DK164306B - Fremgangsmaade til fremstilling af immunocytokemiske objektglas og kontrol-objektglas fremstillet ved denne fremgangsmaade - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af immunocytokemiske objektglas og kontrol-objektglas fremstillet ved denne fremgangsmaade Download PDFInfo
- Publication number
- DK164306B DK164306B DK175385A DK175385A DK164306B DK 164306 B DK164306 B DK 164306B DK 175385 A DK175385 A DK 175385A DK 175385 A DK175385 A DK 175385A DK 164306 B DK164306 B DK 164306B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- slides
- slide
- polylysine
- immunocytochemical
- procedure
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 8
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 claims abstract description 21
- 239000000834 fixative Substances 0.000 claims abstract description 11
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 12
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 11
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 claims description 5
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 claims description 5
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 claims description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 2
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 32
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 9
- 102000015694 estrogen receptors Human genes 0.000 description 8
- 108010038795 estrogen receptors Proteins 0.000 description 8
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 5
- 239000002195 soluble material Substances 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- MEXAGTSTSPYCEP-NUBCRITNSA-N (2r)-2,6-diaminohexanoic acid;hydrobromide Chemical compound Br.NCCCC[C@@H](N)C(O)=O MEXAGTSTSPYCEP-NUBCRITNSA-N 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000002380 cytological effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 2
- -1 polybutylene Polymers 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004705 High-molecular-weight polyethylene Substances 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012760 immunocytochemical staining Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N picric acid Chemical group OC1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229920001748 polybutylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
- G01N2001/305—Fixative compositions
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Microscoopes, Condenser (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
i
DK 164306 B
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af immunocytokemiske objektglas omfattende behandling af objektglassene med en polylysinopløsning. Opfindelsen angår endvidere et kontrol-objektglas, der er fremstillet ved 5 hjælp af den omhandlede fremgangsmåde.
Immunocytokemisk teknik anvendes til visualisering af tilstedeværelsen og fordelingen af en lang række celle- og vævantigener på mikroskopobjektglas, såvel ved grundlæggende forskning 10 som ved klinisk diagnose. Der findes talrige anvendelser, hvortil sådan objektglasfremstillingsteknik har været anvendt. For at nævne nogle få har immunocytokemisk teknik været benyttet til lokalisering af virale antigener på forskellige infektionstrin, til immunoglobulinsyntese ved hjælp af plasmaceller 15 og til receptorlokalisering under endocytosis.
Kontrol-objektglas anvendes ved immunocytokemiske procedurer til opnåelse af kendte positive prøver indeholdende et antigen, der er af interesse, eller til opnåelse af kendte negative 20 prøver, der mangler det antigen, der har interesse. Kontrol-objektglassene omfatter celler, vævssnit eller andre patho-logiske eller cytologiske præparater, der er knyttet til mikroskopobjektglas og lagres indtil de behøves til en immunocytokemisk analyse. Immunoreaktiviteten, dvs. antigeners evne 25 til i prøverne at kombinere med antistoffer, der er specifikke for antigenerne, og cellemorphologien af prøverne på kontrol-objektglassene skal bevares.
I øjeblikket fremstilles de mest almindeligt benyttede immuno-30 cytokemiske kontrol-objektglas ved fiksering af en prøve, såsom væv i formaldehyd, den fikserede vævsprøve indesluttes i paraffin, et vævssnit skæres, og snittet fastgøres på et objektglas. Når der er behov for prøven til anvendelse ved en immunocytokemisk analyse, skal paraffinen fjernes før objekt-35 glassets anvendelse ved hjælp af ovnopvarmning, behandling med xylen og derpå rehydratisering af prøven i en sekvens af graduerede alkoholer. Denne teknik er ufordelagtig af den 2
DK 164306 B
årsag, at immunoreaktivitet kan gå tabt som følge af de barske betingelser, som prøverne underkastes under fiksering, paraffinindlejring og afvoksning. Hertil kommer, at en sådan teknik kræver vævssnit, der skal skæres ét ad gangen med en mikrotom, 5 og disse vævssnit kan variere fra det ene snit til det andet i henseende til antigenindhold og fordeling.
Fra Histochemistry, bind 77 (1983), side 275 - 279, er det kendt at bruge L-lysin-polymerer med høj molekylvægt til belt) lægning.af objektglassene til den immunocytokemiske farvning.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved at den yderligere omfatter: 15 (a) vedhæftning af celle- eller vævsprøver til de polylysinbe- handlede objektglas, (b) behandling af celle- eller vævsprøverne på objektglassene med et fiksativ, og 20 (c) behandling af objektglassene med en vandopløselig polyal-kylenglycol.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen muliggør lagring af immuno-25 cytokemiske kontrol-objektgias i udstrakte tidsrum under bevaring af immunoreaktivitet og cellemorphologi. Eftersom fremgangsmåden ifølge opfindelsen anvender et vandopløseligt materiale, er det unødvendigt at benytte de barske betingelser, der sædvanligvis anvendes til fjernelse af paraffin fra immu-30 nocytokemiske kontrol-objektgi as i henhold til den kendte teknik. I modsætning hertil kan de ifølge opfindelsen fremstillede kontrol-objektglas simpelthen neddykkes i et vandigt bad til fjernelse af det vandopløselige materiale derpå og til re-hydratisering af prøven.
35 I den foretrukne udførelsesform for opfindelsen bliver et mi-kroskop-objektglas, fortrinsvis et objektglas af glas, først 3
DK 164306 B
behandlet med en polylysinopløsning. Det foretrækkes, at den benyttede polylysin har en molekylvægt på 4.000 eller mere. Eksempler på egnede polylysinopløsninger indbefatter en ca. 0,005-0,02% opløsning af poly-L-lysinhydrobromid (> 4.000 5 i molekylvægt) eller poly-D-lysinhydrobromid (>_ 4.000 i> molekylvægt) i destilleret vand. Objektglasset vaskes med_destilleret vand til fjernelse af ethvert overskud af polylysin.
Derpå påføres den ønskede cellelinie eller det ønskede vævssnit på det polylysinbehandlede objektglas.
10
Hvis en cellelinie er den valgte prøve, dyrkes cellerne i en passende opløsning ved hjælp af en række forskellige former for konventionel teknik, der kendes af fagmanden på området.
En suspension af cellerne dryppes på det polylysinbehandlede 15 objektglas, og objektglasset inkuberes ved en passende temperatur i tilstrækkelig tid til at cellerne vedhæfter til det polylysinbehandlede objektglas. Inkubationsperioden bør forløbe i et fugtigt kammer, så at cellerne ikke får lov til at tørre, med henblik på at sikre, at celleimmunoreaktivitet og celle-20 morphologi bevares.
Hvis der anvendes et vævssnit, skæres vævssnittet til en passende tykkelse og påføres direkte på det polylysinbehandlede objektglas.
25
Polylysinen tjener til fastgøring af celler eller væv på objektglasset, fordi polylysin, der er en kationisk polymeriseret aminosyre, vedhæfter til den negativt ladede glasoverflade under efterladelse af overskud af positiv ladning, der står 30 rådighed for tiltrækningen af negativt ladede celler. Som resultat forbliver cellerne adskilt på objektglasset og danner et temmeligt godt dispergeret monolag. Se, f.eks. Husain et al.,J. Clin. Pathol. 33, 309-311 (1980) og Mazia, et al., J. Cell. Biol. 66, 198-200 (1975).
35
Efter vedhæftning af prøven på objektglasset bliver den derpå fikseret på objektglasset ved behandling med et passende 4
DK 164306 B
aldehyd-baseret fiksativ. Det foretrukne fiksativ er picrinsyre-paraformaldehyd, der kendes som Zamboni's fiksativ. Derefter vaskes objektglasset med en pufret saltopløsning og behandles derpå med methanol og derefter med acetone. Methanol og acetone 5 anvendes fortrinsvis ved kolde temperaturer i intervallet fra -15 til -20°C.
Derefter behandles objektglasset med et vandopløseligt materiale og fortrinsvis en polyethylenglycol. Som generel regel anvendes 10 en polyethylenglycol med relativt høj molekylvægt til bevarelse af immunoreaktiviteten og cellemorphologien. Til opnåelse af de bedste resultater bør der anvendes en polyethylenglycol med en molekylvægt på mindst 4.000. Som det vil fremgå for fagmanden på området kan der på tilsvarende måde anvendes 15 andre lignende vandopløselige polymerer indbefattende, uden begrænsning, andre polyalkylenglycoler, såsom polypropylen-glycol, polybutylenglycol og lignende.
Efter behandling med polyethylenglycolen kan objektglassene 20 indeholdende prøverne derpå lagres i udstrakte tidsrum. Når man ønsker at anvende kontrol-objektglassene, såsom til en immunocytokemisk analyse, fjernes det vandopløselige materiale, og den underliggende prøve rehydratiseres ved at bringe kontrol-objektglasset i kontakt med en vandig opløsning og fortrinsvis 25 en pufferopløsning, såsom en pufret saltvandsopløsning, en phosphatpuffer eller en trispuffer.
Som det vil fremgå for fagmanden på området, kan den foreliggende opfindelse anvendes til en række anvendelser inden for 30 forskning og diagnostik, og generelt kan den benyttes til alle de anvendelser, ved hvilke immunocytokemiske mikroskopiske objektglasmetoder benyttes til påvisning af antigener i en prøve. Den foreliggende opfindelse kan anvendes i forbindelse med cellekulturprøver samt vævssnit og andre pathologiske 35 eller cytologiske præparater.
pt specifikt anvendelsesområde, hvortil den foreliggende op findelse er særlig velegnet, er den immunocytokemiske østrogen-
DK 164306 B
s receptorteknik, der benyttes til visualisering af fordelingen af østrogenreceptorantigen i brystcancersvulster. Celler, der er rige på østrogenreceptor, kan således ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse behandles til opnåelse 5 af østrogenreceptor-kontrol-objektglas, der let kan fremstilles og lagres intakte, tørre og ved omgivelsernes temperatur under bevarelse af østrogenreceptorimmunoreaktivitet samt celle-morphologi.
10 Efter at. have beskrevet det grundlæggende i den foreliggende opfindelse henvises der nu til de følgende eksempler på udøvelsen af den foreliggende opfindelse til fremstilling af kontrol -objektg 1 as og disses anvendelse ved immunocytokemiske procedurer.
15
Eksempel 1
Dette eksempel illustrerer fremstillingen af immunocytokemiske kontrol-objektglas under anvendelse af en cellelinie som den 20 valgte prøve.
En ønsket cellelinie dyrkes i et passende medium og under passende betingelser ved hjælp af konventionel dyrkningsteknik i kolber, rulleflasker eller andre beholdere. 90% af dyrknings-25 mediet fjernes, og de tilbageværende celler dækket med kulturmedium høstes fra beholderens indre overflade under anvendelse af en hvilken som helst egnet metode, såsom forsigtig afskrabning med en gummiskraber eller ved skylning med trypsin eller EDTA.
En suspension af celler overføres derpå til en egnet beholder.
30 $n dråbe af cellesuspensionen dryppes på hvert polylysinbehand-let mikroskop-objektglas. De polylysinbehandlede objektglas fremstilles ved placering af rene mikroskop-objektglas i en opløsning af poly-L-lysinhyrdrobromid (molekylvægt 4.000) 35 eller poly-D-lysinhydrobromid (molekylvægt _> 4.000) i destilleret 'vand ved en fortynding på ethundrede mikrogram pr. milliliter destilleret vand. De polylysinbehandlede objektglas 6
DK 164306 B
anbringes i destilleret vand i ét minut, og denne skylning gentages én gang. Objektglassene lufttørres derpå. Til opnåelse af de bedste resultater bør objektglassene frisk fremstilles dagligt.
5
Efter at cellesuspensionen er dryppet på de polylysinbehandlede objektglas, inkuberes objektglassene i 15 minutter ved 37°C i et fugtigt kammer. Cellerne bør ikke få lov til at tørre.
10 Cellerne, fikseres derefter på mikroskop-objektglasset ved at bringe objektglasset i kontakt med følgende opløsninger: (1) 2amboni's fiksativ i 35 minutter, (2) phosphatpufret saltvand (0,01 M, pH 7,4) i 5 minutter, gentag, (3) methanol (absolut) ved -20°C i 4 minutter og (4) acetone ved -20°C i 1 15 minut.
Objektglassene behandles derpå i fem minutter med en opløsning af polyethylenglycol (molekylvægt >_ 4.000) indeholdende ca. seks g polyethylenglycol i 100 ml destilleret vand. Kontrol-20 objektglassene får derpå lov til at lufttørre og kan lagres ved omgivelsernes eller anden passende temperatur indtil der er behov for dem.
Eksempel 2 25
Dette illustrerer fremstilling af immunocytokemiske kontrol-objektglas under anvendelse af frosne vævssnit som den valgte prøve.
30 Frosne vævssnit med en tykkelse på 4 til 6 mikron afskæres . fra det ønskede væv under anvendelse af en kryostat. Uden tørring af snittene overføres hvert snit til et objektglas, der er blevet overtrukket med polylysin som beskrevet i eksempel 1. Vævssnittet fikseres derpå og overtrækkes under anvendelse 35 af samme teknik som beskrevet i eksempel 1 ved behandling med Zamboni's fiksativ, en phosphatpufret saltvandsopløsning, methanol, acetone og til slut med polyethylenglycol.
7 5
DK 164306 B
Eksempel 3
Dette eksempel illustrerer fremstilling af et østrogenreceptor-kontrol-objektglas.
En to uger gammel rulleflaskekultur af celler, der er rige på østrogenreceptor, oparbejdes til fjernelse af alt undtagen 50 ml af dyrkningsmediet. Cellerne, der er knyttet til den indre overflade af rulleflasken og belagt med medium, afskrabes 10 forsigtigt med en gummiskraber og overføres til centrifugerør. pn dråbe med de suspenderede celler anbringes på hver ætset cirkel på et mikroskop-objektglas, der er behandlet med polylysin som beskrevet i eksempel 1.
15 Efter inkubation i femten minutter ved 37°C i et fugtigt kammer som beskrevet i eksempel 1 fikseres cellerne til et mikroskop-objektglas og behandles med polyethylen under anvendelse af samme procedurer som beskrevet i eksempel 1. Disse objektglas tjener som kontrol-objektglas for immunocytokemiske østrogen-20 receptoranalyser og kan opbevares intakte, tørre og ved omgivelsernes temperatur under bevarelse af østrogenreceptor-immunoreaktivitet og cellemorphologi.
Som det vil fremgå for fagmanden på området angives ifølge 25 den foreliggende opfindelse immunocytokemiske kontrol-objektglas indeholdende en prøve, der er beskyttet fra omgivelserne ved hjælp af et vandopløseligt materiale, såsom polyethylen-glycol. Polyethylenglycolen kan fjernes og prøven rehydratiseres til anvendelse ved simpelhen at neddykke objektglasset i eller 30 på anden måde behandle det med f.eks. en phosphatpufret saltvandsopløsning.
De immunocytokemiske kontrol-objektglas ifølge den foreliggende opfindelse frembyder mange fordele i forhold til tidligere 35 kendte formalinfikserede og paraffinomsluttede vævssnit. For det første fikseres de her omhandlede kontrol-objektglas på en mild måde, kræver ikke paraffinomslutning og kræver kun
Claims (8)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af immunocytokemiske objektglas omfattende behandling af objektglassene med en polylysin-opløsning, kendetegnet ved, at den yderligere om- 20 fatter: (a) vedhæftning af celle- eller vævsprøver til de polylysinbe-handlede objektglas, 25 (b) behandling af celle- eller vævsprøverne på objektglassene med et fiksativ, og (c) behandling af objektglassene med en vandopløselig polyal-kylenglycol. 30
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at fiksativet omfatter et aldehydbaseret fiksativ, phosphatpufret saltvand, methanol og acetone.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendetegnet ved, at methanol og acetone påføres på objektglasset ved en temperatur på -20eC. DK 164306 B
4. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at polyalkylenglycolen er polyethylenglycol.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 4, kendetegnet ved, at 5 polyethylenglycolen har en molekylvagt på mindst 4.000.
6. Kontrol-objektgias til anvendelse ved en immunocytokemisk analyse, kendetegnet ved, at det er fremstillet ved fremgangsmåden ifølge krav 1. 10 -
7. Kontrol-objektglas ifølge krav 6, kendetegnet ved?, ...at celle- eller vævsprøven er fikseret på objektglasset ved at objektglasset er blevet bragt i kontakt med Zamboni's fiksativ, phosphatpufret saltvand, methanol og acetone. 15
8. Kontrol-objektgi as ifølge krav 6, kendetegnet ved, at polyalkylenglycolen er polyethylenglycol. 20 25 30 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US60286784A | 1984-04-23 | 1984-04-23 | |
| US60286784 | 1984-04-23 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK175385D0 DK175385D0 (da) | 1985-04-18 |
| DK175385A DK175385A (da) | 1985-10-24 |
| DK164306B true DK164306B (da) | 1992-06-01 |
| DK164306C DK164306C (da) | 1992-10-19 |
Family
ID=24413106
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK175385A DK164306C (da) | 1984-04-23 | 1985-04-18 | Fremgangsmaade til fremstilling af immunocytokemiske objektglas og kontrol-objektglas fremstillet ved denne fremgangsmaade |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0159603B1 (da) |
| JP (1) | JPS60237365A (da) |
| KR (1) | KR850007278A (da) |
| AT (1) | ATE69504T1 (da) |
| AU (1) | AU573328B2 (da) |
| CA (1) | CA1252389A (da) |
| DE (1) | DE3584640D1 (da) |
| DK (1) | DK164306C (da) |
| ES (1) | ES8606642A1 (da) |
| GR (1) | GR850966B (da) |
| IL (1) | IL74774A (da) |
| NZ (1) | NZ211675A (da) |
| ZA (1) | ZA852582B (da) |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6287679A (ja) * | 1985-10-11 | 1987-04-22 | Sanden Corp | 容量可変型圧縮機 |
| FR2590022B1 (fr) * | 1985-11-07 | 1990-01-26 | Coeurveille Michel | Procede de revelation de petites molecules presentes dans les tissus humains, animaux ou vegetaux |
| JPS62127642A (ja) * | 1985-11-28 | 1987-06-09 | Wakunaga Pharmaceut Co Ltd | スライドグラス |
| US4820504A (en) * | 1986-02-12 | 1989-04-11 | City Of Hope | Multi-specimen tissue blocks and slides |
| JPS62255869A (ja) * | 1986-04-08 | 1987-11-07 | フイツトテイカー バイオプロダクツ インコーポレーテツド | 免疫螢光顕微鏡検査用の方法と基質 |
| US4816410A (en) * | 1986-10-29 | 1989-03-28 | Coulter Corporation | Control slide for immunoassay kit and method of making same |
| GB8626920D0 (en) * | 1986-11-11 | 1986-12-10 | Gadson D R | Examination of multiple samples for analysis |
| US4857300A (en) * | 1987-07-27 | 1989-08-15 | Cytocorp, Inc. | Cytological and histological fixative formulation and methods for using same |
| US5092466A (en) * | 1988-10-21 | 1992-03-03 | Large Scale Biology Corportion | Apparatus and method for storing samples of protein gene products, insert-containing cells or dna |
| JP3623303B2 (ja) * | 1996-03-21 | 2005-02-23 | 株式会社三菱化学ヤトロン | スライドプレート洗浄液及びそれを含むキット |
| SE9700207D0 (sv) * | 1997-01-24 | 1997-01-24 | Erik Litborn | A method of preventing evaporation from liquid samples in small volumes |
| DE19715691C1 (de) * | 1997-04-15 | 1998-10-08 | Heinz Hoefler | Klebemittel für histologische Gewebepräparate auf Glasobjektträgern, Verfahren zu dessen Herstellung und Verwendung |
| KR20010105975A (ko) * | 2000-05-19 | 2001-11-29 | 이원배 | 검사용 세포 자동 도말 처리 방법 |
| AU2013243322A1 (en) * | 2012-04-06 | 2014-10-23 | F.Hoffmann-La Roche Ag | Method and device for the homogeneous distribution of suspended cell components |
| WO2015093116A1 (ja) * | 2013-12-17 | 2015-06-25 | コニカミノルタ株式会社 | 細胞の蛍光免疫染色方法ならびにそのためのシステムおよびキット |
| CN108641634B (zh) * | 2018-06-22 | 2020-06-02 | 杭州医国仁生物科技有限公司 | 一种用于载玻片涂层的粘附剂组合物及单面涂层工艺 |
| CN117295946A (zh) * | 2021-06-07 | 2023-12-26 | 株式会社日立高新技术 | 针对病理检查的对照载玻片及其制造方法 |
| CN114903030B (zh) * | 2022-06-14 | 2024-03-01 | 安徽德维洛生物科技有限公司 | 一种活性有核细胞的保存方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5716694A (en) * | 1980-07-03 | 1982-01-28 | Denshi Kagaku Kk | Fixing method of cell |
| JPS5910189A (ja) * | 1982-07-07 | 1984-01-19 | Toshiba Corp | 直流電動機 |
| US4545831A (en) * | 1982-09-13 | 1985-10-08 | The Mount Sinai School Of Medicine | Method for transferring a thin tissue section |
| JPS5994068A (ja) * | 1982-11-20 | 1984-05-30 | Sogo Seibutsu Igaku Kenkyusho:Kk | 血中膵ラ氏島細胞膜抗体のロゼット形成法による検出法 |
| EP0215138B1 (fr) * | 1985-09-06 | 1991-01-16 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Préservation des tissus vivants |
-
1985
- 1985-03-31 IL IL74774A patent/IL74774A/xx unknown
- 1985-04-03 NZ NZ211675A patent/NZ211675A/en unknown
- 1985-04-04 ZA ZA852582A patent/ZA852582B/xx unknown
- 1985-04-05 AT AT85104178T patent/ATE69504T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-04-05 EP EP85104178A patent/EP0159603B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-04-05 DE DE8585104178T patent/DE3584640D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1985-04-11 CA CA000478863A patent/CA1252389A/en not_active Expired
- 1985-04-11 AU AU41011/85A patent/AU573328B2/en not_active Ceased
- 1985-04-18 DK DK175385A patent/DK164306C/da not_active IP Right Cessation
- 1985-04-22 GR GR850966A patent/GR850966B/el unknown
- 1985-04-22 ES ES542462A patent/ES8606642A1/es not_active Expired
- 1985-04-22 KR KR1019850002689A patent/KR850007278A/ko not_active Application Discontinuation
- 1985-04-23 JP JP60085590A patent/JPS60237365A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0159603A3 (en) | 1989-01-25 |
| IL74774A (en) | 1988-05-31 |
| EP0159603A2 (en) | 1985-10-30 |
| ES8606642A1 (es) | 1986-04-01 |
| NZ211675A (en) | 1987-08-31 |
| JPS60237365A (ja) | 1985-11-26 |
| DK164306C (da) | 1992-10-19 |
| ATE69504T1 (de) | 1991-11-15 |
| ZA852582B (en) | 1985-11-27 |
| EP0159603B1 (en) | 1991-11-13 |
| AU4101185A (en) | 1985-10-31 |
| DK175385A (da) | 1985-10-24 |
| DK175385D0 (da) | 1985-04-18 |
| AU573328B2 (en) | 1988-06-02 |
| DE3584640D1 (de) | 1991-12-19 |
| IL74774A0 (en) | 1985-06-30 |
| KR850007278A (ko) | 1985-12-02 |
| GR850966B (da) | 1985-11-25 |
| ES542462A0 (es) | 1986-04-01 |
| CA1252389A (en) | 1989-04-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK164306B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af immunocytokemiske objektglas og kontrol-objektglas fremstillet ved denne fremgangsmaade | |
| Tokuyasu | Application of cryoultramicrotomy to immunocytochemistry | |
| Bernhard et al. | Improved techniques for the preparation of ultrathin frozen sections | |
| McLean et al. | A general method for the specific staining of intracellular antigens with ferritin-antibody conjugates | |
| JPH0213399A (ja) | 試験基質に対する標本粘着の方法 | |
| US20080026366A1 (en) | Biological fixative and method of using the biological fixative | |
| US5137030A (en) | Diagnostic methods | |
| Williams Jr et al. | Formation of microtubules at low temperature by tubulin from Antarctic fish | |
| Milgrom et al. | Mixed agglutination in tissue culture | |
| DK142824B (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af en objektbærer med påført immunologisk reaktivt materiale i lyofiliseret og selvhæftende form. | |
| Potts et al. | Histological-based stainings using free-floating tissue sections | |
| EP0266077B1 (en) | Control slide for immunoassay kit and method of making same | |
| Brown et al. | Specific precipitin reactions with the viruses of foot-and-mouth disease and vesicular stomatitis | |
| Tanaka | Immunocytochemical study of human lymphoid tissues with monoclonal antibodies against S-100 protein subunits | |
| US20070054258A1 (en) | Method of removing mucus and cell treatment solution and preservative solution used therefor | |
| WO2003029783A1 (en) | Tissue fixative composition | |
| RU2709608C1 (ru) | Способ определения белка свертываемости крови у животных | |
| Da Costa et al. | Immunolocalization of AGPs and pectins in Quercus suber gametophytic structures | |
| RU2386137C1 (ru) | Покрытие предметных стекол для проведения иммуноцитохимических и гистологических исследований | |
| Watts | A simple capillary tube method for the determination of the specific gravity of 25 and 50 micro l quantities of urine. | |
| Andersland et al. | Isolation and characterization of cytoskeletons from cotton fiber cytoplasts | |
| CA1163926A (en) | Preservation of monolayers of tissue culture cells by insoluble wax | |
| RU2725765C1 (ru) | Способ окрашивания антигенов при помощи флуоресцентных антител на свежезамороженных срезах опухоли и метастазов | |
| GB2034464A (en) | Assay of infected cells and kit therefor | |
| Swinburne | The identification of skin |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |