EA040162B1

EA040162B1 - Комбинация mcl-1 ингибитора и таксанового соединения, их применения и фармацевтические композиции

Info

Publication number: EA040162B1
Application number: EA201991623
Authority: EA
Inventors: Дейл ПОРТЕР; Энсар ХАЛИЛОВИЧ; Майя Шанрион; Ана Летисия Мараньо; Оливье Женест; Дельфина МЕРИНО; Джеймс УИТТЛ; Франсуа ВАЙЯН; Джейн ВИСВЕЙДЕР; Джеффри ЛИНДЕМАН; Гийом ЛЕССЕН; Элизабетта МАРАНГОНИ
Original assignee: Ле Лаборатуар Сервье; Новартис Аг
Priority date: 2017-01-06
Filing date: 2018-01-05
Publication date: 2022-04-26

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к комбинации MCL-1 ингибитора и таксанового соединения. Изобретение также относится к применению указанной комбинации для лечения злокачественного новообразования, в особенности злокачественных новообразований молочной железы, легких, яичников, мочевого пузыря и предстательной железы, более предпочтительно злокачественных новообразований молочной железы и легких. Также обеспечиваются фармацевтические препараты, подходящие для введения таких комбинаций.

Предпосылки создания изобретения

Злокачественное новообразование характеризуется неконтролируемой клеточной пролиферацией. Антимитотические агенты и антимикротубулиновые агенты исследуют для терапии злокачественного новообразования в связи с их важным влиянием на деление клеток. Ингибирование митотического механизма приводит к различным вариантам исходов, главным образом приводя к остановке клеточного цикла и клеточной гибели. Антимикротубулиновые агенты, такие как таксаны, в настоящее время используются в клинических протоколах. Например, паклитаксел и доцетаксел имеют сходный спектр клинической активности, включая злокачественные новообразования яичников, легких, молочной железы, мочевого пузыря и предстательной железы. Таксаны представляют собой антимитотические агенты, которые связываются с тубулином и ингибируют деполимеризацию микротрубочек, таким образом разрушая нормальное равновесие, задействованное в сборку и разборку микротрубочек и, следовательно, нарушая функционирование микротрубочек. Микротрубочки являются чрезвычайно важными для деления клеток, и клетки, подверженные воздействию таксанов, могут быть неспособны делиться. Остановка клеточного цикла после лечения с применением таксанов может в конечном итоге привести к клеточной гибели вследствие неуспешного митоза. Несмотря на преимущества в противораковом лечении существует длительная неудовлетворенная потребность в более эффективных терапиях с ограниченными токсичностями. В действительности, токсичности, связанные с паклитакселем и доцетакселем, включают нейтропению в качестве основного дозилимитирующего токсичного действия, а также существенную периферическую нейропатию. Фактически, уменьшение доз часто происходит у тяжелых ранее леченных пациентов для смягчения тяжести этих токсичностей. Вдобавок к этому, развитие резистентности к таксанам также ограничивает их применение в клинике.

Апоптоз представляет собой строго регулируемый путь гибели клеток, который инициируется различными цитотоксическим стимулами, включая онкогенный стресс и химиотерапевтические средства. Было показано, что уклонение от апоптоза является отличительным признаком злокачественного новообразования и что эффективность многих химиотерапевтических средств зависит от активации внутреннего митохондриального пути. Три разные подгруппы белков BCL-2 семейства контролируют внутренний апоптотический путь: (I) проапоптотические BH3 (Bcl-2 гомология 3)-только белки; (II) способствующие выживанию представители, такие как сам BCL-2, BCL-xL, BCL-W, MCL-1 и BCL-2A1; и (Ш) проапоптотические эффекторные белки BAX и BAK (Czabotar и др., Nature Reviews Molecular Cell Biology 2014, 15, 49-63). Сверхэкспрессия антиапоптотических представителей BCL-2 семейства наблюдается при многих злокачественных новообразованиях (Adams и Cory, Oncogene 2007, 26, 1324-1337) и фармакологическое ингибирование антиапоптотических белков с помощью BH3-миметических лекарственных средств, таких как ABT-199 (венетоклакс), ABT-263 (навитоклакс) и S63845 рассматривается в качестве терапевтической стратегии для индуцирования апоптоза и вызывания регрессии опухоли при злокачественном новообразовании (Zhang и др., Drug Resist. Updat. 2007, 10, 207-217; Kotschy и др., Nature 2016, 538, 477-482). Тем не менее, наблюдаются механизмы резистентности к BH3 миметикам (Choudhary и др., Cell Death and Disease 2015, 6, e1593) и применение комбинированных терапий может улучшить эффективность и замедлить или даже остановить развитие резистентности.

Рак молочной железы представляет собой гетерогенное заболевание и может быть разделен по меньшей мере на пять основных подгрупп на основании профиля экспрессии генов: Люминал A, Люминал B (положительный по эстрогену, ER+), HEK2-амплифицированный, базальноподобный (преимущественно тройной отрицательный рак молочной железы или TNBC) и нормальноподобный (Curtis и др., Nature 2012, 486, 346-352; Perou и др., Nature 2000, 406, 747-752). Эти подтипы обычно предсказывают клиническое поведение по отношению к ответной реакции и резистентности на терапию, характер метастаз и общую выживаемость. Различные механизмы способствуют прогрессированию опухоли и резистентности к терапии злокачественного новообразования, включая уклонение от клеточной гибели вследствие нарушения регуляции баланса между анти- и проапоптотическими представителями семейства BCL2 (Merino и др., Oncogene 2016, 35, 1877-1887; Beroukim и др., Nature 2010, 463, 899-905; Wertz и др., Nature 2011, 471, 110-114; Goodwin и др., Cell Death Differ. 2015). В подгруппе тройного отрицательного рака молочной железы, оставшееся заболевание после неоадъювантной терапии связано с более высоким риском метастатического рецидивирования по сравнению с пациентами, у которых достигается патологическая полная ответная реакция (Liedtke и др., J. Clin. Oncol. 2008, 26(8), 1275-1281). Приблизительно у 70% пациентов с TNBC не достигается полного ответа после неоадъювантной химиотерапии (такой как паклитаксел или доцетаксел) и страдают от существенно более плохого исхода, с большей вероятностью метастатического рецидива и 3-летней общей выживаемостью только 60-70%.

Рак легких классифицируется на немелкоклеточный рак легких (NSCLC), мелкоклеточный рак лег

- 1 040162 ких (SCLC) и карциноид. Приблизительно 80% всех злокачественных новообразований легких соответствует NSCLC, который может быть дополнительно классифицирован на аденокарциному, плоскоклеточный рак и крупноклеточный рак. Рак легких является наиболее распространенной причиной смерти, связанной со злокачественным новообразованием, у мужчин и второй наиболее распространенной причиной у женщин после рака молочной железы. Несмотря на то что терапия рака легких улучшилась существенно после появления нацеленной терапии, все еще существует настоятельная потребность в разработке новых терапий для улучшения эффективности лечения, уменьшения побочных эффектов и избежания проявление резистентности (Rothschild Cancers 2015, 7(2), 930-949).

Настоящее изобретение обеспечивает новую комбинацию MCL-1 ингибитора и таксанового соединения. Результаты показывают, что ассоциация эффективных небольших молекул, нацеленных на MCL1, с антимикротубулиновыми агентами, является чрезвычайно синергическими на клеточных линия рака молочной железы и легких (фиг. 1-7; табл. 1 и 4). Также нами было показано, что комбинированное разрушение функционирования микротрубочек и MCL-1 нацеливание in vivo является эффективным в переносимых дозах на модели рака молочной железы PDX (ксенотрансплантант, полученный от пациента (Patient Derived Xenograft)) (фиг. 8 и 9) и в различных дозах на самках бестимусных крыс, несущих MDA-MB-231 ксенотрансплантат, модель тройного отрицательного рака молочной железы (фиг. 10-14). Положительная комбинация также наблюдалась на различных PDX моделях TNBC, используя различные схемы введения (фиг. 15). Синергический эффект нацеленного MCL-1 и разрушения функционирования микротрубочек in vitro и in vivo в переносимых дозах было показано с помощью комбинации эффективных низкомолекулярных ингибиторов. В завершение, анализ резидуальной опухоли после неоадъювантного лечения является основной и плохо изученной областью для исследования химиорезистентности и, таким образом, нами были осуществлены эксперименты на PDX модели, резистентной к химиотерапии, свидетельствующие о том, что комбинация MCL-1 ингибитора и таксанового соединения является эффективной (пример 9).

Сущность изобретения

Изобретение относится к комбинации для лечения злокачественного новообразования, содержащей: (а) MCL-1 ингибитор, который представляет собой (2R)-2-{[(5S_a)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(5-фторфуран-2-ил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[1-(2,2,2трифторэтил)-1H-пиразол-5-ил]метокси}фенил)пропановую кислоту или (2R)-2-{[(5S_a)-5-{3-хлор-2метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропановую кислоту, или их соли присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием, и (б) таксановое соединение, которое представляет собой паклитаксел или доцетаксел, для одновременного, последовательного или раздельного применения.

Указанные соединения, их синтез, их применения для лечения злокачественного новообразования и их фармацевтические препараты, описаны в WO 2015/097123, WO 2016/207216, WO 2016/207217, WO 2016/207225, WO 2016/207226 и WO 2017/125224, содержание которых включено в качестве ссылки.

В определенных вариантах осуществления таксановое соединение выбирают из паклитаксела, доцетаксела, кабазитаксела, тезетаксела, Opaxio® (паклитаксел полиглюмекс), Abraxane® (наб-паклитаксел) ларотаксела, таксопрексина, BMS-184476, hongdoushan A, hongdoushan B, и hongdoushan C и других.

В другом варианте осуществления изобретение обеспечивает комбинацию, содержащую:

(a) соединение 1: (2R)-2-{[(5S_a)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропановую кислоту, или ее фармацевтически приемлемую соль, и (б) таксановое соединение, выбранное из паклитаксела или доцетаксела, для одновременного, последовательного или раздельного применения.

Альтернативно, изобретение обеспечивает комбинацию, содержащую:

(a) Соединение 2: (2R)-2-{[(5S_a)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6(5-фторфуран-2-ил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[1-(2,2,2-трифторэтил)-1H-пиразол-5-ил]метокси}фенил)пропановую кислоту, или ее фармацевтически приемлемую соль, и (б) таксановое соединение, выбранное из паклитаксела или доцетаксела, для одновременного, последовательного или раздельного применения.

В другом варианте осуществления изобретение обеспечивает комбинацию, как описано в настоящей заявке, для применения для лечения рака молочной железы или рака легких.

В другом варианте осуществления изобретение обеспечивает применение комбинации, как описано в настоящей заявке, для приготовления лекарственного средства для лечения рака молочной железы или рака легких.

В другом варианте осуществления изобретение обеспечивает лекарственное средство, содержащее, раздельно или совместно:

(a) MCL-1 ингибитор, как описано в настоящей заявке, и (б) таксановое соединение, как описано в настоящей заявке, или (a) MCL-1 ингибитор, как описано в настоящей заявке, и

- 2 040162 (б) таксановое соединение, как описано в настоящей заявке, для одновременного, последовательного или раздельного введения, и где MCL-1 ингибитор и таксановое соединение обеспечиваются в эффективных количествах для лечения рака молочной железы или рака легких.

В другом варианте осуществления изобретение обеспечивает способ лечения рака молочной железы или рака легких, включающий введение совместно терапевтически эффективного количества:

(a) MCL-1 ингибитора формулы (I), как описано в настоящей заявке, и (б) таксанового соединения, как описано в настоящей заявке, или (a) MCL-1 ингибитора формулы (II), как описано в настоящей заявке, и (б) таксанового соединения, как описано в настоящей заявке, субъекту, который в этом нуждается.

В другом варианте осуществления MCL-1 ингибитор представляет собой (2R)-2-{[(5S_a)-5-{3-хлор2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропановую кислоту (соединение 1).

В другом варианте осуществления MCL-1 ингибитор представляет собой (2R)-2-{[(5S_a)-5-{3-хлор2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(5-фторфуран-2-ил)тиено[2,3-d]пиримидин-4ил]окси}-3-(2-{[1-(2,2,2-трифторэтил)-1H-пиразол-5-ил]метокси}фенил)пропановую кислоту (соединение 2).

В другом варианте осуществления таксановое соединение представляет собой паклитаксел.

В другом варианте осуществления таксановое соединение представляет собой доцетаксел.

Краткое описание фигур

На фиг. 1 проиллюстрированы матрицы для ингибирования, ингибирования избытка Loewe и ингибирования роста для комбинаций паклитаксела с Соединением 1 на репрезентативной клеточной линии MDA-MB-453 рака молочной железы;

на фиг. 2 - матрицы для ингибирования, ингибирования избытка Loewe и ингибирования роста для комбинаций паклитаксела с соединением 1 на репрезентативной клеточной линии MDA-MB-468 рака молочной железы;

на фиг. 3 - матрицы для ингибирования, ингибирования избытка Loewe и ингибирования роста для комбинаций паклитаксела с соединением 1 на репрезентативной клеточной линии Н522 рака легких;

на фиг. 4 - типичный эффект ингибирования роста клеток и синергичные матрицы комбинации для ингибирования роста клеток (слева) и ингибирования избытка Loewe (справа), обеспечиваемые соединением 2 в комбинации с паклитакселем на клеточной линии рака молочной железы MDA-MB-453 в двух независимых экспериментах. Значения в матрице эффекта находятся в диапазоне от 0 (нет ингибирования) до 100 (полное ингибирование). Значения в матрице синергизма представляют собой степень ингибирования роста, превышающий теоретическую аддитивность, рассчитанную на основании активности отдельных средств соединения 2 и паклитаксела в тестируемых концентрациях;

на фиг. 5 - типичный эффект ингибирования роста клеток и синергичные матрицы комбинации для ингибирования роста клеток (слева) и ингибирования избытка Loewe (справа), обеспечиваемые соединением 2 в комбинации с паклитакселем на клеточной линии рака легких H522 в двух независимых экспериментах. Значения в матрице эффекта находятся в диапазоне от 0 (нет ингибирования) до 100 (полное ингибирование). Значения в матрице синергизма представляют собой степень ингибирования роста, превышающий теоретическую аддитивность, рассчитанную на основании активности отдельных средств соединения 2 и паклитаксела в тестируемых концентрациях;

на фиг. 6 - синергический эффект соединения 2 с доцетакселом. SK-BR-3 клетки обрабатывали доцетакселом (2 нМ), или слева нелеченные в присутствии соединения 2 (30 нМ), с или без QVD (10 мкМ) в течение 72 ч, после этого анализировали жизнеспособность путем окрашивания йодидом пропидия (PI). Результаты представлены в виде процента нелеченных клеток и представляют 3-5 независимых экспериментов;

на фиг. 7 - синергический эффект соединения 2 с доцетакселом. SK-BR-3 клетки обрабатывали возрастающими концентрациями соединения 2 и доцетаксела в течение 72 ч, после этого анализировали жизнеспособность, используя Cell Titer Glo с последующим анализом с оценкой BLISS. Значения синергизма BLISS представляют собой > 0,0 на вертикальной оси;

на фиг. 8 - эффективность соединения 2 с доцетакселом на улучшение выживания животных на TNBC PDX модели. Кривые выживаемости Каплана-Майера мышей, несущих 110T (n=10-12 мышей на плечо), 838T (n=12 мышей на плечо), или PDX OD-BRE-0589 (8 мышей на плечо), которых обрабатывали только наполнителем (черная линия), доцетакселом (10 мг/кг в/б в день 0 и 21) плюс наполнитель для соединения 2 (темно-серая линия), соединения 2 (25 мг/кг в/в. один раз в неделю в течение 6 недель) плюс наполнитель для доцетаксела (светло-серая линия), или комбинированного доцетаксела и соединения 2 (пунктирная линия). Правые панели: индивидуальные кривые объема опухоли. PDX 838T модель останавливали через 120 дней вследствие возрастного заболевания, независимо от лечения. Логарифмическое ранговое (Mantel-Cox) p значение представлено для терапии комбинацией относительно доцетаксела отдельно;

на фиг. 9 - поддержание нормального веса тела во время осуществления терапии. Нокаутных мы- 3 040162 шей лечили NOD SCID IL2 γ рецептором с применением доцетаксела (15 мг/кг, один раз в/б) и соединения 2 в дозе 25 или 50 мг/кг (3 мыши на группу, в/в инъекции, один раз в неделю в течение 3 недель). За их весом тела наблюдали три раза в неделю в течение 3 недель. Терапия с применением соединения 2 в качестве единственного средства или в комбинации с доцетакселом хорошо переносилась;

на фиг. 10 - эффективность паклитаксела и соединения 1 (обозначенного как соединение A на фигуре) отдельно и в комбинации на самках бестимусных крыс, несущих MDA-MB-231 ксенотрансплантаты, модель TNBC. Опухоли прививали самкам бестимусных крыс путем подкожной инокуляции клеток TNBC MDA-MB-231 человека (1x107 клеток/200 мкл HBSS/Matrigel 1:1 об./об.). Животных с подходящими размерами опухолей рандомизировали на группы (n=7-8) со средним объемом опухоли приблизительно 400 мм³. Объемы опухолей оценивали, используя два наибольших диаметра в соответствии с (LxW²xn/6) и вес тела измеряли 2-3 раза в неделю. Данные представлены в виде среднего значения ± СПС или в виде индивидуальных объемов опухолей. * p < 0,05, по сравнению с группой с наполнителем (однофакторный дисперсионный анализ с апостериорным критерием Даннетта);

на фиг. 11 - переносимость паклитаксела и соединения 1 (обозначенного как соединение A на фигуре) отдельно и в комбинации на самках бестимусных крыс, несущих MDA-MB-231 ксенотрансплантаты, модель TNBC. Опухоли прививали самкам бестимусных крыс путем подкожной инокуляции клеток TNBC MDA-MB-231 человека (1x10⁷ клеток/200 мкл HBSS/Matrigel 1:1 об./об.). Животных с подходящими размерами опухолей рандомизировали на группы (n=7-8) со средним объемом опухоли приблизительно 400 мм³. Объемы опухолей оценивали, используя два наибольших диаметра в соответствии с (LxWxn/6) и вес тела измеряли 2-3 раза в неделю;

на фиг. 12 - эффективность паклитаксела и соединения 1 (обозначенного как соединение A на фигуре) отдельно и в комбинации в различных схемах дозирования на самках бестимусных крыс, несущих MDA-MB-231 ксенотрансплантаты, модель TNBC. Опухоли прививали самкам бестимусных крыс путем подкожной инокуляции клеток TNBC MDA-MB-231 человека (1x10⁷ клеток/200 мкл HBSS/Matrigel 1:1 об./об.). Животных с подходящими размерами опухолей рандомизировали на группы (n=7-8) со средним объемом опухоли приблизительно 400 мм³. Объемы опухолей оценивали, используя два наибольших диаметра в соответствии с (LxWxn/6) и вес тела измеряли 2-3 раза в неделю. Данные представлены в виде среднего значения ± СПС или в виде индивидуальных объемов опухолей. * p < 0,05, по сравнению с группой с наполнителем (однофакторный дисперсионный анализ с апостериорным критерием Даннетта);

на фиг. 13 - переносимость паклитаксела и соединения 1 (обозначенного как соединение A на фигуре) отдельно и в комбинации в различных схемах дозирования на самках бестимусных крыс, несущих MDA-MB-231 ксенотрансплантаты, модель TNBC. Опухоли прививали самкам бестимусных крыс путем подкожной инокуляции клеток TNBC MDA-MB-231 человека (1x10⁷ клеток/200 мкл HBSS/Matrigel 1:1 об./об.). Животных с подходящими размерами опухолей рандомизировали на группы (n=7-8) со средним объемом опухоли приблизительно 400 мм³. Объемы опухолей оценивали, используя два наибольших диаметра в соответствии с (LxW²xn/6) и вес тела измеряли 2-3 раза в неделю;

на фиг. 14 - синергический эффект соединения 1 с доцетакселом;

на фиг. 15 - противоопухолевая активность доцетаксела и соединения 1, вводимых в/в отдельно и в комбинации самкам мышей SCID, несущих имеющую происхождение от пациента TNBC модель. Доцетаксел вводили первым с последующим введение соединения 1 либо через 30 мин или через 72 ч.

Подробное описание изобретения

Таким образом, изобретение обеспечивает в варианте осуществления E1 комбинацию для лечения злокачественного новообразования, содержащую: (a) MCL-1 ингибитор, который представляет собой (2R)-2-{[(5S_a)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(5-фторфуран-2-ил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[1-(2,2,2-трифторэтил)-1H-пиразол-5-ил]метокси}фенил)пропановую кислоту или (2R)-2-{[(5Sa)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропановую кислоту, или их соли присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием, и (б) таксановое соединение, которое представляет собой паклитаксел или доцетаксел, для одновременного, последовательного или раздельного применения.

Дальнейшие пронумерованные варианты осуществления (E) изобретения описаны в настоящей заявке. Следует принять во внимание, что характерные особенности, указанные в каждом варианте осуществления, могут комбинироваться с другими специфическими характерными особенностями, для обеспечения дальнейших вариантов осуществления настоящего изобретения.

E2. Комбинация в соответствии с E1, где MCL-1 ингибитор представляет собой (2R)-2-{[(5S_a)-5-{3хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(5-фторфуран-2-ил)тиено[2,3-d]пиримидин4-ил]окси}-3-(2-{[1-(2,2,2-трифторэтил)-1H-пиразол-5-ил]метокси}фенил)пропановую кислоту.

E3. Комбинация в соответствии с E1, где MCL-1 ингибитор представляет собой (2R)-2-{[(5S_a)-5-{3хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропановую кислоту.

E4. Комбинация в соответствии с E1, где таксановое соединение представляет собой паклитаксел.

- 4 040162

E5. Комбинация в соответствии с E1, где таксановое соединение представляет собой доцетаксел.

E6. Комбинация в соответствии с E1, где MCL-1 ингибитор представляет собой (2R)-2-{[(5S_a)-5-{3хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропановую кислоту и таксановое соединение представляет собой паклитаксел.

E7. Комбинация в соответствии с E1, где MCL-1 ингибитор представляет собой (2R)-2-{[(5S_a)-5-{3хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(5-фторфуран-2-ил)тиено[2,3-d]пиримидин4-ил]окси}-3-(2-{[1 -(2,2,2-трифторэтил)-1H-пиразол-5-ил]метокси}фенил)пропановую кислоту и таксановое соединение представляет собой паклитаксел.

E8. Комбинация в соответствии с E1, где MCL-1 ингибитор представляет собой (2R)-2-{[(5S_a)-5-{3хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропановую кислоту и таксановое соединение представляет собой доцетаксел.

E9. Комбинация в соответствии с E1, где MCL-1 ингибитор представляет собой (2R)-2-{[(5S_a)-5-{3хлор-2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(5-фторфуран-2-ил)тиено[2,3-d]пиримидин4-ил]окси}-3-(2-{[1-(2,2,2-трифторэтил)-1H-пиразол-5-ил]метокси}фенил)пропановую кислоту и таксановое соединение представляет собой доцетаксел.

E10. Комбинация в соответствии с E3, где доза (2R)-2-{[(5S_a)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропановой кислоты во время комбинированного лечения составляет от 25 мг до 1500 мг.

E11. Комбинация в соответствии с E3 или E10, где (2R)-2-{[(5S_a)-5-{3-хлор-2-метил-4-[2-(4метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропановую кислоту вводят во время комбинированного лечения один раз в неделю.

E12. Комбинация в соответствии с любым из E1-E11, где MCL-1 ингибитор вводят перорально и таксановое соединение вводят внутривенно.

E13. Комбинация в соответствии с любым из E1-E11, где MCL-1 ингибитор и таксановое соединение вводят внутривенно.

E14. Комбинация в соответствии с любым из E1-E13, для применения для лечения рака молочной железы или рака легких.

E15. Комбинация для применения в соответствии с E14, где MCL-1 ингибитор и таксановое соединение обеспечиваются в количествах, которые совместно терапевтически эффективны для лечения рака молочной железы или рака легких.

E16. Комбинация для применения в соответствии с E14, где MCL-1 ингибитор и таксановое соединение обеспечиваются в количествах, которые синергетически эффективны для лечения рака молочной железы или рака легких.

E17. Комбинация для применения в соответствии с E14, где MCL-1 ингибитор и таксановое соединение обеспечиваются в синергетически эффективных количествах, что предоставляет возможность уменьшения дозы, требуемой для каждого соединения для лечения рака молочной железы или рака легких, в то же время обеспечивая эффективное лечение злокачественного новообразования, с существенным уменьшением побочных эффектов.

E18. Комбинация для применения в соответствии с любым из E14-E17, где злокачественное новообразование представляет собой рак молочной железы.

E19. Комбинация для применения в соответствии с E18, где злокачественное новообразование представляет собой тройной отрицательный рак молочной железы, в особенности химиорезистентный тройной отрицательный рак молочной железы, более предпочтительно, тройной отрицательный рак молочной железы, резистентный к терапии таксаном.

E20. Комбинация для применения в соответствии с любым из E14-E17, где злокачественное новообразование представляет собой рак легких, в особенности не-мелкоклеточный рак легких или мелкоклеточный рак легких.

E21. Комбинация в соответствии с любым из E1-E13, дополнительно содержащая один или несколько наполнителей.

E22. Фармацевтические композиции, содержащие комбинацию в соответствии с любым из E1-E13, в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми наполнителями.

E23. Фармацевтические композиции в соответствии с E22, для применения для лечения рака молочной железы или рака легких.

E24. Фармацевтические композиции для применения в соответствии с E23, где злокачественное новообразование представляет собой рак молочной железы.

E25. Фармацевтические композиции для применения в соответствии с E24, где злокачественное новообразование представляет собой тройной отрицательный рак молочной железы, в особенности химиорезистентный тройной отрицательный рак молочной железы, более предпочтительно, тройной отрица- 5 040162 тельный рак молочной железы, резистентный к терапии таксаном.

E26. Фармацевтические композиции для применения в соответствии с E23, где злокачественное новообразование представляет собой рак легких, в особенности немелкоклеточный рак легких или мелкоклеточный рак легких.

E27. Применение комбинации в соответствии с любым из E1-E13 для приготовления лекарственного средства для лечения рака молочной железы или рака легких.

E28. Применение в соответствии с E27, где злокачественное новообразование представляет собой рак молочной железы.

E29. Применение в соответствии с E28, где злокачественное новообразование представляет собой тройной отрицательный рак молочной железы, в особенности химиорезистентный тройной отрицательный рак молочной железы, более предпочтительно, тройной отрицательный рак молочной железы, резистентный к терапии таксаном.

Е30. Применение в соответствии с E27, где злокачественное новообразование представляет собой рак легких, в особенности не-мелкоклеточный рак легких или мелкоклеточный рак легких.

E31. Лекарственное средство, содержащее, раздельно или совместно:

(a) MCL-1 ингибитор, как определено в E1, и (б) таксановое соединение, как определено в E1, для одновременного, последовательного или раздельного введения, и где MCL-1 ингибитор и таксановое соединение обеспечиваются в эффективных количествах для лечения злокачественного новообразования.

E32. Способ лечения злокачественного новообразования, включающий введение совместно терапевтически эффективного количества:

(a) MCL-1 ингибитора, как определено в E1, и (б) таксанового соединения, как определено в E1, субъекту, который в этом нуждается.

Е33. Способ сенсибилизации пациента, который (I) рефракторный по меньшей мереи к одному химиотерапевтическому лечению, или (II) имеет рецидив после лечения с применением химиотерапии, или в обоих случаях (I) и (II), где способ включает введение совместно терапевтически эффективного количества MCL-1 ингибитора, как определено в E1, в комбинации с таксановым соединением, как описано в настоящей заявке, указанному пациенту.

Комбинация относится либо к комбинации с фиксированной дозой в одной отдельно взятой дозированной форме (например, капсуле, таблетке или саше), комбинации с нефиксированной дозой, или набору для комбинированного введения, где соединение согласно настоящему изобретению и один или несколько компонентов из комбинации (например, другое лекарственное средство, как объясняется ниже, также обозначается в виде терапевтического средств или соагента) могут вводиться независимо в одно и то же время или раздельно в течение временных интервалов, в особенности, если эти временные интервалы предоставляют возможность для компонентов комбинации проявлять совместный, например, синергетический эффект.

Термины совместное введение или комбинированное введение или тому подобные, в контексте настоящей заявки, охватывают введение выбранного компонента комбинации отдельно взятому субъекту, который в этом нуждается (например, пациенту), и включают схемы лечения, при которых агенты не обязательно вводятся одним и тем же путем введения или в одно и то же время.

Термин комбинация с фиксированной дозой обозначает, что активные компоненты, например соединение формулы (I) и один или несколько компонентов комбинации, оба вводятся пациенту одновременно в форме единого целого или дозировки.

Термин комбинация с нефиксированной дозой обозначает, что активные компоненты, например соединение согласно настоящему изобретению, и один или несколько компонентов комбинации, оба вводятся пациенту в виде раздельных составляющих либо одновременно или последовательно, без специфических временных ограничений, где такое введение обеспечивает терапевтически эффективные уровни двух соединений в организме пациента. Последнее также применяется для коктейльной терапии, например введение трех или более активных компонентов.

Злокачественное новообразование обозначает класс заболевания, в котором группа клеток проявляет неконтролируемый рост. Типы злокачественных новообразований включают солидные опухоли, включая карциному, саркому или бластому. В особенности злокачественное новообразование относится к раку молочной железы и легких.

Термин совместно терапевтически эффективны обозначает, что терапевтические средства могут вводиться раздельно (в хронологически установленном порядке, в особенности специфически к последовательности образом) в такие временные интервалы, что они могут предпочтительно, у теплокровного животного, в особенности у человека, лечить, все еще проявляя (предпочтительно синергетическое) взаимодействие (совместный терапевтический эффект). В любом случае, это может быть установлено, в частности, путем определения последующих уровней в крови, свидетельствующих о том, что оба соединения присутствуют в крове человека, подвергаемого лечению, по меньшей мере на протяжении определенных временных интервалов.

- 6 040162

Синергетически эффективны или синергизм обозначает, что терапевтический эффект, наблюдаемые после введения двух или более агентов является больше, чем сумма терапевтических эффектов, наблюдаемых после введения каждого отдельно взятого средства.

В контексте настоящей заявки термин лечить, лечение или терапия любого заболевания или нарушения относится в одном варианте осуществления, к ослаблению заболевания или нарушения (то есть, облечение или остановка или уменьшение развития заболевания или по меньшей мере одного из его клинических симптомов). В другом варианте осуществления лечить, лечение или терапия относится к ослаблению или облегчению по меньшей мере одного физического параметра, включая те, которые могут не ощущаться пациентом. В еще другом варианте осуществления лечить, лечение или терапия относится к модуляции заболевания или нарушения, либо физически, (например, стабилизация различимого симптома), физиологически, (например, стабилизация физического параметра), или обоих.

В контексте настоящей заявки субъект нуждается в лечении, если такой субъект будет получать преимущества биологически, медицински или качества жизни от такого лечения.

В другом аспекте, обеспечивается способ сенсибилизации человека, который (I) рефракторный по меньшей мере к одному химиотерапевтическому лечению, или (II) имеет рецидив после лечения с применением химиотерапии, или в обоих случаях (I) и (II), где способ включает введение MCL-1 ингибитор, в комбинации с таксановым соединением, как описано в настоящей заявке, пациенту. Сенсибилизируемый пациент представляет собой пациента, который отвечает на лечение, включающее введение MCL-1 ингибитора формулы (I) или формулы (II), в комбинации с таксановым соединением, как описано в настоящей заявке, или у которого не развилась резистентность к такому лечению.

Лекарственное средство обозначает фармацевтическую композицию или комбинацию нескольких фармацевтических композиций, которые содержат один или несколько активных компонентов в присутствии одного или нескольких наполнителей.

В фармацевтических композициях в соответствии с изобретением, пропорция активных компонентов по весу (вес активных компонентов по отношению к общему весу композиции) составляет 5-50%.

В качестве фармацевтических композиций в соответствии с изобретением, более специфически используют те, которые являются подходящими для введения пероральным, парентеральным и в особенности внутривенным, через- или транскожным, назальным, ректальным, подъязычным, глазным или респираторным путем, более специфически таблетки, драже, подъязычные таблетки, твердые желатиновые капсулы, таблетки для медленного растворения под языком, капсулы, пастилки, инъецируемые препараты, аэрозоли, глазные капли или капли в нос, суппозитории, кремы, мази, кожные гели и др.

Фармацевтические композиции в соответствии с изобретением могут содержать один или несколько фармацевтически приемлемых наполнителей или носителей, выбранных из разбавителей, смазывающих веществ, связующих, дезинтеграторов, стабилизаторов, консервантов, абсорбентов, красителей, подсластителей, ароматизаторов и др.

В качестве неограничивающего примера можно указать:

в качестве разбавителей: лактоза, декстроза, сахароза, маннит, сорбит, целлюлоза, глицерин, в качестве смазывающих веществ: диоксид кремния, тальк, стеариновая кислота и ее магниевая и кальциевая соли, полиэтиленгликоль, в качестве связующих: алюмосиликат магния, крахмал, желатин, трагакант, метилцеллюлоза, натрий карбоксиметилцеллюлоза и поливинилпирролидон, в качестве дезинтеграторов: агар, альгиновая кислота и ее натриевая соль, шипучие смеси.

Соединения комбинации могут вводиться одновременно или последовательно. Путь введения предпочтительно представляет собой внутривенную инфузию или инъекцию, и соответствующие фармацевтические композиции могут предоставлять возможность немедленного или отстроченного высвобождения активных компонентов. Соединения комбинации, кроме того, могут вводиться в форме двух раздельных фармацевтических композиций, каждая из которых содержит один из активных компонентов, или в форме единственной фармацевтической композиции, в которой активные компоненты представлены в смеси.

Применяемые схемы дозирования изменяются в зависимости от пола, возраста и веса пациента, пути введения, природы злокачественного новообразования и любых сопутствующих лечений и находится в диапазоне от 25 до 1500 мг MCL-1 ингибитора в неделю, более предпочтительно от 50 до 1400 мг в неделю. Доза таксанового соединения будет такой же, как используется при его самостоятельном введении.

Фармакологические данные.

Пример 1. Влияние на пролиферацию in vitro комбинации MCL-1 ингибитора (соединение 1) с паклитакселем на клеточных линиях рака молочной железы и легких.

Влияние на пролиферацию комбинации MCL-1 ингибитора (соединение 1) с паклитакселем оценивали на панели клеточных линий 19 рака молочной железы (BT-20, BT-474, BT-549, Cal-148, HCC1143, HCC1395, HCC1500, HCC1937, HCC1954, HCC38, HCC70, Hs 578T, MCF7, MDA-MB-157, MDA-MB-231, MDA-MB-436, MDA-MB-453, MDA-MB-468 и SK-BR-3) и 3 клеточных линий рака легких (H522, H23 и A549).

- 7 040162

Материалы и методы

Соединения растворяли в 100% ДМСО (Sigma, № каталога D2438-50ML) при маточной концентрации 10 мМ и хранили при -20°C до использования. Соединения распределяли в планшетах на 96 лунок объемом 2 мл (Greiner bio-one, номер каталога 780271), серийно разведенные 3-кратно. Соединение 1 использовали в диапазоне концентраций 0,0 - 10,0 мкМ. Паклитаксел использовали в диапазоне концентраций 0,0 - 1,0 мкМ в клетках рака молочной железы и в диапазоне концентраций 0,0 - 2,0 мкМ в клетках рака легких.

Все клеточные линии получали из Американской коллекции типовых культур и культивировали в соответствии с рекомендациями производителя. Все линии дополняли с применением 10% FBS (GIBCO, Номер каталога 10099-141). Все клеточные линии определяли как свободные от микоплазматического загрязнения путем ПЦР анализа на обнаружение, осуществленном в Idexx Radil (Columbia, MO, USA) и аутентифицировали с помощью SNP анализа. Клетки размораживали из замороженных стоков, проводили через > 1 пассаж и выращивали при 37°C в 5% CO₂. Клетки распространяли в T-75 колбы и оценивали их жизнеспособность в счетчике Beckman-Coulter ViCell перед высеванием. Для расщепления и распространения клеточных линий, клетки отсоединяли от колб, используя 0,25% Трипсин-EDTA (Corning Costar, № кат. 25-053-CL).

Пролиферацию клеток измеряли в 72-часовых анализах CellTiter-Glo™ (CTG) и все представленные результаты представляют собой результаты измерений по меньшей мере в трех повторах. Клетки диспергировали в обработанные тканевой культурой планшеты на 96 лунок (Costar, номер каталога 3904) с конечным объемом 80 мкл среды и при плотности 3000 клеток на лунку. Через 16-24 ч после высевания, по 20 мкл каждого из серийных разведений соединения переносили на планшеты, содержащие клетки, получая концентрации соединений в вышеуказанных диапазонах и конечную концентрацию ДМСО 0,16%. Дополнительно, в это время исследовали планшет дня 0, используя люминесцентный анализ жизнеспособности клеток CellTiter-Glo®, как описано ниже. Через 72 ч после обработки соединением, определяли влияния соединений на пролиферацию клеток, используя люминесцентный анализ жизнеспособности клеток CellTiter-Glo™ (Promega, № каталога G7573). Он представляет собой гомогенный метод для определения количества жизнеспособных клеток в культуре на основании количества присутствующего АТФ, который сигнализирует о присутствии метаболически активных клеток. Способ более подробно описан в Technical Bulletin, TB288 Promega. Вкратце, 100 мкл реагента CTG добавляли к планшетам и планшеты инкубировали в течение 20-30 мин на орбитальном встряхивателе. После этого планшеты анализировали на планшет-ридере Perkin Elmer Victor™ X4.

Рассчитывали процент ингибирования роста, избыток ингибирования и ингибирования роста, используя программное обеспечение Combo Module, используя модель синергизма Loewe (как описано в Lehar и др., Nature Biotechnology 2009, 27(7), 659-66), согласно которой определяют влияние на рост выше, чем будут предполагать, если два лекарственных средства ведут себе дозо-аддитивным образом. Положительные числа представляют собой площади возрастающего синергизма. Процентное значение ингибирования роста относительно ДМСО представлено на панели, отмеченной как Ингибирование. Количество ингибирования, превышающее ожидаемое количество, представлено на панели, обозначенной как Избыток ингибирования Loewe. Количество ингибирования, нормированное ко дню 0, представлено на панели, обозначенной как Ингибирование роста. Концентрации соединения 1 представлены в нижней строке слева направо и возрастающие концентрации паклитаксела вдоль крайней левой колонки снизу вверх. Все оставшиеся точки на сетках представляют собой результаты для комбинации двух ингибиторов, которые соответствуют концентрациям отдельных средств, представленных на двух осях. Определяли абсолютное IC₅₀ путем обнаружения концентрации соединения, при которой рассчитанная кривая пересекает отметку 50% активности. Рассчитывали IC₅₀ и оценку синергизма с помощью программного обеспечения Combo module, как описано в Lehar и др., 2009.

Оценка синергизма

SS ~ 0 —> Аддитивная доза

SS >2 —► Синергизм

SS >1 —► Слабый синергизм

- 8 040162

Таблица 1. Указаны абсолютные IC₅₀ значения единственного средства для каждого соединения и измерения оценки синергизма для комбинации соединения 1 и паклитаксела. Взаимодействия считаются синергическими, если наблюдается оценка > 2,0

Клеточная линия	Происхождение	Соединение 1	Паклитаксел	Комбинация
Абс 1С₅₀(нМ)	Абс 1С₅₀(нМ)	Оценка синергизма (SS)
ВТ-20	Молочная железа	653	5,97	7,93
ВТ-474	Молочная железа	1262,5	1,7	4,7
ВТ-549	Молочная железа	>10000	8,82	9,01
Са1-148	Молочная железа	1330	4,25	13,8
НСС1143	Молочная железа	>10000	9,43	2,58
НСС1395	Молочная железа	9915	8,03	1,52
НСС1500	Молочная железа	257,5	>1000	6,38
НСС1937	Молочная железа	137	И,6	9,4
НСС1954	Молочная железа	158,5	6,5	3,69
НСС38	Молочная железа	3385	4,33	5,19
НСС70	Молочная железа	704	8,39	И,9
Hs 578Т	Молочная железа	519,5	0,363	8,49
MCF7	Молочная железа	1292,5	10,4	3,82
MDA-MB-157	Молочная железа	>10000	>1000	0,389
MDA-MB-231	Молочная железа	>10000	17,5	4,86
MDA-MB-436	Молочная железа	>10000	14,7	1,41
MDA-MB-453	Молочная железа	>10000	4,2	23,9
MDA-MB-468	Молочная железа	9917,5	3,07	и,з
SK-BR-3	Молочная железа	301	2,66	4,52
NCI-H522	Легкие	713	0,48	14,9
NCI-H23	Легкие	160	0,22	6,97
A549	Легкие	>10000	0,163	4,82

Результаты.

Соединение 1 в качестве единственного средства ингибируют рост 7/19 клеточных линий рака молочной железы и 2/3 клеточных линий рака легких, с IC₅₀ ниже 1000 нМ (табл. 1).

Паклитаксел в качестве единственного средства ингибирует рост 17/19 клеточных линий рака молочной железы и 3/3 клеточных линий рака легких, с IC₅₀ ниже 1000 нМ.

В комбинации, лечение с применением соединения 1 и паклитаксела вызывает синергическое ингибирование роста (то есть, оценка синергизма выше 2 (Lehar и др., 2009)) в 16/19 клеточных линий рака молочной железы и 3/3 клеточных линий рака легких (табл. 1). В 11 клеточных линиях, синергический эффект является заметным, с оценками синергизма выше 6. Важно, что синергизм не зависит от антипролиферативных эффектов отдельно взятого средства, и синергические эффекты наблюдаются для широкого диапазона концентрации отдельно взятых средств (фиг. 1-3), что должно являться полезным in vivo касательно гибкости для уровней и схем дозирования.

Пример 2. Влияние in vitro на пролиферацию комбинации MCL-1 ингибитора (соединение 2) с паклитакселем на клеточных линий рака молочной железы и легких.

Влияние на пролиферацию комбинации MCL-1 ингибитора (соединение 2) с паклитакселем оценивали на панели 2 клеточных линий рака молочной железы (MDA-MB-453 и MDA-MB-468) и одной клеточной линии рака легких (H522).

Материалы и методы.

Клеточные линии получали и поддерживали в основной среде, дополненной фетальной бычьей сывороткой, как указано в табл. 2. Дополнительно, все питательные среды содержали пенициллин (100

- 9 040162

МЕ/мл), стрептомицин (100 мкг/мл) и L-глутамин (2 мМ).

Клеточные линии культивировали при 37°C в увлажненной атмосфере, содержащей 5% CO₂, и распространяли в T-150 колбах. Во всех случаях клетки размораживали из замороженных стоков, пропускали через > 1 пассаж, используя подходящие разведения, подсчитывали и оценивали их жизнеспособность, используя CASY счетчик-клеток перед высеванием 150 мкл/лунку при плотностях, указанных в табл. 2, в планшеты на 96 лунок.

Все клеточные линии определяли как не содержащие микоплазматических загрязнений с помощью собственных методов.

Готовили маточные растворы соединений при концентрации 5 мМ в ДМСО и хранили при -20°C.

Для анализа активности соединений в виде отдельно взятого средства или в комбинации, клетки высевали и обрабатывали семи или восьми 3,16-кратные серийные разведения для каждого диспергированого соединения, либо индивидуально или в возможных перестановках в шахматном порядке, непосредственно в планшетах для анализа клеток, как указано на фиг. 5 и 6. Влияния отдельно взятых средств, а также их комбинаций в шахматном порядке, на жизнеспособность клеток оценивали после инкубирования в течение 3 дней при 37°C/5% CO₂ путем количественного определения клеточных уровней АТФ, используя CellTiterGlo в количестве 75 мкл реагента/лунку. Осуществляли по меньшей мере два независимых эксперимента, каждый из них осуществляли в двух повторах. Люминесценцию количественно определяли на многоцелевом планшет-ридере.

Рассчитывали IC₅₀ для отдельных взятых средств, используя стандартную подгонку кривой по четырем параметрам. Оценивали потенциальные синергетические взаимодействия между комбинациями соединений, используя 2D матрикс избытка ингибирования в соответствии с моделью аддитивности Loewe и представляли в виде Оценки Синергизма (Lehar и др. 2009). Все расчеты осуществляли, используя программное обеспечение Clalice™ Bioinformatics, доступное на вебсайте Horizon.

Время удвоения, указанное в табл. 2, представляет собой среднее значение времени удвоения, полученное в различных пассажах (в T-150 колбах), проведенных из размороженных клеток при их высевании в планшеты на 96 лунки.

Оценка синергизма

SS ~ 0 —► Аддитивный

SS >1 —> Слабый синергизм

SS >2 —► Синергизм

Таблица 2. Условия идентификации и анализов для клеточных линий, используемых в комбинированных экспериментах

Клеточная линия	Просихождение	Среда	%FBS	Источник	Время удвоения (часы)	Количество высеянных клеток /лунку
MDA-MB-453	Молочная железа	L-15	10	АТСС	41,4	15000
MDA-MB-468	Молочная железа	L-15	20	АТСС	34,3	30000
Н522	Легкие	RPMI	10	АТСС	67,2	30000

Таблица 3. Указаны IC₅₀ значения для отдельно взятого средства для соединения 2 и паклитаксела. Соединения инкубировали с клетками в течение 3 дней

Клеточная линия	Соединение 2	Паклитаксел
Исх. КОНЦ. [мкМ]	1С₅₀[мкМ]	Исх. КОНЦ. [мкМ]	1С₅₀[мкМ]
MDA-MB-453	2,00	> 2	1,0	> 1
MDA-MB-468	2,00	> 2	1,0	0,0009
Н522	2,00	0,140	0,01	0,0002

- 10 040162

Таблица 4. Указаны оценки синергизма для комбинации соединения 2 и паклитаксела.

Взаимодействия считаются синергическими, если наблюдается оценка > 2,0. Указаны исходные концентрации соединений, среднее максимального ингибирования и стандартное отклонение (со) оценок синергизма. Соединения инкубировали с клетками в течение 3 дней

Клеточная линия	Соединение 2	Паклитаксел	Комбинация
Исх. конц. [мкМ]	Среднее Макс. Инг.	Исх. конц. [мкМ]	Среднее Макс. Инг.	Среднее Оценки синергизма	Погрешность оценки синергизма
		[%]		[%]	(SS)	(со)
MDA-MB-453	2,0	21,0	1,00	37,0	16,9	0,5
MDA-MB-468	2,0	24,0	1,00	75,0	6,5	0,2
H522	2,0	92,0	0,01	61,0	3,7	0,6

Результаты.

Соединение 2 в качестве единственного средства ингибирует рост 1/3 тестируемых клеточных линий, с IC₅₀ 140 нМ для клеточной линии H522 (табл. 3).

Паклитаксел в качестве единственного средства ингибирует рост 2/3 тестируемых линий, с IC₅₀ ниже 1 нМ.

В комбинации, лечение с применением соединения 2 и паклитаксела вызывает синергическое ингибирование роста (то есть оценка синергизма выше 2 (Lehar и др., 2009)) в трех тестируемых клеточных линиях (табл. 4). В 2 клеточных линиях, синергический эффект является заметным, с оценками синергизма 6,5 и 16,9. Важно, что синергизм не зависит от антипролиферативных эффектов отдельно взятого средства, и синергические эффекты наблюдаются для широкого диапазона концентрации отдельно взятых средств (фиг. 4 и 5), что должно являться полезным in vivo касательно гибкости для уровней и схем дозирования.

Пример 3. Синергизм между MCL-1 ингибитором и доцетакселом in vitro.

Изобретатели исследовали, будет ли MCL-1 ингибитор (соединение 2) проявлять синергетические действия с агентами, которые в настоящее время используются для лечения TNBC. Соединение 2 комбинировали с доцетакселом в SK-BR-3 клетках.

Материалы и методы.

Клеточные линии. Клеточную линию рака молочной железы SK-BR-3 поддерживали в RPMI-1640 плюс GlutaMAX-1 (Gibco), дополненной 10% фетальной бычьей сывороткой (FCS) и 10 мкг/мл инсулина. Для исследования жизнеспособности, клетки высевали в количестве 2х10⁵ клеток/мл в планшеты на 96 лунок, в RPMI-1640 среду (Gibco), дополненную с применением 10% FCS и 10 мкг/мл инсулина, и обрабатывали возрастающими концентрациями соединения 2.

Жизнеспособность клеток. Жизнеспособность клеток оценивали с использованием анализа люминесценции Cell Titer Glo (Promega) согласно инструкциям производителя. Применяли ингибитор каспазы QVD-OPh гидрат с широким спектром действия (Sigma-Aldrich) при концентрации 10 мкМ. Вытеснение йодида пропидия (5 мкг/мл) анализировали путем проточной цитометрии. Для исследования клеток in vitro для определения синергизма между различными лекарственными средствами, определяли воздействия комбинаций, используя независимый метод Bliss (Prichard и др., Antimicrobial Agents and Chemotherapy 1991, 35, 1060-5).

Результаты.

Доцетаксел и MCL-1 ингибиторы проявляют заметный синергизм при очень низких концентрациях обеих компонентов. В особенности, доцетаксел и соединение 2 проявляют заметный синергизм при очень низких концентрациях доцетаксела (2 нМ) и соединения 2 (31 нМ) (фиг. 6 и 7). Ингибирование каспаз с помощью пан-каспазного ингибитора QVD-OPH эффективно блокирует клеточную гибель, подтверждая, что клеточная гибель обуславливается апоптозом (фиг. 6).

Пример 4. MCL-1 ингибирование сенсибилизирует PDX опухоли к лечению таксаном в условиях in vivo.

Поскольку в анализах in vitro было установлено, что клеточные линии рака молочной железы являются чувствительными к соединению 2 в комбинированной терапии, на следующем этапе мы определяли их терапевтический эффект in vivo на трех моделях PDX, представляющих собой три TNBC (110T, 838T и PDX OD-BRE-0589).

Материалы и методы.

Ткани рака молочной железы человека получали от давших согласие пациентов из Royal Melbourne Hospital Tissue Bank, Victorian Cancer Biobank и Georges-Francois Leclerc Center с релевантным разрешением комиссии по биомедицинское этике. Разрешение по этике и проведению клинических исследований было получено от Комитета по этике исследований на людях Walter and Eliza Hall Institute (WEHI) и

- 11 040162 из Комитета по этике исследований на людях Georges-Francois Leclerc Center. NOD SCID IL2 нокаутные мыши по гамма рецептору или SCID мышей разводили и поддерживали в соответствии с правилами, принятыми в учреждении. Все эксперименты на животных получили разрешение Комитета по контролю этических норм обращения с животными WEHI и Servier Research Institute (IdRS).

Соединение 2 (25 мг/кг) или его наполнитель инъецировали в/в еженедельно в течение шести недель. Соединение 2 растворяли в 20% (2-гидроксипропил)-в-циклодекстрине и 25 мМ соляной кислоте. Доцетаксел (10 мг/кг в/б) или его наполнитель приготавливали, как было описано ранее (Oakes и др., Proceedings of the National Academy of Sciences of the USA 2012, 109, 2766-71) и инъецировали в/б еженедельно за один день до введения соединения 2. За мышами наблюдали относительно развития опухоли три раза в неделю и размер опухоли измеряли, используя электронные штангенциркули. Объем опухоли оценивали путем измерения минимального и максимального диаметра опухоли, используя формулу: (минимальный диаметр)²(максимальный диаметр)/2.

После развития опухоли мышей рандомизировали на группы для лечения. Лечение начинали, когда объем опухоли достигал 80-120 мм³. Рандомизацию и измерение опухолей проводили, используя Study Director программное обеспечение (v 3.0, studylog). Мышей умертвляли при первом измерении, при котором объем опухоли превышал 600 мм³ или резком ухудшении состояния здоровья животного, которые не было обусловлено прогрессированием заболевания или токсичностью лекарственного средства (проверка мышей).

Результаты.

Соединение 2 отдельно является неэффективным для ингибирования роста опухоли. Однако мы наблюдали значительно улучшенную активность в комбинации с доцетакселом по сравнению с доцетакселом, вводимым в виде отдельно взятого средства, что приводит к существенно улучшенному выживанию животных на трех PDX моделях (фиг. 8).

Эти результаты указывают на то, что MCL-1 ингибиторы в комбинации с таксановыми соединения, вероятно, существенно усиливают ответ опухоли на лечение и клинический исход.

Пример 5. MCL-1 ингибитор в комбинации с доцетакселом хорошо переносится в условиях in vivo.

NOD SCID IL2 нокаутных мышей по гамма рецептору лечили с применением доцетаксела (15 мг/кг, один раз в/б) и соединение 2 в дозе 25 или 50 мг/кг (3 мыши на группу, в/в инъекции, один раз в неделю в течение 3 недель). За их весом тела наблюдали три раза в неделю в течение 3 недель.

Соединение 2 в комбинации с доцетакселом хорошо переносится и не индуцирует существенную потерю веса тела (фиг. 9).

Пример 6. Эффективность соединения 1 в комбинации с паклитакселем на модели MDA-MB-231 ксенотрансплантата молочной железы у бестимусных крыс.

Методы.

В этом исследовании оценивали противоопухолевую активность и переносимость соединения 1 в комбинации с паклитакселем на модели тройного отрицательного рака молочной железы (TNBC), MDAMB-231, на самках NTac:NIH-Whn бестимусных крыс (Taconic).

Соединение 1 (свободное основание) и паклитаксел (Sandoz) использовали в этих исследованиях. Паклитаксел разводили согласно инструкциям производителя с помощью стерильного 5% (мас./об.) раствора глюкозы до 1,5 мг/мл для введения 7,5 мг/кг в дозируемом объеме 5 мл/кг [конечная концентрация этанола и Cremophor EL составляла 10 и 15%, соответственно в 5% (мас./об.) растворе глюкозы]. Соединение 1 приготавливали в липосомальном препарате (Novartis) в количестве 5 мг/мл для введения дозы 50 мг/кг в дозируемом объеме 10 мл/кг.

MDA-MB-231, клеточную линию тройного отрицательного рака молочной железы, получали из клеточного банка ATCC. Клетки культивировали при 37°C в атмосфере 5% CO2 на воздухе в DMEM среде с высоким содержинием глюкозы (BioConcept Ltd. Amimed), дополненной 10% FCS (BioConcept Ltd. Amimed, № 2-01F36-I) и 4 мМ L-глутамином (BioConcept Ltd. Amimed, №5-10K00-H). Для получения MDA-MB-231 ксенотрансплантатов, клетки собирали и ресуспендировали в HBSS (Gibco, №14175) и смешивали с Matrigel (BD Bioscience, №354234) (1:1 об./об.) перед инъецированием 200 мкл, содержащих 1х10⁷ клеток подкожно в правые лапы животных, которых анестезировали изофлураном. За 24 ч до инокуляции клеток всех животных облучали в дозе 5 Гр в течение 2 мин, используя γ-излучатель. За ростом опухоли наблюдали регулярно после инокуляции клеток и животных рандомизировали на группы для лечения (n=7-8) со средним объемом опухоли приблизительно 400 мм³.

Группы лечили с помощью:

1) наполнителя, используемого для приготовления препарата паклитаксела, в/в плюс липосомальный наполнитель в/в; или

2) 7,5 мг/кг в/в болюс паклитаксела плюс липосомальный наполнитель в/в; или

3) наполнителя, используемого для приготовления препарата паклитаксела в/в плюс соединение 1 в дозе 50 мг/кг в/в; или

4) 7,5 мг/кг в/в паклитаксела плюс 50 мг/кг в/в соединения 1.

Наполнитель для паклитаксела или паклитаксел вводили один раз в неделю (QW) в виде медленной

- 12 040162 болюсной дозы через хвостовую вену за 0,5 ч или 16 ч преед наполнителем для соединения 1 или самим соединением 1 в липосомальном препарате и их вводили путем в/в инфузии в течение 15 мин в хвостовую вену. Для болюсных введений и 15-ти минутных инфузий животных анестезировали приблизительно в течение 5 и 25 мин, соответственно с помощью изофлурана/O₂.

Объемы опухолей измеряли, используя штангенциркули 2-3 раза в неделю. Размер опухоли, в мм³, рассчитывали согласно формуле:

(LxW²xn/6), где W - ширина и L - длина опухоли. Животных также взвешивали 2-3 раза в неделю и часто исследовали для обнаружения признаков каких-либо побочных эффектов. Данные опухоли и изменения веса тела анализировали статистически, используя GraphPad Prism 7.00 (программное обеспечение GraphPad). Если расхождения в данных были нормально распределены, то данные анализировали, используя однофакторный дисперсионный анализ с апостериорным критерием Даннетта для сравнения леченной относительно контрольной группы. Ретроспективный анализ с критерием Тьюки использовали для межгруппового сравнения. В других случаях, использовали ранговый критерий Крускала-Уоллиса ретроспективный тест Данна. Если это является подходящим, то результаты представлены в виде среднего ± СПС.

В качестве критерия эффективности рассчитывали значения %T/C после окончания эксперимента в соответствии с (Аобъема опухоли^{леченные}/Аобъема опухоли^{контроль})*100

Регрессию опухоли рассчитывали в соответствии с /а г леченные/ г леченной в начелеч & ι па (Лобъема опухоли /объем опухоли )* 100 где Δобъемов опухолей представляют собой среднее значение объема опухоли в день оценки минус средний объем опухоли в начале эксперимента.

Результаты: эффективность и переносимость.

Соединение 1 50 мг/кг, дозированное через 0,5 ч или 16 ч после наполнителя для паклитаксела [этанол:Cremophor EL:5% (мас./об.) глюкоза (10:15:75%)] хорошо переносится.

Соединение 1 (50 мг/кг QW) в липосомальном препарате не проявляет эффективности на модели MDA-MB-231 ксенотрансплантата после QWx7 в/в инфузионное введение (фиг. 10 и 12).

Паклитаксел 7,5 мг/кг вызывает задержку роста опухоли (T/C% = 34%) и существенно (p < 0,05) отличается от группы, обработанной наполнителем (фиг. 10 и 12).

Комбинация 7,5 мг/кг в/в паклитаксела плюс 50 мг/кг в/в соединения 1, вводимая с интервалом 0,5 ч или 16 ч, вызывает 82 и 59% регрессию, соответственно в день 28 после начала лечения на выживание животных (3/8 в обеих группах) (фиг. 10). В день 46 от начала лечения, регрессия опухоли составила 92 и 81%, на выживание животных 2/8 и 3/8 соответственно. Объем опухоли у животных у обеих из этих комбинированных групп существенно отличался (p < 0,05) от такого у животных, леченных отдельно с паклитакселем или соединением 1 в день 28 и 46 (фиг. 10).

Комбинация 7,5 мг/кг в/в паклитаксела плюс 25 мг/кг в/в соединения 1, вводимая через 16 ч, вызывает стаз опухоли (15% регрессия в день 28 и T/C% значения составили 2% в день 49 после начала лечения) у выживших (7/7) животных (фиг. 12). Эта схема дозирования хорошо переносилась на основании изменений веса тела и клинических признаков.

Комбинация 3,75 мг/кг в/в паклитаксела плюс 50 мг/кг в/в соединения 1, вводимая через 16 ч, вызывает опухолестаз вплоть до дня 35 (3% регрессию в день 28 и T/C% значения составляли 20% в день 49 после начала лечения) у выживших (7/7) животных (фиг. 12). Эта схема дозирования хорошо переносилась на основании изменений веса тела и клинических признаков (фиг. 11 и 13). Эти данные указывают на то, что комбинация паклитаксела и соединения 1 имеет заметный положительный эффект на противоопухолевую активность по сравнению с любым отдельно используемым средством.

Пример 7. MCL-1 ингибирование сенсибилизирует PDX опухоли к таксановому лечению in vivo.

Мы исследовали терапевтические эффекты в условиях in vivo соединения 1 в комбинированной терапии, in TNBC 110T PDX модель.

Материалы и методы.

Ткани рака молочной железы человека получали от давших согласие пациентов из Royal Melbourne Hospital Tissue Bank, Victorian Cancer Biobank и Georges-Francois Leclerc Center релевантным разрешением комиссии по биомедицинское этике. Разрешение по этике и проведению клинических исследований было получено от Комитета по этике исследований на людях Walter and Eliza Hall Institute (WEHI) и из Комитета по этике исследований на людях Georges-Francois Leclerc Center. NOD SCID IL2 нокаутных мышей по γ рецептору или SCID мышей разводили и поддерживали в соответствии с правилами, принятыми в учреждении. Все эксперименты на животных получили разрешение Комитета по контролю этических норм обращения с животными WEHI и Servier Research Institute (IdRS).

Группу из 40 самок NSG мышей затравливали размороженными суспензиями единичных клеток и раннего пассажа опухолей молочной железы человека (TNBC PDX110). Вкратце, 100000 клеток ресуспендировали в 10 мкл буфера для трансплантации (50% фетальной бычьей сыворотки, 10% 0,04% раствора трипанового синего и 40% PBS) и Matrigel с уменьшенным количеством фактора роста [BD] при

- 13 040162 соотношении 3:1, и инъецировали в очищенные жировые подушки молочной железы самкам мышей

NOD-SCID-IL2Ry_c’^/_ в возрасте 3 или 4 недели. За мышами наблюдали относительно развития опухоли три раза в неделю и размер опухоли измеряли, используя электронные штангенциркули. Объем опухоли оценивали путем измерения минимального и максимального диаметра опухоли, используя формулу:

(минимальный диаметр)²(максимальный диаметр)/2.

После достижения опухолями объема 60-110 мм³ мышей рандомизировали на группы для лечения и проводили лечение. Доцетаксел или его наполнитель приготавливали путем растворения маточного раствора (20 мг/мл) с помощью PBS и инъецировали в/б каждый 21 день в течение двух циклов лечения. Продолжительность терапии указана вертикальной чертой. Соединение 1 растворяли в 20% (2гидроксипропил)-в-циклодекстрина и 25 мМ соляной кислоте. Соединение 1 (15 мг/кг) или его наполнитель инъецировали в/в два раза в неделю в течение шести недель. Мышей умертвляли при первом измерении, при котором объем опухоли превышал 600 мм³, или если их состояние здоровья резко ухудшалось вследствие других причин, отличающихся от прогрессирования заболевания или токсичности лекарственного средства (цензурированное событие), n=9-10 мышей на леченную группу.

Результаты.

Соединение 1 отдельно является неэффективным для ингибирования роста опухоли. Однако мы наблюдали значительно улучшенную активность в комбинации с доцетакселом по сравнению с доцетакселом, вводимым в виде отдельно взятого средства, что приводит к существенно улучшенному выживанию животных на PDX модели (фиг. 14).

Пример 8. Противоопухолевая активность доцетаксела и соединения 1 самкам мышей SCID, несущих имеющую происхождение от пациента TNBC модель.

В этом исследовании оценивали противоопухолевую активность соединения 1 в комбинации с доцетакселом на TNBC PDX модели OD-BRE-00589, самкам мышей SCID.

Методы.

Доцетаксел приготавливали в виде препарата в 5% этаноле, 5% PS80 и 90% глюкозе в концентрации 0,67 мг/мл для введения 10 мг/кг. Соединение 1 приготавливали в липосомальном препарате (Novartis) в концентрации 7,5 мг/мл для введения 70 мг/кг.

OD-BRE-00589 представляет собой тройной отрицательный рак молочной железы PDX, полученный из IMODI консорциума. Предоставивших согласие пациентов получали из Комитета по этике исследований на людях Georges-Francois Leclerc Center. Их прививали на SCID мышах в виде фрагментов в объеме 27 мм³.

За ростом опухоли наблюдали регулярно после прививания фрагментов и животных рандомизировали через 11 дней после прививания на леченные группы (n=8) со средним объемом опухоли приблизительно 200 мм³. Контрольную группу не подвергали лечению, а другие группы лечили с помощью:

1) 70 мг/кг соединения 1 в/в, или

2) 10 мг/кг доцетаксела в/в, или

3) 10 мг/кг доцетаксела в/в с последующим через 30 мин введением 70 мг/кг соединения 1, или

4) 10 мг/кг доцетаксела в/в с последующим через 72 ч введением 70 мг/кг соединения 1.

Введения осуществляли один раз в хвостовую вену.

Объемы опухолей измеряли, используя штангенциркули 2-3 раза в неделю. Объем опухоли рассчитывали, используя формулу:

длинахширина²/2.

Животных также взвешивали 2-3 раза в неделю и часто исследовали для обнаружения признаков каких-либо побочных эффектов.

Результаты

Соединение 1 отдельно является неэффективным для ингибирования роста опухоли. Однако мы наблюдали значительно улучшенную активность в комбинации с доцетакселом по сравнению с доцетакселом, вводимым в виде отдельно взятого средства, что приводит к существенному улучшению противоопухолевой активности на PDX модели (фиг. 15).

Пример 9. Исследования эффективности соединения 1 в комбинации с паклитакселем на PDX модели, резистентной к доцетакселу.

Методы.

Тестировали PDX модели, резистентность которых к доцетакселу была подтверждена in vivo. Каждая леченная группа включала 5 самок швейцарских бестимусных мышей в возрасте от 6 до 8 недель. Лечение начинали, когда ксенотрансплантаты достигали среднего объема опухоли ~ 120-150 мм³. После этого группы случайно подвергали воздействию различных лечений. Количество привитых животных зависело от гомогенности роста опухоли. Приготовленное в липосомальном препарате, соединение 1

- 14 040162 вводили внутривенно в дозе 70 мг/кг один раз в неделю. Препарат необходимо готовить экстемпорально.

паклитаксел, разведенный в 0,9% NaCl, вводили в/б в дозе 25 мг/кг. Паклитаксел вводили QW за 16 ч до введения соединения 1. Схемы введения для различных . лечений определены, как показано ниже

Группа	Доза (мг/кг)	Схема
Контроль (наполнитель)	-	-
Соединение 1	70	в/в, Q7D, 4н: D1-D8-D15-D22
Паклитаксел	25	в/б, Q7D, 4н: D1-D8-D15-D22
Соединение 1 + паклитаксел	Соединение 1: 70 Паклитаксел: 25	Q7D, 4н Паклитаксел, в/б: D1-D8-D15-D22 Соединение 1, в/в: D1-D8-D15-D22

Размеры опухоли измеряли два раза в неделю и вес индивидуальных мышей измеряли один раз в неделю. Лечения осуществляли до тех пора, пока усредненный объем опухоли наиболее отвечаемой группы начинал повторно расти. За мышами наблюдали после остановки лечения для сравнения времени рецидивирования между группами. Используя программное обеспечение Statview, сравнивали объем опухоли и/или относительный объем опухоли (RTV, соотношение объема во время t, разделенное на исходный объем в день 1 и умноженный на 100), оптимальное ингибирование роста (соотношение RTV (х 100) в леченной группе, разделенное на RTV в контролях), задержку роста (время в днях, необходимое для увеличения в 4 раза исходного объема опухоли 200 мм³ в леченной группе и контрольной группе) и изменения веса тела.

Если наблюдался рецидив после лечения с применением паклитаксела, опухоли повторно подвергали воздействию комбинации соединения 1 + паклитаксел. Это осуществляли либо путем включения 10 мышей в группу, леченную паклитакселем, и затем лечение мышей с рецидивирующей опухолью отдельно паклитакселем (5 животных) или в комбинации (5 животных), или путем использования нерандомизированных мышей из исследования эффективности. Если наблюдали исходную ответную реакцию на паклитаксел, то дополнительных животных, оставленных после рандомизации, включали для этого исследования.

Результаты.

Соединение 1 отдельно является неэффективным для ингибирования роста опухоли. Однако мы наблюдали значительно улучшенную активность в комбинации с паклитакселем по сравнению с паклитакселем, вводимым в виде отдельно взятого средства, что приводит к существенному улучшению противоопухолевой активности на PDX моделм, резистентной к таксановому соединению.

Эти результаты указывают на то, что MCL-1 ингибиторы в комбинации таксановыми соединения, вероятно, существенно усиливают ответ опухоли на лечение и клинический исход.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Комбинация для лечения злокачественного новообразования, содержащая:

(a) MCL-1 ингибитор, который представляет собой (2R)-2-{[(5S_a)-5-{3-хлор-2-метuл-4-[2-(4метилпиперазин-1-ил)этоkси]фенил}-6-(5-фторфуран-2-ил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]оkси}-3-(2-{[1(2,2,2-трифторэтил)-1H-пиразол-5-ил]метоκси}фенил)пропановую кислоту или (2R)-2-{[(5S_a)-5-{3-хлор2-метил-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2-(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропановую кислоту, или их соли присоединения с фармацевтически приемлемой кислотой или основанием; и (б) таксановое соединение, которое представляет собой паклитаксел или доцетаксел, для одновременного, последовательного или раздельного применения.
2. Комбинация по п.1, где MCL-1 ингибитор представляет собой (2R)-2-{[(5S_a)-5-{3-хлор-2-метил-4[2-(4-метилпиперазuн-1-ил)этокси]фенил}-6-(5-фторфуран-2-ил)тиено[2,3-d]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2{[1 -(2,2,2-трифторэтил)-1H-пиразол-5-ил]метокси} фенил)пропановую кислоту.
3. Комбинация по п.1, где MCL-1 ингибитор представляет собой (2R)-2-{[(5S_a)-5-{3-хлор-2-метил-4[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]фенил}-6-(4-фторфенил)тиено[2,3-б]пиримидин-4-ил]окси}-3-(2-{[2(2-метоксифенил)пиримидин-4-ил]метокси}фенил)пропановую кислоту.
4. Комбинация по п.1, дополнительно содержащая один или несколько наполнителей.
5. Применение комбинации по п.1 для лечения рака молочной железы или рака легких.
6. Применение по п.5, где MCL-1 ингибитор и таксановое соединение обеспечиваются в количествах, которые совместно терапевтически эффективны для лечения рака молочной железы или рака легких.
7. Применение по п.5, где MCL-1 ингибитор и таксановое соединение обеспечиваются в количествах, которые синергетически эффективны для лечения рака молочной железы или рака легких.
8. Применение по п.5, где MCL-1 ингибитор и таксановое соединение обеспечиваются в синергетически эффективных количествах, что предоставляет возможность уменьшения дозы, требуемой для каж-

- 15 040162 дого соединения для лечения рака молочной железы или рака легких, в то же время обеспечивая эффективное лечение злокачественного новообразования, с уменьшением побочных эффектов.
9. Фармацевтическая композиция, содержащая комбинацию в соответствии с любым из пп.1-4, в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми наполнителями.
10. Применение фармацевтической композиции по п.9 для лечения рака молочной железы или рака легких.
11. Применение комбинации по п.1, для приготовления лекарственного средства для лечения рака молочной железы или рака легких.
12. Лекарственное средство, содержащее, раздельно или совместно:

(a) MCL-1 ингибитор, как определено в п.1; и (б) таксановое соединение, как определено в п.1, для одновременного, последовательного или раздельного введения, и где MCL-1 ингибитор и таксановое соединение обеспечиваются в эффективных количествах для лечения рака молочной железы или рака легких.
13. Способ лечения рака молочной железы или рака легких, включающий введение совместно терапевтически эффективного количества:

(a) MCL-1 ингибитора, как определено в п.1; и (б) таксанового соединения, как определено в п.1, субъекту, который в этом нуждается.
14. Способ по п.13, где доза MCL-1 ингибитора во время комбинированного лечения составляет от 25 до 1500 мг.
15. Способ по п.13, где MCL-1 ингибитор вводят во время комбинированного лечения один раз в неделю.
16. Способ по п.13, где MCL-1 ингибитор и таксановое соединение вводят внутривенно.
17. Способ по п.13, где MCL-1 ингибитор вводят перорально и таксановое соединение вводят внутривенно.
18. Способ сенсибилизации пациента, который (I) рефракторный по меньшей мере к одному химиотерапевтическому лечению, или (II) имеет рецидив после лечения с применением химиотерапии, или в обоих случаях (I) и (II), где способ включает введение совместно терапевтически эффективного количества:

(a) MCL-1 ингибитора, как определено в п.1; и (б) таксанового соединения, как определено в п.1, указанному пациенту.