EA024104B1 - Способ стимуляции регенерации резецированной печени дистантным ишемическим прекондиционированием - Google Patents
Способ стимуляции регенерации резецированной печени дистантным ишемическим прекондиционированием Download PDFInfo
- Publication number
- EA024104B1 EA024104B1 EA201400036A EA201400036A EA024104B1 EA 024104 B1 EA024104 B1 EA 024104B1 EA 201400036 A EA201400036 A EA 201400036A EA 201400036 A EA201400036 A EA 201400036A EA 024104 B1 EA024104 B1 EA 024104B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- liver
- day
- experiment
- animals
- resection
- Prior art date
Links
Landscapes
- Surgical Instruments (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к экспериментальной хирургии и может быть использовано для стимуляции регенерации резецированной печени. Для этого лабораторному животному на вторые сутки эксперимента осуществляют резекцию печени в объеме 70%, дистантное ишемическое прекондиционирование проводят 10-минутным пережатием бедренной артерии, посредством наложения жгута на верхнюю треть левого бедра на первые, четвертые и седьмые сутки эксперимента. Способ обеспечивает эффективную стимуляцию регенерации резецированной печени, подтверждаемую снижением летальности, улучшением микроциркуляции, уменьшением выраженности цитолиза, улучшением синтетической функции печени в сравнении с контрольной группой, а также результатами морфологического исследования.
Description
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной хирургии, и может быть использовано для стимуляции регенерации резецированной печени.
Наиболее близким к заявленному решению является Способ пострезекционной регенерации печени в эксперименте авт. С.П. Чикотеева и др. (КИ 2232550). В данном решении проводят предварительную ксенотрансплантацию криоконсервированными изолированными гепатоцитами свиньи подкожно в переднюю брюшную стенку. Процедуру осуществляют за 48 ч до операции. Затем интраоперационно непосредственно после резекции 90% печени выполняют трансплантацию таких же клеток под капсулу селезенки.
Недостатками данного метода являются сложность технического выполнения и высокая вероятность развития осложнений при ксенотрансплантации. Кроме того, 100% летальность крыс контрольной группы затрудняет проведение эксперимента из-за невозможности сравнения показателей в опытной и контрольной группах животных. По данным большинства исследователей наиболее оптимальной для изучения регенерации печени у крыс является резекция 70% органа.
Во всех живых организмах заложены сложные механизмы самосохранения и восстановления. Задача современной медицины изучить и найти способы их активации. Вот почему феномен ишемического прекондиционирования заслуживает самого детального изучения. Эффекты прекондиционирования цитопротекция и неоангиогенез, лежащий в основе восстановительных процессов, важны в хирургии. Доказанная способность стимулировать неоангиогенез (Колесник И.М., 2010), позволяет предположить эффективность применения дистантного ишемического прекондиционирования для стимуляции процесса регенерации органов и тканей, в том числе резецированной печени.
Основным преимуществом предлагаемого способа является простота исполнения, а также отсутствие необходимости применения фармакологических препаратов.
Техническим результатом изобретения является разработка способа стимуляции регенерации резецированной печени с помощью дистантного ишемического прекондиционирования.
Технический результат достигается тем, что при резекции 70% печени на вторые сутки эксперимента, лабораторному животному проводят дистантное ишемическое прекондиционирование 10-минутным пережатием бедренной артерии, посредством наложения жгута на верхнюю треть левого бедра, на первые четвертые и седьмые сутки эксперимента.
Способ осуществляется следующим образом.
Опыты проводят на белых крысах линии \УШ1аг массой 210-220 г.
Резекция печени производится на вторые сутки в объеме 70%.
Состояние печени оценивается по показателю летальности животных, уровню микроциркуляции, выраженности цитолиза, состоянию синтетической функции печени и результатам морфологического исследования в группах интактных животных, ложнооперированных, с резекцией печени и в группе животных с резекцией печени, которым проводилось дистантное ишемическое прекондиционирование.
Показатель летальности оценивается в экспериментальных группах животных в первые 10 суток после операции.
Уровень микроциркуляции в резецированной печени определяется при помощи оборудования производства компании Вюрас куЧепъ: полиграфа МР100 с модулем лазерной допплеровской флоуметрии ЬЭР100С и поверхностного датчика ΤδΌ 140. Регистрация и обработка результатов лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) производится с помощью программы АсцКпоШебде версии 4.2., значения микроциркуляции выражают в перфузионных единицах (ПЕ). Запись уровня микроциркуляции осуществляют последовательно по поверхности печени, затем рассчитывают среднее значение. Регистрацию уровня микроциркуляции проводят на 2-е, 7-е, 14-е, 21-е и 28-е сутки после операции.
Выраженность цитолиза оценивают по уровню показателей АлАТ, АсАТ и ЛДГ в крови экспериментальных животных на 2-е, 7-е, 14-е, 21-е и 28-е сутки после операции. Показатели определяют УФ кинетическим методом на автоматизированной системе АИ5800 (Весктап СоиНег, США).
Синтетическую функцию печени оценивают по показателям коагулограммы (АЧТВ, МНО, фибриноген) на 7-е, 14-е, 21-е и 28-е сутки после операции на анализаторе С8-20001 (§уктех, Япония).
Морфологическое исследование выполняется на материале стандартных участков печени, взятых после выведения животных из эксперимента. Обработка материала производится по стандартной методике с фиксацией в формалине, заливкой в парафин, окраской гематоксилином и эозином. Общеморфологическое и морфометрическое исследования выполняются с применением системы для сканирования и архивирования изображений МшахЭекк.
Дистантное ишемическое прекондиционирование (ДИП) проводят 10-минутным пережатием бедренной артерии, посредством наложения жгута на верхнюю треть левого бедра, на первые, четвертые и седьмые сутки эксперимента.
При статистической обработке данных рассчитывают среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считают достоверными при р<0,05.
Пример конкретного выполнения.
Экспериментальные животные были разделены на следующие группы:
1) интактные животные (п=20);
- 1 024104
2) ложнооперированные животные (п=20);
3) резекция печени (п=50);
4) резекция печени + ДИП (п=50).
Резекцию печени производили лабораторным животным на вторые сутки эксперимента в объёме 70%. Крыс наркотизировали внутрибрюшинным введением комбинации хлоралгидрата и золетила. После наркотизации крысу фиксировали в положении на спине. Шерсть на брюшке тщательно выстригали, кожу обрабатывали 70% раствором этилового спирта. Срединную лапаротомию выполняли от мечевидного отростка длиной 4 см. Печень мобилизовывали посредством пересечения связок. Удаляли левую и медиальную доли после предварительного лигирования сосудов. Лапаротомное отверстие ушивали после санации брюшной полости и контроля гемостаза послойно, узловым швом.
Стимуляцию регенерации печени проводили у животных 4-й группы 10-минутным пережатием бедренной артерии, посредством наложения жгута на верхнюю треть левого бедра на первые, четвертые и седьмые сутки эксперимента.
Показатель летальности оценивали в экспериментальных группах животных в первые 10 суток после операции. В группе животных с резекцией печени он составил 40%, в группе животных с резекцией печени и проведением дистантного ишемического прекондиционирования - 15%.
Уровень микроциркуляции в печени определяли при помощи оборудования производства компании Вюрас 8у81етз: полиграфа МР100 с модулем лазерной допплеровской флоуметрии Ь0Р100С и поверхностного датчика ΤδΌ 140 на 2-е, 7-е, 14-е, 21-е и 28-е сутки после операции. Регистрацию и обработку результатов лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) производили с помощью программы АсдКпоШебде версии 4.2., значения микроциркуляции выражали в перфузионных единицах (ПЕ). Запись кривой уровня микроциркуляции осуществляли по всей поверхности печени в течение 30 с в каждой точке. Из полученных значений выводили среднее, которое вносили в протокол и принимали за уровень микроциркуляции в печени у данного животного. Из полученных значений рассчитывали среднее, которое принимали за уровень микроциркуляции в данной группе животных на данном сроке исследования.
В группе интактных животных уровень микроциркуляции в печени составил 877±17 ПЕ. Результаты оценки уровня микроциркуляции у животных опытных групп представлены в табл. 1.
Таблица 1
Результаты оценки уровня микроциркуляции в печени животных опытных групп (М±т) в перфузионных единицах на 2-е, 7-е, 14-е, 21-е и 28-е сутки после операции (соответственно 3-и, 8-е, 15-е, 22-е и 29-е сутки эксперимента)
Группа | Уровень микроциркуляции в печени в перфузионных единицах | ||||
2-е сутки | 7-е сутки | 14-е сутки | 21-е сутки | 28-е сутки | |
Ложнооперированные | 881+14 | 860+19 | 872+21 | 875+9 | 880+12 |
Резекция печени | 421+14* | 429+9* | 501±И* | 591+17* | 637+19* |
Резекция печени + ДИП | 738+17** | 730+15** | 764+19** | 9П±20** | 1000+25** |
Примечание:
* - р<0,05 в сравнении с группой интактных животных;
** - р<0,05 в сравнении с группой животных с резекцией печени на соответствующем сроке;
ложная операция - лапаротомия с последующим ушиванием передней брюшной стенки на вторые сутки эксперимента;
резекция печени осуществлялась в объеме 70% на вторые сутки эксперимента;
ДИП - дистантное ишемическое прекондиционирование - 10-минутное пережатие бедренной артерии, посредством наложения жгута на верхнюю треть левого бедра, на первые, четвертые и седьмые сутки эксперимента.
Среднее значение уровня микроциркуляции в печени ложнооперированных животных на всех сроках не имеет достоверных отличий от такового у интактных крыс.
После резекции печени показатель снижается на 50% и остается на прежнем уровне первые 14 суток. К 21 суткам показатель начинает расти, однако на 28-е сутки среднее значение уровня микроциркуляции в резецированной печени крыс достоверно ниже такового у интактных животных.
Проведение дистантного ишемического прекондиционирования способствовало сохранению кровотока в резецированной печени на довольно высоком уровне (показатель снижается на 16%) и восстановлению его на сроке до 21-х суток после резекции.
Выраженность цитолиза оценивали по уровню показателей АлАТ, АсАТ и ЛДГ в крови экспериментальных животных на 2-е, 7-е, 14-е, 21-е, 28-е сутки после операции. Показатели определяли УФ кинетическим методом на автоматизированной системе АИ5800 (Весктап СоиИег, США).
АлАТ в контрольной группе на 2-е сутки 108±4 МЕ/л - снижается до нормальных показателей к 21
- 2 024104 суткам - 38±2 МЕ/л, в группе с проведением дистантного ишемического прекондиционирования на 2-е сутки - 62±1 МЕ/л - нормализуется на 7-е сутки и остается в пределах нормальных значений на всех остальных сроках эксперимента.
АсАТ в контрольной группе на 2-е сутки 184±7 МЕ/л - снижается до нормальных показателей к 21 суткам, в группе с проведением дистантного ишемического прекондиционирования на 2-е сутки - 84±3 МЕ/л - нормализуется на 14-е сутки и остается в пределах нормальных значений на всех остальных сроках эксперимента.
ЛДГ в контрольной группе на 2-е сутки 564±9 МЕ/л - снижается до нормальных показателей к 28 суткам - 250±6 ЕД/л, в группе с проведением дистантного ишемического прекондиционирования на 2-е сутки - 300±8 МЕ/л - нормализуется на 7-е сутки и остается в пределах нормальных значений на всех остальных сроках эксперимента.
Синтетическую функцию печени оценивали по показателям коагулограммы (АЧТВ, МНО, фибриноген) на 7-е, 14-е, 21-е и 28-е сутки после операции на анализаторе С8-20001 (8узтех, Япония).
На 7-е сутки после резекции печени отмечается снижение синтетической функции, проявляющееся удлинением АЧТВ до 60±1 с, увеличение МНО до 4±0,2, снижением уровня фибриногена до 1,7±0,002 г/л. Наиболее выраженные изменения показателей выявлены на 21-е сутки (АЧТВ - 75±1 с, МНО - 6±0,1, фибриноген 0,9±0,003 г/л). На 28 сутки отмечается их некоторое восстановление (АЧТВ - 55±1 с, МНО 4±0,1, фибриноген 1,2±0,002 г/л). Коррекция дистантным ишемическим прекондиционированием способствовала менее выраженному снижению синтетической функции печени после ее резекции. Наиболее выраженные изменения показателей были зарегистрированы на 7-е сутки (АЧТВ - 40±1 с, МНО 2,7±0,02, фибриноген 1,8±0,01 г/л). К 14-м суткам показатели восстановились и сохранялись в пределах нормы на всех остальных сроках эксперимента.
Морфологическое исследование выполняли на материале стандартных участков печени, взятых после выведения животных из эксперимента. Обработку материала производили по стандартной методике с фиксацией в формалине, заливкой в парафин, окраской гематоксилином и эозином. Общеморфологическое и морфометрическое исследования выполняли с применением системы для сканирования и архивирования изображений МиахЭезк.
Масса печени у интактных животных составила 9,2±0,002 г. В группе ложнооперированных животных показатель не имеет достоверных отличий от такового у интактных животных. Масса печени непосредственно после резекции 2,8±0,003 г. Средняя масса печени животных опытных групп на различных сроках эксперимента представлена в табл. 2.
В группе животных с резекцией печени масса печени на 2-е сутки увеличивается в сравнении с массой непосредственно после резекции почти в 2 раза, к 7-м суткам несколько уменьшается, затем начинает увеличиваться, однако на 28-е сутки после резекции достоверно меньше массы печени у интактных крыс. В группе животных с резекцией печени и проведением дистантного ишемического прекондиционирования масса печени на 2-е сутки увеличивается ровно в 2 раза, продолжая расти и достигая массы у интактных животных к 28 суткам.
Таблица 2
Средняя масса печени животных опытных групп (М±т) в граммах на 2-е, 7-е, 14-е, 21-е и 28-е сутки после операции (соответственно 3-и, 8-е, 15-е, 22-е и 29-е сутки эксперимента)
Группа | Средняя масса печени граммах | ||||
2-е сутки | 7-е сутки | 14-е сутки | 21-е сутки | 28-е сутки | |
Резекция печени | 5,1±0,01* | 4,2±0,01* | 5±0,01* | 5,9±0,01* | 6,3±0,02* |
Резекция печени + ДИП | 5,3±О,О1** | 7,1±0,01** | 8,0±0,01** | 8,5±0.021** | 9,2±0,02** |
Примечание:
* - р<0,05 в сравнении с группой интактных животных;
** - р<0,05 в сравнении с группой животных с резекцией печени на соответствующем сроке;
ложная операция - лапаротомия с последующим ушиванием передней брюшной стенки на вторые сутки эксперимента;
резекция печени осуществлялась в объеме 70% на вторые сутки эксперимента;
ДИП - дистантное ишемическое прекондиционирование - 10-минутное пережатие бедренной артерии, посредством наложения жгута на верхнюю треть левого бедра, на первые, четвертые и седьмые сутки эксперимента.
При микроскопии на отдаленных сроках в контрольной группе сохранялось неравномерное кровенаполнение сосудов всех типов, наблюдались очаги зернистой дистрофии гепатоцитов, очаги склерозирования и воспалительной инфильтрации портальных трактов. Восстановление печеночной ткани происходило за счет гипертрофии одноядерных гепатоцитов, полиплоидии и амитотического деления двуядерных гепатоцитов. В группе с введением эритропоэтина на отдаленных сроках нарушений микроцир- 3 024104 куляции и признаков повреждения гепатоцитов не выявлено, определяется равномерно выраженная гипертрофия цитоплазмы и ядер гепатоцитов. Восстановление печеночной ткани происходило за счет полиплоидии, амитотического деления двуядерных гепатоцитов и митотического деления одноядерных гепатоцитов, т.е. были задействованы все виды регенерации печени. Основная нагрузка приходилась на одноядерные гепатоциты с размером ядра 9 мкм на 2-е и 7-е сутки, что свидетельствовало о стимуляции генетического аппарата клетки.
Полученные результаты позволяют констатировать возможность стимуляции регенерации резецированной печени у крыс дистантным ишемическим прекондиционированием.
Claims (1)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯСпособ стимуляции регенерации резецированной печени, отличающийся тем, что резекцию печени осуществляют лабораторному животному на вторые сутки эксперимента в объеме 70%, дистантное ишемическое прекондиционирование проводят 10-минутным пережатием бедренной артерии, посредством наложения жгута на верхнюю треть левого бедра на первые, четвертые и седьмые сутки эксперимента.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EA201400036A EA024104B1 (ru) | 2013-12-04 | 2013-12-04 | Способ стимуляции регенерации резецированной печени дистантным ишемическим прекондиционированием |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EA201400036A EA024104B1 (ru) | 2013-12-04 | 2013-12-04 | Способ стимуляции регенерации резецированной печени дистантным ишемическим прекондиционированием |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA201400036A1 EA201400036A1 (ru) | 2015-06-30 |
EA024104B1 true EA024104B1 (ru) | 2016-08-31 |
Family
ID=53488014
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA201400036A EA024104B1 (ru) | 2013-12-04 | 2013-12-04 | Способ стимуляции регенерации резецированной печени дистантным ишемическим прекондиционированием |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
EA (1) | EA024104B1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2712015C1 (ru) * | 2019-02-18 | 2020-01-24 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (Томский НИМЦ) | Способ прекондиционирования почек в сердечно-сосудистой хирургии |
-
2013
- 2013-12-04 EA EA201400036A patent/EA024104B1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
RENE SCHMIDT. Molecular mechanisms of liver preconditioning. World Journal of Gastroenterology, 2010 December 28, Vol. 16, Issue 48, p. 6058-6067 [он-лайн] [найдено 14.04.2014], Найдено в Интернет: * |
ДАНИЛЕНКО Л.М. Применение рекомбинантного эритропоэтина и ресвератрола для фармакологической коррекции ишемических повреждений миокарда. ЭНЖ Современные проблемы науки и образования No. 6, 2013 [он-лайн] [найдено 14.04.2014], Найдено в Интернет: * |
КОЛЕСНИК И.М. и др. Фармакологическое прекондиционирование эритропоэтином при ишемии конечности. Биомедицина No. 4, 2011, с. 90-91 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2712015C1 (ru) * | 2019-02-18 | 2020-01-24 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (Томский НИМЦ) | Способ прекондиционирования почек в сердечно-сосудистой хирургии |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EA201400036A1 (ru) | 2015-06-30 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Imhof et al. | Orthotopic microvascular reanastomosis of whole cryopreserved ovine ovaries resulting in pregnancy and live birth | |
Bryant et al. | Repeated removal of developing limb buds permanently reduces appendage size in the highly-regenerative axolotl | |
CN102596188A (zh) | 增加肝脏增殖的方法 | |
Pakyari et al. | A new method for skin grafting in murine model | |
Papanna et al. | Cryopreserved human amniotic membrane and a bioinspired underwater adhesive to seal and promote healing of iatrogenic fetal membrane defect sites | |
Diaz-Garcia et al. | Ovarian cortex transplantation in the baboon: comparison of four different intra-abdominal transplantation sites | |
EP2949348A1 (en) | Adhesion preventing material | |
von Schönfeldt et al. | Advanced follicle development in xenografted prepubertal ovarian tissue: the common marmoset as a nonhuman primate model for ovarian tissue transplantation | |
Wells | Subjection of fetal rats to surgery and repeated subcutaneous injections: method and survival | |
Li et al. | Intranasal oxytocin restores maternal behavior and oxytocin neuronal activity in the supraoptic nucleus in rat dams with cesarean delivery | |
EA024104B1 (ru) | Способ стимуляции регенерации резецированной печени дистантным ишемическим прекондиционированием | |
Luo et al. | The application of Compont gel in chronic obstructive jaundice rats model | |
Zhang et al. | Establishment of a rat model of liver venous deprivation: simultaneous portal and hepatic vein ligation | |
RU2556609C1 (ru) | Способ стимуляции регенерации резецированной печени l-норвалином | |
Mastellos et al. | Inducing and characterizing liver regeneration in mice: Reliable models, essential “readouts” and critical perspectives | |
RU2559935C1 (ru) | Способ стимуляции регенерации резецированной печени l-аргинином | |
Yin et al. | Developmental switch from morphological replication to compensatory growth for salamander lung regeneration | |
RU2559586C1 (ru) | Способ стимуляции регенерации резецированной печени дигидрокверцетином | |
EA024137B1 (ru) | Способ стимуляции регенерации резецированной печени рекомбинантным эритропоэтином | |
Ding et al. | Modified model of whole ovary transplantation in rats | |
Santos et al. | Effects of the pneumoperitoneum in rats submitted to a unilateral nephrectomy: morphologic and functional study on the remnant kidney | |
Kyono et al. | NEW FREEZING METHOD BY PULSED MAGNETIC FIELD EFFECTS; WHOLE OVARIES OF CYNOMOLGUS MONKEYS AND RABBITS. | |
RU2614885C1 (ru) | Модель ишемии спинного мозга у лабораторных животных | |
Biondo-Simões et al. | Influence of arterial hypertension treated with losartan on skin healing in rats | |
RU2481645C2 (ru) | Способ моделирования очагов диссеминированного постспленэктомического спленоза |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM RU |