EA021883B1 - Производные индола в качестве противораковых агентов - Google Patents

Производные индола в качестве противораковых агентов Download PDF

Info

Publication number
EA021883B1
EA021883B1 EA201170997A EA201170997A EA021883B1 EA 021883 B1 EA021883 B1 EA 021883B1 EA 201170997 A EA201170997 A EA 201170997A EA 201170997 A EA201170997 A EA 201170997A EA 021883 B1 EA021883 B1 EA 021883B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
formula
acid
compounds
treatment
base
Prior art date
Application number
EA201170997A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201170997A1 (ru
Inventor
Брюно Схунтьес
Софи Декамп
Натали Клоди Изабелль Амблар
Original Assignee
Янссен Фармацевтика Нв
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Янссен Фармацевтика Нв filed Critical Янссен Фармацевтика Нв
Publication of EA201170997A1 publication Critical patent/EA201170997A1/ru
Publication of EA021883B1 publication Critical patent/EA021883B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/12—Ophthalmic agents for cataracts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/10—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing aromatic rings

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I), их применению для лечения рака, а также фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения формулы (I)

Description

(57) Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I), их применению для лечения рака, а также фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения формулы (I)
021883 Β1
0)
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к производным индола и композициям, содержащим указанные соединения, действующим в качестве противораковых агентов. Кроме того, настоящее изобретение относится к способам получения описанных соединений, комбинации указанных соединений с одним или несколькими противораковыми агентами, применению указанных соединений, например, в качестве лекарственных средств, в частности, для лечения рака.
Без связи с какой-либо теорией в настоящее время считают, что хотя ΜΌΜ2 и р53 представляют собой ключевые элементы в биологии опухолевых клеток и играют ключевые роли в клеточной реакции на повреждение или стресс клеток и хотя настоящие соединения увеличивают экспрессию р53, оказывается, что они могут не представлять собой основные молекулярные мишени, посредством которых настоящие соединения проявляют свою демонстрируемую сильную преклиническую противоопухолевую активность. Первоначальные исследования были направлены на непосредственное или опосредуемое действие на синтез ДНК и/или репликативную, вызванную стрессом, ответную реакцию как основу для наблюдаемой преклинической противоопухолевой активности соединений. Настоящие соединения проявляют также антипролиферативные действия в опухолевых клетках, которые лишены р53, лишены функционального р53 или имеют мутант р53 и, кроме того, они могут делать онкогенные клетки чувствительными к химиотерапии и радиотерапии.
р53 представляет собой белок-супрессор опухолей, который играет основную роль в регуляции баланса между пролиферацией клеток и подавлением роста/апоптозом клеток. При нормальных условиях полупериод существования р53 является очень коротким и в результате этого уровень р53 в клетках низкий. Однако в ответ на клеточное повреждение ДНК или клеточный стресс (например, активацию онкогена, эрозию теломера, гипоксию) уровни р53 увеличиваются. Повышение уровней р53 приводит к активации транскрипции ряда генов, которая вызывает либо остановку роста, либо процессы апоптоза клеток. Таким образом, важной функцией р53 является предотвращение нерегулируемой пролиферации поврежденных клеток и, тем самым, защита организма от развития рака. Термин ΜΌΜ2 (Митте ИоиЫе Μίηи1с 2) применяют в данном контексте для обозначения белка, получаемого в результате экспрессии гена шбш2. В пределах значения этого термина ΜΌΜ2 включает в себя все белки, кодируемые шбш2, их мутанты, их альтернативные белки тонкого слоя и их фосфорилированные белки. Кроме того, применяемый в контексте термин ΜΌΜ2 включает в себя аналоги ΜΌΜ2, например ΜΌΜΧ, известный также как ΜΌΜ4, и гомологи и аналоги ΜΌΜ2 других животных, например гомолог ΗΌΜ2 человека или аналог ΗΌΜΧ человека. ΜΌΜ2 является ключевым негативным регулятором функции р53. Он образует негативную авторегуляторную петлю связыванием аминоконцевого домена трансактивации р53, и, таким образом, ΜΌΜ2 как ингибирует способность р53 активировать транскрипцию, так и направленно вызывает протеолитическую деградацию р53. При нормальных условиях эта регуляторная петля является ответственной за поддержание низких уровней р53.
Предшествующий уровень техники изобретения
В 1Ρ 11130750 среди других соединений описаны замещенные фениламинокарбонилиндолилсоединения в качестве антагонистов рецептора 5-НТ.
В ЕР 1129074 описаны амиды антраниловой кислоты в качестве ингибиторов рецепторов эндотелиального фактора роста сосудов (УЕОРК) и применимые при лечении ангиогенных нарушений.
В \νϋ 01/42224 предложены карбоксиамидопроизводные для лечения болезни Альцгеймера. В ЕР 1317443 описаны трициклические производные третичных аминов, применимые в качестве рецептора СХСК4 хемокина или модуляторов ССК5 для лечения вирусного иммунодефицитного заболевания человека и вирусного иммунодефицитного заболевания кошачьих.
В ЕР 1379239 описаны Ы-(2-арилэтил)бензиламины в качестве антагонистов рецептора 5-НТ6рецептора.
В νθ 00/15357 описаны пиперазин-4-фенилпроизводные в качестве ингибиторов взаимодействия между ΜΌΜ2 и р53. В ЕР 1137418 предложены трициклические соединения для восстановления конформационной стабильности белка семейства р53. В νθ 03/040402 предложены соединения, которые ингибируют взаимодействие между белками, такое как взаимодействие между ΜΌΜ2 и р53. В ЕР 1443937 описаны замещенные 1,4-бензодиазепины и их применение в качестве ингибиторов взаимодействия ΜΌΜ2-ρ53. В ЕР 1458380 предложены цис-2,4,5-трифенилимидазолоны, которые ингибируют взаимодействие белка ΜΌΜ2 с подобными р53 пептидами и обладают антипролиферативной активностью.
В ЕР 1519932 описаны производные бисарилсульфонамидов, которые связываются с ΜΌΜ2 и которые можно применять в терапии рака.
В νθ 2006/032631, νθ 2007/107543, νθ 2007/107545, νθ 2009/019274, νθ 2009/037308 и νθ 2009/037343 описаны ингибиторы взаимодействия между ΜΌΜ2 и р53.
Существует потребность в эффективных малых молекулах, которые обладают сильным ингибирующим действием против роста клеток, имеют широкий профиль безопасности и обладают меньшими нежелательными побочными действиями.
Соединения настоящего изобретения проявляют превосходную активность ίη νίίτο и превосходные противоопухолевые действия ίη νίνο. Они имеют низкую аффинность в отношении ферментов Р450, ко- 1 021883 торые снижают риск нежелательного взаимодействия лекарственное средство-лекарственное средство, обеспечивая тем самым более широкий предел безопасности. Кроме того, соединения настоящего изобретения обладают слабыми, индуцированными лекарственными средствами, неврологическими действиями и имеют улучшенный сердечно-сосудистый профиль, который может благоприятно влиять на ограничивающую дозу токсичность соединений.
Описание изобретения
Настоящее изобретение относится к соединениям, композициям, комбинациям для лечения рака и их применению для лечения рака. Кроме того, соединения и композиция настоящего изобретения являются применимыми для повышения эффективности химиотерапии и радиотерапии. Изобретение также относится к способам получения соединений настоящего изобретения.
Изобретение относится к соединениям формулы (I)
включая их любую стереохимически изомерную форму, где
К1 представляет собой гидрокси-С1-6алкил или С2-6алкенил; при условии, что заместитель К1 находится в положении 6 или 7 индольной части;
К2 представляет собой водород или С1-4алкил;
Ζ представляет собой радикал, выбранный из
К3 представляет собой водород или гидрокси-С1-4алкил;
К4 представляет собой гидрокси или С1-4алкилокси;
К5 представляет собой водород или С1-4алкил или
К4 и К5, взятые вместе, образуют оксо; их фармацевтически приемлемым солям или сольватам.
Соединения формулы (I) могут существовать в их таутомерных формах. Предполагается, что такие формы, хотя они определенно не указаны в приведенной выше формуле, включены в объем настоящего изобретения.
Настоящее изобретение относится также к применению соединения формулы (I) для изготовления лекарственного средства для лечения рака и применению соединения формулы (I) для лечения рака. Настоящее изобретение относится также к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) в качестве активного ингредиента и фармацевтически приемлемый носитель; к комбинации одного или нескольких противораковых агентов и соединения формулы (I), способам получения соединений формулы (I). Один способ получения соединения формулы (I) настоящего изобретения заключается в том, что промежуточный продукт формулы (II) подвергают взаимодействию с промежуточным продуктом формулы (III), где А1 представляет собой подходящую уходящую группу, в инертном в реакционных условиях растворителе, необязательно в присутствии под-
или, если необходимо, превращают соединения формулы (I) друг в друга по известным в данной области техники превращениям и дополнительно, если необходимо, превращают соединения формулы (I) в терапевтически активную нетоксичную кислотно-аддитивную соль обработкой кислотой или в терапевтически активную нетоксичную основно-аддитивную соль обработкой основанием, или наоборот, превращают кислотно-аддитивную соль в свободное основание обработкой основанием или превращают
- 2 021883 основно-аддитивную соль в свободную кислоту обработкой кислотой, или, если необходимо, получают их стереохимически изомерные формы или сольваты.
Второй способ получения соединения формулы (I) настоящего изобретения заключается в том, что промежуточный продукт формулы (II) подвергают взаимодействию с промежуточным продуктом формулы (III), где представляет собой подходящую уходящую группу, в присутствии подходящего катализатора, подходящего лиганда, подходящего основания и подходящего растворителя
или, если необходимо, превращают соединения формулы (I) друг в друга по известным в данной области техники превращениям и дополнительно, если необходимо, превращают соединения формулы (I) в терапевтически активную нетоксичную кислотно-аддитивную соль обработкой кислотой или в терапевтически активную нетоксичную основно-аддитивную соль обработкой основанием, или наоборот, превращают кислотно-аддитивную соль в свободное основание обработкой основанием или превращают основно-аддитивную соль в свободную кислоту обработкой кислотой, или, если необходимо, получают их стереохимически изомерные формы или сольваты.
Третий способ получения соединения формулы (I) настоящего изобретения заключается в том, что соответствующее карбонильное соединение формулы (IV) восстанавливают в присутствии подходящего восстанавливающего агента и подходящего растворителя
где К2 и Ζ имеют значения, указанные в п.1, или, если необходимо, превращают соединения формулы (I) друг в друга по известным в данной области техники превращениям и дополнительно, если необходимо, превращают соединения формулы (I) в терапевтически активную нетоксичную кислотно-аддитивную соль обработкой кислотой или в терапевтически активную нетоксичную основно-аддитивную соль обработкой основанием, или наоборот, превращают кислотно-аддитивную соль в свободное основание обработкой основанием или превращают основно-аддитивную соль в свободную кислоту обработкой кислотой, или, если необходимо, получают их стереохимически изомерные формы или сольваты.
Четвертый способ получения соединения формулы (I) настоящего изобретения заключается в том, что соответствующее сложноэфирное производное формулы (V), где Кх представляет собой С1-3алкилС(=О)ОС1-4алкил, восстанавливают в присутствии подходящего восстанавливающего агента и подходящего растворителя
где К2 и Ζ имеют значения, указанные в п.1, или, если необходимо, превращают соединения формулы (I) друг в друга по известным в данной области техники превращениям и дополнительно, если необходимо, превращают соединения формулы (I) в терапевтически активную нетоксичную кислотно-аддитивную соль обработкой кислотой или в терапевтически активную нетоксичную основно-аддитивную соль обработкой основанием, или наоборот, превращают кислотно-аддитивную соль в свободное основание обработкой основанием или превращают основно-аддитивную соль в свободную кислоту обработкой кислотой, или, если необходимо, получают
- 3 021883 их стереохимически изомерные формы или сольваты.
Пятый способ получения соединения формулы (I) настоящего изобретения заключается в том, что промежуточный продукт формулы (VI) гидролизуют подходящим основанием в присутствии подходящего растворителя
(VI) (1-1-а) где К2 и Ζ имеют значения, указанные в п.1, или, если необходимо, превращают соединения формулы (I) друг в друга по известным в данной области техники превращениям и дополнительно, если необходимо, превращают соединения формулы (I) в терапевтически активную нетоксичную кислотно-аддитивную соль обработкой кислотой или в терапевтически активную нетоксичную основно-аддитивную соль обработкой основанием, или наоборот, превращают кислотно-аддитивную соль в свободное основание обработкой основанием или превращают основно-аддитивную соль в свободную кислоту обработкой кислотой, или, если необходимо, получают их стереохимически изомерные формы или сольваты.
Ряд терминов, применяемых в предшествующих определениях и далее в контексте, объясняются ниже. Эти термины иногда применяют как таковые (по отдельности) или в составных терминах.
С1-4алкил, как группа или часть группы, означает насыщенные углеводородные радикалы с неразветвленной или разветвленной цепью, имеющие от 1 до 4 атомов углерода, такие как метил, этил, пропил, 1-метилэтил, бутил; С1-6алкил, как группа или часть группы, означает насыщенные углеводородные радикалы с неразветвленной или разветвленной цепью, имеющие от 1 до 6 атомов углерода, такие как группы, указанные для С1-4алкила, и пентил, гексил, 2-метилбутил и т.п. С2-6алкенил означает углеводородные радикалы с неразветвленной или разветвленной цепью, содержащие двойную связь и имеющие от 2 до 6 атомов углерода, такие как, например, этенил, 2-пропенил, 3-бутенил, 2-пентенил, 3-пентенил, 3-метил-2-бутенил и т.п.
Линии, нарисованные от заместителей к циклическим системам, указывают, что связь может быть присоединена к любому из подходящих атомов цикла.
Для терапевтического применения солями соединений формулы (I) являются соли, у которых противоион является фармацевтически приемлемым. Однако соли кислот и оснований, которые не являются фармацевтически приемлемыми, могут также найти применение, например, при получении или очистке фармацевтически приемлемого соединения. Все соли, независимо от того, являются ли они фармацевтически приемлемыми или не являются, включены в объем настоящего изобретения.
Имеется в виду, что фармацевтически приемлемые соли, указываемые в контексте ранее или далее, содержат формы терапевтически активных нетоксичных кислотно-аддитивных солей, которые способны образовывать соединения формулы (I). Последние можно преимущественно получать обработкой формы основания такими подходящими кислотами, как неорганические кислоты, например галогеноводородные кислоты, например хлористо-водородная кислота, бромисто-водородная кислота и т.п.; серная кислота; азотная кислота; фосфорная кислота и т.п.; или органические кислоты, например уксусная, пропановая, гидроксиуксусная, 2-гидроксипропановая, 2-оксопропановая, щавелевая, малоновая, янтарная, малеиновая, фумаровая, яблочная, винная, 2-гидрокси-1,2,3-пропантрикарбоновая, метансульфоновая, этансульфоновая, бензолсульфоновая, 4-метилбензолсульфоновая, циклогексансульфоновая, 2гидроксибензойная, 4-амино-2-гидроксибензойная и подобные кислоты. Наоборот, форму соли можно превратить обработкой щелочью в форму свободного основания.
Соединения формулы (I), содержащие кислые протоны, можно превратить в их терапевтически активные нетоксичные формы аддитивных солей металлов или аминов обработкой подходящими органическими и неорганическими основаниями. Имеется в виду, что фармацевтически приемлемые соли, указываемые в контексте ранее или далее, содержат также формы терапевтически активных нетоксичных солей металлов или аминов (формы основно-аддитивных солей), которые способны образовывать соединения формулы (I). Формы подходящих основно-аддитивных солей включают, например, аммониевые соли, соли щелочных и щелочно-земельных металлов, например соли лития, натрия, калия, магния, кальция и т.п., соли с органическими основаниями, например первичными, вторичными и третичными алифатическими и ароматическими аминами, такие как соли метиламина, этиламина, пропиламина, изопропиламина, четырех изомеров бутиламина, диметиламина, диэтиламина, диэтаноламина, дипропиламина, диизопропиламина, ди-н-бутиламина, пирролидина, пиперидина, морфолина, триметиламина, триэтиламина, трипропиламина, хинуклидина, пиридина, хинолина и изохинолина, соли бензатина, Ν-метил-Э- 4 021883 глюкамина, 2-амино-2-(гидроксиметил)-1,3-пропандиола, гидрабамина и соли с аминокислотами, такими как, например, аргинин, лизин и т.п.
Наоборот, форму соли можно превратить обработкой кислотой в форму свободной кислоты.
Термин соль включает также четвертичные аммониевые соли (четвертичные амины), которые соединения формулы (I) способны образовывать реакцией между основным атомом азота соединения формулы (I) и подходящим кватернизующим агентом, таким как, например, необязательно замещенный С1-6алкилгалогенид, арилгалогенид, С1-6алкилкарбонилгалогенид, арилкарбонилгалогенид или арил-С1-6алкилгалогенид, например метилиодид или бензилиодид, у которого арил представляет собой незамещенный или замещенный фенил. Можно применять также другие реагенты с легко уходящими группами, такие как, например, С1-6алкилтрифторметансульфонаты, С1-6алкилметансульфонаты и С1-6алкил-п-толуолсульфонаты. Четвертичный амин имеет положительно заряженный атом азота. Фармацевтически приемлемые противоионы включают в себя ионы хлора, брома, йода, трифторацетата, ацетата, трифлата, сульфата и сульфоната. Выбранный противоион можно ввести с применением ионообменной смолы.
Термин соль предпочтительно означает формы фармацевтически приемлемых кислотноаддитивных солей и формы фармацевтически приемлемых аддитивных солей металлов или аминов.
Термин сольват включает гидраты и формы, образованные присоединением растворителей, которые способны образовывать соединения формулы (I), а также их соли. Примерами таких форм являются, например, гидраты, алкоголяты и т.п.
Должно быть понятно, что некоторые из соединений формулы (I) и их соли и сольваты могут содержать один или несколько центров хиральности и могут существовать в виде стереохимически изомерных форм.
Термин стереохимически изомерные формы соединений формулы (I), применяемый в контексте ранее, означает все возможные соединения, состоящие из одинаковых атомов, связанных одинаковой последовательностью связей, но имеющие разные трехмерные структуры, которые не являются взаимообмениваемыми и которые могут иметь соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли или физиологически функциональные производные.
Если не указывается или не обозначается иначе, химическое название соединений означает смесь всех возможных стереохимически изомерных форм, а также каждую из индивидуальных изомерных форм соединений формулы (I) и их солей или сольватов, которая, по существу, не содержит другой изомер(ы), т.е. содержит меньше чем 50%, предпочтительно меньше чем 20%, более предпочтительно меньше чем 10%, еще более предпочтительно меньше чем 5%, еще более предпочтительно меньше чем 2% и наиболее предпочтительно меньше чем 1% другого изомера(ов). Так, например, когда соединение формулы (I) указывается как К-изомер, это означает, что соединение, по существу, не содержит 8изомер. Или, если соединение формулы (I), например, указывается как Е-изомер, это означает, что соединение, по существу, не содержит Ζ-изомер.
В частности, стереогенные центры могут иметь К- или 8-конфигурацию; заместители у двухвалентных циклических (частично) насыщенных радикалов могут иметь либо цис-, либо транс-конфигурацию. Соединения, содержащие двойные связи, могут иметь Е (заместители находятся на одной стороне относительно двойной связи)- или Ζ (заместители находятся на противоположных сторонах относительно двойной связи)-стереохимию у этой двойной связи. Термины цис, транс, К, 8, Е и Ζ хорошо известны специалисту в данной области. Несомненно имеется в виду, что стереохимически изомерные формы соединений формулы I включены в объем данного изобретения.
Особенно интересными являются те соединения формулы (I), которые являются стереохимически чистыми.
По условиям СА8-номенклатуры, когда в молекуле присутствуют два стереогенных центра известной абсолютной конфигурации, К- или 8-обозначение присваивается (на основании правила последовательности Кана-Ингольца-Прелога) хиральному центру, пронумерованному самым низким числом, центру начала отсчета. Конфигурация второго стереогенного центра указывается с применением относительных обозначений [К*,К*] или [К*,8*], где К* всегда указывается как центр начала отсчета и [К*,К*] обозначают центры с одинаковой хиральностью и [К*,8*] обозначают центры с различной хиральностью. Например, если в молекуле хиральный центр, пронумерованный самым низким числом, имеет 8конфигурацию и второй центр имеет К-конфигурацию, стереообозначение должно быть указано как 8[К*,8*]. Если применяют обозначения α и β, то положение заместителя с самым высоким приоритетом у асимметричного атома углерода в циклической системе, имеющего самое низкое число в цикле, всегда условно является а-положением средней плоскости, определяемой циклической системой. Положение заместителя с самым высоким приоритетом у другого асимметричного атома углерода в циклической системе относительно положения заместителя с самым высоким приоритетом у атома начала отсчета обозначается α, если он находится на той же стороне средней плоскости, определяемой циклической системой, или β, если он находится на другой стороне средней плоскости, определяемой циклической системой.
- 5 021883
Термины цис и транс при применении в контексте соответствуют номенклатуре СЬетюа1 АЬ51гас18 (1. Огд. СЬет. 1970, 35 (9), 2849-2867) и относятся к положению заместителей в циклической части.
Соединения формулы (I) можно синтезировать в форме рацемических смесей энантиомеров, которые можно отделить друг от друга по известным в данной области методикам разделения. Рацемические соединения формулы (I) можно превратить в соответствующие формы диастереомерных солей реакцией с подходящей хиральной кислотой. Указанные формы диастереомерных солей затем разделяют, например, селективной или фракционированной кристаллизацией, и энантиомеры выделяют из солей обработкой щелочью. Альтернативный способ разделения энантиомерных форм соединений формулы (I) включает жидкостную хроматографию, в которой применяют хиральную неподвижную фазу. Эти чистые стереохимически изомерные формы можно также получить из соответствующих чистых стереохимически изомерных форм подходящих исходных веществ, при условии, что реакция протекает стереоспецифическим образом. Если желательным является определенный стереоизомер, такое соединение предпочтительно следует синтезировать стереоспецифическими способами получения. В этих способах преимущественно следует применять энантиомерно чистые исходные вещества.
Имеется в виду, что настоящее изобретение включает также любые изотопы атомов, присутствующих в соединениях изобретения. Например, изотопы водорода включают тритий и дейтерий и изотопы углерода включают С-13 и С-14.
Имеется в виду, что применяемый ниже в контексте термин соединения формулы (I) или соединения настоящего изобретения всегда включает также фармацевтически приемлемые соли, в частности кислотно- или основно(соль металла или амина)-аддитивные соли, все стереоизомерные формы, сольваты и все полиморфные кристаллические формы или аморфные формы.
При применении в контексте выше или ниже такие заместители можно всегда выбрать, каждый независимо, из перечня многочисленных определений заместителей, причем предполагается, что все возможные комбинации их являются химически стабильными.
