EA040876B1 - L-ENANTIOMER OF 2-ETHYL-6-METHYL-3-HYDROXYPYRIDINUM - Google Patents
L-ENANTIOMER OF 2-ETHYL-6-METHYL-3-HYDROXYPYRIDINUM Download PDFInfo
- Publication number
- EA040876B1 EA040876B1 EA202090070 EA040876B1 EA 040876 B1 EA040876 B1 EA 040876B1 EA 202090070 EA202090070 EA 202090070 EA 040876 B1 EA040876 B1 EA 040876B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- enantiomer
- dose
- animals
- ethyl
- methyl
- Prior art date
Links
Description
Область техники, к которой относится изобретениеThe field of technology to which the invention belongs
Изобретение относится к области медицины, конкретно к новому химическому соединению - Lэнантиомеру 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния L-гидроксибутандиоату, обладающему церебропротекторной, гепатопротекторной, липидрегулирующей, противоишемической и нейротропной активностью.The invention relates to the field of medicine, specifically to a new chemical compound - L-enantiomer 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridinium L-hydroxybutanedioate, which has cerebroprotective, hepatoprotective, lipid-regulating, anti-ischemic and neurotropic activity.
Предшествующий уровень техникиPrior Art
Одно из перспективных направлений, развиваемых отечественными фармакологами, относится к инновационным отечественным лекарственным препаратам в ряду производных гидроксипиридина.One of the promising areas developed by domestic pharmacologists refers to innovative domestic drugs in the series of hydroxypyridine derivatives.
Среди производных 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина известен ряд препаратов, обладающих широким спектром биологической активности.Among the derivatives of 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridine, a number of drugs are known that have a wide spectrum of biological activity.
В начале 1980-х гг. в ГУ НИИ Фармакологии РАМН Смирнов Л.Д. и Кузьмин В.И. синтезировали мексидол - сукцинат 2-этил-6-метил-3-оксипиридина. Мексидол - препарат с многокомпонентным спектром фармакологических эффектов и многофакторным механизмом действия. Наиболее важными компонентами активности мексидола являются его антиоксидантные, мембранотропные эффекты, способность модулировать функционирование рецепторов и мембрано-связанных ферментов и восстанавливать нейромедиаторный баланс. (Мексидол: основные нейропсихотропные эффекты и механизм действия. Т.А. Воронина. ГУ НИИ Фармакологии им. В.В. Закусова.М., РАН).In the early 1980s in the State Research Institute of Pharmacology of the Russian Academy of Medical Sciences Smirnov L.D. and Kuzmin V.I. synthesized mexidol - 2-ethyl-6-methyl-3-oxypyridine succinate. Mexidol is a drug with a multicomponent spectrum of pharmacological effects and a multifactorial mechanism of action. The most important components of the activity of mexidol are its antioxidant, membranotropic effects, the ability to modulate the functioning of receptors and membrane-bound enzymes and restore neurotransmitter balance. (Mexidol: main neuropsychotropic effects and mechanism of action. T.A. Voronina. State Research Institute of Pharmacology named after V.V. Zakusov. M., RAS).
Мексидол широко применяется в медицине, а также ветеринарии в качестве антиоксидантного и антигипоксического средства, характеризующегося широким спектром фармакологического действия и высокой эффективностью (ноотропное и транквилизирующее действие - пат. RU 2065299, противоишемическое и антиатеросклеротическое действие - пат. RU 2144822, антиангинальное - пат. RU 2168993, гепатопротекторное - пат. RU 2189817, антимикробное - пат. RU 2157686 и др.).Mexidol is widely used in medicine, as well as veterinary medicine as an antioxidant and antihypoxic agent, characterized by a wide spectrum of pharmacological action and high efficiency (nootropic and tranquilizing action - US Pat. RU 2065299, anti-ischemic and anti-atherosclerotic effect - US Pat. RU 2144822, antianginal - US Pat. RU 2168993, hepatoprotective - patent RU 2189817, antimicrobial - patent RU 2157686, etc.).
Известны композиции на основе 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината в виде различных лекарственных форм: раствора для парентерального введения (Приказ МЗ РФ от 31.12.1996 №432 Раствор Мексидола® 5% для инъекций, пат. RU 2205640, 2380089, 2398583), таблеток (Приказ МЗ РФ от 26.01.1998 №21 Мексидол® таблетки, покрытые оболочкой, 0,125 г), капсул (пат. RU 2144822, 2145855), перевязочного материала (пат. RU 2149648) и др.Compositions based on 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridine succinate are known in the form of various dosage forms: a solution for parenteral administration (Order of the Ministry of Health of the Russian Federation dated December 31, 1996 No. 432 Mexidol® 5% solution for injection, Pat. RU 2205640, 2380089 , 2398583), tablets (Order of the Ministry of Health of the Russian Federation dated January 26, 1998 No. 21 Mexidol® coated tablets, 0.125 g), capsules (US Pat. RU 2144822, 2145855), dressings (US Pat. RU 2149648), etc.
Предложена фармацевтическая композиция в виде таблеток для перорального применения на основе 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина сукцината (RU 2444359).A pharmaceutical composition in the form of tablets for oral use based on 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridine succinate is proposed (RU 2444359).
Известно также лекарственное средство этоксидол - 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиний гидроксибутандиоат (рацемат), обладающий противоишемической, церебропротекторной, нейротропной и липидрегулирующей активностями (RU 2377237), формулы:It is also known the drug ethoxydol - 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridinium hydroxybutanedioate (racemate), which has anti-ischemic, cerebroprotective, neurotropic and lipid-regulating activities (RU 2377237), formula:
Также известны фармацевтические композиции, содержащие этоксидол: таблетки, растворы для инъекций.Pharmaceutical compositions containing ethoxidol are also known: tablets, injection solutions.
Показано, что этоксидол в дозе 10 мг/кг устраняет фибрилляцию желудочков при окклюзии коронарных артерий и уменьшает количество животных с фибрилляцией желудочков до 2 из 8 экспериментальных животных при введении в дозе 10 мг/кг и до 2 из 9 - при введении в дозе 23 мг/кг.It has been shown that etoxidol at a dose of 10 mg/kg eliminates ventricular fibrillation in coronary artery occlusion and reduces the number of animals with ventricular fibrillation to 2 out of 8 experimental animals when administered at a dose of 10 mg/kg and to 2 out of 9 - when administered at a dose of 23 mg /kg.
Этоксидол достоверно увеличивает порог фибрилляции желудочков у кошек в дозе 23,0 мг/кг в период с 5 до 60 мин окклюзии коронарных артерий, в то время как Анаприлин оказывает такое действие в изотоксической дозе в период с 30 до 60 мин.Ethoxydol significantly increases the threshold for ventricular fibrillation in cats at a dose of 23.0 mg/kg in the period from 5 to 60 minutes of coronary artery occlusion, while Anaprilin has this effect at an isotoxic dose in the period from 30 to 60 minutes.
В условиях острой ишемии миокарда в дозе 15 мг/кг оказывает выраженное кардиопротекторное действие на сердечную гемодинамику, приближая значения сократимости (dP/dt), артериального кровяного давления (АД) и др. к уровню интактного контроля.In conditions of acute myocardial ischemia at a dose of 15 mg/kg, it has a pronounced cardioprotective effect on cardiac hemodynamics, bringing the values of contractility (dP/dt), arterial blood pressure (BP), etc. to the level of intact control.
Этоксидол в дозе 1 мг/кг обладает способностью снижать интенсивность перекисного окисления липидов у лабораторных кроликов, вызванного их 30-дневной иммобилизацией, о чем свидетельствует снижение уровня малонового диальдегида (МДА) в плазме крови на 46% и в ткани почек. При этом уровень общего холестерина снижается на 41,7%, а индекс атерогенности снижается на 82,9%.Ethoxydol at a dose of 1 mg/kg has the ability to reduce the intensity of lipid peroxidation in laboratory rabbits caused by their 30-day immobilization, as evidenced by a decrease in the level of malonic dialdehyde (MDA) in blood plasma by 46% and in kidney tissue. At the same time, the level of total cholesterol is reduced by 41.7%, and the atherogenic index is reduced by 82.9%.
Успехи стереофармакологии, достигнутые за последние десятилетия, обогатили науку пониманием общих закономерностей: структура - активность и структура - токсичность, для веществ, представляющих собой рацемические смеси лево- и правовращающих изомеров. Были получены D- и L-энантиомеры, обладающие различными фармакологическими свойствами. Исследования показали, что левовращающие изомеры, как правило, более токсичны, но также и более активны, тогда как правовращающие и рацематы уступают им по силе фармакологических эффектов.The successes of stereopharmacology achieved over the past decades have enriched science with an understanding of the general patterns: structure - activity and structure - toxicity, for substances that are racemic mixtures of left- and right-handed isomers. D- and L-enantiomers with different pharmacological properties were obtained. Studies have shown that levorotatory isomers tend to be more toxic, but also more active, while dextrorotatory and racemates are inferior to them in terms of pharmacological effects.
Классическим примером является L-адреналин: его внутрисердечная концентрация в 11 раз выше, чем правовращающего изомера. Высокой стереоспецифичностью характеризуются рецепторные взаимо- 1 040876 действия, в том числе процессы печеночного метаболизма, которые также определяются характером взаимосвязи лекарство-рецептор.The classic example is L-adrenaline: its intracardiac concentration is 11 times higher than the dextrorotatory isomer. High stereospecificity is characteristic of receptor interactions, including processes of hepatic metabolism, which are also determined by the nature of the drug-receptor relationship.
Клинические исследования S-амлодипина. Антигипертензивный и антиангинальный эффекты Sамлодипина подтверждаются результатами клинических исследований. Показано, что для достижения оптимального терапевтического действия S-амлодипина требуются вдвое меньшие дозы препарата.Clinical studies of S-amlodipine. The antihypertensive and antianginal effects of Samlodipine are confirmed by the results of clinical studies. It has been shown that half the doses of the drug are required to achieve the optimal therapeutic effect of S-amlodipine.
В настоящее время только 15% лекарственных средств - это хирально чистые вещества, то есть состоящие из энантиомеров одного типа. Использование оптических изомеров известных сердечнососудистых средств - путь к повышению их эффективности и переносимости (М.И. Лутай, А.Ф. Лысенко, О.И. Моисеенко. Национальный научный центр Институт кардиологии им. акад. Н.Д. Стражеско АМН Украины, г. Киев).Currently, only 15% of drugs are chirally pure substances, that is, they consist of enantiomers of the same type. The use of optical isomers of known cardiovascular drugs is a way to increase their effectiveness and tolerability (M.I. Lutai, A.F. Lysenko, O.I. Moiseenko. National Research Center Institute of Cardiology named after N.D. Strazhesko of the Academy of Medical Sciences of Ukraine, Kiev City).
В настоящее время в клинической практике используются такие производные 3-гидроксипиридина как мексидол, эмоксипин (Г.И. Клебанов и др. Антиоксидантные свойства производных 3-оксипиридина: мексидола, эмоксипина и проксипина. Вопросы медицинской химии №3 2001). Данные препараты обладают антиоксидантным, антигипоксическим, ноотропным, противосудорожным, анксиолитическим действием.Currently, such derivatives of 3-hydroxypyridine as mexidol, emoxipin are used in clinical practice (G.I. Klebanov et al. Antioxidant properties of 3-hydroxypyridine derivatives: mexidol, emoxipine and proxipin. Questions of Medical Chemistry No. 3 2001). These drugs have antioxidant, antihypoxic, nootropic, anticonvulsant, anxiolytic effects.
Сущность изобретенияThe essence of the invention
Целью изобретения является разработка нового химического соединения L-энантиомера 2-этил-6метил-3-гидроксипиридиния L-гидроксибутандиоата (соединение 1), формулы (I):The aim of the invention is to develop a new chemical compound of the L-enantiomer of 2-ethyl-6methyl-3-hydroxypyridinium L-hydroxybutanedioate (compound 1), formula (I):
его использование в качестве церебропротекторного средства, а также изучение его антигипоксической активности с учетом требований, предъявляемых к доклиническим исследованиям лекарственных средств. Соединение проявляют церебропротекторную активность, которая обеспечивает пролонгирующий период биоэлектрической активности миокарда, по сравнению с рацематом.its use as a cerebroprotective agent, as well as the study of its antihypoxic activity, taking into account the requirements for preclinical studies of drugs. The compounds show cerebroprotective activity, which provides a prolongation of the bioelectrical activity of the myocardium, compared with the racemate.
Также, целью изобретения является создание нового средства, обладающего гепатопротекторной липидрегулирующей, противоишемической и нейротропной активностью, содержащего соединение Lэнантиомер 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния L-гидроксибутандиоат (соединение 1).Also, the aim of the invention is to create a new agent with hepatoprotective lipid-regulating, anti-ischemic and neurotropic activity, containing the compound Lenantiomer 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridinium L-hydroxybutanedioate (compound 1).
Соединение 1 в виде композиции с фармацевтически приемлемыми носителями (целевыми добавками) может быть введено в виде различных лекарственных форм. Соединение применяется в терапевтически эффективных дозах, которые зависят от веса, пола и возраста пациентов, этиологии и тяжести их заболеваний. Предпочтительные дозы составляют от 20 до 300 мг.Compound 1 in the form of a composition with pharmaceutically acceptable carriers (target additives) can be administered in various dosage forms. The compound is used in therapeutically effective doses, which depend on the weight, sex and age of patients, the etiology and severity of their diseases. Preferred doses are 20 to 300 mg.
Технический результат: эффективность нового производного 3-гидроксипиридина, а именно Lэнантиомера 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния L-гидроксибутандиоата для лечения и профилактики широкого спектра заболеваний в качестве средства, проявляющего гепатопротекторную липидрегулирующую, противоишемическую и нейротропную активность, обеспечивающего пролонгированный период биоэлектрической активности миокарда, по сравнению с рацематом.EFFECT: effectiveness of a new derivative of 3-hydroxypyridine, namely L-enantiomer of 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridinium L-hydroxybutanedioate for the treatment and prevention of a wide range of diseases as a means of exhibiting hepatoprotective lipid-regulating, anti-ischemic and neurotropic activity, providing a prolonged period bioelectrical activity of the myocardium, compared with the racemate.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретенияInformation confirming the possibility of carrying out the invention
Пример 1.Example 1
1. Получение L-энантиомера 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния L-гидроксибутандиоата.1. Obtaining the L-enantiomer of 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridinium L-hydroxybutanedioate.
К 13,7 г (0,1 м) 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина добавляли 13,41 г (0,1 м) L-гидроксибутандиовой кислоты, тщательно перемешивали и нагревали до температуры плавления 100-110°С. К полученной смеси постепенно добавляли около 120 мл воды, полученный раствор фильтровали, и удаляли 6070% воды вакуумной перегонкой. Затем к полученному остатку добавляли 80 мл ацетона и кристаллизовали, полученный осадок фильтровали и сушили в вакууме. Получали 23,8 г белого кристаллического вещества, обладающего высокой гигроскопичностью, расплывающегося на воздухе.To 13.7 g (0.1 m) of 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridine was added 13.41 g (0.1 m) of L-hydroxybutanedioic acid, mixed thoroughly and heated to a melting point of 100-110°C . About 120 ml of water was gradually added to the resulting mixture, the resulting solution was filtered, and 6070% of water was removed by vacuum distillation. Then, 80 ml of acetone was added to the resulting residue and crystallized, the resulting precipitate was filtered and dried in a vacuum. Received 23.8 g of a white crystalline substance with high hygroscopicity, deliquescent in air.
C12H17N6C12H17N6
Найдено, %: С 53,07; Н 6,38; N 5,11.Found, %: С 53.07; H 6.38; N 5.11.
Вычислено, %: С 53,14; Н 6,27; N 5,17.Calculated, %: С 53.14; H 6.27; N 5.17.
ИК-спектр, ν см-1: 3510, 3230, 1660, 1610, 1560, 1292, 1161.IR spectrum, ν cm-1: 3510, 3230, 1660, 1610, 1560, 1292, 1161.
УФ-спектр, нм: 228,291 (вода)UV spectrum, nm: 228.291 (water)
Угол вращения [a]D20 -13,6 (4,5% ацетонитрил).Angle of rotation [a]D20 -13.6 (4.5% acetonitrile).
2. Биологические исследования.2. Biological research.
Общая характеристика лабораторных животных.General characteristics of laboratory animals.
Исследования проводили на 69 самцах и 69 самках белых мышей линии SHK весом 20-22 г, полученных из питомника Филиала Андреевка Федерального Государственного Бюджетного Учреждения Науки Научный Центр Биомедицинских Технологий Федерального Медико-Биологического Агентства России.The studies were carried out on 69 male and 69 female white mice of the SHK line weighing 20-22 g, obtained from the nursery of the Andreevka Branch of the Federal State Budgetary Institution of Science, the Scientific Center for Biomedical Technologies of the Federal Medical and Biological Agency of Russia.
- 2 040876- 2 040876
Количество животных.The number of animals.
Экспериментальные группы животных по 6 мышей каждого пола в группе для изучения острой токсичности и антигипоксической активности являются репрезентативной выборкой, которая позволяет получать статистически достоверные данные, о чем свидетельствует многолетняя практика токсикологических исследований. Во время исследований животные содержались в контролируемых условиях: температура окружающего воздуха 20-24°С, относительная влажность 50-60%.Experimental animal groups of 6 mice of each sex per group for studying acute toxicity and antihypoxic activity are a representative sample that allows you to obtain statistically reliable data, as evidenced by many years of practice in toxicological studies. During the studies, the animals were kept under controlled conditions: ambient temperature 20-24°C, relative humidity 50-60%.
2.1. Определение острой токсичности соединения 1.2.1. Determination of acute toxicity of compound 1.
В настоящем исследовании острую токсичность оценивали на лабораторных мышах обоего пола при однократном внутривенном введении соединения 1 или препарата сравнения Этоксидол.In the present study, acute toxicity was evaluated in laboratory mice of both sexes after a single intravenous injection of compound 1 or the reference drug Ethoxydol.
Белым аутбредным мышам (по 6 мышей каждого пола в группе) вводили соединение 1 или препарат сравнения в нарастающих дозах 300, 400, 500, 600, 700 мг/кг в виде раствора в воде для инъекций общим объемом 0,5 мл, допустимого для данного вида животных.White outbred mice (6 mice of each sex per group) were injected with compound 1 or the reference drug in increasing doses of 300, 400, 500, 600, 700 mg/kg as a solution in water for injection with a total volume of 0.5 ml, acceptable for this animal species.
Наблюдение за животными проводили в течение не менее 14 дней после введения. О токсичности препаратов судили по гибели животных и общей картине интоксикации.Animals were observed for at least 14 days after administration. The toxicity of drugs was judged by the death of animals and the general picture of intoxication.
Фиксировали общее состояние животных: особенности их поведения, интенсивность и характер двигательной активности, наличие и характер судорог, координацию движений, тонус скелетных мышц, реакцию на тактильные или болевые раздражители, частоту и глубину дыхательных движений, состояние волосяного и кожного покрова. Производили подсчет количества погибших животных в ходе эксперимента.The general condition of the animals was recorded: the features of their behavior, the intensity and nature of motor activity, the presence and nature of seizures, coordination of movements, skeletal muscle tone, response to tactile or pain stimuli, the frequency and depth of respiratory movements, the condition of the hair and skin. The number of dead animals was counted during the experiment.
Полученные данные обрабатывались общепринятым методом вариационной статистики с вычислением среднего значения (М) и стандартной ошибки среднего значения (m). В качестве критерия оценки достоверности различия средних величин использовали парный t-критерий Стьюдента с поправкой Бонферрони при уровне значимости Р<0,05; для определения достоверности различий абсолютных величин использовали непараметрический критерий хи-квадрат; при объеме выборки менее 10 - точный критерий Фишера; для определения достоверности различий до и после введения фармакологического агента использовали критерий Уилкоксона.The data obtained were processed by the generally accepted method of variation statistics with the calculation of the mean value (M) and the standard error of the mean value (m). Paired Student's t-test with Bonferroni's correction was used as a criterion for assessing the significance of differences in mean values at a significance level of P<0.05; to determine the significance of differences in absolute values, a nonparametric chi-square test was used; with a sample size of less than 10 - Fisher's exact test; to determine the significance of differences before and after administration of the pharmacological agent, the Wilcoxon test was used.
На основании полученных результатов определяли характеристики острой токсичности с помощью пробит-анализа по Миллеру-Тейнтеру [10] (табл. 1-4).Based on the results obtained, the characteristics of acute toxicity were determined using the Miller-Tainter probit analysis [10] (Tables 1-4).
Клиническая картина интоксикации у мышей при введении обоих сравниваемых фармакологических агентов была идентичной. При введении токсических доз соединения 1 и препарата сравнения Этоксидол, Россия отмечалось снижение двигательной активности животных. При увеличении дозы наблюдался кратковременный (2-3 мин) период гиперкинезии с явлениями беспокойства. Была нарушена координация движений, тонус скелетных мышц был повышен, наблюдались тонические и клонические судороги. В этот период наблюдались непроизвольные акты дефекации и мочеиспускания. Часть животных погибала на фоне судорог. Выжившие животные находились в заторможенном состоянии, что выражалось в сниженной реакции на световые, звуковые, тактильные и болевые раздражители (раздражение корня хвоста). При этом наблюдались судорожные подергивания мышц, снижение аппетита, диарея или обстипация на фоне возрастающего потребления воды. Дыхание было учащенным и поверхностным, регистрировали гипертермию. В указанном выше состоянии животные находились в течение первых двух суток, после чего их физиологическое состояние постепенно возвращалось к исходному.The clinical picture of intoxication in mice with the introduction of both compared pharmacological agents was identical. With the introduction of toxic doses of compound 1 and the reference drug Ethoxydol, Russia, a decrease in the motor activity of animals was noted. When the dose was increased, a short-term (2-3 min) period of hyperkinesia with anxiety was observed. Movement coordination was impaired, skeletal muscle tone was increased, tonic and clonic convulsions were observed. During this period, involuntary acts of defecation and urination were observed. Some of the animals died on the background of convulsions. The surviving animals were in an inhibited state, which was expressed in a reduced reaction to light, sound, tactile and pain stimuli (stimulation of the tail root). At the same time, convulsive muscle twitches, decreased appetite, diarrhea or constipation were observed against the background of increasing water consumption. Breathing was rapid and superficial, hyperthermia was recorded. The animals were in the above state for the first two days, after which their physiological state gradually returned to the initial state.
В течение последующих 14 суток явления интоксикации у животных проявлялись в виде сниженной реакции на раздражители. Волосяной покров терял блеск, характерный для здоровых животных, кожные покровы оставались без изменений. В дальнейшем состояние животных постепенно возвращалось к норме.Over the next 14 days, the phenomena of intoxication in animals manifested themselves in the form of a reduced reaction to stimuli. The hairline lost its luster, characteristic of healthy animals, the skin remained unchanged. In the future, the condition of the animals gradually returned to normal.
При наблюдении за животными в течение 14 суток не было зарегистрировано случаев смерти среди выживших животных.When observing the animals for 14 days, no deaths were recorded among the surviving animals.
Результаты исследования летальности мышей после введения соединения 1 или препарата сравнения Этоксидол представлены в таблицах 1-4.The results of the study of mortality in mice after administration of compound 1 or the reference drug Ethoxydol are presented in tables 1-4.
Таблица 1. Зависимость доза-эффект (летальные исходы) при внутрижелудочном введении мышам-самцам соединения 1.Table 1. Dose-response relationship (lethal outcomes) with intragastric administration of compound 1 to male mice.
Расчет параметров острой токсичности дал следующие результаты: DL50 =419,74 (364,2-474,3) мг/кг, DL16 =304,3 мг/кг, DL84 =523,8 мг/кг.The calculation of the acute toxicity parameters gave the following results: DL 50 =419.74 (364.2-474.3) mg/kg, DL 16 =304.3 mg/kg, DL84 =523.8 mg/kg.
- 3 040876- 3 040876
Таблица 2. Зависимость доза-эффект (летальные исходы) при внутрижелудочном введении мышам-самцам препарата сравнения Этоксидол.Table 2. Dose-effect relationship (lethal outcomes) with intragastric administration of the reference drug Ethoxydol to male mice.
Расчет параметров острой токсичности дал следующие результаты: DL50 =498,93 (414,4-643,9) мг/кг, DL16 =391,2 мг/кг, DL84 =622,3 мг/кг.The calculation of the acute toxicity parameters gave the following results: DL50 =498.93 (414.4-643.9) mg/kg, DL 16 =391.2 mg/kg, DL 84 =622.3 mg/kg.
Таблица 3. Зависимость доза-эффект (летальные исходы) при внутрижелудочном введении мышам-самкам соединения 1Table 3. Dose-effect relationship (lethal outcomes) with intragastric administration of compound 1 to female mice
Расчет параметров острой токсичности дал следующие результаты: DL50 =428,81 (291,8-554,4) мг/кг, DL16 =313,4 мг/кг, DL84 =574,7 мг/кг.The calculation of the acute toxicity parameters gave the following results: DL50 =428.81 (291.8-554.4) mg/kg, DL 16 =313.4 mg/kg, DL 84 =574.7 mg/kg.
Таблица 4. Зависимость доза-эффект (летальные исходы) при внутрижелудочном введении мышам-самкам препарата сравнения ЭтоксидолTable 4. Dose-effect relationship (lethal outcomes) with intragastric administration of the reference drug Ethoxydol to female mice
Расчет параметров острой токсичности дал следующие результаты: DL50 =499,36 (350,1-628,3) мг/кг, DL16 =367,3 мг/кг, DL84 =628,0 мг/кг.The calculation of the acute toxicity parameters gave the following results: DL50 =499.36 (350.1-628.3) mg/kg, DL 16 =367.3 mg/kg, DL 84 =628.0 mg/kg.
Динамика массы тела выживших мышей, получавших токсические дозы соединения 1 или препарата сравнения Этоксидол, значимо не отличалась от таковых в контрольных группах. При анализе динамики потребления воды и пищи после внутривенного введения токсических доз соединения 1 или препарата сравнения Этоксидол существенной разницы по сравнению с контрольными группами мышей также не обнаружено (табл. 5-10).The dynamics of body weight of surviving mice treated with toxic doses of compound 1 or the reference drug Ethoxydol did not differ significantly from those in the control groups. When analyzing the dynamics of water and food consumption after intravenous administration of toxic doses of compound 1 or the reference drug Ethoxydol, no significant difference was also found in comparison with the control groups of mice (Tables 5-10).
Таблица 5. Суточное потребление сухого корма (г) и воды (мл) на мышь (самцы) при внутрижелудочном введении токсичных доз соединения 1Table 5. Daily consumption of dry food (g) and water (ml) per mouse (male) after intragastric administration of toxic doses of compound 1
* Различия при сравнении с контролем достоверны при р<0,05 (критерий хи-квадрат).* Differences when compared with control are significant at p<0.05 (chi-square test).
- 4 040876- 4 040876
Таблица 6. Суточное потребление сухого корма (г) и воды (мл) на мышь (самцы) при внутрижелудочном введения токсичных доз препарата сравнения ЭтоксидолTable 6. Daily consumption of dry food (g) and water (ml) per mouse (male) after intragastric administration of toxic doses of the reference drug Ethoxydol
* Различия при сравнении с контролем достоверны при р<0,05 (критерий хи-квадрат).* Differences when compared with control are significant at p<0.05 (chi-square test).
Таблица 7. Суточное потребление сухого корма (г) и воды (мл) на мышь (самки) при внутрижелудочном введения токсичных доз соединения 1Table 7. Daily consumption of dry food (g) and water (ml) per mouse (female) after intragastric administration of toxic doses of compound 1
* Различия при сравнении с контролем достоверны при р<0,05 (критерий хи-квадрат).* Differences when compared with control are significant at p<0.05 (chi-square test).
Таблица 8. Суточное потребление сухого корма (г) и воды (мл) на мышь (самки) при внутрижелудочном введения токсичных доз препарата сравнения ЭтоксидолTable 8. Daily consumption of dry food (g) and water (ml) per mouse (female) after intragastric administration of toxic doses of the reference drug Ethoxydol
* Различия при сравнении с контролем достоверны при р<0,05 (критерий хи-квадрат).* Differences when compared with control are significant at p<0.05 (chi-square test).
Таблица 9. Динамика массы тела выживших мышей (самцы, г), при определении острой токсичности соединения 1 и препарата сравнения ЭтоксидолTable 9. Dynamics of the body weight of surviving mice (males, g), when determining the acute toxicity of compound 1 and the reference drug Ethoxydol
* Различия при сравнении с исходными значениями (критерий Уилкоксона) и соответствующими значениями контроля (t-критерий Стьюдента) достоверны при р<0,05.* Differences when compared with baseline values (Wilcoxon test) and corresponding control values (Student's t-test) are significant at p<0.05.
- 5 040876- 5 040876
Таблица 10. Динамика массы тела выживших мышей (самки, г), при определении острой токсичности соединения 1 и препарата сравнения ЭтоксидолTable 10. Dynamics of body weight of surviving mice (females, g), when determining the acute toxicity of compound 1 and the reference drug Ethoxydol
* Различия при сравнении с исходными значениями (критерий Уилкоксона) и соответствующими значениями контроля (t-критерий Стьюдента) достоверны при р<0,05.* Differences when compared with baseline values (Wilcoxon test) and corresponding control values (Student's t-test) are significant at p<0.05.
Таким образом, проведенный анализ полученных результатов позволяет сделать вывод о том, что соединение 1 по показателю острой токсичности относится к 3 классу токсичности (умеренно токсичные) [11] по ГОСТ 12.1.007-76.Thus, the analysis of the obtained results allows us to conclude that compound 1, in terms of acute toxicity, belongs to the 3rd toxicity class (moderately toxic) [11] according to GOST 12.1.007-76.
2.2. Определение антигипоксической активности.2.2. Determination of antihypoxic activity.
Эксперименты по определению антигипоксической активности веществ проводили на белых мышах массой 20-22 г, наркотизированных тиопенталом натрия (50 мг/кг внутрибрюшинно).Experiments to determine the antihypoxic activity of substances were carried out on white mice weighing 20-22 g, anesthetized with sodium thiopental (50 mg/kg intraperitoneally).
Соединение 1 или препарат сравнения вводили в течение 3 мин внутривенно (в вену хвоста) в дозе, соответствующей 5% от значения LD50, при помощи электронного дозатора (Kent Scientific, США) за 5 мин до перевязки трахеи. Результаты исследования представлены в табл. 11.Compound 1 or the reference drug was administered intravenously (in the tail vein) for 3 min at a dose corresponding to 5% of the LD 50 value using an electronic dispenser (Kent Scientific, USA) 5 min before tracheal ligation. The results of the study are presented in table. eleven.
Как показали результаты экспериментов, препарат сравнения Этоксидол, применяемый в высшей терапевтической дозе, приводил к увеличению времени жизни подопытных животных - наименьшее время сохранения биоэлектрической активности составило 592 с, а наибольшее - 610 с, что значимо отличалось от аналогичных показателей у мышей контрольной группы. Кроме того, при приеме препарата не наблюдалось заметного уменьшения частоты сердечных сокращений (табл. 11).As the results of the experiments showed, the reference drug Ethoxydol, used in the highest therapeutic dose, led to an increase in the life time of experimental animals - the shortest time of maintaining bioelectric activity was 592 s, and the longest - 610 s, which significantly differed from similar indicators in mice of the control group. In addition, when taking the drug, there was no noticeable decrease in heart rate (Table 11).
Таблица 11. Влияние соединения 1 и препарата сравнения Этоксидол на продолжительность жизни мышей (время биоэлектрической активности миокарда) на фоне остро развивающейся асфиксииTable 11. The effect of compound 1 and the reference drug Ethoxydol on the lifespan of mice (the time of myocardial bioelectrical activity) against the background of acutely developing asphyxia
- 6 040876- 6 040876
а Отличие от группы контроля достоверно (критерий выживаемости Гехана с поправкой Йейтса); a Significant difference from the control group (Gehan survival test with Yates correction);
б Отличие от группы Этоксидол статистически достоверно при р<0,05 (одномерный дисперсионный анализ, критерий Ньюмена-Кейлса); b The difference from the Ethoxidol group is statistically significant at p<0.05 (univariate analysis of variance, Newman-Keuls test);
* Отличие от контроля статистически достоверно при р<0,05 (одномерный дисперсионный анализ, критерий Ньюмена-Кейлса).* The difference from the control is statistically significant at p<0.05 (univariate analysis of variance, Newman-Keuls test).
Соединение 1 при введении мышам в дозе, составляющей 5% от значения LD50, продлевало период биоэлектрической активности миокарда до 696±10 с, что статистически значимо больше аналогичного показателя в контрольной группе и в группе препарата сравнения. Кроме того, под влиянием исследуемого препарата сократительная способность миокарда составила 381 ±9 уд./мин.Compound 1, when administered to mice at a dose of 5% of the LD 50 value, extended the period of myocardial bioelectric activity to 696±10 s, which is statistically significantly more than the same indicator in the control group and in the comparator group. In addition, under the influence of the study drug, myocardial contractility was 381 ± 9 bpm.
Проведенное исследование острой токсичности энантиомера 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния L-гидроксибутандиоата (соединение 1) в сравнении с препаратом Этоксидол показало, что при однократном внутривенном введении мышам линии SHK показатель DL50 соединения 1 для мышей-самцов составил 419,7 мг/кг, для мышей-самок - 428,8 мг/кг; показатель DL50 препарата сравнения Этоксидол для мышей-самцов составил 498,9 мг/кг, для мышей-самок - 499,4 мг/кг. Соединение 1 относится к 3 классу токсичности при парентеральном пути введения согласно ГОСТ 12.1.007-76.A study of the acute toxicity of the enantiomer 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridinium L-hydroxybutanedioate (compound 1) in comparison with the drug Ethoxydol showed that after a single intravenous administration to mice of the SHK line, the DL 50 index of compound 1 for male mice was 419, 7 mg/kg, for female mice - 428.8 mg/kg; the DL 50 index of the reference drug Ethoxidol for male mice was 498.9 mg/kg, for female mice - 499.4 mg/kg. Compound 1 belongs to the 3rd class of toxicity when administered parenterally according to GOST 12.1.007-76.
При изучении антигипоксической активности соединения 1 в сравнении с готовой лекарственной формой препарата Этоксидол установлено, что левовращающий изомер при однократном профилактическом введении в хвостовую вену мышей за 5 мин до воспроизведения гипоксии в дозе, составляющей 5% от значения DL50, обладает антигипоксической активностью. При этом указанная активность соединения 1 статистически значимо превосходит соответствующую активность препарата сравнения, о чем свидетельствует продолжительность биоэлектрической активности сердца. Ни препарат сравнения, ни соединение 1 не обладают брадикардическим эффектом.When studying the antihypoxic activity of compound 1 in comparison with the finished dosage form of the drug Ethoxydol, it was found that the levorotatory isomer with a single prophylactic injection into the tail vein of mice 5 minutes before hypoxia is reproduced at a dose of 5% of the DL 50 value, has antihypoxic activity. At the same time, the indicated activity of compound 1 statistically significantly exceeds the corresponding activity of the reference drug, as evidenced by the duration of the bioelectrical activity of the heart. Neither the reference drug nor compound 1 has a bradycardic effect.
Пример 2.Example 2
Раствор для инъекций (масса/объем):Solution for injection (mass/volume):
L-энантиомер 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния L-гидроксибутандиоат - 5,00%;L-enantiomer 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridinium L-hydroxybutanedioate - 5.00%;
натрия метабисульфит - 1,0%;sodium metabisulphite - 1.0%;
М раствор хлористо-водородной кислоты до рН 4,5;M solution of hydrochloric acid to pH 4.5;
Вода для инъекций - до 100%.Water for injection - up to 100%.
Пример 3.Example 3
Капсулы:Capsules:
L-энантиомер 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридиния L-гидроксибутандиоат - 30 мас.%;L-enantiomer 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridinium L-hydroxybutanedioate - 30 wt.%;
крахмал - 25 мас.%;starch - 25 wt.%;
поливинилпирролидон - 3,5 мас.%;polyvinylpyrrolidone - 3.5 wt.%;
микрокристаллическая целлюлоза - 12,5 мас.%;microcrystalline cellulose - 12.5 wt.%;
лактоза - 29,0 мас.%;lactose - 29.0 wt.%;
Пример 4. Изучение липидрегулирующего действия L-энантиомера.Example 4. Study of the lipid-regulating action of the L-enantiomer.
Исследования проводили на экспериментальной модели дислипидемии у крыс линии Вистар (сам- 7 040876 цы, массой 250-280 г, по 10 животных в группе). Модель холестериновой дислипидемии индуцировали введением масляного раствора холестерина в дозе 40 мг/кг и витамина D3 в дозе 25000 МЕ/кг (инъекции проводили ежедневно в течение 20 суток). До начала эксперимента и в динамике (через 20 и 30 суток) у крыс определяли следующие показатели:The studies were carried out on an experimental model of dyslipidemia in Wistar rats (males, weighing 250–280 g, 10 animals per group). The model of cholesterol dyslipidemia was induced by the introduction of an oil solution of cholesterol at a dose of 40 mg/kg and vitamin D3 at a dose of 25,000 IU/kg (injections were carried out daily for 20 days). Before the start of the experiment and in dynamics (after 20 and 30 days), the following indicators were determined in rats:
1. Общий холестерин (ОХС) в плазме крови.1. Total cholesterol (TC) in blood plasma.
2. β-липопротеиды (β-ЛП).2. β-lipoproteins (β-LP).
3. Холестерин липопротеидов высокой плотности (ХС ЛПВП).3. High density lipoprotein cholesterol (HDL cholesterol).
4. Концентрация триглицеридов (ТГ).4. The concentration of triglycerides (TG).
5. Индекс атерогенности (ИА).5. Atherogenic index (AI).
ИА рассчитывали по формуле: ИА = (ОХС - ХС ЛПВП)/ХС ЛПВП.AI was calculated using the formula: AI = (TC - HDL-C)/HDL-C.
Содержание холестерина липопротеидов высокой плотности определяли по методу Абеля после гепарин-марганцовой преципитации и осаждения из сыворотки липопротеидов низкой плотности. Содержание триглицеридов определяли при помощи диагностических тест-наборов.The content of high density lipoprotein cholesterol was determined by the Abel method after heparin-manganese precipitation and precipitation of low density lipoproteins from serum. The content of triglycerides was determined using diagnostic test kits.
Результаты исследований приведены в табл. 12.The research results are given in table. 12.
Таблица 12. Влияние L-энатиномера на показатели липидного спектра плазмы крови крыс с индуцированной холестерином и витамином D3 дислипидемиейTable 12. The effect of L-enatinomer on the parameters of the lipid spectrum of the blood plasma of rats with dyslipidemia induced by cholesterol and vitamin D3
Достоверность различий по сравнению с интактными и контрольными животными составляет р<0,001 и р<0,01 соответственно.The significance of differences compared to intact and control animals is p<0.001 and p<0.01, respectively.
Полученные результаты свидетельствуют о том, что введение холестерина в сочетании с витамином D3 вызывает негативные изменения в спектре плазмы крови животных, характерные для дислипидемии IIA (по классификации ВОЗ). Через 20 суток эти нарушения проявлялись в существенном повышении уровня β-ЛП (р<0,001) и увеличении ИА (р<0,001). Через 30 суток у животных контрольной группы помимо этих проатерогенных изменений наблюдалось также повышение ТГ (р<0,01) и ОХС (р<0,01).The obtained results indicate that the administration of cholesterol in combination with vitamin D3 causes negative changes in the blood plasma spectrum of animals, which are characteristic of dyslipidemia IIA (according to the WHO classification). After 20 days, these disorders were manifested in a significant increase in the level of β-LP (p<0.001) and an increase in AI (p<0.001). After 30 days in animals of the control group, in addition to these proatherogenic changes, an increase in TG (p<0.01) and total cholesterol (p<0.01) was also observed.
Кроме того, наблюдали выраженный дисбаланс окислительно-восстановительной системы. Уровень каталазы в плазме крови был существенно снижен. Обнаружено накопление продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ). Введение животным, которым предварительно вводили холестерин с витамином D3, L-энантиомера в дозе 25 мг/кг перорально (с 20 по 30 сутки) оказывало выраженное липидкорригирующее действие: существенно увеличилась фракция ХС ЛПВП, снизилось содержание ОХС, βЛП и значение ИА снизилось до нормы (значение у интактных животных). Таким образом, L-энантиомер является эффективным липидрегулирующим средством.In addition, a pronounced imbalance of the redox system was observed. Plasma catalase levels were significantly reduced. Accumulation of products of lipid peroxidation (LPO) was found. The administration of the L-enantiomer at a dose of 25 mg/kg orally (from days 20 to 30) to animals that were previously injected with cholesterol with vitamin D3 had a pronounced lipid-correcting effect: the HDL-C fraction significantly increased, the content of total cholesterol, βLP decreased, and the AI value decreased to normal. (value in intact animals). Thus, the L-enantiomer is an effective lipid-regulating agent.
Пример 5. Исследования острой токсичности и антигипоксической активности.Example 5 Acute Toxicity and Antihypoxic Activity Studies.
Исследования проводили на 69 белых мышах-самцах и 69 белых мышах-самках линии SHK весом 20-22 г. Экспериментальные группы животных, по 6 мышей каждого пола в группе, для проведения эксперимента по изучению острой токсичности и антигипоксической активности является репрезентативной выборкой, которая позволяет получать статистически достоверные данные, о чем свидетельствует многолетняя практика токсикологических исследований. Во время эксперимента животных содержали в контролируемых условиях: температура окружающего воздуха 20-24°С, относительная влажность 5060%.The studies were carried out on 69 white mice-males and 69 white mice-females of the SHK line weighing 20-22 g. receive statistically reliable data, as evidenced by the long-term practice of toxicological studies. During the experiment, the animals were kept under controlled conditions: ambient temperature 20-24°C, relative humidity 50-60%.
В настоящем исследовании острую токсичность оценивали на белых аутбредных мышах обоего пола при однократном внутривенном введении соединения 1 и препарата сравнения. Белым аутбредным мышам (по 6 мышей каждого пола в группе) вводили соединение 1 или препарат сравнения в нарастающих дозах 300, 400, 500, 600, 700 мг/кг веса животного в виде раствора в воде для инъекций общим объемом 0,5 мл, что допустимо для данного вида животных.In the present study, acute toxicity was evaluated in white outbred mice of both sexes after a single intravenous injection of compound 1 and the reference drug. White outbred mice (6 mice of each sex per group) were injected with compound 1 or the reference drug in increasing doses of 300, 400, 500, 600, 700 mg/kg of animal weight as a solution in water for injection with a total volume of 0.5 ml, which acceptable for this type of animal.
Наблюдение за животными проводили в течение не менее 14 дней после введения. О токсичностиAnimals were observed for at least 14 days after administration. About toxicity
- 8 040876 препаратов судили по гибели животных и общей картине интоксикации.- 8 040876 drugs were judged by the death of animals and the general picture of intoxication.
Фиксировали общее состояние животных: особенности их поведения, интенсивность и характер двигательной активности, наличие и характер судорог, координацию движений, тонус скелетных мышц, реакцию на тактильные или болевые раздражители, частоту и глубину дыхательных движений, состояние волосяного и кожного покрова. Производили подсчет количества погибших в ходе эксперимента животных.The general condition of the animals was recorded: the features of their behavior, the intensity and nature of motor activity, the presence and nature of seizures, coordination of movements, skeletal muscle tone, response to tactile or pain stimuli, the frequency and depth of respiratory movements, the condition of the hair and skin. The number of animals that died during the experiment was counted.
Полученные данные обрабатывались общепринятым методом вариационной статистики с вычислением среднего значения (М) и стандартной ошибки среднего значения (m). В качестве критерия оценки достоверности различия средних величин использовали парный t-критерий Стьюдента с поправкой Бонферрони при уровне значимости Р<0,05; для определения достоверности различий абсолютных величин использовали непараметрический критерий хи-квадрат; при объеме выборки менее 10 - точный критерий Фишера; для определения достоверности различий до и после введения фармакологического агента использовали критерий Уилкоксона.The data obtained were processed by the generally accepted method of variation statistics with the calculation of the mean value (M) and the standard error of the mean value (m). Paired Student's t-test with Bonferroni's correction was used as a criterion for assessing the significance of differences in mean values at a significance level of P<0.05; to determine the significance of differences in absolute values, a nonparametric chi-square test was used; with a sample size of less than 10 - Fisher's exact test; to determine the significance of differences before and after administration of the pharmacological agent, the Wilcoxon test was used.
На основании полученных результатов определяли характеристики острой токсичности с помощью пробит-анализа по Миллеру-Тейнтеру.Based on the results obtained, the acute toxicity characteristics were determined using the Miller-Tainter probit analysis.
Клиническая картина интоксикации у мышей при введении обоих сравниваемых фармакологических агентов была идентичной. При введении токсических доз соединения 1 и препарата сравнения Этоксидол (рацемат) (Россия), отмечалось снижение двигательной активности животных. При увеличении дозы наблюдался кратковременный (2-3 мин) период гиперкинезии с явлениями беспокойства. Была нарушена координация движений, тонус скелетных мышц был повышен, зарегистрированы тонические и клонические судороги. В этот период наблюдались непроизвольные акты дефекации и мочеиспускания. Часть животных погибала на фоне судорог. Выжившие животные находились в заторможенном состоянии, что выражалось в сниженной реакции на световые, звуковые, тактильные и болевые раздражители (раздражение корня хвоста), при этом наблюдались судорожные подергивания мышц, снижение аппетита, диарея или обстипация на фоне возрастающего потребления воды. Дыхание было учащенным и поверхностным, регистрировали гипертермию. В указанном выше состоянии животные находились в течение первых двух суток, после чего их физиологическое состояние постепенно возвращалось к исходному.The clinical picture of intoxication in mice with the introduction of both compared pharmacological agents was identical. With the introduction of toxic doses of compound 1 and the reference drug Ethoxydol (racemate) (Russia), a decrease in the motor activity of animals was noted. When the dose was increased, a short-term (2-3 min) period of hyperkinesia with anxiety was observed. Movement coordination was impaired, skeletal muscle tone was increased, tonic and clonic convulsions were registered. During this period, involuntary acts of defecation and urination were observed. Some of the animals died due to convulsions. The surviving animals were in an inhibited state, which was expressed in a reduced reaction to light, sound, tactile and pain stimuli (irritation of the root of the tail), while convulsive muscle twitches, decreased appetite, diarrhea or constipation were observed against the background of increasing water consumption. Breathing was rapid and shallow, hyperthermia was recorded. The animals were in the above state for the first two days, after which their physiological state gradually returned to the initial state.
В течение последующих 14 суток явления интоксикации у животных проявлялись в сниженной реакции на раздражители. Волосяной покров терял блеск, характерный для здоровых животных, кожные покровы оставались без изменений. В дальнейшем состояние животных постепенно возвращалось к норме.Over the next 14 days, the phenomena of intoxication in animals manifested themselves in a reduced reaction to stimuli. The hairline lost its luster, characteristic of healthy animals, the skin remained unchanged. In the future, the condition of the animals gradually returned to normal.
При наблюдении за животными в течение 14 суток не было зарегистрировано гибели среди выживших животных.When observing the animals for 14 days, no death was recorded among the surviving animals.
Соединение 1 при введении мышам в дозе, составляющей 5% от значения LD50, продлевало период биоэлектрической активности миокарда до 696±10 с, что статистически значимо больше аналогичных значений в контрольной группе и в группе препарата сравнения. Кроме того, под влиянием исследуемого препарата сократимость миокарда составляла 381±9 уд./мин. В то время как рацемат, применяемый в высшей терапевтической дозе, приводил к увеличению времени жизни подопытных животных, при котором наименьшее время сохранения биоэлектрической активности составляло 592 с, а наибольшее - 610 с.Compound 1, when administered to mice at a dose of 5% of the LD 50 value, extended the period of myocardial bioelectric activity to 696±10 s, which is statistically significantly greater than similar values in the control group and in the comparator group. In addition, under the influence of the study drug, myocardial contractility was 381±9 bpm. While the racemate, used in the highest therapeutic dose, led to an increase in the life time of experimental animals, in which the shortest time of maintaining bioelectric activity was 592 s, and the longest - 610 s.
Пример 6. Изучение противоишемической активности.Example 6 Study of anti-ischemic activity.
Эксперименты проводили на белых нелинейных самцах крыс, мышей, кроликов и кошек.The experiments were carried out on non-linear white male rats, mice, rabbits and cats.
Изучали влияние дозы, составляющей 5% от ЛД50, на соотношение зоны некроза к зоне ишемии при ишемическом повреждении миокарда крыс. Кроме того, изучали влияние той же дозы на развитие реперфузионных аритмий. Фибрилляцию желудочков вызывали окклюзией коронарных артерий. Затем определяли влияние препарата на кардиогемодинамику и перекисное окисление липидов (ПОЛ), индуцированные иммобилизационным стрессом.We studied the effect of a dose of 5% of LD 50 on the ratio of the necrosis zone to the ischemic zone in ischemic damage to the rat myocardium. In addition, the effect of the same dose on the development of reperfusion arrhythmias was studied. Ventricular fibrillation was caused by occlusion of the coronary arteries. Then the effect of the drug on cardiohemodynamics and lipid peroxidation (LPO) induced by immobilization stress was determined.
Показано, что соединение 1 в дозе 5 мг/кг устраняет фибрилляцию желудочков при окклюзии коронарных артерий и снижает количество животных, у которых возникает фибрилляция желудочков, до 1 из 10 экспериментальных животных.Compound 1 at a dose of 5 mg/kg was shown to eliminate ventricular fibrillation in coronary artery occlusion and reduce the number of animals in which ventricular fibrillation occurs to 1 out of 10 experimental animals.
Препарат в дозе 10 мг/кг оказывает отчетливое кардиопротекторное действие на кардиогемодинамику, приближая значения сократимости (dP/dt), АД и других значений к уровню интактного контроля.The drug at a dose of 10 mg/kg has a distinct cardioprotective effect on cardiohemodynamics, bringing contractility (dP/dt), blood pressure and other values closer to the level of intact control.
Пример 7. Изучение нейропротекторной активности.Example 7. Study of neuroprotective activity.
Нейротропная активность подтверждена на модели обучаемость условного рефлекса пассивного избегания у необученных крыс и тесте амнезии условного рефлекса пассивного избегания, вызванной скополамином.Neurotropic activity was confirmed in the passive avoidance conditioned reflex trainability model in untrained rats and the passive avoidance conditioned amnesia test induced by scopolamine.
Исследование проводили на белых аутбредных половозрелых крысах-самцах массой 250-280 г.The study was carried out on white outbred mature male rats weighing 250-280 g.
Тест на воспроизведение обучаемости проводили через 24 ч после обучения, регистрировали латентный период захода животного в темную камеру и затем регистрировали число животных, совсем не зашедших в темную опасную камеру и остававшихся на освещенной висящей платформе (крысы, хоро-The test for reproducing learning ability was carried out 24 h after training, the latent period of the animal entering the dark chamber was recorded, and then the number of animals that did not enter the dark dangerous chamber at all and remained on the illuminated hanging platform (rats,
Claims (5)
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2017143801 | 2017-12-14 | ||
RU2018137717 | 2018-10-25 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA040876B1 true EA040876B1 (en) | 2022-08-10 |
Family
ID=
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11878974B2 (en) | Composition and method for treating metabolic disorders | |
EP4114408A1 (en) | Nicotinamide mononucleotide and bis-nicotinamide dinucleotide derivatives for the treatment of arrhythmia | |
JPS6322520A (en) | Study-accelerating memory-enhancing drug | |
US6451761B1 (en) | N′N′-dichlorinated omega-amino acids and uses thereof | |
JPH025732B2 (en) | ||
RU2663836C1 (en) | L-enantymer of 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypiridinium hydroxybutandioate possessing cerebroprotective activity | |
RU2705575C1 (en) | Agent exhibiting hepatoprotective, lipid-regulating, antiischemic and neurotropic activity | |
EA040876B1 (en) | L-ENANTIOMER OF 2-ETHYL-6-METHYL-3-HYDROXYPYRIDINUM | |
RU2354645C1 (en) | Kreatine amides, method for its making, neuroprotective agent | |
CN104510752B (en) | The medical usage of red sandalwood alkane glycosides | |
UA125150C2 (en) | L-enantiomer 2-ethyl-6-methyl-3-hydroxypyridinium l-hydroxybutandioate with cerebroprotective, hepatoprotective, lipid-regulating, anti-ischemic and neurotropic activities | |
RU2380097C1 (en) | Solid unit dosage form for pancreatic diabetes | |
GB2582361A (en) | Adenosine receptor agonists | |
RU2601622C1 (en) | Agent possessing endothelium protective effect in conditions of experimental diabetes mellitus and cerebral blood circulation disorder | |
TWI672145B (en) | Use and pharmaceutical composition for metabolic disease prevention and/or treatment | |
JPS63152317A (en) | Remedy for disease following cerebral ischemic change in morbid state | |
RU2531082C1 (en) | Agent possessive cardioprotective action under stress stimulation | |
RU2153880C1 (en) | General tonic agent for prophylaxis and treatment of patients with cardiovascular system disease | |
EA027170B1 (en) | Pharmaceutical composition for correcting symptoms of or treating asthenia and/or chronic fatigue syndrome | |
BG112806A (en) | Adamantane derivative with antiviral and anti-parkinson activity | |
JP2020527168A (en) | Use of azapyrone compounds to improve parasympathetic function | |
KR100923434B1 (en) | Sibutramine thioctate, process for preparing the same and pharmaceutical composition including the same | |
EA037869B1 (en) | Use of phenylcreatine for the prevention or treatment of extrasystole | |
Campbell | Absorption, distribution and metabolism of fenfluramine | |
CH654834A5 (en) | ISOPROPYLAMINO PYRIMIDINE DERIVATIVE, PROCESS FOR ITS PREPARATION AND THERAPEUTIC COMPOSITION CONTAINING THIS DERIVATIVE. |