EA022911B1

EA022911B1 - Способ лечения пациента, страдающего i или ii стадией системной красной волчанки

Info

Publication number: EA022911B1
Application number: EA200901630A
Authority: EA
Inventors: Шарон Дж. Басби; Джейн А. Гросс; Дженифер Визич; Иван Несторов; Ален Мунафо; Орестис Папасоулиотис; Клаудиа Пена-Росси
Original assignee: Займодженетикс, Инк.; Арес Трейдинг С.А.
Priority date: 2007-06-13
Filing date: 2008-06-13
Publication date: 2016-03-31
Also published as: SI2167038T1; JP2015013887A; AU2008265974A1; CN101790369A; ES2681195T3; IL202305B; LT2167038T; PL2167038T3; DK2167038T3; CA2690119A1; MX2009013183A; PT2167038T; CY1120830T1; EP2167038B1; WO2008157369A2; TR201806960T4; EA200901630A1; HUE038445T2; CN105770891A; JP2017031209A

Abstract

В различных воплощениях настоящее изобретение относится к способу лечения пациента, страдающего I или II стадией системной красной волчанки, включающему еженедельное введение в дозе приблизительно от 1 до приблизительно 10 мг/кг в течение приблизительно от 2 до приблизительно 52 недель слитой молекулы, которая включает TACI внеклеточный домен или его фрагмент, который связывается с BlyS, и константный домен иммуноглобулина человека.

Description

В различных воплощениях настоящее изобретение относится к способам и композициям для лечения аутоиммунных заболеваний или расстройств иммунной системы, а именно системной красной волчанки, включающим введение ТАСГ-Гд слитого белка такого, как атацицепт при использовании особого режима ведения доз, который максимизирует блокирование функций лигандов семейства ΤΝΒ.

Предпосылки создания изобретения

Лиганд В1у8/Семейство рецепторов.

Три рецептора, ТАС1 (трансмембранный активатор или трансмембранный активатор и партнёр кальциевого модулятора и лиганда циклофилина), ВСМА (антиген созревания В-клеток) и ВАРР-К (рецептор для фактора, активирующего В-клетки, принадлежащего к семейству ΤΝΡ), были идентифицированы как такие, которые обладают уникальными связывающими аффинностями для двух факторов роста В1у8 (стимулятор В-лимфоцитов) и АРК1Ь (лиганд, индуцирующий пролиферацию) (Маг8!ег8 е! а1. Сигг Вю1 2000; 10 (13): 785-788; Тйотр8оп е! а1. 8с1епсе 2001; 293: 2108-2111). ТАС1 и ВСМА связываются как с В1у8, так и с АРК1Б. в то время как ВАРР-К был определен как такой, который связывается с В1у8 с высокой аффинностью (Маг81ег8 е! а1. Сигг Вю1 2000; 10(13): 785-788; Тйотрзоп е! а1. 8с1епсе 2001; 293:21 08-2111). В результате этого В1у8 является способным передавать сигнал через три рецептора, в то время как АРКГЬ способен предавать сигнал только через ТАС1 и ВСМА. Кроме того, циркулирующие гетеротримерные комплексы В1у8 и АРКГЬ (группировки, состоящие из трех белков, содержащие одну или две копии каждого из В1у8 и АРКГЬ) были идентифицированы в образцах сыворотки, взятой от пациентов с системными иммунными ревматическими заболеваниями, и были продемонстрированы как такие, которые индуцируют пролиферацию В-клеток ίη уйго (Ко8сйке е! а1. 1. Гттипо1 2002; 169: 4314-4321). Среди Гд-слитых белков для всех трех рецепторов, только ТАСГ-Рс5, такой, как атацицепт, является способным блокировать биологическую активность гетеротримерных комплексов (Косйе е! а1. 1. Гттипо1 2002; 169:4314-4321).

В1у8 и АРКГЬ представляют собой мощные стимуляторы созревания, пролиферации и выживания В-клеток (Ого88 е! а1. №Циге 2000; 404: 995-999, Ого88 е! а1. Гттцпйу 2001; 15(2): 289-302, Огоот е! а1. 1. С1ш Гпуе8! 2002; 109(1): 59-68). В1у8 и АРКГЬ могут быть необходимыми для персистенции аутоиммунных заболеваний, в частности, тех, которые вовлекают в свое развитие В-клетки. Трансгенные мыши, созданные для экспрессии высоких уровней В1у8, демонстрируют расстройства клеток иммунной системы, а также симптомы, подобные тем, которые наблюдаются у пациентов с системной эритематозной волчанкой (8ЬЕ) (Сйе8оп е! а1. Кеу18ей дшйейпе8 !ог Й1адпо818 апй 1геа!теп!. В1оой 1996; 87: 4990-4997, Сйеета е! а1. ΛΠΐιπΙί8 Кйеит 2001; 44(6): 1313-1319). Подобно этому, повышенные уровни В1у8 и АРКГЬ были измерены в образцах сыворотки, взятой от 8ЬЕ пациентов и других пациентов с различными аутоиммунными заболеваниями, подобными ревматоидному артриту (Ко8сйке е! а1. 1. Гттипо1 2002; 169: 4314-4321; Мапе!!е X., Апп Кйеит Όΐ8 2003; 62(2): 168-171; Найпе е! а1. 1. Ехр Мей 1998; 188(6): 11851190), что расширило ассоциацию В1у8 и/или АРЫЬ с заболеваниями, которые опосредуются Вклетками, от животных моделей до человека.

Системная эритематозная волчанка (8ЬЕ) представляет собой аутоиммунное заболевание, которое клинически характеризуется возрастающим и угасающим течением и вовлечением многочисленных органов, включая кожу, почки и центральную нервную систему (Каттег О.М. и Т8око8 О.С. ред. (1999), Ьцрц8: Мо1еси1аг апй Се11и1аг Ра1йодепе818 1-е изд., Нитап Рге88, Ν.Ι; Ьаййа К.О. ред. (1999), 8у8!етю Ьцрц8 Егу!йгота!о8и8, 3-е изд., Асайетк Рге88, Ат8!егйат). Общее распространение 8ЬЕ составляет 1 из 2000, и приблизительно 1 из 700 белых женщин развивает 8ЬЕ в течение периода своей жизни (Ьаййа К.О. (1999), Сигг. Орт. Кйеита!о1. 8ер; 11(5): 352-6). Только в США более полумиллиона людей имеют 8ЬЕ, и большинство из них представляет собой женщин в репродуктивном возрасте (Нагйт ЬА. (2003), 1. Ехр. Мей. 185: 1101-1111).

Не существует единого критерия для диагностики 8ЬЕ. Американский ревматологический колледж разработал 11 критериев для диагностики 8ЬЕ, которые охватывают клинический спектр 8ЬЕ в отношении кожных, системных и лабораторных анализов. Такие критерии включают высыпания на щеках, дискоидные высыпания, чувствительность к солнечному свету, язвы в ротовой полости, артрит, воспаление серозных оболочек, воспаления почек и центральной нервной системы, изменения в составе крови, и присутствие антинуклеарных антител. Пациент должен соответствовать четырем из этих критериев для того, чтобы быть диагностированным в качестве 8ЬЕ пациента. (Тап е! а1. (1982), АййгЙ18 Кйеита!о1. 25: 1271-1277). 8ЬЕ обычно подтверждают анализами, которые включают, но без ограничения, анализы крови для определения антинуклеарных антител; анализы крови и мочи для оценки функции почек; анализы при использовании комплемента для определения присутствия низких уровней комплемента, что часто ассоциируется с 8ЬЕ; скорость седиментации (Е8К) или наличие С-реактивного белка для измерения уровней воспаления (СКР); рентгенографию для оценки повреждения легких и ЭКГ для оценки повреждения сердца.

Стандартная терапия для 8ЬЕ представляет собой введения стероидного глюкокортикоида, общего ингибитора иммунной системы. Она может использоваться для облегчения симптомов; однако в настоящее время не является доступным никакое лечение для 8ЬЕ. Обычно назначается низкая пероральная

- 1 022911 доза преднизона при уровнях ниже чем 0,5 мг/кг/сутки. К сожалению, эта терапия является недостаточной для того, чтобы удержать пациентов в состоянии ремиссии, и часто случаются заболевания. Обострения могут подвергаться контролю при использовании высоких доз глюкокортикоида посредством внутривенных введений при дозе 30 мг метилпреднизолона/кг/сутки в течение трех последовательных дней. Однако лечение с помощью стероидных средств при высоких дозах может давать тяжелые побочные эффекты для пациентов.

Такие стандартные лечения в общем случае являются неспецифическими, часто ассоциируются с тяжелыми побочными эффектами и существенно не влияют на развитие заболевания или вызывают переход к осложнениям функции почек, которые угрожают жизни (волчаночный нефрит или ЬЫ). Следовательно, существует давно ощущаемая потребность уровня техники в развитии новых способов для лечения 8ЬЕ.

Краткое изложение сущности изобретения

Данное изобретение относится к способу лечения пациента, страдающего I или II стадией системной красной волчанки, который включает еженедельное введение в дозе приблизительно от 1 до приблизительно 10 мг/кг в течение приблизительно от 2 до приблизительно 52 недель слитой молекулы, содержащей ТАС1 внеклеточный домен или его фрагмент, который связывается с В1у§ и константный домен иммуноглобулина человека.

Краткое описание фигур

Фиг. 1 графически представляет концентрацию свободного атацицепта, построенную против времени, выраженного в днях, для подкожного введения, основное фармакинетическое измерение. Каждая линия на графике представляет собой дозу, как представлено в пояснениях.

Фиг. 2 графически представляет концентрацию комплекса атацицепта и В1у§, построенную против времени, выраженного в днях, для подкожного введения, основное фармакинетическое измерение. Каждая линия на графике представляет собой дозу, как представлено в пояснениях фиг. 1.

Фиг. ЗА и 3В графически представляют биологические эффекты подкожного введения на уровни различных иммуноглобулинов и уровни В-клеток.

Фиг. 4 показывает различие в биодоступности, как показано с помощью измерений свободного атацицепта для подкожного и внутривенного введения атацицепта.

Фиг. 5 графически представляет относительную подобность биологической активности, которую наблюдали при использовании двух методов введения, как представлено с помощью концентрации 1дМ против времени. См. пояснения на фиг. 4.

Фиг. 6 графически показывает подобие способа подкожного и внутривенного введения, как представлено с помощью уровня свободного атацицепта против времени.

Фиг. 7 показывает относительно подобие кривых целевого связывания, которые наблюдали при использовании двух методов введения, как представлено с помощью уровня комплекса атацицепт-В1у§ против времени. См. пояснения на фиг. 4.

Фиг. 8 графически показывает, что множественные дозы обеспечивают получение более высокой биологической активности, как представлено с помощью концентрации 1дМ против времени.

Фиг. 9 графически показывает, что целевое связывание является более высоким при использовании множественных доз, как представлено с помощью уровня комплекса атацицепт-В1у§ против времени. См. пояснения на фиг. 8.

Фиг. 10 графически представляет концентрацию свободного атацицепта, построенную против времени, выраженного в днях, для внутривенного введения, основное фармакинетическое измерение. Каждая линия на графике представляет собой дозу, как представлено в пояснениях.

Фиг. 11 графически представляет концентрацию комплекса атацицепт-В1у§, построенную против времени, выраженного в днях, для внутривенного введения, основное фармакинетическое измерение. Каждая линия на графике представляет собой дозу, как представлено в пояснениях фиг. 10.

Фиг. 12 является графическим представлением биомаркерного измерения при использовании внутривенного введения, в частности, представлены уровни иммуноглобулинов и уровни В-клеток.

Фиг. 13А и 13В являются графическими представлениями концентрации смеси (композита) атацицепта (определяется как свободный атацицепт + атацицепт-В1у§ комплекс) против времени для подкожного введения (исследование 1). (А) группы введения однократной дозы; (В) группы введения множественных доз. Представлены средние значения ± значения стандартной ошибки. Множественные дозы вводили в дни 0, 7, 14 и 21. Точки времени введения дозы не являются связанными с указанными пиками концентрации, которые не регистрировались между дозами.

Фиг. 14А и 14В представляют собой графическое представление концентрации композита атацицепта (определяется как свободный атацицепт + атацицепт-В1у§ комплекс) против времени для внутривенного введения (исследование 2). (А) группы введения однократной дозы; (В) группы введения множественных доз. Представлены средние значения ± значения стандартной ошибки. Множественные дозы вводили в дни 0 и 21.

Фиг. 15А-15С представляют собой суммарные профили иммуноглобулинов в исследовании 1 (под- 2 022911 кожное введение), которые демонстрируются группой (% от базового значения, среднее значение ± стандартная ошибка). (А) Σ§Μ; (В) Σ^Α, (С) 1дО. Эти фигуры расширяют данные, представленные на фиг. ЗА и ЗВ.

Фиг. 16А-16С представляют собой профили суммарного иммуноглобулина в исследовании 2 (внутривенное введение), которые демонстрируются группой (% от базового уровня, среднее значение ± значение стандартной ошибки). (А) 1дМ; (В) 1дА, (С) Σ§0. Эти фигуры расширяют данные, представленные на фиг. 12.

Фиг. 17А-17С графически представляют взаимоотношение между подкожной дозой атацицепта (исследование 1) и наблюдаемым максимумом иммуноглобулинового ответа (в % снижения от базового уровня). Столбцы представляют среднее значение ± стандартная ошибка. (А) 1дМ; (В) 1дА, (С) 1дС.

Фиг. 18А-18С графически представляют взаимоотношение между внутривенной дозой атацицепта (исследование 2) и наблюдаемым максимумом иммуноглобулинового ответа (в % снижения от базового уровня). Столбцы представляют среднее значение ± стандартная ошибка. (А) 1дМ; (В) 1дА, (С) 1дС.

Фиг. 19А и 19В показывают профили Σ§Μ (среднее значение ± стандартная ошибка) в группах введения той же однократной дозы исследований при подкожном и внутривенном введении. (А) 3 мг/кг; (В) 9 мг/кг.

Фиг. 20А и 20В показывают профили комплекса атацицепт-В1у8 (среднее значение ± стандартная ошибка) в группах той же однократной дозы исследований при подкожном и внутривенном введении. (А) З мг/кг; (В) 9 мг/кг.

Подробное описание изобретения

Данное изобретение относится к способу лечения пациента, страдающего Σ или ΣΣ стадией системной красной волчанки, который включает еженедельное введение в дозе приблизительно от 1 до приблизительно 10 мг/кг в течение приблизительно от 2 до приблизительно 52 недель слитой молекулы, содержащей ΤΑСΣ внеклеточный домен или его фрагмент, который связывается с В1у8 и константный домен иммуноглобулина человека.

В предпочтительном варианте осуществления заявленного изобретения указанный ΤΑСΣ внеклеточный домен имеет последовательность, включающую 8ЕО ΣΌ N0: 1 или же указанный ΤΑСΣ внеклеточный домен является по крайней мере на 50% идентичным 8Е0 ΣΌ N0: 1.

Он может также иметь последовательность, включающую только аминокислоты 30-110 8Е0 ΣΌ N0:

1.

Указанный константный домен иммуноглобулина человека в предпочтительном варианте осуществления имеет последовательность, включающую 8Е0 ΣΌ N0: 2.

В наиболее предпочтительном варианте осуществления способа указанная слитая молекула представляет собой атацицепт.

Слитая молекула может вводиться пациенту в количестве приблизительно от 1 до приблизительно 9 мг/кг.

Способ в соответствии с изобретением предусматривает дополнительное введение пациенту второго лекарственного средства, которое выбрано из группы, состоящей из К8АЮ, противомалярийных средств, кортикостероидов, иммуносупрессивных агентов, ΣνΣ§, ΌΗΕ и талидомида.

Предпочтительные варианты осуществления изобретения предполагают любой приемлемый способ введения, включая подкожный, пероральный или внутривенный. В предпочтительном варианте осуществления изобретения пациент представляет собой человека.

В-клетки, как считается в настоящее время, играют важную роль в патогенезе 8ЬЕ с помощью зависимых от антитела и независимых от антитела механизмов. В дополнение к выработке антител, В-клетки секретируют множество цитокинов, действуют в качестве антигенпрезентирующих клеток и выполняют разнообразные эффекторные функции. Таким образом, В-клетки выступают в качестве рациональных мишеней для разработки лекарственных средств для 8ЬЕ (Вто^шпд 1.Б., №1 Ксу Эгид Όίδοον 2006; 5: 564-76).

Были предложены некоторые направленные на В-клетки стратегии в качестве возможных терапий для 8ЬЕ. Некоторые из этих стратегий предназначены для устранения В-клеток посредством использования моноклональных антител (тАЬ) (Ьеапбго Μ.Σ., Еб\уагЙ8 1.С., СатЬпбде Ο.Σ. ЕЬгегМет Μ.Κ., ПепЬетд Э.А. АйЬпйк КЬеит 2002; 46: 2673-3; Ьоопсу КП., АпоЬк Σ.Η., СатрЬс11 Ό.Σ., Ре1даг К.Е., Уоипд Р., Атепб ЬЭ., е! а1., Ат1ЬтЬ18 КЬеит 2004; 50: 2580-9; Ьеапбго Μ.Σ., СатЬпбде О., Ефуагбз 1.С., ЕЬгеп8!е1п М.К., ΣδепЬегд Э.А., КЬеита!о1оду 2005; 44: 1542-5; Эотпег Т., КаиГтап 1., Уедепег У.А., Теой Ν, ОоИепЬетд Ό.Μ., Вигшс81сг О.К., Аг1ЬпО8 Ке8 ТЬет 2006, 8: К74). В это же время другие препятствуют стимуляции В-клеток (Вакег К.Р., Еб\уагЙ8 Β.Μ., Μа^η 8.Η., СЬо1 О.Н., Уадег К.Е., На1регп У.О., е! а1. Ат1ЬтЬ18 КЬеит 2003; 48: 3253-65; \Уа11асс Ό.Σ., Н88е Σ., 8!оЬ1 У., ΜсКау Σ., ВоЬпд Е1 Μе^^^11 1.Т., е! а1., Атепсап Со11еде оГ КЬеита!о1оду Аппиа1 8с1епППс Μееί^ηд, 2006; Ого88 1.А., ЭШоп 8.К., Μπάτί 8., 1оЬп8!оп Σ., Ыйаи А., Косще К., е! а1., ЬптипПу 2001; 15: 289-302) или стремятся к селективному нацеливанию В-клеток, продуцирующих аутоантитела (Α1а^сοη-8едον^а Ό., ТитЪп 1.А., Риге К.А., ΜсКау Σ.Ό., СатФе1, Μ.Η., 8ΐππιά V., е! а1., Ат1ЬтЙ18 КЬеит 2003; 48: 442-54; Ьидет Ό., Эауап Μ., 21пдет Η., Ни Σ.Ρ., Μοζе8 Е. 1. СЬп Σттипο1

- 3 022911

2004; 24: 579-90; Маиегтапп Ν., §1Ьоедег Ζ., Ζίη§βΓ Η., Μοζβδ Ε., С1т Εχρ 1ттипо1 2004; 137: 513-20).

Попытки ингибировать стимуляцию В-клеток были сфокусированы, в первую очередь, на взаимодействиях рецептор-лиганд, которые вовлекают молекулы, которые называются стимулятором Влимфоцитов (В1у§) и лигандом, стимулирующим пролиферацию (АРМЕ). В1у§ и АРР1Ь представляют собой членов семейства цитокинов фактора некроза опухоли (ΤΝΡ), которые являются важными для выживания В-клеток и их развития после выхода из костного мозга. В1у§ и АРМЕ связываются с одинаковыми и различными рецепторами. Обе молекулы связываются с трансмембранным активатором и партнёром (ТАС1) кальциевого модулятора и лиганда циклофилина (САМЬ) и антигеном созревания Вклеток (ВСМА), в то время как В1у§ также связывается с фактором, активирующим В-клетки, который относится к рецептору семейства ΤΝΡ (ВАРР-М), а АРМЕ взаимодействует с протеогликанами.

Полученные подтверждения на животных моделях и на людях поддерживают важную роль В1у§ и АРМЕ в развитие аутоиммунных заболеваний. Трансгенные мыши, которые сверхэкспрессируют В1у§, демонстрируют размножение В-клеток и поликлональную гиперглобулинемию (Ого88 ТА., 1оНп81оп 1., Мибб δ., Еп§е1тап К., Όί11οη δ., Маббеп К., е! а1., ШОие 2000: 404: 995-9; Маскау Р., ХУообсоск 8.А., Ьате!оп Р., АтЬтозе С., Вае18сйет М., 8сЬпе1бет Р., е! а1., 1. Εχρ Меб 1999; 190: 1697-710; Кйате δ.Ό., 8ато51 I., Х1а Χ.Ζ., МсСаЬе δ., Мшет К., 8о1оууеу I., е! а1., Ргос Νηΐ1 Асаб 8ш 2000; 97: 3370-5). Некоторые из этих мышей развивают фенотип, подобный волчанке, состоящий из антител, направленных против двухцепочечной ДНК (дцДНК), депонирование иммуноглобулина в почках и ускоренное развитие гломерулярного заболевания, уровни В1у8 также являются повышенными у предрасположенных к волчанке ΝΖΕΙΝΖΧν Р1 (ΈΙ\ν) и МКЕ-1рт/1рт мышей (δ!ο11 V., Хи Ό., К1ш К.8., Ко88 М.К, 1отдеп8еп Τ.Ν., Иеосйагап В., е! а1., Ат1йтЙ18 Кйеит 2005; 52: 2080-91). Исследования, проведенные на людях, также предполагают роль В1у8 и АРМЕ в системных аутоиммунных заболеваниях. Пациенты с 8ЬЕ имели повышенные уровни В1у8 в сыворотке крови, что позитивно коррелирует с уровнями анти-дцДНК антител (ЕНапд 1., Р.о8сйке V., Вакег К., νηπβ Ζ., А1агсоп Ο.δ., Ре881ег В.1., е! а1., 1. 1ттипо1 2001, 166: 6-10; Сйеета Ο.δ., Р.о8сйке V., НбЬей И.М., δ!ο11 V., Ат1ЬтЙ18 Ийеит 2001; 44: 1313-19; δ!ο11 V., Ме1уа8 δ., Тап 8.М., Сйеета Ο.δ., Оатаг В., Хи И., е! а1., Ат1ЬтЙ18 Вкеит 2003; 48: 3475-86). Сывороточные уровни АРМЬ являются повышенными у пациентов с δΕΕ по сравнению со здоровыми индивидуумами и у пациентов с ревматоидным артритом (Коуата Т., Т8икато!о Н., М1уад1 Υ., Итер И., О!8ика 1., Муадата Н., е! а1. Апп Ийеит Όί8 2005; 64: 1065-7). Сывороточные уровни В1у8 и АРМЬ были определены в синовиальной жидкости пациентов с воспалительным артритом (Тап 8.М., Хи И., Во8скке V., Репу IV., АгкГе1б Ό.Ο., ΕЬ^е8таηη Ο.Κ. е! а1., АпЬтЙ18 Вкеит 2003; 48: 982-92). Такие убедительные наблюдения у мышей и у людей привели в разработке нескольких В1у8 антагонистов. Один из таких агентов является рекомбинантным слитым белком, включающим внеклеточный домен ТАС1 рецептора, связанный с человеческим 1дО1 Рс доменом (атацицепт, ранее обозначался как ТАС1-1д). Атацицепт блокирует стимуляцию Вклеток с помощью как В1у8, так и АРМЕ. Несколько линий исследований обеспечивают поддержку предположения о том, что атацицепт будет обладать мощными эффектами ш νίνο. В первую очередь, трансгенные мыши, которые экспрессируют атацицепт, имеют незначительное количество В-клеток и сниженные концентрации иммуноглобулина, а лечение их с помощью атацицепта замедляет начало и снижает тяжесть артрита в мышиной модели индуцированного коллагеном артрита. Выработка антител против коллагена также является супрессированной (Ого88 ТА., ИШоп δ.Ρ.., Мибб δ., 1оНп81оп 1., ЫНаи А., Восще М., е! а1., выше). В третьих, обработка предрасположенных к волчанке самок ΡΙ\ν мышей с помощью атацицепта замедляет развитие протеиноурии и повышает выживание (Ого88 ТА., 1оЬп8!оп 1., Мибб δ., Εη5е1таη М., ИШоп δ., Маббеп К., е! а1., выше). В заключение, при прямом сравнении эффективности мышиного атацицепта и ВАРР-РПд (ингибитор только В1у8) у предрасположенных к волчанке самок ΕΙ\ν мышей, только атацицепт снижает сывороточные уровни 1дМ, снижает частоту встречаемости антителообразующих клеток в селезенке, и ингибирует 1дМ ответ на антиген, зависимый от Т-клеток, что дает возможность предположить роль АРМЬ в этих процессах (Ватапи)ат М., \ν3ΐ^ X., Ниапд V., Ьш Ζ., 8с1иГГсг Ь., Тао Н., е! а1., 1. С’Пп 1п\'С81. 2006; 116: 724-34). В свете этих обнадеживающих предклинических данных изобретатели в соответствии с данной заявкой проверили биологические эффекты, фармакокинетики, фармакодинамики и безопасность атацицепта в клинических опытах у пациентов с δ6Ε.

В обоих фаза Ι исследованиях, описанных в примерах 1 и 2, представленных ниже, атацицепт был хорошо переносимым местно и системно у пациентов с δΕΕ. Наблюдали явные признаки биологической активности атацицепта при этих перспективных показаниях, в значительной степени в соответствии с его механизмом действия (МоА).

В соответствии с современными концепциями в отношении механизмов действия (МоА) для атацицепта и не связывая это с теорией, можно сказать, что ингибирование В1у8 и АРМЕ приводит к воздействию на В-клетки, включая секрецию неспецифических и специфических антител, что главным образом влияет на связанные с δΕΕ биомаркеры и маркеры клинической эффективности. Как это является типичным для исследований фазы I, внимание в настоящем анализе фокусировалось на ранних этапах МоА каскада и, в частности, на ответах, начиная с ранних биомаркеров В1у8 и АРМЕ ингибирования (таких, как комплекс атацицепт-В1уδ) и биологических эффектах (таких, как уровни 1д).

- 4 022911

Атацицепт демонстрирует мультифазную нелинейную РК, характеризующуюся более чем пропорциональным дозе увеличением воздействия свободного лекарственного средства, и сверхпологим повышением воздействия комплекса атацицепт-В1у§. Такое поведение не было неожиданным и было показано у КА пациентов. Это поддерживает гипотезу о том, что РК атацицепта опосредуется его лигандами. Общее значение РК атацицепта, хотя и есть линейным, является предсказуемым для совокупности доз, между однократной и множественными дозами. Три РК маркера атацицепта имели сходное поведение у КА и 8ЬЕ пациентов, что свидетельствует о том, что тип аутоиммунного заболевания не является основной детерминантой РК атацицепта.

Длительная аккумуляция комплекса атацицепт-В1у§ при множественном введении доз (вплоть до четырех еженедельных доз групп 5 и 6, исследование 1), совместно с минимальной аккумуляцией свободного атацицепта, обеспечивает подтверждение присутствия значительной начальной загрузки свободных В1у§ и АРК1Ь, как системной, так и периферической. Повышенные базовые уровни В1у§, измеренные в трех исследованиях (по сравнению с нормальными субъектами, данные для которых были взяты из литературы), говорят в пользу этой гипотезы.

Также является вероятным, что если существующее перед введением дозы равновесие между растворимыми лигандами и их рецепторами нарушается путем введения атацицепта, то инициируются сложные кинетические процессы перераспределения системой циркуляции крови, лимфатической системой и периферическими компартментами. Такое перераспределение вовлекает как лекарственное средство, так и его лиганды, и с учетом размера вовлеченной молекулы занимает, по крайней мере, несколько недель до установления нового равновесия.

С другой стороны, длительная аккумуляция комплекса может предполагать эндогенную генерацию свободных лигандов (опять-таки, как в системе циркуляции крови, так и в периферических тканях). Опубликованные данные в отношении скорости повышения уровня сывороточного В1у§ после введения ретуксимаба (СатЬпбде с1 а1., АгОлПН Кйеит 2006; 54: 723-732) обеспечивают дополнительное подтверждение того факта, что эндогенное образование В1у§ играет важную роль в В1у§ ингибировании и должно учитываться. Длительный период достижения стабильного состояния (в течение одного месяца еженедельного введения дозы) поддерживает эти гипотезы.

Насыщаемые кинетики атацицепта впервые наблюдали, и о них было сообщено при использовании однократных доз атацицепта, применяемых к здоровым волонтерам и КА пациентам в предыдущих фаза I исследованиях, они показали, что В1у§ (и АРК1Ь) ингибирование является насыщаемым, то есть повышение воздействия атацицепта в пределах точки насыщения будет приводить к снижающемуся эффекту в отношении связывания В1у§ (и в конечном итоге, АРК1Ь). Это явление должно учитываться и использоваться при выборе терапевтических режимов введения доз.

Следует подчеркнуть, что приемлемое насыщение ингибирования В1у§ (и АРК1Ь) требует поддержания в течение определенного времени и будет достигаться с помощью приемлемой модели воздействия атацицепта во времени. Последнее будет необходимым для динамического баланса между сложными и, главным образом, не охарактеризованными процессами образования и перераспределения эндогенных В1у§ и АРК1Ь, и образовавшимся кинетическим профилем атацицепта. Такой баланс может быть достигнут только с помощью приемлемой модели дозирующего режима в отношении не только уровня дозы, а также и частоты введения доз.

Хорошо определенные взаимоотношения между кумулятивной дозой атацицепта и ответом 1д антитела были установлены с помощью способов неизолированного размещения; такое взаимоотношение сначала определяли с помощью однократных доз атацицепта у здоровых волонтеров и с помощью однократных и множественных доз атацицепта у пациентов с КА. В настоящих исследованиях все три 1д маркера, используемые для мониторинга, показали быстрое снижение после введения первой дозы атацицепта. После четырех недель введения дозы все три биомаркера антителогенеза постепенно, последовательно и систематически снижались по направлению к стабильному состоянию, по-видимому, при отсутствии достижения его во время периода введения доз.

Обнаружение того факта, что частота введения дозы оказывается такой, которая играет, по крайней мере, важную роль в качестве уровня дозы в ответе всех трех биомаркеров, сначала сделанное при исследовании КА, подтверждается с помощью 8ЬЕ данных, полученных после подкожного введения (исследование 1). В общем случае, биомаркеры имеют весьма подобное поведение при подобных уровнях дозы как в популяции 8ЬЕ, так и КА, что подчеркивает наличие общих корней в МоА при обоих показаниях, основываясь на ингибировании В1уА (и АРК1Ь).

Другие интересные факты были выявлены из сравнения РК и результатов биологической активности между двумя исследованиями. Несмотря на то что ни один из них не был предназначен для обращения к вопросу пригодности подкожного способа введения, сравнения частичных и общих площадей под кривыми концентрация - время (АИС) свободного атацицепта и композита атацицепта после введения подобных подкожных и внутривенных доз (группа 3, исследование 1 против группы 1 исследования 2, и группа 4, исследование 1 протип группы 2, исследование 2) позволяет дифференцировать грубую оценку среднего значения биодоступности. Из табл. 2аЬ и 3аЬ эти оценки составляют приблизительно 35-40% как для свободного, так и для композитного лекарственного средства - число, которое не выходит за пре- 5 022911 делы диапазона фигур для молекул с высокими молекулярными весами (Ройет и Сйаттаи, 1. Рйатт δοί 2000; 89: 297-310).

Однако наблюдение за маркерами биологической активности выявило, что подобные дозы обеспечивают подобную биологическую активность вне зависимости от способа введения, как проиллюстрировано для 1дМ на фиг. 19. На первый взгляд, наблюдение, что 2,5-3-кратная разница в системном воздействии лекарственного средства может приводить к подобным биологическим эффектам противоречит установленной системе понятий; однако в случае же атацицепта это явление может быть хорошо обосновано.

Современное понимание абсорбции больших белковых молекул после подкожного введения констатирует, что происходит отток белков из сайта инъекции, как в периферическую лимфатическую систему, так и в капилляры крови, и поглощение лимфатической системой повышается с повышением молекулярного размера. Для лекарственных средств с молекулярным весом, сопоставимым с таковым атацицепта, можно ожидать, что вплоть до 70-80% подкожной дозы может предполагаемо сначала поступить в периферическую лимфатическую систему. Однако система циркуляции крови и лимфатическая система являются тесно сплетенными и связанными так, что массовый обмен между компартментами крови и лимфы будет весьма оперативным и беспрепятственным даже для больших молекул. Последнее было подтверждено в случае атацицепта с помощью относительно (для молекулярного веса 73,4 кДа) быстрого уравновешивания РК профилей для внутривенного и подкожного введений.

Эти рассуждения приводят по крайней мере к двум возможным, взаимосвязанным и, следовательно, никоим образом не взаимоисключающим объяснениям наблюдаемого явления. Кинетическое объяснение предполагает, что даже при подкожном введении достаточное количество лекарственного средства переносится в систему циркуляции крови для обеспечения адекватного ингибирования В1у§ и, таким образом, для начала МоА каскада в центральном компартменте. Является хорошо известным, что многие биологические эффекты замедляются в отношении лежащих в их основе кинетики лекарственного средства. Несмотря на то что в случае атацицепта РЭ 1ад не является избыточной (о чем свидетельствует быстрое снижение уровня 1д маркеров после введения первой дозы), это оказывается достаточным для обеспечения РК 1ад, вызванной почти несоответствующей абсорбцией. Эта гипотеза поддерживается почти идентичными профилями комплекса атацицепт-В1у§ в группах одинаковой однократной дозы при подкожном и внутривенном введении (фиг. 20), где подобие, в частности, отмечается в первые 7 дней после введения.

Фармакодинамическое объяснение заключается в том, что как система циркуляции крови, так и лимфатическая система представляют собой сайты воздействия для ингибирования В1у§ (и АРК1Ь) и как таковые представляют собой мишени для атацицепта. При внутривенном способе введения лекарственное средство сначала инъецируется в кровяное русло и оттуда оно распределяется к лимфе и другим (целевым и нецелевым) периферическим тканям. При подкожном пути введения лекарственное средство сначала подвергается оттоку в лимфатический компартмент и в русло крови параллельно и из последнего распределяется к другим (целевым и нецелевым) периферическим тканям. В обоих случаях проникновение лекарственного средства в оба сайта действия является незамедлительным и быстрым и приводит к подобным профилям биологической активности в каждом из них.

Этот интересный факт подтверждает гипотезу о том, что механистическое применение системы знаний, которая предписывает, что оценка воздействия введенных подкожным путем белковых лекарственных средств, которая должна быть осуществлена при использовании параметра системной или сывороточной биодоступности, может быть неприемлемой или, в лучшем случае, неполной.

Правило чем выше системная доступность, тем больше эффект может иметь важные исключения в этом классе лекарственных средств.

Последнее имеет важное практическое применение, связанное с разработкой терапевтического режима при использовании атацицепта. Становится понятным, что внутривенный путь может представлять собой только средство для доставки более высоких доз лекарственного средства пациенту, если это является необходимым, при условии, что величина подкожной дозы может быть ограничена объемом инъекции и концентрацией раствора, содержащего дозу лекарственного средства.

Хорошая переносимость, выраженная биологическая активность лечения с помощью атацицепта на ряду с его МоА и другие позитивные закономерности, наблюдаемые в двух фаза I исследованиях 8ЬЕ, обеспечивают разумное объяснение для дальнейших исследовательских работ в отношении лекарственного средства для лечения пациентов с 8ЬЕ. В соответствии с современной системой воззрений на разработку лекарственного средства на каждом этапе вновь полученная информация должна прилагаться к уже существующим сведениям, в то время как банк знаний в отношении лекарственного средства обновляется, расширяется и совершенствуется для последующего применения с целью создания основанной на имеющейся информации модели следующего этапа в типичном цикле изучать и подтверждать. В соответствии с такой системой понятий авторы изобретения предпочли наблюдать и анализировать множество воздействий (свободный и композитный атацицепт), специфическое связывание (комплекс атацицептВ1у§), биологическую активность (1д и количество клеток иммунной системы) и определенные маркеры, связанные с заболеванием (анти-дцДНК антитела) в двух ранних исследованиях при использовании

- 6 022911 очень сложной модели (последовательной, с увеличением дозы). Анализируя ценность данных, полученных научным путем, и извлекая информацию, которую они содержат, для авторов представилась возможность определить интервалы доз и режимы для проведения дальнейших исследований, которые понадобятся для того, чтобы охарактеризовать профиль безопасности атацицепта, и для того, чтобы улучшить понимание его МоА, подтвердить изначальные данные клинической эффективности и определить оптимальное клиническое применение.

Пример 1. Подкожное введение атацицепта.

Это фаза 1Ь, двойное слепое, плацебо-контролируемое исследование с увеличением дозы включало шесть групп (п=8 каждая, за исключением для группы 5, в которой п=7) пациентов, которых подвергали лечению с помощью атацицепта или плацебо в соотношении 3:1. Группы 1-4 получали однократную подкожную дозу плацебо, или 0,3, 1, 3, или 9 мг/кг атацицепта. Группы 5 и 6 получали четыре еженедельные дозы плацебо или 1 или 3 мг/кг атацицепта (см. табл. 1). Пациентов подвергали наблюдению в течение 6 (группы 1-4) или 9 (группы 5 и 6) недель. Результаты измерений включали: (ί) системную и местную переносимость атацицепта; (и) частоту возникновения побочных эффектов (АЕ); (ίίί) фармакокинетику и фармакодинамику атацицепта, включая влияния на субпопуляции лимфоцитов и уровни 1§; и (ίν) измерения активности 8ЬЕ заболевания.

Пациентов с 8ЬЕ от слабой до умеренной степени вносили в список. Биологическая активность атацицепта была продемонстрирована с помощью зависимых от дозы снижений уровней иммуноглобулина и количества зрелых В-клеток и общего количества В-клеток. Этот эффект был наиболее сильным в группах повторной дозы и не затухал в течение всего последующего периода. Не наблюдали никаких изменений в количестве Т-клеток, клеток естественных киллеров или моноцитов. Умеренные реакции в сайте инъекции возникали более часто в группе атацицепта, чем в группе плацебо. Не наблюдали никаких различий в частоте или типе побочных эффектов, а также не было никаких тяжелых или серьезных побочных эффектов у пациентов, которых подвергали лечению при использовании атацицепта.

Фармакокинетики оценивали путем измерения сывороточных уровней свободного атацицепта (табл. 2а), атацицепт/В1у8 комплекса (табл. 3а) и композитного атацицепта (определяется как свободный атацицепт + атацицепт-В1у8 комплекс, табл. 4а). Сывороточные уровни каждого из перечисленных выше количественно оценивали при использовании твердофазного иммуноферментного анализа. Сыворотку инкубировали с мышиными тАЬ, конъюгированными с биотином и специфическими для атацицепта (определение свободного или общего атацицепта) (2утоСепейс8, 1пс., 8саО1с. \УА). или с козьими поликлональными антителами, конъюгированными с биотином и специфическими либо для В1у8, либо для атацицепта (определение атацицепт/В1у8 комплекса) (К & Ό 8у81ет8, М1ппеаро118, ΜΝ), иммобилизованными на покрытых стрептавидином микропланшетах (АбаШк, Моп1геа1, ЦиеЬес). Антитела инкубировали вместе с образцами, взятыми от пациентов, стандартными и контрольными образцами, разведенными 1:10, в течение 1 ч. После промывания специфическое для атацицепта мышиное тАЬ конъюгировали с пероксидазой хрена (НКР) (для измерения свободного атацицепта или атацицепт-В1у8 комплека), или в случае композита ЕБ18А тАЬ, направленные против атацицепта и В1у8 (2утоСепейс8, 1пс.), прибавляли и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч. Во всех трех анализах сывороточные уровни атацицепта определяли и количественно оценивали при использовании стандартных хемилюминесцентных способов, т.е. после промывания прибавляли тетраметилбензидин (ТМВ) в качестве НКР субстрата (81дта-А1Фтсй, 81. Ьошк, МО). Реакцию останавливали через 20 мин при использовании 0,5 М серной кислоты и регистрировали поглощение при 450 нм.

Концентрацию аналита в образце пациента пересчитывали при использовании стандартной кривой, с применением алгоритма выравнивания второго порядка для многочлена. Все образцы подвергали измерению в трехкратной повторности.

Аналитические критерии эффективности с точностью до <15% коэффициента вариации (СУ) для стандартных образцов и <20% для образцов пациента были приемлемыми.

Нижние границы количественной оценки (ББОО) анализов составляли 15,6 нг/мл для свободного атацицепта, 5 ед./мл для комплекса атацицепт-В1у8 (1 ед./мл соответствует 1,82 нг/мл атацицепта - 0,44 нг/мл В1у8 в молярном соотношении 3:1) и 25 нг/мл для композитных аналитов. Среднее значение восстановления добавленного аналита, определенное для анализа точности для низких, средних и высоких концентрациях аналита в образцах КА пациентов, соответствовало величинам восстановления 82,5-97,0, 93,9 и 102,0-125,8% в трех анализах, соответственно. Сывороточные РК маркеры испытывали так, как описано ниже (ί) для однократной дозы группы 1-4 - при базовом уровне и через 4, 8, 12 ч в день введения и после этого в дни исследования 2, 3, 4, 8, 15, 22, 29 и 43; (ίί) для многократной дозы группы 5 и 6 при базовом уровне и после этого в дни исследования 8, 15, 22, 29, 36, 43, 64. Во всех группах РК образцы в день введения дозы указаны как минимум на графике.

Концентрации несвязанного В1у8 измеряли в сыворотке при базовом уровне. В1у8 подвергали измерению с помощью ЕЬ18А. Биотинилированные тАЬ, специфические для В1у8, инкубировали вместе с образцами пациента, стандартными или контрольными образцами (разведенными 1:10) в течение 1 ч в микропланшетах, предварительно покрытых стрептавидином. После промывания анти-В1у8 НКРконъюгированные мышиные тАЬ инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч. После про- 7 022911 мывания прибавляли ТМВ в качестве НКР субстрата. Останавливали реакцию через 20 мин при использовании 0,5 М серной кислоты и регистрировали поглощение при 450 нм. Концентрацию аналита в образце пациента пересчитывали при использовании стандартной кривой, с применением алгоритма выравнивания второго порядка для многочлена. Все образцы подвергали измерению в трехкратной повторности. Аналитические критерии эффективности с точностью до <15% коэффициента вариации (СУ) для стандартных образцов и <20% для образцов пациента были приемлемыми. Нижняя граница количественной оценки (ЬЬОР) составляла 15,6 нг/мл В1у3 в сыворотке. Среднее значение восстановления добавленного аналита для низких, средних и высоких концентраций аналита в образцах КА пациентов соответствовало величинам восстановления 101-113%.

Фармакодинамики оценивали путем измерения сывороточных уровней иммуноглобулинов (1дО, 1дМ, 1дА), комплемента-3 (С3) и антиядерных антител (ΑΝΑ), и путем осуществления проточного цитометрического анализа поднаборов лимфоцитов. Иммуноглобулины и С3 измеряли при использовании стандартных способов. ΑΝΑ измеряли при использовании А1йеиа МиШаиа1у1е ΑΝΑ аналитической системы (Ζοιΐ5 8с1еиййс 1пс, Катйаи, N1, иЗЛ). 1дО, 1дМ, и Ι§Α оценивали в крови как маркеры биологической активности. Биомаркеры измеряли при базовом уровне и через 8 ч в день введения (только группы 1-4) и после это в дни исследования 8, 15, 22, 29, 36, 43 и 64.

Панель типов мононуклеарных клеток периферической крови (поднаборы В- и Т-клеток, клетки естественных киллеров [ΝΚ] и моноциты) оценивали в образцах периферической крови, окрашенных антителами, при использовании четырехцветной проточной цитометрии. Анализ включал: суммированные Тклетки (СИ45+, СИ3+), клетки Т-хелперов (СИ45+, СИ3+, СВ4+, СИ8-), Тцитотоксические/супрессорные клетки (СИ45+, СО3+.СЭ4-. СЭ8+). суммированные В-клетки (СИ1 9+), зрелые В-клетки (СИ1 9+, 1дИ+, СИ27-), моноциты (СИ45+, СИ3-, СИ14+, СИ56-) и ΝΚ клетки (СИ45+, СИ3-, СИ14-, СЭ56+). Организация, с которой был заключен договор (ЕюЮпх, Отошидеи, Тйе №1йет1аиб§), осуществляла обработку образцов, окрашивание антителами и комплектование, анализ и качественный контроль данных. Авторы осуществляли дальнейший анализ и качественный контроль на поднаборах В-клеток. Для поднаборов В-клеток аналитический фильтр был увеличен для включения малых и больших лимфоцитов, с последними, которые были подобны по своим размерам моноцитам.

Медицинские истории собирали при включении в исследование и исследование состояния здоровья осуществляли на еженедельной основе. Гематологические профили и профили химии крови проводили еженедельно и подвергали оценке при использовании общих критериев токсичности Национального института рака. Образцы крови для фармакокинетических оценок собирали еженедельно для групп повторяемой дозы и в день 1 через 4 и 8 ч, а также в дни 2, 3, 4 и 8 и после этого еженедельно для групп однократной дозы. Образцы крови для фармакодинамических оценок собирали еженедельно для групп повторяемой дозы и в дни 2, 3, 8 и после этого еженедельно для групп однократной дозы.

Электрокардиограмму после дня Ό4 проводили один раз в две недели в группах однократной дозы и еженедельно у пациентов, которые получали повторяемые дозы исследуемого лекарственного средства.

Несмотря на то что исследование не было направлено на определение воздействия лечения на активность заболевания, приведенные ниже измерения получали для обеспечения предварительных данных относительно эффективности. 3ΕΕΕΝΑ 3ΕΕΌΑΙ оценки определяли при базовом уровне и в дни 29 и 43 (группы 1-4), а также в дни 22 и 64 (группы 5 и 6). Уровни анти-дцДНК антитела и С3 измеряли при базовом уровне, в дни 15, 29 и 43 (группы 1-4), а также в дни 15, 22, 29, 43 и 64 (группы 5 и 6).

Способы анализа данных, которые включали профили концентрация-время, подвергали некомпартментному анализу (NСΑ; ^ίηΝοηΣίη программное обеспечение, версия 5.0.1). Игнорировали все измерения, ниже ЕСОО для NСΑ. Данные на основе использования биомаркеров (1дМ, 1дО или ΙβΑ) превращали в формат отличие от базового уровня и потом индивидуальные профили биомаркер-время также подвергали NСΑ. Полученные NСΑ-выведенные измерения для воздействия (РК) и ответа последовательно подвергали анализу вместе для исследования существующих взаимоотношений воздействиеответ.

Было получено подтверждение нелинейной фармакокинетики, последовательное с фармакокинетиками насыщаемого связывания взаимодействий лиганд-рецептор (фиг. 1 и 2). Профили концентрациявремя для свободного и композитного атацицепта продемонстрировали мультифазные фармакокинетики с четкой быстрой абсорбцией, Т_тах составляло приблизительно 24 ч после введения первой дозы, и начальная фаза распределения длилась 7-14 дней. Наблюдали низкую аккумуляцию свободного атацицепта в группах повторяемой дозы; аккумуляция композитного атацицепта была незначительно выше, а комплекс атацицепт-В1у3, как было обнаружено, подвергался аккумуляции в течение периода введения дозы.

Лечение с помощью атацицепта начальным, временным повышением уровня зрелых и суммарных В-клеток, после чего следовало замедленное зависимое от дозы снижение (фиг. 3В). В группах однократной дозы 3 мг/кг и 9 мг/кг и в группах повторяемой дозы снижение на 35% по сравнению с базовым уровнем в случае зрелых В-клеток наблюдали в день 29. В группах однократной дозы это снижение длилось вплоть до дня 43; в группах повторяемой дозы снижение приблизительно на 60% наблюдали в день

- 8 022911

43, и оно стабилизировалось на 45-60% до последней оценки в день 64. Модели, наблюдаемые для суммарных В-клеток, были подобными таковым для зрелых В-клеток. В группе однократной дозы 3 мг/кг снижение по сравнению с базовым уровнем приблизительно на 30% для суммарных В-клеток наблюдали в день 29, и оно оставалось стабильным до дня 43. В группах повторяемой дозы снижение приблизительно на 40-50% наблюдали в день 43, и оно стабилизировалось на 35-60% до последней оценки в день 64 (фиг. 3В). Не существовало значимых изменений в количестве суммарных, хелперных или цитотоксических Т-клеток, ΝΚ клеток или моноцитов.

Зависимое от дозы снижение уровней иммуноглобулинов наблюдали у пациентов, которых подвергали лечению с помощью атацицепта (фиг. 3А и 3В, см. также табл. 5а). Этот эффект был наиболее значительным в группах повторяемой дозы. Уровни 1дМ продемонстрировали наибольшее снижение при лечении, достигая приблизительно 50% в день 43 в группе повторяемой дозы 3 мг/кг. Уровни 1дА снижались приблизительно на 33% в группе повторяемой дозы 3 мг/кг в день 29, а уровни 1§С снижались приблизительно на 16% в группе повторяемой дозы 3 мг/кг в день 36. Самые низкие уровни возникали между днями 15 и 29 в группах однократной дозы между днями 29 и 43 в группах повторяемой дозы.

После этого значения начинали возвращаться к базовому уровню. Последние наблюдаемые значения были на 5-30% ниже базового уровня в группах однократной дозы (за исключением группы 0,3 мг/кг, в которой значения 1дМ были выше базового уровня) и на 8-65% ниже базового уровня в группах повторяемой дозы.

Эти результаты показывают, что более частое введение меньших доз атацицепта обеспечивает лучшую биологическую активность, чем более частое введение доз при более высоких дозах (фиг. 7 и 8).

Пример 2. Внутривенное введение атацицепта.

Это фаза 1Ь, двойное слепое, плацебо-контролируемое исследование с увеличением дозы включало четыре группы (п=6 каждая) пациентов, которых подвергали лечению при использовании внутривенного введения атацицепта или плацебо в соотношении 3:1. Группы 1-3 получали однократную дозу плацебо,

3, 9 или 18 мг/кг атацицепта, вторая доза вводилась через три недели после начальной дозы. Результаты измерений включали: (ί) системную и местную переносимость внутривенного атацицепта; (и) частоту возникновения побочных эффектов (АЕ); (ίίί) фармакокинетику и фармакодинамику внутривенного атацицепта, включая влияния на субпопуляции лимфоцитов и уровни 1д; и (ίν) измерения активности §ЬЕ заболевания. Субъектов подвергали оценки в течение периода 6 недель (группы 1-3) или периода 9недель (группа 4); субъекты из групп 3 и 4 возвращались в дни исследования 84 и 120 для взятия образцов на РК и биомаркеры. Сывороточные РК маркеры испытывали так, как описано ниже (ί) для групп однократной дозы 1 - при базовом уровне и через 0,25, 0,5 и 4 ч в день введения и после этого в дни 2, 3,

4, 8, 15, 22, 29 и 43; (ίί) для группы многократной дозы 4 - при базовом уровне и через 0,25, 0,5 и 4 ч в день первого введения и после этого в дни 8, 22, 22 (перед второй дозой и через 0,25 и 0,5 ч после введения второй дозы), 29, 36, 43, 64. Для групп 3 и 4 осуществляли измерение РК в дни 85 и 120. Во всех группах РК образцы в день введения дозы указаны как минимум на графике. Концентрации несвязанного В1у§ измеряли в сыворотке при базовом уровне. 1§С, 1дМ и 1дА оценивали в крови как маркеры биологической активности. Биомаркеры измеряли при базовом уровне и после в дни исследования 2, 3, 4, 8, 15 (только группы 1-3), 22, 29, 36, 43 и 64 (только группа 4). А в группах 3 и 4 также осуществляли измерения 1д в дни исследования 85 и 120.

Как и в примере 1, пациентов с 8ЬЕ от слабой до умеренной степени вносили в список, и фармакокинетики оценивали путем измерения сывороточных уровней свободного атацицепта (табл. 2Ь), атацицепт/В1у§ комплекса (табл. 3Ь) и композита атацицепта (определяется как свободный атацицепт + атацицепт-В1у§ комплекс, табл. 4Ь). Биологическая активность атацицепта была продемонстрирована с помощью зависимых от дозы снижений уровней иммуноглобулина и количества зрелых В-клеток и общего количества В-клеток (см. фиг. 11, см. также фиг. 5Ь). Этот эффект был наиболее сильным в группе повторной дозы и не затухал в течение всего последующего периода. Не наблюдали никаких изменений в количестве Т-клеток, клеток естественных киллеров или моноцитов. Умеренные реакции в сайте инъекции возникали более часто в группе атацицепта, чем в группе плацебо. Не было никаких различий в частоте или типе побочных эффектов, а также не было никаких тяжелых или серьезных побочных эффектов у пациентов, которых подвергали лечению при использовании атацицепта. Сравнение между путями подкожного введения (см. пример 1) и внутривенного введения выявило весьма подобные фармакокинетики (нелинейная РК, опосредованная лигандами) и подобную РК, которая была прогнозируемой и последовательной с однократной и многократной дозами (фиг. 9 и 10).

Несмотря на то что не было выявлено преимуществ внутривенного введения (невзирая на более высокую биодоступность при использовании этого способа введения, см. фиг. 4), эти результаты также поддерживают вывод о том, что более частое ведение меньших доз атацицепта обеспечивает лучшую биологическую активность, чем не такое частое введение доз при более высоких дозах (фиг. 7 и 8). Эти результаты также указывают на то, что несмотря на более низкую биодоступность лекарственного средства при использовании подкожного введение, профили связывания для двух способов являются весьма сравнимыми (см. фиг. 7).

- 9 022911

Ветви дозировок в фазе I 8ЬЕ исследованиях при использовании атацицепта Исследование 1 - подкожное введение атацицепта

Таблица 1

Группа	Доза	Введение	Количество пациентов
I	1x0,3 мг/кг	Однократная доза	6 активной дозы, 2 плацебо
2	1x1 мг/кг	Однократная доза	6 активной дозы, 2 плацебо
3	1x3 мг/кг	Однократная доза	б активной дозы, 2 плацебо
4	1x9 мг/кг	Однократная доза	6 активной дозы, 2 плацебо
5	4x1 мг/кг	4 еженедельные дозы (Ο\ν)	6 активной дозы, 2 плацебо
6	4x3 мг/кг	4 еженедельные дозы (0%^г)	6 активной дозы, 2 плацебо

Исследование 2 - внутривенное введение атацицепта

Группа	Доза	Введение	Количество пациентов
1	1x3 мг/кг	Однократная доза	5 активной дозы, 1 плацебо
2	1x9 мг/кг	Однократная доза	5 активной дозы, 1 плацебо
3	1x18 мг/кг	Однократная доза	5 активной дозы, 1 плацебо
4	2x9 мг/кг	2 дозы с интервалом 3 недели	5 активной дозы, 1 плацебо

Ο\ν - каждую неделю.

Таблица 2а

Фармакокинетические параметры для свободного атацицепта, полученные из некомпартментного анализа, исследование 1 Параметры, оцененные после введения первой дозы

	Т./, (часы)	Ттах (часы)	Стах (нг/мл)	лист? (мг*ч/л)	АиСззб (мг*ч/л)
Группа 1,0,3 мг/кг
Ср. знач. (30)	401 (477)	28 (9,80)	185(145)	30,4 (29.4)	17,6(10.6)
Усреднен.	204	24	136	19,1	14,1
Группа 2, 1 мг/кг
Ср. знач. (30)	452 (219)	18,7(8,26)	821 (525)	108 (38,4)	69,3 (29,1)
Усреднен.	433	24	666	120	67,9
Группа 3, 3 мг/кг
Ср. знач. (30)	651 (218)	28 (9,80)	2600 (745)	287(55,6)	218(47,2)
Усреднен.	572	24	2830	293	239
Группа 4, 9 мг/кг
Ср, знач. (30)	642(218)	32(12,4)	6190(3200)	634(141)	520(157)
Усреднен,	653	24	5370	608	474

Параметры, оцененные после введения последней дозы

Группа 5,4x1 мг/кг

Ср. знач. (80)	690 (230)	н/о	Н.О.	147(24,1)	56,9 (9,80)
Усреднен.	729	Н.О.	Н.О.	149	59,3
Группа 6,4x3 мг/кг
Ср. знач. (80)	472(157)	Н.О.	НО.	209 (33,7)	96,5 (34,5)
Усреднен.	492	Н.О.	Н.О.	202	85,8

ЛИСззб - площадь под кривой концентрация-время от момента времени 0 ч до момента времени 336 ч; ЛиСмр - ЛИС от момента времени 0 ч до бесконечности; С_тах - максимальная концентрация; 8Ό - стандартное отклонение; Т_1/2 - конечный период полувыведения; Т_тах - время достижения максимальной концентрации. Последняя доза вводилась в момент времени 504 ч. N=6 8ЬЕ пациентов на группу.

Н.О. - не оценивали в соответствии с планом взятия образцов после введения последней дозы.

- 10 022911

Таблица 2Ь

Фармакокинетические параметры для свободного атацицепта, полученные из некомпартментного анализа, исследование 2

Параметры, оцененные после введения первой дозы

	т_й (часы)	Ттах (часы)	Стах (нг/мл)	лиспчг (мГ’Ч/л)	Аис₃₃₆ (мг*ч/л)
Группа 1,3 мг/кг
Ср. знач. (δϋ)	743 (216)	0,500 (0)	39,7(5,49)	912(189)	815(170)
Усреднен.	642	0,500	38,6	953	848
Группа 2, 9 мг/кг
Ср. знач. (8Ц>	722(146)	0,350 (0,137)	198 (248)	2040(613)	1930(565)
Усреднен.	765	0,250	91,7	1770	1680
Группа 3, 18 мг/кг
Ср. знач. (30)	796(188)	0,400(0,137)	289(91,2)	5010(743)	4840 (713)
Усреднен.	702	0,500	257	4880	4730

Группа 4,2x9 мг/кг с интерв. 3 нед.

Ср. знач. (8ϋ) Усреднен.	Н.О. Н.О.	1,15(1,60) 0,500	140(23,7) 148	Н.О. Н.О.	2750 (220) 2620
Параметры, оцененные после введения последней дозы
Группа 4, 2x9 мг/кг с интерв. 3 нед. Ср. знач. (8ϋ) 748 (92,2) Усреднен. 710	504,25 (0) 504,25	109 (22,6) 119	4320(1020) 4700	4110(971) 4520

ЛиСззе - площадь под кривой концентрация-время от момента времени 0 ч до момента времени 336 ч; ЛИСют - ЛИС от момента времени 0 ч до бесконечности; С_тах - максимальная концентрация; 8Ό - стандартное отклонение; Т_1/2 конечный период полувыведения; Т_тах время достижения максимальной концентрации. Последняя доза вводилась в момент времени 504 ч. N=6 8ЬЕ пациентов на группу.

Н.О. - не оценивали в соответствии с планом взятия образцов после введения первой дозы.