Представляющим интерес вариантом осуществления настоящего изобретения являются те соединения формулы (I), у которых заместитель К1 находится в положении 7 индольной части, т.е. соединения, имеющие следующую формулу:
Представляющим интерес вариантом осуществления настоящего изобретения являются те соединения формулы (I) или ^-а), где К1 представляет собой гидрокси-С1-6алкил. Другим вариантом осуществления настоящего изобретения являются те соединения формулы (I) или ^-а), где К2 представляет собой С1-4алкил.
Представляющим интерес вариантом осуществления настоящего изобретения являются те соединения формулы (I) или ^-а), где Ζ представляет собой радикал формулы (ζ-1).
Представляющим интерес вариантом осуществления настоящего изобретения являются те соединения формулы (I) или ^-а), где Ζ представляет собой радикал формулы (ζ-2).
Представляющим интерес вариантом осуществления настоящего изобретения являются те соединения формулы (I), ^-а), где Ζ представляет собой радикал формулы (ζ-2), у которых К4 представляет собой гидроксил и К5 представляет собой водород; или К4 представляет собой гидроксил и К5 представляет собой С1-4алкил.
Соединения указанных выше, представляющих интерес вариантов осуществления предпочтительно являются стереохимически чистыми.
Представляющим интерес вариантом осуществления настоящего изобретения является энантиомер формулы
имеющий левое вращение плоскости поляризованного света, измеренное при длине волны Ό-линии натрия (589 нм) при температуре 20°С и длине пути ячейки 1 дм в хлороформе при концентрации 8,59
- 6 021883 мг/мл;
или его фармацевтически приемлемая соль, или его сольват.
Другим представляющим интерес вариантом осуществления настоящего изобретения является энантиомер формулы
имеющий правое вращение плоскости поляризованного света, измеренное при длине волны Όлинии натрия (589 нм) при температуре 20°С и длине пути ячейки 1 дм в метаноле при концентрации 10,33 мг/мл; или его фармацевтически приемлемая соль, или его сольват.
Предпочтительные соединения настоящего изобретения выбраны из группы, состоящей из
- 7 021883
- 8 021883
- 9 021883
их фармацевтически приемлемую соль или их сольват.
(* означает относительную стереохимию).
Предпочтительные соединения настоящего изобретения выбраны из группы, состоящей из
- 10 021883
- 11 021883
их фармацевтически приемлемую соль или их сольват.
Предпочтительным соединением настоящего изобретения является соединение, имеющее следующую формулу:
или его фармацевтически приемлемая соль, или его сольват.
Предпочтительным соединением настоящего изобретения является соединение, имеющее следующую формулу:
включая любую его стереохимически изомерную форму; его фармацевтически приемлемая соль или его сольват.
Соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые соли и их стереохимически изомерные формы можно получить способами настоящего изобретения, раскрытыми выше. Исходные вещества и некоторые из промежуточных продуктов являются известными соединениями и коммерчески доступными или их можно получить согласно общепринятым методикам реакций, обычно известным в данной области. Ссылкой в этом отношении являются также способы синтеза, описанные в ^О 2006/032631.
Способы получения соединений настоящего изобретения будут описаны ниже в контексте более подробно. Другие способы получения конечных соединений формулы (I) описаны в примерах.
В общем, соединения формулы (I) можно получить реакцией промежуточного продукта формулы (II) с промежуточным продуктом формулы (III), где ^1 представляет собой подходящую уходящую группу, такую как, например, галоген, например фтор, хлор, бром или йод, или сульфонилоксигруппа, такая как метилсульфонилокси, 4-метилфенилсульфонилокси и т.п. Реакцию можно проводить в инертном в реакционных условиях растворителе, таком как, например, спирт, например метанол, этанол, 2метоксиэтанол, пропанол, бутанол и т.п.; простой эфир, например 1,4-диоксан, предпочтительно в присутствии подходящей кислоты, такой как, например, НС1, 1,1'-оксибиспропан и т.п.; кетон, например, 4метил-2-пентанон; или Ν,Ν-диметилформамид, нитробензол, ацетонитрил и т.п. Добавление подходящего основания, такого как, например, карбонат или гидрокарбонат щелочного или щелочно-земельного металла или органическое основание, например Ν,Ν-диизопропилэтиламин, триэтиламин, карбонат натрия или карбонат калия, можно применять для связывания кислоты, которая выделяется во время реакции. Небольшое количество подходящего иодида металла, например иодида натрия или калия, можно добавлять для промотирования реакции. Перемешивание может повысить скорость реакции. Реакцию преимущественно проводят при температуре между комнатной температурой и температурой флегмы реакционной смеси и, при необходимости, реакцию можно проводить при повышенном давлении.
- 12 021883
В указанной выше реакции промежуточные продукты формулы (II), где К1 представляет собой -С(ОН)(СН3)2, могут дать в результате соответствующее конечное соединение формулы (I), где К1 представляет собой -С(СН3)=СН2.
Указанную выше реакцию промежуточного продукта формулы (III) с промежуточным продуктом формулы (II) можно также проводить в присутствии подходящего катализатора, такого как, например, Ρά (бЬа)2-бис-[(1,2,4,5-п)-1,5-дифенил-1,4-пентадиен-3-он]палладий, подходящего лиганда, такого как, например, ΒΓΝΆΡ (2,2'-бис-(дифенилфосфино)-1,1'-бинафтил), подходящего основания, такого как, например, третичный бутоксид натрия, и подходящего растворителя, такого как, например, толуол.
Соединения формулы (I), где К1 представляет собой гидрокси-С1-4алкил, причем указанные соединения представлены формулой 0-1), можно также получить восстановлением соответствующего карбонилпроизводного формулы (IV) в присутствии подходящего восстанавливающего агента, такого как, например, Ν;·ιΒΗ4, и подходящего растворителя, такого как, например, спирт, например метанол и т.п.
Соединения формулы (!-1) можно также получить восстановлением соответствующего сложноэфирного производного формулы (V), где Кх представляет собой -С1-3алкил-С(=О)ОС1-4алкил, в присутствии подходящего восстанавливающего агента, такого как, например, ЫЛ1Н4, и подходящего растворителя, такого как, например, тетрагидрофуран.
Соединения формулы (Σ-1), где К1 представляет собой гидрокси-С1-4алкил и указанный гидрокси-С14алкил находится в положении 7 индольной части, причем указанные соединения представлены формулой ^-Г-а), можно также получить гидролизом промежуточного продукта формулы (VI) подходящим основанием, таким как, например, гидроксид натрия, в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, тетрагидрофуран или спирт, например этанол и т.п.
Соединения формулы (I) можно также превратить друг в друга посредством реакций, известных в данной области техники, или превращениями функциональных групп.
Соединения формулы (I) можно также превратить в фармацевтически приемлемую кислотноаддитивную соль реакцией с подходящей кислотой, такой как, например, хлористо-водородная кислота, в подходящем растворителе, таком как, например, спирт, например 2-пропанол, диэтиловый простой эфир, диизопропиловый простой эфир.
Некоторые из промежуточных продуктов и исходных веществ являются известными соединениями и могут быть коммерчески доступными или их можно получить согласно известным в данной области
- 13 021883 методикам.
В общем, промежуточные продукты формулы (II) можно получить гидрированием промежуточного продукта формулы (VII) в присутствии подходящего металлического катализатора, такого как, например, никель Ренея, в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, спирт, например метанол или этанол и т.п.; или платина на угле, в присутствии подходящего каталитического яда, такого как раствор тиофена и пентаоксид ванадия, в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, тетрагидрофуран.
Промежуточные продукты формулы (VII) можно получить реакцией промежуточного продукта формулы (VIII) с промежуточным продуктом формулы (IX), где ТО2 представляет собой подходящую уходящую группу, такую как, например, атом галогена, например хлора, брома, фтора и т.д., в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, Ν,Ν-диметилсульфоксид. Добавление подходящего основания, такого как, например, карбонат или гидрокарбонат щелочного или щелочно-земельного металла или органическое основание, например Ν,Ν-диизопропилэтиламин, триэтиламин, карбонат натрия, гидрокарбонат натрия или карбонат калия, можно применять для связывания кислоты, которая выделяется во время реакции.
Промежуточные продукты формулы (VIII) можно получить из соответствующего промежуточного продукта формулы (X) в присутствии никеля Ренея и ΝΗ3 и в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, спирт, например метанол и т.п.
Промежуточные продукты формулы (X), где К1 представляет собой гидрокси-С1-4алкил, например, -СН(ОН)(СН3), причем указанные промежуточные продукты представлены формулой (Х-а), можно также получить из промежуточного продукта формулы (XI) реакцией с СН3МдС1 в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, тетрагидрофуран.
Такую же реакцию можно применять для получения соединений с другими группами гидрокси-С14алкил. Например, промежуточные продукты, где К1 представляет собой С(ОН)(СН3)2, можно получить из соответствующего промежуточного продукта с -С(=О)-СН3.
Промежуточные продукты формулы (XI) можно получить реакцией промежуточного продукта формулы (XII) с цианидом натрия в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, Ν,Νдиметилформамид.
- 14 021883
Альтернативно, промежуточные продукты формулы (XI) можно также получить окислением соответствующего гидроксианалога в присутствии периодинана Десса-Мартина и подходящего растворителя, такого как, например, дихлорметан.
Промежуточные продукты формулы (XII) можно получить реакцией промежуточного продукта формулы (XIII) с СН31 в присутствии подходящего растворителя, такого как спирт, например этанол.
Промежуточные продукты формулы (XIII) можно получить реакцией промежуточного продукта формулы (XIV) с солью Эшенмозера в присутствии уксусной кислоты.
Промежуточные продукты формулы (XIV) можно получить окислением соответствующего гидроксильного аналога в присутствии подходящего окисляющего агента, такого как, например, МпО2, в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, дихлорметан.
Промежуточные продукты формулы (III), где Ζ представляет собой радикал формулы (ζ-2) и К4 представляет собой гидроксил, причем указанные промежуточные продукты представлены формулой (Ш-а), можно получить восстановлением промежуточного продукта формулы (Ш-Ь) подходящим восстанавливающим агентом, таким как, например, ΝαΒΗ4, в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, спирт, например метанол.
Промежуточные продукты формулы (Ш-а) можно превратить в промежуточные продукты формулы (Ш-с) реакцией с С1-4алкилиодидом в присутствии подходящего основания, такого как гидрид натрия, и подходящего растворителя, такого как, например, тетрагидрофуран. Промежуточные продукты формулы (Ш-Ь) можно получить окислением промежуточного продукта формулы (Ш-а) реакцией с подходящим окисляющим агентом, таким как, например, МпО2, в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, дихлорметан. Промежуточные продукты формулы (Ш-Ь) можно превратить в промежуточный продукт формулы (Ш-ά) реакцией с С1-4алкил-МдС1 в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, тетрагидрофуран.
Промежуточные продукты формулы (Ш-а) можно также получить перемешиванием промежуточного продукта формулы (XV) в смеси метанол/ΝΗ,. При желании, промежуточный продукт формулы (Ш-а) можно превратить в промежуточный продукт формулы (XV) перемешиванием в смеси уксусного ангидрида и пиридина.
- 15 021883
δ-энантиомер промежуточного продукта (ΙΙΙ-а), называемый в контексте промежуточным продуктом формулы (Ш-а-1), и К-энантиомер промежуточного продукта (XV), называемый в контексте промежуточным продуктом формулы (Χν-Ь), можно получить добавлением липазы СапбМа АШагбса В к рацемической смеси промежуточного продукта формулы (ΙΙΙ-а) в подходящем растворителе, таком как этениловый эфир уксусной кислоты (см. схему 1). При желании, промежуточный продукт формулы (Χν-Ь) можно превратить в К-энантиомер промежуточного продукта (ΙΙΙ-а), называемый в контексте промежуточным продуктом формулы (Ш-а-2), реакцией в смеси МеОН/ΝΗ,.
Данный способ позволяет превратить один из энантиомеров исходной рацемической смеси в его ацетат с ее (энантиомерный избыток) >99% и выходом 58% и второй изомер выделить с ее >99% и выходом 42%.
Термин энантиомерный избыток (ее) хорошо известен специалисту в области стереохимии. Для смеси (+)- и (-)-энантиомеров с составом, указанным как молярные или массовые части Р(+) и Р(-) (где Р(+)+Р(-)=1), энантиомерный избыток для Р(*) устанавливают как Р(+)-Р(-) и процентный энантиомерный избыток как 100*[Р(+)-Р(-)].
Схема 1
Альтернативно, К-энантиомер промежуточного продукта (ΙΙΙ-а), называемый в контексте промежуточным продуктом формулы (Ш-а-2), и δ-энантиомер промежуточного продукта (XV), называемый в контексте промежуточным продуктом формулы (Χν-а), можно получить добавлением липазы СапбМа АПатйса В к рацемической смеси промежуточного продукта формулы (XV) в воде (см. схему 2). При желании, промежуточный продукт формулы (Χν-а) можно превратить в промежуточный продукт (ΙΙΙ-а1) реакцией в смеси МеОН/ΝΗ,.
Альтернативно, промежуточный продукт формулы (ΙΙΙ-а) можно также разделить на его энантиомеры хиральной колоночной хроматографией.
Промежуточные продукты формулы (XV) можно получить перемешиванием промежуточного продукта формулы (XV!) в уксусном ангидриде.
Промежуточный продукт формулы ^Щ), у которого ^1 представляет собой хлор, называемый в контексте промежуточным продуктом формулы ^Щ-а), можно получить добавлением хлорида бензилтриэтиламмония и хлорида натрия к раствору промежуточного продукта формулы (XV]!) в ацетонитриле с последующим добавлением концентрированной хлористо-водородной кислоты.
- 16 021883
Промежуточные продукты формулы (XVII) можно получить добавлением дымящей азотной кислоты к серной кислоте с последующим добавлением порциями 1-оксида 6,7-дигидро-5Нциклопента[Ь]пиридина.
Промежуточные продукты формулы (IV) можно получить согласно указанным выше протоколам реакций для получения промежуточных продуктов формулы (II).
Промежуточные продукты формулы (V) можно получить удалением защиты у промежуточного продукта формулы (XVIII), у которого Р представляет собой подходящую защитную группу, такую как, например, -С(=О)-О-С(СН3)3, в присутствии подходящей кислоты, такой как, например, хлористоводородная кислота, и подходящего растворителя, такого как, например, ацетонитрил.
Промежуточные продукты формулы (XVIII) можно получить реакцией промежуточного продукта формулы (XIX) с промежуточным продуктом формулы (III) в присутствии инертного в условиях реакции растворителя, такого как, например, спирт, например метанол, этанол, 2-метоксиэтанол, пропанол, изопропанол, бутанол и т.п.; простой эфир, например 1,4-диоксан, предпочтительно в присутствии подходящей кислоты, такой как, например, НС1, 1,1'-оксибиспропан и т.п.; кетон, например 4-метил-2пентанон; или Ν,Ν-диметилформамид, нитробензол, ацетонитрил и т.п. Добавление подходящего основания, такого как, например, карбонат или гидрокарбонат щелочного или щелочно-земельного металла или органическое основание, например Ν,Ν-диизопропилэтиламин, триэтиламин, карбонат натрия или карбонат калия, можно применять для связывания кислоты, которая выделяется во время реакции. Небольшое количество подходящего иодида металла, например иодида натрия или калия, можно добавлять для промотирования реакции. Перемешивание может повысить скорость реакции. Реакцию можно преимущественно проводить при температуре между комнатной температурой и температурой флегмы и, если необходимо, реакцию можно проводить при повышенном давлении.
Промежуточные продукты формулы (XIX) можно получить согласно протоколам реакций, описанным выше для промежуточных продуктов формулы (II).
Промежуточные продукты формулы (VI) можно получить реакцией промежуточного продукта формулы (XX), в которой Р представляет собой подходящую уходящую группу, которая имеет значения, указанные выше, и Ку представляет собой -С1-4алкил-О-§1(СН3)2-С(СН3)3, в присутствии подходящей кислоты, такой как, например, трифторуксусная кислота, и подходящего растворителя, такого как, например, дихлорметан.
Промежуточные продукты формулы (XX) можно получить реакцией промежуточного продукта формулы (XXI) с промежуточным продуктом формулы (III) в присутствии инертного в реакционных условиях растворителя, такого как, например, спирт, например метанол, этанол, 2-метоксиэтанол, пропанол, изопропанол и т.п.; простой эфир, например 1,4-диоксан, предпочтительно в присутствии подходящей кислоты, такой как, например, НС1, 1,1'-оксибиспропан и т.п.; кетон, например 4-метил-2-пентанон; или Ν,Ν-диметилформамид, нитробензол, ацетонитрил и т.п. Добавление подходящего основания, такого как, например, карбонат или гидрокарбонат щелочного или щелочно-земельного металла или органиче- 17 021883 ское основание, например Ν,Ν-диизопропилэтиламин, триэтиламин, карбонат натрия или карбонат калия, можно применять для связывания кислоты, которая выделяется во время реакции. Небольшое количество подходящего иодида металла, например иодида натрия или калия, можно добавлять для промотирования реакции. Перемешивание может повысить скорость реакции. Реакцию можно преимущественно проводить при температуре между комнатной температурой и температурой флегмы и, если необходимо, реакцию можно проводить при повышенном давлении.
Промежуточные продукты формулы (XXI) можно получить из соответствующего нитропромежуточного продукта формулы (XXII) гидрированием в присутствии подходящего катализатора, такого как, например, никель Ренея, и подходящего растворителя, такого как, например, спирт, например метанол и т.п.
Промежуточные продукты формулы (XXII), где Р представляет собой -С(=О)-С1-4алкил, причем эти промежуточные продукты представлены формулой (XXII-а), можно получить реакцией промежуточного продукта формулы (XXIII) с ди-трет-бутилдикарбонатом в присутствии подходящего основания, такого как, например, триэтиламин, и подходящего растворителя, такого как, например, 4(диметил)аминопиридин.
(ХХП-а)
Промежуточные продукты формулы (XIII) можно получить реакцией промежуточного продукта формулы (XXIV) с промежуточным продуктом формулы (IX) в присутствии подходящего основания, такого как, например, бикарбонат натрия, и подходящего растворителя, такого как, например, Ν,Νдиметилсульфоксид.
Промежуточные продукты формулы (XXIV) можно получить реакцией промежуточного продукта формулы (XXV) с ΝΗ3 в присутствии подходящего катализатора, такого как, например, никель Ренея, и в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, спирт, например метанол и т.п.
- 18 021883
(ΧΧΥ) (χχίν)
Промежуточные продукты формулы (XXV) можно получить реакцией промежуточного продукта формулы (XXVI) с трет-бутилдиметилсилилхлоридом в присутствии подходящего основания, такого как, например, имидазол, и подходящего растворителя, такого как, например, тетрагидрофуран.
Промежуточные продукты формулы (XXVI) можно получить, как описано выше для промежуточных продуктов формулы (XI).
Соединения формулы (I) и некоторые из промежуточных продуктов в настоящем изобретении могут содержать асимметричный атом углерода. Чистые стереохимически изомерные формы этих соединений и этих промежуточных продуктов можно получить посредством применения известных в данной области техники методик. Например, диастереоизомеры можно разделить физическими способами, такими как селективная кристаллизация или хроматографические методики, например, распределение в противоточном потоке, жидкостная хроматография и подобные способы. Энантиомеры можно получить из рацемических смесей сначала превращением указанных рацемических смесей при помощи подходящих разделяющих агентов, таких как, например, хиральные кислоты, в смеси диастереомерных солей или соединений; затем физическим разделением этих смесей диастереомерных солей или соединений, например, селективной кристаллизацией, суперкритической жидкостной хроматографией или хроматографическими способами, например, жидкостной хроматографией, и подобными способами, и, наконец, превращением этих разделенных диастереомерных солей или соединений в соответствующие энантиомеры. Стереохимически чистые изомерные формы можно также получить из стереохимически чистых изомерных форм подходящих промежуточных продуктов и исходных веществ, при условии, что реакции превращения проходят стереоспецифическим образом.
Соединения формулы (I), в том числе их стереохимически изомерные формы, их фармацевтически приемлемые соли или их сольваты, обладают ценными фармакологическими свойствами, проявляющимися в том, что они повышают экспрессию р53, проявляют сильную антипролиферативную активность, проявляют сильную противоопухолевую активность.
Как указано выше, соединения изобретения повышают экспрессию р53 при проведении анализа, описанного в разделе С.1. Это повышение может быть вызвано, но не ограничивается ими, одним или несколькими следующими механизмами действия:
взаимодействие с предшествующими или последующими мишенями, например, киназами или ферментами, активности которых принимают участие в убиквитинации или §ИМО-модификации, непосредственная или опосредованная стабилизация белка р53, например, сохранением этого белка в его функциональной структурной форме или предотвращением ошибочного фолдинга (ошибочной укладки);
увеличение экспрессии р53 или экспрессии членов семейства р53, например р63 и р73; повышение активности р53, например (но без ограничения этим), повышением его транскрипционной активности, и/или повышение экспрессии генов и белков пути передачи сигналов р53, например (но без ограничения указанным), р21 \\αΠ. οίρ1, МГС-1 (ΟΌΡ-15), РЮ-3, Вах, Рита, Νοχα и ЛТР-3.
Следовательно, в настоящем изобретении описываются соединения формулы (I) для применения в качестве лекарственных средств, в частности для лечения рака или родственных заболеваний, для ингибирования роста опухолей, для повышения экспрессии р53.
Кроме того, изобретение относится также к применению соединения для изготовления лекарственного средства для лечения нарушения, опосредуемого посредством пониженной экспрессии р53, в частности, для лечения рака, где упомянутым соединением является соединение формулы (I).
Термин лечение, применяемый в контексте, относится к любому лечению заболевания и/или состояния у животного, особенно человека, и включает в себя (ί) предотвращение появления заболевания и/или состояния у субъекта, который может быть предрасположен к такому заболеванию или состоянию, но у которого оно еще не диагностировано; (ίί) подавление заболевания и/или состояния, т.е. задержка его развития; (ίίί) ослабление заболевания и/или состояния, т.е. индуцирование регресса заболевания
- 19 021883 и/или состояния.
Термин нарушение, опосредуемое посредством пониженной экспрессии р53 означает любое нежелательное или пагубное состояние, которое можно ингибировать, развитие которого можно задерживать, которое можно ослабить или регресс которого можно вызвать апоптозом, индуцированием гибели клеток или регуляцией клеточного цикла.
В настоящем описании раскрывается также способ лечения нарушения, опосредуемого пониженной экспрессией р53, в частности лечение рака, введением эффективного количества соединения настоящего изобретения субъекту, например, млекопитающему (и более конкретно человеку), нуждающемуся в таком лечении.
Соединения изобретения могут обладать антипролиферативными действиями в клетках опухолей, даже если такие клетки лишены функционального белка р53. Более конкретно, соединения изобретения могут обладать антипролиферативными действиями в опухолях с р53 дикого типа или мутантным р53 и/или опухолях, сверхэкспрессирующих ΜΌΜ2. Соединения могут воздействовать на ангиогенез, миграцию, инвазию и метастаз опухолевых клеток.
Таким образом, в данном описании раскрывается ингибирование роста опухолей соединением настоящего изобретения.
