DK173457B1 - Nye secopregnatrien-derivater, farmaceutiske præparater indeholdende disse samt deres anvendelse - Google Patents

Description

* i DK 173457 B1

Den foreliggende opfindelse angår en hidtil ukendt klasse af forbindelser, som udviser anti-inflammatorisk og immunmodulerende virkning, såvel som en stærk aktivitet ved fremkaldelsen af differentiering og hæmning af uønsket for-5 mering af visse celler, herunder cancerceller og hudceller, samt farmaceutiske præparater, eventuelt opdelt i dosisenheder, indeholdende disse forbindelser, og disses anvendelse til fremstilling af et præparat til behandling og profylakse af sygdomme, der er karakteriserede ved unormal 10 celledifferentiering og/eller -proliferation.

Forbindelserne ifølge opfindelsen udgør en ny klasse af D-vitamin-analoger, der kan beskrives ved den almene formel I

H2)n—V~°H

i I R2 r3

I H I

JI H ^

OH

15 i hvilken formel (og i øvrigt i resten af denne beskrivel- •i o se) n er et helt tal fra 1-7; og R og R , som er ens eller forskellige, betyder hydrogen, lige eller forgrenet

Cj^-Cy alkyl med de forbehold, at når n = 1, er R1 og R2

A O

20 ikke samtidigt hydrogen, ej heller er R og R samtidigt en alkylgruppe, uafhængigt udvalgt blandt methyl, ethyl eller n-propyl, og når n = 2, er R1 og R2 ikke samtidigt methyl eller, sammen med det carbonatom (angivet med stjerne i 2 DK 173457 B1 formel I), som bærer hydroxylgruppen, en mættet eller umættet C^-Cg-carbocyklisk ring; og R^ og R4 betyder enten samtidigt hydrogen, eller sammen udgør de en binding (enten i Z- eller E- konfigurationen} mellem carbonatomerne med 5 numrene 22 og 23 med det forbehold, at når og R4 sammen udgør en binding og n=3 er R^- og R^ ikke samtidigt methyl; og derivater af forbindelserne af formel I, hvori hydroxylgruppen ved carbonatomet med stjerne er erstattet med hydrogen.

10 Her og i det følgende betyder udtrykket "lavere alkyl" en lige eller forgrenet, mættet eller umættet carbonkæde indeholdende fra 1 til 7 carbonatomer, og udtrykket "lavere cyklo-alkyl" angiver en mættet eller umættet C3-Cg-carbocyklisk ring.

15 Som det ses af formel I, indeholder forbindelserne ifølge opfindelsen, afhængigt af betydningerne af R^·, R^, r3 og R4, diastereoisomere former (fx E- eller Z-konfigurationen ved 22,23-dobbeltbindingen; R- eller S-konfiguratio-nen ved carbonatomet angivet ved stjerne). Opfindelsen 20 omfatter alle disse diastereoisomerer i ren form og også blandinger af diastereoisomerer. Det skal imidlertid bemærkes, at vore undersøgelser viser en betydelig forskel i aktiviteten mellem de stereoisomere former. Desuden er derivater af forbindelser af formel I, hvori en eller flere 25 hydroxygrupper er maskeret som grupper, som kan gendannes til hydroxy-grupper in vivo, af interesse.

Indenfor opfindelsens omfang er en type prodrug af formel I, hvori hydroxylgruppen mangler ved carbonatomet med stjerne. Disse forbindelser er relativt inaktive in 30 vitro, men omdannes til aktive forbindelser af formel I ved enzymatisk hydroxylering efter indgift til patienten.

Det har for nylig vist sig, at lor, 25-dihydroxyvitamin D3 (1,25 (OH) 2D-j) påvirker effekten og/eller produktionen af interleukiner (Immunol. Lett. 1/7, 361-366 (1988)), hvilket 35 giver anledning til at forvente en mulig anvendelse af denne forbindelse i behandlingen af sygdomme, som er karak- ψ 3 DK 173457 B1 teriserede ved forstyrrelser i immunapparatet, fx autoim-munsygdomme og transplantatafstødning eller andre tilstande, som er karakteriserede ved en. unormal interleukin-1 -produktion, fx inflammatoriske sygdomme, såsom rheumatoid 5 arthritis og asthma.

Det er ligeledes påvist, at (1,25(OH)2D3 er i stand til stimulere celledifferentieringen og hæmme en for høj celleproliferation (Abe, E. et al, Proc. Natl. Acad. Sci., U.S.A. 78, 4990-4994 (1981)), og det har givet anledning 10 til at antage, at denne forbindelse kunne være anvendelig i sygdomme, som er karakteriserede ved unormal celleprolife-ration og/eller celledifferentiering, såsom leukæmi, myelo-fibrose og psoriasis.

Anvendelsen af 1,25(OK)2^3, eller dets prodrug 15 la-OH-D^, har også været på tale til behandling af hypertension (Lind, L. et al, Acta Med. Scand. 222, 423-427 (1987)) og diabetes mellitus (Inomata, S. et al, Bone Mineral 1, 187-192 (1986)) .

Behandlingmulighederne ved disse indikationer for 20 1,25(OH)2D^ er imidlertid stærkt begrænsede på grund af dette hormons velkendte, kraftige virkning på calciummetabolismen; forhøjede blodkoncentrationer vil hurtigt give anledning til hypercalcæmi. Denne forbindelse og dens stærkt virkende syntetiske analoger er ikke helt tilfreds-25 stillende til brug som midler til behandlingen af fx psoriasis, leukæmi eller immunsygdomme, som kræver vedvarende indgift af midlet i relativt høje doser.

Der er beskrevet et antal D-vitaminanaloger, som udviser en større grad af selektivitet i positiv retning for 30 den celledifferentierende/celleproliferationshæmmende aktivitet sammenlignet med virkningen på calciummetabolismen.

Vitamin D3 analogen, MC 903, som indeholder en 22,23-dobbeltbinding, en 24-hydroxygruppe, og har carbonatomerne 25,26 og 27 inkorporeret i en tre-leddet ring, har således 35 en kraftig celledifferentieringsfremkaldende og celleproli-ferationshæmmende virkning og udviser kun moderat virkning på calciummetabolismen in vivo (Binderup, L. and Bramm, E., 4 DK 173457 B1

Biochemical Pharmacology 37, 889-895 (1988)). Denne selektivitet ses imidlertid ikke ved in vitro undersøgelser, der viser, at MC 903 binder ligeså godt til tarmens D-vitamin-receptor som l,25(OH)2D3. Det kan derfor tænkes, at MC

5 903's lave _in vivo-virkning på calciummetabolismen skyldes en hurtig metabolisme af forbindelsen, hvilket derfor begrænser denne forbindelses virkning ved systemisk anvendelse.

Det hævdes, at 24-homo-l,25-dihydroxyvitamin D3 og 10 26-homo-l,25-dihydroxyvitamin D3 (sammen deres 22,23-di- dehydroanaloger) (Ostrem, V.K.; Tanaka, Y.; Prahl, J.;

DeLuca, H.F.; and Ikekawa, N.; Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84, 2610-14 (1987)) har den samme evne til at binde sig til tarmreceptoren hos rotter og kyllinger og receptoren i en 15 human myeloid leukæmicellelinie (HL-60) som l,25(OH)2D3, og skulle alligevel være 10 gange bedre til at fremkalde differentiering af HL-60 celler in vitro end l,25(OH)2D3. In vivo er disse forbindelser henholdsvis "signifikant mindre virkningsfulde" og “mere virkningsfulde" end l,25(OH)2D3 i 20 calciummetabolismevurderinger.

26,27-Dimethyl-la,25-dihydroxyvitamin D3 er blevet syntetiseret, men publiceret materiale om dets biologiske aktiviteter giver modstridende oplysninger (Sai, H.;

Takatsuto, S.; Hara, N.; and Ikekawa, N.; Chem. Pharm.

25 Bull. 13' 878-881 (1985) and Ikekawa, N.; Eguchi, T.; Hara, N. ; Takatsuto, S.; Honda, A.; Mori, Y.; and Otomo, S.;

Chem. Pharm. Bull. 4362-4365 (1987)). Den nært beslæg tede 26,27-diethyl-la,25-dihydroxyvitamin D3 omtales også af disse forfattere; i dette tilfælde som med "næsten ingen 30 D-vitamin-virkning" (dvs. calciummetabolismevirkning), men med en 10 gange større evne end l,25(OH)2D3 til at fremkalde celledifferentiering.

Den kendsgerning, at der er kun små strukturelle forskelle mellem de ovennævnte forbindelser giver anledning 35 til at antage, at den nuværende viden ikke giver mulighed for at forudse, hvilken struktur af D-vitaminanaloger som 5 DK 173457 B1 vil vise en gunstig grad af selektivitet, der ses som en højere celledifferentieringsvirkning in vitro sammenlignet med evnen til at binde sig til tarmens D-vitaminreceptor in vitro. Sagen kompliceres yderligere af den observation, at 5 receptoren ikke altid viser den samme bindende evne in vivo som _in vitro, hvilket sandsynligvis skyldes en farmakokine-tisk forskel mellem forbindelserne.

Det har nu overraskende vist sig, at forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse sammenlignet med de 10 ovennævnte kendte forbindelser udviser en højere grad af adskillelse af den biologiske virkning på celledifferen-tiering/proliferation og interleukin I-aktiviteten på den ene side og calciummetabolismen på den anden.

Forbindelsernes selektivitet illustreres af, at, mens 15 den koncentration, som behøves for at fremkalde celledifferentiering i en human monocytisk tumorcellelinie, er den samme eller mindre, end hvad der kræves af 1,25(OH)for at give samme effekt, er deres evne til at binde sig til tarmreceptoren meget lavere end for 1,25(OH)2^3's vedkom- 20 mende. Hos rotter er forbindelserne betydeligt mindre aktive end l,25(OH)2D3 med hensyn til fremkaldelse af hyper- calciuri og hypercalcæmi. For eksempel har forbindelserne 36, 37, 38 og 54 (se Tabel 2) en bindeevne til receptoren, som er mellem 1% og 10% af 1,25(OH)2^3, i god overensstem- 25 melse med den observerede lavere in vivo virkning på calciummetabolismen. De samme forbindelser har gode bindeevner til receptoren i tumorceller (svarende til den for 1,25(OH) 2^3) og er desuden gode til at fremkalde differentiering og hæmme proliferation af disse celler ved samme lave koncen-30 trationer som l,25(OH)2D3.

Samtidig udviser forbindelserne ifølge opfindelsen god biotilgængelighed såvel som kemisk og metabolisk stabilitet, hvilket gør dem særdeles egnede til både lokal og systemisk behandling og til profylakse af human- og veteri-35 nærsygdomme, som er karakteriserede ved 1) unormal celle-proliferation og/eller celledifferentiation, såsom visse 6 DK 173457 B1 dermatologiske sygdomme, herunder psoriasis og visse cancerformer, 2) en forstyrrelse i immunapparatet, fx auto-immunsygdomme, herunder diabetes mellitus og afstødning af transplantater eller 3) inflammatoriske sygdomme, såsom 5 rheumatoid arthritis og asthma.

De foreliggende forbindelser kan anvendes i kombination med andre medikamenter. Til forebyggelse af transplantatafstødning kan en behandling med de foreliggende forbindelser med fordel kombineres med fx en cyclosporinbehand-10 ling.

Forbindelserne af formel I kan med fordel fremstilles udfra vitamin D2 via de nært beslægtede mellemprodukter 1 (Tetrahedron Letters, 1987, 28, 1337) og 2_ (Tetrahedron, 1987, £3, 4609) ad de veje, som er angivet i Skema 2. Et 15 nøgletrin i syntesen som beskrevet er reaktionen med et sidekædefragment (af type A, B eller C) enten direkte (type A) eller efter behandling af sidekædefragmentet (type B eller C) med en stærk base (såsom n-butyl-lithium eller lithium-di-iso-propylamid), hvorefter man får et nucleofilt 20 reagens (af henholdsvis type B' eller C*>. Alle disse reaktionstyper er en velkendt del af den teknik, som benyttes i den syntetiske organiske kemi til dannelse af bindinger mellem carbonatomer og har faktisk været benyttet i synteser af andre forbindelser af D-vitamintypen.

25 Generelt har sidekædefragmentet strukturen z_(CH2)n’'c(Rl) (r2>~or5 med følgende betydninger (følgende standardforkortelser vil 30 blive anvendt i resten af denne beskrivelse: Et = ethyl;

Hep = heptyl; Me = methyl; Ph = fenyl; Pr s propyl; THP = tetrahydro-4H-pyran-2-yl; THF = tetrahydrofuran; Ts = g--toluensulfonyl):

For type A er Z = X-CHj-, hvor X er en "leaving 35 group", fx Br, I eller TsO.

For type B er Z = PhS(02)-CH2-, og den tilsvarende B' 7 DK 173457 B1 har Z = PhS(O2)-CHM-, hvor M = metal, fx Li.

For type C er Z = Ph3P4-CH2“, eller Z = ζ^Ρ(0)-0^-, hvor Q = methoxy, ethoxy eller fenyl, og den tilsvarende C has Z = Ph^P^CH'- eller Q2P(O)-CHM- (M = metal, fx Li).

5 R5 er efter valg hydrogen (ikke i A) eller en alkohol beskyttende gruppe, såsom tri(lavere-alkyl)silyl eller THP.

I det tilfælde, hvor R5 = H i B eller C, er R5 = Μ (M = metal, fx Li) i de deriverede B' eller c .

Synteserne af de enkelte fragmenter af typerne A, B 10 og C kan varieres på mange måder, og kun for eksemplets skyld er synteserne af de specifikke forbindelser i Tabel 1, ad de reaktionsveje, som er summerede i Skema 1, beskrevet i præparationerne. Det skal bemærkes, at fragmenterne af typerne B og C med n, R1, R2 og R5 svarende til en eksem-15 plificeret forbindelse af type A, men hvor selve fragmentet ikke er eksemplificeret, let kan fremstilles ud fra de tilsvarende, beskrevne mellemprodukter ved analoge metoder.

8 DK 173457 B1

Tabel 1: Et antal specifikke sidekadefragmenter [Z- (C^Jy-CfR1) (R2)OR5] 5 -------

Forbin- Formel delse

Nummer + Type * n R1 R2 R5 Z

10 3 Al -(CH2)2- SiMe3 BrCH2 | 4 Al -{CH2)2- THP TsOCH2 I 5 Al -(CH2)4- SiMe3 BrCH2 I 6 Al -(CH2)5- SiMe3 BrCH2 I 7 A 2 -(CH2)2- SiMe3 BrCH2 15 j 8 A 3 Me Me SiMe3 BrCH2 I 9 A 3 Et Et SiMe3 BrCH2 I 10 A 4 Me Me SiMe3 BrCH2 I 11 A 5 Me Me SiMe-j BrCH2 I 12 B 1 -(CH2)2- THP PhS(02)CH2 20 I 13 I B 4 Me Me H Ph S(02)CH2 I 14 I C 4 Me Me H Ph2P(0)CH2

I 15a ++ [ A 1 Me H SiMe3 ICH2 I

I 15b ** I A 1 H Me SiMe3 ICH2 I

I 16 ** I A 1 H Hep SiMe3 ICH2 I

25 I 17 I A 2 Et Et SiMe3 BrCH2 I

I 18 I A 3 Pr Pr SiMe3 BrCH2 I

j 19 I B 3 Me Me H PhS(02)CH2 |

I 60 I A 2 Pr Pr SiMe3 BrCH2 I

1_I----1 30 + Som angivet i Præparationerne * Se tekst ++ S-Form ** R-Form 35 Noter til Skema 1 a. TsCl - base; b. dihydropyran - syre; c. LiBr (for X =

Br) eller Nal (for X = I); d. (i) PhSH - base, (ii) H202 - 9 DK 173457 B1

NaWO^; e. Grignard reagens R^MgBr or R1MgI; (i) L* (ii) H202; 2· Me^SiCl - base; h. HeOH - syre; SKEMA 1 5 (R2)-OH — D ja

TsO-CH--(CH,) -C(R^) (R2)-OH <r^ 2 i Π b^^-- ® 2 10 ^--, BrOr2-(CH_)n-C(0)-R -η [j- (R^)-0-TT{P c p A (X - OTs, R5 TSe\j___I 8r<H lCH , -c<o>-OES:

ITT G

PhS(O2)-CH2-(CH2)n-C(RA)(R^)-0H / 15 b (R5 = H) >(£or R1 » R2> si ^ X-GH^CH^OR1) (R2)-Oi 4--- \ 6 Ί- \ 2 \ Ph,P(0)Æ-(CH,) -CiR1)«2)-*» \\ \ 2 2 V1 < e>\h \ ^ C (R3 = H)

PhS(0J-CH -(CHJ -C(Rl)(R2)-0-*niP X-GH,-{CH ) -CCR1){R2)0SiMe.

2 2 2 n 2 2 n J

25 B (R5 - ΊΗΡ) A (R5 = SiMe3) Ψ

---> Ph-P(O) -CH_-{CH,) -G^HR^-O-THP

« 2 i Ti C (R5 » THP) 30 Nogle af disse sidekædefragmenter omdannes (se Præpa rationer og Eksempler) til forbindelser af I via de i Skema 2 anførte mellemprodukter. Mellemprodukterne er angivet i Tabel 2 sammen med de eksemplificerede forbindelser af formel I.

35 10 DK 173457 B1

Tabel 2: Et antal eksemplificerede forbindelser anført i Skema 2 og angivet ved nummer i Præparationer og Eksempler 5 I ~[ " Formel | jForbin- | I----—--—- —----1 I delse | | n R1 R2 R3 R4 R5 | I Nummer | | el. R^ el. R7 ] I-1-1—----———-1

10 120a, 20b I II | 1 -{CH2)2- H SeMe siMe3 I

121a, 21b I II I 1 -<CH2)2- H SeMe H | I 22 I II I 1 -{CH2)2- H SeMe THP |

I 23 I III J 1 -<CH2)2- h h thp I

I 24 I ni I i -(CH2)5- H H H I

15 I 25 I III I 3 Me Me Η Η Η | I 26 I III I 4 Me Me Η Η Η [ J 27 j III J 4 Me Me Binding (22e) H | I 28 j IV I 1 -{CH2)2- H H THP | I 29 I iv I i ~(ch2)5- H H H ] 20 I 30 j IV I 3 Me Me Η Η H | J 31 J IV j 4 Me Me Η Η H | J 32 I IV ] 4 Me Me Binding (22e) H |

I 33 j V J 1 -(ch2)2- H H THP I

I 34 I I I 1 -(CH2)2- H H - I

25 I 35 I I I 1 -<CH2)5- Η H - I

] 36 I I I 3 Me Me Η H - | j 37 I I I 4 Me Me Η H - | I 38 I I j 4 Me Me Binding (22e) - | I 39 + I III I 1 Me Η Η Η H | 30 j 40 * I III 1 1 H Me Η Η H | I-1-1-----1 11 DK 173457 B1

Tabel 2 (fortsat):

I ~ Formel " ”J

5 |Forbin- I--------------—------- I delse | | n R1 R2 R3 R4 R 1 7 i

I Nummer | | el. Rg el· R

I-1-f—-—--1

I 41 * J III I 1 H Hep Η H H

10 I 42 I III I 3 Me Me Binding (22E) H

j 43 j III j 3 Et Et Η H H

I 44 j III j 3 Pr Pr Η H H ' I 45 + I IV I 1 Me Η Η H H ·

I 46 * I IV J 1 H Me Η Η H I

15 I 47 * ) IV I 1 H Hep Η Η H I

I 48 j IV j 3 Me Me Binding (22E) H |

I 49 I IV j 3 Et Et Η Η H I

I 50 I IV j 3 Pr Pr Η Η H I

I 51 + { I I 1 Me Η Η H " I

2 0 I 52 * ) I j 1 H Me Η Η " I

I 53 * ) I ] 1 H Hep Η H - I

I 54 I I I 3 Me Me Binding (22E) - I

j 55 j I I 3 Et Et Η H - 1

j 56 j I (3 Pr Pr Η Η - I

25 j 57 I III j 2 Et Et Η Η H I

I 58 j IV j 2 Et Et Η Η H |

i 59 j I I 2 Et Et Η Η - I

i 63 I III I 2 Pr Pr Η H SiMe3 | I 64 j IV j 2 Pr Pr Η H SiMe3 |

30 I 65 J I I 2 Pr Pr Η Η - I

I_I_I-----1 + S-Konfiguration ved carbonatom med stjerne * R-Konfiguration ved carbonatom med stjerne 35 Noter til Tabel 2

For forbindelser af formel II er der mulighed for diastereoisomerer ved C-23 og/eller C-22. Disse er i nogle blevet adskilt til karakterisering, men oftest 12 DK 173457 B1 anvendtes reaktionsprodukterne af formel II direkte som en blanding i de efterfølgende trin; der er ikke givet data for disse mellemprodukter, og disse forbindelser er ikke indeholdt i Tabel 2.

5

Noter til Skema 2 R5 er efter ønske H eller an alkoholbeskyttende gruppe, og betydningen af R^ kan ændres ved de forskellige trin af 10 syntesen af en given forbindelse af formel I. Y er efter ønske H eller en derivatiserende gruppe, som skal lette trinet "d." a. (i) n-BuLi, < i i) Sidekædefragment A (se tekst); b. (i) 15 S02, (ii) n-Bu3SnH - hu, (iii) NaHC03 (kogende EtOH); c.

Metalliseret derivat (B1) af sidekædefragment B (se tekst), (ii) Fakultativ derivatisering enten in situ af 22-alkoxid-me11emproduktet eller efter isolering af 22-hydroxyforbindelsen; d. Reduktiv fjernelse under medvirken af fx Na-Hg 20 (for Y = H, MeC(O)-, PhC(O)- eller MeS(02)-), eller samme betingelser som ovenfor beskrevet for trin "b" (for Y =

MeS-C(S)- eller PhC(S)-); e. (i) Wittig (Horner-Wittig) reagens, reagens (C) deriveret fra sidekædefragment C (se tekst) véd behandling med n-BuLi, (ii) vandig "oparbejd-25 ning", (iii) NaH (ii og iii kun for reagenser af Q

2P(O)-typen); t. hu- triplet sensitizer; 3. n-Bu4N+F~ eller HF; h. Enhver nødvendig reaktion(sfølge) til afbeskyttelse af sidekædens OH-gruppe. Dette trin kan, om ønsket, også udføres på et tidligere trin i syntesen; jL. I det tilfælde,

19 R

30 hvor R R , og RJ = H, valgfri inversion af konfigurationen ved carbonatomet med stjernen, fx via Mitsunobu's reaktion (Synthesis, 1981, 1).

DK 173457 B1 13 SKEHA 2 VITAMIN D2

''yCH(SeMe)2 ''yCHO

-)- sjiO -)- yS. r7 R4 \ S/4V(CH2)nV^R1 [JR] R i Th] r >L Jk

^-> II R6 = H, R7 = SeMe ---Ill R3 * R4 = H

II R6 * S(02)Ph, R7 = OY ---III R3 + R4 = bond (22E) III R3 + R4 - bond (22Z) c e .....—I - ii·— -^· ——— — — ......— — DK 173457 B1 14 SKEMA 2 fortsat 5 r4 r4 ^iL ί ^il l· Ir«5 (JpD B pjh) r

10 \ i}^ 111 ^ IV

-(- SiO oJi-f- 9 II I f ψ 15 4 4 R ^* R* V''iV(CK2,n<^'Rl V'V^n'V*1 R3 uæ ^lX r3 h0**

[ja) · R [ ] h i R

20 |Jh jfH

{ 1 xC v

HO',“ks^SOH

25 * for = H eller tri-alkylsilyl

Parallelle reaktioner kan anvendes til omdannelse af 30 andre sidekædefragmenter til de tilsvarende forbindelser af formel I. Det ses, at vejene i Skema 1 er meget fleksible og letter syntesen af sidekaedefragmenterne, hvori n, R1 og R kan have en hvilken som helst af de betydninger, som er angivet i beskrivelsen af formel I. Til syntesen af forbin-35 delserne ifølge formel I, hvori carbonatomet med stjerne er kiralt R^ φ R^) anvendes forbindelse D i Skema 1 med fordel som stereoisomeren med hovedsageligt eller udelukkende den 15 DK 173457 B1 ønskede konfiguration, hvorved man får stort set eller udelukkende de(n) ønskede diastereoisomer(er) af formel I.

Forbindelse D kan alternativt anvendes som stereo-isomeren med den modsatte konfiguration, og konfigurationen 5 kan derefter vendes på et senere syntesetrin.

En metode til fremstilling af forbindelse D i høj stereokemisk renhed i det tilfalde, hvor R1 = H er vist i Skema 3.

10 SKEMA 3

Eto -C(0MCH2)n-C(0)-R2 ->HO-C(OMCH ) -- JL-> n/'\

HO H

15 R2

2 2 "X

HO H

20 D (R^=H) a. (i) KOH, (ii) Saccharomyces cerevisiae, glukose, pH 6-7; b (i) CH2N2, (ii) LiAlH4.

25 Syntesen af prodrugs af forbindelserne af formel I, som mangler sidekædehydroxylet (ved carbonatomet med stjernen) , kan ske ad vejene ifølge Skema 2, under anvendelse af det passende sidekædefragment med strukturen Z-(CH2>n"CH(Rl)(R2>· 30 De prodrug-former, som svarer til forbindelserne 36 og 54, fremstilles således fra BrCH2(CH2)3CHMe2 [anvendes

som henholdsvis sidekædefragment A eller som det deriverede fragment B (PhS(02)CH2(CH2)3CHMe2)], og forbindelserne svarende til forbindelserne 37 og 38 på lignende måde fra BrCH

35 2(CH2)4CHMe2’ I en alternativ syntesevej til forbindelserne ifølge 16 DK 173457 B1

formel III (R3 = R4 = H) (eller den tilsvarende sidekæde-desoxyanalog), reduceres aldehyd 2 (natriumborhydrid i ethanol) til den tilsvarende primære alkohol (forbindelse 61 i Præparationerne), som derefter omdannes til tosylatet 5 (forbindelse 62 i Præparationerne) (£-toluenesulfonylklorid i pyridin). Denne forbindelse forbindes herefter under tilstedeværelse af dilithiumtetrachlorcuprat med Grignard’s reagens derivatet fra det fornødne sidekædefragment A

[eller den tilsvarende desoxyanalog, z-(CH2)n-CH(R1)(R2)] 10 (hvori Z = BrCH2 eller ICH2) ved reaktion med magnesiummetal i THF. Syntesen af forbindelse 65 og af sidekædedes-oxyanalogen af forbindelse 36 (forbindelse 68) via denne fremgangsmåde er eksemplificeret.

De foreliggende forbindelser er tænkt anvendt i far-15 maceutiske præparater, som er anvendelige ved behandlingen af humane og veterinære sygdomme som ovenfor beskrevet.

Den nødvendige mængde af en forbindelse af formel I (herefter omtalt som den aktive bestanddel) vil naturligvis for at have terapeutisk virkning variere afhængigt af, 20 hvilken forbindelse der er tale om, hvilken sygdom som skal behandles, og hvilken patient som er under behandling. Forbindelserne ifølge opfindelsen kan indgives ad parenteral, intra-artikulær, enteral eller topikal vej. De absorberes godt, når de indgives enteralt, og dette er den 25 foretrukne indgivelsesform ved behandlingen af systemiske sygdomme.

Den aktive bestanddel omfatter passende fra 1 ppm to 0,1% i topiske præparater og 1 ppm i 1% i orale og parente-rale præparater, beregnet efter vægt af præparatet.

30 Ved udtrykket "dosisenhed" forstås en enhed, dvs. en enkelt dosis, som kan indgives til en patient, og som let kan håndteres og pakkes, idet den forbliver en fysisk og kemisk stabil enhedsdosis, og som indeholder enten det aktive materiale som sådant eller en blanding deraf med faste 35 eller flydende farmaceutiske fortyndings- eller bæremidler.

Præparaterne, til såvel veterinær- som humanmedicinsk brug ifølge den foreliggende opfindelse, indeholder en 17 DK 173457 B1 effektiv mængde af en eller flere af forbindelserne med formlen I sammen med farmaceutisk acceptable, ugiftige bærer- og/eller hjælpestoffer. Bæremidlerne må være "acceptable" i den forstand, at de er kompatible med de 5 andre bestanddele i midlet og ikke skadelige for patienten.

Præparaterne omfatter fx de former, som er egnede til oral, rektal, parenteral (inklusiv subkutan, intramuskulær og intravenøs), intra-artikulær eller topisk indgift.

Præparaterne kan passende indgives i form af dosis-10 enheder og kan fremstilles på en hvilken som helst velkendt metode i apotekerkunsten. Alle fremgangsmåder omfatter det trin at bringe den aktive bestanddel i forbindelse med bæreren, som består af et eller flere hjælpestoffer. I almindelighed fremstilles præparaterne ved at bringe den aktive 15 bestanddel i en ensartet og nær forbindelse med en flydende eller findelt fast bærer eller begge dele, og derefter om nødvendigt at bearbejde resultatet heraf til det ønskede præparat.

Præparater ifølge den foreliggende opfindelse, som er 20 egnede til oral indgift, kan være i form af adskilte enheder, såsom kapsler, breve, tabletter eller sugetabletter, der hver indeholder en forudbestemt mængde af den aktive bestanddel, i form af et pulver eller granulat, en opløsning eller suspension i en vandig eller ikke-vandig væske 25 eller i form af en olie-i-vand eller vand-i-olie emulsion.

En tablet kan fremstilles ved at presse eller forme den aktive bestanddel, om ønsket sammen med et eller flere hjælpestoffer. Pressede tabletter kan fremstilles ved i en passende maskine at presse den aktive bestanddel i en frit-30 flydende form, fx som pulver eller granulat, om ønsket blandet med et bindemiddel, smøremiddel, inert opløsningsmiddel eller et overfladeaktivt eller dispergerende middel. Formede tabletter fremstilles ved i en passende maskine at forme en blanding af den aktive bestanddel i pulverform og 35 et passende bæremiddel, som er fugtet med et inert flydende opløsningsmiddel.

Præparater til rektal indgift kan være i form af en stikpille, som indeholder den aktive bestanddel og en 18 DK 173457 B1 bærer, fx kakaosmor, eller i form af et lavement.

Egnede præparater til parenteral indgift kan passende bestå af en steril, olieagtig eller vandig præparation af den aktive bestanddel, som fortrinsvis er isotonisk med 5 modtagerens blod.

Præparater egnede til intra-artikulær indgift kan være i form af en steril vandig præparation af den aktive bestanddel, som kan være i mikrokrystallinsk form, fx i form af en vandig mikrokrystallinsk suspension. Liposomale 10 præparater eller biologisk nedbrydelige polymere systemer kan også anvendes til at indgive den aktive bestanddel både intra-artikulært eller som øjenpræparat.

Egnede præparater til topisk indgift omfatter flydende eller halvflydende præparater, såsom linimenter, lotio-15 ner, påsmøringsmidler, olie-i-vand eller vand-i-olie emulsioner, fx cremer, salver eller pastaer; eller opløsninger eller suspensioner, såsom dråber; eller som sprays.

Til asthma-behandling kan anvendes inhalation af pulver, præparater med drivgas eller spray-præparater, som 20 dispenseres med en spray-dåse, en spray eller en forstøver. Præparaterne skal, når de dispenseres, fortrinsvis have en partikelstørrelse på fra 10 til 100μ.

Sådanne præparater er fortrinsvis i form af et findelt pulver til pulmonal indgift fra en pulverinhalator 25 eller selvdrevne pulverdispenserende præparater. I tilfælde af selv-drevne opløsninger og forstøvningspræparater kan virkningen opnås enten ved at vælge en ventil med de ønskede spray-karakteristika (fx i stand til at frembringe en spray med den ønskede partikelstørrelse) eller ved at 30 inkorporere den aktive bestanddel som et suspenderet pulver med kontrolleret partikelstørrelse. Disse selv-drevne præparater kan enten være pulver-dispenserende præparater eller præparater, som dispenserer den aktive bestanddel som dråber af en opløsning eller suspension.

35 Selvdrevne pulver-dispenserende præparater indeholder fortrinsvis partikler af faste aktive bestanddele og et flydende drivmiddel med et kogepunkt på under 18°C ved atmosfærisk tryk. Det flydende drivmiddel kan være ethvert drivmiddel, som er egnet til medicinsk brug og kan omfatte et eller flere C^-C^-alkylcarbonhydrider eller halogenerede 19 DK 173457 B1 C^-Cg-alkylcarbonhydrider eller blandinger deraf; chlore- rede og fluorerede C^-Cg-alkylcarbonhydrider er særligt 5 foretrukne. I almindelighed udgør drivmidlet fra 45 til 99,9 vægt% af præparatet, medens den aktive bestanddel udgør fra 1 ppm til 0,1 vægt% af præparatet.

Foruden de ovennævnte bestanddele kan præparaterne ifølge opfindelsen indeholde et eller flere tilsætnings-10 stoffer, såsom fortyndingsmidler, puffere, smagsstoffer, bindemidler, overfladeaktive stoffer, fortykkelsesmidler, smøremidler, konserveringsmidler, fx methylhydroxybenzoat (herunder antioxidanter), emulgeringsmidler og lignende.

Behandlingen med de foreliggende forbindelser 15 og/eller med andre terapeutisk aktive forbindelser kan ske samtidigt eller med mellemrum.

Ved behandlingen af systemiske sygdomme indgives daglige doser på 1-1000 pg, fortrinsvis 2-250 pg, af en forbindelse af formel I. Ved den topiske behandling af derma-20 tologiske sygdomme anvendes salver, cremer og lotioner indeholdende 1-1000 pg/g, fortrinsvis 10-500 pg/g, af en forbindelse af formel I. De orale præparater fremstilles fortrinsvis som tabletter, kapsler eller dråber indeholdende 0,5-500 pg, fortrinsvis 1-250 pg, af en forbindelse af for-25 mel I, pr. dosisenhed.

Opfindelsen skal i det følgende beskrives ved hjælp af en række præparationer og eksempler.

Præparationer og Eksempler 30 Generelt

De i Præparationer og Eksempler omtalte forbindelser identificeres ved nummer eller bogstav med de tilsvarende forbindelser i Skemaerne og/eller Tabellerne. Ultraviolette spektre (λ) måltes for opløsninger i 96% ethanol. For ker-35 nemagnetiske resonansspektre er værdier for kemiske skift (5) angivet i p.p.m. for deuteriokloroform-opløsninger i forhold til tetramethylsilan (5 * 0) eller kloroform (δ = 20 DK 173457 B1 7,25) som intern standard. Værdien for en multiplet, enten defineret (dublet (d), triplet (t), kvartet (q) eller ikke (m) er givet ved det omtrentlige midtpunkt, medmindre et område er angivet (s = enkelt spektrallinie, b = bred).

5 Koblingskonstanter (J) er angivet i Hertz og er afrundet til nærmeste enhed.

Ether er diethylether og tørredes over natrium. THF tørredes over natriumbenzofenon. Petroleumether refererer til pentandelen. Saltvand er mættet natriumkloridopløsning.

10 Alle opløsninger er vandige, medmindre andet er angivet.

Organiske opløsninger tørredes over tør magnesiumsulfat og inddampedes i en rotationsfordamper ved vandluftpumpetryk.

Præparation 1: 1-(2-Hydroxyethyl)cyklopropanol 15 [D (n=l, R1 + R2 = -(CH?)?-)]

En omrørt opløsning af lithium di-i so-propylamid (fremstillet ved langsom tilsætning af 146 ml n-butyl-lithium-opløsning (1,5 M i hexan) til 30.8 ml di-iso--propylamin i 200 ml tør THF ved 0°C) afkøledes til -70°C og 20 behandledes dråbevis med 8,4 g nydestilleret 4-hydroxy- -2-butanon med en sådan hastighed, at reaktionsblandingens temperatur forblev under -65°C. Efter yderligere 20 minutters forløb tilsattes i løbet af ca. et minut en opløsning af 38 ml trimethylsilylklorid og 10 ml triethylamin i 50 ml 25 tør THF (fremstillet ved 0°C, og derefter afkølet til ca.

-60°C) via en nål med dobbeltspids, hvorefter reaktionsblandingens temperatur øjeblikkeligt steg til -50°C, men derefter faldt igen til -70°C. Efter at have været holdt ved denne temperatur i yderligere 1 time (hvorunder der udfæl-30 dedes et hvidt bundfald), fik reaktionsblandingen lov til at opvarmes til stuetemperatur i løbet af 2 timer, før den blev udrystet mellem 1 1 petroleumsether og 400 ml 2% natriumhydrogencarbonatopløsning. Det organiske lag fraskiltes, vaskedes med saltvand og tørredes. Fjernelse af 35 opløsningsmidlet i vakuum gav en remanens, som rensedes ved destillering, hvorved man fik en olie med et kogepunkt på 21 DK 173457 B1 71-73°C/11 mmHg (Fundet: C, 51,83; H, 10,54. C10H24O2Si2 kræver C, 51,67; H, 10,41%). -H NMR spektret viste, at produktet var en ca. 85:15 blanding af 2,4-bis(trimethylsilyloxy) -1-buten og 2,4-bis(trimethylsilyloxy)-2-buten, og 5 blandingen anvendtes som sådan i næste trin.

3,6 g Zink-korn omdannedes til en sølvforbindelse ved behandling med en opløsning af 30 mg sølvacetat i 20 ml i eddikesyre i 30 sekunder ved 80°C. Efter dekantering vaskedes zink-sølvforbindelsen 6 gange ved dekantering med 15 ml 10 tør ether og dækkedes til slut med 40 ml ether. Til denne blanding, som blev omrystet og opvarmet under tilbagesvaling under en nitrogenatmosfære, sattes i løbet 5 minutter 7,5 g di-jodmetan dråbevis. Opvarmning under tilbagesvaling fortsattes i 1 time før dråbevis tilsætning via en injek-15 tionssprøjte af den ovenfor beskrevne kinetiske blanding af 4,7 g 2,4-bis(trimethylsilyloxy)-1- og -2-butener. Efter yderligere 20 timers kogning under tilbagesvaling isafkø-ledes den omrørte reaktionsblanding og behandledes dråbevis med 4,8 ml pyridin, den fortyndedes med mere tør ether og 20 filtreredes. Filtratet koncentreredes i vakuum, hvorved man fik en olie, som rensedes ved kromatografi (200 g silika-gel; 3% ether i petroleumsether som elueringsmiddel), hvorved man fik 2-(l-trimethylsilyloxycyklopropyl)ethoxytri-methylsilan som en olie, som anvendtes direkte i næste 25 trin. Destillation (kogepunkt 80-81°C/10 mmHg) gav en prøve til analyseformål (Fundet: C, 53,61; H, 10,58. cllH26°2si2 dræver C, 53,60; H, 10,63%).

Til en iskold opløsning af 3,15 g 2-(1-trimethyl-silyloxycyklopropyl)ethoxytrimethylsilan i 20 ml metanol 30 sattes 0,1 ml metanolisk hydrogenklorid (ca. 1 M). Efter 10 minutters forløb koncentreredes opløsningen i vakuum (ved stuetemperatur) to konstant vægt, hvorved man fik titelforbindelsen som en olie, δ (100 MHz) 0,47 (2H, m), 0,77 (2H, m), 1,77 (2H, t, J 6), 3,35 (IH, bs), 3,9 [3H, m, 35 inklusive 3,92 (2H, t, J 6)]. En prøve til analyseformål fremstilledes ved destillation, kogepunkt 58-59°C/0,l mmHg 22 DK 173457 B1 (Fundet: C, 58,92; H, 9,83. C^qOj kræver C, 58, 80; H, 9,87%) .

Præparation 2: 1-(2-Bromethyl)-cyklopropyloxytri- 5 methylsilan (Forbindelse 3)

Til en iskold opløsning af 1,31 g 1-(2-hydroxyethyl)-cyklopropanol og 4 ml pyridin i 20 ml diklormetan sattes 4,7 g 2-toluensulfonylklorid. Blandingen omrørtes derefter i 5 timer ved stuetemperatur under en atmosfære af nitro-10 gen, før den udrystedes mellem 100 ml ether og vand. Det organiske lag vaskedes, i nævnte rækkefølge, med 1 N saltsyre, vand, 5% natriumhydrogencarbonatopløsning og saltvand, og tørredes. Koncentration i vakuum gav en remanens, som rensedes ved kromatografi (150 g silikagel; 40% ethyl 15 acetat i petroleumsether som elueringsmiddel), hvorved man fik 1-(2-2~toluensulfonyloxyethyl)cyklopropanol [E; n = 1, RI + R2 = - (CH2)2 — ] som en olie.

En omrørt opløsning af 15 g lithiumbromid og 3,15 g 1-(2-jj-toluensulfonyloxyethyl)cyklopropanol i 80 ml acetone 20 opvarmedes under tilbagesvaling i 1 time. Den afkølede reaktionsblanding udrystedes mellem 200 ml diklormetan og vand, og den vandige fase ekstraheredes med mere diklormetan. De kombinerede diklormetan-faser vaskedes med vand og saltvand. Efter tørring fik man efter fjernelse af op- 25 løsningsmidlet 1-(2-bromoethyl)cyklopropanol [Η; n = 1, R1 9 + R = -{CH2)2"] som en olie. Destillation af en portion gav en prøve til analyseformål, kogepunkt. 32°C/0,2 mmHg (Fundet: C, 36,55; H, 5,67. C^HgOBr kræver C, 36,39; H, 5,50%).

Til en iskold opløsning af 1,4 g 1-(2-bromethyl)-30 cyklopropanol, 2,8 ml triethylamin og 0,1 g 4-dimethyl-aminopyridin i 25 ml diklormetan, omrørt under en nitrogenatmosfære, sattes dråbevis 1,9 ml trimethylsilylklorid.

Efter yderligere 40 minutters omrøring på et isbad udrystedes reaktionsblandingen mellem 100 ml ether og vand. Det 35 organiske lag vaskedes i rækkefølge med vand (x2) og saltvand, tørredes og koncentreredes i vakuum, hvorved man fik 23 DK 173457 B1 en remanens. Denne rensedes ved kromatografi {50 g sili-kagel; 2% ether i petroleumsether som elueringsmiddel) efterfulgt af destillering, hvor ved man fik titelforbindelsen som en olie. Kogepunkt: 32°C/0,3 mmHg (Fundet: C, 5 40,67; H, 7,28; Br, 33,68. CgH170BrSi kræver C, 40,51; H, 7,22; Br, 33,69%), δ (100 MHz) 0,13 (9H, s), 0,48 (2H, m), 0,77 (2H, m), 2,03, (2 H, t, J 8) og 3,55 (2H, t, J 8).

Præparation 3: 2-[1-(2-p-Toluensulfonyloxyethyl)- 10 cyklopropyloxy]tetrahydro-4H-pyran (Forbindelse 4)

Til en opløsning af 1,30 g 1-(2-jo-toluensulfonyloxy-ethyl)cyklopropanol (et mellemprodukt i Præparation 2) i 15 ml diklormetan ved stuetemperatur sattes 0,88 g dihydro-15 pyran (95%) og 0,1 g pyridinium-jø-toluensulfonat. Efter 5 timers forløb fortyndedes opløsningen med 70 ml ether og ekstraheredes i rækkefølge med vand, 5% natriumhydrogen-carbonatopløsning og saltvand. Efter tørring og fjernelse af opløsningsmidlet i vakuum rensedes produktet ved 20 kromatografi (50 g silikagel; 30% ether i petroleumsether som opløsningsmiddel, efterfulgt af omkrystallisation fra hexan, hvorved man fik titelforbindelsen som plader, smp.

56-57°C (Fundet C, 59,99; H, 7,13; S 9,37. C27H24O5S kræver C, 59,98; H, 7,11; S 9,42%), δ (100 MHz) 0,5 (2H, m), 0,85 25 (2H, m), 1,2-2,4 (8H, m), 3,1-3,9 (4H, m) , 4,55 (IH, m) , 7,6 (3H, m), 7,9 (2H, m).

Præparation 4: 1-(2-Bromethyl)cyklopentyloxytri- methylsilan (Forbindelse 5) 30 Idet man fulgte fremgangsmåderne i den nedenfor beskrevne rækkefølge (Præparation 5) for syntesen af cyklohexylanalogen (6) over fire trin, fremstilledes titelforbindelsen analogt under anvendelse af l-(ethoxy-carbonyl-methyl)cyklopentanol som udgangsmateriale i stedet 3 5 for 1-(ethoxycarbonylmethyl)cyklohexanol.

24 DK 173457 B1

Præparation 5: 1-(2-Bromoethyl)cyklohexyloxytri- methylsilan (Forbindelse 6) 14 g 1-(Ethoxycarboxylmethyl)cyklohexanol sattes i løbet af 1 time dråbevis til en isafkølet, omrørt suspen-5 sion af 3,5 g lithiumaluminiumhydrid i 250 ml tør ether, og omrøring fortsattes natten over ved stuetemperatur. Efter destruktion af overskydende hydrid ved forsigtig tilsætning af vand til den isafkølede blanding fraskiltes etherlaget, vaskedes med saltvand og tørredes. Koncentration i vakuum 10 til konstant vægt gav 1-(2-hydroxyethyl)cyklohexanol [D (n 1 2 = 1, R + R = -(CHj)^-) i tilstrækkelig renhed til næste trin. Destillering af en portion gav en prøve til analyse, kogepunkt 78-79°C/0,2 mmHg (Fundet C, 66,53; H, 11,13. CgH^ O2 kræver C, 66,63; H, 11,18%).

15 Til en isafkølet opløsning af 11,2 g 1-(2-hydroxy- ethyl)cyklohexanol og 17 ml pyridin i 100 ml diklormetan sattes 19,5 g £-toluensulfonylklorid. Blandingen omrørtes derefter i 3 timer ved stuetemperatur under en nitrogenatmosfære, før den udrystedes mellem 300 ml ether og vand.

20 Det organiske lag vaskedes, i nævnte rækkefølge, med 4 N saltsyre, vand og 5% natriumhydrogenkarbonatopløsning og saltvand, og tørredes. Koncentration i vakuum gav en remanens, som rensedes ved kromatografi (500 g silikagel; 20% ethylacetat i petroleumsether som elueringsmiddel, hvorved 25 man fik 1- (2-]0-toluensulfonyloxyethyl) cyklohexanol [E; n = 1, R1 + = —(CH2)5-3 som en olie.

En omrørt opløsning af 70 g lithiumbromid og 16,4 g 1-(2-p-toluensulfonyloxyethyl)cyklohexanol i 350 ml acetone opvarmedes under tilbagesvaling i 1 time. Den afkølede re-30 aktionsblanding koncentreredes delvist i vakuum og udrystedes derefter mellem 300 ml ether og vand. Ether-fasen vaskedes med vand og saltvand, tørredes og koncentreredes i vakuum, hvorved man fik 1-(2-bromethyl)cyklohexanol [Η; n = 1, R1 + R2= -(Ci^)^-] som en olie.

35 Til en isafkølet opløsning af 4,2 g 1-(2-bromethyl)- 25 DK 173457 B1 cyklohexanol, 5,6 ml triethylamin og 0,3 g 4-dimethyl-aminopyridin i 50 ml diklormetan, omrørt under en nitrogenatmosfære, sattes dråbevis 3,8 ml trimethylsilylklorid.

Efter yderligere 40 minutters omrøring på et isbad, fort-5 sattes omrøringen ved stuetemperatur i 16 timer. Reaktionsblandingen udrystedes mellem 200 ml ether og vand. Det organiske lag vaskedes i rækkefølge med vand (x2) og saltvand, tørredes og koncentreredes i vakuum, hvorved man fik en remanens. Denne rensedes ved kromatografi (150 g sili-10 kagel; 2% ether i petroleumsether som elueringsmiddel) efterfulgt af destillation, hvorved man fik titelforbindelsen som en olie. Kogepunkt 85-87°C/0,2 mmHg (Fundet: C, 47,44; H, 8,33; Br, 28,85. Cn^^OBrSi kræver C, 47,30; H, 8,30; Br, 28,61%), δ (100 MHz) 0,13 (9H, s), 1,1-1,8 15 (10H,m), 2,05, (2 H, m) og 3,4 (2H, m).

Præparation 6 1-(3-brompropyl)cyklopropyloxytri- methylsilan (Forbindelse 7)

Idet man følger fremgangsmåderne i den ovenfor 20 beskrevne rækkefølge til syntese af 2-bromethylanalogen (3) over seks trin (Præparationer 1 og 2), fremstilledes titelforbindelsen analogt under anvendelse af 3-acetyl-l-pro-panol som udgangsmateriale i stedet for 4-hydroxy- 2-butanon.

25 26 DK 173457 B1

Præparation 7: 6-Brom-2-methyl-2-trimethylsilyl- oxyhexan (Forbindelse 8)

Til en omrørt, isafkølet opløsning af 18,7 ml ethyl-5-brompentanoat (G, n=3) i 100 ml tør ether sattes 5 dråbevis i løbet af 1 time en filtreret opløsning af

Grignard's reagens, fremstillet udfra 10 g magnesium og 25 ml metyljodid i 200 ml tør ether. Efter yderligere 30 minutter på isbadet, fik reaktionsblandingens temperatur lov til at stige til stuetemperatur i løbet af 30 minutter, 10 før den blev hældt i en omrørt, isafkølet opløsning af 30 g ammoniumklorid i 200 ml vand. Efter at den kraftige reaktion var ophørt, fraskiltes etherlaget, og det vandige lag vaskedes med mere ether. De kombinerede ether-lag vaskedes med vand og saltvand, tørredes og koncentreredes i vakuum, 15 hvorved man fik det rå mellemprodukt carbinol H (n = 3, R1 2 = R = Me) som en lysegul olie. Denne opløstes i 130 ml diklormetan og 40 ml triethylamin, og 0,2 g 4-dimethyl-aminopyridin tilsattes. Den omrørte opløsning blev isafkølet under dråbevis tilsætning af 27 ml trimethylsilyl-20 klorid i løbet af 30 minutter. Reaktionsblandingen blev derefter omrørt ved stuetemperatur i 2 timer, før den udrystedes mellem 500 ml ether og 500 ml vand. Ether-laget vaskedes fire gange med vand, en gang med saltvand, og tørredes. Efter fjernelse af opløsningsmidlet i vakuum, 25 destilleredes remanensen, hvorved man fik et produkt med et kogepunkt på 103-105°C/11 mmHg. En 5 g portion af produktet rensedes ved kromatografi (150 g silikagel; 1% ether i petroleumsether som elueringsmiddel) og redestilleredes, hvorved man fik det rene bromid (8) som en olie, δ (300 30 MHz) 0,10 (9 H, s), 1,21 (6 H, s), 1,45 (4 H. m), 1,86 (2 H, m) og 3,42 (2 H, t, J 7) .

27 DK 173457 B1

Præparation 8 7-Brom-3-ethyl-3-trimethylsilyloxy heptan (Forbindelse 9)

Forbindelsen fremstilledes ifølge fremgangsmåden beskrevet i Præparation 7, bortset fra, at Grignard's 5 reagens fremstilledes udfra 45 g ethylbromid via mellemproduktet carbinol H (n = 3, R1 = R2 = Et) . j); kogepunkt 88°C/0,5 mmHg; δ (300 MHz) 0,09 (9H, s), 0,81 (6H, t), 1,30-1,55 (8H, m) , 1,84 (2h, m) og 3,41 (2H, t, J 7).

10 Præparation 9 7-Brom-2-methyl-2-trimethysilyloxy- heptan (Forbindelse 10)

Forbindelsen fremstilledes ifølge fremgangsmåden beskrevet i Præparation 7, bortset fra at ethyl-5-brompen-tanoat erstattedes med 26 g ethyl-6-bromhexanoat (G, n = 4) 15 via mellemproduktet carbinol H (n = 4, R1 = R2 = Me) . Det olieagtige bromid (10) havde et kogepunkt på 87-88°C/l mmHg and δ (300 MHz) 0,10 (9H, s), 1,20 (6H, s), 1,41 (6 H, m) , 1,89 (2H, m) og 3,41 (2H, t, J 7).

20 Præparation 10 8-Brom-3-methyl-2-trimethylsilyloxy oktan (Forbindelse 11)

Forbindelsen fremstilledes ifølge fremgangsmåden beskrevet i Præparation 7, bortset fra at ethyl-5-brompen-tanoatet erstattedes med 28 g ethyl-7-bromheptanoat (G, n = 25 5) via mellemproduktet carbinol H (n = 5, R1 = R2 = Me) .

28 DK 173457 B1

Præparation 11 2-[1-(2-Fenylsulfonylethyl)cyklo- propyloxy]tetrahydro-4H-pyran (Forbindelse 12) 1,30 g 2-[1-(2-g-Toluensulfonyloxyethyl)cyklopropyl-5 oxy]tetrahydro-4H-pyran (Forbindelse 4) opløstes i en i en for-blandet, omrørt opløsning af 0,45 g kalium-tert-butoxid og 0,50 g thiofenol i 10 ml Ν,Ν-dimethylformamid ved stuetemperatur. Efter få minutter begyndte dannelsen af et bundfald, og efter 30 minutter udrystedes blandingen mellem 10 50 ml ether og vand. Det organiske lag vaskedes i række følge med 2N natriumhydroxidopløsning, vand og saltvand.

Tørring og koncentration i vakuum gav en remanens, som rensedes ved kromatografi (50 g silikagel; 10% ether i petro-leumsether som elueringsmiddel, hvorved man fik 2-[l-(2-fe-15 nylthioethyl)cyklopropyloxy]tetrahydro-4H-pyran. Destillation af en portion gav en prøve til analyseformål, kogepunkt 12l-122°C/0.1 mmHg. (Fundet: C, 69,07; H, 8,01; S, 11,31. C16H2202S kræver C, 69,03; H, 7,97; S, 11,52%).

Til en omrørt opløsning af 0,43 g 2-[1-(2-fenylthio-20 ethyl)cyklopropyloxy]tetrahydro-4H-pyran i 5 ml metanol sattes 0,3 g natriumhydrogenkarbonat, 0,3 ml vandig natriumwolframatopløsning (2%) og 0,4 g brintoverilte (100 vol). Reaktionsblandingen omrørtes ved 50°C i 2 timer og afkøledes derefter og udrystedes mellem 50 ml diklormetan 25 og vand. Det organiske lag vaskedes med saltvand, tørredes og koncentreredes i vakuum. Det således dannede råprodukt destilleredes, hvorved man fik titel forbindelsen som en viskøs olie, kogepunkt 176-177°C/0,15 mmHg, (Fundet: C, 61,86; H, 7,19; S, 10,27. C16H2204S kræver C, 61,91; H, 7,14; S, 30 10,33%), δ (100 MHz) 0,5 (2H, m), 0,85 (2H, m), 1,2-2,4 (8H, m) , 3,1-3,9 (4H, m), 4,55 (IH, m), 7,6 (3H, m) , 7,9 (2H, m) .

s DK 173457 B1 29

Præparation 12 6-Hydroxy-6-methylheptylf enyl - sulfon (Forbindelse 13)

Til en oplosning af 14,0 g 7-brom-2-methyl-2-tri-methylsilyloxyheptan (10) i 55 ml metanol sattes ved stue-5 temperatur 0,2 ml ethanolisk hydrogenklorid (ca. 1 M) . Efter 10 minutters forløb koncentreredes opløsningen i vakuum (ved stuetemperatur) til konstant vægt. Remanensen blandedes i kloroform og rekoncentreredes til konstant vægt, hvorved man fik 7-brom-2-methyl-2-heptanol (Η, n = 4, R1 = 10 R2 = Me) som en kromatografisk homogen olie. Produktet opløstes i 10 ml THF og sattes ved stuetemperatur til en for--blandet opløsning af 6,7 g kalium-tert-butoxide og 3,6 ml thiofenol i 50 ml Ν,Ν-dimethylformamid. Efter få minutters forløb begyndte dannelsen af et bundfald, og efter 30 15 minutter udrystedes blandingen mellem 300 ml ethylacetat og 200 ml vand. Det organiske lag vaskedes, i nævnte rækkefølge, med 2 N natriumhydroxydopløsning, vand og saltvand.

Tørring og koncentrering i vakuum gav 6-hydroxy-6—methyl-heptylfenylsulfid som en kromatografisk homogen olie. Denne 20 opløstes i 60 ml metanol, og til den omrørte opløsning sattes 4,7 g natriumhydrogenkarbonat, 5 ml vandig natriumwol-framatopløsning (2%) og 11,8 ml brintoverilte (100 vol).

Den indledende eksotermiske reaktion, som fulgte, kontrolleredes ved samtidig isafkøling. Reaktionsblandingen omrør-25 tes derefter i 1 time ved 50°C. Efter afkøling udrystedes blandingen mellem 200 ml diklormetan og vand. Det vandige lag ekstraheredes med mere diklormetan, og de kombinerede diklormetanlag vaskedes med vand, saltvand og tørredes. Koncentrering i vakuum gav et råprodukt, som rensedes ved 30 kromatografi (150 g silikagel; ether som elueringsmiddel), hvorved man fik sulfonen (13) som en viskøs olie, δ (300 MHz) 1,18 (6H, s), 1,4 (7H, m), 1,75 (2H, m), 3,09 (2H, m), 7,5-7,75 (3H, m), 7,90 (2H, m).

35 Præparation 13 6-Hydroxy-6-methylhepty1difenyl -fosfinoxid (Forbindelse 14)

En opløsning af 1,7 g 7-brom-2-methyl-2-trimethylsilyloxyheptan (10) i 2 ml tør 30 DK 173457 B1 THF sattes dråbevis til en opløsning af lithiumdifenyl-fosfid [fremstillet ved behandling af 1,0 ml difenylfosfin i 5 ml tør THF ved 0°C under nitrogen med 4 ml n-butyl-li-thium (1.4 M i hexaner] ved -70°C i løbet af 5 minutter 5 (injektionssprøjte). Den lysegule opløsning fortyndedes med 100 ml petroleumsether og ekstraheredes med vand og saltvand, og tørredes. Koncentration i vakuum gav en olie (rå 6-methyl-6-trimethylsilyloxyheptyldifenylfosfin), som opløstes i 30 ml diklormetan og rystedes med 50 ml brint-10 overilte (6%) i 5 minutter. Den vandige fase skiltes fra den organiske fase og ekstraheredes med mere diklormetan.

De kombinerede, organiske faser vaskedes med saltvand, tørredes og koncentreredes i vakuum, hvorved man fik en olie (rå 6-methyl-6-trimethylsilyloxyheptyldifenylfosfin-15 oxid). Denne opløstes i 5 ml diklormetan og 30 ml metanol, som indeholdt lidt hydrogenklorid. Efter 10 minutter koncentreredes opløsningen i vakuum, hvorved man fik en olie. Denne krystalliseredes fra ether, hvorefter man fik fosfinoxydet (14) som nåle, δ (300 MHz) 1,17 (6 H, s), 20 1,30-1,50 (6H, m), 1,50-1,75 (3H, m), 2,26 (2H, m), 7,40-7,55 (6 H, m), 7,65-7,80 (4 H, m).

31 DK 173457 B1

Præparation 14 Forbindelserne 20

En omrørt oplosning af 0,75 g af selen-acetalen (1) i 5 ml tør THF afkøledes til -70°C under nitrogen og behandledes dråbevis via en injektionssprøjte med 0,7 ml n-butyl-5 -lithiumopløsning (1.5 M i hexan). Efter 10 minutter tilsattes dråbevis 0,36 g af forbindelse 3, og efter yderligere 10 minutter ved -70°C fjernedes kuldebadet, og reaktionsoplosningens temperatur fik lov til at stige til stuetemperatur. To timer senere fortyndedes reaktionsopløsningen med 10 50 ml ether og ekstraheredes med vand og saltvand. Ether- laget tørredes, og koncentreredes i vakuum, hvorved man fik en remanens, som rensedes ved kromatografi (100 g silika-gel; 2% ether i petroleumsether som elueringsmiddel), hvorved man fik forbindelse 20a (mindst polære isomer), δ (100 15 MH2) 0,06 (12H, s), 0,15 (9H, s), 0,56 (3H, s), 0,87 (9H, s), 0,90 (9H, s), 1,05 (3H, d, J 6), 1,95 (3H, s), 4,2 (IH, m), 4,5 (IH,m), 4,9 (2H, m), 5,8 (IH, d, J 11), 6,45 (IH, d, J 11); ^max 270 nm, og forbindelse 20b (mest polære isomer), δ (100 MHz) 0,06 (12H, s), 0,14 (9H, s), 0,57 (3H, 20 s), 0,87 (9H, s), 0,90 (9H, s), 0,25-0,8 (4H, m), 0,95 (3H, m), 1,96 (3H, s), 4,2 (IH, m), 4,5 (IH, m), 4,9 (2H, bs), 5,8 (IH, d, J 11), 6,45 (IH, d, J 11); 270 nm.

— — ITlCLJv

Præparation 15 Forbindelse 21

Til en omrørt isafkølet opløsning af 0,20 g forbin-25 delse 20a i 5 ml tor THF sattes en oplosning af 0,15 g tetra-n-butylammonium-fluoridtrihydrat i 1 ml THF. Efter omrøring i yderligere 10 minutter, udrystedes reaktionsopløsningen mellem 40 ml ethylacetat og 30 ml 2% natriumhydrogencarbonatopløsning, og det organiske lag 30 vaskedes med vand og saltvand, tørredes og koncentreredes. Remanensen rensedes ved kromatografi (30 g silikagel, 20% ether i petroleumsether som elueringsmiddel), hvorved man fik forbindelse 21a som nåle (fra ether-metanol), δ (100 MHz) 0,06 (12H, s), 0,56 (3H, s), 0,4-0,8 (4H, m), 0,87 35 (9H, s), 0,90 (9H, s), 1,05 (3H, d, J 6), 1,96 (3H, s), 4,2 (IH, m), 4,5 (IH, m), 4,95 (2H, m) , 5,8 (IH, d, J 11), 6,45 (IH, d, J 11); 270 nm.

32 DK 173457 B1

Lignende behandling af forbindelse 20b gav forbindelse 21b (mest polære isomer) som nåle (fra ether-meta-nol), δ (100 MHz) 0,06 (12H, s), 0,57 (3H, s), 0,4-0,85 (4H, m), 0,87 (9H, s), 0,90 (9H, s), 0,95 (3H, m), 1,98 5 (3H, s), 4,2 (IH, m), 4,5 (IH, m), 4.95 (2H, m), 5,8 (IH, d, J 11), 6,45 (IH, d, J 11); 270 nm.

Præparation 16 Forbindelse 22

Til en opløsning af 0,20 g af forbindelse 21a i 8 ml 10 diklormetan sattes ved stuetemperatur 0,5 g dihydropyran (95%) og 25 mg pyridinium-g-toluensulfonat. Efter 1 time fortyndedes reaktionsopløsningen med 70 ml ether og ekstra-heredes, i nævnte rækkefølge, med vand, 5% natriumhydrogen-carbonatopløsning og saltvand. Efter tørring og fjernelse 15 af opløsningsmidlet i vakuum, rensedes produktet ved kromatografi (30 g silikagel; 5% ether i petroleumsether som elueringsmiddel) , hvorefter man fik 22_ som nåle (fra ether--metanol), δ (100 MHz) 0,06 (12H, s), 0,56 (3H, s), 0,87 (9H, s), 0,90 (9H, s), 1,05 (3H, d, J 6), 1,95 (3H, s), 3,5 20 (IH, m), 3,9 (IH, m), 4,2 (IH, m), 4,5 (IH, m), 4,75 (IH, bs), 4,9 (2H, m), 5,8 (IH, d, J 11), 6,45 (IH, d, J 11); λ__v 270 nm. max DK 173457 B1 33

Præparation 17 Forbindelse 23 75 mg af forbindelse 22 opløstes i 0,5 ml ether, og 2 ml flydende svovldioxyd tilsattes (under afkøling). Svovldioxidet fik lov til at koge under tilbagesvaling i 1 time, 5 og hvorefter opløsningsmidlet fjernedes i vakuum til dannelse af en diastereoisomer blanding af svovldioxyd-adduk-ter (jf. Tetrahedron Letters, 1987, 28, 1337) af Forbindelse 22. Produktet (i en Pyrex-kolbe) opløstes i 3 ml toluen, og 0,2 g tri-n-butylstannan tilsattes. En nitrogenatmosfære 10 etableredes, og reaktionskolben vandkøledes (20°C) under belysning ved bestråling fra en højtryks Hg-lampe (type:

Hanau TQ 718Z2) i 1 time). Opløsningen koncentreredes derefter i vakuum, hvorved man fik en remanens, som rensedes ved kromatografi (15 g silikagel; 20% ether i 15 petroleumsether som elueringsmiddel). Det først eluerede var hovedfraktionen, 6 S-svovldioxydadduktet af forbindelse 23. Dette efterfulgtes af bifraktionen, 6 R-diastereo-isomeren. Fraktionerne, som indeholdt de to isomerer, kombineredes (hver giver det samme produkt i næste trin, 20 dog isoleredes en ren prøve af hver isomer til karakteriseringsformål) og koncentreredes til en olie. Denne opløstes eller suspenderedes sammen med 50 mg natriumhydrogen-karbonat i 3 ml 96% ethanol, og den omrørte blanding opvarmedes under tilbagesvaling under en nitrogenatmosfære i 90 25 minutter. Efter afkøling udrystedes reaktionsopløsningen mellem 20 ml ethylacetat og vand, og ethylacetat-laget vaskedes med saltvand og tørredes. Fjernelse af opløsningsmidlet i vakuum gav et produkt, som rensedes ved kromatografi (15 g silikagel; 10% ether i petroleumsether som 30 elueringsmiddel), hvorved man fik 23, ^rnax ^70 nm.

Metode 1 Fremstilling af Forbindelse III (R^ = = H) fra selen-acetalen (1) og

sidekædefragment A

35 34 DK 173457 B1

En omrørt opløsning af 0,75 g af selen-acetalen (1) i 5 ml tør THF afkøledes til -70°C under nitrogen og behandledes dråbevis via en injektionssprøjte med 0,7 ml n-butyl-lithi-umopløsning (1.5 M i hexan). Efter 10 minutters forløb til-5 sattes sidekædefragmentet A dråbevis, og efter yderligere 10 minutter ved -70°C fjernedes kølebadet, og reaktionsopløsningens temperatur fik lov til at stige til stuetemperatur. To timer senere fortyndedes reaktionsopløsningen med 50 ml ether og ekstraheredes med vand og saltvand. Ether-10 laget tørredes og koncentreredes i vakuum, hvorved man fik en råolie, som indeholdt forbindelse II (R6 = H, R1 = SeMe) som en blanding af diastereoisomererne ved C-22. Denne opløstes i 2 ml ether, og 15 ml flydende svovldioxyd (under afkøling) og 0,2 ml vand tilsattes. Svovldioxidet fik lov 15 til at koge under tilbagesvaling i en time, og derefter fjernedes opløsningsmidlet i vakuum, hvorved man fik en diastereoisomer blanding af svovldioxydaddukterne (jf.

Tetrahedron Letters, 1987, 2_8, 1337) af forbindelse II (R6 = H, R7 = SeMe). Produktet (i en Pyrexkolbe) opløstes i 20 ml 20 toluen, og 2 g tri-n-butylstannan tilsattes. En nitrogen-atmosfære etableredes, og reaktionskolben blev vandkølet (20°C) under belysning ved bestråling fra en højtryks Hg-lampe (type: Hanau TQ 718Z2) i 2 timer. Opløsningen koncentreredes derefter i vakuum, hvorved der dannedes en 25 remanens, som rensedes ved kromatografi (150 g silikagel; 40% ether i petroleumsether som elueringsmiddel). Først blev hovedfraktionen, 6 S-svovldioxydadduktet af forbindelse III (R3 = R4 = H) elueret. Denne efterfulgtes af bifraktionen, 6 R-diastereoisomeren. Fraktionerne, som indeholdt 30 de to isomerer, kombineredes (hver giver det samme produkt i næste trin, dog isoleredes en ren prøve af hver isomer til karakteriseringsformål) og koncentreredes til en olie.

Denne opløstes eller suspenderedes sammen med 0,4 g natriumhydrogenkarbonat i 10 ml 96% ethanol, og den omrørte 35 blanding opvarmedes under tilbagesvaling under en nitrogenatmosfære i 90 minutter. Efter afkøling udrystedes reaktionsopløsningen mellem 50 ml ethylacetat og vand, og 35 DK 173457 B1 ethylacetat-laget vaskedes med saltvand og tørredes. Fjernelse af opløsningsmidlet i vakuum gav et produkt, som rensedes ved kromatografi (30 g silikagel; 30% ether i petro- 3 leumsether som elueringsmiddel), hvorved man fik III (R = 5 R4 = H) .

Det skal bemærkes at i Præparationerne 18, 19, 20, 34, 35, 36, 38, 39 og 46 skifter betydningen af R5 i mellemprodukterne fra R^ = SiMe^ i II til R^ = H efter behandling med svovldioxyd.

10

Præparation 18 Forbindelse 24

Forbindelsen fremstilledes under anvendelse af Metode 1, hvori s idekæde fragment et var 0,42 g af forbindelse 6; 24_ δ (100 MHz) 0,06 (12H, s), 0,54 (3H, s), 0,87 (9H, s), 0,90 15 (9H, s), 4,2 (IH, m), 4,5 (IH, m), 4,9 (2H, m), 5,8 (IH, d, J 11), 6,45 (IH, d, J 11); Xmax 270 nm.

Præparation 19 Forbindelse 25

Forbindelsen fremstilledes under anvendelse af Metode 20 1, hvor sidekædefragmentet var 0,40 g af forbindelse 8. 25; δ (300 MHz) 0,05 (12H, s), 0,53 (3H, s), 0,85 (9H, s), 0,89 (9H, s), 0,91 (3H, d, J 6), 1,0-2,1 (31H, m, inklusive 1,20 {6H, s)), 2,30 (IH, bd, J 14), 2,56 (IH, dd, J 14 og 5), 2,86 (IH, bd, J 11), 4,21 (IH, m), 4,53 (IH, m), 4,93 (IH, 25 bs), 4,98 (IH, bs,), 5,81 (IH, d, J 11), 6,45 (IH, d, J 11); Xmax 270 h™·

Præparation 20 Forbindelse 26

Forbindelsen fremstilledes under anvendelse af Metode 30 1, hvori sidekædefragmentet A var 0,42 g af forbindelse 10.

26; δ (300 MHz) 0,05 (12H, s), 0,53 (3H, s), 0,85 (9H, s), 0,89 (9H, s), 0,9 (3H, m), 0,95-2,05 (33H, m, inklusive 1,20 (6H, s)), 2,29 (IH, bd, J 14), 2,55 (IH, dd, J 14 og 5), 2,86 (IH, bd, J 12), 4,20 (IH, m), 4,52 (IH, m), 4,93 35 (IH, bs), 4,97 (IH, bs,), 5,81 (IH, d, J 11), 6,45 (IH, d, J 111 ·' \ax 270 ™»· 36 DK 173457 B1

Metode 2 Fremstilling af forbindelserne III

[R3 + R4 = binding (22E)] fra Aldehyd (2) og Sidekaedef ragment B 5 En opløsning af lithium-di-iso-propylamid (0.4 M i THF-hexaner, 3:1) tilsattes dråbevis via en injektionssprøjte (10 minutter) til en opløsning af sidekædefragmen-tet B i 8 ml tør THF, omrørt ved -25°C under nitrogen. Den resulterende, gule opløsning afkøledes til -40^0, og en 10 opløsning af 1,21 g af aldehydet (2) i 8 ml tør THF tilsattes dråbevis (5 minutter). Efter omrøring i 30 minutter behandledes reaktionsblandingen med 10 ml ether og 1 ml vand og udrystedes mellem 100 ml ethylacetat og 50 ml vand. Det organiske lag vaskedes med saltvand, tørredes og 15 koncentreredes i vakuum, hvorved man fik en rå olie indeholdende forbindelse II (R6 = S(02)Ph, R7 = OH) som en blanding af diastereoisomerer ved C-22 og C-23. Denne blev opløst i 5 ml ethylacetat og fortyndedes med 50 ml metanol (mættet med og indeholdende suspenderet dinatriumhydrogen-20 fosfat). Til den isafkølede blanding sattes 15 g natrium- amalgam (ca. 5% Na), og reaktionsblandingen omrørtes ved 5°C under nitrogen i 15 timer. Blandingen udrystedes derefter mellem 200 ml ethylacetat og 200 ml vand (dekantering fra kviksølvet), og det organiske lag vaskedes med saltvand, 25 tørredes og koncentreredes i vakuum. Rensning af remanensen ved kromatografi gav III (R3 + R4 = binding (22E)).

37 DK 173457 B1

Præparation 21 Forbindelse 27

Denne forbindelse fremstilledes under anvendelse af Metode 2, hvori sidekædefragmentet B var 0,66 g af forbindelse 13, og 12 ml af lithium-iso-propylamid-opløsningen 5 anvendtes. Mellemproduktet II har R5 = OH. Kromatografien udfortes på 150 g silikagel med 10% ethylacetat i petrole-umsether som elueringsmiddel. 27; δ (300 MHz) 0,06 (12H, s), 0,54 (3H, s), 0,86 (9H, s), 0,90 (9H, s), 1,00 (3H, d, J 7), 1,15-2,1 (29H, m, inklusive 1,20 (6H, s)), 2,30 (IH, 10 bd, J 14), 2,55 (IH, dd, J 14 og 5), 2,86 (IH, bd, J 12), 4,21 (IH, m), 4,53 (IH, m), 4,93 (IH, bs). 4,98 (IH, bs), 5,26 (2H, m), 5,81 (IH, d, J 11), og 6,45 (IH, d, J 11); λ 270 run. max 15 Metode 3 Fremstilling af Forbindelse IV fra

den tilsvarende Forbindelse III

En blanding af 0,10 g anthracen, 20 mg triethylamin og 0,20 g af forbindelse III i 15 ml toluen, omrørt under en nitrogenatmosfære i en Pyrex-kolbe nedsænket i et vand-20 bad ved 20°C, belystes ved bestråling fra en højtryks Hg-lampe (type: Hanau TQ 718Z2) i 30 minutter. Reaktionsblandingen filtreredes og koncentreredes i vakuum, hvorved man fik en remanens. Denne rensedes ved kromatografi (30 g silikagel; 30% ether i petroleumsether som elueringsmid-25 del), hvorved man fik IV.

Præparation 22 Forbindelse 28

Forbindelsen fremstilledes under anvendelse af Metode 3, hvori udgangsmateriale III var forbindelse 23. I denne 30 præparation var det anvendte elueringsmiddel 5% ether i petroleumsether. 28; λ__„ 265 nm.

38 DK 173457 B1

Præparation 23 Forbindelse 29

Forbindelsen fremstilledes under anvendelse af Metode 3, hvori udgangsmateriale III var forbindelse 24. 29; δ (300MHz) 0,06 (12H, s), 0,53 (3H, s), 0,88 (18H, s), 0,92 5 (3H, d, J 6) , 1-2,05 (31H, m), 2,21 (IH, dd, J 13 og 7), 2,45 (IH, dd, J 13 og 3), 2,82 (IH, bd, J 12), 4,19 (IH, m), 4,38 (IH, m), 4,87 (IH, d, J2), 5,18 (IH, m) , 6,02 (IH, d, J 11), 6,24 (IH, d, J 11); 265 rim.

10 Præparation 24 Forbindelse 30

Forbindelsen fremstilledes under anvendelse af Metode 3, hvori udgangsmateriale III var forbindelse 25. 3j3; δ (300 MHz) 0,05 (12H, s), 0,52 (3H, s), 0,87 (18H, s), 0,91 (3H, m) , 0,95-2,05 (31H, m, inklusive 1,20 (6H, s)), 2,20 15 (IH, dd, J 13 og 7), 2,44 (IH, dd, J 13 og 4), 2,81 (IH, bd, J 12), 4,18 (IH, m), 4,36 (IH, m), 4,86 (IH, d, J 2), 5.17 (IH, m), 6,01 (IH, d, J 11), 6,23 (IH, d, J 11); λ 265 run. max 20 Præparation 25 Forbindelse 31

Forbindelsen fremstilledes under anvendelse af Metode 3, hvori udgangsmateriale III var forbindelse 26. 3^; δ (300 MHz) 0,05 (12H, s), 0,52 (3H, s), 0,87 (18H, s), 0,9 (3H, m) , 0,9-2,05 (33H, m, inklusive 1,20 (6H, s)), 2,21 25 (IH, dd, J 13 og 7), 2,44 (IH, dd, J 13 og 4), 2,81 (IH, bd, J 11), 4,18 (IH, m), 4,36 (IH, m), 4,86 (IH, d, J 2), 5.17 (IH, m), 6,01 (IH, d, J 11), 6,23 (IH, d, J 11); λmax 265 nm.

39 DK 173457 B1

Præparation 26 Forbindelse 32

Forbindelsen fremstilledes under anvendelse af Metode 3, hvori udgangsmateriale III var forbindelse 27. 32; δ (300MHz) 0,06 (12H, s), 0,53 (3H, s), 0,87 (18H, s), 1,0 5 (3H, d, J 7), 1,1-2,1 (29H, m, inklusive 1,20 (6H, s)), 2,2 (IH, dd, J 13 og 7), 2,45 (IH, dd, J 13 og 4), 2,81 (IH, bd, J 11), 4,2 (IH, m), 4,35 (IH, m), 4,85 (IH, m) , 5,2 (3H, m), 6,01 (IH, d, J 11), 6,23 (IH, d, J 11); Amax 265 nm.

10

Præparation 27: 1,3(R)-Decandiol [D (n = 1, R1 = H, R2 = Hep)]

En opløsning af 25,7 g ethyl-3-oxodecanoat i 360 ml ethanol og 260 ml vandig kaliumhydroxyd (1 M) omrørtes ved 15 stuetemperatur i 18 timer. Opløsningsmidlet fjernedes i vakuum, hvorved man fik rå kalium-3-oxodecanoat.

640 g Bagegær (Saccharomyces cerevisiae, Malteserkors®, De danske Spritfabrikker, 640 g), 720 g D-glucose, 1,6 g kaliumhydrogenfosfat og 0,8 g magnesiumsulfat i 2 1 20 vand omrørtes ved stuetemperatur i 30 minutter. En opløsning af ovennævnte kalium-3-oxodecanoat i 1,5 1 vand tilsattes. Blandingen omrørtes ved stuetemperatur, og pH’et holdtes mellem 6,0 og 6,5 ved automatisk titrering med 1 M kaliumhydroxyd eller 1 M citronsyre. Efter 48 timer til-25 sattes Celite ®, og efter omrøring i yderligere 30 minutter filtreredes blandingen. Filtratet gjordes surt til pH 2,5 med koncentreret saltsyre, ekstraheredes med 2x21 methy-lenklorid, tørredes og inddampedes i vakuum, hvorved man fik rå 3(R)hydroxydecanoinsyre.

30 12 g af den rå 3-hydroxydecanoinsyre opløstes i 100 ml ether, og 0,15 mol diazomethan i ca. 100 ml ether tilsattes langsomt.

Overskydende diazomethan destrueredes med 2 ml eddikesyre. Reaktionsblandingen vaskedes med mættet natrium-35 hydrogenkarbonat, tørredes og inddampedes i vakuum. Remanensen rensedes ved kromatografi (180 g silikagel, ether/-pentan 1:2 som elueringsmiddel), hvorved man fik methyl--3(R)-hydroxydecanoat som en olie. δ (300 MHz) 0,88 (3H, 40 DK 173457 B1 t), 1,15-1,60 {12H), 2,42 (IH, dd, J 16 og 9), 2,53 (IH, dd, J 16 og 3), 3,71 (3 H, s) og 4,01 (1 H, m) .

Optisk renhed (>98% e.e.) bestemtes ved 1HNMR kiral skift reagens undersøgelser (cf. M. Hirama, M. Shimizu and 5 M. Iwashita, Chem. Commun. 1983 599-600).

En opløsning af 3,5 g methyl-3(R)-decanoat i 15 ml tør ether sattes langsomt til en suspension af 0,50 g lithiumaluminiumhydrid i 25 ml tør ether, og blandingen om-rørtes ved stuetemperatur i 40 minutter. Overskydende hy-10 drid destrueredes ved dråbevis tilsætning af 5 ml vand.

Efter centrifugering ekstraheredes bundfaldet med 3 x 40 ml ethylacetat. De kombinerede organiske opløsninger vaskedes med 50 ml vand, tørredes og inddampedes til tørhed i vakuum, hvorved man fik titelforbindelsen som en olie. δ (300 15 MHz) 0,88 (3H, t), 1,15-1,60 (12H, m). 1,71 (2H, m), 2,30-2,55 (2H, m) og 3,87 (3H, m).

Præparation 28; l-Jod-3(R)-trimethylsilyloxydecan (Forbindelse 16) 20 En opløsning af 2,5 g 3(R)-decandiol i 20 ml pyridin afkøledes til -20°C, og 3,0 g 4-toluensulfonylklorid i 20 ml pyridin tilsattes i løbet af 20 minutter. Efter 30 minutters omrøring tilsattes 4 ml vand, efterfulgt af 30 ml methylenklorid. Blandingen vaskedes med 2 x 50 ml saltsyre 25 (1 M) og 50 ml natriumhydroxyd (1 M), tørredes og inddam pedes i vakuum. Remanensen (rå 1-(4-toluensulfonyloxy)--3(R)-decanol) kogtes under tilbagesvaling med 9 g natrium-jodid i 110 ml i 1,5 timer. Efter afkøling filtreredes blandingen, og filtratet inddampedes til tørhed i vakuum.

30 Remanensen opløstes i 100 ml methylenklorid, vaskedes med 100 ml vand og 100 ml natriumhydroxydopløsning (1 M), tørredes og inddampedes. Kromatografi (60 g silikagel, methylenklorid/ethylacetat 20:1 som elueringsmiddel) gav l-jod-3(R)-decanol som en olie, δ (300 MHz) 0,89 (3h, t), 35 1,15-1,60 (13H, m), 1,92 (2H, m), 3,32 (2H, m) og 3,72 (IH, m) .

Til en opløsning af 490 mg l-jod-3(R)-decanol i 10 ml methylenklorid sattes 336 mg trimethylsilylklorid og 398 mg 41 DK 173457 B1 N-ethyldiisopropylamin. Efter omrøring i 1 time, vaskedes blandingen med 10 ml fosfat-buffer (pH 6,5, 0.066 M) og 10 ml saltvand, tørredes og inddampedes i vakuum. Remanensen rensedes ved kromatografi (20 g silikagel, methylenklorid 5 som elueringsmiddel), hvorved man fik titelforbindelsen som en olie, δ (300 MHz) 0,13 (9H, s), 0,87 (3H, t), 1,15-1,50 (12H, m), 1,92 (2H, m), 3,21 (2H, m) og 3,70 (IH, m).

Præparation 29: l-Jod-3(S)-trimethylsilyloxybutan 10 (Forbindelse 15a) l-Jod-3(S)-butanol fremstilledes ved anvendelse af den i Præparation 28 beskrevne metode, men idet man erstattede 1,3 (R) -decandiol med 1,3 (£>) -butandiol. Mellemproduktet 1-jod-3(S)butanol rensedes ved destillation, kogepunkt 15 52-54°C/0,5 mmHg; δ (300 MHz) 1,24 (3H, d, J 6), 1,60 (IH, bd), 1,97 (2H, m), 3,29 (2H, t, J 7) og 3,93 (IH, m).

15a; δ (300 MHz) 0,14 (9H, s), 1,17 (3H, d, J 6), 1,93 (2H, m) , 3,22 (2H, m) og 3,87 (IH, m) .

20 Præpara t i on 30: l-Jod-3(R)-trimethylsilyloxybutan (Forbindelse 15b)

Titel forbindelsen fremstilledes ved at anvende den i Præparation 28 beskrevne fremgangsmåde, men idet man erstattede 1,3(R)-decandiol med 1,3(R)-butandiol.

25 15b; δ (300 MHz) 0,14 (9H, s), 1,17 (3H, d, J 6), 1,93 (2H, m) , 3,22 (2H, m) og 3,87 (lH, m) .

Præparation 31: 6-Brom-3-ethyl-3-trimethylsilyloxy- hexan (Forbindelse 17) 30 Forbindelsen fremstilledes ifølge den i Præparation 7 beskrevne fremgangsmåde, bortset fra at Grignard's reagens fremstilledes udfra 45 g ethylbromid, og ethyl-5—brompenta- noatet erstattedes med 23 g ethyl-4-bromburyrat (G, n = 2) 1 2 via mellemproduktet carbinol H (n = 2, R = R =Et). Det 35 olieagtige bromid (17) havde kogepunktet 52-53°C/0, 1 mmHg; δ (300MHz) 0,09 (9H, s), 0,82 (6H, t, J7), 1,50 (6H, m), 1,85 (2H, m) og 3,40 (2H, t, J 7).

42 DK 173457 B1

Præparation 32: 8-Brom-4-propyl-4-trimethylsilyloxy oktan (Forbindelse 18)

Forbindelsen fremstilledes ifølge den i Præparation 7 5 beskrevne fremgangsmåde, bortset fra at Grignard’s reagens fremstilledes udfra 51 g propylbromid via mellemproduktet carbinol H (n = 3, R1 = R2 = Pr). Det olieagtige bromid (18) havde kogepunktet 102°C/0,5 mmHg; δ (300 MHz) 0,08 (9H, s), 0,88 (6H, t, J 7), 1,15-1,50 (12H, m), 1,84 (2H, m) og 10 3,41 (2H, t, J 7) .

Præparation 33: 5-Hydroxy-5-methylhexylfeny1- sulfon (Forbindelse 19)

Forbindelsen fremstilledes ved at følge 15 fremgangsmåden i Præparation 12, bortset fra at der anvendes 6-brom-2-methyl-2-trimethylsilyloxyhexan (forbindelse 8) som udgangsmateriale, via det tilsvarende l 2 mellemprodukt 6-brom-2-methyl-2-hexanol (Η, n = 3, R = R =

Me) og 5-hydroxy-5-methylhexylfenylsulfid. 19; δ (300 MHz) 20 1,17 (6H, s), 1,42 (4H, m), 1,59 (IH, bs), 1,72 (2H, m), 3,11 (2H, m), 7,5-7,7 (3H, m) og 7,90 (2H, m).

Præparation 34: Forbindelse 39

Forbindelsen fremstilledes ved at anvende Metode 1, 25 hvori sidekædefragmentet A var 0,44 g af forbindelse 15b.

29; δ (300 MHz) 0,06 (12H, s), 0,53 (3H, s), 0,85 (9H, S), 0,89 (9H, s), 0,92 (3H, d, J 7), 1,00-2,10 [24H, m, inklusive 1,18 (3H, d, J = 6)], 2,30 (IH, bd ), 2,55 (IH, dd, J 14 og 6), 2,86 (IH, bd), 3,79 (IH, m), 4,21 (IH, m),

30 4,53 (IH, m) , 4,93 (IH, m) , 4,98 (IH, m) , 5,81 (IH, d, J

11) og 6,45 (IH, d, J 11).

43 DK 173457 B1

Præparation 35: Forbindelse 40

Forbindelsen fremstilledes ved at anvende Metode 1, hvori sidekædefragmentet A var 0,44 g af forbindelse 15b £0 δ (300 MHz) 0,06 (12H, s), 0,53 (3H, s), 0,85 (9H, s), 0,89 5 (9H, s), 0,92 (3H, d, J 7), 1,00-2,10 [24H, m, inklusive (3H, d, J = 6)], 2,30 (IH, bd ), 2,55 (IH, dd, J 14 og 6), 2,86 (IH, bd), 3,79 (IH, m), 4,21 (IH, m), 4,53 (IH, m) , 4,93 (IH, m), 4,98 (IH, m), 5,81 (IH, d, J 11) og 6,45 (IH, d, J 11) .

10

Præparation 36: Forbindelse 41

Forbindelsen fremstilledes ved at anvende Metode 1, hvori sidekædefragmentet A var 0,57 g af forbindelse 16. 4£ δ (300 MHz) 0,06 (12H, m), 0,53 (3H, s), 0,60-2,10 [57H, m, 15 inklusive 0,85 (9H, s), 0,89 (9H, m)], 2,30 (IH, m), 2,56 (IH, m) , 2,86 (IH, m), 3,58 (IH, m), 4,21 (IH, m), 4,52 (IH, m) , 4,93 (IH, m), 4,98 (IH, m), 5,81 (IH, d, J 11) og 6,45 (IH, d, J 11).

20 Præparation 37; Forbindelse 42

Forbindelsen fremstilledes ved at anvende Metode 2, hvori sidekædefragmentet B var 0,63 g af forbindelse 19, og 12 ml af lithium-di-iso-propylamid-opløsningen anvendtes.

Der benyttedes følgende modifikation: Før tilsætningen af 25 ether og vand til reaktionsblandingen tilsattes dråbevis 0,6 ml benzoylchlorid, og blandingens temperatur fik lov til at stige til 0°C og omrørtes ved denne temperatur i 30 minutter. Forbindelse II har R® = S(C>2)Ph og R7 = 0C(0)Ph, og R5 = OH. Kromatografien af III udførtes på 150 g 30 silikagel med 40% ether i petroleumsether som elueringsmiddel. £2/ δ (300 MHz) 0,06 (12H, s), 0,54 (3H, s), 0,86 {9H, s), 0,90 (9H, s), 1,00 (3H, d, J 7), 1,15-2,1 (27H, m, inklusive 1,20 (6H, s)), 2,30 (IH, bd, J 14), 2,55 (IH, dd, J 14 og 5), 2,86 (IH, bd, J 12), 4,21 (IH, m) , 35 4,53 (IH, m) , 4,93 (IH, bs), 4,98 (IH, bs), 5,28 (2H, m), 5,81 (IH, d, J 11) og 6,45 (IH, d, J 11); 270 nm.

lueiX

44 DK 173457 B1

Præparation 38: Forbindelse 43

Forbindelsen fremstilledes ved anvendelse af Metode 1, hvori sidekædefragment A var 0,47 g af forbindelse 9. I denne præparation var det anvendte elueringsmiddel i den 5 endelige kromatografi 20% ether i petroleumsether. 43/ δ (300MHz) 0,06 (12H, m), 0,53 (3H, s), 0,60-2,10 [56H, m, inklusive 0,86 (9H, s), og 0,89 (9H, s)], 2,30 (IH, m), 2,55 (IH, m), 2,86 (IH, m), 4,21 (IH, m), 4,53 (IH, m), 4,93 (IH, m), 4,98 (IH, m), 5,82 (IH, d, J 11) og 6,45 (IH, 10 d, J 11) .

Præparation 39: Forbindelse 44

Forbindelsen fremstilledes ved at anvende Metode 1, hvori sidekædefragmentet A var 0,56 g af forbindelse 18. I 15 denne præparation var det anvendte elueringsmiddel i den endelige kromatografi 15% ether i petroleumsether. 44; δ (300MHz) 0,05 {12H, m), 0,53 (3H, s), 0,60-2,10 [60H, s, inklusive 0,86 (9H, s) og 0,89 (9H, s)], 2,30 (IH, m), 2,55 (IH, m), 2,86 (IH, m), 4,21 (IH, m), 4,52 (IH, m), 4,93

20 (IH, m), 4,98 (IH, m), 5,81 (2H, d, J 11) og 6,45 (IH, d, J

11) ·

Præparation 40: Forbindelse 45

Forbindelsen fremstilledes ved at anvende Metode 3, 25 hvori udgangsmateriale III var forbindelse 39. 45/ δ (300 MHz) 0,06 (12H, s), 0,52 (3H, s), 0,70-2,1[45H, m, inklusive 0,87 (18H, s), 1,18 (3H, d, J 6)], 2,20 (IH, m), 2,44 (IH, m), 2,81 (IH, m), 3,79 (IH, m), 4,18 (lH, m),

4,36 (IH, m), 4,86 (IH, m), 5,17 (IH, m), 6,00 (IH, d, J

30 11) og 6,23 (IH, d, J 11); 265 nm.

45 DK 173457 B1

Præparation 41: Forbindelse 46

Forbindelsen fremstilledes ved at anvende Metode 3, hvori udgangsmateriale III var forbindelse 40. 4£; δ (300 MHz) 0,06 (12H, s), 0,52 (3H, s), 0,70-2,10 [45H, m, 5 inklusive 0,87 (18H, s), 1,18 (3H, d, J 6) ] , 2,20 (IH, m), 2,44 (IH, m), 2,81 (IH, m), 3,79 (IH, m), 4,18 (IH, m),

4,36 (IH, m), 4,86 (IH, m), 5,17 (IH, m), 6,00 (IH, d, J

11) og 6,23 (IH, d, J 11); Xmax 265 nm.

10

Præparation 42: Forbindelse 47

Forbindelsen fremstilledes ved at anvende Metode 3, hvori udgangsmateriale III var forbindelse 41. _47; δ (300 MHz) 0,06 (12H, m), 0,52 (3H, s), 0,60-2,10 [57H, m, 15 inklusive 0,87 (18H, s)], 2,20 (IH, m), 2,43 (IH, m), 2,81 (IH, m), 3,57 (IH, m), 4,18 (IH, m), 4,37 (IH, m), 4,86 (IH, m), 5,17 (IH, m), 6,00 (IH, d, J 11) og 6,23 (IH, d, j U); Nnax 265 ™“· 20 Præparation 43 Forbindelse 48

Forbindelsen fremstilledes ved at anvende Metode 3, hvori udgangsmateriale III var forbindelse 42. 48: δ (300 MHz) 0,06 (12H, s), 0,53 (3H, s), 0,87 (18H, s), 1,0 (3H, d, J 7), 1,1-2,1 (27H, m, inklusive 1,20 (6H, s)), 2,2 (IH, 25 dd, J 13 og 7), 2,45 (IH, dd, J 13 og 4), 2,81 (IH. bd, j 11), 4,18 (IH, m), 4,35 (IH, m), 4,85 (IH, m), 5,16 (IH, m), 5,27 (2H, m), 6,01 (IH, d, J 11), 6,23 (IH, d, J 11); λ 265 nm. max 46 DK 173457 B1

Præparation 44: Forbindelse 49

Forbindelsen fremstilledes ved at anvende Metode 3, hvori udgangsmateriale III var forbindelse 43. I denne præparation var det anvendte elueringsmiddel 10% ether i 5 petroleumsether. 49; δ (300 MHz) 0,05 (12H, m), 0,52 (3H, s), 0,60-2,10 [ 56H, m, inklusive 0,82 (6H, t), 0,87 (18H, s), 0,90 (3H, d) og 1,45 (4H, q)], 2,20 (IH, m), 2,44 (IH, m), 2,81 (IH, m), 4,18 (IH, m), 4,36 (IH, m), 4,86 (IH, m), 5,17 (IH, m), 6,00 (IH, d, J 11), og 6,23 (IH, d, J 11).

10

Præparation 45; Forbindelse 50

Forbindelsen fremstilledes ved at anvende Metode 3, hvori udgangsmaterialet III var forbindelse 44. I denne præparation var det anvendte elueringsmiddel 10% ether i 15 petroleumsether. 5_0; δ (300 MHz) 0,05 (12H, m) , 0,52 (3H, s), 0,60-2,10 [60H, m, inklusive 0,87 (18H, s)], 2,21 (IH, m) , 2,43 (IH, m) , 2,81 (IH, tn), 4,18 (IH, m) , 4,37 (IH, m) , 4,86 (IH, m), 5,17 (IH, m), 6,00 (IH, d, J 11), og 6,23 (IH, d, J 11).

20

Præparation 46 Forbindelse 57

Forbindelsen fremstilledes ved at anvende Metode 1, hvori sidekædefragmentet A var 0,42 g af forbindelse 17; 57; δ (300 MHz) 0,05 (12H, bs), 0,53 (3H, s), 0,85 (6H, t, 25 J 7,5), 0,86 (9H, bs), 0,89 <9H, bs), 0,91 (3H, d, J 6), [0,98-2,10 (27H, m, inklusive 1,45 (4H, q, J 7,5)1, 2,30 (IH, m), 2,56 (IH, m), 2,86 (IH, m), 4,21 (IH, m) , 4,52 (IH, m), 4,93 (IH, m), 4,98 (IH, m), 5,82 (IH, d, J 11), 6,45 (IH, d, J 11).

30

Præparation 47: Forbindelse 58

Forbindelsen fremstilledes ved at anvende Metode 3, hvori udgangsmaterialet III var forbindelse 57. 5j) δ (300 MHz) 0,05 (12H, bs), 0,52 (3H, s), 0,8-2,1 [54H. m, 35 inklusive 0,84 (6H, t, J 7,5) og 0,87 (18H, s) og 1,45 (4H, q, J 7,5)1, 2,20 (lH, m), 2,45 (IH, m), 2,80 (IH, m), 4,18 (IH, m), 4,36 (IH, m), 4,86 (IH, m), 5,16 (IH, m), 6,00 (IH, d, J 11) og 6,22 (IH, d, J 11).

47 DK 173457 B1

Præparation 48 l-Brom-4-propyl-4-trimethylsilyl- oxy-heptan (Forbindelse 60)

Forbindelsen fremstilledes ifølge den i Præparation 7 5 beskrevne fremgangsmåde, bortset fra at Grignard's reagens fremstilledes udfra 51 g propylbromid, og ethyl-4-brompen-tanoatet erstattedes med 23 g ethyl-4-bromburyrat (G, n = 4) via mellemproduktet karbinol H (n = 2, R1 = R2 = Pr) . Den olieagtige bromid (60) havde kogepunkt 69-70°C/l mmHg og δ 10 (300 MHz) 0,08 (9H, s), 0,88 (6H, t) , 1,15-1,60 (10H, m), 1,85 (2H, m) og 3,39 (2H, t, J 6,8).

Præparation 49 1(S), 3(R) -bis-tert-butyldimethyl silyloxy-20(S)-hydroxymethyl-9,10 15 secopregna-5(E),7(E),10)-trien (Forbindelse 61)

En omrørt, isafkølet opløsning af 5 g af aldehyd 2 i 20 ml THF og 70 ml ethanol behandledes med 0,35 g natri-um-borhydrid. Efter 10 minutters forløb udrystedes reak-20 tionsblandingen mellem ethylacetat og vand, og det organiske lag vaskedes med saltvand og tørredes. Koncentrering i vakuum gav titelforbindelsen, δ (300 MHz) 0,05 (12H, m),

0,56 (3H, s), 0,85 (9H, s), 0,89 (9H, s), 1,05 (3H, d, J

7), og 0,9-2,1 (15H, m), 2,31 (IH, bd), 2,55 (IH, dd, J 14 25 og 5), 2,87 (IH, bd), 3,38 (lH, dd, J 10 og 7), 3,65 (IH. dd, J 10 og 3), 4,21 (IH, m), 4,52 (IH, m), 4,93 (IH, bs), 4,98 (IH, bs), 5,82 (IH, d, J 11) og 6,45 (IH, d, J 11).

48 DK 173457 B1

Præparation 50 1(S),3(R)-bis-tert-butyldimethyl silyloxy-20(S)-p-toluensulfonyloxy methyl)-9,10-secopregna)-5(E),7(E), 10(19)-trien (Forbindelse 62) 5 5 g af forbindelse 61 opløstes i 25 ml dichlormethan og 3 ml pyridin, og opløsningen omrørtes og isafkøledes under tilsætning af 2,5 g p-toluensulfonylklorid. Reaktionsblandingen fik lov til at stå ved 5°C natten over, før den udrystedes mellem ethylacetat og vand. Det organiske 10 lag vaskedes, i nævnte rækkefølge, med mættet kobbersulfat-opløsning (2x), vand, 5% natriumhydrogencarbonatopløsning og saltvand, og tørredes derefter og koncentreredes i vakuum. Remanensen rensedes ved kromatografi (200 g silika-gel; 5% ether i petroleumsether som elueringsmiddel), 15 efterfulgt af krystallisation fra ether-methanol, hvorved man fik titelforbindelsen som nåle, δ (300 MHz) 0,05 (12H, m), 0,50 (2H, s), 0,85 (9H, s), 0,89 (9H, s), 0,99 (3H, d, J 7) , 1-2,1 (14H, m), 2,29 (IH, bd), 2,44 (3H, s), 2,53 (IH, dd, J 14 og 5), 2,85 (IH, bd), 3,80 (IH, dd, J 9 og 20 6), 3,97 (IH, dd, J 9 og 3), 4,20 (IH, m), 4,51 (IH, m), 4,93 (IH, bs), 4,97 (IH, bs), 5,79 (IH, d, J 11), 6,42 (IH, d, J 11) 7,34 (2H, d, J 8), 7,78 (2H; d, J 8).

49 DK 173457 B1

Præparation 51 Forbindelse 63

Til 0,21 g magnesium sattes i løbet af 40 minutter og under omrøring og opvarmning til tilbagesvaling en opløsning af 2,63 g af forbindelse 60 i 5 ml ether. Efter yder-5 ligere 1 times kogning under tilbagesvaling skiltes Grig-nard's reagens fra en lille mængde ureageret magnesium og overførtes til en tør kolbe under nitrogen. 5 ml tør THF tilsattes under omrøring, hvorefter der dannedes et hvidt bundfald. Blandingen afkøledes i et isbad, og en opløsning 10 af 25 mg lithiumklorid og 40 mg tør kupriklorid i 3 ml tør THF tilsattes under omrøring på 5 minutter. Omrøring i isbadet fortsattes i yderligere 45 minutter. En opløsning af 0,42 g af forbindelse 62 i 5 ml tør THF tilsattes i løbet af ca. 2 minutter, og omrøring fortsattes i yderli-15 gere 40 minutter i et isbad og derefter ved stuetemperatur i 17 timer.

Reaktionsblandingen udrystedes mellem 25 ml ether og vandig ammoniumklorid (1 g i 15 ml), og den vandige fase ekstraheredes to gange med 25 ml ether-portioner. Den 20 kombinerede organiske fase vaskedes med 10 ml saltvand, tørredes og koncentreredes i vakuum, hvorved man fik en olie, som rensedes ved flash kromatografi (40 g silikagel; petroleumsether, derefter 2,5% ether i petroleumsether som elueringsmiddel), hvorved man fik 63; δ (100 Hz) 0,08 (12H, 25 s), 0,04-0,10 (9H, s), 0,54 (3H, s), 0,85 (9H, s), 0,90 (9H, s>, 0,90 (6H, t), og 0,9-2,10 (33H, m). 2,30 (IH, bd), 2,56 (IH, dd), 2,86 (IH, d), 4,21 (IH, m), 4,53 (lH, m), 4,93 (IH, m), 4,98 (IH, m), 5,82 (IH, d, J 11,5) og 6,45 (IH, d, J 11,5).

30 50 DK 173457 B1

Præparation 52 Forbindelse 64

En blanding af 0,18 g anthracen, 75 mg triethylamin og 0,48 g af forbindelse 63 i 35 ml methylenklorid, omrørt under en atmosfære af nitrogen i en Pyrex-kolbe nedsænket i 5 et vandbad ved 20°C, belystes ved bestråling fra en højtryks Hg-lampe (type: Hanau TQ 718Z2) i en time. Reaktionsblandingen filtreredes og koncentreredes i vakuum, hvorved man fik en remanens. Denne rensedes ved flash kromatografi (65 g silikagel; 1% ether i petroleumsether som elueringsmid-10 del), hvorved man fik 64; δ (100 MHz) 0,08 (12H, s), 0,05-0,10 (9H, s), 0,52 (3H, s), 0,87 (18H, s), 0,84-0,94 (9H, m) , 1,00-2,10 (30H, m), 2,21 (IH, dd), 2,44 (lH, dd) , 2,79 (IH, d), 4,18 (IH, m), 4,37 (IH, m), 4,86 (lH, m), 5,17 (IH, m), 6,01 (IH, d, J 11,2) og 6,23 (IH, d, J 11,2).

15

Præparation 53 1(S),3(R)-Di-tert-butyldimethylsilyl- oxy-20(R)-(61-methyl-1-heptyl)-9,10-secopregna-5(E),7(E),10(19)-trien (Forbindelse 66 - sidekæde-desoxy-20 analogen af Forbindelse 25)

Det omrørte Grignard's reagens, som man fik udfra 2,09 g 5-methyl-1-hexylbromid og 0,29 g magnesium i 8 ml tør THF, behandledes ved 0°C med en opløsning af 14 mg lit-hiumklorid og 22 mg vandfri kupriklorid i 1,6 ml tør THF, 25 efterfulgt af en opløsning af 0,25 g af Forbindelse 62 i 1 ml tør THF. En time efter udrystedes reaktionsblandingen mellem vand og ether, og etherlaget vaskedes med saltvand, tørredes og koncentreredes i vakuum. Rensning af remanensen ved kromatografi (15 g silikagel, 2% ether i petroleum-30 sether som elueringsmiddel), efterfulgt, af krystallisation fra ether-methanol, gav titelforbindelsen, δ (300 MHz) 0,07 (12H, m), 0,55 (3H, s), 0,87 (9H, s), 0,87 (3H, d), 0,9 (9H, s), og 0,85-2,1 (31H, m), 2,31 (IH, bd), 2,57 (IH, dd, j 14 og 5), 2,87 (IH, bd), 4,22 (IH, m), 4,54 (IH, m), 4,94 35 (IH, bs), 4,99 (IH, bs), 5,83 (lH, d, J 11), 6,47 (IH, d, j 11) - 51 DK 173457 B1

Præparation 54 1(S),3(R)-Bis-tert-butyldimethylsil- yloxy-20(R)-(61-methyl-1-heptyl) 9,10-secopregna-5(Z), 7 (E),10(19) -trien (Forbindelse 67 - sidekæde-5 -desoxy-analogen af Forbindelse 30)

Forbindelsen fremstilledes ved at anvende Metode 3, hvori udgangsmaterialet (som erstatter forbindelse III) var Forbindelse 66 (Se Præparation 53).

I denne præparation var elueringsmidlet 2% ether i 10 petroleumsether. Produktet gav de forventede spektrosko-piske data.

Eksempel 1 1(S), 3 (R)-Dihydroxy-20(R)-[3-(1-hydr- oxycyclopropyl)propyl]-9,10-seco 15 pregna-5(Z), 7 (E) ,10(19)-trien (Forbindelse 34)

En oplosning af 50 mg af forbindelse 28 og 0,1 g tetra-n-butylammoniumfluoridtrihydrat i 5 ml THF opvarmedes ved 60°C under en atmosfære af nitrogen i 50 minutter. Efter 20 afkøling udrystedes reaktionsopløsningen mellem 40 ml ethy-lacetat og 30 ml 2% natriumhydrogencarbonatopløsning, og det organiske lag vaskedes med vand og saltvand, tørredes og koncentreredes i vakuum, hvorved man fik et råprodukt indeholdende forbindelse 33. Denne opløstes i 3 ml ethanol, 25 og 9 mg pyridinium £-toluensulphonat tilsattes. Den omrørte opløsning opvarmedes derefter ved 50°C under en atmosfære af nitrogen i 30 minutter. Efter afkøling udrystedes reaktionsopløsningen mellem 30 ml ethylacetat og vand. Det organiske lag vaskedes, i nævnte rækkefølge, med 5% natrium-30 hydrogenkarbonatopløsning og saltvand, tørredes og koncentreredes i vakuum. Remanensen rensedes ved kromatografi (15 g silikagel; ethylacetat som elueringsmiddel), hvorved man fik 34; (300MHz) 0,42 (2H, m), 0,53 (3H, s), 0,72 (2H, m), 0,93 (3H, d, J 6), 1-2,05 (23H, m) , 2,30 (IH, dd, J 13 og 35 6), 2,59 (IH, dd, J 13 og 3), 2,81 (IH, dd, J 12 og 4), 4,22 (IH, m), 4,42 (IH, m), 4,99 (IH, bs), 5,32 (IH, bs), 6,00 (IH, d, J 11), 6,37 (IH, d, J 11); Xmax 265 nm.

52 DK 173457 B1

Metode 4 Fremstilling af Forbindelse I fra den tilsvarende Forbindelse IV En opløsning af 0,2 g af forbindelse IV og 0,4 g 5 tetra-n-butylammoniumfluoridtrihydrat i 10 ml THF op varmedes ved 60°C under en atmosfære af nitrogen i 50 minutter. Efter afkøling udrystedes reaktionsopløsningen mellem 40 ml ethylacetat og 30 ml 2% natriumhydrogencar-bonatopløsning, og det organiske lag vaskedes med vand og 10 saltvand, tørredes og koncentreredes. Remanensen rensedes ved kromatografi (30 g silikagel, ethylacetat som elu-eringsmiddel), hvorved man fik I.

Forbindelserne af Eksemplerne 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 15 10, 11 og 12 og 14 fremstilledes under anvendelse af metode 4, hvori udgangsmaterialet IV var henholdsvis forbindelse 29, 30, 31, 32, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 58 og 67 (Se Præparation 54).

20 Eksempel 2 1 (S),3(R)-Dihydroxy-20(R)-[3-(1-hydr- oxycyklohexy1) propyl]-9,10-seco pregna-5(Z),7(E),10(19)-trien (Forbindelse 35) δ (300 MHz) 0,53 (3H, s), 0,92 (3H, d, J 6), 1-2,1 (33H, 25 m), 2,30 (IH, dd, J 13 og 7), 2,59 (IH, dd, J 13 og 3),

2,81 (IH, dd, J 12 og 3), 4,21 (IH, m), 4,42 (IH, m), 4,99 (IH, bs), 5,32 (IH, bs), 6,00 (IH, d, J 11), 6,37 (IH, J

11U 26S “ 30 Eksempel 3 1(S),3(R)-Dihydroxy-20(R)-(6-hydroxy -6-methyl-l-heptyl)-9,10-secopregna -5(Z),7(E),10(19)-trien (Forbindelse 36) δ (300 MHz) 0,54 (3H, s), 0,92 (3H, d, j 6), 0,85-2,1 35 (33H, m, inklusive 1,21 (6H, s )), 2,31 (IH, dd, J 13 og 6), 2,60 (IH, dd, J 13 og 3), 2,82 (IH, dd, J 12 og 3), 4,23 (IH, m), 4,43 (IH, m), 5,00 (IH, bs), 5,33 (IH, bs), 53 DK 173457 B1 6,02 (IH, d, J 11), 6,38 (IH, J 11); Xmax 265 ran.

Eksempel 4 1(S),3(R)-Pihydroxy-20(R)-(7-hydroxy- -7-methyl-l-oktyl)-9,10-secopregna 5 -5(2),7(E),10(19)-trien (Forbindelse 37) δ (300 MHz) 0,53 (3H, s), 0,90 (3H, d, J 6), 0,9-2,05 (35H, m, inklusive 1,20 (6H, s)), 2,28 (IH, dd, J 13 og 7), 2,59 (IH, dd, J 13 og 3), 2,82 (IH, dd, J 11 og 3), 4,22 (IH, 10 m), 4,41 (IH, m), 4,99 (IH, bs), 5,32 (IH, bs), 6,01 (IH, d, J 11), 6,37 (IH, J 11); 265 ran.

Eksempel 5 1(S),3(R)-Dihydroxy-20(R)-(7-hydroxy- -7-methylokt-l(E)-en-l-yl-9,10-seco-15 pregna-5(2),7(E),10(19)-trien

Forbindelse 38) δ (300 MHz) 0,54 (3H, s), 1,0 (3H, d, j 7), 1,1-2,1 (31H, m, inklusive 1,20 (6H, s)), 2,30 (IH, dd, J 13 og 7), 2,60 (IH, dd, J 13 og 3), 2,82 (IH, dd, J 11 og 3), 4,22 (IH, 20 m), 4,42 (IH, m), 5,00 (lH, bs), 5,25 (2H, m), 5,31 (IH, bs), 6,01 (IH, d, J 11), 6,37 (IH, d, J 11); 265 ran.

Eksempel 6 1(S) , 3(R)-Dihydroxy-20(R) - (4 (S) - -hydroxy-1-pentyl)-9,10-secopregna-25 5(Z),7(E),10(19)-trien (Forbindelse 51) δ (300 MHz) 0,53 (3H, s), 0,60-2,10 (29H, m, inklusive 1,18 (3H, d, J 6], 2,30 (IH, m), 2,59 (IH, m) , 2,81 (IH, m), 3,78 (IH, m), 4,21 (IH, m), 4,42 (IH, m), 4,99 (IH, m), 30 5,31 (IH, m), 6,00 (IH, d, J 11) og 6,36 (IH, d, J 11); λ max 265 nm· 54 DK 173457 B1

Eksempel 7 1(S),3(R)-Dihydroxy-20(R)-(4(R)- -hydroxy-1-penty1)-9,10-secopregna-5 (Z),7(E),10(19)-trien (Forbindelse 52) 5 δ (300 MHz) 0,53 (3H, s), 0,60-2,10 [29H, m, inklusive 1,18 (3H, d, J 6)], 2,30 (IH, m), 2,59 (IH, m), 2,81 (IH, m), 3,78 (IH, m), 4,21 (IH, m), 4,42 (IH, m), 4,99 (IH, m), 5,31 (IH, m), 6,00 (IH, d, J 11) og 6,36 (IH, d, J 11); λ max 265 n™· 10

Eksempel 8 1(S),3(R)-Pihydroxy-20(R)-(4-(R) -hydroxy-1-undecyl)-9,10-secopregna-5(Z),7(E),10(19)-trien (Forbindelse 53) 15 δ (300 MHz) 0,53 (3H, s), 0,60-2,10 [41H, m, inklusive 0,89 (3H, t), 0,94 (3H, d, J 6)], 2,30 (IH, m), 2,59 (IH, m), 2,81 (IH, m), 3,57 (IH, m), 4,21 (IH, m), 4,41 (IH, m), 4,99 (IH, m), 5,31 (IH, m), 6,00 (IH, d, J 11) og 6,37 (IH, d, J 11); \nax 265 nm.

20

Eksempel 9 1(S),3(R)-Dihydroxy-20(R)-(6-ethyl- -6-hydroxy-1-oktyl)-9,10-secopregna-5(Z),7(E),10(19)-trien (Forbindelse 55) 25 δ (300 MHz) 0,52 (3H, s), 0,60-2,10 [40H, m, inklusive 0,84 (6H, t, J 7,5), 0,90 (3H, d, J 6), 1,44 (4H, q, J 7,5)], 2,29 (IH, m), 2,58 (IH, m), 2,81 (IH, m), 4,21 (IH, m),

4,41 (IH, m), 4,99 (IH, m), 5,31 (IH, m), 6,00 (IH, d, J

11) og 6,36 (IH, d, J 11); ^max 265 nm.

30 55 DK 173457 B1

Eksempel 10 1(S),3(R)-Dihydroxy-20(R)-(6-hydroxy -6-propyl-1-nonyl)-9,10-secopregna--5(Z),7(E),10(19)-trien (Forbindelse 56) 5 δ (300MHz) 0,54 (3H, s), 0,60-2,10 (44H, m), 2,31 (IH, m), 2,61 (IH, m), 2,82 (IH, m) , 4,23 <1H, m), 4,43 (IH, m), 5,01 (IH, m)), 5,33 (IH, m), 6,02 (IH, d, J 11), 6,38 (IH, d, J 11) ; \tax 264 h"1, 10 Eksempel 11 1(S),3(R)-Dihydroxy-20(R)-(5-ethyl -5-hydroxy-1-heptyl)-9,10-secopregna-5(Z),7(E),10(19)-trien (Forbindelse 59) δ (300 MHz) 0,53 (3H, s), 0,85 (6H, t, J 7,5), 0,90 (3H, d, 15 J 6), 0,98-2,10 [29H, m, inklusive 1,45 (4H, q, J 7,5), 2,30 (IH, m), 2,59 (IH, m), 2,81 (IH, m), 4,21 (IH, m), 4,42 (IH, m), 4,99 (IH, m), 5,32 (IH, m), 6,00 (IH, d, J 11) og 6,37 (IH, d, J 11).

20 Eksempel 12 1(S),3(R)-Dihydroxy-20(R)-(5-propyl- -5-hydroxy-1-oktyl)-9,10-secopregna-5(Z),7(E),10(19)-trien (Forbindelse 65)

En oplosning af 0,38 g af forbindelse £4 i en 25 blanding af 20 ml ethylacetat, 33 ml acetonitril og 1 ml ca. 40% vandig hydrogenfluorid omrørtes under nitrogen i 1 time ved 25°C. Reaktionsopløsningen omrystedes mellem 100 ml ethylacetat og 50 ml 2% natriumbikarbonatopløsning. Den organiske fase ekstraheredes to gange med 50 ml-portioner 30 af vand og 25 ml saltvand, tørredes og koncentreredes i vakuum, hvorved man fik en olie.

Denne rensedes to gange ved flash kromatografi.

Første gang på 100 g silikagel med ethylacetat som elueringsmiddel, anden gang på 40 g silikagel med 30% 35 petroleumsether i ethylacetat som elueringsmiddel. Man fik produktet 65 som en olie; δ (300 MHz) 0,54 (3H, s), 0,92 (6H, t), 0,88-0,95 (3H, d), 1,00-2,10 (33H, m), 2,31 (IH, 56 DK 173457 B1 dd), 2,60 (IH, dd), 2,82 (IH, dd), 4,23 (IH, m), 4,43 (IH, m , 5,00 (IH, m), 5,33 (IH, m), 6,02 (IH, d, J 11,3), og 6,38 (IH, d, J 11,3).

5 Eksempel 13 1(S),3(R)-Dihydroxy-20(R) -(6'-methyl 1'-heptyl)-9,10-secopregna-5(Z), 7(E),10(19)-trien (Forbindelse 68) δ (300 MHz) 0,53 (3H, s), 0,85 (6H, d), 0,91 (3H, d), og 0,9-2,0 (27H, m), 2,27 (IH, dd), 2,57 (IH, m), 2,80 (IH, 10 m), 4,20 (IH, m), 4,40 (IH, m), 4,99 (IH, bs), 5,31 (IH, bs), 6,00 (IH, d, J 11) og 6,36 (IH, d, J 11).

Eksempel 14 Dermatologisk creme indeholdende forbindelse 36 15 I 1 g mandelolie opløstes 1 mg af forbindelse 36. Til denne opløsning sattes 40 g mineralolie og 20 g selv-emulgerende bivoks. Blandingen opvarmedes til flydende form.

Efter tilsætning af 40 ml varmt vand, blandedes blandingen godt. Den resulterende creme indeholder ca. 10 ug forbin-20 delse 36 pr. gram creme.

Eksempel 15 Kapsler indeholdende forbindelse 36

Forbindelse 26 suspenderes i jordnøddeolie til en slutkoncentration på 50 ug forbindelse 36/ml olie. 10 25 vaegtdele gelatine, 5 vægtdele glycerin, 0,08 vægtdele kaliumsorbat og 14 vægtdele destilleret vand sammenblan-dedes under opvarmning og formedes til bløde gelatinekapsler. Disse fyldtes med hver 100 μΐ af forbindelse 36 i oliesuspension, således at hver kapsel indeholder 5 ug 30 forbindelse 36.

Claims (7)

1. 57 DK 173457 B1 En secopregnatrien-forbindelse med formlen I 5 R4 r1 fil R2 r3 H £ ' 10. hvilken formel n er et helt tal fra 1 - 7; og og , som er ens eller forskellige, betyder hydrogen, lige eller forgrenet C^-Οη alkyl med de forbehold, at når n = 1, er R1 9 1 2 og R ikke samtidigt hydrogen, ej heller er RA og R samtidigt en alkylgruppe, uafhængigt udvalgt blandt methyl, 1 9 15 ethyl eller n-propyl, og når n = 2, er R og R ikke samtidigt methyl eller, sammen med det carbonatom (angivet med stjerne i formel I), som bærer hydroxylgrupen, en mættet eller umættet C^-Cg-carbocyklisk ring; og R-* og R4 betyder enten samtidigt hydrogen, eller sammen udgør de en 20 binding (enten i Z- eller E- konfigurationen) mellem carbonatornerne med numrene 22 og 23 med det forbehold, at når og R4 sammen udgør en binding og n=3 er R-*- og R^ ikke samtidigt methyl; eller og derivater af forbindelserne af formel I, hvori hydroxylgruppen ved carbonatomet med 25 stjerne er erstattet med hydrogen. 58 DK 173457 B1
2. 2. En diastereoisomer af en forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved at være i ren form; eller en blanding af diastereoisomerer af en forbindelse ifølge krav 1. 5
3. 3. En forbindelse ifølge krav 1, udvalgt fra gruppen bestående af 1(S),3(R)-Dihydroxy-20(R)-(5-ethyl-5-hydroxy-1-heptyl)-10 -9,10-secopregna-5(Z),7(E),10(19)-trien; 1(S),3(R)-Dihydroxy-20(R)-(6-hydroxy-6-methyl-l-heptyl)--9,10-secopregna-5(Z),7(E),10(19)-trien; 15 1(S),3(R)-Dihydroxy-20(R)-(6-ethyl-6-hydroxy-1-oktyl)- -9,10)-secopregna-5(Z),7(E),10(19)-trien; 1(S),3(R)-Dihydroxy-20(R)-(7-hydroxy-7-methyl-1-oktyl)- 9,10)-secopregna-5(Z), 7 (E),10(19)-trien; 20 1(S),3(R)-Dihydroxy-20(R)-(7-hydroxy-7-methylokt-l(E)-en-1-yl-9,10)-secopregna-5(Z),7(E),10(19)-trien; 1(S),3(R)-Dihydroxy-20(R)-{6'-methyl-1'-heptyl)-9,10-seco-25 pregna-5(Z),7(E),10(19)-trien.
4. 4. Et farmaceutisk præparat kendetegnet ved at indeholde en effektiv mængde af en eller flere af forbindelserne ifølge krav 1, sammen med farmaceutisk accep- 30 table, ugiftige bærer- og/eller hjælpestoffer.
5. 5. Et farmaceutisk præparat ifølge krav 4 kendetegnet ved at være i dosisenhedsform.
6. 6. En dosisenhed ifølge krav 5 kendetegnet ved at indeholde fra 0,5 - 500 yg, fortrinsvis fra 1 - 250 yg af en forbindelse af formel I. 59 DK 173457 B1
7. 7. Anvendelse af en forbindelse ifølge krav 1-3 til fremstilling af et præparat til behandling og profylakse af sygdomme, der er karakteriserede ved unormal celledifferentiering og/eller -proliferation.