DK164544B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af substituerede benzonitriler - Google Patents

Description

DK 164544 B

Den foreliggende opfindelse angår en analogif remgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte substituerede benzonitriIfor-bindelser med formlen (I)

CN

ίο hvor X er et oxygen- eller svovlatom, R* er brom (Br), chlor (Cl), fluor (F), phenoxy, Cj_3-alkylthio, Ci_3-alkylsulfinyl, Ci„3-alkylsulfonyl, C^.g-alkylaminosulfonyl, di-Cl-3-alkylami-nosulfonyl, benzoyl, C^.ø-alkoxy, Cj_3-alkyl, halogeneret 15 C1_3-alkyl eller acetyl, og R2 er hydrogen (H), brom, chlor, fluor eller trifluormethyl (CF3), og n er tallet 1, 2, 3 eller 4.

Som anvendt i den foreliggende beskrivelse og krav betyder 20 "Ci_3-alkyl" en Cj_3-alkylgruppe, methyl, ethyl, propyl eller isopropyl, "halogeneret Cj^-alkyl" refererer til et C^_3-al-kyl substitueret med fortrinsvis fra 1 til 4 substituenter valgt af gruppen bestående af Br, Cl eller F såsom trifluormethyl, 2,2-dichlorl,l-di fluorethyl og 1-chlorpropyl. "Ci_3-alk-25 oxy" refererer til en Cj_3-alkoxygruppe, såsom methoxy, ethoxy, propoxy og isopropoxy. De substituenter, som indeholder udtrykket "C^ø-alkyl", refererer til grupper, som f.eks. "Cj_3-alkylsulfonyl" som repræsenterer methylsu1fony1, ethyl-sulfonyl, propylsulfonyl og isopropyIsulfonyl, og "di-C^_3-al-3 o kylaminosulfonyl" repræsenterer f.eks. dimethylaminosulfonyl, diethylaminosulfonyl, dipropylaminosulfonyl, diisopropylamino-sulfonyl og Ν,Ν-methylaminosulfonyl.

Foretrukne forbindelser er dem, hvori R1 er brom, chlor, 35 Cj-3-alkylsulfinyl, C1_3-alkyl sulfonyl, C1_3-alkyl, halogene ret Cj-s-alkyl eller Cj.ø-alkoxy, R2 er hydrogen, brom, chlor, fluor eller trifluormethyl, X er 0, og n er 1 eller 2. Særligt foretrukne forbindelser er dem, hvori R* er brom, chlor eller halogeneret Ci_3-alkyl, R2 er hydrogen, brom, chlor eller CF3, X er 0, og n er 1 eller 2.

2

DK 164544B

5 Af bekvemmelighedsgrunde omtales forbindelserne fremstillet ved analogifremgangsmåden i den foreliggende ansøgning somme tider som "substituerede benzonitri 1 er".

Forbi ndelserne fremstillet ved analogifremgangsmåden ifølge 10 opfindelsen er i almindelighed krystal linske faste stoffer, der har begrænset vandopløselighed, men som er opløselige i varierende grad i organiske opløsningsmidler såsom methylen-chlorid, methanol og ethanol. Forbindelserne beskrevet i den foreliggende ansøgning udviser antiviral virkning og kan så-15 ledes anvendes til at hæmme vira! formering ved at bringe en virus og fortrinsvis virusværtsceller i kontakt med en effektiv mængde af forbindelsen. De ved anal og i fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser kan anvendes til fremstilling af antivirale midler, ved hvilke en virus eller 20 virusværtscelle (dvs. en celle som er modtagelig for infektion af virusen) bringes i berøring med en effektiv, men ugiftig mængde af en eller flere af de foreliggende forbindelser, samt antivirale midler, der indeholder fra 0,1 mikrogram (pg) eller mindre af den aktive forbindelse pr. milliliter (ml) bærer til 25 99 vægtprocent af den aktive forbindelse i kombination med en farmaceutisk anvendelig bærer.

Som det fremgår af de senere i beskrivelsen omtalte sammenligningsforsøg, er forbindelserne fremstillet ved analogifrem-30 gangsmåden ifølge opfindelsen klart overlegne i forhold til den kendte forbindelse 5-(3,4-dichlorphenoxy)-2-nitrobenzoni-tril med hensyn til antiviral virkning.

Analogifremgangsmåden ifølge opfindelsen til fremstilling af 35 forbindelserne med formlen (I) er ejendommelig ved at en substitueret benzenforbindelse af formlen Bz-A bringes til at reagere med en substitueret benzenforbindelse af formlen

Bzl-X-Y, hvor A er halogen, X er 0 eller S, Y er hydrogen el ler en phenatsalt-dannende kation såsom natrium eller kalium, og hvor Bz er en af molekyldelene 2-cyano-4-nitropheny1 eller 3

DK 164544 B

"©o*.

hvor n, R* og R2 har den i forbindelse med formel I angivne 10 betydning, og Bz* er den anden af disse molekyIdele. Reaktionen forløber, når reaktionsdeltagerne bringes i berøring med hinanden og blandes, i nærværelse af phenatsalt-dannende alkali såsom et alkalimetalhydroxid eller -carbonat, når Y er hydrogen, og i nærværelse af et indifferent organisk opløsnings-15 middel såsom dimethylsulfoxid, methylethylketon eller acetoni-tril. Reaktionen forløber godt ved temperaturer på 60 - 100°C, og udmærkede udbytter fås på 2 - 4 timer, omend noget strengere betingelser kan være nyttige, når Bz* er 2-cyano-4-nitro-phenyl. Reaktionsdeltagerne kan kombineres i enhver rækkeføl-20 ge og i varierende mængder, men reaktionsdeltagerne forbruges i ækvimolære mængder, og anvendelse af c irka-ækvimolære mængder foretrækkes derfor. Når Y er hydrogen, anvendes også en c irka-ækvi mo 1 ær mængde phenatsalt-dannende alkali. Forbindelserne kan fraskilles og renses på sædvanlige måder.

25

Mere specielt udføres ana 1 og ifremgangsmåden ifølje opfindelsen bekvemt ved reaktion af en forbindelse af formlen

Wy- (R2)n 1 2 3 5 hvor η, X, R og R har den førnævnte betydning, med en 2-halogen-5-nitrobenzonitril i et indifferent organisk op- 4

DK 164544 B

løsningsmiddel i nærværelse af et alkalisk middel (i den foreliggende beskrivelse også omtalt som phenatsalt-dannende alkali) under betingelser, der er tilstrækkelige til at danne den foreliggende forbindelse. Det alkaliske middel skal have tilstrækkelig basicitet og tilstrækkelig koncentration til at omdanne forbindelsen af formlen II

5 til dens salt til reaktion med 2-halogen-5-nitrobenzonitri-len.

Alternativt kan analogifremgangsmåden gennemføres ved reaktion af en substitueret halogenbenzen af formlen 10 1 ,3©“* (R >n 1 2 15 hvor A er halogen, og n, R og R har den førnævnte betydning, med en 2-cyano-4-nitrophenol eller l-mercapto-2-cyano- 4-nitrobenzen i et indifferent organisk opløsningsmiddel i nærværelse af et alkalisk middel under betingelser, der er tilstrækkelige til at danne den foreliggende forbindelse.' 20 Det alkaliske middel i denne reaktion skal være af tilstrækkelig basicitet og i tilstrækkelig koncentration til at omdanne 2-cyano-4-nitrophenolen eller l-mercapto-2-cyano- 4-nitrobenzenen til dens salt til reaktion med forbindelsen af formlen III. Afhængende af substituenterne i forbindel- 25 sen af formlen III kan der kræves strengere reaktionsbetingelser end til reaktionen af en forbindelse af formlen II med en 2-halogen-5-nitrobenzonitril, og/eller reaktionen kan give mere end en af de foreliggende forbindelser, hvilket kræver yderligere adskillelsestrin, når der ønskes en 30 enkelt forbindelse.

Specielt udøves analogifremgangsmåden ifølge opfindelsen til fremstil-æcmg af de substituerede benzonitriler med formlen I:

Forbindelsen med formlen II bringes til at reagere med en 2-halogen-5-nitrobenzonitril, i almindelighed 2-chlor-5- J J Ύ"> Λ «ΪΛηΐ 4·νί 1 ««am -£Γ -.5--. — U 1--. -tnIt«* A rnpsl -r\ 5

DK 164544B

koncentrationer af ovennævnte reaktionsdeltagere bringes i kontakt og blandes i et indifferent organisk opløsningsmiddel, fortrinsvis dimethylsulfoxid (DMSO) eller aceto= nitril, og opvarmes til en temperatur på 60 - 100°C i 5 nærværelse af et alkalisk middel, fortrinsvis natrium= hydroxid eller kaliumcarbonat, i tilstrækkelig tid til at få den ønskede forbindelse, i reglen fra 1 til 10 timer. Traditionelle metoder såsom fortynding med vand og filtrering kan anvendes til at udvinde de foreliggende forbin-10 delser af reaktionsblandingen. Rensning opnås ved sædvanlig teknik såsom omkrystallisation af opløsningsmidler såsom alkanoler, alkylalkanolethere, chloroform, dimethyl= formamid, methylethylketon, isopropylacetat eller eddikesyre.

15 De forbindelser, hvori R* er C1_3-alkylsulfiny1 eller Ci.s-alkylsulfonyl og X er et oxygenatom, kan også fremstilles ved at oxidere den ønskede stamforbindelse af formlen I, hvori Ri er C2_3~alkylthio, og X er et oxygenatom. Oxidationen udføres bekvemt ved at oxidere svovlatomet i stamforbindelsen 2Q med et egnet oxidationsmiddel, f.eks. hydrogenperoxid i iseddike, under betingelser, ved hvilke der fås den ønskede Cj_3-a1ky1su1fi ny 1 - eller Cj_3-alkylsulfonyl-substituent.

Reaktionsdeltagere til de i det foregående beskrevne analogifremgangsmåder til fremstilling af de foreliggende forbindelser 25 er industrielt tilgængelige eller fremstilles let ved fremgangsmåder, der er velkendte. Forbindelsen 2-chlor-5~nitro= benzonitril er industrielt tilgængelig, og det samme er de fleste af de substituerede phenoler og substituerede thio= phenoler, repræsenteret ved formlen II. De substituerede 50 phenoler, som har en di-C^_^-alkylaminosulfonyl-substituent, fremstilles let ved anvendelse af lignende fremgangsmåder som dem, der er beskrevet i Eliel m.fl., J.Org.Chem.20, 1657 (1955).

DK 164544 B

6

Som anvendt i den foreliggende beskrivelse refererer udtrykket "indifferent organisk opløsningsmiddel" til organiske opløsningsmidler, der ikke selv undergår reaktion, under de betingelser, der anvendes til fremstilling af de 5 foreliggende forbindelser. Eksempler på egnede indifferente organiske opløsningsmidler er dimethylsulfoxid, methyleethylketon, acetonitril, toluen eller dimethylfor= mamid. "Alkaliske midler" refererer til baser, som er i stand til at danne salte med phenoler såsom natriumhydroxid, 10 kaliumhydroxid, natriumcarbonat og kaliumcarbonat, og "halo= gen" refererer til brom, chlor, fluor eller jod.

De følgende eksempler illustrerer nærmere opfindelsen.

Eksempel 1; 2-(3,4-dichlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril.

Til en opløsning af 91,3 g (0,56 mol) 3,4-dichlorphenol, 15 opløst i 500 ml dimethylsulfoxid (DMSO)y blev der sat 22,4 g (0,56 mol) natriumhydroxid (NaOH). Opslæmningen blev opvarmet til 60°C i 15 minutter, og der blev tilsat 100 g (0,55 mol) 2-chlor-5-nitrobenzonitril. Blandingen blev opvarmet til 75°C i 3 timer. Reaktionsblandingen blev af-20 kølet og hældt i en opslæmning af 200 ml 2N NaOH og 1.800 ml is og vand, hvorved produktet udfældede. Produktet blev opsamlet ved filtrering, vasket godt med vand og tørret til dannelse af 163,3 g produkt (96,4% udbytte), smeltepunkt 154 - 155°C. Omkrystallisation af 3-methoxy-2-propa= 25 nol gav renset 2-(3,4-dichlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril, som smelter ved 155 - 156°C. De fremtrædende infrarøde bånd for 2-(3,4-dichlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril var følgende: IR (Nujol) 2.250, 1.620, 1.580, 1.520, 1.465, 1.360, 1.270, 1.130, 1.040 og 895 cm 30 EKSEMPEL 2: 2-(2,4-dichlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril.

Til en opløsning af 5,0 g (0,037 mol) 2,4-dichlorphenol, opløst i 150 ml DMSO, blev der sat 1,23 g (0,0307 mol) NaOH. Op-

DK 164544 B

7 slæmningen blev opvarmet til 60°C i 1’5 minutter, og der blev tilsat 5,04 g (0,0276 mol) 2-chlor-5-nitrobenzonitril. Blandingen blev opvarmet til 75°C i 3 1/4 time. Reaktionsblandingen blev afkølet og hældt i vand. Produktet blev 5 opsamlet ved filtrering, vasket godt med vand og tørret og gav 8,1 g produkt (95,3% udbytte). Omkrystallisation af ethanol gav renset 2-(2,4-dichlorphenoxy)-5-nitrobenzo= nitril, smeltepunkt 153,5 - 154,5°C.

EKSEMPEL 3: 2-(4-bromphenoxy)-5-nitrobenzonitril.

10 Til en opløsning af 5,31 g (0,0307) 4-bromphenol, opløst i 150 ml DMSO, blev der sat 1,23 g (0,0307 mol) NaOH. Opslæmningen blev opvarmet til 60°C i 15 minutter, og der blev tilsat 5,04 g (0,0276 mol) 2-chlor-5-nitrobenzonitril. Blandingen blev opvarmet til 75°C i 4 timer. Reaktionsblandin-15 gen blev afkølet og hældt i vand. Produktet blev opsamlet ved filtrering, vasket godt med vand og tørret, hvilket gav 8,1 g rå produkt. Det rå produkt blev opløst i CE^C^ og vasket med 10% vandig NaOH, vand og tørret (Na^O^) . Fjernelse af opløsningsmiddel i vakuum gav 7,5 g (85% ud-20 bytte) af produktet. Omkrystallisation af ethanol gav renset 2-(4-bromphenoxy)-5-nitrobenzonitril, smeltepunkt 171 -172°C.

EKSEMPEL 4: 2-(4-chlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril.

Til en opløsning af 3,95 g (0,0307 mol) 4-chlorphenol, opløst 25 i 150 ml DMSO, blev der sat 1,23 g (0,0307 mol) NaOH. Opslæmningen blev opvarmet til 60°C i 15 minutter, og 5,04 g (0,0276 mol) 2-chlor-5-nitrobenzonitril blev tilsat, og blandingen blev opvarmet til 75°C i 3 timer. Reaktions-blandingen blev afkølet og hældt i vand. Produktet blev 30 opsamlet ved filtrering, vasket godt med vand og tørret til dannelse af 7,0 g af produktet (92% udbytte). Omkrystallisation af ethanol gav renset 2-(4-chlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril, smeltepunkt 163 - 164°C.

EKSEMPEL· 5: 2-(4-phenoxyphenoxy)-5-nitrobenzonitril.

8

DK 164544 B

Til en opløsning af 5,71 g (0,0307 mol) 4-phenoxyphenol, opløst i 150 ml DMSO, blev der sat 1,23 g (0,0307 mol) NaOH. Opslæmningen blev opvarmet til 75°C i 15 minutter, og 5,04 g (0,0276 mol) 2-chlor-5-nitrobenzonitril blev tilsat, 5 og blandingen blev opvarmet til 75°C i 4 timer. Reaktionsblandingen blev afkølet og hældt i vand. Produktet blev opsamlet ved filtrering, vasket godt med vand og tørret.

Det rå produkt blev opløst i Ci^C^ og vasket med 10% vandig NaOH, vand og tørret (Na2SO^). Fjernelse af opløsnings-10 midlet i vakuum gav 8,0 g (87% udbytte) af produktet. Omkrystallisation af ethanol gav renset 2-(4-phenoxyphenoxy)- 5-nitrobenzonitril, smeltepunkt 150 - 151,5°C.

EKSEMPEL 6: 2-(4- (methylthio)phenoxy)-5-nitrobenzonitril.

Til en opløsning af 11,55 g (0,0824 mol) 4-(methylthio)phe= 15 nol, opløst i 150 ml DMSO,blev der sat 3,3 g (0,0824 mol)

NaOH. Opslæmningen blev opvarmet til 60°C, og 13,7 g (0,0730 mol) 2-chlor-5-nitrobenzonitril blev tilsat, og blandingen blev opvarmet til 75°C i 2 1/2 time. Blandingen blev afkølet og hældt i en opløsning af 200 ml 5N vandig 20 NaOH og 500 ml vand. Produktet blev opsamlet ved filtrering, vasket godt med vand og tørret til dannelse af 20,3 g produkt (94,6% udbytte). Omkrystallisation af methanol gav renset 2-(4-(methylthio)phenoxy)-5-nitrobenzonitril, smeltepunkt 124 - 126°C.

25 EKSEMPEL 7; 2-(4-(methylsulfinyl)phenoxy)-5-nitrobenzonitril.

Til en opslæmning af 10,0 g (0,0350 mol) 2-(4-(methylthio) phenoxy)-5-nitrobenzonitril i 100 ml iseddike blev der sat en opløsning af 4,0 g vandig 30% hydrogenperoxid (0,0350 mol) opløst i 20 ml iseddike i løbet af 5 minutter.

35 Reaktionsblandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 16 timer og opvarmet til 50°C i 3 timer. Reaktionsblandingen 9

DK 164544B

blev omrørt ved stuetemperatur i 16 timer og opvarmet til 50°C i 3 timer. Reaktionsblandingen blev hældt i vand og produktet opsamlet ved filtrering, vasket godt med vand og tørret til dannelse af 9,8 g produkt (92,8% 5 udbytte). Omkrystallisation af ethanol gav renset 2—(4— (methylsulfinyl)phenoxy)-5-nitrobenzonitril, smeltepunkt 159 - 160°C.

EKSEMPEL 8. 2-(4-(methylsulfonyl)phenoxy)-5-nitrobenzonitril.

Til en opslæmning af 10,0 g (0,0350 mol) 2-(4-(methylthio) 10 phenoxy)-5-nitrobenzonitril i 75 ml iseddike, opvarmet til 60°C, blev der sat 15,85 g vandig 30% hydrogenperoxid (0,140 mol) i løbet af 5 minutter. Yderligere 25 ml iseddike blev tilsat, og blandingen blev opvarmet til 75°C i 3 timer. Reaktionsblandingen blev afkølet og hældt i 15 vand. Produktet blev samlet ved filtrering, vasket med vand og tørret til dannelse af 10,9 g produkt (98,2% udbytte), smeltepunkt 205 - 206,5°C. Omkrystallisation af methanol gav renset 2-(4-(methylsulfonyl)phenoxy)-5-nitro= benzonitril, smeltepunkt 206 - 207°C.

20 EKSEMPEL 9. N,N-dimethyl-4-(2-cyano-4-nitrophenoxy)benzen= sulfonamid.

Til en opløsning af 6,37 g (0,0317 mol) N,N-dimethyl-4-hy= droxybenzensulfonamid i 150 ml DMSO blev der sat 1,27 g (0,0317 mol) NaOH. Blandingen blev opvarmet til 60°c, 25 og 5,26 g (0,0288 mol) 2-chlor-5-nitrobenzonitril blev tilsat, og blandingen blev opvarmet til 75°C i 2 1/2 time. Reaktionsblandingen blev afkølet og hældt i en opløsning af 400 ml 2N vandig NaOH og 300 ml vand. Produktet blev samlet ved filtrering, vasket godt med vand og tørret til 30 dannelse af 8,8 g produkt (88% udbytte). Omkrystallisation af en blanding af ethanol og dimethylformamid gav renset N,N-dimethyl-4-(2-cyano-4-nitrophenoxy)benzensulfon=

DK 164544B

xo amid, smeltepunkt 221,5 - 223°C.

EKSEMPEL 10: N,N-diethyl-4-(2-cyano-4-nitrophenoxy)benzen= sulfonamid.

Til en opløsning af 6,73 g (0,0294 mol) N,N-diethyl-4-hy= 5 droxybenzensulfonamid i 150 ml DMSO blev der sat 1,18 g (0,0294 mol) NaOH. Blandingen blev opvarmet til 60°C, og 4,88 g (0,0267 mol) 2-chlor-5-nitrobenzonitril blev tilsat, og blandingen blev opvarmet til 75°C i 3 timer. Reaktionsblandingen blev afkølet og hældt i en opløsning af 10 400 ml 2N vandig NaOH og 300 ml vand. Produktet blev samlet ved filtrering, vasket godt med vand og tørret til dannelse af 8,8 g produkt (88% udbytte). Omkrystallisation af ethanol gav renset N,N-diethyl-4-(2-cyano-4-nitrophenoxy) benzensulfonamid, smeltepunkt 163 - 164°C.

15 EKSEMPEL 11: 2- (4-benzoylphenoxy)-5-nitrobenzonitril.

Til en opløsning af 11,4 g (0,0575 mol) 4-hydroxybenzophenon, opløst i 150 ml DMSO, blev der sat 2,3 g (0,0575 mol) NaOH. Blandingen blev opvarmet til 60°C, og 10,0 g (0,0548 mol) 2-chlor-5-nitrobenzonitril blev tilsat og blandingen op-20 varmet til 75°C i 3 timer. Reaktionsblandingen blev afkølet og hældt i en opløsning af 100 ml 2N vandig NaOH og 700 ml vand. Produktet blev samlet ved filtrering, vasket godt med vand og tørret til dannelse af 17,75 g produkt (89,6% udbytte). Omkrystallisation af en blanding af etha= 25 nol og dimethylformamid og en anden omkrystallisation af chloroform gav renset 2-(4-benzoylphenoxy)-5-nitrobenzo= nitril, smeltepunkt 179,5 - 180,5°C.

EKSEMPEL 12: 2- ((4-chlorphenyl)thio)-5-nitrobenzonitril.

Til en opløsning af 15,2 g (0,105 mol) 4-chlorthiophenol, 50 opløst i 150 ml DMSO, blev der sat 4,2 g (0,105 mol) NaOH. Blandingen blev opvarmet til 60°C, og 18,3 g (0,100 mol) 2-chlor-5-nitrobenzonitril blev tilsat, og blandingen blev

DK 164544 B

11 opvarmet til 60°C i 2 1/2 time. Blandingen blev afkølet og hældt i en opløsning af 100 ml 2N vandig NaOH og 600 ml vand. Produktet blev samlet ved filtrering, vasket godt med vand og tørret til dannelse af 28,8 g produkt 5 (99% udbytte). Omkrystallisation af ethanol gav renset 2-((4-chlorphenyl)thio)-5-nitrobenzonitril, smeltepunkt 162 - 164,5°C.

EKSEMPEL 13: 2-(3-methoxyphenoxy)-5-nitrobenzonitril.

I en 250 ml enkelt-halset kolbe, udstyret med magnetisk om-10 rører og tilbagesvaler forsynet med nitrogenbobler, blev der anbragt 9,13 g (0,050 mol) 2-chlor-5-nitrobenzonitril, 6,39 g (0,0515 mol) 3-methoxyphenol, 7,10 g (0,0515 mol) vandfri kaliumcarbonat (K2C03) og 75 ml acetonitril. Blandingen blev opvarmet til tilbagesvaling og holdt dér i 3 ti-15 mer. Reaktionsblandingen blev afkølet til stuetemperatur og fortyndet med 150 ml vand. Produktet udskilte sig som et fast stof. Det faste stof blev frafiltreret, vasket grundigt med vand og lufttørret. Det lufttørrede faste stof blev omkrystalliseret af ca. 200 ml absolut ethanol 20 til dannelse af 7,15 g (53% udbytte) renset 2-(3-methoxy= phenoxy)-5-nitrobenzonitril, smeltepunkt 102 - 103,5°C.

EKSEMPEL 14; 2-((4-trifluormethyl)phenoxy)-5-nitrobenzonitril.

I en 250 ml enkelt-halset kolbe, udstyret med magnetisk omrører og tilbagesvaler forsynet med nitrogenbobler, blev 25 der anbragt 9,13 g (0,050 mol) 2-chlor-5-nitrobenzonitril, 8,35 g (0,0515 mol) 4-(trifluormethyl)phenol, 7,10 g (0,0515 mol) vandfri K2C03 og 75 ml acetonitril. Blandingen blev opvarmet til tilbagesvaling og holdt dér i 3 timer. Reaktionsblandingen blev afkølet til stuetemperatur og 50 fortyndet med 150 ml vand. Produktet udskilte sig som et fast stof. Det faste stof blev frafiltreret, vasket grundigt med vand og lufttørret. Det lufttørrede faste stof blev omkrystalliseret af 350 ml absolut ethanol til dannelse af 12,35 g (80% udbytte) renset 2-((4-trifluormethyl)-phen= oxy)-5-nitrobenzonitril, smeltepunkt 154 - 155,5°C.

12

DK 164544 B

EKSEMPEL 15; 2-(4-acetylphenoxy)-5-nitrobenzonitril.

I en 250 ml enkelt-halset kolbe, udstyret med magnetisk omrører og tilbagesvaler forsynet med nitrogenbobler, blev 5 der anbragt 9,13 g (0,05 mol) 2-chlor-5-nitrobenzonitril, 7,01 g (0,0515 mol) 4-hydroxyacetophenon, 7,10 g (0,0515 mol) vandfri og 75 ml acetonitril. Blandingen blev opvar met til tilbagesvaling og holdt dér i 3 timer. Reaktions-blandingen blev så afkølet til stuetemperatur og fortyndet 10 med 150 ml vand. Produktet udskilte sig som et fast stof.

Det faste stof blev frafiltreret, vasket grundigt med vand og lufttørret. Det lufttørrede faste stof blev omkrystalliseret 2 gange af 300 ml absolut ethanol til dannelse af 4,95 g (35% udbytte) renset 2-(4-acetylphenoxy)-5-nitro= 15 benzonitril, smeltepunkt 135 - 136,5°C.

EKSEMPEL 16; 2-(4-chlor-2-methylphenoxy)-5-nitrobenzonitril.

I en 250 ml enkelt-halset kolbe, udstyret med magnetisk omrører og tilbagesvaler forsynet med nitrogenbobler, blev der anbragt 9,73 g (0,0533 mol) 2-chlor-5-nitrobenzonitril, 20 7,83 g (0,0549 mol) 4-chlor-2-methylphenol, 7,56 (0,0549 mol) vandfri og 75 ml acetonitril. Blandingen blev opvarmet til tilbagesvaling og holdt dér i 3 timer. Reaktionsblandingen blev så afkølet til stuetemperatur og fortyndet med 150 ml vand. Produktet udskilte sig som et fast stof.

25 Det faste stof blev frafiltreret, vasket grundigt med vand og lufttørret. Det lufttørrede faste stof blev omkrystalliseret af 400 ml absolut ethanol og en lille smule acetone til dannelse af 9,60 g (62% udbytte) renset 2-(4-chlor-2-methylphenoxy)-5-nitrobenzonitril, smeltepunkt 144,5 -30 145,5°C.

EKSEMPEL 17: 2- (3,4,5-trichlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril.

13

DK 164544B

I en 250 ml enkelt-halset kolbe, udstyret med magnetisk omrører og tilbagesvaler forsynet med nitrogenbobler, blev der anbragt 8,68 g (0,0475 mol) 2-chlor-5-nitrobenzonitril, 9,67 g (0,0489 mol) 3,4,5-trichlorphenol, 6,75 g (0,0489 mol) 5 vandfri K^CO^ og 75 ml acetonitril. Blandingen blev opvarmet til tilbagesvaling og holdt der i 3 timer. Reaktionsblandingen blev afkølet til stuetemperatur og fortyndet med 150 ml vand. Produktet udskilte sig som et fast stof.

Det faste stof blev frafiltreret, vasket grundigt med vand 10 og lufttørret. Det lufttørrede faste stof blev omkrystalliseret af en blanding af 200 ml absolut ethanol og 100 ml acetone til dannelse af 11,62 g (71% udbytte) renset 2-(3,4,5-trichlorphenoxy)-5- nitrobenzonitril som små hvide krystaller, smeltepunkt 162 - 164°C.

12 EKSEMPEL 18: 2-(2,3,5,6-tetrafluorphenoxy)-5-nitrobenzonitril.

I en 250 ml enkelt-halset kolbe, udstyret med magnetisk omrører og tilbagesvaler forsynet med nitrogenbobler, blev der anbragt 9,13 g (0,050 mol) 2-chlor-5-nitrobenzonitril, 8,55 g (0,0515 mol) 2,3,5,6-tetrafluorphenol, 7,10 g (0,0515 mol) 20 vandfri og 75 ml acetonitril. Blandingen blev opvar met til tilbagesvaling og holdt dér i 3 timer. Reaktionsblandingen blev så afkølet til stuetemperatur og fortyndet med 150 ml afioniseret vand. Produktet udskilte sig som et fast stof. Det faste stof blev frafiltreret, vasket 25 grundigt med vand og lufttørret. Det lufttørrede faste stof blev omkrystalliseret af 300 ml absolut ethanol til dannelse af 11,36 g (73% udbytte) renset 2-(2,3,5,6-tetra= fluorphenoxy)-5-nitrobenzonitril, smeltepunkt 152,5 -154,5°C.

EKSEMPEL 19: 2-(2,3,4,5,6-pentafluorphenoxy)-5-nitrobenzo= nitril.

14

DK 164544 B

I en 250 ml enkelt-halset kolbe, udstyret med magnetisk omrører og tilbagesvaler forsynet med nitrogenbobler, blev der anbragt 9,59 g (0,0525 mol) 2-chlor-5-nitrobenzonitril, 5 9,96 g (0,0541 mol) 2,3,4,5,6-pentafluorphenol, 7,56 g (0,0541 mol) vandfri 0<J 75 ml acetonitril. Blandingen blev opvarmet til tilbagesvaling og holdt dér i 3 timer. Reaktionsblandingen blev så afkølet til stuetemperatur og fortyndet med 150 ml afioniseret vand. Produktet udskilte 10 sig som et krystallinsk fast stof. Det faste stof blev frafiltreret, vasket grundigt med vand og lufttørret. Det lufttørrede faste stof blev omkrystalliseret af 200 ml absolut ethanol til dannelse af 9,91 g (57% udbytte) renset 2-(2,3, 4,5,6-pentafluorphenoxy)-5-nitrobenzonitril, smeltepunkt 15 127,5 - 129°C.

Andre 2-(substitueret phenoxy)-5-nitrobenzonitriler, fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, var: EKSEMPEL 20: 2-((3,4-dichlorphenyl) thio)-5-nitrobenzonitril,

smeltepunkt 137 - 139°C

20 EKSEMPEL 21: 2-(4-fluorphenoxy)-5-nitrobenzonitril, smeltepunkt 132,5 - 133,5°C.

EKSEMPEL 22: 2-(2,3-dichlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril, smeltepunkt 146 - 147°C.

EKSEMPEL 23: 2-(2,5-dichlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril, 25 smeltepunkt 167 - 168,5°C.

EKSEMPEL 24: 2-(2,6-dichlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril, smeltepunkt 157 - 159°C.

EKSEMPEL 25: 2-(3,5-dichlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril, smeltepunkt 196 - 198°C.

15

DK 164544 B

EKSEMPEL 26: 2-((2-trifluormethyl)phenoxy)-5-nitrobenzonitril, smeltepunkt 113 - 115°C.

5 EKSEMPEL 27: 2-((3-trifluormethyl)phenoxy)-5-nitrobenzonitril, smeltepunkt 85,5 - 86,5°C.

EKSEMPEL 28: 2-(3,5-bis(trifluormethyl)phenoxy)-5-nitrobenzo= nitril, smeltepunkt 138 - 140°C.

10 EKSEMPEL 29; 2-(2,3,4-trichlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril, smeltepunkt 203 - 204,5°C.

EKSEMPEL 30: 2-(2,3,5-trichlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril, smeltepunkt 160 - 162°C.

EKSEMPEL 31; 2-(2,3,6-trichlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril, 15 smeltepunkt 141 - 143°C.

De fysiske egenskaber af forbindelserne i ovenstående eksempler er opsummeret i tabel 1.

16

DK 164544 B

γν o m <d 4 cn in in cn in

rH CN O CN 4 fN 4 00 r-H CN

2....... ...

0\Ρσ>σ^σ>οο3Φσι co in ih

I—I i—I r—I

-P Cl p*. rH CN O rH 00 fA CN tn

Φ CD CD CN ΙΑ ΙΟ ΙΟ IA CN CO 1A

'ϋ x ...

d0\OrH,HCNCNfnfnfn k\ m 4 3 fa m γν cn to in in m cn to 10 U....... ...

0\o o o 00 10 oo 00 m cn i-h 4 in m 4 m to mm m m m to 10 co o in cd γν o o σι 0 o γν cn 4 in cn co rH i-h 2....... ...

0\°σισιβοοοοσισι co cn i-h

i—I rH rH

-P

Ϊ tO lO rH fN 4 CN ΙΑ ΓΝ |N tO

g., <d cd cn m to m ia m (n m ^ 0\° i-h rH cn cn ια γα ia m ia 4 Φ m i-h i-h n\ m γν ia cn cn γν <d in in cn co to η» 10 00 00 ja U ...

0\o o o eo to co oo tn cn rH 4 in in 4· m to m in in in in 4J in * "c 4· tn m 1-1 3 in cn Ί Q, IQ rH CN 4 rH lO O IN CN 4 fa cjj in i fN to m cn to o i to

fa jJ rH in rH rH rH rH r-t CN LA rH

W Η I . I I I I I I . I

£ (U ΙΑ ΓΑ Η ΓΑ O 4 <D lO rH ΓΑ ^ gCjin inrNtomcNin o cn to

0] O rHrHrHrHrHrHi—I CN CN H

C

AN

CN

O' — —

U U

1 i

fA CN X X X X X XXX

CN

CN AN

/-\ in

(A X X CN

tA υ u

rH Π X W

θ' Γ) fn EC υ 2 2

‘Ο-ΛΙ xu CN CN CN

— — t- — TO I o o o U U efl U O tn tn=0 cn tn tn I I I I I I I 111 4* 4 4 4" 4" 4“ ^ 444 xooooooo ooo tn· rH cn m 4 in to in oo cn o

rH

wc 17

DK 164544 B

UD LO CM CM 01 CO UD CT> (Τ> O

O ΙΛ Νλ H CO UD CM O UT f''- e\o co οι o οι σι σι oo σι oo 00 r—i

+J lO CM CM CO CD LO J- rO O CO

O) lo lo r-^ 'ro lo ro ud to cm o 'ϋ x · ... ...·.·

Ce\° (O CM K\ CM rO fO ri i—I H CM

13 ti ur

r* in 01 LA 00 CM J- Kl LO rM

jp σι K\ rH UT fO CO LO O r^. 00 LO LO CO LO LO IO Ut LO UT -3 ur ur n o ro o lo r-^ σι cm

t-I UDfOO O) rM (J1 ur CO

2 . ... ......

0\o oo σι o σι σι σι co co co oo

4J

2 h ro ro σι r·*. ur cn cm co

C Lft fs, ζΝ ΙΛ H «Jf O CO

tT* ej— # ··« ····*· ^0\o ro cm io cm ro ro i-ι i—i o ή

O

CQ

co o cm lo ro j· lo t-< σι «-< o. CM CO CO CM ur O CM o (J . ... ......

\o o ro cm ur ro oo lo o ra co LO CO LO CO LO ur in ur -3*

^ ^ LO LO LO

H lo c o ^ ^ ^ ^ £ £ £ rifj Q. ri J” ro to «Oi-fuTr-ri-icri fe-H S' i ud O lo roicoi iKv

<0 3 . ^ ^ M LO ^ LO LO H

d σι cm cm ur lo ur cm cm p M fv lo o lo ro ur co to cm ro w Q i—t r-l r-l ri ri I-I T-I ri r-L ri u.

r Ll CO

/•Γ - I

(vj ro U co lo rs X I *> t —

(J LO LO ur U

I ·. * S I

X XXX x cm ro ro ro ro H“ få) jT « x" >r — υ u. u — — — u = o u o υ ο=υ u u u- u- υ

I III I I I I I I

ur ur ro ur ur j- ur cm cm ur X O to O O OOOOOto

CO* i—I CM ro ur LO LO co cn O

ACC-I t—I 1—I 1—I 1—) r-lf-li—liHrHCM

ω c

DK 164544 B

18

CNOlJ'fOVDCNKAlAOKVO

OOHOOr-ICMinHCNtn Z...........

e\°ocncn(Jimcn<Tip^ooco»

ι—I

4J

m hstf\r^toj*c^u3fACvcT)Ln COrHrHOOininfvr^lOr'· c ............

3 g\° CMCNCMCMCMCMCMr-lr-lr—Ir—I

J· K\K\Lr\J-K\U3fA^fAj-^· O...........

0\°ooooo.3-.d-n»ininin ιθιηιηιηιηιηιη4-4··3·4· ΙΛίΟίΟΙΟΙΟΟσίίΛΙΛΙΑίη

OOOOOOOOJ’HiHiH

z .......

0\°ooio>fficr>cr>a>r^«ooooo

H

+> <u r^iou3tou3mcnrHr^r^r>· d r>-G5a»a>cncNCMiOJ-J-4· &.............

CU o^·0 CVl^-l^Hr—ti—ICMCS1'—11—Ir—i<—I

ω

CQ

Γ^Ηι-ίι-ΗΗίΛΙΛΟΟίΛΙΛίΛ -ίΐΛΙΛ.ΐΛΐηΐΛΙΛ00-3·-3·-3· υ ........

e'iPoooooj-J-r^iAiniA

«ΰΐΛΙΓ\ΙΤ\ΐΛΐΛΙΛ^·^Γ^ί··ί· +J +J ^ J S £ R “i Ό Ό W4J d Ι-Ιί^ οοσϊ ΙΛ l£> O J- CN ΓΑ 9¾ ^ i-a-iOLnOi-Hcoj-ovo-t g ° ?} ΙΛΗΗΗι-ΙΗΙιΗΡΊιΗΗ

E-1 ^ jj · I I i i i in i i i I

r1 cMiorvr^ioin*o3inoH

fnj-iomoir-iinfnouDj·

^ q iH H_ i—tiHi—li—|03t-ICNrHrH

C _

cm in O U U

C£ _ — — _ UL 1 I I

V-/ O U U U UJ-iniO

I I I I I V ·. -V

Xminiflinixinminm

iH

CL

tn m tn — — — — ulu.il — — — u.uuauuuuuuu

I I I I I I I I I I I 4-CMCMCMtnCMtntnCMCMCN

XOOOO OOOOOOO

cn · rHCNtnj-mtxir^cocnoiH

M SM CMCNCMCMCMCNCMCMCMtAtn w d

DK 164544 B

19

Forbindelserne fremstillet ved ana1ogifremgangsmåden ifølge opfindelsen har antiviral virkning og har vist -sig at være særligt effektive over for

Picorna-virus, dvs. små ribonukleinsvre-virus. Picorna-virus indbefatter virus såsom Coxsackie-virus, Rhino-virus og et 5 antal plantesygdoms-virus. Forbindelserne har lav giftighed over for pattedyr, lav fytotoksicitet og udviser ingen eller ringe skadelige bivirkninger, når de administreres til pattedyr i doser, der giver god antiviral virkning. Der er nogen variation fra forbindelse til forbindelse i antiviral styrke og spektrum af antiviral virkning samt i toksicitet og bivirkninger, som illustreret nedenfor.

Den antivirale virkning af de foreliggende forbindelser blev påvist under anvendelse af følgende afprøvningsmetode med vævskultur: 15 Enkeltlags HeLa-celler i 16 mm vævskultur-skåle blev behandlet med 1 ml kulturmedium (Eagles medium suppleret med kalvefoster-serum), indeholdende den pågældende forbindelse i en passende koncentration eller slet ikke indeholdende nogen forbindelse. Kulturmedier såsom de i den forelig-20 gende beskrivelse beskrevne er nærmere beskrevet i standardtekster som f.eks. Kuchler's Biochemical Methods in Cell Culture and Virology, Dowden, Hutchinson & Ross, Inc., Stroudsberg, Pennsylvania (1977) . Efter behandlingen blev cellerne smittet med 0,05 ml Rhino-virus, type 1A (RV-1A), 25 Rhino-virus, type 2 (RV-2) eller Coxsackie virus (Cox A2^) i kulturmedium. Nogle af forbindelserne blev også afprøvet over for Rhino-virus, type 5 (RV-5), Rhino-virus,type 8 (RV-8) eller Rhino-virus, type 64 (RV-64). Cellekontroller fik ingen virus. Kulturer blev iagttaget 30 for forbindelsens cytotoksicitet og virale cytopatiske virkning (CPE) 48 og 72 timer efter behandling.

DK 164544 B

20

Desuden blev nogle af forbindelserne afprøvet på dyr under anvendelse af følgende fremgangsmåde, der i det følgende omtales som "enkelt oral dosis"-prøve. Schweiziske hanmus med en vægt på 10 - 12 g blev smittet intraperito-5 nealt (IP) med 0,2 ml af en normalt dødelig dosis, d.v.s. en virus-dosis tilstrækkelig til at forårsage =80 - 100% dødelighed i inficerede dyr inden for 10 dage fra smitten med Cox i saltopløsning med phosphatstødpude, inde holdende 1% varme-inaktiveret kalvefoster-serum. 3 timer 10 senere blev mus behandlet oralt (P.O.) med 0,2 ml forbindelse, suspenderet i 0,5% hydroxypropylmethylcellulose (Methocel ® eller med 0,2 ml 0,5% Methosel der ikke indeholdt nogen forbindelse. Forbindelses-suspensionerne havde en koncentration på 30 mg pr. ml (600 mg/kg). Muse-15 ne blev iagttaget dagligt i 7 - 10 dage efter smitten og dødsfaldene noteret. En modificeret Mantel-Haenzel kombineret chi-kvadrat-metode blev anvendt til at bestemme signifikant forskel mellem virus-kontrol og behandlede grupper. ^Chi-kvadrat-værdier større end 3,84 betragtes som signifi-20 kante (95% konfidens-niveau) ved denne prøve.

Nogle af forbindelserne blev også afprøvet på dyr under anvendelse af følgende fremgangsmåde, der i det følgende omtales som "kontinuerlig oral fodrings"-prøve. Coxsackie A2^ virus, dyrket på HeLa-celler, blev administreret i en 25 koncentration, der frembringer 80 - 100% dødsfald hos mus, der vejer 10 - 11 gt i løbet af 10 dage, når musene injiceres (IP) med 0,2 ml virus-præparat. Mus blev sat på kost, indeholdende forsøgsforbindelsen, dispergeret i almindeligt i handelen værende blandingsfoder til gnavere i en koncen-30 tration på 0,06% (vægtprocent) på dag 0. På dag 1 blev musene smittet med virus-præparatet, 0,2 ml pr. mus, IP. Dødsfald i både kontrolgruppen og forsøgsgruppen blev noteret for den 10. dag og resultaterne analyseret ved chi-kvadrat-metoden. Chi-kvadrat-værdier større end 3,84 vi-35 ser, at forbindelsen er aktiv (95% konfidens-niveau).

Resultaterne, der fremkom ved ovennævnte afprøvning, er op-

DK 164544 B

21

_X UD

ud m I r-l >

CL O

oo m i es in X >

X CL o CN UD

v ω > S. . la ^ i m m n-' & >

Η Q£ O CN O

3 v

4J

3 in •^ <£ LA in <Νιη»ΛΐΑΐΛΐΛΐη “ cMWin10p|<ScMM«WiA»0

^OO^mOuDUDuDUDUDUDCM»-1 r1 (J V V v V V V rH

tn u\ csincNtn«'· ίΛιη

I 04 UD N UD <N 04 ΙΛ .UD

'>···1 < < o · • OJOOHOOUDyjiNZZO'-' ^ VI LA VI H rH vi tJ ^ · .

1 s a - s ^ s S I inU3CNU)<<<<< < ^ ^ >...·ΖΖΖΖΖΟΖ· ££ O O rH O m tn

^ vi -Η -H

•μ 0)

JJ

•H

o ^

•H

tn e

_ν\00ΟΟΟΟΟΟΟΟΟΐΛ OdoooooomoooocM +Ja.rHrHiHi-liHrH rH H rH rH

Ο'-'ΛΛΛΛΛ A Λ Λ Λ 4-) >ι

U

rHCNtn-iinuDn-oocnorHCN

CO . rH i—1 Η a; u w c

DK 164544 B

22 la la j- in cm ai in in la ^ LD 04 la i—I Ή 04 04 Al 04

I LA LD 04 < (A fA ID rH >“< rH

> · · · 2 · ·

04 O LO o o O 40 fA fA

f—I V

LA LA Ά CO LA 04 LA lA 04 LA 04 _ I 04 iH 04 04 LA LA LO 04r-4 V > f-i 4A H r-l 04<N · ·

X £..... · O LD fA

4A O fA K\ pH H VV| g Q. LA LA LA LA LA LA la LA 04

}_) I 04 LA 04 04 04 AJ 04 04.-I

^ > · * · · · · · *

S-| Q£ LD 04 LO LO 1-4«“· rH LO (A

3 - vl

-P

rH rH LA

3 04 LA LA LA LA 04 LA lAlA

^<040404LA04iHA4lA04041ALA

CO rHLDrH · · · * · LO rH 04 >X · · · 04 rH (A LO 04 · · Al

ίϋ O fA O 4A i-H +1 O fA LO rH

> u V V V

•

^ in LA LA LA in in LA

Ol+J 04 LA 04 LA in 04 04 04 04 04 Al

(O I 04 rH 04 04 LA rH '“I 10 rH ι-H H

PI W >iHfA^HrH04 · 'LA

W -P CC " ’ · · . fA fA - OlAfAfA

COM fA O fA fA rH V vl 04 V V V v| O v f E-ι ' <4H '

^ <ζ LA la LA LA LA LA

1—I tn A4 LA 04 LA 04040404

I 04'-t04lAinrH04<LDHrHrH

> .......

£XLiJiAL00404fAlO O fA fA fA

χΐ

-P

0) -p · v — la in g . .

S\©0000040400©00 Q σ LA LA m in rH rH rH rH rH LA LA LA

.J DL Λ Al Λ Λ ΛΛΛ O ^ •p

rH

U

. CA-J‘LALDA-C0CnOrH04K\J· m. rHi-HrHrHi-HrHrH0404040404

^ M W C

23

DK 164544 B

• i - _ c · (!) ΗΌ j· m ·£> o c c fy c i φ U3 04 ^ to a) ¢) CMD Φ > liA lO 1-4 ,η ,Η CP 3 «0 .Q S· >04 · * (UH -ri >, ad) 3 o' O Ν' Ό φ Ό Ό 3 = 04

C O C M COM

H φ t? O c: C

in ^ .Q 3 > «- Ό -3 Φ 00 04 ΙΛ 04 3 O Τ3 W ίΞ - O'

|,-( 04 Ή O *4Η T& ίΗ >H Χ3 O

^ . · · 4-( β O O 3 Φ G

X (V m ι-i 4A ξρ Ή *w Φ E

X V iw -H 3 · Ό +> nj+J φ tP <H 3^01 3 ω ΙΛ U\ (4-1 C -3 Φ 4-> ·Η "© > m in 04 CM ε.Η3·Η4->>Φ·Η4-ι "Θ. I CM ta ri O t? 0) s OrQ Ό 3 ·> . · · -3 Ό M ω 3 3 α iv UD O ^ -|-)Φ3Φ>=Φ^ 3 nit4 3 υ,ΐυ -,> ·Η 4J:Hld ¢) 4-),.4 -|->>Η0'.ί<ίΦ0'3

—i cm m fi S Λί Λ >Q

3 J 04 < φ 4J \ M 3 •'OP

X <r Ό . O in Z m 03 tP-3 Φ 3 φ G Φ Φ Φ V $ r-4 r-4 *3 +1 G 3.-3^0 4030)¾.¾ >2Z OW'-'tO > 3 >, Λί « Φ D.i - φ Φ 4-! *3 .—· > υ -u co c: cdcoshcu 04 4-1 in in C Ό Φ+> Φ Ai <3 rg Λ 54 Φ o, oi m 04 in m Φ3μ>ι·Ργ^!ΦΡ< Φ i3tn , _j 04 ta m oi in 04 ό u η ϋ æ ·η {ρ·η : t! H 4J J ...·.· · 4-i Φ O G E +1 CO 3 Qt *n ,H O 04 rH 04 |3 3 ^ ^ ^ 5 Ί , = ti κζ O aro φ 3 G Φ -O 3 <0 &4 44 3Φ·3β·3ΦΦΦσ>

Φ Ό .Q O H J2 3 O

- -3 3·3βΦΦ>ι3

< 3 ^ o -p <D Π3 tP+> ** <D

T* iO < in < m in φ3 44Γχωβ'&Φ'ΦΜ ' 04 5 . 2 o ... ω Φ 3 r3 -3 Μ Λ Φ -3 >' o4 rH040l W 4J 4-1¾ Φ .03 S > ~ ^ 04 II μ·Η Ιίί) Ό no:

X Οκ-Ι 3 G Ο 4-4VI O' G

φ -H G ιΗ Ή I : Ή Φ 4-1 ^Γ-ΐΟΰΡΛΌΉ'-' Φ r-l-3 Ο 34-13*· <3

4.) rH.H4Jin033rCJP«U

Η Φ£φ4-(Τ3βΦΛ ο'·' Λ γρφίπ^βφ-ρφ •Η” “* 0]*4-JtPt7'3(dr34·) Φ £ « ο ο λ ο ο 4Jk fin! S OJyilM)

Hi Ο ® 04 ° 2 S S φα,φΦΜΜΟΙΡ ·3 Ο Cf) m 04 (3 04 04 04 04 jj 0^3-33¾ 4-) 3 Λ Λ I ΛI Λ Λ Λ .HgG<><C0>,O"©.G3 Ο ^ φ(3θ34-ιφ4-)ΦΦ Ρ Η 14 Λ Ο : !> ω Ρ >1 φ (ρ 4-1 4-4 <! φ Η υ λ;οφ32φρρφ 034-)4-) = 3 CD ί-4 Μ-4 4-)Πί Β ιϋ # 3¾¾ Ο ·Η Φ +) +) ·Η >14-) Φ 4.) ε >γ-η tp φ > -υ ω ε >, ns ·3 fy r-ι φ ε (J-H iJ4-> > Ο Φ -Ο 3 Ο • miDi^oocnOr-i —. ,ο Ό Φ -Ρ w-04 04 04 04 04rnm Λ χ Ε C = Ό ,Χ 3 ΧΧ>ιΦΛ>ιΦ

W C XXXWOs-PQ

DK 164544 B

24 tn in m

g meor-iiHiOr-inJinfnJ· rHiH

•3 uamooiocMCnooj-ooo cn m ^xfnr-iinooiDcoocno« o o

(4^ CN »-H ιΗ rH H

pH

S

o -H 0\0 0\0 0\0 0\0 oV5 0\0 0\0 oV3 0\0 0\0 0\0 0\0 'Tj'TIlOtOlOlOlOlOOlOlDO ID 10

UøyOOOOOOOOOO O O

Ό C 0000000000 00 •H 01 0(0 +1 “H ^ P- g cn

CM 4-1 &K C

ni S

t-4 w -d H +J >

(E U -§L

<oy cn cn cn cn cn m in

E-iiw .g- lOinmini-iocfcr» -i O

w S 01 N rnioncMNOcno coco cn m en cm o o o oo o o j· rS ^ Ό u σ o S σ (DEOOOOOOOO 00 iv^-OOOOOOOO 00 P coioiØlOlØlØlØCO 10 10 W cn Ή 01 s • r-iCNfn-iiniQf^COOOi-ICMi-t

01 · rH i—t r-f CM

w c

DK 164544 B

25

Dataene i tabel 2 viser den antivirale virkning af repræsentative forbindelser, der er fremstillet ved analogifremgangsmåden ifølge opfindelsen.

Dataene for forsøgene med vævskultur viser, at alle de 5 undersøgte forbindelser er aktive over for mindst én af de tre forsøgs-virus (RV-1A, RV-2 eller Cox A21). Desuden har flere af forsøgsforbindelserne udvist antiviral virkning over for forsøgsvirus RV-5, RV-8 eller RV-64.

Endvidere har nogle af forbindelserne vist (ved 95% konfi- 2 10 dens-niveau, d.v.s. som har X -værdi større eijd 3,84), at de er aktive antivirale forbindelser ved afprøvning på mus.

Af særlig interesse er forbindelsen fra eksempel 1, d.v.s.

2-(3,4-dichlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril, der har udvist 15 antiviral virkning, både ved enkelt oral dosis- og kontinuerlig oral fodrings-forsøgene. En forbindelse, der kan administreres oralt og stadig bevare antiviral virkning, har tydelige fordele, da den let kan inkorporeres i kosten til pattedyr, som eksemplificeret i prøven med kontinuerlig 20 oral fodring, eller oralt i forskellige midler, omfattende den aktive forbindelse og en farmaceutisk anvendelig bærer. Forbindelsen 2-(3,4-dichlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril har udvist antiviral virkning over for et bredt spektrum af virus i andre vævskulturprøver som følger: 25 Opløsninger af 2-(3,4-dichlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril blev fremstillet ved at opløse 5 mg af forbindelsen i 0,1 ml dimethylsulfoxid og inkubere ved 56°C i mindst 15 minutter. Denne opløsning blev sat til 0,9 ml opvarmet (56°C) vedligeholdelsesmedium (49% Eagles, 49% medium 199, 30 2% kalvefoster-serum og antibiotika),og den fremkomne 1 ml blev derefter sat til 9 ml opvarmet (56°C) vedligeholdelsesmedium. Af denne opløsning blev der fremstillet endelige koncentrationer på 100, 50, 25 eller 12,5 ug/ml med vedlige-

DK 164544 B

26 holdelses-medium.

Tredobbelte cellekultur-glas (Wl-38 human embryonisk lunge-cellekultur-glas) fik tilført 1 ml medium, indeholdende forbindelsen i nærmere angivne koncentrationer og podet 5 med 3-300 TCID^Q (3-300 gange den over for vævskultur smitsomme dosis 50, d.v.s. den dosis, der kræves til at smitte 50% af de afprøvede cellekulturer). Der blev udført samtidige virale titreringer. Vævskulturerne blev suppleret med frisk medium, når dette var nødvendigt 10 (ca. 3-4 dage), indtil viral-titreringer var fuldendt.

Cellekultur-glassene blev undersøgt dagligt for cytopatisk virkning. Forsøgene blev anset for fuldendt, når virus-kontroltitrerings-glas udviste 75% eller mere ødelæggelse af cellelag. På den tid blev der foretaget sammenlignin-15 ger med procenten af cellelags-ødelæggelse i glas, indeholdende blandinger af virus og forbindelse. Iagttagne forskelle på 75% eller mere blev bedømt som "+", 74-50% som og mindre end 50% som hæmning.

Ved de ovennævnte prøver hæmmede forbindelsen 2-(3,4-di= 20 chlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril i en koncentration på 25 mikrogram pr. milliliter ( yg/ml) formeringen af 20 forskellige Rhino-virus, d.v.s. blev bedømt som "+" over for 20 forskellige Rhino-virus, der blev anvendt til afprøvningen, hvilke virus var følgende: En ikke-typifice- 25 ret Rhino-virus, betegnet som "Hank' (utypificeret), og disse yderligere Rhino-virus-typer: type 4, type 6, type 8, type 10, type 13, type 17, type 19, type 21, type 29, type 39, type 56, type 58, type 59, type 60, type 64, type 68, type 74, type 75 og type 81.

20 Ved andre vævskultur-afprøvninger under anvendelse af lignende fremgangsmåder som de ovenfor beskrevne udviste for-bindel en 2-(3,4-dichlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril hæmmende virkning over for enterovirus Coxsackie B2 og Coxsackie , men påvirkede ikke formeringen (i forsøgskoncentratio-

DK 164544 B

27 nerne af den pågældende forbindelse anvendt til afprøvningen) af følgende virus: Influenza A, influenza WSN, influenza PR 8, parainfluenza 1, parainfluenza NDV (Newcastle's sygdoms-virus), adenovirus (utypificeret), Herpes simplex-virus, type 1, 5 og en virus identificeret som katta-calici-virus, ubekræftet.

Resultaterne af ovennævnte prøve viser, at forbindelsen 2-(3,4-dichlorphenoxy)-5-nitrobenzonitri 1 er særligt effektiv over for Picorna-virus, dvs. små ribonukleinsyre (RNA) virus, 10 som f.eks. Coxsackie-virus og Rhino-virus. Den viser i øvrigt, at denne forbindelse har et bredt spektrum af aktivitet over for Picorna-virus.

Under anvendelse af de ovenfor beskrevne standard-vævsku1tur-prøver og dyreforsøgs-metoder blev der foretaget sammenligningsforsøg mellem 2-(3,4-dichlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril (eks. 1) og det kendte 5-(3,4-dichlorphenoxy)-2-nitrobenzoni-tril.

Resultaterne af sammenligningsforsøgene er vist i tabel 3 og 4 nedenfor.

Tabel 3

Forbindelse Cvtotokr ....

- sicitet* Vævskul turprøve1 Λ„ (jjtq/ml ) RV-1A RV-2 Cox A2l RV-5 RV-8 RV-64 * ® 2-(3,4-dichlor- phenoxy)-5-ni tro- benzonitril (eks.l) >100 0,5 0,25 0,25 0,5 0,25 0,156 5-(3,4-dichlor-phenoxy)-2-ni tro-

benzonitri1 50 «3,125 «3,125 «3,125 NA NA NA

30 * Cytotoksicitetstal lene repræsenterer den koncentration af forbindelse (pg/ml), der viste sig at være giftig for cellen.

Laveste koncentration af forbindelse (pg/ml), der er nødven-3 5 dig for at bevirke 50% reduktion i cytopatisk virkning.

DK 164544 B

28

Symbolet "NA" viser, at forbindelsen ikke var aktiv over for den pågældende virus ved standardforsøgsbetingelserne; ">" betyder "større end"; betyder "mindre end eller lig med"; "<" betyder "mindre end"; og "NT" viser, at forbindelsen ikke 5 blev undersøgt over for den pågældende virus.

Tabel 4

Dosis

Forbi ndel se Dosi s* (mg/kq/daq) x2** 2-(3,4-dichlorphenoxy)- 10 5-nitrobenzonitri1 0,06% -75 23,62 5-(3,4-dichlorphenoxy)- 2-ni trobenzonitril 0,06% ~75 0,03 * Vægtprocent af forsøgsforbindelse i diætkosten til forsøgs-15 dyrene.

**x2-værdier større end 3,84 viser, at forbindelsen er aktiv (95% konfidens-interval).

2Q Af tabellerne fremgår, at den foreliggende forbindelse 2-(3,4-dichlorphenoxy)-5-nitrobenzonitri 1 udviste udtalt større antiviral virkning end sammen!ignings-forbindelsen 5-(3,4-dichlor-phenoxy)-2-nitrobenzonitri 1. Ved vævskultur-prøven krævedes højere koncentrationer af 5-(3,4-dichlorphenoxy)-2-nitrobenzo-25 nitril til at frembringe en 50% reduktion i cytopatisk virkning ved afprøvning over for forsøgsvirus RV-1A, RV-2 og Cox A21· Desuden var sammenlignings-forbindelsen ikke aktiv over for forsøgsvirus RV-5, RV-8 og RV-64 i de anvendte forsøgskoncentrationer .

30

Sammenlignings-forbindelsen kunne heller ikke udvise antiviral virkning ved den kontinuerlige orale fodringsprøve.

En anden tydelig fordel ved forbindelsen 2-(3,4-dichlorpheno-35 xy)-5-nitrobenzonitril er dens lave toksicitet, idet forbindelsen ved afprøvning på rotter viste sig at have en akut oral toksicitet på ca. 5 g/kg og ved intraperi toneal administration

DK 164544 B

29 større end 2 g/kg. Afprøvning på Beagle-hunde viste en akut oral toksicitet større end 2 g/kg.

På grund af dens mange tydelige fordele (f.eks. bredspektret 5 antiviral virkning i lav koncentration, lav toksicitet og antiviral virkning, når den administreres oralt til dyr) er forbindelsen 2-(3,4-dichlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril den foretrukne forbindelse ifølge opfindelsen.

10 De ved ana 1 og i fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser kan anvendes til fremstilling af lægemidler til hæmn i ng af virus. Ved administration af sådanne lægemidler bringes en virus eller virusværtscelle i kontakt med en mængde af en eller flere af forbindelserne, der er effektive 15 til at hæmme den pågældende virus. Selv om opfindelsen ikke skal fortolkes som begrænset til nogen speciel teori om virkningen, ser det ud til, at forbindelserne virker til hæmning af virus i værtsceller snarere end ved direkte kemisk eller fysisk inaktivering af virus-partiklen, ad-20 skilt fra cellen. Ved antivirale anvendelser, udført på ikke levende omgivelser, skal denne kontakt udføres på en måde, der er effektiv til at sikre fortsat tilstedeværelse af en effektiv mængde af forbindelsen, når der sker påfølgende kontakt med værtscellen. Fortrinsvis anvendes for-25 bindeiserne ved at bringe værtscellerne i kontakt med en effektiv antiviral mængde (d.v.s. den mængde som skal anvendes for at opnå signifikant viral hæmning) af en eller flere af forbindelserne. Kontakten kan udføres direkte, såsom ved tilsætning af forbindelsen til cellerne i vævs-30 kultur,til at hæmme Picorna-virus. Kontakt kan også udføres ved at administrere en antiviral dosis af en forbindelse ifølge opfindelsen til et dyr. Forbindelserne kan administreres til dyr parenteralt (f.eks. ved intraperitoneal, subkutan eller intravenøs injektion) eller oralt, og den 35 orale antivirale virkning af visse af forbindelserne er en ejendommelighed. Ved sådanne anvendelser administreres en effektiv antiviral dosis af en eller flere af forbindelserne til et dyr. Valg af forbindelsen eller forbindelserne til ad-

DK 164544 B

30 ministration til dyr i et givet tilfælde dikteres af sådanne betragtninger som toksicitet, mutagenicitet, lethed af administrationen, antiviral virkning (styrke), stabilitet, forenelighed med egnede bærere etc.

Den nøjagtige mængde af forbindelsen eller forbindelserne der skal anvendes, d.v.s. den mængde af forbindelsen eller forbindelserne, som er tilstrækkelig til at give den øn-5 skede virkning, afhænger af forskellige faktorer såsom den anvendte forbindelse, kontakt-måden eller administrationsmåden, størrelsen,alderen og arten af dyret, administrationsvejen, tiden og hyppigheden, den eller de pågældende virus, og om forbindelsen administreres profylaktisk eller admini-10 streres til et inficeret dyr for at hæmme den inficerende virus. Så meget som 600 mg/kg/dag aktiv forbindelse kan administreres, men den anvendte mængde er fortrinsvis mindst 0,1 mg/kg/dag og mest hensigtsmæssigt fra 0,1 til 60 mg/kg/ dag. I særlige tilfælde, kan den mængde, som skal admini-15 streres, konstateres ved sædvanlig teknik, f.eks. ved at iagttage den virkning, der frembringes med forskellige mængder under anvendelse af sædvanlige metoder til virus-bestemmelse.

Forbindelserne administreres fortrinsvis i form af et middel, omfattende forbindelsen i blanding med en farmaceutisk an-20 vendelig bærer, d.v.s. en bærer der er kemisk indifferent over,for den aktive forbindelse, og som ikke har nogen skadelige bivirkninger eller toksicitet under brugsbetingelserne. Som ovenfor vist, udviser forbindelserne, når de administreres til vævskultur-medium, signifikant antiviral virk-25 ning i lave koncentrationer som f.eks. 0,156 yg/ml 2-(3,4-dichlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril, der forårsagede en 50% reduktion i cytopatisk virkning ved afprøvning over for forsøgs-virus RV-64.

Disse midler kan indeholde fra 0,1 mikrogram eller mindre 30 af den aktive forbindelse pr. milliliter bærer til 99 vægtprocent af den aktive forbindelse i kombination med en farmaceutisk anvendelig bærer. Fortrinsvis indeholder disse midler fra 0,1 til 6,0 mikrogram pr. milliliter.

DK 164544 B

31

Midlerne kan være i fast form såsom tabletter, kapsler, granulater, foderblandinger, fodersupplementer og -koncentrater, pulvere, korn og lignende, såvel som i væskeform såsom sterile, injicerbare suspensioner, oralt administre-5 rede suspensioner eller opløsninger. De farmaceutisk anvendelige bærere kan indbefatte hjælpestoffer såsom overfladeaktive dispergeringsmidler, suspenderingsmidler, tabletbindingsmidler, smøremidler, aromaer og farvende stoffer.

10 Typiske midler vil indeholde fra 0,1 yg aktiv forbindelse pr. ml bærer eller mængder på f.eks. 0,0025, 0,05, 0,25, 0,5, 1,0, 10, 25 eller 50 vægti aktiv forbindelse i en farmaceutisk anvendelig bærer.

I foretrukne midler anvendes forbindelsen i mikroniseret 15 form til faste midler i blanding med en vand-dispergerbar farmaceutisk anvendelig bærer såsom et overfladeaktivt dispergeringsmiddel, eller i en flydende vandig suspension eller opløsning, indeholdende et farmaceutisk anvendeligt suspenderingsmiddel såsom methylcellulose eller hydroxy= 20 propylmethylcellulose eller carboxymethylcellulose eller et farmaceutisk anvendeligt opløsningsmiddel såsom ethanol.

Eksempler på repræsentative vandige suspensioner, tabletter og kapsel-præparater er beskrevet for yderligere at illustrere opfindelsen.

25 (a) Til 50 ml afioniseret vand sættes følgende komponenter og blandes i rækkefølge: 1,0 g Avicel ® RC591 (mikro- krystallinsk cellulose), 0,15 g CMC 7HF (carboxymethyl= cellulose), 0,05 g af det overfladeaktive middel Pluronic ® polyol P68 (polyoxypropylenpolyoxyethylen-30 kondensat), 0,1 g af konserveringsmidlet kaliumsorbat, 60,0 g saccharose i 25 - 30 ml afioniseret vand, 2,0 g 2-(3,4-dichlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril (fortrinsvis i mikroniseret form) under undgåelse af indeslutning

DK 164544 B

32 af luft, om muligt. Rumfanget indstilles til 100 ml med afioniseret vand, og den færdige suspension føres gennem en egnet kolloid-mølle eller homogen!sator.

Den fremkomne suspension er egnet til oral administra-5 tion,til f.eks.at administrere 100 milligram aktiv for bindelse pr. 5 milliliter enheds-dosis, eller 200 mg pr. 10 ml enheds-dosis.

Om nødvendigt kan eventuelt ønskede farmaceutisk anvendelige tilsætninger, der anvendes til suspensions-10 fremstillinger af fagfolk, såsom aroma, farve, konser veringsmiddel og lignende, anvendes. De foreliggende forbindelser kan anvendes i suspensioner såsom den ovenfor beskrevne, i koncentrationer fra mindre end 1-10 vægt%/rumfang (w/v) eller mere.

15 (B) På lignende måde blandes 2 g mikroniseret 2-(3,4-di= chlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril, 0,3 g SeaSpen ® PF (calciumcarrageenan), 0,5 g CMC 7HF, 30 g saccharose, 0,1 g Pluronic ® polyol F68, 0,01 g natriumlaurylsul= fat med tilstrækkelig meget afioniseret vand til at 20 indstille det endelige suspensionsrumfang til 100 ml.

(C) På lignende måde blandes 2 g mikroniseret 2-(3,4-di= chlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril, 2 g mikrokrystal-linsk cellulose, 0,1 g Pluronic® polyol F68, 0,01 g natriumlaurylsulfat, 0,1 g methylparaben (4-hydroxy= 25 benzoesyremethylester), 0,01 g propylparaben (4-hydroxy= benzoesyrepropylester) med tilstrækkeligt afioniseret vand til at indstille det endelige suspensionsrumfang til 100 ml.

(D) Der blandes i følgende mængdeforhold: 7 g mikronise- 30 ret 2-(3,4-dichlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril med 228 g mikrokrystallinsk cellulose, 5,5 g majsstivelse og 7,5 g Methocel ® Al5 (methylcellulose). Der dannes en våd granulering ved tilsætning af afioniseret vand.

DK 164544 B

33

Den våde granulering sigtes og tørres derefter. Efter sigtning af den fremkomne tørre granulering tilsættes 2,0 g magniumstearat, der blandes og sairanen-trykkes til 200 mg tabletter.

5 (E) Der blandes i følgende mængdeforhold: 5 g mikronise- ret 2-(3,4-dichlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril med 230 g StaRx® 1500 (modificeret føde-stivelse) , 2,5 g magniumstearat og 12,5 g majsstivelse, og derefter sammentrykkes blandingen til 250 mg tabletter.

10 (F) 5 g 2-(3,4-dichlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril opløses i 100 ml polyethylenglycol 400 og hældes i bløde gelatine-kapsler, 250 mg pr. kapsel.

(G) Der blandes i følgende mændeforhold: 5 g mikronise- ret 2-(3,4-dichlorphenoxy)-5-nitrobenzonitril med 15 210 g mikrokrystallinsk cellulose, 25 g laktose og 10 g majsstivelse. Der fyldes i hårde gelatine-kapsler, 250 mg pr. kapsel.

Flere af tablet- og kapsel-præparaterne, der er beskrevet heri, er baseret på en tablet- eller kapsel-enhedsdosis 20 af en størrelse på 250 mg. Andre størrelser enhedsdosis, f.eks. en enhedsdosis på 50 mg eller 100 mg, er også mulige og kan fremstilles i hovedsagen som beskrevet i det foregående under anvendelse af de forskellige komponenter i den nødvendige koncentration.

25 Hensigtsmæssigt er midlet i form af en enhedsdosis egnet til oral administration til et pattedyr, hvor enhedsdosen indeholder en effektiv mængde af forbindelsen, hvilken mængde også er ugiftig for dyret. Hensigtsmæssigt er midlet også i form af en fast enhedsdosis, omfattende en med 30 vand dispergerbar farmaceutisk anvendelig bærer og en effektiv mængde af forbindelsen.

Claims (8)

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af substituerede ben-zonitri 1forb inde1 ser med formlen (I)

15 CN n 20 hvor X er oxygen eller svovl, Ri er brom, chlor, fluor, pheno-xy, Ci_3-alky1thio, Ci_3-alkylsulfinyl, C^_3-alkylsulfonyl, Ci-3-alkyl aminosul fonyl, di-Ci_3-alkylaminosulfonyl, benzoyl, cl-3“alkoxy, Ci_3~alkyl, halogeneret Ci-3-alkyl eller acetyl, og r2 er hydrogen, brom, chlor, fluor eller trif 1uormethyl, og n er tallet 1, 2, 3 eller 4, kendetegnet ved, at en substitueret benzenforbindelse med formlen Bz-A bringes til at reagere med en substitueret benzen forbindeIse med formlen Bzl-X-Y, hvor A er halogen, X er 0 eller S, Y er hydrogen eller en phenatsalt-dannende kation, Bz er en af molekyldelene 2-cya-no-4-nitrophenyl eller N-^<R >n hvor Ri, r2 og n har den ovennævnte betydning, og Bzl er den anden af de nævnte molekyldele. DK 164544 B 35

2. Analogif remgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at reaktionen udføres ved en temperatur på 60 - 100eC.

3. Analogi fremgangsmåde ifølge krav 2, kendetegnet 5 ved, at reaktionen udføres i et indifferent organisk opløsningsmiddel .

4. Analogi fremgangsmåde ifølge krav 3, kendetegnet ved, at reaktionsdeltagerne anvendes i ækvimolære mængder. 10

5. Analogifremgangsmåde ifølge krav 1 -4, kendeteg net ved, at en forbindelse med formlen ” bringes til at reagere med en 2-halogen-5-nitrobenzonitri 1 i et indifferent organisk opløsningsmiddel i nærværelse af et 20 alkalisk middel,

6. Ana 1 og i fremgangsmåde ifølge krav 1 - 4, kendetegnet ved, at en forbindelse med formlen (R2)» - hvor A er halogen, bringes til at reagere med en 2-cyano-4-30 nitrophenol eller l-mercapto-2-cyano-4-nitrobenzen i et indif ferent organisk opløsningsmiddel i nærværelse af et alkalisk middel .

7. Ana 1 og ifremgangsmåde ifølge krav l - 4, kendeteg-35 net ved, at 3,4-di ch1 orpheno1 bringes til at reagere med 2- chlor-5-nitrobenzonitri1. 36 DK 164544 B

8. Anal og i fremgangsmåde ifølge krav 1 - 4, kendetegnet ved, at 4-(trifluormethyl)phenol bringes til at reagere med 2-ch1or-5-nitrobenzonitri 1. 5 10 15 20 25 30 35