EA044513B1 - Комплекс 7-дезацетил-форсколина и пвп - Google Patents
Комплекс 7-дезацетил-форсколина и пвп Download PDFInfo
- Publication number
- EA044513B1 EA044513B1 EA202291738 EA044513B1 EA 044513 B1 EA044513 B1 EA 044513B1 EA 202291738 EA202291738 EA 202291738 EA 044513 B1 EA044513 B1 EA 044513B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- pvp
- dapsk
- complex
- mixture
- forskolin
- Prior art date
Links
- WPDITXOBNLYZHH-KAACEJSMSA-N (3r,4ar,5s,6s,6as,10s,10ar,10bs)-3-ethenyl-5,6,10,10b-tetrahydroxy-3,4a,7,7,10a-pentamethyl-5,6,6a,8,9,10-hexahydro-2h-benzo[f]chromen-1-one Chemical compound O1[C@@](C)(C=C)CC(=O)[C@]2(O)[C@@]3(C)[C@@H](O)CCC(C)(C)[C@@H]3[C@H](O)[C@H](O)[C@]21C WPDITXOBNLYZHH-KAACEJSMSA-N 0.000 title claims description 16
- WPDITXOBNLYZHH-UHFFFAOYSA-N desacetylforskolin Natural products O1C(C)(C=C)CC(=O)C2(O)C3(C)C(O)CCC(C)(C)C3C(O)C(O)C21C WPDITXOBNLYZHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 16
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 claims description 165
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 claims description 124
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 claims description 122
- OHCQJHSOBUTRHG-KGGHGJDLSA-N FORSKOLIN Chemical compound O=C([C@@]12O)C[C@](C)(C=C)O[C@]1(C)[C@@H](OC(=O)C)[C@@H](O)[C@@H]1[C@]2(C)[C@@H](O)CCC1(C)C OHCQJHSOBUTRHG-KGGHGJDLSA-N 0.000 claims description 84
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 67
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 63
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 57
- OHCQJHSOBUTRHG-UHFFFAOYSA-N colforsin Natural products OC12C(=O)CC(C)(C=C)OC1(C)C(OC(=O)C)C(O)C1C2(C)C(O)CCC1(C)C OHCQJHSOBUTRHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 43
- SUZLHDUTVMZSEV-UHFFFAOYSA-N Deoxycoleonol Natural products C12C(=O)CC(C)(C=C)OC2(C)C(OC(=O)C)C(O)C2C1(C)C(O)CCC2(C)C SUZLHDUTVMZSEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 32
- 230000009477 glass transition Effects 0.000 claims description 31
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 17
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 16
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 16
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 claims description 10
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 claims description 5
- 208000010412 Glaucoma Diseases 0.000 claims description 5
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 claims description 5
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 claims description 5
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 claims description 5
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 5
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 5
- 208000018937 joint inflammation Diseases 0.000 claims description 5
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 claims description 5
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 208000030603 inherited susceptibility to asthma Diseases 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 22
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229920003080 Povidone K 25 Polymers 0.000 description 12
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 12
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 11
- IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N Cyclic adenosine monophosphate Chemical compound C([C@H]1O2)OP(O)(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H]2N1C(N=CN=C2N)=C2N=C1 IVOMOUWHDPKRLL-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 10
- 108060000200 adenylate cyclase Proteins 0.000 description 10
- 102000030621 adenylate cyclase Human genes 0.000 description 10
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 150000004160 forskolin derivatives Chemical class 0.000 description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 6
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- 229910052573 porcelain Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100024448 Prostaglandin E2 receptor EP2 subtype Human genes 0.000 description 4
- 108091006335 Prostaglandin I receptors Proteins 0.000 description 4
- 101150109738 Ptger4 gene Proteins 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 230000006196 deacetylation Effects 0.000 description 4
- 238000011978 dissolution method Methods 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 229960005032 treprostinil Drugs 0.000 description 4
- PAJMKGZZBBTTOY-ZFORQUDYSA-N treprostinil Chemical compound C1=CC=C(OCC(O)=O)C2=C1C[C@@H]1[C@@H](CC[C@@H](O)CCCCC)[C@H](O)C[C@@H]1C2 PAJMKGZZBBTTOY-ZFORQUDYSA-N 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101001117519 Homo sapiens Prostaglandin E2 receptor EP2 subtype Proteins 0.000 description 3
- 102100024450 Prostaglandin E2 receptor EP4 subtype Human genes 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 3
- 238000013262 cAMP assay Methods 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- -1 for example Chemical class 0.000 description 3
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J ATP(4-) Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J 0.000 description 2
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 235000005320 Coleus barbatus Nutrition 0.000 description 2
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 2
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 2
- 239000012630 HPLC buffer Substances 0.000 description 2
- 101000836978 Homo sapiens Sperm-associated antigen 11B Proteins 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 241000131459 Plectranthus barbatus Species 0.000 description 2
- 229920003081 Povidone K 30 Polymers 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 206010006475 bronchopulmonary dysplasia Diseases 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 2
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 229930004069 diterpene Natural products 0.000 description 2
- 150000004141 diterpene derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000009079 Epoprostenol Receptors Human genes 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 201000009794 Idiopathic Pulmonary Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010061296 Motor dysfunction Diseases 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 206010033307 Overweight Diseases 0.000 description 1
- 229920003078 Povidone K 12 Polymers 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 208000003782 Raynaud disease Diseases 0.000 description 1
- 208000012322 Raynaud phenomenon Diseases 0.000 description 1
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 208000032942 Vaccine-Preventable disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000033558 biomineral tissue development Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 206010006451 bronchitis Diseases 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 239000012482 calibration solution Substances 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000002037 dichloromethane fraction Substances 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 230000003176 fibrotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 208000036971 interstitial lung disease 2 Diseases 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 1
- 229920000831 ionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 1
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 1
- 229940069328 povidone Drugs 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002287 radioligand Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005245 sintering Methods 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 1
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 1
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к комплексу 7-дезацетил-форсколина (7-ДАФСК) и поливинилпирролидона (ПВП) и к способу получения такого комплекса.
Предшествующий уровень техники
Дитерпен форсколин представляет собой практически нерастворимое в воде растительное соединение из Plectranthus barbatus (Coleus forskohlii). Форсколин находится в центре внимания для универсального медицинского применения, включая сердечнососудистые заболевания, бронхиальную астму, ожирение, лечение глаукомы, легочных заболеваний, воспалений суставов и остеоартрита/артрита. Форсколин способствует образованию хрящей в суставах и в то же время предотвращает оссификацию и минерализацию. Кроме того, форсколин изучается в исследованиях стволовых клеток в отношении дифференцировки и регрессии к плюрипотентности.
Форсколин активирует аденилатциклазу, мембраносвязанный фермент. Аденилатциклаза превращает аденозин трифосфат (АТФ) в циклический аденозин монофосфат (цАМФ) и высвобождает цАМФ в цитозоль, повышая внутриклеточную концентрацию цАМФ в большинстве клеток и тканей (Metzger H. et al., 1981, Drug Research, 1248-50). цАМФ действует как вторичный мессенджер в передаче клеточных сигналов и служит для активации многих пептидных гормонов (протеинкиназ).
Форсколин представляет собой дитерпен с двумя α-гидроксигруппами в положениях 1 и 9, βгидроксигруппой в положении 6 и β-ацетоксигруппой в положении 7. Две α-гидроксигруппы в положениях 1 и 9 необходимы для связывания с аденилатциклазой. Форсколин из-за его низкой растворимости в воде (0,01 мг/мл, WO 2005025500 A2) требует различных составов для использования в качестве диагностического или терапевтического средства. Такие составы содержат различные растворители, такие как спирты или ДМСО, которые часто плохо переносятся и приводят к побочным эффектам.
В документе US 6346273 B1 обсуждается способ повышения растворимости в воде плохо растворимых в воде фармацевтически активных веществ, таких как форсколин, путем образования комплекса с неионным полимером, таким как поливинилпирролидон (ПВП). В этом документе описано увеличение растворимости форсколина в воде.
Повышенная растворимость форсколина в воде достигается за счет образования комплексов форсколина с циклодекстринами. WO 2005025500 A2 описывает способ образования комплекса форсколина с циклодекстрином в водной среде.
WO 2017103840 A1 описывает водорастворимые композиции форсколина, полученные путем образования комплексов с водорастворимыми полимерами, такими как, среди прочих, ПВП. После смешивания форсколина с полимером добавляют раствор крахмала, и смесь нагревают, затем охлаждают и сушат распылением.
WO 2018127600 A1 раскрывает способ получения комплексов форсколин-циклодекстрин, который основан на процессе спекания и обеспечивает повышенное содержание форсколина в комплексе, а также повышенную растворимость в воде.
Другим подходом к увеличению растворимости форсколина в воде является химическая дериватизация. Производным форсколина с более высокой растворимостью в воде по сравнению с форсколином является 7-дезацетил-форсколин, который проявляет такой же эффект в отношении аденилатциклазы, как и форсколин (Laurenza A. et al., Molecular Pharmacology 1987, 32(1), 133-139, Pinto С. et al., Biochemical Pharmacology 2009, 78(1), 62-69). Однако дезацетилирование форсколина в положении 7 позволяет увеличить растворимость в воде лишь в ограниченной степени (до 1 мг/мл).
Следовательно, существует потребность в усовершенствованной водорастворимой форме производного форсколина, которая характеризуется как высокой растворимостью в воде и, таким образом, улучшенной биодоступностью, так и высоким содержанием производного форсколина.
Таким образом, целью настоящего изобретения является обеспечение формы 7-дезацетилфорсколина, имеющей повышенную растворимость в воде и в то же время высокое содержание 7дезацетил-форсколина.
Изложение сущности изобретения
Задачу решают с помощью комплекса 7-дезацетил-форсколина (7-ДАФСК) и поливинилпирролидона (ПВП), как описано в формуле изобретения и вариантах осуществления настоящего изобретения.
Настоящее изобретение раскрывает комплекс 7-дезацетил-форсколина (7-ДАФСК) и поливинилпирролидона (ПВП).
В одном варианте осуществления комплекс по изобретению отличается тем, что средняя массовая доля 7-ДАФСК в общем комплексе находится в пределах от 1 до 50 мас.%, предпочтительно 5, 10, 15, 20 или 25 мас.%, более предпочтительно 30, 35, 40, 45 мас.% или выше.
В одном варианте осуществления среднее молярное отношение 7-ДАФСК к ПВП в комплексе составляет 0,1 или выше, предпочтительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60 или выше, более предпочтительно 3 или выше.
В одном варианте осуществления комплекс по изобретению отличается тем, что ПВП имеет среднюю молекулярную массу от 1 до 40 кДа. Предпочтительно ПВП имеет среднюю молекулярную массу
- 1 044513 от 1 до 25, более предпочтительно примерно от 2 до 3, наиболее предпочтительно примерно 2,5 кДа.
В другом варианте осуществления комплекс по изобретению отличается тем, что 7-ДАФСК получен из синтетического форсколина.
В одном варианте осуществления 7-ДАФСК присутствует с чистотой по меньшей мере 98,5%.
Неожиданно было обнаружено, что особенно высокая массовая доля 7-ДАФСК в комплексе 7ДАФСК-ПВП может быть получена путем нагревания смеси 7-ДАФСК и ПВП до температуры, превышающей температуру стеклования используемого ПВП. В частности, смесь нагревают до температуры, которая по меньшей мере на 20°С, предпочтительно по меньшей мере на 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100°С выше температуры стеклования ПВП. В частности, температуру доводят до диапазона примерно на 25-50°С выше температуры стеклования ПВП.
Таким образом, в настоящем изобретении также предложен способ получения комплекса 7ДАФСК-ПВП по изобретению, отличающийся тем, что смесь 7-ДАФСК и ПВП нагревают до температуры, превышающей температуру стеклования используемого ПВП.
В одном варианте осуществления способ по изобретению характеризуется тем, что растворитель, предпочтительно воду, этанол, метанол, ацетон, этилметилкетон, дихлорметан и/или этилацетат, еще более предпочтительно воду, этанол, метанол, пропанол и/или дихлорметан, добавляют к смеси 7ДАФСК и ПВП. Особо предпочтительно к смеси 7-ДАФСК и ПВП добавляют воду и/или этанол или их смесь.
В конкретном варианте осуществления смесь по изобретению выдерживают при температуре, превышающей температуру стеклования используемого ПВП, в течение по меньшей мере 5 мин.
В одном варианте осуществления способ по изобретению включает следующие этапы:
(a) приготовление смеси 7-ДАФСК и ПВП и добавление к смеси растворителя, предпочтительно спирта, предпочтительно этанола;
(b) добавление воды;
(c) нагревание смеси выше температуры стеклования ПВП в течение по меньшей мере 5 мин;
(d) охлаждение смеси и растворение в воде;
(e) удаление нерастворенных компонентов, при необходимости путем фильтрации. В одной конкретной форме применения смесь нагревают по меньшей мере на 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 70, 80, 90, 100°С выше температуры стеклования ПВП.
Применение способа по изобретению позволяет эффективно и просто получать комплексы 7ДАФСК-ПВП, которые значительно повышают растворимость 7-ДАФСК в воде, а также могут содержать высокую массовую долю 7-ДАФСК, что делает возможным полезное применение 7-ДАФСК в диагностике и/или терапии.
С помощью комплексов 7-ДАФСК с ПВП по изобретению можно повысить растворимость 7ДАФСК в воде. Используя высокую массовую долю 7-ДАФСК в комплексе по изобретению, можно повысить растворимость 7-ДАФСК в воде, не требуя, таким образом, нежелательно большого количества ПВП. Таким образом, составы с производными форсколина также могут быть получены более экономичным способом, чем раньше. Избегая больших количеств ПВП и связанных с этим побочных эффектов, настоящее изобретение облегчает и улучшает использование 7-ДАФСК в диагностике и/или терапии.
Таким образом, настоящее изобретение также обеспечивает фармацевтическую композицию, содержащую комплекс 7-ДАФСК-ПВП по изобретению.
В одном варианте осуществления указанная фармацевтическая композиция отличается тем, что содержит 7-ДАФСК в концентрации по меньшей мере 25, 50, 75, 100, 200, 250, 300, 400, 500, 600, 800, 1000, 2000, 3000 или 4000 мг/л, предпочтительно 4000 мг/л.
Один аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции для перорального, внутривенного или ингаляционного введения.
В конкретном варианте осуществления фармацевтическую композицию по изобретению применяют в терапевтическом способе.
В другом конкретном варианте осуществления фармацевтическую композицию по изобретению используют для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, бронхиальной астмы, ожирения, глаукомы, легочных заболеваний, воспалений суставов или остеоартрита/артрита.
Один аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции по изобретению для применения в качестве лекарственного средства.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1 - схема реакции дезацетилирования форсколина до 7-ДАФСК карбонатом натрия (Na2CO3).
Фиг. 2 - сравнение массовой доли 7-ДАФСК в комплексах 7-ДАФСК-ПВП К12 и 7-ДАФСК-ПВП К25 в образцах, приготовленных методом нагревания и методом растворения.
Фиг. 3 - доля преобразованного 7-ДАФСК при различных массовых соотношениях ДАФСК и используемого ПВП К12.
Фиг. 4 - сравнение массовой доли 7-ДАФСК в комплексах 7-ДАФСК-ПВП К12 при различных мас- 2 044513 совых соотношениях 7-ДАФСК и ПВП К12.
Фиг. 5 - зависимость между растворимостью в воде и массовой долей 7-ДАФСК в комплексе 7ДАФСК-ПВП К12.
Фиг. 6 - анализ цАМФ с использованием клеток HEK293, содержащих рецепторы ЕР2, ЕР4 и IP. Клетки стимулировали контрольным образцом (трепростинил), 30 мкМ форсколина в ДМСО, 100 мкМ 7ДАФСК в воде и 100 мкМ 7-ДАФСК в комплексе 7-ДАФСК-ПВП К12 в воде.
Подробное описание изобретения
7-Дезацетил-форсколин (7-ДАФСК) может быть представлен структурной формулой, показанной на фиг. 1. 7-ДАФСК может также существовать в других формах, помимо молекулярной формы, таких как в форме солей, например, солей щелочных металлов, таких как соли натрия или калия. В контексте настоящего изобретения термин 7-дезацетил-форсколин (7-ДАФСК) относится как к молекулярной форме, как показано в структурной формуле на фиг. 1, так и ко всем другим возможным формам, таким как соли 7 -ДАФСК, предпочтительно соли щелочных металлов, особо предпочтительно соли натрия или калия.
Поливинилпирролидон (ПВП), также известный как поливидон или повидон, представляет собой полимер соединения винилпирролидона. ПВП коммерчески доступен в различных степенях полимеризации. Степень полимеризации определяет среднюю молекулярную массу полимера. Термин средняя молекулярная масса, используемый в настоящем изобретении, относится к средневесовой молекулярной массе.
В контексте настоящего изобретения предпочтительным является ПВП со средней молекулярной массой от 1 до 40 кДа, поскольку полимеры такого размера все еще могут хорошо экскретироваться и не метаболизироваться почками.
В одном варианте осуществления комплекс 7-ДАФСК-ПВП отличается тем, что ПВП имеет среднюю молекулярную массу от 1 до 60 кДа, в частности от 1 до 40 кДа. Предпочтительно ПВП имеет среднюю молекулярную массу от 1 до 25 кДа, предпочтительно, примерно от 2 до 9, от 2 до 8, от 2 до 7, от 2 до 6, от 2 до 5, от 2 до 4, более предпочтительно от 2 до 3, наиболее предпочтительно примерно от 2,5 кДа.
Термин примерно в настоящем изобретении относится к указанному значению или значению, которое отклоняется от указанного значения на ±10%.
Молекулярная масса ПВП также может быть определена значением К, которое получают путем измерения вязкости, и зависит от средневязкостной молекулярной массы вместо указания средневесовой молекулярной массы. ПВП со средневесовой молекулярной массой примерно 2,5 кДа соответствует ПВП со значением К примерно 12, называемому в настоящем изобретении ПВП К12 (K. Kolter et al. HotMeld Extrusion with BASF Pharma Polymers, ISBN 978-3-00-039415-7, 2012). ПВП со средневесовой молекулярной массой примерно 24 кДа соответствует ПВП со значением К примерно 25, обозначаемому в настоящем изобретении как ПВП К25.
В контексте настоящего изобретения термин комплекс 7-ДАФСК-ПВП относится к химическому продукту, содержащему 7-ДАФСК и ПВП, и характеризующемуся тем фактом, что между 7-ДАФСК и ПВП существует связь. Термин комплекс никоим образом не ограничивает природу соединения, а просто означает наличие связи между одной или несколькими молекулами 7-ДАФСК и одной или несколькими молекулами ПВП. Связь может представлять собой, например, ковалентную связь или, предпочтительно, нековалентное присоединение 7-ДАФСК к ПВП, например, через связи Ван-дер-Ваальса или водородные связи. Термин 7-ДАФСК-ПВП или комплекс 7-ДАФСК-ПВП следует понимать, как включающий химический продукт в целом, а не отдельный комплекс 7-ДАФСК-ПВП на молекулярном уровне.
Термины массовая доля и молярное отношение всегда следует понимать здесь как средние значения. Они относятся не к каждому отдельному комплексу на молекулярном уровне, а к среднему значению всего химического продукта.
Проценты (%) в настоящем изобретении относятся в каждом случае к массовым процентам (мас.%), если не указано иное.
В одном варианте осуществления средняя массовая доля 7-ДАФСК в общем комплексе составляет от 1 до 50 мас.%, предпочтительно 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20 или 25 мас.%, более предпочтительно 30, 35, 40, 45 мас.% или выше. Массовая доля здесь отражает относительную долю массы 7-ДАФСК от массы всего комплекса (7-ДАФСК-ПВП).
Доля 7-ДАФСК в комплексе 7-ДАФСК-ПВП также может быть выражена в виде молярного отношения. Например, для комплекса 7-ДАФСК-ПВП, который состоит из молекулярного 7-ДАФСК (молярная масса: 368,5 г/моль) и ПВП, имеющего среднюю молекулярную массу примерно 2,5 кДа (ПВП К12), и имеет среднюю массовую долю 7-ДАФСК в общем комплексе 30 мас.%, среднее молярное отношение 7-ДАФСК к ПВП в комплексе составляет примерно 3. Среднее молярное отношение здесь отражает отношение молярного количества 7-ДАФСК к молярному количеству ПВП.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения среднее молярное отношение 7-ДАФСК к ПВП в комплексе составляет 0,1 или выше, предпочтительно 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40,
- 3 044513
45, 50, 55, 60 или выше, более предпочтительно 3 или выше.
Доля (массовая доля, а также молярное отношение) 7-ДАФСК в общем комплексе всегда следует понимать в настоящем изобретении как среднюю долю. Подходящим методом определения средней доли
7-ДАФСК в общем комплексе является высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ). Специалист в данной области техники знаком с выполнением такого определения.
7-ДАФСК можно получить из форсколина с помощью реакции дезацетилирования, например, карбонатного омыления, как описано в конкретных примерах настоящего изобретения. В качестве реагента можно использовать как натуральный, так и синтетический форсколин. Натуральный форсколин обычно присутствует в виде обогащенного экстракта, который очищают перед использованием. В контексте настоящего изобретения предпочтительным является синтетический форсколин, коммерчески доступный в высокой чистоте, в качестве реагента для синтеза 7-ДАФСК.
Таким образом, в одном варианте осуществления комплекс согласно изобретению характеризуется тем, что 7-ДАФСК получен из синтетического форсколина. В предпочтительном варианте осуществления 7-ДАФСК имеет чистоту по меньшей мере 98,5%.
Комплекс 7-ДАФСК-ПВП по изобретению характеризуется повышенной растворимостью в воде по сравнению с 7-ДАФСК-ПВП, не образующим комплексов, что выгодно для фармацевтических применений.
Неожиданно было обнаружено, что комплексы 7-ДАФСК-ПВП легко доступны синтетически путем нагревания 7-ДАФСК и ПВП до температуры, превышающей температуру стеклования используемого ПВП. Удивительно, но эта процедура также приводит к высокой массовой доле 7-ДАФСК в общем комплексе.
Таким образом, настоящее изобретение включает способ получения комплекса 7-ДАФСК-ПВП согласно изобретению, где смесь 7-ДАФСК и ПВП нагревают до температуры, превышающей температуру стеклования используемого ПВП.
Как аморфное вещество, ПВП не имеет точки плавления, но имеет так называемую температуру стеклования. Температура стеклования зависит, в том числе, от степени полимеризации, т.е. от средней молекулярной массы ПВП (см. табл. 1).
Таблица 1
Примеры зависимости температуры стеклования ПВП от молекулярной массы
| Средняя молекулярная масса ПВП | Температура стеклования |
| Примерно 2,5 кДа («ПВП К12») | 93°С |
| Примерно 9 кДа («ПВП К17») | 130°С |
| Примерно 24 кДа («ПВП К25») | 155°С |
| Примерно 40 кДа («ПВП КЗО») | 175°С |
В этом контексте температуру стеклования используемого ПВП следует понимать как температуру, при которой происходит стеклование ПВП в настоящей смеси с 7-ДАФСК. На температуру стеклования используемого ПВП может влиять состав смеси, например, если к смеси добавляют растворители или воду. Способы определения температуры стеклования известны специалистам в данной области техники. Предпочтительно температуру стеклования можно определить в соответствии с процедурой соответствующего стандарта DIN (Wampfler В., et al., Messunsicherheit in der Kunststoffanalytik - Ermittlung mit Ringversuchsdaten. Carl Hanser Verlag, Munich 2017, ISBN-10: 3446452869).
Особо предпочтительный вариант осуществления способа по изобретению для получения комплекса 7-ДАФСК-ПВП отличается тем, что средняя молекулярная масса используемого ПВП составляет примерно 2,5 кДа (ПВП К12), и смесь нагревают до температуры выше 93°С. В частности, нагревание осуществляют до температуры, которая по меньшей мере на 25 °С, в частности, на 30, 40, 45 °С или более превышает температуру стеклования ПВП К12.
Другой предпочтительный вариант осуществления характеризуется тем, что средняя молекулярная масса используемого ПВП составляет примерно 9 кДа (ПВП К17), и смесь нагревают до температуры выше 130°С. Более конкретно, смесь нагревают до температуры, которая по меньшей мере на 25°С, в частности, на 30, 40, 45 или более превышает температуру стеклования ПВП К17.
Другой предпочтительный вариант осуществления характеризуется тем, что средняя молекулярная масса используемого ПВП составляет примерно 24 кДа (ПВП К25), и смесь нагревают до температуры выше 155°С. Более конкретно, её нагревают до температуры, которая по меньшей мере на 25°С, в частности на 30, 40, 45°С или более превышает температуру стеклования ПВП К25.
Другой предпочтительный вариант осуществления характеризуется тем, что средняя молекулярная масса используемого ПВП составляет примерно 40 кДа (ПВП К30), и смесь нагревают до температуры выше 175°С. Более конкретно, её нагревают до температуры, которая по меньшей мере на 25°С, в частности на 30, 40, 45 или более превышает температуру стеклования ПВП К30.
Было обнаружено, что предпочтительно добавлять растворитель или смесь растворителей к смеси 7-ДАФСК и ПВП по изобретению. Предпочтительно смесь 7-ДАФСК и ПВП перемешивают в виде пасты в небольшом количестве растворителя. Добавление растворителя может способствовать однородному
- 4 044513 распределению 7-ДАФСК и ПВП и позволить большему количеству 7-ДАФСК присоединяться к ПВП.
Подходящими растворителями являются водные, спиртовые или другие органические растворители, такие как вода, этанол, метанол, пропанол, ацетон, этилметилкетон, дихлорметан и/или этилацетат.
В одном варианте осуществления способ получения комплекса 7-ДАФСК-ПВП по изобретению отличается тем, что растворитель, предпочтительно воду, этанол, метанол, пропанол, ацетон, этилметилкетон, дихлорметан и/или этилацетат, еще более предпочтительно воду, этанол, метанол, пропанол, дихлорметан и/или пиридин, добавляют к смеси 7-ДАФСК и ПВП. Особо предпочтительно к смеси 7ДАФСК и ПВП добавляют воду и/или этанол или их смесь. Добавление воды и/или этанола может быть одновременным или последовательным.
Было обнаружено, что в производственном процессе полезно поддерживать смесь 7-ДАФСК и ПВП при температуре, превышающей температуру стеклования используемого ПВП, в течение определенного периода времени. Хорошие результаты были получены, когда смесь выдерживали при температуре выше температуры стеклования не менее 5 мин.
Поэтому в конкретном варианте осуществления способа по изобретению смесь 7-ДАФСК и ПВП выдерживают при температуре, превышающей температуру стеклования используемого ПВП, по меньшей мере 5 мин.
В конкретном варианте осуществления способ по изобретению включает следующие этапы, которые выполняют последовательно:
(a) приготовление смеси 7-ДАФСК и ПВП и добавление к смеси растворителя, предпочтительно спирта, предпочтительно этанола;
(b) добавление воды;
(c) нагревание смеси выше температуры стеклования ПВП в течение по меньшей мере 5 мин;
(d) охлаждение смеси и растворение в воде;
(e) удаление нерастворенных компонентов, при необходимости путем фильтрации. В одном варианте осуществления смесь 7-ДАФСК и ПВП готовят в массовом отношении от 2:1 до 1:4, предпочтительно 2:1, 2:1,5, 1:1, 2:3, 1:2, 1:3 и 1:4, наиболее предпочтительно 1:1 или 1:2.
Применение способа по изобретению позволяет эффективно и просто получать комплексы 7ДАФСК-ПВП.
Способ по изобретению позволяет получать комплексы 7-ДАФСК-ПВП с высокой массовой долей 7-ДАФСК. Обычные способы получения комплексов ПВП включают растворение компонентов в растворителе или смеси растворителей, причем смесь не нагревают выше температуры стеклования ПВП. В конкретном примере, поясняемом в настоящем изобретении, способ по изобретению позволил достичь на 8-9% более высоких средних массовых долей 7-ДАФСК в комплексах 7-ДАФСК-ПВП по сравнению с обычными процессами образования комплексов.
Высокая массовая доля 7-ДАФСК в комплексах 7-ДАФСК-ПВП особенно выгодна для фармацевтических применений в диагностике и/или терапии. При использовании высокой массовой доли 7ДАФСК в комплексе по изобретению растворимость 7-ДАФСК в воде может быть увеличена без необходимости неблагоприятно большого количества ПВП. Таким образом, составы с производными форсколина также могут быть получены более экономичным способом, чем раньше. Избегая больших количеств адъювантов (ПВП) и связанных с ними побочных эффектов, настоящее изобретение облегчает и улучшает использование 7-ДАФСК в диагностике и/или терапии.
Комплекс 7-ДАФСК-ПВП по изобретению можно использовать для любых диетических или медицинских целей, в которых применимы форсколин и/или 7-ДАФСК.
Следовательно, настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей комплекс 7-ДАФСК-ПВП по изобретению с 7-ДАФСК в качестве активного ингредиента.
Термин фармацевтическая композиция используется в настоящем изобретении в отношении комплекса 7-ДАФСК-ПВП по изобретению с 7-ДАФСК в качестве активного ингредиента, при необходимости в комбинации с дополнительными ингредиентами и/или активными ингредиентами.
Фармацевтическая композиция по изобретению может быть представлена в различных составах для системного и местного применения. Неограничивающие примеры препаратов для системного или местного применения, содержащих комплекс 7-ДАФСК-ПВП по изобретению, включают составы для перорального, интрабуккального, внутрилегочного, ректального, внутриматочного, интрадермального, местного, дермального, парентерального, внутриопухолевого, интракраниального, буккального, сублингвального, интраназального, подкожного, внутрисосудистого, интратекального, ингаляционного, респираторного, внутрисуставного, внутриполостного, имплантационного, трансдермального, ионотофоретического, интраокулярного, вагинального, оптического, внутривенного, внутримышечного, внутрижелезистого, внутриорганного, внутрилимфатического введения, составы с энтеросолюбильными покрытиями или составы с медленным высвобождением.
Композицию можно вводить один или несколько раз в сутки. Предпочтительный вариант осуществления относится к фармацевтической композиции по изобретению для перорального, внутривенного или ингаляционного введения.
Составы для перорального введения могут быть предоставлены в виде отдельных единиц, таких как
- 5 044513 капсулы, таблетки или пастилки, содержащие состав в виде порошка или гранул. Составы для перорального введения также могут быть представлены в виде раствора или суспензии в водной или неводной среде, или в виде эмульсии.
Составы для внутривенного введения могут быть представлены в виде раствора или суспензии в водной среде, например, в виде солевого раствора.
Специфическая доза комплекса 7-ДАФСК-ПВП для достижения терапевтического или профилактического эффекта зависит от конкретного применения, например, пути введения, возраста, массы тела и состояния конкретного пациента, заболевания, которое лечат, и тяжести симптомов.
Доза 7-ДАФСК-ПВП в композиции по изобретению предпочтительно представляет собой эффективную дозу, при которой достигается терапевтический или профилактический эффект, не вызывая нежелательных побочных эффектов, и композицию можно вводить в виде разовой дозы или в виде нескольких единиц.
В конкретном варианте осуществления композицию по изобретению обеспечивают в виде раствора или аэрозоля, содержащего 7-ДАФСК в концентрации по меньшей мере 25 мг/л, предпочтительно по меньшей мере 50, 75, 100, 200, 250, 300, 400, 500, 600, 800 или 1000 мг/л. В предпочтительном варианте осуществления композиция содержит 7-ДАФСК в концентрации по меньшей мере 1, 1,5, 2, 2,5, 3 или 4, наиболее предпочтительно 4 мг/мл.
В другом конкретном варианте осуществления композиция по изобретению представлена в виде капсулы или таблетки, содержащей 7-ДАФСК в фармацевтически эффективном количестве, например, от 10 до 2000 мг, предпочтительно по меньшей мере 25, 50, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 или 1000, более предпочтительно 500 мг.
В конкретном варианте осуществления фармацевтическую композицию по изобретению применяют в терапевтическом способе.
Известно, что форсколин и 7-ДАФСК являются неспецифическими стимуляторами цАМФ. Комплекс 7-ДАФСК-ПВП по изобретению можно использовать для лечения любого заболевания или расстройства, которое можно лечить форсколином и/или 7-ДАФСК. Неограничивающие примеры таких заболеваний включают нейродегенеративные заболевания, болезнь Альцгеймера, моторную дисфункцию, острые и хронические сердечно-сосудистые заболевания, легочные заболевания, такие как астма, муковисцидоз, сосудистые заболевания, связанные с муковисцидозом, бронхит, хроническую обструктивную болезнь легких (ХОБЛ), ожирение, глаукому, воспаление суставов, остеоартрит/артрит, фиброзные изменения, такие как идиопатический легочный фиброз, посттравматический легочный фиброз, бронхолегочная дисплазия (БЛД), заболевания печени после воздействия токсических факторов, такие как заболевания, предупреждаемые вакцинацией или цирроз, и нарушения периферического кровообращения, включая болезнь Рейно и склеродермию.
В конкретном варианте осуществления фармацевтическую композицию по изобретению используют для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, бронхиальной астмы, ожирения, глаукомы, легочных заболеваний, воспалений суставов или остеоартрита/артрита.
Другой аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции по изобретению для применения в качестве лекарственного средства.
Настоящее изобретение дополнительно проиллюстрировано следующими примерами и фигурами, но не ограничивается ими.
Примеры
Следующие примеры описывают синтез 7-ДАФСК и образование комплекса 7-ДАФСК с ПВП, где был выбран ПВП со средней молекулярной массой примерно 2,5 кДа (ПВП К12) и примерно 24 кДа (ПВП К25), и соотношение количеств 7-ДАФСК и ПВП варьировало. В примерах далее рассматривается характеристика полученных комплексов с точки зрения содержания 7-ДАФСК, растворимости в воде и эффекта в качестве активатора цАМФ в анализах цАМФ. Примеры не включают подробное описание стандартных методов, таких как определение содержания с помощью ВЭЖХ или измерение спектров ЯМР. Такие способы хорошо известны специалистам в данной области техники.
Пример 1. Синтез 7-дезацетил-форсколина.
Синтетический форсколин Mercachem (материал GMP), серия МАМА07-024-5, использовали в качестве реагента для синтеза 7-дезацетил-форсколина (7-ДАФСК). Дезацетилирование форсколина проводили классическим карбонатным омылением.
Дезацетилирование проводили по схеме реакции, представленной на фиг. 1. Сначала 200 мг форсколина (синтетический форсколин, Mercachem, серия МАМА07-024-5) и 200 мг прокаленного Na2CO3 перемешивали в 10 мл метанола в круглодонной колбе вместимостью 250 мл, в течение 4 ч при комнатной температуре. Затем реакционной смеси давали отстояться в течение ночи (20 ч).
Затем метанол отгоняли (с роторным испарителем) и растворяли примерно в 20 мл CH2Cl2 из колбы. Смесь обрабатывали ультразвуком в течение короткого периода времени (1 мин). Образовавшийся 7ДАФСК переводили в раствор с CH2Cl2, осаждая соли. Соли отделяли фильтрацией (на фильтрах со средней скоростью фильтрации). Затем фильтрат промывали в 2 н HCl в делительной воронке. Дихлорметановую фракцию удаляли, а растворитель отгоняли в ротационном испарителе. Полученный белый
- 6 044513 порошок анализировали с помощью ВЭЖХ. Была определена чистота более 99%.
Структуру 7-ДАФСК подтверждали с помощью 1Н ЯМР и 13С ЯМР. Измеренные спектры 1Н и 13С
ЯМР полученного 7-ДАФСК идентичны ранее опубликованным спектрам этого соединения (J. Org.
Chem. 2006, 71, 4619-4624). Это подтвердило необходимое дезацетилирование форсколина в соответствии со схемой реакции, показанной на фиг. 1.
Полученный 7-ДАФСК дополнительно характеризовали с помощью ВЭЖХ. Дезацетил-форсколин и форсколин элюировали подвижной фазой ацетонитрил/вода (55/45 по объему) при скорости потока 0,6 мл/мин (стационарная фаза: Nucleosil 120 3С18, 250x4 мм). Строили калибровочную кривую для количественного определения содержания 7-ДАФСК в комплексе с ПВП. Для калибровки использовали калибровочные растворы с концентрацией 7-ДАФСК 0,014; 0,028; 0,056 и 0,56 мг/мл.
Пример 2. Получение комплексов 7-ДАФСК-ПВП.
Поскольку сам 7-дезацетил-форсколин лишь умеренно растворим в воде, 7-ДАФСК объединяли в комплекс с ПВП для повышения его растворимости в воде. Комплексы 7-ДАФСК получали способами по изобретению, именуемыми в дальнейшем способами нагревания, и для сравнения с обычным раствором без нагревания (способы растворения).
. Получение комплексов 7-ДАФСК-ПВП путем нагревания ПВП выше температуры стеклования (способ нагревания).
Комплекс 7-ДАФСК-ПВП К12 (комплекс 7-ДАФСК с ПВП К12).
Для образования комплекса 7-дезацетил-форсколина с ПВП К12 (Коллидон 12 PF, Евр.Фарм., Фарм. США, Яп.Фарм.; BASF, средняя молярная масса: примерно 2,5 кДа), 20 мг 7-ДАФСК и 20 мг ПВП К12 растирали в фарфоровом тигле, добавляли 300 мкл этанола и перемешивали. Через 10 мин добавляли 100 мкл H2O, перемешивали и снова оставляли на 10 мин. Затем раствор нагревали до 140°С в сушильном шкафу в течение 40 мин и оставляли в нем в общей сложности на 45 мин. После охлаждения добавляли 3 мл H2O и перемешивали в течение 20-30 мин. Затем суспензию отбирали шприцем и пропускали через фильтр 0,45 мкм (гидрофильный). Тигель повторно промывали 3 мл H2O, и промывной раствор также пропускали через фильтр. Содержание 7-ДАФСК, растворенного в 6 мл H2O, определяли с помощью ВЭЖХ. Для определения раствор комплекса 7-ДАФСК-ПВП разбавляли 1:10 буфером для ВЭЖХ. Массовая доля 7-ДАФСК в общем комплексе при определении составила 35 мас.%.
Комплекс 7-ДАФСК-ПВП К25 (комплекс 7-ДАФСК с ПВП К25).
Для образования комплекса 7-дезацетил-форсколина с ПВП К25 (FLUKA 81399, средняя молекулярная масса: примерно 24 кДа) 20 мг 7-ДАФСК и 20 мг ПВП К25 растирали в фарфоровом тигле, и добавляли 300 мкл этанола и перемешивали. Через 10 мин добавляли 100 мкл H2O, перемешивали и снова оставляли на 10 мин. Затем раствор нагревали до 185°С в сушильном шкафу в течение 40 мин и оставляли в нем в общей сложности на 45 мин. После охлаждения добавляли 3 мл H2O и перемешивали в течение 20-30 мин. Затем суспензию отбирали шприцем и пропускали через фильтр 0,45 мкм (гидрофильный). Тигель повторно промывали 3 мл H2O, и промывной раствор также пропускали через фильтр. Содержание 7-ДАФСК, растворенного в 6 мл H2O, определяли с помощью ВЭЖХ. Для определения раствор комплекса 7-ДАФСК-ПВП 25 разбавляли буфером для ВЭЖХ в соотношении 1:10. Массовая доля 7-ДАФСК в общем комплексе при определении составила 17 мас.%.
. Получение комплексов 7-ДАФСК-ПВП способом растворения.
Комплекс 7-ДАФСК-ПВП К12.
мг 7-ДАФСК и 40 мг ПВП К12 растирали в фарфоровом тигле, добавляли 300 мкл этанола и перемешивали. Через 10 мин добавляли 100 мкл H2O, перемешивали и снова оставляли на 10 мин. Затем раствор выдерживали при комнатной температуре в течение 45 мин, добавляли 3 мл H2O и перемешивали в течение 20-30 мин. Затем суспензию отбирали шприцем и пропускали через фильтр 0,45 мкм (гидрофильный). Тигель повторно промывали 3 мл H2O, и промывной раствор также пропускали через фильтр. Содержание 7-ДАФСК, растворенного в 6 мл H2O, определяли с помощью ВЭЖХ. Массовая доля 7-ДАФСК в общем комплексе при определении составила 24 мас.%.
Комплекс 7-ДАФСК-ПВП К25.
мг 7-ДАФСК и 40 мг ПВП 25 растирали в фарфоровом тигле, добавляли 300 мкл этанола и перемешивали. Через 10 мин добавляли 100 мкл H2O, перемешивали и снова оставляли на 10 мин. Затем раствор выдерживали при комнатной температуре в течение 45 мин, добавляли 3 мл H2O и перемешивали в течение 20-30 мин. Затем суспензию отбирали шприцем и пропускали через фильтр 0,45 мкм (гидрофильный). Тигель повторно промывали 3 мл H2O, и промывной раствор также пропускали через фильтр. Содержание 7-ДАФСК, растворенного в 6 мл H2O, определяли с помощью ВЭЖХ. Массовая доля 7ДАФСК в общем комплексе при определении составила 8 мас.%.
Пр имер 3. Определение растворимости в воде.
Для испытаний на растворимость использовали соответствующий комплекс, высушенный на ротационном испарителе. Добавляли определенное количество воды, а затем добавляли комплекс до тех пор, пока не появлялся избыток 7-ДАФСК-ПВП. Перенасыщенный раствор обрабатывали ультразвуком, перемешивали и слегка нагревали (водяная баня при 40°С). Затем суспензию фильтровали (фильтр 0,45
- 7 044513 мкм) и определяли содержание 7-ДАФСК в фильтрате с помощью ВЭЖХ.
Пример 4. Характеристика комплекса 7-ДАФСК-ПВП.
Массовая доля 7-ДАФСК в общем комплексе.
На фиг. 2 представлена диаграмма определяемого содержания 7-ДАФСК в комплексах 7-ДАФСКПВП К12 и 7-ДАФСК-ПВП 25, для которых было выбрано соотношение 7-ДАФСК к ПВП 20 к 20. Здесь проводится различие между способом нагревания и способом растворения. Для всех комплексов можно увидеть четкие различия в отношении солей 7-ДАФСК между двумя способами. При использовании способа нагревания в конечных комплексах можно получить на 8-9% больше солей 7-ДАФСК. Комплекс 7ДАФСК-ПВП К12 характеризуется самым высоким содержанием 7-ДАФСК (примерно 35 мас.%).
Для оптимизации содержания 7-ДАФСК в общем комплексе изменяли массовые отношения используемых 7-ДАФСК и ПВП К12 (фиг. 3). Даже при изменении соотношения 7-ДАФСК/ПВП К12 не более 50-60% используемого материала могло формировать комплекс с 7-ДАФСК (20 мг) при этом способе, как видно из фиг. 3. Ясно, что, несмотря на увеличение количества ПВП12, конечное комплексообразующее количество 7-ДАФСК в конечном комплексе существенно не меняется. Для того чтобы выяснить, сколько не образовавшего комплекс 7-ДАФСК переходит в раствор в процессе растворения после приготовления путем нагревания, оценивали контрольный образец (без ПВП12, только 7-ДАФСК), обработанный так же, как и комплексные образцы. Здесь могло выходить в раствор менее четверти используемого 7-ДАФСК. Таким образом, образование комплекса с ПВП увеличивает растворимость 7ДАФСК.
Даже увеличивая количество растворителя перед нагреванием, не удалось ввести в комплекс с ПВП К12 большее количество 7-ДАФСК.
Фиг. 4 показывает, что даже при очень малых количествах ПВП могут быть получены сопоставимые результаты.
Сообщаемое содержание 7-ДАФСК в мас.% определяли с помощью ВЭЖХ. Для расчета предполагали, что все количество ПВП переходит в раствор при растворении в 6 мл H2O.
Растворимость в воде.
Из табл. 2 видно, что значительное увеличение растворимости 7-ДАФСК в воде возможно за счет образования комплекса с ПВП. Растворимость 7-ДАФСК в комплексе с ПВП до трех раз выше, чем растворимость не образовавшего комплекс 7-ДАФСК. В отличие от 7-ДАФСК, форсколин практически не растворяется в ПВП из-за его стерической структуры и не образует комплексов с ПВП.
На фиг. 5 показано, что растворимость в воде существенно не меняется при различных соотношениях ДАФСК/ПВП. Значения варьируют от 2,5 мг/мл до 3,5 мг/мл. Это связано с тем фактом, что при каждом соотношении образует комплекс примерно одинаковая доля 7-ДАФСК (50-60%) из комплекса, что существенно не меняет растворимость комплекса в воде.
Таблица 2
Растворимость в воде различных веществ/комплексов
| Вещество/комплекс | Массовая доля ПВП от общего комплекса | Растворимость в воде |
| ФСК | - | 0,01 мг/мл |
| ФСК-ПВП12 | - | 0,001 мг/мл (не обнаруживается, не выявляется образование комплекса с форсколином) |
| 7-ДАФСК | - | 1 мг/мл |
| 7-ДАФСК-ПВП К12 | 35 масс.% | 3 мг/мл |
| 7-ДАФСК-ПВП К25 | 17 масс.5 | 2 мг/мл |
Пример 5. Тест на клеточной культуре: анализ цАМФ.
Анализ цАМФ проводили с использованием клеток HEK293 (клетки эмбриональной почки человека, 1970) с рецепторами простагландина ЕР2 или ЕР4 или рецептором простациклина IP. Клетки HEK293 инкубировали с эмбриональной телячьей сывороткой и радиолигандом ([3Н]аденин). Образование цАМФ ([3Н] цАМФ) контролировали в ходе эксперимента.
Сравнивали активацию аденилатциклазы (АЦ) форсколином (растворенным в ДМСО), 7-ДАФСК и 7-ДАФСК-ПВП, оба были растворены в воде. Существуют незначительные различия между тремя производными форсколина в активации АЦ через рецепторы ЕР2 и ЕР4, и нет существенных различий в активации рецептора IP (фиг. 6).
Все три производных форсколина через указанные рецепторы активируют аденилатциклазу даже в присутствии трепростинила. Трепростинил по отдельности (контрольный образец) не вызывает активации АЦ. Повышенная активность форсколина, 7-ДАФСК и 7-ДАФСК-ПВП по сравнению с контролем ясно видна на фиг. 6. Таким образом, эти результаты показывают, что 7-ДАФСК-ПВП является подходящим стимулятором аденилатциклазы.
Анализы проводили следующим образом.
День 1: клетки HEK293, стабильно экспрессирующие рецепторы ЕР2, ЕР4 или IP, выращивали на 6- 8 044513 луночном планшете в 2 мл среды DMEM, содержащей 10% ЭТС и 2 мкКи [3Н]-аденина, и инкубировали в течение 16 ч.
День 2: клетки стимулировали 30 мкМ трепростинила по отдельности или в комбинации с 30 мкМ форсколина в ДМСО, 100 мкМ 7-ДАФСК в воде или 100 мкМ 7-ДАФСК в комплексе 7-ДАФСК-ПВП К12 в воде (в свежей среде в течение 30 мин при комнатной температуре). Затем клетки лизировали 2,5% перхлорной кислотой (ПХК) в течение 30 мин на льду. Экстракт ПХК нейтрализовали KOH, и [3Н]цАМФ отделяли последовательной хроматографией с использованием колонок DOWEX и оксида алюминия. Затем измеряли радиоактивность с помощью сцинтиллятора.
Аликвоту экстракта ПХК из каждой лунки использовали для измерения радиоактивности.
Пример 6. Попытка получения комплекса форсколин-ПВП способом растворения.
мг ФСК и 40 мг ПВП 25 растирали в фарфоровом тигле, добавляли 300 мкл этанола (или пропанола) и перемешивали. Через 10 мин добавляли 100 мкл H2O, перемешивали и снова оставляли на 10 мин. Затем раствор выдерживали при комнатной температуре в течение 45 мин, добавляли 3 мл H2O и перемешивали в течение 20-30 мин. Затем суспензию отбирали шприцем и пропускали через фильтр 0,45 мкм (гидрофильный). Тигель повторно промывали 3 мл H2O, и промывной раствор также пропускали через фильтр. Содержание ФСК, растворенного в 6 мл H2O, определяли с помощью ВЭЖХ. Массовая доля ФСК в общем комплексе при определении составила <0,01 мас.%. ФСК не был обнаружен в фильтрате при проведении ВЭЖХ.
Claims (11)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Комплекс 7-дезацетил-форсколина (7-ДАФСК) и поливинилпирролидона (ПВП).
- 2. Комплекс по п.1, где ПВП имеет среднюю молекулярную массу по отношению к средневесовой молекулярной массе от 1 до 40 кДа, предпочтительно от 2 до 25, особо предпочтительно примерно 2,5 кДа.
- 3. Комплекс по п.1 или 2, где 7-ДАФСК получен из синтетического форсколина.
- 4. Комплекс по любому из пп.1-3, где средняя массовая доля 7-ДАФСК в общем комплексе находится в пределах от 1 до 50, предпочтительно 30 мас.% или выше.
- 5. Способ получения комплекса по любому из пп.1-4, где смесь 7-ДАФСК и ПВП нагревают до температуры, превышающей температуру стеклования используемого ПВП.
- 6. Способ по п.5, где растворитель, предпочтительно воду, этанол, метанол, ацетон, этилметилкетон, дихлорметан и/или этилацетат, более предпочтительно воду, этанол, метанол, пропанол и/или дихлорметан, еще более предпочтительно воду и/или этанол, или их смесь, добавляют к смеси 7-ДАФСК и ПВП.
- 7. Способ по п.5 или 6, где смесь выдерживают при температуре выше температуры стеклования используемого ПВП в течение по меньшей мере 5 мин.
- 8. Способ по любому из пп.5-7, включающий этапы:(a) приготовление смеси 7-ДАФСК и ПВП и добавление к смеси растворителя, предпочтительно спирта, предпочтительно этанола;(b) добавление воды или водного раствора;(c) нагревание смеси выше температуры стеклования ПВП в течение по меньшей мере 5 мин;(d) охлаждение смеси и растворение в воде или водном растворе;(e) удаление нерастворенных компонентов, при необходимости путем фильтрации.
- 9. Фармацевтическая композиция для лечения сердечно-сосудистых заболеваний, бронхиальной астмы, ожирения, глаукомы, заболеваний легких, воспаления суставов или остеоартрита/артрита, содержащая комплекс по любому из пп.1-4.
- 10. Фармацевтическая композиция по п.9, содержащая 7-ДАФСК в концентрации по меньшей мере 25, предпочтительно по меньшей мере 100, 250, 500, 1000, 2000, 3000 или 4000 мг/мл, особо предпочтительно 4000 мг/мл.
- 11. Фармацевтическая композиция по п.9 или 10 для внутривенного, перорального или ингаляционного введения.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP20153429.4 | 2020-01-23 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA044513B1 true EA044513B1 (ru) | 2023-08-31 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP2244712B1 (en) | In vivo studies of crystalline forms of meloxicam | |
| US8372836B2 (en) | Spray dried formulation | |
| JP2010512397A (ja) | アンサマイシン製剤およびその使用法 | |
| TW200808792A (en) | 3-aminoimidazo[1,2-a]pyridine derivatives | |
| HU228938B1 (hu) | Hexahidrofuro[2,3-b]furán-3-il-N-{3-(1,3-benzodioxol-5-il-szulfonil)-(izobutil)-amino-1-benzil-2- -(hidroxi-propil)}-karbamát mint retrovírus proteáz gátló | |
| US10285969B2 (en) | Mangiferin-6-O-berberine salt and preparation method and use thereof | |
| JP5425799B2 (ja) | 抗腫瘍活性を有する水溶性トリテルペンフェノール化合物及びその調製方法 | |
| RU2485121C1 (ru) | Новые кристаллические формы адефовира дипивоксила и способы его получения | |
| EA044513B1 (ru) | Комплекс 7-дезацетил-форсколина и пвп | |
| US20230346956A1 (en) | Complex of 7-deacetylforskolin and pvp | |
| US6492417B1 (en) | 11-deoxy-16-fluoro-PGF2α analogs as FP receptor antagonists | |
| CN107007839A (zh) | 一种异可利定包合物及其制备方法 | |
| CN109734580A (zh) | 曲前列尼尔钠盐新晶型及制备方法 | |
| JPH05186348A (ja) | 水性懸濁液剤の製造法 | |
| JP2001500526A (ja) | 粘液溶解剤としての２−メチル−チアゾリジン−２，４−ジカルボン酸の使用 | |
| SI21748A (sl) | Inkluzijski kompleksi klopidogrela in njegovih kislinskih adicijskih soli, postopek za njihovo pripravo, farmacevtski pripravki, ki vsebujejo te komplekse in njihova uporaba za zdravljenje tromboze | |
| JPS6334123B2 (ru) | ||
| CN113330013A (zh) | 杂环化合物盐及其应用 | |
| KR101770014B1 (ko) | 아미노벤조산 유도체의 유기 아민염 및 그 제조 방법 | |
| JPH046705B2 (ru) | ||
| JP2004508348A (ja) | インスリン受容体アクチベーターとしてのベンゼントリカルボン酸誘導対体 | |
| JPS6334125B2 (ru) | ||
| CN116323614A (zh) | 用于治疗炎性和自身免疫性病症的rabeximod的硫羰酯衍生物 | |
| WO2006135545A2 (en) | A method for the prevention and/or treatment of neurodegenerative diseases characterized by administering an ep1 receptor antagonist | |
| NL8006341A (nl) | Voor roentgenstralen amorfe, fysiologisch toelaatbare zuuradditiezouten van ergotalkaloiden en dihydroer- gotalkaloiden, werkwijze voor de bereiding en toepas- sing daarvan in de therapie. |