EA014349B1 - Castasterone bovine serum albumin conjugate as immunogen - Google Patents
Castasterone bovine serum albumin conjugate as immunogen Download PDFInfo
- Publication number
- EA014349B1 EA014349B1 EA200701628A EA200701628A EA014349B1 EA 014349 B1 EA014349 B1 EA 014349B1 EA 200701628 A EA200701628 A EA 200701628A EA 200701628 A EA200701628 A EA 200701628A EA 014349 B1 EA014349 B1 EA 014349B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- castasterone
- conjugate
- serum albumin
- bovine serum
- immunogen
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области иммунохимического анализа фитогормонов брассиностероидов, а именно к конъюгату кастастерона с бычьим сывороточным альбумином формулы (I)The invention relates to the field of immunochemical analysis of phytohormones of brassinosteroids, namely, a conjugate of castasterone with bovine serum albumin of the formula (I)
ф, где БСА - бычий сывороточный альбумин, который может быть использован в качестве белканосителя для получения антител, специфичных к 248-метилбрассиностероидам.f, where BSA is bovine serum albumin that can be used as a protein carrier to produce antibodies specific for 248-methylbrassinosteroids.
Брассиностероиды - природные низкомолекулярные биорегуляторы, которые являются гормонами растений [1]. Они присутствуют во всех растительных объектах и обладают ростмодулирующим и адаптогенным действием. Содержание брассиностероидов в растениях очень низко - менее 10-5-10-9%. В очень малых концентрациях они проявляют и свое биологическое действие. Установлено, например, что при обработке различных сельскохозяйственных культур в дозах 5-20 мг на гектар посевов наблюдается заметный ростстимулирующий и адаптогенный эффект, приводящий к увеличению урожая, повышению качества продукции и устойчивости растений к неблагоприятным условиям и болезням [2-7]. Эти свойства брассиностероидов делают их привлекательными в качестве основы для агропрепаратов. Одним из наиболее активных брассиностероидов является брассинолид, что делает актуальным разработку методов его анализа, а также анализа его химического и биохимического предшественника кастастерона (далее 248-метилбрассиностероиды). В качестве такого метода нами предложен метод иммуноферментного определения 248-метилбрассиностероидов, который, прежде всего, требует наличия соответствующего иммуногена. Брассиностероиды сами по себе не обладают иммуногенностью, поэтому для получения иммунного ответа у животных они могут быть использованы для иммунизации в виде конъюгатов с белками, которые (конъюгаты), в свою очередь, могут быть получены через соответствующие гаптены.Brassinosteroids are natural low molecular weight bioregulators that are plant hormones [1]. They are present in all plant objects and have growth modulating and adaptogenic effects. The content of brassinosteroids in plants is very low - less than 10 -5 -10 -9 %. In very small concentrations, they also exhibit their biological effect. It has been established, for example, that when processing various crops in doses of 5-20 mg per hectare of crops, a noticeable growth-stimulating and adaptogenic effect is observed, leading to an increase in yield, an increase in the quality of products and plant resistance to adverse conditions and diseases [2-7]. These properties of brassinosteroids make them attractive as a basis for agricultural products. One of the most active brassinosteroids is brassinolide, which makes it relevant to develop methods for its analysis, as well as analysis of its chemical and biochemical precursor castasterone (hereinafter 248-methylbrassinosteroids). As such a method, we proposed an enzyme immunoassay for the determination of 248-methylbrassinosteroids, which, first of all, requires the presence of an appropriate immunogen. Brassinosteroids themselves do not possess immunogenicity, therefore, to obtain an immune response in animals, they can be used for immunization in the form of conjugates with proteins, which (conjugates), in turn, can be obtained through the corresponding haptens.
Известен конъюгат брассинолида с БСА формулы (II)Known conjugate of brassinolide with BSA of the formula (II)
в котором связь брассиностероида с белком осуществляется через 3-гидроксигруппу [8]. К недостаткам данного конъюгата следует отнести, прежде всего, связывание (маскировку) 3-гидроксигруппы, которая относится к группам, ответственным за биологическую активность брассиностероидов, что может сказаться отрицательно на специфичности вырабатываемых животными антител. Кроме того, наличие в молекуле лабильной сложноэфирной связи между молекулой стероида и остатком янтарной кислоты делает этот конъюгат нестабильным [9].in which the connection of the brassinosteroid with the protein is via a 3-hydroxy group [8]. The disadvantages of this conjugate include, first of all, the binding (masking) of the 3-hydroxy group, which refers to the groups responsible for the biological activity of brassinosteroids, which may adversely affect the specificity of antibodies produced by animals. In addition, the presence of a labile ester bond in the molecule between the steroid molecule and the succinic acid residue makes this conjugate unstable [9].
Наиболее близким к заявляемому является конъюгат кастастерона с БСА формулы (III)Closest to the claimed is the conjugate of castasterone with BSA of the formula (III)
который предложен авторами для радиоиммуноанализа брассиностероидов [10]. Конъюгат получен на основе 248-метилбрассиностероида - кастастерона, но не позволил получить антитела, специфичные к этой группе брассиностероидов - показатели перекрестных реакций с изученными авторами брассиностероидами составляли от 20 до 50%.which was proposed by the authors for radioimmunoassay of brassinosteroids [10]. The conjugate was obtained on the basis of 248-methyl-brassinosteroid - castasterone, but did not allow to obtain antibodies specific to this group of brassinosteroids - the rates of cross-reactions with the brassinosteroids studied by the authors ranged from 20 to 50%.
- 1 014349- 1 014349
Целью изобретения является конъюгат кастастерона и бычьего сывороточного альбумина, позволяющий получить высокоспецифичные антитела к 248-метилбрассиностероидам.The aim of the invention is the conjugate of castasterone and bovine serum albumin, which allows to obtain highly specific antibodies to 248-methylbrassinosteroids.
Поставленная цель достигается заявляемым соединением (I), которое получают взаимодействием Ν-оксисукцинимидного эфира 6-(6-((22К,23К,248)-2а,3а,22,23-тетрагидрокси-24-метил-5а-холест-6илиденаминоокси)ацетамидо)гексановой кислоты (гаптена) с бычьим сывороточным альбумином в водно-диоксановом растворе, очисткой образовавшегося конъюгата путем диализа и лиофилизацией конъюгата.The goal is achieved by the claimed compound (I), which is obtained by the interaction of the Ν-oxysuccinimide ester 6- (6 - ((22K, 23K, 248) -2a, 3a, 22,23-tetrahydroxy-24-methyl-5a-cholest-6ylidenaminooxy) acetamido) hexanoic acid (hapten) with bovine serum albumin in water-dioxane solution, purification of the resulting conjugate by dialysis and lyophilization of the conjugate.
Сущность изобретения подтверждается примерами конкретного выполнения.The invention is confirmed by examples of specific performance.
Пример 1.Example 1
Растворяют 50 мг (0,08 ммоль) 6-(6-((22К,23К,248)-2а,3а,22,23-тетрагидрокси-24-метил-5а-холест6-илиденаминоокси)ацетамидо)гексановой кислоты (гаптена) и 12 мг (0,1 ммоль) Ν-оксисукцинимида в 5 мл безводного диоксана, охлаждают до 5°С и при перемешивании добавляют раствор 17,4 мг (0,084 ммоль) дициклогексилкарбодиимида в 3 мл безводного диоксана. Реакционную смесь перемешивают 30 мин при 5°С и 17 ч при комнатной температуре. Выпавшую в осадок дициклогексилкарбомочевину отфильтровывают, фильтрат упаривают. Остаток растворяют в этилацетате, промывают водой, сушат безводным №ь8О4. упаривают. Без дополнительной очистки растворяют 35 мг (0,055 ммоль) Ν-оксисукцинимидного эфира в 10 мл безводного диоксана и добавляют 52 мг (0,86 мкмоль) БСА в 10 мл смеси 9 мл дистиллированной воды и 1 мл насыщенного раствора гидрокарбоната натрия. Перемешивают реакционную смесь в течение 20 ч при комнатной температуре.50 mg (0.08 mmol) of 6- (6 - ((22K, 23K, 248) -2a, 3a, 22,23-tetrahydroxy-24-methyl-5a-cholest6-ylideneaminooxy) acetamido) hexanoic acid (hapten) are dissolved and 12 mg (0.1 mmol) of Ν-oxisuccinimide in 5 ml of anhydrous dioxane, cooled to 5 ° C and a solution of 17.4 mg (0.084 mmol) of dicyclohexylcarbodiimide in 3 ml of anhydrous dioxane was added with stirring. The reaction mixture was stirred for 30 minutes at 5 ° C and 17 hours at room temperature. The precipitated dicyclohexylcarbourea is filtered off and the filtrate is evaporated. The residue was dissolved in ethyl acetate, washed with water, dried with anhydrous Na 8 O 4 . evaporated. Without further purification, 35 mg (0.055 mmol) of Ν-oxysuccinimide ester is dissolved in 10 ml of anhydrous dioxane and 52 mg (0.86 μmol) of BSA are added in 10 ml of a mixture of 9 ml of distilled water and 1 ml of a saturated solution of sodium bicarbonate. Stir the reaction mixture for 20 hours at room temperature.
