EP1131088A2 - INHIBITEURS DE L'ACTIVATION DE NF-$g(k)B, ET LEURS UTILISATIONS PHARMACEUTIQUES - Google Patents

INHIBITEURS DE L'ACTIVATION DE NF-$g(k)B, ET LEURS UTILISATIONS PHARMACEUTIQUES

Info

Publication number
EP1131088A2
EP1131088A2 EP99958229A EP99958229A EP1131088A2 EP 1131088 A2 EP1131088 A2 EP 1131088A2 EP 99958229 A EP99958229 A EP 99958229A EP 99958229 A EP99958229 A EP 99958229A EP 1131088 A2 EP1131088 A2 EP 1131088A2
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
cells
growth hormone
activation
nucleotide sequence
erythropoietin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP99958229A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
François HIRSCH
Astrid Haeffner
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Original Assignee
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Centre National de la Recherche Scientifique CNRS filed Critical Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Publication of EP1131088A2 publication Critical patent/EP1131088A2/fr
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/475—Quinolines; Isoquinolines having an indole ring, e.g. yohimbine, reserpine, strychnine, vinblastine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1816—Erythropoietin [EPO]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/27—Growth hormone [GH] (Somatotropin)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Definitions

  • the subject of the present invention is the use of biological inhibitors of
  • NF- ⁇ B in the context of the treatment of cancers, and more particularly of malignant hemopathies or solid tumors.
  • MDR MDR
  • P-gp P-glycoprotein
  • the present invention stems from the discovery by the inventors of new effects of human growth hormone (hGH), also called somatotropin, namely on the one hand that hGH, and other compounds which specifically bind to transmembrane receptors class I cytokines, are inhibitors of NF- ⁇ B activation by a cytotoxic molecule, and, on the other hand, that hGH, and other compounds mentioned above, make it possible to potentiate the effects of cytotoxic molecules and therefore to reduce the concentrations of the latter in the context of therapeutic treatments.
  • hGH human growth hormone
  • somatotropin also called somatotropin
  • LPS lipopolysaccharides
  • the inventors have demonstrated that human monocytes die after the bridging (or the engagement) of the surface molecule APOl / CD95 / Fas, and have shown that hGH decreases mediated death through the molecule Fas, by increasing the synthesis of an antiapoptogenic proto-oncogene,
  • TNF- ⁇ because Fas and the TN55- ⁇ p55 receptor belong to the same family of nerve growth receptors.
  • the human promyeloid leukemia line U937 was used to carry out this work, due to the insensitivity of human monocytes to death mediated by TNF- ⁇ . Getting results opposite to those observed with Fas, namely that hGH accelerates cell death mediated by TNF- ⁇ , enabled the inventors to conclude on the inhibitory effect of hGH on the activation of NF- ⁇ B by TNF- ⁇ or by other cytotoxic molecules activating NF- ⁇ B, such as daunomycin.
  • the aim of the present invention is to provide a new method of treating cancers, and more particularly malignant hemopathies and solid tumors, offering the advantage of improving both the response of patients to certain anticancer treatments and also, potentially, the general condition of the patient.
  • the invention also aims to provide new products for the treatment of said pathologies, having both the advantage of increasing the response of tumor cells to chemotherapy, and that of improving the general condition of patients.
  • the new products of the invention make it possible to decrease the activation of factor NF- ⁇ B by means of the compound inhibiting the activation of NF- ⁇ B used, such as human growth hormone, which is likely to result in the inhibition of the transcription of the MDR genes and therefore a strengthening of the cytotoxic effects of the antitumor agents used, with the expected consequence the reduction in the dosage of these antitumor drugs.
  • the subject of the invention is the use of compounds that inhibit the activation of NF- ⁇ B, for the preparation of medicaments intended for the treatment of malignant hemopathies and solid tumors.
  • a more particular subject of the invention is the use of NF- ⁇ B inhibitor compounds, for the preparation of medicaments intended for the prevention of the appearance, or treatment, of phenomena of resistance to cytotoxic molecules used in the context of treatment. of the above-mentioned pathologies, these resistance phenomena appearing in patients treated with these molecules when the latter are likely to activate NF- ⁇ B.
  • compounds inhibiting the activation of NF- ⁇ B is meant any compound capable of inhibiting in the cells of the organism, the activation of NF- ⁇ B made by cytotoxic molecules used in the treatment of the aforementioned pathologies, and therefore any compound capable of inhibiting the synthesis of proteins (such as P-gp) allowing cells to evacuate these molecules before they have been able to reach their molecular targets .
  • the invention relates more particularly to the aforementioned use of compounds which inhibit the activation of NF- ⁇ B, in combination with one or more cytotoxic molecules which can be used in the treatment of malignant hemopathies or solid tumors, said cytotoxic molecules being capable of '' activate the factor NF- ⁇ B.
  • the compounds inhibiting the activation of NF- ⁇ B used in the context of the present invention are compounds which specifically bind to the transmembrane receptors of class I cytokines in the cells of the organism.
  • said compounds are chosen from those which bind to the abovementioned receptors whose amino acid sequences of the transmembrane, intracytoplasmic and extramembrane parts have a homology of approximately 50% to approximately 70%.
  • a more particular subject of the invention is the aforementioned use of compounds inhibiting the activation of NF- ⁇ B as defined above, chosen from growth hormone, prolactin, erythropoietin, interleukme-4 , interleukin-7, G-CSF, GM-CSF, interleukin-3, interleukin-6, of human or other mammalian origin.
  • said compounds are chosen from growth hormone, or erythropoietin.
  • the invention more particularly relates to the aforementioned use:
  • recombinant human growth hormone as coded by the nucleotide sequence SEQ ID NO 1, or by any nucleotide sequence derived from the latter by degeneration of the genetic code and nevertheless being capable of coding for the hormone human growth, the amino acid sequence of which is represented by SEQ ID NO 2, said growth hormone being obtained by transformation of appropriate cells using vectors containing a nucleotide sequence as described above, recovery of the recombinant protein produced by said cells, and purification.
  • the invention also relates to the aforementioned use of any peptide sequence derived by addition and / or deletion and / or substitution of one or more amino acids of the sequence SEQ ID NO 2, and retaining the property of growth hormone human inhibit the activation of NF- ⁇ B.
  • a more particular subject of the invention is also the aforementioned use of recombinant human erythropoietin as coded by the nucleotide sequence SEQ ID NO 3, or by any nucleotide sequence derived from the latter by degeneration of the genetic code and being nevertheless capable of coding for human erythropoietin, the amino acid sequence of which is represented by SEQ ID NO 4, said erythropoietin being obtained by transformation of appropriate cells using vectors containing a nucleotide sequence as described above, recovery of the recombinant protein produced by said cells, and purification.
  • the invention also relates to the aforementioned use of any peptide sequence derived by addition and / or deletion and / or substitution of one or more amino acids of the sequence SEQ ID NO 4 , and retaining the property of human erythropoietin to inhibit a NF- ⁇ B activation.
  • a more particular subject of the invention is the aforementioned use of compounds which inhibit the activation of NF- ⁇ B as defined above, for the preparation of a drug which can be administered parenterally (IM, IN, SC), in particular is right :
  • NF- ⁇ B in the context of the present invention, there may be mentioned: - cytokines,
  • anthracyclines including daunomycin, dauxorubicin,
  • vinca alkaloids such as vinblastine and vincristine
  • the dosage of cytotoxic molecules used in association with said compounds is approximately 2 to approximately 5 times lower than the dosage of these same molecules used alone in the context of the treatment of malignant hemopathies and solid tumors.
  • cytotoxic molecules used in association with said compounds is approximately 2 to approximately 5 times lower than the dosage of these same molecules used alone in the context of the treatment of malignant hemopathies and solid tumors.
  • the usual daily dosage of daunomycin or dauxorubicin being from 40 to 60 mg / m 2
  • the dosage of the latter in the context of the present invention is approximately 5 to 30 mg / m 2
  • the usual daily dosage of vinblastine being from 5 to 7 mg / m 2