из некомпартментного анализа, исследование 1

Таблица 3 а

Фармакокинетические параметры для композита атацицепта, полученные

Параметры, оцененные после введения первой дозы
	Тй	Тщах	Стах	АиСтг	Аис₃₃₆
	(часы)	(часы)	(нг/мл)	(мг«ч/л)	(мгч/л)
Группа 1, О,3мг/кг
Ср. знач. (30)	3710(5450)	30(14,7)	436 (300)	1360(2120)	75,6 (36,5)
Усреднен. Группа 2, 1 мг/кг	1270	24	324	319	61,0
Ср. знач. (30)	807 (515)	16(8,80)	1160(597)	610 (370)	168 (47,1)
Усреднен. Группа 3, 3 мг/кг	543	16	963	441	169
Ср. знач. (80)	3040 (2770)	32(12,4)	3140(935)	2470(1620)	400 (69,3)
Усреднен. Группа 4, 9 мг/кг	2580	24	3130	2210	411
Ср. знач. (8ϋ)	878(256)	32(12,4)	8890 (4860)	1770(378)	865(199)
Усреднен.	795	24	7150	1780	807

__Параметры, оцененные после введения последней дозы

Группа 5, 4x1 мг/кг

Ср. знач. (3ϋ)	1410(572)	Н.О.	Н.О.	1570(834)	237 (50,4)
Усреднен.	1610	Н.О.	Н.О.	1490	221
Группа 6, 4x3 мг/кг
Ср. знач. (30)	1500(545)	Н.О.	Н.О.	2530(1340)	386 (83,4)
Усреднен.	1520	Н.О.	Н.О.	2070	389

ЛИС₃₃₆ - площадь под кривой концентрация-время от момента времени 0 ч до момента времени 336 ч; ЛИСют - ЛИС от момента времени 0 ч до бесконечности; С_тах - максимальная концентрация; 8Ό - стандартное отклонение; Т_1/2 - конечный период полувыведения; Т_тах - время достижения максимальной концентрации. Последняя доза вводилась в момент времени 504 ч. N=6 8ЬЕ пациентов на группу.

- 11 022911

Фармакокинетические параметры для композита атацицепта, полученные из некомпартментного анализа, исследование 2

Таблица 3Ь

	Т_и (часы)	т ¹ шах (часы)	(нг/мл)	Аист,р (мг*ч/л)	АиСззб (МГ’ч/л)
Группа 1, 3 мг/кг
Ср. знач. (8ϋ)	2550(1220)	0,350 (0,137)	57,3 (12,0)	2870(531)	1180(184)
Усреднен.	2050	0,250	55.9	2650	1200
Группа 2, 9 мг/кг
Ср. знач. (δϋ)	1560(842)	0,350 (0,137)	348 (362)	4590(520)	3210(650)
Усреднен.	1600	0,250	201	4430	2880
Группа 3, 18 мг/кг
Ср. знач. (50)	1080(147)	0,250 (0)	411 (77,3)	7470(1380)	5990 (863)
Усреднен.	1100	0,250	446	7710	6240

Параметры, оцененные после введения первой дозы
	т_й (часы)	Ттах (часы)	Стах (нг/мл)	АиС,мр (мг*ч/л)	АиСззб (мг’ч/л)
Г руппа 4, 2x9 мг/кг с интерв. 3 нед.
Ср. знач. (80)	Н.О.	1,05(1,65)	361 (334)	Н.О.	4720 (2400)
Усреднен.	Н.О.	0,250	251	Н.О.	4320

Группа 4, 2x9 мг/кг с интерв, 3 нед.

Ср. знач. (30)	1480 (750)	504,25 (0)	240 (69,4)	8490 (2010)	6390(1200)
Усреднен.	1140	504,25	272	8130	6390

АиС₃₃₆ - площадь под кривой концентрация-время от момента времени 0 ч до момента времени 336 ч; АИС^ - АИС от момента времени 0 ч до бесконечности; С_{тах -} максимальная концентрация; 8Ό - стандартное отклонение; Т_1/2 - конечный период полувыведения; Т_тах - время достижения максимальной концентрации. Последняя доза вводилась в момент времени 504 ч. N=6 8ЬЕ пациентов на группу. Н.О. - не оценивали в соответствии с планом взятия образцов после введения первой дозы.

Таблица 4а

Фармакокинетические параметры для комплекса В1у§-атацицепт, полученные из некомпартментного анализа, исследование 1

Параметры, оцененные после введения первой дозы
	*П_г	Ттах	Стах	АиС[нр	АВСззй
	(часы)	(часы)	[кЕд./мл]	(кЕд. »ч/л)	(кЕд. »ч/л)
Группа 1, 0,Змг/кг
Ср. знач. (80)	1240 (656)	364 (126)	161 (91,9)	382 (390)	38,5 (17,8)
Усреднен. Г руппа 2, 1 мг/кг	1230	336	134	259	33,7
Ср. знач. (δϋ)	821 (704)	260(124)	269 (89,9)	362 (196)	68,7(24,1)
Усреднен. Группа 3, 3 мг/кг	512	336	286	319	73,0
Ср. знач. (δϋ)	1250 (517)	728 (330)	316(30,4)	727 (323)	59,5 (13,3)
Усреднен. Группа 4,9 мг/кг	1420	840	315	735	55,9
Ср. знач. (80)	6960 (6550)	700(223)	369 (66,2)	3680 (2890)	69,9(16,7)
Усреднен.	6220	672	388	4330	72,7

Группа 5, 4x1 мг/кг
Ср. знач. (δϋ)	2510(2330)	756 (92,0)	460(122)	1700(1330)	139(38,1)
Усреднен.	1970	756	443	1260	134
Группа 6,4x3 мг/кг
Ср. знач. (80)	7680(13200)	840(184)	668(159)	8050(13700)	201 (40,6)
Усреднен.	2220	840	660	2450	199

АИС₃₃₆ - площадь под кривой концентрация-время от момента времени 0 ч до момента времени 336 ч; АИСют - АИС от момента времени 0 ч до бесконечности; С_тах максимальная концентрация; 8Ό - стандартное отклонение; Т_1/2 - конечный период полувыведения; Т_тах - время достижения максимальной концентрации. Последняя доза вводилась в момент времени 504 ч. N=6 8ЬЕ пациентов на группу.

* Т_1/2 и АИСют не являются достоверными оценками для этой величины по причине терминальной формы профилей.

- 12 022911

Фармакокинетические параметры для комплекса В1у§-атацицепт, полученные из некомпартментного анализа, исследование 2

Таблица 4Ь

Параметры, оцененные после введения первой дозы
*т_й	Тщах Сщах	АиСззб
(часы)	(часы) [кЕд./мл] (кЕд. «ч/л)	(кЕд. «ч/л)

Группа 1, 3 мг/кг
Ср. знач. (80)	86500(159000)	672 (206) 0,297 (0,0412)	35100	59,6 (10,2)
				(63800)
Усреднен. Группа 2, 9 мг/кг	9800	672	0,300	4240	63,1
Ср. знач, (8ϋ)	3790 (2320)	605 (255) 0,352 (0,0763)	2040(1230)	61,0(11,4)
Усреднен. Группа 3, 18	3770	504	0,342	2480	58,8
мг/кг
Ср. знач. (8Э)	1800(616)	672 (206)	0,454(0,118)	1460 (674)	86,3 (20,0)
Усреднен.	1570	672	0,452	1210	84,3

Группа 4,2x9 мг/кг с интерв. 3 нед.

Ср. знач. (3ϋ)	Н.О.	504 (0)	0,414(0,121)	Н.О.	78,8(17,8)
Усреднен.	Н.О.	504	0,397	Н.О.	78,4
Параметры, оцененные после введения последней дозы
Группа 4,2x9 мг/кг с интерв. 3 нед.
Ср. знач. (5ϋ)	2650 (3270)	1008 (0)	0,707 (0,343)	2790 (2550)	186(38,0)
Усреднен.	1140	1008	0,685	1740	195

ЛИСззб - площадь под кривой концентрация-время от момента времени 0 ч до момента времени 336 ч; ЛИСют - ЛИС от момента времени 0 ч до бесконечности; С_тах - максимальная концентрация; 8Ό - стандартное отклонение; Т_1/2 - конечный период полувыведения; Т_тах - время достижения максимальной концентрации. Последняя доза вводилась в момент времени 504

ч. N=6 §ЬЕ пациентов на группу.

Н.О. - не оценивали * Т_1/2 и ЛИСют не являются достоверными оценками для этой величины по причине терминальной формы профилей.

- 13 022911

Таблица 5 а

Результаты некомпартментного анализа для (1д)М, 1§Л, и 1§О биомаркеров исследование 1

ΙίξΜ		1еА		ΙβΟ
Группа* Тпшл (дни) Макс,	Ттах	Макс, измен.	Тцухх	Макс, измен.
измен. (%	(дни)	(% от баз.	(дни)	(% от баз.
от баз. уровня)		уровня)		уровня)
Группа 1,0,3 мг/кг подкожн.
Ср.знач. 14,1 (17) 2,82(23,4)	д.о.	Д.о.	11,8 (15,7)	-0,377(17,8)
(80) Усреднен. 7 10,2 Группа 2, 1 мг/кг подкожн.	д.о.	д.о.	7,00	4,07
Ср.знач. 18,7(13,0) 19,4(8,93)	до.	д.о.	25,7 (14,5)	11,1 (5,77)
(51»
Усреднен. 17,5 16,5 Группа 3, 3 мг/кг подкожн.	д.о.	до.	24,5	12,1
Ср.знач. 23,3(5,70) 24,8(3,81)	Д.о.	д-о.	29,2 (8,20)	10,5 (1,25)
(8Э) Усреднен. 21,0 25,2 Группа 4, 9 мг/кг подкожн.	д.о.	д.о.	28,0	10,9
Ср. знач. 29,2 (8,20) 37,9 (8,57)	Д.о.	д-о.	18,7 (7,20)	14,7 (5,95)
(5Ώ) Усреднен. 28,0 37,2 Группа 5, 4x1 мг/кг подкожн. ¢)%⁷	Д.О.	д.о.	21,0	15,9
Ср.знач. 31,0(11,3) 29,2(10,0)	27,0	23,1 (10,1)	25,0(11,3)	11,5 (5,84)
(80)	(10,2)
Усреднен. 35,0 31,0 Группа 6 4x3 мг/кг подкожн.	28,0	20,7	28,0	14,4
Ср. знач. 42,0( 11,7) 50,4 (7,25)	36,2	34,9 (5,85)	33,8 (6,90)	17,5(4,22)
(80)	(2,90)
Усреднен. 42,0 49,8 Плацебо)·	35,0	32,9	35,0	17,8
Ср.знач. 13,5(12,4) 13,7(15,3)	14,0	9,14 (7,06)	11,0(11,3)	11,2(13,5)
(80)	(9,90)
Усреднен. 7,00 10,9	10,5	10,6	14,0	9,84

* Пациенты активной дозы для групп 1-6 (п=6).