Примеры опухолей, включающих злокачественные новообразования взрослых людей и детей, которые могут ингибировать соединения настоящего изобретения, включают, но не ограничиваются перечисленным, рак легких, включающий мелкоклеточный рак легких и немелколеточный рак легких (например, аденокарциному), раковые заболевания поджелудочной железы, раковые заболевания толстой кишки (например, колоректальные карциномы, такие как, например, аденокарцинома толстой кишки и аденома толстой кишки), эзофагеальный рак, плоскоклеточный рак полости рта, карциному языка, карциному желудка, рак печени, ринофарингеальный рак, опухоли кроветворных лимфоидных тканей (например, острый лимфобластный лейкоз, В-клеточную лимфому, лимфому Беркитта), неходжкинскую лимфому (например, лимфому клеток головного мозга), лимфому Ходжкина, миелоидные лейкозы (например, острый миелоидный лейкоз (ЛМЬ) или хронический миелоидный лейкоз (СМЬ)), острый лимфобластный лейкоз, хронический лимфобластный лейкоз (СЬЬ), рак фолликул щитовидной железы, синдром миелодисплазии (ΜΌδ), опухоли мезенхимального происхождения, саркомы мягких тканей, липосаркомы, саркомы желудочно-кишечной стромы, злокачественные опухоли оболочки периферических нервов (ΜΡΝδΤ), саркомы Юинга, лейомиосаркомы, мезенхимальные хондросаркомы, лимфосаркомы, фибросаркомы, рабдомиосаркомы, меланомы, тератокарциномы, нейробластомы, опухоли головного мозга, медуллобластому, глиомы, доброкачественную опухоль кожи (например, кератоакантому), рак молочной железы (например, запущенный рак молочной железы), карциному почек, нефробластому, карциному яичников, цервикальную карциному, рак эндометрия, карциному мочевого пузыря, рак простаты, включающий запущенное заболевание и гормонрезистентный рак простаты, тестикулярные раковые заболевания, остеосаркому, рак головы и шеи, эпидермальную саркому, множественную миелому (например, резистентную множественную миелому), мезотелиому. Конкретными раковыми заболеваниями, которые можно лечить соединениями настоящего изобретения, являются рак молочной железы, колоректальный рак, немелкоклеточный рак легких, острый миелоидный лейкоз (ΛΜΕ).
Ввиду полезных фармакологических свойств соединений объектов данного изобретения, их можно изготовить в составе различных фармацевтических форм для целей введения.
Для изготовления фармацевтических композиций данного изобретения эффективное количество соединения настоящего изобретения в качестве активного ингредиента объединяют для образования однородной смеси с фармацевтически приемлемым носителем, который может иметь различные формы в зависимости от формы препарата, требуемого для введения. Эти фармацевтические композиции желательны в виде единичной дозированной формы, подходящей предпочтительно для введения перорально, ректально, подкожно или парентеральной инъекцией. Например, при изготовлении композиций в пероральной дозированной форме можно применять любую из обычных фармацевтических сред, таких как, например, вода, гликоли, масла, спирты и т.п., в случае пероральных жидких препаратов, таких как суспензии, сиропы, эликсиры и растворы, или твердые носители, такие как крахмалы, сахара, каолин, лубриканты, связывающие вещества, дезинтегрирующие агенты и т.п., в случае порошков, пилюль, капсул и таблеток.
Вследствие легкости их введения, таблетки и капсулы представляют собой наиболее подходящую пероральную единичную дозированную форму, в этом случае, несомненно, применяют твердые фармацевтические носители. Для парентеральных композиций носитель обычно содержит стерильную воду, по меньшей мере, в качестве его большей части, хотя могут быть включены другие ингредиенты, например, для способствования растворимости компонентов. Например, можно изготовить инъецируемые растворы, в которых носитель содержит солевой раствор, раствор глюкозы или смесь солевого раствора и раствора глюкозы. Можно также изготовить инъецируемые суспензии, в этом случае можно применять подходящие жидкие носители, суспендирующие агенты и т.п. В композициях, подходящих для подкожного введения, носитель необязательно содержит агент, повышающий проникновение, и/или подходящий смачивающий агент, необязательно в сочетании с подходящими добавками любой природы в небольших
- 20 021883 количествах, причем добавки не оказывают значительное вредное воздействие на кожу. Указанные добавки могут облегчить введение в кожу и/или могут быть полезными при изготовлении требуемых композиций. Эти композиции можно вводить различными путями, например, в виде чрескожного пластыря, посредством нанесения пятен, в виде мази. Особенно подходящим является изготовление вышеуказанных фармацевтических композиций в виде единичной дозированной формы вследствие легкости введения и однородности дозы. Единичная дозированная форма, описываемая для применения в контексте описания и формулы изобретения, относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве унифицированных доз, причем каждая единица содержит предварительно определенное количество активного ингредиента, вычисленное для обеспечения требуемого терапевтического действия, в сочетании с требуемым фармацевтическим носителем. Примерами таких единичных дозированных форм являются таблетки (в том числе таблетки с насечками и таблетки, покрытые оболочками), капсулы, пилюли, пакетики с порошком, облатки, инъецируемые растворы или суспензии, полные чайные ложки, полные столовые ложки и т.п., и их сегрегированные многократные дозы.
Особенно благоприятным является изготовление вышеуказанных фармацевтических композиций в виде единичной дозированной формы вследствие легкости введения и однородности дозы. Единичная дозированная форма, описываемая в контексте описания и формулы изобретения, относится к физически дискретным единицам, подходящим в качестве унифицированных доз, причем каждая единица содержит предварительно определенное количество активного ингредиента, вычисленное для обеспечения требуемого терапевтического действия, в сочетании с требуемым фармацевтическим носителем. Примерами таких единичных дозированных форм являются таблетки (в том числе таблетки с насечками и таблетки, покрытые оболочками), капсулы, пилюли, пакетики с порошком, облатки, инъецируемые растворы или суспензии, полные чайные ложки, полные столовые ложки и т.п., и их сегрегированные многократные дозы.
Соединения изобретения вводят в количестве, достаточном для индуцирования апоптоза, индуцирования гибели клеток или регуляции клеточного цикла.
Таким образом, соединения изобретения вводят в количестве, достаточном для увеличения экспрессии р53 или проявления противоопухолевой активности.
Специалист в данной области может легко определить эффективное количество на основании результатов испытания, представленных далее в контексте. В общем, предполагается, что терапевтически эффективное количество может быть от 0,005 до 100 мг/кг массы тела и конкретно от 0,005 до 10 мг/кг массы тела. Для введения требуемой дозы может быть подходящим введение одной, двух, трех, четырех или более поддоз через подходящие интервалы времени на протяжении дня. Указанные поддозы можно изготовить в виде единичных дозированных форм, например, содержащих от 0,5 до 500 мг, конкретно от 1 до 500 мг, более конкретно от 10 до 500 мг активного ингредиента на единичную дозированную форму.
В зависимости от способа введения., фармацевтическая композиция предпочтительно может содержать от 0,05 до 99 мас.%, более предпочтительно от 0,1 до 70 мас.%, еще более предпочтительно от 0,1 до 50 мас.% соединения настоящего изобретения и от 1 до 99,95 мас.%, более предпочтительно от 30 до 99,9 мас.%, еще более предпочтительно от 50 до 99,9 мас.% фармацевтически приемлемого носителя, причем все проценты вычислены в расчете на общую массу композиции.
В качестве другого аспекта настоящего изобретения предложена комбинация соединения настоящего изобретения с другим противораковым агентом, особенно для применения в качестве лекарственного средства, более конкретно, при лечении рака или родственных заболеваний.
Для лечения указанных выше состояний соединения изобретения можно преимущественно применять в комбинации с одним или несколькими другими лекарственными средствами, более конкретно с другими противораковыми агентами или адъювантами при терапии рака.
Примеры противораковых агентов или адъювантов (агентов, усиливающих действие лекарственных средств в терапии) включают, но не ограничиваются перечисленным:
- 21 021883 координационные соединения платины, например цисплатин, необязательно в комбинации с амифостином, карбоплатин или оксалиплатин;
таксановые соединения, например паклитаксел, частицы паклитаксела, связанные с белком (АЬгахапе™) или доцетаксел;
ингибиторы топоизомеразы I, такие как камптотециновые соединения, например иринотекан, 3Ν-38, топотекан, топотекан Ьс1;
ингибиторы топоизомеразы II, такие как противоопухолевые эпиподофиллотоксины или производные подофиллотоксина, например этопозид, этопозида фосфат или тенипозид;
противоопухолевые винкаалкалоиды, например винбластин, винкристин или винорелбин;
противоопухолевые производные нуклеозидов, например 5фторурацил, лейковорин, гемцитабин, гемцитабин Ьс1, капецитабин, кладрибин, флударабин, неларабин;
алкилирующие агенты, такие как азотный аналог горчичного газа или нитрозомочевина, например циклофосфамид, хлорамбуцил, кармустин, тиотепа, мефалан (мелфалан), ломустин, альтретамин, бусулфан, дакарбазин, эстрамустин, ифосфамид, необязательно в комбинации с месной, пипоброманом, прокарбазином, стрептозоцином, телозоломидом, урацилом;
противоопухолевые производные антрациклина, например даунорубицин, доксорубицин, необязательно в комбинации с дексразоксаном, доксилом, идарубицином, митоксантроном, эпирубицином, эпирубицином Ьс1, валрубицином;
молекулы, которые нацелены на рецептор 1СЕ-1, например, пикроподофиллин;
производные тетракарцина, например тетрокарцин А; глюкокортикоид, например преднизон;
антитела, например трастузумаб (антитело НЕК2), ритуксимаб (антитело ΟΌ20), гемтузумаб, гемтузумаб озогамицин, цетуксимаб, пертузумаб, бевацизумаб, алемтузумаб, экулизумаб, ибритумомаб тиуксетан, нофетумомаб, панитумумаб, тозитумомаб, СЫТО 328;
антагонисты рецептора эстрогена или селективные модуляторы рецептора эстрогена или ингибиторы синтеза эстрогена, например тамоксифен, фулвестрант, торемифен, дролоксифен, фаслодекс, ралоксифен или летрозол;
ингибиторы ароматазы, такие как эксеместан, анастрозол, летразол, тестолактон и ворозол;
дифференцирующие агенты, такие как ретиноиды, витамин ϋ или ретиноевая кислота и агенты, блокирующие метаболизм ретиноевой кислоты (ΚΑΜΒΑ), например аккутан;
ингибиторы ДНК-метилтрансферазы, например азацитидин или децитабин;
антифолаты, например, преметрексед-динатрий;
- 22 021883 антибиотики, например антиномицин ϋ, блеомицин, митомицин С, дактиномицин, карминомицин, дауномицин, левамизол, пликамицин, митрамицин;
антиметаболитики, например клофарабин, аминоптерин, цитозина арабинозид или метотрексат, азацитидин, цитарабин, флоксуридин, пентостатин, тиогуанин;
индуцирующие апоптоз агенты и антиангиогенные агенты, такие как ингибиторы Вс1-2, например УС 137, ВН 312, АВТ 737, госсипол, НА 14-1, ТИ 37 или декановая кислота;
связывающие тубулин агенты, например комбрестатин, колхицины или нокодазол;
ингибиторы киназы, например ингибиторы ЕСГК (рецептор эпителиального фактора роста) , ΜΤΚΙ (ингибиторы многоцелевой киназы), ингибиторы шТОК, например флавоперидол, иматиниба мезилат, эрлотиниб, гефитиниб, дазатиниб, лапатиниб, лапатиниба дитозилат, сорафениб, сунитиниб, сунитиниба малеат, темсиролимус;
ингибиторы фарнезилтрансферазы, например типифарниб; ингибиторы гистондеацетилазы (НБАС), например бутират натрия, субероиланилид гидроксамовой кислоты (ЗАНА), депсипептид (ГК 901228), ΝνΡ-ΙΑ<2824, К306465, σΝσ-26481585, трихостатин А, вориностат;
ингибиторы пути убихитин-протеазомы, например Ρ3-341, ΜΙΛΙ. 41 или бортезомиб;
ионделиз;
ингибиторы теломеразы, например теломестатин; ингибиторы металлопротеиназы матрикса, например батимастат, маримастат, приностат или метастат;
рекомбинантные интерлейкины, например альдеслейкин, денилейкин дифтитокс, интерферон альфа 2а, интерферон альфа 2Ь, пегинтерферон альфа 2Ь;
ингибиторы МАРК; * ретиноиды, например алитретиноин, бексаротен, третиноин; триоксид мышьяка;
аспарагиназа;
стероиды, например дромостанолона пропионат, мегестрола ацетат, нандролона (деканоат, фенпропионат), дексаметазон;
агонисты или антагонисты гормона, высвобождающего гонадотропин, например абареликс, гозерелина ацетат, гистрелина ацетат, лейпролида ацетат;
талидомид, леналидомид;
меркаптопурин, митотан, памидронат, пегадемаза, пегаспартаза, расбуриказа;
миметики ВИЗ, например, АВТ-737;
ингибиторы МЕК, например, Ρϋ98059, ΑΖϋ6244, С1-1040; аналоги колониестимулирующего фактора, например филграстим, пегфилграстим, сарграмостим; эритропоэтин или его аналоги (например, дарбероэтин альфа); интерлейкин 11; опрелвекин; золедронат, золедроновая кислота; фентанил;
- 23 021883 бисфосфонат; палифермин;
ингибитор стероидной цитохром Р450-17альфа-гидроксилаза17,20-лиазы (СУР17), например абиратерон, абиратерона ацетат.
Как указано выше, соединения настоящего изобретения имеют также терапевтические применения для сенсибилизации опухолевых клеток во время радиотерапии и химиотерапии.
Поэтому соединения настоящего изобретения можно применять в качестве радиосенсибилизирующего вещества и/или химиосенсибилизирующего вещества или можно вводить в комбинации с другим радиосенсибилизирующим веществом и/или химиосенсибилизирующим веществом.
Применяемый в контексте термин радиосенсибилизирующее вещество означает молекулу, предпочтительно молекулу с низкой молекулярной массой, вводимую животным в терапевтически эффективных количествах для повышения чувствительности клеток к ионизирующему излучению и/или для стимуляции лечения заболеваний, которые поддаются излечению ионизирующим излучением.
Применяемый в контексте термин химиосенсибилизирующее вещество означает молекулу, предпочтительно молекулу с низкой молекулярной массой, вводимую животным в терапевтически эффективных количествах для повышения чувствительности клеток к химиотерапии и/или стимуляции лечения заболеваний, которые поддаются излечению химиотерапией.
В литературе предложено несколько механизмов способа действия радиосенсибилизирующих веществ, включающих механизмы, при которых радиосенсибилизирующие гипоксические клетки вещества (например, производные 2-нитроимидазола и производные диоксида бензотриазина) имитируют кислород или действуют альтернативно, подобно биоредуктивным агентам при гипоксии; радиосенсибилизирующие негипоксические клетки вещества (например, галогенированные пиримидины) могут быть аналогами оснований ДНК и предпочтительно включаются в ДНК раковых клеток и тем самым стимулируют индуцированное радиацией разрушение молекул ДНК и/или препятствуют действию механизмов репарации нормальной ДНК; выдвинуты также гипотезы различных других потенциальных механизмов действия радиосенсибилизирующих веществ при лечении заболевания.
Во многих протоколах лечения рака в настоящее время применяют радиосенсибилизирующие вещества в сочетании с рентгеновским излучением. Примеры активирующих рентгеновское излучение радиосенсибилизирующих веществ включают, но не ограничиваются перечисленным, следующие вещества: метронидазол, мизонидазол, десметилмизонидазол, пимонидазол, этанидазол, ниморазол, митомицин С, КЗи 1069, 8К 4233, ЕО9, КВ 6145, никотинамид, 5-бромдеоксиуридин (ВШК), 5-иоддеоксиуридин (ЮбК), бромдеоксицитидин, фтордеоксиуридин (РибК), гидроксимочевину, цисплатин и их терапевтически активные аналоги и производные.
При фотодинамической терапии (ΡΌΤ) раковых заболеваний применяют видимый свет в качестве активатора радиации сенсибилизирующего агента. Примеры фотодинамических радиосенсибилизирующих веществ включают, но не ограничиваются указанными веществами, производные гематопорфирина, фотофрин, производные бензопорфирина, этиопорфирин олова, феоборбид-а, бактериохлорофилл-а, нафталоцианины, фталоцианины, фталоцианины цинка и их терапевтически эффективные аналоги и производные.
Радиосенсибилизирующие вещества можно вводить в сочетании с терапевтически эффективным количеством одного или нескольких соединений, включающих, но не ограничивающихся перечисленным, соединения, которые стимулируют включение радиосенсибилизирующих веществ в клеткимишени; соединения, которые регулируют поток терапевтических средств, питательных веществ и/или кислорода в клетки-мишени; химиотерапевтические агенты, которые воздействуют на опухоль вместе с дополнительной радиацией или без нее, или другие терапевтически эффективные соединения для лечения рака или другого заболевания.
Химиосенсибилизирующие вещества можно вводить в сочетании с терапевтически эффективным количеством одного или нескольких других соединений, включающих, но не ограничивающихся перечисленным, соединения, которые стимулируют включение химиосенсибилизирующих веществ в клеткимишени; соединения, которые регулируют поток терапевтических средств, питательных веществ и/или кислорода в клетки-мишени; химиотерапевтические агенты, которые воздействуют на опухоль, или другие терапевтически эффективные соединения для лечения рака или другого заболевания. Обнаружено, что антагонисты кальция, например, верапамин, являются применимыми в комбинации с противоопухолевыми агентами для создания чувствительности к химиотерапии в опухолевых клетках, устойчивых к переносимым химиотерапевтическим агентам, и для повышения эффективности таких соединений в чувствительных к лекарственным средствам злокачественных образованиях.
Ввиду их полезных фармакологических свойств, компоненты комбинаций согласно изобретению, т.е. одно или несколько других противораковых средств и соединение согласно настоящему изобретению можно изготовлять в составе различных фармацевтических форм для целей введения. Компоненты можно изготовлять раздельно в отдельных фармацевтических композициях или в одной фармацевтической композиции, содержащей все компоненты.
Одно или несколько других противораковых средств и соединение согласно настоящему изобрете- 24 021883 нию можно вводить одновременно (например, в разных композициях или в одной композиции) или последовательно в любом порядке. В последнем случае два или более соединений можно вводить в пределах периода времени и в количестве и способом, которые достаточны для гарантирования того, что достигается полезное или синергическое действие. Должно быть понятно, что предпочтительный способ и порядок введения и соответствующие дозированные количества и схемы приема для каждого компонента комбинации будет зависеть от вводимого конкретного другого лекарственного средства и соединения настоящего изобретения, пути их введения, конкретной подвергаемой лечению опухоли и конкретного хозяина, подвергаемого лечению. Оптимальный способ и порядок введения и дозированные количества и схему приема может легко определить специалист в данной области с применением общепринятых способов и с учетом информации, приведенной в контексте.
Массовое отношение соединения согласно настоящему изобретению и одного или нескольких других противораковых агентов при приеме их в комбинации может определить специалист в данной области. Указанное отношение и точная доза и частота введения зависят от конкретного соединения согласно изобретению и другого применяемого противоракового агента(ов), конкретного, подвергаемого лечению состояния, тяжести подвергаемого лечению состояния, возраста, массы, пола, питания, времени введения и общего физического состояния конкретного пациента, способа введения, а также другой лекарственной терапии, которую может принимать индивидуум, что хорошо известно специалисту в данной области. Кроме того, очевидно, что эффективное суточное количество можно уменьшить или увеличить в зависимости от реакции подвергаемого лечению субъекта и/или в зависимости от оценки лечащего врача, прописывающего соединения настоящего изобретения. Конкретное массовое отношение настоящего соединения формулы (I) и другого противоракового агента может составлять от 1/10 до 10/1, более конкретно от 1/5 до 5/1, еще более конкретно от 1/3 до 3/1.
Координационное соединение платины преимущественно вводят при дозе 1-500 мг на квадратный метр (мг/м2) площади поверхности тела, например 50-400 мг/м2, конкретно для цисплатина доза составляет приблизительно 75 мг/м2 и для карбоплатина приблизительно 300 мг/м2 на курс лечения.
Таксановое соединение преимущественно вводят при дозе 50-400 мг/м2 площади поверхности тела, например 75-250 мг/м2, конкретно паклитаксел вводят при дозе приблизительно 175-250 мг/м2 и доцетаксел вводят при дозе приблизительно 75-150 мг/м2 на курс лечения.
Камптотециновое соединение преимущественно вводят при дозе 0,1-400 мг/м2 площади поверхности тела, например 1-300 мг/м2, конкретно иринотекан вводят при дозе приблизительно 100-350 мг/м2 и топотекан вводят при дозе приблизительно 1-2 мг/м2 на курс лечения.
Противоопухолевое производное подофиллотоксина преимущественно вводят при дозе 30-300 мг/м2 площади поверхности тела, например 50-250 мг/м2, конкретно этопозид вводят при дозе приблизительно 35-100 мг/м2 и тенипозид вводят при дозе приблизительно 50-250 мг/м2 на курс лечения.
Противоопухолевый винкаалкалоид преимущественно вводят при дозе 2-30 мг/м2 площади поверхности тела, конкретно винбластин вводят при дозе приблизительно 3-12 мг/м2, винкристин вводят при дозе приблизительно 1-2 мг/м2 и винорелбин вводят при дозе приблизительно 10-30 мг/м2 на курс лечения.
Противоопухолевое производное нуклеозида преимущественно вводят при дозе 200-2500 мг/м2 площади поверхности тела, например 700-1500 мг/м2, конкретно для 5-РИ доза составляет 200-500 мг/м2, для гемцитабина доза приблизительно составляет 800-1200 мг/м2 и для капецитабина доза составляет приблизительно 1000-2500 мг/м2 на курс лечения.
Алкилирующие агенты, такие как азотистый аналог горчичного газа или нитрозомочевина, преимущественно вводят при дозе 100-500 мг/м2 площади поверхности тела, например 120-200 мг/м2, конкретно циклофосфамид вводят при дозе приблизительно 100-500 мг/м2, хлорамбуцил вводят при дозе приблизительно 0,1-0,2 мг/м2, кармустин вводят при дозе приблизительно 150-200 мг/м2 и ломустин вводят при дозе приблизительно 100-150 мг/м2 на курс лечения.
Противоопухолевое производное антрациклина преимущественно вводят при дозе 10-75 мг/м2 площади поверхности тела, например 15-60 мг/м2, конкретно для доксорубицина доза составляет приблизительно 40-75 мг/м2, для даунорубицина доза составляет приблизительно 25-45 мг/м2 и для идарубицина доза составляет приблизительно 10-15 мг/м2 на курс лечения.
Антиэстрогенный агент преимущественно вводят при дозе приблизительно 1-100 мг ежедневно в зависимости от конкретного агента и подвергаемого лечению состояния. Тамоксифен преимущественно вводят перорально при дозе 5-50 мг, предпочтительно 10-20 мг дважды в день с продолжением терапии в течение периода времени, достаточного для достижения и поддержания терапевтического действия. Торемифен преимущественно вводят перорально при дозе приблизительно 60 мг один раз в день с продолжением терапии в течение периода времени, достаточного для достижения и поддержания терапевтического действия. Анастрозол преимущественно вводят перорально при дозе приблизительно 1 мг один раз в день. Дролоксифен преимущественно вводят перорально при дозе приблизительно 20-100 мг один раз в день. Ралоксифен преимущественно вводят перорально при дозе приблизительно 60 мг один раз в день. Эксеместан преимущественно вводят перорально при дозе приблизительно 25 мг один раз в день.
Антитела преимущественно вводят при дозе приблизительно 1-5 мг/м2 площади поверхности тела
- 25 021883 или, как известно в данной области, другое количество. Трастузумаб преимущественно вводят при дозе 1-5 мг/м2 площади поверхности тела, конкретно 2-4 мг/м2 на курс лечения. Эти дозы можно вводить, например, один, два или больше раз на курс лечения, который можно повторять, например, каждые 7, 14, 21 или 28 дней.
Соединения формулы (I), их фармацевтически приемлемые аддитивные соли, в частности фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли, и стереоизомерные формы могут обладать полезными диагностическими свойствами, поэтому их можно применять для детектирования или идентификации образования комплекса между меченым соединением и другими молекулами, пептидами, белками, ферментами или рецепторами.
В способах детектирования или идентификации можно применять соединения, которые мечены агентами для введения метки, такими как радиоизотопы, ферменты, флуоресцентные вещества, светящиеся вещества и т.д. Примеры радиоизотопов включают 125Σ, 131Σ, 3Н и 14С. Ферменты обычно делают детектируемыми конъюгированием с подходящим субстратом, который, в свою очередь, катализирует детектируемую реакцию. Примеры их включают, например, бета-галактозидазу, бета-глюкозидазу, щелочную фосфатазу, пероксидазу и малатдегидрогеназу, предпочтительно пероксидазу хрена.
Светящиеся вещества включают в себя, например, люминол, производные люминола, люциферин, акворин и люциферазу.
В качестве биологических образцов можно указать ткань тела или жидкости тела. Примерами жидкостей тела являются цереброспинальная жидкость, кровь, плазма, сыворотка, моча, мокрота, слюна и т.п.
Нижеследующие примеры иллюстрируют настоящее изобретение.
Экспериментальная часть.
Ниже в контексте ДМФА означает Ν,Ν-диметилформамид, ЭСМ означает дихлорметан, ΌΣΡΕ означает диизопропиловый простой эфир, ДМСО означает диметилсульфоксид, ЕЮАс означает этилацетат, ЕЮН означает этанол, МеОН означает метанол и ТГФ означает тетрагидрофуран.
А. Получение промежуточных соединений.
Пример А1.
а) Получение промежуточного продукта 1
О
Оксид марганца (33,31 г, 13 экв., 0,3832 моль) добавляли порциями к раствору 4-хлор-6,7-дигидро5Н-циклопента[Ь]пиридин-7-ола (промежуточного продукта 3) [СА§ 126053-15-4] (5 г, 1 экв., 0,029 моль) в ЭСМ (50 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч и затем фильтровали через целит. Растворитель выпаривали, получая при этом 3,25 г (66%) промежуточного продукта 1.
Ь) Получение промежуточного продукта 2
он
Метилмагнийхлорид (1,47 мл, 3,2 экв., 0,004 моль) добавляли по каплям к раствору промежуточного продукта 1 (0,220 г, 1 экв., 0,0013 моль) в ТГФ (4 мл) при температуре от -5 до 0°С в потоке Ν2. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. При 0-10°С добавляли хлорид аммония (10% раствор в воде) и ЕЮАс. Смесь экстрагировали три раза ЕЮАс и затем органический слой отделяли, сушили над Мд§О4, фильтровали и растворитель выпаривали. Остаток (0,215 г) очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: циклогексан/ЕЮАс, 50/50). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали, получая при этом 0,120 г (50%) промежуточного продукта 2.
Пример А2.
а) Получение промежуточного продукта 3
Натрийтетрагидроборат (1,92 г, 50,67 ммоль) добавляли порциями при 5°С к раствору промежуточного продукта 1 (7,72 г, 46,06 ммоль) в МеОН (80 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ночи и затем выливали в воду. Смесь экстрагировали три раза ЕЮАс. Органический слой промывали водой и раствором №С1, отделяли, сушили над Мд§О4, фильтровали и растворитель выпаривали, получая при этом 6,38 г (81,7%) промежуточного продукта 3 (смесь 50/50 К§). Этот
- 26 021883 продукт применяли без дополнительной очистки в следующей стадии. Ь) Получение промежуточного продукта 4
о—
При 0°С в атмосфере Ν2 гидрид натрия (1,06 г, 44,22 ммоль) добавляли порциями к раствору промежуточного продукта 3 (3,00 г, 17,70 ммоль) в ТГФ (безводном, 30 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 мин при 0°С. Затем при 0°С к смеси по каплям добавляли иодметан (1,65 мл, 26,53 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ночи. Смесь охлаждали до комнатной температуры и по каплям добавляли холодную воду. Смесь перемешивали в течение 1 ч и затем экстрагировали ЕЮАс три раза. Органический слой отделяли, сушили над Мд§О4, фильтровали и растворитель выпаривали, получая при этом 3,10 г (95,4%) промежуточного продукта 4. Данный продукт применяли без дополнительной очистки в следующей стадии.
Пример А3.
а) Получение промежуточного продукта 5
Метиловый эфир 1Н-индол-7-карбоновой кислоты (0,091 моль), соль Эшенмозера (0,1 моль) в уксусной кислоте (300 мл) нагревали при 65°С в течение 2 ч. Осадок отделяли фильтрованием, растворяли в ЭСМ и 10% растворе карбоната калия. Добавляли карбонат калия (твердый) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч и затем экстрагировали. Органический слой отделяли, сушили над Мд§О4, фильтровали и растворитель выпаривали, получая при этом 10 г промежуточного продукта 5.
Ь) Получение промежуточного продукта 7
Промежуточный продукт 5 (0,043 моль), иодметан (0,047 моль) в ЕЮН (300 мл) перемешивали при комнатной температуре на протяжении ночи. Осадок отделяли фильтрованием и сушили, получая при этом 8,3 г промежуточного продукта 6.
с) Получение промежуточного продукта 7
Промежуточный продукт 6 (0,023 моль) цианид натрия (0,03 моль) в ДМФА (100 мл) нагревали при 110°С в течение 2 ч. Реакционную смесь выливали в ледяную воду, перемешивали в течение 1 ч. Осадок отделяли фильтрованием и растворяли в ЭСМ. Раствор экстрагировали, органический слой отделяли, сушили над Мд§О4, фильтровали и упаривали, получая при этом 5,1 г промежуточного продукта 7.
ά) Получение промежуточного продукта 8
Метилмагнийхлорид (0,058 моль) добавляли по каплям к раствору промежуточного продукта 7 (0,018 моль) в ТГФ (50 мл) в потоке Ν2. Реакционную смесь перемешивали при 5°С в течение 1 ч. При 5°С по каплям добавляли 10% раствор хлорида аммония. Реакционную смесь экстрагировали ЕЮАс. Органический слой отделяли, сушили над Мд§О4, фильтровали и упаривали, получая при этом 4 г промежуточного продукта 8.
- 27 021883
е) Получение промежуточного продукта 9
Промежуточный продукт 8 (0,019 моль) в смеси МеОН/ΝΗ (50 мл) гидрировали в присутствии никеля Ренея (4 г) при комнатной температуре и давлении 3х105 Па (3 бара) в течение 2 ч. Реакционную смесь фильтровали через целит, промывали ОСМ и фильтрат упаривали, получая при этом 3,5 г промежуточного продукта 9.
ί) Получение промежуточного продукта 10
Смесь промежуточного продукта 9 (0,016 моль), 2-фтор-5-нитротолуола (0,018 моль), анион мононатрийкарбоната (0,019 моль) в ДМСО (100 мл) нагревали при 60°С на протяжении ночи. Смесь охлаждали при комнатной температуре. Добавляли ледяную воду, добавляли ОСМ. Реакционную смесь экстрагировали, органический слой отделяли, сушили над М§§О4, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: смесь циклогексан/ЕЮАс, 60/40). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали, получая при этом 2,8 г промежуточного продукта 10.
ί) Получение промежуточного продукта 11
Промежуточный продукт 10 (0,0079 моль), оксид ванадия (0,05 г), раствор (4%) тиофена в ОШЕ (1 мл), 5% Ρί/С (1,3 г) в ТГФ (50 мл) гидрировали при атмосферном давлении в течение 1 ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтровали и растворитель выпаривали, получая при этом промежуточный продукт 11. Этот продукт применяли без дополнительной очистки в следующей стадии.
Согласно способу А3 получали следующие промежуточные продукты.
Н У н
промежуточный продукт Νί 44 промежуточный продукт № 45
он
промежуточный продукт № 46 промежуточный продукт № 47
ЦХ-ΝΗ,
ГУ
03
ΒΟ'η·''' ОК
промежуточный продукт Νί 48 промежуточный продукт Νί 49
- 28 021883
Пример А4.
Промежуточный продукт 7 альтернативно получали также следующим образом.
а) Получение промежуточного продукта 12
1-(Трифенилфосфоранилиден)-2-пропанон (34,4 ммоль) добавляли порциями при комнатной температуре к раствору 1Н-индол-7-карбоксальдегида (34,44 ммоль) в метилбензоле (60 мл). Реакционную смесь нагревали при 100°С в течение 3 ч и затем охлаждали до комнатной температуры и упаривали досуха. Остаток (17,4 г) очищали ВЭЖХ на диоксиде кремния: 20-45 мкм (450 г) (элюент смесь ОСМ/МсОН. 99,5/0,5). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали, получая при этом 4,3 г промежуточного продукта 12.
Ь) Получение промежуточного продукта 13
Промежуточный продукт 12 (3,4 ммоль) и соль Эшенмозера (3,8 ммоль) в уксусной кислоте (10 мл) нагревали при 65°С в течение 2 ч. Осадок отделяли фильтрованием, растворяли в ЭСМ и 10% растворе карбоната калия. Добавляли карбонат калия (твердый) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь экстрагировали, органический слой отделяли, сушили над Мд§О4, фильтровали и растворитель выпаривали, получая при этом 0,7 г промежуточного продукта 13.
с) Получение промежуточного продукта 14
Промежуточный продукт 13 (0,13 моль), иодметан (0,14 моль) в ЕЮН (300 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 2 дней. Осадок отделяли фильтрованием и сушили, получая при этом 47 г промежуточного продукта 14.
ά) Получение промежуточного продукта 15
Промежуточный продукт 14 (136,5 ммоль), цианид натрия (177,5 ммоль) в ДМФА (400 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Добавляли воду и реакционную смесь экстрагировали ЕЮАс. Органический слой отделяли, сушили над Мд§О4, фильтровали и упаривали. Остаток очищали высокоэффективной жидкостной хроматографией (неупорядоченный §ЮН, 20-45 мкм, 1000 г, МАТКЕХ). Подвижная фаза: смесь 70% циклогексана/30% ЕЮАс. Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали, получая при этом 11,8 г промежуточного продукта 15.
е) Получение промежуточного продукта 16
Метилмагнийхлорид (0,07 моль) добавляли по каплям к раствору промежуточного продукта 15 (0,022 моль) в ТГФ (50 мл). Добавляли 10% раствор ΝΗ4Ο и ЕЮАс. Реакционную смесь экстрагировали, органический слой отделяли, сушили над Мд§О4, фильтровали и растворитель выпаривали. Остаток (2,9 г) очищали высокоэффективной жидкостной хроматографией (неупорядоченный §ЮН, 20-45 мкм, 450 г МАТКЕХ). Подвижная фаза: смесь 60% циклогексана/40% ЕЮАс. Чистые фракции собирали и раство- 29 021883 ритель выпаривали, получая при этом 2 г промежуточного продукта 16. ί) Получение промежуточного продукта 7
Периодинан Десса-Мартина (24,9 мл) добавляли по каплям при комнатной температуре к раствору промежуточного продукта 16 (10 ммоль) в ЭСМ (20 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, затем выливали в ледяную воду, фильтровали через целит и фильтрат экстрагировали ЭСМ. Органический слой отделяли, сушили над Мд§О4, фильтровали и растворитель концентрировали. Остаток (2,8 г) очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент смесь циклогексан/ЕЮАс, 60/40). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали, получая при этом 0,8 г промежуточного продукта 7.
Пример А5.
Промежуточный продукт 15 альтернативно получали также следующим образом.
а) Получение промежуточного продукта 17
Литийтетрагидроалюминат (0,018 моль, 0,69 г) добавляли порциями к раствору метилового эфира 3-(цианометил)-1Н-индол-7-карбоновой кислоты (0,012 моль, 2,6 г) в ТГФ (50 мл) при 5°С в потоке Ν2. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. При 5°С по каплям добавляли воду и реакционную смесь фильтровали через целит, промывали ЕЮАс и экстрагировали. Органический слой отделяли, сушили над Мд§О4, фильтровали и концентрировали, получая при этом 2,4 г промежуточного продукта 17.
Ь) Получение промежуточного продукта 15
Периодинан Десса-Мартина (0,016 моль) добавляли по каплям при 5°С к раствору промежуточного продукта 17 (0,0081 моль) в ЭСМ (15 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь фильтровали через целит, фильтрат выпаривали. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент смесь циклогексан/ЕЮАс, 70/30). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали, получая при этом 0,5 г промежуточного продукта 15.
Пример А6.
Получение промежуточных продуктов 18, 19 и 20
Смесь 4-хлор-6,7-дигидро-5Н-циклопента[Ь]пиридин-7-ола (5 г, 0,029 моль) и липазы СаиФБа Аи1атйса В (2,5 г) в этениловом эфире уксусной кислоты (50 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакционную смесь фильтровали через целит. Целит промывали ЭСМ. Растворитель фильтрата выпаривали. Остаток (6,3 г) очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: ЭСМ/МсОН. от 100/0 до 98/2; 15-40 мкм). Собирали фракции двух разных продуктов и растворитель каждой фракции продукта выпаривали, получая при этом 2,1 г промежуточного продукта 18 (42%, 8энантиомер) и 3,6 г промежуточного продукта 19 (58%; К-энантиомер). При желании, промежуточный продукт 19 можно превратить в К-энантиомер промежуточного продукта 18 реакцией в смеси
- 30 021883
Μ£θΗ/ΝΗ3 с получением промежуточного продукта 20.
Промежуточные продукты 18 и 20 альтернативно получали также следующим образом.
Натрийтетрагидроборат (1,37 г, 36,10 ммоль) добавляли в виде порций при 5°С к раствору промежуточного продукта 1 (5,50 г, 32,82 ммоль) в МеОН (50 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ночи и затем выливали в воду и смесь экстрагировали три раза ЕЮАс. Органический слой промывали водой и раствором №С1 в воде, отделяли, сушили над Μ§δΟ4, фильтровали и растворитель выпаривали. Остаток (4,42 г) очищали хиральной сверхкритической жидкостной хроматографией на СШКАЬРАК ΛΌ-Η, 5 мкм, 250x20 мм. Подвижная фаза: 85% СО2, 15% МеОН.
Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали, получая при этом 1,625 г (29,2%) соединения 18 (δ-энантиомер) (ДМФА, 20°С, концентрация 0,33% мас./об., 589 нм: -77,58°) и 1,620 г (29,1%) соединения 20 (К-энантиомер) (ДМФА, 20°С, концентрация 0,33 мас./об.%, 589 нм: +76,74°).
Пример А7.
Получение промежуточного продукта 21
Оксалилхлорид (0,0079 моль) добавляли по каплям к 7-[2-[[(1,1диметилэтил)диметилсилил]окси]этил]-1Н-индолу (0,0047 моль) в диэтиловом простом эфире (20 мл) при 5°С. Реакционную смесь перемешивали при 5°С в течение 2 ч. К раствору при 5°С по каплям добавляли ΝΗ4ΟΗ (концентрированный, 20 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре на протяжении ночи. Добавляли воду и ЕЮАс. Органический слой отделяли, сушили над Μ§δΟ4, фильтровали и концентрировали, получая при этом 1,8 г промежуточного продукта 21.
Получение промежуточного продукта 22
Литийтетрагидроалюминат (0,021 моль) добавляли порциями к раствору промежуточного продукта 21 (0,0052 моль) в ТГФ (50 мл) при 5°С. Смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником на протяжении ночи, затем охлаждали до 5°С на ледяной бане. Избыток литийтетрагидроалюмината гидролизовали осторожно добавлением по каплям воды. Смесь фильтровали через целит, промывали ИСМ и экстрагировали. Органический слой отделяли, сушили над Μ§δΟ4, фильтровали и концентрировали, получая при этом 0,6 г промежуточного продукта 22.
Пример А8.
Получение промежуточного продукта 23
Оксалилхлорид (2,9 ммоль) добавляли по каплям при 5°С к раствору 4-(1Н-индол-7-ил)-3-бутен-2она (2,7 ммоль) в диэтиловом простом эфире (10 мл). Охлаждающую баню удаляли и реакционной смеси давали возможность нагреться до комнатной температуры (1,5 ч). Осадок отделяли фильтрованием и сушили, получая при этом 0,49 г промежуточного продукта 23.
- 31 021883
Ь) Получение промежуточного продукта 24
Гидроксид алюминия (10 мл) добавляли по каплям к раствору промежуточного продукта 23 (0,725 ммоль) в диэтиловом простом эфире (10 мл) при 5°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре на протяжении ночи. Осадок отделяли фильтрованием и сушили, получая при этом 0,11 г промежуточного продукта 24.
с) Получение промежуточного продукта 25
Литийтетрагидроалюминат (39,5 ммоль) добавляли порциями к раствору промежуточного продукта 24 (7,9 ммоль) в ТГФ (20 мл) при 5°С. Смесь перемешивали при 80°С в течение 2 ч, затем охлаждали до 5°С с помощью ледяной бани. Избыток литийтетрагидроалюмината осторожно гидролизовали добавлением по каплям воды. Смесь фильтровали через целит, промывали ЭСМ и экстрагировали. Органический слой отделяли, сушили над Μ§δΟ4, фильтровали и концентрировали, получая при этом 1 г промежуточного продукта 25.
б) Получение промежуточного продукта 26
Смесь промежуточного продукта 25 (4,3 ммоль), 2-фтор-5-нитротолуола (4,7 ммоль), аниона мононатрийкарбоната (5,1 ммоль) в ДМСО (10 мл) нагревали при 60°С на протяжении ночи. Смесь охлаждали до комнатной температуры. Добавляли ледяную воду, добавляли ЭСМ. Реакционную смесь экстрагировали, органический слой отделяли, сушили над Μ§δΟ4, фильтровали и упаривали. Остаток очищали колоночной хроматографией (элюент: ^СΜ/ΜеΟΗ, 97/3). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали. Остаток очищали высокоэффективной жидкостной хроматографией (неупорядоченный δίΟΗ, 1540 мкм, 300 г ΜΕΚΟΚ). Подвижная фаза (смесь 0,1% ΝΗ4ΟΗ-99% дихлорметана-1% МеОН). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали, получая при этом 200 мг промежуточного продукта 26.
е) Получение промежуточного продукта 27
Смесь промежуточного продукта 26 (0,35 ммоль) в МеОН (5 мл) гидрировали в присутствии никеля Ренея (200 мг) при атмосферном давлении и комнатной температуре. Остаток фильтровали через целит, промывали ЭСМ и остаток упаривали, получая при этом 0,14 г промежуточного продукта 27.
Пример А9.
а) Получение промежуточного продукта 28
- 32 021883 трет-Бутилдиметилсилилхлорид (195 мг, 0,91 ммоль) добавляли к раствору промежуточного продукта 16 (162 мг, 0,81 ммоль), имидазола (143 мг, 2,1 ммоль) в ТГФ (5 мл) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре на протяжении ночи. Осадок отделяли фильтрованием и промывали ЭСМ. Фильтрат упаривали. Остаток (365 мг) очищали флэшхроматографией на силикагеле (15-40 мкм, 30 г, ОС’М/МеОН, 100/0-99/1). Чистые фракции собирали и упаривали досуха, получая при этом 190 мг промежуточного продукта 28.
Ь) Получение промежуточного продукта 29
Промежуточный продукт 28 (190 мг, 0,6 ммоль), никель Ренея (0,7 г) в 7н. растворе ΝΗ3 в МеОН (10 мл) перемешивали при комнатной температуре и давлении Н2 3х105 Па (3 бара) в течение 4 ч. Реакционную смесь фильтровали через целит и целит промывали смесью ЭСМ/МеОН (90/10) три раза. Растворитель выпаривали, получая при этом 147 мг промежуточного продукта 29.
с) Получение промежуточного продукта 30
Смесь промежуточного продукта 29 (147 мг, 0,46 ммоль), 1-фтор-2-метил-4-нитробензола (78 мг, 0,51 ммоль), натриевой соли угольной кислоты (1:1) (85 мг, 1 ммоль) в ДМСО (2 мл) нагревали при 65°С в течение 1 ночи. Смесь выливали в лед и перемешивали 10 мин, добавляли ЭСМ и смесь экстрагировали дважды ЭСМ. Органический слой промывали водой, затем сушили над М§8О4, фильтровали и растворитель выпаривали. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле (15-40 мкм, 30 г, смесь циклогексан/ЙОАс, 85/15). Чистые фракции собирали и упаривали досуха, получая при этом 200 мг промежуточного продукта 30.
ά) Получение промежуточного продукта 31
Промежуточный продукт 30 (2,8 г, 6,17 ммоль), ди-трет-бутилдикарбонат (8 г, 37 ммоль), 4диметиламинопиридин (0,15 г, 1,2 ммоль) и триэтиламин (1,89 мл, 13,6 ммоль) в ТГФ (50 мл) перемешивали в течение 24 ч при 60°С. Смесь упаривали досуха. Остаток (7,4 г) очищали высокоэффективной жидкостной хроматографией на силикагеле (картридж, 15-40 мкм, 90 г). Подвижная фаза: 50% циклогексана + 50% дихлорметана. Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали, получая при этом 3.3 г промежуточного продукта 31.
е) Получение промежуточного продукта 32
Смесь промежуточного продукта 31 (3,3 г, 5 ммоль), никеля Ренея (3 г) в МеОН (100 мл) гидрировали при 2,5х105 Па (2,5 бара) в течение 2 ч. Остаток фильтровали через целит, промывали ЭСМ и остаток упаривали, получая при этом 2,7 г промежуточного продукта 32.
- 33 021883
ί) Получение промежуточного продукта 33
Промежуточный продукт 32 (2,6 г, 4,2 ммоль), 4-хлор-6,7-дигидро-5Н-циклопента[Ь]пиридин-7-ол (0,78 г, 4,6 ммоль) и 4 М раствор НС1 в диоксане (0,21 мл, 0,8 ммоль) в ацетонитриле (28 мл) и ЕЮН (7 мл) нагревали при 65°С в течение 72 ч. После охлаждения до комнатной температуры добавляли воду и порошок карбоната калия и смесь экстрагировали дважды ЕЮАс. Органический слой промывали водой, сушили над Мд§О4, фильтровали и упаривали. Остаток очищали высокоэффективной жидкостной хроматографией (неупорядоченный §ЮН, 20-45 мкм, 450 г МАТКЕХ). Подвижная фаза: смесь 0,5% ΝΗ4ΟΗ; 95% дихлорметана; 5% МеОН. Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали, получая при этом 2,35 г промежуточного продукта 33.
д) Получение промежуточного продукта 34
Оксид марганцаДУ) (4,3 г) добавляли порциями к промежуточному продукту 33 (2,2 г, 2,9 ммоль) и трис-(2-(2-метоксиэтокси)этил)амину (47 мг, 0,145 ммоль) в растворе ЭСМ (50 мл) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Смесь фильтровали через целит. Целит промывали ЭСМ и растворитель выпаривали, получая при этом 1,84 г промежуточного продукта 34.
1ι) Получение промежуточного продукта 35
Промежуточный продукт 34 (1,2 г, 1,6 ммоль) в трифторуксусной кислоте (1,2 мл, 15,9 ммоль) и ЭСМ (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 2 дней. Добавляли 10% раствор карбоната калия и смесь экстрагировали дважды ЭСМ. Органический слой сушили над Мд§О4, фильтровали и упаривали, получая при этом 0,8 г промежуточного продукта 35, применяемого без дополнительной очистки в следующей стадии.
- 34 021883
Пример А10.
а) Получение промежуточного продукта 36
Иодметан (0,024 моль) добавляли к раствору метилового эфира 3-[(диметиламино)метил]-1Ниндол-7-карбоновой кислоты (0,022 моль) в ЕЮН (50 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре на протяжении ночи, затем концентрировали в вакууме досуха, получая при этом 5,6 г (68%) промежуточного продукта 36.
Ь) Получение промежуточного продукта 37
Смесь промежуточного продукта 36 (0,015 моль) и цианида натрия (0,019 моль) в ДМФА (60 мл) перемешивали при 100°С в течение 2 ч. Добавляли воду. Осадок отделяли фильтрованием. Фильтрат упаривали, получая при этом 3,5 г (100%) промежуточного продукта 37.
с) Получение промежуточного продукта 38
Смесь промежуточного продукта 37 (0,016 моль) и никеля Ренея (3 г) в смеси МеОН/NНз (50 мл) гидрировали при комнатной температуре и давлении 3х105 Па (3 бара), затем фильтровали через целит. Фильтрат упаривали, получая при этом 3,2 г (89%) промежуточного продукта 38.
ά) Получение промежуточного продукта 39
Смесь промежуточного продукта 38 (0,0092 моль), 1-фтор-4-нитробензола (0,01 моль) и диизопропилэтиламина (0,023 моль) перемешивали при 180°С в течение 2 ч. Добавляли воду. Смесь экстрагировали ИСМ. Органический слой отделяли, сушили (Мд§О4), фильтровали и растворитель выпаривали. Остаток (2,6 г) очищали колоночной хроматографией на кромасиле (элюент: циклогексан/ЕЮАс, 60/40). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали, получая при этом 1,4 г (45%) промежуточного продукта 39.
е) Получение промежуточного продукта 40
трет-Бутиловый эфир угольной кислоты (0,015 моль) добавляли при комнатной температуре к смеси промежуточного продукта 39 (0,05 моль) и 4-(диметиламино)пиридина (немного) в ТГФ (50 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре на протяжении ночи. Смесь экстрагировали ЕЮАс. Органический слой промывали водой, сушили (Мд§О4), фильтровали и растворитель выпаривали. Остаток (4 г) очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: циклогексан/ЕЮАс, 60/40). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали, получая при этом 3,3 г (82%) промежуточного продукта 40.
- 35 021883
ί) Получение промежуточного продукта 41
Смесь промежуточного продукта 40 (0,0061 моль) и никеля Ренея (3,3 г) в МеОН (50 мл) гидрировали при комнатной температуре и давлении 3х105 Па (3 бара), затем фильтровали через целит. Целит промывали смесью ЭСМ/МеОН (98/2). Фильтрат упаривали. Остаток (2,8 г) очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: циклогексан/ЕЮАс, 70/30). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали, получая при этом 1,3 г (42%) промежуточного продукта 41.
д) Получение промежуточного продукта 42
Смесь промежуточного продукта 41 (0,0018 моль), 4-хлор-6,7-дигидро-5Н-циклопента[Ь]пиридин7-ола (0,33 г) и смеси НС1/изопропанол (5 капель) в ацетонитриле (20 мл) перемешивали при 65°С в течение 24 ч. Добавляли 10% раствор карбонат калия. Смесь экстрагировали ЕЮАс. Органический слой отделяли, сушили (Мд§О4), фильтровали и растворитель выпаривали. Остаток (1,1 г) очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент: ЭСМ/МеОН^К-ОН, 95/5/0,1). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали, получая при этом 0,054 г промежуточного продукта 42.
1ι) Получение промежуточного продукта 43
Смесь промежуточного продукта 42 (0,0009 моль) и 3н. НС1 (0,0039 моль) в ацетонитриле (10 мл) перемешивали при 65°С в течение 3 ч. Добавляли 10% карбонат калия. Смесь экстрагировали ЕЮАс. Органический слой отделяли, сушили (Мд§О4), фильтровали и растворитель выпаривали. Остаток (0,4 г, 100%) кристаллизовали из смеси диэтиловый простой эфир/ацетонитрил. Осадок отделяли фильтрованием и сушили, получая при этом 0,3 г промежуточного продукта 43, точка плавления 164°С.
В. Получение конечных соединений.
