(-CH2-CH-)n- CO-V- dans lesquels V et W identiques ou différents représentent une liaison -0-,-S-, ou -NH-, Z peut prendre les significations de R3, Ri et R2, et n peut prendre les valeurs de 1 à 500 et Ai et A2 identiques ou différents représentent un radical alkyle linéaire ou ramifié renfermant de 1 à 5 atomes de carbone ou acyle linéaire ou ramifié renfermant de 2 à 5 atomes de carbone, pour le transport et/ou la délivrance de molécules ou de macromolécules biologiquement actives. 16. Utilisation selon la revendication 15, caractérisée en ce que le composé de formule (I) est sous forme d'un assemblage supramoléculaire tel que des micelles, des micelles inversées, des liposomes, phases hexagonales, phases gel, toroïdes, émulsions, micro émulsions, hélices, tubes, fibres ou disques, seul ou en combinaison avec un principe actif ou un matériel génétique. 17. Utilisation selon la revendication 16, caractérisée en ce que ledit assemblage supramoléculaire est un gel. 18. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 15 à 17, caractérisée en ce que lesdites molécules ou de macromolécules biologiquement actives sont choisies parmi des principes actifs, des acides nucléiques tels que des molécules d'ADN ou d'ARN, d'ADN anti-sens, de PNA, d'ARN messager, d'ARN interférence (siRNA's), des plasmides, des oligonucléotides duplex, des oligonucléotides simple brin, des oligonucléotides triplex, des peptides et des polysaccharides. 19. Une composition pharmaceutique, renfermant un principe actif et un composé de formule (I) tel que défini dans la revendication 15. 20. Une composition pharmaceutique, renfermant un principe actif et un composé de formule (I) tel que défini dans l'une quelconque des revendication 1 à 10. 21. Une composition pharmaceutique selon les revendications 19 ou 20, caractérisée en ce que ledit composé de formule (I) est sous forme d'un assemblage supramoléculaire tel que des micelles, des micelles inversées, des liposomes, phases hexagonales, phases gel, toroïdes, émulsions, micro émulsions, hélices, tubes, fibres ou disques. 22. Une composition pharmaceutique selon l'une quelconque des revendications 19 à 21 , caractérisée en ce qu'elle renferme un composé de formule (I) à une concentration en poids allant de 0,05 à 5 %. 23. Une composition pour le transfert de gènes comprenant un gène et un composé de formule (I) telle que définie dans la revendication 15. 24. Une composition pour le transfert de gènes comprenant un gène et un composé de formule (I) telle que définie dans l'une quelconque des revendications 1 à 10. 25. Une composition pour le transfert de gènes selon l'une des revendications 23 ou 24, caractérisée en ce que ledit composé de formule (I) est sous forme d'un assemblage supramoléculaire tel que des micelles, des micelles inversées, des liposomes, phases hexagonales, phases gel, toroïdes, émulsions, micro émulsions, hélices, tubes, fibres ou disques. 26. Un procédé pour le transfert de gènes dans lequel on transfère un gène dans un organisme hôte à l'aide d'un composé de formule (I) telle que définie dans la revendication 15. 27. Un procédé pour le transfert de gènes dans lequel on transfère un gène dans un organisme hôte à l'aide d'un composé de formule (I) telle que définie dans l'une quelconque des revendications 1 à 10. 28. Un procédé pour le transfert de gènes selon l'une des revendications 26 ou 27, caractérisé en ce que ledit composé de formule (I) est sous forme d'un assemblage supramoléculaire tel que des micelles, des micelles inversées, des liposomes, phases hexagonales, phases gel, toroïdes, émulsions, micro émulsions, hélices, tubes, fibres ou disques. 29. Un procédé selon la revendication 28, caractérisé en ce que ledit assemblage supramoléculaire est un gel. 30. Un procédé pour le transfert de gènes selon l'une quelconque des revendications 27 à 29, caractérisé en ce qu'il s'agit de la transfection de cellules non adhérentes. 31. Assemblages supramoléculaire tels que des micelles, des micelles inversées, des liposomes, phases hexagonales, phases gel, toroïdes, émulsions, micro émulsions, hélices, tubes, fibres ou disques, comprenant un composé de formule (I) telle que définie dans la revendication 15, seul ou en combinaison avec un principe actif ou un matériel génétique. 32 Assemblage supramoléculaire selon la revendication 31, caractérisé en ce qu'il comprend un composé de formule (I) telle que définie dans l'une quelconque des revendications 1 à 10. 33. Utilisation d'un assemblage supramoléculaire selon l'une des revendication 31 ou 32, pour complexer des sels d'actinides ou de lanthanides, en particulier des sels de cérium, de thorium ou d'uranium. 34. Utilisation d'un composé de formule (I) telle que définie dans la revendication 16 comme structure porteuse d'une sonde luminescente. 35. Utilisation d'un composé de formule (I) telle que définie dans l'une quelconque des revendication 1 à 10 en tant que précurseurs de principe actif .
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Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2924430B1 (fr) * 2007-11-30 2010-03-19 Univ Bordeaux 2 Procede de preparation de nanoparticules a base de molecules ou macromolecules amphiphiles fonctionnelles et leur utilisation
FR2945946B1 (fr) * 2009-05-29 2011-08-26 Univ Victor Segalen Bordeaux 2 Formulations a compartiments multiples a base de molecules ou macromolecules amphiphiles fonctionnelles
AU2012234259A1 (en) * 2011-03-31 2013-10-03 Libera-Korner, Jeanette Perfluorinated compounds for the non-viral transfer of nucleic acids
FR2985916B1 (fr) * 2012-01-25 2015-12-04 Univ Bordeaux Segalen Decontamination par hydrogels d'echantillons aqueux contenant des nanoparticules
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EP3095790A1 (fr) * 2015-05-22 2016-11-23 Universite De Bordeaux Composés nucléoside-lipide avec des chaînes dialkyl orthoester sensibles au ph et leur utilisation à des fins de transport ou de vectorisation d'au moins un agent thérapeutique
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FR3078064A1 (fr) 2018-02-22 2019-08-23 Universite de Bordeaux Procede de decontamination d'un milieu liquide aqueux contenant des micropolluants
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Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004052905A2 (fr) * 2002-12-10 2004-06-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Derives de nucleoside antiviraux

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2626792A1 (de) * 1976-06-15 1977-12-29 Kowa Co Acylderivate von adenosin-5'-monophosphorsaeure, verfahren zu deren herstellung und diese enthaltende pharmazeutische zusammensetzung
EP1644479A4 (fr) * 2003-06-16 2008-04-23 Mark W Grinstaff Macromolecules et molecules synthetiques fonctionnelles pour l'administration de genes

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004052905A2 (fr) * 2002-12-10 2004-06-24 F. Hoffmann-La Roche Ag Derives de nucleoside antiviraux

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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LOUIS MOREAU ET AL: "Nucleoside phosphocholine amphiphile for in vitro DNA transfection", MOLECULAR BIOSYSTEMS, vol. 1, no. 3, 1 January 2005 (2005-01-01), pages 260, XP055214110, ISSN: 1742-206X, DOI: 10.1039/b503302k *
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