EA031546B1 - Селективные ингибиторы bace1 - Google Patents
Селективные ингибиторы bace1 Download PDFInfo
- Publication number
- EA031546B1 EA031546B1 EA201791684A EA201791684A EA031546B1 EA 031546 B1 EA031546 B1 EA 031546B1 EA 201791684 A EA201791684 A EA 201791684A EA 201791684 A EA201791684 A EA 201791684A EA 031546 B1 EA031546 B1 EA 031546B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- mmol
- added
- solution
- scheme
- fluorophenyl
- Prior art date
Links
- 229940125759 BACE1 protease inhibitor Drugs 0.000 title 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 148
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 44
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 76
- 125000006002 1,1-difluoroethyl group Chemical group 0.000 claims description 38
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 claims description 23
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 21
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 11
- 125000001559 cyclopropyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])* 0.000 claims description 9
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 claims description 8
- 208000027061 mild cognitive impairment Diseases 0.000 claims description 8
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 7
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 4
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 125000006001 difluoroethyl group Chemical group 0.000 claims 1
- PQBPFJLVWKWJHB-UHFFFAOYSA-N pyrazine-2-carboxamide hydrate Chemical compound O.N1=C(C=NC=C1)C(=O)N PQBPFJLVWKWJHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 210
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 163
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 120
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 107
- -1 racemates Chemical class 0.000 description 100
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 72
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 66
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 62
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 59
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 56
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 54
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 54
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 54
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 52
- BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N Methyl tert-butyl ether Chemical compound COC(C)(C)C BZLVMXJERCGZMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 46
- 239000000047 product Substances 0.000 description 46
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 45
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 44
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 44
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 37
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 37
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 35
- 101000894895 Homo sapiens Beta-secretase 1 Proteins 0.000 description 30
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 30
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 30
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical class CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 28
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 28
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 28
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 27
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 26
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 26
- 102100021257 Beta-secretase 1 Human genes 0.000 description 24
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 24
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 23
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 22
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical class [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 20
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 20
- 101000894883 Homo sapiens Beta-secretase 2 Proteins 0.000 description 19
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 19
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 18
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- AFABGHUZZDYHJO-UHFFFAOYSA-N 2-Methylpentane Chemical compound CCCC(C)C AFABGHUZZDYHJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 102100021277 Beta-secretase 2 Human genes 0.000 description 16
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- AGIJRRREJXSQJR-UHFFFAOYSA-N 2h-thiazine Chemical compound N1SC=CC=C1 AGIJRRREJXSQJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N Acetaldehyde Chemical compound CC=O IKHGUXGNUITLKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 13
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 13
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 13
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 12
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N dimethylformamide Substances CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 11
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 11
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 11
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 11
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 11
- 125000005336 allyloxy group Chemical group 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 10
- JWUJQDFVADABEY-UHFFFAOYSA-N 2-methyltetrahydrofuran Chemical compound CC1CCCO1 JWUJQDFVADABEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N amyloid-beta polypeptide 42 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N 0.000 description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 9
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 9
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 9
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 9
- PAQZWJGSJMLPMG-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-tripropyl-1,3,5,2$l^{5},4$l^{5},6$l^{5}-trioxatriphosphinane 2,4,6-trioxide Chemical compound CCCP1(=O)OP(=O)(CCC)OP(=O)(CCC)O1 PAQZWJGSJMLPMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 8
- 101710137189 Amyloid-beta A4 protein Proteins 0.000 description 8
- 101710151993 Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 description 8
- 102100022704 Amyloid-beta precursor protein Human genes 0.000 description 8
- KZMGYPLQYOPHEL-UHFFFAOYSA-N Boron trifluoride etherate Chemical compound FB(F)F.CCOCC KZMGYPLQYOPHEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- WTDHULULXKLSOZ-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine hydrochloride Chemical compound Cl.ON WTDHULULXKLSOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 238000002866 fluorescence resonance energy transfer Methods 0.000 description 8
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 8
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- PQIOSYKVBBWRRI-UHFFFAOYSA-N methylphosphonyl difluoride Chemical group CP(F)(F)=O PQIOSYKVBBWRRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 8
- KJIFKLIQANRMOU-UHFFFAOYSA-N oxidanium;4-methylbenzenesulfonate Chemical compound O.CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 KJIFKLIQANRMOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 8
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 8
- APOYTRAZFJURPB-UHFFFAOYSA-N 2-methoxy-n-(2-methoxyethyl)-n-(trifluoro-$l^{4}-sulfanyl)ethanamine Chemical compound COCCN(S(F)(F)F)CCOC APOYTRAZFJURPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 7
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 7
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 7
- CTAPFRYPJLPFDF-UHFFFAOYSA-N isoxazole Chemical compound C=1C=NOC=1 CTAPFRYPJLPFDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000000634 powder X-ray diffraction Methods 0.000 description 7
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 7
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 7
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 7
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 7
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 7
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 6
- MZRVEZGGRBJDDB-UHFFFAOYSA-N N-Butyllithium Chemical compound [Li]CCCC MZRVEZGGRBJDDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 6
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 6
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- IUYHWZFSGMZEOG-UHFFFAOYSA-M magnesium;propane;chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].C[CH-]C IUYHWZFSGMZEOG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 6
- FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M sodium iodide Chemical compound [Na+].[I-] FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WJKHJLXJJJATHN-UHFFFAOYSA-N triflic anhydride Chemical compound FC(F)(F)S(=O)(=O)OS(=O)(=O)C(F)(F)F WJKHJLXJJJATHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 101710138990 Collectrin Proteins 0.000 description 5
- 102100033635 Collectrin Human genes 0.000 description 5
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- WETWJCDKMRHUPV-UHFFFAOYSA-N acetyl chloride Chemical compound CC(Cl)=O WETWJCDKMRHUPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000012346 acetyl chloride Substances 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 5
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 239000002585 base Substances 0.000 description 5
- CPEKAXYCDKETEN-UHFFFAOYSA-N benzoyl isothiocyanate Chemical compound S=C=NC(=O)C1=CC=CC=C1 CPEKAXYCDKETEN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 5
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 5
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 5
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 5
- IKGLACJFEHSFNN-UHFFFAOYSA-N hydron;triethylazanium;trifluoride Chemical compound F.F.F.CCN(CC)CC IKGLACJFEHSFNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 5
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- GRJJQCWNZGRKAU-UHFFFAOYSA-N pyridin-1-ium;fluoride Chemical compound F.C1=CC=NC=C1 GRJJQCWNZGRKAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 8-[3-(1-cyclopropylpyrazol-4-yl)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl]-3-methyl-3,8-diazabicyclo[3.2.1]octan-2-one Chemical class C1(CC1)N1N=CC(=C1)C1=NNC2=C1N=C(N=C2)N1C2C(N(CC1CC2)C)=O HBAQYPYDRFILMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KXDAEFPNCMNJSK-UHFFFAOYSA-N Benzamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CC=C1 KXDAEFPNCMNJSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007818 Grignard reagent Substances 0.000 description 4
- 239000007821 HATU Substances 0.000 description 4
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 125000002619 bicyclic group Chemical group 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 4
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 4
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 4
- CSJLBAMHHLJAAS-UHFFFAOYSA-N diethylaminosulfur trifluoride Chemical compound CCN(CC)S(F)(F)F CSJLBAMHHLJAAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 4
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 4
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 4
- 150000004795 grignard reagents Chemical class 0.000 description 4
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- GDOPTJXRTPNYNR-UHFFFAOYSA-N methyl-cyclopentane Natural products CC1CCCC1 GDOPTJXRTPNYNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000002923 oximes Chemical class 0.000 description 4
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 4
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 4
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 4
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 4
- PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M sodium-L-ascorbate Chemical compound [Na+].OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M 0.000 description 4
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 4
- VRTQPEYVMHATOA-UHFFFAOYSA-N (4-tert-butyl-2,6-dimethylphenyl)-trifluoro-$l^{4}-sulfane Chemical compound CC1=CC(C(C)(C)C)=CC(C)=C1S(F)(F)F VRTQPEYVMHATOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QBPXGTUBZXXKJO-UHFFFAOYSA-N 1,2-oxazole-4-carboxamide Chemical compound NC(=O)C=1C=NOC=1 QBPXGTUBZXXKJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CIISBYKBBMFLEZ-UHFFFAOYSA-N 1,2-oxazolidine Chemical compound C1CNOC1 CIISBYKBBMFLEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NRKYWOKHZRQRJR-UHFFFAOYSA-N 2,2,2-trifluoroacetamide Chemical compound NC(=O)C(F)(F)F NRKYWOKHZRQRJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UTZVSIXTYYWUOB-USJZOSNVSA-N 2-[(1s,2s,4as,8as)-2-hydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-3,4,4a,6,7,8-hexahydro-1h-naphthalen-1-yl]-n-methoxy-n-methylacetamide Chemical compound CC1(C)CCC[C@]2(C)[C@H](CC(=O)N(C)OC)[C@@](C)(O)CC[C@H]21 UTZVSIXTYYWUOB-USJZOSNVSA-N 0.000 description 3
- JNETZJWWXCLUKM-UHFFFAOYSA-N 4-bromo-1-fluoro-2-iodobenzene Chemical compound FC1=CC=C(Br)C=C1I JNETZJWWXCLUKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FJNAHISQPZDAEP-UHFFFAOYSA-N 5-(1,2,4-triazol-1-yl)pyrazine-2-carboxylic acid Chemical compound C1=NC(C(=O)O)=CN=C1N1N=CN=C1 FJNAHISQPZDAEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010043324 Amyloid Precursor Protein Secretases Proteins 0.000 description 3
- 102000002659 Amyloid Precursor Protein Secretases Human genes 0.000 description 3
- 108091061949 BACE1-AS Proteins 0.000 description 3
- WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M Lithium hydroxide Chemical compound [Li+].[OH-] WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- YFPVQBZFWNFJFW-UHFFFAOYSA-N S1CN=CC(=C1)C(=O)N Chemical compound S1CN=CC(=C1)C(=O)N YFPVQBZFWNFJFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 3
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N aminothiocarboxamide Natural products NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CBHOOMGKXCMKIR-UHFFFAOYSA-N azane;methanol Chemical compound N.OC CBHOOMGKXCMKIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 102000044297 human BACE1 Human genes 0.000 description 3
- 102000044294 human BACE2 Human genes 0.000 description 3
- XNXVOSBNFZWHBV-UHFFFAOYSA-N hydron;o-methylhydroxylamine;chloride Chemical compound Cl.CON XNXVOSBNFZWHBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- SHFJWMWCIHQNCP-UHFFFAOYSA-M hydron;tetrabutylazanium;sulfate Chemical compound OS([O-])(=O)=O.CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC SHFJWMWCIHQNCP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 3
- NXPHGHWWQRMDIA-UHFFFAOYSA-M magnesium;carbanide;bromide Chemical compound [CH3-].[Mg+2].[Br-] NXPHGHWWQRMDIA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 3
- 125000002524 organometallic group Chemical group 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000011755 sodium-L-ascorbate Substances 0.000 description 3
- 235000019187 sodium-L-ascorbate Nutrition 0.000 description 3
- VBXBTOGGSZJEEI-UHFFFAOYSA-M sodium;[2-(pyridine-4-carbonyl)hydrazinyl]methanesulfonate;hydrate Chemical compound O.[Na+].[O-]S(=O)(=O)CNNC(=O)C1=CC=NC=C1 VBXBTOGGSZJEEI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N teixobactin Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H]1C(N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C[C@@H]2NC(=N)NC2)C(=O)N[C@H](C(=O)O[C@H]1C)[C@@H](C)CC)=O)NC)C1=CC=CC=C1 LMBFAGIMSUYTBN-MPZNNTNKSA-N 0.000 description 3
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 3
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 3
- JRHPOFJADXHYBR-HTQZYQBOSA-N (1r,2r)-1-n,2-n-dimethylcyclohexane-1,2-diamine Chemical compound CN[C@@H]1CCCC[C@H]1NC JRHPOFJADXHYBR-HTQZYQBOSA-N 0.000 description 2
- BXJGLPROAVAGKO-QFIPXVFZSA-N (2s)-1-trityloxybut-3-en-2-ol Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(C=1C=CC=CC=1)(OC[C@@H](O)C=C)C1=CC=CC=C1 BXJGLPROAVAGKO-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 2
- FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N (E)-dacarbazine Chemical compound CN(C)\N=N\c1[nH]cnc1C(N)=O FDKXTQMXEQVLRF-ZHACJKMWSA-N 0.000 description 2
- FZENGILVLUJGJX-IHWYPQMZSA-N (Z)-acetaldehyde oxime Chemical compound C\C=N/O FZENGILVLUJGJX-IHWYPQMZSA-N 0.000 description 2
- FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxy-7-azabenzotriazole Chemical compound C1=CN=C2N(O)N=NC2=C1 FPIRBHDGWMWJEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybenzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC(O)=NC2=C1 YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKFOHTNLZOIEHZ-UHFFFAOYSA-N 2h-1,3-thiazin-2-amine Chemical compound NC1SC=CC=N1 QKFOHTNLZOIEHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VNTNANCAPVJRJP-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydrothiazin-2-amine Chemical class NN1CCC=CS1 VNTNANCAPVJRJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 4-[[(3ar,5ar,5br,7ar,9s,11ar,11br,13as)-5a,5b,8,8,11a-pentamethyl-3a-[(5-methylpyridine-3-carbonyl)amino]-2-oxo-1-propan-2-yl-4,5,6,7,7a,9,10,11,11b,12,13,13a-dodecahydro-3h-cyclopenta[a]chrysen-9-yl]oxy]-2,2-dimethyl-4-oxobutanoic acid Chemical compound N([C@@]12CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@H]5C(C)(C)[C@@H](OC(=O)CC(C)(C)C(O)=O)CC[C@]5(C)[C@H]4CC[C@@H]3C1=C(C(C2)=O)C(C)C)C(=O)C1=CN=CC(C)=C1 QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 101800001718 Amyloid-beta protein Proteins 0.000 description 2
- KHBQMWCZKVMBLN-UHFFFAOYSA-N Benzenesulfonamide Chemical compound NS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 KHBQMWCZKVMBLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910016523 CuKa Inorganic materials 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 239000012594 Earle’s Balanced Salt Solution Substances 0.000 description 2
- QIGBRXMKCJKVMJ-UHFFFAOYSA-N Hydroquinone Chemical compound OC1=CC=C(O)C=C1 QIGBRXMKCJKVMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- JRNVZBWKYDBUCA-UHFFFAOYSA-N N-chlorosuccinimide Chemical compound ClN1C(=O)CCC1=O JRNVZBWKYDBUCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940124639 Selective inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Natural products NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FZENGILVLUJGJX-UHFFFAOYSA-N acetaldehyde oxime Chemical compound CC=NO FZENGILVLUJGJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010064539 amyloid beta-protein (1-42) Proteins 0.000 description 2
- 239000011260 aqueous acid Substances 0.000 description 2
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 125000006255 cyclopropyl carbonyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 2
- 238000002050 diffraction method Methods 0.000 description 2
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 2
- 208000002854 epidermolysis bullosa simplex superficialis Diseases 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 2
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 2
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 2
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- GLXDVVHUTZTUQK-UHFFFAOYSA-M lithium;hydroxide;hydrate Chemical compound [Li+].O.[OH-] GLXDVVHUTZTUQK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- KRKPYFLIYNGWTE-UHFFFAOYSA-N n,o-dimethylhydroxylamine Chemical compound CNOC KRKPYFLIYNGWTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GNVRJGIVDSQCOP-UHFFFAOYSA-N n-ethyl-n-methylethanamine Chemical compound CCN(C)CC GNVRJGIVDSQCOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 2
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- CTSLXHKWHWQRSH-UHFFFAOYSA-N oxalyl chloride Chemical compound ClC(=O)C(Cl)=O CTSLXHKWHWQRSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 150000004714 phosphonium salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- NIPZZXUFJPQHNH-UHFFFAOYSA-N pyrazine-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CN=CC=N1 NIPZZXUFJPQHNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000009518 sodium iodide Nutrition 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 238000012799 strong cation exchange Methods 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- ZXUCBXRTRRIBSO-UHFFFAOYSA-L tetrabutylazanium;sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O.CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC.CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC ZXUCBXRTRRIBSO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N tetraphosphorus decaoxide Chemical compound O1P(O2)(=O)OP3(=O)OP1(=O)OP2(=O)O3 DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 2
- 125000004044 trifluoroacetyl group Chemical group FC(C(=O)*)(F)F 0.000 description 2
- VFJYIHQDILEQNR-UHFFFAOYSA-M trimethylsulfanium;iodide Chemical compound [I-].C[S+](C)C VFJYIHQDILEQNR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QGZNTONZSPXNTB-UHFFFAOYSA-N (2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl acetate Chemical compound CC(=O)OC(=O)OC(C)(C)C QGZNTONZSPXNTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVCHGFPKFPDHGT-NNFJYWIMSA-N (3aR,4S,6aR)-6a-(5-bromo-2-fluorophenyl)-4-(trityloxymethyl)-3,3a,4,6-tetrahydro-1H-furo[3,4-c][1,2]oxazole Chemical compound BrC=1C=CC(=C(C=1)[C@]12NOC[C@@H]1[C@H](OC2)COC(C1=CC=CC=C1)(C1=CC=CC=C1)C1=CC=CC=C1)F TVCHGFPKFPDHGT-NNFJYWIMSA-N 0.000 description 1
- LYPXTDXYEQEIIN-UHFFFAOYSA-N 1,2-oxazole-4-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)C=1C=NOC=1 LYPXTDXYEQEIIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MQXPKJNBYZWPHX-UHFFFAOYSA-N 1-(1,2-oxazolidin-2-yl)ethanone Chemical compound CC(=O)N1CCCO1 MQXPKJNBYZWPHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BHKKSKOHRFHHIN-MRVPVSSYSA-N 1-[[2-[(1R)-1-aminoethyl]-4-chlorophenyl]methyl]-2-sulfanylidene-5H-pyrrolo[3,2-d]pyrimidin-4-one Chemical compound N[C@H](C)C1=C(CN2C(NC(C3=C2C=CN3)=O)=S)C=CC(=C1)Cl BHKKSKOHRFHHIN-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 1-butoxybutane Chemical compound CCCCOCCCC DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BSXPDVKSFWQFRT-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxytriazolo[4,5-b]pyridine Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=N1 BSXPDVKSFWQFRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BXJGLPROAVAGKO-UHFFFAOYSA-N 1-trityloxybut-3-en-2-ol Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(C=1C=CC=CC=1)(OCC(O)C=C)C1=CC=CC=C1 BXJGLPROAVAGKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FJRPOHLDJUJARI-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydro-1,2-oxazole Chemical compound C1NOC=C1 FJRPOHLDJUJARI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-N 2-Methylbenzenesulfonic acid Chemical compound CC1=CC=CC=C1S(O)(=O)=O LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical compound CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 2-aminoacetic acid;2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound NCC(O)=O.OCC(N)(CO)CO AXAVXPMQTGXXJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OZYVXZCZIZFESK-UHFFFAOYSA-N 2-bromo-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]acetic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(Br)C(O)=O OZYVXZCZIZFESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YMQRPXBBBOXHNZ-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-1-morpholin-4-ylethanone Chemical compound ClCC(=O)N1CCOCC1 YMQRPXBBBOXHNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LODHFNUFVRVKTH-ZHACJKMWSA-N 2-hydroxy-n'-[(e)-3-phenylprop-2-enoyl]benzohydrazide Chemical compound OC1=CC=CC=C1C(=O)NNC(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 LODHFNUFVRVKTH-ZHACJKMWSA-N 0.000 description 1
- LQIIEHBULBHJKX-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropylalumane Chemical compound CC(C)C[AlH2] LQIIEHBULBHJKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WEQPBCSPRXFQQS-UHFFFAOYSA-N 4,5-dihydro-1,2-oxazole Chemical compound C1CC=NO1 WEQPBCSPRXFQQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NSPMIYGKQJPBQR-UHFFFAOYSA-N 4H-1,2,4-triazole Chemical compound C=1N=CNN=1 NSPMIYGKQJPBQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 description 1
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 229910021595 Copper(I) iodide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 239000001116 FEMA 4028 Substances 0.000 description 1
- 238000011484 FRET-based enzyme assay Methods 0.000 description 1
- 101000945075 Homo sapiens Collectrin Proteins 0.000 description 1
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000016844 Immunoglobulin-like domains Human genes 0.000 description 1
- 108050006430 Immunoglobulin-like domains Proteins 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- 239000002841 Lewis acid Substances 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LEAHIJJHDFNHPV-LDBYXDLTSA-N N-[(4aS,5S,7aS)-7a-(5-amino-2-fluorophenyl)-5-(1,1-difluoroethyl)-4,4a,5,7-tetrahydrofuro[3,4-d][1,3]thiazin-2-yl]benzamide Chemical compound NC=1C=CC(=C(C=1)[C@@]12N=C(SC[C@@H]1[C@H](OC2)C(C)(F)F)NC(C1=CC=CC=C1)=O)F LEAHIJJHDFNHPV-LDBYXDLTSA-N 0.000 description 1
- NZIAIVSNFSGEHM-PQLFEHCQSA-N N-[[(3S,4R,5S)-3-(5-bromo-2-fluorophenyl)-4-(hydroxymethyl)-5-(trityloxymethyl)oxolan-3-yl]carbamothioyl]benzamide Chemical compound BrC=1C=CC(=C(C=1)[C@@]1(CO[C@@H]([C@H]1CO)COC(C1=CC=CC=C1)(C1=CC=CC=C1)C1=CC=CC=C1)NC(=S)NC(C1=CC=CC=C1)=O)F NZIAIVSNFSGEHM-PQLFEHCQSA-N 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MUBWJJIBXPGEBA-UHFFFAOYSA-N OC(=O)C1=CSNC=C1 Chemical compound OC(=O)C1=CSNC=C1 MUBWJJIBXPGEBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 239000007868 Raney catalyst Substances 0.000 description 1
- NPXOKRUENSOPAO-UHFFFAOYSA-N Raney nickel Chemical compound [Al].[Ni] NPXOKRUENSOPAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000564 Raney nickel Inorganic materials 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- LIUIYAYRPIIEQR-UHFFFAOYSA-N S1CN=CC(=C1)C(=O)O Chemical compound S1CN=CC(=C1)C(=O)O LIUIYAYRPIIEQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N Salicylic acid Natural products OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- QYTDEUPAUMOIOP-UHFFFAOYSA-N TEMPO Chemical group CC1(C)CCCC(C)(C)N1[O] QYTDEUPAUMOIOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RZECAKUPWIWBRJ-SUZMYJTESA-N [(2S,3R,4S)-4-amino-4-(5-bromo-2-fluorophenyl)-2-(1,1-difluoroethyl)oxolan-3-yl]methanol Chemical compound N[C@@]1([C@@H]([C@H](OC1)C(C)(F)F)CO)C1=C(C=CC(=C1)Br)F RZECAKUPWIWBRJ-SUZMYJTESA-N 0.000 description 1
- MBKBWYYDNUJGGY-UHFFFAOYSA-N [N].C=1C=NOC=1 Chemical group [N].C=1C=NOC=1 MBKBWYYDNUJGGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZBIKORITPGTTGI-UHFFFAOYSA-N [acetyloxy(phenyl)-$l^{3}-iodanyl] acetate Chemical compound CC(=O)OI(OC(C)=O)C1=CC=CC=C1 ZBIKORITPGTTGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 238000010936 aqueous wash Methods 0.000 description 1
- 239000003855 balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- PASDCCFISLVPSO-UHFFFAOYSA-N benzoyl chloride Chemical class ClC(=O)C1=CC=CC=C1 PASDCCFISLVPSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N beta-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N 0.000 description 1
- 235000011175 beta-cyclodextrine Nutrition 0.000 description 1
- 229960004853 betadex Drugs 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- SIPUZPBQZHNSDW-UHFFFAOYSA-N bis(2-methylpropyl)aluminum Chemical compound CC(C)C[Al]CC(C)C SIPUZPBQZHNSDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004657 carbamic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000001108 carbamothioyl group Chemical group C(N)(=S)* 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 150000005829 chemical entities Chemical class 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- LSXDOTMGLUJQCM-UHFFFAOYSA-M copper(i) iodide Chemical compound I[Cu] LSXDOTMGLUJQCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GBRBMTNGQBKBQE-UHFFFAOYSA-L copper;diiodide Chemical compound I[Cu]I GBRBMTNGQBKBQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 210000005257 cortical tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- AQEFLFZSWDEAIP-UHFFFAOYSA-N di-tert-butyl ether Chemical compound CC(C)(C)OC(C)(C)C AQEFLFZSWDEAIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 125000002147 dimethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])N(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 208000037765 diseases and disorders Diseases 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000003821 enantio-separation Methods 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012025 fluorinating agent Substances 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 1
- 102000050078 human CLTRN Human genes 0.000 description 1
- 150000003840 hydrochlorides Chemical group 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N isopropylamine Chemical compound CC(C)N JJWLVOIRVHMVIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000842 isoxazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- IXHBTMCLRNMKHZ-LBPRGKRZSA-N levobunolol Chemical compound O=C1CCCC2=C1C=CC=C2OC[C@@H](O)CNC(C)(C)C IXHBTMCLRNMKHZ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 150000007517 lewis acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000011981 lindlar catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- VFZXMEQGIIWBFJ-UHFFFAOYSA-M magnesium;cyclopropane;bromide Chemical compound [Mg+2].[Br-].C1C[CH-]1 VFZXMEQGIIWBFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FRIJBUGBVQZNTB-UHFFFAOYSA-M magnesium;ethane;bromide Chemical compound [Mg+2].[Br-].[CH2-]C FRIJBUGBVQZNTB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- CVVMLRFXZPKILB-UHFFFAOYSA-N methyl 5-chloropyrazine-2-carboxylate Chemical compound COC(=O)C1=CN=C(Cl)C=N1 CVVMLRFXZPKILB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 125000004573 morpholin-4-yl group Chemical group N1(CCOCC1)* 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 231100000189 neurotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002887 neurotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 229910000069 nitrogen hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 description 1
- 125000001979 organolithium group Chemical group 0.000 description 1
- FIYYMXYOBLWYQO-UHFFFAOYSA-N ortho-iodylbenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1I(=O)=O FIYYMXYOBLWYQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 239000003444 phase transfer catalyst Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 210000004694 pigment cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000019612 pigmentation Effects 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 150000003242 quaternary ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007142 ring opening reaction Methods 0.000 description 1
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000010956 selective crystallization Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M sodium ascorbate Substances [Na+].OC[C@@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M 0.000 description 1
- 229960005055 sodium ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- JVBXVOWTABLYPX-UHFFFAOYSA-L sodium dithionite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])=O JVBXVOWTABLYPX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000012312 sodium hydride Substances 0.000 description 1
- 229910000104 sodium hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000000946 synaptic effect Effects 0.000 description 1
- BNWCETAHAJSBFG-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 2-bromoacetate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)CBr BNWCETAHAJSBFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-M toluene-4-sulfonate Chemical compound CC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- JBWKIWSBJXDJDT-UHFFFAOYSA-N triphenylmethyl chloride Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(C=1C=CC=CC=1)(Cl)C1=CC=CC=C1 JBWKIWSBJXDJDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001665 trituration Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
- 229910052727 yttrium Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D513/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00
- C07D513/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D513/04—Ortho-condensed systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/54—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame
- A61K31/542—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C309/00—Sulfonic acids; Halides, esters, or anhydrides thereof
- C07C309/01—Sulfonic acids
- C07C309/28—Sulfonic acids having sulfo groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton
- C07C309/29—Sulfonic acids having sulfo groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton of non-condensed six-membered aromatic rings
- C07C309/30—Sulfonic acids having sulfo groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton of non-condensed six-membered aromatic rings of six-membered aromatic rings substituted by alkyl groups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C55/00—Saturated compounds having more than one carboxyl group bound to acyclic carbon atoms
- C07C55/02—Dicarboxylic acids
- C07C55/08—Malonic acid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D309/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings
- C07D309/16—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
- C07D309/28—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom, not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D309/30—Oxygen atoms, e.g. delta-lactones
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Neurology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
Abstract
В настоящем изобретении представлено соединение формулы IIили его фармацевтически приемлемая соль.
Description
Настоящее изобретение относится к некоторым новым селективным ингибиторам ВАСЕ1, к фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения, к способам применения указанных соединений для лечения физиологических расстройств и к промежуточным соединениям и способам, подходящим для синтеза указанных соединений.
Настоящее изобретение относится к области лечения болезни Альцгеймера и других заболеваний и расстройств, затрагивающих амилоидный пептид β (Abeta), нейротоксичный и в высокой степени агрегированный пептидный сегмент белка-предшественника амилоида (АРР). Болезнь Альцгеймера представляет собой изнуряющее нейродегенеративное расстройство, которое поражает миллионы пациентов во всем мире. Принимая во внимание современные разрешенные агенты, присутствующие на рынке, ко торые направлены лишь на временное, симптоматическое улучшение состояния пациента, а не на остановку, замедление или реверсирование заболевания, существует значительная неудовлетворенная потребность в лечении болезни Альцгеймера.
Болезнь Альцгеймера характеризуется образованием, агрегацией и отложением Abeta в головном мозге. Было показано, что полное или частичное ингибирование β-секретазы (фермент расщепления βсайта белка-предшественника амилоида; ВАСЕ) оказывает значительный эффект на патологию, связанную с бляшками и зависящую от бляшек, в мышиных моделях, что позволяет предположить, что даже небольшое снижение уровней пептида Abeta может приводить к долговременному существенному уменьшению объема бляшек и синаптической недостаточности, обеспечивая значительное терапевтическое преимущество, в частности, при лечении болезни Альцгеймера. Кроме того, идентифицированы два гомолога ВАСЕ, которые называют ВАСЕ1 и ВАСЕ2, и полагают, что ВАСЕ1 является наиболее клинически важным для развития болезни Альцгеймера. ВАСЕ1 экспрессируется, главным образом, в нейронах, а ВАСЕ2, как было показано, экспрессируется, главным образом, на периферии. (См. D. Oehlrich, Bioorg. Med. Chem. Lett., 24, 2033-2045 (2014)). Кроме того, ВАСЕ2 может быть важным для пигментации, поскольку было установлено, что он играет роль в процессинге меланоцитарного белка, специфического для пигментных клеток (см. L. Rochin, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 110(26), 10658-10663 (2013)). Необходимы ингибиторы ВАСЕ, проникающие в центральную нервную систему (ЦНС), в частности ингибиторы, которые являются селективными в отношении ВАСЕ1 по сравнению с ВАСЕ2, для обеспечения средств для лечения расстройств, опосредованных пептидом Abeta, таких как болезнь Альцгеймера.
В патенте США № 8158620 описаны конденсированные аминодигидротиазиновые производные, которые обладают ингибирующей активностью в отношении ВАСЕ1, и они дополнительно описаны как пригодные для применения терапевтические агенты для лечения нейродегенеративных заболеваний, вызванных пептидом Аβ, таких как деменция типа Альцгеймера. Кроме того, в патенте США № 8338407 описаны некоторые конденсированные аминодигидротиазиновые производные, обладающие ингибирующим действием на ВАСЕ1, которые пригодны для применения при лечении некоторых нейродегенеративных заболеваний, таких как деменция типа Альцгеймера.
В настоящем изобретении представлены некоторые новые соединения, которые являются ингибиторами ВАСЕ. Кроме того, в настоящем изобретении представлены некоторые новые соединения, которые являются селективными ингибиторами в отношении ВАСЕ1 по сравнению с ВАСЕ2. Кроме того, в настоящем изобретении представлены некоторые новые соединения, которые проникают в ЦНС. В настоящем изобретении представлены также некоторые новые соединения, которые имеют потенциал для улучшенного профиля побочного действия, например, благодаря селективному ингибированию ВАСЕ1 по сравнению с ВАСЕ2.
Соответственно в настоящем изобретении представлено соединение формулы I
или его фармацевтически приемлемая соль.
Кроме того, в настоящем изобретении представлено соединение формулы Ia
- 1 031546
или его фармацевтически приемлемая соль.
В настоящем изобретении дополнительно представлено соединение формулы II
где R представляет собой метил, этил или циклопропил, или его фармацевтически приемлемая соль. Кроме того, в настоящем изобретении представлено соединение формулы IIa
или его фармацевтически приемлемая соль.
В настоящем изобретении представлен также способ лечения болезни Альцгеймера у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I, Ia, II или IIa или его фармацевтически приемлемой соли.
В настоящем изобретении дополнительно представлен способ лечения прогрессирования умеренных когнитивных нарушений, связанных с болезнью Альцгеймера, у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I, Ia, II или IIa или его фармацевтически приемлемой соли. В настоящем изобретении представлен также способ ингибирования ВАСЕ у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I, Ia, II, IIa или его фармацевтически приемлемой соли. В настоящем изобретении представлен также способ лечения ингибирования расщепления белкапредшественника амилоида, опосредованного ВАСЕ, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I, Ia, II или IIa или его фармацевтически приемлемой соли. В настоящем изобретении дополнительно представлен способ ингибирования выработки пептида Abeta, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы I, Ia, II или IIa или его фармацевтически приемлемой соли.
Кроме того, в настоящем изобретении представлено соединение формулы I, Ia, II или IIa или его фармацевтически приемлемая соль для применения в терапии, в частности для лечения болезни Альцгеймера или для лечения прогрессирования умеренных когнитивных нарушений, связанных с болезнью Альцгеймера. Кроме того, в настоящем изобретении представлено применение соединения формулы I, Ia, II или IIa или его фармацевтически приемлемой соли для производства лекарственного средства для лечения болезни Альцгеймера.
В настоящем изобретении дополнительно представлена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы I, Ia, II или IIa или его фармацевтически приемлемую соль и один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или вспомогательных веществ. В настоящем изобретении дополнительно представлен способ получения фармацевтической композиции, включающий смешивание соединения формулы I, Ia, II или IIa или его фармацевтически приемлемой соли и одного или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или вспомогательных веществ. Настоящее изобретение охватывает также новые промежуточные соединения и способы синтеза соединений формул I, Ia, II и IIa.
Умеренные когнитивные нарушения определяют как потенциальную продромальную фазу демен
- 2 031546 ции, связанной с болезнью Альцгеймера, на основании клинической картины и на основании прогрессирования с течением времени пациентов с умеренными когнитивными нарушениями до деменции Альцгеймера. (Morris, et al, Arch. Neurol, 58, 397-405 (2001); Petersen, et al., Arch. Neurol, 56, 303-308 (1999)). Термин лечение прогрессирования умеренных когнитивных нарушений, связанных с болезнью Альцгеймера включает ограничение, замедление, остановку или реверсирование развития умеренных когнитивных нарушений, связанных с болезнью Альцгеймера, у пациента.
В контексте настоящего документа термины лечение или лечить включают ограничение, замедление, остановку или реверсирование развития или тяжести существующего симптома или расстройства.
В данном контексте термин пациент относится к людям.
Термин ингибирование выработки пептида Abeta означает снижение in vivo уровней пептида Abeta у пациента.
В контексте настоящего документа термин эффективное количество относится к количеству или дозе соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, которая при однократном или многократном введении пациенту обеспечивает требуемый эффект у пациента, имеющего диагноз или проходящего лечение.
Эффективное количество может быть легко определено лечащим врачом как специалистом в данной области техники с помощью известных технологий и посредством наблюдения результатов, полученных в аналогичных обстоятельствах. При определении эффективного количества для пациента лечащий врач учитывает ряд следующих факторов, включая, но не ограничиваясь ими: вид пациента; его массу, возраст и общее состояние здоровья; конкретное заболевание или расстройство, подлежащее лечению; степень, или поражение, или тяжесть заболевания или расстройства; реакцию конкретного пациента; конкретное вводимое соединение; способ введения; характеристики биодоступности вводимого препарата; выбранный режим ввода доз; применение сопутствующих лекарственных средств; другие релевантные обстоятельства.
Соединения согласно настоящему изобретению, в целом, являются эффективными в широком диапазоне доз. Например, суточные дозы обычно входят в диапазон от примерно 0,01 до примерно 20 мг/кг массы тела. В некоторых случаях более уместными могут быть уровни доз, находящиеся ниже нижнего предела указанного диапазона, тогда как в других случаях могут быть использованы более высокие дозы с допустимыми побочными эффектами, и, следовательно, вышеуказанный диапазон доз никоим образом не предназначен для ограничения настоящего изобретения.
Соединения согласно настоящему изобретению предпочтительно составляют в фармацевтические композиции, которые вводят любым способом, обеспечивающим биодоступность соединения, включая пероральный и трансдермальный способы. Наиболее предпочтительно указанные композиции предназначены для перорального введения. Указанные фармацевтические композиции и способы их получения хорошо известны в данной области техники. (См., например, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (D.B. Troy, ред., 21-ое изд., Lippincott, Williams & Wilkins, 2006).
Соединения формулы I, Ia, II или IIa или их фармацевтически приемлемые соли особенно подходят для способов лечения согласно настоящему изобретению, но некоторые группы, заместители и конфигурации являются предпочтительными. В следующих параграфах описаны такие предпочтительные группы, заместители и конфигурации. Следует понимать, что указанные предпочтения относятся к способам лечения, а также к новым соединениям согласно настоящему изобретению.
Так, предпочтительно соединение формул I и II, в которых конденсированное бициклическое кольцо находится в цис-конфигурации, или его фармацевтически приемлемая соль. Например, специалистам в данной области техники понятно, что соединение формулы Ia находится в цис-конфигурации относительно центров, обозначенных 1 и 2, как показано ниже на схеме А. Кроме того, соединение формулы Ia состоит из центральной структуры, которая содержит три хиральных центра у атомов углерода, обозначенных 1, 2 и 3. Специалистам в данной области техники понятно, что система нумерации, использованная на схеме А, может не соответствовать системе нумерации, используемой для составления названий соединений, представленных в настоящем документе, и, следовательно, система нумерации, использованная на схеме А, представлена в иллюстративных целях. Предпочтительная относительная конфигурация указанных трех хиральных центров формулы Ia показана на схеме А.
- 3 031546
Схема А
Дополнительные соединения согласно настоящему изобретению представляют собой
F
Ы-[3-[(4а8,7а8)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-б][1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1 -ил)пиразин-2-карбоксамид;
Ы-[3-[(4а8К,58К,7а8К)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-б][1,3]тиазин-7аил]-4-фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1-ил)пиразин-2-карбоксамид и их фармацевтически приемлемые соли.
Хотя настоящее изобретение включает все отдельные энантиомеры и диастереомеры, а также смеси энантиомеров указанных соединений, включая рацематы, особенно предпочтительны соединения с абсолютной конфигурацией, указанной ниже:
Ы-[3-[(4а8,58,7а8)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-б][1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1-ил)пиразин-2-карбоксамид и его фармацевтически приемлемые соли;
Ы-[3-[(4а8,58,7а8)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-б][1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1 -ил)пиразин-2-карбоксамида гидрат.
Кроме того, особенно предпочтителен Ы-[3-[(4а8,58,7а8)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7тетрагидрофуро[3,4-б][1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1-ил)пиразин-2-карбоксамид.
Кроме того, особенно предпочтительны Ы-[3-[(4а8,58,7а8)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7тетрагидрофуро [3,4-d][ 1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1 -ил)пиразин-2-карбоксамида малонат и
М-[3-[(4а8,58,7а8)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4Д][1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1-ил)пиразин-2-карбоксамида 4-метилбензолсульфонат.
Специалистам в данной области техники понятно, что соединения согласно настоящему изобретению могут существовать в таутомерных формах, как показано ниже на схеме В. При упоминании в настоящей заявке одного из конкретных таутомеров-соединений согласно настоящему изобретению, следует понимать, что оно включает обе таутомерные формы и все их смеси.
Схема В
О
F R
F
Ν-AsJi
Η
Кроме того, некоторые промежуточные соединения, описанные в следующих способах получения, могут содержать одну или более защитных групп для азота или кислорода. Понятно, что защитные группы могут варьироваться, как известно специалистам в данной области техники, в зависимости от конкретных условий реакции и конкретных осуществляемых превращений. Условия защиты и снятия защиты хорошо известны специалистам в данной области техники и описаны в литературных источниках (см., например, Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, четвертое издание, Peter G.M. Wuts and Theodora W. Greene, John Wiley and Sons, Inc. 2007).
Отдельные изомеры, энантиомеры и диастереомеры могут быть выделены или разделены специали
- 4 031546 стами в данной области техники в любой удобной точке синтеза соединений согласно настоящему изобретению при помощи таких способов, как технология селективной кристаллизации или хиральная хроматография (см., например, J. Jacques, et al., Enantiomers, Racemates, and Resolutions, John Wiley and Sons, Inc., 1981, и E.L. Eliel and S.H. Wilen, Stereochemistry of Organic Compounds, Wiley-Interscience, 1994).
Фармацевтически приемлемая соль соединений согласно настоящему изобретению, такая как гидрохлоридная соль, может быть получена, например, посредством взаимодействия соответствующего свободного основания соединения согласно настоящему изобретению, соответствующей фармацевтически приемлемой кислоты, такой как хлористоводородная кислота, в подходящем растворителе, таком как диэтиловый эфир, в стандартных условиях, известных в данной области техники. Кроме того, образование таких солей может протекать одновременно при снятии защиты, защитной группы для азота. Образование таких солей хорошо известно и общепринято в данной области техники. См., например, Gould, P.L., Salt selection for basic drugs, International Journal of Pharmaceutics, 33: 201-217 (1986); Bastin, R.J., et al. Salt Selection and Optimization Procedures for Pharmaceutical New Chemical Entities, Organic Process Research and Development, 4: 427-435 (2000); и Berge, S.M., et al, Pharmaceutical Salts, Journal of Pharmaceutical Sciences, 66: 1-19, (1977).
Ниже представлено определение некоторых сокращений. АРР относится к белкупредшественнику амилоида; BSA относится к альбумину бычьей сыворотки; CDI относится к 1,1'карбонилдиимидазолу; кДНК относится к комплементарной дезоксирибонуклеиновой кислоте; DCC относится к 1,3-дициклогексилкарбодиимиду; Deoxo-Fluor® относится к трифториду бис(2метоксиэтил)аминосеры; DIC относится к 1,3-диизопропилкарбодиимиду; DMAP относится к 4диметиламинопиридину; DMEM относится к среде Игла, модифицированной по способу Дульбекко; ДМСО относится к диметилсульфоксиду; EBSS относится к сбалансированному солевому раствору Эрла; EDCI относится к гидрохлориду 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида; твердофазный иммуноферментный анализ относится к фермент-связанному иммуносорбентному анализу; F12 относится к среде Хэма F12; FBS относится к эмбриональной бычьей сыворотке; Fc относится к кристаллизующемуся фрагменту; FLUOLEAD™ относится к трифториду 4-трет-бутил-2,6диметилфенилсеры; FRET относится к резонансоному переносу энергии флуоресценции; HATU относится к гексафторфосфату (диметиламино)-N,N-диметил(3H-[1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридин-3-илокси) метанаминия; HBTU относится к гексафторфосфату (Ш-бензотриазол-1-илокси)(диметиламино)-Ы,№ диметилметанаминия; НЕК относится к почке эмбриона человека; HF-пиридин относится к гидрофториду пиридина, или к реактиву Олаха, или к поли(пиридинфториду); HOAt относится к 1-гидрокси7-азабензотриазолу; НОВТ относится к гидрату 1-гидроксибензотриазола; IC50 относится к концентрации агента, которая вызывает 50% от максимального ингибирующего ответа, возможного для данного агента; IgG1 относится к Fc-гамма-рецептору иммуноглобулин-подобного домена; MEM относится к минимальной поддерживающей среде; PBS относится к фосфатно-солевому буферному раствору; PDAPP относится к белку-предшественнику амилоида, полученному из тромбоцитов; Ph относится к фенильной группе; РуВОР относится к (бензотриазол-1-ил-окситрипирролидинофосфония гексафторфосфату); РуВОР относится к бром-трис-пирролидинофосфония гексафторфосфату; RFU относится к относительной единице флуоресценции; ОТ-ПЦР относится к полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией; SDS-PAGE к электрофорезу в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия; SCX относится к сильному катионному обмену; СКЖХ относится к сверхкритической жидкостной хроматографии; Т3Р® относится к пропилфосфоновому ангидриду; ТГФ относится к тетрагидрофурану; TEMPO относится к (2,2,6,6-тетраметилпиперидин-1-ил)оксилу; ТМЕМ относится к трансмембранному белку; тритил относится к группе формулы (В^зС-; XtalFluor-E® или соль дифторсульфиния DAST относится к (диэтиламино)дифторсульфония тетрафторборату или Ν,Ν-диэтилS,S-дифторсульфилиминия тетрафторборату; и XtalFluor-M® или соль дифторсульфиния морфо-DAST относится к дифтор(морфолино)сульфония тетраборату или дифтор-4-морфолинсульфония тетрафторборату.
Специалистам в данной области техники понятно, что термины тозилат, толуолсульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислота и 4-метилбензолсульфоновая кислота относятся к соединению следующей структуры:
O=S=O
ОН
Соединения согласно настоящему изобретению или их соли могут быть получены многочисленными способами, известными специалистам в данной области техники, некоторые из которых представлены на следующих схемах, в способах получения и примерах. Специалистам в данной области техники по
- 5 031546 нятно, что конкретные стадии синтеза для каждого из описанных способов можно комбинировать различными способами, или вместе со стадиями из других схем для получения соединений согласно настоящему изобретению или их солей. Продукты каждой стадии на представленных ниже схемах могут быть выделены стандартными способами, хорошо известными в данной области техники, включая экстракцию, испарение, осаждение, хроматографию, фильтрацию, растирание в порошок и кристаллизацию. На схемах, представленных ниже, все заместители являются такими, как описано ранее, если не указано иное. Реагенты и исходные материалы легко доступны специалистам в данной области техники. Следующие схемы, способы получения и примеры дополнительно иллюстрируют настоящее изобретение.
Схема 1
На схеме 1 на стадии А йодид триметилсульфония обрабатывают органическим основанием, таким как н-бутиллитий, при температуре примерно -50°С в растворителе, таком как ТГФ Затем к щелочному раствору добавляют защищенный оксиметилоксиран, защищенный подходящей защитной группой, такой как тритильная группа, при -10°С и оставляют перемешиваться в течение примерно 2 ч с получением защищенного продукта схемы 1, стадии A. PG представляет собой защитную группу, разработанную для аминогруппы или группы кислорода, такую как карбаматы, амиды или простые эфиры Такие защитные группы хорошо известны и общеприняты в данной области техники Защищенный продукт стадии А подвергают взаимодействию со сложным α-галогенэфиром, таким как трет-бутоксибромацетат, используя тетра-Ы-бутиламмония сульфат или другие катализаторы фазового переноса на основе другой четвертичной аммониевой соли, в растворителе, таком как толуол, и водном растворе неорганического основания, такого как гидроксид натрия, примерно при комнатной температуре с получением соединения схемы 1, стадии В. Такие реакции алкилирования хорошо известны в данной области техники. Альтерна
- 6 031546 тивно для получения защищенного продукта стадии В может быть использовано основание, такое как 60% гидрид натрия в масле, с растворителями, такими как Ν,Ν-диметилформамид или ТГФ, и при температуре от 0 до 100°С трет-Бутоксикарбонилацетат превращают в оксим посредством 2-стадийного процесса. Восстановительный агент, такой как гидрид изобутилалюминия, в гексанах по каплям добавляют при температуре примерно -70°С, затем по каплям добавляют водный раствор кислоты, такой как хлористоводородная кислота, при температуре примерно -60°С. Выделение продукта осуществляют посредством органической экстракции с получением промежуточного вещества. Указанное вещество растворяют в органическом растворителе, таком как дихлорметан, и обрабатывают ацетатом натрия, затем гидрохлоридом гидроксиламина с получением оксимного продукта стадии С. Оксимный продукт схемы 1, стадии С может быть превращен в бициклический 4,5-дигидроизоксазоловый продукт стадии D в циклизации 3+2 с помощью нескольких способов, таких как применение водного раствора гипохлорита натрия или альтернативного окислителя, такого как N-хлорсукцинимид, и в растворителе, таком как третбутил-метиловый эфир, толуол, дихлорметан или ксилол, при температуре примерно 10-15°С или при нагревании. 2-фтор, 5-бромфенильная группа может быть добавлена к полученному дигидроизоксазолу посредством получения металлорганического реагента. Металлорганический реагент может быть получен из 4-бром-1-фтор-2-йодбензола с применением обмена галоген-металл с такими реагентами как нбутиллитий или комплекс хлорида изопропилмагния с хлоридом лития, и посредством добавления по каплям при температуре от примерно от -78 до 15°С в растворителе, таком как ТГФ. Затем добавляют кислоту Льюиса, такую как диэтилэтерат трифторида бора, с получением продукта схемы 1, стадии Е. Полученный бициклический тетрагидроизоксазол может быть обработан цинком в уксусной кислоте с получением продукта с раскрытым кольцом схемы 1, стадии F. Альтернативный способ раскрытия изоксазольного кольца заключается в применении никеля Ренея в полярном растворителе, таком как этанол, под давлением в условиях гидрирования. Затем продукт стадии F может быть подвержен взаимодействию с бензоилизотиоцианатом в растворителе, таком как дихлорметан или ТГФ, при температуре от примерно 5°С до комнатной температуры с получением тиомочевинного соединения стадии G. Тиазиновое кольцо может быть образовано с помощью трифторметансульфонового ангидрида и органического основания, такого как пиридин, в растворителе, таком как дихлорметан, при температуре примерно -20°С с получением продукта стадии Н. Гидроксиметильная защитная группа, такая как тритильная группа, может быть удалена на схеме 1, стадии I, с применением способов, хорошо известных в данной области техники, таких как обработка муравьиной кислотой при комнатной температуре или моногидратом птолуолсульфоновой кислоты в растворителях, таких как дихлорметан и метанол, с получением соединения стадии I. Гидроксиметил может быть оксилен до карбоновой кислоты с применением окислительных агентов, таких как 2-йодоксибензойная кислота (IBX) при температуре 0-22°С в растворителе, таком как ДМСО, или посредством добавления (диацетоксийодо)бензола по частям или всего сразу в растворителе, таком как ацетонитрил или ацетонитрил с водой, при перемешивании при температуре примерно 5-25°С с получением соединения схемы 1, стадии J. В качестве катализатора реакции окисления может быть использован также TEMPO. Амид Вайнреба получают на схеме 1, стадии К, из кислотного продукта стадии J с добавлением ^О-диметилгидроксиламина гидрохлорида, органического основания, такого как триэтиламин, и конденсирующего реагента, такого как HATU. Смесь перемешивают при комнатной температуре с получением продукта стадии К. Другие конденсирующие агенты, которые могут быть использованы, включают CDI, карбодиимиды, такие как DCC, DIC или EDCI, или другие соли урония или фосфония с ненуклеофильными анионами, такие как HBTU, РуВОР и PyBrOP. Затем амид Вайнреба превращают в кетон, используя металлорганический реагент, такой как реактив Гриньяра, или литийорганический реагент на стадии L в растворителе, таком как ТГФ. Подходящий реактив Гриньяра может быть добавлен в виде раствора в растворителях, таких как эфир или 2-метилтетрагидрофуран, к амиду Вайнреба при температуре от примерно -78 до 0°С с получением кетона стадии L. На схеме 1 стадии М, R и кетонная группа соединения стадии L могут быть превращены в группу дифтор-R с применением DeoxoFluor® в растворителе, таком как дихлорметан, при температуре от примерно -78°С до комнатной температуры. Другой альтернативный способ включает предварительное смешивание фторирующего реагента, такого как Deoxo-Fluor®, с диэтилэтератом трифторида бора с последующим добавлением продукта схемы 1, стадии L и тригидрофторида триэтиламина с получением продукта схемы 1, стадии М. Альтернативно могут быть использованы другие фторирующие агенты, которые хорошо известны в данной области техники, такие как трифторид диэтиламиносеры (также известный как DAST), XtalFluor-E® или XtalFluor-M® с добавкой, такой как тригидрофторид триэтиламина, или FLUOLEAD™, с применением добавки, такой как HF-пиридин. 5-бром фенильной группы превращают в амин, используя (1R,2R)-N,N'диметил-1,2-циклогександиамин или транс-^№-диметилциклогексан-1,2-диамин в растворителе, таком как этанол, и добавляя азид натрия, а затем L-аскорбат натрия и сульфат меди. Реакционную смесь нагревают до примерно 80-100°С в течение нескольких часов, а затем выделяют продукт посредством экстракции, используя растворитель, такой как этилацетат. Затем промежуточное соединение восстанавливают в условиях гидрирования, используя палладий на углероде, такой как 5-10% палладий, в растворителях, таких как метанол или этанол и ТГФ, при давлении примерно 40-50 psi водорода с получением
- 7 031546 анилинового продукта схемы 1, стадии N.
Альтернативно на схеме 2 защищенный продукт схемы 1, стадии А может быть обработан 4-(2хлорацетил)морфолино-реагентом и основанием, таким как гидросульфат тетрабутиламмония, в растворителе, таком как толуол, при температуре примерно 5°С с получением продукта схемы 2, стадии А. Морфолино-группа может затем служить в качестве уходящей группы на схеме 2, стадии В. Например, продукт схемы 2, стадии А может быть обработан подходящим реактивом Гриньяра, который может быть получен in stiu из комплекса изопропилмагнийхлорида с хлоридом лития и 4-бром-1-фтор-2йодбензола, или при наличии подходящего реактива Гриньяра указанный реактив может быть добавлен непосредственно к продукту схемы 2, стадии А при температуре примерно 5°С с получением продукта схемы 2, стадии В. Карбонилацетат может быть превращен в оксим с использованием гидрохлорида гидроксиламина и ацетата натрия при нагревании примерно до 50°С с получением продукта схемы 2, стадии С. Оксимный продукт схемы 2, стадии С может быть затем превращен в продукт схемы 2, стадии D (такой же продукт, как на схеме 1, стадии Е) с использованием гидрохинона в растворителе, таком как толуол, и при нагревании с обратным холодильником до кипения. Аминный продукт схемы 2, стадии D может быть ацилирован ацетилхлоридом с применением органического основания, такого как DMAP и пиридин, в растворителе, таком как дихлорметан, при температуре примерно 0-5°С с получением продукта схемы 2, стадии Е. Продукт схемы 2, стадии Е может быть затем превращен в продукт схемы 3, стадии А, как описано ниже.
- 8 031546
Схема 3
Стадия
Стадия F
Стадия
Стадия С
В альтернативном способе, представленном на схеме 3, изоксазольный атом азота соединения схемы 1, стадии Е защищают ацетильной группой, и защитную группу гидроксиметила удаляют двухстадийным способом. Например, тетрагидроизоксазол обрабатывают органическим основанием, таким как DMAP и пиридин, в растворителе, таком как дихлорметан, и добавляют ацетилхлорид. Температуру поддерживают ниже примерно 10°С, а затем оставляют перемешиваться при примерно комнатной температуре. Реакционную смесь разбавляют водой и экстрагируют растворителем, таким как дихлорметан. Органические экстракты промывают водным раствором кислоты, таким как 1 н. раствор хлористоводородной кислоты, и снова экстрагируют водный слой растворителем, таким как дихлорметан, затем промывают водой. Органический растворитель может быть частично удален, и может быть добавлена кислота, такая как муравьиная кислота или моногидрат п-толуолсульфоновой кислоты, в растворителях, таких как дихлорметан и метанол, для защиты гидроксиметила. Смесь может быть перемешана при комнатной температуре или нагрета до температуры примерно 40°С до завершения снятия защиты гидрокси-группы с получением соединения схемы 3, стадии А. Гидроксиметильный продукт схемы 3, стадии А может быть окислен до продукта карбоновой кислоты схемы 3, стадии В таким же образом, как в способе, описанном на схеме 1, стадии J, а амид Вайнреба может быть дополнительно получен таким же образом, как в способе, описанном на схеме 1, стадии К, с применением конденсирующего агента, такого как CDI, который добавляют частями или добавляют все количество за один раз, с растворителем, таким как дихлорметан, охлаждают до -20°С и перемешивают в течение примерно 1 ч, и частями добавляют гидрохлорид Ы,О-диметилгидроксиламина или добавляют все количество за один раз. Для ускорения реакции может быть использовано также органическое основание, такое как триэтиламин. Могут быть добавлены дополнительные количества CDI и Ы,О-диметилгидроксиламина до видимого завершения реакции с получением продукта амида Вайнреба схемы 3, стадии С. Кетон схемы 3, стадии D может быть получен из амида Вайнреба таким же способом, как описано на схеме 1, стадии L. Кетон стадии D может быть превращен в группу дифтор-R таким же способом, как описано на схеме 1, стадии М, с получением продукта схемы 3, стадии Е. С ацетилтетрагидроизоксазола может быть снята защита в кислотных условиях, хорошо известных в данной области техники, таких как применение хлористоводородной кислоты и нагревание до примерно 100°С, с получением продукта схемы 3, стадии F. Бициклический тетрагидроизоксазол может быть обработан цинком в уксусной кислоте с получением продукта раскрытия кольца схемы 3, стадии r таким же образом, как в способе, описанном на схеме 1, стадии F. Тиазиновый продукт схемы 3, стадии Н может быть получен в 2-стадийной реакции, выполняемой в одном реакторе, с применением
- 9 031546 бензоилизотиоцианата таким же образом, как в способе, описанном на схеме 1, стадии G. Смесь выпаривают до остатка и добавляют циклогексан. Смесь нагревают до примерно 60°С и добавляют третбутиловый эфир для растворения остатка. Раствор фильтруют и концентрируют досуха. Затем может быть образовано тиазиновое кольцо таким же образом, как в способе, описанном на схеме 1, стадии Н, с получением продукта схемы 3, стадии Н.
Схема 4
На схеме 4, стадии А анилиновый продукт схемы 1, стадии N может быть конденсирован с гетероароматической карбоновой кислотой с помощью конденсирующих агентов, хорошо известных в данной области техники. Специалистам в данной области техники понятно, что существует множество способов и реагентов для получения амида в результате взаимодействия карбоновых кислот и аминов. Например, взаимодействие подходящего анилина с подходящей кислотой в присутствии конденсирующего реагента и аминного основания, такого как диизопропилэтиламин или триэтиламин, приводит к получению соединения схемы 4, стадии А. Конденсирующие реагенты включают карбодиимиды, такие как DCC, DIC, EDCI, и ароматические оксимы, такие как HOBt и HOAt. Кроме того, вместо более традиционных конденсирующих реагентов могут быть использованы урониевые или фосфониевые соли ненуклеофильных анионов, такие как HBTU, HATU, РуВОР и PyBrOP, или циклический фосфорный ангидрид, такой как Т3Р®. Для усиления реакции могут быть использованы добавки, такие как DMAP. Альтернативно анилинамин может быть ацилирован с помощью замещенных бензоилхлоридов в присутствии основания, такого как триэтиламин или пиридин. На схеме 4, стадии В с защищенного тиазинамина может быть затем снята защита с помощью органического основания, такого как пиридин и гидрохлорид Ометилгидроксиламина, в растворителях, таких как ТГФ и этанол, и органическом основании, таком как пиридин, с получением соединения формулы II. Альтернативно для снятия защиты с тиазина может быть использовано неорганическое основание, такое как гидроксид лития в метаноле, с получением соединения формулы II.
- 10 031546
Схема 5
Альтернативно на схеме 5 бромидный продукт схемы 1, стадии М превращают в защищенный анилин, используя трифторацетамид, йодид меди, диамин, такой как транс, рацемический-Ы,М'-диметил-1,2циклогександиамин, неорганическое основание, такое как карбонат калия, и йодид натрия, при нагревании до примерно 100-130°С с получением защищенного анилинового продукта схемы 5, стадии А. Затем с защищенного анилина и тиазинамина может быть поэтапно снята защита. Трифторацетамид может быть гидролизован с помощью основания, такого как 7 н. аммиак в метаноле, с получением анилина и защищенного тиазина, того же продукта, как на схеме 1, стадии N. Затем с тиазина может быть снята защита в условиях, хорошо известных в данной области техники и описанных на схеме 4, стадии В, с применением гидрохлорида О-метилгидроксиламина в растворителе, таком как этанол и ТГФ, с органическим основанием, таким как пиридин, с последующим нагреванием до примерно 55°С или с перемешиванием при комнатной температуре с последующим концентрированием и очисткой с получением продукта схемы 5, стадии В. Альтернативно порядок снятия защиты может быть изменен на обратный, то есть сначала снимают защиту с тиазина, и в последнюю очередь снимают защиту с анилина. На схеме 5, стадии С анилиновый продукт стадии В может быть затем подвергнут взаимодействию с подходящей карбоновой кислотой или хлорангидридом кислоты, как описано на схеме 4, стадии А, с получением продуктов формулы II.
Фармацевтически приемлемая соль соединений согласно настоящему изобретению, такая как гидрохлоридная соль, может быть получена, например, посредством взаимодействия соответствующего свободного основания формулы I, Ia, II или IIa и соответствующей фармацевтически приемлемой кислоты, такой как хлористоводородная кислота, п-толуолсульфоновая кислота или малоновая кислота, в подходящем растворителе, таком как диэтиловый эфир, в стандартных условиях, известных в данной области техники. Кроме того, образование таких солей может протекать одновременно при снятии защиты, защитной группы для азота. Образование таких солей хорошо известно и общепринято в данной области техники. См., например, Gould, P.L., Salt selection for basic drugs, International Journal of Pharmaceutics, 33: 201-217 (1986); Bastin, R.J., et al. Salt Selection and Optimization Procedures for Pharmaceutical New Chemical Entities.
Следующие способы получения и примеры дополнительно иллюстрируют настоящее изобретение.
Способ получения 1.
(2S)-1-Тритилоксибут-3-ен-2-ол.
OH
Схема 1, стадия А. Перемешивали йодид триметилсульфония (193,5 г, 948,2 ммоль) в ТГФ (1264 мл)
- 11 031546 при комнатной температуре в течение 75 мин. Охлаждали смесь до -50°С и через канюлю добавляли нбутиллитий (2,5 моль/л в гексанах, 379 мл, 948,2 ммоль) в течение 30 мин. Оставляли реакционную смесь постепенно нагреваться до -30°С и перемешивали в течение 60 мин. Частями добавляли (2S)-2тритилоксиметилоксиран (100 г, 316,1 ммоль), поддерживая температуру ниже -10°С. После полного добавления оставляли реакционную смесь нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Выливали реакционную смесь в насыщенный раствор хлорида аммония, разделяли фазы и экстрагировали водную фазу этилацетатом. Объединяли органические слои и сушили над сульфатом магния. Фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя смесью метил-трет-бутилового эфира: гексанов (градиент 10-15%), с получением указанного в заголовке соединения (56,22 г, 54%). ЭР/МС: m/z+ 353 (M+Na).
Альтернативный способ получения 1. (2S)-1-Тритилоксибут-3-ен-2-ол.
Схема 2, стадия А. Исходный материал: добавляли трифенилметилхлорид (287 г, 947,1 ммоль), DMAP (7,71 г, 63,1 ммоль) и триэтиламин (140 г, 1383,5 ммоль) к раствору ^)-бут-2-ен-1,2-диола, полученного так, как описано в JACS, 1999, 121, 8649, (64,5 г, 631 ммоль) в дихлорметане (850 мл). Перемешивали в течение 24 ч при 24°С. Добавляли 1 н. водный раствор лимонной кислоты (425 мл). Разделяли слои и концентрировали органический экстракт при пониженном давлении досуха. Добавляли метанол (900 мл) и охлаждали до 5°С в течение 1 ч. Собирали твердые вещества фильтрованием и промывали метанолом, охлажденным до 5°С (50 мл). Отбрасывали твердое вещество и концентрировали маточный раствор при пониженном давлении досуха. Добавляли толуол (800 мл) и концентрировали до массы 268 г с получением указанного в заголовке соединения (129 г, 67%) в виде 48 мас.% раствора в толуоле.
Способ получения 2. 1-Морфолино-2-[(Ш)-1-(тритилоксиметил)аллилокси]этанон.
Схема 2, стадия А. Добавляли гидросульфат тетрабутиламмония (83,2 г, 245,0 ммоль) и 4-(2хлорацетил)морфолин (638,50 г, 3902,7 ммоль) к раствору 1-тритилоксибут-3-ен-2-ола (832,4 г, 2519 ммоль) в толуоле (5800 мл), охлажденному до 0-5°С. Добавляли раствор гидроксида натрия (1008,0 г, 25202 ммоль) в воде (1041 мл). Перемешивали в течение 19 ч при температуре от 0 до 5°С. Добавляли воду (2500 мл) и толуол (2500 мл). Разделяли слои и промывали органический экстракт водой (2x3500 мл). Концентрировали органический экстракт при пониженном давлении досуха. К остатку добавляли толуол (2500 мл), а затем медленно добавляли н-гептан (7500 мл). Перемешивали в течение 16 ч. Собирали полученное твердое вещество фильтрованием и промывали н-гептаном (1200 мл). Сушили твердое вещество под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения (1075,7 г, 98%).
Способ получения 3.
1-(5-Бром-2-фторфенил)-2-[(Ш)-1-(тритилоксиметил)аллилокси]этанон.
Схема 2, стадия В. Добавляли 1,3 М раствор комплекса изопропилмагнийхлорида с хлоридом лития (3079 мл, 2000 ммоль) в ТГФ к раствору 4-бром-1-фтор-2-йодбензола (673,2 г, 2237,5 ммоль) в толуоле (2500 мл) с такой скоростью, чтобы поддерживать температуру реакционной смеси ниже 5°С. Перемешивали в течение 1 ч. Добавляли полученный раствор Гриньяра (5150 мл) к раствору 1-морфолино-2[(Ш)-1-(тритилоксиметил)аллилокси]этанона (500 г, 1093 ммоль) в толуоле (5000 мл) с такой скоростью, чтобы поддерживать температуру реакционной смеси ниже 5°С. Добавляли полученный раствор Гриньяра (429 мл) и перемешивали в течение 1 ч. Добавляли 1 н. водный раствор лимонной кислоты (5000 мл) с такой скоростью, чтобы поддерживать температуру ниже 5°С. Разделяли слои и промывали органический экстракт водой (5000 мл). Концентрировали раствор при пониженном давлении досуха. К остатку добавляли метанол (2000 мл) и концентрировали с получением указанного в заголовке соединения в виде
- 12 031546 остатка (793 г, активность 73,4%, 83%).
Способ получения 4.
1-(5-Бром-2-фторфенил)-2-[(18)-1-(тритилоксиметил)аллилокси]этаноноксим.
Вг
Схема 2, стадия С. Добавляли гидрохлорид гидроксиламина (98,3 г) к раствору 1-(5-бром-2фторфенил)-2-[(18)-1-(тритилоксиметил)аллилокси]этанона (450 г, 707 ммоль) и ацетата натрия (174 г) в метаноле (3800 мл). Нагревали раствор до 50°С в течение 2 ч. Охлаждали до 24°С и концентрировали. К остатку добавляли воду (1000 мл) и толуол (1500 мл). Разделяли слои и экстрагировали водную фазу толуолом (500 мл). Объединяли органический экстракт и промывали водой (2x400 мл). Концентрировали раствор при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения в виде остатка (567 г, активность 61,4%, 88%).
Способ получения 5.
Трет-Бутил-2-[(18)-1-(тритилоксиметил)аллилокси]ацетат.
Схема 1, стадия В. Добавляли (28)-1-тритилоксибут-3-ен-2-ол (74,67 г, 226,0 ммоль) к раствору тетра-Ы-бутиламмония сульфата (13,26 г, 22,6 ммоль) в толуоле (376 мл). Добавляли раствор гидроксида натрия (50 мас.%) в воде (119 мл), затем трет-бутил-2-бромацетат (110,20 г, 565,0 ммоль). Перемешивали реакционную смесь в течение 18 ч при комнатной температуре. Выливали в воду, разделяли фазы и экстрагировали водную фазу этилацетатом. Объединяли органические слои и сушили над сульфатом магния. Фильтровали смесь и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (77,86 г, 77%). ЭР/МС: m/z+ 467 (M+Na).
Способ получения 6.
(1Е)-2-[(18)-1-(Тритилоксиметил)аллилокси]ацетальдегидоксим.
он
I
Схема 1, стадия С. Охлаждали раствор трет-бутил-2-[(18)-1-(тритилоксиметил)аллилокси]ацетата (77,66 г, 174,7 ммоль) в дихлорметане (582,2 мл) до -78°С. По каплям добавляли раствор диизобутилалюминийгидрида в гексанах (1 моль/л, 174,7 мл), в течение 35 мин и поддерживали температуру ниже 70°С. Перемешивали при -78°С в течение 5 ч. К реакционной смеси по каплям добавляли раствор хлористоводородной кислоты в воде (2 моль/л, 192,1 мл), поддерживая температуру ниже -60°С. Оставляли реакционную смесь постепенно нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 60 мин. Отделяли органический экстракт и промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия. Сушили раствор над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Растворяли остаток в дихлорметане. Добавляли ацетат натрия (28,66 г, 349,3 ммоль), затем гидрохлорид гидроксиламина (18,21 г, 262,0 ммоль). Перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Выливали в воду, разделяли фазы и экстрагировали водную фазу дихлорметаном. Объединяли органические слои и сушили над сульфатом магния. Фильтровали смесь и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (68,38 г, 101%). ЭР/МС: m/z 386 (М-Н).
- 13 031546
Способ получения 7.
(3ак,48)-4-(Тритилоксиметил)-3,3а,4,6-тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазол.
Схема 1, стадия D. Охлаждали раствор (1Е)-2-[(1Б)-1-(тритилоксиметил)аллилокси]ацетальдегидоксима (55,57 г, 143,4 ммоль) в трет-бутил-метиловом эфире (717 мл) до 5°С. По каплям добавляли гипохлорит натрия (5% в воде, 591 мл, 430,2 ммоль), поддерживая температуру ниже 10°С. Перемешивали при 10°С в течение 30 мин. Оставляли реакционную смесь нагреваться до 15°С. Перемешивали при 15°С в течение 18 ч. Разбавляли реакционную смесь этилацетатом и промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия. Разделяли фазы, промывали органическую фазу 5% раствором гидросульфита натрия и насыщенным солевым раствором. Сушили раствор над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя 50% смесью метил-трет-бутилового эфира/дихлорметана:гексанов (градиент 20-27%), с получением указанного в заголовке соединения (35,84 г, 65%). ЭР/МС: m/z+ 408 (M+Na).
Способ получения 8.
(3aR,4S,6aR)-6а-(5-Бром-2-фторфенил)-4-(тритилоксиметил)-3,3а,4,6-тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазол.
Схема 1, стадия Е. Охлаждали раствор 4-бром-1-фтор-2-йодбензола (86,94 г, 288,9 ммоль) в ТГФ (144,5 мл) и толуоле (1445 мл) до -78°С. По каплям добавляли н-бутиллитий (2,5 М в гексанах, 120 мл, 288,9 ммоль), поддерживая температуру ниже -70°С. Перемешивали в течение 30 мин при -78°С. По каплям добавляли диэтилэтерат трифторида бора (36,5 мл, 288,9 ммоль), поддерживая температуру ниже 70°С. Перемешивали раствор в течение 30 мин при -78°С. К реакционной смеси по каплям добавляли раствор (3aR,4S)-4-(тритилоксиметил)-3,3а,4,6-тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазола (55,69 г, 144,5 ммоль) в ТГФ (482 мл) в течение 30 мин, поддерживая температуру ниже -65°С. Перемешивали при -78°С в течение 90 мин. Быстро добавляли насыщенный раствор хлорида аммония, поддерживая температуру ниже -60°С. Выливали в насыщенный солевой раствор и экстрагировали водную фазу этилацетатом. Объединяли органический экстракт и сушили над сульфатом магния. Фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя 10-15% смесью диэтилового эфира: гексанов (градиент 0-70%), с получением указанного в заголовке соединения (36,52 г, 45%). ЭР/МС: m/е (79Br/81Br) 560/562 [М+Н].
Альтернативный способ получения 8.
Схема 2, стадия D. Раствор 1-(5-бром-2-фторфенил)-2-[(1Б)-1-(тритилоксиметил)аллилокси]этаноноксима (458 г, 502 ммоль) и гидрохинона (56,3 г, 511 ммоль) в толуоле (4000 мл) в атмосфере азота нагревали с обратным холодильником до кипения в течение 27 ч. Охлаждали раствор до 24°С и добавляли водный раствор карбоната натрия (800 мл). Разделяли слои и экстрагировали водную фазу толуолом (300 мл). Объединяли органический экстракт и промывали водой (2x500 мл). Концентрировали раствор при пониженном давлении с получением остатка. Добавляли изопропиловый спирт (1500 мл) и нагревали с обратным холодильником до кипения. Охлаждали до 24°С и собирали твердое вещество фильтрацией. Сушили твердое вещество под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения (212 г, 75%).
Способ получения 9.
1-[(3aR,4S,6aS)-6а-(5-Бром-2-фторфенил)-4-(тритилоксиметил)-3,3а,4,6-тетрагидрофуро[3,4с] изоксазол-1-ил] этанон.
- 14 031546
Схема 2, стадия Е. Добавляли ацетилхлорид (35,56 г, 503,9 ммоль) к раствору (3aR,4S,6aR)-6a-(5бром-2-фторфенил)-4-(тритилоксиметил)-3,3а,4,6-тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазола (235,3 г, 420 ммоль), DMAP (5,13 г, 42,0 ммоль) и пиридина (66,45 г, 840,1 ммоль) в дихлорметане (720 мл) в атмосфере азота, поддерживая внутреннюю температуру ниже 5°С. Перемешивали в течение 1 ч, и затем добавляли воду (300 мл) и 1 М серную кислоту (300 мл). Перемешивали смесь в течение 10 мин и оставляли для разделения слоев. Собирали органический экстракт и промывали насыщенным раствором карбоната натрия (500 мл) и водой (500 мл). Сушили раствор над сульфатом магния. Фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением 1-[(3aR,4S,6aS)-6a-(5-бром-2-фторфенил)-4-(тритилоксиметил)-3,3a,4,6тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазол-1-ил]этанона (235 г, 93%) в виде серого твердого вещества.
Способ получения 10.
1-[(3aR,4S,6aS)-6a-(5-Бром-2-фторфенил)-4-(гидроксиметил)тетрaгидро-1H,3Н-фуро[3,4с][1,2] оксазол-1 -ил]этанон.
Схема 3, стадия А. В реакторе объемом 20 л, оснащенном рубашкой, добавляли ацетилхлорид (290 мл, 4075 ммоль) к раствору (3aR,4S,6aR)-6a-(5-бром-2-фторфенил)-4-(тритилоксиметил)-3,3a,4,6тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазола (1996 г, 3384 ммоль), DMAP (56,0 г, 458 ммоль), пиридина (500 мл, 6180 ммоль) в дихлорметане (10 л) в атмосфере азота, поддерживая внутреннюю температуру ниже 10°С. После полного добавления (1 ч) нагревали до 20°С и перемешивали в течение ночи. Если реакция не была завершена, добавляли ацетилхлорид, DMAP, пиридин и дихлорметан до завершения реакции. Охлаждали реакционную смесь до 0°С и медленно добавляли воду (5 л), перемешивали реакционную смесь при 10°С в течение 30 мин и оставляли для разделения слоев. Собирали органический экстракт и промывали водный слой дихлорметаном (1 л). Промывали объединенные органические экстракты 1 н. водным раствором хлористоводородной кислоты (2x4 л), экстрагировали водный слой дихлорметаном (2x1 л). Промывали объединенные органические экстракты водой (4 л) и удаляли растворитель при пониженном давлении с получением общего объема примерно 5 л. Добавляли 90% муравьиную кислоту (1800 мл) и оставляли при комнатной температуре на 3 дня. Нагревали до 40°С в течение 2 ч, затем удаляли растворитель при пониженном давлении. Разбавляли остаток метанолом (4 л) и медленно добавляли насыщенный водный раствор карбоната натрия (3 л). Добавляли твердый карбонат натрия (375 г) для доведения до рН 8-9. Перемешивали при 45°С в течение 1 ч, затем охлаждали до комнатной температуры. Удаляли твердые вещества фильтрацией, промывали метанолом (4x500 мл), затем обрабатывали 2 н. водным раствором гидроксида натрия (100 мл) и оставляли при комнатной температуре на 1 ч. Удаляли твердые вещества фильтрацией, промывали метанолом (2x100 мл). Выпаривали растворитель при пониженном давлении и разделяли остаток между этилацетатом (5 л) и водой (2 л). Экстрагировали водный слой этилацетатом (2 л) и промывали объединенные органические экстракты насыщенным солевым раствором (2x1 л). Удаляли растворитель при пониженном давлении, добавляли метил-трет-бутиловый эфир (2,5 л) и выпаривали досуха. Добавляли метил-трет-бутиловый эфир (4 л) и перемешивали при 65°С в течение 1 ч, охлаждали до комнатной температуры и собирали твердое вещество фильтрацией, промывая метил-третбутиловым эфиром (3x500 мл). Сушили под вакуумом до бежевого твердого вещества. Нагревали полученное твердое вещество в толуоле (7,5 л) до 110°С до полного растворения, охлаждали до 18°С в течение 1 ч и перемешивали при указанной температуре в течение 1 ч. Нагревали до 40°С и после образования осадка еще раз охлаждали до 18°С. Перемешивали в течение 45 мин, затем собирали твердое вещество фильтрацией, промывая толуолом (2x500 мл). Сушили твердое вещество под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения (443,1 г, 36%, чистота по ЖХМС 95%). Выпаривали фильтрат под вакуумом с получением остатка. Очищали остаток флэш-хроматографией на силикагеле, элюируя от 20 до 100% этилацетатом в изогексане. Суспендировали фракции, содержащие продукт, в метил-трет
- 15 031546 бутиловом эфире (2 л) при 60°С в течение 30 мин, охлаждали до комнатной температуры и собирали твердое вещество фильтрацией, промывая метил-трет-бутиловым эфиром (2x200 мл). Сушили твердое вещество под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения в виде бежевого кристаллического вещества (304 г, 24%, чистота по ЖХМС 88%). Выпаривали фильтрат под вакуумом до остатка. Очищали остаток флэш-хроматографией на силикагеле, элюируя от 20 до 100% этилацетатом в изогексане, с получением указанного в заголовке соединения (57,8 г, 5%, чистота по ЖХМС 88%). ЭР/МС: m/z (79Br/81Br) 360,0/362,0 [М+Н].
Альтернативный способ получения 10.
Схема 3, стадия А. Добавляли 1-[(3aR,4S,6aS)-6а-(5-бром-2-фторфенил)-4-(тритилоксиметил)3,3а,4,6-тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазол-1-ил]этанон (69 г, 114,5 ммоль) к охлажденному до 15°С раствору моногидрата п-толуолсульфоновой кислоты (2,2 г, 11,45 ммоль), дихлорметана (280 мл) и метанола (700 мл). Перемешивали в течение 18 ч и затем удаляли растворитель при пониженном давлении. Разбавляли остаток дихлорметаном (350 мл) и добавляли 1 М водный раствор карбоната натрия (140 мл) и воду (140 мл). Разделяли слои и выпаривали органический слой при пониженном давлении. К остатку добавляли толуол (350 мл) и нагревали с обратным холодильником до кипения в течение 1 ч. Охлаждали до 10-15°С со скоростью 10°С/ч. Собирали твердые вещества фильтрованием и промывали толуолом (70 мл). Сушили твердое вещество под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения (30 г, 65%) в виде серого твердого вещества.
Способ получения 11.
(3aR,4S,6aS)-1-Ацетил-6а-(5-бром-2-фторфенил)-3,3а,4,6-тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазол-4карбоновая кислота.
О н0~? н
Вг
Схема 3, стадия В. Добавляли воду (2 л) к суспензии l-[(4S,6aS)-6a-(5-бром-2-фторфенил)-4(гидроксиметил)-3,3а,4,6-тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазол-1-ил]этанона (804,9 г, 2177 ммоль), TEMPO (40,0 г, 251 ммоль) в ацетонитриле (4,5 л) в реакторе объемом 20 л, оснащенном рубашкой, и охлаждали до внутренней температуры 5°С. Частями добавляли (диацетоксийод)бензол (1693 г, 4993,43 ммоль) в течение 30 мин. Контролировали экзотерму, используя охлаждения реактора, а затем выдерживали при 20°С до завершения реакции по данным ЖХМС. Медленно добавляли суспензию бисульфита натрия (70 г, 672,68 ммоль) в воде (300 мл) при комнатной температуре, поддерживая внутреннюю температуру ниже 25°С. Перемешивали в течение 30 мин, а затем охлаждали до 5°С. Добавляли воду (2 л), затем медленно добавляли 47 мас.% водный раствор гидроксида натрия (780 мл) в течение 1 ч, поддерживая внутреннюю температуру ниже 10°С. Добавляли этилацетат (2 л) и изогексан (5 л), энергично перемешивали и разделяли слои. Экстрагировли двухфазные органические слои водой (1 л) и промывали объединенный водный слой метил-трет-бутиловым эфиром (2,5 л). Охлаждали водные экстракты до 5°С и медленно добавляли 37% хлористоводородную кислоту (1,4 л) в течение 30 мин, поддерживая внутреннюю температуру около 5°С. Добавляли этилацетат (5 л), разделяли слои и промывали органический слой насыщенным солевым раствором (3x1 л). Экстрагировали объединенные водные экстракты этилацетатом (2,5 л), промывали объединенные органические экстракты насыщенным солевым раствором (1 л), затем сушили сульфатом натрия и фильтровали. Разбавляли органические вещества гептаном (2,5 л) и выпаривали досуха при пониженном давлении. Добавляли метил-трет-бутиловый эфир (1,5 л) и гептан (1,5 л) и выпаривали досуха. Добавляли гептан (2,5 л) и выпаривали досуха два раза. Добавляли гептан (500 мл) и метил-трет-бутиловый эфир (500 мл) и перемешивали при 40°С в течение 30 мин, затем собирали осадок фильтрацией, промывая гептаном/метил-трет-бутиловым эфиром (3x300 мл), и сушили на воздухе с получением указанного в заголовке соединения в виде бежевого кристаллического вещества (779 г, 91%).ЭР/МС: m/z (79Br/81Br) 374,0/376,0 [М+Н]. [a]D20=-19,0° (С=1,004, хлороформ).
Альтернативный способ получения 11.
Схема 3, стадия В. Добавляли воду (150 мл) и ацетонитрил (150 мл) к 1-[(4S,6aS)-6а-(5-бром-2фторфенил)-4-(гидроксиметил)-3,3а,4,6-тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазол-1-ил]этанону (30 г, 73,3 ммоль), TEMPO (1,14 г, 7,30 ммоль) и (диацетоксийод)бензолу (51,9 г, 161 ммоль). Охлаждали до 15°С и перемешивали в течение 2 ч. Медленно добавляли тиосульфат натрия (21 г) и карбонат калия (22 г) в воде (150 мл) при комнатной температуре. Перемешивали в течение 1 ч, а затем добавляли метил-третбутиловый эфир (150 мл). Разделяли слои и доводили рН водного слоя до 2-3 с помощью концентрированной серной кислоты. Добавляли этилацетат (150 мл) и разделяли слои. Выпаривали органический слой досуха при пониженном давлении. Добавляли н-гептан (90 мл) и нагревали до кипения с обратным
- 16 031546 холодильником в течение 1 ч. Охлаждали до 15 °С, а затем собирали осадок фильтрацией, промывая нгептаном (90 мл). Сушили под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (27 г, 98%).
Способ получения 12. (3аЕ,48,6а8)-1-Ацетил-6а-(5-бром-2-фторфенил)-№метокси-№метилтетрагидро-1Н,3Н-фуро[3,4с][1,2]оксазол-4-карбоксамид.
Схема 3, стадия С. В реакторе объемом 10 л, оснащенном рубашкой, охлаждали раствор (3аК,48,6а8)-1-ацетил-6а-(5-бром-2-фторфенил)-3,3а,4,6-тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазол-4-карбоновой кислоты (771 г, 2019 ммоль) в дихлорметане (7,0 L) до 0°С в атмосфере азота и по частям добавляли CDI (400 г, 2421 ммоль) в течение 40 мин. Охлаждали рубашку реактора до -20°С и перемешивали в течение 1 ч, а затем добавляли гидрохлорид Ы,О-диметилгидроксиламина (260,0 г, 2612 ммоль) в течение примерно 30 мин. Перемешивали при -20°С в течение 1 ч, при 0°С в течение 2 ч и при 10°С в течение 7 ч. Добавляли CDI (175 г, 1058 ммоль) и перемешивали при 10°С в течение ночи. Добавляли дополнительное количество CDI (180 г, 1088 ммоль) при 10°С и перемешивали в течение 1 ч, затем добавляли гидрохлорид N.O-диметилгидроксиламина (140 г, 1407 ммоль) и продолжали перемешивать при 10°С. Если реакция не завершена, можно добавлять дополнительные количества CDI, затем гидрохлорида ^Одиметилгидроксиламина до завершения реакции. Охлаждали реакционную смесь до 5°С и промывали 1 н. водным раствором хлористоводородной кислоты (5 л), затем 2 н. водным раствором хлористоводородной кислоты (5 л). Экстрагировали объединенный водный раствор дихлорметаном (1 л), объединяли органический экстракт и промывали водой (2,5 л), 1 н. водным раствором гидроксида натрия (2,5 л) и водой (2,5 л), сушили над сульфатом магния, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Добавляли метил-трет-бутиловый эфир (3 л) и выпаривали при пониженном давлении. Добавляли дополнительное количество метил-трет-бутилового эфира (2 л) и перемешивали при 50°С в течение 1 ч, охлаждали до 25°С и перемешивали в течение 30 мин. Собирали полученное твердое вещество фильтрацией, промывали метил-трет-бутиловым эфиром (2x500 мл) и сушили под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения (760 г, 88%) в виде белого твердого вещества. ЭР/МС: m/z (79Br/81Br) 417,0/419,0 [М+Н].
Альтернативный способ получения 12.
Схема 3, стадия С. Охлаждали раствор (3аК,48,6а8)-1-ацетил-6а-(5-бром-2-фторфенил)-3,3а,4,6тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазол-4-карбоновой кислоты (27 г, 70,7 ммоль) в Ν,Ν-диметилформамиде (135 мл) до 0°С в атмосфере азота и добавляли CDI (14,9 г, 91,9 ммоль). Перемешивали в течение 1 ч, а затем добавляли гидрохлорид Ν,Ο-диметилгидроксиламина (9,0 г, 92 ммоль) и триэтиламин (14,3 г, 141 ммоль). Перемешивали при 15°С в течение 16 ч. Охлаждали реакционную смесь до 0°С и добавляли 0,5 М водный раствор серной кислоты (675 мл). Перемешивали в течение 1 ч. Собирали полученное твердое вещество фильтрацией. Перемешивали твердое вещество в метил-трет-бутиловом эфире (90 мл) в течение 1 ч. Собирали твердое вещество фильтрацией, промывали метил-трет-бутиловым эфиром (30 мл). Сушили под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения (23 г, 78%) в виде твердого вещества.
Способ получения 13.
1-[(3аК,48,6а8)-1-Ацетил-6а-(5-бром-2-фторфенил)-3,3а,4,6-тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазол-4ил] этанон.
Н
Схема 3, стадия D. В реакторе объемом 20 л, оснащенном рубашкой, охлаждали раствор (3аК,48,6а8)-1-ацетил-6а-(5-бром-2-фторфенил)-№метокси-№метилтетрагидро-1Н,3Н-фуро[3,4с][1,2]оксазол-4-карбоксамида (654,0 г, 1536 ммоль) в ТГФ (10 л) до -60°С и по каплям добавляли 3,2 М раствор метилмагнийбромида в 2-метилтетрагидрофуране (660 мл, 2110 ммоль), поддерживая внутреннюю температуру ниже -40°С. Перемешивали реакционную смесь при -40°С в течение 30 мин, затем ох
- 17 031546 лаждали до -50°С и добавляли 1 н. водный раствор хлористоводородной кислоты (2 л) в ТГФ (2 л), под держивая внутреннюю температуру ниже -38°С. Повышали температуру до 10°С и добавляли этилацетат (5 л) и воду (1 л), перемешивали и оставляли нагреваться до внутренней температуры 5°С, и разделяли слои. Экстрагировали водный слой этилацетатом (1 л) и объединяли органические экстракты. Промывали органические экстракты водой (2 л) и экстрагировали водный слой этилацетатом (1 л). Объединяли органический экстракт и промывали насыщенным солевым раствором (3x2 л), затем сушили над сульфатом магния, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении до остатка. Добавляли циклогексан (2,5 л), перемешивали при 60°С в течение 1 ч, затем при 20°С в течение 30 мин и собирали твердое вещество фильтрацией, промывая циклогексаном (500 мл). Сушили твердое вещество под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (565 г, 99%). ЭР/МС: m/z (79Br/81Br) 372,0/374,0 [М+Н], [a]D 20=-58,0° (С=1,000, хлороформ).
Альтернативный способ получения 13.
Схема 3, стадия D. Охлаждали раствор (3aR,4S,6aS)-1-ацетил-6a-(5-бром-2-фторфенил)-N-метокси№метилтетрагидро-Ш,3Н-фуро[3,4-с][1,2]оксазол-4-карбоксамида (4,0 г, 9,59 ммоль) в ТГФ (60 мл) до -5°С и по каплям добавляли 3,0 М раствор метилмагнийбромида в 2-метилтетрагидрофуране (5,0 мл, 15 ммоль), поддерживая внутреннюю температуру от -5 до 0°С. Перемешивали реакционную смесь при температуре от -5 до 0°С в течение 60 мин, затем добавляли насыщенный раствор хлорида аммония (20 мл). Добавляли метил-трет-бутиловый эфир (40 мл), оставляли до достижения внутренней температуры 5°С и разделяли слои. Выпаривали органический при пониженном давлении до остатка. Добавляли н-гептан (50 мл), перемешивали и собирали твердое вещество фильтрацией. Сушили твердое вещество под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества (3,0 г, 77%).
Способ получения 14. 1-[(3aR,4S,6aS)-6а-(5-Бром-2-фторфенил)-4-(1,1-дифторэтил)тетрагидро-1H,3Н-фуро[3,4с][1,2] оксазол-1 -ил]этанон.
Вг
Схема 3, стадия Е. Одной порцией добавляли 1-[(3aR,4S,6aS)-1-ацетил-6а-(5-бром-2-фторфенил)3,3а,4,6-тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазол-4-ил]этанон (5,08 г, 13,6 ммоль) к перемешанной суспензии XtalFluor-M® (10,02 г, 39,18 ммоль) в безводном дихлорметане (100 мл) при 0-5°С. Перемешивали смесь в течение 10 мин и по каплям добавляли тригидрофторид триэтиламина (4,5 мл, 27 ммоль) в течение 10 мин. Перемешивали реакционную смесь на ледяной бане в течение 8 ч, затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Добавляли насыщенный водный раствор карбоната натрия (100 мл) и перемешивали в течение 1 ч. Разделяли слои и экстрагировали водный слой дихлорметаном (2x50 мл). Объединяли органические экстракты и промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (100 мл), 2 н. водным раствором хлористоводородной кислоты (2x100 мл) и насыщенным солевым раствором (100 мл). Выпаривали досуха с получением светло-коричневого твердого вещества и растворяли в метилтрет-бутиловом эфире (300 мл) при 60°С. Фильтровали горячий раствор и выпаривали фильтрат с получением коричневого твердого вещества (5,3 г, 81%, чистота по ЖХМС 82%), которое использовали без дополнительной очистки. ЭР/МС: m/z (79Br/81Br) 393,8/395,8 [М+Н].
Альтернативный способ получения 14.
Схема 3, стадия Е. Частями добавляли XtalFluor-M® (1,21 кг, 4,73 моль) к перемешанному раствору 1-[(3aR,4S,6aS)-1-ацетил-6а-(5-бром-2-фторфенил)-3,3а,4,6-тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазол-4-ил]этанона (565 г, 1,51 моль) в безводном дихлорметане (5 л) при -14°С. Перемешивали смесь в течение 10 мин и по каплям добавляли тригидрофторид триэтиламина (550 г, 3,34 моль) в течение 20 мин. Перемешивали реакционную смесь при -10°С в течение примерно 10 ч, затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Медленно добавляли 50% водный раствор гидроксида натрия (750 мл), поддерживая внутреннюю температуру ниже 10°С, затем добавляли воду (1,5 л) и насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия (1 л) и перемешивали в течение 30 мин. Разделяли слои и экстрагировали водный слой дихлорметаном (1 л). Объединяли органические экстракты и промывали насыщенным солевым раствором (3 л), 2 н. водным раствором хлористоводородной кислоты (5 л) и насыщенным солевым раствором (3 л). Выпаривали с получением остатка и очищали хроматографией на силикагеле, элюируя 50-100% раствором дихлорметана в изогексане, затем 10% раствором метил-трет-бутилового эфира в дихлорметане с получением указанного в заголовке соединения в виде белого порошка (467 г, 73%, чистота по ЖХМС 94%). ЭР/МС: m/z (79Br/81Br) 393,8/395,8 [М+Н].
Способ получения 15.
- 18 031546 (3aR,4S,6aS)-6а-(5-Бром-2-фторфенил)-4-(1,1-дифторэтил)-3,3а,4,6-тетрагидро-1H-фуро[3,4с]изоксазол.
Схема 3, стадия F. Добавляли 37% водный раствор хлористоводородной кислоты (1,3 л, 16 моль) к раствору 1-[(3aR,4S,6aS)-6а-(5-бром-2-фторфенил)-4-(1,1-дифторэтил)тетрагидро-1H,3Н-фуро[3,4с][1,2]оксазол-1-ил]этанона (570 г, 1,45 моль) в 1,4-диоксане (5 л) в реакторе объемом 10 л, оснащенном рубашкой, и перемешивали при 100°С в течение примерно 3 ч или до завершения реакции по данным ЖХМС. Охлаждали реакционную смесь до 10°С, разбавляли водой (1 л) и медленно добавляли смесь 50 мас.% водного раствора гидроксида натрия (800 мл) и воды (1 л), поддерживая внутреннюю температуру ниже 20°С. Добавляли этилацетат (2,5 л) и энергично перемешивали, затем разделяли слои и промывали органическую фазу насыщенным солевым раствором (2 л), дополнительным количеством насыщенного солевого раствора (1 л) и водой (1 л). Сушили раствор над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали досуха при пониженном давлении с получением остатка. Добавляли циклогексан (2,5 л) и выпаривали досуха, затем повторяли прием с получением указанного в заголовке соединения в виде коричневого маслянистого вещества (527 г, 89%, чистота по ЖХМС 86%). ЭР/МС: m/z (79Br/81Br) 351,8/353,8 [М+Н].
Способ получения 16. [^^^)-4-Амино-4-(5-бром-2-фторфенил)-2-(1,1-дифторэтил)тетрагидрофуран-3-ил] метанол.
F он о' Г
ΝΗ
Схема 3, стадия G. Добавляли цинковый порошок (6,0 г, 92 ммоль) к раствору (SaR^S^aS)^-^бром-2-фторфенил)-4-(1,1-дифторэтил)-3,3а,4,6-тетрагидро-Ш-фуро[3,4-с]изоксазола (5,06 г, 13,4 ммоль) в уксусной кислоте (100 мл) при комнатной температуре и перемешивали в течение ночи. Разбавляли смесь этилацетатом (200 мл) и водой (300 мл) и энергично перемешивали, добавляя карбонат натрия (97 г, 915 ммоль). Разделяли слои и промывали органический слой насыщенным солевым раствором (2x200 мл), сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя от 0 до 100% метил-трет-бутиловым эфиром в изогексане, с получением указанного в заголовке соединения в виде воскообразного вещества (4,67 г, 89%, чистота по ЖХМС 90%). ЭР/МС: m/z (79Br/81Br) 354,0/356,0 [М+Н].
Альтернативный способ получения 16.
Схема 3, стадия G. Частями добавляли цинковый порошок (200 г, 3,06 моль) к раствору (3aR,4S,6aS)-6а-(5-бром-2-фторфенил)-4-( 1,1 -дифторэтил)-3,3а,4,6-тетрагидро-1Н-фуро [3,4-с]изоксазола (304 г, чистота 75%, 647 ммоль) в уксусной кислоте (2 л) и воде (2 л) при 20°С, затем нагревали до 40°С и перемешивали в течение ночи. Разбавляли смесь водой (2 л) и энергично перемешивали, добавляя карбонат натрия (4 кг, 43,4 моль), затем доводили рН до 8-9 с помощью дополнительного количества карбоната натрия. Добавляли этилацетат (5 л) и воду (2,5 л), перемешивали в течение 30 мин и фильтровали через диатомовую землю, промывая смесью ацетонитрила/воды 2:1. Разделяли слои, экстрагировали водный слой этилацетатом (2x2,5 л) и промывали объединенные органические экстракты насыщенным солевым раствором (2x2,5 л), сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали с получением остатка. Очищали остаток с помощью СКЖХ, колонка Chiralpak AD-H (5), 50x250 мм; элюент 12% этанол (0,2% диэтилметиламина в CO2); скорость потока 340 г/мин, при УФ 220 нм, с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (197,7 г, 84%), [a]D 20=-6,93° (С=0,678, хлороформ). ЭР/МС: m/z (79Br/81Br) 354,0/356,0 [М+Н].
Способ получения 17.
[^^^)-4-Амино-4-(5-бром-2-фторфенил)-2-(тритилоксиметил)тетрагидрофуран-3-ил] метанол.
- 19 031546
Схема 1, стадия F. Добавляли (3аК,48,6аК)-6а-(5-бром-2-фторфенил)-4-(тритилоксиметил)-3,3а,4,6тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазол (31,30 г, 55,9 ммоль) к уксусной кислоте (186 мл) с получением суспензии. Добавляли цинк (25,6 г, 391 ммоль) и энергично перемешивали реакционную смесь в течение 18 ч. Разбавляли смесь толуолом и фильтровали через диатомовую землю. Концентрировали фильтрат при пониженном давлении. Солюбилизировали остаток этилацетатом, промывали насыщенным солевым раствором и насыщенным раствором бикарбоната натрия. Разделяли фазы, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (31,35 г, 99%). ЭР/МС: m/е (79Br/81Br) 562/564 [М+Н].
Способ получения 18.
№[[(38,4К,58)-3-(5-Бром-2-фторфенил)-4-(гидроксиметил)-5-(тритилоксиметил)тетрагидрофуран-3ил] карбамотиоил] бензамид.
Схема 1, стадия G. Растворяли [(2Б,3И,4Б)-4-амино-4-(5-бром-2-фторфенил)-2(тритилоксиметил)тетрагидрофуран-3-ил]метанол (31,35 г, 55,73 ммоль) в дихлорметане (557 мл) и охлаждали до 5°С. Добавляли бензоилизотиоцианат (9,74 мл, 72,45 ммоль). После завершения добавления оставляли реакционную смесь нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Выливали в насыщенный раствор бикарбоната натрия, разделяли фазы и экстрагировали водную фазу дихлорметаном. Объединяли органический экстракт и сушили над сульфатом магния. Фильтровали раствор и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (42,95 г, 106%). ЭР/МС: m/е (79Br/81Br) 747/749 [M+Na].
Способ получения 19.
N-[(4aS,5S,7aS)-7а-(5-Бром-2-фторфенил)-5-(1,1-дифторэтил)-4а,5,7,7а-тетрагидро-4Н-фуро[3,4d][1,3]тиазин-2-ил]бензамид.
Схема 3, стадия Н. Добавляли бензоилизотиоцианат (1,80 мл, 13,3 ммоль) к раствору [(2S,3R,4S)-4амино-4-(5-бром-2-фторфенил)-2-(1,1-дифторэтил)тетрагидрофуран-3-ил]метанола (4,67 г, 11,9 ммоль) в дихлорметане (20 мл) при комнатной температуре в течение 1 ч до завершения реакции по данным ЖХМС. Выпаривали реакционную смесь до остатка под вакуумом. Добавляли циклогексан (50 мл), нагревали до 60°С и добавляли метил-трет-бутиловый эфир до полного растворения осадка (100 мл). Фильтровали горячий раствор, охлаждали до комнатной температуры и медленно выпаривали при пониженном давлении до образования белого осадка. Удаляли растворитель при пониженном давлении и растворяли остаток в безводном дихлорметане (30 мл), добавляли пиридин (2,4 мл, 30 ммоль) и охлаждали раствор до -25°С. По каплям добавляли трифторметансульфоновый ангидрид (2,2 мл, 13 ммоль) в течение 30 мин и оставляли нагреваться до 0°С в течение 1 ч. Промывали реакционную смесь водой (25 мл), 2 н. водным раствором хлористоводородной кислоты (25 мл), водой (25 мл), насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (25 мл) и водой (25 мл), сушили над сульфатом магия, фильтровали и кон
- 20 031546 центрировали досуха. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя 5% метил-третбутиловым эфиром в дихлорметане, с получением указанного в заголовке соединения в виде светложелтого пенистого вещества (5,0 г, 76%, чистота по ЖХМС 90%). ЭР/МС: m/z (79Br/81Br) 499,0/501,0 [М+Н].
Альтернативный способ получения 19.
Схема 3, стадия Н. Добавляли бензоилизотиоцианат (98 мл, 724,9 ммоль) к раствору [(2S,3R,4S)-4амино-4-(5-бром-2-фторфенил)-2-(1,1-дифторэтил)тетрагидрофуран-3-ил]метанола (197,6 г, 546,7 ммоль) в дихлорметане (1,2 л) при 30°С в течение 1 ч. Добавляли CDI (101 г, 610,4 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Для полного расходования тиомочевинного промежуточного соединения может быть добавлено дополнительное количество CDI. Нагревали до 90°С в течение 42 ч и охлаждали раствор до комнатной температуры. Разбавляли реакционную смесь этилацетатом (2 л) и добавляли 2 н. водный раствор хлористоводородной кислоты (2 л), перемешивали, добавляли насыщенный солевой раствор (1 л) и разделяли слои. Промывали органический слой 2 н. водным раствором хлористоводородной кислоты (0,5 л), насыщенным солевым раствором (2x1 л) и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (1 л). Сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя 0-100% этилацетата в изогексане, с получением указанного в заголовке соединения в виде светло-желтого твердого вещества (234 г, 83%). ЭР/МС: m/z (79Br/81Br) 499,0/501,0 [М+Н].
Способ получения 20.
N-[(4aS,5S,7aS)-7а-(5-Бром-2-фторфенил)-5-(тритилоксиметил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4d][1,3]тиазин-2-ил]бензамид.
Схема 1, стадия Н. Растворяли N-[[(3S,4R,5S)-3-(5-бром-2-фторфенил)-4-(гидроксиметил)-5(тритилоксиметил)тетрагидрофуран-3-ил]карбамотиоил]бензамид (42,95 г, 59,18 ммоль) в дихлорметане (591 мл) и охлаждали до -20°С. Добавляли пиридин (12,0 мл, 148,0 ммоль), затем трифторметансульфоновый ангидрид (10,97 мл, 65,10 ммоль). Контролировали добавление, поддерживая температуру ниже -20°С. Перемешивали реакционную смесь при -20°С в течение 30 мин. Оставляли реакционную смесь нагреваться до комнатной температуры. Выливали в насыщенный раствор хлорида аммония, разделяли фазы и экстрагировали водную фазу дихлорметаном. Объединяли органический экстракт и сушили над сульфатом магния. Фильтровали раствор и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (45,24 г, 108%). ЭР/МС: m/e (79Br/81Br) 707/709 [М+Н].
Способ получения 21.
N-[(4aS,5S,7aS)-7а-(5-Бром-2-фторфенил)-5-(гидроксиметил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4d][1,3]тиазин-2-ил]бензамид.
НО_ ,,
Схема 1, стадия I. Растворяли N-[(4aS,5S,7aS)-7а-(5-бром-2-фторфенил)-5-(тритилоксиметил)4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4Д][1,3]тиазин-2-ил]бензамид (45,24 г, 63,93 ммоль) в муравьиной кислоте (160 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли воду (29 мл) в течение 5 мин. Перемешивали в течение 50 мин. Концентрировали смесь при пониженном давлении с получением остатка. Растворяли остаток в метаноле (639 мл), добавляли триэтиламин (26,7 мл, 191,8 ммоль) и перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Выливали в насыщенный солевой раствор, разделяли фазы и экстрагировали водную фазу хлороформом. Объединяли органический экстракт и сушили над сульфатом магния. Фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ацетона:гексанов (градиент 25-38%), с получением указанного в заголовке соединения (16,04 г, 54%). ЭР/МС: m/e (79Br/81Br) 465/467 [М+Н].
Способ получения 22.
(4aS,5S,7aS)-2-Бензамидо-7а-(5-бром-2-фторфенил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-d][1,3]тиазин-5карбоновая кислота.
- 21 031546
Схема 1, стадия J. Добавляли N-[(4aS,5S,7aS)-7а-(5-бром-2-фторфенил)-5-(гидроксиметил)-4,4а,5,7тетрагидрофуро[3,4Щ[1,3]тиазин-2-ил]бензамид (16,04 г, 34,47 ммоль) к ДМСО (172 мл). Добавляли 2йодоксибензойную кислоту (35,56 г, 120,70 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Разбавляли реакционную смесь хлороформом (300 мл) и выливали в насыщенный раствор хлорида аммония (400 мл). Отделяли органическую фазу и сушили над сульфатом магния. Фильтровали раствор и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Растворяли остаток в этилацетате (400 мл) и промывали насыщенным раствором хлорида аммония (2x250 мл). Отделяли органическую фазу, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Растворяли остаток в смеси дихлорметана:метанола и добавляли диэтиловый эфир до выпадения в осадок твердого вещества. Собирали твердое вещество фильтрацией и сушили при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (5,78 г, 35%). ЭР/МС: m/e (79Br/81Br) 479/481 [М+Н].
Способ получения 23.
(4aS,5S,7aS)-2-Бензамидо-7а-(5-бром-2-фторфенил)-N-метокси-N-метил-4,4а,5,7-тетрагидрофуро [3,4-d][1,3]тиазин-5-карбоксамид.
Схема 1, стадия K. Растворяли (4aS,5S,7aS)-2-бензамидо-7а-(5-бром-2-фторфенил)-4,4а,5,7тетрагидрофуро[3,4Щ[1,3]тиазин-5-карбоновую кислоту (5,78 г, 12,1 ммоль) в дихлорметане (201 мл) и гидрохлориде Ы,О-диметилгидроксиламина (1,76 г, 18,1 ммоль). Добавляли триэтиламин (5,29 мл, 36,2 ммоль), затем HATU (7,02 г, 18,1 ммоль). Перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней. Выливали в насыщенный раствор хлорида аммония, разделяли фазы и экстрагировали водную фазу этилацетатом. Объединяли органические экстракты и сушили над сульфатом магния. Фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя этилацетатом :дихлорметаном (градиент 0-50%), с получением указанного в заголовке соединения (4,15 г, 66%). ЭР/МС: m/e (79Br/81Br) 522/524 [М+Н].
Способ получения 24a.
N-[(4aS,5S,7aS)-5-Ацетил-7а-(5-бром-2-фторфенил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-d][1,3]тиазин-2ил] бензамид.
Схема 1, стадия L. К раствору (4aS,5S,7aS)-2-бензамидо-7а-(5-бром-2-фторфенил)-N-метокси-Nметил-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4Д][1,3]тиазин-5-карбоксамида (1,51 г, 2,89 ммоль) в ТГФ (57,8 мл), охлажденному до -78°С, по каплям добавляли метилмагнийбромид (3,0 моль/л в диэтиловом эфире, 4,8 мл, 14,5 ммоль). Перемешивали реакционную смесь при -78°С в течение 5 мин и оставляли постепенно нагреваться до комнатной температуры. Перемешивали в течение 30 мин. Гасили реакцию метанолом (4 мл), разбавляли насыщенным раствором хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом. Объединяли органический экстракт и сушили над сульфатом натрия. Фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя смесью этилацетата: гексанов (градиент 0-100%), с получением указанного в заголовке соединения (1,28 г, 93%). ЭР/МС: m/e (79Br/81Br) 477/479 [M+Na].
Способ получения 24b.
- 22 031546
N-[(5S,7aS)-7а-(5-Бром-2-фторфенил)-5-пропаноил-4а,5,7,7А-тетрагидро-4Н-фуро[3,4-d] [1,3 ]тиазин-2-ил]бензамид.
Схема 1, стадия L. Добавляли (4aS,5S,7aS)-2-бензамидо-7а-(5-бром-2-фторфенил)-N-метокси-Nметил-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4Л][1,3]тиазин-5-карбоксамид (3,00 г, 5,74 ммоль) к ТГФ (115 мл) в атмосфере азота и охлаждали до -78°С. К реакционной смеси по каплям добавляли раствор этилмагнийбромида (1,0 моль/л) в ТГФ (28,7 мл, 28,7 ммоль), поддерживая температуру при -78°С. Через 1 ч одной порцией добавляли метанол (10 мл), а затем выливали в насыщенный раствор хлорида аммония. Экстрагировали смесь этилацетатом, сушили органические экстракты над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали in vacuo с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя гексанами:этилацетатом (градиент 100-40%), с получением указанного в заголовке соединения (2,844 г, 5,788 ммоль, 100%). ЭР/МС: m/z (79Br/81Br) 491/493/513/515 (M+H/Na).
Способ получения 24с.
N-[(5S,7aS)-7а-(5-Бром-2-фторфенил)-5-(циклопропилкарбонил)-4а,5,7,7а-тетрагидро-4Н-фуро[3,4d][1,3]тиазин-2-ил]бензамид.
Br
Схема 1, стадия L. К раствору (4aS,5S,7aS)-2-бензамидо-7а-(5-бром-2-фторфенил)-N-метокси-Nметил-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4Л][1,3]тиазин-5-карбоксамида (1,51 г, 2,89 ммоль) в ТГФ (51,2 мл), охлажденному до -78°С, по каплям добавляли циклопропилмагнийбромид (1,0 моль/л в 2метилтетрагидрофуране, 14 мл, 14,4 ммоль). Перемешивали реакционную смесь при -78°С в течение 5 мин и оставляли постепенно нагреваться до комнатной температуры. Перемешивали в течение 30 мин. Гасили реакцию метанолом (4 мл), разбавляли насыщенным раствором хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом. Объединяли органический экстракт и сушили над сульфатом натрия. Фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя смесью этилацетата: гексанов (градиент 0-100%), с получением указанного в заголовке соединения (1,299 г, 89%). ЭР/МС: m/z (79Br/81Br) 503/505 [М+Н].
Способ получения 25a.
N-[(4aS,5S,7aS)-7а-(5-Бром-2-фторфенил)-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4d][1,3]тиазин-2-ил]бензамид.
Схема 1, стадия М. Смешивали дихлорметан (34 мл), Deoxo-Fluor® (1,52 мл, 6,88 ммоль) и диэтилэтерат трифторида бора (0,89 мл, 6,88 ммоль). Перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Одной порцией добавляли N-[(4aS,5S,7aS)-5-ацетил-7а-(5-бром-2-фторфенил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4Л][1,3]тиазин-2-ил]бензамид (0,821 г, 1,72 ммоль), затем тригидрофторид триэтиламина (1,13 мл, 6,88 ммоль). Перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Выливали в насыщенный раствор хлорида аммония, разделяли фазы и экстрагировали водную фазу этилацетатом. Объединяли органический экстракт и сушили над сульфатом магния. Фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя смесью дихлорметана: гексанов (градиент 80-100 %), с получением указанного в заголовке соединения (0,552 г, 64%). ЭР/МС: m/e (79Br/81Br) 499/501 [М+Н].
- 23 031546
Способ получения 25b.
N-[(4aS,5S,7aS)-7а-(5-Бром-2-фторфенил)-5-(1,1-дифторпропил)-4а,5,7,7а-тетрагидро-4Н-фуро[3,4d][1,3]тиазин-2-ил]бензамид.
Схема 1, стадия М. Добавляли N-[(5S,7аS)-7а-(5-бром-2-фторфенил)-5-пропаноил-4а,5,7,7Атетрагидро-4Н-фуро[3,4-б][1,3]тиазин-2-ил]бензамид (0,486 г, 0,989 ммоль) к дихлорметану (19,8 мл) в атмосфере азота при -78°С, затем Deoxo-Fluor® (1,75 г, 1,75 мл, 3,96 ммоль). Перемешивали в течение 30 мин при -78°С, а затем нагревали до комнатной температуры в течение ночи. Выливали реакционную смесь в насыщенный раствор бикрабоната натрия и экстрагировали дихлорметаном. Отделяли органические вещества, используя гидрофобную фритту, и концентрировали in vacuo с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя гексанами:этилацетатом (градиент 100-50%), с получением неочищенного указанного в заголовке соединения с примесями (0,230 г, 0,448 ммоль, 45%), которое использовали без дополнительной очистки. ЭР/МС: m/z 513/515 (М+Н).
Способ получения 25с.
N-[(4aS,5S,7aS)-7a-(5-Бром-2-фторфенил)-5-[циклопропил(дифтор)метил]-4,4а,5,7тетрагидрофуро [3,4-d][ 1,3]тиазин-2-ил]бензамид.
Схема 1, стадия М. Добавляли Deoxo-Fluor® (1,9 мл, 6,68 ммоль) к раствору N-[(5S,7aS)-73-(5бром-2-фторфенил)-5-(циклопропилкарбонил)-4а,5,7,7а-тетрагидро-4Н-фуро[3,4-б][1,3]тиазин-2-ил]бензамида (0,812 г, 1,61 ммоль) в дихлорметане (24 мл) при комнатной температуре. Перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Выливали в насыщенный раствор бикарбоната натрия и экстрагировали водную фазу этилацетатом (3х). Объединяли органические экстракты и сушили над сульфатом натрия. Фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя смесью этилацетата:гексанов (градиент 5-100%), с получением указанного в заголовке соединения (41 мг, 5%). ЭР/МС: m/z (79Br/81Br) 525/527 [М+Н].
Способ получения 26.
N-[(5S,7aS)-5-(1,1-Дифторэтил)-7а-{2-фтор-5-[(трифторацетил)амино]фенил}-4а,5,7,7а-тетрагидро-
Схема 4, стадия А. Растворяли Ы-[(4а8,58,7а8)-7а-(5-бром-2-фторфенил)-5-(1,1-дифторэтил)4а,5,7,7а-тетрагидро-4Н-фуро[3,4-4][1,3]тиазин-2-ил]бензамид (234 г, 454,6 ммоль) в 1,4-диоксане (2 л) и добавляли молекулярные сита 4 А (37 г), 2,2,2-трифторацетамид (91 г, 780,9 ммоль), токноизмельченный карбонат калия (114 г, 824,9 ммоль), йодид натрия (117 г, 780,6 ммоль), йодид меди (I) (17,5 г, 91,9 ммоль) и рацемический транс-М,М'-диметил-1,2-циклогександиамин (20 г, 140,6 ммоль) под потоком азота. Очи щали сосуд, 3 раза повторяя цикл вакуумирования и заполнения азотом, и нагревали до 123°С в течение 18 ч. Охлаждали до комнатной температуры и фильтровали раствор через диатомовую землю, и промывали этилацетатом. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония (2 л) и энергично переме
- 24 031546 шивали в течение 45 мин. Разделяли слои и промывали органический слой насыщенным водным раствором хлорида аммония (3x1 л), насыщенным солевым раствором (300 мл), сушили над сульфатом магния, фильтровали и выпаривали с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя 0-100% этилацетата в изогексане, с получением указанного в заголовке соединения в виде светло-желтого твердого вещества (297,9 г, 95%, чистота 81%). ЭР/МС: m/z 532,0 [М+Н].
Способ получения 27а.
N-[(4aS,5S,7aS)-7а-(5-Амино-2-фторфенил)-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4й][1,3]тиазин-2-ил]бензамид.
Схема 1, стадия N. Смешивали N-[(4aS,5S,7aS)-7а-(5-бром-2-фторфенил)-5-(1,1-дифторэтил)4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-й][1,3]тиазин-2-ил]бензамид (0,372 г, 0,74 ммоль) и (1R,2R)-N,N'-диметил1,2-циклогександиамин (0,037 мл, 0,22 ммоль) в этаноле (30 мл). Добавляли азид натрия (0,194 г, 2,98 ммоль), затем L-аскорбат натрия (0,66 М раствор, 0,50 мл, 0,33 ммоль). Продували верхнюю часть колбы азотом и добавляли сульфат меди (0,33 М раствор, 0,68 мл, 0,22 ммоль). Нагревали реакционную смесь до 80°С и перемешивали в течение 5 ч. Охлаждали реакционную смесь и добавляли холодную воду. Экстрагировали смесь этилацетатом. Объединяли органический экстракт и сушили над сульфатом натрия. Фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Смешивали остаток с палладием (10 мас.% на углероде, 0,35 г, 0,16 ммоль) в этаноле (50 мл) и ТГФ (10 мл). Продували смесь азотом и водородом. Перемешивали при комнатной температуре при давлении водорода 50 psi в течение 1 ч. Отфильтровывали катализатор и промывали этилацетатом. Концентрировали раствор при пониженном давлении с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя смесью этилацетата:дихлорметана (градиент 0-20%), с получением указанного в заголовке соединения (0,2184 г, 67%). ЭР/МС: m/z 436 (М+Н).
Альтернативный способ получения 27a.
Схема 4, стадия В. Добавляли 7 н раствор аммиака в метаноле (600 мл, 4,2 моль) к перемешанной суспензии N-[(5S,7aS)-5-(1,1-дифторэтил)-7а-{2-фтор-5-[(трифторацетил)амино]фенил}-4а,5,7,7атетрагидро-4Н-фуро[3,4-й][1,3]тиазин-2-ил]бензамида (250 г, чистота 80%, 376,3 ммоль) в метаноле (200 мл) при комнатной температуре и перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Выпаривали досуха с получением указанного в заголовке соединения в виде коричневого смолистого вещества (190 г, 375,2 ммоль, чистота 86%). ЭР/МС: m/z 436,0 [М+Н].
Способ получения 27b.
(4aS,5S,7aS)-7а-(5-Амино-2-фторфенил)-5-(1,1-дифторпропил)-4а,5,7,7а-тетрагидро-4Н-фуро[3,4d][1,3] тиазин-2-амин.
Схема 1, стадия N. Смешивали Ы-[(4а8,58,7а8)-7а-(5-бром-2-фторфенил)-5-(1,1-дифторпропил)4а,5,7,7а-тетрагидро-4Н-фуро[3,4Д][1,3]тиазин-2-ил]бензамид (0,567 г, 1,104 ммоль), 1,4-диоксан (4,802 мл) и этанол (11,04 мл), затем азид натрия (0,2154 г, 3,313 ммоль), транс-КИ-диметилциклогексан-1.2диамин (0,04760 г, 0,0528 мл, 0,3313 ммоль), 0,66 М L-аскорбат натрия (0,74 г, 0,74 мл, 0,4859 ммоль) и воду (0,1699 мл). Наконец, добавляли 0,33 М сульфат меди (0,74 г, 0,74 мл, 0,2430 ммоль) и нагревали до 100°С. Перемешивали в течение ночи при 90°С. Добавляли дополнительное количество 0,33 М сульфата меди (0,74 г, 0,74 мл, 0,2430 ммоль), 0,66 М L-аскорбата натрия (0,74 г, 0,74 мл, 0,4859 ммоль), азида натрия (0,2154 г, 3,313 ммоль) и транс-У^-диметилциклогексан-1,2-диамина (0,04760 г, 0,0528 мл, 0,3313 ммоль). Нагревали реакционную смесь при 100°С в течение 1 ч, а затем охлаждали до комнатной температуры. Выливали реакционную смесь в насыщенный солевой раствор и экстрагировали продукт хлороформом. Фильтровали смесь через диатомовую землю и отделяли органические вещества, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали in vacuo. Переносили материал в аппарат Парра с
- 25 031546 палладием (5 мас.%) в катализаторе Линдлара (0,113 г, 0,0533 ммоль) и добавляли метанол (55,22 мл) в атмосфере азота. Гидрировали при давлении водорода 276 кПа при энергичном встряхивании в течение 3 ч. Добавляли дополнительное количество палладия (5 мас. %) в катализаторе Линдлара (0,113 г, 0,0533 ммоль) и гидрировали при давлении водорода 345 кПа еще 4 ч. Фильтровали реакционную смесь через диатомовую землю и промывали хлороформом. Концентрировали фильтрат in vacuo, а затем добавляли метанол (55,22 мл), затем гидрат гидроксида лития (0,4634 г, 0,182 мл, 11,04 ммоль). Нагревали реакционную смесь до 70°С в течение 3 ч, а затем охлаждали до комнатной температуры. Выливали реакционную смесь в насыщенный солевой раствор и экстрагировали хлороформом. Разбавляли органический экстракт метанолом и выливали на картридж SCX-2. Промывали картридж одним объемом колонки метанола и отбрасывали. Затем промывали картридж SCX-2 одним объемом колонки 7 М метанольного раствора аммиака и концентрировали in vacuo с получением указанного в заголовке соединения (0,290 г, 0,840 ммоль, 76%). ЭР/МС: m/z 346 (М+Н).
Способ получения 27с.
N-[(4aS,5S,7aS)-7a-(5-Амино-2-фторфенил)-5-[циклопропил(дифтор)метил]-4,4a,5,7тетрагидрофуро[3,4^][ 1,3]тиазин-2-ил]бензамид.
Схема 1, стадия N. Смешивали N-[(4aS,5S,7aS)-7а-(5-бром-2-фторфенил)-5-[циклопропил(дифтор)метил]-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4^][1,3]тиазин-2-ил]бензамид (31 мг, 0,059 ммоль) и (1R,2R)^^-диметил-1,2-циклогександиамин (0,0049 мл, 0,030 ммоль) в этаноле (3 мл). Добавляли азид натрия (31 мг, 0,47 ммоль), затем L-аскорбат натрия (0,66 М раствор, 0,089 мл, 0,059 ммоль). Продували верхнюю часть колбы азотом и добавляли сульфат меди (0,33 М раствор, 0,18 мл, 0,059 ммоль). Нагревали реакционную смесь до 80°С и перемешивали в течение 3 ч. Охлаждали реакционную смесь и добавляли холодную воду. Экстрагировали смесь этилацетатом. Объединяли органический экстракт и сушили над сульфатом натрия. Фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Смешивали остаток с палладием (10 мас.% на углероде, 30 мг, 0,014 ммоль) в этаноле (20 мл) и ТГФ (5 мл). Продували смесь азотом и водородом. Перемешивали при комнатной температуре при давлении водорода 40 psi в течение 4 ч. Отфильтровывали катализатор и промывали этилацетатом. Концентрировали раствор при пониженном давлении с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя смесью этилацетата: гексанов (градиент 0-100%), с получением указанного в заголовке соединения (21 мг, 77%). ЭР/МС: m/z 462 (М+Н).
Способ получения 28.
(4aS,5S,7aS)-7а-(5-Амино-2-фторфенил)-5-(1,1-дифторэтил)-4а,5,7,7а-тетрагидро-4Н-фуро[3,4d][1,3]тиазин-2-амин.
к водному слою 35%
Схема 4, стадия В. Растворяли N-[(4aS,5S,7aS)-7а-(5-амино-2-фторфенил)-5-(1,1-дифторэтил)4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4^][1,3]тиазин-2-ил]бензамид (216,4 г, чистота 88%, 435,9 ммоль) в пиридине (400 мл), этаноле (100 мл) и ТГФ (300 мл). Добавляли гидрохлорид О-метилгидроксиламина (190 г, 2275,0 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Разбавляли 2метилтетрагидрофураном (1 л) и промывали водой (2x300 мл). Отделяли органический слой и добавляли водный раствор гидроксида аммония (100 мл). Экстрагировали 2 метилтетрагидрофураном (300 мл), затем насыщали хлоридом натрия и экстрагировали 2метилтетрагидрофураном (2x300 мл). Объединяли органические экстракты, промывали насыщенным солевым раствором (300 мл) и выпаривали до остатка. Растворяли в метаноле (200 мл), добавляли 7 н. раствор аммиака в метаноле (100 мл, 700 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. При сохранении трифторацемидной примеси может быть добавлено дополнительное количество аммиака. Удаляли растворитель при пониженном давлении и растворяли остаток в 2 н. водном растворе
- 26 031546 хлористоводородной кислоты (1,5 л). Экстрагировали дихлорметаном (6x500 мл), объединяли органические слои и удаляли растворитель при пониженном давлении до общего объема примерно 1 л. Промывали 2 н. водным раствором хлористоводородной кислоты (300 мл) и объединяли водные промывочные растворы. Добавляли 2-метилтетрагидрофуран (1 л) и энергично перемешивали, доводя рН до щелочного значения бикарбонатом натрия до прекращения выделения газа. Разделяли слои и экстрагировали водный слой 2-метилтетрагидрофураном (2x500 мл). Сушили объединенные органические экстракты сульфатом магния, фильтровали и выпаривали с получением коричневого твердого вещества. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя 0-100% дихлорметаном в ТГФ. Выпаривали фракции, со держащие продукт, с этилацетатом:гептаном, с получением указанного в заголовке соединения в виде тонкодисперсного бежевого порошка (106 г, 70%, чистота 95%). ЭР/МС: m/z 332,0 [М+Н], [a]D 20=+42,11° (С=0,532, хлороформ).
Способ получения 29.
5-(1Н-1,2,4-Триазол-1 -ил)пиразин-2-карбоновая кислота.
Перемешивали смесь метил-5-хлорпиразин-2-карбоксилата (124 г, 718,55 ммоль), 1Н-1,2,4-триазола (198,5 г, 2874,2 ммоль) и карбоната калия (297,92 г, 2155,6 ммоль) в Ν,Ν-диметилформамиде (1 л) при 100°С в течение 15 ч. Охлаждали до комнатной температуры и выливали в воду (2 л). Доводили рН раствора до 2-3 с помощью концентрированного водного раствора хлористоводородной кислоты (примерно 500 мл) и перемешивали в течение 30 мин. Собирали полученное твердое вещество фильтрацией и промывали водой. Добавляли воду (500 мл) и этанол (500 мл), нагревали до 50-60°С в течение 4 ч и охлаждали до комнатной температуры. Собирали твердые вещества фильтрацией и сушили под вакуумом при 40°С с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества. ЭР/МС: m/z 190,0 (М-Н).
Способ получения 30.
N-[3-[(4aS,5S,7aS)-2-Бензaмидо-5-(1,1-дифторэтил)-4,4a,5,7-тетрaгидрофуро[3,4-d][1,3]тиaзин-7aил]-4-фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1 -ил)пиразин-2-карбоксамид.
Схема 3, стадия А. Смешивали N-[(4aS,5S,7aS)-7a-(5-aмино-2-фторфенил)-5-(1,1-дифторэтил)4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4Д][1,3]тиазин-2-ил]бензамид (0,139 г, 0,32 ммоль), 5-(Ш-1,2,4-триазол-1ил)пиразин-2-карбоновую кислоту (0,0852 г, 0,45 ммоль) и HOAt (0,0575 г, 0,41 ммоль) в дихлорметане (4 мл):диметилформамиде (1 мл). К раствору добавляли N.N-диизопропилэтиламин (0,11 мл, 0,63 ммоль), затем одной порцией добавляли EDCI (0,079 г, 0,41 ммоль). Перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 18 ч. Разбавляли раствор этилацетатом, промывали водой и насыщенным солевым раствором и разделяли фазы. Экстрагировали этилацетатом. Объединяли органический экстракт и сушили над сульфатом магния. Фильтровали раствор и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя смесью этилацетата:дихлорметана (градиент 0-30%), с получением указанного в заголовке соединения (0,1140 г, 59%). ЭР/МС: m/z 609 (М+Н).
Способ получения 30а.
N-[3-[(4aS,5S,7aS)-2-бензaмидо-5-[циклопропил(дифтор)метил]-4,4a,5,7-тетрaгидрофуро[3,4d] [1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1 -ил)пиразин-2-карбоксамид.
- 27 031546
Схема 3, стадия А. Смешивали N-[(4aS,5S,7aS)-7а-(5-амино-2-фторфенил)-5-[циклопропил(дифтор)метил]-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4Д][1,3]тиазин-2-ил]бензамид (21 мг, 0,045 ммоль), 5-(1H-1,2,4триазол-1-ил)пиразин-2-карбоновую кислоту (10 мг, 0,054 ммоль) и НОВТ (10 мг, 0,059 ммоль) в дихлорметане (2,5 мл):диметилформамиде (0,5 мл). К раствору добавляли ^№диизопропилэтиламин (0,016 мл, 0,091 ммоль), затем одной порцией добавляли EDCI (11 мг, 0,059 ммоль). Перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 18 ч. Разбавляли раствор этилацетатом, водой и 1 н. NaOH (0,5 мл) и экстрагировали этилацетатом (3х). Объединяли органические экстракты и сушили над сульфатом натрия. Фильтровали раствор и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя смесью этилацетата: дихлорметана (градиент 0-100%), с получением указанного в заголовке соединения (20 мг, 69%). ЭР/МС: m/z 635 (М+Н).
Пример 1.
N-[3-[(4aS,5S,7aS)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-d][1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1 -ил)пиразин-2-карбоксамид.
Схема 3, стадия В. Нагревали смесь N-[3-[(4aS,5S,7aS)-2-бензамидо-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7тетрагидрофуро [3,4-d][ 1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1-ил)пиразин-2-карбоксамида (0,1148 г, 0,189 ммоль), гидрохлорида О-метилгидроксиламина (0,1575 г, 1,886 ммоль) и пиридина (0,15 мл, 1,886 ммоль) в ТГФ (2 мл) и этаноле (2 мл) при 45°С в течение 5 ч. Охлаждали реакционную смесь до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 дней. Концентрировали раствор при пониженном давлении с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя смесью 7 н. раствора NH3 в метаноле/дихлорметане (градиент 0-3%), с получением указанного в заголовке соединения (0,086 г, 90%). ЭР/МС: m/z 505 (М+Н).
Альтернативное получение примера 1.
Схема 4, стадия D. Перемешивали (4aS,5S,7aS)-7а-(5-амино-2-фторфенил)-5-(1,1-дифторэтил)4а,5,7,7а-тетрагидро-4Н-фуро[3,4Д][1,3]тиазин-2-амин (96,5 г, 291 ммоль) в этилацетате (1 л) в атмосфере азота при 50°С и медленно добавляли к теплому раствору 5-(Ш-1,2,4-триазол-1-ил)пиразин-2карбоновую кислоту (84 г, 439,45 ммоль). Перемешивали в течение 10 мин и добавляли Т3Р® (1,67 М в этилацетате, 350 мл, 585 ммоль), и перемешивали при 50°С в течение 17 ч. Охлаждали до комнатной температуры, разбавляли дихлорметаном (1 л) и перемешивали, гася раствором карбоната натрия в воде (128 г, 1,21 моль в 1 л). Разбавляли дихлорметаном (1 л) и водой (2 л) и энергично перемешивали в течение 1 ч. Фильтровали через диатомовую землю и промывали дихлорметаном (3x500 мл), метанолом (500 мл), водой (500 мл), насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (500 мл) и 1:1 смесью метанола:дихлорметана (6x500 мл). Разделяли слои и экстрагировали водный слой дихлорметаном (3x1 л). Объединяли все органические фазы и выпаривали с получением остатка. Обрабатывали остаток в дихлорметане (1л) ультразвуком в течение 15 мин и собирали твердое вещество фильтрацией, промывая дихлорметаном (5x200 мл). Добавляли насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия до достижения рН 8 и энергично перемешивали с дихлорметаном (1 л) и метанолом (500 мл). Удаляли твердое вещество фильтрацией и экстрагировали фильтрат дихлорметаном (2x500 мл). Растворяли твердое вещество в смеси дихлорметана:метанола (1:1, 500 мл) и объединяли полученный раствор с другими органическими фазами. Удаляли растворитель при пониженном давлении, добавляя дихлорметан для сохранения раствора, а затем, после получения конечного объема примерно 300 мл, очищали раствор хроматографией на силикагеле, элюируя 5% смесью 0,3 М раствора аммиака в метаноле/дихлорметане, с получением светлокоричневого твердого вещества. Растворяли твердое вещество в горячем этаноле (2,5 л), фильтровали в горячем состоянии и охлаждали до комнатной температуры в течение 1 ч. Собирали твердое вещество фильтрацией и промывали этанолом (2x250 мл) и сушили под вакуумом. Выпаривали фильтрат досуха и дополнительно очищали хроматографией на силикагеле, элюируя сначала 65% этилацетатом в смеси 50:1 изогексана:7 н. раствора аммиака в метаноле, затем смесью 50:1 этилацетата:7 н. раствора аммиака в метаноле. При необходимости может быть выполнена дополнительная очистка с помощью СКЖХ, колонка Chiralpak AD-H (5 мкм), 50x250 мм; элюент 35% изопропанол (0,2% диэтилметиламина) в CO2; скорость потока 300 г/мин при УФ 220 нм. После выпаривания и вакуумной сушки суспендировали материал в этаноле (1,5 л) и перемешивали при осторожном нагревании (от 36 до 45°С) в течение 20 мин. Собирали твердое вещество фильтрацией, промывая этанолом (100 мл). Из фильтрата может быть выделено дополнительное количество материала; выпаривали досуха, нагревали в этаноле до кипения с об
- 28 031546 ратным холодильником, удаляли твердые вещества горячей фильтрацией, а затем охлаждали фильтрат до комнатной температуры. Собирали твердые вещества фильтрацией, промывая этанолом, и объединяли с материалом, полученным в результате вышеописанной фильтрации. Сушили объединенные твердые вещества под вакуумом при 40°С с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (103,3 г, 68%, содержание этанола 2,5 мас.%). ЭР/МС: m/z 505,0 (М+Н), [a]D20=+149,4° (С=1, хлороформ).
Пример 1 А. N-[3-[(4aS,5S,7aS)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-d][1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1 -ил)пиразин-2-карбоксамида 4-метилбензолсульфонат.
Растворяли N-[3-[(4aS,5S,7aS)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-d][1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1-ил)пиразин-2-карбоксамид (600 мг, 1,189 ммоль) в ацетоне (9 мл) и воде (1 мл).Нагревали полученную суспензию до 60°С. Добавляли моногидрат птолуолсульфоновой кислоты (420 мг, 2,208 ммоль), растворенный в ацетоне (1 мл). Перемешивали смесь в течение ночи при 60°С. Охлаждали смесь до комнатной температуры, отфильтровывали твердые вещества под вакуумом и промывали ацетоном (1 мл), и сушили на воздухе в течение ночи с получением указанного в заголовке соединения (743 мг, 73%).
Порошковая рентгеновская дифракция (ПРД).
Диаграммы ПРД кристаллических твердых веществ получали на рентгеновском порошковом дифрактометре Bruker D4 Endeavor, оснащенном источником СиКа (λ=1,54060 А) и детектором Vantec, работающем при 35 кВ и 50 мА. Образец сканировали от 4 до 40° 2θ с шагом 0,009° 2Θ, скоростью сканирования 0,5 сек/шаг, с дивергенцией 0,6 мм, с неподвижной 5,28 мм антирассеивающей и 9,5 мм детекторной щелями. Сухой порошок укладывали на кварцевый держатель образца и при помощи предметного стекла обеспечивали гладкую поверхность. Диаграммы дифракции кристаллической формы получали при температуре и относительной влажности окружающей среды. В области кристаллографии хорошо известно, что для любой данной кристаллической формы относительные интенсивности пиков дифракции могут варьироваться из-за предпочтительной ориентации, обусловленной такими факторами, как морфология и форма кристалла. При наличии эффекта предпочтительной ориентации интенсивности пиков являются переменными, но положения характеристических пиков полиморфа не меняются. См., например, фармакопею США №23, национальный формуляр №18, страницы 1843-1844, 1995. Кроме того, в области кристаллографии также хорошо известно, что для любой данной кристаллической формы угловые положения пиков могут незначительно варьироваться. Например, положения пиков могут смещаться вследствие изменения температуры или влажности, при которых анализируют образец, вследствие смещения образца или наличия или отсутствия внутреннего стандарта. В представленном случае вариабельность положения пика, составляющая ±0,2 в °2θ, учитывает указанные возможные отклонения, не препятствуя точному определению указанной кристаллической формы. Подтверждение кристаллической формы может быть основано на любой уникальной комбинации характеристических пиков (в единицах °2θ), как правило, более выраженных пиков. Диаграммы дифракции кристаллической формы, полученные при температуре и влажности окружающей среды, корректировали в соответствии со стандартными пиками NIST 675 при 8,853 и 26,774 °2θ.
Полученный образец кристаллического N-[3-[(4aS,5S,7aS)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7тетрагидрофуро [3,4-d][ 1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1 -ил)пиразин-2-карбоксамида 4метилбензолсульфоната описывали с помощью диаграммы ПРД, используя излучение СиКа, имеющей пики дифракции (значения 2θ), указанные в представленной ниже таблице. В частности, диаграмма содержит пик при 17,3° в комбинации с одним или более пиками, выбранными из группы, состоящей из 14,8, 12,7 и 4,9; с допуском углов дифракции 0,2 °.
- 29 031546
Таблица 1. Пики порошковой рентгеновской дифракции примера 1А
| Пик | Угол (^-тета +/- 0,2°) | Относительная интенсивность (% от наиболее интенсивного пика) |
| 1 | 4,9 | 48 |
| 2 | 9,4 | 14 |
| 3 | 12,7 | 52 |
| 4 | 14,8 | 60 |
| 5 | 17,3 | 100 |
| 6 | 19,8 | 44 |
| 7 | 24,9 | 35 |
| 8 | 25,3 | 37 |
| 9 | 26,8 | 19 |
| 10 | 28,2 | 14 |
Пример 1В.
N-[3-[(4aS,5S,7aS)-2-Амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-d][1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1 -ил)пиразин-2-карбоксамида малонат.
Смешивали N-[3-[(4aS,5S,7aS)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-d][1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1-ил)пиразин-2-карбоксамид (201 мг, 0,398 ммоль) и малоновую кислоту (104 мг, 0,999 ммоль) в 95% растворе этанола в воде (15 мл). Перемешивали смесь при 65°С до получения прозрачного раствора. Через несколько минут образовался густой белый осадок. Перемешивали суспензию в течение 1 ч при 55°С, а затем хлаждали до комнатной температуры при перемешивании. Отфильтровывали твердые вещества под вакуумом и сушили на воздухе в течение 2 дней с получением указанного в заголовке соединения (477 мг, 80%).
Полученный образец кристаллического N-[3-[(4aS,5S,7aS)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7тетрагидрофуро [3,4-d][ 1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1-ил)пиразин-2-карбоксамида малоната описывали с помощью диаграммы ПРД, используя излучение CuKa, имеющей пики дифракции (значения 2Θ), указанные в представленной ниже табл. 2. В частности, диаграмма содержит пик при 22,7 в комбинации с одним или более пиками, выбранными из группы, состоящей из 16,8, 17,2 и 24,0; с допуском углов дифракции 0,2°.
Таблица 2. Пики порошковой рентгеновской дифракции примера 1В
| Пик | Угол (°2-тета +/- 0,2°) | Относительная интенсивность (% от наиболее интенсивного пика) |
| 1 | 5,5 | 39 |
| 2 | 10,3 | 44 |
| 3 | 11,8 | 55 |
| 4 | 15,3 | 39 |
| 5 | 16,8 | 62 |
| 6 | 17,2 | 57 |
| 7 | 18,3 | 41 |
| 8 | 22,4 | 60 |
| 9 | 22,7 | 100 |
| 10 | 24,0 | 53 |
- 30 031546
Пример 1С.
Ы-[3-[(4а8,58,7а8)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-й][1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1 -ил)пиразин-2-карбоксамида гидрат.
Суспендировали Ы-[3-[(4а8,58,7а8)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-й][1,3] тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1-ил)пиразин-2-карбоксамид (116 мг, 0,23 ммоль) в 1:1 смеси ТГФ:воды (2 мл) при 70°С. Перемешивали раствор в течение по меньшей мере 2 дней, отфильтровывали твердое вещество и сушили под потоком азота с получением указанного в заголовке соединения.
Полученный образец Ы-[3-[(4а8,58,7а8)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4й][1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1-ил)пиразин-2-карбоксамида гидрата описывали с помощью диаграммы ПРД, используя излучение СиКа, имеющей пики дифракции (значения 2Θ), указанные в представленной ниже табл. 3. В частности, диаграмма содержит пик при 13,0 в комбинации с одним или более пиками, выбранными из группы, состоящей из 7,8, 10,5, 11,0, 14,9, 19,7, 21,3 и 26,9, с допуском углов дифракции 0,2°.
Таблица 3. Пики порошковой рентгеновской дифракции примера 1С
| Пик | Угол (°2нтета+/-0.2°) | Относительная интенсивность (% от наиболее интенсивного пика) |
| 1 | 7,8 | 82 |
| 2 | 10,5 | 68 |
| 3 | 11,0 | 38 |
| 4 | 13,0 | 100 |
| 5 | 13,2 | 48 |
| 6 | 14,9 | 44 |
| 7 | 16,6 | 30 |
| 8 | 19,1 | 32 |
| 9 | 19,7 | 93 |
| 10 | 21Д | 29 |
| 11 | 21,3 | 73 |
| 12 | 22,0 | 26 |
| 13 | 22,3 | 52 |
| 14 | 26,9 | 65 |
Пример 2.
Ы-[3-[(4а8,58,7а8)-2-Амино-5-(1,1-дифторпропил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-й][1,3]тиазин-7аил]-4-фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1 -ил)пиразин-2-карбоксамид.
Схема 3, стадии А и В. Смешивали 5-(1Н-1,2,4-триазол-1-ил)пиразин-2-карбоновую кислоту (0,116 г, 0,608 ммоль), ацетонитрил (4,05 мл), диметилформамид (0,00314 мл), а затем по каплям добавляли оксалилхлорид (0,154 г, 0,105 мл, 1,22 ммоль) в атмосфере азота. Перемешивали реакционную смесь в течение 30 мин, а затем концентрировали in vacuo. Растворяли остаток в ацетонитриле (4,05 мл) и по каплям добавляли к смеси (4аБ,58,7аБ)-7а-(5-амино-2-фторфенил)-5-(1,1-дифторпропил)-4а,5,7,7а
- 31 031546 тетрагидро-4Н-фуро[3,4М][1,3]тиазин-2-амина (0,140 г, 0,405 ммоль) в этаноле (4,05 мл) и воде (1,35 мл) при перемешивании. После завершения добавления разбавляли реакционную смесь хлороформом и промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия. Разбавляли органический экстракт метанолом и помещали на картридж SCX-2. Промывали картридж SCX-2 одним объемом колонки метанола и отбрасывали, а затем промывали картридж SCX-2 одним объемом колонки 7 М метанольного раствора аммиака. Концентрировали промывочный метанольный раствор аммиака in vacuo и очищали хроматографией на силикагеле, элюируя дихлорметаном/метанолом (градиент 100-85%) с получением остатка. Дополнительно очищали ахиральной СКЖХ (сверхкритической жидкостной хроматографией), колонка: бензолсульфонамид (BzS) 5 мкм, Princeton Chromatography, 21,2x250 мм; элюент: 22% метанол (1% 2 М раствора аммиака в метаноле) в CO2; скорость потока: 70 мл/мин, при УФ 250 нм; обратное давление: 100 бар; температура: 40°С. Солюбилизировали остаток в хлороформе и промывали насыщенным солевым раствором. Пропускали органический слой через гидрофильную фритту и концентрировали in vacuo с получением указанного в заголовке соединения (0,0658 г, 0,127 ммоль, 31%). ЭР/МС m/z 519 (М+Н).
Пример 3.
N-[3-[(4aS,5S,7aS)-2-Амино-5-[циклопропил(дифтор)метил]-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4d] [1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1 -ил)пиразин-2-карбоксамид.
Схема 3, стадия В. Нагревали смесь N-[3-[(4aS,5S,7aS)-2-бензамидо-5-[циклопропил(дифтор)метил]-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4М][1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1-ил)пиразин-2карбоксамида (20 мг, 0,0315 ммоль), гидрохлорида О-метилгидроксиламина (26 мг, 0,315 ммоль) и пиридина (0,026 мл, 0,315 ммоль) в этаноле (3 мл) при 55°С в течение 18 ч. Охлаждали реакционную смесь до комнатной температуры и концентрировали раствор при пониженном давлении с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя смесью 7 н раствора NH3 в метаноле: дихлорметане (градиент 0,5-10%), с получением указанного в заголовке соединения (15 мг, 90%). ЭР/МС m/z 531 (М+Н).
Процедура in vitro анализа.
Для оценки селективности в отношении ВАСЕ1 по сравнению с ВАСЕ2 исследуемое соединение оценивали в ферментном анализе на основе FRET, используя специфические субстраты для ВАСЕ1 и ВАСЕ2, как описано ниже. Для in vitro ферментных и клеточных анализов исследуемое соединение получали в ДМСО с получением 10 мМ исходного раствора. Исходный раствор серийно разбавляли в ДМСО с получением десятиточечной кривой разбавления с конечными концентрациями соединения от 10 мкМ до 0,05 нМ в 96-луночном круглодонном планшете с последующим проведением in vitro ферментных и цельноклеточных анализов.
In vitro анализ ингибирования протеазы.
Экспрессия huBACE1:Fc и huBACE2:Fc.
Человеческий ВАСЕ1 (номер доступа: AF190725) и человеческий ВАСЕ2 (номер доступа: AF 204944) клонировали из общей кДНК головного мозга с помощью ОТ-ПЦР. Нуклеотидные последовательности, соответствующие аминокислотным последовательностям № 1-460, вставляли в кДНК, кодирующую полипептид IgGi (Fc) человека (Vassar et al., Science, 286, 735-742 (1999)). Полученный белок слияния ВАСЕ1(1-460) или ВАСЕ2(1-460) и человеческого Fc, названный huBACE1:Fc и huBACE2:Fc соответственно, конструировали в вектор pJB02. Человеческий BACE1(1-460):Fc (huBACE1:Fc) и человеческий BACE2(1-460):Fc (huBACE2:Fc) транзиентно экспрессировали в клетках HEK293. 250 мкг к ДНК каждого конструкта смешивали с Fugene 6 и добавляли к 1 л клеток HEK 293. Через четыре дня после трансфекции кондиционировали среду и собирали для очистки. huBACE1:Fc и huBACE2:Fc, очищали хроматографией на основе белка А, как описано ниже. Ферменты хранили при -80°С в небольших аликвотах. (См. Yang, et. al., J. Neurochemistry, 91(6) 1249-59 (2004).
Очистка huBACE1 :Fc и huBACE2:Fc.
Собирали кондиционированную среду клеток HEK293, транзиентно трансфицированных с применением к ДНК huBACE1:Fc или huBACE2:Fc. Клеточный дебрис удаляли фильтрацией кондиционированной среды через стерильный фильтр с размером отверстий 0,22 мкм. 5 мл белка А-агарозы (объем слоя) добавляли к 4 л кондиционированной среды. Полученную смесь осторожно перемешивали в течение ночи при 4°С. Смолу белка А-агарозы собирали и упаковывали в хроматографическую колонку низкого давления. Колонку промывали 20х объемами слоя PBS со скоростью потока 20 мл/ч. Связанный белок
- 32 031546 huBACE1:Fc или huBACE2:Fc элюировали 50 мМ уксусной кислотой, рН 3,6, со скоростью потока 20 мл/ч. Фракции элюента объемом 1 мл сразу нейтрализовали, используя 0,5 мл 200 мМ ацетата аммония, рН 6,5. Чистоту конечного продукта оценивали с помощью электрофореза SDS-PAGE в 4-20% трис-глицине. Фермент хранили при -80°С в небольших аликвотах.
FRET анализ ВАСЕ1.
Серийные разбавления исследуемого соединения получали так, как описано выше. Соединение дополнительно разбавляли 20х в буфере KH2PO4. 10 мкл каждого разбавления добавляли в каждую лунку в ряду А-Н соответствующего черного планшета с низким связыванием белка, содержащую реакционную смесь (25 мкл 50 мМ KH2PO4., рН 4,6, 1 мМ TRITON® Х-100, 1 мг/мл BSA и 15 мкМ субстрата FRET на основании последовательности АРР) (см. Yang, et. al, J. Neurochemistry, 91(6) 1249-59 (2004)). Содержимое тщательно перемешивали на планшетном шейкере в течение 10 мин. 15 мкл раствора человеческого BACE1(1-460):Fc с концентрацией 200 пМ (см. Vasser, et al., Science, 286, 735-741 (1999)) в буфере KH2PO4. добавляли на планшет, содержащий субстрат и исследуемое соединение, для инициации реакции. После быстрого перемешивания на планшетном шейкере записывали флуоресценцию смеси в относительных единицах (RFU) в момент времени 0 при длине волны возбуждения 355 нм и длине волны излучения 460 нм. Реакционный планшет накрывали алюминиевой фольгой и хранили в темной увлажненной печи при комнатной температуре в течение 16-24 ч. Записывали RFU в конце инкубации при тех же настройках возбуждения и излучения, которые использовали в момент времени 0. Разность RFU в момент времени 0 и в конце инкубации указывает на активность ВАСЕ1 при обработке данным соединением. Разность RFU наносили на график в зависимости от концентрации ингибитора и подгоняли кривую к четырехпараметрическому логистическому уравнению для получения значения IC50. (May, et al., Journal of Neuroscience, 31, 16507-16516 (2011)).
Соединение примера 1, испытанное, по существу, так, как описано выше, имело IC50 для ВАСЕ1 1,19 нМ±0,48, n=4 (среднее значение ±СОС; СОС = стандартная ошибка среднего). Полученные данные демонстрируют, что соединение примера 1 ингибирует активность очищенного рекомбинантного фермента ВАСЕ1 in vitro.
FRET анализ ВАСЕ2 ТМЕМ27.
Трансмембранный белок 27 (ТМЕМ27) (номер доступа NM_020665, также известный как Collectrin) представляет собой недавно описанный субстрат для ВАСЕ2, но не для ВАСЕ1 (Esterhazy, et al, Cell Metabolism, 14, 365-377 (2011)). Для оценки исследуемого соединения в отношении ингибирования ферментной активности ВАСЕ2 в качестве субстрата использовали пептид FRET (dabcyl-QTLEFLKIPSLucY) на основании аминокислотной последовательности человеческого ТМЕМ27 (Esterhazy, et al, Cell Metabolism, 14, 365-377 (2011)). Серийные разбавления исследуемого соединения получали так, как описано выше. Соединение дополнительно разбавляли 20х в буфере KH2PO4. 10 мкл каждого разбавления добавляли в каждую лунку в ряду А-Н соответствующего черного планшета с низким связыванием белка, содержащую реакционную смесь (25 мкл 50 мМ KH2PO4., рН 4,6, 1 мМ TRITON® Х-100, 1 мг/мл BSA и 5 мкМ субстрата ТМЕМ FRET). Затем 15 мкл раствора человеческого ВАСЕ2 (1-460):Fc с концентрацией 20 мкМ (см. Vasser, et al., Science, 286, 735-741 (1999)) в буфере KH2PO4. добавляли на планшет, содержащий субстрат и исследуемое соединение, для инициации реакции. Содержимое тщательно перемешивали на планшетном шейкере в течение 10 мин. Записывали RFU смеси в момент времени 0 при длине волны возбуждения 430 нм и длине волны излучения 535 нм. Реакционный планшет накрывали алюминиевой фольгой и хранили в темной увлажненной печи при комнатной температуре в течение 1624 ч. Записывали RFU в конце инкубации при тех же настройках возбуждения и излучения, которые использовали в момент времени 0. Разность RFU в момент времени 0 и в конце инкубации указывает на активность ВАСЕ2 при обработке данным соединением. Разность RFU наносили на график в зависимости от концентрации ингибитора и подгоняли кривую к четырехпараметрическому логистическому уравнению для получения значения IC50 (May, et al., Journal of Neuroscience, 31, 16507-16516 (2011)). Соединение примера 1, испытанное, по существу, так, как описано выше, имело IC50 для ВАСЕ2 479 нМ±202, n=4 (среднее значение ±СОС; СОС = стандартная ошибка среднего). Отношение ВАСЕ1 (IC50 в ферментном анализе FRET) к ВАСЕ2 (IC50 в анализе FRET TMEM27) составляло примерно 400, указывая на функциональную селективность в отношении ингибирования фермента ВАСЕ1. Данные, представленные выше, демонстрируют, что соединение примера 1 является селективным в отношении ВАСЕ1 по сравнению с ВАСЕ2.
Цельноклеточный анализ SH-SY5YAPP695Wt.
В стандартном цельноклеточном анализе для измерения ингибирования активности ВАСЕ1 используют клеточную линию нейробластомы человека SH-SY5Y (номер доступа АТСС CRL2266), стабильно экспрессирующую кДНК APP695Wt человека. Клетки обычно используют до пересева №6, а затем выбрасывают.
Клетки SH-SY5YAPP695Wt помещали в 96-луночные планшеты для тканевых культур в концентрации 5,0х04 клеток на лунку в 200 мкл культуральной среды (50% MEM/EBSS и среда Хэма F12, 1х каждого из пирувата натрия, заменимых аминокислот и бикарбоната Na, содержащего 10% FBS). На сле- 33 031546 дующий день среду удаляли из клеток, добавляли свежую среду, затем инкубировали при 37°С в течение 24 ч в присутствии/в отсутствие исследуемого соединения в требуемом диапазоне концентрации.
По окончании инкубации анализировали кондиционированную среду на признаки активности бетасекретазы, анализируя пептиды Abeta 1-40 и 1-42 с помощью специфических сэндвичевых твердофазных иммуноферментных анализов. Для измерения указанных специфических изоформ Abeta использовали моноклональный 2G3 в качестве иммобилизованного антитела для Abeta 1-40 и моноклональный 21F12 в качестве иммобилизованного антитела для Abeta 1-42. В твердофазных иммуноферментных анализах Abeta 1-40 и Abeta 1-42 использовали биотинилированный 3D6 в качестве репортерного антитела (описание антител представлено в Johnson-Wood, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94, 1550-1555 (1997)). Концентрация Abeta, высвобожденного в кондиционированной среде после обработки соединением, соответствует активности ВАСЕ1 в таких условиях. Вычерчивали 10-точечную кривую ингибирования и подгоняли к четырехпараметрическому логистическому уравнению для получения значений IC50 эффекта понижения Abeta. Соединение примера 1, испытанное, по существу, так, как описано выше, демонстрировало следующую активность в отношении понижения Abeta, представленную в табл. 4.
Таблица 4
| № Примера | Твердофазный иммуноферментный анализ A-beta (1-40) в SH-SY5YAPP695Wt IC50 (нМ) | Твердофазный иммуноферментный анализ A-beta (1-42) в SH-SY5YAPP695Wt IC50 (нМ) |
| 1 | 0,385 + 0,163, п=4 | 0,381 +0,266, п=4 |
Среднее значение ±СОС; СОС = стандартная ошибка среднего.
In vivo ингибирование бета-секретазы.
Для проверки ингибирования активности бета-секретазы in vivo после обработки соединением можно использовать несколько животных моделей, включая модель на мышах, морских свинках, собаках и обезьянах. Животные, используемые в настоящем изобретении, могут быть животными дикого типа, трансгенными или животными с нокаутным геном. Например, для анализа in vivo ингибирования Abeta и выработки sAPPbeta в присутствии ингибирующих соединений подходит мышиная модель PDAPP, полученная так, как описано в публикации Games et al., Nature 373, 523-527 (1995), и другие нетрансгенные животные или животные с нокаутным геном. Обычно мышам PDAPP, мышам с нокаутным геном или нетрансгенным животным в возрасте 2 месяца вводят соединение, составленное в композицию с носителями, такими как кукурузное масло, бета-циклодекстрин, фосфатные буферы, PHARMASOLVE® или другие подходящие носители, посредством перорального, подкожного, внутривенного введения, введения с кормом или другого способа введения. В течение интервала времени от 1 до 24 ч после введения соединения животных усыпляют и извлекают головной мозг для анализа Abeta 1-х. Abeta 1-х в данном контексте относится к сумме частиц Abeta, которые начинаются с 1 остатка и заканчиваются С-концом, который больше 28 остатка. В результате обнаруживают большинство частиц Abeta, которые зачастую называют общим Abeta. Уровни общих пептидов Abeta (Abeta 1-х) измеряют с помощью сэндвичевого твердофазного иммуноферментного анализа, используя моноклональный 266 в качестве иммобилизованного антитела и биотинилированный 3D6 в качестве репортерного антитела. (См. May, et al., Journal of Neuroscience, 31, 16507-16516(2011)).
Для испытаний острого воздействия вводят соединение или соответствующий носитель и усыпляют животных примерно через 3 ч после введения дозы. У выбранных животных извлекают ткань головного мозга и анализируют на присутствие Abeta 1-х. Можно анализировать также ткани более взрослых АРР трансгенных мышей после постоянного введения доз для определения количества бета-амилоидных бляшек после лечения соединением.
Животные (PDAPP или другие АРР трансгенные или нетрансгенные мыши), которым вводили ингибирующее соединение, могут демонстрировать снижение Abeta в тканях головного мозга по сравнению с контрольными животными, обработанными носителем, или с контрольным значением в нулевой момент времени. Например, пероральная доза 3, 10 и 30 мг/кг примера 1, введенная молодым самкам PDAPP мышей, приводила к снижению уровней пептидов Abeta 1-х в гиппокампе мозга на 23% (незначительно), 43% (р<0,05) и 58% (р<0,01) соответственно. В кортикальной ткани головного мозга дозы 3, 10 и 30 мг/кг примера 1 вызывали снижение уровней Abeta 1-х на 43, 59 и 73% (все значения р<0,01) по сравнению с мышами, обработанными носителем, через 3 ч после введения дозы.
С учетом активности примера 1 против фермента ВАСЕ1 in vitro указанные эффекты снижения Abeta согласуются с ингибированием ВАСЕ in vivo и дополнительно демонстрируют проникновение примера 1 в ЦНС.
Представленные исследования демонстрируют, что соединение согласно настоящему изобретению ингибирует ВАСЕ1 и, следовательно, подходит для снижения уровней Abeta.
- 34 031546
Claims (15)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Соединение формулы где R представляет собой метил, этил или циклопропил, или его фармацевтически приемлемая соль.
- 2. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, где R представляет собой метил.
- 3. Соединение по п.1 или 2, где указанное соединение представляет собой или его фармацевтически приемлемая соль.
- 5. Соединение по любому из пп.1-2, представляющее собойН
- 6. Соединение по любому из пп.1-2 или его фармацевтически приемлемая соль, где указанное соединение представляет собой N-[3-[(4aS,5S,7aS)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4Д][1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1-ил)пиразин-2-карбоксамид.
- 7. Соединение по п.5, представляющее собой N-[3-[(4aS,5S,7aS)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4Д][1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1-ил)пиразин-2карбоксамид.
- 8. Соединение по любому из пп.1-4, представляющее собой N-[3-[(4aS,5S,7aS)-2-амино-5-(1,1- 35 031546 дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4^][1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1-ил)пиразин-2-карбоксамида гидрат.
- 9. Соединение по любому из пп.1-4, где соль представляет собой N-[3-[(4aS,5S,7aS)-2-амино-5-(1,1дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4^][1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1-ил)пиразин-2-карбоксамида 4-метилбензолсульфонат.
- 10. Соединение по любому из пп.1-4, где соль представляет собой N-[3-[(4aS,5S,7aS)-2-амино-5(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4^][1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-(1,2,4-триазол-1ил)пиразин-2-карбоксамида малонат.
- 11. Способ лечения болезни Альцгеймера у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения по любому из пп.1-10 или его фармацевтически приемлемой соли.
- 12. Способ лечения прогрессирования умеренных когнитивных нарушений, связанных с болезнью Альцгеймера, у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения по любому из пп.1-10 или его фармацевтически приемлемой соли.
- 13. Применение соединения по любому из пп.1-10 или его фармацевтически приемлемой соли для лечения болезни Альцгеймера.
- 14. Применение соединения по любому из пп.1-10 или его фармацевтически приемлемой соли для лечения прогрессирования умеренных когнитивных нарушений, связанных с болезнью Альцгеймера.
- 15. Фармацевтическая композиция для лечения болезни Альцгеймера, содержащая соединение по любому из пп.1-10 или его фармацевтически приемлемую соль и один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или вспомогательных веществ.
- 16. Способ получения фармацевтической композиции, включающий смешивание соединения по любому из пп.1-10 или его фармацевтически приемлемой соли с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями, разбавителями или вспомогательными веществами.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201562119391P | 2015-02-23 | 2015-02-23 | |
| PCT/US2016/018160 WO2016137788A1 (en) | 2015-02-23 | 2016-02-17 | Selective bace1 inhibitors |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201791684A1 EA201791684A1 (ru) | 2017-12-29 |
| EA031546B1 true EA031546B1 (ru) | 2019-01-31 |
Family
ID=55442893
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201791684A EA031546B1 (ru) | 2015-02-23 | 2016-02-17 | Селективные ингибиторы bace1 |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9522923B2 (ru) |
| EP (1) | EP3262051B1 (ru) |
| JP (1) | JP6111001B1 (ru) |
| KR (1) | KR101945139B1 (ru) |
| CN (1) | CN107257801B (ru) |
| AR (1) | AR103680A1 (ru) |
| AU (1) | AU2016223072B2 (ru) |
| BR (1) | BR112017013936A2 (ru) |
| CA (1) | CA2972098A1 (ru) |
| CL (1) | CL2017002090A1 (ru) |
| CO (1) | CO2017008382A2 (ru) |
| CR (1) | CR20170315A (ru) |
| DO (1) | DOP2017000178A (ru) |
| EA (1) | EA031546B1 (ru) |
| EC (1) | ECSP17054980A (ru) |
| GT (1) | GT201700185A (ru) |
| IL (1) | IL252969A0 (ru) |
| MX (1) | MX367940B (ru) |
| NZ (1) | NZ732940A (ru) |
| PE (1) | PE20171337A1 (ru) |
| PH (1) | PH12017501523A1 (ru) |
| SG (1) | SG11201705764SA (ru) |
| SI (1) | SI3262051T1 (ru) |
| TN (1) | TN2017000355A1 (ru) |
| TW (1) | TWI627177B (ru) |
| WO (1) | WO2016137788A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA201704293B (ru) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB201116559D0 (en) | 2011-09-26 | 2011-11-09 | Univ Leuven Kath | Novel viral replication inhibitors |
| WO2016149057A1 (en) * | 2015-03-19 | 2016-09-22 | Eli Lilly And Company | Selective bace1 inhibitors |
| AR104241A1 (es) | 2015-04-29 | 2017-07-05 | Lilly Co Eli | Derivados de tetrahidrofuro tiazina como inhibidores de bace1 selectivos |
| JOP20160086B1 (ar) | 2015-05-08 | 2021-08-17 | 2 Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research And Development | مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك |
| JO3633B1 (ar) | 2015-09-16 | 2020-08-27 | Katholieke Univ Leuven Ku Leuven Research & Development | مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك |
| JOP20160198B1 (ar) | 2015-09-16 | 2022-03-14 | Janssen Pharmaceuticals Inc | مشتقات اندول مستبدلة احاديا او ثنائيا بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك |
| US10646469B2 (en) | 2016-03-31 | 2020-05-12 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | Substituted indole derivatives as dengue viral replication inhibitors |
| KR102359735B1 (ko) | 2016-03-31 | 2022-02-08 | 얀센 파마슈티칼즈, 인코포레이티드 | 뎅기 바이러스 복제 억제제로서의 치환 인돌린 유도체 |
| JOP20170069B1 (ar) | 2016-04-01 | 2021-08-17 | 1 Janssen Pharmaceuticals Inc | مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك |
| EP3436004A1 (en) | 2016-04-01 | 2019-02-06 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | Substituted indole compound derivatives as dengue viral replication inhibitors |
| WO2018034977A1 (en) * | 2016-08-18 | 2018-02-22 | Eli Lilly And Company | Combination therapy of bace-1 inhibitor and anti-n3pglu abeta antibody |
| JOP20180026A1 (ar) | 2017-03-31 | 2019-01-30 | Univ Leuven Kath | مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك |
| JOP20180025B1 (ar) | 2017-03-31 | 2021-08-17 | Janssen Pharmaceuticals Inc | مشتقات اندولين مستبدلة بصفتها مانعات للتكاثر الفيروسي لحمى الفنك |
| TWI771420B (zh) | 2017-05-22 | 2022-07-21 | 美商健生醫藥公司 | 作為登革熱病毒複製抑制劑之經取代之吲哚啉衍生物（一） |
| JP7203764B2 (ja) | 2017-05-22 | 2023-01-13 | ヤンセン ファーマシューティカルズ，インコーポレーテッド | デングウイルス複製阻害剤としての置換インドリン誘導体 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2233474A1 (en) * | 2008-01-18 | 2010-09-29 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Condensed aminodihydrothiazine derivative |
| WO2012098461A1 (en) * | 2011-01-21 | 2012-07-26 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Fused aminodihydrothiazine derivatives |
| WO2012098213A1 (en) * | 2011-01-21 | 2012-07-26 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Fused aminodihydrothiazine derivatives useful as bace inhibitors |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2609582A1 (en) | 2005-06-14 | 2006-12-28 | Schering Corporation | Aspartyl protease inhibitors |
| EP2305672B1 (en) | 2008-06-13 | 2019-03-27 | Shionogi & Co., Ltd. | SULFUR-CONTAINING HETEROCYCLIC DERIVATIVE HAVING ß-SECRETASE-INHIBITING ACTIVITY |
| TW201016708A (en) | 2008-09-30 | 2010-05-01 | Eisai R&D Man Co Ltd | Novel fused aminodihydrothiazine derivative |
| AR077277A1 (es) | 2009-07-09 | 2011-08-17 | Lilly Co Eli | Compuestos de biciclo (1,3)tiazin-2-amina formulacion farmaceutica que lo comprende y su uso para la manufactura de un medicamento util para el tratamiento de la enfermedad de alzheimer |
| JP5554346B2 (ja) | 2009-12-09 | 2014-07-23 | 塩野義製薬株式会社 | 含硫黄複素環誘導体を含有するアルツハイマー症の治療用または予防用医薬組成物 |
| JPWO2011071109A1 (ja) | 2009-12-11 | 2013-04-22 | 塩野義製薬株式会社 | アミノ基を有する縮合ヘテロ環化合物 |
| GB201100181D0 (en) | 2011-01-06 | 2011-02-23 | Eisai Ltd | Fused aminodihydrothiazine derivatives |
| TW201302763A (zh) | 2011-05-24 | 2013-01-16 | 必治妥美雅史谷比公司 | 用於減少β－類澱粉產生之化合物 |
| WO2014015125A1 (en) | 2012-07-19 | 2014-01-23 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Fused aminodihydrothiazine derivative salts and uses thereof |
| GB201212816D0 (en) * | 2012-07-19 | 2012-09-05 | Eisai Ltd | Novel compounds |
| TWI593692B (zh) | 2013-03-12 | 2017-08-01 | 美國禮來大藥廠 | 四氫吡咯并噻嗪化合物 |
| TWI639607B (zh) * | 2013-06-18 | 2018-11-01 | 美國禮來大藥廠 | Ｂａｃｅ抑制劑 |
| AR104241A1 (es) * | 2015-04-29 | 2017-07-05 | Lilly Co Eli | Derivados de tetrahidrofuro tiazina como inhibidores de bace1 selectivos |
-
2016
- 2016-02-12 AR ARP160100396A patent/AR103680A1/es unknown
- 2016-02-15 TW TW105104352A patent/TWI627177B/zh not_active IP Right Cessation
- 2016-02-17 TN TNP/2017/000355A patent/TN2017000355A1/en unknown
- 2016-02-17 PE PE2017001256A patent/PE20171337A1/es unknown
- 2016-02-17 BR BR112017013936A patent/BR112017013936A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2016-02-17 WO PCT/US2016/018160 patent/WO2016137788A1/en active Application Filing
- 2016-02-17 JP JP2016558188A patent/JP6111001B1/ja not_active Expired - Fee Related
- 2016-02-17 EA EA201791684A patent/EA031546B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2016-02-17 US US15/045,305 patent/US9522923B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2016-02-17 SG SG11201705764SA patent/SG11201705764SA/en unknown
- 2016-02-17 CA CA2972098A patent/CA2972098A1/en not_active Abandoned
- 2016-02-17 CN CN201680011583.5A patent/CN107257801B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2016-02-17 CR CR20170315A patent/CR20170315A/es unknown
- 2016-02-17 SI SI201630428T patent/SI3262051T1/sl unknown
- 2016-02-17 AU AU2016223072A patent/AU2016223072B2/en not_active Ceased
- 2016-02-17 EP EP16706731.3A patent/EP3262051B1/en active Active
- 2016-02-17 NZ NZ732940A patent/NZ732940A/en not_active IP Right Cessation
- 2016-02-17 MX MX2017010861A patent/MX367940B/es active IP Right Grant
- 2016-02-17 KR KR1020177023007A patent/KR101945139B1/ko active IP Right Grant
-
2017
- 2017-06-18 IL IL252969A patent/IL252969A0/en unknown
- 2017-06-23 ZA ZA2017/04293A patent/ZA201704293B/en unknown
- 2017-07-31 DO DO2017000178A patent/DOP2017000178A/es unknown
- 2017-08-01 GT GT201700185A patent/GT201700185A/es unknown
- 2017-08-16 CO CONC2017/0008382A patent/CO2017008382A2/es unknown
- 2017-08-16 CL CL2017002090A patent/CL2017002090A1/es unknown
- 2017-08-22 EC ECIEPI201754980A patent/ECSP17054980A/es unknown
- 2017-08-23 PH PH12017501523A patent/PH12017501523A1/en unknown
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2233474A1 (en) * | 2008-01-18 | 2010-09-29 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Condensed aminodihydrothiazine derivative |
| WO2012098461A1 (en) * | 2011-01-21 | 2012-07-26 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Fused aminodihydrothiazine derivatives |
| WO2012098213A1 (en) * | 2011-01-21 | 2012-07-26 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Fused aminodihydrothiazine derivatives useful as bace inhibitors |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| DANIEL OEHLRICH, HANA PROKOPCOVA, HARRIE J.M. GIJSEN: "The evolution of amidine-based brain penetrant BACE1 inhibitors", BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS, PERGAMON, AMSTERDAM, NL, vol. 24, no. 9, 1 May 2014 (2014-05-01), AMSTERDAM, NL, pages 2033 - 2045, XP055233028, ISSN: 0960-894X, DOI: 10.1016/j.bmcl.2014.03.025 * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA031546B1 (ru) | Селективные ингибиторы bace1 | |
| JP6777668B2 (ja) | 選択的ｂａｃｅ１阻害剤 | |
| JP2019142902A (ja) | Ｎ−［３−［（４ａｒ，７ａｓ）−２−アミノ−６−（５−フルオロピリミジン−２−イル）−４，４ａ，５，７−テトラヒドロピロロ［３，４−ｄ］［１，３］チアジン−７ａ−イル］−４−フルオロ−フェニル］−５−メトキシ−ピラジン−２−カルボキサミドのトシル酸塩 | |
| KR101915419B1 (ko) | BACE 억제제로서의 테트라히드로피롤로[3,4-d][1,3]티아진-유도체 | |
| AU2017268154B2 (en) | N-[3-[2-Amino-5-(1,1-difluoroethyl)-4,4a,5,7-tetrahydrofuro[3,4-d][1,3]oxazin-7a-yl]-4-fluoro-phenyl]-5-(trifluoromethyl)pyridine-2-carboxamide and its (4aR,5S,7aS) isomer as a selective BACE1 inhibitor for treating e.g. Alzheimer's disease | |
| WO2018031334A1 (en) | Aminothiazines and their use as bace1 inhibitors |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM |
|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): RU |