EA025417B1 - Вакцины с повышенной иммуногенностью и способы их получения - Google Patents
Вакцины с повышенной иммуногенностью и способы их получения Download PDFInfo
- Publication number
- EA025417B1 EA025417B1 EA201300488A EA201300488A EA025417B1 EA 025417 B1 EA025417 B1 EA 025417B1 EA 201300488 A EA201300488 A EA 201300488A EA 201300488 A EA201300488 A EA 201300488A EA 025417 B1 EA025417 B1 EA 025417B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- vaccine
- antigen
- microbial
- vaccine antigen
- increased immunogenicity
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 90
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 38
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 title claims abstract description 32
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title abstract description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 93
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 93
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 93
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 19
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims abstract description 9
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 claims description 32
- 230000010933 acylation Effects 0.000 claims description 31
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 24
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 23
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 19
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims description 7
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims description 7
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 claims description 7
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 claims description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 6
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 6
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 6
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 6
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims description 5
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 claims description 5
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 3
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 claims description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims 6
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims 6
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims 4
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 claims 4
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims 4
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims 2
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 claims 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims 1
- 230000002152 alkylating effect Effects 0.000 claims 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 claims 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 2
- 208000031295 Animal disease Diseases 0.000 abstract 1
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 abstract 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 abstract 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 abstract 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 abstract 1
- 239000011369 resultant mixture Substances 0.000 abstract 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 abstract 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 abstract 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 22
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 21
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 18
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 16
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 15
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 14
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 14
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 12
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 11
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 8
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 6
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 6
- MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N Muraminsaeure Natural products OC(=O)C(C)OC1C(N)C(O)OC(CO)C1O MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 5
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 5
- 108010013639 Peptidoglycan Proteins 0.000 description 5
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 5
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical group ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 4
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 4
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 4
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 3
- 101100324465 Caenorhabditis elegans arr-1 gene Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 101710123026 High molecular weight antigen Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 2
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 229940126578 oral vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 2
- 229960005030 other vaccine in atc Drugs 0.000 description 2
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 2
- 201000005404 rubella Diseases 0.000 description 2
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000007407 African swine fever Diseases 0.000 description 1
- 101710145634 Antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 208000027312 Bursal disease Diseases 0.000 description 1
- 241000700112 Chinchilla Species 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- 208000001726 Classical Swine Fever Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000152447 Hades Species 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 206010019973 Herpes virus infection Diseases 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- DUKURNFHYQXCJG-UHFFFAOYSA-N Lewis A pentasaccharide Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OC1C(OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)C(NC(C)=O)C(OC2C(C(OC3C(OC(O)C(O)C3O)CO)OC(CO)C2O)O)OC1CO DUKURNFHYQXCJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- 208000010359 Newcastle Disease Diseases 0.000 description 1
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 1
- LGRFSURHDFAFJT-UHFFFAOYSA-N Phthalic anhydride Chemical group C1=CC=C2C(=O)OC(=O)C2=C1 LGRFSURHDFAFJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 241001079625 Proteides Species 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- VXLCKSFMONBCLQ-UHFFFAOYSA-N [Na]CC[Na] Chemical group [Na]CC[Na] VXLCKSFMONBCLQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000016571 aggressive behavior Effects 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N biuret Chemical compound NC(=O)NC(N)=O OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JHIWVOJDXOSYLW-UHFFFAOYSA-N butyl 2,2-difluorocyclopropane-1-carboxylate Chemical group CCCCOC(=O)C1CC1(F)F JHIWVOJDXOSYLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 229960005097 diphtheria vaccines Drugs 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 229940071106 ethylenediaminetetraacetate Drugs 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 description 1
- 150000002605 large molecules Chemical class 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 230000037023 motor activity Effects 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000000869 mutational effect Effects 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229910052573 porcelain Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000012899 standard injection Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 108091005992 succinylated proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение может быть использовано в медицине и ветеринарии для создания пероральных, парентеральных и трансдермальных вакцин, эффективных в профилактике заболеваний человека и животных. Предложены вакцины с повышенной иммуногенностью и способы их получения, отличающиеся тем, что в качестве специфического иммуногенного компонента используют нарезанный на олигомерные фрагменты вакцинный антиген, а полученную смесь (ансамбль) олигомерных фрагментов модифицируют путем изменения заряда на противоположный ацилированием или алкилированием аминогрупп остатков лизина и/или гистидина в последовательностях олигомерных фрагментов. Применение таких вакцин в связи с их способностью адаптироваться к организму позволяет защищать организм даже от таких мутантных вариантов инфекционных агентов, которых еще не существует в природе. Средство имеет широкий спектр действия, малотоксично и доступно для промышленного производства, высокоиммуногенно и неаллергенно, быстро метаболизируется и не содержит токсичных компонентов.
Description
Изобретение относится к ветеринарии и медицине, а именно, к вакцинологии и фармации и предназначено для профилактики и лечения инфекционных и других заболеваний человека и животных, где применяется вакцинация.
Предшествующий уровень техники
В современном мире вакцинация является одним из основных методов предотвращения эпидемий. Существуют две основных группы инфекционных заболеваний: группа инфекций, контролируемых вакцинами (применение которых предотвращает эпидемию) - входящих в схемы обязательной вакцинации и вторая группа инфекции, вакцинопрофилактика которых малоэффективна или неэффективна вовсе (1]. К первой группе инфекций относятся консервативные микроорганизмы и вирусы, антигенный состав которых неизменен и вакцина индуцирует высокие уровни защитных антител в крови. Это такие инфекции, как дифтерия, коклюш, корь, краснуха и др. Ко второй группе инфекционных заболеваний, при которых вакцинация неэффективна, относят грипп, герпесвирусные инфекции, ВИЧ/СПИД и некоторые другие [2’3’4]. Неэффективность вакцин в профилактике этой группы инфекций обусловлена целым рядом причин. Например, вирус гриппа представляет собой полиморфный (вирусная частица не имеет четкой структуры и формы) вирус с фрагментированным изменчивым геномом.
Вирус гриппа очень изменчив и способен к персистенции (пожизненному нахождению в организме человека) [5]. В организме человека и животных (в т.ч. птицы [6]) этот вирус размножается в несколько стадий - в острую продуктивную фазу инфицированная клетка выделяет вирусные частицы, способные заражать соседние клетки [7]. В фазу персистенции (латентную фазу) этот вирус пережидает внутри клетки, при этом утрачивая часть фрагментированного генома или захватывая куски человеческой РНК в цитоплазме [8]. Согласно статистике антигенный состав вируса гриппа в месяц меняется на 5% [9]. Соответственно, применение стандартных подходов к разработке антигриппозных вакцин является бесперспективным. Даже применение рекомбинантных белков и новых видов генных вакцин не избавляет такие препараты от быстрого устаревания. Наличие в одной ампуле нескольких консервативных белков (например, гемагглютининов и нейраминидаз для вируса гриппа) не позволяет защитить организм от вирусной агрессии через индукцию выработки специфичных антител. Эти антитела будут иметь совершенно не ту моноклональную специфичность, которая будет необходима при таком уровне мутации вирусов. Изменение подхода к проектированию вакцин должно сопровождаться включением в состав вакцин таких антигенов, которые еще не появились в результате мутации вирусов [10]. Так называемое предиктивное включение антигенов возможно двумя путями: классическим с применением методов эпидемиологического прогнозирования антигенного дрейфа и путем частичной модификации антигенов с получением неограниченного количества комбинаций антигена в одной ампуле антигена [11]. Первое направление себя оправдало лишь частично: ни в одном случае прогноз антигенного дрейфа не совпал с реальными мутационными изменениями нейраминидазы и гемагглютинина гриппа [12,13]. Если использовать технологию частичной модификации белкового компонента вакцинного антигена, например, нейраминидазы 1 типа, в процессе приготовления вакцины, то в одной дозе вакцины вместо одного белка с одним антигенным профилем появится более миллиона белков с одной первичной и вторичной структурой, но разными сайтами замещения и разным антигенным профилем.
Индуцированные этим белком антитела будут перекрывать все возможные комбинации сайтов присоединения. Соответственно количество индуцированных моноклонов будет на порядок выше, хотя белок останется тот же самый. При этом любой будущий эпитоп структуры нейраминидазы будет перекрыт уже синтезированными антителами.
Такой подход позволяет резко сократить количество антигена для вакцинации, защищать организм от вирусов с фрагментированным геномом и высокоизменчивых микроорганизмов небольшим количеством антител, но со значительно большим спектром моноклональной специфичности. Грубо говоря, вакцина будет содержать набор даже тех антигенов нейраминидазы, которые еще не существуют. При этом в крови вакцинированных ранее животных уже будет находиться необходимый пулл антител к будущему штамму вируса. Применение такой вакцины позволит успешно защищать организм от высокоизменчивых персистирующих, а также низкоиммуногенных вирусов и микроорганизмов.
Всемирная организация здравоохранения определила приоритетным направление исследований по замене парентеральных вакцин на пероральные [14]. Непарентеральные способы вакцинации базируются на способности антигенов проникать через слизистые оболочки главным образом кишечного тракта. Применение пероральных вакцин позволяет обеспечить непрерывность антигенного стимула, который является обязательным условием поддерживания на высоком уровне коллективного иммунитета против инфекций, управляемых средствами специфической профилактики. К тому же такой способ иммунизации является самым простым, физиологически адекватным и психологически привлекательным.
Известен способ [15] повышения иммуногенности путем экспрессии холерного токсинного антигена в химерный белок растений. Известный способ повышения иммуногенности нуклеопротеинов вируса гепатита В путем ковалентного связывания аминогрупп этого белка с микробным гаптеном. Такая конъюгация позволила поднять иммуногенность вакцины и вызывать индукцию титра антител до уровня 1:128 (при вакцинации животных нативным белком титр антител не превышал 1:32). Эта технология не
- 1 025417 может быть использована для повышения иммуногенности других вакцин (микробных и вирусных), потому что рассчитанна исключительно на белок, который индуктируется в ядре клетки вирусом гепатита В. Кроме того, пероральное использование такой вакцины невозможно, потому что кишечные ферменты разрушают антиген. Недостаточно эффективным представляется и сам метод конъюгации, поскольку титры антител к модифицированному антигену возрастали лишь в 4 раза. Ближайшим к патентуемому средству является способ получения водорастворимого адъюванта [16]. Этот адъювант содержит фрагменты пептидогликана и полисахарида с ацетилглюкозамином и ацилмурамовой кислотой. Последняя вместо ацетиловой группы была модифицирована янтарным или фталевым ангидридом. Пептидогликан изымали из клеточной стенки микроорганизмов рода ЫосагФа и ацилировали 30-50% за массой пептидогликана. Применение такого способа дало возможность повысить иммуногенность микробного антигена на 25-30% против стандартной инъекционной вакцины. Титры специфических антител росли до 1:256-1:512 через два недели после вакцинации. Получение чистого пептидогликана является важной процедурой, так как она связана с многостадийной очисткой. Кроме того, такие вакцины были полностью неэффективными при пероральном применении, потому что разрушались кишечными ферментами; в связи с тем, что адъювант не имел ковалентных связей с антигеном, наблюдалась значительная разница между титром антител к адъюванту (1:400) и титром антител к микробному антигену (1:100). К отличиям обоих изобретений следует отнести, в первую очередь, применение указанного ангидрида для модификации разных за химической природой антигенных комплексов: пептидогликана - в аналоге, белковой субстанции - в предлагаемом изобретении. Кроме того, в известном изобретении ацилированию поддается антигенный комплекс, который применяется в качестве адъюванта, а в заявленной модели остатки органических кислот в структуре модифицированного антигену сами выступают адъювантными соединениями.
Раскрытие изобретения
Задачей изобретения является разработать вакцины с повышенной иммуногенностью и эффективностью, в том числе при пероральном применении, и способ их получения.
Поставленная задача решается путем разработки вакцин с повышенной иммуногенностью и способа их получения, отличающегося тем, что в качестве специфического иммуногенного компонента используют нарезанный на олигомерные фрагменты вакцинный антиген - полисахарид, белок, липополисахарид либо цельный антиген - бактерию, вирус, смесь белков бактерии или вируса, а полученная смесь (ансамбль) олигомерных фрагментов модифицирована путем изменения заряда на противоположный путем ацилирования янтарным ангидридом или алкилированием монохлоруксусной кислотой; также в качестве специфического иммуногенного компонента используют вакцинный антиген с частично измененным на противоположный зарядом молекулы, изменение заряда которого проводят ацилированием или алкилированием с образованием смеси (ансамбля) вакцинных антигенов с разным зарядом молекул. Нами использован ансамбль из нарезанных на олигомерные фрагменты вакцинных антигенов, являющихся специфическими иммуногенными компонентами с измененными на противоположные зарядами молекул. Супрамолекулярный ансамбль или ансамбль - термин из супрамолекулярной химии. Объекты супрамолекулярной химии - супрамолекулярные ансамбли, строящиеся самопроизвольно из комплементарных, т.е. имеющих геометрическое и химическое соответствие фрагментов, подобно самопроизвольной сборке сложнейших пространственных структур в живой клетке [17,18].
Эта технология может быть использована для создания других вакцин: для профилактики таких инфекций, как грипп, гепатиты, вирусы герпеса, кори, краснухи, ВИЧ/СПИД, вирусных инфекций животных: болезни Нью-Касла, инфекционной бурсальной болезни птицы, классической чумы свиней, африканской чумы свиней и любых других заболеваний. В связи с частичной модификацией структуры в процессе реакции модификации образуется огромное количество разнообразных производных вакцинного антигена с разной иммуногенностью и структурой и соответственно иммунная система индуцирует синтез большего количества моноклонов в ответ на эти новые антигенные детерминанты. Кроме того, такое разнообразие новых эпитопов (сотни тысяч или даже миллионы) позволяет предиктивно защищать организм от еще несуществующих будущих штаммов гриппа и мутантных вирусов ВИЧ/СПИД.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1 - зависимость между титром индуцируемых специфических антител и степенью ацилирования корпускулярного синегнойного антигена;
фиг. 2 - зависимость между титром индуцируемых специфических антител и степенью ацилирования растворимого высокомолекулярного синегнойного антигена.
Лучший вариант осуществления изобретения
Пример 1. Получение синегнойной вакцины на основе композиции вакцинных антигенов с измененным зарядом молекул
Синегнойную палочку культивировали на твердой питательной среде (МПБ с добавлением 1% глюкозы). Через трое суток поверхность питательной среды всплошную была покрыта синегнойной палочкой. Из поверхности среды в чашке Петри делали смыв 0,9% раствором натрия хлорида, а полученную суспензию трехкратно отмывали и центрифугировали. После повторного суспендирования суспензию микроорганизмов прогревали в термостате в течение 140 мин при 80°С, а затем опять засевали на ПМА с
- 2 025417 целью контроля инактивации. По количеству микробных тел полученная суспензия отвечала 10 млрд. клеток/мл; затем 0,1 мл суспензии разводили в 100 раз 0,9% раствором натрия хлорида и устанавливали концентрацию поверхностных белков с помощью Биуретового метода и в реакции комплексообразования с бромфеноловым голубым методом Флореса [3]. В пересчете на белок проводили реакцию ацилирования раствором янтарного ангидрида, как было показано в примере 1 [6]. Получили 8 образцов с разными степенями ацилирования: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15%. Превышение 15% полностью лишает иммуногенности сукцинилированные белки, потому производные со степенями модификации, большими за 15% не считали целесообразным получать и использовать в дальнейшем. Корпускулярный антиген с разной степенью ацилирования дальше использовали для установления его иммуногенности. Другую часть антигена центрифугировали 40 мин при 3 тыс. об./мин. Осадок отбрасывали, а надосадочную жидкость пропускали через колонку с сефадексом 0-75. Первую, самую тяжелую фракцию собирали и использовали дальше для установления концентрации белка и степени химической модификации. Полученный антиген представлял собой однородную фракцию (одно полимерное вещество) и имел молекулярную массу 1,5 мДа и заряд - 186000. Получали растворимый гликопротеидный антиген с такими степенями ацилирования: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15%.
Общеизвестно, что при использовании фильтрации геля распределение белков проходить по размерам белковой глобулы. Гель-фильтрацию [7] проводили на колонках, заполненных гелем сефадекс 0-75. Общий объем столбика геля определяли VI. В течение элюирования крупные молекулы, которые не проникают в гранулы геля, двигаются с большой скоростью совместно с межгранульным растворителем и появляются в виде узкой полосы. Объем элюента, который соответствует появлению этой зоны, определяли как νο (свободный объем). Менее крупные молекулы проходили колонку медленно, проникали в гранулы геля, а выход их из колонки был весьма долговременным. В связи с тем, что степень диффузии в гранулы геля зависит от размера молекул, вещества выделяются из колонки в порядке уменьшения их молекулярной массы. Молекулярная масса М опытного протеида устанавливалась путем сравнения объема элюирования νο с аналогичным параметром белков-маркеров.
Для выделения антигена использовали колонку диаметром 25 мм и длиной 1000 мм. Гель сефадекс 0-75 и 0-25 предварительно готовили таким образом: к буферному раствору (0,1М ТРИС -НС1 и 0,1 М ЫаС1, рН=8,0) медленно добавляли гранулы геля, удерживали в термостате 72 ч при I = 37°С. Потом гель диаэрировали (постепенно и осторожно перемешивали в избыточном количестве буферного раствора для удаления газовых пузырей) на шейкере на протяжении часа. На дно колонки клали фильтровальную бумагу. К колонке медленно добавляли немного буферного раствора, потом по стенке переносили небольшое количество (5 г) суспензии набухнувших гранул геля сефадекс 0-25. После формирования столбика геля через колонку пропускали не менее двух объемов рабочего буферного раствора. Затем наносили микропипеткой 100 мкл раствора образца. Постоянную скорость элюирования задавали благодаря установлению над колонкой капельницы с буферным раствором и роликом регулировали скорости элюирования. Элюат собирали в пробирки по 0,5 мл и анализировали на спектрофотометре СФ-56 при длине волны 280 нм за методикой [4].
Антисинегнойная сыворотка для диагностических целей с титром специфических антисинегнойных антител (1:1000) была получена по стандартной схеме иммунизации мышей, по схеме [1] термически инактивированной корпускулярной синегнойной вакциной с концентрацией частиц 10 млрд./мл., которую вводили на 3; 5 и 7 сутки в дозе 0,2 мл внутримышечно. Для получения контрольной сыворотки использовали 20 мышей.
Для иммунизации животных в опыт взяты ацилированные образцы как корпускулярного антигена (по 10 животных в группе на один образец, 8 групп), так и ацилированного растворимого антигена (8 образцов по 10 животных на образец). Первой группе животных вводили 8 образцов антигена (по 10 животных на каждый образец перорально по 0,2 мл) по схеме Пастера (в 1; 3 и 7 дни), второй группе - по схеме профессора Бабича Е.М. (через день по 0,2 мл перорально в течение 15 дней) [1]. Уровень антител устанавливали двумя методами: реакцией гемаглютинации и методом флуоресцирующих антител. По 3 животных из каждой группы оставляли живыми до 15 суток, убивали эфиром и получали сыворотку, где также устанавливали уровень специфических антител вышеприведенными методами. Для реализации указанного готовили тест-систему для реакции прямой гемагглютинации, которую проводили в 96луночных круглодонных иммунологических планшетах, куда добавляли по 0,02 мл 0,1% суспензии термостатированных эритроцитов барана и по 0,02 мл суспензии термоинактивированных клеток синегнойной палочки в концентрации 10 млрд. клеток/мл. Уровень антител устанавливали последовательными десятикратными (но двукратными) разведениями сывороток крови мышей, которые добавляли в количестве 0,02 мл к лункам планшетов. Наличие агглютинатов свидетельствовало об образовании иммунных комплексов. Как контрольные использовали нормальный человеческий иммуноглобулин (титр антисинегнойных антител составлял от 0 к (1:10) согласно АНД) и сыворотку крови невакцинированных мышей (титр от 0 до 1:10).
Первым образцом была модель корпускулярной вакцины на основе инактивированной пастеризацией синегнойной палочки. Ацилировали только поверхностные антигены. Степень ацилирования колебалась от 1 до 15% с шагом в 2%. Всего исследовано по 8 образцов модифицированного растворимого
- 3 025417 антигена и по 8 корпускулярного антигена. Результаты исследования иммуногенности полученных образцов иллюстрируют данные фиг. 1.
Как видно из фиг. 1, на 15 сутки после инъекционного введения нативного вакцинного препарата средний титр антител у вакцинированных животных составлял (1:640). При этом пероральное использование нативного корпускулярного антигена не вызывало индукцию синтеза специфических антител.
Химически модифицированный антиген из степенью модификации в 1 % от концентрации в нем белка индуцировал синтез такого же уровня антител, как и нативный антиген (1:640). Модификация поверхностных антигенов на 3 % приводила к индукции антител на уровне (1:320) для перорального варианта и на уровне (1:2560) для инъекционного варианта.
Для производных антигенов с другими степенями ацилирования при их пероральном применении не наблюдалось индукции синтеза специфических антисинегнойных антител. При этом, инъекционный вариант был эффективным даже к производному с 15% степенью ацилирования. Так, производное со степенью ацилирования 5% индуцировало синтез антител на уровне (1:1280), производное с 7% степенью ацилирования антигена - на уровне (1: 320), производное из 9% - на уровне (1:40), другие варианты (с 11 и 15% степенью модификации) - на уровне (1:20).
Таким образом, наиболее эффективным оказалось производное со степенью ацилирования 3%, которое индуцировало синтез специфических антител как при использовании классической схемы вакцинации Л. Пастера при инъекционном применении, так и при использовании схемы вакцинации Е. Бабича при пероральном применении вакцины.
На следующей фиг. 2 приведена зависимость между уровнем индуцируемых специфических антител и степенью ацилирования растворимого модифицированного антигена (первая фракция).
Этот вариант антигена-кандидата представляет собой химическую монокомпонентную вакцину на основе гликопротеидного модифицированного высокомолекулярного антигена с массой 1,5 мДа и зарядом молекулы 186000. Именно наибольшая молекулярная масса или первая фракция, которая выходит из колонки при разделе фракций, оказывалась наиболее иммуногенной. При исследовании структуры полученного антигена была подтверждена корреляция между изменением заряда и массы антигена, который подтверждает состояние завершения химической реакции модификации структуры антигена. Следует обратить внимание на интересный факт, обнаруженный во время инъекционной вакцинации мышей: введение немодифицированной вакцины (на седьмой день - третий раз) вызывало у части животных проявления аллергической реакции в виде тремора, падения двигательной активности и отказа от употребления пищи на протяжении суток.
При этом, введение всех модифицированных вариантов вакцины не вызывало побочных явлений у животных. Ацилированный вариант растворимого антигена со степенью ацилирования 1%, как и неацилированный антиген вызывал индукцию синтеза одинакового количества антител в титре (1:1280). Пероральное применение растворимого антигена и антигена со степенью ацилирования в 1% не приводило к существенной индукции синтеза специфических антисинегнойных антител. Производное растворимого антигена со степенью ацилирования 3% активировало синтез антител на уровне (1:5120) в инъекционном варианте и (1:1280) при пероральном использовании.
Ацилированное на 5% производное индуцировало синтез специфических антител на уровне (1: 640) для пероральной формы применения и на уровне (1:2560) - для инъекционной формы. Производное со степенью ацилирования 7% индуктировало синтез специфических антител на уровне (1:640) - для пероральной формы и (1:1280) для инъекционной. Для растворимого антигена со степенью ацилирования 11% соответствующий уровень индуцируемых специфических антител составлял (1:320) для оральной формы вакцины и (1:640) - для инъекционной формы. Уровни синтеза антител уравнялись у вакцинированных животных при пероральном и инъекционном применении лишь при использовании вакцинного препарата с уровнем ацилирования 13% и равнялись 1:40, а при степени ацилирования в 15% иммуногенной была только инъекционная форма вакцины - кандидата, она индуктировала синтез антител на уровне (1:20).
Таким образом, характерным отличием растворимого высокомолекулярного антигена оказалась индукция синтеза антител не только производным со степенью ацилирования 3%, но производными со степенями ацилирования 5, 7, 11, 13% при пероральном применении по выше отмеченной схеме Бабича Е.М. В четыре раза большим был титр антител при инъекционном применении самого эффективного производного со степенью ацилирования 3%, чем при его же пероральном применении. В сравнении с корпускулярным модифицированным антигеном ацилированное на 3% производное растворимого антигена было вдвое эффективнее по иммуногенности при инъекционном и в четыре раза более эффективным - при пероральном его применении. Невзирая на значительно большую антигенную нагрузку, чем при инъекционном использовании, пероральное применение частично ацилированного растворимого антигена оказалось эффективным и индуцировало уровень антител, который в перспективе в состоянии долговременно (год и больше) защищать организм от синтегнойной инфекции. Использование пероральной вакцинации несомненно является перспективным направлением усовершенствования иммунобиологических средств.
Среди полученных вариантов ацилированных антигенов выбран сукцинилированный на 3 мас.%
- 4 025417 белка растворимый гликопротеидный антиген, который при пероральном применении на 15 сутки вызывал индукцию синтеза специфических антител в титре (1:1280) и титра (1:5120) - при его же инъекционном применении.
Пример 2. Получение антидифтерийной вакцины на основе композиции вакцинных антигенов с измененным зарядом молекул
Микробную массу получают из производственного штамма Ρν - 8 вариант Вейсензее путем культивирования бактерий С. ШрЫНепае на бульоне Лингуда с добавлением 0,3% глюкозы или мальтозы. Культивирование проводят при температуре 37°С в течение 36 ч, после чего микробную массу отделяют от токсина с помощью центрифугирования (6000 об/хв. в течение 30 мин). Полученный осадок (п-грамм сырой массы) заливают этанолом (концентрация 96°) в объеме (2-4) п мл, выдерживают в холодильнике при температуре 4°С 24 ч и центрифугуют в отмеченном режиме. Микробный осадок заливают (2-10) п мл физ. раствором, доводят рН до 7,2-7,4, охлаждают до 4-6°С, оставляют на 3-4 ч, дальше центрифугуют (6000 об./мин. в течение 30 мин). К полученному осадку постепенно добавляют 0,8% раствор этилендиаминтетраацетата динатриевой соли (ЕДТА-Ыа2), одновременно растирают в фарфоровой ступке до получения белой, тягучей массы. Выдерживают в холодильнике при температуре 4-6°С 18 ч. Экстракт центрифугируют при 6000 об./мин в течение 30 мин, после чего проводят диализ против дистиллированной воды при рН 7,2-7,5 и сгущают полиэтиленгликолем с молекулярной массой 15000 Да или сефадексом С 200 §ирегйпе 1 к объему п мл. Экстракт ЕДТА переосаждают при рН 7,0. В состав выделенных антигенных комплексов входят белки (75,3±3,4)%, липиды (23,3±4,1)% и углеводы (1,4±0,4)%. Готовят водную суспензию соматических антигенов, ориентируясь на получение необходимой их концентрации для проведения пероральной прививки (5,0 мг/л), доводят рН до 8,5-9,0 с помощью 1,0% раствора гидроокиси натрия или 1,0% уксусной кислоты, устанавливают на спектрофотометре (длина волны 230 нм) точное содержимое белковой субстанции. Соматический комплекс модифицируют янтарным ангидридом по отношению к содержимому белку. Иммуногенные свойства полученных комплексов определяют на кролях породы шиншилла весом 3,0-3,5 кг. Создание грундиммунитета у животных проводят по схеме двукратного введения антигена в дозе 5,0 мг через час до кормления с суточным интервалом в течение пяти дней. Серологическое обследование выполняют через 7, 14 и 21 день после последней прививки с помощью стандартного дифтерийного эритроцитарного диагностикума с титром 1:3200 (см. таблицу).
Титры антидифтерийных антител в сыворотках крови кролей после вакцинации
| Процентное | Доза | День | Количество | У них получали антитела в | |||
| соотношение | антигена | наблюдения | ЖИВОТНЫХ | титрах | |||
| модификатора к | (в мг) | 1:10- | 1:80- | 1:320- | 1:1280- | ||
| антигену | 1:40 | 1:160 | 1:640 | 1:2560 | |||
| 1,0% | 5,0 | 7-й | 5 | 2 | 0 | 0 | 0 |
| 14-й | 5 | 2 | 1 | 0 | 0 | ||
| 21-й | 5 | 2 | 0 | 0 | 0 | ||
| 2,0 % | 5,0 | 7-й | 5 | 0 | 0 | 1 | 4 |
| 14-й | 5 | 0 | 0 | 3 | 2 | ||
| 21-й | 5 | 0 | 1 | 4 | 0 | ||
| 3,0 % | 5,0 | 7-й | 5 | 0 | 0 | 2 | 3 |
| 14-й | 5 | 0 | 0 | 2 | 3 | ||
| 21-й | 5 | 0 | 0 | 4 | 1 | ||
| 4,0 % | 5,0 | 7-й | 5 | 0 | 1 | 1 | 3 |
| 14-й | 5 | 0 | 1 | 1 | 3 | ||
| 21-й | 5 | 0 | 1 | 2 | 2 | ||
| 5,0 % | 5,0 | 7-й | 5 | 3 | 2 | 0 | 0 |
| 14-й | 5 | 4 | 0 | 0 | 0 | ||
| 21-й | 5 | 4 | 0 | 0 | 0 | ||
| Не | 15,0 | 7-й | 10 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| модифицирован- | 14-й | 10 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| ный антиген | 21-й | 10 | 0 | 0 | 0 | 0 |
Полученные результаты свидетельствуют, что модифицированные антигены имеют разную способность влиять на гуморальный иммунитет. Применение модификатора в количестве 1,0% и меньше, а также 5,0% и больше по отношению к массе белкового компонента не приводило к индукции титров антитела у животных, тогда как ацилирование 2,0-4,0 мас.% белка приводило к индукции защитных титров в крови перорально вакцинированных кролей к титру 1:2560 с сохранением его до 21 суток.
- 5 025417
Промышленная применимость
Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а конкретно к вакцинологии, и может быть использовано для создания средств специфической профилактики инфекционных, онкологических и других. заболеваний. Способ позволяет осуществить модификацию существующих вакцинных антигенов прямо на фармацевтическом предприятии, на доступном оборудовании, значительно сократить стоимость полученных вакцин, уменьшить их побочные эффекты, создавать пероральные формы вакцин. Уникальное оборудование для осуществления изобретения не требуется.
Использованные источники информации
1) КоЬЫпз I. В., К. 8сйпеегзоп апб 8. С. δζυ. 1995. Регзресйуе: йуроГйез1з: зегит 1дС апйЬобу ίδ зиГЛС1сп1!о сопГег ргоГесйоп адатз! ЫГесйоиз б1зеазе Ьу 1пасЛуабпд !йе шоси1иш. 1. 1пГес!. Όίδ. 171:1378-1398.
2) Эе1 Уа1, Μ., Η. 1. 8сйИсйГ, Н. Уо1кшег, М. Меззег1е, Μ. 1. Кеббейазе апб и. Н. Козζ^по№зк^. 1991. РгоГесбоп адатз! 1е1йа1 суГотеда1оу1гиз тГесйоп Ьу а гесотЬшапГ уассте сопГштпд а зшд1е попатепс Тсе11 ерйоре. 1. У1го1. 65:3641-3646.
3) Ьагзеп Ό. Ь., А. Кагазш апб С. О1зеп. 2001. йптш^айоп оГ р1дз адатз! тЛиег^а уйиз 1пГесбоп
Ьу ΌΝΑ уассше рпттд Го11о\уеб Ьу кШеб-У1гиз уассте ЬоозЛпд. Уассше 19: 2842-2853.
4) Сют-8ат Ь., Вгипе ВиЫс I., .Топрс 8., [^ζίΓκ^λΈΐα и. Н. (2003). УассшаЛоп оГ Мюе \\йй Вас!епа Саггутд а С1опеб Негрезуйиз Сепоте КесопзЫиГеб 1п У1уо. 1. Уйо1. 77: 8249-8255.
5) Ьеуш 8.А., ЭизйоГГ 1., Р1о1кш ТВ. ЕуоЫйоп апб регазГепсе оГ тЛиег^а А апб о!йег б1зеазез. Ма!й ВюзсГ 2004 Маг-Арг; 188:17-28.
6) Теггедшо С., ТоГГап А., ВеаГо М.8., Эе №γ6ι К., Игадо А., Сариа 1.СопуепЛопа1 Η5Ν9 уассте зирргеззез зйеббшд ш зресГЛс-раГйодеп-Ггее Ыгбз сйа11епдеб \\йй НРА1 Η5Ν1 А/с1йскеп/Уатадис1и/7/2004. Ау1ап И1з. 2007, Маг; 51(1 8ирр1): 495-7.
7) Мебуебеуа М.К, РеГгоу ΝΑ, Уазбепко 8.К., 81тапоузка1а У.К., Со1иЬеу И.В. Тйе сйагас!епзйсз оГ !йе йетаддЫЛпЫ Ггот регз1з1еп1 уапапГз оГ !йе тЛиег^а У1гиз А/Ую!опа/35/72 (Н3№). Уорг Уйизо1. 1990 8ер-Ос!;35(5): 374-6.
8) Агопззоп Р., КоЬейзоп В., Ципддгеп Н.С., КпзГепззоп К. 1пуазюп апб регз1з1епсе оГ !йе пеигоабарГеб тЛиег^а уйиз А/\У8№33 щ !йе тоизе о1Гас!огу зузГет. Уйа1 1ттипо1. 2003;16(3): 415-23.
9) Сох ММ. Уасстез ш беуе1ортеп! адатз! ау1ап тЛиег^а. Мтегуа Меб. 2007 Арг; 98(2): 145-53.
10) Сгопуа11 С.К., Вопо Ь.Ь. Кетоушд Ьатегз !о д1оЬа1 рапбеппс тЛиег^а уасстайоп. Вюзесиг ВюГеггог. 2006; 4(2): 168-75.
11) Мабупоу А.У., ВаЬусй Е.М., 8те1уапзкауа М.У. 1псгеазе оГ уасстез аб.щуапбсйу Ьу зиссшу1абоп оГ уассше апбдеп//Ке.)иуепабоп Кезеагсй.- Аид 2005, уо1. 8, №. 1 :Р. 14-17 (РозГег оГ СопГгетсе).
12) ТаиЬепЬегдег ЕК., Могепз И.М., Раит А.8. Тйе пех! шЛиета рапбеппс: сап ίΐ Ье ргебюГеб? ГАМА. 2007 Мау 9; 297(18): 2025-7.
13) Уагбауаз К, ВгеЬап К, В1о\\ег 8. Сап тЛиег^а ер1бетюз Ье ргеуепГеб Ьу уо1ип1агу уастпайоп? РЬо8 Сотри! Вю1. 2007 Мау 4;3(5): е85.
14 Научные исследования и разработки в области вакцин//Материалы 87-й Сессии исполнительного комитета Всемирной организации здравоохранения 21 ноября 1990 г., -11 с.
15 Ипйеб 81а!ез РаГепГ 6395964, Мау 28, 2002 Ο12Ν 005/04; Ο12Ν 015/82; Ο2Ν 015/87; А01Н 005/00. Ога1 1ттщ^а0оп \\йй Ггапздетс р1ап!з/АгаРеп; Сйаг1ез I.; Мазоп; Нидй 8.; Тагир Над А.; С1етеп!з; 1ойп Ό. Тйе Техаз А&М Итуегзйу 8уз!ет (Со11еде 8!айоп. ТХ); Тйе АбтГтзГгаГогз оГ Гйе Ти1апе Рипб (№те Ог1еапз, ЬА) Арр1 №.: 817906, АидизГ 4, 1997.
16 Ипйеб 81а!ез РаГепГ 4094971 .Типе 13, 1978. А61К 039/02. 1ттипо1одюа1 аб.)иуап! адеп!з асйуе ш асщеоиз зоЫОоп Сйеб1б; Ьошз А.; АибЫей; Ргапсо1зе Магдиегйе Адепсе Иайопа1е бе Уа1опзайоп бе 1а Кесйегсйе Арр1. №.: 717509 АцдцзГ 25, 1976.
17 ййр: //бю. асабетю. гц/бю. пзГ/ги\\йй/79240.
18 Нап-Мапе Ьейп. 8иргато1еси1аг СйетГзйу. СопсерГз апб Регзресйуез.- ХУетйейт №\у Уогк; Вазе1; Сатйпбде; Токуо: УСН Уег1адздезе11зсйаГ! тЬН, 1995.-Р. 103 (СйарГег 7).
Claims (34)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Вакцина с повышенной иммуногенностью, отличающаяся тем, что в качестве специфического иммуногенного компонента для ее получения используют нарезанный на олигомерные фрагменты вакцинный антиген, а полученную смесь (ансамбль) олигомерных фрагментов модифицируют путем изменения заряда на противоположный ацилированием или алкилированием аминогрупп остатков лизина и/или гистидина в последовательностях олигомерных фрагментов.
- 2. Вакцина с повышенной иммуногенностью п.1, отличающаяся тем, что в качестве вакцинного антигена используют микробный гликопротеид.
- 3. Вакцина с повышенной иммуногенностью по п.1, отличающаяся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь микробных гликопротеидов.
- 4. Вакцина с повышенной иммуногенностью по п.1, отличающаяся тем, что в качестве вакцинного антигена используют микробный пептид.- 6 025417
- 5. Вакцина с повышенной иммуногенностью по п.1, отличающаяся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь микробных пептидов.
- 6. Вакцина с повышенной иммуногенностью по п.1, отличающаяся тем, что в качестве вакцинного антигена используют микробный полисахарид.
- 7. Вакцина с повышенной иммуногенностью по п.1, отличающаяся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь микробных полисахаридов.
- 8. Вакцина с повышенной иммуногенностью по п.1, отличающаяся тем, что в качестве вакцинного антигена используют микробный липополисахарид.
- 9. Вакцина с повышенной иммуногенностью по п.1, отличающаяся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь микробных липополисахаридов.
- 10. Вакцина с повышенной иммуногенностью по п.1, отличающаяся тем, что в качестве вакцинного антигена используют вирусный белок.
- 11. Вакцина с повышенной иммуногенностью по п.1, отличающаяся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь вирусных белков.
- 12. Вакцина с повышенной иммуногенностью по п.1, отличающаяся тем, что вакцинный антиген нарезают на фрагменты с помощью протеаз.
- 13. Вакцина с повышенной иммуногенностью по п.12, отличающаяся тем, что вакцинный антиген нарезают на фрагменты с помощью синтетических протеаз.
- 14. Вакцина с повышенной иммуногенностью по п.1, отличающаяся тем, что степень ацилирования или алкилирования олигомерных фрагментов по массе составляет от 1 до 15%.
- 15. Вакцина с повышенной иммуногенностью по п.12, отличающаяся тем, что в качестве протеазы используют трипсин.
- 16. Вакцина с повышенной иммуногенностью по п.1, отличающаяся тем, что ацилирование производят ангидридами карбоновых и поликарбоновых кислот.
- 17. Вакцина с повышенной иммуногенностью по п.1, отличающаяся тем, что алкилирование производят галогенпроизводными карбоновых и поликарбоновых кислот.
- 18. Способ получения вакцины с повышенной иммуногенностью, отличающийся тем, что вакцинный антиген нарезают на олигомерные фрагменты, а полученную смесь (ансамбль) олигомерных фрагментов модифицируют путем изменения заряда на противоположный ацилированием или алкилированием аминогрупп остатков лизина и/или гистидина в последовательностях олигомерных фрагментов.
- 19. Способ по п.18, отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют микробный гликопротеид.
- 20. Способ по п.18, отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь микробных гликопротеидов.
- 21. Способ по п.18, отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют микробный пептид.
- 22. Способ по п.18, отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь микробных пептидов.
- 23. Способ по п.18, отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют микробный полисахарид.
- 24. Способ по п.18, отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь микробных полисахаридов.
- 25. Способ по п.18, отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют микробный липополисахарид.
- 26. Способ по п.18, отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь микробных липополисахаридов.
- 27. Способ по п.18, отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют вирусный белок.
- 28. Способ по п.18, отличающийся тем, что в качестве вакцинного антигена используют смесь вирусных белков.
- 29. Способ по п. 18, отличающийся тем, что вакцинный антиген нарезают на фрагменты с помощью протеаз.
- 30. Способ по п.29, отличающийся тем, что вакцинный антиген нарезают на фрагменты с помощью синтетических протеаз.
- 31. Способ по п.18, отличающийся тем, что степень ацилирования или алкилирования олигомерных фрагментов по массе составляет от 1 до 15%.
- 32. Способ по п.29, отличающийся тем, что в качестве протеазы используют трипсин.
- 33. Способ по п.18, отличающийся тем, что ацилирование производят ангидридами карбоновых и поликарбоновых кислот.
- 34. Способ по п.18, отличающийся тем, что алкилирование производят галогенпроизводными карбоновых и поликарбоновых кислот.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PCT/RU2010/000700 WO2012070974A1 (ru) | 2010-11-22 | 2010-11-22 | Вакцины с повышенной иммуногенностью и способы их получения |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201300488A1 EA201300488A1 (ru) | 2013-11-29 |
| EA025417B1 true EA025417B1 (ru) | 2016-12-30 |
Family
ID=46146103
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201300488A EA025417B1 (ru) | 2010-11-22 | 2010-11-22 | Вакцины с повышенной иммуногенностью и способы их получения |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| EA (1) | EA025417B1 (ru) |
| WO (1) | WO2012070974A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019212378A1 (ru) * | 2018-05-04 | 2019-11-07 | Farber Boris Slavinovich | Вакцины с повышенной иммуногенностью, низкой аллергенностью и реактогенностью |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1557712A (en) * | 1975-08-29 | 1979-12-12 | Anvar | Immunological agents |
| WO1997027311A1 (en) * | 1996-01-23 | 1997-07-31 | St. Jude Children's Research Hospital | Mixture of recombinant vaccinia vectors as polyenv vaccines for hiv |
| WO2004000351A1 (en) * | 2002-06-20 | 2003-12-31 | Cytos Biotechnology Ag | Packaged virus-like particles for use as adjuvants: method of preparation and use |
-
2010
- 2010-11-22 WO PCT/RU2010/000700 patent/WO2012070974A1/ru active Application Filing
- 2010-11-22 EA EA201300488A patent/EA025417B1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1557712A (en) * | 1975-08-29 | 1979-12-12 | Anvar | Immunological agents |
| WO1997027311A1 (en) * | 1996-01-23 | 1997-07-31 | St. Jude Children's Research Hospital | Mixture of recombinant vaccinia vectors as polyenv vaccines for hiv |
| WO2004000351A1 (en) * | 2002-06-20 | 2003-12-31 | Cytos Biotechnology Ag | Packaged virus-like particles for use as adjuvants: method of preparation and use |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| MARTYNOV A.V. et al., "New approach to design and synthesis of therapeutic and preventive drugs, taking into account interspecies polymorphism of receptors (method of precision partial modification)", Annals of Mechnikov Institute, 2007, N. 4, p. 5-15 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019212378A1 (ru) * | 2018-05-04 | 2019-11-07 | Farber Boris Slavinovich | Вакцины с повышенной иммуногенностью, низкой аллергенностью и реактогенностью |
| US11213579B2 (en) | 2018-05-04 | 2022-01-04 | Boris Farber | Vaccines with enhanced immunogenicity, low allergenicity and reactogenicity |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2012070974A1 (ru) | 2012-05-31 |
| EA201300488A1 (ru) | 2013-11-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2265148T3 (es) | Enterotoxina mutante eficaz como adyuvante oral no toxico. | |
| JP4509554B2 (ja) | アルミニウムアジュバントおよびヒスチジンを含むワクチン | |
| KR100287424B1 (ko) | 헬리코박터 감염에 대한 우레아제 기재 백신(Urease-Based Vaccine Against Helicobacter Infection) | |
| JP5327873B2 (ja) | リコンビナントヘリコバクターピロリの経口ワクチン及びその調製方法 | |
| KR100642877B1 (ko) | 면역치료에 유용한 항원조성물 | |
| AU8441991A (en) | Improved vaccine compositions | |
| KR19990022748A (ko) | 변형된 메닝고코컬 다당류 접합백신 | |
| ES2446984T3 (es) | Vacuna contra Escherichia coli enterohemorrágica | |
| JPS61200924A (ja) | 合成免疫原 | |
| JPH10500958A (ja) | Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒの感染症の治療および予防 | |
| CN104507496B (zh) | 包含与crm197载体蛋白偶联的hiv gp41肽的免疫原性化合物 | |
| US4567041A (en) | Mutant strain of Listeria monocytogenes and its use in production of IgM antibodies and as an immunotherapeutic agent | |
| Piccioli et al. | GMMA as a ‘plug and play’technology to tackle infectious disease to improve global health: Context and perspectives for the future | |
| US20070031447A1 (en) | Method of isolating biologically active fraction containing clinically acceptable native S-lipopolysaccharides obtained from bacteria producing endotoxic lipopolysaccharides | |
| CZ174293A3 (en) | Process for preparing a composite vaccine against intestinal infection caused by enterotoxigenic escherichia coli bacteria | |
| JP4236215B2 (ja) | 非型性のヘモフイルス インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）株用のワクチンとしての精製非型性ヘモフイルス インフルエンザＰ５蛋白質 | |
| EA025417B1 (ru) | Вакцины с повышенной иммуногенностью и способы их получения | |
| JP4530317B2 (ja) | 減毒化トキシンを含むワクチン製剤 | |
| ES2686875T3 (es) | Exopolisacárido de la bacteria Shigella sonnei, método para producirlo, vacuna y composición farmacéutica que lo contienen | |
| US20120195925A1 (en) | Vaccines with increased immunogenicity and methods for obtaining them | |
| US7112332B1 (en) | Oral or intranasal vaccines using hydrophobic complexes having proteosomes and lipopolysaccharides | |
| WO2000015257A1 (fr) | Preparations vaccinales contenant des saponines | |
| US11213579B2 (en) | Vaccines with enhanced immunogenicity, low allergenicity and reactogenicity | |
| EP0646377A1 (en) | Albumin-conjugated tumour cell-free extracts, antigenic compositions comprising the same, related antibodies, and uses thereof | |
| Hwang et al. | Beneficial effects of the mixed adjuvant of CpG plus monophosphoryl lipid a in immunization with a recombinant protein vaccine for hepatitis A |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM BY KG MD TJ TM |