  • the dosage of the latter in the context of the present invention is approximately 1 to 4 mg / m 2
  • the dosage of the latter in the context of the present invention is approximately
  • the usual daily dosage of taxol being approximately 75 mg / m 2
  • the dosage of the latter in the context of the present invention is approximately 15 to 35 mg / m 2 .
  • the cancers likely to be treated in the context of the present invention there may be mentioned mainly:
  • hemopathies such as leukemias, lymphomas,
  • the subject of the invention is also any product containing: - a compound inhibiting the activation of NF- ⁇ B as described above, and more particularly a compound which specifically binds to transmembrane receptors of class I cytokines as defined above -above,
  • a cytotoxic molecule capable of activating the NF- ⁇ B factor, as a combination preparation for simultaneous, separate or spread over time for the treatment of malignant hemopathies and solid tumors.
  • the subject of the invention is also any product as defined above, as a combination preparation for a simultaneous, separate or spread over time use for the prevention of the appearance, or for the treatment, of resistance phenomena.
  • cytotoxic molecules used in the treatment of the above-mentioned pathologies appearing in patients treated with these molecules when the latter are likely to activate NF- ⁇ B.
  • the invention relates more particularly to any product as defined above, characterized in that it comprises, as compound inhibiting the activation of NF- ⁇ B, growth hormone, prolactin, erythropoietin, l 'interleukin-4, interleukin-7, G-CSF, GM-CSF, interleukin-3, interleukin-6.
  • Products which are particularly preferred in the context of the present invention are those comprising, as compound inhibiting the activation of NF- ⁇ B, the growth hormone, or erythropoietin.
  • the subject of the invention is more particularly any product as defined above, characterized in that it comprises: - human growth hormone as obtained by extraction from pituitary extracts, and purification,
  • the recombinant human growth hormone as described above coded by the nucleotide sequence SEQ ID NO 1, or by any nucleotide sequence derived from the latter by degeneration of the genetic code and being nevertheless capable of coding for human growth hormone, the amino acid sequence of which is represented by SEQ ID NO 2, or any peptide sequence derived by addition and / or deletion and / or substitution of one or more amino acids of the sequence SEQ ID NO 2, and retaining the property of human growth hormone to inhibit the activation of NF- ⁇ B.
  • the subject of the invention is also any product as defined above, characterized in that it comprises recombinant human erythropoietin as described above, coded by the nucleotide sequence SEQ ID NO 3, or by any sequence nucleotide derived from the latter by degeneration of the genetic code and nevertheless being capable of coding for human erythropoietin, the amino acid sequence of which is represented by SEQ ID NO 4, or any peptide sequence derived by addition and / or deletion and / or substitution of one or more amino acids of the sequence SEQ ID NO 4, and retaining the property of human erythropoietin to inhibit the activation of
  • the invention also relates to any product as described above, characterized in that it comprises, as cytotoxic molecule capable of activating the factor NF- ⁇ B, any molecule chosen from the following: - cytokines,
  • anthracyclines including daunomycin, dauxorubicin,
  • vinca alkaloids such as vinblastine and vincristine
  • Products as defined above are characterized in that they contain:
  • - growth hormone and daunomycin or dauxorubicin in proportions such that their daily dosage is approximately 2 IU / kg of growth hormone for approximately 5 to 30 mg / m 2 of daunomycin or dauxorubicin, - l growth hormone and vinblastine, in proportions such that their daily dosage is approximately 2 IU / kg of growth hormone for approximately 1 to 4 mg / m 2 of vinblastine, - growth hormone and vincristine, in proportions such that their daily dosage is approximately 2 IU / kg of growth hormone for approximately 0.1 to 1 mg / m 2 of vincristine,
  • erythropoietin and daunomycin or dauxorubicin in proportions such that their daily dosage is approximately 150 IU / kg of erythropoietin for approximately 5 to 30 mg / m 2 of daunomycin or dauxorubicin, - rerythropoietin and vinblastine, proportions such that their daily dosage is approximately 150 IU / kg of erythropoietin for approximately 1 to 4 mg / m 2 of vinblastine,
  • erythropoietin and vincristine in proportions such that their daily dosage is approximately 150 IU / kg of erythropoietin for approximately 0.1 to 1 mg / m 2 of vincristine,
  • erythropoietin and taxol in proportions such that their daily dosage is approximately 150 IU / kg of erythropoietin for approximately 15 to 35 mg / m 2 of taxol.
  • the invention is illustrated by the following detailed description of the in vitro effect of growth hormone and erythropoietin on tumor cell lines.
  • a selection gene (resistant neomycin, Neo ⁇ ) and the gene coding for human growth hormone (hGH) were co-transfected into the human promyeloid leukemia line U937.
  • hGH human growth hormone
  • This cytokine secreted by different types of immune cells has anti-tumor activity (Harakana, K et al., 1984, Int J Cancer, 34: 263-267) and is capable of promoting the activation of NF-kB (Baeuerle PA, Henkel T, 1994, Ann Rev Immunol, 12: 141-179).
  • U937-hGH cells and U937-Neo control cells were cultured for 48 hours in the presence of increasing concentrations of TNF- ⁇ recombinant. At the end of this culture, the washed cells were incubated in the presence of propidium iodide which is incorporated into the DNA of the dead cells. The cells are analyzed by flow cytometry.
  • Figure 1 shows the increase in the incorporation of propidium iodide as a function of increasing doses of TNF- ⁇ expressed in international units (IU).
  • IU international units
  • Figure 2 shows the result of a delay gel analysis. On this gel were deposited nuclear extracts from U937-hGH cells and
  • U937 ("mother” line used to obtain the U937-hGH lines) subjected to different inducers including TNF- ⁇ or TNF- ⁇ and cycloheximide (inhibitor of protein synthesis). This experiment clearly indicates that the presence of NF-kB in the nuclei of U937-hGH cells is reduced compared to the control cells.
  • NF- ⁇ B The presence of NF- ⁇ B is attested on lines 4 and 5 which represent the migration of nuclear extracts of U937 cells stimulated by TNF- ⁇ , and pre-incubated, either with a cold NF- ⁇ B mutated probe which does not move the signal (line 4), or with a cold NF- ⁇ B homologous probe which inhibits the signal (line 5).
  • Figure 3 represents the result of an immunoassay enzyme (ELISA) produced with the lysate of U937-hGH and U937-Neo cells transfected in a transient with a plasmid containing NF- ⁇ B sequences in the promoter of the reporter gene coding for chloramphenicol-acetyl transferase (CAT) (Chiao P et al., 1994, Proc Natl Acad Sci USA, 91: 28-32).
  • ELISA immunoassay enzyme
  • the cells are transfected by electroporation and then incubated with TNF- ⁇ . At the end of the culture, the cells are lysed and the CAT activity is measured by a commercial ELISA (Boehrmger-Mannheim), according to the supplier's recommendations.
  • the figure shows that the CAT activity, reflecting the presence of NF- ⁇ B, is decreased in U937-hGH cells compared to the control cells, after stimulation with TNF- ⁇ .
  • TNF- ⁇ being very difficult in human clinic due to the adverse side effects, the inventors were interested in daunomycin.
  • This anthracycline used in anticancer therapy under the name of CerubidineR works by interposing in the sequences of cellular DNA, thereby disrupting cellular functioning.
  • active daunomycin NF-kB (Das KC, White CW, 1997, J Biol Chem, 272: 14914-14920 ).
  • Figure 4 indicates that the U937-hGH line is also more sensitive than the control line to daunomycin-mediated death.
  • hGH hGH to try to reverse the "adriamycin resistant" phenotype of cells isolated from a human ovarian adenocarcinoma IGRON / ADR (Bénard J et al., 1985, Cancer Res, 45: 4970-4979). As illustrated in Figure 5, these cells are insensitive to the toxic effect of daunomycin added to the culture (hGH groups 0 ng / ml). The addition of recombinant hGH (Saizen ⁇ , Serono laboratory) makes these cells sensitive to daunomycin, with a maximum effect observed for the lowest dose of hGH used here, ie 5 ng / ml.
  • EPO Erythropoietin
  • RCC-EPO cells 4.10 4 RCC cells were transiently transfected using an Effecten R kit, either with 3 ⁇ g of a plasmid carrying the gene coding for EPO (RCC-EPO cells), or with 3 ⁇ g of a plasmid coding for resistance to neomycin
  • Neo the black columns corresponding to the cells of the U937-hGH strain; TNF- ⁇ concentrations are indicated on the abscissa in IU / ml.
  • CAT the percentage change in CAT activity is indicated on the abscissa; the two left columns represent the two experiments performed on U937-Neo cells, and the two right columns represent the two independent experiments performed on U937-hGH cells.

Abstract

La présente invention a pour objet l'utilisation d'inhibiteurs du facteur nucléaire NF- kappa B, dans le cadre du traitement de cancers, et plus particulièrement d'hémopathies malignes ou de tumeurs solides, ainsi que les produits contenant un composé inhibiteur de l'activation de NF- kappa B et une molécule cytotoxique susceptible d'activer le facteur NF- kappa B, en tant que préparation de combinaison pour une utilisation simultanée, séparée, ou étalée dans le temps pour le traitement desdites pathologies.

Description

INHIBITEURS DE L'ACTIVATION DE NF-κB, ET LEURS UTILISATIONS PHARMACEUTIQUES
La présente invention a pour objet l'utilisation d'inhibiteurs biologiques de
NF-κB, dans le cadre du traitement de cancers, et plus particulièrement d'hémopathies malignes ou de tumeurs solides.
De nombreuses cellules tumorales ont développé des mécanismes sophistiqués leur permettant de résister à l'effet de certains agents utilisés en chimiothérapie anticancéreuse. Une des parades actuelles développées par les cliniciens est l'augmentation du dosage de ces médicaments, avec pour conséquence une aggravation des effets secondaires observés chez les patients. Ainsi par exemple, la plupart des leucémies et certains lymphomes sont traités par l' administration d'anthracyclines (daunomycine, dauxorubicine) dont la toxicité se manifeste sur des fonctions vitales (hépatique, cardiaque...)
(Gauthier, PH, 1987, Gaz Med Fr, 94:43-49).
Le mécanisme d'action de ces médicaments a été bien étudié et aboutit essentiellement à la mort des cellules tumorales par apoptose (Hanmrn YA, Blood, 89: 1845-1853). Pour échapper à l'apoptose, les cellules utilisent une catégorie de protéines codées par des gènes dénommés multidrug résistant gènes
(MDR) qui leur permettent de contrôler l'entrée ou la sortie de différentes molécules (Pastan I, Gottesman MM, 1991, Annu Rev Med, 42:277-286). Dans le cas des agents anticancéreux, ceux-ci sont évacués activement par l'intermédiaire de la P-glycoprotéine (P-gp), produit du gène MDR1. Comme tout gène, l'expression des MDR est contrôlée par différents facteurs nucléaires. Ainsi, il a été récemment montré que le gène MDR1 possédait dans sa partie régulatrice des sites de fixation du facteur NF-κB (Zhou G, Kuo MT, 1997, J Biol Chem, 272:15174-15183). Ce facteur nucléaire, qui par ailleurs joue un rôle considérable dans de nombreuses situations inflammatoires (Barnes PJ, Karin M, 1997, N Engl J Med, 336:1066-1071) participerait à l'activation du gène MDR1.
Plusieurs travaux récents ont établi un lien entre l' inhibition de l'activation de NF-κB et la potentialisation de l'apoptose. Dans les premières expériences rapportées (Wang CY et coll., 1996, Science, 272:784-786, Nan Antwerp DJ et coll., 1996, Science, 272:787-789) les auteurs ont validé leurs données en utilisant des lignées manipulées génétiquement pour obtenir l'inhibition ou la surexpression de l'activité NF-kB. Ceci ne permet donc pas d'en tirer directement des applications thérapeutiques.
Dans une autre étude, les auteurs ont testé les effets de différents inhibiteurs de protéases empêchant l'activation de NF-κB (pyrolidine dithiocarbamate, N-tosyl-L-lysyl chloromethylcétone, N-acétyl cystéine) sur une lignée de macrophages murins (Mannick EE et coll., 1997, Mediators of
Inflammation, 6:225-232). Les auteurs de cet article concluent sur le lien possible entre l'inhibition de NF-κB et l'induction de l'apoptose des cellules inflammatoires et immunes. Enfin, une autre approche axée sur l'inhibition des effets inflammatoires de NF-kB, a consisté à surexprimer l'inhibiteur naturel de NF-κB, la molécule
IκB, par thérapie génique (Makarov SS et coll., 1997, Gène Ther, 4:846-852).
Cette technologie est encore au stade de développement du fait de la complexité de la vectorisation nécessaire à son bon fonctionnement. La présente invention découle de la mise en évidence par les Inventeurs de nouveaux effets de l'hormone de croissance humaine (hGH), dénommée également somatotropine, à savoir d'une part que l'hGH, et autres composés se liant spécifiquement aux récepteurs transmembranaires des cytokines de classe I, sont des inhibiteurs de l'activation de NF-κB par une molécule cytotoxique, et, d'autre part que l'hGH, et autres composés susmentionnés, permettent de potentialiser les effets de molécules cytotoxiques et donc de réduire les concentrations de ces dernières dans le cadre de traitements thérapeutiques.
Tout d'abord, les Inventeurs ont observé que les monocytes humains répondaient moins à une stimulation par les lipopolysaccharides (LPS) quand ils étaient cultivés en présence d'hGH recombinante exogène. Les Inventeurs en ont conclu que l'hGH inhibait l'activation de NF-κB après stimulation par les LPS
(Haeffner A et coll., 1997, J I munol, 158:1310-1314).
Puis, les Inventeurs ont mis en évidence que les monocytes humains mouraient après le pontage (ou l'engagement) de la molécule de surface APOl/CD95/Fas, et ont montré que l'hGH diminue la mort médiée à travers la molécule Fas, en augmentant la synthèse d'un proto-oncogène antiapoptogène,
Bcl-2.
Enfin, les Inventeurs ont étudié les effets de l'hGH sur la réponse au
TNF-α car Fas et le récepteur p55 du TNF-α appartiennent à la même famille des récepteurs de croissance nerveuse. La lignée leucémique promyéloide humaine U937 a été utilisé pour réaliser ce travail, du fait de l'insensibilité des monocytes humains à la mort médiée par le TNF-α. L'obtention de résultats inverses à ceux observés avec Fas, à savoir que l'hGH accélère la mort des cellules médiée par le TNF-α, a permis aux Inventeurs de conclure sur l'effet inhibiteur de l'hGH sur l'activation de NF-κB par le TNF-α ou par d'autres molécules cytotoxiques activant NF-κB, telle que la daunomycine. Ainsi, la présente invention a pour but de fournir une nouvelle méthode de traitement des cancers, et plus particulièrement des hémopathies malignes et des tumeurs solides, offrant l'avantage d'améliorer à la fois la réponse des malades à certains traitements anticancéreux et également, potentiellement, l'état général du malade. L'invention a également pour but de fournir de nouveaux produits destinés au traitement desdites pathologies, présentant à la fois l'avantage d'augmenter la réponse des cellules tumorales à la chimiothérapie, et celui d'améliorer l'état général des patients. Les nouveaux produits de l'invention permettent de diminuer l'activation du facteur NF-κB par l'intermédiaire du composé inhibiteur de l'activation de NF-κB utilisé, tel que l'hormone de croissance humaine, ce qui est susceptible d'entraîner l'inhibition de la transcription des gènes MDR et donc un renforcement des effets cytotoxiques des agents antitumoraux utilisés, avec pour conséquence attendue la diminution du dosage de ces médicaments antitumoraux. L'invention a pour objet l'utilisation de composés inhibiteurs de l'activation de NF-κB, pour la préparation de médicaments destinés au traitement des hémopathies malignes et des tumeurs solides.
L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation de composés inhibiteurs de NF-κB, pour la préparation de médicaments destinés à la prévention de l'apparition, ou au traitement, de phénomènes de résistance aux molécules cytotoxiques utilisées dans le cadre du traitement des pathologies susmentionnées, ces phénomènes de résistance apparaissant chez les patients traités par ces molécules lorsque ces dernières sont susceptibles d'activer NF-κB. Par composés inhibiteurs de l'activation de NF-κB (encore désignés composés inhibiteurs de NF-κB), on entend tout composé capable d'inhiber dans les cellules de l'organisme, l'activation de NF-κB faite par des molécules cytotoxiques utilisées dans le cadre du traitement des pathologies susmentionnées, et donc tout composé capable d'inhiber la synthèse de protéines (telle que la P-gp) permettant aux cellules d'évacuer ces molécules avant qu'elles n'aient pu atteindre leurs cibles moléculaires. L'invention concerne plus particulièrement l'utilisation susmentionnée de composés inhibiteurs de l'activation de NF-κB, en association avec une ou plusieurs molécules cytotoxiques utilisables dans le cadre du traitement des hémopathies malignes ou des tumeurs solides, lesdites molécules cytotoxiques étant susceptibles d'activer le facteur NF-κB.
Avantageusement, les composés inhibiteurs de l'activation de NF-κB utilisés d.ans le cadre de la présente invention, sont des composés se liant spécifiquement aux récepteurs transmembranaires des cytokines de classe I dans les cellules de l'organisme. De préférence, lesdits composés sont choisis parmi ceux se liant aux récepteurs susmentionnés dont les séquences en acides aminés des parties transmembranaires, intracytoplasmiques et extramembranaires présentent une homologie d'environ 50 % à environ 70 % .
L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée de composés inhibiteurs de l'activation de NF-κB tels que définis ci-dessus, choisis parmi l'hormone de croissance, la prolactine, l'érythropoïétine, l'interleukme-4, l'interleukine-7, le G-CSF, le GM-CSF, l'interleukine-3, l'interleukine-6, d'origine humaine ou autres mammifères.
De préférence, lesdits composés sont choisis parmi l'hormone de croissance, ou l'érythropoïétine. A ce titre l'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée :
- de l'hormone de croissance humaine, telle qu'obtenue par extraction à partir d'extraits hypophysaires, et purification,
- ou, avantageusement, de l'hormone de croissance humaine recombinante telle que codée par la séquence nucléotidique SEQ ID NO 1, ou par toute séquence nucléotidique dérivée de cette dernière par dégénérescence du code génétique et étant néanmoins capable de coder pour l'hormone de croissance humaine dont la séquence en acides aminés est représentée par SEQ ID NO 2, ladite hormone de croissance étant obtenue par transformation de cellules appropriées à l'aide de vecteurs contenant une séquence nucléotidique telle que décrite ci-dessus, récupération de la protéine recombinante produite par lesdites cellules, et purification.
L'invention concerne également l'utilisation susmentionnée, de toute séquence peptidique dérivée par addition et/ou suppression et/ou substitution d'un ou plusieurs acides aminés de la séquence SEQ ID NO 2, et conservant la propriété de l'hormone de croissance humaine d'inhiber l'activation de NF-κB. L'invention a plus particulièrement pour objet encore l'utilisation susmentionnée de rérythropoïétine humaine recombinante telle que codée par la séquence nucléotidique SEQ ID NO 3, ou par toute séquence nucléotidique dérivée de cette dernière par dégénérescence du code génétique et étant néanmoins capable de coder pour l'érytmOpoïétine humaine dont la séquence en acides an inés est représentée par SEQ ID NO 4, ladite érythropoïétine étant obtenue p.ar transformation de cellules appropriées à l'aide de vecteurs contenant une séquence nucléotidique telle que décrite ci-dessus, récupération de la protéine recombinante produite par lesdites cellules, et purification.. L'invention concerne également l'utilisation susmentionnée, de toute séquence peptidique dérivée par addition et/ou suppression et/ou substitution d'un ou plusieurs acides aminés de la séquence SEQ ID NO 4, et conservant la propriété de rérythropoïétine humaine d'inhiber l'activation de NF-κB.
L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée de composés inhibiteurs de l'activation de NF-κB tels que définis ci-dessus, pour la préparation d'un médicament administrable par voie parentérale (IM, IN, SC), notamment à raison :
- d'environ 2 Ul/kg de poids corporel/jour dans le cas de l'hormone de croissance humaine, - d'environ 150 Ul/kg de poids corporel/jour dans le cas de érythropoïétine humaine.
Parmi les molécules cytotoxiques susceptibles d'activer le facteur NF-κB utilisées en association avec lesdits composés inhibiteurs de l'activation de
NF-κB dans le cadre de la présente invention, on peut citer : - les cytokines,
- les anthracyclines, dont la daunomycine, la dauxorubicine,
- les vinca-alcaloïdes, telles que la vinblastine et la vincristine,
- la paclitaxele (ou Taxol, DCI).
Avantageusement, le dosage des molécules cytotoxiques utilisées en association avec lesdits composés est environ 2 à environ 5 fois inférieur au dosage de ces mêmes molécules utilisées seules dans le cadre du traitement des hémopathies malignes et des tumeurs solides. A titre d'illustration :
- la posologie journalière usuelle de la daunomycine ou la dauxorubicine étant de 40 à 60 mg/m2, la posologie de ces dernières dans le cadre la présente invention est d'environ 5 à 30 mg/m2, - la posologie journalière usuelle de la vinblastine étant de 5 à 7 mg/m2, la posologie de cette dernière dans le cadre la présente invention est d'environ 1 à 4 mg/m2,
- la posologie journalière usuelle de la vincristine étant de 1 à 2 mg/m2, la posologie de cette dernière dans le cadre la présente invention est d'environ
0,1 à 1 mg/m2,
- la posologie journalière usuelle du taxol étant d'environ 75 mg/m2, la posologie de ce dernier dans le cadre la présente invention est d'environ 15 à 35 mg/m2. Parmi les cancers susceptibles d'être traités dans le cadre de la présente invention, on peut citer principalement :
- les hémopathies malignes telles que leucémies, lymphomes,
- les tumeurs solides telles que celles de l'ovaire, ou du sein. L'invention a également pour objet tout produit contenant : - un composé inhibiteur de l'activation de NF-κB tel que décrit ci-dessus, et plus particulièrement un composé se liant spécifiquement aux récepteurs transmembranaires des cytokines de classe I tels que définis ci-dessus,
- et une molécule cytotoxique susceptible d'activer le facteur NF-κB, en tant que préparation de combinaison pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps pour le traitement des hémopathies malignes et des tumeurs solides.
L'invention a également pour objet tout produit tel que défini ci-dessus, en tant que préparation de combinaison pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps pour la prévention de l'apparition, ou pour le traitement, de phénomènes de résistance aux molécules cytotoxiques utilisées dans le cadre du traitement des pathologies susmentionnées, apparaissant chez les patients traités par ces molécules lorsque ces dernières sont susceptibles d'activer NF-κB.
L'invention concerne plus particulièrement tout produit tel que défini ci- dessus, caractérisé en ce qu'il comprend à titre de composé inhibiteur de l'activation de NF-κB, l'hormone de croissance, la prolactine, l'érythropoïétine, l'interleukine-4, l'interleukine-7, le G-CSF, le GM-CSF, l'interleukine-3, interleukine-6.
Des produits particulièrement préférés dans le cadre de la présente invention, sont ceux comprenant à titre de composé inhibiteur de l'activation de NF-κB, l'hormone de croissance, ou érythropoïétine.
L'invention a plus particulièrement pour objet tout produit tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il comprend : - l'hormone de croissance humaine telle qu'obtenue par extraction à partir d'extraits hypophysaires, et purification,
- ou, avantageusement, l'hormone de croissance humaine recombinante telle que décrite ci-dessus, codée par la séquence nucléotidique SEQ ID NO 1, ou par toute séquence nucléotidique dérivée de cette dernière par dégénérescence du code génétique et étant néanmoins capable de coder pour l'hormone de croissance humaine dont la séquence en acides aminés est représentée par SEQ ID NO 2, ou toute séquence peptidique dérivée par addition et/ou suppression et/ou substitution d'un ou plusieurs acides aminés de la séquence SEQ ID NO 2, et conservant la propriété de l'hormone de croissance humaine d'inhiber l'activation de NF-κB.
L'invention a également pour objet tout produit tel que défini ci-dessus, caractérisé en ce qu'il comprend de l'érythropoïétine humaine recombinante telle que décrite ci-dessus, codée par la séquence nucléotidique SEQ ID NO 3, ou par toute séquence nucléotidique dérivée de cette dernière par dégénérescence du code génétique et étant néanmoins capable de coder pour érythropoïétine humaine dont la séquence en acides aminés est représentée par SEQ ID NO 4, ou toute séquence peptidique dérivée par addition et/ou suppression et/ou substitution d'un ou plusieurs acides aminés de la séquence SEQ ID NO 4, et conservant la propriété de rérythropoïétine humaine d'inhiber l'activation de
NF-κB.
L'invention concerne également tout produit tel que décrit ci-dessus, caractérisé en ce qu'il comprend à titre de molécule cytotoxique susceptible d'activer le facteur NF-κB, toute molécule choisie parmi les suivantes : - les cytokines,
- les anthracyclines, dont la daunomycine, la dauxorubicine,
- les vinca-alcaloïdes, telles que la vinblastine et la vincristine,
- la paclitaxele (ou Taxol, DCI).
Des produits tels que définis ci-dessus préférés dans le cadre de la présente invention, sont caractérisés en ce qu'ils contiennent :
- l'hormone de croissance et la daunomycine ou la dauxorubicine, dans des proportions telles que leur posologie journalière est d'environ 2 Ul/kg d'hormone de croissance pour environ 5 à 30 mg/m2 de daunomycine ou dauxorubicine, - l'hormone de croissance et la vinblastine, dans des proportions telles que leur posologie journalière est d'environ 2 Ul/kg d'hormone de croissance pour environ 1 à 4 mg/m2 de vinblastine, - l'hormone de croissance et la vincristine, dans des proportions telles que leur posologie journalière est d'environ 2 Ul/kg d'hormone de croissance pour environ 0,1 à 1 mg/m2 de vincristine,
- l'hormone de croissance et le taxol, dans des proportions telles que leur posologie journalière est d'environ 2 Ul/kg d'hormone de croissance pour environ 15 à 35 mg/m2 de taxol,
- érythropoïétine et la daunomycine ou la dauxorubicine, dans des proportions telles que leur posologie journalière est d'environ 150 Ul/kg d' érythropoïetine pour environ 5 à 30 mg/m2 de daunomycine ou dauxorubicine, - rérythropoïétine et la vinblastine, dans des proportions telles que leur posologie journalière est d'environ 150 Ul/kg d' érythropoïetine pour environ 1 à 4 mg/m2 de vinblastine,
- rérythropoïétine et la vincristine, dans des proportions telles que leur posologie journalière est d'environ 150 Ul/kg d' érythropoïetine pour environ 0,1 à 1 mg/m2 de vincristine,
- érythropoïétine et le taxol, dans des proportions telles que leur posologie journalière est d'environ 150 Ul/kg d' érythropoïetine pour environ 15 à 35 mg/m2 de taxol.
L'invention est illustrée à l'aide de la description détaillée qui suit de l'effet in vitro de l'hormone de croissance et de érythropoïétine sur des lignées cellulaires tumorales.
1) Exemple n°l :
Un gène de sélection (neomycin résistant, Neo^) et le gène codant pour l'hormone de croissance humaine (hGH) ont été co-transfectés dans la lignée leucémique promyéloïde humaine U937. En comparant la lignée transfectée U937-hGH (qui produit de façon constitutive l'hGH à des doses physiologiques), soit à la lignée parentale U937, soit à une lignée transfectée avec Neo^- seul, on observe par différentes approches méthodologiques que la lignée U937-hGH meurt davantage sous l'effet du tumor necrosis factor (TNF-α). Cette cytokine sécrétée par différents types de cellules immunes possède une activité antitumorale (Harakana, K et coll., 1984, Int J Cancer, 34:263-267) et est capable de promouvoir l'activation de NF-kB (Baeuerle PA, Henkel T, 1994, Ann Rev Immunol, 12:141-179).
Les cellules U937-hGH et les cellules contrôles U937-Neo ont été mises en culture pendant 48 heures en présence de concentrations croissantes de TNF-α recombinant. A l'issue de cette culture, les cellules lavées ont été incubées en présence d'iodure de propidium qui s'incorpore dans l'ADN des cellules mortes. Les cellules sont analysées par cytométrie en flux.
La Figure n°l montre l'augmentation de l'incorporation d'iodure de propidium en fonction des doses croissantes de TNF-α exprimées en unités internationales (UI). Pour les cellules U937 (lignée "mère" ayant servi à obtenir les lignées U937-hGH), avec l'augmentation de la concentration de TNF-α on observe une légère augmentation du pourcentage de cellules fluorescentes (donc mortes) due à l'incorporation d'iodure de propidium (fluorescence rouge). Cette figure met par contre bien en évidence le fait que ces valeurs sont beaucoup plus élevées pour la lignée U937-hGH, en fonction des doses croissantes de TNF-α ajoutées au milieu de culture.
Il est ainsi démontré que la présence dans les cultures cellulaires d'hGH produite par les lignées U937 transfectees avec le gène de VhGH, augmente leur susceptibilité à l'induction de mort médiée par le TNF-α.
2) Exemple n°2 :
Ayant rapporté dans une étude précédente que l'hGH pouvait intervenir dans l'inhibition de l'activation de NF-κB médiée par les lipopolysaccharides
(Haeffner A et coll., 1997, J Immunol, 158:1310-1314), les Inventeurs ont étudié le statut de NF-κB lors de la stimulation des différentes lignées par le
TNF-α.
La Figure n°2 représente le résultat d'une analyse par gel retard. Sur ce gel ont été déposés des extraits nucléaires provenant des cellules U937-hGH et
U937 (lignée "mère" ayant servi à obtenir les lignées U937-hGH) soumises à différents inducteurs dont le TNF-α ou le TNF-α et la cycloheximide (inhibiteur de synthèse protéique). Cette expérience indique clairement que la présence de NF-kB dans les noyaux des cellules U937-hGH est diminuée par rapport aux cellules contrôles.
La présence de NF-κB est attestée sur les lignes 4 et 5 qui représentent la migration des extraits nucléaires de cellules U937 stimulées par le TNF-α, et pré-incubés, soit avec une sonde froide NF-κB mutée qui ne déplace pas le signal (ligne 4), soit avec une sonde froide NF-κB homologue qui inhibe le signal (ligne 5).
La Figure n°3 représente le résultat d'un enzyme immunoassay (ELISA) réalisé avec le lysat de cellules U937-hGH et U937-Neo transfectees de façon transitoire avec un plasmide contenant des séquences NF-κB dans le promoteur du gène rapporteur codant pour la chloramphenicol-acetyl-transférase (CAT) (Chiao P et coll., 1994, Proc Natl Acad Sci USA, 91:28-32).
Les cellules sont transfectees par électroporation puis incubées avec le TNF-α. A l'issue de la culture, les cellules sont lysées et l'activité CAT est mesurée par un ELISA commercial (Boehrmger-Mannheim), selon les recommandations du fournisseur.
La figure montre que l'activité CAT, reflet de la présence de NF-κB, est diminuée dans les cellules U937-hGH par rapport aux cellules contrôles, après stimulation par le TNF-α.
Les résultats présentés dans les Figures 2 et 3 démontrent donc par deux approches méthodologiques différentes, que la synthèse de NF-κB est diminuée dans U937-hGH par rapport à la lignée contrôle.
3) Exemple n°3 :
L'utilisation du TNF-α étant très difficile en clinique humaine du fait des effets secondaires adverses, les Inventeurs se sont intéressés à la daunomycine. Cette anthracycline utilisée en thérapie anticancéreuse sous le nom de CerubidineR agit en s 'intercalant dans les séquences de l'ADN cellulaire, perturbant de ce fait le fonctionnement cellulaire. Tout comme le TNF-α (Baeuerle PA, Henkel T, 1994, Ann Rev Immunol, 12:141-179), la daunomycine active NF-kB (Das KC, White CW, 1997, J Biol Chem, 272: 14914-14920). La Figure 4 indique que la lignée U937-hGH est également plus sensible que la lignée contrôle à la mort médiée par la daunomycine.
4) Exemple n°4 :
Pour tester la possibilité d'utiliser l'objet de la présente invention sur des tumeurs non lymphoïdes, les Inventeurs ont utilisé l'hGH pour essayer d'inverser le phenotype "adriamycine résistant" de cellules isolées à partir d'un adénocarcinome ovarien humain IGRON/ADR (Bénard J et coll., 1985, Cancer Res, 45:4970-4979). Comme illustré par la Figure 5, ces cellules sont insensibles à l'effet toxique de la daunomycine ajoutée à la culture (groupes hGH 0 ng/ml). L'adjonction d'hGH recombinante (Saizen^, laboratoire Serono) rend ces cellules sensibles à la daunomycine, avec un effet maximal observé pour la plus faible dose d'hGH utilisée ici, soit 5 ng/ml.
Ce résultat prouve d'une part que des résultats d'aggravation de mortalité peuvent être obtenus aussi bien avec de l'hGH exogène recombinante qu'avec les lignées transfectees susmentionnées, et que d'autre part, la présente invention peut s'appliquer à des tumeurs solides non lymphoïdes.
5) Exemple n°5 :
L'érythropoïétine (EPO), une autre molécule que hGH appartenant à la même famille des cytokines de classe I, a été testée sur des cellules de carcinome rénal humain (RCC) HIEG.
4.104 cellules RCC ont été transfectees de façon transitoire à l'aide d'un kit EffectenR , soit avec 3μg d'un plasmide portant le gène codant pour EPO (cellules RCC-EPO), soit avec 3μg d'un plasmide codant pour la résistance à la néomycine
(cellules RCC-Neo) comme contrôle négatif. 48 heures après, les RCC ont été mises en présence de daunomycine à deux concentrations différentes : 0,3 et 0,6 μM. Le nombre de cellules survivantes a été mesuré 48 heures plus tard par cytométrie en flux (Figure 6). Les résultats de l'expérience 1 exprimés en nombre de cellules vivantes sont les suivants :
RCC-Neo RCC-EPO daunomycine OμM 14745 26911 daunomycine 0,3μM 11382 3487 daunomycine 0,6μM 10179 8551
Les résultats de l'expérience 2 exprimés en nombre de cellules vivantes sont les suivants :
RCC-Neo RCC-EPO daunomycine OμM 20150 29102 daunomycine 0,3μM 8891 2693 daunomycine 0,6μM 7001 4739
Les résultats montrent que dans deux expériences différentes (expériences 1 et 2), la présence conjointe de daunomycine et d'EPO aggrave sensiblement la mortalité cellulaire, avec un effet plus marqué pour la plus faible dose de daunomycine utilisée. Légendes des figures :
- Figure 1 : Effet de l'hormone de croissance sur la mortalité des cellules exposées au TNF-α : le pourcentage des cellules mortes (IP+) est indiqué en ordonnée, les colonnes blanches correspondant aux cellules de la souche U937-
Neo, les colonnes noires correspondant aux cellules de la souche U937-hGH ; les concentrations de TNF-α sont indiquées en abscisse en Ul/ml.
- Figure 2 : Effet de l'hormone de croissance sur la translocation de NF- KB ; la colonne 1 correspond aux cellules U937 de contrôle, la colonne 2 correspond aux cellules U937 traitées par TNF-α + cycloheximide, la colonne 3 correspond aux cellules U937 traitées par TNF-α, la colonne 4 correspond aux cellules U937 traitées par TNF-α + une sonde NF-κB mutée, la colonne 5 correspond aux cellules U937 traitées par TNF-α + une sonde NF-κB homologue, la colonne 6 correspond aux cellules U937-hGH de contrôle, la colonne 7 correspond aux cellules U937-hGH traitées par TNF-α + cycloheximide, la colonne 8 correspond aux cellules U937-hGH traitées par TNF-α ; la présence de NF-κB est indiquée par une flèche.
- Figure 3 : Effet de l'hormone de croissance sur l'activité rapporteur
CAT ; le pourcentage de variation de l'activité CAT est indiqué en abscisse ; les deux colonnes de gauche représentent les deux expériences effectuées sur les cellules U937-Neo, et les deux colonnes de droite représentent les deux expériences indépendantes effectuées sur les cellules U937-hGH.
- Figure 4 : Effet de l'hormone de croissance sur l'apoptose induite par la daunomycine ; le pourcentage des cellules mortes (IP+) est indiqué en ordonnée, les colonnes blanches correspondant aux cellules de la souche U937- Neo, les colonnes noires correspondant aux cellules de la souche U937-hGH ; les pourcentages indiqués montrent l'augmentation de la mortalité des cellules ; les concentrations de daunomycine sont indiquées en abscisse en μM.
- Figure 5 : Effet de l'hormone de croissance sur l'apoptose de la lignée IGROV/ADR, induite par la daunomycine ; le pourcentage des cellules mortes (IP+) est indiqué en ordonnée, les différentes colonnes correspondant aux différentes concentrations d'hGH utilisées (0, 5, 50, 500, 1000 ng/ml) ; les concentrations de daunomycine sont indiquées en abscisse en μM. - Figure 6 : Effet de érythropoïétine sur l'apoptose de la lignée de carcinome rénal humain HIEG, induite par la daunomycine : pour chacune des expérience 1 et 2, le nombre de cellules vivantes est indiqué en ordonnée, les colonnes blanches correspondant aux cellules RCC-Neo, les colonnes noires correspondant aux cellules RCC-EPO ; les concentrations de daunomycine sont indiquées en abscisse en μM.

Claims

REVENDICATIONS
1. Utilisation de composés inhibiteurs de l'activation du facteur nucléaire
KB (NF-KB), pour la préparation de médicaments destinés au traitement des hémopathies malignes et des tumeurs solides, et à la prévention de l'apparition, ou au traitement, de phénomènes de résistance aux molécules cytotoxiques utilisées dans le cadre du traitement des pathologies susmentionnées, apparaissant chez les patients traités par ces molécules lorsque ces dernières sont susceptibles d'activer NF-κB.
2. Utilisation de composés inhibiteurs de l'activation de NF-κB selon la revendication 1, pour la préparation de médicaments destinés au traitement des hémopathies malignes et des tumeurs solides, en association avec une ou plusieurs molécules cytotoxiques utilisables dans le cadre du traitement des pathologies susmentionnées et susceptibles d'activer le facteur NF-κB.
3. Utilisation selon la revendication 1 ou la revendication 2, de composés inhibiteurs de l'activation de NF-κB se liant spécifiquement aux récepteurs transmembranaires des cytokines de classe I dans les cellules de l'organisme, tels que les composés choisis parmi l'hormone de croissance ou l'érythropoïétine.
4. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3 :
- de l'hormone de croissance humaine, telle qu'obtenue par extraction à partir d'extraits hypophysaires, et purification,
- ou de l'hormone de croissance humaine recombinante telle que codée par la séquence nucléotidique SEQ ID NO 1, ou par toute séquence nucléotidique dérivée de cette dernière par dégénérescence du code génétique et étant néanmoins capable de coder pour l'hormone de croissance humaine dont la séquence en acides aminés est représentée par SEQ ID NO 2, ladite hormone de croissance étant obtenue par transformation de cellules appropriées à l'aide de vecteurs contenant une séquence nucléotidique telle que décrite ci-dessus, récupération de la protéine recombinante produite par lesdites cellules, et purification,
- ou de toute séquence peptidique dérivée par addition et/ou suppression et/ou substitution d'un ou plusieurs acides aminés de la séquence SEQ ID NO 2, et conservant la propriété de l'hormone de croissance humaine d'inhiber l'activation de NF-κB.
5. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3 :
- de l'érythropoïétine humaine recombinante telle que codée par la séquence nucléotidique SEQ ID NO 3, ou par toute séquence nucléotidique dérivée de cette dernière par dégénérescence du code génétique et étant néanmoins capable de coder pour rérythropoïétine humaine dont la séquence en acides aminés est représentée par SEQ ID NO 4, ladite érythropoïetine étant obtenue par transformation de cellules appropriées à l'aide de vecteurs contenant une séquence nucléotidique telle que décrite ci-dessus, récupération de la protéine recombinante produite par lesdites cellules, et purification.,
- ou de toute séquence peptidique dérivée par addition et/ou suppression et/ou substitution d'un ou plusieurs acides aminés de la séquence SEQ ID NO 4, et conservant la propriété de rérythropoïétine humaine d'inhiber l'activation de NF-κB.
6. Utilisation de composés inhibiteurs de l'activation de NF-κB selon l'une des revendications 1 à 7, en association avec une ou plusieurs molécules cytotoxiques susceptibles d'activer le facteur NF-κB choisies parmi :
- les cytokines,
- les anthracyclines, dont la daunomycine, la dauxorubicine,
- les vinca-alcaloïdes, telles que la vinblastine et la vincristine, - la paclitaxele (ou Taxol, DCI).
7. Utilisation de composés inhibiteurs de l'activation de NF-κB selon l'une des revendications 1 à 6, caractérisée en ce que le dosage des molécules cytotoxiques utilisées en association avec lesdits composés est environ 2 à environ 5 fois inférieur au dosage de ces mêmes molécules utilisées seules dans le cadre du traitement des hémopathies malignes et des tumeurs solides.
8. Produits contenant un composé inhibiteur de l'activation de NF-κB et une molécule cytotoxique susceptible d'activer le facteur NF-κB, en tant que préparation de combinaison pour une utilisation simultanée, séparée ou étalée dans le temps pour le traitement des hémopathies malignes et des tumeurs solides.
9. Produit selon la revendication 8, caractérisé en ce qu'il comprend à titre de composé inhibiteur de l'activation de NF-κB, un composé se liant spécifiquement aux récepteurs transmembranaires des cytokines de classe I dans les cellules de l'organisme, choisi notamment parmi l'hormone de croissance ou érythropoïétine.
10. Produit selon la revendication 8 ou 9, caractérisé en ce qu'il comprend: - l'hormone de croissance humaine, telle qu'obtenue par extraction à partir d'extraits hypophysaires, et purification,
- ou l'hormone de croissance humaine recombinante telle que codée par la séquence nucléotidique SEQ ID NO 1, ou par toute séquence nucléotidique dérivée de cette dernière par dégénérescence du code génétique et étant néanmoins capable de coder pour l'hormone de croissance humaine dont la séquence en acides aminés est représentée par SEQ ID NO 2, ladite hormone de croissance étant obtenue par transformation de cellules appropriées à l'aide de vecteurs contenant une séquence nucléotidique telle que décrite ci-dessus, récupération de la protéine recombinante produite par lesdites cellules, et purification,
- ou toute séquence peptidique dérivée par addition et/ou suppression et/ou substitution d'un ou plusieurs acides aminés de la séquence SEQ ID NO 2, et conservant la propriété de l'hormone de croissance humaine d'inhiber l'activation de NF-κB.
11. Produit selon la revendication 8 ou 9, caractérisé en ce qu'il comprend:
- rérythropoïétine humaine recombinante telle que codée par la séquence nucléotidique SEQ ID NO 3, ou par toute séquence nucléotidique dérivée de cette dernière par dégénérescence du code génétique et étant néanmoins capable de coder pour rérythropoïétine humaine dont la séquence en acides aminés est représentée par SEQ ID NO 4, ladite érythropoïetine étant obtenue par transformation de cellules appropriées à l'aide de vecteurs contenant une séquence nucléotidique telle que décrite ci-dessus, récupération de la protéine recombinante produite par lesdites cellules, et purification. ,
- ou toute séquence peptidique dérivée par addition et/ou suppression et/ou substitution d'un ou plusieurs acides aminés de la séquence SEQ ID NO 4, et conservant la propriété de l'érythropoïétine humaine d'inhiber l'activation de NF-κB.
12. Produit selon l'une des revendications 8 à 11, caractérisé en ce qu'il comprend à titre de molécule cytotoxique susceptible d'activer le facteur NF-κB, toute molécule choisie parmi les suivantes :
- les cytokines,
- les anthracyclines, dont la daunomycine, la dauxorubicine, - les vinca-alcaloïdes, telles que la vinblastine et la vincristine,
- la paclitaxele (ou Taxol, DCI).
EP99958229A 1998-11-25 1999-11-24 INHIBITEURS DE L'ACTIVATION DE NF-$g(k)B, ET LEURS UTILISATIONS PHARMACEUTIQUES Withdrawn EP1131088A2 (fr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9814858 1998-11-25
FR9814858A FR2786104B1 (fr) 1998-11-25 1998-11-25 Inhibiteurs de l'activation de nf-kb, et leurs utilisations pharmaceutiques
PCT/FR1999/002897 WO2000030587A2 (fr) 1998-11-25 1999-11-24 INHIBITEURS DE L'ACTIVATION DE NF-λB, ET LEURS UTILISATIONS PHARMACEUTIQUES

Publications (1)

Publication Number Publication Date
EP1131088A2 true EP1131088A2 (fr) 2001-09-12

Family

ID=9533184

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EP99958229A Withdrawn EP1131088A2 (fr) 1998-11-25 1999-11-24 INHIBITEURS DE L'ACTIVATION DE NF-$g(k)B, ET LEURS UTILISATIONS PHARMACEUTIQUES

Country Status (7)

Country Link
US (2) US6914046B1 (fr)
EP (1) EP1131088A2 (fr)
JP (1) JP2002537224A (fr)
AU (1) AU1564300A (fr)
CA (1) CA2351733A1 (fr)
FR (1) FR2786104B1 (fr)
WO (1) WO2000030587A2 (fr)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003090681A2 (fr) * 2002-04-24 2003-11-06 Research Development Foundation Effets synergetiques des inhibiteurs du facteur nf-kb de transcription nucleaire et d'agents anti-cancereux
CN1674881A (zh) * 2002-06-26 2005-09-28 学校法人庆应义塾 含NF－κB抑制剂的医药组合物
GB0228441D0 (en) * 2002-12-05 2003-01-08 Ares Trading Sa Splice variant
KR20050097962A (ko) * 2003-02-14 2005-10-10 각고호우징 게이오기주크 의약 조성물
ES2967701T3 (es) * 2013-03-15 2024-05-03 Translate Bio Inc Mejora sinergística de la entrega de ácidos nucleicos mediante formulaciones mezcladas

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL97779A (en) * 1990-04-10 2000-01-31 Genentech Inc Compositions for cytoprotection against radiation and chemotherapy injury or risk thereof
US20020052309A1 (en) * 1996-09-11 2002-05-02 Athanasius A. Anagnostou Method of treating endothelial injury
AU8768098A (en) * 1997-08-04 1999-02-22 Christopher J. Berry Method of treating disease using a tocotrienol and alpha-lipoic acid r derivatives or an ester thereof
US6831057B2 (en) * 1997-10-28 2004-12-14 The University Of North Carolina At Chapel Hill Use of NF-κB inhibition in combination therapy for cancer

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See references of WO0030587A2 *

Also Published As

Publication number Publication date
WO2000030587A3 (fr) 2000-09-14
CA2351733A1 (fr) 2000-06-02
JP2002537224A (ja) 2002-11-05
AU1564300A (en) 2000-06-13
FR2786104A1 (fr) 2000-05-26
US20050272654A1 (en) 2005-12-08
US6914046B1 (en) 2005-07-05
FR2786104B1 (fr) 2002-12-27
WO2000030587A2 (fr) 2000-06-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0667771B1 (fr) Compositions antitumorales contenant des derives du taxane
Dusting Nitric oxide in cardiovascular disorders
US5457130A (en) Eicosapentaenoic acid used to treat cachexia
JP4467885B2 (ja) タキサン誘導体を含有する抗腫瘍組成物
JP2845622B2 (ja) インターロイキン―２とヒスタミン、その類似体又はｈ▲下２▼―受容体アゴニストを含む抗腫瘍性製剤
Hriscu Modulatory factors of circadian phagocytic activity
Hodges et al. CoQ_ {10}: could it have a role in cancer management?
US20180353441A1 (en) Compositions and methods for treating lung diseases
Reimers et al. Interleukin 1β induces diabetes and fever in normal rats by nitric oxide via induction of different nitric oxide synthases
EP2173349B1 (fr) Combinaisons antitumorales contenant un agent inhibiteur de vegf et de l'irinotecan
FR2527441A1 (fr) Agent pour accroitre l'activite antitumorale d'un agent antitumoral et composition antitumorale le contenant
EP1131088A2 (fr) INHIBITEURS DE L'ACTIVATION DE NF-$g(k)B, ET LEURS UTILISATIONS PHARMACEUTIQUES
SK2712002A3 (en) Pharmaceutical composition for treating hepatocellular carcinoma
JPH09507490A (ja) 増殖性障害、転移および薬物耐性腫瘍の治療用バナジン酸塩化合物
Carvalho-Freitas et al. In vitro macrophage activity: biphasic effect of prolactin and indirect evidence of dopaminergic modulation
JPH10504304A (ja) ナチュラルキラー細胞活性化物質と過酸化水素スカベンジャーまたは過酸化水素阻害物質とを用いるナチュラルキラー細胞の活性増強
KR20070063507A (ko) 면역조절작용과 화학방어활성을 가진 치환된 퓨리닐 유도체및 단독 또는 중쇄 길이 지방산이나 글리세리드와의 혼합사용
Pinegin et al. Experimental immunology The effect of polyoxidonium on the phagocytic activity of human peripheral blood leukocytes
EP0280593B1 (fr) Composition à base d'acide aminé et de vitamines utilisable en thérapeutique cancérologique
Tohgo et al. Anticancer drugs that induce cancer-associated cachectic syndromes
EP1499330B1 (fr) Therapie par l'arsenic de maladies autoimmunes
EP0250335A1 (fr) Médicament et composition médicamenteuse pour le traitement des tumeurs ainsi que pour le traitement des maladies infectieuses dues aux virus
EP1631291B1 (fr) Utilisation d'un inhibiteur de tyrosine kinase c-abl-, pdgf-r- ou c-kit- dans le traitement du diabete
Umbert et al. Comparison of the pathology of fascia in eosinophilic myalgia syndrome patients and idiopathic eosinophilic fasciitis
Mathov The risks of monoamine oxidase inhibitors in the treatment of bronchial asthma

Legal Events

Date Code Title Description
PUAI Public reference made under article 153(3) epc to a published international application that has entered the european phase

Free format text: ORIGINAL CODE: 0009012

17P Request for examination filed

Effective date: 20010518

AK Designated contracting states

Kind code of ref document: A2

Designated state(s): AT BE CH CY DE DK ES FI FR GB GR IE IT LI LU MC NL PT SE

AX Request for extension of the european patent

Free format text: AL;LT;LV;MK;RO;SI

17Q First examination report despatched

Effective date: 20031103

17Q First examination report despatched

Effective date: 20031103

STAA Information on the status of an ep patent application or granted ep patent

Free format text: STATUS: THE APPLICATION IS DEEMED TO BE WITHDRAWN

18D Application deemed to be withdrawn

Effective date: 20080212