Ψ Плацебо группа, все плацебо-пациенты, объединенные вместе (п=12). Т_тах - время максимального истощения 1д

д.о. - данные отсутствуют.

Таблица 5Ь

Результаты некомпартментного анализа для (1д)М, 1§Л, и 1§О биомаркеров исследование 2 _щи_ΐβΑ_1е<з_

Группа* Т_га„(дни) Макс. Т_тах Макс. Т_тах Макс, измен.

измен. {% (дни) измен. (% (дни) (% от баз. от баз. от баз. уровня) _уровня)_уровня)_

Группа 1,3 мг/кг внутривен.

Ср. знач. (3ϋ)	23,8(12,7)	34,2(11,2)	18,2(14,5)	19,0(10,9)	15,4 (7,70)	13,9 (7,72)
Усреднен.	21,0	39,4	14,0	14,9	21,0	12,2
Группа 2, 9 мг/кг внутривен.
Ср. знач.	25,2 (3,80)	33,5 (5,64)	21,0(7,00)	26,5 (3,43)	21,0 (7,00)	17,1 (3,86)
(8ϋ)
Усреднен.	28,0	33,6	21,0	25,8	21,0	17,1

Группа 3, 18 мг/кг внутривен.

Ср. знач. (8Э)	29,4 (7,70)	35,3(13,1)	23,8 (6,30)	29,8 (5,71)	19,6 (7,70)	17,1 (1,96)
Усреднен.	28,0	29,3	28,0	28,6	14,0	17,0
Группа 4,2x9 мг/кг внутривен, с интерв. 3 нед. Ср.знач. 39,2(6,30) 42,3 (10,7) 36,4(7,70)	35,9 (8,06)	36,4 (7,70)	23,2 (3,76)
(30)
Усреднен.	42,0	41,2	42,0	37,5	42,0	24,0
Плацебо!
Ср. знач.	10,2(12,0)	8,51 (5,14)	21,5 (17,3)	15,4(16,1)	10,0(12,2)	10,7(7,14)
(5Э)
Усреднен.	5,00	7,66	21,0	10,2	5,00	13,9

* Пациенты активной дозы для групп 1-4 (п=5).

ί Плацебо группа, все плацебо-пациенты, объединенные вместе (п=4). Т_тах - время максимального истощения 1д

- 14 022911

Ссылки

Упоминания, цитируемые в данном изобретении, включая патенты, опубликованные заявки и другие публикации, введены в данное описание как ссылки.

Перечень последовательностей <110> ЗАЙМОДЖЕНЕТИКС. ИНК.

Арес Трейдинг С. А.

< 120> СПОСОБЫ ВВЕДЕНИЯ ДОЗ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ АУТОИММННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ТАСНе СЛИТОГО БЕЛКА, ТАКОГО, КАК АТАЦИЦЕПТ <130> 07-НРС <150> 60/943,618 <151> 2007-06-13 <150> 61/024,031 <151>2008-01-28 <160> 2 <170> РаГепИп версия 3.4 <210> 1 <211> 154 <212> Белок

Ме( 8ег О1у Беи О1у Агд 8ег Аг§ Аг£ О1у О1у Аг§ 8ег Аг§ Уа1 Азр 15 10 15

О1п О1и О1и Аг§ РЬе Рго О1п О1у Ьеи Тгр ТЬг О1у Уа1 А1а Ме! Аг§

25 30

8ег Суз Рго О1и О1и О1п Туг Тгр Азр Рго Беи Беи О1у ТЬг Суз Ме!

40 45

5ег Суз Буз ТЬг Не Суз Азп Ηίδ О1п 8ег О1п Аг§ ТЬг Суз А1а А1а 50 55 60

РЬе Суз Аг§ 8ег Беи 8ег Суз Аг& Буз О1и О1п О1у Буз РЬе Туг Азр 65 70 75 80

- 15 022911

Ηϊ® Ьеи Ьеи Αη? Авр Су® Не 8ег Су® А1а Зег Не Су® С1у Οίη Ηί®

90 95

Рго Ьуз О1п Су® А1а Туг РЬе Суз О1и А®п Ьу® Ьеи Ατβ Зег Рго Уа1 100 105 ПО

Азп Ьеи Рго Рго О1и Теи Аг£ Аг§ Οίη Αη> Зег О1у О1и Уа1 О1и Азп 115 120 125

Азп Зег Азр Азп Зег О1у Аг§ Туг О1п О1у Ьеи О!и Ηί® Аг§ С1у Зег 130 135 140

С1и А1а Зег Рго А1а Ьеи Рго О1у Ьеи Ьу®

145 150 <210> 2 <211> 348 <212> РКТ <213> Константный домен Рс5 иммуноглобулина человека <400> 2

Ме1 А®р А1а Ме1 Ьу® Ага О1у Ьеи Суз Су® Уа1 Ьеи Ьеи Ьеи Суз О1у 15 10 15

А1а V®! РЬе Уа1 Зег Ьеи Зег О1п О1и Пе Ηί® А1а О1и Ьеи Аг§ Аг§

25 30

РЬе Аг§ Аге А1а Ме1 Аг§ Зег Су® Рго О1и О1и О1п Туг Тгр Азр Рго 35 40 45

Ьеи Ьеи С1у ТЬг Суз Ме1 Зег Суз Ьу® ТЬг Не Су® Азп Ηί® С1п Зег 50 55 60

О1п Агц ТЬг Суз А1а А1а РЬе Суз Аг§ Зег Ьеи Зег Суз Аг§ Ьу® О1и

70 75 80

О1п О1у Ьу® РЬе Туг Азр Ηΐ® Ьеи Ьеи Аг§ Азр Су® Пе Зег Суз А1а

90 95

Зег Не Су® С1у Οίη Ηί® Рго Ьуз С1п Суз А1а Туг РЬе Су® <31и Азп 100 105 ПО

Ьу® Ьеи Аг§ Зег О1и Рго Ьуз Зег Зег Азр Ьу® ТЬг Ηί® ТЬг Суз Рго

- 16 022911

115 120 125

Рго Суз Рго А1а Рго С1и А1а О1и О1у А1а Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе 130 135 140

Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Ме1 Не Зег Αίβ ТЬг Рго О1и Уа1

145 150 155 160

ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа! Зег ΗΪ3 О1и Азр Рго О1и Уа1 Ьуз РЬе

165 170 175

Азп Тгр Туг Уа1 Азр С1у Уа1 О1и Уа1 Из Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго 180 185 190

Аг§ О1и С1и О1п Туг Азп Зег ТЬг Туг Аг§ Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг 195 200 205

Уа1 Ьеи Шз О1п Азр Тгр Ьеи Азп С1у Ьуз О1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 210 215 220

Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго Зег Зег Не О1и Ьуз ТЬг Не Зег Ьуз А1а

225 230 235 240

Ьуз О1у О1п Рго Лг§ О1и Рго О1п Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агц

245 250 255

Азр О1и Ьеи ТЬг Ьуз Азп О1п Уа1 Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз О1у 260 265 270

РЬе Туг Рго Зег Азр Не А1а Уа1 <31и Тгр О1и Зег Азп О1у О1п Рго 275 280 285

О1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр О1у Зег 290 295 300

РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Аг§ Тгр О1п О1п

305 310 315 320

О1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1 Ме1 Шз О1и А1а Ьеи ΗΪ8 Азп Шз

325 330 335

Туг ТЬг О1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у Ьуз

340 345

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Способ лечения пациента, страдающего I или II стадией системной красной волчанки, включающий еженедельное введение в дозе приблизительно от 1 до приблизительно 10 мг/кг в течение приблизительно от 2 до приблизительно 52 недель слитой молекулы, которая включает:

(ί) ТАС1 внеклеточный домен или его фрагмент, который связывается с В1у§;

(и) константный домен иммуноглобулина человека.
2. Способ по п.1, где указанный ТАС1 внеклеточный домен имеет последовательность, включающую Л Т) ГО N0: 1.
3. Способ по п.1, где указанный ТАС1 внеклеточный домен является по крайней мере на 50% идентичным 5>ЕО ГО N0: 1.
4. Способ по п.1, где указанный ТАС1 внеклеточный домен имеет последовательность, включающую аминокислоты 30-110 5>ЕО ГО N0: 1.
5. Способ по п.1, где указанный константный домен иммуноглобулина человека имеет последовательность, включающую 5>ЕО ГО N0: 2.
6. Способ по п.1, где указанная слитая молекула представляет собой атацицепт.
7. Способ по п.1, где указанная композиция вводится в количестве приблизительно от 1 до приблизительно 9 мг/кг.
8. Способ по п.1, где этот способ предусматривает дополнительное введение пациенту второго лекарственного средства, которое выбрано из группы, состоящей из МАЮ, противомалярийных средств, кортикостероидов, иммуносупрессивных агентов, 1У1д, ЭНЕЛ и талидомида.
9. Способ по п.8, где указанная слитая молекула представляет собой атацицепт.
10. Способ по п.1, где указанная слитая молекула вводится подкожно, перорально или внутривенно.
11. Способ по п.1, где пациент представляет собой человека.