DK164916B - Fremgangsmaade til rensning eller berigelse af biologisk aktive proteiner og hertil egnet middel - Google Patents
Fremgangsmaade til rensning eller berigelse af biologisk aktive proteiner og hertil egnet middel Download PDFInfo
- Publication number
- DK164916B DK164916B DK218582A DK218582A DK164916B DK 164916 B DK164916 B DK 164916B DK 218582 A DK218582 A DK 218582A DK 218582 A DK218582 A DK 218582A DK 164916 B DK164916 B DK 164916B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- process according
- bis
- protein
- precipitate
- solution
- Prior art date
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 48
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 48
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 title 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 title 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 22
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 20
- 239000000975 dye Substances 0.000 claims abstract description 17
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 8
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 125000001273 sulfonato group Chemical group [O-]S(*)(=O)=O 0.000 claims abstract description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000000987 azo dye Substances 0.000 claims description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 14
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 10
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 9
- -1 diazoamino Chemical group 0.000 claims description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 claims description 4
- NRZRRZAVMCAKEP-UHFFFAOYSA-N naphthionic acid Chemical compound C1=CC=C2C(N)=CC=C(S(O)(=O)=O)C2=C1 NRZRRZAVMCAKEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 claims description 4
- XVJNOIOHMFFFIP-UHFFFAOYSA-L disodium;4-amino-3-[[4-[4-[(1-amino-4-sulfonatonaphthalen-2-yl)diazenyl]-3-methoxyphenyl]-2-methoxyphenyl]diazenyl]naphthalene-1-sulfonate Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC=CC2=C(N)C(N=NC3=CC=C(C=C3OC)C=3C=C(C(=CC=3)N=NC=3C(=C4C=CC=CC4=C(C=3)S([O-])(=O)=O)N)OC)=CC(S([O-])(=O)=O)=C21 XVJNOIOHMFFFIP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 102100037611 Lysophospholipase Human genes 0.000 claims description 2
- 108010058864 Phospholipases A2 Proteins 0.000 claims description 2
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 claims description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- NAYGOLGTZZLECJ-UHFFFAOYSA-N 1,3-thiazole-2-sulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=NC=CS1 NAYGOLGTZZLECJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- CZIRZNRQHFVCDZ-UHFFFAOYSA-L titan yellow Chemical compound [Na+].[Na+].C1=C(C)C(S([O-])(=O)=O)=C2SC(C3=CC=C(C=C3)/N=N/NC3=CC=C(C=C3)C3=NC4=CC=C(C(=C4S3)S([O-])(=O)=O)C)=NC2=C1 CZIRZNRQHFVCDZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 8
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 4
- 108010024957 Ascorbate Oxidase Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- BDSSGZJWZVGEJE-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-[4-(7-sulfo-1,3-benzothiazol-2-yl)phenyl]iminohydrazinyl]phenyl]-1,3-benzothiazole-7-sulfonic acid Chemical compound C1=CC(S(O)(=O)=O)=C2SC(C3=CC=C(C=C3)N=NNC3=CC=C(C=C3)C3=NC=4C=CC=C(C=4S3)S(=O)(=O)O)=NC2=C1 BDSSGZJWZVGEJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-UHFFFAOYSA-N 3-cholesterol Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 2
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 2
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 102000004567 6-phosphogluconate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108020001657 6-phosphogluconate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 description 1
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 description 1
- 101710195183 Alpha-bungarotoxin Proteins 0.000 description 1
- 108700023418 Amidases Proteins 0.000 description 1
- 108010004032 Bromelains Proteins 0.000 description 1
- 102000005870 Coenzyme A Ligases Human genes 0.000 description 1
- IQFVPQOLBLOTPF-UHFFFAOYSA-L Congo Red Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC=CC2=C(N)C(N=NC3=CC=C(C=C3)C3=CC=C(C=C3)N=NC3=C(C4=CC=CC=C4C(=C3)S([O-])(=O)=O)N)=CC(S([O-])(=O)=O)=C21 IQFVPQOLBLOTPF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102000001390 Fructose-Bisphosphate Aldolase Human genes 0.000 description 1
- 108010068561 Fructose-Bisphosphate Aldolase Proteins 0.000 description 1
- 108010036781 Fumarate Hydratase Proteins 0.000 description 1
- 102100036160 Fumarate hydratase, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 108010063907 Glutathione Reductase Proteins 0.000 description 1
- 102100036442 Glutathione reductase, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000004195 Isomerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000769 Isomerases Proteins 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 108010011449 Long-chain-fatty-acid-CoA ligase Proteins 0.000 description 1
- 229920001007 Nylon 4 Polymers 0.000 description 1
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710167959 Putative UTP-glucose-1-phosphate uridylyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000533293 Sesbania emerus Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 1
- 102000005840 alpha-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010030291 alpha-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 1
- 102000005922 amidase Human genes 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019835 bromelain Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N glycerol 1-phosphate Chemical compound OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 229920001600 hydrophobic polymer Polymers 0.000 description 1
- 150000002466 imines Chemical class 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- XLTANAWLDBYGFU-UHFFFAOYSA-N methyllycaconitine hydrochloride Natural products C1CC(OC)C2(C3C4OC)C5CC(C(C6)OC)C(OC)C5C6(O)C4(O)C2N(CC)CC31COC(=O)C1=CC=CC=C1N1C(=O)CC(C)C1=O XLTANAWLDBYGFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 125000000542 sulfonic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 150000003641 trioses Chemical class 0.000 description 1
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LYTCVQQGCSNFJU-LKGYBJPKSA-N α-bungarotoxin Chemical compound C(/[C@H]1O[C@H]2C[C@H]3O[C@@H](CC(=C)C=O)C[C@H](O)[C@]3(C)O[C@@H]2C[C@@H]1O[C@@H]1C2)=C/C[C@]1(C)O[C@H]1[C@@]2(C)O[C@]2(C)CC[C@@H]3O[C@@H]4C[C@]5(C)O[C@@H]6C(C)=CC(=O)O[C@H]6C[C@H]5O[C@H]4C[C@@H](C)[C@H]3O[C@H]2C1 LYTCVQQGCSNFJU-LKGYBJPKSA-N 0.000 description 1
- LYTCVQQGCSNFJU-PJLYXUTNSA-N β-bungarotoxin Chemical compound C([C@H]1O[C@H]2C[C@H]3O[C@@H](CC(=C)C=O)C[C@H](O)[C@]3(C)O[C@@H]2C[C@@H]1O[C@@H]1C2)=CC[C@]1(C)O[C@H]1[C@@]2(C)O[C@]2(C)CC[C@@H]3O[C@@H]4C[C@]5(C)O[C@@H]6C(C)=CC(=O)O[C@H]6C[C@H]5O[C@H]4C[C@@H](C)[C@H]3O[C@H]2C1 LYTCVQQGCSNFJU-PJLYXUTNSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/30—Extraction; Separation; Purification by precipitation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0055—Oxidoreductases (1.) acting on diphenols and related substances as donors (1.10)
- C12N9/0057—Oxidoreductases (1.) acting on diphenols and related substances as donors (1.10) with oxygen as acceptor (1.10.3)
- C12N9/0063—Ascorbate oxidase (1.10.3.3)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0065—Oxidoreductases (1.) acting on hydrogen peroxide as acceptor (1.11)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12N9/20—Triglyceride splitting, e.g. by means of lipase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y110/00—Oxidoreductases acting on diphenols and related substances as donors (1.10)
- C12Y110/03—Oxidoreductases acting on diphenols and related substances as donors (1.10) with an oxygen as acceptor (1.10.3)
- C12Y110/03003—L-ascorbate oxidase (1.10.3.3)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/814—Enzyme separation or purification
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
DK 164916 B
i
Opfindelsen angår en fremgangsmåde til rensning eller berigelse af biologisk aktive proteiner og et hertil egnet middel.
Til berigelsen af biologisk aktive proteiner findes der allerede flere berigelsesmidler henholdsvis -fremgangsmåder. Ek-5 sempler på egnede midler er salte såsom ammoniumsUlfat/ organiske opløsningsmidler såsom acetone, uorganiske geler, aktivt carbon, bytterkromatografi, molekylsier, polyethylen* iminer og nogle andre. I betragtning af den overordentlige mangfoldighed af naturligt forekommende aktive proteiner 10 og deres følgestoffer mærkes dog meget hyppigt den uheldige mangel på variationsmuligheder ved adskillelsen henholdsvis rensningen. Af det i og for sig allerede begrænsede antal af fremgangsmåder og midler til rensning og berigelse af proteiner kan for det meste kun ganske få anvendes i et spe-15 cielt tilfælde. Dette har til følge, at det samme rensningstrin mange gange må gentages for at opnå en nogenlunde tilfredsstillende fraseparering af følgestoffer. Oftest er de opnåede berigelsesgrader desuden ringe, og den senere fjernelse af de til berigelsen anvendte midler kræver særlige 20 forholdsregler såsom inddampning af store væskevolumener og lignende. De forskellige kendte fremgangsmåder til rensning henholdsvis berigelse af biologisk aktive proteiner har derfor i det store og hele altid de samme fremstillingstrin, som, meget ensartet omend i varierende rækkefølge, gentages.
25 Der er behov for yderligere fremgangsmåder til rensning og berigelse af biologisk aktive proteiner, som forbedrer de foreliggende variationsmuligheder og gør proteinberigelsen mere virksom. Formålet med den foreliggende opfindelse er derfor at tilvejebringe en yderligere fremgangsmåde og middel 30 til rensning henholdsvis berigelse af biologisk aktive proteiner, som i så ringe grad som muligt påvirker proteinaktiviteten og forøger de bestående variationsmuligheder.
2
DK 164916 B
Denne opgave løses ifølge opfindelsen ved en fremgangsmåde 5 til rensning henholdsvis berigelse af biologisk aktive proteiner ved tilsætning af et selektivt fældningsmiddel, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at man behandler en vandig opløsning, som indeholder det ønskede protein, ved en pH-værdi under dets isoeelektriske punkt med en 10 sådan mængde af et arylsulfonsurt azofarvestof med to sulfo= natgrupper, som er adskilt fra hinanden ved 8 - 10 i resonansforhold stående dobbeltbindinger, blandt hvilke der er mindst én N=N-dobbeltbinding, indtil mindst størstedelen af den biologiske aktivitet af det ønskede enzym befinder sig i bundfal-15 det, fraseparerer bundfaldet og ved en pH-værdi over dets isoelektriske punkt igen bringer det aktive protein i opløsning.
Fra EP A nr. 09.781 kendes en fremgangsmåde til oprensning af acy1-coenzym-A-syntetase ved affinitetskromatografi, hvor ko-lonnebærermaterialet er et polysaccharid med azofarvestof som ligand.
Fra W0 nr. 79/00541 kendes en fremgangsmåde til oprensning af proteiner ved affinitetskromatografi, hvor kolonnebærermate- 2 5 rialet ligeledes er et polysaccharid med azofarvestof som 1igand.
Således beskrives i begge disse skrifter anvendelse af aromatiske farvestoffer som ligand ved affinitetskromatografi.
3 0
Disse farvestoffer, som er bundet til en polymer matriks, tjener til at immobilisere forskellige proteiner ved binding til en fast fase. Ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fældes proteinerne derimod ved hjælp af et opløst azofarvestof.
35 3
DK 164916B
Det er ganske vist kendt, at mange farvestoffer med proteiner indgår en vekselvirkning. Forsåvidt der dog herved optræder fældning, går den biologiske aktivitet af det i fældningskom-plekset indeholdte protein normalt fuldstændigt tabt. Denne
O
denaturering optræder overraskende ikke ved de oven for definerede azofarvestoffer, desuden sker fældningen af de forskellige proteiner meget selektivt, således at der opnås en udmærket rensnings- og berigelseseffekt. Det er særligt 10 overraskende, at fremgangsmåden ifølge opfindelsen kun er lidt afhængig af fremmedsalte og derfor egner sig til anvendelse på rå celleekstrakter. Det er derfor i mange tilfælde muligt af rå celleekstrakter selektivt at fælde det søgte biologisk aktive protein og at fraseparere størstedelen af 15 de forurenende fremmedproteiner og øvrige celleekstrakt indholdsstoffer. Ligeledes er den direkte fældning af fermentationssuppen mulig. Da sulfonsyregrupperne i fældningsmidlet er fuldstændigt ioniserede ned til ca. pH-værdi 2, afhænger den for fældningen optimale pH-værdi praktisk taget 2o udelukkende af ioniserbarheden og pH-stabiliteten af det på gældende aktive protein. I almindelighed egner fremgangsmåden sig ved sådanne proteiner, hvis biologiske aktivitet også bliver opretholdt under deres isoelektriske punkt.
Denne forudsætning er i almindelighed givet, når det aktive 25 protein kan adsorberes på kationbytter uden væsentligt ak tivitetstab. Dette kan hurtigt konstateres i et simpelt for-forsøg.
Ved biologisk aktive proteiner forstås i forbindelse med den 30 foreliggende opfindelse fortrinsvis de enzymatisk aktive og de immunologisk aktive proteiner.
35
DK 164916 B
4
Fremgangsmåden egner sig også til andre biologisk aktive i proteiner, f.eks. hormoner, toksiner, immunoglobuliner og ! lignende.
5 Eksempler på enzymatisk aktive proteiner, der egner sig til fremgangsmåden ifølge opfindelsen, er ADH af lever, aldolase, α-amylase af svampe henholdsvis pankreas, ascorbatoxidase, bromelain, α-bungarotoxin, β-bungarotoxin, cholesterin= esterase, cholesterinoxidase, carboxypeptidase-B, chymotryp= sin, diaphorase, fumarase, α-galactosidase af kaffebønner eller af gær, glucose-6-phosphatdehydrogenase af gær, glu= tathionreduktase, glycerin-3-phosphatdehydrogenase, oxalat= oxidase, papain, phospholipase A2, peroxidase, penicillin= amidase, 6-phosphogluconatdehydrogenase, trypsin, triose= 15 phosphatisomerase og uridindiphosphoglucosepyrophosphorylase.
Talrige andre enzymer egner sig ligeledes.
Ifølge opfindelsen anvendes fortrinsvis som azofarvestof 3,3'-(4,4'-biphenylen-bis(azo))bis(4-amino-1-naphthalinsulfonsyre) 20 eller et med en eller flere lavere alkyl- eller lavere alkoxy-grupper substitueret derivat deraf.
Forbindelserne af disse foretrukne grupper har følgende almene formel: 25 fV, = N = N_y_y 30 R R \ϊ_^ hvori hvert R uafhængigt af hinanden betegner et hydrogen-35 atom, C^^alkyl eller C^^alkoxy.
DK 164916 B
5
Typiske eksempler på disse foretrukne grupper er de i handelen værende farvestoffer kongorødt(C.I.22120) og benzopur-purin 10B (C.I.23560).
ς
En yderligere foretrukken gruppe af azofarvestoffer består af 2,2'-[(diazoamino)-di-p-phenylen]bis(7-benzothiazolsulfonsyre) og derivater heraf med en eller flere lavere alkyl- og/eller lavere alkoxygrupper.
10 Forbindelserne af denne foretrukne gruppe har følgende almene formel: /rØ-"' HDK.XS·'' 20 hvori hvert R uafhængigt af hinanden betegner et hydrogenatom, Ci_4alkyl eller C-^alkoxy.
Et typisk eksempel fra denne foretrukne gruppe er thiazol-25 gult -S (C.I.19540).
Farvestoffet tilsættes i opløst form. 0,05 - 5%-ige opløsninger har vist sig velegnede (afhængigt af det pågældende azofarvestofs opløselighed) . Dog kan der også anvendes 30 mere kraftigt fortyndede opløsninger, selv om der herved i reglen bliver tilført unødigt meget vand. Den egnede farvestofmængde afhænger af den proteinmængde, der skal fældes.
I almindelighed ligger den mellem ca. 0,01 og ca. 2,0% vægt/volumen, fortrinsvis mellem 0,05 og 0,2% farvestof/volu-35 men-opløsning.
DK 164916B
6 pH-betingeIserne afhænger som allerede nævnt af det isoelek-triske punkt af det aktive protein. I almindelighed kommer pH-værdier mellem ca. 2 og ca. 9 i betragtning.
5 Opløsningen af bundfaldet kræver, som angivet ovenfor, at pH- værdien hæves til over det isoelektriske punkt. I almindelighed vil man derfor igen opløse det udskilte bundfald med en pufferopløsning med en pH-værdi mellem ca. 4 og ca. 10. Af den således opnåede opløsning kan farvestoffet så fjernes ved 20 hjælp af sædvanlige metoder. Eksempler herpå er: Fældning af farvestoffet ved hjælp af polykationer, fældning af det aktive protein ved tilsætning af salte såsom ammoniumsulfat, eller af organiske opløsningsmidler såsom acetone, adsorption af farvestoffet på anionbyttere såsom diethylaminoethylgruppe-15 holdige polymere carbonhydrater eller hydrofobe polymere så som polyvinyl-polypyrrolidon, dialyse eller ultrafiltrering. Egnede polykationer er f.eks. polyethyleniminerne.
Det udfældede aktive protein-azofarvestof-kompleks viser sig 20 i alle undersøgte tilfælde at være godt filtrerbart.
Da fældningen af det søgte aktive protein i mange tilfælde på grund af den høje selektivitet af fremgangsmåden kommer forud for fældningen af andre proteiner og følgestoffer, viser den lette fjernelighed sig som særligt fordelagtig for 25 berigelsen. De af det søgte protein udfældede stoffer kan på grund af denne egenskab let og fuldstændigt frasepareres.
Det samme gælder for fældningen af det søgte aktive protein selv, som igen let kan frasepareres ved filtrering eller centrifugering af de endnu i opløsning værende forureninger.
30
Opfindelsen angår desuden et middel til selektiv fældning af biologisk aktive proteiner af deres vandige opløsninger uden tab af den biologiske aktivitet, hvilket middel er ejendommeligt ved, at det indeholder eller består af et arylsulfon-35 7
DK 164916 B
surt azofarvestof med to sulfonatgrupper, som er adskilt fra hinanden med 8 - 10 i resonansforhold stående dobbeltbindinger, hvoraf mindst én er en N=N-dobbeltbinding. Et foretrukket middel af denne art indeholder som azofarvestof 3,3'-(4,4'-bi= 5 phenylylen -bis (azo) )bis (4-amino-l-naphthalinsulfonsyre) og/eller et med en eller flere lavere alkyl- eller lavere alkoxygrupper substitueret derivat deraf. Et yderligere foretrukket middel indeholder 2,2'-[(diazoamino)-di-p-phenylen]-bis(7-benzothiazolsulfonsyre) og/eller derivater deraf, som 10 har en eller flere lavere alkyl- og/eller lavere alkoxygrup per.
Opfindelsen frembyder talrige fordele. Der er allerede nævnt den forholdsvis ringe indvirkning på fældningen af opløsningens saltindhold, således at meget urene opløsninger såson 15 fermentationssupper og celleåbneropløsninger kan behandles direkte ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen. Ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen anvendes desuden en ringe mængde fældningsmiddel, og herved spares i mange tilfælde den hidtil til fældningen nødvendige store mængde organisk opløsningsmiddel. I et typisk tilfælde blev der hidtil til for-rensning af en råekstrakt krævet 60%-ige acetone-henholdsvis methanolkon-centrationer, hvilket ved 1.000 liter råekstrakt kræver 1.500 liter organisk opløsningsmiddel. I modsætning hertil lykkes det ifølge opfindelsen at opnå fældningen med 1 kg farvestof og samtidig desuden en langt bedre rensning, dvs. fraseparering af uønskede følgestoffer.
De følgende eksempler belyser opfindelsen yderligere.
30 EKSEMPEL 1.
En i handelen værende lyofiliseret rålipase blev opløst i 0,01M natriumacetat, pH-værdi 3,6, til en aktivitet på ca.
650 U/ml. Denne opløsning blev tilsat 0,3 mg kongorødt pr.
ml i form af en 2%-ig vandig opløsning. Der fremkom et bundfald, 35
DK 164916 B
8 som indeholdt ca. 70% af udgangsaktiviteten. I den overliggende fraktion kan der kun endnu konstateres en ringe restaktivitet. Bundfaldet filtreres fra, eftervaskes med den samme puffer og opløses igen med puffer, pH-værdi 5,0. Ved tildryp-5 ning af en 10%-ig polyethyleniminopløsning udfældes farvestof fet kvantitativt. Den samlede aktivitet af bundfaldet findes derefter i den overliggende fraktion.
En gentagelse af dette forsøg med benzopurpurin 10B giver prak-10 tisk taget samme resultat.
EKSEMPEL 2.
En ascorbatoxidaseholdig råekstrakt i Ο,ΟΙΜ kaliumphosphat/ 15 acetat-puffer, pH-værdi 4,6, med et indhold af ca. 20 U/ml ascorbatoxidase behandles med 0,4 mg kongorødt/ml i form af en 2%-ig vandig opløsning. Det dannede bundfald skilles fra.
I den overliggende fraktion måles en restaktivitet på 1%. Bundfaldet opløses med 0,05M kaliumphosphatpuffer, pH-værdi 20 7,6. Således fås ca. 60% af udgangsaktiviteten i opløsningen.
Farvestoffet kan frasepareres som beskrevet i eksempel 1.
EKSEMPEL 3.
Renset cholesterinesterase optages i 0,05M kaliumphosphat-2 5 puffer, pH-værdi 4, til en koncentration på ca. 75 U/ml.
Den således opnåede opløsning tilsættes 1 mg kongorødt pr. ml opløsning, og det dannede bundfald skilles fra. I den overliggende fraktion konstateres 1% af udgangsaktiviteten; bundfaldet indeholder 99% af aktiviteten. Efter opløsning Λ af bundfaldet i 0,1M kaliumphosphatpuffer, pH-værdi 6, fås igen 100% af aktiviteten af bundfaldet i opløsningen.
Fremgangsmåden blev gentaget, idet der til udgangsopløsningen var blevet tilsat 0,3M natriumchlorid. Resultaterne forblev 35 uændrede.
Claims (12)
1. Fremgangsmåde til rensning henholdsvis berigelse af biologisk aktive proteiner ved tilsætning af et selektivt fældningsmiddel, kendetegnet ved, at man behandler en 35 vandig opløsning, som indeholder det ønskede protein, ved en pH-værdi under dets isoelektriske punkt med en sådan mængde DK 164916B af et arylsulfonsurt azofarvestof med to sulfonatgrupper, som ved hjælp af 8 - 10 i resonansforhold stående dobbeltbindinger, hvoraf .mindst én er en N=N-dobbeltbinding, er fjernet fra hinanden, indtil i det mindste størstedelen af den biologiske 5 aktivitet af det ønskede aktive protein befinder sig i bund faldet, fraskiller bundfaldet og igen bringer det aktive protein i opløsning ved en pH-værdi over dets isoelektriske punkt.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, 10 at man som azofarvestof anvender 3,3'-{4,4'-biphenylylen-bis- (azo) )bis (4-amino-l-naphthalinsulfonsyre) elleret med en eller flere lavere alkyl- eller lavere alkoxygrupper substitueret derivat deraf.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendetegnet ved, at man anvender kongorødt (C.I.22120) eller benzopurpurin 10B (C.I.23560).
4. Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendetegnet ved, 20 at man anvender 2,2' - [ (diazoamino) -di-p-phenylen]-bis (7-benzo= thiazolsulfonsyre) eller et derivat deraf med en eller flere lavere alkyl- og/eller lavere alkoxygrupper.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 4, kendetegnet ved, 25 at man anvender thiazolgult G (C.I.19540).
6. Fremgangsmåde ifølge et af de foregående krav, kendetegnet ved, at man tilsætter 0,01- 2,0% vægt/volumen farvestof. 3 0
7. Fremgangsmåde ifølge et af de foregående krav, kendetegnet ved, at man tilsætter azofarvestoffet i form af en 0,05 - 5%-ig opløsning.
8. Fremgangsmåde ifølge et af de foregående krav, k e n -3 5 detegnet ved, at man gennemfører fældningen ved pH-værdier mellem 2 og 9. DK 164916B
9. Fremgangsmåde ifølge et af de foregående krav, kendetegnet ved, at man opløser det udskilte bundfald med pufferopløsning, pH-værdi 4,5 - 10.
10. Middel til selektiv fældning af biologisk aktive protei ner af deres vandige opløsninger uden tab af biologisk aktivitet, kendetegnet ved, at det indeholder eller består af et arylsulfonsurt azofarvestof med to sulfonatgrup-per, som er adskilt fra hinanden ved 8 - 10 i resonans forhold 10 stående dobbeltbindinger, hvoraf mindst én er en ^N-dobbelt binding.
11· Middel ifølge krav 10, kendetegnet ved, at man som azofarvestof anvender 3,3'-(4,4'-biphenylylen-bis- 15 (azo))bis(4-amino-l-naphthalinsulfonsyre) eller et derivat deraf med en eller flere lavere alkyl- og/eller lavere alkoxy-grupper.
12. Middel ifølge krav 10, kendetegnet ved, at 20 man anvender 2,2'-[(diazoamino)-di-p-phenylen]bis(7-benzo= thiazolsulfonsyre) eller et derivat deraf med en eller flere lavere alkyl- og/eller lavere alkoxygrupper. 25 30 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3119453 | 1981-05-15 | ||
| DE19813119453 DE3119453A1 (de) | 1981-05-15 | 1981-05-15 | Verfahren zum reinigen bzw. anreichern von biologisch aktiven proteinen und hierzu geeignetes mittel |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK218582A DK218582A (da) | 1982-11-16 |
| DK164916B true DK164916B (da) | 1992-09-07 |
| DK164916C DK164916C (da) | 1993-02-01 |
Family
ID=6132447
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK218582A DK164916C (da) | 1981-05-15 | 1982-05-14 | Fremgangsmaade til rensning eller berigelse af biologisk aktive proteiner og hertil egnet middel |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4451487A (da) |
| EP (1) | EP0065286B1 (da) |
| JP (1) | JPS57193494A (da) |
| AT (1) | ATE22651T1 (da) |
| DE (2) | DE3119453A1 (da) |
| DK (1) | DK164916C (da) |
| ZA (1) | ZA823339B (da) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4743550A (en) * | 1985-04-29 | 1988-05-10 | Union Carbide Corporation | Method for improving the partition coefficient in enzyme-containing systems having at least two phases |
| NZ216094A (en) * | 1985-05-15 | 1989-06-28 | Commw Serum Lab Commission | Method for purification of an immunoglobulin |
| US5597485A (en) * | 1988-05-13 | 1997-01-28 | Vilmax S.A. | Process for separating proteins |
| JPH02132163U (da) * | 1989-04-10 | 1990-11-02 | ||
| JPH0311159U (da) * | 1989-06-20 | 1991-02-04 | ||
| US5182369A (en) * | 1990-02-28 | 1993-01-26 | Monsanto Company | Method for purifying somatotropin monomers |
| JPH0464651U (da) * | 1990-10-17 | 1992-06-03 | ||
| JPH07217721A (ja) * | 1994-02-04 | 1995-08-15 | Shinano Kenshi Co Ltd | 歯車とその取付構造 |
| JP3321984B2 (ja) * | 1994-05-17 | 2002-09-09 | 味の素株式会社 | 蛋白塩酸加水分解物製造工程での改善された食塩分離法 |
| DE102005001362A1 (de) * | 2005-01-11 | 2006-07-20 | Protagen Ag | Verfahren und Vorrichtung zur Quantifizierung von Proteinen |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3098015A (en) * | 1961-01-21 | 1963-07-16 | Kabi Ab | Enzyme purification |
| US3580840A (en) * | 1969-03-18 | 1971-05-25 | Litton Systems Inc | Process for treating sewage and other contaminated waters |
| US3728224A (en) * | 1970-11-12 | 1973-04-17 | Miles Lab | Enzyme purification process |
| SE356735B (da) * | 1970-12-02 | 1973-06-04 | Svenska Cellulosa Ab | |
| DE2966596D1 (en) * | 1978-01-24 | 1984-03-08 | Secr Defence | Improvements in or relating to media for affinity chromatography |
| EP0009781B2 (en) * | 1978-09-29 | 1986-04-23 | Mitsubishi Kasei Corporation | Process for the purification of long-chain acyl-coenzyme-a synthetase and the enzyme, acyl-coa synthetase, purified thereby |
-
1981
- 1981-05-15 DE DE19813119453 patent/DE3119453A1/de not_active Withdrawn
-
1982
- 1982-05-12 AT AT82104186T patent/ATE22651T1/de not_active IP Right Cessation
- 1982-05-12 EP EP82104186A patent/EP0065286B1/de not_active Expired
- 1982-05-12 US US06/377,277 patent/US4451487A/en not_active Expired - Fee Related
- 1982-05-12 DE DE8282104186T patent/DE3273606D1/de not_active Expired
- 1982-05-13 JP JP57079292A patent/JPS57193494A/ja active Granted
- 1982-05-14 ZA ZA823339A patent/ZA823339B/xx unknown
- 1982-05-14 DK DK218582A patent/DK164916C/da not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0065286A3 (en) | 1984-06-13 |
| DE3119453A1 (de) | 1982-12-09 |
| DK218582A (da) | 1982-11-16 |
| US4451487A (en) | 1984-05-29 |
| JPS57193494A (en) | 1982-11-27 |
| ATE22651T1 (de) | 1986-10-15 |
| EP0065286B1 (de) | 1986-10-08 |
| ZA823339B (en) | 1983-04-27 |
| JPS6240360B2 (da) | 1987-08-27 |
| EP0065286A2 (de) | 1982-11-24 |
| DK164916C (da) | 1993-02-01 |
| DE3273606D1 (en) | 1986-11-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| London et al. | Renaturation of Escherichia coli tryptophanase after exposure to 8 M urea: evidence for the existence of nucleation centers | |
| Regalado et al. | Studies on the purification of peroxidase from horseradish roots using reverse micelles | |
| RU2203949C2 (ru) | Способ получения проинсулина человека | |
| FI111551B (fi) | Menetelmä erittäin puhdistetun emäksisen proteaasin valmistamiseksi ja menetelmällä valmistetun proteaasin käyttö | |
| DE69626976T2 (de) | BEHANDLUNG EINER PROTEINLÖSUNG MIT A1/Fe UND ANSCHLIESENDE MEMBRANKONZENTRATION | |
| JPH0231687A (ja) | 血清アルブミンの純化方法 | |
| DK164916B (da) | Fremgangsmaade til rensning eller berigelse af biologisk aktive proteiner og hertil egnet middel | |
| EP0700300A1 (en) | Purification of plasma proteins | |
| US3947324A (en) | Method for isolating high purity peroxidase | |
| Dong et al. | Complete removal and exchange of sodium dodecyl sulfate bound to soluble and membrane proteins and restoration of their activities, using ceramic hydroxyapatite chromatography | |
| FI98643C (fi) | Menetelmä luonnollisesti tuotetun kymosiinin talteenottamiseksi | |
| Sharma et al. | Purification of alkaline phosphatase from chicken intestine by three-phase partitioning and use of phenyl-Sepharose 6B in the batch mode | |
| CA1316135C (en) | Membrane filtration of cell culture media with charged particles | |
| US7935798B2 (en) | Method for the extraction of intracellular proteins from a fermentation broth | |
| JP2006515568A (ja) | 複合媒体から組み換えタンパク質を精製する方法およびそれにより得られる精製タンパク質 | |
| CA3147428A1 (en) | Method for preparing botulinum toxin | |
| EP0202678B1 (en) | Process for dissolving enzymes | |
| JP3325107B2 (ja) | 水性二相分離法 | |
| CA1117879A (en) | T-factor, coa-spc substantially free of proteolytic enzymes and its preparation | |
| Davidson et al. | Partial purification and some properties of thyroid peroxidase solubilized by extraction with n-butanol | |
| EP1234507A1 (en) | Process for isolating beta-lactoglobulin from milk or milk fractions | |
| Geahel et al. | Integration of ion exchange and ultrafiltration steps studied during purification of formate dehydrogenase using DEAE dextran | |
| Dissing et al. | Integrated removal of nucleic acids and recovery of LDH from homogenate of beef heart by affinity precipitation | |
| EP0019857B1 (en) | Apoglucose oxidase preparation and its production | |
| JPS63132898A (ja) | 蛋白質の分離精製方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |