DK164916B - Fremgangsmaade til rensning eller berigelse af biologisk aktive proteiner og hertil egnet middel - Google Patents
Fremgangsmaade til rensning eller berigelse af biologisk aktive proteiner og hertil egnet middel Download PDFInfo
- Publication number
- DK164916B DK164916B DK218582A DK218582A DK164916B DK 164916 B DK164916 B DK 164916B DK 218582 A DK218582 A DK 218582A DK 218582 A DK218582 A DK 218582A DK 164916 B DK164916 B DK 164916B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- process according
- bis
- protein
- precipitate
- solution
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/30—Extraction; Separation; Purification by precipitation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0055—Oxidoreductases (1.) acting on diphenols and related substances as donors (1.10)
- C12N9/0057—Oxidoreductases (1.) acting on diphenols and related substances as donors (1.10) with oxygen as acceptor (1.10.3)
- C12N9/0063—Ascorbate oxidase (1.10.3.3)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0065—Oxidoreductases (1.) acting on hydrogen peroxide as acceptor (1.11)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12N9/20—Triglyceride splitting, e.g. by means of lipase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y110/00—Oxidoreductases acting on diphenols and related substances as donors (1.10)
- C12Y110/03—Oxidoreductases acting on diphenols and related substances as donors (1.10) with an oxygen as acceptor (1.10.3)
- C12Y110/03003—L-ascorbate oxidase (1.10.3.3)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/814—Enzyme separation or purification
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
DK 164916 B
i
Opfindelsen angår en fremgangsmåde til rensning eller berigelse af biologisk aktive proteiner og et hertil egnet middel.
Til berigelsen af biologisk aktive proteiner findes der allerede flere berigelsesmidler henholdsvis -fremgangsmåder. Ek-5 sempler på egnede midler er salte såsom ammoniumsUlfat/ organiske opløsningsmidler såsom acetone, uorganiske geler, aktivt carbon, bytterkromatografi, molekylsier, polyethylen* iminer og nogle andre. I betragtning af den overordentlige mangfoldighed af naturligt forekommende aktive proteiner 10 og deres følgestoffer mærkes dog meget hyppigt den uheldige mangel på variationsmuligheder ved adskillelsen henholdsvis rensningen. Af det i og for sig allerede begrænsede antal af fremgangsmåder og midler til rensning og berigelse af proteiner kan for det meste kun ganske få anvendes i et spe-15 cielt tilfælde. Dette har til følge, at det samme rensningstrin mange gange må gentages for at opnå en nogenlunde tilfredsstillende fraseparering af følgestoffer. Oftest er de opnåede berigelsesgrader desuden ringe, og den senere fjernelse af de til berigelsen anvendte midler kræver særlige 20 forholdsregler såsom inddampning af store væskevolumener og lignende. De forskellige kendte fremgangsmåder til rensning henholdsvis berigelse af biologisk aktive proteiner har derfor i det store og hele altid de samme fremstillingstrin, som, meget ensartet omend i varierende rækkefølge, gentages.
25 Der er behov for yderligere fremgangsmåder til rensning og berigelse af biologisk aktive proteiner, som forbedrer de foreliggende variationsmuligheder og gør proteinberigelsen mere virksom. Formålet med den foreliggende opfindelse er derfor at tilvejebringe en yderligere fremgangsmåde og middel 30 til rensning henholdsvis berigelse af biologisk aktive proteiner, som i så ringe grad som muligt påvirker proteinaktiviteten og forøger de bestående variationsmuligheder.
2
DK 164916 B
Denne opgave løses ifølge opfindelsen ved en fremgangsmåde 5 til rensning henholdsvis berigelse af biologisk aktive proteiner ved tilsætning af et selektivt fældningsmiddel, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at man behandler en vandig opløsning, som indeholder det ønskede protein, ved en pH-værdi under dets isoeelektriske punkt med en 10 sådan mængde af et arylsulfonsurt azofarvestof med to sulfo= natgrupper, som er adskilt fra hinanden ved 8 - 10 i resonansforhold stående dobbeltbindinger, blandt hvilke der er mindst én N=N-dobbeltbinding, indtil mindst størstedelen af den biologiske aktivitet af det ønskede enzym befinder sig i bundfal-15 det, fraseparerer bundfaldet og ved en pH-værdi over dets isoelektriske punkt igen bringer det aktive protein i opløsning.
Fra EP A nr. 09.781 kendes en fremgangsmåde til oprensning af acy1-coenzym-A-syntetase ved affinitetskromatografi, hvor ko-lonnebærermaterialet er et polysaccharid med azofarvestof som ligand.
Fra W0 nr. 79/00541 kendes en fremgangsmåde til oprensning af proteiner ved affinitetskromatografi, hvor kolonnebærermate- 2 5 rialet ligeledes er et polysaccharid med azofarvestof som 1igand.
Således beskrives i begge disse skrifter anvendelse af aromatiske farvestoffer som ligand ved affinitetskromatografi.
3 0
Disse farvestoffer, som er bundet til en polymer matriks, tjener til at immobilisere forskellige proteiner ved binding til en fast fase. Ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fældes proteinerne derimod ved hjælp af et opløst azofarvestof.
35 3
DK 164916B
Det er ganske vist kendt, at mange farvestoffer med proteiner indgår en vekselvirkning. Forsåvidt der dog herved optræder fældning, går den biologiske aktivitet af det i fældningskom-plekset indeholdte protein normalt fuldstændigt tabt. Denne
O
denaturering optræder overraskende ikke ved de oven for definerede azofarvestoffer, desuden sker fældningen af de forskellige proteiner meget selektivt, således at der opnås en udmærket rensnings- og berigelseseffekt. Det er særligt 10 overraskende, at fremgangsmåden ifølge opfindelsen kun er lidt afhængig af fremmedsalte og derfor egner sig til anvendelse på rå celleekstrakter. Det er derfor i mange tilfælde muligt af rå celleekstrakter selektivt at fælde det søgte biologisk aktive protein og at fraseparere størstedelen af 15 de forurenende fremmedproteiner og øvrige celleekstrakt indholdsstoffer. Ligeledes er den direkte fældning af fermentationssuppen mulig. Da sulfonsyregrupperne i fældningsmidlet er fuldstændigt ioniserede ned til ca. pH-værdi 2, afhænger den for fældningen optimale pH-værdi praktisk taget 2o udelukkende af ioniserbarheden og pH-stabiliteten af det på gældende aktive protein. I almindelighed egner fremgangsmåden sig ved sådanne proteiner, hvis biologiske aktivitet også bliver opretholdt under deres isoelektriske punkt.
Denne forudsætning er i almindelighed givet, når det aktive 25 protein kan adsorberes på kationbytter uden væsentligt ak tivitetstab. Dette kan hurtigt konstateres i et simpelt for-forsøg.
Ved biologisk aktive proteiner forstås i forbindelse med den 30 foreliggende opfindelse fortrinsvis de enzymatisk aktive og de immunologisk aktive proteiner.
35
DK 164916 B
4
Fremgangsmåden egner sig også til andre biologisk aktive i proteiner, f.eks. hormoner, toksiner, immunoglobuliner og ! lignende.
5 Eksempler på enzymatisk aktive proteiner, der egner sig til fremgangsmåden ifølge opfindelsen, er ADH af lever, aldolase, α-amylase af svampe henholdsvis pankreas, ascorbatoxidase, bromelain, α-bungarotoxin, β-bungarotoxin, cholesterin= esterase, cholesterinoxidase, carboxypeptidase-B, chymotryp= sin, diaphorase, fumarase, α-galactosidase af kaffebønner eller af gær, glucose-6-phosphatdehydrogenase af gær, glu= tathionreduktase, glycerin-3-phosphatdehydrogenase, oxalat= oxidase, papain, phospholipase A2, peroxidase, penicillin= amidase, 6-phosphogluconatdehydrogenase, trypsin, triose= 15 phosphatisomerase og uridindiphosphoglucosepyrophosphorylase.
Talrige andre enzymer egner sig ligeledes.
Ifølge opfindelsen anvendes fortrinsvis som azofarvestof 3,3'-(4,4'-biphenylen-bis(azo))bis(4-amino-1-naphthalinsulfonsyre) 20 eller et med en eller flere lavere alkyl- eller lavere alkoxy-grupper substitueret derivat deraf.
Forbindelserne af disse foretrukne grupper har følgende almene formel: 25 fV, = N = N_y_y 30 R R \ϊ_^ hvori hvert R uafhængigt af hinanden betegner et hydrogen-35 atom, C^^alkyl eller C^^alkoxy.
DK 164916 B
5
Typiske eksempler på disse foretrukne grupper er de i handelen værende farvestoffer kongorødt(C.I.22120) og benzopur-purin 10B (C.I.23560).
ς
En yderligere foretrukken gruppe af azofarvestoffer består af 2,2'-[(diazoamino)-di-p-phenylen]bis(7-benzothiazolsulfonsyre) og derivater heraf med en eller flere lavere alkyl- og/eller lavere alkoxygrupper.
10 Forbindelserne af denne foretrukne gruppe har følgende almene formel: /rØ-"' HDK.XS·'' 20 hvori hvert R uafhængigt af hinanden betegner et hydrogenatom, Ci_4alkyl eller C-^alkoxy.
Et typisk eksempel fra denne foretrukne gruppe er thiazol-25 gult -S (C.I.19540).
Farvestoffet tilsættes i opløst form. 0,05 - 5%-ige opløsninger har vist sig velegnede (afhængigt af det pågældende azofarvestofs opløselighed) . Dog kan der også anvendes 30 mere kraftigt fortyndede opløsninger, selv om der herved i reglen bliver tilført unødigt meget vand. Den egnede farvestofmængde afhænger af den proteinmængde, der skal fældes.
I almindelighed ligger den mellem ca. 0,01 og ca. 2,0% vægt/volumen, fortrinsvis mellem 0,05 og 0,2% farvestof/volu-35 men-opløsning.
DK 164916B
6 pH-betingeIserne afhænger som allerede nævnt af det isoelek-triske punkt af det aktive protein. I almindelighed kommer pH-værdier mellem ca. 2 og ca. 9 i betragtning.
5 Opløsningen af bundfaldet kræver, som angivet ovenfor, at pH- værdien hæves til over det isoelektriske punkt. I almindelighed vil man derfor igen opløse det udskilte bundfald med en pufferopløsning med en pH-værdi mellem ca. 4 og ca. 10. Af den således opnåede opløsning kan farvestoffet så fjernes ved 20 hjælp af sædvanlige metoder. Eksempler herpå er: Fældning af farvestoffet ved hjælp af polykationer, fældning af det aktive protein ved tilsætning af salte såsom ammoniumsulfat, eller af organiske opløsningsmidler såsom acetone, adsorption af farvestoffet på anionbyttere såsom diethylaminoethylgruppe-15 holdige polymere carbonhydrater eller hydrofobe polymere så som polyvinyl-polypyrrolidon, dialyse eller ultrafiltrering. Egnede polykationer er f.eks. polyethyleniminerne.
Det udfældede aktive protein-azofarvestof-kompleks viser sig 20 i alle undersøgte tilfælde at være godt filtrerbart.
Da fældningen af det søgte aktive protein i mange tilfælde på grund af den høje selektivitet af fremgangsmåden kommer forud for fældningen af andre proteiner og følgestoffer, viser den lette fjernelighed sig som særligt fordelagtig for 25 berigelsen. De af det søgte protein udfældede stoffer kan på grund af denne egenskab let og fuldstændigt frasepareres.
Det samme gælder for fældningen af det søgte aktive protein selv, som igen let kan frasepareres ved filtrering eller centrifugering af de endnu i opløsning værende forureninger.
30
Opfindelsen angår desuden et middel til selektiv fældning af biologisk aktive proteiner af deres vandige opløsninger uden tab af den biologiske aktivitet, hvilket middel er ejendommeligt ved, at det indeholder eller består af et arylsulfon-35 7
DK 164916 B
surt azofarvestof med to sulfonatgrupper, som er adskilt fra hinanden med 8 - 10 i resonansforhold stående dobbeltbindinger, hvoraf mindst én er en N=N-dobbeltbinding. Et foretrukket middel af denne art indeholder som azofarvestof 3,3'-(4,4'-bi= 5 phenylylen -bis (azo) )bis (4-amino-l-naphthalinsulfonsyre) og/eller et med en eller flere lavere alkyl- eller lavere alkoxygrupper substitueret derivat deraf. Et yderligere foretrukket middel indeholder 2,2'-[(diazoamino)-di-p-phenylen]-bis(7-benzothiazolsulfonsyre) og/eller derivater deraf, som 10 har en eller flere lavere alkyl- og/eller lavere alkoxygrup per.
Opfindelsen frembyder talrige fordele. Der er allerede nævnt den forholdsvis ringe indvirkning på fældningen af opløsningens saltindhold, således at meget urene opløsninger såson 15 fermentationssupper og celleåbneropløsninger kan behandles direkte ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen. Ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen anvendes desuden en ringe mængde fældningsmiddel, og herved spares i mange tilfælde den hidtil til fældningen nødvendige store mængde organisk opløsningsmiddel. I et typisk tilfælde blev der hidtil til for-rensning af en råekstrakt krævet 60%-ige acetone-henholdsvis methanolkon-centrationer, hvilket ved 1.000 liter råekstrakt kræver 1.500 liter organisk opløsningsmiddel. I modsætning hertil lykkes det ifølge opfindelsen at opnå fældningen med 1 kg farvestof og samtidig desuden en langt bedre rensning, dvs. fraseparering af uønskede følgestoffer.
De følgende eksempler belyser opfindelsen yderligere.
30 EKSEMPEL 1.
En i handelen værende lyofiliseret rålipase blev opløst i 0,01M natriumacetat, pH-værdi 3,6, til en aktivitet på ca.
650 U/ml. Denne opløsning blev tilsat 0,3 mg kongorødt pr.
ml i form af en 2%-ig vandig opløsning. Der fremkom et bundfald, 35
DK 164916 B
8 som indeholdt ca. 70% af udgangsaktiviteten. I den overliggende fraktion kan der kun endnu konstateres en ringe restaktivitet. Bundfaldet filtreres fra, eftervaskes med den samme puffer og opløses igen med puffer, pH-værdi 5,0. Ved tildryp-5 ning af en 10%-ig polyethyleniminopløsning udfældes farvestof fet kvantitativt. Den samlede aktivitet af bundfaldet findes derefter i den overliggende fraktion.
En gentagelse af dette forsøg med benzopurpurin 10B giver prak-10 tisk taget samme resultat.
EKSEMPEL 2.
En ascorbatoxidaseholdig råekstrakt i Ο,ΟΙΜ kaliumphosphat/ 15 acetat-puffer, pH-værdi 4,6, med et indhold af ca. 20 U/ml ascorbatoxidase behandles med 0,4 mg kongorødt/ml i form af en 2%-ig vandig opløsning. Det dannede bundfald skilles fra.
I den overliggende fraktion måles en restaktivitet på 1%. Bundfaldet opløses med 0,05M kaliumphosphatpuffer, pH-værdi 20 7,6. Således fås ca. 60% af udgangsaktiviteten i opløsningen.
Farvestoffet kan frasepareres som beskrevet i eksempel 1.
EKSEMPEL 3.
Renset cholesterinesterase optages i 0,05M kaliumphosphat-2 5 puffer, pH-værdi 4, til en koncentration på ca. 75 U/ml.
Den således opnåede opløsning tilsættes 1 mg kongorødt pr. ml opløsning, og det dannede bundfald skilles fra. I den overliggende fraktion konstateres 1% af udgangsaktiviteten; bundfaldet indeholder 99% af aktiviteten. Efter opløsning Λ af bundfaldet i 0,1M kaliumphosphatpuffer, pH-værdi 6, fås igen 100% af aktiviteten af bundfaldet i opløsningen.
Fremgangsmåden blev gentaget, idet der til udgangsopløsningen var blevet tilsat 0,3M natriumchlorid. Resultaterne forblev 35 uændrede.
Claims (12)
1. Fremgangsmåde til rensning henholdsvis berigelse af biologisk aktive proteiner ved tilsætning af et selektivt fældningsmiddel, kendetegnet ved, at man behandler en 35 vandig opløsning, som indeholder det ønskede protein, ved en pH-værdi under dets isoelektriske punkt med en sådan mængde DK 164916B af et arylsulfonsurt azofarvestof med to sulfonatgrupper, som ved hjælp af 8 - 10 i resonansforhold stående dobbeltbindinger, hvoraf .mindst én er en N=N-dobbeltbinding, er fjernet fra hinanden, indtil i det mindste størstedelen af den biologiske 5 aktivitet af det ønskede aktive protein befinder sig i bund faldet, fraskiller bundfaldet og igen bringer det aktive protein i opløsning ved en pH-værdi over dets isoelektriske punkt.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, 10 at man som azofarvestof anvender 3,3'-{4,4'-biphenylylen-bis- (azo) )bis (4-amino-l-naphthalinsulfonsyre) elleret med en eller flere lavere alkyl- eller lavere alkoxygrupper substitueret derivat deraf.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendetegnet ved, at man anvender kongorødt (C.I.22120) eller benzopurpurin 10B (C.I.23560).
4. Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendetegnet ved, 20 at man anvender 2,2' - [ (diazoamino) -di-p-phenylen]-bis (7-benzo= thiazolsulfonsyre) eller et derivat deraf med en eller flere lavere alkyl- og/eller lavere alkoxygrupper.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 4, kendetegnet ved, 25 at man anvender thiazolgult G (C.I.19540).
6. Fremgangsmåde ifølge et af de foregående krav, kendetegnet ved, at man tilsætter 0,01- 2,0% vægt/volumen farvestof. 3 0
7. Fremgangsmåde ifølge et af de foregående krav, kendetegnet ved, at man tilsætter azofarvestoffet i form af en 0,05 - 5%-ig opløsning.
8. Fremgangsmåde ifølge et af de foregående krav, k e n -3 5 detegnet ved, at man gennemfører fældningen ved pH-værdier mellem 2 og 9. DK 164916B
9. Fremgangsmåde ifølge et af de foregående krav, kendetegnet ved, at man opløser det udskilte bundfald med pufferopløsning, pH-værdi 4,5 - 10.
10. Middel til selektiv fældning af biologisk aktive protei ner af deres vandige opløsninger uden tab af biologisk aktivitet, kendetegnet ved, at det indeholder eller består af et arylsulfonsurt azofarvestof med to sulfonatgrup-per, som er adskilt fra hinanden ved 8 - 10 i resonans forhold 10 stående dobbeltbindinger, hvoraf mindst én er en ^N-dobbelt binding.
11· Middel ifølge krav 10, kendetegnet ved, at man som azofarvestof anvender 3,3'-(4,4'-biphenylylen-bis- 15 (azo))bis(4-amino-l-naphthalinsulfonsyre) eller et derivat deraf med en eller flere lavere alkyl- og/eller lavere alkoxy-grupper.
12. Middel ifølge krav 10, kendetegnet ved, at 20 man anvender 2,2'-[(diazoamino)-di-p-phenylen]bis(7-benzo= thiazolsulfonsyre) eller et derivat deraf med en eller flere lavere alkyl- og/eller lavere alkoxygrupper. 25 30 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3119453 | 1981-05-15 | ||
| DE19813119453 DE3119453A1 (de) | 1981-05-15 | 1981-05-15 | Verfahren zum reinigen bzw. anreichern von biologisch aktiven proteinen und hierzu geeignetes mittel |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK218582A DK218582A (da) | 1982-11-16 |
| DK164916B true DK164916B (da) | 1992-09-07 |
| DK164916C DK164916C (da) | 1993-02-01 |
Family
ID=6132447
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK218582A DK164916C (da) | 1981-05-15 | 1982-05-14 | Fremgangsmaade til rensning eller berigelse af biologisk aktive proteiner og hertil egnet middel |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4451487A (da) |
| EP (1) | EP0065286B1 (da) |
| JP (1) | JPS57193494A (da) |
| AT (1) | ATE22651T1 (da) |
| DE (2) | DE3119453A1 (da) |
| DK (1) | DK164916C (da) |
| ZA (1) | ZA823339B (da) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4743550A (en) * | 1985-04-29 | 1988-05-10 | Union Carbide Corporation | Method for improving the partition coefficient in enzyme-containing systems having at least two phases |
| NZ216094A (en) * | 1985-05-15 | 1989-06-28 | Commw Serum Lab Commission | Method for purification of an immunoglobulin |
| US5597485A (en) * | 1988-05-13 | 1997-01-28 | Vilmax S.A. | Process for separating proteins |
| JPH02132163U (da) * | 1989-04-10 | 1990-11-02 | ||
| JPH0311159U (da) * | 1989-06-20 | 1991-02-04 | ||
| US5182369A (en) * | 1990-02-28 | 1993-01-26 | Monsanto Company | Method for purifying somatotropin monomers |
| JPH0464651U (da) * | 1990-10-17 | 1992-06-03 | ||
| JPH07217721A (ja) * | 1994-02-04 | 1995-08-15 | Shinano Kenshi Co Ltd | 歯車とその取付構造 |
| JP3321984B2 (ja) * | 1994-05-17 | 2002-09-09 | 味の素株式会社 | 蛋白塩酸加水分解物製造工程での改善された食塩分離法 |
| DE102005001362A1 (de) * | 2005-01-11 | 2006-07-20 | Protagen Ag | Verfahren und Vorrichtung zur Quantifizierung von Proteinen |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3098015A (en) * | 1961-01-21 | 1963-07-16 | Kabi Ab | Enzyme purification |
| US3580840A (en) * | 1969-03-18 | 1971-05-25 | Litton Systems Inc | Process for treating sewage and other contaminated waters |
| US3728224A (en) * | 1970-11-12 | 1973-04-17 | Miles Lab | Enzyme purification process |
| SE356735B (da) * | 1970-12-02 | 1973-06-04 | Svenska Cellulosa Ab | |
| DE2966596D1 (en) * | 1978-01-24 | 1984-03-08 | Secr Defence | Improvements in or relating to media for affinity chromatography |
| DK151634C (da) * | 1978-09-29 | 1988-06-20 | Mitsubishi Chem Ind | Fremgangsmaade til rensning af langkaedet acyl-coenzym-a-syntetase |
-
1981
- 1981-05-15 DE DE19813119453 patent/DE3119453A1/de not_active Withdrawn
-
1982
- 1982-05-12 EP EP82104186A patent/EP0065286B1/de not_active Expired
- 1982-05-12 DE DE8282104186T patent/DE3273606D1/de not_active Expired
- 1982-05-12 US US06/377,277 patent/US4451487A/en not_active Expired - Fee Related
- 1982-05-12 AT AT82104186T patent/ATE22651T1/de not_active IP Right Cessation
- 1982-05-13 JP JP57079292A patent/JPS57193494A/ja active Granted
- 1982-05-14 DK DK218582A patent/DK164916C/da not_active IP Right Cessation
- 1982-05-14 ZA ZA823339A patent/ZA823339B/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ZA823339B (en) | 1983-04-27 |
| DE3119453A1 (de) | 1982-12-09 |
| JPS6240360B2 (da) | 1987-08-27 |
| DK164916C (da) | 1993-02-01 |
| DK218582A (da) | 1982-11-16 |
| DE3273606D1 (en) | 1986-11-13 |
| ATE22651T1 (de) | 1986-10-15 |
| EP0065286A3 (en) | 1984-06-13 |
| EP0065286B1 (de) | 1986-10-08 |
| EP0065286A2 (de) | 1982-11-24 |
| US4451487A (en) | 1984-05-29 |
| JPS57193494A (en) | 1982-11-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Regalado et al. | Studies on the purification of peroxidase from horseradish roots using reverse micelles | |
| Hönig et al. | Selectivity of protein precipitation with polyethylene glycol fractions of various molecular weights | |
| FI111551B (fi) | Menetelmä erittäin puhdistetun emäksisen proteaasin valmistamiseksi ja menetelmällä valmistetun proteaasin käyttö | |
| RU2203949C2 (ru) | Способ получения проинсулина человека | |
| DE69626976T2 (de) | BEHANDLUNG EINER PROTEINLÖSUNG MIT A1/Fe UND ANSCHLIESENDE MEMBRANKONZENTRATION | |
| Moore et al. | A proteinase from human erythrocyte membranes | |
| CN105017412A (zh) | 一种从牛血清中分离高纯度牛血清白蛋白的方法 | |
| DK164916B (da) | Fremgangsmaade til rensning eller berigelse af biologisk aktive proteiner og hertil egnet middel | |
| WO1994026287A1 (en) | Purification of plasma proteins | |
| US3947324A (en) | Method for isolating high purity peroxidase | |
| Dong et al. | Complete removal and exchange of sodium dodecyl sulfate bound to soluble and membrane proteins and restoration of their activities, using ceramic hydroxyapatite chromatography | |
| FI93842C (fi) | Menetelmä proteiinien renaturoimiseksi | |
| FI98643C (fi) | Menetelmä luonnollisesti tuotetun kymosiinin talteenottamiseksi | |
| Cheng et al. | Protein recovery from surfactant precipitation | |
| CA1316135C (en) | Membrane filtration of cell culture media with charged particles | |
| CA1251751A (en) | Process for dissolving enzymes | |
| Chatterjee et al. | Studies on Rabbit Reticulocyte Ribosomes, II. Separation of the Ribosomal Proteins by Two-dimensional Electrophoresis | |
| JP3325107B2 (ja) | 水性二相分離法 | |
| CA1117879A (en) | T-factor, coa-spc substantially free of proteolytic enzymes and its preparation | |
| Davidson et al. | Partial purification and some properties of thyroid peroxidase solubilized by extraction with n-butanol | |
| Geahel et al. | Integration of ion exchange and ultrafiltration steps studied during purification of formate dehydrogenase using DEAE dextran | |
| US4268631A (en) | Apoglucose oxidase preparation | |
| EP1234507A1 (en) | Process for isolating beta-lactoglobulin from milk or milk fractions | |
| SU293384A1 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПАНКРЕАТИЧЕСКОГО ИНГИБИТрРАПРОТЕАЗг' | |
| JPS63132898A (ja) | 蛋白質の分離精製方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |