DK156697B - Fremgangsmaade til separering og isolering af antihaemofil faktor og fibronectin fra en blodplasmaproeve - Google Patents
Fremgangsmaade til separering og isolering af antihaemofil faktor og fibronectin fra en blodplasmaproeve Download PDFInfo
- Publication number
- DK156697B DK156697B DK098581AA DK98581A DK156697B DK 156697 B DK156697 B DK 156697B DK 098581A A DK098581A A DK 098581AA DK 98581 A DK98581 A DK 98581A DK 156697 B DK156697 B DK 156697B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- fibronectin
- precipitate
- blood plasma
- approx
- factor
- Prior art date
Links
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 title claims abstract description 88
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 title claims abstract description 88
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 39
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 title claims abstract description 25
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 48
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 26
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 20
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 claims description 15
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 claims description 15
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 11
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 9
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 8
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 8
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 6
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 claims 1
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 15
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 29
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 27
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 25
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 24
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 11
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 7
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 7
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 7
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 7
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 7
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 6
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 102100023804 Coagulation factor VII Human genes 0.000 description 5
- 108010023321 Factor VII Proteins 0.000 description 5
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 5
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 5
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 5
- 229940012413 factor vii Drugs 0.000 description 5
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 5
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 5
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 5
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 5
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 5
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 5
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000603 anti-haemophilic effect Effects 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 3
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 3
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 3
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010035369 Cohn fraction I Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002356 Nectin Human genes 0.000 description 2
- 108060005251 Nectin Proteins 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 101001027128 Homo sapiens Fibronectin Proteins 0.000 description 1
- 206010064912 Malignant transformation Diseases 0.000 description 1
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M cobalt(2+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+2].N#[C-].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000003467 diminishing effect Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 1
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 239000000976 ink Substances 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000036212 malign transformation Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 210000000865 mononuclear phagocyte system Anatomy 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002947 procoagulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000012465 retentate Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/829—Blood
- Y10S530/83—Plasma; serum
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/829—Blood
- Y10S530/83—Plasma; serum
- Y10S530/831—Cohn fractions
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
DK 156697 B
Opfindelsen angâr en fremgangsmâde til séparering og isolering af antihæmofil faktor og fibronectin fra en blod-plasmaprtfve.
Den terapeutiske værdi af fibronectin er blevet er-5 kendt af en række forskere. Fibronectin spiller en vigtig rolle ved cellulær adhæsion, malign transformation, funk-tionen af det reticuloendotheliale System og ved embryonisk différentiation, jfr. Yamada et al., Nature, 1978, vol.
275, side 179-184, Saba, Ann. Surg., august 1978, side 142-10 152, Scovill et al., The Journal of Trauma, 1976, vol. 16, nr. 11, side 898-904, samt Scovill et al., Ann. Surg., ok-tober 1978,, side 521-529.
Fraktioneringen af humant plasma til fremstilling af et antihæmofil faktor (AHF)-koncentrat (faktor VIII) er 15 kendt, jfr. Hershgold et al., J. Lab. Clin. Med., 1966, vol.
67, side 23-32 samt US patentskrifterne nr. 3.973.002 og 4.170.639. Ved fremgangsmâderne if0lge Hershgold og det sidstnævnte US patentskrift udvindes der kryopræcipiat fra optoede portioner af frisk frosset humant plasma ved en 20 temperatur pâ fra ca. 2 til ca. 10°C ved centrifugering, og der tdrres og vaskes til fjernelse af oploselige proteiner, hvorpâ kryopræcipitatet ekstraheres med en vandig puffer, og ekstraktens pH-værdi indstilles pâ fra ca. 6,5 til ca.
7,5. Den sâledes indstillede vandige ekstrakt af AHF-pro-25 teiner renses ved kontakt med aluminiumhydroxid. Efter rens-ningen konstitueres den vandige AHF-ekstrakt med puffer og saltopl0sning, og dens pH-værdi indstilles pâ en værdi i omrâdet fra 6,50 til 6,95. Den sâledes indstillede oplosning fryset0rres til dannelse af fast AHF-koncentrat.
30 Ved fremgangsmâden ifolge det forstnævnte US patent skrift ekstraheres kryopræciopitat i vandig puffer, og eks-trakten renses om 0nsket ved kontakt med aluminiumhydroxid som ovenfor beskrevet. Den rensede ekstrakt indstilles pâ en pH-værdi pâ fra 6,0 til 7,0 ved tilsætning af syre og 35 afkoles derpâ kraftigt (bratk0les) til 2-20°C i et tidsrum pâ fra ca. 15 til ca. 60 minutter. Efter centrifugering
DK 156697B
2 kasseres remanensen, og den ovenstâende væske behandles som beskrevet ovenfor til opnâelse af et fast AHF-koncentrat.
Ved fremstillingen af et AHF-koncentrat solubiliseres der derfor kryopræcipitat i et vandigt medium, og opl0snxngen 5 syrnes til en pH-værdi pâ 6,0-7,0 ved tilsætning af en bio-logisk acceptabel syre sâledes, som det er velkendt i tek-nikken. Oplesningen afkoles derpâ kraftigt til en temperatur pâ ca. 2 til ca. 20°C og centrifugeres. Den ovenstâende væske skilles fra en remanens, kaldet syre-bratk0lings-præ-10 cipitatet, der kasseres, og væsken behandles med aluminium-hydroxid til rensning deraf. Der isoleres et AHF-koncentrat fra den sâledes rensede ovenstâende væske i overensstemmelse med den ovenfor omtalte procedure, dvs. konstituering af den ovenstâende væske med puffer, saltopl0sning og syre 15 samt fryset0rring af den ovenstâende væske.
Det har vist sig, at det ovenfor omtalte syre-brat-kelings-præcipitat, der hidtil er blevet kasseret, har fibro-nectin-lignende aktivitet og kan anvendes direkte til tera-peutiske behandlinger som en fibronectin-erstatning. Alter-20 nativt kan dette præcipitat behandles til dannelse af prak-tisk taget rent fibronectin. Til dette formâl underkaster man syre-bratk0lings-præcipitatet behandlinger, der herer til den kendte teknik til brug ved isolering af fibronectin, f.eks. de metoder, der er beskrevet af Engvall et al., Int.
25 J. Cancer, vol. 20, side 2 (1977), Molnar et al., Biochemi-stry, vol. 18, side 3909 (1979), Chen et al., Analytical Biochemistry, vol. 79, side 144-151 (1977) samt Mosesson et al., J. Biol. Chem., vol. 245, nr. 21, side 5728-5736, (1970). Metoden if0lge Engvall et al., ved hvilken der an-30 vendes kontakt med et gelatine-Sepharose-affinitetsmedium, er den foretrukne metode til behandling af syre-bratk0lings-præcipitatet til dannelse af fibronectin (Sepharose = Sepha-rose ®).
Opfindelsen angâr som allerede nævnt en fremgangsmâde 35 til separering og isolering af antihæmofil faktor og fibro-
DK 156697 B
3 nectin fra en blodplasmapr0ve, og denne fremgangsmâde er ifdlge opfindelsen ejendommelig ved, at man (a) isolerer en blodplasmafraktion indeholdende fibronectin og antihæmofil faktor fra blodplasma, 5 (b) fremstiller en opl0sning af blodplasmafraktionen i et vandigt medium, (c) syrner oplesningen til en pH-værdi pâ fra 5,0 til 6,95 til dannelse af et præcipitat indeholdende en overvejende mængde af fibronectinet i blodplas- 10 mafraktionen og en ovenstâende væske indeholdende en overvejende mængde af den antihæmofile faktor i blodplasmafraktionen, (d) isolerer fibronectin fra præcipitatet og (e) isolerer antihæmofil faktor fra den ovenstâende 15 væske.
I modsætning til de ovennævnte US patentskrifter nr.
3.973.002 og nr. 4.170.639 angâr den foreliggende opfindelse sâledes en fremgangsmâde til isolering af sâvel fibronectin som AHF fra en given blodplasmaprcve. I den kendte teknik.
20 findes der intet forslag om at isolere fibronectin fra syre--bratk0lings-præcipitatet ved den konventionelle AHF-separe-ringsproces, idet dette præcipitat tidligere blev bortkastet.
I det f0rstnævnte patentskrift kaldes dette præcipitat for et "indifferent fibr0st fast stof". Det kunne ikke forventes, 25 at det kunne indeholde ca. 14 til ca. 24% fibronectin. Sk0nt fibronectin til tider betegnes som "i kulden uopl0seligt globulin" i den kendte teknik, var det kendt, at fibronectin faktisk er forholdsvis opleseligt, selv i kulden, medmindre det er kompleksbundet med fibrin og fibrinogen, jfr. Nature, 30 vol. 275, (1978), side 179. I betragtning af det, der er angivet i US patentskrift nr. 3.973.002, var der ingen grund til at tro, at syre-bratk0lings-præcipitatet indeholdt et sâdant kompleks. Det mâtte snarere forventes, at fibronectin allerede var blevet efterladt i en uopl0selig remanens fra 35 et tidligere trin af fraktioneringsproceduren. Selv om det mâtte betragtes som nærliggende, at kryopræcipitat indeholder
DK 156697 B
4 fibronectin, ville det i ait fald ikke være nærliggende, at de særlige syre- eller syre-bratk01ings-præcipitater, der fâs ved den her omhandlede fremgangsmâde, og som fâs ved indstilling af pH-værdien pâ en værdi væsentligt lavere end 5 fysiologiske grænser og ved en eventuel mild bratkoling (ingen frysning), ville indeholde fibronectin.
I EP-A 0.022.052, der ikke er forpubliceret, beskrives der ikke et syrningstrin, men det angives, at man fælder fibronectin ved tilsætning af heparin ved plasmas normale 10 pH-værdi. Fremgangsmâden ifolge opfindelsen adskiller sig ogsâ klart fra en sâdan separeringsmetode.
I grundtrækkene kan den omhandlede metode til frem-stilling af syre- eller syre-bratk0lings-præcipitat med fibronectin-lignende aktivitet og fibronectin som sâdant 15 sammenfattes som folger, jfr. tegningens figur 1:
Kryopræcipitat fâs fra opt0et frosset blodplasma og solubiliseres i et vandigt medium. Opldsningen g0res sur og bratkoles ved en pH-værdi og en temperatur og i et tidsrum, der er tilstrækkeligt til dannelse af et syre-bratk0lings-20 -præcipitat. Fortrinsvis indstilles pH-værdien pâ en værdi i omrâdet fra ca. 5,0 til ca. 6,95, især fra ca. 6,50 til ca. 6,95, og oplosningen afkoles kraftigt til en temperatur pâ fra ca. 2,5 til ca. 7,5°C. Tidsrummet for præcipitat--dannelsen udg0r almindeligvis fra ca. 15 til ca. 60 minut-25 ter. Det dannede syre-bratk0lings-præcipitat skilles fra oplosningen og kan anvendes direkte som fibronectin-erstat-ning eller som en kilde til fibronectin. Begge produkterne kan frysetdrres ved kendte metoder eller i nærværelse af fra ca. 1 til ca. 20% carbonhydrat.
