EA028630B1 - Способ предотвращения вызванного канцерогеном рака с применением кураксина-137 - Google Patents

Abstract

Настоящее изобретение относится к новому способу предотвращения вызванного канцерогеном рака у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение эффективного количества соединения формулыили его фармацевтически приемлемую соль или гидрат; причем карциноген представляет собой генотоксический карциноген, и рак представляет собой рак толстой кишки, рак почки или рак матки.

Description

Настоящее изобретение относится к способу, полезному при предотвращении вызванного канцерогеном рака, включая, например, рак толстой кишки, рак почки или рак матки.

Уровень техники

Лечение различных видов рака может основываться на характеристиках рака, которые в некоторых случаях включают молекулярный анализ опухоли. Варианты лечения больных раком включают хирургию, а лучевую терапию и химиотерапию также используют в качестве альтернативной или дополнительной терапии. Кроме того, в некоторых случаях используют гормональную терапию или эндокринную терапию. Все эти варианты лечения омрачены нежелательными побочными эффектами и/или снижением эффективности, если подобраны не тщательно для конкретной опухоли.

Таким образом, остается потребность в способах, которые полезны для лечения рака и связанных с ним заболеваний, в том числе на персонализированной основе.

Краткое описание изобретения

Настоящее изобретение предусматривает способ предотвращения вызванного канцерогеном рака у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение эффективного количества соединения формулы

или его фармацевтически приемлемую соль или гидрат; причем карциноген представляет собой генотоксический карциноген, и рак представляет собой рак толстой кишки, рак почки или рак матки.

Детали изобретения изложены в прилагаемом описании ниже. Хотя способы и материалы, подобные или эквивалентные тем, которые описаны здесь, могут быть использованы при осуществлении или тестировании настоящего изобретения, иллюстративные способы и материалы описаны ниже. Другие признаки, цели и преимущества настоящего изобретения будут очевидны из описания и формулы изобретения. В описании и прилагаемой формуле изобретения формы единственного числа включают также множественное число, если из контекста явно не следует иное. Если не определено иначе, то все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют то же значение, что обычно понимается специалистом в данной области, к которой это изобретение относится.

Краткое описание графических материалов

На фиг. 1 проиллюстрирована безопасность при длительном приеме кураксина-137 с питьевой водой. Фиг. 1А-Е показывают группы мышей ММТУ-пеи (п=5/группу), которым давали обычную воду (контроль) или растворы кураксина-137 (0,1 или 0,2 мг/мл) аб йЬйиш с 4 до достижения 14-недельного возраста.

На фиг. 1А показано, что скорость потребления жидкости мышами ММТУ-была похожей для групп, получавших обычную воду или растворы кураксина-137 (0,1 или 0,2 мг/мл). Ось Υ - подсчитанное количество потребляемой воды каждой мышью в клетке в день, исходя из взвешивания бутылок один раз в неделю.

На фиг. 1В проиллюстрирована фактическая доза кураксина-137, доставленная с питьевой водой. Средняя суточная доза кураксина-137 была рассчитана с использованием измерений от А и С.

На фиг. 1С проиллюстрированы получавшие кураксин и контрольные мыши, набравшие вес при подобных скоростях. Средний вес тела мышей в трех исследуемых группах показан отнесенным к среднему весу в каждой группе в 4-недельном возрасте. Столбцы ошибок указывают среднее отклонение между 5 мышами на группу.

На фиг. 1Ό проиллюстрированы кривые выживаемости, полученные по методу Каплана-Мейера, иллюстрирующие не связанную с опухолью смертность животных ММТУ-пеи в трех исследуемых группах. Группа 0,1 мг/мл начала лечение в 4-недельном возрасте, а группа 0,2 мг/мл - в 10-недельном возрасте. У мышей, которые умерли до достижения 44-недельного возраста, не было видимых или прощупываемых опухолей. Данные анализировали с использованием МебСа1с ν.11,3.3, а кривые выживаемости сравнивали, используя логарифмический ранговый критерий, р >0,1 для каждой получавшей кураксин группы в сравнении с контрольной группой.

- 1 028630

На фиг. 1Е представлен анализ иерархической группировки профилей экспрессии генов в образцах, выделенных от 2 мышей в каждой исследуемой группе, контроле (простая вода) и получавших 0,1 и 0,2 мг/мл кураксина-137 с 4 до 14-недельного возраста. РНК печени и селезенки были проанализированы.

На фиг. 2 проиллюстрировано отсутствие морфологических изменений органов мышей ММТУ-пеи, получавших кураксин-137 в возрасте от 4 до 14 недель. По 5 животных из группы подвергались слепому гистопатологическому анализу. Из большинства органов готовили Н&Е-окрашенные срезы.

На фиг. 2А проиллюстрированы образцы костного мозга (первая колонка) из трех групп мышей, продемонстрировавшие плотно упакованные кроветворные клетки всех линий и разной зрелости, что указывает на активный гемопоэз. Образцы селезенки мышей из всех групп (колонка 2 и 3) имели нормальную морфологию с лимфоидными клетками в белой пульпе и активный гемопоэз в красной пульпе.

На фиг. 2В проиллюстрирована морфология печени (первая колонка), легких (вторая колонка) и почек (третья колонка). Гистология печени была нормальной у всех мышей с более компактной цитоплазмой перипортальных гепатоцитов и менее вакуолярной цитоплазмой клеток вокруг терминальной вены долек. Все мыши продемонстрировали нормальную гистологию легких (альвеол, бронхиол и кровеносных сосудов) и почек (клубочков и канальцев).

На фиг. 2С проиллюстрирована морфология желудочно-кишечного тракта. Нормальная морфология образцов из кишечника всех мышей с неизмененной поверхностью эпителия, ворсинок, собственной пластинки, крипт и слизистой лимфоидной ткани.

На фиг. 3 проиллюстрировано действие длительного введения кураксина-137 на общую и безопухолевую жизнеспособность самок трансгенных мышей ММТУ-иеи.

На фиг. 3А показано, что кураксин-137 (в данном документе, СВЬ 137) продлевает общую жизнеспособность мышей дозозависимым способом. Кривые выживаемости, полученные по методу КапланаМейера, проиллюстрированы для каждой группы животных (контроль-регулярно пьющий воду, или 0,1 или 0,2 мг/мл кураксина-137 (СВБС137) в питьевой воде в возрасте от 4 до 14 недель; п=19-25/группу). Данные анализировали с использованием МебСа1с ν.11,3.3, а кривые выживаемости сравнивали, используя логарифмический ранговый критерий, р<0,0001 для обеих получавших кураксин групп.

На фиг. 3В показано, что начало опухоли (появление видимых опухолей) было отсроченным у животных, получавших кураксин-137 (СВЬ 137), дозозависимым способом. Кривые Каплана-Мейера безопухолевой выживаемости были построены для групп, описанных в А, и анализировались как в А; р<0,001 для обеих получавших кураксин групп.

На фиг. 3С продемонстрировано опухолевое разнообразие в трех группах мышей, представленное как среднее количество опухолей разных категорий размеров (большие, средние, малые) у мышей, определенных при аутопсии. Столбцы ошибок - стандартное отклонение между 19-25 проанализированными животными на каждую группу. Звездочки указывают на существенное отличие от нелеченых животных (ΐ-тест, р<0,05).

На фиг. 4 представлена схема эксперимента по исследованию ЭМН.

На фиг. 5 проиллюстрированы динамические изменения веса тела мышей в продолжение всего исследования ОМеН.

В табл. 1 представлена концентрация кураксина-137 (мкМ) в мышиной плазме и тканях (среднее +/8Ό в мкМ, п=4) спустя 10 недель после начала обработки (14-недельный возраст).

В табл. 2 представлены гистологические показатели у старых животных в каждой испытательной группе (2 мыши на группу).

В табл. 3 представлен коэффициент заболеваемости опухолью, индуцированной ОМН у самок мышей.

В табл. 4 представлен коэффициент заболеваемости опухолью, индуцированной ОМН у самцов мышей.

В табл. 5 представлен вес органов, извлеченных во время аутопсии из самок животных в ОМНисследовании.

В табл. 6 представлен вес органов, извлеченных во время аутопсии из самцов животных в ОМНисследовании.

В табл. 7 представлены макроскопические изменения в органах самок мышей.

В табл. 8 представлены макроскопические изменения в органах самцов мышей.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение основывается, частично, на обнаружении того, что кураксины обладают противораковым действием на карциномы, что характеризуется определенными молекулярными маркерами, включая ЕК, РК, НЕК2 и РАСТ, но не ограничивается ими.

Настоящее изобретение предусматривает способ предотвращения вызванного канцерогеном рака у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение эффективного количества соединения формулы

- 2 028630

или его фармацевтически приемлемую соль или гидрат, причем карциноген представляет собой генотоксический карциноген, и рак представляет собой рак толстой кишки, рак почки или рак матки.

Следующие определения используются относительно изобретения, раскрытого в данном документе. Если не определено иное, то все технические и научные термины, использованные в данном документе, имеют те же значения, что и понятные для специалиста в области техники, к которой относится изобретение.

Как использовано в данном документе, форма единственного числа может означать и множественное число. Кроме того, термин приблизительно, когда используется по отношению к числовому показателю, означает указанный числовой показатель плюс или минус до 10% от указанного числового показателя. Например, формулировка приблизительно 50 охватывает диапазон от 45 до 55.

Термин применять, вводить или введение, как использовано в этом описании, относится к непосредственному введению субъекту соединения или фармацевтически приемлемой соли соединения, или композиции, или введению субъекту конъюгата пролекарства или аналога соединения или фармацевтически приемлемой соли соединения, или композиции, которые могут образовывать эквивалентное количество активного соединения в организме субъекта.

Термин алкил, как использовано в данном документе, если не указано иное, относится к неразветвленной или разветвленной ненасыщенной группе, полученной из алкана путем удаления атомов водорода. Репрезентативные алкильные группы с неразветвленной цепью включают -метил, -этил, -ппропил, -п-бутил, -п-пентил и п-гексил, но не ограничиваются ими. Репрезентативные алкильные группы с разветвленной цепью включают изопропил, -сек-бутил, -изобутил, -трет-бутил, -изопентил, -неопентил, 1-метилбутил, 2-метилбутил, 3-метилбутил, 1,1-диметилпропил и 1,2-диметилпропил, но не ограничиваются ими.

Термин носитель, как использовано в этом описании, охватывает носители, эксципиенты и разбавители и означает материал, композицию или наполнитель, такой как жидкий или твердый наполнитель, разбавитель, эксципиент, растворитель или инкапсулированный материал, вовлеченный в перенос или транспортировку фармацевтического агента из одного органа или части тела в другой орган или часть тела.

Хотя неограниченный термин содержащий в качестве синонима таких терминов, как включающий или имеющий, используется в данном документе для описания и притязаний изобретения, настоящее изобретение или варианты его реализации могут альтернативно быть описаны с использованием альтернативных терминов, таких как состоящий из или состоящий, по сути, из.

Термин болезнь используется в этом описании для обозначения и используется взаимозаменяемо с терминами заболевание, состояние или недуг, если не указано иное.

Эффективное количество, когда используется в связи с соединением, описанным в данном документе, представляет собой количество, которое является эффективным для обеспечения ощутимого лечения, предотвращения или снижения патогенеза рака или родственных заболеваний, таких как, например, рак молочной железы.

Гормональная терапия является противораковой терапией, которая может включать манипулирование эндокринной системой. Эта терапия может включать лекарственные средства, которые ингибируют продуцирование или активность гормонов (антагонисты гормонов), например.

Гормональная терапия является противораковой терапией, которая может включать манипулирование эндокринной системой. Эта терапия может включать лекарственные средства, которые ингибируют продуцирование или активность гормонов (антагонисты гормонов), например.

Термин гидроксил означает-ОН.

Субъект является млекопитающим, например, человеком (например, женщиной или мужчиной), мышью, крысой, морской свинкой, собакой, кошкой, лошадью, коровой, свиньей или нечеловеческим приматом, таким как обезьяна, шимпанзе, бабуин или макак-резус, и термины субъект и пациент в данном документе используются взаимозаменяемо.

Термин лечение, по отношению к субъекту, означает улучшение по меньшей мере одного симптома заболевания субъекта. Лечение может быть излечиванием, улучшением или, по меньшей мере,

- 3 028630 частичным ослаблением болезни, включая рак или родственные заболевания, такие как, например, рак молочной железы. Лечение может оцениваться с использованием разных конечных точек, включая общую выживаемость, интервал без признаков развития, интервал без признаков заболевания или полный патологический ответ.

Как указано в данном документе, все процентные отношения композиций представляют собой процентное содержание по весу всей композиции, если не указано иное. Как использовано в данном документе определение включает и его варианты предназначены не для ограничения, то есть перечисление элементов в перечне не исключает другие подобные элементы, которые могут также быть полезными в материалах, композициях, устройствах и способах этой технологии. Аналогично, определения могут и может и их варианты предназначены не для ограничения, так как перечисление того, что вариант реализации может содержать определенные элементы или признаки, не исключает другие варианты реализации настоящей технологии, которые не содержат этих элементов или признаков.

Обычно, композиции согласно изобретению содержат карбазольное соединение. Пригодные карбазольные соединения и способы их получения описаны в РСТ/ϋδ 2009/059558, поданной 5 октября 2009 года, полное описание которой включено в данный документ путем ссылки. В некоторых вариантах реализации, карбазол представляет собой соединение, указанное в данном документе как кураксин.

В разных вариантах реализации настоящее изобретение относится к соединению формулы

или его фармацевтически приемлемой соли или гидрату.

Соединение указано выше как кураксин и, в частности, указано в данном документе как кураксин137, и/или СВЬ-137, и/или СВЬ0137.

В разных вариантах реализации настоящее изобретение относится к раку. Рак или опухоль относится к неконтролируемому росту клеток и/или аномально повышенной выживаемости клеток, и/или ингибированию апоптоза, которые мешают нормальному функционированию телесных органов и систем. Субъект, который страдает раком или у которого диагностирована опухоль, является субъектом, имеющим объективно заметные раковые клетки, присутствующие в организме субъекта. Включенными в это изобретение являются доброкачественный и злокачественный рак, а также латентные опухоли или метастазы. Рак, который мигрирует из своего исходного положения и обсеменяет жизненно важные органы, может в конце концов приводить к смерти субъекта по причине функциональной деградации пораженных органов.

В разных вариантах реализации изобретение применяется к преметастатическому раку или метастатическому раку. Метастаз относится к распространению рака из его исходного положения в другие места в организме. Раковые клетки могут отделяться от исходной опухоли, пенетрировать в лимфатические и кровяные сосуды, циркулировать через кровяной поток и расти в отдаленной точке (метастазировать) в нормальных тканях где-то в другом месте организма. Метастаз может быть локальным или удаленным. Метастазис является непрерывным процессом, возможным из-за отделения опухолевых клеток от исходной опухоли, передвижения посредством кровотока и остановки в отдаленном участке. На новом участке клетки налаживают кровоснабжение и могут расти до образования опасной для жизни массы. Стимулирующий и ингибирующий молекулярные метаболические пути в опухолевой клетке регулируют это свойство; взаимодействия между опухолевой клеткой и клетками-хозяевами в отдаленном участке также являются важными.

Метастазы часто выявляют благодаря исключительно или комбинированному использованию сканирований с помощью ядерного магнитного резонанса (ΜΚ4), сканирований с помощью компьютерной томографии (СТ), подсчету кровяных элементов и тромбоцитов, исследования функций печени, рентгенографических сканирований грудной клетки и костей в дополнение к мониторингу специфических симптомов.

Способы и композиции, описанные в данном документе, направлены на предупреждение рака и/или предупреждение роста, прогрессирования и/или метастазирования злокачественных опухолей и пролиферативных нарушений, связанных с повышенной выживаемостью клеток или ингибированием апоптоза.

В разных вариантах реализации настоящее изобретение относится к способам предотвращения рака, вызванного канцерогеном. В некоторых вариантах реализации изобретение относится к способам

- 4 028630 предотвращения рака, вызванного генотоксическим канцерогеном.

В некоторых вариантах реализации изобретения канцероген является канцерогеном, который классифицирован в МоподгарЪк оп 1Нс Εναίιιαίίοη оГ Сагстодетс Ктккк ΐο Нитапк Международного агентства онкологических исследований (1АКС), включая группу 1 карциногенов (агенты, которые точно канцерогенны для людей. Обстоятельство выделения влечет за собой воздействия, которые канцерогенны для людей), группа 2А (агенты, которые вероятно карциногенны для людей. Обстоятельство выделения влечет за собой воздействия, которые вероятно канцерогенны для людей), группа 2В канцерогенов (агенты, которые возможно карциногенны для людей.

Обстоятельство выделения влечет за собой воздействия, которые возможно канцерогенны для людей.), группа 3 канцерогенов (агенты, которые не поддаются классификации относительно их онкогенности для людей) и группа 4 канцерогенов (агенты, которые, следует полагать, не онкогенны для людей). Неограничивающими примерами канцерогенов являются диоксины и диоксинподобные соединения, бензол, кепон, ΕΌΒ, асбест, промышленный дым и табачный дым, бензо[а]пирен, нитрозамины (такие как нитрозонорникотин) и реактивные альдегиды (такие как формальдегид), винилхлорид, мышьяк, асбест, кадмий, соединения гексавалентного хрома (VI), дизельные выхлопы, этиленоксид, никель, радон и продукты его распада, радий-226, радий-224, плутоний-238, плутоний-239 и другие излучатели альфачастиц с высокой атомной массой и так далее.

В некоторых вариантах реализации изобретения карциногеном является диметилгидразин (ЭМН). В некоторых вариантах реализации карциногеном является 1,2-ЭМН и/или его несимметрический аналог 1,1-ЭМН. В некоторых вариантах реализации изобретения эти способы включают введение эффективного количества кураксина 137 или его фармацевтически приемлемой соли.

Как 1,2-ЭМН, так и его несимметрический аналог 1,1-ЭМН, являются человеческими карциногенами. Гидразин и его производные являются официально признанными человеческими карциногенами в законах Российской Федерации (§аш1айои Кеди1айоп апб Нуд1ешс погтк 1,2.2353-08 Сагсшодешс ГасЮгк апб тат гецшгетеШк 1о ргеуепйоп оГ сагсшодешс гткк). 1,1-ЭМН широко используется в авиакосмической промышленности в качестве важного компонента ракетного топлива. Тысячи человек привлекаются к его производству и использованию, многие из них находятся в группе высокого онкогенного риска, так как у них имеются симптомы отравления 1,1-ЭМН.

Считается, что 1,2-ЭМН является абсолютным канцерогеном, т.е. он может не только инициировать образование опухоли, но также способствовать ее прогрессированию. Без стремления быть связанным с теорией, не верится, что сам ЭМН непосредственно вызывает мутации. Однако когда его вводят в организм, он может подвергаться метаболической трансформации в печени и других тканях, которые подверглись микросомальному окислению ксенобиотиками. Сопродукты этих реакций включают образование алкилированных производных, которые обладают способностью поражать ДНК. Без намерения быть связанными с теорией, считается, что образование активных форм кислорода в результате метаболических превращений ЭМН приводит к его способности стимулировать рост опухоли. На уровне молекулярной передачи сигнала стимулирование опухоли модулируется активностью компонентов стрессового метаболического пути, которые включают фактор траскрипции р53, ΝΕ-кВ и фосфатидилинозитол3 -киназы/МТОК.

Без стремления быть связанным с теорией, ЭМН обладает признаком развития рака - промутагенное поражение О6-МеО, которое вызывает переход ОС в АТ ш νίΙΐΌ и ш νί\Ό. Это единственная мутация, индуцированная в Е.соП и 8а1топе11а после воздействия ЭМН. Кроме того, мутации ОС в АТ были обнаружены в К-Как протоонкогене в ЭМН-индуцированной опухоли у крыс.

ЭМН вызывает опухоли многих разновидностей, включая аденокарциномы и полипы толстой кишки, плоскоклеточный рак околоанальной кожи, гепатомы и гемангиоэндотелиомы; опухоли, саркомы матки, аденокарциномы яичников; ангиосаркомы надпочечников и кистозные и солидные почечные аденомы, но не ограничиваясь ими.

В одном аспекте настоящее изобретение предусматривает способ предотвращения вызванного канцерогеном рака у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение эффективного количества кураксина-137 или его фармацевтически приемлемую соль или гидрат, причем карциноген представляет собой генотоксический карциноген, и рак представляет собой рак толстой кишки, рак почки или рак матки.

В некоторых вариантах реализации изобретения профилактические способы включают введение агента субъекту, который может страдать от рака. В некоторых вариантах реализации изобретения субъект, вероятно, будет страдать от рака, если субъект характеризуется одним или более факторов высокого риска развития рака, генетической предрасположенностью к раку (например, генетические факторы риска), предыдущим эпизодом рака (например, новый рак и/или рецидив), семейным анамнезом рака и воздействием индуцирующего рак агента (например, экологического агента).

В некоторых вариантах реализации изобретения субъект, вероятно, будет страдать от рака, если субъект характеризуется высоким риском развития рака. В некоторых вариантах реализации изобретения субъект, вероятно, будет страдать от рака, если субъект характеризуется генетической предрасположенностью к раку. В некоторых вариантах реализации изобретения генетическая предрасположенностью к

- 5 028630 раку представляет собой генетический фактор риска, как это известно из уровня техники. Такие факторы риска могут включать, в качестве примера, НЖСС. МЬН1, ΜδΗ2, М8Н6, РМ§1, РМ§2, по меньшей мере, для рака толстой кишки, матки, тонкой кишки, желудка, мочевого пути. В некоторых вариантах реализации изобретения субъект, вероятно, будет страдать от рака, если субъект характеризуется предыдущим эпизодом рака. В некоторых вариантах реализации изобретения субъект был поражен 1 или 2, или 3, или 4 или 5, или 6 предыдущими эпизодами рака. В некоторых вариантах реализации изобретения субъект, вероятно, будет страдать от рака, если субъект характеризуется семейным анамнезом рака. В некоторых вариантах реализации изобретения родитель, и/или дедушка, и/или брат, и/или тетя/дядя, и/или двоюродная бабушка/двоюродный дедушка, и/или двоюродный брат страдал или страдает от рака. В некоторых вариантах реализации изобретения субъект, вероятно, будет страдать от рака, если субъект характеризуется воздействием онкогенного агента (например, агента окружающей среды). Например, подвержение кожи воздействию интенсивного солнечного света является одним из факторов риска развития рака кожи. В качестве примера, курение является фактором риска для рака легкого, полости рта, гортани, мочевого пузыря, почек и нескольких других органов.

В определенных вариантах реализации настоящее изобретение предусматривает предотвращение рака, вызванного канцерогеном. В некоторых вариантах реализации изобретения канцерогеном является 1,2-ΌΜΗ и/или его несимметрический аналог 1,1-ΌΜΗ. В некоторых вариантах реализации изобретения настоящее изобретение включает выбор субъекта, который подвергался или будет подвергаться действию карциногена.

Любой агент, описанный в настоящем документе, может иметь соответствующую основную функциональную группу, которая может реагировать с неорганической или органической кислотой, или карбоксильную группу, которая может реагировать с неорганическим или органическим основанием, чтобы образовать фармацевтически приемлемую соль. Фармацевтически приемлемая соль присоединения кислоты образуется из фармацевтически приемлемой кислоты, как это хорошо известно из уровня техники. Такие соли включают перечисленные в 1опгпа1 о£ РЬаттасеибса1 8шеисе, 66, 2-19 (1977) и ТЬе НаибЬоок о£ РЬаттасеибса1 8аЬк; Рторетбек, 5>е1есОоп, апб Ике. Р. Н. §(аЬ1 аиб С О. ^етти(Ь (ебк.), Уегкщ, 2штсЬ (5>\уЦ/ег1апб) 2002, которые во всей полноте включены в данный документ посредством ссылки.

Фармацевтически приемлемые соли включают, но не в качестве ограничивающего примера, сульфат, цитрат, ацитат, оксалат, хлорид, бромид, йодид, нитрат, бисульфат, фосфат, кислый фосфат, изоникотинат, лактат, салицилат, кислый цитрат, тартрат, олеат, таннат, пантотенат, битартрат, аскорбат, сукцинат, малеат, гентизинат, фумарат, глюконат, глюкаронат, сахарат, формат, бензоат, глутамат, метансульфонат, этансульфонат, бензолсульфонат, р-толуолсульфонат, камфоросульфонат, памоат, фенилацетат, трифторацетат, акрилат, хлорбензот, динитробензоат, гидроксибензоат, метоксибензоат, метилбензоат, о-ацетоксибензоат, нафтален-2-бензоат, изобутират, фенилбутират, α-гидроксибутират, бутин-1,4дикарбоксилат, гексин-1,4-дикарбоксилат, капрат, каприлат, циннамат, гликолят, гептаноат, гиппурат, малат, гидроксималеат, малонат, манделат, мезилат, никотинат, фталат, терафталат, пропиолат, пропионат, фенилпропионат, себакат, суберат, р-бромбензолсульфонат, хлорбензолсульфонат, этилсульфонат, 2-гидроксиэтилсульфонат, метилсульфонат, нафтален-1-сульфонат, нафтален-2-сульфонат, нафтален-1,5сульфонат, ксиленсульфонат и тартрат.

Термин фармацевтически приемлемая соль также относится к соли соединений согласно настоящему изобретению, имеющих кислотную функциональную группу, такую как карбоксильная функциональная группа, и основанию. Пригодные основания включают гидроксиды щелочных металлов, таких как натрий, калий и литий; гидроксиды щелочно-земельных металлов, таких как кальций и магний; гидроксиды других метллов, таких как цинк; аммоний и органические амины, такие как незамещенные или гидроксизамещенные моно-, ди- или триалкиламины, дициклогексиламин; трибутиламин; пиридин; Νметил, Ν-этиламин; диэтиламин; триэтиламин; моно-, бис- или трис-(2-ОН-низшие алкиламины), такие как моно-, бис- или трис-(2-гидроксиэтил)амин, 2-гидрокси-трет-бутиламин, или трис-(гидроксиметил)метиламин, Ν,Ν-ди-низший алкил-Л-(гидроксил-низший алкил)-амины, такие как Н^диметил^-(2гидроксиэтил)амин или трис-(2-гидроксиэтил)амин; Ν-метил-Э-глюкамин; и аминокислоты, такие как аргинин, лизин и подобные, но не ограничиваются ими.

В некоторых вариантах реализации изобретения репрезентативные фармацевтические соли включают, например, водорастворимые и водонерастворимые соли, такие как ацетат, амсонат (4,4диаминостилбен-2,2-дисульфонат), бензолсульфонат, бензонат, бикарбонат, бисульфат, битартрат, борат, бромид, бутират, кальций, эдетат кальция, камзилат, карбонат, хлорид, цитрат, клавуариат, дигидрохлорид, эдетат, эдизилат, эстолат, эзилат, фумарат, глуцептат, глюконат, глутамат, гликолиларсенилат, гексафторфосфат, гексилрезорцинат, гидрабамин, гидробромид, гидрохлорид, гидроксинафтоат, йодид, изотианат, лактат, лактобионат, лаурат, магний, малат, малеат, манделат, мезилат, метилбромид, метилнитрат, метилсульфат, мукат, напсилат, нитрат, Ν-метилглюкаминаммониевая соль, 3-гидрокси-2-нафтоат, олеат, оксалат, пальмитат, памоат (1,1-метен-бис-2-гидрокси-3-нафтоат, эйнбонат), пантотенат, фосфат/дифосфат, пикрат, полигалактуронат, пропионат, р-толуенсульфонат, салицилат, стеарат, субацетат, сукцинат, сульфат, сульфосалицилат, сурамат, таннат, тартрат, теоклат, тозилат, тритиойодит и валерат.

Кроме того, любой агент, описанный в настоящем документе, можно вводить субъекту в качестве

- 6 028630 компонента композиции, которая содержит фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель. Такие композиции необязательно содержат соответствующее количество фармацевтически приемлемого эксципиента для обеспечения формы для надлежащего введения.

Фармацевтические эксципиенты могут быть жидкостями, такими как вода или масло, включая продукты нефтяного, животного, растительного или синтетического происхождения, такие как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, сезамовое масло и подобные. Фармацевтические эксципиенты могут быть солевым раствором, аравийской камедью, желатином, крохмальной пастой, тальком, кератином, коллоидный кремнезёмом, мочевиной и подобным. В дополнение могут быть использованы вспомогательные, стабилизирующие, сгущивающие, смазывающие и окрашивающие агенты. В одном варианте реализации, фармацевтически приемлемые эксципиенты являются стерильными, когда водятся субъекту. Вода является полезным эксципиентом, когда любой агент, описанный в настоящем документе, вводят внутривенно. Солевые растворы и водные декстрозы, и растворы глицерина также могут применяться в качестве жидких эксципиентов, особенно для инъекционных растворов. Подходящие фармацевтические эксципиенты также включают крахмал, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рис, мелкий порошок, мел, силикагель, стеарат натрия, глицеролмоностеарат, тальк, хлорид натрия, сухое обезжиренное молоко, глицерин, пропилен, гликоль, воду, этанол и подобное. Любой агент, описанный в настоящем документе, если желательно, также может содержать малые количества смачивающего или эмульгирующего агентов, рН буферных агентов.

Любое вещество, описанное в данном документе, может принимать форму раствора, суспензии, эмульсии, таблеток, пилюль, пелет, капсул, содержащих жидкость капсул, порошков, препаратов длительного высвобождения, суппозиториев, эмульсий, аэрозолей, спреев, суспензий или любую другую форму, пригодную для использования. Другие примеры пригодных эксципиентов описаны в КетшдХоп'к РЬагтасеийса1 8с1епсе8 1447-1676 (АПопко К. Сеппаго еЙ8., 19* ей. 1995), включенный в данный документ посредством ссылки.

В одном варианте реализации любое вещество, описанное в данном документе, получают в соответствии с рутинными процедурами, как и композицию, адаптированную для орального введения человеку. Композиции для оральной доставки могут быть в форме таблеток, лепешек, водных или масляных суспензий, гранул, порошков, эмульсий, капсул, сиропов или эликсиров, например. Орально вводимые композиции могут содержать один или более агентов, например, подсластителей, таких как фруктоза, аспартам или сахарин; ароматизаторов, таких как мята, масло грушанки или черешни; красители; и консерванты, для обеспечения фармацевтически приятного на вкус препарата. Кроме того, при получении таблеток или пилюль композиции могут быть покрыты оболочкой, чтобы предотвратить распад и абсорбцию в желудочно-кишечном тракте, тем самым обеспечивая длительное действие в течение расширенного периода времени. Селективно проницаемые мембраны, окружающие осмотически активное движущееся любое вещество, описанное в данном документе, также пригодны для орального введения композиций. В этих последних платформах жидкость из внешней среды, окружающей капсулу, всасывается движущимся соединением, которое разбухает, чтобы вытеснить вещество или композицию вещества через отверстие. Эти доставочные платформы могут обеспечить профиль доставки по сути нулевого порядка в противоположность зубчатым профилям препаратов немедленного высвобождения. Полезным также может быть задерживающий высвобождение материал, такой как глицеринмоностеарат или глицеринстеарат. Оральные композиции могут содержать стандартные эксципиенты, такие как маннитол, лактоза, крахмал, стеарат магния, сахарид натрия, целлюлоза и карбонат магния. В одном варианте реализации эксципиенты являются фармацевтически чистыми.

Ингредиенты могут поставляться отдельно или смешанными вместе в единую дозированную форму, например, в качестве предварительно смешанного раствора, сухого лиофилизированного порошка или безводного концентрата в герметически закрытом контейнере, таком как ампула, предварительно заполненный шприц или саше, указывающие количество активного вещества. Когда любое вещество, описанное в данном документе, вводят путем инфузии, оно может приготавливаться и распределяться, например, с инфузионной бутылью, содержащей фармацевтически стерильную воду или солевой раствор. Когда любое вещество, описанное в данном документе, вводят путем инъекции, предусмотрены ампулы со стерильной водой для инъекции или солевым раствором для того, чтобы ингредиенты можно было смешать перед введением.

Любое вещество, описанное в данном документе, может вводиться способом контрольного высвобождения или длительного высвобождения или с помощью доставляющего устройства, которые хорошо известны специалистам в данной области. Примеры включают те, которые описаны в патентах США № 3845770; 3916899; 3536809; 3598123; 4008719; 5674533; 5059595; 5591767; 5120548; 5073543; 5639476; 5354556 и 5733556, каждый из которых во всей полноте включен в данный документ посредством ссылки, но не ограничиваются ими. Эти дозированные формы могут быть полезными для обеспечения контролируемого или длительного высвобождения одного или более активных ингредиентов с использованием, например, гидроксипропилметилцеллюлозы или других полимерных матриксов, гелей, проницаемых мембран, осмотических систем, многослоевых покрытий, микрочастиц, липосом, микросфер или их комбинации для обеспечения желательного профиля высвобождения в изменяющихся пропорциях. Из- 7 028630 вестные специалисту в данной области рецептуры контролируемого или длительного высвобождения, включая те, что описаны в настоящем документе, можно легко выбрать для использования с активными ингредиентами веществ, описанных в данном документе. Изобретение, таким образом, предусматривает формы разовых единиц дозирования, пригодные для орального введения, такие как таблетки, капсулы, желатиновые капсулы и каплеты, которые приспособлены для контролируемого или длительного высвобождения, но не ограничиваются ими.

Контролируемое или длительное высвобождение активного ингредиента может стимулироваться разными условиями, включая изменение рН, изменение температуры, стимулирование с помощью света пригодной длины волны, концентрацию или доступность ферментов, концентрацию или доступность воды или другие физиологические условия и соединения, но не ограничиваясь ими.

Композиции могут быть приготовлены с помощью обычных способов смешивания, гранулирования, покрытия или полимеризации соответственно, и настоящие композиции могут содержать в одном варианте реализации от приблизительно 0,1% до приблизительно 99%; и в другом варианте реализации от приблизительно 1% до приблизительно 70% любого вещества, описанного в данном документе, по весу или объему.

В другом варианте реализации любое вещество, описанное в данном документе, действует синергически, когда вводится с другим веществом, и его вводят в дозах, которые ниже тех доз, которые обычно применяются, когда такое вещество используется в качестве монотерапии. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения кураксин-137 или его фармацевтические соли и дополнительное терапевтическое вещество или его фармацевтические соли могут давать больше, чем суммарный эффект, когда вводятся в комбинации или конъюгированными. В некоторых вариантах реализации изобретения кураксин-137 или его фармацевтические соли и дополнительное терапевтическое вещество или его фармацевтические соли могут давать синергетический эффект, когда вводятся в комбинации или конъюгированными.

Например, дозирование любого вещества, описанного в данном документе, а также график дозирования могут зависеть от разных параметров, включая тип рака (например, рак молочной железы), подлежащий лечению, общее состояние здоровья пациента и рассудительность медицинского работника, производящего введение, но не ограничиваясь ими. Любое вещество, описанное в данном документе, может вводиться перед (например, за 5 мин, 15 мин, 30 мин, 45 мин, 1 ч, 2 ч, 4 ч, 6 ч, 12 ч, 24 ч, 48 ч, 72 ч, 96 ч, 1 неделю, 2 недели, 3 недели, 4 недели, 5 недель, 6 недель, 8 недель или 12 недель до), одновременно с или после (например, спустя 5 мин, 15 мин, 30 мин, 45 мин, 1 ч, 2 ч, 4 ч, 6 ч, 12 ч, 24 ч, 48 ч, 72 ч, 96 ч, 1 неделю, 2 недели, 3 недели, 4 недели, 5 недель, 6 недель, 8 недель или 12 недели после) введения дополнительного терапевтического вещества субъекту, нуждающемуся в этом. В разных вариантах реализации любое вещество, описанное в данном документе, может вводиться на расстоянии 1 минуты, на расстоянии 10 мин, на расстоянии 30 мин, на расстоянии меньше, чем 1 ч, на расстоянии 1 с половиной часа, на расстоянии от 1 ч до 2 ч, на расстоянии от 2 ч до 3 ч, на расстоянии от 3 ч до 4 ч, на расстоянии от 4 ч до 5 ч, на расстоянии от 5 ч до 6 ч, на расстоянии от 6 ч до 7 ч, на расстоянии от 7 ч до 8 ч, на расстоянии от 8 ч до 9 ч, на расстоянии от 9 ч до 10 ч, на расстоянии от 10 ч до 11 ч, на расстоянии от 11 ч до 12 ч, на расстоянии не более чем 24 ч или на расстоянии не более чем 48 ч.

Количество любого вещества, описанного в данном документе, которое смешивается с материалом носителя для получения разовой дозы, может изменяться в зависимости от субъекта, подлежащего лечению, и конкретного способа введения. Чтобы помочь определить оптимальный диапазон дозирования, могут применяться анализы ίη νίίτο или ίη νίνο.

Обычно, полезные дозы известны из уровня техники. Например, дозы можно определить, ссылаясь на Рйу51С1ап5' Иевк РсГсгспсс. 66'¹' Εάίίίοη, РИК ΝοΙ\\όγ1<; 2012 Εάίίίοη (ИесешЬет 27, 2011), содержание которого включено в данный документ во всей полноте.

Дозирование любого вещества, описанного в данном документе, может зависеть от нескольких факторов, включая тяжесть состояния, подлежащего лечению или предотвращению, возраст, вес и здоровье субъекта, подлежащего лечению. Кроме того, фармакогеномная (действие генотипа на фармакокинетику фармакодинамику или профили эффективности терапевтического вещества) информация о конкретном субъекте может влиять на используемое дозирование. Более того, точные индивидуальные дозирования могут отчасти приспосабливаться в зависимости от разных факторов, включая специфическую комбинацию веществ, подлежащих введению, время введения, путь введения, природу рецептуры, скорость выведения, конкретный тип рака (например, рак молочной железы), подлежащий лечению, серьезность нарушения и анатомическое местоположение нарушения. Предполагаются некоторые изменения в дозировании.

Как правило, при оральном введении млекопитающему дозирование любого вещества, описанного в данном документе, составляет от 0,001 мг/кг/день до 100 мг/кг/день, от 0,01 мг/кг/день до 50 мг/кг/день или от 0,1 мг/кг/день до 10 мг/кг/день. При оральном введении человеку дозирование любого вещества, описанного в данном документе, обычно составляет от 0,001 мг до 1000 мг в день, от 1 мг до 600 мг в день, или от 5 мг до 30 мг в день. В одном варианте реализации оральная доза составляет 600 мг в день. В одном варианте реализации оральная доза составляет две дозы по 300 мг в день. В другом варианте

- 8 028630 реализации оральная доза составляет от 7,5 мг в неделю до 15 мг в неделю.

Для введения любого вещества, описанного в данном документе, парентеральной инъекцией дозирование обычно составляет от 0,1 мг до 250 мг в день, от 1 мг до 20 мг в день, или от 3 мг до 5 мг в день. Инъекции могут вводиться до четырех раз в день. Как правило, при оральном или парентеральном введении дозирование любого вещества, описанного в данном документе, обычно составляет от 0,1 мг до 1500 мг в день, или от 0,5 мг до 10 мг в день, или от 0,5 мг до 5 мг в день. Может быть введено дозирование вплоть до 3000 мг в день.

В некоторых вариантах реализации изобретения неограничивающие примеры доз кураксина-137 или его фармацевтической соли и дополнительного терапевтического вещества или его фармацевтической соли (в комбинации или введенного индивидуально) могут находиться в диапазоне от приблизительно 0,1 мг/кг до приблизительно 100 мг/кг веса тела субъекта, например, приблизительно 0,1 мг/кг, приблизительно 0,2 мг/кг, приблизительно 0,3 мг/кг, приблизительно 0,4 мг/кг, приблизительно 0,5 мг/кг, приблизительно 0,6 мг/кг, приблизительно 0,7 мг/кг, приблизительно 0,8 мг/кг, приблизительно 0,9 мг/кг, приблизительно 1 мг/кг, приблизительно 1,1 мг/кг, приблизительно 1,2 мг/кг, приблизительно 1,3 мг/кг, приблизительно 1,4 мг/кг, приблизительно 1,5 мг/кг, приблизительно 1,6 мг/кг, приблизительно 1,7 мг/кг, приблизительно 1,8 мг/кг, приблизительно 1,9 мг/кг, приблизительно 2 мг/кг, приблизительно 3 мг/кг, приблизительно 4 мг/кг, приблизительно 5 мг/кг, приблизительно 6 мг/кг, приблизительно 7 мг/кг, приблизительно 8 мг/кг, приблизительно 9 мг/кг, приблизительно 10 мг/кг, приблизительно 11 мг/кг, приблизительно 12 мг/кг, приблизительно 13 мг/кг, приблизительно 14 мг/кг, приблизительно 15 мг/кг, приблизительно 20 мг/кг, приблизительно 25 мг/кг, приблизительно 30 мг/кг, приблизительно 35 мг/кг, приблизительно 40 мг/кг, приблизительно 45 мг/кг, приблизительно 50 мг/кг, приблизительно 55 мг/кг, приблизительно 60 мг/кг, приблизительно 65 мг/кг, приблизительно 70 мг/кг, приблизительно 75 мг/кг, приблизительно 80 мг/кг, приблизительно 85 мг/кг, приблизительно 90 мг/кг, приблизительно 95 мг/кг, или приблизительно 100 мг/кг веса тела, включая все значения и диапазоны между ними Пути введения могут включать, например: внутрикожный, внутримышечный, внутрибрюшинный, внутривенный, подкожный, внутриносовой, эпидуральный, оральный, подъязычный, внутриносовой, внутрицеребральный, интравагинальный, чрезкожный, ректальный, путем ингаляции или местный путь, особенно на глаза, нос, ухо или кожу.

Способ введения может оставляться на усмотрение лечащего врача и зависит, частично, от места расположения медицинского состояния. В большинстве случаев введение приводит к высвобождению вещества, описанного в данном документе, в кровоток.

Любое вещество, описанное в данном документе, можно вводить орально. Такие вещества можно также вводить любым другим удобным путем, например, внутривенной инфузией или болюсной инъекцией, абсорбцией через эпителий или слизистокожные выстилки (например, слизистую оболочку полости рта, ректальную или кишечную слизистую оболочку и так далее), и можно вводить вместе с другим биологически активным веществом. Введение может быть системным или локальным. Известны разные системы доставки, например, инкапсулирование или липосомы, микрочастицы, микрокапсулы, капсулы и так далее, которые могут быть использованы для введения.

В определенных вариантах реализации желательным может быть локальное введение в область, требующую лечения.

В другом варианте реализации доставка может быть осуществлена в везикулах, в частности в липосомах (см. Ьапдег, 1990, §с1епсе 249:1527-1533; Тгеа! е! а1., в Ырокошек ίη !Ье ТЬегару оГ Шесбоик И1кеаке апб Сапсег, Ьоре/-Веге51еш апб Иб1ег (ебк.), Ыкк, Иете Уогк, рр. 353-365 (1989). В еще другом варианте реализации доставка может быть осуществлена в системе контролируемого высвобождения. В одном варианте реализации может быть использовано устройство медленного высвобождения. В некоторых вариантах реализации изобретения это устройство состоит из локально доставляемой или неразлагающейся жидкости, геля, полимера и так далее.

В другом варианте реализации можно использовать полимерные материалы (смотри Мебюа1 АррЬсабопк оГ Соп!го11еб Ке1еаке, Ьапдег апб №1ке (ебк.), СКС Ргек., Воса Ка!оп, Нопба (1974); Соп!го11еб Эгид ВюауабаЫШу, Игид Ргобис! Иеыдп апб РегГогтапсе. §шо1еп апб Ва11 (ебк.), №беу, Иете Уогк (1984); Капдег апб Реррак, 1983, 1. Масгошок 8ск Кеу. Масгошок СЬет. 23:61; см. также Ьеуу е! а1., 1985, §с1епсе 228:190; Иигшд е! а1., 1989, Апп. Иеигок 25:351; Но\\агб е! а1., 1989, 1. Иеигокигд. 71:105). В другом варианте реализации система контролированного высвобождения может быть помещена по соседству с намеченной областью, подлежащей лечению, таким образом требуется только фракционирование системной дозы (см., например, Сообкоп, ш Мебюа1 АррЬсабопк оГ Соп!го11еб Ке1еаке, кирга, уо1. 2, рр. 115-138 (1984)). Могут быть использованы другие системы контролируемого высвобождения, рассмотренные в обзоре Ьапдег, 1990, §с1епсе 249:1527-1533).

Введение любого вещества, описанного в данном документе, может, независимо, составлять от одного до четырех раз в день или от одного до четырех раз в месяц, или от одного до шести раз в год, или один раз каждые два, три, четыре или пять лет. Введение может составлять по длительности один день или один месяц, два месяца, три месяца, шесть месяцев, один год, два года, три года и может даже продолжаться всю жизнь субъекта. Постоянное, продолжительное введение может предписываться в неко- 9 028630 торых случаях. Система доз может вводиться в качестве однократной дозы или поделенной на многократные дозы. Обычно, желательную дозу вводят при установленных интервалах в течение длительного периода, обычно, по меньшей мере, в течение нескольких недель или месяцев, хотя могут быть необходимыми более длительные периоды введения, составляющие несколько месяцев или лет, или более.

Схема приёма лекарственного средства, использующая любое вещество, описанное в данном документе, может быть выбрана в соответствии с рядом факторов, включая тип, вид рака, возраст, вес, пол и медицинское состояние субъекта; тяжесть состояния, подлежащего лечению; путь введения; функционирование почек и печени субъекта; фармакогеномный характер индивидуума; и применяемое специфическое соединение в соответствии с изобретением. Любое вещество, описанное в данном документе, можно вводить в однократной суточной дозе или в суммарной суточной дозе, которую можно вводить в разделенных дозах два, три или четыре раза в день. Кроме того, любое вещество, описанное в данном документе, можно вводить постоянно, а не периодически, в продолжение схемы приёма лекарственного средства.

Введенная дозировка представляет собой эффективное количество вещества. Эффективные количества, токсичность и терапевтическую эффективность можно определить с помощью стандартных фармацевтических процедур в культурах клеток или экспериментальных животных, включая определение ЬЭ₅₀ (доза, летальная для приблизительно 50% популяции) и/или ΕΌ₅₀ (доза, терапевтически эффективная для приблизительно 50% популяции), но не ограничиваясь ими. Дозирование может изменяться в зависимости от применяемой дозированной формы и используемого пути введения. Соотношение доз между токсическим и терапевтическим эффектами - это терапевтический индекс, который может быть представлен как соотношение ΕΌ₅₀/ΕΌ₅₀, Композиции и способы, которые демонстрируют большие терапевтические индексы, могут быть отобраны для использования в некоторых вариантах реализации изобретения.

Терапевтически эффективную дозу можно рассчитать изначально из анализа клеточной культуры. Также, дозу можно определить в модели на животных для достижения диапазона концентрации, циркулирующего в плазме, который включает 1С₅₀ (например, концентрация кураксина-137 и/или дополнительного терапевтического средства или его фармацевтически приемлемой соли, при которой достигается половина максимального ингибирования симптомов), как определено в культуре клеток или в приемлемой модели на животных. Уровни в плазме можно измерить, например, с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения. Действия отдельной дозы можно мониторить с помощью пригодного биоанализа. Дозирование определяется врачом и приспосабливается, если необходимо, в ответ на наблюдаемые эффекты лечения.

Например, эффективность кураксина-137 или его фармацевтически приемлемой соли можно оценить путем измерения способности соединения ингибировать активность ΝΕ-кВ или активировать р53. Активацию р53 можно измерить, используя анализ реакции на воздействие дозы, в котором чувствительная аналитическая система контактирует с представляющим интерес соединением через посредство ряда концентраций, включая концентрации, при которых эффект отсутствует или наблюдается минимальный эффект, через более высокие концентрации, при которых наблюдается частичный эффект, к насыщенным концентрациям, при которых наблюдается максимальный эффект. Теоретически, такие анализы ответа на воздействие дозы соединения-активатора можно описать как сигмоидальную кривую, изображающую степень активации как функции концентрации. Кривая, также теоретически, проходит через точку, в которой концентрация является достаточной для повышения активности до уровня, который составляет 50%, разница между исходной и максимальной активностью в анализе - значение ЕС₅₀. Определение значения ЕС₅₀ осуществляют, используя стандартные биохимические (неклеточные) аналитические методы или аналитические методы с использованием клеток.

Сравнивания эффективности активаторов часто предусматриваются со ссылкой на сравнительные значения ЕС₅₀, причем более высокое значение ЕС₅₀ указывает на то, что исследуемое соединение является менее эффективным, а более низкое значение ЕС50 указывает на то, что соединение является более эффективным, нежели контрольное соединение. Соединения согласно настоящему изобретению демонстрируют неожиданно значительную эффективность, например, активацию р53, в анализе люциферазной репортерной клеточной линии.

В некоторых вариантах реализации изобретения воздействие повлечет за собой количественные изменения, составляющие по меньшей мере приблизительно 10%, предпочтительно по меньшей мере приблизительно 20%, приблизительно 30%, приблизительно 50%, приблизительно 70% или приблизительно 90% или более. Терапевтический эффект также включает остановку или замедление прогрессирования основного заболевания или нарушения, не обращая внимания на то, реализуется ли улучшение.

В некоторых вариантах реализации эффективное количество, которое будет лечить рак, будет модулировать симптомы, как правило, по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 40% или по меньшей мере приблизительно на 50%. В примерах реализации такие модуляции влекут за собой, например, статистически значимые количественные изменения численности раковых клеток. В некоторых вариантах реализации изобретения это может быть снижением численности микрометастаз в отдаленные органы, снижением рекурентности метастатического заболевания и так далее.

- 10 028630

Это изобретение далее иллюстрируется следующими неограничивающими примерами.

Примеры

Пример 1: Кураксин-137 проявляет противоопухолевое действие при введении склонным к опухолям самкам мышей ММТУ-№и.

Способы, примененные в данном документе, известны из уровня техники. Детали некоторых из этих способов приведены ниже.

Химикаты и реагенты: кураксин-137, также известный как СВБС137 (>97% чистоты согласно НРЬС и ЬС/М8), был специально синтезирован (ТогоШо. Сапаба). Для введения животным лекарственное средство растворяли в воде в количестве 0,1 или 0,2 мг/мл и хранили при комнатной температуре (КТ). Стабильность соединения в воде при КТ определяли в течение 2 месяцев в стандартном анализе по генурепортёру активации р53 на клетках КСС45-р53-Ьис, как описано (см. δοί Тгаи§1 Меб 2011 Аид 10;3(95):95га74). Отличия между свежим и хранившимся растворами не были обнаружены. НоесНЧ 33358, К1881, ТЛР, тип III коллагеназы, гидрокортизон, инсулин и БОР были приобретены у §1дша (δί§ша-АЫйсЬ, 1пс.). Растворы 100Х пенициллина/стрептомицина и фунгизона, ЭМЕМ, глутамин, N-(2гидроксиэтил)пиперазин-№-этансульфоновая кислота (НЕРЕ8), альбумин бычьей сыворотки (В8А), холерный токсин и Тп/о1 были приобретены у 1пуйгодеп, 1пс.

Клетки: Клетки МЭА-МВ-453-ММТУ-Еис (КВ2) были приобретены у АТСС. Н1299-кВ-Ьис, а клетки КСС45-р53-Ьис были описаны ранее (см. Ргос №ι11 Асаб δα И8А 2005 Νον 29; 102(48): 17448-53). Клетки выращивали на ЭМЕМ с 10% фетальной бычьей сыворотки (Нус1опе) и другими стандартными добавками.

Клеточные культуры ех νί\Ό: безопухолевые молочные железы или безнекрозные молочные железы были взяты у глубоко анестезированных мышей в стерильных условиях, промыты в ΡΒδ, измельчены ножницами, а затем инкубировались в 0,1% коллагеназы III типа в полной культуральной среде (ЭМЕМ, обогащенный 100 ед./мл пенициллина, 100 пг/мл стрептомицина, 2 мМ глутамина, 10 мМ НЕΡЕδ, 0,075% ΒδА, 10 нг/мл холерного токсина, 0,5 пг/мл гидрокортизона, 5 пг/мл инсулина и 5 нг/мл ЕОР) в течение ночи при 37°С на качающейся платформе. После инкубирования клеточную суспензию центрифугировали при 40д в течение 1 мин. Супернатант сливали, а таблетку промывали один раз ΡΒδ, используя те же условия центрифугирования. Конечную таблетку ресуспендировали в полной культуральной среде и высевали на пластиковые чашки. Полученную органоидную культуру использовали для эксперимента в течение одной недели без пересева.

Вестерн-блоттинг и иммунофлюоресцентное окрашивание проводили, используя стандартные процедуры. Использовали следующие исходные антитела: анти-ЕКа (8С-542, δаηίа Сги/, разбавление для \УВ составляло 1:1000, ГР 1:100), анти-Нег2 (са!#2165, Се11 δίβ^^ίι^, разбавление для \УВ составляло 1:1000, I? 1:200), анти-ΡСNА (са!#2586, Се11 δίβ^^ίι^, разбавление для \УВ составляло 1:1000, I? 1:300), анти-δδКΡ1 (са!# 60970, Вю1едепб, разбавление для \УВ составляло 1:1000, I? 1:200), анти^РТ16 (са!# 607002, Вю1едепб, разбавление для \УВ составляло 1:1000, I? 1:200), анти-р53 (РаЬ421, δί'.’-99 δапΐа Οηζ, разбавление для \УВ составляло 1:1000, I? 1:200), анти-р65 (8С372 δапΐа Οηζ, разбавление для I? составляло 1:200), анти-З-асйп (А3854, δ^дта, разбавление для \УВ составляло 1:20,000) вторичные антимышиные или антикроличьи антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена (Се11 δίβ^^ίι^ разбавление для \УВ составляло 1:2) или А1еха Е1иог 488 или 594 (А21202, А21207, ^Шодеи, разбавление для I? составляло 1:500).

Иммуногистохимия: парафиновые срезы нарезали по 5 мкм, помещали на заряженные предметные стекла и высушивали при 60°С в течение одного часа. Предметные стекла охлаждали до КТ, депарафинизировали в трех сменах ксилена и регидратировали, используя набор спиртов повышающейся концентрации. Эндогенные пероксидазы тушили водной 3% Н₂О₂. Для извлечения антигенов предметные стекла нагревали в микроволнах в течение 20 мин в цитратном буфере (рН 6,0), охлаждали в течение 15 мин и промывали в растворе 0.1%ΡΒδ/Т\γееη20. Предметные стекла затем загружали в Эако Аи1о81атег и блокировали в течение 5 мин с бессывороточным белковым блоком (Эако). После блокирования предметные стекла инкубировали с 0,2 мкг/мл козьим антимышиным δδКΡ1 поликлональным антителом (δ;·ιΐ'ΐΙ;·ι Οηζ, 8с-5909) в течение 1 ч. Изотипически сходное контрольное антитело (0,2 мкг/мл козий ЩО) использовали на дублирующем предметном стекле в местоположении исходного антитела в качестве негативного контроля. После промывания предметные стекла инкубировали с биотинилированным вспомогательным антикозьим ЦО Дасккоп IттипοКе8еа^сЬ ЬаЬогаЮпеу Шс.), после чего окрашивали Е1Не АВС КН (Уес1а81ат) и хромагеном ЭЛВ (Эако). В заключение, окрашенные предметные стекла доокрашивали гематоксилином, дегидратировали, очищали и покрывали покрывным стеклом. Все предметные стекла сканировали, используя сканоскоп Арепо (Арепо ТесЬпо1од1е8, Шс.). Изображения получали, используя Опаде 8соре 8оП\уаге (Арепо ТесЬпо1од1е8, От).

Микроматричный анализ генной экспрессии: суммарную РНК выделили из замороженных образцов тканей, используя реагент ТКЕОЬ ОпуЦгодеп). Мечение мРНК и гибридизирование с Мои8е\УО-6 ν2.0 Ехрге88юп. ВеабСЫр8, сканирование изображения и интенсивностью обработку проводили в соответствии с инструкциями производителя (Шишта, δаη Эгедо, СА). Файлы данных ВеабСЫр анализировали с

- 11 028630 помощью программного обеспечения [Питта СспотсЕйибю и К-базируемого программного пакета ΒίοсомбисЮг для определения уровней сигнала генной экспрессии. Применяли алгоритм иерархического скучивания, базирующийся на среднем сцеплении корреляций Пирсона. Данные поместили в базу данных ΝΟΒΙ ОБО, номер доступа О8Е33285.

Измерение концентраций кураксина-137 в мышиных тканях и плазме: извлечение лекарственного соединения было произведено в отделе химии кливлендской ВюЬаЪз. Из исходной тканевой пробы отвесили 70-100 мг образца. К образцу добавили охлажденный метанол (9х вес образца), образец механически гомогенизировали (ГЬЬег ЕЫспОПс Ро\усгОсп 125). Полученную суспензию образец/метанол затем покачивали в течение ночи при 4°С в рефрижераторе. Затем образцы центрифугировали, супернатант отбирали для анализа с помощью ЬС/Μδ/Μδ. Образцы плазмы извлекали, используя экстракционный раствор 0,1% трифторуксусной кислоты в ацетонитриле (4х объем образца). Разбавленные образцы как следует встряхивали, а затем центрифугировали, полученный супернатант отбирали для анализа с помощью ЬС/Μδ/Μδ. Все приготовленные образцы хранили при 4°С прежде чем анализировать. Образцы анализировали по поводу кураксина-137, используя систему ЬС/Μδ/Μδ АррПеб Вюзу51ет5 ΑΡΙ 3000. Применяли способ градиентной НРЬС с подвижными фазами: (А) 2 мМ ацетат аммония, 0,1% трифторуксусная кислота в воде и (В) 2 мМ ацетат аммония, 0,1% трифторуксусная кислота в метаноле. Инъекционный объем составлял 20 мкл, а скорость потока составляла 0,20 мкл/мин. Колонка РЬеиотеиех Ьипа С18(2), 50x2,00 мм, частицы размером 5 мкм соединялись с проводником РЬеиотеиех С18, 4х2,00 мм картридж/колонка. Масс-спектрометр использовала мониторинг множественных реакций (ΜΚΜ) с однозарядным кураксином-137, выбранным при т/ζ 337,20, подавая фрагментный ион при т/ζ 86,00, Эксперименты на животных: все эксперименты на животных проводили в соответствии с одобренным 1АСИС протоколом Ро5\уе11 Рагк Саисег 1изШи1е (КРС1) и с руководством Ошбе Гог 1Ье Саге аиб Ике оГ ЬаЪогаЮгу Аттак №йоиа1 КезеагсЬ СоиисЬ (ΙδΒΝ 0-309-05377-3). Мыши ΡνΒ/Ν-Τ§(ΜΜΤν^υ)202Μυ1/.Τ (именуемые в данном документе как мыши ΜΜΤν-иеи) были получены от .Таскзои ЬаЪогаЮгу (Ваг НагЪог, ΜηπΒ;) и разводились при необходимости в отделе лабораторных ресурсов (ЬАК) КРС1. Трансген, переносимый этими мышами, направляет экспрессию протоонкогена Нег2/иеи из стероидного рецептора у самок по большей части в (ЕК)-восприимчивый промотор ΜΜΤν. У 100% самок мышей ΜΜΤν-иеи развиваются спонтанные карциномы молочных желез между 6 и 12-месячным возрастом.

Определение максимально переносимой дозы (ΜΤΌ) кураксина-137, введенной мышам с их питьевой водой: группы мышей 5 ΜΜΤν-иеи (самцы и самки в возрасте 4 недель) помещали в клетку и обеспечивали раствором кураксина-137 (разные концентрации, как описано ниже) в воде в темных бутылках (по меньшей мере 150 мл на бутылку) в качестве единственного источника воды. Бутылки взвешивали перед началом эксперимента и раз в неделю с этого времени. Бутылки наполняли раз в неделю. Мыши получали стандартное питание аб ЬЪЬит. Мышей осматривали ежедневно по поводу изменений внешнего вида и поведения и взвешивали ежедневно в течение первой недели, а затем раз в неделю. Эксперимент длился в течение одного месяца или до достижения одного из следующих условий: >10% потеря в весе (все 5 мышей в группе); >15% потеря в весе у 2 и более животных в группе; стойкие изменения во внешнем виде и поведении мышей; гибель более одного животного в клетке. Стартовые дозы, тестируемые в этом эксперименте, подсчитывали, исходя из среднего суточного потребления жидкости мышами, составляющего 150 мл/кг/день, заимствованного из нескольких нормативных источников, а затем корректировали, исходя из фактического потребления жидкости в ЬАК, лаборатории КРС1.

Безопасность постоянного введения кураксина-137 при ΜΤΌ и % ΜΤΌ с питьевой водой: группы по 5 самок мышей ΜΜΤν-иеи (в возрасте 4 недель) получали обыкновенную воду или растворы кураксина-137 (при ΜΤΌ или % ΜΤΌ) в воде аб ЬЪЬит в течение 10 недель. Мышей взвешивали раз в неделю. Спустя 10 недель мышей глубоко анестезировали и собирали кровь путем пункции сердца для выделения плазмы. Основные органы собирали для гистопатологического анализа, выделения РНК и измерения концентрации кураксина-137.

Исследование предотвращения рака: неоплодотворённые самки мышей ΜΜΤν-иеи (19-27 на группу) получали обычную воду или кураксин-137 в воде аб ЬЪЬит. Обрабатываемые кураксином группы получали по 0,1 мг/мл кураксина-137, начиная с 4-недельного возраста, или по 0,2 мг/мл кураксина-137, начиная с 10-недельного возраста. Животных наблюдали ежедневно по поводу признаков патологических нарушений и появления опухолей. Их взвешивали раз в неделю в течение первых 24 недель, а затем раз в месяц. Животные, у которых развилась, по меньшей мере, одна видимая опухоль, переводили на безлекарственную воду и держали до тех пор, пока куммулятивный объем опухоли не достигал 2000 мм³. В это время мышей умерщвляли и иссекали все молочные железы, с опухолью или без, фиксировали в забуфференном формалине и заключали в парафин для изготовления срезов. Гистопатологические исследования проводились вслепую квалифицированными патоморфологами в других лабораториях. Кроме того, Н&Е-окрашенные предметные стекла паренхимальных органов мышей, костного мозга и опухолей анализировали квалифицированные патоморфологи на месте (Ι.Τ.), а репрезентативные фотографии были сделаны с использованием инвертационного микроскопа 2е155 Αχίο ОЪзегуег А1 с масляными линзами Ν-асЬгорЬт 100х/1,25, камерой 2е155 ΜΡΤ’5 и программным обеспечением АхюУкюи Ке1.4.8.

- 12 028630

Было показано, что кураксин-137 можно вводить мышам постоянно с питьевой водой. Кураксин137 является орально доступным и растворимым в воде. Для установления схемы постоянного введения для изучения предотвращения рака его исследовали на предмет того, могут ли мыши получать соединение с их питьевой водой. Мыши ММТУ-пеи не отказывались от питьевых растворов с 0,1 или 0,2 мг/мл кураксина-137, потребляя тот же объем жидкости за данный период времени, что и мыши, подверженные действию негативного контроля воды (фиг. 1А). Однако меньше жидкости потреблялось с более концентрированными растворами кураксина-137. Превращение количества раствора, потребленного мышами, в фактическую дозу лекарства указало на среднюю суточную дозу кураксина-137, составляющую 13,8±2,2 мг/кг для потребляющей 0,1 мг/мл раствора группы и 28,5±2,5 мг/кг для потребляющей 0,2 мг/мл группы (фиг. 1В). Мыши ММТУ-пеи, получающие растворы кураксина-137 при этих уровнях доз вместо привычной питьевой воды между 4 и 14-недельным возрастом, показали отсутствие отличий в приросте массы по сравнению с контрольными животными, получавшими негативный контроль воды (фиг. 1С). Кроме того, отсутствовали видимые отличия между группами мышей, получавшими кураксин, и контрольной группой в течение этого периода времени, за исключением того, что одна мышь характеризовалась сгорбленностью в течение 2 дней без любых других изменений в поведении или весе. Не были обнаружены морфологические различия между исследуемыми группами во время гистопатологического исследования внутренних паренхиматозных органов к концу периода наблюдения (10 неделя). Кроме того, иерархическая кластеризация глобальных генных профилей экспрессии генов в печени и селезенке (эти органы были выбраны в качестве органов с самым высоким уровнем накопленного кураксина-137, смотри ниже) показала небольшое отличие между получавшими кураксин и контрольными животными (фиг. 1Е). Данные указывают на то, что постоянное введение кураксина-137 не вызывает какой-либо очевидной системной токсичности.

Поскольку концентрации кураксина-137 в питьевой воде выше, чем 0,2 мг/кг, затрудняла потребление жидкости мышами, то эта доза (0,2 мг/мл кураксина-137 в питьевой воде; эквивалентна 28,5 мг/кг/день) была определена как МТО для этого режима введения. Эта доза была очень близка к ранее установленной относительной МТО для введения мышам через желудочный зонд (30 мг/кг).

После введения 0,1 или 0,2 мг/мл кураксина-137 в питьевой воде в течение 10 недель, соединение было обнаружено в плазме мышей при средней концентрации 56,2 и 111,2 нг/мл соответственно (эквивалент 0,17 и 0,33 мкМ, дополнительная табл. 1). Значительно более высокие концентрации кураксина-137 были обнаружены в нескольких мышиных органах, показывая самые высокие уровни в селезенке (1286 и 2414 нг/мл в группах с низкой и высокой дозах соответственно (эквивалент 3,8 и 7,2 мкМ) (табл. 1).

Кураксин-137 в концентрациях, превышающих ЬС50% для большинства опухолевых клеток ш νίΐΓΟ (0,2-0,6 мкМ), не вызывает никаких патологических изменений в селезенке или других проанализированных органах (фиг. 2). Таким образом, мы пришли к выводу, что постоянное введение кураксина-137 было достаточно безопасным, чтобы быть проверенным в качестве предупреждающего опухоль режима.

Кроме того, кураксин-137 задерживает появление опухоли и повышает выживаемость у трансгенных мышей ММТУ-пеи. Три группы самок трансгенных мышей ММТУ-пеи регулярно получали (ί) воду на протяжении всей жизни (необработанный контроль), (ίί) 0,1 мг/мл раствор кураксина-137 в воде с 4недельного возраста, или (ίίί) 0,2 мг/мл кураксина-137 в воде с 10-недельного возраста (фиг. 1Ό). Несколько мышей в каждой группе (в том числе необработанной контрольной группе) умерло в ходе исследования не от опухолей. Причины, лежащие в основе этих смертей, не были установлены при аутопсии и гистологическом обследовании. Поэтому было сделано заключение о том, что эти смерти не связаны с образованием опухолей или введением препарата.

В контрольной группе, а также в группе, получавшей 0,1 мг/мл кураксина-137, маммарные опухоли стартовали, будучи обнаруженными в 23-25-недельном возрасте (фиг. 3А). В отличие от этого, появление опухолей было отложено до 40-недельного возраста в группе, получавшей 0,2 мг/мл кураксина-137. Несмотря на то, что кинетика первого появления опухоли в группе, получавшей низкую дозу кураксина, была такой же, как и в контрольной группе, группы с низкой и высокой дозой кураксина статистически отличались от контрольной группы на основе сравнения кривых безопухолевой выживаемости КапланМейера с использованием логарифмического рангового критерия (фиг. 3В)

Средняя длительность безопухолевой выживаемости составляла 44 недели в контрольной группе и 57 и 78 недели в группах, получавших низкую и высокую дозу кураксина соответственно (фиг. 3В).

Общая выживаемость животных, получавших кураксин-137, была выше чем у контрольных животных в обеих группах (фиг. 5А). Некоторые животные в обеих группах, получавших кураксин, попрежнему были без опухолей приблизительно на больше чем 15-месячном возрасте, в то время как контрольные животные жили не дольше чем 13 месяцев (фиг. 3В; табл. 2). Помимо родовой патологической оценки (фиг. 2), старших выживших животных из каждой группы подвергали слепой гистопатологической оценке с помощью независимой фенотипирующей лаборатории (табл. 2). Старшие животные, получавшие кураксин-137, не имели патологий, которые бы отличались от тех, которые наблюдались у старших выживших контрольных мышей (табл. 2). Это обеспечивает дополнительное подтверждение отсутствия общей токсичности и безопасности системного введения кураксина.

- 13 028630

Пример 2: Антикарциногенные эффекты кураксинов.

Кураксин 137 (СВЬО137) изучали с помощью мышей СВА, которым вводили 1,2-диметилгидразин (ΌΜΗ) для оценки его способности ингибировать карциногенез. Этот карциноген вызывает опухоли в тканях толстой кишки, почек, матки, яичников, перианальной коже, легких.

Способность ΌΜΗ вызывать опухоли в толстой кишке у мышей и крыс известна из уровня техники. Сравнительную оценку карциногенной активности 1,2-ΌΜΗ проводили с использованием разных пород мышей (табл. 3 и 4).

Наиболее эффективную карциногенную активность ΌΜΗ проявил у мышей СВА. ΌΜΗ индуцирует опухоли как у самцов, так и у самок мышей СВА, такие как, например, аденокарциномы и полипы толстой кишки, плоскоклеточные карциномы перианально кожи, гепатомы и гемангиоэндотелиомы; опухоли. Примерные вызванные ΌΜΗ опухоли у самок мышей СВА, как правило, включают, например, маточную саркому, аденокарциному яичников; примерные вызванные ΌΜΗ опухоли у самцов мышей СВА, как правило, включают, например, ангиосаркому надпочечников и кистозные и солидные почечные аденомы. Таким образом, эта экспериментальная модель позволяет оценить кураксин против опухолей разных локализаций. Далее эта модель химически индуцированных опухолей переходит в заболевание человека прямо или опосредованно, так как 1,2-ΌΜΗ и его нессиметрический аналог, 1,1-ΌΜΗ, являются канцерогенными для людей. Гидразин и его производные являются официально задекларированными человеческими онкогенами в законах России Федерации (Запйайоп Кеди1а1юи аиб ИуДсше иогш8 1,2.2353-08 Сагсшодешс Гас1ог5 апб таш гес.|шгетеп15 1о ргеуейюп οί сагсшодешс пкк). 1,1-ΌΜΗ широко используется в аэрокосмической промышленности как важный компонент ракетного топлива. Тысячи людей вовлечены в его производство и использование, многие из них находятся в онкогенной группе высокого риска, так как имеют симптомы постоянного отравления 1,1-ΌΜΗ. Многие карциногены, указанные как абсолютные карциногены, могут не только инициировать образование опухоли, но также стимулировать и ее прогрессирование. 1,2-ΌΜΗ является одним из таких карциногенов.

Без привязки к какой-либо теории, кураксины могут влиять на ферменты, задействованные в ксенобиотическом метаболизме, в частности кураксины могут влиять на энзимы, вовлеченные в ксенобиотический метаболизм, в частности изоформу СУР2Е1 цитохрома Р450, который необходим для метаболической активации 1,2-ΌΜΗ. Соответственно кураксины могут влиять на инициирующий процесс и опухолестимулирующий процесс, вызванный 1,2-ΌΜΗ.

Этот пример показывает антиопухолевые эффекты кураксинов во время одновременного введения с 1,2-ΌΜΗ или после воздействия 1,2-ΌΜΗ на животных.

Исследование включало 152 самца мышей и 150 самок мышей. Мышей разделили по следующим экспериментальным группам: 1) группа, в которой вводили 1,2-ΌΜΗ, 2) группа, в которой вводили 1,2ΌΜΗ и кураксин, 3) группа, в которой вводили кураксин, 4) контрольная группа (без какого-либо введения).

Введения кураксина начали со 2 недели после прекращения введения 1,2-ΌΜΗ, когда, без привязки к какой-либо теории, оба карциногена и их метаболиты были выведены из организма. Кураксин добавляли к питьевой воде в концентрации 0,20 мг/мл или 0,13 мг/мл, что отвечает дозам 30 и 20 мг/кг. Раствор кураксина готовили ежедневно.

Экспериментальные группы: самцы мышей СВА (152 мыши):1) 30 мышей - контроль (без введения), 2) 37 мышей - 1,2-ΌΜΗ, 15 недель, 8 мг/кг, 3) 44 мыши - 1,2-ΌΜΗ, 15 недель, 8 мг/кг, СВЬ0137, 1740 недель, 20 мг/кг, 4) 39 мышей - СВЬ0137, 17-40 недель, 20 мг/кг; самки мышей СВА (150 мышей): 1) 30 мышей - контроль (без введения), 2) 37 мышей - 1,2-ΌΜΗ, 20 недель 8 мг/кг, 3) 44 мыши - 1,2-ΌΜΗ, 20 недель, 8 мг/кг,СВЬ0137, 22-42 недели, 20 мг/кг, и 4) 39 мышей - СВЬ0137, 22-42 недели, 20 мг/кг.

План эксперимента показан на фиг. 4. Опухоли индуцировали 1,2-диметилгидразином. Кураксин 137 (СВЬ0137) вводили, как указано.

Оценка состояния животных в продолжение исследования начиная с недели 1 исследования (введение ΌΜΗ), мышей взвешивали и обследовали индивидуально несколько раз в неделю. Состояние мышей в течение введения лекарства обследовали по поводу изменений веса тела и двигательной активности животных. Умерших животных и агонирующих животных забирали умирать и на аутопсию в течение исследования. Количество введенного раствора кураксина оценили по оставшемуся количеству жидкости в поильных чашах на 1 клетку и рассчитывали как среднее для 1 животного.

Аутопсия и макроскопический анализ: мышей умертвили согласно усовершенствованному протоколу исследования животных. Во время аутопсии собрали образцы крови, провели патологоанатомический макроскопический анализ крови, произвели предварительную диагностику, взвесили органы. Органы были взяты (отдельно для заморозки и формалиновой фиксации) из 152 самцов мышей и 150 самок мышей. Органы животных, которые умерли во время исследования (если не наблюдалось разложение), зафиксировали в формалине.

Приготовление гистологических срезов осуществляли, как известно из уровня техники. После извлечения органы фиксировали в 10% забуференном формалине (Вю УДгит) в течение не менее чем 3 дней. Затем образцы тканей дегидратировали спиртом (70°; 96° - 1, 96° - 2; 100° - 1, 100° - 2), хлорофор- 14 028630 мом (ср., УекЮп) и выливали в Н181ош1х (Н181от1хех1га, ВюУкгит). Удаление парафина и окрашивание гистологических срезов: ксилол-1, ксилол-2 (м-ксилол, Мегск); спирты (100°, 96°, 70°), гематоксилинэозин (гематоксилин, Регак; Εοδίη В, АИпск). Обезвоживание и бальзамирование образцов: спирт (100°, 96°, 70°), ксилол-1, ксилол-2 (м-ксилол, Мегск); среда для заливки Βίο-МоиШ: - аналог бальзама (ΒίοОрЕса).

Вес тела животных: состояние повышения веса тела животных обследовалось во всех группах, начиная с недели 1 и по неделю 16. Некоторое повышение среднего веса тела наблюдалось во время введения ΌΜΗ, начиная с недели 16 и по неделю 20. После введения кураксина в дозе 30 мг/кг всех животных обследовали по поводу энергичной потери веса тела и симптомов дегидратации. На 14 день у самцов мышей и на 7 день у самок мышей из-за появления дегидратации введение кураксина отменялось в течение 10 дней у самцов мышей и в течение 7 дней у самок мышей. Затем введение кураксина проводили в дозе 20 мг/кг до конца исследования; симптомы дегидратации не наблюдались (фиг. 5).

Данные некроскопии и макроскопического анализа веса органов: вес органов, извлеченных во время аутопсии, показан в табл. 5 и 6.

Данные макроскопического анализа органов животных, самцов и смок, в описанном исследовании показаны в табл. 7 и 8.

Опухоли толстой кишки: в контрольных группах самок и самцов мышей у животных, которым вводили кураксин, не наблюдалось опухолевых трансформаций. Опухоли толстой кишки были обнаружены в группах животных, получавших ΌΜΗ: у 22 из 37 самцов мышей и у 20 из 39 самок мышей. Многообразие неоплазм в этих группах колебалось от 2 до 5 на животное. В группе ΌΜΗ плюс кураксины опухоли были обнаружены у 12 из 44 самцов мышей и у 12 из 44 самок мышей.

Почечные опухоли: почечные опухоли были обнаружены у 22 самцов мышей в группах животных, которым вводили ΌΜΗ, и у 18 из 45 самцов мышей в группе, которой вводили ΌΜΗ плюс кураксин. В группе животных, которым вводили кураксин, и в контрольной группе не наблюдалось изменений в почках. Почечные опухоли у самок мышей наблюдались только в группе животных, получавших ΌΜΗ, и только у 1 из 40 мышей.

Опухоли печени: самцы мышей СВА характеризуются высокой заболеваемостью спонтанными гепатомами. Введение ΌΜΗ индуцирует значительное снижение в заболеваемости этим типом доброкачественной опухоли, однако, на сегодня его механизм не полностью ясен. Кураксин не имеет какого-либо влияния на интенсивность спонтанного карциногенеза у самцов мышей. У контрольных животных (30 самцов мышей) и в группе, получающей кураксин (40 самцов мышей), заболеваемость опухолью печени составило 17/30 (56,7%) и 22/39 (56,4%) соответственно. У самок мышей СВА спонтанные гепатомы развиваются более редко чем у самцов мышей. В группе ΌΜΗ заболеваемость гепатомами составила 1/39, и в группе ΌΜΗ плюс кураксин она составила 1/44. У самцов мышей, которым вводили ΌΜΗ и ΌΜΗ плюс кураксин, геморрагические неоплазмы печени развивались редко (1/37 и 1/44 соответственно). Таким образом, кураксин не обладал модулирующим действием на ΌΜΗ-индукцию этого вида рака. Геморрагические неоплазмы в печени самок мышей развивались более часто (6/39 - группа ΌΜΗ и 9/44 - группа ΌΜΗ плюс кураксин).

Плоскоклеточные карциномы перианальной кожи: плоскоклеточные карциномы перианальной кожи (анальные опухоли - АТ) представляют собой плоскоклеточный рак, который развивается из поверхностного эпителия перианальной кожи. Некоторые из этих опухолей могут развиваться, без привязки к какой-либо теории, не только из поверхностного эпителия, но также из перианальных жировых (препуциальных) желез. ΌΜΗ является индуктором АТ. Опухоли наблюдались у 16 из 37 самцов мышей и у 10 из 39 мышей. Введение кураксина не индуцировало образование этого вида опухолей и не имело влияния на карциногенную активность ΌΜΗ (опухоли наблюдались у 18 из 44 самцов мышей и у 15 из 44 самок мышей).

Маточные опухоли: в контрольной группе и в группе мышей, которым вводили кураксин, маточные опухоли не были обнаружены. В группе ΌΜΗ заболеваемость опухолью и утолщение рога и тела матки составило 19/39, а в группе ΌΜΗ плюс кураксин эти же превращения наблюдались у 18 из 44 животных.

Опухоли яичников: максимальная заболеваемость прозрачными кистами была обнаружен у 9 из 30 мышей. В противоположность, кураксиновая группа показала 3 из 40 мышей, имеющих кисты. Следовательно, кураксин имел угнетающее действие на заболеваемость прозрачными кистами яичников. Подобный эффект наблюдался у животных, которым вводили ΌΜΗ и ΌΜΗ плюс кураксин (кисты наблюдались у 6 из 39 и 6 из 44 мышей соответственно). Геморрагические неоплазмы в яичниках по большей части наблюдались (6 из 39) в группе мышей, которым вводили ΌΜΗ. В группе мышей, которым вводили ΌΜΗ плюс кураксин, заболеваемость этими опухолями снизилась до 3 из 44. В группе мышей, которым вводили только кураксин, не наблюдались геморрагические неоплазмы в яичниках контрольной группы, этот вид опухоли был обнаружен у 1 из 30 мышей.

Опухоли других органов: у самцов мышей из группы ΌΜΗ была обнаружена одна мезентериальная опухоль. У одной самки мышей, которой вводили ΌΜΗ, были обнаружены одна маточная опухоль и желудочная опухоль метастатического происхождения.

Кроме того, микроскопический анализ обнаружил следующие доброкачественные и злокачествен- 15 028630 ные опухоли и опухолевые массы.

Толстая кишка: гландулярные полипы и аденокарциномы были обнаружены у самок и самцов мышей из группы ΌΜΗ и группы ΌΜΗ плюс кураксины.

Гистологический анализ толстой кишки у мышей, которым вводили 1,2-ΌΜΗ и ΌΜΗ плюс кураксин, обнаружил развитие гландулярных полипов и аденокарцином у самок и самцов мышей. У самцов мышей, существенное антикарциногенное влияние кураксинов проявлялось в заболеваемости полипами и аденокарциномами. В группе 1,2-ΌΜΗ и группе 1,2-ΌΜΗ плюс кураксин процент мышей с полипами составил 54,05% и 22,73% соответственно. Эти отличия являются статистически значимыми (Р<0,01) согласно критерию согласия хи-квадрат (χ²). Во время макроскопического анализа многие животные обследовались по поводу наличия множественных гландулярных полипов. В этой связи подсчитывали количество полипов на животное с полипами (мультиплетность). Мультиплетность толстокишечных полипов, подсчитанная в группе ΌΜΗ, была в 1,2 раза выше, чем в группе ΌΜΗ плюс кураксин (1,80 и 1,50 соответственно).

У самок мышей из группы ΌΜΗ гландулярные полипы были обнаружены у 25 из 35 мышей (64,10%) и в группе ΌΜΗ плюс кураксин - у 11 из 44 (25,00%). Эти отличия являются статистически значимыми (Р<0,001). У самок мышей мультиплетность толстокишечных полипов, подсчитанная в группе ΌΜΗ, превышает группу ΌΜΗ плюс кураксин в 4 раза (6,12 и 1,64 соответственно).

Гландулярные полипы развиваются под воздействием 1,2-ΌΜΗ и не являются спонтанными неоплазмами. В модели, использованной в этом исследовании, гландулярные полипы репрезентируют гландулярную эпителиальную гиперплазию толстой кишки, они демонстрируют экзофитный рост, не проникают в базальную мембрану и не повреждают мышечный слой.

Аденокарциномы толстой кишки у самцов мышей были обнаружены только в группе ΌΜΗ у 7 из 37 животных (18,92%). В группе ΌΜΗ плюс кураксин эти опухоли не были обнаружены (0%). Это отличие является статистически значимым (Р<0,01).

У самок мышей аденокарциномы толстой кишки были обнаружены у 8 из 39 мышей (20,51%) из группы ΌΜΗ, что статистически выше по сравнению с контрольной группой. В группе ΌΜΗ плюс кураксин аденокарциномы были обнаружены у 5 из 44 животных (11,36%). В группе ΌΜΗ у одного животного наблюдалась злокачественность нескольких полипов (мультиплетность 1,50), а в группе ΌΜΗ плюс кураксин этот феномен не наблюдался.

Аденокарцинома толстой кишки является злокачественным новообразованием гландулярного эпителия, которое характеризуется клеточной атипией и инвазивным ростом с проникновением в базальную мембрану и мышечный слой.

Почки: кроме того, у самцов мышей значительный противокарциногенный эффект проявлялся в снижении заболеваемости ангиосаркомами капсулы почки. Почечные аденомы были обнаружены в почках самок и самцов мышей из группы ΌΜΗ и группы ΌΜΗ плюс кураксины. Самцов мышей также обследовали по поводу наличия ангиосарком почечной капсулы. У самцов мышей из группы ΌΜΗ почечные аденомы были обнаружены у 94,6% (у 35 из 37 животных), а в группе ΌΜΗ плюс кураксин - у 38 из 44 животных (86,4%). Во время микроскопического анализа многие животные были обследованы по поводу наличия тяжелых почечных аденом. Мультиплетность почечных аденом в группе ΌΜΗ была в 1,5 раза выше, чем в группе ΌΜΗ плюс кураксин (3,84 и 2,55 соответственно).

У самок мышей из группы ΌΜΗ почечные аденомы наблюдались у 3 из 39 (7,69%) мышей, а в группе ΌΜΗ плюс кураксин - у 1 из 44 животных (2,27%).

По гистологической структуре почечные аденомы делятся на кистоаденомы, папиллярные кистоаденомы и солидные аденомы. Митоз в этих опухолях очень редок, клеточная атипия не тяжелая, инвазивный рост в периферические ткани отсутствует.

Ангиосаркомы капсулы почки (КСА) были обнаружены только у самцов мышей. В группе ΌΜΗ КСА были обнаружены у 18 из 37 животных (48,65%) и в группе ΌΜΗ плюс кураксин КСА были обнаружены только у 9 из 44 (20,45%). Эти отличия являются статистически значимыми (Р<0,01).

Гистологически на ранних стадиях развития ангиосаркомы капсулы почки мы обнаружили субкапсулярные кровоизлияния с артериальным тромбозом и капиллярным ростом почечную капсулу. Большие опухоли репрезентуют разные гистологические варианты ангиосаркомы. У животных не были обнаружены метастазы.

Печень: образование спонтанных доброкачественных печеночных опухолей - гепатом - является обычным явлением для мышей СВА. Гепатомы были обнаружены у животных из всех экспериментальных и контрольных групп, как у самок, так и у самцов. Гепатомы были обнаружены у 11 из 37 (29,73%) самцов мышей из группы ΌΜΗ, у 10 из 44 (22,73%) мышей из группы ΌΜΗ плюс кураксин, у 22 из 39 мышей (56,41%) из кураксиновой группы, и у 16 из 30 (53,33%) мышей из контрольной группы. Заболеваемость спонтанными гепатомами в группе, которой вводили ΌΜΗ, была ниже, чем в кураксиновой группе и контрольной группе. Однако в группе ΌΜΗ наблюдались многочисленные гепатомы (1,55 мультиплетность), которые не наблюдались в других группах. В группе ΌΜΗ - 2 из 39 (5,13%) имели гепатомы, в группе ΌΜΗ плюс кураксин - 2 из 44 (4,55%), в кураксиновой группе - 1 из 39 (2,56%), в контрольной группе - 1 из 30 (3,33%).

- 16 028630

Гистологически гепатома представляет собой узелок, четко отличающийся от нетрансформированной печеночной ткани. Гепатома характеризуется повреждениями структуры печени, отсутствием лучевой структуры, типичной для печени, гепатоциты значительно отклоняются от нормы, клеточной дистрофией и некрозом.

Перианальная кожа: опухоли перианальной кожи являются одними из наиболее часто встречаемых неоплазм, вызванных ЭМН у мышей. Опухоли перианальной кожи (анальные опухоли - АТ) представляют собой плоскоклеточный рак, который развивается из поверхностного эпителия перианальной кожи. Некоторые из таких опухолей могут развиваться не только из поверхностного эпителия, но и также из перианальных жировых (препуциальных) желез.

В группе ЭМН АТ была обнаружена у 16 из 37 самцов мышей (43,24%), в группе ЭМН плюс кураксин - у 18 из 44 животных (40,91%).

У самок мышей, в группе ЭМН АТ была обнаружена у 11 из 38 животных (28,21%), а в группе ЭМН плюс кураксин - у 15 из 44 животных (34,09%).

Микроскопический анализ обнаружил гистологические типы опухолей перианальной кожи, описанных ниже. Наиболее часто наблюдаемым раком является плоскоклеточный рак с ороговением или без ороговения. Плоскоклеточный рак с ороговением является более дифференцированным типом рака, чем рак кожи без ороговения. Рак препуциальных желез был диагностирован только у двух животных (1 самки мышей и 1 самца мышей) в группе ЭМН. и мышиной самки эта опухоль метастазировала в легкие. Повышение плоскоклеточного рака с ороговением наблюдалось в группе ЭМН плюс кураксин по сравнению с группой ЭМН. Таким образом, 7 из 37 самцов мышей имели плоскоклеточный рак с ороговением (18,92%) в группе ЭМН и 16 из 44 (36,36%) самцов мышей в группе ЭМН плюс кураксин. Плоскоклеточный рак без ороговения был обнаружен у 8 из 37 животных (21,62%) в группе ЭМН и только у 2 из 44 (4,55%) животных в группе ЭМН плюс кураксин. У самок мышей плоскоклеточный рак с ороговением был обнаружен у 3 из 39 мышей (7,69%) в группе ЭМН и у 11 из 44 (25,00%) в группе ЭМН плюс кураксин. Плоскоклеточный рак без ороговения был обнаружен у 7 из 39 мышей (17,94%) в группе ЭМН и у 4 из 44 (9,09%) в группе ЭМН плюс кураксин.

Матка: спонтанные маточные саркомы у мышей СВА развиваются очень редко и только у мышей старше 18 месяцев. После введения ЭМН маточные саркомы наблюдаются у 50% мышей, зависимо от дозы и режима. Численность маточных сарком в группе ЭМН была в 1,4 выше, чем в группе ЭМН плюс кураксин. В группе ЭМН маточные саркомы были обнаружены у 13 из 39 животных (33,33%), а в группе ЭМН плюс кураксин у 9 из 44 животных (20,45%). Одна самка из группы ЭМН была обследована по поводу маточной саркомы с метастазами в брюшную стенку. Гистологически эти опухоли определены как стромальные саркомы, которые развиваются в эндометриальной строме с миометриальной инвазией. Опухолевая ткань состояла из удлиненных клеток фибробластного типа и областей с незрелыми мезенхимальными клетками. Метастазы брюшной полости выглядели подобными неоплазмам, выпяченными в полость, а микроскопически они имели структуру фибробластной саркомы.

Яичники: у самок мышей СВА фолликулярные овариальные кисты развиваются спонтанно, что связано с ускоренным старением этих животных. Максимальная заболеваемость прозрачными кистами наблюдалась в контрольной группе (17 из 39 мышей (56,67%)); в группе ЭМН фолликулярные кисты развились у 11 из 39 мышей (28,31%), в группе ЭМН плюс кураксин фолликулярные кисты развились у 9 из 44 (20,45%) мышей; в кураксиновой группе фолликулярные кисты развились у 15 из 39 мышей (38,46%). Таким образом, ЭМН достоверно снижает количество фолликулярных кист, в то время как кураксин интенсифицирует его действие.

Кроме фолликулярных кист самки мышей из экспериментальных и контрольных групп испытывали повреждения, вызванные геморрагическими кистами и гемангиомами. Геморрагические кисты развились во всех группах, за исключением кураксиновой группы. В группе ЭМН геморрагические кисты были обнаружены у 3 из 39 мышей (7,69%), в группе ЭМН плюс кураксин геморрагические кисты были обнаружены у 5 из 44 (11,36%), а в контрольной группе геморрагические кисты были обнаружены у 4 из 30 (13,33%). Гемангиомы наблюдались только в группе ЭМН (у 5 самок мышей из 39 - 12,82%) и в группе ЭМН плюс кураксин (у 1 самок мышей из 44 - 2,27%). Тем не менее, количество гемангиом в группе ЭМН превышало их количество в группе ЭМН плюс кураксин в 5 раз.

Легкие: в легких были обнаружены доброкачественные неоплазмы, эти аденомы, которые являются спонтанными у линейных мышей, развиваются довольно редко у мышей СВА. У самцов мышей, ЭМН индуцировал спонтанный аденомогенезис в легких, а кураксин не действовал на него. В группе ЭМН аденомы наблюдались у 7 из 27 животных (18,92%, Р<0,05 по сравнению с контролем), в группе ЭМН плюс кураксин - у 7 из 44 (15,91%, Р>0,05, по сравнению с контролем), в контрольной группе - у 1 из 30 (3,33%) мышей. В кураксиновой группе легочные аденомы не были обнаружены. У самок мышей из группы ЭМН аденомы наблюдались у 3 из 39 животных (7,69%), в группе ЭМН плюс кураксин аденомы наблюдались у 2 из 44 (4,55%), а в кураксиновой группе аденомы наблюдались у 1 из 39 животных (7,69%). В контрольной группе аденомы не были обнаружены.

Селезенка: микроскопический анализ селезенки проводили у всех самок и самцов мышей. Не было обнаружено патологических изменений в этом органе.

- 17 028630

Таким образом, этот эксперимент показал, т!ег аНа, что кураксины имели антикарциногенный эффект после индукции опухолей толстой кишки 1,2-диметилгидразином: коэффициент заболеваемости аденоматозными полипами снизился у самцов мышей с 54,05% до 22,73%, у самок мышей с 64,4% до 25% и потом коэффициент заболеваемости аденокарциномами у самцов мышей снизился с 18,9% до 0%, у самок мышей с 20,51% до 11,3%. Далее, этот эксперимент показал, т!ег айа, что кураксин индуцировал снижение мультиплетности в образовании аденоматозных полипов у самцов мышей - в 1,2 раз, у самок мышей - в 4 раза. Кроме того, этот эксперимент показал, т!ег айа, что кураксин снизил коэффициент заболеваемости ангиосаркомами почечной капсулы у самцов мышей с 48,65% до 20,45%. Более того, этот эксперимент показал, т!ег айа, что введение кураксина снизило коэффициент заболеваемости маточными саркомами, индуцированными ΌΜΗ, с 33,33% до 20,45%. Дополнительно, этот эксперимент показал, т!ег айа, что кураксины не обладают прокарциногенным действием.

Эквиваленты

Специалистам в данной области техники должно быть понятно, или они будут способны установить, используя не более чем рутинные эксперименты, многочисленные эквиваленты конкретных вариантов реализации изобретения, в частности, описанные в данном документе. Такие эквиваленты охватываются объемом приложенной формулы изобретения.

Включение путем ссылок

Все патенты и публикации, на которые ссылаются в данном документе, включены в него посредством ссылки во всей их полноте.

Таблица 1

Концентрация кураксина -137 в питьевой воде	0,1 мг/мл	0,2 мг/мл
плазма	0,17+/-0,09	0,33+/-0,09
печень	0,96+/-0,55	1,65+/-0,5
почки	0,67+/-0,28	1,74+/-0,33
селезенка	3,8+/-0,86	7,2+/-0,97

Таблица 2. Гистопатологические особенности у старых мышей в каждой обработанной группе (две мыши на группу) мышь /группа) контроль контроль кураге ин- ] нураксин137,0,1 мгУмл|137,0,1 мг/мл

Йьураксин- I куракс!

137,0,2 |,лг/млЦ1 37. 0,2 кураксинмг/мл] возраст на _π ι _п ι _г ι ι ι момент 8,5 месяцев ' 8,5 месяцев 16,5 месяцев 19 месяцев ¹ 17 месяцев 16 месяцев эксперимента - !

маммарные железы множественная , ,дилатационная - , аденокарцинома , _{аденокарцинома} аденокарцинома , _{маммарная доль> а} ~ аденокарцинома аденокарцинома нету отличий между контролем и обработанными мышами 1 · Т · · легкая лимфои ι умеренная лимфои » легкая лимфоид ι умеренная лимфои! легкая лимфои ι легкая лимфои г ная гиперплазия 1дная гиперплазия |дная гиперплазиждная гиперплазия легкие мультифока льные перибронхи олярные лимфои дные инфильтраты ι ле гкие мультифока ι ι ι льные перибронхи в опярные пимфоидные пегочные метастазы пегвие мупьтифоьа ί инфильтраты и уме ι аденокарциномы ίмолочной железы ;ренные перваскуляр жые лимфоидные -инфильтраты льные перибронхио лярные лимфоидные инфильтраты метастатическая аденокарцинома метастатическая аденокарцинома

Таблица 3 фокальные периваскулярные лимфоцитные и макрофаго в ые инфильтраты фокальные периваскулярные лимфоцитные и макрофаго в ые инфильтраты

- 18 028630

Таблица 4

Таблица 5. Сводная таблица веса органов, извлеченных во время аутопсии из самок мышей

Группа	среди ий вес мыши, г	средний вес органа, г
легкие	сердце	селезенка	поджелудо чная железа	почка+над почечные железы	печень	тимус	матка+яи чники
аЬз, г	ге1 %	аЬз, г	ге1 %	аЬз, г	ге1 %	аЬз, г	ге1 %	аЬз, г	ге1 %	аЬз, г	ге1 %	аЬз, г	ге1 %	аЬз, г	ге1 %
Кон тро ль	Сре днее	31,73	0,25	0,79	0,11	0,35	0,09	0,29	0,08	0,24	0,38	1,19	1,35	4,28	0,04	0,13	0,39	1,24
ЗЕМ	0,6235	0,00 75	0,02 49	0,00 21	0,00 95	0,00 26	0,01 29	0,00 40	0,01 38	0,00 69	0,02 59	0,02 44	0,07 08	0,00 17	0,00 54	0,02 39	0,09 10
СВ1_ 013 7	Сре днее	31,10	0,26	0,86	0,11	0,37	0,10	0,32	0,07	0,24	0,35	1,15	1,39	4,51	0,04	0,12	0,40	1,31
ЗЕМ	0,5978	0,00 81	0,03 04	0,00 14	0,00 79	0,00 565	0,02 04	0,00 35	0,01 19	0,00 58	0,02 89	0,02 85	0,10 41	0,00 15	0,00 51	0,05 41	0,19 75
1,2- ϋΜ Н	Сре днее	27,04	0,22	0,81	0,12	0,44	0,14	0,57	0,08	0,30	0,36	1,33	1,24	4,61	0,03	0,12	0,77	2,95
ЗЕМ	0,5816	0,00 67	0,02 56	0,00 44	0,01 97	0,01 52	0,07 21	0,00 45	0,01 63	0,00 80	0,03 79	0,05 01	0,20 65	0,00 22	0,01 02	0,15 79	0,65 19
1,2- ϋΜ Н + СВ1_ 013 7	Сре днее	26,50	0,19	0,75	0,10	0,41	0,13	0,54	0,09	0,34	0,34	1,34	1,07	4,70	0,03	0,14	0,64	2,51
ЗЕМ	0,8207	0,00 68	0,02 56	0,00 37	0,01 31	0,00 74	0,44 2	0,00 48	0,02 33	0,00 90	0,04 76	0,09 78	0,08 95	0,00 26	0,01 11	0,09 21	0,40 66

Таблица 6. Сводная таблица веса органов, извлеченных во время аутопсии у самцов мышей

Группа	среди ий вес мыши, г	средний вес органа
легкие	сердце	селезенка	поджелудоч ная железа	почка+надпо чечные железы	печень	тимус
аЬз, г	ге1, %	аЬз, г	ге1,	аЬз, г	ге1, %	аЬз, г	ге1, %	аЬз, г	ге1, %	аЬз, г	ге1, %	аЬз, г	ге1,
Контроль	Сред нее	38,38	0,33	0,85	0,15	0,4	0,1	0,25	0,08	0,2	0,68	1,77	2,05	5,37	0,04	0,11
ЗЕМ	0,4663	0,01 56	0,04 01	0,00 25	0,00 65	0,06 7	0,01 51	0,0039	0,01	0,0096	0,0215	0,0747	0,1489 5	0,0021	0,00 54
СВЮ137	Сред нее	36,00	0,37	1,04	0,15	0,41	0,09	0,26	0,07	0,21	0,64	1,79	1,95	5,41	0,05	0,13
ЗЕМ	0,5358	0,01 82	0,04 99	0,00 23	0,00 7	0,00 24	0,00 62	0,0041	0,0108	0,0117	0,0286	0,0675	0,152	0,0026	0,00 62
1,2-ϋΜΗ	Сред нее	30,87	0,28	0,94	0,14	0,44	0,11	0,36	0,09	0,29	0,61	1,94	1,48	4,81	0,03	0,11
ЗЕМ	0,4929	0,01 06	0,04 52	0,00 36	0,00 91	0,00 59	0,02 21	0,0034	0,0098	0,0204	0,0596	0,0417	0,1244	0,0026	0,00 74
1,2-ϋΜΗ- СВЮ137	Сред нее	29,64	0,31	1,07	0,14	0,48	0,14	0,49	0,12	0,34	0,58	1,84	1,37	4,69	0,03	0,12
ЗЕМ	0,583	0,01 48	0,67 3	0,00 28	0,01 31	0,00 94	0,04 13	0,0213	0,0146	0,0356	0,0559	0,0352	0,1275	0,002	0,00 64

Таблица 7. Макроскопические изменения в органах самок мышей

Группа	количе СТВО ЖИВОТ ных	опухоли ТОЛСТОЙ кишки	маточ- ные опухоли		яичники* **	печень***	опухо ли почек	ДРУ- гие опухол и
опухоли перианаль ной кожи	геморрагиче ские неоплазмы	прозрач ные КИСТЫ	геморрагиче ские неоплазмы	из ткани печени
ϋΜΗ	39	20 (51,3%)	10 (25,6%)	19 (48,7%)	6 (15,4%)	6 (15,4%)	6 (15,4%)	1 (2,6%)	1 (2,6%)	1' (2,6%)
ϋΜΗ+СВЬ 0137	44	12 (27,3%)	15 (34,1%)	18 (40,9%)	3 (6,8%)	5 (11,4%)	9 9 (20,5%)	1 (2,3%)
СВЮ137	40					3 (7,7%)
Контроль	30				1 (3,3%)	9 (30%)

* - неоплазмы толстой кишки ** - геморрагические и прозрачные кисты яичников ***- очаговые геморрагические изменения в печени и узелках печеночной ткани '- возможны метастазы в брюшную стенку

- 19 028630

Таблица 8. Макроскопические изменения в органах самцов мышей

Группа	количество ЖИВОТНЫХ	толстая кишка*	опухоли перианальной кожи	почечные опухоли	печень**	Другие органы
геморррагические	из ткани печени
ϋΜΗ	37	22б(59,9%)	16(43%)	22(59,5%)	1(2,7%)	12(32,4%)	1а(2,6%)
ϋΜΗ+ΟΒΙ Ο137	44	12(27,3%)	18(41%)	18(38,6%)	1(2,3%)	13(29,5%)
СВЮ137	39					22(56,4%)
Контроль	30					17(56,7%)

* - полипы толстой кишки ** - фокальные геморрагические трансформации печени и узла ткани печени а - геморрагические неоплазмы в брыжейке б - в группе БМН 50% животных было обследовано на наличие множественных полипов (от 3 до 6 на животное) по сравнению с группой ОМН +СВБ0137

Claims (7)

1. Способ предотвращения вызванного канцерогеном рака у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение эффективного количества соединения формулы или его фармацевтически приемлемую соль или гидрат; причем карциноген представляет собой генотоксический карциноген, и рак представляет собой рак толстой кишки, рак почки или рак матки.

2. Способ по п.1, где рак представляет собой рак толстой кишки.

3. Способ по п.1, где рак представляет собой рак почки.

4. Способ по п.1, где рак представляет собой рак матки.

5. Способ по п.1, где генотоксический карциноген представляет собой гидразин.

6. Способ по п.5, где гидразин представляет собой диметилгидразин.

7. Способ по п.6, где диметилгидразин представляет собой 1,2-диметилгидразин.