Образовавшуюся массу подвергают диализу при 20°С против дистиллированной воды в течение 36 ч, затем против 1%-ной суспензии активированного угля в воде в течение 20 ч, лиофилизуют и замораживают при температуре -20°С. Содержание гаптена в конъюгате, определенное спектрофотометрически, составляет 24 моль гаптена на 1 моль белка.The resulting mass is dialyzed at 20 ° C against distilled water for 36 hours, then against a 1% suspension of activated carbon in water for 20 hours, lyophilized and frozen at -20 ° C. The hapten content in the conjugate, determined spectrophotometrically, is 24 mol of hapten per 1 mol of protein.
Заявляемый конъюгат получают с количественным выходом и высокой степенью посадки гаптена, что обусловлено стабильностью соединения как в процессе синтеза, так очистки и выделения.The inventive conjugate is obtained with a quantitative yield and a high degree of planting of hapten, which is due to the stability of the compound during synthesis, purification and isolation.
Синтезированный конъюгат используют для получения антител, специфичных к 248-метилбрассиностероидам (брассинолид, кастастерон), что подтверждается примером конкретного выполнения.The synthesized conjugate is used to produce antibodies specific for 248-methylbrassinosteroids (brassinolide, castasterone), which is confirmed by an example of a specific implementation.
Пример 2.Example 2
Группу из десяти кроликов иммунизируют конъюгатом кастастерон-БСА с плотностью посадки 24 молекул стероида на 1 молекулу белка. Каждому кролику вводят подкожно в 10-15 точек спины по 1 мг конъюгата, предварительно растворенного в 0,5 мл фосфатно-буферного 0,1 М раствора поваренной соли (рН 7,4) и эмульгированного в равном объеме полного адъюванта Фрейнда. Интервалы между инъекциями составляют 3 недели. Иммунизацию продолжают в течение 6 месяцев, осуществляя периодический отбор проб крови из ушной вены животных. Полученные образцы сыворотки тестируют на наличие связывающей способности в отношении кастастерона и определяют их титры и значения констант ассоциации (Ка). Титр определяют как рабочее разведение антисыворотки, обеспечивающее максимальную чувствительность тест-системы при таком связывании конъюгата, которое позволяет построить калибровочный график в диапазоне 2,5-0,2 ОЕ.A group of ten rabbits is immunized with a castasterone-BSA conjugate with a density of 24 steroid molecules per 1 protein molecule. Each rabbit is injected subcutaneously at 10-15 points of the back with 1 mg of conjugate, previously dissolved in 0.5 ml of phosphate-buffered 0.1 M sodium chloride solution (pH 7.4) and emulsified in an equal volume of Freund's complete adjuvant. The intervals between injections are 3 weeks. Immunization is continued for 6 months, performing periodic sampling of blood from the ear vein of animals. The obtained serum samples are tested for the presence of binding ability against castasterone and their titers and association constant values (K a ) are determined. The titer is defined as the working dilution of the antiserum, providing maximum sensitivity of the test system with such conjugate binding, which allows you to build a calibration graph in the range of 2.5-0.2 OE.
Таблица 1Table 1
Характеристики антисывороток, полученных при иммунизации животных конъюгатом кастастерона с БСА (I)Characteristics of antisera obtained by immunizing animals with castasterone conjugate with BSA (I)
Определение оптимального титра антисыворотки для применения в ИФА показало, что ее разбавление в 100000 (Αι) или 10000 (А2) раз позволяет обеспечить приемлемые условия определения как кастастерона, так и брассинолида, проявивших, как и ожидалось, сравнимые параметры связывания с антителами.Determination of the optimal titer of antiserum for use in ELISA showed that its dilution of 100,000 (Αι) or 10,000 (A 2 ) times allows us to provide acceptable conditions for the determination of both castasterone and brassinolide, which, as expected, showed comparable binding parameters with antibodies.
Таким образом, тест-система обладает чувствительностью, достаточной для обнаружения кастастерона и брассинолида в концентрации 0,2-0,3 нмоль/л или 5-7 пг БС в 50 мкл образца.Thus, the test system has a sensitivity sufficient to detect castasterone and brassinolide at a concentration of 0.2-0.3 nmol / L or 5-7 pg BS in 50 μl of the sample.
- 2 014349- 2 014349
СпецифичностьSpecificity
Перекрестная реакция антител к кастастерону с брассиностероидами и стероидами других классов приведена в табл. 2.The cross-reaction of antibodies to castasterone with brassinosteroids and steroids of other classes is given in table. 2.
Таблица 2table 2
Кросс-реактивность антисыворотки А1 с различными стероидами, параметры связывания с антителамиCross-reactivity of antiserum A 1 with various steroids, antibody binding parameters
Заявляемый конъюгат получается с высоким выходом, обладает стабильностью, высокой степенью посадки гаптена на белок, обеспечивает необходимую иммуногенность и позволяет получать антитела, специфичные к брассинолиду и кастастерону.The inventive conjugate is obtained in high yield, has stability, a high degree of hapten landing on a protein, provides the necessary immunogenicity and allows you to get antibodies specific to brassinolide and castasterone.
ЛитератураLiterature
1. Хрипач В. А., Лахвич Ф.А., Жабинский В.Н. Брассиностероиды. - Минск: Навука ί тэхшка, 1993. 288 с.1. Khripach V.A., Lakhvich F.A., Zhabinsky V.N. Brassinosteroids. - Minsk: Navuka tekhshka, 1993.288 s.
2. Патент РБ № 2806. Средство для снижения накопления радионуклидов растениями и способ его применения/Хрипач В.А., Жабинский В.Н., Литвиновская Р.П., Завадская М.И., Деева В.П., Веденеев А.Н.// Оф. Бюл. Белгос-пат. - 2000. - № 2 (26). - С. 159.2. RB patent No. 2806. Means for reducing the accumulation of radionuclides by plants and the method of its application / Khripach V.A., Zhabinsky V.N., Litvinovskaya R.P., Zavadskaya M.I., Deeva V.P., Vedeneev A .N. // Of. Bull. Belgos Pat. - 2000. - No. 2 (26). - S. 159.
3. Патент РБ № 3488.1996. Способ повышения питательной ценности картофеля/Хрипач В.А., Жабинский В.Н., Литвиновская Р.П., Завадская М.И., Савельева Е.А., Карась И.И., Вакуленко В.В.// Оф. Бюл. Белгос-пат. - 2000. - № 3 (27). - С. 74.3. Patent of the Republic of Belarus No. 3488.1996. A way to increase the nutritional value of potatoes / Khripach V.A., Zhabinsky V.N., Litvinovskaya R.P., Zavadskaya M.I., Savelyeva E.A., Karas I.I., Vakulenko V.V.//Of . Bull. Belgos Pat. - 2000. - No. 3 (27). - S. 74.
4. Патент РБ № 3400. Способ защиты картофеля от фитофтороза/Хрипач В.А., Жабинский В.Н., Литвиновская Р.П., Завадская М.И., Савельева Е.А., Карась И.И., Кильчевский А.В., Титова С.Н.// Оф. Бюл. Бел-гос-пат. - 2000. - № 2(25). - С. 75.4. RB patent No. 3400. A method of protecting potatoes from late blight / Khripach V.A., Zhabinsky V.N., Litvinovskaya R.P., Zavadskaya M.I., Savelyeva E.A., Karas I.I., Kilchevsky A.V., Titova S.N.//Of. Bull. Bel-state pat. - 2000. - No. 2 (25). - S. 75.
5. Патент РБ 5168. Способ защиты ячменя от листовых болезней/Хрипач В. А., Литвиновская Р.П., Жабинский В.Н., Завадская М.И., Волынец А.П., Прохорчик Р.А., Пшеничная Л.А., Манжелесова Н.Е., Морозик Г.В.// Оф. Бюл. НЦИС РБ. - 2003. - 2(37). - С. 95.5. Patent RB 5168. A method of protecting barley from leaf diseases / Khripach V. A., Litvinovskaya R. P., Zhabinsky V. N., Zavadskaya M. I., Volynets A. P., Prokhorchik R. A., Pshenichnaya L.A., Manzhelesova N.E., Morozik G.V.//Of. Bull. NCIS RB. - 2003 .-- 2 (37). - S. 95.
6. Патент РБ 5212. Способ повышения урожайности льна и улучшения качества льноволокна/Воскресенская Л.Г., Хрипач В.А., Жабинский В.Н., Завадская М.И., Литвиновская Р.П.// Оф. Бюл. НЦИС РБ. - 2003. - 2(37). - С. 93.6. Patent RB 5212. A way to increase the yield of flax and improve the quality of flax fiber / Voskresenskaya L.G., Khripach V.A., Zhabinsky V.N., Zavadskaya M.I., Litvinovskaya R.P. // Of. Bull. NCIS RB. - 2003 .-- 2 (37). - S. 93.
7. Патент РБ № 5698. Способ размножения оздоровленного семенного материала картофеля/Бобрик А.О., Хрипач В.А., Жабинский В.Н., Завадская М.И., Литвиновская Р.П.// Оф. Бюл. НЦИС РБ. - 2003. 4(39). - С. 88.7. Patent of the Republic of Belarus No. 5698. The method of propagation of healthy seed material of potatoes / Bobrik A.O., Khripach V.A., Zhabinsky V.N., Zavadskaya M.I., Litvinovskaya R.P. // Of. Bull. NCIS RB. - 2003.4 (39). - S. 88.
8. 8сЫадпйаиГег С.Э.. Апеса Ρ.Ν. апб РЫШрк А.Т. Мопос1опа1 апИЬоб1е8 адашк! Ьгакыпойегюб а пс\у р1аи! дго\\И1 гещйаОпд сотроипб//Р1ап1 Р11у5ю1. (8ирр1.) - 1988. - Уо1. 86. - Р. 113.8. 8sYadpayaiGeg S.E. Apesa Ρ.Ν. apb RYShrk A.T. Mopos1op1 apiob1e8 hell! Г ып ып ой а а а а пс у у у и! dgo \\ I1 geshchyaOpd sotroipb // P1ap1 P11u5y1. (8irr1.) - 1988. - Uo1. 86.- R. 113.
- 3 014349- 3 014349
9. Сайсг М.С., МсусгНоГГ М.Е. 1пк1аЫ1Иу оГ киссту1 ск1сг йпкадск ίη О2'-топокиссту1 сусйс АМР-ргойш софцдайк а! пси!га1 рН// I 1ттипо1. Мс11юбк. - 1985. - Уо1. 81. - Р.245.9. Saisg M.S., MsusgNoGG M.E. 1pk1aY1iu og Kisstu1 sk1sg ypkadsk ίη O2'-topokisstu1 susys AMP-rgoish softsdayke a! psi! ha1 pH // I 1ttypo1. Ms11yubk. - 1985. - Yo1. 81. - P.245.
10. Уоко1а Т., 4апаЬс 8., Одто Υ., УатадисЫ I., ТакайакЫ N. Кабюиптипоаккау Гог ЬгакктоЧсгснбк апб ϊΐ8 икс Гог сотрагайус апа1ук1к оГ ЬгакктоЧсгснбк т к!стк апб кссбк оГ Р1аксо1ик уи1дапк// I Р1ап1 С1ГО\\111 Ксди1. - 1990. - Уо1. 9. - Р. 151.10. Wokoaa T., 4apa 8., Odto Υ., Uatadis I., Takayaki N. Kabyuiptypoakkau Gog bakktoChsgsnbk apb ϊΐ8 x Gog sotragayus apa1uk1k bg gakktoChsgsnbk t kakkkk1 gbk1 . - 1990. - Yo1. 9. - R. 151.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EA200701628A EA014349B1 (en) | 2007-06-01 | 2007-06-01 | Castasterone bovine serum albumin conjugate as immunogen |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EA200701628A EA014349B1 (en) | 2007-06-01 | 2007-06-01 | Castasterone bovine serum albumin conjugate as immunogen |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA200701628A1 EA200701628A1 (en) | 2008-12-30 |
| EA014349B1 true EA014349B1 (en) | 2010-10-29 |
Family
ID=40863324
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA200701628A EA014349B1 (en) | 2007-06-01 | 2007-06-01 | Castasterone bovine serum albumin conjugate as immunogen |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| EA (1) | EA014349B1 (en) |
-
2007
- 2007-06-01 EA EA200701628A patent/EA014349B1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| ADELHEID KOLBE et al. "Syntheses of dexamethasone conjugates of the phytohormones gibberellin A * |
| TAKAO YOKOTA et al. "Radioimmunoassay for brassinosteroids and its use for comparative analysis of brassinosteroids in stems and seeds of phaseolus vulgaris", Plant Growth Regulation, 1990, vol. 9(3), s. 151-159 * |
| VLADIMIR A. KHRIPACH et al. "Analysis of brassinosteroids", Polish Journal Chemical, 2006, vol. 80(4), s. 651-654 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EA200701628A1 (en) | 2008-12-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4852614B2 (en) | Release reagents for vitamin D compounds | |
| US5164296A (en) | Assay methods involving ouabain | |
| JP4896959B2 (en) | Doxorubicin immunoassay | |
| US20080317764A1 (en) | Antibodies against 25-hydroxyvitamin d | |
| CN110845444B (en) | Dimethomorph hapten, artificial antigen and antibody, and preparation method and application thereof | |
| JPH0131141B2 (en) | ||
| CN110642793A (en) | Azoxystrobin hapten, artificial antigen and antibody, and preparation method and application thereof | |
| CN113736744B (en) | Digitoxin monoclonal antibody hybridoma cell strain and application thereof | |
| CN113264834A (en) | Abienol hapten, artificial antigen and antibody as well as preparation method and application thereof | |
| CN111333503A (en) | Dicofol hapten, artificial antigen and antibody as well as preparation methods and applications thereof | |
| ES2877562T3 (en) | Compositions related to vitamin D | |
| JP2517561B2 (en) | Category Estrogen Immunoassay Kit | |
| JP3595506B2 (en) | Method for producing antibody against specific region of cyclosporin and cyclosporin metabolite | |
| EA014349B1 (en) | Castasterone bovine serum albumin conjugate as immunogen | |
| CN109608479A (en) | The preparation method and application of a kind of Tetramine haptens and monoclonal antibody | |
| JP5764854B2 (en) | Polyclonal antibodies and uses thereof | |
| EA014348B1 (en) | 6-(6-((22R,23R,24S)-2α,3α,22,23-TERTAHYDROXY-24-METHYL-5α-CHOLESTAN-6-YLIDENAMINOOXY)ACETAMIDO)HEXANOIC ACID AS A HAPTENE IN THE SYNTHESIS OF CASTASTERONE BOVINE SERUM ALBUMIN CONJUGATE | |
| JP2000191699A (en) | Monoclonal antibody to be specifically reacted with coplanar pcb substantially not reducing antigen recognition characteristic even in 50 (v/v)% aqueous solution of organic solvent, and its measurement | |
| CN113896758A (en) | Solanum nigrum semiantigen, artificial antigen and antibody, and preparation method and application thereof | |
| EA015277B1 (en) | 28-norbrassinolide bovine serum albumin conjugate as immunogen | |
| CN111961002A (en) | Pyraclostrobin hapten, artificial antigen and antibody as well as preparation method and application thereof | |
| CN111875652A (en) | Pleocidin hapten, artificial antigen and antibody as well as preparation method and application thereof | |
| CN111825562B (en) | Chlordan hapten, artificial antigen and antibody, and preparation method and application thereof | |
| CN111943881B (en) | Chlorfenapyr hapten, artificial antigen and antibody as well as preparation methods and applications thereof | |
| Khripach et al. | Enzyme immunoassay of (24 R)-brassinosteroids |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ KZ KG MD TJ TM |
|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): BY RU |