30 Syre-bratkolinbgs-præcipitatet, der har fibronectin- -aktivitet, er et materiale, der indeholder fra ca. 14 til ca. 24% fibronectin, fra ca. 75 til ca. 85% fibrinogen og en mindre mængde, ca. 1%, kryopræcipitat-proteiner, sâsom albumin og gammaglobulin, og mindre end 28 enheder (pr.
35 gram total protein) antihæmofil faktor-aktivitet (faktor VIII).
DK 156697 B
5
Fibronectin isoleret fra det nævnte syre-bratk01ings--præcipitat indeholder fra ca. 90 til ca.98% fibronectin og mindre end ca. 10% fibrinogen og gammaglobulin og er praktisk taget frit for albumin og antihæmofil faktor-aktivitet (fak-5 tor VIII), dvs. indeholder mindre end 1% albumin og mindre end 5 enheder AHF-aktivitet pr. gram total protein.
En anden udf0relsesform for fremgangsmâden if0lge opfindelsen er illustreret pâ tegningens figur 2. Kryopræci-pitat solubiliseres i et vandigt medium, fortrinsvis vand, 10 og opl0sningen g0res sur til en pH-værdi pâ fra ca. 5,0 til ca. 6,8, fortrinsvis fra 5,8 til 6,4, som ovenfor beskrevet.
Oplcsningen centrifugeres til dannelse af et syre--præcipitat, der skilles fra AHF-opl0sningen. Syre-præcipi-tatet har fibronectin-lignende aktivitet og kan anvendes 15 direkte som et terapeutisk middel pâ lignende mâde som fibronectin. Syre-præcipitatet kan ogsâ behandles til isolering af fibronectin under anvendelse af de ovennævnte metoder.
Efter fældning af syre-præcipitatet bratk0les AHF--opl0sningen til en temperatur pâ fra ca. 2 til ca. 20°C, 20 fortrinsvis fra ca. 2,5 til ca. 7,5°C, og derpâ centrifugeres eller behandles opl0sningen pâ lignende mâde til dannelse af et bratk0lings-præcipitat og en AHF-ovenstâende væske. Bratk0lings-præcipitatet har væsentligt mere fibronectin--lignende aktivitet end bâde syre-bratk0lings-præcipitatet 25 og syre-præcipitatet. Bratk01ings-præcipitatet kan anvendes direkte som et terapeutisk middel ved behandling af de medi-cinske forstyrrelser, mod hvilke fibronectin er effektivt. Endvidere kan fibronectin isoleres fra bratk0lings-præcîpi-tatet ved behandling af dette efter de ovenfor omtalte me-30 toder.
Efter fraskillelse af bratk0lings-præcipitat behandles den tilbageblivende AHF-ovenstâende væske if0lge konven-tionelle metoder til fremstilling af et AHF-koncentrat. Til dette formâl kan den ovenstâende væske renses ved kontakt 35 med aluminiumhydroxid og behandles til fjernelse af vand derfra, f.eks. ved fryset0rring. Udbyttet af AHF-koncentrat
DK 156697B
6 ved fremgangsmâden if0lge opfindelsen er i det væsentlige det samme som det, der opnâs ved de kendte fremgangsmâder til produktion af faktor VIII.
Syre-præcipitat-fibronectinmaterialet har felgende 5 sammensætning: ca. 5 til ca. 13% fibronectin, ca. 86 til ca. 94% fibrinogen, ca. 1% kryopræcipitat-proteiner, sâsom albumin og gammaglobulin, og er i det væsentlige frit for faktor VlII-aktivitet, dvs. indeholder mindre end ca. 20 enheder faktor VlII-aktivitet pr. gram total protein.
10 Bratkolings-præcipitat-fibronectinerstatningen er et fibronectin-beriget materiale indeholdende ca. 25 til ca.
32% fibronectin, ca. 67 til ca. 74% fibrinogen, ca. 1% kryopræcipitat-proteiner, sâsom albumin og gammaglobulin, og er i det væsentlige frit for faktor VlII-aktivitet, dvs. inde-15 holder mindre end ca. 20 enheder faktor VlII-aktivitet pr. gram total protein.
Fibronectin isoleret fra enten syre-præcipitatet eller fra bratk0lings-præcipitatet har praktisk taget samme sammensætning som det fibronectin, der isoleres fra syre-20 -bratk0lings-præcipitatet.
Aile de ovenfor fremstillede materialer kan behandles i overensstemmelse med kendt teknik, sâsom sterilfiltrering, konstituering med vandige medier til tilpasning til fysiolo-giske betingelser med hensyn til pH-værdi, saltindhold og 25 lignende, diafiltrering, ultrafiltrering og fryset0rring.
Det menes, at effektiviteten af de nye midler frem-stillet ved fremgangsmâden if0lge opfindelsen primært skyldes deres fibronectin-indhold. Som ovenfor nævnt. er disse midler if0lge den kendte teknik imidlertid ikke blevet erkendt som 30 havende fibronectin-lignende aktivitet.
Disse materialer er nu tilgængelige ved anvendelse af kun mindre modifikationer af den gængse metode til frem-stilling af AHF-koncentrat og uden at formindske udbyttet af AHF-koncentratet.
35 Det er vigtigt at bemærke, at fremgangsmâden if0lge opfindelsen til f'remstilling af fibronectin og fibronectin-
DK 156697 B
7 -erstatninger fra blodplasma kun er beskrevet udf0rt med kryopræcipitat som ekserapel og ikke som nogen begrænsning.
I sit bredere aspekt kan fremgangsmâden if0lge opfindelsen udf0res med plasmafraktioner i almindelighed indeholdende 5 fibronectin og antihæmofil faktor, sâsom Cohn Fraktion I-pasta. Plasmafraktionen solubiliseres i vandigt medium. Opl0sningen behandles ved de ovenfor beskrevne metoder til opnâelse af et præcipitat indeholdende en overvejende andel af fibronectinet, dvs. mere end 50%, fortrinsvis mere end 10 60% af fibronectinet i plasmafraktionen, og fibronectinet isoleres fra præcipitatet som ovenfor beskrevet. Desuden isoleres der antihæmofil faktor-koncentrat (faktor VIII) fra opl0sningen, der indeholder en væsentlig andel af faktor VlII-aktivitet, dvs. mere end 50%, fortrinsvis mere end 80% 15 af faktor VlII-aktiviteten.
Det er naturligvis muligt at isolere fibronectin direkte fra kryopræcipitat, Cohn Fraktion I-pasta, kryopræci-pitat-vaskeopl0sning etc., ved anvendelse af kendt teknik. Imidlertid ville man ved at gâ sâledes frem miste en væsent-20 lig fordel ved den foreliggende opfindelse, nemlig fremstil-lingen af et antihæmofil faktor-koncentrat, i udbytter sva-rende til de, der opnâs ved konventionelle metoder til pro-duktion af faktor VIII.
Ved anvendelse af pasteuriserede fibronectin-erstat-25 ninger og pasteuriseret fibronectin som sâdant til kliniske (farmaceutiske) formai, f.eks. til intravenos indgivelse til en patient, rekonstitueres fibronectin-erstatningen eller fibronectinet i sterilt vand. Den vandige blanding b0r indeholde en terapeutisk mængde fibronectin, der kan 30 defineres som den mængde fibronectin, der har en kurativ eller helbredende effekt pâ den bestemte lidelse, som behandles. Ved f.eks. behandlingen af brandsâr vil en terapeutisk mængde fibronectin være den mængde, der virker kurativt eller lindrende pâ brandsârene.
35 Hvis der ligeledes indgives fibronectin eller fibro- nectin-erstatninger til en cancerpatient, vil den terapeu-
DK 156697B
8 tiske mængde være den mængde, der har en cancer-kurativ eller -lindrende virkning. De terapeutiske mængder af fibro-nectin, der skal anvendes i hvert enkelt tilfælde, vil være âbenbare for fagmanden. Det stérile vand kan indeholde de 5 materialer, der almindeligvis betragtes som medvirkende til en tilnærmelse til fysiologiske betingelser, og/eller som foreskrevet ved officielle bestemmelser. Det stérile vand kan sâledes indeholde et puffermiddel til opnâelse af et fysiologisk acceptabelt pH. Det stérile vand kan ogsâ inde-10 holde natriumchlorid og andre fysiologisk n0dvendige stoffer i fysiologisk acceptable mængder. I almindelighed ber midlet til intravenos indgivelse opfylde de forskrifter, der er udstedt af Food and Drug Administration, hvilke forskrifter er til râdighed for de pâgældende fagfolk.
15 Opfindelsen belyses nærmere i nedenstâende eksempel 1, idet eksempel 2 illustrerer en fremstilling af syre-bratkelings-præcipitat uden anvendelse af syre eller brat-keling, men ved anvendelse af elektroforese. Ved elektrofo-resen fâs et materiale, der i det væsentlige svarer til 20 syre-bratkelings-præcipitatet ifolge eksempel 1. Eksempel 3 illustrerer en fremstilling af et syre-bratk0lings-præcipi-tat, idet der i dette tilfælde benyttes en molekylsigte i stedet for elektroforese. Eksempel 2 og 3 viser fremgangs-mâder til fremstilling af fibronectin, hvor man ikke samtidig 25 kan udvinde den antihæmofile faktor fra kryopræcipitatet.
Eksempel 1
Fremstilling af fibronectin ud fra svre-bratkolinqs- -præcipitat 30 Der anvendes en modificeret metode ifolge Hershgold et al, jfr., den tidligere henvisning, til fremstilling af kryopræcipitat. Frisk frosset humant plasma optes ved ikke over 5°C og opvarmes til ikke over 15°C. Det sâledes opvar-mede plasma bratkeles til 2°C. Efter 3 timer opsamles der 35 uopleseligt kryopræcipitat ved centrifugering ved en tempe-ratur, der ikke overstiger 10°C.
9
DK 156697B
1 kg kryopræcipitat skæres i terninger og suspenderes i 10 liter sterilt vand ved 32°C i ikke over 2 timer. Derpâ indstilles blandingens pH-værdi pâ 6,8 ved tilsætning af 0,1 N saltsyre og bratkoles til 5°C. Præcipitat (syre-brat-5 kdlings-præcipitat) fjernes ved centrifugering ved 5°C.
1 kg syre-bratk0lings-præcipitat indeholdende 260 gram protein, fremstillet som ovenfor beskrevet, suspenderes i 13 liter af en 0,05 M riatriumphosphatpuffer (pH = 7,6), indeholdende 0,1 M natriumchlorid (puffer A). Suspensionen 10 klares ved filtrering.
Et gelatine-Sepharose-kompleks fremstilles ved covalent binding af porcin gélatine til Sepharose CL-4B. Til dette formâl blandes 24 g porcin gélatine med 1,2 kg Sepharose CL-4B, der er aktiveret med 60 g cyanogenbromid. Blan-15 dingen omr0res ved 5°C i 16 timer og vaskes udtommende med 4 M NaCl. Den koblede Sepharose opbevares i 4 M NaCl, og umiddelbart inden anvendelsen ækvilibreres den med puffer A. Cyanogenbromidaktiverings- og proteinkoblingstrinnene er beskrevet af Cuatrecasas et al., (1968), Proc. Natl. Acad.
20 Sci. US., VOl. 61, Slde 636-643.
Den klarede syre-bratk0lings-præcipitat-suspension omrores med 1,2 kg af den ovenfor fremstiilede gélatine--Sepharose i 3 timer. Blandingen anbringes i en Biichner--filtreringstragt og vaskes med 30,6 liter 1 M urinstofop-25 l0sning til fjernelse af uonskede proteiner. Derefter vaskes blandingen med 3,6 liter 4 M urïnstofopl0sning til eluering af fibronectin.
Til fjernelse af urinstof diafiltreres fibronectin--urinstof-eluatet (under anvendelse af en Amicon ® hulfiber-30 -membranpatron med en nominel rétention pâ molekylvægt 10.000 mod puffer A i 10%'s sucrose (0,1 g/ml)) efter tilsætning af sucrose til 10%.
Retentatet analyseres for fibronectin-indhold ved gelelektroforese pâ ureduceret og reduceret natriumdodecyl-35 sulfat (SDS) - polyacrylamidgel. Fibronectin-bândet er an-svarligt for mere end 90% af det protein, der er synligt pâ
DK 156697B
10 gelen. Molekylvægten af fibronecti.net pâ ureduceret SDS--polyacrylamidgel er 400.000 til 500.000. Den af Yamada et al. i Nature, 1978, vol. 275, side 179 angivne molekylvægt er 450.000 til 500.000. Molekylvægten af fibronectinet pâ 5 reduceret SDS-polyacrylamidgel er 250.000 til 270.000. Den af Yamada et al. jfr. ovenfor, angivne værdi er 210.000 til 250.000.
Fibronectinet identificeres yderligere ved hjælp af dets aminosyresammensætning, der stemmer med den, der er 10 angivet af Yamada et al. i Biochemistry, 1977, vol. 16, side 5552.
Et antistof til det ovenfor fremstillede, rensede fibronectin fremstilles og krydsreageres med kommercielt tilgængeligt fibronectin (Collaboration Research, Inc., 15 Waltham, Massachusetts). Ved immunodiffusionsundersogelser viser det ovenfor fremstillede fibronectin en identitetslinie med det kommercielle fibronectin, nâr begge prover krydsreageres mod det ovennævnte antistof.
Det ovenfor fremstillede fibronectin viser sig at 20 være mere end 95% rent som bestemt ved hjælp af farvede SDS-polyacrylamidgeler.
Fibronectinets aktivitet bestemmes i folgende forsog:
Rotteleverskiveforspq som beskrevet af Milnar et al. i Biochemistry, vol. 18, side 3909 (1979). Forsoget udfpres 25 i scintillations-ampuller med 2-16 μg tilsat fibronectin, 10 enheder heparin, gelatineovertrukne latexpartikler mærket med 125i (10.000 cpm tilsat til hver ampul), Krebs-Ringer--puffer til et slutrumfang pâ 1,2 ml samt en 100-150 mg's skive af frisk rottelever. Denne blanding inkuberes i 30 30 minutter ved 30-37°C under omrystning. Optagelsen af mærket gelatinelatex foroges op til 10 gange af fibronectinet.
Agqlutinationsforsoq som beskrevet af Check et al. i J. Réticuloendothélial Soc., vol. 25, side 351-362 (1979). Forsoget udfores pâ lignende mâde som leverskiveforsoget.
35 Fibronectin (2-31 μg, i nogle tilfælde op til 600 μg) sættes til ampuller indeholdende 10 enheder heparin, 300 μΐ af en 11
DK 156697B
Ο,6%’s opiosning af ikke-mærket gelatineovertrukken latex samt Krebs-Ringer-puffer til et slutrumfang pâ 1,2 ml. Ampul-lerne rystes i 30 minutter ved 30-37°C. Agglutinationen bed0mmes visuelt ved konstatering af en overgang fra en 5 mælket oplesning til en klar oplesning med sammenklumpede partikler. Aktiviteterne udtrykkes som den lavest tilsatte mængde fibronectin, ved hvilken agglutination finder sted.
Rotteleverskiveforseget viser aktiviteter af fibronec-tinet fremstillet if0lge opfindelsen pâ fra ca. 2000 til 10 ca. 6000 enheder pr. mg. Molnar et al. jfr. ovenfor, har angivet 1300 til 2000 enheder pr. mg for deres fibronectin.
Agglutinationsaktiviteterne sammenlignes med rotte-leverskiveaktiviteterne med god korrelation. Almindeligvis er agglutinationsaktiviteterne ca. 6 til ca. 12 μg (fibro-15 nectin med en agglutinationsaktivitet st0rre end 100 /ig ville blive betragtet som værende svagt aktive).
Eksemoel 2
Fremstillinq af materiale med væsentliq samme 20 sammensætninq som svre-bratko 1 inqs-præcïpitat under anvendelse af et Harwell-elektroforese- apparat 140 g kryopræcipitat fremstilles ved en fremgangsmâde som beskrevet i eksempel 1 og sættes til 2300 ml af en vandig 25 opldsning indeholdende Tris-citratpuffer (ph = 7,5). Protein-koncentrationen i den sâledes fremstillede oplesning er 15,3 mg pr. ml, og oplesningens specifikke konduktans er 1-2 milli-ohm (m ohm) pr. cm. (Tris = tris-(hydroxymethyl)--aminomethan).
30 Oplesningen ledes gennem en kontinuerlig Harwell- -elektroforese-separator med en stremningshastighed pâ 500 ml/minut. Der opsamles 30 fraktioner. Fraktionerne ana-lyseres ferst ved en optisk tæthed pâ 280 nm for protein og for AHF-prokoagulant-aktivitet ved éttrinsmetoden. Ved den 35 optiske tæthed iagttages der to hovedtoppe, én omfattende fraktionerne 6-15 og én omfattende fraktionerne 16-21. Disse 12
Uï\ li)t>t>?/ D
fraktioner slâs sammen i tre portioner omfattende fraktio-nerne 2-11, 12-15 og 16-20. Disse portioner analyseres for fibronectin pâ reducerede SDS-polyacrylamidgeler.
Portionen fra fraktionerne 12-15 har folgende sammen-5 sætning: 15% fibronectin, 84% fibrinogen, ca. 1% albumin og gammaglobulin samt en faktor VlII-aktivitet pâ ca. 64 enheder pr. g totalt protein.
Eksempel 3 10 Fremstillinq af materiale med væsentliq samme sammensætninq sont svre-bratkelinqs-præcipitat under anvendelse af en molekvlsiqte En Stack Column ® med kapacitet pâ 64 liter, frem-stillet af Pharmacia Corp., üppsala, Sverige, pakkes med 80 15 liter Sepharose CL-4B ®. Sepharosen ækvilibreres med en pufferoplosning indeholdende 0,05 M natriumphosphat og 0,1 M natriumchlorid ved en pH-værdi pâ 7,6.
En opl0sning af kryopræcipitat fremstilles ved samme fremgangsmâde soin beskrevet i eksempel 1 og har en protein-20 koncentration pâ 20 mg/ml. 2 liter af denne opl0sning ledes ind i den ovennævnte kolonne ved hjælp af en peristaltisk pumpe.
Kolonnen elueres med den ovennævnte puffer, og der opsamles 100 1 liter-fraktioner. Ved analyse af protein-25 -optisk tæthed ved 280 nm observeres der tre toppe. Den anden top (30 g protein) har folgende sâmmensætning: 15% fibronectin, 84% fibrinogen, 1% albumin og gammaglobulin samt en faktor VlII-aktivitet pâ ca. 28 enheder pr. g total protein.
Claims (5)
1. Fremgangsmâde til séparation og isolering af anti-hæmofil faktor og fibronectin fra en blodplasmapr0ve, k e n-5 detegnet ved, at man (a) isolerer en blodplasmafraktion indeholdende fibronectin og antihæmofil faktor fra blodplasma, (b) fremstiller en oplosning af blodplasmafraktionen i et vandigt medium, 10 (c) syrner opX0sningen tii en pH-værdi pâ fra 5,0 tii 6,95 tii danneise af et præcipitat indehoidende en overvejende mængde af fibronectinet i blodplas-mafraktionen og en ovenstâende væske indehoidende en overvejende mængde af den antihæmofiie faktor 15 i blodplasmafraktionen, (d) isolerer fibronectin fra præcipitatet og (e) isolerer antihæmofil faktor fra den ovenstâende væske.
2. Fremgangsmâde ifolge krav 1, kendeteg- n e t ved, at pH-værdien i trin (c) indstilles pâ en værdi i omrâdet fra 5,0 til 6,8, fortrinsvis fra 5,6 til 6,4.
3. Fremgangsmâde if0lge krav 2, kendeteg-25 net ved, at den ovenstâende væske i trin (c) bratk0les til en temperatur pâ 2-20°C, fortrinsvis 2,5-7,5°C, til danneise af et andet præcipitat indeholdende fibronectin og en ovenstâende væske beriget med antihæmofil faktor, hvorpâ der isoleres fibronectin fra det andet præcipitat og anti-30 hæmofil faktor fra den ovenstâende væske. 1 35 Fremgangsmâde ifolge krav 1, kendeteg-n e t ved, at opl0sningen i trin (c) bratkoles til en temperatur pâ 2,5-7,5°C. DK 156697B
5. Fremgangsmâde ifolge krav 4, kendeteg-n e t ved, at pH-værdien i trin (c) indstilles pâ en værdi i omrâdet fra 6,5 til 6,95.
6. Fremgangsmâde ifelge ethvert af kravene 1-5, kendetegnet ved, at fibronectinet isoleres som et materiale indeholdende 90-98% fibronectin, mindre end 1% albumin og mindre end 5 enheder antihæmofil faktor-aktivitet pr. gram totalprotein.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US12734080 | 1980-03-05 | ||
| US06/127,340 US4341764A (en) | 1980-03-05 | 1980-03-05 | Method of preparing fibronectin and antihemophilic factor |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK98581A DK98581A (da) | 1981-09-06 |
| DK156697B true DK156697B (da) | 1989-09-25 |
| DK156697C DK156697C (da) | 1990-02-05 |
Family
ID=22429606
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK098581A DK156697C (da) | 1980-03-05 | 1981-03-04 | Fremgangsmaade til separering og isolering af antihaemofil faktor og fibronectin fra en blodplasmaproeve |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4341764A (da) |
| EP (1) | EP0035202B1 (da) |
| JP (1) | JPS56139418A (da) |
| AT (1) | ATE15973T1 (da) |
| CA (1) | CA1164342A (da) |
| DE (1) | DE3172567D1 (da) |
| DK (1) | DK156697C (da) |
| ES (1) | ES500122A0 (da) |
| MX (1) | MX7113E (da) |
Families Citing this family (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4440679A (en) * | 1980-03-05 | 1984-04-03 | Cutter Laboratories, Inc. | Pasteurized therapeutically active protein compositions |
| JPS584074U (ja) * | 1981-06-30 | 1983-01-11 | 井上 岱介 | 風車ネオン式検電器 |
| DE3170868D1 (en) * | 1981-10-12 | 1985-07-11 | Armour Pharma | Process for the preparation of highly purified antihemophilic factor |
| US4391749A (en) * | 1981-10-19 | 1983-07-05 | La Jolla Cancer Research Foundation | Method for the purification of collagens |
| JPS5967228A (ja) * | 1982-10-07 | 1984-04-16 | Green Cross Corp:The | 寒冷不溶性グロブリンの凍結乾燥方法 |
| JPS59134732A (ja) * | 1983-01-21 | 1984-08-02 | Green Cross Corp:The | フイブロネクチン・生理活性物質複合体の製造法 |
| DE3318521A1 (de) * | 1983-05-20 | 1984-11-22 | Lentia GmbH Chem. u. pharm. Erzeugnisse - Industriebedarf, 8000 München | Verfahren zur herstellung eines antihaemophiliefaktor-konzentrats |
| JPS6133124A (ja) * | 1983-11-04 | 1986-02-17 | ラルフ シルヴア−マン | 異性々疾患を治療するための培養間葉細胞から抽出した巨大分子 |
| US4965199A (en) * | 1984-04-20 | 1990-10-23 | Genentech, Inc. | Preparation of functional human factor VIII in mammalian cells using methotrexate based selection |
| AT385658B (de) * | 1985-03-28 | 1988-05-10 | Serotherapeutisches Inst Wien | Verfahren zur herstellung einer fuer die anwendung beim menschen geeigneten fibronektinloesung |
| US4587122A (en) * | 1985-04-23 | 1986-05-06 | The Green Cross Corporation | Fibronectin-dextran-drug complex and method of preparation thereof |
| US4894328A (en) * | 1986-03-26 | 1990-01-16 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Immunodiagnostic test for syphilis and other treponemal infections |
| DK475386D0 (da) * | 1986-10-03 | 1986-10-03 | Weis Fogh Ulla Sivertsen | Fremgangsmaade og apparat til fremstilling af biologiske stoffer |
| FR2632309B1 (fr) * | 1988-06-07 | 1990-08-24 | Lille Transfusion Sanguine | Procede de purification par voie chromatographique de proteines, notamment de facteur viii, et les produits obtenus |
| US5629291A (en) * | 1992-01-31 | 1997-05-13 | La Jolla Cancer Research Foundation | Methods of modulating fibronectin extracellular matrix assembly |
| US5453489A (en) * | 1992-01-31 | 1995-09-26 | La Jolla Cancer Research Foundation | Polypeptide fragments of fibronectin which can modulate extracellular matrix assembly |
| US6528483B2 (en) * | 1995-06-07 | 2003-03-04 | André Beaulieu | Method of producing concentrated non-buffered solutions of fibronectin |
| US7112320B1 (en) * | 1995-06-07 | 2006-09-26 | Andre Beaulieu | Solid wound healing formulations containing fibronectin |
| US5821220A (en) * | 1995-06-07 | 1998-10-13 | Andre Beaulieu | Method of producing concentrated non-buffered solutions of fibronectin |
| EP1049716A4 (en) | 1998-01-23 | 2002-07-03 | Csl Ltd | PURIFICATION OF FIBRINOGEN |
| DK2130554T3 (da) | 1999-02-22 | 2012-12-03 | Univ Connecticut | Albuminfrie faktor VIII-præparater |
| AU779126B2 (en) * | 1999-12-23 | 2005-01-06 | Csl Limited | Separation of fibrinogen from plasma proteases |
| CA2395431C (en) * | 1999-12-23 | 2010-08-17 | Csl Limited | Separation of fibrinogen from plasma proteases |
| DE102004044429B4 (de) * | 2004-09-14 | 2009-04-30 | Biotest Ag | Verfahren zur Herstellung einer Zusammensetzung enthaltend von Willebrand Faktor |
| DE102004044419B4 (de) | 2004-09-14 | 2010-04-15 | Biotest Ag | Verfahren zur Aufreinigung eines von Willebrand Faktors mittels Hydroxylapatit-Durchlaufchromatographie |
| AU2009313325B2 (en) * | 2008-11-07 | 2014-05-01 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Factor VIII formulations |
| GEP20146190B (en) | 2009-05-25 | 2014-11-10 | H Lundbeck As | Preparation of nalmefene hydrochloride from naltrexone |
| IL213864A0 (en) | 2011-06-30 | 2011-08-31 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Method for removing a lytic enzyme from a heterogeneous mixture |
| US8844879B2 (en) * | 2011-12-12 | 2014-09-30 | The Boeing Company | Wing variable camber trailing edge tip |
| IL231230A0 (en) | 2014-02-27 | 2014-08-31 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd | Fibrinogen preparation |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3973002A (en) * | 1974-04-12 | 1976-08-03 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Antihemophilic factor |
| US4170639A (en) * | 1978-07-10 | 1979-10-09 | Warner-Lambert Company | Antihemophilic factor concentrate and its production |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2848529A1 (de) * | 1978-11-09 | 1980-05-29 | Behringwerke Ag | Verfahren zur herstellung des kaelteunloeslichen globulins und dieses enthaltende arzneimittel |
| US4210580A (en) * | 1979-06-19 | 1980-07-01 | David Amrani | Process for separation and isolation of AHF and fibronectin from blood plasma |
| US4278594A (en) * | 1979-06-19 | 1981-07-14 | David Amrani | Process for separation and isolation of AHF, von Willebrand's ristocetin cofactor (VWF:RCF) and fibronectin from blood plasma |
-
1980
- 1980-03-05 US US06/127,340 patent/US4341764A/en not_active Expired - Lifetime
-
1981
- 1981-02-23 DE DE8181101288T patent/DE3172567D1/de not_active Expired
- 1981-02-23 EP EP81101288A patent/EP0035202B1/en not_active Expired
- 1981-02-23 AT AT81101288T patent/ATE15973T1/de not_active IP Right Cessation
- 1981-03-04 CA CA000372253A patent/CA1164342A/en not_active Expired
- 1981-03-04 DK DK098581A patent/DK156697C/da not_active IP Right Cessation
- 1981-03-04 JP JP3000681A patent/JPS56139418A/ja active Pending
- 1981-03-05 ES ES500122A patent/ES500122A0/es active Granted
- 1981-03-05 MX MX819332U patent/MX7113E/es unknown
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3973002A (en) * | 1974-04-12 | 1976-08-03 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Antihemophilic factor |
| US4170639A (en) * | 1978-07-10 | 1979-10-09 | Warner-Lambert Company | Antihemophilic factor concentrate and its production |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MX7113E (es) | 1987-06-29 |
| DK98581A (da) | 1981-09-06 |
| ATE15973T1 (de) | 1985-10-15 |
| DK156697C (da) | 1990-02-05 |
| EP0035202A2 (en) | 1981-09-09 |
| DE3172567D1 (en) | 1985-11-14 |
| EP0035202B1 (en) | 1985-10-09 |
| ES8202029A1 (es) | 1982-01-01 |
| CA1164342A (en) | 1984-03-27 |
| ES500122A0 (es) | 1982-01-01 |
| EP0035202A3 (en) | 1982-09-01 |
| JPS56139418A (en) | 1981-10-30 |
| US4341764A (en) | 1982-07-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK156697B (da) | Fremgangsmaade til separering og isolering af antihaemofil faktor og fibronectin fra en blodplasmaproeve | |
| US3682881A (en) | Fractionation of plasma using glycine and polyethylene glycol | |
| EP0047216B1 (en) | Method of selectively increasing yield and purity of certain cryoprecipitate proteins | |
| US5099003A (en) | Method of preparing a sterile plasma-protein solution containing fibrinogen and factor xiii | |
| EP2929887B1 (en) | Viral inactivated platelet extract, use and preparation thereof | |
| US4188318A (en) | Simplified method for preparation of high yield, high purity Factor VIII concentrate | |
| US4455300A (en) | Fibronectin compositions | |
| US4727059A (en) | Fibronectin solution suitable for use in humans and process for its preparation | |
| JP7416786B2 (ja) | 血小板放出物を調製するための方法 | |
| JPS59137417A (ja) | 人尿由来コロニ−形成刺激因子及びカリクレインの製造法 | |
| DK162233B (da) | Fremgangsmaade til isolering af faktor viii fra blodplasma og pharmaceutisk praeparat indeholdende den saaledes isolerede fator viii | |
| JP2532535B2 (ja) | 組織タンパクｐｐ４含有医薬 | |
| US20030129167A1 (en) | Enhanced production of blood components, blood cells and plasma without freezing | |
| JPH0424360B2 (da) | ||
| US4075197A (en) | Serum albumin production | |
| US4285933A (en) | Process for concentrating blood coagulation Factor XIII derived from human placentae | |
| JP3558292B2 (ja) | 血小板付着インヒビター | |
| JPS61189228A (ja) | 血液凝固第８因子製剤の製法 | |
| Johnson et al. | Enhanced Yield of Antihemophilic Factor and von Willebrand Factor by Cryoprecipitation with Polyethylene Glycol1 | |
| US4302445A (en) | Method for concentrating and purifying antihemophilic factor or factor VIII | |
| US4478825A (en) | Warm ethanol method for preparation of low fibrinogen antihemophilic factor | |
| US4770877A (en) | Isolation of a high molecular weight aortic endothelial cell growth inhibitor | |
| Wiernik et al. | Pulmonary embolus in acute myelocytic leukemia | |
| MXPA03007069A (es) | Acido carboxilico tal como acido citrico para desinfectar o mejorar la produccion de productos sanguineos tales como el plasma, crioprecipitado y/o plaqueta. | |
| WO1993007890A1 (en) | Treatment of haemophilia |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |