EA018064B1

EA018064B1 - Способ лечения депрессии

Info

Publication number: EA018064B1
Application number: EA201000280A
Authority: EA
Inventors: Ника Адам; Гэри Самориски
Original assignee: Рихтер Гедеон Нирт.
Priority date: 2007-08-03
Filing date: 2008-08-04
Publication date: 2013-05-30
Also published as: KR101612563B1; SI2185155T1; KR20100059830A; JP5460594B2; WO2009020897A1; EP2185155A1; HRP20171908T1; HUE036004T2; CN101815519A; ES2653852T3; EP2185155B1; AU2008283989A1; LT2185155T; CN101815519B; CA2695519A1; HK1144784A1; PL2185155T3; US20110015208A1; NO2185155T3; CY1119828T1

Abstract

Настоящее изобретение относится к способу лечения депрессии, в частности большого депрессивного расстройства, включающему введение пациенту, нуждающемуся в этом эффективного количества транс-4-{2-[4-(2,3-дихлорфенил)пиперазин-1-ил]этил}-N,N-диметилкарбамоилциклогексиламин или его фармацевтически приемлемой соли.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к способам лечения депрессии с помощью лигандов дофаминовых рецепторов, а именно, с помощью транс-4-{2-[4-(2,3-дихлорфенил)пиперазин-1-ил]этил}-Ы,Мдиметилкарбамоилциклогексиламина или его фармацевтически приемлемой соли.

Предшествующий уровень техники

Шизофрения представляет собой психическое расстройство, продолжающееся всю жизнь и лишающее трудоспособности, с официально опубликованным уровнем распространения, составляющим около 1%, включая 3,2 млн американцев (см., например, работу Миекег апб МсСигк. Ьапсе!, 363, 2063-72, 2004). Расстройство обычно проявляется в подростковом возрасте или в раннем периоде полового созревания; основные симптомы делятся на три группы: положительно выраженные (позитивные) симптомы, такие как бредовые идеи и галлюцинации, негативные симптомы, такие как отсутствие мотивации поведения и социальная самоизоляция, и когнитивные симптомы, такие как проблемы со вниманием и памятью. Это приводит к нарушению социальной и производственной деятельности, которое неизбежно сильно воздействует на семью субъекта, страдающего расстройством, и его положение в окружающем обществе. В дополнение к психиатрическим симптомам, пациенты, страдающие шизофренией, более подвержены риску медицинской коморбидности, чем население в целом.

Современные руководства рекомендуют атипичные антипсихотики, включающие рисперидон, оланзапин, кветиапин, зипрасидон и арипипразол, для первичного лечения шизофрении. Эти лекарственные средства могут быть единообразно охарактеризованы их двойным механизмом действия: будучи не только антагонистами в отношении дофаминового рецептора Э₂, они также являются потенциальными ингибиторами серотонинового рецептора 5-НТ_2А.

Хотя атипичные антипсихотики более совершенны по сравнению с классическими нейролептиками, они все еще не лишены недостатков при эффективном ведении заболевания. В частности, эти лекарственные средства связывают с высокой частотой появления побочных эффектов (например, таких как экстрапирамидальные симптомы [ЕР8к] при высокой дозе, седативный эффект, влияние на сердечнососудистую систему, например, удлинение ЦТс, изменения в крови, влияние на половую функцию, увеличение массы тела, метаболические патологии). Кроме того, устойчивость к лечению сохраняется высокой у 10-30% пациентов с незначительной ответной реакцией или с отсутствием реакции на доступные в настоящее время антипсихотические лекарственные средства и дополнительно у 30% пациентов с лишь частичной эффективностью лечения (смотри, например, работу Ьейтап е1 а1., Ат. 1. РкусЫайу,161 (2 8ирр1), 1-56, 2004). Это привело к общепринятой практике одновременного экспериментального использования высоких доз различных атипичных антипсихотических фармацевтических средств и дополнения их другими психотропными лекарственными средствами (см., например, работы Ζίπ1< е1 а1., Еиг. Ркусй1а1ту, 19:56-58, 2004; 81ай1 апб Стабу, Сигг. Меб Сйет., 11, 313-27, 2004).

Биполярное расстройство представляет собой сложное хроническое заболевание, вызывающее резкие перепады настроения и необычные изменения физической активности и поведения, в конечном итоге приводящее к функциональным повреждениям; оно связано со значительной заболеваемостью и смертностью. Оно проявляется в виде изменений в настроении и физической активности от эйфории и раздражимости до депрессии и психомоторной заторможенности (Сооб\\й1 апб 1ат1коп, 1990 (СообМп ЕК, 1ат1коп КВ. 1п: Машс-бергекыуе Шпекк. №\ν Уогк: ОхГогб Ишуегайу Ргекк, 642-647, 1990), и связано со значительной заболеваемостью и смертностью. Доля самоубийств в этой категории населения является самой высокой среди всех психиатрических заболеваний (Ми11ег-Оег1тдйаикеп е1 а1., Ьапсе!, 359 (9302), 241-7, 2002). Биполярное расстройство лечат поэтапно в отношении каждой стадии со своим набором проблем для лечащего врача. Биполярная мания является причиной одного из семи случаев неотложной психиатрической помощи. Острые маниакальные и смешанные эпизоды часто ассоциированы с тяжелыми поведенческими, физическими, функциональными и когнитивными нарушениями, каждое из которых может иметь значительные личностные и общественные последствия.

Для лечения острой мании в настоящее время имеются различные фармакологические агенты, включающие нормотимики, противосудорожные средства и антипсихотики. В последние годы для случаев мании при биполярном расстройстве были одобрены атипичные антипсихотики (например, оланзапин, рисперидон, кветиапин, зипрасидон, арипипразол). По сравнению с обычными средствами профиль побочных эффектов для атипичных антипсихотиков является более благоприятным. Однако атипичные средства связывали с повышенным риском метаболических побочных эффектов, включающих увеличение массы тела, дислипидемию, непереносимость глюкозы и диабет II типа. Из-за такого повышенного риска ΡΌΑ требует обязательного присутствия предупредительной этикетки для диабетиков на всех атипичных антипсихотиках. Другие побочные эффекты, обычно ассоциирующиеся с имеющимися в настоящее время вариантами лечения острой мании у пациентов с биполярными расстройствами, включают треморы, психомоторную заторможенность, нарушение когнитивных функций, обострение ажитации, нефротоксичность, изменение функции щитовидной железы и половую дисфункцию.

В связи с этим, несмотря на значительные успехи в фармакологической терапии биполярного расстройства, современные доступные терапевтические методы по-прежнему не соответствуют требованиям к лечению и только устойчиво помогают лишь небольшому проценту пациентов (8асйк, I. Сйп. Ркусйо

- 1 018064 рйагтасоС 23 (3 8ирр1 1), 82-8, 2003). Значительный процент пациентов в полной мере не реагирует на эти варианты лечения и продолжает испытывать подпороговые симптомы и даже рецидивы. Такие недостатки ограничивают их терапевтическую пригодность и эффект и способствуют несоблюдению режима лечения пациентами.

Аффективные расстройства, среди которых большое депрессивное расстройство является одним из наиболее распространенных, в течение жизни поражают одного человека из пяти. Всемирная организация здравоохранения оценивает, что в настоящее время депрессия является четвертой по значимости наиболее важной распространенной по всему миру причиной потерянных лет предстоящей жизни с учетом нетрудоспособности и что она станет второй по значимости причиной к 2020 г. (8ее, е.д., 8с1епсе, 288, 39-40, 2000). Большое депрессивное расстройство представляет собой опасное психическое расстройство, которое глубоко поражает качество жизни человека. В отличие от обычных случаев потери близких людей или отдельного эпизода хандры ΜΌΌ вызывает продолжительный период подавленного настроения и состояния безысходности и может лишать страдающего заболеванием способности получать удовольствие в тех видах деятельности и взаимоотношениях, которые ранее были приятными. Оказалось, что в некоторых случаях эпизоды депрессии, очевидно, вызваны причиняющим боль событием, но также ΜΌΌ может развиваться без специфического фактора, вызывающего стресс. Исследование показывает, что исходный эпизод депрессии, возможно, является ответной реакцией на специфический стимул, но последующие эпизоды с большей вероятностью постепенно начинаются без инициирующего события. Человек, страдающий большой депрессией, считает обязанности, связанные с работой, и подобного рода обязанности, связанные с воспитанием детей, обременительными и выполняет их с огромным усилием. Поражаются умственная эффективность и память, что приводит к тому, что даже простые проблемы становятся утомительными и раздражающими. Половое влечение снижается; многие люди, страдающие ΜΌΌ, становятся замкнутыми и избегают любого рода общественной активности. Часто утрачивается даже способность наслаждаться хорошей едой или здоровым полноценным сном, многие люди в состоянии депрессии отмечают хроническое чувство дискомфорта (общий дискомфорт или беспокойство). Для некоторых боль и страдание, сопровождающие ΜΌΌ, становятся такими невыносимыми, что самоубийство рассматривается как единственный выход; ΜΌΌ имеет самые высокие показатели смертности среди любых других психических расстройств.

Состояние человека, страдающего большим депрессивным расстройством, иногда осложняется тем, что субъект также страдает чувством страха. Поэтому, кроме симптомов своего депрессивного заболевания пациент может демонстрировать признаки избыточного или неконтролируемого беспокойства, раздражимости, чувства неловкости, страха, возбуждения и бессонницы, затруднения в концентрировании и множественные соматические недуги, такие как страдания и боли, подергивания, неподвижность, мышечные судорожные движения, звон в ушах, расфокусированное зрение, горячие и холодные приливы и т.д., каждое из которых вносит вклад в нарушение общественного и профессионального статуса человека.

Фармацевтическое лечение депрессии зачастую неполноценно, обычно у многих пациентов не происходила ремиссия даже после нескольких месяцев лечения. Кроме того, существует высокий уровень повторения симптомов болезни - примерно 85% пациентов, достигших ремиссии, будут страдать другим эпизодом большого депрессивного расстройства. В конечном итоге, многие современные имеющиеся в продаже антидепрессанты связаны с побочными эффектами, которые побуждают некоторых пациентов прекратить прием их лекарственных средств с риском опять впасть в (последующую) депрессию и заработать осложнения в другом.

Таким образом, многие сегодняшние лекарственные средства не являются ни полностью безопасными, ни полностью приемлемыми для множества пациентов. Поэтому, существует постоянная необходимость в новых композициях и новых способах лечения таких состояний, как шизофрения, депрессия, большое депрессивное расстройство, острая мания и биполярное расстройство, при которых фармацевтические средства эффективны среди пациентов в более широком диапазоне (в частности, у пациентов, не чувствительных к лечению), которые являются безопасными и более переносимыми или которые дополняют эффективность уже существующих лекарственных средств.

Сущность изобретения

В одном аспекте настоящее изобретение относится к способам лечения депрессии путем введения транс-4-{2-[4-(2,3-дихлорфенил)пиперазин-1-ил]этил}-Н,И-диметилкарбамоилциклогексиламина или его фармацевтически приемлемой соли.

В других воплощениях раскрыты способы лечения таких заболеваний, как шизофрения, большое депрессивное расстройство и биполярная депрессия, путем введения комбинаций лигандов дофаминовых рецепторов и селективных ингибиторов обратного захвата серотонина.

Краткое описание фигур

Фиг. 1 демонстрирует эффекты продолжительной обработки средой-растворителем и имипрамином на потребление 1%-ного раствора сахарозы в контроле (незакрашенные значки) и у животных, подвергнутых хроническому легкому стрессу (закрашенные значки).

Фиг. 2 - эффекты продолжительной обработки средой-растворителем и карипразина гидрохлоридом

- 2 018064 на потребление 1%-ного раствора сахарозы в контроле (незакрашенные значки) и у животных, подвергнутых хроническому легкому стрессу (закрашенные значки).

Фиг. 3 - эффекты продолжительной обработки средой-растворителем и эсциталопрама оксалатом на потребление 1%-ного раствора сахарозы в контроле (незакрашенные значки) и у животных, подвергнутых хроническому легкому стрессу (закрашенные значки).

Фиг. 4 - эффекты продолжительной обработки средой-растворителем, эсциталопрама оксалатом и карипразина гидрохлоридом на потребление 1%-ного раствора сахарозы в контроле (незакрашенные значки) и у животных, подвергнутых хроническому легкому стрессу (закрашенные значки).

Фиг. 5 - эффекты продолжительной обработки средой-растворителем, эсциталопрама оксалатом и карипразина гидрохлоридом, введенным по отдельности или в комбинации с эсциталопрама оксалатом, на потребление 1%-ного раствора сахарозы у животных, подвергнутых хроническому легкому стрессу.

Фиг. 6 - эффекты продолжительной обработки средой-растворителем, эсциталопрама оксалатом и карипразина гидрохлоридом, введенным по отдельности или в комбинации с эсциталопрама оксалатом, на потребление 1%-ного раствора сахарозы у животных, подвергнутых хроническому легкому стрессу.

Фиг. 7 - эффекты продолжительной обработки карипразина гидрохлоридом самим по себе, эсциталопрама оксалатом самим по себе или карипразина гидрохлоридом в комбинации с эсциталопрама оксалатом, на потребление 1%-ного раствора сахарозы у животных, подвергнутых хроническому легкому стрессу.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения

В одном аспекте настоящее изобретение относится к способам лечения депрессии путем введения лигандов дофаминовых рецепторов.

Синтез соединения по изобретению раскрыт, например, в американской патентной публикации Νο. 2006/0229297. Соединение по изобретению активно при пероральном приеме и является очень эффективным антагонистом дофаминовых О₃/О₂-рецепторов. оно связывается со значительно большей эффективностью с О₃-рецептором по сравнению с П₂-рецептором. Антагонизм в отношении О₃-рецептора примерно на один порядок сильнее, чем антагонизм в отношении П₂-рецептора, что, как считают, противодействует некоторым экстрапирамидальным побочным эффектам, вызванным антагонистами Ό₂рецептора. Кроме повышенной относительной аффиности в отношении рецептора дофамина Ό₃ по сравнению с Ό₂ соединения, по изобретению обладают низкой эффективностью в других рецепторных участках, таких как 5-НТ_2С, гистаминовый Н₁ и адренергические рецепторные участки, что предполагает низкую способность к побочным эффектам, таким как ЕР8§ и повышение массы тела.

В одном воплощении соединение, по изобретению представляет собой транс-4-{2-[4-(2,3дихлорфенил)пиперазин-1-ил]этил}-^№диметилкарбамоилциклогексиламина гидрохлорид (карипразина гидрохлорид).

Подходящие селективные ингибиторы обратного захвата серотонина, которые могут быть использованы, включают без ограничений циталопрам, эсциталопрам, флуоксетин, флувоксамин, пароксетин, сертралин и их фармацевтически приемлемые соли и сольваты (например, гидраты).

Эсциталопрам представляет собой 8-энантиомер циталопрама и имеет следующую структуру:

г

Способы получения эсциталопрама раскрыты, например, в патентах США 34712 и 6566540 и в международной публикации АО 03/000672, АО 03/006449, АО 03/051861 и АО 2004/083197.

В международных публикациях АО 01/03694 и АО 02/087566 раскрыто применение эсциталопрама при лечении различных психических расстройств, включающих большое депрессивное расстройство, генерализованное тревожное расстройство, социальное тревожное расстройство, посттравматическое стрессовое расстройство, приступы паники, острое стрессовое расстройство, нарушение пищевого поведения (такое как булимия, анорексия и ожирение), фобии, дистимию, предменструальный синдром, когнитивные нарушения, нарушения импульсного контроля, синдром дефицита внимания и гиперактивности и злоупотребление лекарственными средствами. В международной публикации АО 02/087566 также раскрыто применение эсциталопрама для лечения пациентов, которые не реагировали на первичное лечение с помощью традиционных 88Ш, в частности, пациентов с большим депрессивным расстройством, которые не реагировали на первичное лечение с помощью традиционных 88ΚΙ. Эсциталопрама оксалат в настоящее время продается на рынке в США под торговой маркой Ьехарто® для лечения большого депрессивного расстройства и генерализованного тревожного расстройства. Ьехарто® имеется в продаже в виде таблеток с быстрым высвобождением с 5, 10 и 20 мг эсциталопрама (в виде оксалатной соли) и в виде раствора 5 мг/мл для перорального применения.

Фармацевтически приемлемые соли включают соли, полученные с помощью реакции главного соединения, функционирующего в качестве основания, с неорганической или органической кислотой с образованием соли, например, солей соляной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, метансульфо

- 3 018064 новой кислоты, камфорсульфоновой кислоты, щавелевой кислоты, малеиновой кислоты, янтарной кислоты, лимонной кислоты, муравьиной кислоты, бромисто-водородной кислоты, бензойной кислоты, виннокаменной кислоты, фумаровой кислоты, салициловой кислоты, миндальной кислоты и угольной кислоты. Фармацевтически приемлемые соли также включают соли, в которых главное соединение функционирует в качестве кислоты и реагирует с приемлемым основанием с образованием, например, солей натрия, калия, кальция, магния, аммония и холина. Специалистам в этой области техники, кроме того, будет ясно, что кислотно-аддитивные соли могут быть получены с помощью реакции соединений с подходящей неорганической или органической кислотой любым из множества известных методов. Альтернативно, соли щелочных и щелочно-земельных металлов могут быть получены путем реакции соединения изобретения с подходящим основанием с помощью множества известных методов.

Ниже приведены дополнительные примеры солей кислот, которые могут быть получены с помощью реакции с неорганической или органической кислот: ацетаты, адипаты, альгинаты, цитраты, аспартаты, бензоаты, бензолсульфонаты, бисульфаты, бутираты, камфораты, диглюконаты, циклопентанпропионаты, додецилсульфаты, этансульфонаты, глюкогептаноаты, глицерофосфаты, полусульфаты, гептаноаты, гексаноаты, фумараты, гидробромиды, гидроиодиды, 2-гидроксиэтансульфонаты, лактаты, малеаты, метансульфонаты, никотинаты, 2-нафталенсульфонаты, оксалаты, пальмоаты, пектинаты, персульфаты, 3-фенилпропионаты, пикраты, пивалаты, пропионаты, сукцинаты, тартраты, тиоцианаты, тозилаты, мезилаты и ундеканоаты.

Например, фармацевтически приемлемой солью может быть гидрохлоридная соль, гидробромидная соль или оксалатная соль.

В распоряжении имеются многочисленные общепринятые источники, в которых описаны процедуры получения различных составов, пригодных для введения соединений в соответствии с изобретением. Примеры возможных составов и препаратов включены, например, в справочник НапбЬоок οί Рйаттасеибса1 Ехс1р1еи18, Лтепсап Рйагтасеи1юа1 ΛδδοοίαΙίοη (последнее издание); в последнее издание РйагтасеиПса1 Эозаде Еогтз: ТаЬ1еБ (ЫеЬеттаи, Басйтап апб 8е11\\'аг1х. ебйога), опубликованное Магсе1 Эеккег. 1пс., а также в Реттд1оп'5 Рйагтасеибса1 8с1епсе5 (Лййиг Озо1, ебйог), 1553-1593 (последнее издание).

Способ введения и лекарственные формы непосредственно зависят от требуемых терапевтических количеств соединений или композиций и эффективности для конкретного лечебного применения.

Подходящие лекарственные формы без ограничения включают лекарственные формы для перорального, ректального, сублингвального, мукозального, назального, глазного, подкожного, внутримышечного, внутривенного, трансдермального, спинномозгового, интратекального, внутрисуставного, внутриартериального, субарахноидального, бронхиального, лимфатического и внутриматочного введения и другие лекарственные формы для системной доставки активных ингредиентов. Предпочтительными являются композиции для перорального введения.

Чтобы получить такие фармацевтические лекарственные формы, активный ингредиент обычно смешивают с фармацевтическим носителем в соответствии с традиционными фармацевтическими методами смешивания. Носитель может быть в виде множества разнообразных форм, в зависимости от формы препарата, необходимого для введения.

При получении составов в форме для перорального приема можно использовать любые традиционные фармацевтические среды. Поэтому для жидких препаратов для перорального применения, таких как, например, суспензии, эликсиры и растворы, подходящие носители и добавки включают воду, гликоли, масла, спирты, ароматизаторы, консерванты, красители и т.п. Для твердых препаратов для перорального применения, таких как, например, порошки, капсулы и таблетки, подходящие носители и добавки включают крахмалы, сахара, разбавители, гранулирующие средства, скользящие вещества, связывающие вещества, дезинтегрирующие средства и т.п. Благодаря простому способу введения, таблетки и капсулы представляют собой наиболее удобную однократную лекарственную форму для перорального применения. При необходимости таблетки могут быть покрыты сахаром или кишечнорастворимой оболочкой с помощью стандартных методов.

Для парентеральных составов носитель обычно будет включать стерильную воду, хотя могут быть включены и другие ингредиенты, например, ингредиенты, которые облегчают растворимость, или ингредиенты для консервации. Также могут быть получены растворы для инъекций, в этом случае могут быть использованы стабилизирующие вещества.

При некоторых применениях может быть полезным использование активных веществ в векторизованной форме, например, путем включения активного вещества в липосому или другую инкапсулирующую среду, или путем фиксации активного вещества, например, с помощью ковалентного связывания, хелатирования или связывающего координирования на подходящей биомолекуле, такой как молекулы, выбираемые из белков, липопротеинов, гликопротеинов и полисахаридов.

Способ лечения настоящего изобретения с помощью составов, подходящих для перорального введения, могут быть представлены в виде раздельных единиц, таких как капсулы, облатки, таблетки или пастилки, каждая из которых содержит заранее определенное количество активного ингредиента в виде порошка или гранул. Необязательно можно использовать суспензию в водном растворе или в неводной

- 4 018064 жидкости, например в сиропе, эликсире, эмульсии или дозе жидкого лекарственного средства.

Таблетку можно изготовить путем сжатия или прессования, или влажного гранулирования, необязательно с помощью одного или нескольких вспомогательных ингредиентов. Спрессованные таблетки могут быть получены с помощью сжатия в подходящей машине вместе с активным соединением, которое находится в сыпучей форме, такой как порошок или гранулы, которое необязательно смешивают, например, со связывающим средством, дезинтегрирующим средством, смазывающим веществом, инертным разбавителем, поверхностно-активным веществом или высвобождающим средством. Спрессованные таблетки, включающие смесь измельченного в порошок активного соединения с подходящим носителем, могут быть получены путем прессования в подходящей машине.

Сироп можно получать путем добавления активного соединения в концентрированный водный раствор сахара, например, сахарозы, к которому также можно добавлять любой вспомогательный ингредиент (ингредиенты). Такой вспомогательный ингредиент (ингредиенты) может включать ароматизаторы, подходящие консерванты, средства, замедляющие кристаллизацию сахара, и средства увеличения растворимости любого другого ингредиента, такие как полигидроксиспирты, например глицерин или сорбит.

Составы, подходящие для парентерального введения, обычно включают стерильный водный препарат активного соединения, который предпочтительно является изотоничным по отношению к крови реципиента (например, физиологический солевой раствор). Такие составы могут включать суспендирующие средства и загустители и липосомы или другие микродисперсные системы, которые предназначены для того, чтобы направлять соединение на компоненты крови или один или несколько органов. Составы могут находиться в виде формы для однократного или многократного применения.

Парентеральное введение может включать любую подходящую форму системной доставки или прямой доставки в ЦНС. Введение, например, может быть внутривенным, внутриартериальным, интратекальным, подкожным, внутримышечным, интраабдоминальным (например, интраперитонеальным) и т.д., и может быть обеспечено инфузионными насосами (внешними или имплантируемыми) или любыми другими подходящими средствами, приемлемыми для требуемого способа введения.

Назальные и другие мукозальные распыляемые составы (например, формы для ингаляции) могут включать очищенные водные растворы активных соединений вместе с консервантами и изотоническими веществами. Такие составы предпочтительно доводят до необходимого значения рН и изотонического состояния, сходного с назальными или другими слизистыми мембранами. Альтернативно, они могут быть в форме тонкоизмельченных твердых порошков, суспендированных в газе-носителе. Такие составы могут быть доставлены с помощью любых подходящих средств или метода, например, с помощью распылителя, опрыскивателя, дозирующего ингалятора или т.п.

Составы для ректального введения могут быть в виде суппозитория с подходящим носителем, таким как масло какао, гидрогенизированные жиры или гидрогенизированные жирные карбоновые кислоты.

Трансдермальные составы могут быть получены путем включения активного вещества в тиксотропный или гелеобразный носитель, такой как целлюлозная среда, например метилцеллюлоза или гидроксиэтилцеллюлоза, с последующей упаковкой полученной композиции в трансдермальное приспособление, пригодное для обеспечения контакта с кожей субъекта, носящего приспособление.

Кроме указанных выше ингредиентов составы этого изобретения могут дополнительно включать один или несколько дополнительных ингредиентов, выбираемых из разбавителей, буферов, ароматизаторов, связывающих веществ, дезинтегрирующих средств, поверхностно-активных веществ, загустителей, скользящих веществ, консервантов (в том числе и антиоксидантов) и т.п.

Составы настоящего изобретения могут обладать немедленным высвобождением, длительным высвобождением, отсроченным высвобождением или любым другим профилем высвобождения, известным специалисту в этой области техники.

Активные ингредиенты, находящиеся в составе, обычно могут быть введены в соответствии с комбинированной суточной схемой приема (для взрослого пациента) дозы для перорального приема, составляющей, например, приблизительно от 0,1 до 500 мг, например приблизительно от 1 до 400 мг, например, приблизительно от 10 до 250 мг, или дозы для внутривенного, подкожного или внутримышечного введения, составляющей примерно от 0,1 до 100 мг, например приблизительно от 0,1 до 50 мг, например приблизительно от 1 до 25 мг.

В некоторых воплощениях состав включает примерно 0,05 мг, примерно 0,1 мг, примерно 0,2 мг, примерно 0,25 мг, примерно 0,3 мг, примерно 0,4 мг, примерно 0,5 мг, примерно 0,75 мг, примерно 1 мг, примерно 1,5 мг, примерно 2 мг, примерно 2,5 мг, примерно 3 мг, примерно 3,5 мг, примерно 4 мг, примерно 4,5 мг, примерно 5 мг, примерно 5,5 мг, примерно 6 мг, примерно 6,5 мг, примерно 7 мг, примерно

7.5 мг, примерно 8 мг, примерно 8,5 мг, примерно 9 мг, примерно 9,5 мг, примерно 10 мг, примерно 10,5 мг, примерно 11 мг, примерно 11,5 мг, примерно 12,0 мг, примерно 12,5 мг, примерно 13,0 мг, примерно

13.5 мг, примерно 14,0 мг, примерно 14,5 мг или примерно 15,0 мг соединения, имеющего формулу I, или его фармацевтически приемлемой соли (например, карипразина гидрохлорида).

Например, состав включает примерно 0,1 мг, примерно 0,25 мг, примерно 0,5 мг, примерно 1 мг,

- 5 018064 примерно 1,5 мг, примерно 2 мг, примерно 2,5 мг, примерно 3 мг, примерно 5 мг, примерно 6 мг, примерно 7,5 мг, примерно 9 мг, примерно 12,5 мг или примерно 15,0 мг соединения, имеющего формулу I, или его фармацевтически приемлемой соли (например, карипразина гидрохлорида).

В дополнительных воплощениях соединение по изобретению или его фармацевтически приемлемая соль находятся в составе в количестве, которое находится в диапазоне любых двух дозировочных количеств (например, приблизительно от 0,1 до 15 мг, примерно от 0,5 до 12,5 мг, примерно от 1,5 до 6 мг, примерно от 6 до 12,5 мг).

Примеры депрессий которые можно лечить, без ограничения включают большое депрессивное расстройство, биполярную депрессию, генерализованное тревожное расстройство, социальное тревожное расстройство, посттравматическое стрессовое расстройство, приступы паники, острое стрессовое расстройство, нарушение пищевого поведения (такое как булимия, анорексия и ожирение), фобии, дистимию, предменструальный синдром, предменструальное дисфорическое расстройство, когнитивные нарушения, нарушения импульсного контроля, синдром дефицита внимания и гиперактивности и злоупотребление лекарственными средствами.

В дополнительных воплощениях нарушение ЦНС представляет собой большое депрессивное расстройство (например, не поддающееся лечению большое депрессивное расстройство) или биполярную депрессию.

Еще одно воплощение представляет собой способ лечения пациента, страдающего не поддающейся лечению депрессии путем введения эффективного количества соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли (например, карипразина гидрохлорида).

Соединения по изобретению, представляют собой лиганды рецепторов Ό₂/ϋ₃. В дополнительных воплощениях, настоящее изобретение обеспечивает способы лечения состояния, при котором необходима модуляция дофаминового рецептора Ό₃ и/или Ό₂, путем введения эффективного количества соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли (например, карипразина гидрохлорида) и селективного ингибитора обратного захвата серотонина (например, эсциталопрама или его фармацевтически приемлемой соли, например, эсциталопрама оксалата).

Дисфункция дофаминергической нейротрансмиттерной системы вовлечена в патологию нескольких нейропсихиатрических и нейродегенеративных расстройств, таких как шизофрения, злоупотребление лекарственными средствами и болезнь Паркинсона, соответственно. Эффект дофамина опосредуется, по меньшей мере, через пять различных дофаминовых рецепторов, принадлежащих семействам Ό! - (ϋ₁, Ό5) или Ό₂ - (Ό₂, Ό₃, Ό₄). Было показано, что в дофаминергических системах мозга у О₃-рецепторов есть характерное распределение. А именно, в определенных лимбических структурах, таких как прилежащее ядро и островки Калеха, были обнаружены участки повышенной плотности. Поэтому предпочтительное нацеливание на О₃-рецепторы может быть обещающим подходом для более селективной модуляции дофаминергических функций и, следовательно, для успешного терапевтического воздействия при некоторых патологиях, таких как шизофрения, эмоциональные или когнитивные нарушения и пристрастие к лекарственным средствам (см., например, работы 8око1о£Т, Р. е! а1: №1Шгс. 1990, 347, 146; 8ο1ι\ναΠζ. 1. С, е! а1: С1ш. №игорйагшасо1. 1993, 16, 295; Ьеуап!, В.: Рйатшасок Кеу. 1997, 49, 231), при пристрастии к лекарственным средствам (см., например, работу Р111а, С. е! а1: №1Шге 1999, 400, 371) и болезни Паркинсона (см., например, работу Ьеуап!, В. е! а1: ЦНС Эгидк 1999, 12, 391) или при боли (см., например, работу Ьеуап!, В. е! а1.: №иго8С1 Ьей. 2001, 303, 9).

Дофаминовые Э₂-рецепторы широко распространены в мозге, и известно, что они вовлечены в целый ряд физиологических функций и патологических состояний. Антагонисты Ό₂ представляют собой лекарственные средства, широко используемые, например, в качестве антипсихотиков. Также, однако, хорошо известно, что мощный антагонизм О₂-рецепторов приводит к нежелательным побочным эффектам, таким как экстрапирамидальные моторные симптомы, психомоторный седативный эффект или когнитивные нарушения. Эти побочные эффекты в значительной степени сдерживают терапевтическое применение соединений-антагонистов Ό₂ (\Уопд А. Н. С. е! а1.: №иго8ск ВюЬейау. Веу. 2003, 27, 269.).

В следующем аспекте настоящее изобретение обеспечивает способ лечения состояний, при которых необходима предпочтительная модуляция дофаминовых рецепторов Ό₃ и/или Ό₂, например, при психозе (например, при шизофрении, шизоаффективных нарушениях), при когнитивном нарушении, сопровождающем шизофрению, при легких и до умеренных когнитивных нарушениях, деменции, психотических состояниях, ассоциированных с деменцией, психотической депрессии, мании, острой мании, параноидальных и бредовых нарушениях, дискинетических нарушениях, таких как болезнь Паркинсона, вызванный нейролептиками паркинсонизм, поздняя дискинезия, при нарушении пищевого поведения (например, при нейрогенной булимии), при синдроме нарушения внимания, гиперактивных расстройствах у детей, депрессии, беспокойстве, расстройстве половой функции, нарушениях сна, рвоте, агрессивности, аутизме и злоупотреблении лекарственными средствами; способ включает эффективное количество соединения, имеющего формулу I, или его фармацевтически приемлемой соли (например, карипразина гидрохлорида) и селективного ингибитора обратного захвата серотонина (например, эсциталопрама или его фармацевтически приемлемой соли, например, эсциталопрама оксалата).

Типичные способы лечения включают лечение шизофрении, шизоаффективных нарушений, когни

- 6 018064 тивного нарушения, сопровождающего шизофрению, легких и умеренных когнитивных нарушений, деменции, психотических состояний, ассоциированных с деменцией, психотической депрессии, мании, параноидальных и бредовых нарушений, дискинетических нарушений, таких как болезнь Паркинсона, вызванный нейролептиками паркинсонизм, депрессия, беспокойство, злоупотребление лекарственными средствами (например, кокаиновая зависимость).

Специфическая комбинация, действующая на два рецептора, описанная выше, обеспечивает одновременное проявление благоприятного действия антагонизма с Ό₃ (например, эффект усиления когнитивных функций, ингибирование экстрапирамидальных моторных симптомов, подавляющее действие на злоупотребление лекарственными средствами) и антагонизма с Ό₂ (например, антипсихотический эффект). Кроме того, та же комбинация неожиданно вызывает ослабление неблагоприятных последствий антагонизма с Ό₂ (например, экстрапирамидальных симптомов, психомоторного седативного эффекта, когнитивных нарушений).

Типичное воплощение представляет собой способ лечения пациента, страдающего шизофренией, путем введения эффективного количества соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли (например, карипразина гидрохлорида) и селективного ингибитора обратного захвата серотонина (например, эсциталопрама или его фармацевтически приемлемой соли, например, эсциталопрама оксалата).

Другое типичное воплощение представляет собой способ лечения пациента, страдающего манией (например, острой манией), путем введения эффективного количества соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли (например, карипразина гидрохлорида) и селективного ингибитора обратного захвата серотонина (например, эсциталопрама или его фармацевтически приемлемой соли, например, эсциталопрама оксалата).

Еще одно типичное воплощение представляет собой способ лечения пациента, страдающего биполярной депрессией, путем введения эффективного количества соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли (например, карипразина гидрохлорида) и селективного ингибитора обратного захвата серотонина (например, эсциталопрама или его фармацевтически приемлемой соли, например, эсциталопрама оксалата).

В соответствии со следующим аспектом настоящее изобретение относится к способу лечения депрессии, включающему введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения по изобретению.

В типичном воплощении настоящее изобретение относится к способу лечения депрессии, включающему введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества транс-4-{2-[4-(2,3дихлорфенил)пиперазин-1-ил]этил}-Л,П-диметилкарбамоилциклогексиламина или его фармацевтически приемлемой соли, например, транс-4-{2-[4-(2,3-дихлорфенил)пиперазин-1-ил]этил}-Н,Мдиметилкарбамоилциклогексиламина гидрохлорида.

В некоторых воплощениях депрессия представляет собой большое депрессивное расстройство.

В дополнительных воплощениях депрессия представляет собой не поддающуюся лечению депрессию.

Для лечения депрессии соединение по изобретению или его фармацевтически приемлемую соль (например, карипразина гидрохлорид) обычно можно вводить в соответствии с суточной схемой приема (для взрослого пациента) дозы для перорального приема, составляющей, например, приблизительно от 0,1 до 500 мг, например, приблизительно от 1 до 400 мг, например приблизительно от 10 до 250 мг, или дозы для внутривенного, подкожного или внутримышечного введения, составляющей примерно от 0,1 до 100 мг, например, приблизительно от 0,1 до 50 мг, например приблизительно от 1 до 25 мг.

В некоторых воплощениях количество соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли (например, карипразина гидрохлорида), вводимое для лечения депрессии составляет примерно 0,05 мг, примерно 0,1 мг, примерно 0,2 мг, примерно 0,25 мг, примерно 0,3 мг, примерно 0,4 мг, примерно 0,5 мг, примерно 0,75 мг, примерно 1 мг, примерно 1,5 мг, примерно 2 мг, примерно 2,5 мг, примерно 3 мг, примерно 3,5 мг, примерно 4 мг, примерно 4,5 мг, примерно 5 мг, примерно 5,5 мг, примерно 6 мг, примерно 6,5 мг, примерно 7 мг, примерно 7,5 мг, примерно 8 мг, примерно 8,5 мг, примерно 9 мг, примерно 9,5 мг, примерно 10 мг, примерно 10,5 мг, примерно 11 мг, примерно 11,5 мг, примерно 12,0 мг, примерно 12,5 мг, примерно 13,0 мг, примерно 13,5 мг, примерно 14,0 мг, примерно 14,5 мг или примерно 15,0 мг. Например, соединение, имеющее формулу (I), или его фармацевтически приемлемую соль (например, карипразина гидрохлорид) для лечения депрессии вводят в количестве, составляющем примерно ОД мг, примерно 0,25 мг, примерно 0,5 мг, примерно 1 мг, примерно 1,5 мг, примерно 2 мг, примерно 2,5 мг, примерно 3 мг, примерно 5 мг, примерно 6 мг, примерно 7,5 мг, примерно 9 мг, примерно 12,5 мг или примерно 15,0 мг.

В дополнительных воплощениях количество соединения по изобретению или его фармацевтически приемлемой соли (например, карипразина гидрохлорида), которое вводят для лечения депрессии, находится в диапазоне любых двух дозировочных количеств (например, приблизительно от 0,1 до 15 мг, примерно от 0,5 до 12,5 мг, примерно от 1,5 до 6 мг, примерно от 6 до 12,5 мг).

В дополнительных воплощениях соединение вводят для лечения депрессии в суточной дозе, со

- 7 018064 ставляющей примерно от 0,01 до 10 мг/кг, например, приблизительно от 0,1 до 1 мг/кг (например, приблизительно 0,03 мг/кг, приблизительно 0,065 мг/кг, приблизительно 0,1 мг/кг, приблизительно 0,25 мг/кг, приблизительно 0,3 мг/кг или приблизительно 1 мг/кг).

Определения

Термин эсциталопрам, используемый в этом документе, включает 1-[3-(диметиламино)пропил]-1(пара-фторфенил)-5-фталанкарбонитрил, предпочтительно содержащий менее 3, 2, 1, 0,5 или 0,2% по массе своего В-энантиомера (исходя из 100% общей массы 1-[3-(диметиламино)пропил]-1-(пфторфенил)-5-фталанкарбонитрила), т.е. 8-циталопрам с энантиомерной чистотой (по массе), составляющей 97, 98, 99, 99,5 или 99,8%. Предпочтительные фармацевтически приемлемые соли эсциталопрама без ограничения включают эсциталопрама оксалат и эсциталопрама гидробромид. Термин эсциталопрам также включает полиморфы, гидраты, сольваты и аморфные формы эсциталопрама и его фармацевтически приемлемых солей, кристаллы эсциталопрама оксалата и эсциталопрама гидробромида, которые раскрыты в международной публикации 1п1етпа11опа1 РиЬ1юа1юи Νο. \¥О 03/011278 и патентных заявках и.8. Νο8. 2004/0167209, 2005/019653 и 2005/0197388.

Термин фармацевтически приемлемый означает биологически или фармакологически совместимый при использовании ίη νίνο у животных или людей и предпочтительно означает одобренный органом управления федерального правительства или правительства штата или перечисленный в Фармакопее США или другой общепризнанной фармакопее для использования у животных или более предпочтительно у людей.

Термин шизофрения включает группу психических расстройств, характеризуемых нарушением мыслительной деятельности и восприятия, и включает шизофрению (и все ее подтипы; параноидальный, кататонический, дезорганизованный, остаточный, недифференцированный) и другие психотические нарушения (в соответствии с ΩίαβηοδΙχ аиб 81а11811са1 Маииа1 ίοτ Меи1а1 Ойогбегх. ΡοιιΠίι Ε6ίίίοη, ^ахЫидΐοη, Э.С (1994): Ашепсаи РхусЫайтс Α88οс^аί^οη, или ТНе 1СЭ-10 С1а88блса1юи οί Меп1а1 аиб ВеНатюипб Όίδο^τδ: С1шка1 Ое8спр1юи8 аиб Оха^^х^ Ошбе1ше8, 6еиеνа (1992): ΧΫοιΉ НеаПН О^даи^ζаί^οи), такие как шизофреноформные и шизоаффективные нарушения, кратковременное психотическое расстройство и т.д.

При клинической оценке шизофрению обычно характеризуют с помощью позитивных симптомов, таких как галлюцинации (в особенности, слуховые галлюцинации, которые обычно воспринимаются как голоса), дезорганизованные мыслительные процессы и бредовые идеи, а также с помощью негативных симптомов, которые включают эмоциональную тупость, алогию, безволие и ангедонию.

Термин негативные симптомы шизофрении относится к классу симптомов шизофрении, которые рассматривают как отражение потери функционального, целевого мышления или активности. Негативные симптомы шизофрении хорошо известны в этой области техники и включают эмоциональную тупость (характеризуемую, например, неподвижным и/или безразличным выражением лица, слабым зрительным контактом и сдержанностью в мимике и жестах), алогию (бедность речи или краткие, лаконичные и/или бессодержательные ответы), безволие (характеризуемое сниженной способностью или отсутствием способности начинать и завершать целенаправленные действия), ангедонию (потерю интереса или чувственного удовлетворения), замкнутость (слабые общественные устремления и взаимодействие), апатию и другие негативные симптомы, известные специалистам в этой области техники. Негативные симптомы шизофрении можно оценить с помощью любой методологии, известной в этой области техники, включая без ограничения краткую психиатрическую оценочную шкалу (ВРВ8) и шкалу позитивных и негативных симптомов (ΡΑΝ88). В ВРВ8 и ΡΑΝ88 есть дополнительные шкалы или факторы, которые могут быть использованы для оценки негативных симптомов. Были разработаны и другие шкалы, направленные на оценку специфических негативных симптомов: например, шкала оценки негативных симптомов (8ΑΝ8), оценка негативных симптомов (Ν8Α) и шкала синдрома дефицита (8Ό8). Для оценки позитивных симптомов также могут быть использованы дополнительные шкалы ВРВ8 и ΡΑΝ88, хотя также существуют методы специфической оценки позитивных симптомов (например, шкала оценки позитивных симптомов или 8АР8).

Термин когнитивные нарушения, ассоциированные с шизофренией относится к когнитивным расстройствам у пациентов, страдающих шизофренией. Когнитивное нарушение при шизофрении представляет собой характерное свойство заболевания (т.е. не результат лечения или клинические симптомы). Когнитивные нарушения без ограничения включают нарушения внимания/активности, кратковременной памяти, вербального научения и памяти, зрительно-пространственной памяти, мотивировки/способности решать проблемы и социального познания. Существует целый ряд нейропсихологических тестов, применяемых для оценки когнитивных нарушений при шизофрении, таких как висконсинский тест сортировки карточек (\УС8Т).

Термины лечить, лечение и терапия относится к одному или нескольким пунктам, приведенным ниже:

(а) облегчение или частичное снятие по меньшей мере одного симптома нарушения у субъекта, включающего, например, аллергические и воспалительные нарушения, такие как астма и СОРЭ;

- 8 018064 (b) облегчение или частичное снижение интенсивности и/или продолжительности проявления нарушения, которое испытывает субъект, без ограничения включающего нарушения, которые отвечают на определенный импульс (например, давление, повреждение ткани, низкая температура, и т.д.);

(c) подавление, замедление начала (т.е. промежутка времени до клинического проявления нарушения) и/или снижение риска развития или нарастания симптомов нарушения.

Термин аффективное расстройство, используемый в этом документе, включает аффективные расстройства, указанные в ΌδΜ-ΐν-ΤΚ, без ограничения включающие депрессивные расстройства, такие как большое депрессивное расстройство.

Пациенты, страдающие не поддающейся лечению депрессией включают (1) тех, которые не способны реагировать на обычные дозы (т.е. значительно превосходящие плацебо в исследованиях двойным слепым методом) антидепрессантов (таких как 88Ш8), постоянно вводимых с минимальной продолжительностью в 6 недель, и (2) тех, которые не способны реагировать на обычные дозы антидепрессанта (такого как 88Ш) (монотерапия), постоянно вводимых с минимальной продолжительностью в 12 недель. Одним критерием определения, поддается ли депрессия пациента лечению антидепрессантом, является демонстрация того, что оценка клинического глобального эффекта-улучшения (СО1-1), составляющая 1 (очень сильное улучшение) или 2 (сильное улучшение), не достигнута в конце 6, 8 или 12 недели исследования. Шкала СО1-1 определена в работе Оиу, V. (еб.): ЕСЭЕи Л55С55шсп1 Мапиа1 Гог Рвусйорйатшасо1оду, Ису15еб. ΩΗΕ\ν РиЬ. Νο. (ΆΌΜ) 76-338, ЯоскуШе, ΜΌ, №Шопа1 1п81йи!е оГ МепГа1 Неа1111, 1976.

Эффективное количество означает количество композиции в соответствии с изобретением, которое при введении пациенту для лечения состояния, нарушения или заболевания достаточно для того, чтобы повлиять на такое лечение. Эффективное количество будет разниться в зависимости от активного ингредиента, состояния, нарушения или заболевания, подвергаемого лечению, и от его тяжести и от возраста, массы тела, физического состояния и восприимчивости млекопитающего, подвергающегося лечению. В соответствии с одним воплощением настоящего изобретения эффективное количество композиции, содержащей соединение по изобретению (например, карипразина гидрохлорид), и 88Ш (например, эсциталопрама оксалат), представляет собой количество, эффективное для лечения нарушения центральной нервной системы, такого как шизофрения, большое депрессивное расстройство, не поддающееся лечению большое депрессивное расстройство, биполярная депрессия, генерализованное тревожное расстройство, социальное тревожное расстройство, посттравматическое стрессовое расстройство или приступы паники.

Субъект или пациент, для которого введение терапевтического соединения является эффективной схемой лечения заболевания или нарушения, предпочтительно является человеком, но может быть любым животным, включающим лабораторное животное в контексте испытания или скрининга, или эксперимента по определению активности. Поэтому, как будет ясно специалисту среднего звена в этой области техники, способы настоящего изобретения особенно полезны для введения любому животному, в частности, млекопитающему, включающему без ограничения людей, домашних животных, таких как представители кошачьих и собачьих, сельскохозяйственных животных, включающих, например, но не ограниченных только ими, представителей коров, лошадей, коз, овец и свиней, диких животных (или в дикой природе, или в зоопарке), экспериментальных животных, таких как мыши, крысы, кролики, козы, овцы, свиньи, собаки, кошки и т.д., представителей птиц, таких как куры, индюшки, певчие птицы и т.д., т.е. для применения в ветеринарии.

Термин примерно или приблизительно означает нахождение в пределах приемлемого диапазона ошибок для определенного значения, определенного средним специалистом в этой области техники, которое будет частично зависеть от того, каким образом измерена или определена эта величина, т.е. от ограничений системы измерения. Например, в соответствии с практикой в этой области техники примерно может означать стандартные отклонения, находящиеся в пределах 1 или более 1. Альтернативно, примерно в отношении композиций может означать положительную или отрицательную область изменения, составляющую до 20%, предпочтительно до 10%, более предпочтительно до 5%.

Примеры

Приведенные ниже примеры предназначены только для иллюстрации настоящего изобретения и никоим образом не должны рассматриваться как ограничение объема изобретения, так как после прочтения представленного описания сущности изобретения многие разновидности и эквиваленты, которые охватывает настоящее изобретение, будут очевидными для специалистов в этой области техники.

Пример 1. Анализ ацетилхолина, дофамина и серотонина во фронтальной коре свободноподвижных крыс с использованием метода двухзондового микродиализа

Чтобы определить влияние введения карипразина гидрохлорида самого по себе и в комбинации с эсциталопрама оксалатом (введенным подкожно) на внеклеточную концентрацию ацетилхолина (АСй), дофамина (ΌΑ) и серотонина (5-НТ) во фронтальной коре свободноподвижных крыс, проводили анализ с использованием метода двухзондового микродиализа.

- 9 018064

Животные и окружающие их условия

Эксперименты проводили на самцах крыс 8ргадие Эа\\'1су (массой тела 250-350 г; Скаг1е8 Ккег, иК). Животных расселяли по группам из 6 крыс с циклом свет-темнота 12 ч/12 ч (свет включали в 07,30 ч), при комнатной температуре, составляющей 21±2°С, и влажности 55±20%. Обеспечивали свободный доступ к пище и воде ай НЬйнт. Животным позволяли привыкнуть к таким условиям, по меньшей мере, в течение 5 дней до исследования.

Операция

Крыс анестезировали изофлураном (5% для индукции, 2% для поддержания) в смеси Ο₂/Ν₂Ο (1 литр/мин каждого), доставляемой с помощью ячейки для анестезии (81 Вегпагй Мей1са1 8еглзсе5. ИК). Концентрические микродиализные зонды с экспонированной 2 мм-насадкой (СМА) из полиарилэфирсульфоновой (РАЕ8) мембраны стереотаксически билатерально имплантировали в префронтальную кору (координаты: АР: +3,2 мм; Ь: +/-2,5 мм относительно брегмы; V: -4,0 мм относительно поверхности черепа; были взяты из стереотаксического атласа Рахшок апй ^а1§оп (Рахшок О, ^а1§оп С, Тке Ка1 Вташ ίη 81егео1ах1с Соогйта1е8, 2^й Еййюп, Ьопйоп: Асайетк Ргекк, 1986). Верхний резцовый (зубной) держатель устанавливали на 3,3 мм ниже интерауральной линии, так чтобы поверхность черепа между брегмой и лямбдой была горизонтальной. Координаты со стороны брегмы для каждого зонда были одинаковыми за исключением латерального измерения, так как один зонд помещали влево от срединной линии, а другой вправо. Образцы для каждой крысы измеряли с одной и той же стороны (например, левый зонд использовали для измерения Аск, а правый зон использовали для измерения ΌΑ и 5-НТ). Для черепных винтов (нержавеющая сталь) делали дополнительные трепанационные отверстия и зонды фиксировали с помощью зубного цемента.

После операции животных по отдельности помещали в круглые камеры (размеры: внутренний диаметр - 450 мм, высота стенки - 320 мм) с зондами для микродиализа, присоединенными к гидравлическому шарниру и противовесному манипулятору для обеспечения неограниченного движения. Для восстановления крыс оставляли по меньшей мере на 16 ч, обеспечивая свободный доступ к пище и воде ай 11Ь11ит. В это время зонды постоянно перфузировали со скоростью тока 1,2 мкл/мин искусственной цереброспинальной жидкостью (аС8Р; Натуатй Аррага1и8, ИК) со следующим составом электролитов (в мМ): натрий 150; калий 3,0; магний 0,8; кальций 1,4; фосфат 1,0; хлорид 155,0. Кроме того, аС8Рперфузат для измерения уровня АСк с помощью зонда содержал неостигмин (1 мкМ), ингибитор холинэстеразы, который предотвращал распад АСк в этих образцах.

Микродиализ и введение лекарственных средств

Эксперимент проводили на следующий день после операции. Образцы диализатов собирали каждые 20 мин, начиная за 80 мин до введения лекарственного средства и продолжая 240 мин после введения лекарственного средства (всего 16 образцов из каждого зонда; 4 - до введения лекарственного средства и 12 - после введения лекарственного средства). Образцы собирали в пробирки Эппендорф, содержащие 5,0 мкл 0,1 М хлорной кислоты (образы только для измерения ЭА и 5-НТ), чтобы предотвратить окисление нейротрансмиттеров. Образцы АСк сразу же замораживали с помощью жидкого азота, тогда как образцы ЭА/5-НТ хранили в сухом льду. По окончании эксперимента все образцы хранили до анализа при -80°С. ВЭЖХ-анализ ЭА и 5-НТ в одном наборе образцов и АСк во втором наборе проводили в течение остатка недели после эксперимента.

Введение лекарственного средства

Базальные уровни

1-------ί-------1-------1-------Г“ -80 -60 -40 -20 0	---1-----1-----]— 20 40 60	“1----1----Г 80 100 120	“Г 140	“Г 160	I 180	200	1 220	¹ ‘Ί 240	Время (мин)
12 3 4	5 6 7	8 9 10	11	12	13	14	15	16	№ образца

Карипразина гидрохлорид (0,03, 0,1 и 0,3 мг/кг) или среду-растворитель (1%-ную метилцеллюлозу) вводили пероральным способом с помощью желудочного зонда (ро), используя объем дозы, составляющий 2 мл/кг массы тела, в комбинации с эсциталопрама оксалатом (1,0 мг/кг) или средой-растворителем (физиологическим раствором), которые вводили с помощью подкожной инъекции (объем дозы составлял 1 мл/кг массы тела).

Анализ дофамина и 5-НТ

Обнаружение и последующее количественное определение как ЭА, так и 5-НТ в одних и тех же диализных образцах включали применение обратнофазовой ион-парной ВЭЖХ в сочетании с электрохимическим детектированием. Кратко, в методе используют обратнофазовую колонку 8ркеткй, набитую ΟΌ82, частицами размером 3 мкм (внутренний диаметр - 150x2,1 мм; Сарйа1 ВЭЖХ, ИК). Насос Оупко1ек, подающий жидкость, использовали для циркулирования мобильной фазы (10,5 мМ натрия ацетат, 0,27 мМ ЭДТА, 2,5 мМ 1-октансульфоновая кислота, 18%-ный метанол, 0,18%-ная ледяная уксусная кислота, рН 5,5) при скорости тока 0,2 мл/мин, для удаления воздуха использовали встроенный дегазирующий элемент 1оит Х-Ас1. Образцы (20 мкл) впрыскивали в колонку с помощью автоматического про

- 10 018064 боотборника 8рагк Но11апб Тпа1й1оп с охлаждающей камерой при 4°С. Использовали электрохимический детектор Ап1ес Ιηίτο и ячейку Ап1ес УТ-03, в которой применяется высокоплотный стеклоуглеродный работающий электрод (+0,70 В), комбинированный с электродом сравнения Ад/АдС1. Сигнал электрода интегрировали с помощью системы приема данных ТигЬосйгот (Регкш-Е1тег). Запасной раствор ΌΆ и 5НТ (1,0 мМ) получали путем растворения в смеси, содержащей эквивалентные количества деионизованной воды и 0,1 М хлорной кислоты (чтобы предотвратить окисление), и хранили при 4°С. Рабочий раствор получали ежедневно путем разбавления в аС8Р.

Анализ ацетилхолина

Обнаружение и последующее количественное определение АСй в диализных образцах включало применение набора Ипце! тюгоЬоге АСй/Сй кй (ΒΑδί) в сочетании с электрохимическим детектированием. В этом методе АСй отделяли на аналитической колонке (1 мм х 530 мм, 5 мкм ΘΌ8) и превращали в перекись водорода (Н₂О₂) под действием ацетилхолинаэстеразы (АСйЕ) и холиноксидазы (СйОх), которые были иммобилизованы на постколонку 1МЕН (1 мм х 50 мм, 10 мкм АСйЕ-СйОх). Полученную Н₂О₂восстанавливали на поверхности стеклоуглеродного электрода, модифицированного ферментами. Высокие концентрации холина (Сй) иногда могут мешать количественному определению Асй, но добавление предколонки 1МЕН перед аналитической колонкой, содержащей иммобилизованную СйОх и каталазу (1 мм х 50 мм, 10 мкм СйОх/еа1а1аке), приводило к удалению любых количеств холина, присутствующего в образце до хроматографического разделения. Насос Супко1ек, подающий жидкость, использовали для циркулирования мобильной фазы (50 мМ ортофосфорная кислота в деионизованной воде, 1%-ный реагент РгоСйп (ΒΑδί), рН 8,5) при скорости потока 0,12 мл/мин, а для удаления воздуха использовали встроенный дегазирующий элемент 1оиг Х-Ас1. Образцы (20 мкл) впрыскивали в колонку с помощью автоматического пробоотборника 8рагк Но11апб Тпа1й1оп с охлаждающей камерой при 4°С. Использовали электрохимический детектор Ап1ес !п(го и ячейку Ап1ес УТ-03, в которой применяется высокоплотный стеклоуглеродный работающий электрод (+0,10 В), скомбинированный с электродом сравнения Ад/АдС1. Сигнал электрода интегрировали с помощью системы приема данных ТигЬосйгот (РегкшЕ1тег). Запасной раствор АСй (1,0 мМ) получали путем растворения в стандартном растворе для разбавления и хранили при 4°С. Рабочий раствор получали ежедневно путем разбавления в стандартном разбавителе.

Гистология

В конце эксперимента крыс умерщвляли, быстро вынимали их мозг и хранили в 10%-ном об/об солевом растворе формальдегида как минимум в течение 5 дней. Срезы (100 мкм) нарезали на вибратоме и рассматривали расположение зондов и их локализацию в соответствии со стереотаксическим атласом (Рахшок 6, \Ха1коп С. Тйе На! Вгат ш 81егео1ах1с Соогб1па1ек, 2'¹ Ебйюп, Ьопбоп: Асабетю Ргекк, 1986). Описывали данные только для тех животных, у которых мембраны зондов были установлены во фронтальной коре.

Лекарственные средства и реагенты

Карипразина гидрохлорид хранили при комнатной температуре. Если композиция и все лекарственные формы относились к свободным основаниям, использовали фактор 1,09. В каждый экспериментальный день раствор (0,1635 мг/мл) лекарственного средства готовили непосредственно в пределах 30 мин до введения лекарственного средства путем добавления 1%-ной метилцеллюлозы и аккуратного встряхивания под теплой водой. Другие растворы лекарственного средства получали с помощью разведения запасного раствора.

Эсциталопрама оксалат хранили при комнатной температуре. Если композиция и все лекарственные формы относились к свободным основаниям, использовали фактор 1,28. В каждый экспериментальный день раствор (1,28 мг/мл) лекарственного средства готовили непосредственно в пределах 30 мин до введения лекарственного средства путем добавления физиологического раствора и аккуратного встряхивания под теплой водой. Раствор забуферивали, добавляя по каплям 1 М ИаОН (диапазон рН составлял 6,8-7,6).

Все реагенты, используемые в ВЭЖХ-анализе, имели степень чистоты, приемлемую для ВЭЖХ. ЭДТА, метанол, 1-октансульфоновую кислоту, хлорную кислоту, ледяную уксусную кислоту, натрия ацетат, ортофосфорную кислоту, 10%-ный раствор формальдегида в физиологическом растворе и метилцеллюлозу получали от фирмы Ркйег 8с1епбПс (ИК). Дофамина гидрохлорид и 5-гидрокситриптамина креатининсульфат получали от фирмы 8щта Сйетка1 Сотрапу (ИК), а ацетилхолина хлорид получали от фирмы ВА81 (ИК).

Статистический анализ

Во всех экспериментах данные, полученные до и после введения лекарственного средства, были преобразованы в логарифмическую шкалу и четыре результата, полученные до введения лекарственного средства, усреднили, чтобы получить исходное (базальное) значение. Затем проводили обратное преобразование результатов. Таким образом, различия между группами, подвергнутыми обработке, корректировали с учетом средних значений на исходном (базальном) уровне. Из-за случающихся время от времени проблем в хроматографии не для всех проанализированных образцов были получены данные. Поэто

- 11 018064 му, в каждой временной точке действительное число η различалось. В каждой временной точке после введения лекарственного средства применяли односторонний анализ ковариаций (АЛСОУА) с (1од)базовой линией в качестве ковариации и обработки в качестве фактора. Каждую дозу карипразина гидрохлорида в физиологическом растворе сравнивали с 1%-ной-метилцеллюлозой в физиологическом растворе с помощью теста Вильямса. Каждую дозу карипразина гидрохлорида с эсциталопрама оксалатом сравнивали с 1%-ной метилцеллюлозой с эсциталопрама оксалатом с помощью теста Вильямса. Каждую дозу карипразина гидрохлорида с эсциталопрама оксалатом сравнивали с той же самой дозой карипразина гидрохлорида в физиологическом растворе с помощью множественного ΐ критерия. В исходном анализе рассчитывали стьюдентизированные остатки. Если величина стьюдентизированных остатков превышала 3, то образец исключали из анализа.

Введение карипразина гидрохлорида самого по себе (0,03, 0,1 и 0,3 мг/кг, ро) не оказывало достоверного влияния на отток ΌΆ во фронтальной коре. Эсциталопрама оксалат (1,0 мг/кг, кс) не оказывал влияния на базальные уровни ЭЛ.

Карипразина гидрохлорид (0,03 и 0,1 мг/кг, ро) в комбинации с эсциталопрама оксалатом (1,0 мг/кг, кс) не оказывал влияния на уровни ΌΆ по сравнению с соответствующими контролями, обработанными средой-растворителем. Карипразина гидрохлорид (0,3 мг/кг, ро) + эсциталопрама оксалат вызывали небольшое, но достоверное снижение оттока ΌΆ на 80-ой и 200-ой минуте после введения лекарственного средства по сравнению с контролями, обработанными карипразина гидрохлоридом + физиологическим раствором (-33 и -40%, соответственно).

Введение карипразина гидрохлорида самого по себе (0,03, 0,1 и 0,3 мг/кг, ро) не оказывало достоверного влияния на отток 5-НТ во фронтальной коре. Эсциталопрама оксалат (1,0 мг/кг, кс) не оказывал влияния на базальные уровни 5-НТ. Карипразина гидрохлорид (0,03 мг/кг, ро) + эсциталопрама оксалат вызывали небольшое, но достоверное снижение оттока 5-НТ, 120-ая минута после введения лекарственного средства в сравнении с контролями, обработанными карипразина гидрохлоридом + физиологическим раствором (-33%). Карипразина гидрохлорид (0,1 мг/кг, ро) + эсциталопрама оксалат вызывали достоверное увеличение оттока 5-НТ, 60-ая минута после введения лекарственного средства в сравнении с контролями, обработанными карипразина гидрохлоридом + физиологическим раствором (106%). Карипразина гидрохлорид (0,3 мг/кг, ро) + эсциталопрама оксалат вызывали небольшое, но достоверное снижение оттока 5-НТ, 200-ая и 240-ая минута после введения лекарственного средства в сравнении с контролями, обработанными карипразина гидрохлоридом + физиологическим раствором (-32% апб -48%, соответственно).

Введение карипразина гидрохлорида самого по себе (0,03, 0,1 и 0,3 мг/кг, ро) не оказывало достоверного влияния на отток АСЬ во фронтальной коре. Эсциталопрама оксалат (1,0 мг/кг, кс) вызывал достоверное снижение базальных уровней ЛС11. 100-ая и 240-ая минуты после введения лекарственного средства в сравнении с контролями, обработанными средой-растворителем + физиологическим раствором (-55 и -56%, соответственно).

Карипразина гидрохлорид (0,03, 0,1 и 0,3 мг/кг, ро) в комбинации с эсциталопрама оксалатом (1,0 мг/кг, кс) не оказывал влияния на уровни АСЬ по сравнению с соответствующими контролями, обработанными средой-растворителем.

Карипразина гидрохлорид в количестве 0,03, 0,1 и 0,3 мг/кг ро не оказывал влияния на внеклеточные уровни ΌΑ, 5-НТ и АСЬ во фронтальной коре крыс. Эсциталопрама оксалат (1,0 мг/кг, кс) оказывал небольшое влияние на эти нейротрансмиттеры или не оказывал никакого влияния, за исключением небольшого снижения уровней АСЬ в двух временных точках.

Карипразина гидрохлорид и эсциталопрам, введенные в комбинации, также оказывали небольшое влияние на внеклеточные уровни ΌΑ, 5-НТ и АСЬ или не оказывали никакого влияния во фронтальной коре крыс.

Пример 2. Карипразина гидрохлорид в модели депрессии в условиях хронического легкого стресса

В этом исследовании оценивали антидепрессантный эффект карипразина гидрохлорида в модели депрессии в условиях хронического легкого стресса (СМ8). Также проводили сравнение эффективности трициклического антидепрессантного соединения имипрамина.

Самцов крыс Ж1к!аг адаптировали к лабораторным условиям и условиям содержания в течение 3 недель, а затем к переводу на потребление 1%-ного раствора сахарозы в течение еще 5 недель перед разделением на контрольные группы и группы, которые в дальнейшем подвергали стрессу.

Отобранную группу подвергали хроническому стрессу в течение семи недель. Использовали следующие факторы, вызывающие стресс: лишение пищи и/или воды, наклон клеток (45° в обратном направлении), освещение с интервалами, размещение по парам, загрязненная клетка (250 мл водопроводной воды в древесно-опилочной подстилке), стробоскопическое освещение (150 вспышек в минуту), без стресса. Действие всех факторов, вызывающих стресс, продолжалось 10-14 ч, и их применяли индивидуально и постоянно, один или два раза в неделю в течение дня и ночи.

Потребление раствора сахарозы измеряли в одночасовых тестах, проводимых на всех животных (т.е. на контролях и на животных, подвергнутых стрессу) раз в неделю на протяжении всего эксперимента. Тестам предшествовало 14-часовое лишение пищи и воды. Исходя из потребления сахарозы после

- 12 018064 первых двух недель стресса, как подвергнутые стрессу, так и контрольные животные получали один раз в день постоянные (5 недель) ГР-инъекции среды-растворителя (1%-ная метилцеллюлоза, 1 мл/кг), карипразина гидрохлорида (0,0625, 0,25 или 1,0 мг/кг) или имипрамина (10 мг/кг) в качестве референсной обработки. Лекарственные средства вводили примерно в 10 ч утра и еженедельно проводили тесты на сахарозу через 24 ч после последней инъекции лекарственного средства. Стресс продолжался в течение всего периода обработки. Обычно в каждой группе 2-3 из 8 животных не реагировали на обработку лекарственным средством. Этих животных считали слабореагирующими/нереагирующими и исключали их из анализа.

Эффекты постоянной обработки средой-растворителем (1%-ная метилцеллюлоза, 1 мл/кг, 1Р, один раз в день) и имипрамином (10 мг/кг, 1Р, один раз в день) на потребление 1%-ного раствора сахарозы в контролях (незакрашенные значки) и у животных, подвергнутых СМЗ (закрашенные значки), показаны на фиг. 1.

Эффекты постоянной обработки средой-растворителем (1%-ная метилцеллюлоза, 1 мл/кг, 1Р, один раз в день) и карипразина гидрохлоридом (0,065 и 0,25 мг/кг, 1Р, один раз в день) на потребление 1%ного раствора сахарозы в контролях (незакрашенные значки) и у животных, подвергнутых СМЗ (закрашенные значки), показаны на фиг. 2.

СМЗ вызывал значительное снижение потребления 1%-ного раствора сахарозы. Такое снижение полностью обращалось с помощью постоянной обработки имипрамином.

Карипразина гидрохлорид, введенный в дозах 0,065 и 0,25 мг/кг, дозозависимым образом повышал количество выпитой сахарозы у подвергнутых стрессу животных и не оказывал какого-либо достоверного влияния у контрольных животных (не подвергнутых стрессу). Эффект наиболее активной дозы 0,065 мг/кг был больше, чем у имипрамина. Также эта доза карипразина гидрохлорида начинала действовать быстрее, т.е. увеличение потребления раствора сахарозы было очевидным на первой неделе, тогда как эффект имипрамина был очевидным на третьей неделе.

Самая высокая проанализированная доза карипразина гидрохлорида, 1 мг/кг, была неактивна в СМЗ-модели. При этой дозе карипразина гидрохлорид не изменял потребление сахарозы у подвергнутых стрессу животных и достоверно снижал потребление сахарозы у контрольных животных. Доза 1 мг/кг производила сильный седативный эффект, при котором может преобладать антагонистический характер соединения относительно Э₂, вызывающий снижение потребления сахарозы даже у не подвергнутых стрессу животных.

Пример 3. Карипразина гидрохлорид и эсциталопрама оксалат в модели депрессии в условиях хронического легкого стресса

Подобно исследованию, описанному в примере 2, проводили дополнительные исследования для дальнейшей оценки антидепрессантного действия карипразина гидрохлорида, вводимого самого по себе или в комбинации с эсциталопрама оксалатом, в модели депрессии в условиях хронического легкого стресса.

В модели депрессии в условиях хронического легкого стресса (СМЗ) крысы, подвергнутые в течение продолжительного периода времени воздействию различных факторов, вызывающих легкий стресс, демонстрируют значительное снижение в их способности реагировать на подкрепительные стимулы. За этим дефицитом обычно следят по снижению потребления 1%-ного раствора сахарозы, но также можно следить и с помощью других тестов, таких как условная реакция на предпочтение места или внутричерепная самостимуляция. Считается, что сниженная чувствительность в отношении подкрепления отражает ангедонию (неспособность испытывать удовольствие), которая является центральным симптомом больших депрессивных расстройств. Клинически одобренные антидепрессанты демонстрировали в модели на животных действие, обращающее эффекты СМЗ на потребление сахарозы. См., например, работу Запсйех С, Отиса Р, Рарр М, Вейауюита1 Рйатшасо1оду 14, 465-470, 2003.

Животные

Самцов крыс ХУМаг (Сйат1е§ Р|уег. Оетшапу) помещали в лабораторию за два месяца до начала эксперимента. За исключением случаев, описанных ниже, животных расселяли по одному, обеспечивая свободный доступ к пище и воде, и содержали с циклом свет-темнота 12 ч/12 ч в условиях постоянной температуры (22±2°С) и влажности (50±5%).

Процедура стресса

Животных вначале обучали употреблять 1%-ный раствор сахарозы; обучение состояло из девяти 1часовых базовых тестов в клетках-жилищах, в которых присутствовала сахароза после 14-часового лишения пищи и воды. Потребление сахарозы измеряли путем взвешивания предварительно взвешенных бутылок, содержащих раствор сахарозы, в конце теста. Затем потребление сахарозы отслеживали в тех же условиях с недельными интервалами в течение всего эксперимента.

Исходя из потребления сахарозы в заключительном базовом тесте, животных разделяли на две равноценные группы. Одну группу животных подвергали процедуре хронического легкого стресса в течение 7 последующих недель. Каждую неделю режим стресса состоял из двух периодов лишения пищи и воды, двух периодов, когда клетку наклоняли на 45°, двух периодов освещения с перерывами (свет включали и

- 13 018064 выключали каждые 2 ч), двух периодов загрязнения клеток (250 мл воды в древесно-опилочной подстилке), одного периода размещения животных по парам, двух периодов со стробоскопическим освещением низкой интенсивности (150 вспышек/мин) и трех периодов без стресса. Все факторы, вызывающие стресс, были продолжительностью 10-14 ч и их применяли индивидуально и непрерывно, днем и ночью. Контрольных животных содержали в отдельных комнатах, и у них не было контакта с животными, подвергаемыми стрессу. За 14 ч до каждого теста на потребление сахарозы их лишали пищи и воды, но в остальных случаях в комнатных клетках обеспечивали свободный доступ к пище и воде.

Введение лекарственных средств

Исходя из баллов теста на потребление сахарозы после первых двух недель стресса, животных, подвергнутых стрессу, дополнительно разделяли на равноценные подгруппы (п = 8 в каждой группе), и в последующие пять недель им один раз в день делали интраперитонеальные инъекции средырастворителя (1%-ная метилцеллюлоза, 1 мл/кг), карипразина гидрохлорида (0,01, 0,03 и 0,065 мг/кг) самого по себе, эсциталопрама оксалата (2 мг/кг) самого по себе или карипразина гидрохлорида (0,01 и 0,03 мг/кг) в комбинации с эсциталопрама оксалатом (2 мг/кг). Одной группе контрольных животных, не подвергнутых стрессу (п = 8), сходным образом вводили среду-растворитель (1%-ная метилцеллюлоза, 1 мл/кг). Лекарственные средства вводили примерно в 10,00 ч и еженедельно через 24 ч после последних инъекций лекарственных средств проводили тесты на потребление сахарозы. Стресс продолжали в течение всего времени обработки. Дозы карипразина гидрохлорида и эсциталопрама оксалата выражали в мг свободного основания на кг массы тела.

Статистика

Все результаты, полученные в этом исследовании, были проанализированы с помощью многофакторного дисперсионного анализа с тремя межпредметными факторами (стресс/контроль, обработка лекарственными средствами и последующие тесты на потребление сахарозы). Для апостериорного сравнения средних значений применяли Ь8И-тест Фишера.

Хронический легкий стресс вызывал постепенное снижение потребления 1%-ного раствора сахарозы. В заключительном тесте базального уровня все животные пили приблизительно 13 г раствора сахарозы. После первых двух недель стресса поглощение оставалось примерно на том же уровне, что и у контролей, но падало до 7,5 г у животных, подвергнутых стрессу, что приводило к достоверному суммарному воздействию [Р(1,62) = 92,179; р<0,001]. Такое различие между контрольными и подвергнутыми стрессу животными, обработанными средой-растворителем, сохранялось на примерно том же уровне до конца эксперимента.

Фиг. 3 демонстрирует эффекты продолжительной обработки средой-растворителем (1%-ная метилцеллюлоза, 1 мл/кг, ΙΡ, один раз в день) и эсциталопрама оксалатом (2 мг/кг, ΙΡ, один раз в день) на потребление 1%-ного раствора сахарозы в контроле (незакрашенные значки) и у животных, подвергнутых хроническому легкому стрессу (закрашенные значки). Обработку начинали после 2 недель стресса. Значения представлены в виде среднее +/- 8ЕМ (стандартная ошибка среднего).

По сравнению с тем, когда вводили только среду-растворитель, эсциталопрама оксалат у всех подвергнутых стрессу животных постепенно повышал потребление сахарозы, что приводило к достоверному эффекту обработки [Е(1,84) = 27,447; р<0,001] и взаимосвязи параметров обработка х количество недель [Е(5,84) = 4,135; р=0,002].

По сравнению с показателями недели 0 повышение потребления сахарозы у подвергнутых стрессу животных, которым вводили эсциталопрама оксалат, достигало статистического уровня значимости через три недели после обработки (р=0,024) и этот эффект затем увеличивался.

Фиг. 4 демонстрирует эффекты продолжительной обработки средой-растворителем, эсциталопрама оксалатом (2 мг/кг, ΙΡ, один раз в день) и карипразина гидрохлоридом (0,065 мг основания /кг, ΙΡ, один раз в день) на потребление 1%-ного раствора сахарозы в контроле (незакрашенные значки) и у животных, подвергнутых хроническому легкому стрессу (закрашенные значки). Обработку начинали после 2 недель стресса. Значения представлены в виде среднее +/- 8ЕМ.

По сравнению с тем, когда вводили только среду-растворитель, карипразина гидрохлорид постепенно повышал потребление сахарозы у подвергнутых стрессу животных, что приводило к достоверному эффекту обработки [Е(1,84) = 37,782; р<0,001], но не приводило к достоверной взаимосвязи параметров обработка х количество недель [Е(5,84) = 2,057; р=0,0784].

По сравнению с показателями недели 0 повышение потребления сахарозы у подвергнутых стрессу животных, которым вводили карипразина гидрохлорид, достигало статистического уровня значимости после первой недели обработки (р=0,009) и этот эффект сохранялся и затем усиливался. Одно подвергнутое стрессу животное демонстрировало довольно слабую реакцию на введение 0,065 мг/кг карипразина гидрохлорида, но его из анализа не исключили.

Фиг. 5 демонстрирует эффекты продолжительной обработки средой-растворителем, эсциталопрама оксалатом (2 мг/кг, ΙΡ, один раз в день) и карипразина гидрохлоридом (0,03 мг основания/кг, ΙΡ, один раз в день), введенным по отдельности или в комбинации с эсциталопрама оксалатом, на потребление 1%ного раствора сахарозы у животных, подвергнутых хроническому легкому стрессу. Обработку начинали

- 14 018064 после 2 недель стресса. Значения представлены в виде среднее +/- 8ΕΜ.

По сравнению с тем, когда вводили только среду-растворитель, карипразина гидрохлорид сам по себе постепенно повышал потребление сахарозы у подвергнутых стрессу животных, что приводило к достоверному эффекту обработки [Е(1,84) = 16,437; р<0,001], но не приводило к достоверной взаимосвязи параметров обработка х количество недель [Е(5,84) = 1,819; N8].

По сравнению с показателями недели 0 повышение потребления сахарозы у подвергнутых стрессу животных, которым вводили карипразина гидрохлорид, достигало статистического уровня значимости через четыре недели после обработки (р=0,003) и этот эффект затем усиливался. Два подвергнутых стрессу животных демонстрировали довольно слабую реакцию на введение 0,03 мг/кг карипразина гидрохлорида, но их из анализа не исключили.

По сравнению с тем, когда вводили только среду-растворитель, карипразина гидрохлорид, введенный в комбинации с эсциталопрама оксалатом, вызывал сходные эффекты, т.е. постепенное повышение потребления сахарозы у подвергнутых стрессу животных, что приводило к достоверному эффекту обработки [Е(1,84) = 12,595; р<0,001], но не приводило к достоверной взаимосвязи параметров обработка х количество недель [Е(5,84)= 1,639; N8].

По сравнению с показателями недели 0 повышение потребления сахарозы у подвергнутых стрессу животных, которым вводили карипразина гидрохлорид, достигало статистического уровня значимости через три недели после обработки (р=0,032) и этот эффект затем усиливался. Три подвергнутых стрессу животных демонстрировали слабую реакцию или отсутствие реакции на совместную инъекцию карипразина гидрохлорида (0,03 мг/кг) и эсциталопрама оксалата, но их из анализа не исключили.

Фиг. 6 демонстрирует эффекты продолжительной обработки средой-растворителем, эсциталопрама оксалатом (2 мг/кг, ΙΡ, один раз в день) и карипразина гидрохлоридом (0,01 мг основания/кг, ΙΡ, один раз в день), введенным по отдельности или в комбинации с эсциталопрама оксалатом, на потребление 1%ного раствора сахарозы у животных, подвергнутых хроническому легкому стрессу. Обработку начинали после 2 недель стресса. Значения представлены в виде среднее +/- 8ΕΜ.

По сравнению с тем, когда вводили только среду-растворитель, карипразина гидрохлорид достоверно снижал потребление сахарозы, если его вводили самого по себе [эффект обработки: Е(1,84) = 5,035; р=0,027, взаимодействие параметров обработка х количество недель [Е(5,84) = 0,561; N8], но этот эффект никогда не достигал статистического уровня значимости при сравнении с показателями недели 0.

При введении в комбинации с эсциталопрама оксалатом карипразина гидрохлорид снижал потребление сахарозы в течение первых двух недель после обработки и повышал потребление в последние две недели, что приводило к недостоверному эффекту обработки [Е(1,84) = 0,12; N8] и взаимосвязи параметров обработка х количество недель [Е(5,84) = 1,562; N8]. В конце периода обработки три животных, получавших 0,1 мг/кг карипразина гидрохлорида плюс эсциталопрама оксалат, не демонстрировали повышение потребления сахарозы по сравнению с показателями недели 0.

Фиг. 7 демонстрирует эффекты продолжительной обработки карипразина гидрохлоридом (0,01, 0,03 и 0,065 мг/кг) самим по себе, эсциталопрама оксалатом (2 мг/кг) самим по себе или карипразина гидрохлоридом (0,01 и 0,03 мг/кг) в комбинации с эсциталопрама оксалатом на потребление 1%-ного раствора сахарозы у животных, подвергнутых хроническому легкому стрессу. Обработку начинали после 2 недель стресса. Значения представлены в виде среднее +/- 8ΕΜ.

Перед началом процедуры стресса (базовый уровень) животные, которых затем подвергали стрессу, были немного меньше, чем контрольные животные (418 и 433 г, соответственно), и после первых двух недель стресса (неделя 0) это различие увеличилось, что приводило к достоверному суммарному воздействию [Е(1,62) = 8,310; р=0,005].

По сравнению с группой, обработанной средой-растворителем, ни эсциталопрама оксалат [Е(1,14) = 0,157; N8], ни карипразина гидрохлорид сам по себе [0,065 мг/кг: Е(1,14) = 2,111; N8, 0,03 мг/кг: Е(1,14) = 0,406; N8, 0,01 мг/кг: Е(1,14) = 1,229; N8] или в комбинации с эсциталопрама оксалатом [0,03 мг/кг: Е(1,14) = 0,308; N8, 0,01 мг: Е(1,14) = 0,022; N8] не влияли на массу тела подвергнутых стрессу животных.

Результаты этого исследования показывают, что процедура ΟΜ8 вызывает значительное снижение потребления 1%-ного раствора сахарозы, и что такой дефицит может быть полностью восстановлен с помощью продолжительной обработки эсциталопрама оксалатом (три недели до появления первых достоверных эффектов). Эффект имипрамина, который в параллельных исследованиях был протестирован в качестве сравнительной обработки, также достигал статистической значимости через три недели после ведения.

Оказалось, что карипразина гидрохлорид был активен в СΜ8-модели депрессии; если его вводили самого по себе в дозах 0,065 и 0,03 мг/кг, соединение постепенно повышало потребление сахарозы у большинства подвергнутых стрессу животных.

Мощность действия карипразина гидрохлорида была сравнима с действием эсциталопрама оксалата (полное восстановление к концу периода обработки), но начальное проявление действия наиболее активной дозы 0,065 мг/кг наступало значительно быстрее; первый достоверный эффект наблюдали уже спус

- 15 018064 тя первую неделю после обработки (по сравнению с тремя неделями, необходимыми при дозе 0,03 мг/кг карипразина гидрохлорида и эсциталопрама оксалата), и этот эффект затем усиливался.

Карипразина гидрохлорид, введенный в комбинации с эсциталопрама оксалатом, вызывал сходные эффекты (и в смысле мощности действия, и в смысле начала действия) по сравнению с эффектами, наблюдаемыми после отдельных инъекций обоих соединений.

При самой низкой дозе 0,01 мг/кг карипразина гидрохлорид снижал потребление сахарозы, если его вводили самого по себе, а эсциталопрама оксалат обращал это снижение в последние две недели обработки.

Пример 4А. Оценка способности карипразина гидрохлорида и эсциталопрама оксалата вызывать антиманиакальные эффекты в мышиной модели гиперактивности, индуцированной смесью амфетаминхлордиазэпоксид

Способность карипразина гидрохлорида и эсциталопрама оксалата вызывать антиманиакальные эффекты оценивали с помощью амфетамин-хлордиазэпоксидного (ЛМРН/СЭР) теста на гиперактивность.

Животные

В этом исследовании использовали самцов мышей С57В1/61, полученных из 1аск§оп ЬаЬотаФпек (Ваг НатЬот, Маше). Приобретали мышей в возрасте 6 недель. После получения мышам присваивали индивидуальные идентификационные номера (помеченные на хвосте) и расселяли по группам, размещая по 4 мыши/клетку. Все животные оставались расселенными в группах по 4 штуки до конца исследования. Всех мышей акклиматизировали в комнате проживания, по меньшей мере, в течение двух недель до тестирования и затем анализировали их в среднем возрасте, составляющем 8 недель. Во время акклиматизации мышей исследовали на регулярной основе, ухаживали за ними и взвешивали, чтобы быть уверенными в соответствии их здоровья и пригодности. Мышей содержали с циклом свет-темнота 12 ч/12 ч. Комнатную температуру поддерживали в диапазоне от 20 до 23°С с относительной влажностью от 30 до 70%. Пищу и воду предоставляли в неограниченном количестве ай НЬйит на протяжении всего исследования. В каждом тесте животных по всем обрабатываемым группам распределяли случайным образом.

Введение лекарственных средств

Использовали следующие соединения:

й-Амфетамина сульфат (81дта, 4,0 мг/кг) и хлордиазэпоксид (СИР; 81дта, 2,5 мг/кг) растворяли в стерильной воде и вводили интраперитонеально в объеме дозы, составляющем 10 мл/кг.

Вальпроат (УРА; 81дта, Ьо1 064К1585, 400 мг/кг) растворяли в стерильной воде и вводили интраперитонеально в объеме дозы, составляющем 10 мл/кг, за 30 мин до введения воды или смеси йамфетамин/СИР.

Карипразина гидрохлорид (0,03, 0,10 и 0,30 мг/кг) и эсциталопрама оксалат (0,5, 2,0 и 5,0 мг/кг) растворяли в стерильной воде и вводили перорально в объеме дозы, составляющем 10 мл/кг за 60 мин до введения воды или смеси й-амфетамин/СИР. Дозы карипразина гидрохлорида и эсциталопрама оксалата выражали в мг свободного основания на кг массы тела.

Методы

Чтобы оценить как поведение, подобное беспокойству, так и двигательную активность, использовали тест открытое поле (ОР). Камеры для открытого поля были квадратными камерами из органического стекла (27,3 х 27,3 х 20,3 см; Мей Л55оаа1е5 1пс., 81 Л1Ьапз, УТ), окруженными инфракрасными источниками фотоизлучения (16 х 16 х 16). Расстояние перемещения измеряли с помощью последовательного прерывания лучей. Общее расстояние перемещения во время сеанса тестирования использовали как показатель активности. Через 60 мин после предварительной обработки водой, карипразина гидрохлоридом или эсциталопрама оксалатом или через 30 мин после предварительной обработки вальпроатом мышам делали инъекцию воды или смеси й-амфетамин/СИР (смесь) и помещали их в камеры ОР на 60-минутный сеанс тестирования. В конце каждого сеанса тестирования в открытом поле камеры ОР тщательно чистили.

Статистический анализ

Результаты исследовали с помощью дисперсионного анализа (ΑNОУΑ) и затем при необходимости с помощью апостериорного РЬ8П-критерия Фишера. Эффект считали достоверным, если р<0,05. Значения, которые располагались выше или ниже двух стандартных отклонений от среднего, исключали из окончательного анализа.

У мышей, обработанных карипразина гидрохлоридом или эсциталопрама оксалатом, отсутствовали проявления токсичности или седативного эффекта во время предварительной обработки или тестирования.

Общее расстояние перемещения

Суммирование эффектов (т.е. общее расстояние перемещения, суммированное в течение 60минутного тестирования), полученных при различных схемах обработки в амфетаминхлордиазэпоксидной модели мании на мышах приведены в табл. 1-4.

- 16 018064

Таблица 1. Влияние введения карипразина гидрохлорида или эсциталопрама оксалата на базальную двигательную активность мышей

Условие тестирования	Обработка лекарственным средством	Общее расстояние перемещения (см/60 мин) [среднее ±станд.ош.средн.1	η
Вода	Среда-растворитель	5103 ±679	12
Вальпроат (400 мг/кг)	4471 ± 298	10
Карипразин НС1 (0,03 мг/кг)	4056 ±427	12
Карипразин НС1 (0,10 мг/кг)	1726 ± 112	11
Карипразин НС1 (0,30 мг/кг)	917 ±73’	12
Эсциталопрама оксалат (0,50 мг/кг)	4435 ± 389	11
Эсциталопрама оксалат (2,0 мг/кг)	5939 ±369	11
Эсциталопрама оксалат (5,0 мг/кг)	6499 ± 445	И

Достоверное различие по сравнению с контролями, обработанными средой-растворителем (р<0,05)

Ни вальпроат, ни эсциталопрама оксалат (0,5, 2,0 и 5,0 мг/кг) не оказывали достоверного влияния на базальную активность по сравнению с мышами, обработанными водой. Карипразина гидрохлорид (0,30 мг/кг) в сравнении с водой достоверно снижал базальную активность мышей (р=0,032), а карипразина гидрохлорид (0,10 мг/кг) в сравнении с водой демонстрировал тенденцию в отношении достоверного снижения базальной двигательной (р=0,090).

Таблица 2

Условие тестирования	Обработка лекарственным средством	Общее расстояние перемещения (см/60 мин) [среднее ±станд,ош.средн.1	η
Вода	Среда-растворитель	5103 ±679	12
ΑΜΡΗ/ΟϋΡ	Среда-растворитель	33591 ±1106	11

Достоверное различие по сравнению с контролями, обработанными водой (р<0,05)

Введение смеси й-амфетамин/хлордиазэпоксид (ΛΜΡΗ/ΟΌΡ) в сравнении с водой приводило к значительному увеличению двигательной активности

Таблица 3

Условие тестирования	Обработка лекарственным средством	Общее расстояние перемещения (см/60 мин) [среднее ± станд.ош.средн.Ц	η
амрн/сор	Среда-растворитель	33591 ±1106	11
АМРН/СНР	Вальпроат (400 мг/кг)	17496 ± 1788	12

*достоверное различие по сравнению с группой, обработанной средой-растворителем (р<0,05)

Введение вальпроата достоверно уменьшало гиперактивность у мышей, индуцированную смесью йамфетамин/хлордиазэпоксид (ΛΜΡΗ/ΟΌΡ).

Таблица 4. Влияние введения карипразина гидрохлорида и эсциталопрама оксалата на гиперактивность у мышей, индуцированную смесью й-амфетамин/хлордиазэпоксид (ΛΜΡΗ/ΟΌΡ)

Условие тестирования	Обработка лекарственным средством	Общее расстояние перемещения (см/60 мин) [среднее ± станд.ош.средн.]]	η
АМРН/СОР	Среда-растворитель	33591 ±1106	и
Карипразин НС1 (0,03 мг/кг)	32122 ±2942	12
Карипразин НС1 (0,10 мг/кг)	13688 ± 2349'	12
Карипразин НС1 (0,30 мг/кг)	2525 ±204'	11
Эсциталопрама оксалат (0,50 мг/кг)	30067± 1901	12
Эсциталопрама оксалат (2,0 мг/кг)	36112± 1934	И
Эсциталопрама оксалат (5,0 мг/кг)	39639 ± 1582*	11

Вальпроат (400 мг/кг) и карипразина гидрохлорид (0,10 и 0,30 мг/кг) в сравнении с водой достоверно уменьшали гиперактивность, индуцированную смесью (р<0,0001).

Эсциталопрама оксалат (5,0 мг/кг) в сравнении с водой усиливал гиперактивность, индуцированную смесью (р=0,003). Эсциталопрама оксалат (0,5 мг/кг) в сравнении с водой демонстрировал тенденцию в отношении достоверного уменьшения гиперактивности, вызванной смесью (р=0,077).

- 17 018064

Пример 4В. Оценка способности карипразина гидрохлорида и эсциталопрама оксалата вызывать антиманиакальные эффекты в мышиной модели гиперактивности, индуцированной смесью амфетаминхлордиазэпоксид

Способность карипразина гидрохлорида и эсциталопрама оксалата вызывать антиманиакальные эффекты оценивали с помощью амфетамин-хлордиазэпоксидного (АМРН/СИР) теста на гиперактивность.

Животные

В этом исследовании использовали 8-недельных самцов мышей С57В1/61, полученных из Искзоп ЬаЬогаФпев (Ваг НагЬог, Маше). После получения мышам присваивали индивидуальные идентификационные номера (помеченные на хвосте) и расселяли по группам (4 мыши/клетку) в вентилируемых ΟΡΤΙклетках для мышей. Все животные оставались расселенными в группах по 4 штуки до конца исследования. Во время акклиматизации мышей исследовали на регулярной основе, ухаживали за ними и взвешивали, чтобы быть уверенными в соответствии их здоровья и пригодности. Мышей содержали с циклом свет-темнота 12 ч/12 ч. Комнатную температуру поддерживали в диапазоне от 20 до 23°С с относительной влажностью от 30 до 70%. Пищу и воду предоставляли в неограниченном количестве ай НЬйит на протяжении всего исследования. В каждом тесте животных по всем обрабатываемым группам распределяли случайным образом.

Введение лекарственных средств

Использовали следующие соединения:

й-Амфетамина сульфат (81§та, 4,0 мг/кг) и хлордиазэпоксид (СИР; 81§та, 2,5 мг/кг) растворяли в стерильной воде и вводили интраперитонеально в объеме дозы, составляющем 10 мл/кг.

Вальпроат (УРА; 81дта, 400 мг/кг) растворяли в стерильной воде и вводили интраперитонеально в объеме дозы, составляющем 10 мл/кг, за 30 мин до введения воды или смеси й-амфетамин/СИР.

Карипразина гидрохлорид (0,03 и 0,10 мг/кг) и эсциталопрама оксалат (0,1 и 0,5 мг/кг) растворяли в стерильной воде и вводили перорально в объеме дозы, составляющем 10 мл/кг, за 60 мин до введения воды или смеси й-амфетамин/СИР. Дозы карипразина гидрохлорида и эсциталопрама оксалата выражали в мг свободного основания на кг массы тела.

Методы

Чтобы оценить как поведение, подобное беспокойству, так и двигательную активность, использовали тест открытое поле (ΟΡ). Камеры для открытого поля были квадратными камерами из органического стекла (27,3 х 27,3 х 20,3 см; Мей Ав5ос1а!е5 1пс., 8ΐ А1Ьапв, УТ), окруженными инфракрасными источниками фотоизлучения (16х16х16). Расстояние перемещения измеряли с помощью последовательного прерывания лучей. Общее расстояние перемещения во время сеанса тестирования использовали как показатель активности. После предварительной обработки водой, вальпроатом или анализируемыми соединениями (карипразина гидрохлоридом, эсциталопрама оксалатом) мышам делали инъекцию воды или смеси й-амфетамин/СИР (смесь) и помещали их в камеры ΟΡ на 60-минутный сеанс тестирования. В конце каждого сеанса тестирования в открытом поле камеры ΟΡ тщательно чистили.

Статистический анализ

Результаты исследовали с помощью дисперсионного анализа (ΑΝΟνΑ) и затем при необходимости с помощью апостериорного РЬ8И-критерия Фишера. Эффект считали достоверным, если р<0,05. Значения, которые располагались выше или ниже двух стандартных отклонений от среднего исключали из окончательного анализа.

Ни одно из проанализированных соединений не демонстрировало клинических признаков у мышей во время предварительной обработки или тестирования.

Общее расстояние перемещения

Суммирование эффектов (т.е. общее расстояние перемещения, суммированное в течение 60минутного тестирования), полученных при различных схемах обработки в мышиной модели мании, индуцированной смесью амфетамин-хлордиазэпоксид (АМРН/СИР), приведены в табл. 5-8.

Таблица 5

Условие тестирования	Обработка лекарственным средством	Общее расстояние перемещения (см/60 мин) (среднее ± станд.ош.средн.]	η
Вода	Среда-растворитель	4316 ±631	12
Вальпроат (400 мг/кг)	3365 ±612	12
Карипразин НС1 (0,03 мг/кг)	4013 ±343	11
Карипразин НС1 (0,10 мг/кг)	2697 ±259	11
Эсциталопрама оксалат (0,10 мг/кг)	5551±382	12
Эсциталопрама оксалат (0,50 мг/кг)	5238 ± 242	12
Карипразин НС1 (0,03 мг/кг) + эсциталопрама оксалат (0,10 мг/кг)	41601296	12

- 18 018064

	Карипразин НС1 (0,03 мг/кг) + эсциталопрама оксалат (0,50 мг/кг)	3830 ±410	11
Карипразин НС1 (0,10 мг/кг) + эсциталопрама оксалат (0,10 мг/кг)	2771±343	11
Карипразин НС1 (0.10 мг/кг) + эсциталопрама оксалат (0,50 мг/кг)	1972 ±309	12

По сравнению с водой обработка лекарственными средствами, показанная в табл. 5, не давала достоверного эффекта на базальную двигательную активность мышей.

Таблица 6

Условие тестирования	Обработка лекарственным средством	Общее расстояние перемещения (см/60 мин) [среднее ± станд.ош.средн.)	η
Вода	Среда-растворитель	4316 ±631	12
АМРН/СОР	Среда-растворитель	36086 ±2978’	12

Мыши, обработанные смесью (СОР+амфетамин), демонстрировали повышенную двигательную активность в сравнении с мышами, обработанными водой.

Таблица 7

Условие тестирования	Обработка лекарственным средством	Общее расстояние перемещения (см/60 мин) [Среднее ± станд.ошхредн.]	Ω
АМРН/СОР	Среда-растворитель	36086 ± 2978	12
АМРН/СОР	Вальпроат (400 мг/кг)	18478 ±2961'	12

*достоверное различие по сравнению с группой, обработанной средой-растворителем (р<0,05) Введение вальпроата (400 мг/кг) достоверно снижало гиперактивность мышей, индуцируемую смесью б-амфетамин/хлордиазэпоксид (АМРН/СЭР).

Таблица 8. Влияние введения карипразина гидрохлорида и эсциталопрама оксалата самих по себе или в комбинации на гиперактивность мышей, индуцируемую смесью б-амфетамин/хлордиазэпоксид (АМРН/СОР)

Условие тестирования	Обработка лекарственным средством	Общее расстояние перемещения (см/60 мин) [среднее ± станд.ош.средн.]	η
АМРН/СОР	Среда-растворитель	36086 ±2978	12
Карипразин НС1 (0,03 мг/кг)	32628 ±2510	11
Карипразин НС1 (0,10 мг/кг)	22594 ±2838’	12
Эсциталопрама оксалат (0,10 мг/кг)	39700 ±3477	12
	Эсциталопрама оксалат (0,50 мг/кг)	40881 ±3123	12
Карипразин НС1 (0,03 мг/кг) + эсциталопрама оксалат (0,10 мг/кг)	30350 ±1313’®	12
Карипразин НС1 (0,03 мг/кг) + эсциталопрама оксалат (0,50 мг/кг)	33343 ±2060^%	12
Карипразин НС1 (0,10 мг/кг) + эсциталопрама оксалат (0,10 мг/кг)	16191 ±2101*’~’^&	11
Карипразин НС1 (0,10 мг/кг) + эсциталопрама оксалат (0,50 мг/кг)	10730 ± 790*’	и

*достоверное различие по сравнению с группой, обработанной средой-растворителем (Р<0,05) 'достоверное различие по сравнению с группой, обработанной карипразином НС1 (0,10 мг/кг) (р<0,05) Достоверное различие по сравнению с группой, обработанной эсциталопрамом (0,10 мг/кг) (р<0,05) Достоверное различие по сравнению с группой, обработанной эсциталопрамом (0,50 мг/кг) (р<0,05)

Повышенная двигательная активность, индуцированная смесью СОР+амфетамин, была достоверно снижена с помощью вальпроата и карипразина гидрохлорида (0,10 мг/кг). Эсциталопрама оксалат сам по себе при обеих протестированных дозах не оказывал достоверного влияния на двигательную активность, индуцированную смесью. Комбинации карипразина гидрохлорида (0,10 мг/кг) и эсциталопрама оксалата (0,10 и 0,50 мг/кг) достоверно снижали двигательную активность, индуцированную смесью. Кроме того, снижение, вызываемое комбинациями, было достоверно больше по величине, чем снижение, вызываемое

- 19 018064 карипразина гидрохлоридом (0,10 мг/кг) самим по себе. Комбинация низкой дозы карипразина гидрохлорида (0,03 мг/кг) и эсциталопрама оксалата (0,10 мг/кг) также вызывала достоверное снижение двигательной активности, индуцированной смесью.

Пример 5. Эффект комбинации карипразина гидрохлорида и эсциталопрама оксалата на активность киназы-3 гликогенсинтазы мозга мыши

Киназа-3 гликогенсинтазы (С8К) является важным ферментом, модулирующим нейрональную функцию. Аномальная активность С8К3 указывает на аффективные расстройства и шизофрению.

Целью этого исследования была оценка способности комбинаций карипразина гидрохлорида и эсциталопрама оксалата стимулировать фосфорилирование 68К3 в мозге мыши.

Животные и окружающая их обстановка

Эксперименты проводили на взрослых самцах С57ВБ/6, полученных из .Тасккоп ЬаЬогайпек (Ваг НагЬог, Мате). Перед экспериментами животных расселяли по четыре-пять штук в клетки при 23°С и создавали цикл свет-темнота 12 ч/12 ч, обеспечивая свободный доступ к пище и воде аб НЬНит.

Введение лекарственных средств

В качестве референсного соединения использовали Ь1С1 (200 мг/кг), а в качестве контроля использовали животных, которым делали инъекции среды-растворителя. Литий растворяли в стерильной воде для инъекций и вводили его ΙΡ в объеме дозы, составляющем 10 мл/кг, за 30 мин до умерщвления животных. Карипразина гидрохлорид, растворенный в стерильной воде для инъекций, вводили перорально (желудочный зонд) в дозе, составляющей 0,2 мг/кг (объем дозы 10 мл/кг), за 60 мин до умерщвления животных. Дозы выражали в мг свободного основания/кг массы тела. Эсциталопрама оксалат, растворенный в стерильной воде для инъекций, вводили подкожно (8С) в дозе, составляющей 1 мг/кг (объем дозы 10 мл/кг), за 60 мин до умерщвления животных. Дозы выражали в мг свободного основания/кг массы тела. Эффект комбинации оценивали после совместного введения карипразина гидрохлорида (0,2 мг/кг, РО) и эсциталопрама оксалата (1 мг/кг, 8С) за 60 мин до умерщвления животных.

Антитела

Антитела антифосфо-68К-3а/3 8ег-21/9 можно приобрести у фирмы Се11 81диа1шд Тес1по1оду (Веуег1у, МА). Антитела апб-ЭАКРР-32 можно приобрести у фирмы ΒΌ Тгапкбисбоп ЬаЬогаФпек (ЬехтЦоп. КУ).

Анализ активности С8К-3

Для каждого измерения киназной активности мозг крысы быстро извлекают и помещают на охлажденную с помощью льда поверхность и гомогенизируют при 4°С в буфере для лизиса (20 мМ Тп5, рН 8,0/137 мМ ЫаС1%-ный глицерин/1%-ный Ыошбе! Р-40/0,5 мМ натрия ортованадат/2 мкМ окадаиковая кислота и смесь ингибиторов протеаз (8щта-А1бпс11). 68К-3а и -3β иммунопреципитируют при 4°С из 1 мг белкового экстракта с 2 мкг моноклонального антитела к 68Ι<-3(/./β и протеин А-сефарозой (Атегкйат Рйагтааа Вюкаепсе). Иммунопрещшитаты затем инкубируют в буфере для анализа (20 мМ Тп5, рН 7,5/10 мМ МдС1₂/5 мМ ЭТТ/0,2 мМ АТР/0,5 мкКи [у-³²Р]АТР) в течение 10 мин при 30°С с 0,5 мкг рекомбинантного ингибитора 2 фосфатазы (Ыете Епд1апб Вю1аЬ§). Проводят также контрольные анализы в присутствии ингибитора С8К-3 кенпауллона (2 мкМ, 8щта-А1бпс11). Реакции останавливают добавлением буфера для образца по Леммли, кипятят в течение 5 мин и электрофоретически разделяют на ДДСЫа/10% ПААГ. Гели затем окрашивают с помощью Соотакые Ь1ие и проводят авторадиографию. Включение ³²Р в рекомбинантный ингибитор 2 фосфатаз измеряют денсиметрически.

Анализ

Все результаты, полученные в этом исследовании, количественно оценивают и анализируют с помощью инфракрасной спектрометрии, используя прибор Ь1Сог.

Введение комбинации карипразина гидрохлорида и эсциталопрама оксалата может синергически стимулировать фосфорилирование С8К3 в мозге мыши при сравнении с тем, когда каждое соединение вводят поодиночке.

Настоящее изобретение по своему объему не ограничено специфическими воплощениями, описанными в этом документе. В действительности, различные модификации изобретения в дополнение к тем, которые описаны в этом документе, будут очевидны для специалистов в этой области техники из изложенного выше описания и сопровождающих фигур. Такие модификации также входят в объем прилагаемой формулы изобретения. Также следует понимать, что все значения являются приблизительными и предоставлены для раскрытия изобретения.

Полное раскрытие всех заявок, патентов и публикаций, процитированных в этом документе, включено в этот документ путем отсылки во всей своей полноте.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Способ лечения депрессии, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества транс-4-{2-[4-(2,3-дихлорфенил)пиперазин-1-ил]этил}-М,М-диметилкарбамоилциклогексиламин или его фармацевтически приемлемой соли.
2. Способ по п.1, транс-4-{2-[4-(2,3-дихлорфенил)пиперазин-1-ил]этил}-М,М-диметилкарбамоил

- 20 018064 циклогексиламин находится в форме гидрохлоридной соли.
3. Способ по п.1 или 2, где депрессия представляет собой большое депрессивное расстройство.

-О- контроль/среда-растворитель

-О- контроль/имипрамин

-·- СМ8/среда-растворитель СМ8/имипрамин *** р < 0.00! относительно контрольных групп, обработанных средой-растворителем или лекарствеьиым средствам # р < 0.05 относительно подвергнутых стрессу животных, обработанных лекарственным средством на неделе О р < 0.01относительна подвергнутых стрессу животных, обработанных лекарственным средством на неделе О ### р < 0.001 относительно подвергнутых стрессу животных, обработанных лекарственным средством на неделе 0

Фиг. 1

-Θ- контроль/среда-растворитель

-·- СМ8/среда-растворитель

16· ##

а.

δ δ <ц з ί

О. δ

7·

-Т-СМ5/карипразин НС1 (0.065 мг/кг ) СМ8/карипразин НС1 (0.25 мг/кг) средой-растворителен или лекарственным средством х средой-растворителен или лекарственным средством |ных средой-растворителен или лекарственным средством Сработанных лекарственный средством на неделе О обработанных лекарственным средством на неделе О их, обработанных лекарственным средством на неделе 0