EA046200B1 - Стабильный состав на основе g-csf, слитого с гибридным fc - Google Patents
Стабильный состав на основе g-csf, слитого с гибридным fc Download PDFInfo
- Publication number
- EA046200B1 EA046200B1 EA202092623 EA046200B1 EA 046200 B1 EA046200 B1 EA 046200B1 EA 202092623 EA202092623 EA 202092623 EA 046200 B1 EA046200 B1 EA 046200B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- composition
- csf
- stability
- fusion
- sorbitol
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 157
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 title claims description 95
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 title claims 5
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 147
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 38
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 38
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 35
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 35
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 26
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 26
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 24
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 23
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 23
- 229920001993 poloxamer 188 Polymers 0.000 claims description 17
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 13
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 12
- 229940044519 poloxamer 188 Drugs 0.000 claims description 11
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 10
- BDKLKNJTMLIAFE-UHFFFAOYSA-N 2-(3-fluorophenyl)-1,3-oxazole-4-carbaldehyde Chemical compound FC1=CC=CC(C=2OC=C(C=O)N=2)=C1 BDKLKNJTMLIAFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 8
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 8
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 8
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 claims description 8
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 8
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 claims description 8
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 claims description 8
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 8
- 229940087562 sodium acetate trihydrate Drugs 0.000 claims description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 3
- CTKXFMQHOOWWEB-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide/propylene oxide copolymer Chemical compound CCCOC(C)COCCO CTKXFMQHOOWWEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 102100039619 Granulocyte colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 96
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 63
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 35
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 33
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 31
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 27
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 23
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 description 20
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 19
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 15
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 15
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 14
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 14
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 13
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 13
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 11
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 11
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000006870 function Effects 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 9
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 9
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 9
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 9
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 9
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 9
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 9
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 8
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 8
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 8
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 8
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108010029961 Filgrastim Proteins 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 7
- 108010044644 pegfilgrastim Proteins 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 6
- HQPMKSGTIOYHJT-UHFFFAOYSA-N ethane-1,2-diol;propane-1,2-diol Chemical compound OCCO.CC(O)CO HQPMKSGTIOYHJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 6
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- 239000002585 base Substances 0.000 description 5
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 5
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 5
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 239000012537 formulation buffer Substances 0.000 description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 4
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 4
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 229960004177 filgrastim Drugs 0.000 description 4
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 4
- 229940071846 neulasta Drugs 0.000 description 4
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 4
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000034628 Celiac artery compression syndrome Diseases 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 3
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 3
- 101000746367 Homo sapiens Granulocyte colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical group SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- -1 ammonium ions Chemical class 0.000 description 3
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 230000006652 catabolic pathway Effects 0.000 description 3
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 229940126534 drug product Drugs 0.000 description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 3
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 238000000569 multi-angle light scattering Methods 0.000 description 3
- 229940029345 neupogen Drugs 0.000 description 3
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 3
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 3
- HQQSBEDKMRHYME-UHFFFAOYSA-N pefloxacin mesylate Chemical compound [H+].CS([O-])(=O)=O.C1=C2N(CC)C=C(C(O)=O)C(=O)C2=CC(F)=C1N1CCN(C)CC1 HQQSBEDKMRHYME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960001373 pegfilgrastim Drugs 0.000 description 3
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000012552 review Methods 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 238000012430 stability testing Methods 0.000 description 3
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010041884 CD4 Immunoadhesins Proteins 0.000 description 2
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 241001460678 Napo <wasp> Species 0.000 description 2
- 101100498071 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) cys-17 gene Proteins 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- BBWBEZAMXFGUGK-UHFFFAOYSA-N bis(dodecylsulfanyl)-methylarsane Chemical compound CCCCCCCCCCCCS[As](C)SCCCCCCCCCCCC BBWBEZAMXFGUGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N galactitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 2
- VKYKSIONXSXAKP-UHFFFAOYSA-N hexamethylenetetramine Chemical compound C1N(C2)CN3CN1CN2C3 VKYKSIONXSXAKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 230000009878 intermolecular interaction Effects 0.000 description 2
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 2
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 238000001370 static light scattering Methods 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- PIEPQKCYPFFYMG-UHFFFAOYSA-N tris acetate Chemical compound CC(O)=O.OCC(N)(CO)CO PIEPQKCYPFFYMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N (R)-(-)-Propylene glycol Chemical compound C[C@@H](O)CO DNIAPMSPPWPWGF-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GNENVASJJIUNER-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-tricyclohexyloxy-1,3,5,2,4,6-trioxatriborinane Chemical compound C1CCCCC1OB1OB(OC2CCCCC2)OB(OC2CCCCC2)O1 GNENVASJJIUNER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUSNOPLQVRUIIM-UHFFFAOYSA-N 4-amino-2-(4,4-dimethyl-2-oxoimidazolidin-1-yl)-n-[3-(trifluoromethyl)phenyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C1NC(C)(C)CN1C(N=C1N)=NC=C1C(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 FUSNOPLQVRUIIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-M Aminoacetate Chemical compound NCC([O-])=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000032467 Aplastic anaemia Diseases 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241001313846 Calypso Species 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 102000007644 Colony-Stimulating Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N D-arabinitol Chemical compound OC[C@@H](O)C(O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 208000037487 Endotoxemia Diseases 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 1
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N L-(-)-Sorbose Chemical compound OCC1(O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 201000003793 Myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 241000208317 Petroselinum Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 239000004373 Pullulan Substances 0.000 description 1
- 229920001218 Pullulan Polymers 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 229940126587 biotherapeutics Drugs 0.000 description 1
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 150000007942 carboxylates Chemical group 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000002144 chemical decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 229940047120 colony stimulating factors Drugs 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 238000013329 compounding Methods 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 229940061607 dibasic sodium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 238000000113 differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000012395 formulation development Methods 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 1
- 239000004312 hexamethylene tetramine Substances 0.000 description 1
- 235000010299 hexamethylene tetramine Nutrition 0.000 description 1
- 239000012493 hydrazine sulfate Substances 0.000 description 1
- 229910000377 hydrazine sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000000126 in silico method Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000011545 laboratory measurement Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 229940045641 monobasic sodium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 208000004235 neutropenia Diseases 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009965 odorless effect Effects 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 230000010494 opalescence Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229960000502 poloxamer Drugs 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 229940068965 polysorbates Drugs 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 235000019423 pullulan Nutrition 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000006681 severe congenital neutropenia Diseases 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000008646 thermal stress Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000052 vinegar Substances 0.000 description 1
- 235000021419 vinegar Nutrition 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
Description
Область техники
Настоящий состав относится к композициям на основе стабильного жидкого состава, содержащим молекулы гибридного Fc, слитого посредством пептидной связи с гранулоцитарным колониестимулирующим фактором (G-CSF), подходящим для введения, осуществляемого подкожным (п/к) путем.
Уровень техники
Гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF) представляет собой белок, необходимый для пролиферации и дифференцировки гранулоцитов, в частности нейтрофилов. Гранулоциты поглощают и уничтожают вторгающиеся микроорганизмы и клеточный детрит и, таким образом, имеют критическое значение для ответа на инфекцию. Однако их продолжительность жизни в кровотоке составляет только 6-12 ч, и они подвергаются разрушению во время своего функционирования. Как результат высокой скорости обновления популяции гранулоцитов, их количество быстро и значительно падает после повреждения костного мозга, например, после прохождения курса лечения с помощью традиционных средств лечения рака, включающих химиотерапевтические средства и лучевую терапию, или на фоне иммунологических нарушений, включающих СПИД (US 7208473 В2).
В последние годы повышение эффективности существующих в природе молекул или лекарственных средств посредством повышения их активности in vivo и/или уменьшения побочных эффектов представляет большой интерес для многих ученых. Гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF) представляет собой пример такой молекулы, лекарственные свойства которой изменяли с течением времени (N. Nicola, Colony Stimulating Factors, vol. 49, Marcel Dekker, Inc., New York, 1990).
Рекомбинантный человеческий метионил-G-CSF (r-metHuG-CSF), представляющий собой белок, длина которого составляет 175 остатков, впервые был получен с использованием E-coli (С.Р. Hill, T.D. Osslund, D. Eisenberg, The structure of granulocytecolony-stimulating factor and its relationship to other growth factors, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90, 1993, 5167-5177). В структуре белка имеются две дисульфидные связи и, как известно, один свободный цистеиновый остаток, Cys17.Cys17, протонируется при низком значении рН, и протонированная форма является важной для поддержания стабильности G-CSF (Т. Arakawa, S.J. Prestrelski, L.O. Narhi, Т.С. Boone, W.c. Kenney, Cysteine 17 of recombinant human granulocyte-colony stimulating factor is partially solvent-exposed (J. Protein Chem. 12, 1993, 525-531). Торговым названием r-metHuG-CSF является NEUPOGEN® (филграстим), и его применяют для лечения нейтропении, индуцированной терапией рака, при проведении процедур трансплантации костного мозга, при, тяжелой врожденной нейтропении, апластической анемии, миелодиспластических синдромах и СПИДе (Фармакопейная статья на лекарственный препарат: Neupogen® (филграстим) - Amgen, Канада).
На замену филграстима с относительно коротким периодом полужизни (3,5-3,8 ч) пришел препарат NEULASTA® (пэгфилграстим), в котором G-CSF ковалентно связан с цепью полиэтиленгликоля, которая может повышать продолжительность циркуляции G-CSF в организме, при этом период его полужизни составляет 18-80 ч (Фармакопейная статья на лекарственный препарат: Neulasta® (ПЭГфилграстим)). Пэгилирование G-CSF не влияет на условия стабильности, в то время как для долговременного хранения белка при 2-8°C все еще требуется значение рН, равное 4,0.
Другим способом повышения эффективности является применение иммуноглобулина в качестве платформы для слияния. Как описано в патенте США № 5045312, гормон роста человека конъюгируют с бычьим сывороточным альбумином или иммуноглобулином мыши с применением карбодиимида или глутаральдегида в качестве сшивающего агента. Конъюгаты обладают повышенной активностью по сравнению с немодифицированным гормоном роста.
Как известно, модификации Fc-домена, такие как изменение сайтов гликозилирования, улучшают терапевтический эффект (R.J. Sola and K. Griebenow, Effects of Glycosylation on the Stability of Protein Pharmaceuticals might improve therapeutic role, J. Pharm. Sci. 2009 Apr; 98(4):1223-1245). Более того, при слиянии активного вещества с соответствующей кристаллизующемуся фрагменту (Fc) областью антитела также удается достичь более продолжительной циркуляции или клинической активности. Добавление Fc-домена увеличивает гидродинамический радиус партнера по слиянию и обеспечивает более длительную циркуляцию посредством взаимодействия с Fc-рецепторами, что в совокупности делает более трудным его выведение почками и увеличивает продолжительность его циркуляции (D.M. Czajkowsky, J. Hu, Z Shao, and R.J. Pleass. Fc-fusion proteins: new developments and future perspectives, EMBO Mol. Med. 2012 Oct; 4(10):1015-1028).
Слитые белки с иммуноглобулином (Ig) в качестве платформы для слияния, как уже было упомянуто, подвергаются широкому изучению. Ig (hIg) человека подразделяют на классы IgG, IgM, IgA, IgD и IgE, которые затем могут дополнительно делиться на подтипы, такие как IgG1 человека (hIgG1), IgG2 человека (hIgG2), IgG3 человека (hIgG3) и IgG4 человека (hIgG4) (Roitt et al., Immunology 1989, Gower Medical Publishing, London, U. K.; New York, N.Y.). Ig представляют собой гетеродимерные белки, которые состоят из четырех полипептидных цепей, представленных тяжелой цепью (НС) и легкой цепью (LC), связанных посредством дисульфидных связей. Как НС, так и LC состоят из вариабельной и константной областей. Константная область тяжелой цепи может быть дополнительно подразделена на три или четыре области (CH1, CH2, СН3 и СН4). В зависимости от изотипа Fc-часть константной области
- 1 046200 тяжелой цепи может состоять из шарнирной области, областей СН2, СН3 и/или СН4. IgG1, IgG2 и IgG4 характеризуются длительными периодами полужизни в сыворотке, составляющими 21 день, в то время как для других IgG их продолжительность составляет приблизительно неделю. Когда в образовании слитых белков задействована Fc-часть N-конца CHI-области IgG, N-конец Fc-области или С-конец СН3-области IgG, может быть достигнуто повышение стабильности и периода полужизни в сыворотке крови (H.W. Schroeder, L. Cavacini, Structure and Function of Immunoglobulins, J. Allergy Clin. Immunol. Feb 2010; 125(202):41-52; Capon et al., Designing CD4 immunoadhesins for AIDS therapy, Nature, 1989; 337:525-531).
Слитые белки на основе IgG могут быть образованы посредством слияния с внеклеточными доменами поверхностных клеточных рецепторов или с цитокинами и гормонами роста (Capon et al., Designing CD4 immunoadhesins for AIDS therapy, Nature, 1989. 337:525-531; Mohler et al., Soluble tumor necrosis factor (TNF) receptors are effective therapeutic agents in lethal endotoxemia and function simultaneously as both TNF carriers and TNF antagonists, J. Immunology, 1993. 151:1548-1561).
Однако, в отличие от слияния с внеклеточными доменами поверхностных клеточных рецепторов, слияние растворимых белков с IgG приводит к снижению разновидностей биологической активности по сравнению с неслитым цитокином или фактором роста. Причина состоит в том, что химерные белки существуют в виде димеров, где два активных белка находятся в непосредственной близости; причем это приводит к стерическому несоответствию при взаимодействии слитых IgG с их молекулами-мишенями. Следовательно, для получения эффективного слитого белка данная проблема должна быть преодолена (Слитые белки на основе иммуноглобулина, US 20120276097 А1).
Другое ограничение технологии слияния с Fc состоит в возникновении нежелательных иммунных ответов. Fc-домен иммуноглобулина также имеет эффекторные функции, такие как антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность (ADCC) или комплементзависимая цитотоксичность (CDC). Данные эффекторные функции, как правило, осуществляются путем взаимодействия между Fc-областью Ig и Fc-рецепторами (FcR) на эффекторных клетках или посредством связывания с компонентами системы комплемента. Следовательно, для снижения нежелательных ответов, таких как гибель клеток, высвобождение цитокинов или воспаление, необходимо провести блокирование эффекторных функций Fc (Слитые белки на основе иммуноглобулина. US 2012/0276097 А1).
В целом, известно, что использование продукта на основе G-CSF, такого как филграстим (Neupogen®), без какой-либо модификации является ограниченным ввиду его короткого периода полужизни. Пэгфилграстим (NEULASTA®) обладает сравнительно более продолжительным периодом полужизни, однако известно, что PEG может характеризоваться некоторыми побочными эффектами, а пэгилирование добавляет дополнительную стадию в ходе изготовления. Стратегии слияния с Fc обеспечивают возможность увеличить короткий период полужизни белков, однако одним из главных ограничений технологии слияния с Fc является наличие нежелательных иммунных ответов, как уже отмечалось. Платформа на основе гибридного Fc (hyFc), являющаяся молекулой, представляющей интерес, подлежащей тестированию на предмет составления и стабилизации согласно настоящему изобретению, была изобретена с целью дополнительного увеличения периода полужизни в плазме крови конъюгированных лекарственных средств и снижения цитотоксичности и иммуногенности (ЕР 20080766022, US 8586038 B2). Для данной цели генетически объединяли два разных иммуноглобулина, характеризующихся отсутствием индуцирования ADCC- и CDC-ответов. Г ибридный Fc получали посредством процедур комбинирования подклассов IgG человека или комбинирования IgD и IgG человека. Гибридный Fc, присоединенный к биологически активной молекуле, является эффективным в отношении увеличения периода полужизни биологически активной молекулы в сыворотке крови, а также повышения уровня экспрессии полипептида, когда экспрессируется нуклеотид, кодирующий полипептид Fc-слитого белка. Таким образом, слитый с гибридным Fc (hyFc) G-CSF также характеризуется более продолжительным периодом полужизни в плазме крови, эффективным уровнем экспрессии, элиминированной цитотоксичностью и сниженной иммуногенностью (US 8586048 В2). В этой связи hy-Fc-слитый G-CSF, является уникальной и оригинальной молекулой, где Fc-часть сама по себе представляет собой две слитые молекулы иммуноглобулина, и эта первая слитая молекула является дополнительно слитой с активной молекулой. Так как данная структура требует уделения внимания стабильности как части слитого Fc, так и G-CSF-части, она отличается от других обычных Fc-слитых лекарственных средств и требует дополнительных отличающихся и уникальных растворов для обеспечения ее стабильности. В этой связи для целей настоящего изобретения было проведено изучение литературы, касающейся стабильности обычных Fc-слитых белков, однако само по себе настоящее изобретение было создано в соответствии с конкретными потребностями в отношении данного уникального hy-Fc-слитого G-CSF.
Как показали результаты обзора литературы, для обычных Fc-слитых лекарственных средств существуют различные растворы для составления. Отличающиеся биофизические и химические свойства рекомбинантного антитела и Fc-конъюгированных белков требуют применения составов в жидкой и лиофилизированной формах при рН (4,0-8,5), буферов (ацетатного, цитратного, фосфатного), стабилизаторов (солей, сахаров, аминокислот) и/или поверхностно-активных веществ (полисорбата 20 и
- 2 046200 полисорбата 80) для защиты их целостности и эффективности во время хранения (S.M. Chamow, Т. Ryll, В.Н. Low man, and D. Farson, Eds., Therapeutic Fc-Fusion Proteins, Wiley-Blackwell: Hoboken, NJ, 2014).
В отличие от интактных моноклональных антител (mAb), которые стабилизируются за счет меж- и внутридоменных взаимодействий Fc- и Fab-доменов; Fc-конъюгаты являются относительно нестабильными ввиду отсутствия междоменной стабильности (A.L. Nelson., Antibody fragments, MAbs. 2010 Jan-Feb; 2(1):77-83). Более того, в наиболее вероятном случае существует более чем один путь разрушения Fc-слитого белка. Зачастую, один параметр состава, стабилизирующий молекулу в отношении защиты от разрушения, происходящего по одному пути, одновременно может стимулировать ее разрушение, происходящее по другому пути. Следовательно, установление оптимального состава композиции лекарственного средства на основе Fc-слитого белка одновременно является как довольно важной, так и сложной задачей.
Разработка состава требует определения физических и химических путей разрушения молекулы. Когда пути разрушения, имеющие решающее значение, определены, целью научного сотрудника, выполняющего составление, является разработка оптимальной композиции буфера для составления, содержащего буферное средство, стабилизатор и/или поверхностно-активное вещество.
Стабильность Fc-слитого белка в отношении химического и физического путей разрушения часто является максимальной в узком диапазоне значений рН (S.M. Chamow, Т. Ryll, В.Н. Lowman, and D. Farson, Eds., Therapeutic Fc-Fusion Proteins, Wiley-Blackwell: Hoboken, NJ, 2014), следовательно, очень важным является выявление оптимальных значений рН. Помимо рН, стабилизирующие средства, такие как сахара (сахароза, трегалоза и/или многоатомные спирты), также являются важными компонентами составов на основе Fc-конъюгатов (Gokarn et al. Excipients for Protein Dugs, Excipient Development for Pharmaceutical, Biotechnology, and Drug Delivery, 2006). Кроме этого, поверхностно-активные вещества, такие как полисорбаты, также играют важную роль в составах на основе белка. Эти поверхностноактивные вещества конкурируют с белками за взаимодействие с границей раздела, тем самым уменьшая поверхностное натяжение и вызываемое им повреждение белковых структур (Т.А. Khan. Н.-С. Mahler, R.S.K. Kishore. Eur. J. Pharm. Biopharm.; 2015 Nov, 97:60-67).
Агрегация терапевтических средств на основе белка, как известно, происходит на каждой стадии: во время изготовления, составления, хранения, транспортировки и даже во время введения. Ввиду того, что такая агрегация белка представляет собой проблему значительного масштаба для биофармацевтической индустрии, и несмотря на огромный технический прогресс за последние годы, она все еще продолжает являться одним из главных препятствий при разработке. Следовательно, способность прогнозировать, минимизировать, ограничивать и/или устранять агрегацию белка является критически важной для эффективного изготовления и составления биотерапевтических препаратов. К сожалению, контроль агрегации представляет собой весьма сложную задачу, поскольку механизмы агрегации протекают многочисленными путями. Несмотря на то, что о механизмах агрегации было накоплено много знаний, в настоящее время все еще невозможно надежно спрогнозировать склонность белка к агрегации. Однако посредством текущих моделей агрегации были идентифицированы два фактора, которые обуславливают стабильность; при этом один из них представляет собой коллоидную, а второй представляет собой конформационную стабильность.
Коллоидная стабильность определяется балансом межмолекулярных взаимодействий, основанных на отталкивании и притяжении между белковыми молекулами в растворе. Конформационная стабильность определяется разницей свободной энергии между свернутым и развернутым состояниями белковой молекулы. Таким образом, современные методики прогнозирования склонности белка к агрегации основываются на оценке конформационной и коллоидной стабильности. Они включают in silico прогнозирование, основанное на последовательности/структуре, и определение начала агрегации (Tm) в качестве индикаторов конформационной стабильности и определение осмотического второго вириального коэффициента (А2) для измерения коллоидной стабильности.
Проводили систематический поиск информации для удовлетворения конкретных потребностей, связанных с уникальной и оригинальной молекулой лекарственного средства, представляющей собой hy-Fc-слитый G-CSF, что привело к созданию настоящего изобретения. С целью обеспечения для G-CSF-конъюгата пролонгированного действия стабильных жидких составов, способных обеспечивать сохранение химической и биофизической целостности активного вещества, был изобретен состав, содержащий буфер в определенном диапазоне значений рН, стабилизатор, поверхностно-активное вещество и/или органическую составляющую.
В настоящем изобретении оценивали стабильные составы на основе G-CSF, слитого с гибридным FC, и выполняли отбор таких стабильных составов на основании хроматографической и электрофоретической чистоты, значений А2 и Tonset. Долгосрочная стабильность отобранных составов продемонстрирована с помощью примеров.
Описание задачи
Разработка типа состава, описанного в данном документе для лекарственного средства на основе слитого белка, где для платформы и активного вещества, слитого с ней, требуются различные соотношения химической или биофизической стабильности, представляет собой сложную задачу. Необходимо
- 3 046200 также отметить, что по настоящему изобретению платформа для слияния hy-Fc (ЕР 20080766022, US 8586038 B2) представляет собой уникальную и оригинальную молекулу, отличается от других обычных Fc-платформ и, таким образом, требует отличных растворов для обеспечения ее стабильности. В частности, другие обычные Fc-платформы часто содержат Fc-область IgG2 или аналогичных иммуноглобулинов, и лекарственное средство является непосредственно слитым с данной одной Fc-областью иммуноглобулина. Однако hy-Fc-платформа представляет собой комбинацию подклассов IgD и IgG, где сама по себе Fc-часть иммуноглобулина представляет собой слитую структуру, и слияние лекарственного средства с данной иммуноглобулиновой частью образует вторую слитую структуру. В связи с этим все изобретения, раскрытые в данном документе, являются полностью специфичными по отношению к описанному лекарственному средству на основе hy-Fc-G-CSF и разрабатывались с учетом конкретных требований по обеспечению стабильности данной уникальной молекулы (US 8586048 В2).
В настоящем изобретении применяли hy-Fc-платформу и G-CSF, характеризующиеся аминокислотной последовательностью, происходящей из гуманизированных организмов. Дополнительная реакция слияния не применялась, так как слияние между IgD и IgG и между G-CSF и иммуноглобулиновой частью обеспечивалось посредством единого генетического кода и единой реакции транскрипциитрансляции. Пептидная связь между G-CSF и hy-Fc-платформой образована между пролином и аргинином. Аминокислотная последовательность мономера hy-Fc-слитого G-CSF представлена ниже. Сигнальная последовательность, последовательность G-CSF, N-концевая последовательность и последовательность hy-Fc указаны в соответствующем формате. Схематическое изображение белковой структуры hy-Fc-слитого G-CSF представлено на фиг. 1.
MAGPATQSPMKLMALQLLLWHSALWTVQEATPLGPASSLPQSFLLKCLEQVRKIQG DGAALQEKLCATYKLCHPEELVLLGHSLGIPWAPLSSCPSQALQLAGCLSQLHSGL FLYQGLLQALEGISPELGPTLDTLQLDVADFATTWQQMEELGMAPALQPTQGAMP AFASAFQRRAGGVLVASHLQSFLEVSYRVLRHLAQPRNTGRGGEEKKKEKEKEEQ EERETKTPECPSHTQPLGVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWY VDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEK nSKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG К
В данном изобретении было обнаружено преимущественное влияние на стабильность молекулы гидролиза при более низких значениях рН (рН <5,0) в участке соединения с G-CSF и перетасовки дисульфидных связей при высоких значениях рН (рН >6,5), а также наличие у молекулы склонности к ним. G-CSF содержит две дисульфидные связи, образованные гомологичными цистеиновыми остатками, и дополнительный цистеиновый остаток в положении 17, который не может участвовать в формировании внутримолекулярных дисульфидных связей. Дисульфидные связи в этих молекулах стабилизируют структуры и делают их устойчивыми к относительно агрессивным воздействиям (некоторые протеазы, высокие температуры, денатурирующие растворители, крайние значения рН), которые приводят к денатурации при сокращении количества дисульфидных связей (Nicos A. Nicola, The waiter and Eliza Hall Institute of Medical Research, Granulocyte Colony Stimulating Factor, p. 77-100).
Более того, собственные исследования показали, что hy-Fc-слитый G-CSF является нерастворимым или труднорастворимым при значениях рН 5,3-6,0, и известно, что сам G-CSF является стабильным и активным при значениях рН около 4,0 (Т. Arakawa, S.J. Prestrelski, L.O. Narhi, Т.С. Boone, W.C. Kenney, Cysteine 17 of recombinant human granulocyte-colony stimulating factor is partially solvent-exposed, J. Protein Chem. 12 (1993), 525-531). После точного определения решающего пути, приводящего к разрушению, цель, тем самым, состояла в обеспечении долгосрочной стабильности активной Fc-слитой молекулы.
Описание настоящего изобретения
Таким образом, целью настоящего изобретения является обеспечение композиций на основе жидкого состава, содержащих молекулы G-CSF пролонгированного действия, слитые посредством пептидной связи с подобной моноклональному антителу платформой в виде гибридного Fc (hy-Fc). Состав для рекомбинантного человеческого G-CSF-hyFc по настоящему изобретению должен предусматривать в особенности подходящий уровень рН, стабилизатор, поверхностно-активное вещество и/или органический растворитель, что при этом обеспечивает высокую стабильность как связи между G-CSF и hy-Fc-платформой, так и внутри самой hy-Fc-платформы, не нарушая активности G-CSF и функционирования hy-Fc-платформы.
Стабильный состав или лекарственный препарат является таковым, содержащаяся в котором молекула G-CSF в значительной мере сохраняет свою биофизическую и химическую стабильность и целостность при хранении. Стабильность составов, содержащих молекулу G-CSF, может быть измерена при выбранных температурах по истечении выбранных периодов времени.
Специалисту в данной области техники будет известно, что стабильность молекулы hy-Fc-слитого G-CSF сильно зависит от состава на ее основе и, следовательно, для поддержания стабильности лекарственного препарата крайне необходимо защитить его физическую и химическую целостность при хране
- 4 046200 нии. Изменение чистоты, биофизических свойств и эффективности молекулы Fc-слитого G-CSF является главным индикатором стабильности, и, таким образом, их мониторинг должен осуществляться при выбранных температурах по истечении определенных временных интервалов.
Термин препарат относится к полученному водному составу. Препарат, содержащий терапевтически эффективное количество гибридного Fc, слитого с G-CSF, предусматривает по меньшей мере один стабилизатор, по меньшей мере одно поверхностно-активное вещество и буферную систему, применяемую для регулирования уровня рН раствора.
Настоящее изобретение относится к изобретению состава для лекарственного средства на основе hy-Fc-слитого G-CSF, представляющего собой оптимальную комбинацию буферного средства, и/или поверхностно-активного вещества, и/или стабилизирующего средства, и/или органического растворителя.
Жидкий состав в соответствии с настоящим изобретением предусматривает стабильную форму состава на основе гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (G-CSF), слитого с гибридным Fc, содержащего (i) терапевтически эффективное количество G-CSF, слитого с гибридным Fc, (ii) буферную систему, (iii) по меньшей мере один стабилизатор, и (iv) по меньшей мере одно поверхностно-активное вещество, и (v) необязательно пропиленгликоль в качестве органического растворителя, при этом значение рН препарата находится в диапазоне от 3,8 до 6,5, предпочтительно от 4,0 до 4,6.
Термин терапевтически эффективное количество относится к количеству, которое при введении живому субъекту оказывает требуемый эффект в отношении живого субъекта. Как правило, терапевтически эффективное количество G-CSF (документ по Neulasta Европейского агентства лекарственных средств) составляет 6 мг на одну процедуру применения. Терапевтически эффективное количество GCSF, слитого с гибридным Fc, составляет 50-400 мкг/кг, предпочтительно 150-250 мкг/кг, при этом терапевтически эффективное количество G-CSF, находящегося в структуре G-CSF, слитого с гибридным Fc, составляет 20-160 мкг/кг, предпочтительно 50-100 мкг/кг. Для обеспечения данного терапевтического эффекта концентрация стабильной формы G-CSF, слитого с гибридным Fc, по настоящему изобретению составляет примерно от 10 до 80 мг/мл и предпочтительно примерно от 20 до 40 мг/мл.
Стабилизирующее средство способствует стабильности компонентов полипептида, тем самым поддерживая их терапевтическую эффективность. Сахара или сахароспирты могут также быть включены в стабилизированные жидкие полипептид-содержащие фармацевтические композиции по настоящему изобретению. Могут применяться любые сахара, такие как моно-, ди- или полисахариды или водорастворимые глюканы, включающие, например, фруктозу, глюкозу, маннозу, сорбозу, ксилозу, мальтозу, лактозу, сахарозу, декстран, пуллулан, декстрин, циклодекстрин, растворимый крахмал, гидроксиэтиловый крахмал и Na-карбоксиметилцеллюлозу. Сахароспирт представляет собой С4-С8-углеводород, содержащий -ОН-группу, и включает, например, маннит, сорбит, инозитол, галактитол, дульцит, ксилит и арабит. Указанные выше сахара или сахароспирты могут применяться по отдельности или в виде комбинации. Установленного предела для применяемого количества не имеется, при условии, что сахар или сахароспирт растворим в жидком препарате и не оказывает нежелательного влияния на стабилизирующие эффекты, достигаемые с применением способов по настоящему изобретению. Предпочтительная концентрация сахара или сахароспирта составляет от приблизительно 1,0 до приблизительно 15,0% (вес./об.), предпочтительно от приблизительно 2,0 до приблизительно 10,0% (вес./об.), более предпочтительно от 3,0 до 7,0% (вес./об.) в пересчете на общий объем жидкого состава. Согласно настоящему изобретению стабилизатор представляет собой сорбит, при этом весовое соотношение сорбита и белка составляет от 3:2 до 7:2, предпочтительно 5:2.
Термин буферная система относится к одному или нескольким компонентам, которые при добавлении к водному раствору способны защищать раствор от варьирования значений рН при добавлении кислоты или щелочи или при разбавлении с помощью растворителя. Таким образом, буферный раствор играет важную роль в стабилизировании hy-Fc-G-CSF в жидком составе. Могут использоваться ацетатный, фосфатный, глицинатный, карбонатный, цитратный, гистидиновый, трис-(гидроксиметил)аминометановый (Трис) буферы и т.п., в случае чего ионы натрия, калия или аммония могут служить в качестве противоионов. Вышеуказанные буферы могут применяться по отдельности или в виде комбинации.
Кислота представляет собой вещество, которое отдает ионы водорода в водном растворе.
Фармацевтически приемлемая кислота включает неорганические и органические кислоты, которые являются нетоксичными в случае концентрации и способа, которые используют при их составлении.
Основание представляет собой вещество, которое отдает гидроксильные ионы в водном растворе.
Фармацевтически приемлемые основания включают неорганические и органические основания, которые являются нетоксичными в случае концентрации и способа, которые используют при их составлении. Согласно настоящему изобретению была выбрана буферная система, содержащая тригидрат ацетата натрия и уксусную кислоту/гидроксид натрия.
Поверхностно-активное вещество представляет собой поверхностно-активную молекулу, содержащую как гидрофобную часть (например, алкильную цепь), так и гидрофильную часть (например, карбоксильную и карбоксилатную группы).
- 5 046200
Поверхностно-активное вещество может быть добавлено в составы по настоящему изобретению. Поверхностно-активные вещества, подходящие для применения в составах по настоящему изобретению, выбирали из группы, состоящей из неионогенного поверхностно-активного вещества на основе полисорбата и неионогенного поверхностно-активного вещества на основе полоксамера или их комбинации. Жидкий состав по настоящему изобретению может содержать сорбит в качестве неионогенного поверхностно-активного вещества, предпочтительно в концентрации, составляющей от 0,08 до 0,15% (вес./об.) в пересчете на общий объем жидкого состава.
Выражение органический растворитель относится в данном документе к пропиленгликолю (PG), представляющему собой полуполярный компонент, целью применения которого является подавление опосредованной кислотой реакции гидролиза, имеющей место при низких значениях рН, с помощью снижения содержания воды в пределах/в окружении белка. Пропиленгликоль, или 1,2-дигидроксипропан, или 1,2-пропандиол, представляет собой прозрачную, бесцветную, вязкую, практически не имеющую запаха жидкость с плотностью, составляющей 1,038 г/см при 20°C, и молекулярной массой, составляющей 76,095. Он способен смешиваться с водой, ацетоном и хлороформом, а также в них. Фармакопейные статьи на PG включены в Европейскую фармакопею, фармакопею США и фармакопею Японии; и его часто применяют в качестве вспомогательного вещества в ряде различных лекарственных средств; а также его применение одобрено в пищевых продуктах и косметических средствах (Справочный обзор вспомогательного вещества пропиленгликоль ЕМА/СНМР/334655/2013). Жидкий состав по настоящему изобретению может содержать пропиленгликоль в качестве органического растворителя в концентрации 20% (об./об.) или меньше в пересчете на общий объем жидкого состава.
Способы выбора оптимальных составов на основе Fc-слитого G-CSF по настоящему изобретению.
Значение рН для лекарственного препарата может быть определено с помощью потенциометрического анализа, описанного в статье <791> фармакопеи США.
Концентрация для каждого образца может быть определена с помощью УФ-теста путем измерения показателей поглощения при 280, 320, 325, 330, 335, 340, 345, 350 нм для каждого из них. От показателя общего поглощения при 280 нм отнимают показатель поглощения (при 320, 325, 330, 335, 340, 345, 350 нм), обусловленный рассеиванием света. Концентрация белка в тестируемом растворе может быть рассчитана при помощи уравнения Ламберта-Бера с использованием скорректированных значений поглощения и значения коэффициента экстинкции, составляющего 1,03 мл/см-г.
Дифференциальная сканирующая калориметрия может быть применена в качестве методики для определения термодинамической стабильности белков. С ее помощью измеряют количество тепла, поглощенного или высвобожденного биомолекулами в растворе во время нагревания или охлаждения. Нативные белки отвечают на нагревание разворачиванием (термической денатурацией) при характеристической температуре (Tonset). Использование Nano DSC, ТА Instruments (Нью-Касл, США), может быть предпочтительным способом определения температуры денатурация и энтальпии денатурации белков и других макромолекул в растворе, характеризующимся при этом универсальностью и точностью, достаточными для проведения скрининга молекулярной стабильности. Для этого образцы подвергали диализу против соответствующего буфера для составления и разбавляли до 1 мг/мл для дальнейшего использования в приборе для проведения DSC. Скорость сканирования составляла 1°С/мин. для нагревания и охлаждения при температурном диапазоне 20-100°C. Градиентное определение состава методом многоуглового статического рассеяния света, GC-MALS, может применяться для определения взаимодействий между белковыми молекулами в растворе с использованием изменений в рассеянии ими света при разных концентрациях. Второй вириальный коэффициент А2, являющийся характеристическим параметром для оценки межмолекулярных взаимодействий, может быть рассчитан с использованием серии показателей измерения светорассеяния. Систему CG-MALS Calypso II, Wyatt Technology Europe (Дернбах, Германия), применяют для снабжения MALS-детектора градиентом концентрации анализируемого вещества. Образец загружают в один поршневой насос системы, а буфер для диализа - в другой поршневой насос системы. Десять равноудаленных точек концентрации от 5 до 0,5 мг/мл получают для каждого из измерений с помощью разбавления образца буфером для диализа. Для каждой градиентной точки 1 мл образца вводят в MALS-детектор. Полученный сигнал светорассеяния записывают в течение временного периода, составляющего 180 с. Анализ диаграммы Цимма может быть проведен с использованием программного обеспечения Calypso версии 2.1.3.
Мутность образцов может быть определена с помощью турбидиметра 2100AN (Hach Lange, Дюссельдорф, Германия) в соответствии с Европейской фармакопеей. Калибровку системы выполняют с помощью смешивания сульфата гидразина и гексаметилентетрамина с получением первичной опалесцирующей суспензии, а затем последующего дополнительного разбавления стандарта опалесценции. При помощи детектора измеряют рассеяние света под углом 90° от образца, а также отраженный свет перед образцом вместе со светом, проходящим непосредственно сквозь образец. Результаты измерений представляются в виде NTU, который представляет собой отношение измеренного рассеянного света под углом 90° к сумме значений компонентов отраженного и проходящего света.
- 6 046200
Получение эталонного раствора для калибровки турбидиметра.
ϊ ϊϊ ΪΪ IV
Стандарт опалесценции 5,00 мл 10,0 мл 30,0 мл 50,0 мл
Очищенная вода 95,0 мл 90,0 мл 70,0 мл 50,0 мл
Для тестирования идентичности и чистоты молекулы осуществляют мониторинг электрофоретических свойств hy-Fc-слитого G-CSF, представленных в виде показателей молекулярной массы и изоэлектрической точки.
Анализ посредством электрофореза в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) может быть проведен для hy-Fc-слитого G-CSF для сравнения его молекулярной массы с молекулярной массой собственного стандартного образца. Лекарственный препарат и собственный стандартный образец разбавляют до 500 мкг/мл с применением деионизированной воды и затем доводят до 3 мкг/20 мкл с использованием буфера для образца NuPAGE® LDS (4X) и деионизированной воды. Его загружают в 12% Bis-Tris-гель NuPAGE® Novex 4 (1,0 мм, 10 лунок) для проведения электрофореза. Гель-электрофорез с применением изоэлектрического фокусирования может применяться для идентификации диапазона изоэлектрических точек hy-Fc-слитого G-CSF по отношению к собственному стандартному образцу. Лекарственный препарат и собственный стандартный образец разбавляют до 1 мг/мл с применением деионизированной воды и доводят до 10 мкг/20 мкл с применением буфера для образца (2Х) Novex® IEF. Изоэлектрическое фокусирование проводят с применением геля для IEF Novex® с рН 3-10 (1,0 мм, 10 лунок).
Выделение hy-Fc-слитого G-CSF и мониторинг его чистоты с точки зрения свойств мономерности и гидрофобности можно осуществлять с помощью методик жидкостной хроматографии.
Эксклюзионная хроматография (SEC) может являться предпочтительным способом для разделения молекул на основании их размера на, как следствие, высокомолекулярные соединения (HMW) и подвергнувшиеся разрушению соединения с использованием 2695 Alliance HPLC (Waters). Разделение осуществляется посредством дифференциальной молекулярной эксклюзии или инклюзии во время того, как молекулы проходят по длине колонки. Лекарственное вещество разбавляют до 1 мг/мл и подвергают разделению с использованием колонки TSK-GEL G3000SWxL (7,8x300 мм) и предохранительной колонки TSK-GEL G3000SWxL (6x40 мм) (TOSOH Bioscience). Подвижная фаза состоит из 50 мМ фосфатного буфера: 5,34 г двухосновного фосфата натрия, 3,12 г одноосновного фосфата натрия, 8,76 г хлорида натрия в 1 л деионизированной воды, которые смешивают с ацетонитрилом в соотношении 9:1 (об./об.), в то время как конечное значение рН составляет 7,0. Поддерживают скорость потока 0,5 мл/мин. и длину волны детектора 214 нм в течение 30 мин. Процентную долю площади основного пика по отношению к общей площади рассчитывают в соответствии с результатом анализа, где выход указывает на мономерную чистоту.
Обращенно-фазовая высокоэффективная хроматография (RP-HPLC) может являться еще одним способом проверки чистоты посредством разделения их по принципу гидрофобности. RP-HPLC применяют для проверки наличия примесей и времени удерживания вариантов и усеченных форм Fc-слитого G-CSF с использованием 2695 Alliance HPLC (Waters). Лекарственное средство в концентрации 1 мг/мл в соответствующем буфере для составления разделяют с использованием колонки Vydac 214ТР С4 (4,6x250 мм) (Grace, Vydac) и предохранительной колонки 214MS С4, 5 мкм, 7,5x4,6 мм (Grace, Vydac). Подвижная фаза состоит из 0,15% трифторуксусной кислоты (TFA) в деионизированной воде и 0,15% TFA в ацетонитриле при скорости потока, составляющей 0,5 мл/мин. Длину волны детектора, составляющую 220 нм, поддерживают в течение 35 мин и осуществляют мониторинг процентной доли площади основного пика по отношению к общей площади в соответствии с результатом анализа.
Более глубокое понимание настоящего изобретения может быть достигнуто с помощью следующих примеров, которые представлены для иллюстрации, но не должны рассматриваться в качестве ограничения настоящего изобретения. Данные примеры описывают разработку жидкого состава, содержащего полноразмерный hyFc-слитый G-CSF, описанный в US 8586048 В2.
Пример 1. Выбор оптимального значения рН и буферного компонента для состава на основе hyFc-слитого G-CSF.
Буферный реагент необходим для поддержания целевого значения рН и стабильности белка, при которых, как известно, обеспечивается его активность. Для целей жидкого состава по настоящему изобретению буферы изначально проверяли посредством измерения начала денатурации (Tonset) в качестве индикатора конформационной стабильности и определения осмотического второго вириального коэффициента (А2) в качестве показателя коллоидной стабильности.
Согласно данному изобретению для составления образцов составы получали с помощью диализа. Лекарственное вещество загружали в заранее подготовленные пробирки для диализа и инкубировали в течение 2 ч в буфере для составления. Через 2 ч буфер для составления заменяли и образцы инкубировали в течение 2 ч в свежем буфере. Диализ завершали за ночь с помощью инкубации образцов в свежем буфере для составления. После диализа образцы удаляли из пробирки для диализа и проводили проверку
- 7 046200 значения рН, а также концентрации образцов. В случае необходимости значение рН регулировали с помощью кислоты или основания фармацевтической степени чистоты. В случае необходимости концентрацию регулировали с помощью разбавления или концентрирования с помощью ультрафильтрации.
Предварительные лабораторные измерения проводили в рамках исследования скрининга состава для осуществления мониторинга коллоидной стабильности, измерявшейся с помощью способа градиентного определения состава методом многоуглового статического рассеяния света (CG-MALS), и термодинамических свойств, измерявшихся с помощью дифференциального сканирующего калориметра (DSC), 20 мг/мл hy-Fc-слитого G-CSF в 10 мМ ацетате натрия при рН, составляющем 3,8, 4,2, 4,6 и 5,2; 10 мМ гистидине-хлористоводородной кислоте при рН, составляющем 5,2, 6,5 и 7,0; 10 мМ фосфата натрия при рН, составляющем 6,5 и 7,5; 10 мМ ацетате гистидина при рН, составляющем 6,5 и 7,0; 10 мМ трис-хлористоводородной кислоте при рН, составляющем 7,5, и 10 мМ трис-ацетате при рН, составляющем 7,5.
Таблица 1
| Оценка конформационной и коллоидной стабильности 20 мг/мл hy-Fc-слитого G-CSF при различных значениях рН и буферных компонентах | |||
| pH | Буфер [10 мМ] | Аг [моль* мл* г'2] | Tonset {°C} |
| 3,8 | Na/ацетат | 63,7 | 45,6 |
| 4,2 | Na/ацетат | 15,3 | 48,7 |
| 4,6 | Na/ацетат | 5,87 | 52 |
| 5,2 | Na/ацетат | -2,7 | 50,9 |
| 5,2 | His/HCl | -1,99 | 50,6 |
| 6,5 | His/HCl | 1,04 | 52,6 |
| 6,5 | His/ацетат | 2,7 | 53,5 |
| 6,5 | NaPO4 | -1,66 | 54,4 |
| 7 | His/HCl | 15 | 55 |
| 7 | His/ацетат | 13,9 | 54,6 |
| 7,5 | Трис/HCl | 3,03 | 54,2 |
| 7,5 | NaPO4 | 0,58 | 50,1 |
| 7,5 | Трис/ацетат | 2,68 | 54,9 |
В соответствии с результатами, представленными в табл. 1, наблюдали, что повышение рН повышало значение Tonset и значение Tonset было выше, чем 40°C при всех исследуемых значениях рН. С другой стороны, значение А2 было отрицательным при рН, составляющем 5,2 (с применением Na/ацетата, His/HCl в качестве буферов), рН, составляющем 6,5 (с применением NaPO4 в качестве буфера). Отрицательное значение А2 указывало на коллоидную нестабильность. При условиях, близких к pl-значению для hy-Fc-слитого G-CSF (рН 5,3-6,0), наблюдали взаимодействия между молекулами, характеризующиеся меньшим отталкиванием и даже притяжением. В диапазоне значений рН от 6,5 до 7,0 обнаруживали более высокую коллоидную стабильность в буферных системах на основе гистидинахлористоводородной кислоты и гистидина-ацетата, чем в системах на основе фосфата натрия. Таким образом, согласно настоящему изобретению, на основании значений А2 и значений Tonset было обнаружено, что условия, где значение рН составляло 3,8 (Na/ацетат), 4,2 (Na/ацетат), 4,6 (Na/ацетат), 6,5 (His/ацетат) и 7,5 (His/ацетат), были более благоприятными для коллоидной и термодинамической стабильности hy-Fc-слитого G-CSF.
Пример 2. Оценка влияния добавления хлорида натрия на стабильность состава на основе hyFc-слитого G-CSF.
Влияние другого вспомогательного вещества для составления на значения Tonset и А2 выбранного состава изучали в рамках дополнительных исследований с применением составов, забуференных с помощью Na/ацетата с рН, составляющим 4,2, и забуференных с помощью His/ацетата с рН, составляющим 6,5, где за основу были взяты результаты, представленные в примере 1. Для целей данного исследования в качестве системы упаковки был выбран контейнер с кремнийорганическим покрытием. Предварительно простерилизованные стеклянные шприцы объемом 1 мл с кремнийорганической смазкой заполняли материалом образцов при ламинарном потоке. Пробки устанавливали с помощью машины для укупоривания. Сначала для оценки эффекта тоничности в отношении стабильности в состав добавляли солевой компонент в виде 150 мМ хлорида натрия. Затем проводили оценку коллоидной и конформационной стабильности, как было описано выше.
- 8 046200
Таблица 2
Оценка коллоидной и конформационной стабильности 20 мг/мл hyFc-слитого G-SF в составах, содержащих
| 150 мМ хлорида натрия | ||||
| pH | Буфер | Хлорид натрия | а2 | Tonset |
| [10 мМ| | [мМ] | [моль*мл*г'2] | {°C} | |
| 4,2 | Na/ацетат | 0 | 15,3 | 48,7 |
| 4,2 | Na/ацетат | 150 | -0,77 | 43 |
| 6,5 | His/ацетат | 0 | 2,7 | 53,5 |
| 6,5 | His/ацетат | 150 | -0,58 | 54,9 |
Добавление хлорида натрия привело к увеличению ионной силы, однако не оказывало четко выраженного эффекта в отношении термодинамической стабильности. В соответствии с результатами, представленными в табл. 2, добавление хлорида натрия обусловливало снижение значений А2. Данные значения указывали на то, что более высокая изотоническая сила не являлась благоприятной ввиду снижения имеющегося взаимодействия отталкивания и отсутствия четко выраженного эффекта в отношении конформационной стабильности. Таким образом, составы по настоящему изобретению не содержат солевого компонента.
Пример 3. Оценка влияния добавления сорбита на стабильность выбранных составов на основе hFcслитого G-CSF.
Сорбит, среди прочего, оценивали в качестве кандидатного стабилизатора, поскольку многие другие кандидаты не демонстрировали долгосрочную стабильность при низких значениях рН. Сорбит (5%) добавляли с состав, а затем измеряли значения Tonset и А2.
Таблица 3
Оценка коллоидной и конформационной стабильности
| 20 мг/мл hy-Fc-слитого G-CSF в составах, содержащих | 5% сорбит | |||
| pH | Буфер | Стабилизатор | а2 | Tonset |
| [10 мМ] | 5% | [моль*мл*г'2] | {°C} | |
| 4,2 | Na/ацетат | - | 15,3 | 48,7 |
| 4,2 | Na/ацетат | Сорбит | 15,7 | 49,9 |
| 6,5 | His/ацетат | - | 2,7 | 53,5 |
| 6,5 | His/ацетат | Сорбит | 1,87 | 53,5 |
В соответствии с результатами, приведенными в табл. 3, присутствие сорбита оказывало легкий стабилизирующий эффект в отношении конформации при значении рН, составляющем 4,2, но не оказывало какого-либо эффекта при значении рН, составляющем 6,5. Следовательно, согласно настоящему изобретению наличие стабилизатора является необходимым для достижения требуемой коллоидной и термической стабильности. Предпочтительным стабилизатором по настоящему изобретению является 5% сорбит фармацевтической степени чистоты.
Пример 4. Оценка эффекта поверхностно-активного вещества в отношении выбранных составов.
Для определения оптимального поверхностно-активного вещества к составам, предусматривающим 10 мМ ацетата натрия при значении рН, составляющем 4,2, и гистидин-ацетат при значении рН, составляющем 6,5, с 5% сорбитом, добавляли либо 0,1% полоксамер 188 (Р188), либо 0,02% полисорбат 20 (PS20), либо 0,02% полисорбат 80 (PS80). Данные жидкие составы на основе hFc-слитого G-CSF, приведенные в таблице 4, подвергали ускоренным исследованиям стабильности при 40°C в течение 2 недель с целью определение потенциальной стабильности белка за пределами его срока хранения. Данные ускоренные исследования обычно проводят при температурах, превышающих таковые для рекомендованных условий хранения, и данные затем применяют для приблизительного расчета энергии активации для реакций разрушения, принимая за основу кинетику Аррениуса (Cleland et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 10(4):307-377 (1993)). Значение энергии активации затем применяли для расчета ожидаемого срока хранения состава на основе белка при рекомендованных условиях хранения. Кроме этого, стабильность составов (табл. 4) оценивали при нагрузке в виде замерзания-оттаивания. Мониторинг стабильность осуществляли в отношении мутности, мономерной и гидрофобной чистоты и электрофоретичности с учетом молекулярной массы и изоэлектрической точки.
- 9 046200
Таблица 4
Матрица состава для определения оптимального поверхностно-активного вещества для составов, содержащих 20 мг/мл hyFc-слитого G-CSF
| Составы | рн | Буфер | Стабилизатор | Поверхностноактивное вещество | Система упаковки |
| Состав 1 (F1) | 4,2 | 10 мМ Na/ацетат | 5% сорбит | - | |
| Состав 2 (F2) | 4,2 | 10 мМ Na/ацетат | 5% сорбит | + 0,1% Р188 | Шприц с |
| 10 мМ Na/ацетат | кремнийорганическим | ||||
| Состав 3 (F3) | 4,2 | 5% сорбит | + 0,02% PS20 | покрытием | |
| Состав 4 (F4) | 4,2 | 10 мМ Na/ацетат | 5% сорбит | + 0,02% PS80 | |
| Состав 5 (F5) | 6,5 | 10 мМ His/ацетат | 5% сорбит | - | |
| Состав 6 (F6) | 6,5 | 10 мМ His/ацетат | 5% сорбит | + 0,1% Р188 | Шприц с |
| 10 мМ His/ацетат | кремнийорганическим | ||||
| Состав 7 (F7) | 6,5 | 5% сорбит | + 0,02% PS20 | покрытием | |
| Состав 8 (F8) | 6,5 | 10 мМ His/ацетат | 5% сорбит | + 0,02% PS80 |
Результаты показывали, что все составы являются устойчивыми к нагрузке в виде замерзанияоттаивания (табл. 5-10). Также вариантом осуществления настоящего изобретения является то, что составы, содержащие полоксамер 188 (Р188), демонстрировали более высокую стабильность, чем составы, содержащие полисорбат 20 (PS20) и полисорбат 80(PS80), и контрольные составы в условиях ускоренного исследования стабильности (40°C в течение 2 недель) (табл. 5-10). Следовательно, полоксамер 188, или Pluronic F68, включали в настоящее изобретение в качестве поверхностно-активного вещества с целью минимизации риска агрегации hyFc-слитого G-CSF в условиях хранения и транспортировки.
Таблица 5
Результаты исследования мутности F1-F4 при 40°C в течение 2 недель и при нагрузке в виде замерзания-оттаивания, n=4 __________________________Мутность [NTU]__________________________ Fl F2 F3 F4
| Среднее значение | SD | Среднее значение | SD | Среднее значение | SD | Среднее значение | SD | |
| 1=0 | 4,6 | 0,6 | 4,0 | 0,6 | з,о | 0,5 | 2,9 | 0,6 |
| Замерзание/оттаивание | 4,2 | 0,6 | 3,9 | 0,3 | 4,0 | 0,4 | 4,1 | 0,1 |
| Термическая нагрузка (2 недели при 40°С) | 6,2 | 1,3 | 5,5 | 0,8 | 6,5 | 0,4 | 6,4 | 0,7 |
Таблица 6
Результаты исследования мутности F5-F8 при 40°C в течение 2 недель и при нагрузке в виде замерзания-оттаивания, n=4 _________________________Мутность [NTU]__________________________ F5 F6 F7 F8
Среднее Среднее Среднее Среднее значение значение значение значение t=0 7,3 0,4 6,9 1,0 7,6 0,7 7,00,8
Замерзание/оттаивание 7,4 0,9 7,5 1,1 7,8 0,2 6,70,5
Термическая нагрузка 5 γ цз,2 82 (2 недели при 40°С)
- 10 046200
Таблица 7
Процентное содержание мономеров в F1-F4 при 40°C в течение 2 недель и при нагрузке в виде замерзания-оттаивания, установленное с помощью SEC-HPLC, n=4 _____________________Отн. содержание мономеров [%]_____________________ Fl F2 F3 F4
Среднее Среднее Среднее Среднее значение значение значение значение t=0 99,5 0,1 99,5 0,1 99,4 0,1 99,40,2
Замерзание/оттаивание 98,5 0,9 98,5 0,6 98,9 0,4 98,80,2
Термическая нагрузка (2 недели при 40°С) ’ ’ ’ ’ ’ ’ ’’
Таблица 8
Процентное содержание мономеров в F5-F8 при 40°C в течение 2 недель и при нагрузке в виде замерзания-оттаивания, установленное с помощью SEC-HPLC, n=4 ____________________Отн. содержание мономеров [%]____________________
| F5 | F6 | F7 | F8 | |||||
| Среднее | SD | Среднее | SD | Среднее | SD | Среднее | SD | |
| значение | значение | значение | значение | |||||
| t=0 | 98,5 | 0,7 | 98,1 | 0,7 | 98,6 | 0,4 | 98,3 | 0,6 |
| Замерзание/оттаивание Термическая нагрузка | 98,2 50,3 | 0,7 0,4 | 98,1 49,0 | 0,7 0,2 | 98,4 25,1 | о,з 0,2 | 98,1 26,7 | 0,6 0,8 |
| (2 недели при 40°С) |
Таблица 9
Процентное содержание гидрофобных молекул в F1-F4 при 40°C в течение 2 недель и при нагрузке в виде замерзания-оттаивания, установленное с помощью RP-HPLC, n=4 ______Отн. содержание соответствующего основному пику вещества [%]______ Fl F2 F3F4
Среднее Среднее Среднее Среднее значение значение значение значение t=0 97,0 0,1 96,7 0,3 96,5 0,1 96,70,1
Замерзание/оттаивание 96,8 0,1 96,8 0,1 96,3 0,2 96,50,1
Термическая нагрузка (2 недели при 40°С)
Таблица 10
Процентное содержание гидрофобных молекул в F5-F8 при 40°C в течение 2 недель и при нагрузке в виде замерзания-оттаивания, установленное с помощью RP-HPLC, n=4
Отн. содержание соответствующего основному пику вещества [%]
| t=0 | F5 Среднее „ | F6 Среднее значение 96,5 | SD 0,1 | F7 Среднее значение 96,4 | SD 0,1 | F8 Среднее значение 96,5 | SD 0,1 | |
| значение 96,6 | 0,1 | |||||||
| Замерзание/оттаивание | 96,5 | 0,1 | 96,4 | 0,0 | 96,4 | 0,0 | 96,4 | 0,1 |
| Термическая нагрузка | 64,0 | 1,4 | 63,3 | 0,5 | 41,2 | 0,7 | 41,3 | 0,3 |
| (2 недели при 40°С) |
В ходе того же исследования в составах, характеризующихся значением рН, составляющим 4,2, и его подвариантами, основные продукты разрушения представляли собой фрагменты, вероятнее всего образовавшиеся в результате гидролиза. При значении рН, составляющем 6,5, и его подвариантах обнаруживались агрегаты, связанные при помощи ковалентной связи, образованные в результате перетасовки дисульфидных связей (фиг. 2 и 3).
Пример 5. Оптимизация и долгосрочная оценка выбранного состава.
Состав 2 (табл. 4) выбирали как наиболее стабильный состав среди подвергнутых скринингу составов, и его условно обозначали как состав 2А. С другой стороны, множество исследований показали, что небольшое изменение значения рН состава могло иметь критическое значение для стабильности состава. Для определения эффекта изменения рН и долгосрочных исследований стабильности выбранных составов, перечисленные в табл. 11 (состав 2А) и 12 (состав 2В), составы получали с изменением значений рН на 4,2 и 4,6 соответственно. В данном случае изменения значения рН достигали с помощью добавления
- 11 046200 фармацевтически приемлемой кислоты или основания. В данном случае предпочтительной кислотой являлась уксусная кислота, а предпочтительным основанием являлся гидроксид натрия.
Таблица 11
Композиция состава 2А, забуференного при рН 4,2
| Функция | Компонент | Количество на мл |
| Активный ингредиент | hy-Fc-слитый GCSF | 20 мг |
| Стабилизатор | Сорбит | 50 мг |
| Поверхностно-активное вещество | Полоксамер 188 (Pluronic F68) | 1 мг |
| Буферное средство | Тригидрат ацетата натрия | 0,16 мг |
| Буферное средство | Уксусная кислота/гидроксид натрия | q.s.* |
* В достаточном количестве.
Таблица 12
Композиция состава 2В, забуференного при рН 4,6
| Функция | Компонент | Количество на мл |
| Активный ингредиент | hy-Fc-слитый G-CSF | 20 мг |
| Стабилизатор | Сорбит | 50 мг |
| Поверхностно-активное вещество | Полоксамер 188 (Pluronic F68) | 1 мг |
| Буферное средство | Тригидрат ацетата натрия | 0,16 мг |
| Буферное средство | Уксусная кислота/гидроксид натрия | q.s.* |
* В достаточном количестве.
Перед проведением исследования стабильности исследовали термодинамическую и коллоидную стабильность полученных составов (табл. 13).
Таблица 13
Коллоидные и термодинамические свойства составов 2А и 2В
Аг Tonset
Состав 4 г. ΙΟ,Ί __________________[10 моль*мл*г ]{°C}
Состав 2А 21,153,6
Состав 2В 5,151,2
В Руководстве по испытанию стабильности Европейского агентства по оценке лекарственных средств указано, что в случаях, когда требуемый срок хранения составляет более шесть месяцев, в момент подачи заявки на регистрацию должны быть предоставлены данные о стабильности за период, составляющий минимум шесть месяцев. Следовательно, испытание стабильности в режиме реального времени в реальных условиях проводили при 2-8°C, ускоренное исследование стабильности проводили при 25°C в течение 6 месяцев. Результаты приведены в табл. 14-17.
Таблица 14
Процентное содержание мономеров в составах 2А и 2В, установленное с помощью SEC-HPLC при 2-8°C, (n=2)
| 2-8°С | Отн. площадь пика, соответствующего мономеру, определенная с помощью SECHPLC [%] | |
| Состав 2А | Состав 2В | |
| t=0 | 98,9 | 98,7 |
| 2 недели | 98,9 | 98,8 |
| 1 месяц | 98,5 | 98,5 |
| 3 месяца | 98,5 | 98,6 |
| 6 месяцев | 98,6 | 98,6 |
- 12 046200
Таблица 15
Процентное содержание мономеров в составах 2А и 2В, установленное с помощью SEC-HPLC при 25°C, (n=2)
Отн. площадь пика, соответствующего мономеру, определенная с помощью SEC· ____________HPLC[%]___________
| Состав 2А | Состав 2В | |
| t=0 | 98,9 | 98,7 |
| 2 недели | 98,8 | 98,9 |
| 1 месяц | 98,7 | 98,7 |
| 3 месяца | 99,0 | 97,8 |
| 6 месяцев | 83,8 | 81,8 |
Таблица 16
Процентное содержание гидрофобных молекул в составах 2А и 2В, установленное с помощью _________RP-HPLC при 2-8°C, (n=2)_________
| 2-8°С | Отн. площадь основного пика, определенная с помощью RP-HPLC [%] | |
| Состав 2А | Состав 2В | |
| t=0 | 97,2 | 97,5 |
| 2 недели | 97,1 | 97,1 |
| 1 месяц | 97,0 | 97,0 |
| 3 месяца | 96,7 | 96,6 |
| 6 месяцев | 96,1 | 96,3 |
Таблица 17
Процентное содержание гидрофобных молекул в составах 2А и 2В, установленное с помощью _________RP-HPLC при 25°C (n=2)_________
| 25°С | Отн. площадь основного пика, определенная с помощью RP-HPLC [%] | |
| Состав 2А | Состав 2В | |
| t=0 | 97,2 | 97,5 |
| 2 недели | 96,0 | 96,0 |
| 1 месяц | 95,0 | 94,7 |
| 3 месяца | 90,8 | 89,6 |
| 6 месяцев | 86,3 | 84,6 |
Было продемонстрировано, что составы 2А и 2В сохраняли стабильность по меньшей мере в течение 6 месяцев в режиме реального времени и реальных температурных условий (табл. 14-17). Таким образом, в настоящем изобретении обнаружили, что составы, характеризующиеся как значением рН, составляющим 4,2, так и значением рН, составляющим 4,6, обеспечивали долгосрочную стабильность hy-Fc-слитого G-CSF в режиме реального времени и реальных условий и в условиях ускоренных исследований стабильности.
Пример 6. Оценка эффекта органического растворителя в отношении стабильности состава на основе hy-Fc-слитого G-CSF.
Настоящий состав обеспечивает разработку улучшенного состава для предотвращения разрушения, обусловленного расщеплением содержащейся в нем молекулы G-CSF, и дальнейшего распада с применением органического растворителя пропиленгликоля (PG).
Во время разработки состава проводили оценку влияния значения рН и присутствия пропиленгликоля на стабильность hy-Fc-слитого G-CSF (табл. 18).
- 13 046200
Таблица 18
Матрица исследования по оценке влияния значения рН и присутствия пропиленгликоля на стабильность 20 мг/мл hy-Fc-слитого G-CSF
| Обозначение состава | pH | Обозначение состава + процентное содержание пропиленгликоля (PG) | Система упаковки |
| F2A | 4,2 | Только состав 2А | |
| F2A+10PG | 4,2 | Состав 2А + 10% PG | |
| F2A+20PG | 4,2 | Состав 2А + 20% PG | Шприц с кремнийорганическим покрытием |
| F2B | 4,6 | Только состав 2В | |
| F2B+10PG | 4,6 | Состав 2В + 10% PG | |
| F2B+20PG | 4,6 | Состав 2В + 20% PG |
Стабильность hy-Fc-слитого G-CSF исследовали при значениях рН, составляющих 4,2 и 4,6, в 10 мМ натрий-ацетатном буфере, содержащем 0,01% Plutonic F-68 и 5% сорбит, и при наличии или отсутствии 10% PG или 20% PG. Образцы, содержащие 20 мг/мл активного ингредиента, хранили при 25 и 2-8°C в течение 6 месяцев. Перед проведением исследования стабильности исследовали проходимость через иглу шприца, а также термодинамическую и коллоидную стабильность составов (табл. 19).
Таблица 19
Коллоидные и термодинамические свойства составов 2А и 2В после замены органического растворителя
| Состав | Аг [1 (Нмоль* мл* г'2] | Tonset {°C} |
| F2A | 21,1 | 53,6 |
| F2A+10PG | 22,7 | 50,5 |
| F2A+20PG | 19,9 | 45,2 |
| F2B | 5,1 | 51,2 |
| F2B+10PG | 5,0 | 47,6 |
| F2B+20PG | 4,7 | 45,0 |
В одном варианте осуществления настоящего изобретения необходимая для выталкивания сила для всех составов была ниже 10 Н и, таким образом, являлась приемлемой для лекарственного средства, вводимого путем инъекции. Составы, содержащие пропиленгликоль, демонстрировали незначительно большую силу, необходимую для выталкивания, по сравнению с составами без пропиленгликоля. Значение рН не оказывало влияния на результаты.
В соответствии с результатами, приведенными в табл. 19, коллоидная стабильность hy-Fc-слитого G-CSF является более высокой при более низких значениях рН. Присутствие 10% пропиленгликоля незначительно повышает взаимодействия отталкивания белковых молекул и, таким образом, коллоидную стабильность, при этом 20% пропиленгликоль не оказывает такого действия. Термодинамическая стабильность hy-Fc-слитого G-CSF также незначительно повышалась при низких значениях рН.
В другом варианте осуществления в ходе того же исследования обнаруживали, что главным путем разрушения hy-Fc-слитого G-CSF являлся химическое разрушение и фрагментация, так как полученные данные показывали, что снижение уровня мономеров было обусловлено повышением содержания низкомолекулярных примесей (табл. 21). Агрегацию, обусловленную перетасовкой дисульфидных связей в hy-Fc-слитом G-CSF, не наблюдали в ходе того же исследования.
В заключительном варианте осуществления того же исследования было продемонстрировано, что добавление пропиленгликоля оказывало благоприятное влияние на химическую стабильность, как было представлено с помощью данных, полученных в ходе ускоренных исследований стабильности (табл. 2023). Однако 20% PG снижал термодинамическую стабильность (табл. 19), и, таким образом, добавление 10% PG являлось более предпочтительным.
- 14 046200
Таблица 20
Процентное содержание мономеров для 20 мг/мл hy-Fc-слитого CSF, установленное с помощью SEC-HPLC при 2-8°C, (n=2)
2-8°С
IM) недели месяц месяца месяцев
| Отн. площадь пика, соответствующего мономеру, определенная с помощью SEC-HPLC [%] | |||||
| F2A | F2A+10PG | F2A+20PG | F2B | F2B+10PG | F2B+20PG |
| 98,9 | 98,7 | 98,8 | 98,7 | 98,6 | 98,3 |
| 98,9 | 98,8 | 98,9 | 98,8 | 98,7 | 98,5 |
| 98,5 | 97,0 | 98,7 | 98,5 | 98,5 | 98,2 |
| 98,5 | 98,5 | 98,7 | 98,6 | 98,3 | 98,3 |
| 98,6 | 98,5 | 98,8 | 98,6 | 98,3 | 98,2 |
Таблица 21
Процентное содержание мономеров для 20 мг/мл hy-Fc-слитого CSF, установленное с помощью SEC-HPLC при 25°C, (n=2)
| Отн. площадь пика, соответствующего мономеру, определенная с помощью SEC-HPLC [%] | |||||
| F2A | F2A+10PG | F2A+20PG | F2B | F2B+10PG | F2B+20PG |
| 98,9 | 98,7 | 98,8 | 98,7 | 98,6 | 98,3 |
| 98,8 | 98,9 | 99,4 | 98,9 | 98,8 | 99,0 |
| 98,7 | 98,9 | 99,2 | 98,7 | 98,6 | 98,4 |
| 99,0 | 99,2 | 98,9 | 97,8 | 99,1 | 98,0 |
| 83,8 | 84,7 | 85,6 | 81,8 | 82,8 | 83,3 |
Таблица 22
25°С
Μ) недели месяц месяца месяцев
Процентное содержание гидрофобных молекул для 20 мг/мл hy-Fc-слитого CSF, установленное с помощью RP-HPLC при 2-8°C, (n=2)
| 2-8°С | Отн. площадь основного пика, определенная с помощью RPHPLC f%] | |||||
| F2A | F2A+10PG | F2A+20PG | F2B | F2B+10PG | F2B+20PG | |
| 1=0 | 97,2 | 97,1 | 97,4 | 97,5 | 97,5 | 97,5 |
| 2 недели | 97,1 | 97,2 | 97,2 | 97,1 | 97,2 | 97,2 |
| 1 месяц | 97,0 | 96,8 | 97,1 | 97,0 | 97,2 | 97,1 |
| 3 месяца | 96,7 | 96,8 | 96,9 | 96,6 | 96,9 | 96,9 |
| 6 месяцев | 96,1 | 96,4 | 96,4 | 96,3 | 96,5 | 96,4 |
Таблица 23
Процентное содержание гидрофобных молекул для 20 мг/мл hy-Fc-слитого CSF, установленное с помощью RP-HPLC при 25°C, (n=2)
| 25°С | Отн. площадь основного пика, определенная с помощью RP-HPLC Г%1 | |||||
| F2A | F2A+10PG | F2A+20PG | F2B | F2B+10PG | F2B+20PG | |
| t=0 | 97,2 | 97,1 | 97,4 | 97,5 | 97,5 | 97,5 |
| 2 недели | 96,0 | 96,1 | 96,3 | 96,0 | 95,9 | 96,3 |
| 1 месяц | 95,0 | 95,1 | 95,6 | 94,7 | 95,0 | 95,2 |
| 3 месяца | 90,8 | 91,0 | 91,4 | 89,6 | 90,3 | 90,9 |
| 6 месяцев | 86,3 | 87,1 | 88,0 | 84,6 | 86,0 | 87,3 |
Обнаруживали, что стабильность составов, приведенных в табл. 18, сохранялась в течение по меньшей мере 6 месяцев в режиме реального времени, реальной температуры и в условиях ускоренных исследований стабильности. И при этом добавление PG оказывало благоприятный эффект в отношении химической стабильности составов. Таким образом, присутствие PG могло бы обеспечивать возможность предотвращения разрушения, обусловленного расщеплением G-CSF, что можно установить из изменения гидрофобной чистоты при 25°C, мониторинг которой проводили с помощью RP-HPLC (табл. 23). Таким образом, в настоящем изобретении было обнаружено, что добавление PG в концентрации 20% или меньше в качестве органического растворителя дополнительно повышает долгосрочную стабильность hy-Fc слитого G-CSF в режиме реального времени, реальной температуры и в условиях ускоренных исследований стабильности.
Пример 7.
Дополнительная оценка эффекта значения рН в отношении стабильности в режиме реального вре
- 15 046200 мени состава на основе hy-Fc-слитого G-CSF.
С целью полного изучения эффекта значения рН в отношении стабильности в режиме реального времени hy-Fc-слитого G-CSF проводили исследование составов с рН, составляющим 4,0, и рН, составляющим 4,4, с содержанием и без содержания 10% пропиленгликоля (PG) (табл. 19) при 2-8°C в течение 6 месяцев.
Активный ингредиент, представленный 20 мг/мл hy-Fc-слитого с G-CSF, исследовали при значениях рН, составляющих 4,0 и 4,4, в 10 мМ натрий-ацетатном буфере, состоящем из 0,01% Pluronic F-68, 5% сорбита, с содержанием и без содержания 10% PG.
Таблица 24
Композиция состава 2С, забуференного при рН 4,0
| Функция | Компонент | Количество на мл |
| Активный ингредиент | hy-Fc-слитый G-CSF | 20 мг |
| Стабилизатор | Сорбит | 50 мг |
| Поверхностноактивное вещество | Пол оксамер 188 (Pluronic F68) | 1 мг |
| Буферное средство | Тригидрат ацетата натрия | 0,16 мг |
| Буферное средство | Уксусная кислота/ гидроксид натрия | q.s.* |
* В достаточном количестве.
Таблица 25
Композиция состава 2D, забуференного при рН 4,4
| Функция | Компонент | Количество на мл |
| Активный ингредиент | hy-Fc-слитый G-CSF | 20 мг |
| Стабилизатор | Сорбит | 50 мг |
| Поверхностноактивное вещество | Пол оксамер 188 (Pluronic F68) | 1 мг |
| Буферное средство | Тригидрат ацетата натрия | 0,16 мг |
| Буферное средство | Уксусная кислота/ гидроксид натрия | q.s.* |
* В достаточном количестве.
Таблица 26
Матрица исследования по оценке влияния значения рН и присутствия пропиленгликоля на стабильность 20 мг/мл hy-Fc-слитого G-CSF
| Обозначение состава | pH | Обозначение состава + процентное содержание пропиленгликоля (PG) | Система упаковки |
| F2C | 4,0 | Только состав 2С | Шприц с |
| F2C+10PG | 4,0 | Состав 2С + 10% PG | кремнийорганическим |
| F2D | 4,4 | Только состав 2D | покрытием |
| F2D+10PG | 4,4 | Состав 2D + 10% PG |
Таблица 27
Процентное содержание мономеров для 20 мг/мл hy-Fc-слитого CSF, установленное с помощью ________SEC-HPLC при 2-8°C, (n=2)_________
| 2-8°С | Отн. площадь основного пика, определенная с помощью SEC-HPLC [%] | |||
| F2C | F2C+10PG | F2D | F2D+10PG | |
| t=0 | 99,7 | 99,7 | 99,7 | 99,7 |
| 1 месяц | 99,5 | 99,5 | 99,5 | 99,5 |
| 3 месяца | 99,7 | 99,6 | 99,7 | 99,6 |
| 6 месяцев | 99,6 | 99,6 | 99,6 | 99,6 |
- 16 046200
Таблица 28
Процентное содержание гидрофобных молекул для 20 мг/мл hy-Fc-слитого CSF, установленное с помощью RP-HPLC при 2-8°C, (n=2)
| 2-8°С | Отн. площадь основного пика, определенная с помощью RP-HPLC Г%1 F2C F2C+10PG F2D F2D+10PG |
| t=0 | 97,3 96,7 97,5 96,8 |
| 1 месяц 3 месяца 6 месяцев | 96,3 96,4 96,5 96,5 95,9 95,9 95,9 96,0 95,6 96,3 95,7 95,8 |
В варианте осуществления данного исследования обнаруживалось, что hy-Fc-слитый G-CSF являлся устойчивым в выбранных условиях, что было подтверждено с помощью анализов SEC-HPLC, RP-HPLC, SDS-PAGE и Gel-IEF (табл. 27, 28, фиг. 4, 5). В ходе исследования не наблюдали ни агрегатов, ни расщепленных форм hy-Fc-слитого G-CSF. Таким образом, в настоящем изобретении обнаруживали, что составы как со значением рН, составляющим 4,0, так и со значением рН, составляющим 4,4, обеспечивали долгосрочную стабильность hy-Fc-слитого G-CSF в режиме реального времени, реальной температуры и в условиях ускоренных исследований стабильности.
Таблица 29
Композиция на основе раствора 20 мг/мл hy-Fc-слитого G-CSF
| Функция | Компонент | Ссылка на стандарты | Количество на мл |
| Стабилизатор | Сорбит | Национальный формуляр | 50 мг |
| Поверхностно-активное | Полоксамер 188 | Национальный | 1 мг |
| вещество | (Pluronic F68) | формуляр | |
| Буферное средство | Тригидрат ацетата натрия | Фармакопея США | 0,16 мг |
| Уксусная | |||
| Буферное средство | кислота/ гидр оксид | Фармакопея США | q.s.* |
| натрия | |||
| Органический растворитель | Пропиленгликоль | Фармакопея США | 0,1 мл |
* В достаточном количестве.
В заключение, как применяется в данном документе, состав на основе G-CSF, слитого с гибридным Fc, как представлено в табл. 29, демонстрировал стабильность при значениях рН в диапазоне от 3,8 до 6,5, предпочтительно от 4,0 до 4,6. В данном документе состав согласно настоящему изобретению состоит из буферной системы, поверхностно-активного вещества, стабилизатора и/или PG в качестве органи ческого растворителя.
Согласно настоящему изобретению буферная система может предусматривать тригидрат ацетата натрия и уксусную кислоту/гидроксид натрия.
Настоящее изобретение может предусматривать сорбит в качестве поверхностно-активного вещества, предпочтительно находящийся в концентрации от 0,08 до 0,15% (вес./об.), и сорбит в качестве стабилизатора, предпочтительно находящийся в концентрации от 3,0 до 7,0% (вес./об.) в пересчете на общий объем жидкого состава, при этом весовое соотношение сорбита и белка составляет от 3:2 до 7:2, предпочтительно 5:2.
Настоящее изобретение может предусматривать PG в концентрации 20% (об./об.) или меньше (Sigma, Швейцария), предпочтительно PG в концентрации 10% (об./об.) или меньше в пересчете на общий объем жидкого состава, с целью уменьшения водного содержимого, которое способствует процессу расщепления G-CSF посредством гидролиза при кислотном рН.
Пояснение графических материалов
Фиг. 1. Схематическое изображение белковой структуры hy-Fc-слитого G-CSF.
Фиг. 2. Испытание на перетасовку дисульфидных связей. Образцы вариантов № F5 и № F6 (хранившиеся в течение 2 недель при 40°C) анализировали в восстановительных и невосстановительных условиях. Полоса 1: маркер, полоса 2: невосстановленный стандартный образец GX-G3, полоса 3: невосстановленный № F5, полоса 4: невосстановленный № F6, полоса 5: пустая, полоса 6: маркер, полоса 7: восстановленный № F5, полоса 8: восстановленный № F6, полоса 9: восстановленный стандартный образец, полоса 10: маркер.
Фиг. 3. Анализ SDS-PAGE после термической нагрузки при 40°C в течение 2 недель: полоса 1:
- 17 046200 стандартный образец, полоса 2: маркер, полосы 3-6: № F3, полосы 7-10: № F4.
Фиг. 4. Анализ SDS-PAGE при 2-8°C при t=6 месяцев: полоса 1, 9: маркер, полоса 2, 5, 6: стандартный образец, полоса 3: № F2C, полоса 4: № F2C + 10% PG, полоса 7: № F2D, полоса 8: № F2D + 10% PG, полоса 10: пустая.
Фиг. 5. Анализ Gel-IEF при 2-8°C при t=6 месяцев: полоса 1, 9: маркер, полоса 2, 5, 6: стандартный образец, полоса 3: № F2C, полоса 4: № F2C + 10% PG, полоса 7: № F2D, полоса 8: № F2D + 10% PG, полоса 10: пустая.
Claims (10)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Стабильный состав на основе гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (G-CSF), слитого с гибридным кристаллизующимся фрагментом (Fc) белка, характеризующегося аминокислотной последовательностью, приведенной ниже, содержащий терапевтически эффективное количество G-CSF, слитого с гибридным Fc в концентрации в диапазоне от 10 до 80 мг/мл, где значение рН препарата составляет от 4,0 до 4,6, с наличием буферной системы на основе тригидрата ацетата натрия и уксусной кислоты/гидроксида натрия и где указанный состав содержит сорбит в качестве стабилизатора и по меньшей мере одно неионогенное поверхностно-активное вещество, выбранное из группы, состоящей из полоксамера 188, полисорбата 20 и полисорбата 80 или их комбинации:MAGPATQSPMKLMALQLLLWHSALWTVQEATPLGPASSLPQSFLLKCLEQVRKIQGDGAALQEKLCATYKLCHPEELVLLGH SLGIPWAPLS SCP SQALQLAGCLSQLH SGL FLYQGLLQALEGISPELGPILDTLQLDVADFATnWQQMEELGMAPALQPTQGAMP AFASAFQRRAGGVLVASHLQSFLEVSYRVLRHLAQPRNrGRGGEEKKKEKEKEEQ EERETKTPECPSHTQPLGVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSQEDPEVQFNWY VDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEK TISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN YKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG К
- 2. Состав по п.1, где сорбит содержится в концентрации от 3,0 до 7,0% (вес/об.) в пересчете на общий объем состава.
- 3. Состав по п.1, где весовое соотношение сорбита и белка составляет от 3:2 до 7:2.
- 4. Состав по п.3, где весовое соотношение сорбита и белка составляет 5:2.
- 5. Состав по п.1, где поверхностно-активное вещество представляет собой полоксамер 188.
- 6. Состав по п.5, где полоксамер 188 содержится в концентрации от 0,08 до 0,15% (вес/об.) в пересчете на общий объем жидкого состава.
- 7. Состав по п.1, где G-CSF, слитый с гибридным Fc, содержится в концентрации в диапазоне от 20 до 40 мг/мл.
- 8. Состав по любому из предыдущих пунктов, где состав содержит пропиленгликоль в качестве органического растворителя.
- 9. Состав по п.8, где пропиленгликоль содержится в концентрации 20% (об./об.) или меньше в пересчете на общий объем жидкого состава.
- 10. Состав по п.9, где пропиленгликоль содержится в концентрации 10% (об./об.) или меньше в пересчете на общий объем жидкого состава.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA046200B1 true EA046200B1 (ru) | 2024-02-15 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102614134B (zh) | Vegf拮抗剂制剂 | |
| CN101721362B (zh) | 包含抗体的溶液制剂 | |
| JP2009534390A (ja) | 生物医薬品製剤のための緩衝剤 | |
| KR102385802B1 (ko) | Gm-csf 중화 화합물을 포함하는 액체 제제 | |
| CN107412737A (zh) | 长效g‑csf缀合物的液体制剂 | |
| TWI639440B (zh) | 包括ｇｍ－ｃｓｆ中和化合物之液態配方 | |
| JP2019534263A (ja) | 室温で安定な凍結乾燥タンパク質 | |
| WO2021115321A1 (zh) | TACI-Fc融合蛋白药物制剂 | |
| KR102589578B1 (ko) | 안정한 하이브리드 fc 융합 g-csf 제형 | |
| EP3060256B1 (en) | A novel stable formulation | |
| JP7215555B2 (ja) | ＰＥＧ化抗ヒトＮＧＦ抗体Ｆａｂ’フラグメント含有医薬組成物 | |
| ES2676468T3 (es) | Formulación de acopladores biespecíficos de linfocitos T (BiTE) | |
| TW201343198A (zh) | 高度濃縮之長效人類生長激素共軛物之液體製劑 | |
| JPWO2008029908A1 (ja) | 抗体を含有する安定な凍結乾燥医薬製剤 | |
| KR20220113355A (ko) | 항-코넥신 항체 제제 | |
| EA046200B1 (ru) | Стабильный состав на основе g-csf, слитого с гибридным fc | |
| KR20210077645A (ko) | 신규 주사제 제형 | |
| JP2021008406A (ja) | 改良型ヒト化抗ヒトα９インテグリン抗体含有医薬組成物 | |
| ES2794449T3 (es) | Formulación líquida que comprende un compuesto neutralizante del GM-CSF | |
| EA045982B1 (ru) | СТАБИЛЬНЫЙ ЛИОФИЛИЗИРОВАННЫЙ СОСТАВ НА ОСНОВЕ G-CSF, СЛИТОГО С ГИБРИДНЫМ Fc | |
| CN116887860A (zh) | 抗il5r抗体配制品 | |
| TW202241513A (zh) | 一種包含抗體融合蛋白的醫藥組成物及其用途 | |
| US20110223156A1 (en) | Reversible gel protein formulation | |
| EA040788B1 (ru) | Жидкая композиция, содержащая соединение, нейтрализующее gm-csf |