EA016410B1 - Фармацевтическая композиция на основе наночастиц циклодекстрина, содержащих рифабутин, способ ее получения, способ лечения микобактериоза и геликобактерной инфекции (варианты) - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к медицине и фармации, а именно к фармацевтической композиции для лечения микобактериозов и геликобактерной инфекции на основе диспергированных в фармацевтически приемлемом носителе наночастиц циклодекстрина от 100 до 1000 нм, свободных от полимера и содержащих терапевтически эффективное количество диспергированного в них рифабутина, а также фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества. Изобретение раскрывает также способ получения упомянутой фармацевтической композиции, а также способы лечения микобактериозов и геликобактерной инфекции, включающих внутривенное и/или внутримышечное, и/или пероральное введение нуждающемуся в этом пациенту упомянутой фармацевтической композиции в терапевтически эффективном количестве. Композиция в соответствии с изобретением может быть выполнена как в виде лиофилизата, пригодного (после диспергирования в фармацевтически приемлемом носителе) для внутривенного или внутримышечного введения пациенту, так и в виде порошка, пригодного для изготовления твердых пероральных лекарственных форм, и обеспечивает эффективность не менее (а в ряде случаев - и более) высокую, чем вводимая перорально субстанция рифабутина.

Description

Область техники

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения микобактериозов и геликобактерной инфекции на основе диспергированных в фармацевтически приемлемом носителе наночастиц циклодекстрина, содержащих терапевтически эффективное количество диспергированного в них рифабутина, а также к способу получения такой композиции и к способам лечения микобактериозов и геликобактерной инфекции, включающим внутривенное, и/или внутримышечное, и/или пероральное введение терапевтически эффективного количества такой композиции нуждающемуся в этом пациенту.

Уровень техники и задачи изобретения

В последние десятилетия проблема повышения эффективности лечения туберкулеза и других микобактериозов приобрела особую актуальность в связи с повышением уровня заболеваемости в России и во всем мире. В связи с распространением ВИЧ-инфекции выделилась группа больных с повышенным риском развития как туберкулеза, так и нетуберкулезных микобактериозов, характеризующихся тяжелым диссеминированным течением заболевания. Фатальный иммунодефицит у ВИЧ-инфицированных больных, а также вторичный иммунодефицит у больных туберкулезом на фоне полирезистентности возбудителя вызывают серьезные трудности в лечении туберкулеза.

Наиболее перспективным путем повышения эффективности лечения туберкулеза и других микобактериозов (например, проказы, которая также представляет собой очень актуальную проблему для развивающихся стран) оказалось создание принципиально новых противотуберкулезных препаратов путем скрининга новых природных молекул или химической модификации известных структур. Однако его действенность ограничена во времени вследствие непрерывности процесса возникновения и распространения резистентности к новым препаратам. Тем не менее, создание в конце 80-х годов нового полусинтетического антибиотика широкого спектра действия группы рифамицинов-рифабутина стало важным достижением фармацевтической химии [1] (см. Список источников в конце настоящего описания).

По химической структуре рифабутин представляет собой 4-дезоксо-3,4-[2-спиро[И-изобутил-4пипераидил] 2,5-дигидро-1Н-имидазол]. По спектру и механизму действия рифабутин схож с рифампицином, однако существенно превосходит его по фармакодинамическим и фармакокинетическим свойствами [1].

Так, лучшая, чем у рифампицина, растворимость рифабутина в липидах обусловливает лучшее его проникновение в ткани, больший объем распределения, меньшую разницу между максимальной (С_тах) и минимальной (С_тт) концентрациями в сыворотке крови, пролонгированное время полувыведения из организма [2].

В основе антибактериального действия рифабутина, как и других антибиотиков из группы рифамицинов (например, рифампицина), лежит подавление ДНК-зависимой РНК-полимеразы бактерий [1]. Также предполагается, что препарат оказывает прямое ингибирующее действие на синтез ДНК бактериальной клетки, обусловливающее его активность в отношении резистентных к рифампицину микобактерий [2]. Рифабутин обладает широким спектром антибактериального действия, активен в отношении широкого круга грамположительных и грамотрицательных бактерий.

Наиболее важным свойством рифабутина является его активность в отношении МусоЬас1етшш 1иЬетси1о818 и МусоЬас1етшш аушт-т!гасе11и1аге сотр1ех. Значения минимальной подавляющей концентрации (МНК) рифабутина в отношении чувствительных к рифампицину штаммов МусоЬас1етшш !иЬетси1о818 составляют 0,03-0,06 мкг/мл, то есть в пределах концентраций, которые поддерживаются в крови в течение 24 ч после однократного приема внутрь 300 мг препарата. Минимальная бактерицидная концентрация (МБК) в 2-4 раза превышает МПК для тех же штаммов микобактерий. Такой уровень концентраций антибиотика в крови обнаруживается в течение 6-12 ч после приема вышеуказанной дозы [1], [3], [4].

Важным свойством рифабутина, определяющим возможность его применения при туберкулезе, обусловленном резистентными к рифампицину микобактериями, является отсутствие полной перекрестной устойчивости возбудителей к этим антибиотикам. Показано, что более 35% резистентных к рифампицину микобактерий сохраняют чувствительность к рифабутину. Эффективность рифабутина подтверждена на модели экспериментального туберкулеза у мышей, вызванного резистентными к рифампицину штаммами, когда препарат, применяемый из расчета средних суточных доз для человека (300-400 мг), способствовал быстрой элиминации микобактерий [5].

Рифабутин превышает по активности рифампицин в отношении клинических штаммов атипичных микобактерий (МусоЬас1етшш аушт-т1гасе11и1аге сотр1ех-МАС) [6]. Значения МПК90 (минимальной концентрации, подавляющей рост 90% микобактерий) рифабутина для большинства штаммов этих видов колеблется в пределах 1,0-2,0 мкг/мл. Чувствительность к рифабутину атипичных микобактерий (МусоЬас1епит капзази, МусоЬас1етшт ГоЧийит, МусоЬас1егшт догбопае, МусоЬас1етшт йаеторЫ1ит) существенно ниже, чем у МАС (МПК90 в зависимости от вида 2,5-8 мкг/мл). МусоЬас1етшш сйе1оиае и МусоЬас!етшт 81т1ае умеренно чувствительны или устойчивы [7].

Большинство штаммов МусоЬас!етшш 1ергае также проявляют высокую чувствительность к рифабутину. По степени активности ίη уйто и при экспериментальной лепре белых мышей рифабутин, как было установлено, существенно превосходит рифампицин. Наблюдаемое синергическое действие в от

- 1 016410 ношении микобактерий лепры при сочетанном применении рифабутина с фторхинолонами (спарфлоксацин, ломефлоксацин, норфлоксацин, офлоксацин, перфлоксацин, ципрофлоксацин, левофлоксацин или моксифлоксацин) является более выраженным, чем при комбинированном применении рифампицина с этой группой препаратов [8].

Одним из наиболее важных показаний к применению рифабутина на сегодняшний день является туберкулез у ВИЧ-инфицированных пациентов и у больных СПИДом (ВИЧ/СПИД-ассоциированный туберкулез) [9].

В отношении других микробных видов активность рифабутина изучена значительно меньше, чем для микобактерий, однако известно, что по действию на многие условно-патогенные виды грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов рифабутин аналогичен рифампицину. Рифабутин активен в отношении 81арйу1ососсик аитеик, коагулазонегативных 81арйу1ососсик ерМетшШб, 81арйу1ососсик 8арторйу11си8, 81арйу1ососсик йаето1уйсик, 81тер1ососси5 руодеиек и 81тер1ососси5 ушбаик (МПК < 0,0050,01 мкг/мл) [10]. К рифабутину чувствительны 81тер1ососси8 рпеитошае и анаэробные кокки; штаммы Еп1егососси8 Гаесайк проявляют к рифабутину лишь умеренную чувствительность (МПК 25 мкг/мл) [11].

Рифабутин активен в отношении метициллинорезистентных штаммов золотистых (МК8А) и коагулазонегативных (МКСИ8) стафилококков, однако, как и в случае с рифампицином, устойчивость стафилококков к рифабутину ίη νίΙΐΌ и ίη νί\Ό развивается очень быстро, практически после однократного контакта с препаратом. Предотвратить ее развитие можно при сочетанном применении рифабутина с фузидином, фторхиполонами или эритромицином. Такие комбинации могут эффективно использоваться при лечении тяжелых инфекций, вызываемых метициллинорезистентными штаммами золотистых (МК8А) и коагулазонегативных (МКСИ8) стафилококков [12].

Для рифабутина характерно быстрое развитие устойчивости у пневмококков, особенно в случаях частого его применения при лечении туберкулеза, МАС-микобактериозов (МусоЬас1епит ауштШ1тасе11и1аге сотр1ех). Среди грамположительных бактерий к рифабутину высокочувствительны С1о81пб1ит крр., в том числе С1о8Йтбшт бйГтсйе. Рифабутин проявляет высокую активность в отношении нейссерий (Иебкепа тешпдШбб, Иебкепа допотгйоеае), хотя клинические данные о возможности его применения при данных инфекциях практически отсутствуют [11].

Большой интерес представляют данные о высокой чувствительности к рифабутину НейсоЬас1ег ру1оп [13], [14], [15]; значения МПК90 рифабутина для данного микроорганизма составляет 0,007 мкг/мл. По степени активности в отношении НейсоЬас1ег ру1оп рифабутин существенно превосходит рифампицин [13]. Такое свойство рифабутина, как стабильность при широких колебаниях значений рН, дает основание рассматривать его как активный компонент в составе комплексной терапии язвенной болезни.

Имеются данные о высокой активности рифабутина (МПК - 0,008 мкг/мл), превосходящей действие рифампицина, в отношении СШатуШа 1гас1ютаО8. Более того, для рифабутина характерно медленное формирование устойчивости хламидий, тогда как к рифампицину ίη ν Нго устойчивость формируется в присутствии субингибирующих концентраций в течение нескольких пассажей [16].

В эксперименте ίη у1уо достоверно установлено, что рифабутин является высокоэффективным препаратом при лечении токсокоплазмоза [17]. Эта особенность антибиотика является важной, поскольку антибиотикотерапия токсокоплазмоза вызывает серьезные трудности. Доза рифабутина 100-200 мг в течение 10 дней защищает 100% мышей при экспериментальном токсоплазмозе. Эта доза существенно превышает применяемую при лечении туберкулеза или МАС-инфекции (МусоЬас1епит ауштШ1тасе11и1аге сотр1ех), однако она может быть снижена при его применении в комбинации с сульфадиазином, пириметамином или клиндамицином (там же). В работе [17] показано также, что рифабутин (в дозе 50 мг/кг) в комбинации с субтерапевтическими дозами пириметамина или клиндамицина предупреждал гибель 40 и 90% животных соответственно.

Рифабутин активен также в отношении многих грамотрицательных бактерий, в частности, в отношении Ркеибтооак аетидшока (синегнойная палочка), причем его активность в отношении данного возбудителя, как было показано, повышается при совместном применении с полимиксином В [18].

На микробную клетку рифабутин действует бактерицидно. Для МусоЬас1етшт аушт и МусоЬас1епит т1тасе11и1аге, активно пролиферирующих внутри клетки, бактерицидный эффект препарата в большей степени коррелирует с клинической эффективностью, чем значения МПК. При изучении динамики гибели МусоЬас1егшт аушт значения МБК (минимальной бактерицидной концентрации, вызывающей гибель > 99% бактериальных клеток) для рифабутина составляли 8 мкг/мл, тогда как МПК (минимальная подавляющая концентрация) составляла менее 0,03 мкг/мл [6]. В большей степени активность рифабутина характеризует значение соотношения МБК/МПК, которое для МусоЬас1епит аушт колеблется от 8 до 128. При определении МБК рифабутина ίη νίΙΐΌ в динамической системе, моделирующей концентрации антибиотика в крови при приеме внутрь, путем подсчета числа КОЕ (колониеобразующих единиц) после экспозиции штамма МусоЬас1епит ш1гасе1й11аге с 5 мкг/мл антибиотика показано снижение числа жизнеспособных особей, начиная с 6 дня контакта при полной гибели культуры к 8 дню. Отношение МБК к МПК рифабутина в отношении референтного штамма МусоЬас1епит 1иЬегси1о818 составило 4, при значении МБК 0,125 мкг/мл [19].

Относительная активность ίη уйто рифабутина по сравнению с рифампицином колеблется в преде

- 2 016410 лах от 2 до 20%. Уровни антибиотика в плазме для рифабутина, превосходящие МПК для чувствительных к рифампицину штаммов МусоЬаШетшт 1иЬетси1о818, поддерживаются в течение 24 ч после приема внутрь 300 мг; концентрации, соответствующие МБК, обнаруживаются в течение 6-12 ч после однократного приема рифампицина в той же дозе [20].

Значения МБК и МПК рифабутина и, следовательно, отношения МБК/МПК для других видов бактерий (Ьедюие11а врр., СЫашШуа 1гас1ют;Ш8. §1арЫ1ососсиз аитеиз) отличались не более чем в 2 раза [1].

Рифабутин характеризуется продолжительным постантибиотическим эффектом, проявляющимся в подавлении микробного роста после короткого срока экспозиции культуры с антибиотиком и последующего его удаления из питательной среды. Продолжительность постантибиотического эффекта зависела от вида микроорганизма, концентрации препарата, продолжительности экспозиции. При экспозиции культуры МАС с рифабутином в течение 1-2 ч при концентрациях препарата, в 2-4 превышающих МБК, продолжительность постантибиотического эффекта колебалась от 21,5 до 47,5 ч [6].

Возможность усиления антимикробной активности рифабутина при его сочетании с другими антибактериальными препаратами наиболее детально изучена в отношении МусоЬас!етшт ауштш1гасе11и1аге сотр1ех (МАС), что обусловлено трудностями лечения заболеваний, вызываемых этими возбудителями. Ιη у1уо рифабутин, применяемый в монотерапии при генерализованной МАС-инфекции, характеризовался умеренной активностью, проявляющейся лишь в снижении обсемененности легких и селезенки мышей, не защищая их от гибели. При профилактическом назначении эффективность рифабутина была сравнима с действием кларитромицина или азитромицина [1].

Активность рифабутина в комбинациях с другими противотуберкулезными препаратами изучали в различных системах, используя при обработке результатов в ряде случаев определение индекса фракционной ингибирующей концентрации (ФИК) (сумма МПК препаратов в комбинации по отношению к МПК каждого препарата в отдельности), а также индекса фракционной бактерицидной концентрации (ФБК) (сумма МБК каждого препарата в комбинации, деленная на МБК каждого препарата в отдельности). Установлено синергическое действие рифабутина с этамбутолом для 43-100% штаммов МАС (ФИК- или ФБК-индекс < 0,5) [21].

При комбинации рифабутина с кларитромицином наблюдали значительное повышение чувствительности штаммов МАС, выделенных у больных с ВИЧ-инфекцией [22].

Наиболее активным против МусоЬас!етшт аушт-ш1тасе11и1ате сотр1ех в системе мышиных макрофагов были сочетания рифабутина с этамбутолом и ципрофлок-сацином/амикацином (91 и 100% гибель клеток соответственно). Синергидной в отношении МАС штаммов оказалась также комбинация рифабутина с тиасетазоном [23].

Аддитивный или синергический эффекты при совместном применении рифабутина и этамбутола были обнаружены в отношении МусоЬаШетшт капзази [24].

Комбинации рифабутина и этамбутола с клофазимином или цефазолином, а также рифабутина с цефазолином и стрептомицином проявляли синергизм против штаммов МусоЬас!етшт рага1иЬегси1о818 [25].

Рифабутин относится к числу немногих антибактериальных препаратов, высокоэффективных в лечении инфекций, вызываемых внутриклеточно локализованными возбудителями, в частности в лечении микобактериозов. В основе такой высокой активности рифабутина лежит его быстрое проникновение в клетку, в частности в макрофаг, происходящее без нарушения фагоцитарной функции. Соотношение между внутри- и внеклеточными концентрациями рифабутина в макрофагах мышей составляют от 9:1 до 15:1 по сравнению с аналогичным показателем 5:1 для рифампицина [26].

В зависимости от используемых концентраций рифабутин, как было показано в литературе, проявлял ингибирующую или бактерицидную активность против размножающихся в культуре мышиных макрофагов МусоЬаШетшт аушт-1п1гасс11и1аге сотр1ех и МусоЬаШетшт хепор1 [27], [28].

При экспозиции в течение 2-5 дней атипичных микобактерий, выделенных у больных СПИДом, с терапевтическими концентрациями рифабутина, достигаемыми в плазме крови после его приема в виде пероральной лекарственной формы, наблюдался бактериостатический эффект с выраженным снижением числа КОЕ (колониеобразующих единиц) [29].

При развившейся инфекции МусоЬас!егшш аушт-ш1гасе11и1аге сотр1ех у мышей действие рифабутина проявляется в выраженном снижении числа жизнеспособных микобактерий в легких и селезенке; по данному показателю действие рифабутина превосходит аналогичное действие рифампицина, рифапентина или азитромицина [1].

При профилактике микобактериозов у инфицированных мышей, предварительно вакцинированных вакциной Кальметта-Герена, защитное (профилактическое) действие рифабутина проявлялось при введении данного антибиотика в дозе 10 мг/день в течение 1 недели, в то время как рифампицин оказывал аналогичное защитное действие лишь после 12 недель его применения в той же дозе [22].

В отношении штаммов НейсоЬаШет ру1оп, устойчивых к кларитромицину и тинидазолу, наиболее эффективной оказалась трехкомпонентная терапия, включающая прием ингибитора протонной помпы (пантопразола), амоксициллина и рифабутина [14].

Несмотря на столь широкий спектр антибактериальной активности, клиническое применение рифа

- 3 016410 бутина ограничивается тем, что рифабутин, как это уже было отмечено выше, малорастворим в воде, изза чего препаратов рифабутина, пригодных для парентерального (внутривенного и/или внутримышечного) введения нуждающемуся в этом пациенту, на сегодняшний день не существует.

В то же время, традиционно выпускаемые коммерчески доступные пероральные лекарственные формы рифабутина (как правило, на сегодняшний день рифабутин выпускается в форме желатиновых капсул) характеризуются низкой биодоступностью, в связи с чем дозы данного антибиотика, необходимые для эффективной антибактериальной терапии, оказываются достаточно высокими, что обусловливает не только существенные побочные эффекты в отношении органов пищеварительной системы (диарея, изжога, несварение желудка, потеря аппетита и тошнота), но и такие побочные эффекты, как лихорадка, появление кожного зуда и кожных высыпаний, тромбоцитопения (по данным ΕΌΆ); показано, что терапия с использованием традиционных пероральных форм рифабутина может также сопровождаться появлением гриппоподобных симптомов [30] (ранее похожие симптомы описывались в литературе также и у пациентов, получавших антибиотик рифампицин).

В связи с этим актуальной является задача разработки растворимой лекарственной формы рифабутина, пригодной для внутривенного введения нуждающемуся в этом пациенту (при ее растворении в соответствующем фармацевтически приемлемом носителе), при этом малотоксичной и обладающей эффективностью не меньшей, чем традиционные пероральные формы данного антибиотика.

Одним из широко применяемых в технологии фармацевтических композиций и лекарственных форм способов повышения растворимости труднорастворимых лекарственных веществ является использование циклодекстринов, образующих с указанными труднорастворимыми веществами субстанциями комплексы включения.

Циклодекстрины представляют собой класс циклических олигосахаридов, получаемых ферментативным расщеплением крахмалов и состоящих из 6 (α-циклодекстрины, α-ΟΌ), 7 (β-циклодекстрины, βСЭ) или 8 (γ-циклодекстрины, γ-ΟΌ) остатков а-Э(+)-глюкопиранозы (декстрозы), соединенных в макроциклы а-О-1,4-гликозидными связями таким образом, что молекула циклодекстрина имеет форму усеченного конуса с гидрофобной внутренней полостью. При обработке крахмала микробным ферментом циклодекстринглюканотрансферазой могут быть также получены так называемые крупнокольцевые (1агде-гшд) циклодекстрины, содержащие девять, десять, одиннадцать и более (до 30-60) остатков глюкозы в цикле - так называемые δ-циклодекстрины, ε-циклодекстрины, ξ-циклодекстрины и т.д.). Структурные формулы трех основных типов циклодекстринов (α-ΟΟ, β-ΟΟ, γ-СЭ) представлены на фиг. 1.

Коническая форма молекулы циклодекстрина стабилизирована водородными связями между ОНгруппами, а также а-О-1,4-гликозидными связями. Все ОН-группы в циклодекстринах находятся на внешней поверхности молекулы. Поэтому внутренняя полость циклодекстринов является гидрофобной и способна образовывать в водных растворах комплексы включения с различными молекулами органической и неорганической природы. В комплексах включения кольцо циклодекстрина является молекулойхозяином, включённое вещество называют гостем.

Комплексы включения в водных растворах диссоциируют на циклодекстрин и исходное вещество, проявляя основные свойства последнего. При нагревании выше 50-60°С комплексы обычно распадаются полностью и обычно восстанавливают свою структуру при охлаждении.

Образование циклодекстринами комплексов включения с различными лекарственными веществами позволяет придавать лекарственным веществам новые полезные свойства, например повышать их растворимость, физическую и химическую стабильность и прочее. Полезные для создания растворимых лекарственных форм труднорастворимых лекарственных веществ свойства циклодекстринов более подробно раскрыты в источниках [31]-[48].

В частности, показано, что образование комплексов включения лекарственное средствоциклодекстрин способно повышать физико-химическую стабильность лекарственного средства в растворе, а также защищать ряд лекарственных веществ от биодеградации.

Циклодекстрины также используют в фармацевтической промышленности для маскирования горького/неприятного вкуса лекарственного вещества, уменьшения летучести лекарственного вещества, получения лекарственных препаратов для перорального или парентерального применения с контролируемым высвобождением и т.д.

В международной публикации РСТ [49], а также в работе [50] описаны комплексы включения антибиотика рифампицина с β-циклодекстрином, полученные методом распылительного высушивания и предназначенные для внутрилегочного введения при лечении туберкулеза; в публикации [49] показано также, что комплексы включения рифампицина с β-циклодекстрином характеризовались более высокой скоростью растворения в среде с рН 7,4 (соответствует физиологическому значению рН) и с рН 5,2 (соответствует значению рН в альвеолярных макрофагах), в сравнении со свободным рифампицином, не входящим в комплексы включения. Также в рамках публикации [49] было показано в исследовании ίη νίνο (на крысах), что рифампицин в составе комплексов включения (с β-циклодекстрином и сукралозой) обладал более высокой чрескожной проницаемостью, в сравнении со свободным рифампицином.

Известно, однако, что рифампицин хорошо растворим в водной среде (растворимость рифампицина

- 4 016410 при 25°С составляет 1400 мг/л), в то время как растворимость рифабутина в воде гораздо ниже. Применение циклодекстринов и/или их производных для повышения растворимости рифабутина с целью создания коллоидных форм данного антибиотика, пригодных для внутривенного введения пациенту, ранее не изучалось.

Следует также отметить, что среди различных видов циклодекстринов именно β-циклодекстрины, использованные в работе [49], обладают наиболее высокой токсичностью. Так, в исследованиях ίη νίίτο [51] именно для β-циклодекстринов была показана наиболее высокая гемолитическая активность. В работе [39] также было показано гемолитическое действие циклодекстринов, наиболее выраженное согласно данной работе для β-циклодекстрина и его производных - диметил-в-циклодекстрина и триметил-βциклодекстрина, в значительно меньшей степени для гидроксипропил-в-циклодекстрина, αциклодекстрина, γ-циклодекстрина, дигидроксипропил-в-циклодекстрина.

Как считается, гемолитическая активность циклодекстринов связана в основном с их способностью солюбилизировать липиды клеточных мембран. Косвенно это предположение подтверждается существованием положительной корреляции между гемолитической активностью отдельных циклодекстринов и их способностью солюбилизировать холестерин, являющийся одним из основных компонентов биологических мембран [39], [41].

Кроме того, в отношении β-циклодекстрина и его производного метил-β-циклодекстрина было показано в литературе, что они способны индуцировать каспаззависимый апоптоз кератиноцитов человека путем солюбилизации холестерина клеточной мембраны; для α-циклодекстрина, γ-циклодекстрина и 2гидроксипропил-β-циклодекстрина подобный эффект не был показан [52].

Указанные выше недостатки характерны и для комплексов включения, образованных βциклодекстринами с антибиотиком рифампицином, описанных в работе [53].

В последние годы наночастицы на основе биодеградируемых полимеров (полилактидов (РЬА, РЬОА), полиалкилцианоакрилатов (РАСА, РВСА, РНСА, Р1НСА и др.)) стали рассматриваться как перспективные коллоидные носители лекарственных средств (в частности, труднорастворимых или практически нерастворимых в водной среде лекарственных средств).

Наночастицы, в общем случае, можно определить как тип коллоидных систем доставки лекарственных средств, представляющих собой твердые частицы размером менее 1 мкм, образованных природными или синтетическими полимерами.

В зависимости от технологии их синтеза среди наночастиц можно выделить наносферы, имеющие полимерную матрицу, в которой терапевтически активный и/или диагностический агент находится в диспергированном виде, и нанокапсулы, имеющие ядро, содержащее терапевтически активный и/или диагностический агент в жидкой фазе, и окружающую ее оболочку из биодеградируемого полимера. В отдельных случаях терапевтически активный и/или диагностический агент также может быть адсорбирован на поверхности указанных наночастиц, которая может быть дополнительно модифицирована (такая модификация в ряде случаев позволяет изменять не только физико-химические свойства наночастиц, но и их биораспределение в организме).

В литературе показано, что наночастицы обеспечивают высокоэффективный транспорт адсобированных лекарственных веществ в макрофаги. Попадая в кровеносную систему, наночастицы доставляются вместе с током крови к целевым органам (которыми в случае туберкулеза являются, в первую очередь, легкие, селезенка, печень) и фагоцитируются резидентными макрофагами и циркулирующими моноцитами. Во внутриклеточной среде наночастицы подвергаются биодеградации под действием ферментов и выделяют заключенное в них лекарственное вещество, что позволяет достичь высоких внутриклеточных концентраций и, таким образом, обеспечить повышение терапевтической эффективности. Наночастицы, как было показано, способны накапливаться в организме в очагах патологии, для которых характерны повышенная проницаемость капилляров и нарушения лимфотока. Эти свойства наночастиц, наиболее полно выраженные при внутривенном введении, легли в основу представления о возможном повышении эффективности антибактериальных лекарственных средств при помощи наночастиц. В частности, было показано, что наночастицы существенно повышают эффективность антибиотиков при лечении экспериментальных бактериальных инфекций, характеризующихся внутриклеточной локализацией возбудителя, включая туберкулез [54], а также сальмонеллез или листериоз [55].

В патенте РФ [56], полученном ранее научным коллективом ООО Научно-Производственный Комплекс Наносистема, раскрыто лекарственное средство для лечения бактериальных (внутриклеточных) инфекций, которое содержит рифабутин, сорбированный в матрице полимерных наночастиц, холестерилфосфат калия, или гликохолат натрия, или гексадецила дигидрофосфат, или α-токоферилсукцинат, а также водорастворимый полимерный стабилизатор (имеющий молекулярную массу не более 70 кДа и выбранный из группы, включающей поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, полисорбат и сывороточный альбумин) и наполнители. Полимеры, использованные для получения наночастиц размером 100-800 нм, включают полимер/полимеры молочной кислоты и/или сополимер/сополимеры молочной и гликолевой кислот при содержании гликолевой кислоты в указанных сополимерах до 50 мол.%; при этом молекулярная масса указанных полимеров и сополимеров составляет от 5 до 300 кДа. Указанное средст

- 5 016410 во, раскрытое в патенте [56], обеспечивает пролонгированное действие рифабутина, повышение его биодоступности и соответственно эффективности лечения бактериальных инфекций.

В евразийском патенте [57], также полученном ранее научным коллективом ООО НаучноПроизводственный Комплекс Наносистема, раскрыта фармацевтическая композиция для лечения туберкулеза и заболеваний, опосредованных НейсоЬас1ет рПогу. на основе полимерных частиц размером 100-800 нм, содержащих антибиотик рифабутин в терапевтически эффективном количестве и вспомогательные вещества, пригодная для внутривенного введения нуждающемуся в этом пациенту, отличающаяся тем, что в качестве вспомогательных веществ содержит полимер/полимеры молочной кислоты и/или сополимер/сополимеры молочной и гликолевой кислот при содержании гликолевой кислоты в сополимерах до 50 мол.% с дополнительной карбоксильной группой или без дополнительной карбоксильной группы на конце молекулы или сополимеры полимеров молочной кислоты или сополимеров молочной или гликолевой кислот с полиэтиленгликолем; при этом молекулярная масса полимеров и сополимеров составляет от 2 до 200 кДа, причем композиция представляет собой лиофилизат, который при добавлении воды или физиологического раствора образует устойчивую суспензию с размером частиц 0,1-0,8 мкм.

Указанная композиция дополнительно содержит водорастворимый природный или синтетический полимерный стабилизатор с молекулярной массой не более 70 кДа и, в случае необходимости, пластификатор липидной природы и наполнители при определенном количественном соотношении компонентов.

Однако дальнейшие исследования наносомальной лекарственной формы рифабутина на основе полилактидов показали, что указанная данная лекарственная форма обладает высокой степенью токсичности, причем данная токсичность обусловлена не самим рифабутином, а именно высокой концентрацией входящего в состав наночастиц биодеградируемого полимера (РЬОЛ или РЬА), что ограничивает возможность дальнейшей разработки и клинического применения таких наночастиц.

В евразийском патенте [58], также принадлежащем ООО Научно-Производственный Комплекс Наносистема, раскрыта фармацевтическая композиция для лечения туберкулеза и заболеваний, опосредованных НейсоЬас1ет ру1ог1, отличающаяся тем, что представляет собой лиофилизат рифабутина, солюбилизированного человеческим сывороточным альбумином, характеризующийся средним размером частиц от 4 до 10 нм, а при добавлении фармацевтически приемлемого разбавителя или носителя - пригодный для внутривенного введения нуждающемуся в этом пациенту устойчивый раствор, характеризующийся средним размером частиц от 4 до 10 нм, а также способ получения такой фармацевтической композиции (лиофилизата рифабутина, солюбилизированного человеческим сывороточным альбумином), отличающийся тем, что водную смесь рифабутина, альбумина и органического растворителя при температуре от 0 до +40°С диспергируют, подвергают гомогенизации высоким давлением с получением наноэмульсии, удаляют из полученной наноэмульсии органический растворитель, фильтруют, добавляют криопротектор, замораживают и лиофилизируют, причем указанную водную смесь рифабутина и альбумина получают путем растворения 2-5% (м/о) альбумина в деминерализованной воде, последующего добавления к указанному раствору альбумина 2-5% (о/о) органического растворителя и рифабутина в количестве от 0,2 до 20,0 мас.%, и способ лечения туберкулеза и заболеваний, опосредованных НейсоЬас1ет ру1ог1, включающий внутривенное введение терапевтически эффективного количества такой фармацевтической композиции нуждающемуся в этом пациенту.

Хотя композиция в соответствии с [58] не содержит потенциально токсичных биоразлагаемых полимеров, тем не менее человеческий сывороточный альбумин, необходимый для получения такой композиции, будучи одним из компонентов плазмы крови человека, может быть инфицирован вирусными инфекциями, имеющими парентеральный путь передачи (ВИЧ, гепатиты В и С и др.); кроме того, в ряде случаев внутривенное введение пациенту препаратов на основе альбумина плазмы крови человека может вызывать такие побочные эффекты, как крапивница, озноб, повышение температуры, одышка, тахикардия, снижение артериального давления, боли в поясничной области.

Применение же для солюбилизации (т.е. повышения растворимости) рифабутина полностью синтетических соединений циклодекстринов позволяет избежать указанных выше недостатков, присущих растворимой форме рифабутина, раскрытой в патенте [58].

Также следует учесть, что в случае использования коммерчески доступных растворов альбумина для инфузий оказывается необходимым дополнительный этап очистки указанных растворов от содержащихся в них вспомогательных компонентов, что увеличивает трудоемкость и стоимость производства такой композиции.

В публикации РСТ [59], предлагаемой нами в качестве ближайшего аналога настоящего изобретения, описаны наночастицы на основе биодеградируемого полимера и циклодекстрина (или производного циклодекстрина), содержащие биологически активное вещество (в частности, гидрофобное биологически активное вещество). В качестве биодеградируемого полимера в соответствии с [59] используется сополимер метилвинилового эфира и малеинового ангидрида (РУМ/МА), в качестве циклодекстрина или его производного используется β-циклодекстрин, или 2-гидроксипропил-в-циклодекстрин, или 6монодезокси-6-моноамин-в-циклодекстрин.

- 6 016410

Биологически активное вещество в соответствии с [59] может представлять собой небольшую биологически активную молекулу, а также белок, или пептид, или нуклеозид, или нуклеотид, или олигонуклеотид, или полинуклеотид, или нуклеиновую кислоту, или лекарственное средство, или аллерген, или антиген, или гидрофобное вещество, или представлять собой субстрат Р-гликопротеина. В частности, лекарственное средство согласно [59] может представлять собой актиномицин Ό, альбендазол, амитриптилин, ампренавир, аторвастатин, бунитролол, камптотецин, карведилол, целиролол, циклоспорин, клотримазол, колхицин, кортизон, даунорубицин, дебризоквин, дексаметазон, дигитоксин, дигоксин, дилтиазем, доцетаксел, домперидон, доксорубицин, эпирубицин, эритромицин, эстрадиол, этопозид, фенитоин, фексофенадин, РК-506, фторурацил, гентамицин, гризеофулвин, иматиниб, индинавир, итраконазол, левофлоксацин, лозартан, ловастатин, мебендазол, метилпреднизолон, метотрексат, мибефрадил, морфин, нелфинавир, ондасетрон, паклитаксел, празиквантел, преднизолон, преднизон, хинидин, рапамицин, рифампицин, саквинавир, сиролимус, сульфаметизол, ритонавир, такролимус, талинолол, тенипозид, терфенадин, топотекан, триамцинолон, верапамил, винбластин или винкристин.

Также [59] раскрывает фармацевтическую композицию, включающую указанные наночастицы, содержащие биодеградируемый полимер (такой как РУМ/МА), циклодекстрин или его производное и биологически активное вещество (такое как актиномицин Ό, альбендазол, амитириптилин, ампренавир, аторвастатин, бунитролол, камптотецин, карведилол, целиролол, циклоспорин, клотримазол, колхицин, кортизон, даунорубицин, дебризоквин, дексаметазон, дигитоксин, дигоксин, дилтиазем, доцетаксел, домперидон, доксорубицин, эпирубицин, эритромицин, эстрадиол, этопозид, фенитоин, фексофенадин, РК-506, фторурацил, гентамицин, гризеофулвин, иматиниб, индинавир, итраконазол, левофлоксацин, лозартан, ловастатин, мебендазол, метилпреднизолон, метотрексат, мибефрадил, морфин, нелфинавир, ондасетрон, паклитаксел, празиквантел, преднизолон, преднизон, хинидин, рапамицин, рифампицин, саквинавир, сиролимус, сульфаметизол, ритонавир, такролимус, талинолол, тенипозид, терфенадин, топотекан, триамцинолон, верапамил, винбластин или винкристин), а также фармацевтически приемлемый эксципиент, носитель или адъювант, и способ получения указанных наночастиц, включающий совместное инкубирование в органическом растворителе биодеградируемого полимера (такого как РУМ/МА) и комплекса включения (циклодекстрин или его производное: биологически активное вещество), с последующей десольватацией указанного биодеградируемого полимера в водно-спиртовом растворе, либо (в виде альтернативы) включающий инкубирование наночастиц указанного биодеградируемого полимера в водном растворе, содержащем комплекс включения (циклодекстрин или его производное: биологически активное вещество).

В качестве наиболее предпочтительных циклодекстринов согласно [59] рассматриваются βциклодекстрин, или 2-гидроксипропил-в-циклодекстрин, или б-монодезокси-б-моноамин-βциклодекстрин, или γ-циклодекстрин, или 2-гидроксипропил-у-циклодекстрин, или их смеси.

Хотя использование сополимера метилвинилового эфира и малеинового ангидрида (РУМ/МА) в составе наночастиц для доставки лекарственных средств описано не только в международной публикации РСТ [59], но и в более ранних публикациях данных авторов [60], однако хорошо известно, что, хотя сополимеры малеинового ангидрида и исследовались клинически (при этом было показано, в частности, что такие полимеры сами по себе также обладают терапевтической активностью, а именно противоопухолевой, противовоспалительной, иммунопотенцирующей и интерферониндуцирующей активностью [61]), однако их применение в медицинских целях, в том числе для изготовления фармацевтических композиций, оказалось невозможным ввиду их высокой токсичности [62], [63].

Так, при использовании сополимера метилвинилового эфира и малеинового ангидрида (РУМ/МА) наблюдались токсические эффекты, типичные для многих синтетических анионных полимеров - пирогенность, тромбоцитопения, ингибирование микросомальных ферментов, сенсибилизация к эндотоксинам, токсическое повреждение печени, органомегалия, а также угнетение ретикулоэндотелиальной системы [64].

Более того, из литературы известно, что даже более безопасные и значительно лучше изученные в токсикологическом отношении, чем РУМ/МА, полимеры (например, (со)полимеры молочной и гликолевой кислот РЬОА и/или РЬА) при их использовании в виде наночастиц могут проявлять токсичность.

Так, в токсикологическом исследовании [65] синтезированных ранее коллективом авторов ООО Научно-Производственный Комплекс Наносистема наносомальных форм рифабутина, полученных на основе полилактидов (РЬОА или РЬА) и не содержащих циклодекстринов (лекарственные формы рифабутина, описанные в евразийских патентах [56]-[58]), было показано, с одной стороны, ослабление токсических свойств, присущих самой субстанции рифабутина, а с другой - появление новых видов токсичности, обусловленных именно тем, что малое количество рифабутина было инкорпорировано в наночастицы из медленно биоразлагаемого полимера РЬОА или РЬА.

Кроме того, гибридные наночастицы, описанные в международной публикации РСТ [58], состоят скорее из биодеградируемого полимера (РУМ/МА), чем из циклодекстринов, и характеризуются низкой нагрузкой по лекарственному веществу (менее 20%); следует также отметить, что материалы [58] не содержат каких-либо указаний на возможность применения таких наночастиц для лечения внутриклеточ

- 7 016410 ных инфекций, в частности для лечения микобактериозов (включая туберкулез).

Все вышесказанное ограничивает возможность использования наночастиц, раскрытых в [58], для создания коллоидных (наносомальных) форм рифабутина, пригодных для внутривенного введения пациенту.

Задачи изобретения

Учитывая сказанное выше, было бы предпочтительным создание такой лекарственной формы рифабутина, которая сочетала бы в себе преимущества комплексов включения с циклодекстринами с одной стороны, и коллоидных носителей, таких как наночастицы - с другой, не содержа при этом биодеградируемых полимеров, которые могут обусловливать дополнительные виды токсичности, была бы безопасной в токсикологическом отношении и имела бы эффективность не меньшую, чем известные на сегодняшний день лекарственные формы данного антибиотика.

В отношении рифабутина такие безопасные (в токсикологическом отношении) и высокоэффективные лекарственные формы рифабутина, в частности пригодные для внутривенного введения лекарственные формы, ранее не исследовались.

Сущность изобретения

В рамках настоящего изобретения коллективом авторов ООО Научно-Производственный Комплекс Наносистема была синтезирована фармацевтическая композиция для лечения микобактериозов и геликобактерной инфекции на основе диспергированных в фармацевтически приемлемом носителе наночастиц циклодекстрина размером от 100 до 1000 нм, содержащих терапевтически эффективное количество диспергированного в них рифабутина, не содержащая полимера; указанная композиция, как было показано в рамках настоящей работы, пригодна как для внутривенного введения пациенту (при добавлении фармацевтически приемлемого носителя и/или разбавителя), так и для изготовления твердых пероральных лекарственных форм.

Таким образом, в рамках настоящего изобретения предлагается фармацевтическая композиция для лечения микобактериозов и геликобактерной инфекции на основе диспергированных в фармацевтически приемлемом носителе наночастиц циклодекстрина размером от 100 до 1000 нм, содержащих терапевтически эффективное количество диспергированного в них рифабутина, а также фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, отличающаяся тем, что указанные наночастицы не содержат полимера.

Указанная фармацевтическая композиция может представлять собой как лиофилизат при диспергировании в фармацевтически приемлемом носителе, образующий суспензию, пригодный для внутривенного и/или внутримышечного введения в терапевтически эффективном количестве нуждающемуся в этом пациенту, так и порошок, пригодный для изготовления твердых пероральных лекарственных форм (таких как таблетки, капсулы или драже).

Фармацевтически приемлемый носитель, пригодный для использования в соответствии с заявляемым изобретением, может представлять собой либо 0,9% водный раствор хлорида натрия, либо 0,010,1% водный раствор полисорбата-80, либо 0,05-5% водный раствор полоксамера-188, либо 0,05-5% водный раствор полоксамера-407; дополнительно указанный фармацевтически приемлемый носитель может содержать небольшое количество аскорбиновой кислоты.

В рамках настоящей работы была показана не меньшая (а в ряде случаев и более высокая) эффективность пероральной и внутривенной лекарственных форм рифабутина на основе наночастиц циклодекстрина, полученных в рамках настоящего изобретения, в лечении острой микобактериальной инфекции (экспериментальная мышиная модель острого туберкулеза, вызванная внутривенным введением микобактерий МусоЬас!етшт 1иЬегси1о818, штамм Η37Βν), а также безопасность указанной формы в токсикологическом отношении в сравнении с субстанцией рифабутина.

Микобактериоз в соответствии с заявляемым изобретением представляет собой микобактериоз, обусловленный одним или несколькими возбудителями, выбранными из МусоЬас!етшт 1иЬегси1о818, или МусоЬас!етшт Ьо\35. или МусоЬас!стшт каикаки, или МусоЬас1егшт 5сгоГи1асеит. или МусоЬас!егшт а\'шт-ш1гасе11и1аге сотр1ех, или МусоЬас!егшт 1ергае, или МусоЬас!егшт рага!иЬегси1о818.

Геликобактерная инфекция в соответствии с заявляемым изобретением представляет собой инфекцию, вызванную Не11соЬас!ет ру1отт

При необходимости поверхность наночастиц, образующих заявляемую фармацевтическую композицию, может быть дополнительно модифицирована одним или несколькими поверхностно-активными веществами (ПАВ); такая модификация, как показано в литературе [66]-[68], позволяет изменять такие параметры наночастиц, как продолжительность циркуляции наночастиц в организме, биораспределение лекарственного вещества, продолжительность и выраженность терапевтического эффекта, обеспечивать направленную доставку наночастиц в целевые органы (органы-мишени) и т.п.

Пригодные для указанной цели ПАВ включают в себя, в частности (но не ограничиваясь данным перечнем), полоксамер-101, полоксамер-105, полоксамер-108, полоксамер-122, полоксамер-123, полоксамер-124, полоксамер-181, полоксамер-182, полоксамер-183, полоксамер-184, полоксамер-185, полоксамер-188, полоксамер-212, полоксамер-215, полоксамер-217, полоксамер-231. полоксамер-238, полоксамер-282, полоксамер-288, полоксамер-331, полоксамер-401. полоксамер-407, сорбитан моностеарат

- 8 016410 (δΡΑΝ 60), сорбитан тристеарат (δΡΑΝ 65), сорбитан монолаурат (δΡΆΝ 20), сорбитан моноолеат (δΡΆΝ 80), сорбитан монопальмитат (δΡΑΝ 40), сорбитан триолеат (δΡΑΝ 85) или их смеси.

Наиболее предпочтительными для использования в рамках заявляемого изобретения поверхностноактивными веществами являются полисорбат-80 (торговая марка Т\уссп® 80), полоксамер-188 (торговая марка ΡΙιίΓοπίο® Р-68) и полоксамер-407.

Полоксамеры (см. общую структурную формулу полоксамеров на фиг. 2) представляют собой сополимеры полиоксиэтилена и полиоксипропилена, существуют в виде жидкостей, паст или в твердом виде, применяются в фармацевтике с конца 1950 г. [68]; при этом каждый из полоксамеров характеризуется определенным соотношением числа звеньев полиоксиэтилена и полиоксипропилена.

В литературе было показано ранее, что модификация поверхности (покрытие) наночастиц на основе биоразлагаемого полимера (сополимера молочной и гликолевой кислот и/или полимера молочной кислоты), содержащих фармакологически активное вещество, полоксамером-188 позволяет как пролонгировать время циркуляции таких наночастиц в крови, так и усиливать фармакологический эффект данного вещества, например, доставляя активное вещество в селезенку [69] и в лимфатические узлы [70], а также может применяться для создания лекарственных форм на основе полимерных наночастиц с постепенным (замедленным) высвобождением лекарственного вещества [71]-[73].

Пригодный для создания фармацевтической композиции в рамках заявляемого изобретения циклодекстрин может быть выбран из α-циклодекстрина, 2-гидроксипропил-в-циклодекстрина, 6монодезокси-6-моноамина-в-циклодекстрина, γ-циклодекстрина, 2-гидроксипропил-у-циклодекстрина, сульфобутил-в-циклодекстрина или их смеси, при этом количественное соотношение рифабутин:циклодекстрин в заявляемой фармацевтической композиции может составлять от 1:1 до 1:5.

Композиция в соответствии с заявляемым изобретением может также дополнительно (т.е. при необходимости) содержать криопротектор, выбранный из 1-50% глюкозы, 1-50% лактозы, 1-50% маннита или 1-50% трегалозы.

Также в рамках настоящего изобретения нами заявляется способ получения фармацевтической композиции по изобретению, отличающийся тем, что:

а) навеску циклодекстрина или его фармацевтически приемлемого(ых) производного(ых) растворяют в растворителе при интенсивном перемешивании;

б) добавляют к полученному раствору навеску рифабутина;

в) перемешивают;

г) гомогенизируют;

д) добавляют полученную дисперсию к водному раствору поверхностно-активного вещества при интенсивном перемешивании;

е) гомогенизируют;

ж) удаляют растворитель;

з) центрифугируют;

и) высушивают.

В рамках настоящего изобретения высушивание (этап (и)) может осуществляться как при помощи лиофильной сушки, так и при помощи распылительной сушки.

Дополнительно указанный способ может включать в себя также нагревание реакционной смеси, и/или обработку реакционной смеси ультразвуком, и/или обработку реакционной смеси микроволновым излучением (СВЧ-излучение), которые могут осуществляться на этапе (в).

Указанный способ может также (при необходимости) включать в себя добавление криопротектора (выбранного предпочтительно из 1-50% глюкозы, 1-50% лактозы, 1-50% маннита или 1-50% трегалозы); в этом случае криопротектор добавляют после стадии центрифугирования (этап (з)).

Растворитель в соответствии с заявляемым изобретением предпочтительно удаляют при помощи отгонки на роторном испарителе (при пониженном давлении).

Также в соответствии с заявляемым изобретением мы заявляем способ лечения микобактериоза, отличающийся тем, что внутривенно и/или внутримышечно вводят терапевтически эффективное количество фармацевтической композиции по изобретению в виде суспензии в фармацевтически приемлемом носителе нуждающемуся в этом пациенту;

способ лечения микобактериоза, отличающийся тем, что перорально вводят терапевтически эффективное количество фармацевтической композиции по изобретению в виде порошка или в виде твердой пероральной лекарственной формы нуждающемуся в этом пациенту;

способ лечения геликобактерной инфекции, отличающийся тем, что внутривенно и/или внутримышечно вводят терапевтически эффективное количество фармацевтической композиции по изобретению в виде суспензии в фармацевтически приемлемом носителе нуждающемуся в этом пациенту;

способ лечения геликобактерной инфекции, отличающийся тем, что перорально вводят терапевтически эффективное количество фармацевтической композиции по изобретению в виде порошка или в виде твердой пероральной лекарственной формы нуждающемуся в этом пациенту.

Следует учитывать, что в рамках настоящего изобретения микобактериоз может быть обусловлен

- 9 016410 одним или несколькими возбудителями, выбранными из МусоЬас1егшш 1иЬегси1ов1в, или МусоЬас1етшт ϋονίδ, или МусоЬас1ег1ит каивави, или МусоЬас1егшт всгоШасеит, или МусоЬас1егшт ауштш1гасе11и1аге сотр1ех, или МусоЬас1епит 1ергае, или МусоЬас1егшт рага1иЬегси1ов1в; геликобактерная инфекция может быть обусловлена Не11соЬас1ет ру1оп.

Представленные ниже примеры, относящиеся к получению фармацевтической композиции в соответствии с настоящим изобретением, а также к подтверждению ее более высокой эффективности в лечении острой экспериментальной микобактериальной инфекции, обусловленной МусоЬас1етшш 1иЬегси1о818, не ограничивают объем притязаний, а приводятся лишь для иллюстрации настоящего изобретения.

Квалифицированному в данной области специалисту должно быть понятно также, что заявляемая фармацевтическая композиция на основе наночастиц (нанокристаллов) циклодекстрина с инкорпорированным в них рифабутином может также с успехом применяться и для лечения других инфекций, охваченных спектром антибактериальной активности рифабутина [1], в частности для лечения микобактериоза, обусловленного МусоЬас1етшш 1ергае, микобактериоза, обусловленного МусоЬас1етшш Ьоу1в, микобактериоза, обусловленного МусоЬас1етшш каивави, микобактериоза, обусловленного МусоЬас1етшш встоШасеит, или МусоЬас1етшт аушт-т1гасе11и1аге сотр1ех, или МусоЬас1егшт 1ергае, или МусоЬас1егшт рага1иЬегси1ов1в, а также для лечения геликобактерной инфекции; таким образом, спектр антибактериальной активности композиции определяется не новой лекарственной формой, раскрытой в рамках настоящей заявки, а спектром антибактериальной активности самого рифабутина [1].

Дополнительно следует также отметить, что предложенный в рамках настоящего изобретения способ синтеза наночастиц циклодекстрина с инкорпорированным в них рифабутином позволяет обойтись без использования высокотоксичных хлорорганических растворителей (хлористого метилена и др.), которые используются, например, в синтезе наносомальных форм рифабутина согласно [53] или [62] и остаточные количества которых могут сохраняться в готовой лекарственной форме, полученной в соответствии с [53] или [62]; в заявляемом способе синтеза в качестве органических растворителей могут быть использованы этанол, ацетон или Ν-метилпирролидон.

Пример 1. Получение (синтез) наночастиц циклодекстрина с инкорпорированным в них рифабутином с использованием лиофильного высушивания, их физико-химические характеристики.

Навеску рифабутина и циклодекстрина (выбранного из α-циклодекстрина (α-ЦД), γциклодекстрина (γ-ЦД), 2-гидроксипропил-в-циклодекстрина (2-ГП-в-ЦД) или сульфобутил-βциклодекстрина (δΒΕ-β-ЦД) заливали растворителем (этанол, ацетон, диметилсульфоксид (ДМСО) или метилпирролидон), оставляли на магнитной мешалке при интенсивном перемешивании в течение 4 суток. Затем обрабатывали на ультразвуковой бане в течение 15 мин, добавляли водный раствор Р1итошс® Е-68 (полоксамер-188), дважды гомогенизировали с помощью УЗ-гомогенизатора и отгоняли растворитель при пониженном давлении. Далее отделяли крупные агломераты центрифугированием, к супернатанту добавляли криопротектор (глюкозу, лактозу, маннит или трегалозу), разливали по флаконам (1 мл/флакон), замораживали при температуре -70°С и лиофильно высушивали.

Для каждого образца и для каждого разведения определяли средний диаметр наночастиц (среднее значение ± стандартное отклонение) и индекс полидисперсности наночастиц (ΡΌΙ, среднее значение ± стандартное отклонение).

В ходе эксперимента варьировались (при получении различных партий препарата) концентрации рифабутина, виды используемого циклодекстрина (α-циклодекстрин, γ-циклодекстрин, 2гидроксипропил-в-циклодекстрин, сульфобутил-в-циклодекстрина, 2-гидроксипропил^-циклодекстрин), весовое соотношение рифабутин:циклодекстрин, вид используемых растворителей (этиловый спирт, диметилсульфоксид (ДМСО), Ν-метилпирролидон или ацетон), а также наличие ПАВ (предпочтительно 0,1-1% Р1итошс Е-68) или его соответствие.

Физико-химические характеристики синтезированных в соответствии с настоящим примером наночастиц циклодекстрина (ЦД) с инкорпорированным в них рифабутином (ВЬ) (включая концентрацию рифабутина (%), вид использованного циклодекстрина (α-циклодекстрин (α-ЦД), сульфобутил-βциклодекстрина (δΒΕ-β-ЦД), γ-циклодекстрин (γ-ЦД), 2-гидроксипропил-в-циклодекстрин (2-ГП-в-ЦД)) и его концентрацию (%), соотношение рифабутин:циклодекстрин для каждой партии наночастиц в соответствии с изобретением, вид использованного растворителя, использованное поверхностно-активное вещество (ПАВ) и его концентрацию (%), условия измерения, вид использованного криопротектора и его концентрацию (%), средний диаметр наночастиц и индекс полидисперсности (ΡΌΙ)) представлены в табл.

1.

- 10 016410

Таблица 1

Физико-химические характеристики наночастиц в соответствии с примером 1

№	%	Вид ИД;	Соот	Раство-	ПАВ,	Вид	Средний диа-	Индекс
об	кон-	его кон-	отно	ритель	% кон-	крио-	метр (Ζ-	полидис-
раз	цен-	центрация,	но-		це н-	протек-	Ауега^е с1), нм	персности(
ца	тра-	%	ше-		ТргЩНЯ	тора,		ΡΒΙ)
	ция		ние			его кои-
	КЬ		КЬ:			копцен-

1	1%	(1-ЦД; [% 1:1	Этанол	Р1игогнс Р-68, 1%	Маннит 1%	618.2*19.7	0.267*0,014
2	1%	а-ЦД: 1%	1:1	Ацетон	Р1игоп!С Р-68. 1%	Маннит 1%	557.9*9,83	0.221+0,073
3	1%	а-ЦД; 1%	1:1	дмео	РШгогнс Е-68, 1%	Без криопротектора	407,5*2,15	0.163*0,01
4	1%	а-ЦД; 1.5%	1:1,5	Этанол	ΡΙυΐΌπϊο Р-68. 1%	Без криопротектора	353.6*3.87	0,120*0,032
5	1%	а-ЦД; 2%	1:2	Этанол	Ркиогнс Г-68, 1%	Без криопротектора	499.7*7,0	0.230*0,010
6	2%	8ВЕ-Р-ЦД; 2%	1:1	Этанол	ΡΙ Итон ίο Р-68, 1%	Маннит	374,4*12,2	0,256*0,013
7	1%	5ВЕ-р-ЦД; 2%	1:1.2 5	Ацетон	ΡΙυΐ'οηίο Е-68. 1%	Маннит	451,2*13.4	0,265*0,018
8	1,5%	$ВЕ-|3-ЦД: 2%	1:1	ДМСО	ΡΙιιγοπ ίο Е-68. 1%	Без криопротектора	384.1* 1 7,8	0,301*0,020
9	0.5%	$ВЕ-Р-ЩД; 2,5%	1:1.5	Этанол	Р1иго1пс Е-68, 1%	Без криопротектора	276,4*12.3	0.259*0,012
10	1%	δΒΕ-β-ЦД; 2%	1:2	Этанол	ΡΙυΐΌπίε Р-68, 1%	Без криопротектора	215,8*1 1,2	0,232*0,009
II	0,5%	2-ГП-р-ЦД; 1%	1:1	Этанол	Р1игоп1С Г-68, 1%	Без криопротек-	294,3*3.36	0,09*0,022

12	0,5%	2-ГП-р-ЦД; 1.5%	1:1,5	Этанол	ΡΙιι готе Р-68, 1%	Без криопротектора	326.5*1,90	0.086*0,013
13	0,5%	2-ГП-11-ЦД; 2%	1:2	Этанол	ΡΙϋΓοηία Г-68, 1%	Без криопротектора	310,6*2,06	0,106*0,011
14	1%	2-ГП-у-ЦД; 1.5%	1:1.5	Этанол	ΡΙιττοιιΐο Р-68, 1%	Маннит 1%	146.5*5,73	0,374*0,036
15	1,5%	2-ГП-у-ЦД: 2.25%	1:1,5	Этанол	Ρΐιιτοπΐε Р-68, ί%	Без криопротектора	141,7*5,73	0.236*0,012
16	0,5%	2-ГП- у ЦД; 0,5%	1:1	Этанол	Ρ)ιι ιοηίε Р-68. 1%	Маннит 1%	247.55*3.29	0.419*0,023
17	0.5%	2-ΓΓΙ- у - ЦД; 0.5%	1:1	Этанол	Р1игО1Йс Г-68, 1%	Без криопротектора	1235.0*25,11	0,419*0,023
18	0,33 %	2-ГП- у - ЦД; 0,5%	1:1,5	Этанол	ΡΙιιγοπ )с Р-68, 1%	Без криопротектора	774,1*31.87	0.217*0,041
19	0,33 %	2-ГП- у - ЦД; 0.5%	1:1.5	Этанол	Р1игол1С Р-68. 1%	Без криопротектора	263,7*12,34	0,19*0,034

инкорпорированным в них рифабутиПример 2. Получение (синтез) наночастиц циклодекетрина ном с использованием распылительного высушивания, их физико-химические характеристики.

Осуществляли синтез наночастиц циклодекстрина с инкорпорированным в них рифабутином аналогично примеру 1, однако на завершительном этапе синтеза частицы подвергали не лиофильному, а распылительному высушиванию.

При получении различных партий препарата варьировались концентрации рифабутина, виды используемого циклодекетрина (α-циклодекстрин, γ-циклодекстрин, 2-гидроксипропил-в-циклодекстрин,

- 11 016410 сульфобутил-в-циклодекстрина, 2-гидроксипропил-у-циклодекстрин), весовое соотношение рифабутин:циклодекстрин, вид используемых растворителей (этиловый спирт, Ν-метилпирролидон или ацетон), а также наличие ПАВ (предпочтительно 0,1-1% Р1игошс Р-68) или его соответствие. Для каждого образца определяли средний диаметр наночастиц (среднее значение ± стандартное отклонение) и индекс полидисперсности наночастиц (ΡΌΙ, среднее значение ± стандартное отклонение).

В ходе эксперимента варьировали (при получении различных партий препарата) концентрации рифабутина, виды используемого циклодекстрина (α-циклодскстрин, γ-циклодекстрин, 2-гидроксипропилβ-циклодекстрин. сульфобутил-в-циклодекстрина, 2-гидроксипропил^-циклодекстрин), весовое соотношение рифабутин:циклодекстрин, вид используемых растворителей (этиловый спирт, диметилсульфоксид (ДМСО), Ν-метилпирролидон или ацетон), а также наличие ПАВ (предпочтительно 0,1-1% Р1итошс Р-68) или его соответствие.

Физико-химические характеристики некоторых синтезированных в соответствии с настоящим примером наночастиц циклодекстрина (ЦД) с инкорпорированным в них рифабутином (КЬ) (включая концентрацию рифабутина (%), вид использованного циклодекстрина (α-циклодекстрин (α-ЦД), сульфобутил-в-циклодекстрина (βΒ-β-ЦД), γ-циклодекстрин (γ-ЦД), 2-гидроксипропил-в-циклодекстрин (2-ГП-вЦД)) и его концентрацию (%), соотношение рифабутин:циклодекстрин для каждой партии наночастиц в соответствии с изобретением, вид использованного растворителя, использованное поверхностноактивное вещество (ПАВ) и его концентрацию (%), условия измерения, вид использованного криопротектора и его концентрацию (%), средний диаметр наночастиц и индекс полидисперсности (ΡΌΙ)) представлены в табл. 2.

Таблица 2

Физико-химические характеристики наночастиц в соответствии с примером 2

№ образца	% концентрация КЬ	Вид 11Д; его концентрация, %	Соотношение Г<Ь:КД	Растворитель	ПАВ. Вид % крнопротек- КОИ- тора цен- тра- ЦИЯ	Средний диаметр (ΖАкега^е ά), нм	Индекс полпднсперсиости(РО1)
1	1%	о+ЦД: 1%	1:1	Ацетон	ΡΙυΐΌη- Маннит 1С Е- 68. 1%	605.94 9.2	0.324+0,08
2	1%	а-ЦД: 2%	1:2	Этанол	ΡΙιίΓοη- Без криопро:с Г- тектора 68. 1%	721.7+8,0	0.300+0,050
3	1%	5ВЕ.-Р- ЦД: 2%	1:1,25	Ацетон	ΡΙοϊΌη- Маннит 1с Е- 68. 1%	323,8+14,7	0.291+0.0.34
4	0.5%	8ВЕ-Р- ЦД: 2,5%	1:1,5	Этанол	ΡΙαιοπ- Без криопро- 1с Е- тектора 68, 1%	254,9+12,1	0.318+0,048
5	0,5%	2-Γ'Π-β- ЦД; 1 %	1:1	Этанол	Р1игоп* Без криопро- 1с Е- тектора 68, 1%	297,1 ±4,67	0.110+0.012
6	0,5%	2-ΓΠ-β- ЦД; 2%	1:2	Эта, юл	ΡΙιιΐοη- Безкриопро- 1С Г- тектора 68, 1%	340.9+6.15	0,305+0,241
7	1,5%	2-ΓΠ-γИД; 2.25%	1:1.5	Этанол	Р1игоп- Без криопрою Г- тектора 68, 1%	209,3+7,36	0,296+0,032
8	0.5%	2-ГП-рЦД; 0.5%	1:1	Этанол	Р1игоп- Маннит ю Е· 68. 1%	327,42+5,44	0.521+0,294
9	0,33%	2-ГП-р- ЦД; 0,5%	1:1.5	Этанол	ΡΙηγοιί- Без криопроίο Г- тектора 68, 1%	578.2+28,13	0,262+0,054

В результате проведенной серии экспериментов (примеры 1, 2) было установлено, что для получения фармацевтической композиции в соответствии с изобретением (композиция на основе наночастиц циклодекстрина с инкорпорированным в них рифабутином) пригодно как распылительное, так и лиофильное высушивание.

Также было установлено, что оптимальным для получения наночастиц (нанокристаллов) в соответствии с изобретением, содержащим рифабутин, является соотношение рифабутин:циклодекстрин, равное 1:1-1:1,5; для α-циклодекстрина это соотношение составляет 1:1,25, для 2-гидроксипропил-вциклодекстрина приблизительно 1:1.

Наиболее оптимальным растворителем в результате эксперимента был признан диметилсульфоксид (ДМСО), однако, поскольку ДМСО сложно удалить полностью из готового препарата (фармацевтической композиции) в соответствии с изобретением, решено было использовать в качестве органического растворителя этанол.

Наиболее предпочтительными циклодекстринами для использования в составе фармацевтической композиции по изобретению в соответствии с результатами, полученными в рамках примера 1, были

- 12 016410 признаны 2-гидроксипропил-в-циклодекстрин и сульфобутил-в-циклодекстрин.

Один из образцов заявляемой фармацевтической композиции рифабутина, синтезированный в рамках примеров 1, 2 с использованием наночастиц 2-гидроксипропил-в-циклодекстрина с включенным в них рифабутином, был исследован в рамках настоящей работы на эффективность в лечении экспериментального туберкулеза у мышей, вызванного МусоЬас1егшт 1иЬегси1о818. Методика исследования эффективности и результаты представлены в примере 3 (внутривенное введение) и примере 4 (пероральное введение).

Пример 3. Изучение эффективности наносомальной фармацевтической композиции рифабутина в соответствии с изобретением в лечении острого экспериментального туберкулеза у мышей, вызванного инфекцией МусоЬас1егшш 1иЬегси1о818 (штамм Η37Βν), при внутривенном введении.

Цель эксперимента состояла в сравнении лечебного эффекта заявляемой фармацевтической композиции рифабутина (наночастицы 2-гидроксипропил-в-циклодекстрина с инкорпорированным в них рифабутином в соответствии с настоящим изобретением) при внутривенном введении и субстанции рифабутина (при пероральном введении) при лечении острого экспериментального туберкулеза у мышей.

Эксперименты проводились на экспериментальных животных - 100 мышах (п = 100) - самках линии Ва1Ь/с в возрасте 7-8 недель, весом 20-22 г. Взятые в исследование животные были инфицированы микобактериями туберкулеза (МусоЬас1епит 1иЬегси1о818, штамм Η37Βν) в дозе 5,6х10⁷ КОЕ/мышь путем введения суспензии микобактерий в боковую хвостовую вену животных.

Как суспензию субстанции рифабутина (ВЬ), так и раствор его фармацевтической композиции (ВЬ-ЦД НЧ) в соответствии с изобретением (образец № 12 по табл. 1) готовили не более чем за 1 ч до начала терапии (в соответствии с паспортными рекомендациями и со способом синтеза, раскрытым в примере 1). Для приготовления суспензии субстанции рифабутина к 10 мг субстанции рифабутина добавляли 100 мкл 90 об.% этанола, разбавляли стерильной водой (до 4 мл) до конечной концентрации 2,5 мг/мл. Композицию рифабутина в соответствии с настоящим изобретением (ВЬ-ЦД НЧ) разбавляли в физиологическом растворе (0,9% раствор хлорида натрия), содержащем небольшое количество аскорбиновой кислоты, и разводили водой до конечной концентрации 2,5 мг/мл.

Лечение начинали на 7 день после заражения и продолжали в течение 4 недель.

На протяжении данного срока, 3 раза в неделю животным опытной группы вводили внутривенно (ί.ν.) в боковую хвостовую вену фармацевтическую композицию рифабутина в соответствии с изобретением (ВЬ-ЦД НЧ), в дозе 100 мкг/мышь (20 животных) или 500 мкг/мышь (20 животных) (внутривенно). Животным, входящим в группу сравнения, вводили перорально (рег оз) (в объеме 0,2 мл) раствор субстанции рифабутина в дозе 100 мкг/мышь (20 животных) или 500 мкг/мышь (20 животных). Животным контрольной группы (20 животных) вводили внутривенно (в боковую хвостовую вену) по 0,2 мл физиологического раствора.

На следующий день после окончания лечения производились эвтаназия животных, их вскрытие, изъятие и гомогенизация внутренних органов (легкие, селезенка); цельные гомогенаты (0-е разведение) и первое десятикратное разведение гомогенатов (для животных, получавших внутривенно фармацевтическую композицию рифабутина в соответствии с изобретением и для животных, получавших перорально раствор рифабутина) высевали на питательную среду Мидлбрук 7Η11 агар; для животных контрольной группы производился высев на Мидлбрук 7Η11 агар первого (десятикратного) и второго (стократного) разведений гомогената. Подсчет числа КОЕ производился через 21 день после посева; для каждого значения брали десятичный логарифм (1д (КОЕ)); результаты для каждой группы животных, для каждого из органов (легкие, селезенка) представлены в табл. 3 (КОЕ/орган, в виде: среднее значение ± стандартное отклонение) и на фиг. 3.

Таблица 3 Обсемененность органов мышей, зараженных М. 1иЬегси1о818 Η37Βν, после внутривенного лечения композицией рифабутина в соответствии с изобретением

Препарат	Доза лечения, мкг/мышь	Легкие	Селезенка
кь-цд ич	500	0,35 ±0,29	2,53 ±0,23
(образец 12	100	3,22 ±0,20	4,02 ±0,15
согласно
Таблице 1),
ί.ν.
КЬ, рег о»	500	1.62 ±0,19	2,90 ± 0,07
	100	4,32 ±0,10	4,52 1 0,07
Контрольная группа	-	6.37 ± 0,06	5,86 ±0,12

Таким образом, вводимая внутривенно циклодекстриновая форма рифабутина (ВЬ-ЦД НЧ), созданная в рамках настоящего изобретения, как это видно из данных, представленных в табл. 3 и на фиг. 3, была эффективнее субстанции рифабутина, введенной перорально при лечении экспериментального туберкулеза мышей. Отклонения между группами достоверны в обеих используемых дозах (100 и 500 мкг/мышь). Наибольшая разница между группами наблюдалась при высевах из легочной ткани.

- 13 016410

Пример 4. Изучение эффективности наносомальной фармацевтической композиции рифабутина в соответствии с изобретением в лечении острого экспериментального туберкулеза у мышей, вызванного инфекцией МусоЬас!етшт 1иЬегси1о818 (штамм Η37Βν), при пероральном введении.

По аналогии с примером 2 цель эксперимента состояла в сравнении лечебного эффекта заявляемой фармацевтической композиции рифабутина (наночастицы 2-гидроксипропил-в-циклодекстрина с инкорпорированным в них рифабутином в соответствии с настоящим изобретением), при пероральном введении указанной композиции (в виде порошка) и субстанции рифабутина (также при пероральном введении) при лечении острого экспериментального туберкулеза у мышей.

Характеристики и количество животных (вид животных, средняя масса тела), методика их инфицирования микобактериями туберкулеза (МусоЬас1епит 1иЬегси1о818, штамм Η37Βν), а также схема эксперимента соответствовали примеру 3.

Аналогично примеру 3, лечение животных начинали на 7 день после заражения, но продолжали в течение 8 недель. На протяжении данного срока, 3 раза в неделю, животным вводили перорально, в объеме 0,2 мл, в дозах 500 и 100 мкг/мышь либо суспензию рифабутина (ВЬ), либо композицию рифабутина в соответствии с изобретением (ВЬ-ЦД НЧ, рег о§, образец № 12 по табл. 1) (по 20 животных на каждую дозу, на каждую из форм рифабутина); контрольной группе (20 животных) вводили перорально по 0,2 мл физиологического раствора.

На следующий день после окончания лечения производились эвтаназия животных, их вскрытие, изъятие и гомогенизация внутренних органов (легкие, селезенка); цельные гомогенаты (0-е разведение) и первое десятикратное разведение гомогенатов (для животных, получавших антибиотик рифабутин в той или иной форме) высевали на питательную среду Мидлбрук 7Η11 агар; для животных контрольной группы (20 животных) производился высев на Мидлбрук 7Η11 агар первого (десятикратного) и второго (стократного) разведений гомогената.

Подсчет числа КОЕ производился через 21 день после посева; для каждого значения брали десятичный логарифм (1д (КОЕ)); результаты для каждой группы животных, для каждого из органов (легкие, селезенка) представлены в табл. 4 (КОЕ/орган, в виде: среднее значение ± стандартное отклонение) и на фиг. 4.

Таблица 4

Обсемененность органов мышей, зараженных М. 1иЬегси1о818 Η37Βν, после перорального лечения композицией рифабутина в соответствии с изобретением

Препарат	Доза лечения, мкг/мышь	Легкие	Селезенка
КЬ-ВДНЧ (обра-	500 >	0,00 ± 0,00	0,71 ±0,32
зец 12 согласно
Таблице 1), рег о$	100	3,45 ± 0,27	3,66 т 0,18
КЬ, рег 08	500	0,41 г 0,27	1,85 г 0,14
	100	4,40 т 0,05	4.25 ±0.19
Контрольная	-	6,02 ± 0,10	6,16 ±0,06
..................

Из представленных в примере 4, в табл. 4 и на фиг. 4 данных можно видеть, что вводимая перорально фармацевтическая композиция рифабутина в соответствии с настоящим изобретением оказалась эффективнее субстанции рифабутина, введенной тем же способом, в лечении острого экспериментального туберкулеза у мышей. Отклонения между группами достоверны в двух используемых дозах (100 и 500 мкг/мышь). Наибольшая разница между группами наблюдалась при высевах из легочной ткани. При пероральном введении фармацевтической композиции рифабутина в соответствии с изобретением в дозе 500 мкг/мышь наблюдался эффект (феномен) стерилизации в легочной ткани.

Таким образом, в рамках настоящего изобретения удалось создать растворимую лекарственную форму антибиотика рифабутина, пригодную как для парентерального, так и для перорального введения нуждающемуся в этом пациенту, на основе наночастиц циклодекстрина, содержащую рифабутин в концентрации 4±1 мг/мл; было показано, что по эффективности такая растворимая форма рифабутина не уступает эффективности вводимой перорально (в тех же дозах) субстанции рифабутина, а в отношении элиминации М. 1иЬегси1оД8 в селезенке даже превосходит ее, что и составляет неожиданный технический результат настоящего изобретения.

Список источников

1. Цыбанев А. А., Соколова Г.Б. Противотуберкулезный антибиотик пролонгированного действия рифабутин. Антимикробный спектр, особенности фармакодинамики и фармакокинетики. - Антибиотики и химиотерапия, 1999; 44(8), с. 30-36. Доступно в сети Интернет (на 29.09.2010):

1111р://па1иге.\уеЬ.ги/бЬ/1П5д.1111п1?1шб=1180884&ип=тбех.1111п1;

1111р://па1иге.\\'еЬ.ги/бЬ/1П5д.1111п1?1шб=1180884&ип=тбех2.1111п1; 1Шр://па1иге.\уеЬ.ги/бЬ/п15д.1и1п1?1шб=1180884&ип=тбех3 .Ыт1.

2. Ипдйеп Ό., Эейа Вгиппа С., 8аиГШрро А. §1иб1е8 оп Не тесйапщт о! асйоп о! 8рпор1репбу1

- 14 016410 пГатусш оп ЬМ427 нГатр1ст-гек1к(ап( М. !иЬегси1ок1к. - Эгидк ипбег Ехрентеп(а1 апб СНшса1 Векеагсй, 1984; 10: 681-689: 37: 7685-7694.

3. Сгокке(РН. Ыете арргоасйек ш ап1ппусоЬас1епа1 сНето(Негару. - Эгидк Тобау, 1988; 24: 291-301;

4. Не|Ге(к Ь.В., Ьтбко1т-Ьеу1 Р.к, 1кетап М. ВГаЬийп: т1шта1 1пй1Ьйогу сопсеп(гаНоп Гог МусоЬас(егтт !иЬегси1ок1к. - ТНе Атепсап Веу1е\х оГ Векрйа(огу Пкеакек, 1988; 137: 719-721.

5. Агте Υ.Α. Ап1ппаусоЬас1епа1 асйуйу т у|уо оГ ЬМ 427 (В1ГаЬи!т). - ТНе Атепсап Вех1е\х оГ Векр1га!огу П1кеакек, 1988; 138: 1254-1267.

6. Вгодбеп Β.Ν., Рийоп А. ВГаЬиВп. А гех1е\у оГ йк ап(птсгоЫа1 асйуйу, рйагтасо-ктейс ргорегИек апб (НегареиНс еГПсасу. - Эгидк, 1994; 47: 6: 983-1009.

7. Υ^ΐω Э.М., №1ккок Р.8., Наб1еу А.К. ТНегареиВс НпрПсаНопк оГ тЫЬйюп уегкик кШшд оГ МусоЬас(егйпп аушт сотр1ех Ьу ап(НшсгоЫа1 адеп(к. - Ап(пшсгоЫа1 Адеп(к апб СНето(Негару, 1987; 31: 117120.

8. ЭНор1е А.М., 1Ьапек М.А. 1п уйго асВуйу оГ (Нгее пе\х Пиогос.|тпо1опек апб купегду \\ЙН апкатусшк адатк( МусоЬас1епит 1ергае. - ТНе 1оигпа1 оГ АпВт1сгоЬ1а1 СНето(Негару, 1993; 32: 445-449.

9. Сеп(егк Гог Э|кеаке Соп(го1 апб РгехепЕоп (2000) Ирба(еб дшбе1шек Гог (Не ике оГ г1ГаЬиПп ог пГатрш Гог (Не (геа(теп( апб ргеуепйоп оГ !иЬегси1ок1к атопд Н1У-шГес(еб раНеп(к (актд рго(еаке шЫЬйогк ог поппис1еок1бе гехегке (гапкспр(аке шЫЬйогк. - ММАВ МогЬ. МоВа1 Ак1у Вер. 49(9), 185 9. АуаПаЫе оп1ше: \х\х\у.сбс.доу/псНк(р/(Ь/ (а! 29.09.2010).

10. Кишп С.М. Ап(пп1сгоЫа1 асВуйу оГ пГаЬиВп. - СНшса1 шГесВоик б1кеакек : ап оГГ1с1а1 риЬНсаВоп оГ (Не НчГесНоик Э|кеакек 8ос1е(х оГ Атенса, 1996; 22: 8ирр1. 1: 3-14.

11. Кап Ν., Ва1б\хт I., Рппсе Н.К е( а1. А сотрагаНхе к(ибу оГ пГаЬийп апб о(Нег апВЫоВск адатк! а крес(гит оГ поптусоЬас(ена1 ткгоогдашкт. - 9(Н МееВпд оГ (Не Атепсап 8оае(у оГ М1сгоЬ1о1оду, 1994; АЬкВ А-37, И8А.

12. Аооб С.А. ВГатркш-гекШап! 8(арНу1ососспк Ьас(епепйа ίπ раВеп! \\ЙН ΆΙΌ8 гесеМпд пГаЬиВп. ЕаисеХ 1994; 343: 919-926.

13. Вокк1 В., баЬек Ό., Эе11а Вгипа С. 1п уйго асНхйу ш г1ГаЬиНп, ро(епВа1 апВЫоВс ш (Не (Негару оГ НеНсоЬас(ег ру1он. - 6(Н 1п(егпа(юпа1 Сопдгекк оГ НчГесНоик Э|кеакек. Ргадие, 1994; АЬк(г. 48.

14. ТогассНю 8., Саробюака 8., 8ога.)а Э.В., СеШш Ь., Маг/ю Ь. ВГаВиВп Ьакеб (Г1р1е (Негару Гог егабР саВоп оГ Н. ру1он рнтагу апб кесопбагу гек1к(ап( (о (Нибахо1е апб с1аг-ййготусш. - О|дек(1хе апб Ыуег ϋΐδеакек, 2005 1ап.; 37(1): 33-8.

15. Сапбисс1 Р., О)е(Н V., Ро1а Р., СакЬатш 6., СакЬатш А. ВГаЬиВп-Ьакеб НейсоЬас(ег ру1он егабР саВоп гекс.|ие (Негару. - АВтеп!агу РНагтасо1оду & ТНегареиВск, 2000; 14: 311-316.

16. ТгеНагпе ΡΌ., Υеа^кНу Р.Ь., Ва11агб В.С. СН1атуб1а ВасйотаВк киксерВЬййу апб гек1к(апсе (о пГатркш апб пГаЬиВп. - ТНе 1оигпа1 оГ АпВт1сгоЬ1а1 СНето(Негару, 1989; 33: 1393-1394.

17. Агащо Р.С., 81йег Т., Ветшд!оп 1.8. ВГаЬиВп 1к асНхе ш тигше тобе1 (охо-р1акток1к. - АпВт1сгоЫа1 Адеп(к апб СНетоШегару, 1994; 38: 570-575.

18. Уаага М. СотрагаНхе асНхйу оГ пГаЬиВп апб пГатркш адашк( дгатпедаНхе Ьас(ена (На( Нахе батадеб ог беГес(еб ои(ег тетЬгапек. - ТНе 1оита1 оГ АпВт1сгоЬ1а1 СНето(Негару, 1993; 31: 799-801.

19. Не|Ге(к Ь.В., Ьтбйо1т-Ьеуу Р.Р, Р1огу М.А. Вас(енаба1 асНхНу ш уйго оГ нГаЬиНп адашк( М. аушт апб М. (иЬегси1ок1к. - ТНе Атепсап Вех1е\х оГ ВекрВа(огу Океакек, 1990; 141: 626-630.

20. ТгиГГо(-Регио( С., СВой А.М., МаюНик I., Сгокке( I. А к(ибу оГ (Не т1шта1 шЫЬйогу сопсепйаВоп оГ гГаЬийп (апкатусш ЬМ 427) Гог МусоЬас(егшт 1пЬегси1ок1к, МусоЬас(епит хепор1 апб МусоЬас(егшт аушт-т!гасе11и1аге. - Веуие бек Ма1аб1ек Векрйа(оВек, 1988; 5: 401-406.

21. Кеп( В.Р, ВакйВаг М., 8Напкоп Э.С. ТНе ш уйго Ьас(епс1ба1 асНхШек оГ сотЬшайопк оГ апйткгоЬ1а1 адеп(к адашк( с1ппса1 1ко1а(ек оГ МусоЬас(егйпп аушт-шВасе11и1аге. - ТНе 1оита1 оГ Ап(пшсгоЫа1 СНетоШегару, 1992; 30: 643-650.

22. МаксеШпо М.Т., Υопа Е., Ра((апт Ь. е( а1. 1п уйго асНхйу оГ с1агйНготуст а1опе ог 10 сотЬтаНопк νί(Β о(Нег ап(тйсгоЫа1 адеп(к адатк( МусоЬас(егйпп ахй1т-т(гасе11и1аге сотр1ех к(гатк 1ко1а(еб Ггот АГО8 райеп!к. - 1оита1 оГ СйетоШегару, 1991; 3: 357-362.

23. 8еубе1 1.К., 8сНарег Κ.Υ., ВиксН-Сегбек 8. Эехе1ортеп( оГ еПссНхе бгид сотЬтайопк Гог (Не 1пЫЬйзоп оГ тиЫр1е гек1к(ап( МусоЬас(ег1ит, екрес1а11у оГ (Не МусоЬас(епит ахтт сотр1ех. - СНето(Негару, 1992; 38: 159-168.

24. Н_)е1т и., Каиб(оуа I., КиЬт М., НоГГпег 8.Е. 8иксерйЬййу оГ МусоЬас(епит капкакй (о е(НатЬи(о1 νίΐΡ гГатуст, аргоПохаст апб 1кота/|б. - Еигореап 1оигпа1 оГ Сйшса1 М1сгоЬю1оду & НчГесНоик ϋΐδеакек, 1992; 11: 51-54.

25. С1иобпп Вб. Вас(епс1ба1 ас(1У1(1ек оГ уапоик апйткгоЫа1 адеп(к адатк( Нитап апб ашта1 1ко1а(ек оГ МусоЬас(епит рага(иЬегси1ок1к. - АпВткгоЫа1 Адеп(к апб СНетоШегару, 1990; 34: 366-367.

26. Уап Эег А\хега Т., Ма(кито(о Т., Никкоп М. НКгарНадосуНс репе(гаНоп оГ апВЬюйск. - 1оигпа1 оГ АпВткгоЬ1а1 СйетоШегару, 1988, 22: 185-192.

27. Вак(од| Ν., Ро1аг М.С., Эау|б Н.Ь. АсВоп оГ ап(йиЬегси1ок1к апб в-1ас(ат бгидк адатк( ех(га- апб т(гасе11и1аг1у дго\утд МусоЬас(епит ауй1т-т(гасе11и1аге. - Апп 1пк( Рак(еиг (М1сгоЬю1од1е), 1988; 139: 225232.

- 15 016410

28. ΡαχΙοβί Ν., В1от-Ро1аг М.С., Όανίά Н.Ь. Эгид αοίίοη адатЧ т1гасс1к11аг дго\\1к οΓ МуеоЬаеЮпит χβηορί. - Сигг. МкгоЬюк, 1989, 19: 83-89.

29. ΠιηΙοιϊηί Ь., Ни С.р.. Ли 8.Н. с! а1. ΛαΙίνίΙ\· οΓ апЛткгоЫа1 адсп!к адатЧ ΜусοЬасίс^^ит ανίιιιη ίη1гасс11и1агс αοιηρίοχ (УЕС) Чгатк ίχοΐαίοά ίη 11а1у Ггот ΛΙΌ8 рабспк. - ΖοηίΓαΙΠαΙΙ ΒααΙΟΓίοΙ., 1992; 276: 512520.

30. МайссШ А., с! а1. (2005) Το1θΓαόί1ίΙ\· οΓ 1\\'1сс-\\'сск1у ΓίΓαόυΙίη-ίχοηίαζίά сοтЬтаЛοпκ усгкик баку Ι5οηίαζί6 Γογ 1а(сп1 Ιιι№ΐΌΐι1ο8ί8 ίη Н1У-тГсс1сб киЬ]сс1к: а ρί1οί Чибу. - Ιηί. ί. ТиЬсгс Диид Όίδ, 3, 1043 6.

31. δζςί11ί ί. Сус^сх!^ Тсскгюкду (Ι.Ε.Ό. Ό-νί^. кспск сб.). - Ккихсг Асабстк РиЬккксгк, Όο^τ^!!, !кс №!ксг1апбк, 1988.

32. Ό. Сус^сх^^ апб Ткск Ιπ6ιι4π-1 икск. - Εб^ί^οпк бс Зап!с, Рапк, 1987.

33. Егбтттд К., 8ζ&)ίίί ί. СускбсхЛтк ίη Ркаттасу. - Ккихсг Асабстс РиЬккксгк, Όο^^Εί, !кс №111сгктбч 1994.

34. Иската К., Шгауата Е., 1пс Т. Аρρ1^саί^οп οΓ сускбсхП'тк ίη ркагтассикса1 ρ^сρа^аί^οпк. - Эгид Тагдс!сб Пс1Ксгу, 3, р. 411-456, 1994.

35. А1Ьсгк Ε., Ми11сг Β.ν. СускбсхИ'т бспуакуск ίη ркагтассикск. - Сг111са1 Ксу1с\\'к ίη ТксгарсиЛс Огид Сатсг Зук!стк, 12, р. 311-337, 1995.

36. ΕοΓίδδοη Т. ЕГГссй οΓ сускбсхИ'тк οη 111с скст1са1 ЧаЬИку οΓ бгидк ίη -ди^ик 8ο1ιιΙίοη4 - Эгид δί-Μΐίγ, 1, р. 22-33, 1995.

37. ΕοΓίδδοη Т., Вгс\\'Чсг Μ.Ε. Ркагтассикса1 арркса1юпк οΓ сускбсхИ'тк. 1. Эгид 8ο1υΠ1ίζηΙίοη апб 4-Μ1ίζ-ίίοπ. - Ιοηγπ-1 οΓ Ркагтасси11са1 Заспсск, 85, р. 1017-1025, 1996.

38. Ка]с\\'кк1 В.А., З!с11а УД. Ркагтассикса1 аррШа^^ οΓ сускбсхП'тк. 2. Ιη νίνο бгид бскусгу. Ιουτπ-1 οΓ Ркагтассикса1 Зс1спсск, 85, р. 1142-1168, 1996.

39. 1пс Т., Иската К. Ркагтассикса1 аррШа^^ οΓ сускбсхП'тк. - III. Τοχ^сο1οд^саί ккиск апб каГс1у суакиИюп. - Ιοηγπ-1 οΓ Ркагтасси11са1 8с1спссч 86, р. 147-162, 1997.

40. З!с11а УД., Ка]с\\'кк1 В.А. СускбсхИ'тк: 1Нс1г Ги!игс ίη бгид Γοπι·ιιι1-1ίοη. - Ркагтассикса1 Всксагск,

14, р. 556-567, 1997.

41. Люп-тэгом Ό.Θ. Сус1οбсχί^^πκ - спаЫтд схс1р1сп1к: 1Нс1г ргскси! апб Ги1игс икс ίη Ркагтассиксак. Сгк1са1 Всх1с\\ъ ίη Тксгарси11с Эгид Сатсг ЗуЧстк, 14, р. 1-104, 1997.

42. З!с11а УД., В-ο У.М., Ζαηηου Е.А., Ζί- У. Мсскашктк οΓ бгид гс1сакс Ггот сускбсхП'т ^тр^хск. - Абхапссб Эгид Оскусгу Всхю^к, 36, р. 3-16, 1999.

43. δζαι^ Ь., 8ζοί11ί ί. Н1дк1у ^иШс сускбсхИ'т бспу-куск: сксткку, ргорсгЛск, апб !гсибк ш бсхс1ορтспί. - Абхапссб Эгид Оскхсгу В^стек, 36, р. 17-28, 1999.

44. Μοκкс^ О.Ь., Т^тртои Ό.Θ. Сοтρ1сχаί^οп апб сускбсхЛтк. - Епсускрсбха οΓ РкагтассиЛса1 ^ск^^ду, 2^пб сбЛюи, ί. 8\\'аг11пск апб ЕС. Вοу1ап, сб^ίο^κ, р. 531-538, Магсс1 Эскксг, 1пс., №\ν ΥογΕ 2002.

45. δ^Γ-η^οη Ε., ΕοΓίκκκοη Т. СускбсхП'тк ίη сус бгор - Ιοηγπ-1 οΓ кюккюп РЬспοтспа апб МасгосусНс Сксткку, 44, р. 23-27, 2003.

46. Р-ο У.М., З!с11а УД. \ν1κη сап сускбсхП'тк Ьс сοпыбс^сб Γογ 8ο1ιιΝ1ίζαΙίοη ри^кск? - Ιοηγπ-1 οΓ РкагтассиЛса1 8с1спсск, 92, р. 927-932, 2003.

47. Ска11а В., Аки)а А., А11 к, Ккаг В.К. СускбсхЛтк ίη бгид бскусгу: Ап ирба1сб гсу1с\у. - ААР8 Ркагт. 8с1 Тсск., 6, Ε329-Ε357, 2005.

48. З!с11а УД., Нс О. Сус^сх^^. - Τοχ^сο1οд^саί Ра^^ду, 2008; 36; 30. Аха11аЬ1с οη-кис: кίίρ://ίρχ.кадсρиЬ.сοт/сд^/сοпίспί/аЬкί^асί/36/1/30 (а! 29.09.2010).

49. νθ 2004/041284 А1 ’ТпсЫкюп ^шркх οΓ апЛ4иЬсгси1аг гГатрют νί(1 Ьсίа-сус1οбсχί^^п ογ 2Ьубгохургору1 Ьсίа-сус1οбсχί^^п апб а ргасскк Γογ ргобистд !кс катс, заявитель ΕΟυΝΕΙΕ ОЕ δΟΙΕΝΠΕΙΟ АЛБ ИкТОиЗТРбАЕ ΠΕδΕ/ΆΡΟ 1 [ΙΝ], авторы изобретения РАО, Каки1араб, Вата [ΙΝ], ВИА^МАта, №пбип [ΙΝ], ΥΛ^ΛУ. Дики [ΙΝ] и КР^НкА^ЕМ, №с1ат, 8Л1акккт1 [ΙΝ]; опубликовано 21.05.2004.

50. Ра!11 Ι.8., Зигскк δ. Ркук^сοскст^са1 ска^асίс^^ζаί^οп, ίη νίίτο гс1сакс апб рсгтс-ίίοπ Чибкк οΓ гскри·аЬ1с ^^Γатρ^с^п-сус1οбсχ1^^п тс1икюп ^тр^хск. - Ιι^ί-η Ιοηγπ-1 οΓ Ркагтассикса1 8с1спсск, 2009, Νον-Эсс; 71 (6): р.638-643. Аνа^1аЬ1с οπ-кис: киρ://\ν\ν\ν.ηсЬ^.η1т.тк.дον/ρтс/а^ι^с1ск/РΜС2846468/?ιοο1=ρиЬтсб (а! 29.09.2010).

51. Ьсгоу-ксска! Е., ^иск^сте Ό., Апбгсих Д-Р., Ртчсих Е., Оисксис Ό. Εν-1ιι-1ίοη οΓ !кс суЮФх-

1ску οΓ сускбсхИ'тк апб куб^οχуρ^ορу1аίсб бспуакуск. - ίοηΓπα1 οΓ Ркагтассибса1к, 101, р. 97103, 1994.

52. 8сЬбпГс1бсг и., Рабск^ск А., Ε^ικι· Р., Н1р1сг и.С. Сус1οбсχί^^п-^пбиссб аρορ-ίοк^к ίπ Ьитап кс^аί^пοсуίск 1к сакракс-8 бсрспбсп! апб -с^тр-шсб Ьу т^ίοсЬοпб^^аί суίο-ск^οтс с гс1сакс. Εχρ. ПсгтаЮк,

15, р. 883-890, 2006.

53. Мск!а 8.К., Вкакт К.К., Мск!а Ν, Окат δ. Вскагюг οΓ пГатркт ίπ νίΐΒ Ьс!а- сус1οбсχί^^п ίπ а^исοиκ тсб1а: а кρссί^οксορ^с апб сοпбисίοтсί^^с к!ибу. - Εο11οι6 апб Рο1утс^ Зс1спсс (2005) 283: 532-538.

54. Рапбсу В., Ζ-Ιιοογ А., Зкагта δ., Кки11сг О.К. Nапορа^ι^с1с спсарки1а!сб ап-ШиЬсгси1аг бгидк ак а ροίспί^а1 οτ-1 бгид бскусгу кук!ст адатк! тигтс ШЬсгсиВык. - ΤиЬс^си1οк^к (ЕбтЬигдк З^б-пб) 2003;

- 16 016410

83(6): 373-378.

55. Р1п!о-А1рйапбагу Н., Апбгетоп! А., Соиугсиг Р. Тагде1еб бейуегу οί апйЫобск икшд йрокотек апб папоратйс1ек: гекеагсй апб арр1юа!юпк. - 1п!етпа!юпа1 1оита1 оГ Ап!1тюгоЫа1 Адеп!к 2000 1ап; 13(3): 155168, Реу1е\\·.

56. КЕ 2337711 С1 Средство для лечения бактериальных инфекций, патентообладатель ООО Научно-Производственный Комплекс Наносистема, авторы изобретения Гельперина Светлана Эммануиловна [КЕ], Максименко Ольга Олеговна [Ки], Шипуло Елена Владимировна [КЕ], Ванчугова Людмила Витальевна [КП], опубликовано 10.11.2008 (бюллетень № 31).

57. ЕА 012121 В1 Фармацевтическая композиция для лечения туберкулеза и заболеваний, опосредованных Не11соЬас!ег ру1оп. на основе полимерных наночастиц, способ ее получения и способы лечения, патентообладатель ООО НИК Наносистема [КИ], авторы изобретения Гельперина Светлана Эммануиловна [КП], Максименко Ольга Олеговна [КЕ], Шипуло Елена Владимировна [КЕ], Ванчугова Людмила Витальевна [КИ], опубликовано 28.08.2009 (бюллетень ЕАПВ 4'2009).

58. ЕА 013569 В1 Фармацевтическая композиция рифабутина для лечения туберкулеза и заболеваний, опосредованных НЕМСОВАСТЕК. РУБОК1. Способ ее получения и способ лечения, патентообладатель ООО НПК Наносистема [КП], авторы изобретения Гельперина Светлана Эммануиловна [КИ], Максименко Ольга Олеговна [КЕ], Шипуло Елена Владимировна [КП], Ванчугова Людмила Витальевна [КП], Бабий Владимир Евстахиевич [КЕ], Игнатьев Алексей Владимирович [КЕ], опубликовано 30.06.2010 (бюллетень ЕАПВ 3'2010).

59. \УО 2008/129106 А2 Иапоратйс1ек сотрпкшд а сус1обех!гш апб а Ью1одка11у асйуе то1еси1е апб икек !йегеоР', заявители: 1Х'8Т1ТЕТО С1ЕХ'Т1Е1СО Υ ТЕСХ'ОЕОСИСО ИЕ ИАУАККА, 8.А [Е8]; 8АЬМАИ ИА8НАМ Н.А. [Е8]; 1КАСНЕ ОАККЕТА .ΙΕΆΝ МАХ'ЕЕЕ [Е8]; САМРАМЕКО М/ШТ1ХЕ/ ΜΙОиЕЬ АИОЕ [Е8], авторы изобретения: 8/\Ε\Ε\Ν ИА8НАМ Н.А. [Е8]; 1КАСНЕ ОАККЕТА ГОАИ МАХ'ЕЕЕ [Е8]; САМРАИЕКО М/ШТ1ХЕ/ МЮиЕЬ АХ'ОЕ [Е8], опубликовано 30.10.2008.

60. АгЬок Р., ^1т1й М., Агапдоа М.А., ОаЬот Е., 1гасйе ЕМ. СаШгех А.И. ак а пе\у ро1утег Гог Гйе ргератабоп оГ йдапб-папоратйс1е соп)пда1ек. - 1оитпа1 оГ СопГтойеб Ке1еаке, 2002, Ос! 30; 83(3): 321-30.

61. Вгек1о\у Ό.8. Вю1одюа11у асОсе куп(Ве(1с ро1утегк. - Риге апб АррНеб Сйет1к!гу, уо1. 46, радек 110-113, Регдатоп Ргекк, 1976.

62. Кеде1коп ^., Но11апб ЕЕ. ЕГГес! оГ ап апюше ро1уе1ес(го1у1е (ро1уе!йу1епе ки1Гопа!е) ш ра!1еп!к χνίΐΐι сапсег. С1шюа1 рйагтасо1оду оГ а тасгото1еси1е. - Сйшса1 Рйагтасо1оду апб Тйегареийск, 1962, Иоу-Эес; 3: 730-749.

63. Кеде1коп ^., т \Уа1ег-8о1иЫе Ро1утегк, Ро1утег 8с1епсе апб Тесйпо1оду. - уо1. 2 (ебйеб Ьу И.М. В1ка1ек), радек 161-177, Р1епит Ргекк, Ие\у Υο^к (1973).

64. Е1п1ег Ν.Β., еб. 1п1егГегопк апб 1п1егГегоп 1пбисегк. - Иойй-Но11апб, Атк!егбат, 1973, радек 324, 369, 384.

65. Переверзева Э.Р., Трещалин И.Д., Максименко О.О., Гельперина С.Э. Изменение токсических свойств рифабутина при применении его в коллоидной лекарственной форме. - 3-й съезд токсикологов России, 2-5 декабря 2008 г., Москва. Тезисы докладов. - Министерство здравоохранения и соц. развития Российской Федерации. - М., 2008, 556 с.

66. 8!о1п1к 8., Иипл 8.Е., Оатте!! М.С., Эау1ек М.С., СоотЬек А.О.А., Тау1ог И.С., йутд М.Р., Ршк1кк 8.С., Табгок Т.Е., Эа\зк 8.8. & 111ит Ь. 8игГасе тобШса!юп оГ ро1у(1асйбе-со-д1усойбе) папокрйегек Ьу ЬюбедгабаЬ1е ро1у(1ас!1бе)-ро1у(е!йу1епе д1усо1) со-ро1утегк. - Рйагтасеийса1 Кекеагсй, 11, 1994, радек 18001808.

67. МодЫт1 8.М., Нип!ег А.С., Миггау ЕС. Еопд-С1гси1а!шд апб Тагде!-8ресШс Иапоратйс1ек: Тйеогу !о РгасОсе. - Рйагтасо1. К.еу1е^к, 53: 283-318, 2001.

68. МодЫт1 8.М., Нип!ег А.С. Ро1охатегк апб ро1охаттек т папорагйс1е епдшеегшд апб ехрептепГа1 тебкте. - Т1Ь!есй (Ос!. 2000), уо1. 18, р. 412-420.

69. МодЫт1, 8.М. е! а1. Иоп-рйадосу!ю пр!аке оГ тГгауепоик1у т)ес1еб ткгокрйегек ш та! кр1ееп: шДиепсе оГ ратйс1е чхе апб йубторйШс соайпд. - Вюсйет. Вюрйук. Кек. Соттип., 1991, 177: 861-866.

70. Модй1т1, 8.М. е! а1. 8игГасе епдшеегеб папокрйегек \\йй епйапсеб бгатаде ш!о 1утрйайск апб ир!аке Ьу тасгорйадек оГ !йе гедюпа1 побек. - ЕЕВ8 Ьей., 1994, 344: 25-30.

71. Мопката, К. е! а1. Епйапсетеп! оГ 1йегареи!1с еГГес!к оГ гесотЬтап! т!ег1еикт-2 оп а 1гапкр1ап(аЬ1е га! йЬгокагсота Ьу !йе ике оГ а киЧашеб ге1еаке уеЫс1е, Р1игошс де1. - Сапсег, 1987, 47: 37-41.

72. Еи1!к, К.А., 1ойпкоп, Т.Р. 8иЧатеб-ге1еаке оГ игеаке Ггот а ро1охатег де1 та!пх. - 1. Рагеп!ег. 8с1. Тесйпо1., 1990, 44: 58-65.

73. Ка!акат, М. е! а1. Соп!го11еб ге1еаке оГ йитап дгоМй йогтопе т га!к Го11о\\'тд рагеп!ега1 абтшъ ЧгаОоп оГ ро1охатег де1к. - 1. Соп!го1. Ке1еаке, 1997, 49: 21-26.

Claims (46)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Фармацевтическая композиция для лечения микобактериозов и геликобактерной инфекции на основе диспергированных в фармацевтически приемлемом носителе наночастиц циклодекстрина разме

   - 17 016410 ром от 100 до 1000 нм, свободных от полимера и содержащих терапевтически эффективное количество диспергированного в них рифабутина, а также фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества.
2. 2. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что она представляет собой лиофилизат, а при диспергировании в фармацевтически приемлемом носителе - суспензию для внутривенного и/или внутримышечного введения в терапевтически эффективном количестве нуждающемуся в этом пациенту.
3. 3. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что она представляет собой порошок для изготовления твердых пероральных лекарственных форм.
4. 4. Фармацевтическая композиция по п.3, отличающаяся тем, что твердые пероральные лекарственные формы представляют собой таблетки, капсулы или драже.
5. 5. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-4, отличающаяся тем, что поверхность указанных наночастиц дополнительно модифицирована одним или несколькими поверхностно-активными веществами, выбранными из группы, включающей полоксамер-101, полоксамер-105, полоксамер-108, полоксамер-122, полоксамер-123, полоксамер-124, полоксамер-181, полоксамер-182, полоксамер-183, полоксамер-184, полоксамер-185, полоксамер-188, полоксамер-212, полоксамер-215, полоксамер-217, полоксамер-231, полоксамер-238, полоксамер-282, полоксамер-288, полоксамер-331, полоксамер-401, полоксамер-407, сорбитан моностеарат (8ΡΆΝ 60), сорбитан тристеарат (8ΡΆΝ 65), сорбитан монолаурат (8ΡΆΝ 20), сорбитан моноолеат (8ΡΆΝ 80), сорбитан монопальмитат (8ΡΆΝ 40), сорбитан триолеат (8ΡΆΝ 85) или их смеси.
6. 6. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что циклодекстрин или его фармацев- тически приемлемое(ые) производное(ые) выбирают из α-циклодекстрина, 2-гидроксипропил-βциклодекстрина, сульфобутил-β-циклодекстрина, 6-монодезокси-6-моноамина-β-циклодекстрина, γциклодекстрина, 2-гидроксипропил^-циклодекстрина или их смеси.
7. 7. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что количественное соотношение (рифабутин :циклодекстрин) составляет от 1:1 до 1:5.
8. 8. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что дополнительно содержит криопротектор, выбранный из 1-50% глюкозы, 1-50% лактозы, 1-50% маннита или 1-50% трегалозы.
9. 9. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что фармацевтически приемлемый носитель представляет собой 0,9% водный раствор хлорида натрия, или 0,01-0,1% водный раствор полисорбата-80, или 0,05-5% водный раствор полоксамера-188, или 0,05-5% водный раствор полоксамера407.
10. 10. Фармацевтическая композиция по п.9, отличающаяся тем, что фармацевтически приемлемый носитель дополнительно содержит аскорбиновую кислоту.
11. 11. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-10, отличающаяся тем, что микобактериоз обусловлен одним или несколькими возбудителями, выбранными из МусоЬас1егшт 1иЬегси1о515, или МусоЬас!егшт Ьον^5, или МусоЬас1егшт капвави, или МусоЬас1егшт всго£и1асеит, или МусоЬас1егшт аν^ит-^ηΐ^асе11и1а^е сотр1ех, или МусоЬас1егшт 1ергае, или МусоЬас1епит рага1иЬегси1о515.
12. 12. Фармацевтическая композиция по п.11, отличающаяся тем, что микобактериоз представляет собой ВИЧ/СПИД-ассоциированный микобактериоз.
13. 13. Фармацевтическая композиция по п.12, отличающаяся тем, что ВИЧ/СПИД-ассоциированный микобактериоз обусловлен МусоЬас1епит атц1т-т1гасе11и1аге сотр1ех.
14. 14. Фармацевтическая композиция по п.12, отличающаяся тем, что ВИЧ/СПИД-ассоциированный микобактериоз обусловлен МусоЬас1егшт 1иЬегси1о515.
15. 15. Способ получения фармацевтической композиции по любому из пп.1-14, отличающийся тем, что:

    а) навеску циклодекстрина или его фармацевтически приемлемого(ых) производного(ых) растворяют в растворителе при интенсивном перемешивании;

    б) добавляют к полученному раствору навеску рифабутина;

    в) перемешивают;

    г) гомогенизируют;

    д) добавляют полученную дисперсию к водному раствору поверхностно-активного вещества при интенсивном перемешивании;

    е) гомогенизируют;

    ж) удаляют растворитель;

    з) центрифугируют;

    и) высушивают.
16. 16. Способ по п.15, отличающийся тем, что на этапе в) дополнительно осуществляют нагревание реакционной смеси, и/или обработку реакционной смеси ультразвуком, и/или обработку реакционной смеси микроволновым излучением СВЧ.
17. 17. Способ по п.15, отличающийся тем, что в качестве циклодекстрина или его фармацевтически приемлемого (приемлемых) производного (производных) используют α-циклодекстрин, β

    - 18 016410 циклодекстрин, 2-гидроксипропил-в-циклодекстрин, сульфобутил-в-циклодекстрин, 6-монодезокси-6моноамина-в-циклодекстрин, γ-циклодекстрин, 2-гидроксипропил^-циклодекстрин или их смеси.
18. 18. Способ по п.15, отличающийся тем, что в качестве растворителя используют ацетон, или этанол, или диметилсульфоксид, или Ν-метилпирролидон.
19. 19. Способ по п.15, отличающийся тем, что растворитель на этапе ж) удаляют при помощи отгонки на роторном испарителе (при пониженном давлении).
20. 20. Способ по п.15, отличающийся тем, что гомогенизацию осуществляют при помощи обработки ультразвуком или при помощи гомогенизатора высокого давления.
21. 21. Способ по п.15, отличающийся тем, что после центрифугирования (этап з)) добавляют криопротектор.
22. 22. Способ по п.21, отличающийся тем, что криопротектор выбирают из 1-50% глюкозы, 1-50% лактозы, 1-50% маннита или 1-50% трегалозы.
23. 23. Способ по п.15, отличающийся тем, что водный раствор поверхностно-активного вещества имеет концентрацию 0,05-5%.
24. 24. Способ по п.15, отличающийся тем, что поверхностно-активное вещество выбрано из группы, включающей полоксамер-101, полоксамер-105, полоксамер-108, полоксамер-122, полоксамер-123, полоксамер-124, полоксамер-181, полоксамер-182, полоксамер-183, полоксамер-184, полоксамер-185, полоксамер-188, полоксамер-212, полоксамер-215, полоксамер-217, полоксамер-231, полоксамер-238, полоксамер-282, полоксамер-288, полоксамер-331, полоксамер-401, полоксамер-407, сорбитан моностеарат (δΡΑΝ 60), сорбитан тристеарат (δΡΑΝ 65), сорбитан монолаурат (δΡΑΝ 20), сорбитан моноолеат (δΡΑΝ 80), сорбитан монопальмитат (δΡΑΝ 40), сорбитан триолеат (δΡΑΝ 85) или их смеси.
25. 25. Способ по п.15, отличающийся тем, что центрифугирование осуществляют при скорости 10005000 об/мин.
26. 26. Способ по п.15, отличающийся тем, что высушивание на этапе и) осуществляют при помощи лиофильного или распылительного высушивания.
27. 27. Способ по п.15, отличающийся тем, что полученный на этапе и) продукт смешивают с наполнителями и другими вспомогательными веществами и используют полученную смесь для изготовления твердой пероральной лекарственной формы.
28. 28. Способ лечения микобактериоза, отличающийся тем, что внутривенно и/или внутримышечно вводят терапевтически эффективное количество фармацевтической композиции по любому из пп.1-2, 614 в виде суспензии в фармацевтически приемлемом носителе нуждающемуся в этом пациенту.
29. 29. Способ по п.28, отличающийся тем, что фармацевтически приемлемый носитель представляет собой 0,9% водный раствор хлорида натрия, или 0,01-0,1% водный раствор полисорбата-80, или 0,05-5% водный раствор полоксамера-188, или 0,05-5% водный раствор полоксамера-407.
30. 30. Способ по п.29, отличающийся тем, что фармацевтически приемлемый носитель дополнительно содержит аскорбиновую кислоту.
31. 31. Способ по п.28, отличающийся тем, что микобактериоз обусловлен одним или несколькими возбудителями, выбранными из МуеоЬаеЮпит 1иЬегси1о818, или МуеоЬаеЮпит Βονίδ, или МуеоЬаеЮпит капзази, или МуеоЬаеЮпит зегоШаееит, или МуеоЬаеЮпит ау1ит-1п1гаее11и1аге еотр1ех, или МуеоЬаеЮпит 1ергае, или МуеоЬаеЮпит рага1иЬегеи1о818.
32. 32. Способ по п.28, отличающийся тем, что микобактериоз представляет собой ВИЧ/СПИДассоциированный микобактериоз.
33. 33. Способ по п.32, отличающийся тем, что ВИЧ/СПИД-ассоциированный микобактериоз обусловлен МуеоЬаеЮпит 1иЬегеи1о818.
34. 34. Способ по п.32, отличающийся тем, что ВИЧ/СПИД-ассоциированный микобактериоз обусловлен МуеоЬаеЮгцпп ау1ит-1п1гаее11и1аге еотр1ех.
35. 35. Способ лечения микобактериоза, отличающийся тем, что перорально вводят терапевтически эффективное количество фармацевтической композиции по любому из пп.1, 3-14 в виде порошка или в виде твердой пероральной лекарственной формы нуждающемуся в этом пациенту.
36. 36. Способ по п.35, отличающийся тем, что микобактериоз обусловлен одним или несколькими возбудителями, выбранными из МуеоЬаеЮпит 1иЪегеи1о818, или МуеоЬаеЮпит Ьо\'15. или МуеоЬаеЮпит капзази, или МуеоЬаеЮпит зегоШаееит, или МуеоЬаеЮпит аушт-т1гаее11и1аге еотр1ех, или МуеоЬаеЮпит 1ергае, или МуеоЬаеЮпит рагаШЬегеЫовю.
37. 37. Способ по любому из пп.35, 36, отличающийся тем, что микобактериоз представляет собой ВИЧ/СПИД-ассоциированный микобактериоз.
38. 38. Способ по п.37, отличающийся тем, что ВИЧ/СПИД-ассоциированный микобактериоз обусловлен МуеоЬаеЮпит 1иЬегеи1о518.
39. 39. Способ по п.37, отличающийся тем, что ВИЧ/СПИД-ассоциированный микобактериоз обусловлен МуеоЬае1ег1ит аушт-т1гаее11и1аге еотр1ех.
40. 40. Способ по п.35, отличающийся тем, что твердые пероральные лекарственные формы представляют собой таблетки, капсулы или драже.

    - 19 016410
41. 41. Способ лечения геликобактерной инфекции, отличающийся тем, что внутривенно и/или внутримышечно вводят терапевтически эффективное количество фармацевтической композиции по любому из пп.1-3, 6-14 в виде суспензии в фармацевтически приемлемом носителе нуждающемуся в этом пациенту.
42. 42. Способ по п.41, отличающийся тем, что фармацевтически приемлемый носитель представляет собой 0,9% водный раствор хлорида натрия, или 0,01-0,1% водный раствор полисорбата-80, или 0,05-5% водный раствор полоксамера-188, или 0,05-5% водный раствор полоксамера-407.
43. 43. Способ по п.42, отличающийся тем, что фармацевтически приемлемый носитель дополнительно содержит аскорбиновую кислоту.
44. 44. Способ лечения геликобактерной инфекции, отличающийся тем, что перорально вводят терапевтически эффективное количество фармацевтической композиции по любому из пп.1, 3-14 в виде порошка или в виде твердой пероральной лекарственной формы нуждающемуся в этом пациенту.
45. 45. Способ по п.44, отличающийся тем, что твердые пероральные лекарственные формы представляют собой таблетки, капсулы или драже.
46. 46. Способ по любому из пп.44, 45, отличающийся тем, что дополнительно вводят пациенту терапевтически эффективное количество одного или нескольких лекарственных средств, выбранных из амоксициллина, пантопразола, эзомепразола, рабепразола, омепразола, метронидазола, кларитромицина, висмутцитрата или тетрациклина.