EA041972B1 - Содержащие ганглиозид gm-3 наночастицы в качестве иммуномодуляторов - Google Patents

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к областям иммунонанотехнологий и иммуноонкологии, в частности к иммуномодуляторам для лечения индивидуумов, страдающих раком и/или хроническими инфекциями. В частности, в настоящем изобретении раскрыт наночастичный иммуномодулятор, специализирующийся на специфичном воздействии на супрессорные клетки миелоидного происхождения (MDSCs) у этих индивидуумов, а также восстановлении Т-клеточного иммунного ответа.

Уровень техники

В последнее время важные клинические результаты были получены с использованием антител (Abs), ингибирующих контрольную точку иммунного ответа, обладающих способностью вызывать долгосрочные объективные ответы, оказывающие значительное влияние на выживаемость пациентов. Эти методы лечения, которые модулируют иммунную систему и восстанавливают способность пациента разрушать опухолевые клетки, привели к возрождению иммунотерапии рака с особым акцентом на разработку новых иммуномодуляторов.

Однако существуют и другие пути подавления противоопухолевого иммунного ответа, которые являются важными мишенями для разработки новых иммуномодуляторов (Malmberg K.J. et al. (2004) Cancer Immunol Immunother 53 (10): 879-92). Супрессорные клетки миелоидного происхождения (MDSCs) составляют одну из основных клеточных популяций, мобилизованных опухолями, обладающих способностью подавлять иммунный ответ (Mantovani A. et al. (2010) Curr Opin Immunol 22 (2): 231-7; Condamine T. et al. (2011) Trends Immunol 32 (1): 19-25). В частности, как указано Shipp et al., в обзорной статье частота циркулирующих МЛСК является фактором плохого прогноза у пациентов с опухолями самых разных органов и тканей. Кроме того, высокий уровень циркуляции в этих популяциях связан с меньшим преимуществом традиционных методов лечения, таких как химиотерапия, радиотерапия и даже применение Abs против контрольных точек (Shipp С. et al. (2016) Cell Mol Life Sci 73(21): 4043-61). У людей в качестве общего консенсуса описаны три популяции MDSC: MDSCs ранней стадии (eMDSC), определяемые как LIN’CD11b⁺CD33⁺HLA-DR; моноцитарные MDSCs (mMDSC), определенные как CD14+HLA-DR ^низ - и гранулоцитарные MDSCs (gMDSC), с фенотипом CD11b⁺CD33⁺CD14^-CD15⁺ (CD66b⁺) (Bronte V. et al. (2016) Nat Commun 7: 12150). Все три популяции считаются супрессорами опухолеспецифического иммунного ответа (Shipp С. et al. (2016) Cell Mol Life, Sci 73 (21): 4043-61).

Стратегии исследований, которые в настоящее время разрабатываются для противодействия иммуносупрессии, индуцированной MDSCs, сосредоточены на трех подходах:

(1) уменьшить их количество, (2) повлиять на их функцию и (3) повлиять на их дифференцировку.

В этих направлениях уже были получены обнадеживающие результаты в отношении нескольких из оцениваемых лекарственных препаратов (Najjar Y. G. et al. (2013) Frontiers in Oncology 3 (49): 1-9).

Особенно релевантными для настоящего изобретения в рамках терапевтических стратегий, нацеленных на MDSCs, являются стратегии, основанные на системах с наночастицами. Известно, что наночастицы имеют широкий спектр применения, и что в зависимости от размера и характеристик поверхности они ведут себя по-разному in vivo. Размер, например, влияет на место локализации, а характеристики поверхности влияют на механизмы адгезии и захвата (Wilkerson A. et al. (2017) Current Topics in Medicinal Chemistry 17: 1843-57). В этом смысле, как сообщает Serda R.E., системы частиц диаметром от 500 до 2000 нм преимущественно захватываются в месте инъекции и перемещаются в лимфатические узлы (ЛУ), тогда как частицы диаметром от 20 до 200 нм пассивно проникают в ЛУ, где они взаимодействуют с резидентными клетками (Serda R.E. (2013) Int J of Nanomed 8:1683-1696).

К настоящему времени было описано только шесть основанных на наночастицах стратегий, влияющих на MDSCs, среди которых: наночастицы, нагруженные гемцитабином, наночастицы, нагруженные хемокином CCL21, наночастицы, нагруженные CpG, липосомы, нагруженные полностью трансретиноевой кислотой, и наночастицы, созданные с использованием глюканов (Wilkerson A. et al. (2017) Current Topics in Medicinal Chemistry 17:1843-57). Эти пять стратегий имеют три фундаментальные характеристики: размер наночастиц находится в диапазоне от 30 до 250 нм, их использование ограничено мышиными моделями, и они представляют собой частицы, которые сами по себе не влияют на MDSCs, но они являются системами-носителями биологического агента.

Шестой стратегией, основанной на системе наночастиц, с воздействием на MDSCs, является использование очень мелких протеолипосом (VSSP), которые содержат ганглиозид GM3. Эти препараты можно рассматривать как техническое решение, наиболее близкое к настоящему изобретению. Первоначально Molina et al. патенте США № 8591917B2 описывали способ стимуляции иммунного ответа у субъектов при помощи вводимым подкожно VSSP. Кроме того, исследования Fernandez et al. and Oliver et al. показали, что у здоровых мышей с опухолями или мышей с вызванной химиотерапией лейкопенией введение VSSP вызывает в селезенке значительное увеличение клеток с фенотипом, сходным с фенотипом MDSCs, но с заметно сниженной подавляющей способностью (Fernandez A. et al. (2011) J Immunol 186: 264-74; Oliver L. et al. (2012) Vaccine 30: 2963-72). В других исследованиях также описывается, что применение VSSP у мышей с опухолями предотвращает перекрестную презентацию антигенов MDSCs,

- 1 041972 индуцированную опухолью, и индуцирует их дифференцировку в антигенпрезентирующие клетки (Fernandez A. et al. (2014) J ImmunoTherapy of Cancer 2:5). Способ получения этих VSSP описан Rodriguez et al. в патенте США № 6149921, в котором подчеркивается, что конъюгат белков Neisseria meningitidis смешивается с избытком ганглиозида GM3 в присутствии детергента, который затем удаляется методом диализа. Кроме того, Estevez et al. описывают, что после диализа происходит процесс ультрацентрифугирования, который удаляет конъюгаты с большей массой и размером (Estevez F. et al. (2000) Vaccine 18: 190-7).

Новое активное вещество иммуномодулирующего препарата, описанного в настоящем изобретении, также включает конъюгаты мембранных везикул N. meningitidis и ганглиозида GM3. Этот препарат имеет особые характеристики размера, поверхностного заряда и морфологии, связанные с системой наночастиц, которые никогда ранее не были описаны ни в каком техническом решении или в предыдущей научной публикации. Эти характеристики наделяют настоящее изобретение преимущественными и неожиданными свойствами с точки зрения их влияния на MDSCs по сравнению с теми решениями, которые ранее были описаны в Fernandez A. et al. и Oliver L. et al. Препарат по настоящему изобретению, предпочтительно вводимый подкожно для лечения пациентов с опухолями, и вопреки сведениям из предшествующего уровня техники, вызывает удобное и значительное уменьшение gMDSCs и mMDSCs и оказывает влияние на ответ Т-лимфоцитов и выживаемость получивших лечение пациентов. Следовательно, новизна настоящего изобретения состоит в создании нового иммуномодулятора с эффектом снижения уровней MDSCs у пациентов с опухолями.

Краткое описание изобретения

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для иммуномодуляции иммунного ответа у онкологических пациентов, содержащей наночастицы, образованные гидрофобным конъюгированием комплекса белков наружной мембраны (ОМРС) бактерии N. meningitidis с ганглиозидом GM3, где соотношение конъюгации белок-ганглиозид находится в диапазоне от 1,5:1 до 10:1.

В частности, указанная композиция характеризуется мономодальным распределением размера частиц в диапазоне от 15 до 25 нм, индексом полидисперсности 0,230, отрицательным Z-потенциалом с номинальным значением в диапазоне от 25 до 45 мВ.

В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению фармацевтической композиции, являющейся объектом настоящего изобретения, для лечения рака, и, в частности, в качестве иммуномодулятора MDSCs у пациентов с раковыми заболеваниями, которые увеличивают присутствие этих клеток.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения нуждающегося в этом субъекта, включающему введение фармацевтической композиции, описанной в настоящем изобретении, путем подкожного, внутрикожного, внутримышечного, внутриопухолевого введения или путем прямого нанесения на слизистые оболочки с еженедельной частотой в общей сложности в количестве по меньшей мере четырех доз, а затем введения поддерживающих доз раз в две недели или в месяц в течение по меньшей мере шести месяцев.

В конкретном варианте осуществления изобретения объектом настоящего изобретения является способ отбора онкологических пациентов в качестве кандидатов для получения лечения описанной фармацевтической композицией, который включает: извлечение образца крови и/или опухолевой ткани у пациента и определение уровней MDSCs в указанном образце крови и/или опухолевой ткани. Пациенты, которые имеют высокую частоту или высокое абсолютное количество MDSCs в крови или те, у кого был положительный результат в отношении степени инфильтрации MDSCs в опухолевой ткани, будут рассматриваться в качестве кандидатов для такого лечения.

Подробное описание изобретения

Иммуномодулирующая композиция.

Настоящее изобретение относится к иммуномодулирующей системе, которая значительно уменьшает количество циркулирующих MDSCs у тех онкологических пациентов, у которых высокий уровень этих клеток циркулирует в крови или имеет мест в опухоли. Иммуномодулирующая система может быть определена как система, способная устранять или модулировать любой из подавляющих медиаторов иммунного ответа, как в случае MDSCs.

Иммуномодулирующий объект, заявленный в настоящем изобретении, состоит из наночастиц, полученных из наружной мембраны грамотрицательной бактерии N. meningitidis, связанной с ганглиозидом GM3. Данное изобретение предусматривает, что ОМРС N. meningitidis сначала диспергируют в буферном растворе трис-HCl, содержащем смесь дезоксихолата натрия (10-40 мМ) и додецилсульфата натрия (1-10 мМ), в реакторе с перемешиванием в течение периода времени от 1 до 36 ч.

Затем добавляют массу ганглиозида GM3 в 0,6-10 раз меньше, чем добавленная масса ОМРС, так что соотношение белок:ганглиозид составляет от 1,5:1 до 10:1, и продолжают перемешивание. Образование наночастиц достигается за счет использования системы тангенциальной фильтрации с мембранами от 10 до 100 кДа и трансмембранным давлением от 115 до 175 кПа, так что детергенты полностью удаляются. Ультрафильтрованный остаточный раствор ультрацентрифугируют при 100000 g и концентри- 2 041972 руют для доведения его концентрации до желаемой дозы от 0,1 до 2 мг/мл ОМРС и стерилизуют фильтрацией в стерильной капсуле с размером пор 0,2 мкм.

Путем конъюгации при соотношении массы белка и ганглиозида, смещенном к количеству белка, и процесса тангенциальной ультрафильтрации в контролируемых условиях получали препарат с определенными характеристиками, который получил название VSSP-iMod. Анализ морфологии, размера и поверхностной плотности заряда частиц показывает наличие гетерогенной композиции в виде наночастиц размером от 15 до 25 нм и с отрицательным Z-потенциалом номинального значения в диапазоне от 25 до 45 мВ.

Способы идентификации и/или отбора пациентов для лечения с применением VSSP-iMod.

Для отбора пациентов, которым будет вводиться VSSP-iMod, определяли уровень gMDSC и mMDSC, которые могут подавлять Т-специфический ответ на опухоли.

Увеличение MDSCs из-за присутствия опухоли может быть определено путем оценки различных субпопуляций этих клеток в кровотоке или в микроокружении опухоли. Кроме того, их присутствие подразумевает увеличение определенных белков плазмы и циркулирующей ДНК. Источники образцов для оценки включают образцы периферической крови и опухоли, которые включают без ограничений биопсию опухоли, циркулирующие белки плазмы, асцитную жидкость и циркулирующую ДНК.

Увеличение этих клеток можно определить с помощью диагностического или прогностического анализа с использованием проточной цитометрии, иммуногистохимии (ИГХ), ИФА, иммунофлуоресценции или полимеразной цепной реакции. С другой стороны, пациент, у которого нет повышенных уровней MDSC из-за стадии или локализации имеющейся у него опухоли, является тем пациентом, у которого уровни выше, чем у нормальных здоровых доноров, но который не имеет значительных уровней, наблюдаемых у пациентов с той же патологией.

Определение уровней MDSCs в образцах крови пациентов проводят с помощью проточной цитометрии, где обе популяции анализируют в области FSC ^“^''“^““‘ySSC мжое/высогое. в частности, для популяции gMDSC выбрана двойная положительная популяция для CD11b и CD33, и в ней субпопуляция положительная для CD66b и отрицательна для CD14. Для mMDSC отбирается популяция с отрицательной или низкой экспрессией HLA-DR и положительной по CD14. На основании этих результатов и в связи с тем же определением для здоровых доноров, сопоставимых по возрасту и полу, уровни MDSC можно классифицировать следующим образом в соответствии с их частотой или абсолютным количеством:

отрицательный: значения в процентах и/или числах в диапазоне, определяемом средним нормальных значений (М) ± стандартное отклонение с доверительной вероятностью 95%;

слабый: значения в процентах и/или числах 2M<MDSC<3M по отношению к М;

высокий: значения в процентах и/или числах со значениями 3M<MDSC.

Пациенты с высокой частотой или абсолютным количеством MDSC в крови будут подлежать лечению с применением VSSP-iMod.

Для определения уровней MDSCs в образцах опухолевых тканей можно использовать методику ИГХ для CD33+ клеток. Для этого необходимо определить процент CD33+ клеток в ткани, который выражается следующим образом:

отрицательный: менее 10% положительных клеток;

положительная/низкая инфильтрация MDSCs: от 10 до 19% положительных клеток;

положительная/высокая инфильтрация MDSCs: более 20% положительных клеток В зависимости от ее гистологического типа и стадии, можно считать, что опухоль;

рекрутирует MDSCs при условии, что она является положительной в отношении степени ее инфильтрации CD33+ клетками.

Терапевтическое применение и способы лечения.

Настоящее изобретение относится к иммуномодулирующей композиции, специализирующейся на уменьшении MDSCs как фенотипа gMDSC, так и mMDSC, которая является решением, представляющим особый интерес для иммуноонкологии, где известно, что MDSCs представляют собой существенный супрессорный узел противоопухолевого иммунного ответа.

Прогрессирование некоторых опухолей сопровождается рекрутированием в место опухоли MDSCs, для которых были описаны специальные механизмы подавления противоопухолевого иммунного ответа Т- и NK-лимфоцитов. Настоящее изобретение предполагает, что у тех пациентов, которые имеют повышенный уровень gMDSC и/или mMDSC в кровотоке и/или в опухоли, количество этих клеток может быть значительно снижено путем лечения с применением VSSP-iMod. Это снижение приведет к тому, что у этих пациентов естественный противоопухолевый иммунный ответ или иммунный ответ, индуцированный какой-либо терапией, не будет подавляться MDSCs, что приведет к выживанию получивших такое лечение пациентов.

Иммуномодулятор VSSP-iMod настоящего изобретения может быть введен пациенту путем подкожного, внутрикожного, внутримышечного, внутриопухолевого введения или путем непосредственного нанесения на слизистые оболочки.

- 3 041972

К числу типов рака, которые можно лечить с помощью иммуномодулятора VSSP-iMod, являющегося объектом настоящего изобретения, относятся те типы, для которых сообщалось, что они рекрутируют MDSCs в качестве иммуносупрессивного механизма противоопухолевого иммунного ответа. Более конкретно, примеры этих видов рака включают меланому, рак предстательной железы, рак головы и шеи, рак яичников, рак мочевого пузыря, гепатоцеллюлярную карциному, немелкоклеточный рак легкого, хронический лимфолейкоз, плоскоклеточный рак пищевода, лимфому Ходжкина, рак почки и рак молочной железы.

Диапазон доз иммуномодулятора VSSP-iMod для применения у людей составляет от 100 мкг до 2 мг, предпочтительно от 200 мкг до 1200 мкг (в зависимости от содержания ОМРС).

Указанный иммуномодулятор вводят субъектам с еженедельной частотой в общей сложности в количестве по меньшей мере четырех доз, чтобы достичь быстрого снижения MDSC, а затем вводят поддерживающе дозы каждые две недели или ежемесячно в течение по меньшей мере шести месяцев. Это лечение может проводиться хронически до тех пор, пока пациенту это необходимо.

Настоящее изобретение дополнительно поясняется следующими примерами и чертежами. Однако эти примеры не должны рассматриваться как ограничивающие объем изобретения. В эти примеры включены экспериментальные данные, которые позволяют проверить конкретные физико-химические характеристики VSSP-iMod и его эффективность в отношении снижения содержания MDSCs у получавших лечение пациентов. Кроме того, примеры показывают влияние этого снижения на ответ Т-лимфоцитов, а также на выживаемость получавших лечение пациентов.

Краткое описание фигур

Фиг. 1 - оценка методом фотонной корреляционной спектроскопии диаметра частиц VSSP-iMod.

Фиг. 2 - оценка методом фотонной корреляционной спектроскопии Z-потенциала частиц VSSPiMod.

Фиг. 3 - изображение морфологии частиц VSSP-iMod, полученное при помощи атомно-силовой микроскопии.

Фиг. 4 - оценка с помощью проточной цитометрии эффекта лечения с применением VSSP-iMod у пациентов с метастатическим почечно-клеточным раком (мПКР):

а) частота gMDSC и

b) процент пациентов с частотой gMDSC выше и ниже среднего значения.

Фиг. 5 - оценка с помощью проточной цитометрии влияния лечения с применением VSSP-iMod на способность MDSCs подавлять пролиферацию:

a) TCD4+лимфоцитов и

b) TCD8+ лимфоцитов.

Фиг. 6 - оценка с помощью проточной цитометрии влияния лечения с применением VSSP-iMod у пациентов с карциномой молочной железы на:

а) частоту и % пациентов с частотой gMDSC выше и ниже среднего значения,

b) частоту и % пациентов с частотой mMDSC выше и ниже среднего значения.

Фиг. 7 - определение с помощью проточной цитометрии влияния лечения с применением VSSPiMod на абсолютное количество TCD8+ лимфоцитов у пациентов с карциномой молочной железы.

Примеры

Пример 1. VSSP-iMod имеет определенный размер и поверхностный заряд.

Размер в нанометрах и Z-потенциал частиц, составляющих VSSP-iMod, были измерены с помощью фотонной корреляционной спектроскопии. Образцы оценивали в трех повторностях, размер и значения Z-потенциала были получены с использованием алгоритмов CONTEST и Smoluchowski, соответственно. Как показано на фиг. 1, VSSP-iMod показал мономодальное распределение в диапазоне от 15 до 25 нм по объемному распределению с коэффициентом полидисперсности (PDI) 0,230, что означает, что препарат является гетерогенным по составу частиц. Кроме того, VSSP-iMod показал отрицательный Z-потенциал, и его номинальное значение находилось в диапазоне от 25 до 45 мВ, как показано на фиг. 2.

Пример 2. Морфология наночастиц VSSP-iMod.

Изображения VSSP-iMod получали в многомодовом атомно-силовом микроскопе с использованием кремниевого кантилевера. 50 мкл образца наносили на слюду, предварительно функционализированную раствором хлорида никеля с концентрацией 50 моль/л. Перед нанесением на слюду VSSP-iMod разбавляли трис-буферным раствором (концентрация 10 ммоль/л, рН 8,5) в соотношении 1/10. Изображение на фиг. 3 показывает гетерогенную композицию, состоящую из наночастиц сферической структуры порядка десятков нанометров, что полностью соответствует результату, полученному с помощью фотонной корреляционной спектроскопии.

Пример 3. VSSP снижает частоту и супрессивную активность MDSCs у пациентов с мПКР.

Оценивали влияние VSSP-iMod на MDSCs у пациентов с мПКР. С этой целью пятнадцать пациентов с этим диагнозом получали 400 мкг VSSP-iMod, вводимого подкожно в дельтовидную область. В общей сложности четыре дозы VSSP-iMod вводили с еженедельной частотой, а затем ежемесячно вводили поддерживающие дозы до завершения 6 месяцев лечения. В этом анализе частоту gMDSC оценивали с помощью проточной цитометрии. С этой целью было проанализировано в общей сложности 200000

- 4 041972 клеток и было определено процентное содержание gMDSC путем измерения фенотипа CD11b⁺/CD66b⁺/ CD14- в общем количестве МКПК. В качестве контроля оценивали частоту gMDSC у 15 здоровых доноров того же возраста и пола. Как видно на фиг. 4а, VSSP-iMod уменьшал частоту циркулирующих gMDSC у пациентов через 21 день или три дозы после начала лечения. Из уровня техники известно, что пациенты, у которых количество gMDSC ниже среднего значения, установленного для пациентов в определенных местах, имеют значительно более высокую выживаемость, чем те пациенты, у которых уровни gMDSC выше этого значения (Shipp С. et al. (2016) Cell, Mol.Life, Sci. 73 (21): 4043-61). Анализ процента пациентов с частотой gMDSC выше и ниже среднего значения показан на фиг. 4b. Как можно наблюдать после лечения с применением VSSP-iMod, только примерно 20% получавших лечение пациентов поддерживали высокий уровень MDSCs. Этот результат сохранялся на 147-й день или после пятого месяца, что указывает на то, что этот эффект VSSP-iMod сохраняется на протяжении всего лечения.

У этих пациентов последствия для ответа Т-лимфоцитов в результате воздействия VSSP-iMod на MDSCs также оценивали в эксперименте по пролиферации с помощью проточной цитометрии. В качестве исходного материала использовали в общей сложности 40х10⁶ клеток из МКПК указанных пациентов. CD11b⁺ клетки очищали с использованием магнитных частиц, конъюгированных с CDHb-специфичным Ab. CDHb-отрицательную фракцию метили CFSE и культивировали отдельно или с CD11b⁺ клетками в соотношении 5:1 в течение 96 ч. На фиг. 5 показан относительный процент пролиферации Т-лимфоцитов в день 0 и в день 21 после введения VSSP-iMod у пациентов с ПКР. Как видно на фиг. 5 а, пролиферация TCD4+ лимфоцитов увеличивается на 21 день, эффект, аналогичный наблюдаемому у TCD8+ лимфоцитов (фиг. 5b), что означает, что VSSP-iMod способен модулировать опосредованное MDSC подавление пролиферации Т-клеток у пациентов с ПКР.

Большинство пациентов, включенных в исследование, показали хорошее качество жизни в конце лечения, как установлено в протоколе, было решено продолжить ежемесячную иммунизацию. Продление лечения поддерживало уровень gMDSC ниже средних значений в нулевой день, а медиана выживаемости всех пациентов в этом исследовании составляла 37,5 месяцев (табл. 1). Эта величина намного выше, чем историческая медиана 6,6 месяца, сообщенная для аналогичных пациентов, получавших интерферон, который в настоящее время является стандартом лечения на Кубе. Кроме того, в руководствах по клинической практике для мПКР Национальной всеобщей онкологической сети (NCCN) пациенты классифицируются по моделям Мемориального онкологического центра Слоана-Кеттеринга (MSKCC), как имеющие благоприятный, промежуточный и плохой прогноз. В этих руководствах указывается, что пациенты с мПКР, получавшие терапию против фактора роста эндотелия сосудов, имеют медиану выживаемости 27 месяцев в случае тех, у кого диагностирован промежуточный прогноз, тогда как 75% из тех, у кого диагностирован благоприятный прогноз, остаются живы через 24 месяца. Относительное сравнение значений, указанных в руководствах, с данными, полученными при применении VSSP-iMod, указывает на то, что влияние VSSP-iMod на gMDSCs также привело к выживаемости, превышающей стандарт, нормированный в руководствах NCCN. В исследовании VSSP-iMod 100% пациентов с благоприятным прогнозом были живы через 36 месяцев, а пациенты с промежуточным прогнозом имели медиану выживаемости 42 месяца.

Таблица 1. Выживаемость пациентов с мПКР, получавших VSSP-iMod

- 5 041972

Пример 4. VSSP снижает частоту MDSCs моноцитарного и гранулоцитарного фенотипа у пациентов с карциномой молочной железы.

Влияние VSSP-iMod на MDSCs также оценивали у пациентов с карциномой молочной железы. С этой целью было разработано исследование окна возможностей фазы 0, в котором пациенты получали 400 мкг VSSP-iMod с еженедельной частотой в течение трех недель путем подкожного введения в дельтовидную область. Это лечение проводилось в обычное время, установленное между диагнозом и началом стандартного лечения хирургического вмешательства или химиотерапии, назначенного врачом. В этом исследовании частоту gMDSCs, mMDSCs и CD8 Т-клеток определяли при помощи проточной цитометрии. Всего было проанализировано 200000 клеток, и было определено процентное содержание gMDSC и mMDSC с использованием фенотипов CD11b⁺/CD66b⁺/CD14^-y CD11b⁺/CD14⁺/HLA-DR ^низ.^/отриц., в общем количестве МКПК, соответственно. Как видно на фиг. 6а, VSSP-iMod снижал частоту циркулирующих gMDSC, и такое же действие наблюдалось в отношении mMDSC (фиг. 6b), циркулирующих у пациентов, после 21 дня лечения. Кроме того, анализ процента пациентов с частотой gMDSCs и mMDSC выше и ниже среднего значения показал, что после лечения с применением VSSP-iMod только 15% и 0% пациентов, получавших лечение, сохраняли высокий уровень gMDSC и mMDSC соответственно. Это лечение также увеличило частоту CD8⁺ Т-клеток в крови пациентов (фиг. 7).

Claims (5)

1. Фармацевтическая композиция, содержащая наночастицы, образованные гидрофобным конъюгированием комплекса белков наружной мембраны (ОМРС) бактерии Neisseria meningitidis с ганглиозидом GM3, где соотношение конъюгации белок-ганглиозид находится в диапазоне от 1,5:1 до 10:1, и где фармацевтическая композиция характеризуется мономодальным распределением размера частиц в диапазоне от 15 до 25 нм, индексом полидисперсности 0,230, отрицательным Z-потенциалом с номинальным значением в диапазоне от 25 до 45 мВ.

2. Применение фармацевтической композиции по п.1 в лечении рака.

3. Применение фармацевтической композиции по п.1 для снижения количества супрессорных клеток миелоидного происхождения (MDSC) у онкологических пациентов.

4. Способ лечения рака у нуждающегося в этом субъекта, включающий подкожное введение фармацевтической композиции по п.1 в дозе 400 мкг с еженедельной частотой в общей сложности в количестве по меньшей мере четырех доз, а затем введения поддерживающих доз раз в две недели или в месяц в течение по меньшей мере шести месяцев.

5. Способ отбора онкологических пациентов в качестве кандидатов для получения лечения фармацевтической композицией по п.1, который включает:

i) извлечение образца крови и/или опухолевой ткани у пациента и ii) определение уровней MDSC в указанном образце крови и/или опухолевой ткани;

где пациенты отбираются если среднее значение частоты или абсолютного количества MDSC в крови равно или выше более чем в три раза нормальных значений, или процентное содержание клеток CD33+ в ткани составляет более чем 20%.