Пример В1.
Получение соединения 1
Промежуточный продукт 11 (1,00 г, 3,092 ммоль), промежуточный продукт 2 (0,437 г, 2,381 ммоль), НС1 (0,155 мл, 0,618 ммоль) в ацетонитриле (10 мл) перемешивали в течение 5 ч при 65°С. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и затем делали основной при помощи карбоната калия (10% раствор в воде) и экстрагировали три раза ЭСМ. Органический слой промывали водой, сушили над Мд§О4, фильтровали и растворитель выпаривали. Остаток (1,37 г) очищали хроматографией с нормальной фазой на диоксиде кремния (5 мкм, колонка 150x30,0 мм). Подвижная фаза с градиентом от 0%
- 36 021883
ΝΗ4ΟΗ, 100% ЭСМ, 0% МеОН до 0,8% ΝΗ4ΟΗ, 92% ЭСМ, 8% МеОН. Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали. Остаток (0,350 г) растворяли в ацетонитриле в течение 1 недели при комнатной температуре. Этот продукт кристаллизовали и фильтровали и сушили в вакууме, получая при этом 300 мг (20,8%) соединения 1, точка плавления 209°С.
Пример В2.
Получение соединений 2 и 3
Раствор промежуточного продукта 11 (0,0031 моль), Ν,Ν-диизопропилэтиламина (0,0028 моль), гидрохлорида 4-бромпиридина (0,0034 ммоль) в ацетонитриле (20 мл) нагревали при 65°С в течение 6 ч. Добавляли 10% раствор карбоната калия и ЕЮАс. Реакционную смесь экстрагировали, органический слой отделяли, сушили над Мд§О4, фильтровали и концентрировали. Остаток (1,3 г) очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент ^СΜ/ΜеΟΗ/NΗ4ΟΗ, 95/5/0,5). Собирали две фракции и растворитель выпаривали, получая при этом 60 мг соединения 3 и 80 мг Р2. Остаток Р2 (80 мг) очищали сверхкритической жидкостной хроматографией (колонка АМШО, 150x21,2 мм, элюент: МеОН/СО2, 30/70). Собирали чистые фракции и растворитель выпаривали, получая при этом 43 мг соединения 2.
Пример В3.
Получение соединения 4
Промежуточный продукт 35 (0,8 г, 1,7 ммоль) и 3н. раствор гидроксида натрия (2,57 мл, 2,57 ммоль) в ΕΐΟΗ (22 мл) и ТГФ (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Добавляли 10% раствор ΝΗ.·|Ο и ЭСМ и смесь фильтровали через целит. Органический слой декантировали, сушили над Мд§О4, фильтровали и упаривали. Остаток очищали хроматографией с нормальной фазой на сферическом ЕНОК 10 мкм, 60 г РЬагтРгер МЕКСК. Подвижная фаза: 0,1% ΝΗ^Η, 95% ЭСМ, 5% МеОН. Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали, получая при этом 250 мг соединения 4.
Пример В4.
Получение соединения 5
Натрийтетрагидроборат (0,69 ммоль) добавляли к раствору промежуточного продукта 49 (0,46 ммоль) в МеОН (5 мл) при 5°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре на протяжении ночи. Добавляли воду, реакционную смесь экстрагировали ЕЮАс, органический слой отделяли, сушили над Мд§О4, фильтровали и упаривали. Остаток (0,14 г) кристаллизовали в ацетонитриле, осадок отделяли фильтрованием и сушили, получая при этом 0,1 г соединения 5.
- 37 021883
Пример В5.
Получение соединения 6
Литийтетрагидроалюминат (0,0003 моль) добавляли порциями при 5°С к раствору промежуточного продукта 43 (0,0002 моль) в ТГФ (4 мл) в потоке Ν2. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Добавляли воду. Смесь экстрагировали ЕЮАс. Органический слой отделяли, сушили (Мд§О4), фильтровали и растворитель выпаривали. Остаток (0,18 г) очищали колоночной хроматографией на кромасиле (элюент: ОСМ/МсОН^НЮН· от 98/2/0,2 до 85/15/1/ 3,5 мкм). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали, получая при этом 0,066 г (70%) соединения 6.
Пример В6.
Получение соединений 7 и 8
Промежуточный продукт 47 (1,00 г, 3,23 ммоль), промежуточный продукт 4 (0,653 г, 3,55 ммоль), раствор НС1/диоксан (0,242 мл, 0,97 ммоль) в ацетонитриле (15 мл) перемешивали в течение 1 ночи при 70°С. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. Добавляли воду, затем карбонат калия (10% раствор в воде). Смесь экстрагировали три раза ЭСМ. Органический слой отделяли, сушили над Мд§О4, фильтровали и растворитель выпаривали. Остаток очищали хроматографией с нормальной фазой на силикагеле (картридж 15-40 мкм, 30 г). Подвижная фаза: смесь 96% ЭСМ, 4% МеОН. Собирали чистые фракции и растворитель выпаривали, получая при этом 0,092 г (6,5%) соединения 7 и 0,030 г (2,0%) соединения 8.
Пример В7.
Получение соединения 9
Промежуточный продукт 27 (0,41 ммоль) и 4-хлор-6,7-дигидро-5Н-циклопента[Ь]пиридин-7-ол (0,46 ммоль) нагревали при 125°С в течение 2 ч. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (элюент ^СМ/МеОН/NН4ОН, 90/10/0,1). Чистые фракции собирали и растворитель выпаривали, получая при этом 58 мг соединения 9.
Пример В8.
Получение соединений 24 и 25
Соед. № 24: *δ Соед. № 25: *К * означает относительную стереохимию (абсолютная стереохимия не известна). Поэтому если соединение 24 является δ-энантиомером, то соединение 25 является К-энантиомером, или, если соединение
- 38 021883 является К-энантиомером, то соединение 25 является δ-энантиомером.
Реакцию проводят в атмосфере Ν2.
Смесь промежуточного продукта 47 (11,31 ммоль), промежуточного продукта 4 (12,44 ммоль), Рй(йЬа)2 (1,13 ммоль), ΒΙΝΑΡ (1,13 ммоль) и ΐΒιιΟΝα (22,62 ммоль) в толуоле (100 мл) перемешивали при кипячении с обратным холодильником на протяжении ночи. Смесь фильтровали, промывали МеОН и очищали высокоэффективной жидкостной хроматографией (колонка δνηοΓ^ί 50x250 мм, 10 мкм; элюент: смесь ίΉ3ΟΝ/Η2Ο (0,1% трифторуксусной кислоты), градиент от 15% СΗзСN во время 0 мин до 40% ΟΗ3ΟΝ во время 25 мин). Нужную фракцию собирали и растворитель выпаривали в вакууме. Остаток экстрагировали ΌΟΜ, промывали водным ΝαΗΟΟ3, сушили над Ν;·ι2δΟ4. фильтровали и упаривали, получая при этом соединение 8 (3,8 г, чистота 98%, выход 65%), которое разделяли суперкритической жидкостной хроматографией на С1йгасс1 ΟΙ, 20 мкм, 250 мм х 20 мм; сверхкритический СΟ2:изопропанол (0,05% диэтиламина), 40:60 об./об., 70 мл/мин, получая при этом две фракции;
1000,79 мг (19%) соединения 24, точка плавления 110,5-111,6°С, (ее=99%, [а]с 20=+5,034° (длина волны=589, 20°С, раствор в метаноле, концентрация 10,33 мг/мл), и
939,19 мг (18%) соединения 25, точка плавления 111,4-113,3°С, (ее=99%, [а]с 20=-3,443° (длина волны=589, 20°С, раствор в ΜеΟΗ, концентрация 10,74 мг/мл).
Пример В9.
Получение соединений
Соед. № 26: *δ
Соед. № 27: *К * означает относительную стереохимию (абсолютная стереохимия не известна). Поэтому если соединение 26 является δ-энантиомером, то соединение 27 является К-энантиомером, или, если соединение 26 является К-энантиомером, то соединений 27 является δ-энантиомером.
Реакцию проводят в атмосфере Ν2.
Смесь промежуточного продукта 11 (9,25 ммоль), промежуточного продукта 2 (9,25 ммоль), ΐΒιιΟΝα (18,5 ммоль), Рй(йЬа)2 (0,93 ммоль) и ΒΙΝΑΡ (0,93 ммоль) в толуоле (40 мл) нагревали для кипячения с обратным холодильником в течение 3 ч. Образовавшуюся смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат упаривали в вакууме и остаток очищали высокоэффективной жидкостной хроматографией (колонка δνιΚΓβί 50x250 мм, 10 мкм; элюент: смесь ΟΗ3ΟΝ/Η2Ο (0,1% трифторуксусной кислоты), градиент от 10% ΟΗ3ΟΝ во время 0 мин до 40% ΟΗ3ΟΝ во время 25 мин). Нужные фракции собирали и рН регулировали до >7. Раствор концентрировали и экстрагировали этилацетатом (3 раза, 100 мл) и нужные органические слои промывали солевым раствором, сушили над Ν;·ι2δΟ.·|, фильтровали и растворитель выпаривали в вакууме, получая при этом 2,5 г (57%) соединения 1, которое разделяли суперкритической жидкостной хроматографией (ΑΏ 250x20 мм, 20 мкм; сверхкритический СО2:изопропанол (0,05% диэтиламина), 40:60 об./об., 70 мл/мин), получая при этом две фракции.
Фракцию 1 (1 г) дополнительно очищали высокоэффективной жидкостной хроматографией (колонка δγΓΚΓβί, 50x250 мм, 10 мкм; элюент: смесь ΟΗ3ΟΝ/Η2Ο (0,1% трифторуксусной кислоты), градиент от 10% ΟΗ3ΟΝ во время 0 мин до 4 0% ΟΗ3ΟΝ во время 25 мин), получая при этом 0,88 г (20%) соединения № 26, точка плавления 122,3-124°С (ее=100%).
Фракцию 2 (1 г) дополнительно очищали высокоэффективной жидкостной хроматографией (колонка δνιΚΓβί, 50x250 мм, 10 мкм; элюент: смесь ΟΗ3ΟΝ/Η2Ο (0,1% трифторуксусной кислоты), градиент от 10% ΟΗ3ΟΝ во время 0 мин до 40% ΟΗ3ΟΝ во время 25 мин), получая при этом 0,96 г (22%) соединения 27, точка плавления 121,4-122,6°С (ее=99%).
В табл. 1 приведен список соединений, которые получали согласно одному из описанных выше примеров.
- 39 021883
Таблица 1
N
Соед. № 1; Пр. [В1]; Соед. N2 2; Пр. [В2];
ГС Γθ’) у
Соед. № 3; Пр. [В2]; Соед. № 4; Пр. [ВЗ];
Соед. № 5; Пр. [В4]; Соед. № 6; Пр. [В5];
о^.
Соед. № 7; Пр. [В6]; Соед. № 8; Пр. [Вб];
____22£„.......________________ Соед. № 9; Пр. [В7]; •.....-...... ..............—..................
да ‘ НО .Д'даЯ Ср ОН
Соед. № 10; Пр. [В1]; Соед. № 11; Пр. [В1];
- 40 021883
- 41 021883
* означает относительную стереохимию
Характеристика соединений.
Точки плавления.
Величины являются либо пиковыми величинами плавления, либо интервалами плавления, их получали с экспериментальными погрешностями, которые обычно связаны с данным аналитическим способом.
Установка (прибор) Кофлера.
Для соединения 4 точку плавления получали на приборе с нагревом, состоящим из нагревательной пластины с линейным градиентом температуры, двигающейся стрелкой и температурной шкалы в градусах Цельсия.
ΑΗδ-2Λ.
Для соединений 11, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 точку плавления определяли аппаратом определения точки плавления \УКЛ-2А. купленным у δίκ-ιπ^ΐκ-ιί Ргейбаоп апй δ^πΙίΓχ ПМгитеШ Со. Ый. Точку плавления измеряли с линейным нагревом со скоростью до 0,2-5,0°С/мин. Указанная величина является диапазоном температуры плавления. Максимальная температура была 300°С.
ДСК.
Для соединения 1 точку плавления определяли ДСК (дифференциальной сканирующей калориметрией). Точку плавления измеряли с температурным градиентом 10°С/мин. Максимальная температура
- 42 021883 была 350°С. Величины были пиковыми величинами.
ЖХ-МС.
Для получения ЖХ-МС-характеристик соединений настоящего изобретения применяли следующие методики.
Общая методика А.
Измерение данных ВЭЖХ проводили с применением системы АШапсе ΗΤ 2795 ^а1ег8). содержащей четырехступенчатый насос с устройством для дегазации, автоматическое устройство для введения образца, диодный матричный детектор (ΌΆΌ) и колонку, указываемую ниже в соответствующих методах, причем в колонке поддерживали температуру 30°С. Поток из колонки разделяли для подачи части потока в спектрометр МС. МС-детектор был расположен в соответствии с источником ионизации электрораспылением. Напряжение капиллярной иглы было 3 кВ и температуру источника поддерживали 100°С на ЬСТ (Типе οί ΠίβΙιΙ Ζδριπγ™) масс-спектрометра от \ν;·ι^Γ8. В качестве газа-распылителя применяли азот. Сбор данных проводили с применением системы данных \ν;·ιΝΓ8-ΜχΓ0ΐη;·ΐ88 Μ;·188ΡύπχΟρеη1уηx.
Общая методика В.
Измерение данных ЖХ проводили с применением системы ИРЬС (ультраэффективной жидкостной хроматографии) Асцийу (\ν;·ι^Γ8). содержащей двухступенчатый насос с устройством для дегазации, автоматическое устройство для введения образца, диодный матричный детектор (ΌΆΌ) и колонку, указываемую ниже в соответствующих методах, причем в колонке поддерживали температуру 40°С. Поток из колонки подавали в МС-детектор. МС-детектор был расположен в соответствии с источником ионизации электрораспылением. Напряжение капиллярной иглы было 3 кВ и температуру источника поддерживали при 130°С на Циайго (тройной квадрупольный масс-спектрометр от Vаΐе^8). В качестве газа-распылителя применяли азот. Сбор данных проводили с применением системы данных Vаΐе^8-Μ^с^οта88 ΜηδδΡγηχΟρеη1уηx.
Общая методика С.
Измерение данных ВЭЖХ проводили с применением модуля Адбеп1 1100, содержащего насос, диодный матричный детектор (ΌΆΌ) (применяли длину волны 220 нм), нагреватель колонки и колонку, указываемую ниже в соответствующих методах. Поток из колонки разделяли и часть направляли в АдПеп1 ΜδΌ §епе8 О1946С апб О1956А. МС-детектор был расположен в соответствии с ΑΡΙ-Εδ (ионизация электрораспылением при атмосферном давлении). МС-спектры получали сканированием от 100 до 1000. Напряжение капиллярной иглы было 2500 В для режима определения положительных ионов и 3000 В для режима определения отрицательных ионов. Напряжение фрагментации было 50 В. Температуру сушки газа поддерживали при 350°С при скорости потока 10 л/мин.
Метод 1.
Добавление к общей методике А: ВЭЖХ с обращенной фазой проводили на колонке Χ^ση-Μδ С18 (5 мкм, 4,6x150 мм) со скоростью потока 1,0 мл/мин. Применяли две подвижные фазы (подвижная фаза А: 100% 7 мМ ацетата аммония; подвижная фаза В: 100% ацетонитрил) для создания градиентного условия от 85% А, 15% В (градиент сохраняли в течение 3 мин) до 20% А, 80% В за 5 мин, сохранение такого состава 20% А и 80% В в течение 6 мин и снова создания равновесия с начальным соотношением за 3 мин. Применяли объем инъекции 20 мкл. Напряжение конуса было 20 В для режима определения положительной ионов и 20 В для режима определения отрицательных ионов. Масс-спектры получали сканированием от 100 до 900 за 0,8 с с применением времени задержки между сканированиями 0,08 с.
Метод 2.
Добавление к общей методике В: ИРЬС с обращенной фазой проводили на колонке \ν3ΝΓ8 Асцийу ВЕН (гибрид мостиковый этилсилоксан/диоксид кремния) С18 (1,7 мкм, 2,1x100 мм) со скоростью потока 0,35 мл/мин. Применяли две подвижные фазы (подвижная фаза А: 95% 7 мМ ацетата аммония/5% ацетонитрила; подвижная фаза В: 100% ацетонитрила) для создания градиентного условия от 90% А и 10% В (сохраняли в течение 0,5 мин) до 8% А и 92% В за 3,5 мин, сохранение такого состава в течение 2 мин и возвращение к начальному составу за 0,5 мин и сохранение его в течение 1,5 мин. Применяли объем инъекции 2 мкл. Напряжение конуса было 20 В для режима определения положительной ионов и для режима определения отрицательных ионов. Масс-спектры получали сканированием от 100 до 1000 за 0,2 с с применением времени задержки между сканированиями 0,1 с.
Метод 3.
Добавление к общей методике С: ВЭЖХ с обращенной фазой проводили на колонке ΥΜС-Ρаск ΟΌδ-АЦ, 50x2,0 мм, 5 мкм, со скоростью потока 0,8 мл/мин. Применяли две подвижные фазы (подвижная фаза А: вода с 0,1% ТРА; подвижная фаза В: ацетонитрил с 0,05% ТРА). Сначала поток с 90% А и 10% В сохраняли в течение 0,8 мин. Затем достигали градиент 20% А и 80% В за 3,7 мин и сохраняли его в течение 3 мин. Обычные объемы инъекции были 2 мкл. Температура печи была 50°С (полярность МС: положительная).
- 43 021883
Таблица 2
Данные ЖХ-МС и точек плавления (время удерживания: К, в минутах), (МН)' пика, методика ЖХ-МС относится к методу, применяемому для ЖХ-МС
№ соединения ЖХ-МС Точка плавления
Не (МН) + Методика
1 3,39 471 2 209°С
2 3,35 401 2
4 3,19 441 2 121°С
5 2,97 417 2
б 7,47 415 1
7 3,94 439 2
8 3,45 457 2
9 8,51 471 1
10 3,05 457 2
11 3,01 473 3 221,0-222,5°С
12 3,07 443 2
13 3,00 443 2
14 3,49 425 2
15 8,22 443 1
16 3,34 457 2
17 3,32 457 2
18 8,68 457 1
20 8,62 457 1
21 3,2 443 1
22 8,95 415 1
23 2,93 443 3
24 110,5-111,6°С
25 111,4-113,3°С
26 122,3-124°С
27 121,4-122,6°С
28 98,3-100°С
29 96,8-99°С
30 111,5-112,3°С
31 112,7-113,6°С
Вращение плоскости поляризованного света.
Вращение плоскости поляризованного света измеряли с применением поляриметра. [а]с 20 указывает вращение плоскости поляризованного света при длине волны Ό-линии натрия (589 нм) при температуре 20°С. Длиной пути ячейки является 1 дм. Помимо фактической величины измерения указываются концентрация и растворитель раствора, которые применяют для измерения вращения плоскости поляризованного света.
- 44 021883
Таблица 3
Вращение плоскости поляризованного света
0’ соединения Концентрация Растворитель
18 -37,4° 0,516% масс./об. ДМФА
20 +36,87° 0,575% масс./об. ДМФА
21 -39,68° 0,378% масс./об. ДМФА
24 +5,03° 10,30 мг/мл МеОН
25 -3,44° 10,70 мг/мл МеОН
26 -13,74 8,59 мг/мл хлороформ
27 +11,89 9,00 мг/мл хлороформ
30 -5,25 4,00 мг/мл МеОН
31 +7,99 4,00 мг/мл МеОН
28 -4,90 10,00 мг/мл МеОН
29 +5,69 9,89 мг/мл Меон
С. Фармакологический пример.
Способность настоящих соединений предотвращать экспрессию р53 в клетках А2780 измеряли связанным с ферментом р53 твердофазным иммуноферментным анализом. Анализ р53 является сэндвичтвердофазным иммуноферментным анализом, в котором применяли два поликлональных антитела. Поликлональное антитело, специфичное для р53-белка, иммобилизовывали на поверхности пластиковых лунок. Любой р53, присутствующий в анализируемом образце, будет связываться с иммобилизованным антителом. Биотинированное идентифицирующее поликлональное антитело также распознает р53-белок и может связываться с любым р53, который удерживается иммобилизованным антителом. Идентифицирующее антитело, в свою очередь, связывается со стрептавидином, конъюгированным с пероксидазой хрена. Пероксидаза хрена катализирует превращение хромогенного субстрата о-фенилендиамина, интенсивность которого пропорциональна количеству р53-белка, связанного с планшетом. Окрашенный продукт реакции определяют количественно с применением спектрофотометра. Количественное определение достигают построением стандартной кривой с применением известных концентраций очищенного рекомбинантного, ШЗ-меченого р53-белка (см., например, С.1).
С.1. ΕΟ8Α р53.
Клетки А2780 (АТСС) культивировали в ΚΡΜΣ, дополненной 10% фетальной телячьей сывороткой (РСЗ), 2 мМ Ь-глутамином и гентамицином, при 37°С в увлажненном термостате с 5% СО2.
Клетки А2780 засевали при плотности 20000 клеток на лунку в 96-луночном планшете, культивировали в течение 24 ч и обрабатывали соединением в течение 16 ч при 37°С в увлажненном термостате. После инкубации клетки промывали один раз забуференным фосфатом физиологическим раствором и добавляли 30 мкл, на лунку, буфера ΚΙΡΑ с низким одержанием соли (20 мМ трис, рН 7,0, 0,05 мМ ΕΌΤΑ, 1% Νοπίάβΐ Ρ40, 0,5% ЭОС. 0,05% 8Ό8, 1 мМ ΡΜ8Ρ, 1 мкг/мл апротинина и 0,5 мкг/мл лейпептина). Планшеты помещали на лед на 30 мин для завершения лизиса. р53-белок детектировали в лизатах с применением сэндвич-ЕЫЗА, описанного ниже.
Полистирольные 96-луночные планшеты ЕМ/КЛА с высоким связыванием (СозЛаг 9018) покрывали иммобилизованным антителом рАЫ801 (АЬсат аЬ28-100) при концентрации 1 мкг/мл в буфере для покрытия (0,1 М NаΗСОз, рН 8,2), 50 мкл на лунку. Антителу давали возможность прилипать на протяжении ночи при 4°С. Покрытые планшеты промывали один раз смесью забуференный фосфатом физиологический раствор (ΡΒ3)/0,05% твина 20 и добавляли 300 мкл блокирующего буфера (ΡΒ8, 1% альбумин бычьей сыворотки (Β3Α)) в течение периода инкубации 2 ч при комнатной температуре. Разведения очищенного рекомбинантного, ШЗ-меченого р53-белка, в диапазоне 3-200 нг/мл, проводили в блокирующем буфере и продукт разведения применяли в качестве стандартов.
Планшеты промывали дважды смесью ΡΒ3/0,05% твина 20 и добавляли блокирующий буфер или стандарты в количестве 80 мкл/лунку. К стандартам добавляли 20 мкл буфера для лизиса. В другие лунки добавляли образцы в количестве 20 мкл лизата/лунку. После инкубации на протяжении ночи при 4°С планшеты промывали дважды смесью ΡΒ3/0,05% твина 20. К каждой лунке добавляли аликвоты 100 мкл вторичного поликлонального антитела р53 (РЬ-393) (ТеЬиЫо, зс-6243) при концентрации 1 мкг/мл в блокирующем буфере и давали им возможность прилипнуть в течение 2 ч при комнатной температуре. Планшеты промывали три раза смесью ΡΒ3/0,05% твина 20. Добавляли идентифицирующее антитело антикроличьего ΗΚΡ (зс-2004, ТеЬиЫо) при 0,04 мкг/мл в ΡΒ3/1% Β3Α и инкубацию проводили в течение 1 ч при комнатной температуре. Планшеты промывали три раза смесью ΡΒ3/0,05% твина 20 и добавляли 100 мкл буфера для субстрата (буфер для субстрата получали незадолго до применения добавлением 1 таблетки 10 мг о-фенилендиамина (ΟΡΌ) от Зщта и 125 мкл 3% Н2О2 к 25 мл ΟΚΌ-буфера: 35 мМ лимонная кислота, 66 мМ №2ΗΡΟ4, рН 5,6). Через 5-10 мин цветную реакцию останавливали добавлени- 45 021883 ем 50 мкл буфера для остановки реакции (1 М Н2§О4) на лунку. Поглощение при двойной длине волны 495/655 нм измеряли с применением микропланшет-ридера Βίοηιά и результаты затем анализировали.
Для каждого эксперимента инкубацию контрольных проб (не содержащих лекарственное средство) и слепой пробы (не содержащей клетки или лекарственные средства) проводили параллельно. Величину слепого опыта вычитали из величин всех контрольных проб и образцов. Для каждого образца величину р53 (в единицах поглощения) выражали как процент величины для белка р53, присутствующего в контрольной пробе. Процентное предохранение выше чем 140% считали как значимое. В контексте действия испытуемых соединений выражали как самую низкую дозу, обеспечивающую по меньшей мере 140% величины для р53, присутствующей в контрольной пробе (ЬАЭ) (см. табл. 4).
В некоторых экспериментах анализ адаптировали для культуральных 384-луночных планшетов и проводили в них.
Таблица 4
Результаты испытания соединений, которые испытывали по описанному выше протоколу ЕЫ8А р53 (клетки А2780)
С.2. Анализ пролиферации.
Раковые клетки А2780 яичников человека были любезно подарены Иг. Т.С. НашШои (Рох СНазс Сапсег Сейте, РеппзуКата, И.8.А.). Клетки культивировали в среде КΡМI 1640, дополненной 2 мМ Ьглутамином, 50 мкг/мл гентамицина и 10% фетальной телячьей сывороткой.
Реагенты, применяемые в анализе с аламаром синим.
Резазурин был куплен у А1йг1сН (Ρτοά. Νο. 199303). Ферроцианид калия, феррицианид калия,
- 46 021883
КН2РО4 и К2НРО4, были куплены у §1дта (Ргод. Νοδ. Р9387, Р8131, Р5655 и Р8281 соответственно).
Буфер, 0,1 М фосфат калия (РРВ), получали следующим образом: 2,72 г КН2РО4 и 13,86 г К2НРО4 растворяли в 500 мл Н2О ιηί11ί-Ο. рН регулировали до рН 7,4 и объем доводили до 1 л добавлением Н2О т1Ш-Р; буфер стерилизовали стерилизующим фильтром и хранили при комнатной температуре. Исходный раствор резазурина (РРВ-А) был свежеприготовленным растворением 45 мг резазурина в 15 мл РВ§. 30 мМ феррицианид калия (РРВ-В) получали растворением 0,987 г феррицианида калия в 100 мл РРВ. 30 мМ ферроцианид калия (РРВ-С) получали растворением 1,266 г ферроцианида калия в 100 мл РРВ.
Смесь РРВ-А, РРВ-В и РРВ-С получали смешиванием равных объемов соответствующих растворов. Рабочий раствор резазурина (называемый в контексте раствором аламар синий) получали разведением указанной смеси 20х (об./об.) в РРВ и стерилизацией фильтром; раствор аламар синий можно хранить при 4°С максимально в течение 2 недель.
Методика анализа с аламаром синим.
Для экспериментов в 384-луночных планшетах клетки засевали при плотности 5х103 клеток/мл в черных 384-луночных культуральных планшетах Ра1сои с прозрачным дном (НГе ТесЬио1од1е8, Меге1Ьеке, Ве1дшт) в 45 мкл культуральной среды. Клеткам предоставляли возможность прилипать к пластику в течение 24 ч. Испытуемое соединение предварительно разводили (1/50 в культуральной среде) и 5 мкл предварительно разведенного соединения добавляли к лункам. После 4 дней инкубации к каждой лунке добавляли 10 мкл раствора аламара синего и клетки дополнительно инкубировали в течение 5 ч (А2780) при 37°С. Интенсивность флуоресценции измеряли для каждой лунки флуоресцентным планшет-ридером (Ииогккаи, ЬаЬкукгетк, возбуждение при 540 нм и излучение при 590 нм).
Антипролиферативную активность вычисляли как процент оставшихся жизнеспособных клеток в обработанных клетках по сравнению с контрольными пробами (необработанными клетками). В экспериментах результат каждого экспериментального условия означает среднее значение 3 повторных лунок. При необходимости, эксперименты повторяли для получения кривых достаточная концентрацияответная реакция. При необходимости, КХ-величины (концентрация лекарственного средства, необходимая для уменьшения роста клеток на 50% контрольного опыта) вычисляли с применением пробитанализа для измеренных данных (Иииеу, И.к, РгоЬР Аиа1у8е8, 2'1 Ед. СЬар1ег 10, Огадед Рекропкек, СатЬпдде Итуегкйу Ргекк, СатЬпдде 1962). Действия испытуемых соединений в контексте представлены как ρΚ.’50 (величина отрицательного 1од КАгвеличины (М)) (см. табл. 5А).
Таблица 5А
Результаты испытания соединений согласно описанному выше протоколу пролиферации клеток (клетки А2780)
- 47 021883
Соединения испытывали также согласно описанному выше протоколу, но с применением других клеточных линий: клеточной линии колоректального рака НСТ116, клеточной линии немелкоклеточного рака легких Н1299, клеточной линии рака простаты человека Όυ145. Результаты представлены в табл. 5В.
Таблица 5В
№ соединения Ингибирование пролиферации клеток НСТ116, р1С5« Ингибирование пролиферации клеток Н1299, р1С60 Ингибирование пролиферации клеток ϋϋ145, р1С5о
б 5,39 5,03
17 7,05 6,18 6,17
12 6,06 5,2
13 5,61 <5
19 5,46 5,74
2 5,94 6,16
5 6,46 5,23 5,56
22 5,09 5,07
15 6,69 5, 82
20 5,72 5,73
13 7,27 6, 38 6,40
21 6,83 6,12 5,22
9 6,02 5,17 5,26
11 6,67 5,81 6,21
14 <5 5,40 5,14
4 6,00 5,43 5,29
10 6,47 5,68 5,65
7 7,00 6,39 6,60
8 7,06
16 6,68 6,73 5,98
23 5,53 5, 61 5
1 6,82 6,06 5,92
27 7,08 5, 99 6,00
24 7,42 6,63 6,53
31 6,94 5, 84 6,04
26 7,26 6,27 6,18
30 7,19 6,02 6,14
29 7,37 6,67 6,58
28 7,11 6,73 6,52
- 48 021883
С.3. Анализ Р450.
Белки СУР Р450 (экспрессированные Е.соБ) (3А4, 2Ό6, 2С9, 1А2 и 2С19) превращают свои специфические субстраты в флуоресцентные молекулы 2 Флуоресцентные молекулы измеряют с применением флуоресцентного планшет-ридера. Соединения, ингибирующие ферментативную реакцию, будут вызывать уменьшение флуоресцентного сигнала.
Превращения, опосредованные соответствующими, кДНК-экспрессированными изоферментами цитохрома Р450.
Аббревиатуры:
СЕС: 7-этокси-3-цианокумарин;
СНС: 3-циано-7-гидроксикумарин,
МЕС: 7-метокси-4 -трифторметилкумарин;
7-НРС: 7-гидрокситрифторметилкумарин,
СЕС: 7-этокси-3-цианокумарин;
СНС: 3-циано-7-гидроксикумарин,
АММС: 3-[2-^^-диэтил-Ы-метиламино)этил]-7-метокси-4-метилкумарин; АНМС: гидрохлорид 3-[2-^^-диэтиламино)этил]-7-гидрокси-4-метилкумарина, ВЕС: 7 -бензилокситрифторметилкумарин,
ΌΒΕ: дибензилфлуоресцеин,
7-ВЦ: бензилоксихинолин.
Смесь кофакторов (для всех ферментов СУР, за исключением СУР 2Ό6)
С-6-Р рабочий раствор 8.25 мМ 25.10 мг конечная концентрация 33 мМ
α-6-р-вд 1 Е/мл 14.29 мкл 0.4 Е/мл
0.5М М§С12.6Н,О 8.25 мМ 165.0 мкл 3.3 мМ
ΝΑϋΡ 3.25 мМ 25.59 мг 1.3 мМ
растворенный в 0,1М Ыа-К-фосфатном буфере 10 мл
Аббревиатуры:
О-6-Р: глюкоза-6-фосфат;
Ο-6-Ρ-ΌΗ: глюкоза-6-фосфат-дегидрогеназа. Смесь кофакторов (для СУР2Э6)
0-6-Р рабочий раствор 1.025 мМ 3.12 мг конечная концентрация 0.41 мМ
Ο-6-Ρ-ϋΗ 1 Е/мл 14.29 мкл 0.4 Е/мл
0.5М МдСЬ.бЩО 1.025 мМ 20.5 мкл 0.41 мМ
ΝΑΒΡ 20.5 мкМ 0,161 мг 8.2 мкМ
растворенный в 0,1 М Ыа-К-фосфатном буфере 10 мл
- 49 021883
СУР Р450 энзимы субстратов
СУР1А2: (СЕС) конечная концентрация 5 пмоль Р450/мл
СУР2С9: (МЕС) конечная концентрация 60 пмоль Р450/мл
СУР2С19: (СЕС) конечная концентрация 2,5 пмоль Р450/мл
СУР2О6: (АММС) конечная концентрация 42 пмоль Р450/мл
СУРЗА4; (ВГС) (ОВГ) (7-ВС) конечная концентрация 83 пмоль Р450/мл конечная концентрация 5 пмоль Р450/мл конечная концентрация 20 пмоль Р450/мл
Все эти ферменты СУР растворяли в 0,01 М Να-Κ-фосфатном буфере + 1,15% КС1 и хранили на льду до применения. Ферменты СУР Р450 хранили при -80°С.
Разведение соединений и ссылочных ингибиторов.
Соединения и эталонные ингибиторы доставляли в лабораторию в виде 5 мМ раствора в ДМСО. Рабочий раствор с концентрацией 5-10-4 М получали серийным разведением с применением ацетонитрила. Конечная концентрация соединения была 10-5 М для первичного скрининга и конечная концентрация растворителя была 2%. После первичного скрининга при концентрации 10-5 М величины КУ, выбранных сильнодействующих ингибиторов определяли при диапазоне концентраций 3· 10-9-10-5 М. При первичном скрининге все соединения испытывали в трех повторах. Ссылочные ингибиторы испытывали при диапазоне концентраций 10-9-10-4 М.
Ссылочные ингибиторы_
Фурафиллин (Ультрачистые химикаты) для ΟΥΡ1Α2
Сульфафеназол в лаборатории авторов для СУР2С9
Транилципромин в лаборатории авторов для СУР2С19
Хинидин в лаборатории авторов для СУР266
Кетоконазол в лаборатории авторов для СУРЗА4
Растворы субстратов
СЕС (субстрат СУР1А2) 6,25 мкл 20 мМ раствора СЕС/5 мл общего раствора 5 мкМ
МГС (субстрат СУР2С9) 200 мкл 25 мМ раствора МГС/5 мл общего раствора 200 мкМ
СЕС (субстрат СУР2С19) 31,25 мкл 20 мМ раствора СЕС/5 мл общего раствора 25 мкМ
АММС (субстрат СУР2О6) 150 мкл 0,5 мМ раствора АММС/5 мл общего раствора 3 мкМ
ВГС (субстрат ΟΥΡ3Α4) 750 мкл 5 мМ раствора ВГС/5 мл общего раствора 150 мкМ
ϋΒΓ (субстрат СУРЗА4) 12,5 мкл 2 мМ раствора ϋΒΓ/5 мл общего раствора 1 мкМ
7-ВО (субстрат СУРЗА4) 60 мкл 25 мМ раствора 7-ВО/5 мл общего раствора 60 мкМ
Исходные растворы субстратов растворяли в ацетонитриле и хранили при -20°С. Конечный рабочий раствор растворяли в 0,1 М Να-Κ-фосфатном буфере с рН 7,4 и этот раствор всегда был свежеприготовленным перед началом анализа.
Анализ данных.
Подготовку планшета, связывание данных, анализ данных, достоверность результатов и одобрение и загрузку данных проводили полуавтоматически программным обеспечением Ьех15-Ьар1асе (Ьар1асеГ)1.М-1^АМ).
При вычислениях применяли формулу:
% активность = (100/(средняя величина положительного контроля - средняя величина отрицательного контроля) х (средняя величина образца - средняя величина отрицательного контроля).
% ингибирование = 100 - % активность.
При вычислении величину !СУ, автоматически получали графической экстраполяцией в 1^АМ на
- 50 021883 основе пересечения с 50% контрольной оси.
Способ.
Анализ проводили в черном 96-луночном планшете СокГат. Каждая лунка при анализе содержала 40 мкл раствора фермента СУР Р450 (в образцах отрицательного контроля 40 мкл 0,1 М Να-Κ-фосфатного буфера с рН 7,4 без добавленного фермента); 40 мкл смеси кофакторов; 2 мкл соединения или эталонного ингибитора для отрицательных контрольных образцов или растворитель для положительных контрольных образцов. После 5 мин предварительной инкубации при 37°С во встряхиваемом термостате добавляли 20 мкл раствора субстрата. Планшеты инкубировали при 37°С в течение 10 мин (СУР3А4/ЭВР), 15 мин (СУР1А2), 30 мин (СУР2С9, СУР3А4/ВРС и СУР3А4/7-ВЦ и СУР2С19) и 45 мин (С.УР2О6). Реакцию останавливали добавлением 200 мкл ацетонитрила. Для СУР3Л4/ОВР реакцию останавливали добавлением 200 мкл 2 М ΝαΟΗ. Для СУР3А4/7-ВЦ реакцию останавливали добавлением 40 мкл смеси трис/ацетонитрил (1:5) (об./об.) с последующим центрифугированием 10 мин при 2000 об/мин. Сигнал флуоресценции детектировали флуоресцентным планшет-ридером УкГог2 (^а11ас) или Ииогоккап (ЬаЬкукГетк). Длины волн возбуждения и излучения для разных ферментов и их специфических субстратов указаны в табл. 6.
Таблица 6
Длины волн возбуждения и излучения
[1] МкгоШег Р1а1е Аккаук Гог [пЫЬнкп оГ Нитап, Пгид-МеГаЬо^тд СуГосЬготек Р450
СЬаг1ек Ь. Сгекрц УаидЬп Р. МШег, Вгисе Рептап (СепГекГ) Апа1уйса1 ВксЬеткГгу 248, 188-190 (1997) Лгйс1е п° АВ972145.
[2] №уе1 Н1дЬ ТЬгоидЬриГ ЙиогексепГ Р450 аккаук У.Р. МШег, ί. Аскегтапп, Ό.Μ. §1геккег, С.Ь. Сгекр1 СепГекГ !п1егпе1 кНе.
В табл. 7 указаны данные для соединений настоящего изобретения (соединений № 18, 20, 9, 14 и 4), испытанных в семи тестах, при сравнении с соединениями известного уровня техники. Как описано выше, испытывали пять ферментов Р450, один из них применяли на трех разных субстратах (таким образом, проводили всего семь испытаний). В табл. 7 показано, сколько раз соединение в испытаниях с Р450 показало ингибирующую активность с Κ'\0<1.00Ε-06.
Таблица 7
Сравнительные данные по ингибированию СУР
Соединение Действия на Р450, 1С50
н 7 раз <1,ООЕ-06
к Кк н
ή
Соединение № 47 ЕР 1809622
Шт н Ίΐ- 3 раза <1,00Е-06
н-А-7 ή Кс н М
и
Соединение № 36 ЕР 1809622
- 51 021883
н „-θ' о N Соединение № 197 ЕР 1809622 7 раз <1,ООЕ-О6
АХО Соединение № 195 ЕР 1809622 0 раз <1,ООЕ-Об
Соединение № 229 ЕР 1809622 0 раз <1,ООЕ-Об
Соединение № 20 0 раз <1,00Е-06
ΗΝ-''^У сУ он Соединение № 18 0 раз <1,00Е-06
,ώ'χΡ Соединение № 9 0 раз <1,ООЕ-06
раз <1,00Е-0б
Соединение № 14
Соединение Ν' 4
О раз <1,00Е-06
С4. Антагонизм в отношении Κο-4-1284 у мышей ' ’ .
Испытание является модификацией методики, описанной С'о1раег1 е1 а1. (1975)3. Самцов мышей NΜΚI (22±3 г) содержали в макролоновых клетках для наблюдений (Ьх^хН: 11x12x17 см; п=3 на клетку). В начале экспериментов непосредственно перед введением испытуемого соединения начальную
- 52 021883 температуру тела мышей измеряли с точностью 0,1°С вводом термочувствительного зонда (диаметр 1,0 мм) электрического термометра (Сотагк) до постоянной глубины 3 см в пищевод до получения стабильного показателя. Диаметр зрачка правого глаза измеряли градуированным микроскопом и выражали в единицах 1/24 мм. Через 15 мин после введения испытуемого соединения мышам вводили Ко-4-1284 (10 мг/кг, подкожно). Ко-4-1284 является подобным резерпину ингибитором переноса везикулярного моноамина (УМАТ-2), который быстро уменьшает секреторные везикулы 3’ 4. Через 15, 30 и 60 мин после введения у мышей оценивали в баллах пальпебральное открывание век (0, 1, 2, 3, 4, 5) и двигательную активность (-1, 0, 1, 2, 3). С 60-минутными интервалами сразу после балльного оценивания определяемого поведения опять измеряли диаметр зрачка правого глаза и температуру пищевода. Отмечали аномальные явления, такие как интенсивный вдох носом, пережевывание, подъем на задние лапы, гиперемия, пилоэрекция, слюноотделение, дрожание, судороги и гибель (последние явления были отмечены также при проявлении перед введением Ко-4-1284). Критериями для индуцированных лекарственным средством эффектов были обратимый блефароптоз: оценка в баллах пальпебральных открытий век >1 за время 15, 30 или 60 мин (2,7, 0,5 и 0% ложноположительных контролей, соответственно; п>350); индуцирование изнеможения: оценка в баллах -1 для локомоции за 15, 30 и 60 мин (ни разу не наблюдали в контролях); реверсирование гипокинезии: оценка в баллах >0 для локомоции за 15, 30 и 60 мин (2,2, 0,8 и 0% ложноположительных контролей соответственно); реверсирование миоза: диаметр зрачка >5 единиц за 60 мин (0,8% ложноположительных контролей); потенцирование гипотермии: понижение температуры (через интервал времени 1 ч) >9,0°С (1,4% ложноположительных контролей); реверсирование гипотермии: понижение температуры <3,0°С (1,8% ложноположительных контролей).
Согласно стандартной методике Ко-41284 инъецировали через 15 мин после подкожного или перорального введения и обследование начинали на 15 мин позже. Дозы сначала давали 3 животным. Когда по меньшей мере 2 из 3 животных обнаруживали активность по меньшей мере в одном из обследований, соединение считали активным. В других случаях соединение считали неактивным при конкретном режиме время-путь введения-доза и испытание классифицировали как завершенное.
Соединения № 20, 18, 1, 27, 24, 25, 31, 30, 7, 29, 28, 26 и 17 испытывали, каждое на 3 животных, при концентрации 80 мг/кг после перорального введения, и они не обнаруживали активность на реверсирование миоза, реверсирование птоза, реверсирование гипокинезии. Соединение 4 испытывали только при 40 мг/кг и оно не обнаружило активность на реверсирование миоза, реверсирование птоза, реверсирование гипокинезии.
Соединение из ЕР 1809622 также испытывали таким же тестом и результаты испытания показаны ниже в табл. 8.
- 53 021883
Таблица 8
Сравнительные данные
Соединение Индуцированные лекарственными средствами неврологические побочные действия
А имеются
Соединение № 47 ЕР 1809622
имеются
ίΊ
и
Соединение № 36 ЕР 1609622
н —ГЙ имеются
Λ ТТ
и
Соединение Ϊ ί 187 1809622
Тио Ν он имеются
Соединение № 195 ЕР 1809622
Тес ей N ОН имеются
Соединение № 229 ЕР 1809622
Ссылки.
[3] Со1раей, Р.С., Ьепаегк, Р.М., №етедеегк, С.1Е., ктккеп, Р.А.Т: А сгШса1 ккйу оп Ко-4-1284 ап!адопкт ш тке, АгсЬ. Ш!. РЬагтасойуп. 215 40-90 (1975).
[4] С’о1/к А., О'АдокРпг К., Секига, А.М., Воггош, Е., Иа Ргайа, М.: Мопоатше ох1йаке-А тЫЬйогк апй йоратте те!аЬо1кт ш га! саийа!ик: еукепсе 1Ьа1 ап шсгеакей суЮкоПс 1еуе1 оГ йоратте Й18р1асек геуегФЫе топоатте охкаке-А ШЫЬйогк т уко, 1. РЬагтасо1. Ехр. ТЬег. 265 103-111 (1993).
[5] РШпдег, Е.к: ЕГГес! оГ а гекегрте-кке адеп! оп !Ье ге1еаке апй те!аЬо1кт оГ [3Η]ΝΆ ш се11 Ьойкк апй 1егтта1к, Оеп. РЬагтасо1. 25 1039-1043 (1994).
С. 5: определение ингибирования ΗЕКΟ-опосредуемого К+-тока в клетках ΗЕК293 с применением пэтч-кламп-теста.
Эксперименты проводили с применением клеток ΗЕК293, стабильно экспрессирующих калиевый канал ΗЕКΟ. Клетки выращивали при 37°С и 5% СО2 в культуральных флаконах в среде МЕМ, дополненной 10% термоинактивированной фетальной телячьей сывороткой, 1% раствором Ь-глутаминапенициллина-стрептомицина, 1% незаменимых аминокислот (100х), 1% пирувата натрия (100 мМ) и 0,8% генетицина (50 мг/мл). Перед применением клетки пересевали в среде МЕМ в отсутствие 5 мл Ьглутамин-пенициллин-стрептомицина. Для применения в автоматизированной системе пэтч-клампа Ра!сЬXр^екк 7 0 00А (Ахоп Шккитепк) клетки собирали для получения клеточной суспензии отдельных клеток. Бесклеточный раствор содержал (мМ) 150 №С1, 4 КС1, 1 МдС12, 1,8 СаС12, 10 ΗЕРЕδ, 5 глюкозу (рН 7,4, добавляли №·ιΟΗ). Раствор для пипетирования содержал (мМ): 120 КС1, 10 ΗЕРЕδ, 5 ЕОТА, 4 АТФ-Мд2, 2 МдС12, 0,5 СаС12 (рН 7,2, добавляли ΚΟΗ). Эксперименты с пэтч-клампом проводили в режиме фиксации потенциала и токи целых клеток регистрировали автоматизированным анализом пэтчклампа с применением системы Рак^ргекк 7000А (Ахоп Егккитепк). Сигналы тока усиливали и оцифровывали усилителем МиШс1атр, сохраняли и анализировали с применением программного обеспечения РакИргекк, ^а!аXр^екк и Цог 5,0 (\Уауете1гкк).
Поддерживающий потенциал был -80 мВ. ΗЕКО-ток (К+-селективный наружный ток) определяли
- 54 021883 как максимальный конечный ток при -40 мВ после 2 с деполяризации изменяющийся до +60 мВ. Скорость цикличности импульса была 15 с. Перед каждым тест-импульсом из поддерживающего потенциала подавали короткий импульс (0,5 с) до -60 мВ для определения (линейной) утечки тока. После установления конфигурации целых клеток и периода стабильности в течение 5 мин применяли наполнитель с последующим применением испытуемого вещества при увеличивающихся концентрациях до 10-7 М, 3х10-7 М и 3х10-6 М. Каждую концентрацию испытуемого соединения применяли дважды. Влияние каждой концентрации определяли спустя 5 мин как средний ток 3 последовательных импульсов напряжения. Для определения степени блокирования остаточный ток сравнивали с остаточным током предварительной обработки наполнителем. Данные (табл. 9) представлены как средние величины (± стандартная ошибка, среднего (8ЕМ), при доступности) процентного ингибирования по сравнению с контролем (контроль принимают за 100%) (п равно числу экспериментов).
Таблица 9
Ингибирование НЕКО-опосредуемого К+-тока в клетках НЕК293
Соединение 3-1О'М 3-10'6М
г? •ЧХ' ''Ίί—Г
Л н 76±1,6 58±2,7 13±3,1
и (п=3)
Соединение № 4 7 ЕР 1809622
н ΥΎν'
ην^-Ί Λ и1- н 68+3,5 41±2,Э 5±0,33
и (п=3)
Соединение № 36 ЕР 1809622
н гг ι Г
л? ι ι н 68±3,2 36±6,1 5±1
и (п=3)
Соединение № 187 ЕЕ 1309622
- 55 021883
„χω СА Ν Υη (η=3) Соединение № 195 ЕР 1809622 80±3,7 65+2 19+0,4
СА» (дй) Соединение № 229 ЕР 1809622 81+4,8 63+5,5 18±1,1
хУхх ήα Ν Он (п=4) Соединение № 110 ЕР 1809622 86±4,6 66±5,2 22+4,6
χτ’ΆίΟ °< <п=3) Соединение Ν’ 21 ЕР 1809622 35+8,6 8+3,6 0±0
ύφ он (п=3) Соединение № 112 ЕР 1809622 74+3,2 46+7,3 6±3,1
О~кк (п=3) Соединение № 196 ЕР 1809622 87±0,9 76±1,б 38+3,1
- 56 021883
ΐ с лч Соединение р У\ 89±3,9 75+0,8 18+4,6
Ν' 2 <П=3)
<^1
ХД Д н “\ги
г у\ н 88+5,1 76+1,8 26+7,1
Ч' ЛЛ
он (П-3)
Соединение № 20
Μ-Ί- Х’Ч,
НМ' V и н
ιίΎΛ Н< 90±1,8 82+3,8 41+4,3
V МУ5
ОН (η-3)
Соединение № 18
Дл-т- Γ^ι
ΗΝ ν и н т
Г г> н 86±2,5 82±1,1 69±5,1
у он (η=4)
Соединение Ν· 1
Д р
19 ” 86±2,9 53±6,8 2±0,3
1
ч- У <ч (η=3)
Соединение Ν' 7
н
г ν> ΌΗ 89+2,9 87+4,8 69±3,4
Ν'^Λ
он (η=4)
№ 6
- 57 021883
рА /\-Л
V? -он 84±3,9 70+4,7 21+3,3
Ν ОН № 17 (п=3)
О-< Н / —
го 87±0,9 78+2,8 58±2,9
и д он № 12 (п=6)
хГО гаД-^ ГО ~>я Лн 91±2,е 85+4,2 75+1,8
он № 13 (п-З)
м
X у Ζ- 89±2,4 72±3,2 26+4,7
ОН №19 (П-3)
„дУ Эй н У >
сх 88+1,9 74±6,1 33+10,5
он № 5 (П-3)
76+ 5,2 49+7,3 9+2,3
Ь™
э № 22 (п-3)
- 58 021883
е 93+1,2 88+0,8 66+4,4
Е> он но
Я' 15 (п=3)
Л8' η Л} 3 91 + 0,9 86+1,8 65+1,2
ч № 21 (п-3)
(Г V- гС >
к ¥~ □ 87+2,1 72+3,4 47+3,2
№ 9 (п=3)
хо
ЛгВ ЯЧ
ΗΝΧ Г м η Ύ Ύ но 90+8,7 80+7,2 43+3,3
Я к Он К· 11 (п=3)
б Я 0 я н > / 84+2,1 57+5,4 10+3,8
л Н· 14 (п=4>
тЧ
ч ΝΗ 89+4,2 85+1,7 66+3,3
О (Т СС № 4 -.ОН (п-3)
- 59 021883
» (П-3) 82+2,1 72+2,6 62±1,8
у № ЧК ' н , но 10
ГО)
ГО го 9/ Э3±7,3 83±б,4 25+5,4
ьгд 0^. № 8 (п=3)
у Ό+ “ и/ )
№ 16 (п=3) 89±6,0 74+7,9 34+4,4
ιί\ί3'^Ύ -о
ΙΙΓίΟ) 00 го Ън 92±1,0 87±2,0 72+0,4
к, № 23 (п=3)
г-го ι н / \ *К
По V. α θΗ -Ν
оа/ 90+1,8 75+3,3 53+8,1
1 он (п=3)
№ 27
/Ό- ~1
уАП ГОЧ^“^ О го
со 88+3,2 77+4,2 29+2,9
и К' 24 (п=3)
- 60 021883
* № 25 У V (П=3) 82+1,7 65±2,8 27±2,7
5ЧГ- г Л ОН χ| *к -ни у X 91±0,9 82+2,3 55±3,8
№ 31 (П=3)
с он н V-/ № 26 V- -Ν \ *8 он (11=3) 87±1,7 78+1,8 51±5,9
г г > он ц ΝΗ Л 98±1,6 93+6,3 80±7,2
1 н № 30 (П=3)
р-он ΗΝ- λΖγ № 29 ΝΗ с N __/ К ί (п=3) 89+2,3 82±3,9 39+0,8
ΗΝ у/ № 28 -ΝΗ V / __/ *5 (п=4) 84±4,4 79±8,8 60±6,4
Настоящие соединения неожиданно проявили превосходную активность ίη νίίτο в сочетании с низкой аффинностью в отношении ферментов Р450 и отсутствием ίη νίνο индуцированных лекарственными средствами неврологических действий и слабыми сердечно-сосудистыми действиями.
- 61 021883
С.6. Противоопухолевые действия ίη νΐνο.
Противоопухолевую активность ίη νΐνο можно тестировать следующим образом.
Стандартная ссылка ΝΟΊ.
В188ету, М-С., апй СНаЬо1, О.О. ШзЮгу апй пе\у йеνе1οртеηΐ οί зсгеетпд апй еуа1иа1юп теПюйз οί апБсапсег йгидз изей ίη νΐνο апй ίη νίΐτο. Ви11. Сапсег. 1991, 78: 587-602.
Животная модель.
Для этих исследований применяли иммунодефицитных (отсутствие волочковой железы) самцов мышей ЯМЫ Иийе (Νιι/Νιι) (20-25 г, получены от 1апу1ег, Ргапсе). Начальная масса была приблизительно 23-34 г. Всех животных выдерживали в условиях §РР полного барьера при свободном доступе к корму и воде. Мыши были группой, которую поселили в условиях 12-часового цикла свет:темнота (свет включали в 06:00 ч) при температуре 19-22°С и влажности 35-40% в клетках Тес1ипр1а81 1уре-3 ШС. Мышей кормили стандартным лабораторным кормом. Все эксперименты проводили в соответствии с Еигореап ί.’οιηιηιιηί1^5 СоипсП Э|гсс11ус8 (86/609/ЕЕС) и эти эксперименты не требовали одобрения местной комиссией по этике. Мышей с установленной моделью опухолевого ксенотрансплантата (объем опухоли ~200 мм3) рандомизировали согласно объемам опухоли, 5 мышей на группу обработки.
Система испытания.
Клеточную линию опухоли глиомы И87 человека получали из организма пациента женского пола индо-европейской расы возраста 44 года. Клетки культивировали при 37°С в увлажненной атмосфере (5% СО2, 95% воздуха) в среде ЭМЕМ, дополненной 2 мМ Ь-глутамином, 2,0 мМ пируватом натрия, 25 единицами/мл пенициллина/25 мкг/мл стрептомицина и 10% фетальной телячьей сывороткой. Клетки сохраняли в виде культур монослоя клеток, пассируемых дважды в неделю при плотности 3х 106 клеток в колбе Т175 с применением следующей методики. Вкратце, клетки промывали РВ§ (без Мд'2, Са'2) перед добавлением смеси трипсин-ЕИТА в колбы для культивирования клеток. После отделения клеток смесь трипсин-ЕИТА инактивировали добавлением полной среды. Суспензию клеток затем переносили в пробирку Фалькона объемом 50 мл и центрифугировали в течение 3 мин при 1200 об/мин. Среду аспирировали, причем клетки ресуспендировали в подходящем объеме полной среды. Число клеток подсчитывали в гемоцитометре и их жизнеспособность анализировали исключением 0,25% трипана синего. Подходящий объем суспензии клеток затем добавляли либо в новую колбу(ы) Т175 для культивирования клеток, либо в роллер-флакон, содержащий свежую среду. Для культивирования опухолевых клеток И87 в больших количествах подходящее число роллер-флаконов засевали 0,5-1 х107 клетками за неделю до инокуляции мышей. Среду заменяли дважды в течение этого периода, причем последняя замена была за день до инъекции клеток. Клетки собирали, как описано выше, за исключением того, что после центрифугирования клетки ресуспендировали в холодной (4°С) среде без сыворотки. Мышам инъецировали в паховую область всего 1х 107 клеток в объеме 200 мкл.
Схема исследования.
Клетки глиомы И8 7 человека инъецировали в паховую область самцам мышей NМКI №йе (1х107 клеток/200 мкл/животному) в день 0 (Д0) В день 7-10 (день может изменяться вследствие используемой опухоли/роста между партиями клеток), когда объем опухоли достигал приблизительно в среднем 200 мм3, мышей рандомизировали согласно объему опухоли, 5 мышей на группу обработки. Мышей затем обрабатывали один раз в день (ΟΌ) либо наполнителем (10% ΗΡ-β-СЭ), либо наполнителем, содержащим испытуемое соединение (20 мг/кг), кормлением через желудочный зонд (перорально), вводимым в объеме 10 мл/кг массы тела в течение 5 дней. Точные измерения опухоли проводили в день 6 (через 24 ч после 5-й дозы) и затем опять в день 10. Проводили мониторинг возобновления роста опухоли (после прекращения дозирования), так чтобы можно было зарегистрировать время достижения объема 2000 мм3 (ТТК2000). Это дает дополнительную информацию по продолжительности влияния лекарственного средства на рост опухоли. Обычно размер опухоли и массу тела измеряли дважды в неделю с проведением мониторинга мышей ежедневно в отношении клинических признаков токсичности в течение обработки. Клинические признаки токсичности включали в себя (но не ограничиваются указанным) постоянную анорексию или обезвоживание, положение тела, состояние агонии, вялость, гипотермию и/или затрудненное дыхание (согласно методическим рекомендациям ИКСССК по уходу за животными при экспериментальной неоплазии (Т1е ИКСССК (ИК ί'.’οοΓώιη·ιΙίι^ Соп-ипШее οη Сапсег КезеатсБ) дшйе1шс8 ίοτ Ле \уеИаге οί апипаЕ ίη е\рептеп1а1 ικορΕΐ8ί3 (Шу 1997); апй ΧνοιΈιικιη, Р. е1 а1. ИКСССК дшйеНпе. Вг. ΐ. Сапсег. 1998, 77: 1-10).
Анализ данных.
Для каждого отдельного животного мониторинг массы тела и размера опухоли [с применением обычно принятой формулы: объем опухоли (мм3) = (ах Ь2/2); где а представляет собой длину, Ь представляет собой ширину опухоли, определяемых измерениями штангенциркулем] проводили дважды в неделю на протяжении всего исследования. Постоянную потерю массы тела больше чем 15% начальной массы тела рассматривали как клиническую токсичность, такого животного удаляли из исследования и умерщвляли. Временной ход роста опухоли в период исследования выражали как величины медианы или рост опухоли можно нормализовать относительно начального объема опухоли в день начала обработки и
- 62 021883 выражать как среднее значение ± стандартная ошибка среднего (δΕΜ) (5 животных на группу). Для предварительно установленных опухолей относительные объемы опухолей можно вычислить для каждой мыши (объем обработанной опухоли/объем опухоли в день 0) и выразить как среднее значение ± δΕΜ для каждой группы обработки. Статистическую значимость указывают односторонними рвеличинами из анализа \νίΚο\οη-Μ;·ιηη-\νΐιίΙι·^\· (ранкового суммарного критерия νίΚοχοη), и р<0,05 считают статистически значимым. Отношения обработка/контроль (Т/С) вычисляют на основе конечных относительных объемов опухолей с применением критерия ΝΟ в дни 6 и 10 (день 1 = началу обработки, после того, как мыши были рандомизированы и распределены по подходящим группам обработки). Эффективным критерием для отношений Т/С является 42%.
Таблица 10 % Т/С в день 6 и день 10 после начала введения дозы
№ соединения % Т/С, день 6 % Т/С, день 10
6 105 99
12 64 71
19 57 40
2 14 -0,23
5 103 67
22 40 55
15 53 88
18 9 -3
21 102 95
9 145 113
11 72 79
4 77 129
10 96 71
16 63 64
23 72 95
1 17 8
27 193 22
24 60 1
31 179 1
26 354 -11
30 -61 -10
29 -196 -13
28 -280 -10
25 330 -3
Ό. Пример композиции: таблетки, покрытые пленкой.
Получение сердцевины таблетки.
Смесь 100 г соединения формулы (Ι), 570 г лактозы и 200 г крахмала хорошо смешивают и после этого увлажняют раствором 5 г додецилсульфата натрия и 10 г поливинилпирролидона приблизительно в 200 мл воды. Влажную смесь порошков просеивают, сушат и снова просеивают. Затем к смеси добавляют 100 г микрокристаллической целлюлозы и 15 г гидрогенизированного растительного масла. Всю массу хорошо смешивают и прессуют в таблетки, получая при этом 10000 таблеток, причем каждая содержит 10 мг соединения формулы (Ι).
Покрытие.
К раствору 10 г метилцеллюлозы в 75 мл денатурированного этанола добавляют раствор 5 г этилцеллюлозы в 150 мл дихлорметана. Затем к раствору добавляют 75 мл дихлорметана и 2,5 мл 1,2,3пропантриола. 10 г полиэтиленгликоля расплавляют и растворяют в 75 мл дихлорметана. Последний раствор добавляют к первому и затем добавляют 2,5 г октадеканоата магния, 5 г поливинилпирролидона и 30 мл концентрированной суспензии красящего вещества и всю смесь гомогенизируют. Сердцевины таблеток покрывают полученной таким образом смесью в аппарате для нанесения покрытий.

Claims (19)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ включая любую его стереохимически изомерную форму, где
    К1 представляет собой гидрокси-С1-6алкил или С2-6алкенил; при условии, что заместитель К1 находится в положении 6 или 7 индольной части;
    К2 представляет собой водород или С1-4алкил;
    Ζ представляет собой радикал, выбранный из
    К3 представляет собой водород или гидрокси-С1-4алкил; К4 представляет собой гидрокси или С1-4алкилокси;
    К5 представляет собой водород или С!-4алкил или К4 и К5, взятые вместе, образуют оксо;
    его фармацевтически приемлемая соль или его сольват.
  2. 2. Соединение по п.1, имеющее формулу
  3. 3. Соединение по п.1 или 2, где К1 представляет собой гидрокси-С1-6алкил.
  4. 4. Соединение по любому из пп.1-3, где К2 представляет собой С1-4алкил.
  5. 5. Соединение по любому из пп.1-4, где Ζ представляет собой радикал формулы (ζ-1).
  6. 6. Соединение по любому из пп.1-4, где Ζ представляет собой радикал формулы (ζ-2).
  7. 7. Соединение по п.6, где К4 представляет собой гидроксил и К5 представляет собой водород.
  8. 8. Соединение по п.6, где К4 представляет собой гидроксил и К5 представляет собой С1-4алкил.
  9. 9. Соединение по п.1, где соединение является энантиомером формулы имеющим левое вращение плоскости поляризованного света, измеренное при длине волны И-линии натрия (589 нм) при температуре 20°С и длине пути ячейки 1 дм в хлороформе при концентрации 8,59 мг/мл;
    или его фармацевтически приемлемая соль, или его сольват.
  10. 10. Соединение по п.1, где соединение является энантиомером формулы
    - 64 021883 имеющим правое вращение плоскости поляризованного света, измеренное при длине волны Όлинии натрия (589 нм) при температуре 20°С и длине пути ячейки 1 дм в метаноле при концентрации 10,33 мг/мл;
    или его фармацевтически приемлемая соль, или его сольват.
  11. 11. Применение соединения по любому из пп.1-10 в качестве лекарственного средства для лечения рака.
  12. 12. Фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по любому из пп.1-10 в качестве активного ингредиента и фармацевтически приемлемый носитель.
  13. 13. Применение соединения по любому из пп.1-10 для изготовления лекарственного средства для лечения рака.
  14. 14. Комбинация одного или нескольких противораковых агентов и соединения по любому из пп.110.
  15. 15. Способ получения соединения по п.1, отличающийся тем, что промежуточный продукт формулы (II) подвергают взаимодействию с промежуточным продуктом формулы (III), где ^1 представляет собой подходящую уходящую группу, в инертном в реакционных условиях растворителе, необязательно или, если необходимо, превращают соединения формулы (I) друг в друга по известным в данной области техники превращениям и дополнительно, если необходимо, превращают соединения формулы (I) в терапевтически активную нетоксичную кислотно-аддитивную соль обработкой кислотой или в терапевтически активную нетоксичную основно-аддитивную соль обработкой основанием, или наоборот, превращают кислотно-аддитивную соль в свободное основание обработкой основанием или превращают основно-аддитивную соль в свободную кислоту обработкой кислотой, или, если необходимо, получают их стереохимически изомерные формы или сольваты.
  16. 16. Способ получения соединения по п.1, отличающийся тем, что промежуточный продукт формулы (II) подвергают взаимодействию с промежуточным продуктом формулы (III), где ^1 представляет собой подходящую уходящую группу, в присутствии подходящего катализатора, подходящего лиганда, или, если необходимо, превращают соединения формулы (I) друг в друга по известным в данной области техники превращениям и дополнительно, если необходимо, превращают соединения формулы (I) в терапевтически активную нетоксичную кислотно-аддитивную соль обработкой кислотой или в терапевтически активную нетоксичную основно-аддитивную соль обработкой основанием, или наоборот, превращают кислотно-аддитивную соль в свободное основание обработкой основанием или превращают основно-аддитивную соль в свободную кислоту обработкой кислотой, или, если необходимо, получают их стереохимически изомерные формы или сольваты.
    - 65 021883
  17. 17. Способ получения соединения по п.1, отличающийся тем, что соответствующее карбонильное соединение формулы (IV) восстанавливают в присутствии подходящего восстанавливающего агента и подходящего растворителя (IV) (1-1) где К2 и Ζ имеют значения, указанные в п.1, или, если необходимо, превращают соединения формулы (I) друг в друга по известным в данной области техники превращениям и дополнительно, если необходимо, превращают соединения формулы (I) в терапевтически активную нетоксичную кислотно-аддитивную соль обработкой кислотой или в терапевтически активную нетоксичную основно-аддитивную соль обработкой основанием, или наоборот, превращают кислотно-аддитивную соль в свободное основание обработкой основанием или превращают основно-аддитивную соль в свободную кислоту обработкой кислотой, или, если необходимо, получают их стереохимически изомерные формы или сольваты.
  18. 18. Способ получения соединения по п.1, отличающийся тем, что соответствующее сложноэфирное производное формулы (V), где Кх представляет собой С1-3алкил-С(=О)ОС1-4алкил, восстанавливают в присутствии подходящего восстанавливающего агента и подходящего растворителя или, если необходимо, превращают соединения формулы (I) друг в друга по известным в данной области техники превращениям и дополнительно, если необходимо, превращают соединения формулы (I) в терапевтически активную нетоксичную кислотно-аддитивную соль обработкой кислотой или в терапевтически активную нетоксичную основно-аддитивную соль обработкой основанием, или наоборот, превращают кислотно-аддитивную соль в свободное основание обработкой основанием или превращают основно-аддитивную соль в свободную кислоту обработкой кислотой, или, если необходимо, получают их стереохимически изомерные формы или сольваты.
  19. 19. Способ получения соединения по п.1, отличающийся тем, что промежуточный продукт формулы (VI) гидролизуют подходящим основанием в присутствии подходящего растворителя (VI) (1-1-а) где К2 и Ζ имеют значения, указанные в п.1, или, если необходимо, превращают соединения формулы (I) друг в друга по известным в данной области техники превращениям и дополнительно, если необходимо, превращают соединения формулы (I) в терапевтически активную нетоксичную кислотно-аддитивную соль обработкой кислотой или в терапевтически активную нетоксичную основно-аддитивную соль обработкой основанием, или наоборот, превращают кислотно-аддитивную соль в свободное основание обработкой основанием или превращают основно-аддитивную соль в свободную кислоту обработкой кислотой, или, если необходимо, получают их стереохимически изомерные формы или сольваты.
EA201170997A 2009-02-04 2010-02-03 Производные индола в качестве противораковых агентов EA021883B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP09152089 2009-02-04
PCT/EP2010/051316 WO2010089327A2 (en) 2009-02-04 2010-02-03 Indole derivatives as anticancer agents

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201170997A1 EA201170997A1 (ru) 2012-01-30
EA021883B1 true EA021883B1 (ru) 2015-09-30

Family

ID=40738626

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201170997A EA021883B1 (ru) 2009-02-04 2010-02-03 Производные индола в качестве противораковых агентов

Country Status (23)

Country Link
US (1) US8541442B2 (ru)
EP (1) EP2393801B1 (ru)
JP (1) JP5612611B2 (ru)
KR (1) KR101730407B1 (ru)
CN (1) CN102307868B (ru)
AR (1) AR075235A1 (ru)
AU (1) AU2010210178B2 (ru)
BR (1) BRPI1008855B8 (ru)
CA (1) CA2749209C (ru)
CL (1) CL2011001860A1 (ru)
CO (1) CO6341625A2 (ru)
EA (1) EA021883B1 (ru)
ES (1) ES2639752T3 (ru)
IL (1) IL214427A (ru)
MX (1) MX2011008195A (ru)
MY (1) MY152018A (ru)
NO (1) NO20111199A1 (ru)
NZ (1) NZ594186A (ru)
SG (1) SG173495A1 (ru)
TW (1) TWI476189B (ru)
UA (1) UA107455C2 (ru)
WO (1) WO2010089327A2 (ru)
ZA (1) ZA201105695B (ru)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2853729A1 (en) 2011-10-28 2013-05-02 Board Of Regents, The University Of Texas System Novel compositions and methods for treating cancer
WO2014085486A2 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Waters Technologies Corporation Methods and apparatus for the analysis of vitamin d metabolites
CN113480530A (zh) 2016-12-26 2021-10-08 阿里根公司 芳香烃受体调节剂
CN106632303A (zh) * 2017-01-09 2017-05-10 湖南华腾制药有限公司 一种6‑噻唑基吲哚衍生物的制备方法
EP3713937A2 (en) 2017-11-20 2020-09-30 Ariagen, Inc. Indole compounds as aryl hydrocarbon receptor (ahr) modulators
CN108659003B (zh) * 2018-04-14 2021-01-26 上海朝晖药业有限公司 一种治疗口腔溃疡的化合物的制备方法
AU2020258394A1 (en) 2019-04-15 2021-10-28 Ariagen, Inc. Chiral indole compounds and their use

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002078693A2 (en) * 2001-03-29 2002-10-10 Eli Lilly And Company N-(2-arylethyl)benzylamines as antagonists of the 5-ht6 receptor
WO2006032631A1 (en) * 2004-09-22 2006-03-30 Janssen Pharmaceutica N.V. Inhibitors of the interaction between mdm2 and p53

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR901228A (fr) 1943-01-16 1945-07-20 Deutsche Edelstahlwerke Ag Système d'aimant à entrefer annulaire
AUPO863197A0 (en) 1997-08-18 1997-09-11 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Novel derivatives
US6309492B1 (en) 1998-09-16 2001-10-30 Marc A. Seidner Polymer fill coating for laminate or composite wood products and method of making same
UA71587C2 (ru) 1998-11-10 2004-12-15 Шерінг Акцієнгезелльшафт Translated By PlajАМИДЫ АНТРАНИЛОВОЙ КИСЛОТЫ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КАЧЕСТВЕ ЛЕЧЕБНЫХ СРЕДСТВ
JP2002531396A (ja) 1998-12-02 2002-09-24 ファイザー・プロダクツ・インク ｐ５３ファミリーのタンパク質の配座安定性を回復するための方法及び組成物
WO2001042224A1 (en) 1999-12-09 2001-06-14 Mitsubishi Pharma Corporation Carboxyamido derivatives
DE60137435D1 (de) 2000-09-15 2009-03-05 Anormed Inc Chemokin rezeptor bindenden heterozyklische verbindungen
WO2003040402A2 (en) 2001-11-09 2003-05-15 The Regents Of The University Of California Alpha-helix mimicry by a class of organic molecules
PL370176A1 (en) 2001-11-13 2005-05-16 3-Dimensional Pharmaceuticals, Inc. Substituted 1,4-benzodiazepines and uses thereof for the treatment of cancer
ES2301717T3 (es) 2001-12-18 2008-07-01 F. Hoffmann-La Roche Ag Cis-2,4,5-trifenil-imidazolinas y su utilizacion para el tratamiento de tumores.
GB0215650D0 (en) 2002-07-05 2002-08-14 Cyclacel Ltd Bisarylsufonamide compounds
AU2007228784B2 (en) 2006-03-22 2012-03-08 Janssen Pharmaceutica N.V. Cyclic-alkylaminederivatives as inhibitors of the interaction between MDM2 and p53
US8232298B2 (en) * 2006-03-22 2012-07-31 Janssen Pharmaceutica N.V. Inhibitors of the interaction between MDM2 and P53
US20100129933A1 (en) * 2007-04-26 2010-05-27 Forschungszentrum Karlsruhe Gmbh Method for detecting the binding between mdm2 and the proteasome
AR067813A1 (es) 2007-08-06 2009-10-21 Janssen Pharmaceutica Nv Fenilendiaminas sustituidas como inhibidores de l ainteraccion entre mdm2 y p53
JO2704B1 (en) 2007-09-21 2013-03-03 جانسين فارماسوتيكا ان في Interference inhibition factors between MD2 and B53
ATE547415T1 (de) 2007-09-21 2012-03-15 Janssen Pharmaceutica Nv Inhibitoren der wechselwirkung zwischen mdm2 und p53

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002078693A2 (en) * 2001-03-29 2002-10-10 Eli Lilly And Company N-(2-arylethyl)benzylamines as antagonists of the 5-ht6 receptor
WO2006032631A1 (en) * 2004-09-22 2006-03-30 Janssen Pharmaceutica N.V. Inhibitors of the interaction between mdm2 and p53

Also Published As

Publication number Publication date
AU2010210178B2 (en) 2014-06-05
KR20110116195A (ko) 2011-10-25
TWI476189B (zh) 2015-03-11
EA201170997A1 (ru) 2012-01-30
WO2010089327A2 (en) 2010-08-12
CL2011001860A1 (es) 2012-07-20
WO2010089327A3 (en) 2010-10-21
ES2639752T3 (es) 2017-10-30
MY152018A (en) 2014-08-15
NZ594186A (en) 2012-12-21
CN102307868A (zh) 2012-01-04
CA2749209A1 (en) 2010-08-12
AR075235A1 (es) 2011-03-16
ZA201105695B (en) 2014-01-29
US8541442B2 (en) 2013-09-24
EP2393801A2 (en) 2011-12-14
BRPI1008855B8 (pt) 2021-05-25
SG173495A1 (en) 2011-09-29
MX2011008195A (es) 2011-09-06
IL214427A (en) 2016-02-29
NO20111199A1 (no) 2011-11-04
AU2010210178A1 (en) 2011-07-28
JP2012516872A (ja) 2012-07-26
UA107455C2 (ru) 2015-01-12
CN102307868B (zh) 2016-06-22
BRPI1008855A2 (pt) 2016-03-15
KR101730407B1 (ko) 2017-04-26
JP5612611B2 (ja) 2014-10-22
CA2749209C (en) 2017-01-10
IL214427A0 (en) 2011-09-27
US20110294846A1 (en) 2011-12-01
CO6341625A2 (es) 2011-11-21
TW201038552A (en) 2010-11-01
EP2393801B1 (en) 2017-07-12
BRPI1008855B1 (pt) 2020-05-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11583524B2 (en) Inhibitors of the interaction between MDM2 and P53
US8288377B2 (en) Inhibitors of the interaction between MDM2 and p53
US8609836B2 (en) 4-aryl-2-anilino-pyrimidines
EA021883B1 (ru) Производные индола в качестве противораковых агентов
ES2367760T3 (es) Derivados de quinazolinona como inhibidores de la polimerización de la tubulina.
US20240174659A1 (en) Compounds and methods for yap/tead modulation and indications therefor

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM