DK155948B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af pentapeptider til paavirkning af modningen af t-lymfocyter. - Google Patents
Analogifremgangsmaade til fremstilling af pentapeptider til paavirkning af modningen af t-lymfocyter. Download PDFInfo
- Publication number
- DK155948B DK155948B DK522582A DK522582A DK155948B DK 155948 B DK155948 B DK 155948B DK 522582 A DK522582 A DK 522582A DK 522582 A DK522582 A DK 522582A DK 155948 B DK155948 B DK 155948B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- tyr
- lys
- phe
- mmol
- arg
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/66—Thymopoietins
- C07K14/662—Thymopoietins at least 1 amino acid in D-form
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/18—Thymus derived hormone or factor; related peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
DK 155948 B
o 1
Opfindelsen angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte pentapeptider til påvirkning af modningen af T-lymfocyter.
Fra thymusekstrakter er der blevet isoleret flere 5 peptider, f.eks. thymosin-α^ og thymopoietin II, der bidrager til differentieringen ("modning") af thymusafhængige lymfocyter (T-celler). Også en delsekvens af thymopoietin II, Arg-Lys-Asp-Val-Tyr, udviser i de tilsvarende testsystemer, f.eks. ved roset-testen, en thymopoietin-agtig virkning, 10 jfr. Science, 204, 1309-1310 (1979).
Til undersøgelsen af indflydelsen af mindre peptider på lymfocyter egner sig roset-testen og PHA-stimula-tions-testen.
Ved roset-testen følges modningen af lymfocyter fra 15 humant navlesnorblod ved rosettering med fåre-erythrocyter i kulden. Denne test er specifik for T-celler, dvs. den tillader iagttagelsen af forskydningen af R -T-celler til R+-T--celler. Navlesnorblodet indeholder forholdsvis mange umodne eller ikke uddifferentierede lymfocyter, således at basis- 20 værdien (normalværdien) for rosetdannende T-celler ligger lavere end ved lymfocyter for det perifere blod hos voksne.
På grundlag af undersøgelser af blodet fra patienter, der lider af autoimmunsygdomme eller tumorer, kan man korrelere et lavt rosettal med en lav immunstatus. Ved testen op-25 tæller man rosettallene for lymfocyt-erythrocyt-systemer og sammenligner dem, idet systemerne enten kun forinkuberes i et næringsmedium uden tilsætning eller i næringsmediet under tilsætning af det stof, hvor hvilket der skal undersøges.
Koncentrationen af de undersøgte peptider varieres ved 30 denne test mellem ca. 10 ng/ml til 1 pg/ml, 5 pg/ml, 10 pg/ml og 20 pg/ml. Ved bedømmelsen medtages der kun sådanne rosetter, som består af mindst én lymfocyt og tre vedhæftende erythro-cyter.
Ved PHA-stimulations-testen (PHA=phytæmagglutinin) eller ved lymfocyt-transformations-testen opnås tilbageslutnin-
O
2
DK 155948 B
ger vedrørende antallet af de modne, dvs. stimulerbare lymfocyter, ikke gennem en undersøgelse af overfladeantigenerne, men derimod ved funktions-testen med hensyn til stimu-lerbarhed med plantelectinet PHA. Lymfocyterne (T-celler) 5 stimuleres af lectinet, ligesom af bakterielle eller virale antigener, til en blasttransformation. Denne fører enten direkte eller ved udtømning af lymfokiner til en proliferation. Indbygningen af radioaktivt thymidin i løbet af et bestemt tidsrum er da et mål for antallet af de stimulerede cel-10 ler. Kun de modne eller immunologisk potente T-celler stimuleres. Man kan således ved hjælp af denne test følge indflydelsen af et stof på lymfocytmodningen. Ganske vist skal stimuleringen være suboptimal, fordi der ved højere koncentrationer også stimuleres andre subpopulationer af lymfocyter, 15 og effekten lader sig i så fald ikke længere iagttage. De peptider, der skal undersøges, er blevet sat til kulturmediet i forskellige koncentrationer. De er til stede under den samlede varighed af testen (op til 72 timer).
En mulig nedbrydning af peptiderne med serum eller lym-20 focyt-proteaser lades ude af betragtning ved disse undersøgelser.
Der er nu ifølge opfindelsen blevet tilvejebragt penta-peptider, der ved den specifikke PHA-test overgår det kendte peptid Arg-Lys-Asp-Val-Tyr med hensyn til virkningen. Disse hid-25 til ukendte peptider kan i overensstemmelse med de almene egenskaber af deres led karakteriseres som følger: basisk-basisk-aromatisk-aromatisk-vilkårlig.
De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede pentapeptider har den almene formel 30
Bi-b2-Ai-a2-x (I) i hvilken B1 er arginin eller lysin, hver gang i L- eller D-konfigura-35 tion, idet a-aminogruppen eventuelt kan være acyleret med benzyloxycarbonyl eller tert.butyloxycarbonyl, 3
DK 155948 B
B2 er arginin eller lysin, A^ er phenylalanin, tyrosin eller tryptophan, hver gang i L- eller D-konfiguration, A2 er phenylalanin, tyrosin eller tryptophan, og 5 X er glutamin, prolin, glycin eller arginin, idet carboxyl-gruppen kan være esterificeret med en aliphatisk alkohol med 1-6 C-atomer.
Substituenten (beskyttelsesgruppen) på a-aminogruppen i Bi og leddet X er ikke kritiske for virkningen af pentapep-10 tiderne fremstillet ifølge opfindelsen. Disse bestanddele kan imidlertid være af betydning for stabiliteten og biotilgængeligheden og dermed være af betydning i kvantitativ henseende .
Beskyttelsesgrupperne, dvs. benzyloxycarbonyl og 15 tert. butyloxycarbonyl, beskytter peptiderne mod en N-terminal nedbrydning med acylaser og aminopeptidaser.
Mellem X = Gly, Arg eller prolin er der kun kvantitative forskelle. Som særligt virksomme har vist sig pentapep-tider, i hvilke X betyder en basisk aminosyre såsom arginin.
20 Også en forestring af carboxylgruppen med en aliphatisk alkohol, f.eks. methanol, ethanol eller en højere alkohol, f.eks. n-hexanol, kan være fordelagtig for peptidets virkning og for dets biotilgængelighed.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig 25 ved det i kravets kendetegnende del angivne.
Syntesen af de her omhandlede forbindelser følger således de fra peptidkemien kendte metoder, såeldes som de f.eks. er udførligt beskrevet i Houben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie, bind 15. De i det følgende anførte ek-30 sempler belyser de i og for sig kendte syntesemetoder.
Forbindelserne fremstillet ifølge opfindelsen kan anvendes til behandling af immunmangler, virale og fungoide samt kronisk bakterielle infektioner, autoimmunsygdomme, samt til terapi af sygdomme, der forårsages af celler med 35 immunologisk relevante forandringer af cellemembran-kendetegnende (f.eks. tumorceller).
O
4
DK 155948 B
Anvendelsen af de omhandlede pentapeptider kan ske intravenøst, subcutant eller intranasalt.
Doseringen ved parenteral indgivelse ligger ved 0,1 til 50 pg, og ved intranasal indgivelse ved 1 til 500 pg pr.
5 enkeltdosis. Doseringen kan i svære tilfælde også forøges, eftersom toksiske egenskaber hidtil ikke er blevet iagtta get. Også en nedsættelse af dosis er mulig.
De her omhandlede forbindelser kan intranasalt eller patenteralt indgives i tilsvarende farmaceutisk form. Til en 10 intranasal anvendelsesform blandes de aktive forbindelser med de for disse gængse tilsætningsstoffer, såsom stabilisatorer eller indifferente fortyndingsmidler, og bringes ved hjælp af gængse metoder på egnede indgivelsesformer, f.eks. vandige, alkoholiske eller olieagtige suspensioner, eller vandige, al-15 koholiske eller olieagtige opløsninger. Som olieagtige bærestoffer eller opløsningsmidler kommer f.eks. vegetabilske eller animalske olier i betragtning, f.eks. solsikkeolie eller levertran.
Til den subcutane eller intravenøse indgivelse brin-20 ges de aktive forbindelser eller deres fysiologisk tålelige salte i opløsning, suspension eller emulsioner, om ønsket sammen med hertil gængse stoffer såsom opløsningsformidlere, emulgatorer eller yderligere hjælpestoffer. Som opløsningsmidler for de hidtil ukendte, aktive forbindelser og de til-25 svarende fysiologisk tålelige salte kommer f.eks. følgende på tale: vand, fysiologiske kogsaltopløsninger eller alkoholer, f.eks. ethanol, propandiol eller glycerol, og desuden også sukkeropløsninger, såsom glucose- eller mannitolopløs-ninger, eller også en blanding af de forskellige nævnte op- 30 løsningsmidler.
35
O
5
DK 155948 B
Forbindelsernes virkning godtgøres ved hjælp af de i det følgende angivne farmakologiske data.
Følgende forbindelser undersøges ved PHA-testen: (A) Lys-Arg-Tyr-Tyr-Gly-OEt.
5 (B) Lys-Lys-Tyr-Phe-Arg-OH
(D) D-Lys-Arg-D-Phe-Trp-Pro-OH
(E) Arg-Lys-Tyr-Phe-Gln-OH
Som kendt sammenligningsstof anvendes forbindelsen (V) Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OH 10 Resultater af PHA-stimulations-testen: 15 20 25 30 35 6
O
DK 155948 B
Afprøvet Koncen- PHA-kon- Indbygning af Stimula- X - SEM
3 stof tration centration H-thymidin tions- __pg/ml__pg/ml__(cpm)__indeks SI _
5 V 1 10 59073 til 61624 1,06 *S
8 46392 til 58607 1,26 1,16 - 0,06
4 26875 til 32247 1,20 J
A 1 10 14356 til 18388 1,28 \ 10 8 11517 til 14031 1,22 - 1,32 - 0,07
4 2727 til 3947 1,45 J
B 1 10 19848 til 25888 1,30 8 5300 til 5801 1,09 - 1,16 - 0,05 15 __ 4 5499 til 6073 1,10 J _
Afprøvet Koncen- PHA-kon- Indbygning af Stimula- x - SEM
3 stof tration centration H-thymidrn tions- 20 ug/ml__pg/ml__(cpm)__indeks SI_ D 1 10 5038 til 8713 1,73 Λ 8 5185 til 5924 1,14 < 1,33 - 0,2
4 4415 til 4999 1,13 J
25 E 1 10 12650 til 15231 1,20 *\ 8 12693 til 13148 1,04 J 1,12 - 0,05 __4 8105 til 9072 1,12 J _
De følgende eksempler belyser syntesen af de her om-30 handlede pentapeptider.
Der anvendes som- regel de ifølge IUPAC anvendte forkortelser: 35 o
DK 155948B
7
Boc tert.butyloxycarbonyl
Bu*" tert. butyl DCC dicyclohexylcarbodiimid
Et ethyl 5 HOBt 1-hydroxybenzotriazol HOObt 3-hydroxy-4-0X0-3,4-dihydro-l,2,3-benzotriazin
Mbh 4,4'-dimethoxybenzhydryl
Me methyl Z benzyloxycarbonyl 10
Eksempel 1 H-Lys-Arg-Tyr-Tyr-Gly-OEt-diacetat a) Z-Tyr(But)-Gly-OEt
Til en opløsning af 18,55 g (50 mmol) Z-Tyr (Bu*")-OH, 15 6,98 g (50 mmol) H-Gly-OEt·HCl og 6,75 g (50 mmol) HOBt i
75 ml dimethylformamid sættes der under omrøring ved 0°C
6,4 ml (50 mmol) N-ethylmorpholin og 11,33 g (50 mmol) DCC.
Der omrøres i to timer ved 0°C og henstilles natten over ved stuetemperatur. Fældningen skilles fra ved sugning, og filtra-20 tet inddampes i højvakuum. Remanensen fordeles mellem eddikeester og vand. Eddikeesterfasen udrystes med NaHCO^-opløsning, KHS0^/K2S0^-puffer og vand, tørres over Na2S0^ og inddampes.
Der skilles fra uopløst materiale ved filtrering, og der sættes petroleumsether til filtratet. Der afkøles i nogle timer 25 i et isbad, og fældningen skilles fra ved sugning. Udbytte 20,63 g (89%) med smp. 108°C og [a]^ = -13,4° (c=l, methanol).
b) H-Tyr(But)-Gly-OEt-HCl 19,78 g (43 mmol) Z-Tyr(But)-Gly-OEt opløses i 200 ml methanol. Hertil sættes der Pd/carbon-katalysator, og der le-30 des under omrøring og under tilsætning af ca. 2 N methanolisk HCl ved en pH-værdi på 4,5 (autotitrator) hydrogen gennem opløsningen, indtil der ikke længere optages methanolisk HCl. Derefter skilles katalysatoren fra ved sugning, og filtratet inddampes. Remanensen sammenrøres med ether og skilles fra 35 ved sugning. Udbytte 14,87 g (93,7%) med smp. 140-142°C og
O
8
DK 155948 B
[a]22 = +30,9° (c=l, methanol).
c) Z-Tyr (Bu11)-Tyr (Bufc)-Gly-OEt
Til en opløsning af 14,35 g (40 romol) Η-Tyr (Bu11)-Gly--OEt·HC1, 14,84 g (40 mmol) Z-Tyr(But)-OH og 5,4 g (40 mmol) s HOBt i 100 ml dimethylformamid sættes der ved 0°C 5,12 ml (40 mmol) N-ethylmorpholin og 8,65 g (42 mmol)»DCC. Der oparbejdes som i eksempel la). Remanensen sammenrives med petro-leumsether. Udbyttet er 26,3 g. Til rensning chromatograferes stoffet i en blanding af methylenchlorid og acetone i forhol-10 det 9:1 over 150 g kiselgel. Fraktionerne inddampes, og remanensen sammenrives med ether. Udbytte 19,74 g (73%) med smp. 113°C og Ια]22 = -28,7° (c=l, methanol).
d) Η-Tyr(Bufc)-Tyr(But)-Gly-OEt-HC1 18.9 g (28 mmol) Z-Tyr (Bu1") -Tyr (Bu1") -Gly-OEt opløses i 15 200 ml methanol og hydrogeneres katalytisk analogt med eksem pel lb). Remanensen sammenrives med en blanding af 250 ml ether og 250 ml petroleumsether, og der skilles fra ved sugning. Udbytte 15,65 g (96%) med [a]22 = +7,7° (c-1, methanol).
e) Z-Arg(Zj-Tyr(Bu^) -Tyr (Bufc)-Gly-OEt 20 Til en opløsning af 5,78 g (10 mmol) Η-Tyr(But)-Tyr(But)- -Gly-OEt-HCl og 1,35 g (10 mmol) HOBt i 30 ml dimethylformamid sættes der 1,28 ml (10 mmol) N-ethylmorpholin og 8,15 g (10,5 mmol) Z-Arg(Z2)-OTcp. Der omrøres i 4 timer ved stuetemperatur og henstilles natten over ved stuetemperatur, og den 25 fremkomne geléagtige masse sammenrøres med 250 ml vand. Fældningen skilles fra ved sugning, og der sammenrøres og fraskilles ved sugning i rækkefølge under anvendelse af KHS04/-K2S04~Pu^er' NaHCO3-opløsning og vand. Udbytte 10,47 g (95%) med smp. 163-165°C og [a].23 = -16,1° (c=l, dimethylformamid) .
30 f) H-Arg-Tyr (Bufc)-Tyr(B^)-Gly-OEt« 2 HC1 9.9 g (9 mmol) Z-Arg(Z2)-Tyr(Bufc)-Tyr(Bu')-Gly-OEt suspenderes i 300 ml methanol og hydrogeneres katalytisk analogt med eksempel lb). Remanensen sammenrives med ether. Udbytte 6,22 g (92%) med smp. 76-83°c og [a]23 = +16,6° (c=l, 35 methanol).
O
9
DK 155948 B
t t g) Z-lys(Boc)-Arg-Tyr(Bu )-Tyr(Bu )-Gly-OEt
Til en opløsning af 5,98 g (8 mmol) H-Arg-TyrfBu*^--Tyr (Bu^)-Gly--OEt*2 HCl og 1,08 g HOBt (8 mmol) i 40 ml dimethyl formamid sættes der 1,03 g N-ethylmorpholin og 4,76 g 5 (8,5 mmol) Z-Lys(Boc)-OTcp. Der omrøres i 6 timer ved stue temperatur og henstilles natten over ved stuetemperatur. Der oparbejdes analogt med eksempel la), idet der dog ikke udry-stes surt. Remanensen sammenrives med ether og chromatogra-feres til yderligere rensning i en blanding af methylenchlo-10 rid og methanol i forholdet 9:1 på 100 g kiselgel. De tilsvarende fraktioner inddampes, og remanensen sammenrives med ether. Udbytte 5,88 g (72%) med smp. 96-99°C og [a]^5 --22,0° (c=l, dimethylformamid).
h) H-Lys-Arg-Tyr-Tyr-Gly-OEt-diacetat 15 5,0 g (5 mmol) Z-Lys(Boc)-Arg-Tyr(Bu^)-Gly-OEt opløses i 50 ml 90%'s trifluoreddikesyre. Der henstilles i to timer ved stuetemperatur og inddampes. Stoffet sammenrives derpå med ether og skilles fra ved sugning. Dernæst sammenrives der med vand, og der fraskilles ved sugning.
20 Stoffet (= Z-Lys-Arg-Tyr-Tyr-Gly-OEt-trifluoracetat) opløses derefter i 60 ml 90%'s eddikesyre, og der hydrogeneres katalytisk efter tilsætning af Pd/carbon-katalysator under trykgennemledning af hydrogen. Efter afsluttet hydrogenering skilles der fra katalysatoren ved sugning, og filtra-25 tet inddampes. Remanensen chromatograferes i vand på en svagt basisk ionbytter (acetat-form). Eluatet frysetørres. Udbytte 3,365 g. Til rensning chromatograferes 800 mg deraf i 90%'s methanol på en tværbundet hydroxypropyleret dextrangel. Ud- 24 o bytte 506 mg med [a]D = -10,7 (c=l, methanol). Aminosyre- 30 analyse (hydrolyse i 6 N HCl, 24 timer ved 120°C): Gly 1,0,
Tyr 1,7, Lys 1,0, Arg 0,9.
35 o 10
DK 155948 B
Eksempel 2 Z-Lys-Lys-Tyr-Phe-Arg-OH-diacetat a) Z-Tyr(But)-Phe-OMe
Til en opløsning af 40,7 g (0,1 mmol) Z-Tyr(Bu^)-OH, 5 21,6 g H-Phe-OMe-hydrochlorid og 13,5 g (0,1 mmol) HOBt i 200 ml dimethylformamid sættes der ved 0°C 13 ml N-ethylmor-pholin og 22 g DCC. Der oparbejdes som i eksempel la). Remanensen sammenrives med petroleumsether, og der skilles fra ved sugning. Udbytte 50,3 g (94%) med smp. 103-104°C og 10 [a]^4 = “12,3° (c=l, methanol).
b) H-Tyr(But)-Phe-OMe-HC1 49,5 g Z-Tyr (Bu*") -Phe-OMe opløses i 800 ml methanol og hydrogeneres katalytisk analogt med eksempel lb). Remanensen lader sig ikke krystallisere. Udbytte 43 g olie.
15 c) Z-Lys(Boc)-Tyr(Bu^)-Phe-OMe
Til en opløsning af 21,5 g Η-Tyr(Bu^)-Phe-OMe*HC1 og 6,67 g HOBt i 150 ml dimethylformamid sættes der 6,43 ml N--ethylmorpholin og 27,67 g Z-Lys(Boc)-OTcp. Der omrøres i 3 timer ved stuetemperatur og inddampes. Remanensen oparbej-20 des analogt med eksempel la). Stoffet krystalliseres fra en blanding af eddikeester og petroleumsether. Udbytte 29,1 g (77%) med smp. 93-94°C og [a]j^ = -19,2° (c=l, methanol).
d) Η-Lys(Boc)-Tyr(Bu**)-Phe-OMe-HCl 28 g Z-Lys(Boc)-Tyr(But)-Phe-OMe opløses i 300 ml me- 25 thanol og hydrogeneres katalytisk analogt med eksempel lb).
Remanensen krystalliserer fra ether. Udbytte 22,4 g (91,8%) med smp. 145-147°C og [a]i?4 = +18,2° (c=l, methanol).
^ t e) Z-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Tyr(Bu )-Phe-OMe
Til en opløsning af 21,9 g Η-Lys (Boc) -Tyr (Bu1*) -Phe-30 -OMe·HCl og 4,46 g HOBt i 130 ml dimethylformamid sættes der 4,3 ml N-ethylmorpholin og 18,48 g Z-Lys(Boc)-OTcp. Der omrøres i tre timer ved stuetemperatur. Derpå udfældes pepti-det med 400 ml vand og 35 ml mættet NaHCO^-opløsning. Fældningen skilles fra ved sugning, og der krystalliseres fra en 35 blanding af eddikeester og petroleumsether. Udbytte 30,4 g o 11
DK 155948 B
(93%) med smp. 159-160°C,og [a]£8 = -17,5° (c=l, methanol).
f) Z-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Tyr(Bu^)-Phe-OH
20 g (ca. 20 mmol) Z-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Tyr(But)-Phe-"OMe opløses næsten fuldstændigt i 100 ml dioxan. Hertil 5 sættes der 20 ml 1 N NaOH, og der omrøres i 1 time ved stuetemperatur. Derpå skilles der fra det uopløselige stof ved filtrering, og til filtratet sættes der 500 ml is-vand og 20 ml 1 N HC1. Fældningen skilles fra ved sugning og tørring. Udbyttet er 18,5 g. Ifølge DC i en blanding af methylenchlo-10 rid og acetone i forholdet 8:2 er forsæbningen ikke forløbet fuldstændigt. Stoffet indeholder endnu større mængder udgangsprodukt. Ved fraktioneret krystallisation fra eddikeester isoleres der fra blandingen ca. 3 g rent forsæbningsprodukt.
Smp. 156-158°C og [ct]^8 = -13,1° (c=l, methanol).
15 g) Z-Lys(Boc)-Lys(Boc)-Tyr(Bu^)-Phe-Arg-OBu*'
Til en opløsning af 1,95 g (2 mmol) Z-Lys(Boc)-Lys-(Boc)-Tyr(But)-Phe-OH, 606 mg (2 mmol) H-Arg-OBu1·2 HCl og 326 mg (2 mmol) HOObt i 5 ml dimethylacetamid sættes der ved 0°C 0,26 ml N-ethylmorpholin og 440 mg DCC. Der omrøres der-20 på først i to timer ved 0°C, hvorpå der henstilles natten over ved stuetemperatur. På andendagen skilles fældningen fra ved sugning, og filtratet Inddampes. Udbytte 2,5 g. Til rensning omkrystalliseres stoffet to gange fra eddikeester. Udbytte 1,7 g med smp. 134-137°C og [a]p6 = -26,4° (c=l, me-25 thanol) .
h) Z-Lys-Lys-Tyr-Phe-Arg-OH-diacetat 1,6 g Z-Lys (Boc) -Lys (Boc) -Tyr (Bu'*') -Phe-Arg-OBu1" opløses i 15 ml 90%‘s trifluoreddikesyre. Der henstilles i 1 time ved stuetemperatur, og opløsningen inddampes. Remanensen 30 sammenrives med ether, og der fraskilles ved sugning. Derefter opløses remanensen i vand og chromatograferes over en svagt basisk ionbytter (acetat-form). Eluatet inddampes og chromatograferes i 90%'s methanol på en tværbundet hydroxy- 24 o propyleret dextrangel. Udbytte 920 mg med [α]β = -29,7 35 (c=l, methanol) .
DK 155948B
O
12
Eksempel 3 H-Lys-Lys-Tyr-Phe-Arg-OH-diacetat 500 mg Z-Lys-Lys-Tyr-Phe-Arg-diacetat opløses i 20 ml 90%'s eddikesyre og hydrogeneres katalytisk analogt med ek-5 sempel lh). Remanensen chromatograferes i 90%'s methanol på en tværbundet hydroxypropyleret dextrangel. Det peptid-holdi-ge eluat inddampes, og remanensen opløses i vand og frysetørres. Udbyttet 244 mg. Aminosyreanalyse (hydrolyse i 6 N HCl, 24 timer ved 120°C): Tyr 0,93, Phe 1,0, Lys 2,06, Arg 0,9.
10
Eksempel 4
Z-D-Lys-Arg-D-Phe-Trp-Pro-OH
a) Z-Trp-Pro-OBut
Til en opløsning af 16,9 g (50 mmol) Z-Trp-OH, 8,55 g 15 (50 mmol) H-Pro-0But og 6,75 g (50 mmol) HOBt i 75 ml dime thyl formamid sættes der ved 0°C 10,92 g (53 mmol) DCC. Der omrøres i to timer ved 0°C, og der henstilles natten over ved stuetemperatur. Fældningen skilles fra ved sugning, og filtratet inddampes. Remanensen oparbejdes analogt med eksempel la), 20 og remanensen sammenrives med ether. Udbytte 19,49 g (79%) med smp. 173°C og [a]p5 = -54,2° (c=l, dimethylformamid).
b) H-Trp-Pro-OBu^»HCl 16,64 g (40 mmol) Z-Trp-Pro-Obu1" hydrogeneres katalytisk i 200 ml methanol analogt med eksempel lb). Remanensen 25 sammenrives med ether. Udbytte 14,37 g med smp. 190-195°C og fa]^ = -22,4° (c=l, methanol).
c) Z-D-Phe-Trp-Pro-OBu*'
Til en opløsning af 3,46 g (10 mmol) H-Trp-Pro-OBu1'*HC1, 2,99 g (10 mmol) Z-D-Phe-OH og 1,35 g (10 mmol) HOBt i 25 ml 30 dimethylformamid sættes der ved 0°C 1,28 ml (10 mmol) N-ethyl-morpholin og 2,26 g (11 mmol) DCC. Der omrøres i to timer ved 0°C, og der henstilles natten over ved stuetemperatur. Fældningen skilles fra ved sugning, og filtratet inddampes. Remanensen oparbejdes analogt med eksempel la). Remanensen kry-35 stalliserer fra ether. Udbytte 3,91 g (61%) med smp. 186°C og [a]p^ = -53,6° (c=l, methanol).
O
13
DK 155948 B
Fra moderluden kan der ved tilsætning af petroleums-ether yderligere udfældes peptid. Udbytte 0,85 g med smp.
183°C.
d) H-D-Phe-Trp-Pro-OBu^HCl 5 3,7 g Z-D-Phe-Trp-Pro-OBu^ hydrogeneres katalytisk i 100 ml methanol analogt med eksempel lb). Remanensen sammen- o 23 rives med ether. Udbytte 2,67 g med smp. 155-165°C og [al^ = “75,8° (c=l, methanol).
e) Z-Arg(Z^) -D-Phe-Trp-Pro-OBu1' 10 Til en opløsning af 2,43 g (4,5 mmol) H-D-Phe-Trp-Pro- -OBu^’Hcl og 0,61 g (4,5 mmol) HOBt i 20 ml dimethylforaamid o sættes der ved O C 0,58 ml (4,5 mmol) N-ethylmorpholin og 3,5 g (4,6 mmol) Z-Arg(Z2)-OTcp. Der omrøres i 6 timer ved stuetemperatur, hvorpå der henstilles natten over. Reaktions-15 blandingen inddampes og oparbejdes analogt med eksempel la). Remanensen sammenrives med ether. Udbytte 4,01 g. Ved omkrystallisation fra 25 ml 94%'s alkohol fås der 3,58 g (75%) med smp. 142-145°C og [a]^ = -19,2° (c=l, methanol).
f) H-Årg-D-Phe-Trp-Pro-OBu1* 2 HC1 - 20 3 g Z-Arg (Z^)-D-Phe-Trp-Pro-OBu suspenderes i 100 ml methanol og hydrogeneres katalytisk analogt med eksempel lb). Remanensen sammenrives med ether. Udbyttet 2,01 g (97%) med smp. 190-200°C og [a]^ = -27,0° (c=l, methanol).
t 4- g) Z-D-Lys(Boc)-Arg-D-Phe-Trp-Pro-OBu 25 Til en opløsning af 1,47 g (2 mmol) H-Arg-D-Phe-Trp- -Pro-0But·2HC1 og 0,27 g (2 mmol) HOBt i 10 ml dimethylform-amid sættes der ved 0°C 0,26 ml (2 mmol) N-ethylmorpholin og 1,23 g (2,2 mmol) Z-D-Lys(Boc)-OTcp. Der omrøres i 4 timer ved stuetemperatur, der inddampes, og remanensen fordeles mellem 30 eddikeester og en mættet NaHCO^-opløsning. Eddikeesterfasen udrystes med vand, tørres over Na2S04 og inddampes. Remanensen sammenrives med ether og skilles fra ved sugning. Udbytte 1,65 g med smp. 125-132°C og [a]^ = -21,9° (c = 1, methanol) .
35
O
14
DK 155948 B
h) Z-D-Lys-Arg-D-Phe-Trp-Pro-OH
j· 1,55 g Z-D-Lys(Boc)-Arg-D-Phe-Trp-Pro-OBu opløses i 14,5 ml 90%’s trifluoreddikesyre og 1,5 ml ethylmercaptan.
Der henstilles ved stuetemperatur i 1 time og inddampes. Re-5 manensen opløses i vand og chromatograferes over en svagt basisk ionbytter (acetat-form). Eluatet frysetørres. Udbytte 883 mg. Til rensning chromatograferes peptidet i 90%'s methanol på en tværbundet hydroxypropyleret dextrangel. Udbyt- 2 2 te 570 mg med [a]D = -24,6° (c=l, methanol).
10
Eksempel 5 H-D-Lys-Arg-D-Phe-Trp-Pro-OH-triacetat 380 mg Z-D-Lys-Arg-D-Phe-Trp-Pro-OH-acetat opløses i 20 ml 90%'s eddikesyre og hydrogeneres katalytisk analogt 15 med eksempel lh). Remanensen chromatograferes i 90%'s methanol på en tværbundet hydroxypropyleret dextrangel. Udbytte 140 mg med [a]^ = -26,8° (c=l, methanol).
Aminosyreanalyse (hydrolyse i 6 N HC1, 24 timer ved 120°C): Pro 0,95, Phe 1,0, Lys 1,03, Arg 0,93. Trp sønderde-20 les ved hydrolysen, men kan imidlertid eftervises ved hjælp af et UV-spektrum.
Eksempel 6 H-Arg-Lys-Tyr-Phe-Gln-OH-acetat 25 a) Η-Tyr(Bu^)-Phe-Gln(Mbh)-0H-acetat 30 g Z-Tyr(Bu^)-Phe-Gln(Mbh)-OH opløses i 600 ml 90%'s eddikesyre og hydrogeneres katalytisk analogt med eksempel lh). Remanensen sammenrives med ether. Udbytte 24,2 g (88%) med smp. 192-193°C og [o]^ = +16,9° (c=l, 80%'s eddikesyre).
30 b) Z-Lys(Boc)-Tyr(Bu^)-Phe-Gln(Mbh)-OH
Til en opløsning af 5,6 g Η-Tyr (Bu*") -Phe-Gln (Mbh) -0H-acetat og 0,95 g HOBt i 20 ml dimethylformamid sættes der 3,92 g Z-Lys(Boc)-OTcp. Der omrøres i 4 timer ved stuetemperatur og henstilles natten over ved stuetemperatur. På anden-35 dagen sammenrøres reaktionsblandingen med 100 ml vand og 7 ml
O
15
DK 155948 B
mættet NaHCOg-opløsning. Fældningen skilles fra ved sugning og tørres. Udbytte 8,09 g (95%) med smp. 177-184°C og [a]p® = -10,6° (c=l, 80%'s eddikesyre).
c) Η-Lys(Boc)-Tyr(Bu^)-Phe-Gln(Mbh)-OH-acetat S 7,5 g Z-Lys(Boc)-Tyr(Bu^)-Phe-Gln(Mbh)-OH opløses i 350 ml 90%'s eddikesyre og hydrogeneres katalytisk analogt med med eksempel Ih). Remanensen sammenrives med ether og skilles fra ved sugning. Udbytte 4,81 g (74%) med smp. 136-138°C og [a]^ = +8,2° (c=l, 80%'s eddikesyre).
10 d) Z-Arg (Z,J -Lys (Boc) -Tyr (BuS -Phe-Gln (Mbh) -OH
Til en opløsning af 2,57 g (2,5 mmol) Η-Lys(Boc)-Tyr-(But)-Phe-Gln(Mbh)-OH-acetat og 0,34 g HOBt i 10 ml dimethyl-formamid sættes der en opløsning af 1,9 g Z-Arg(Z^)-OTcp i 5 ml dimethylformamid. Der omrøres i 5 timer ved stuetempera-15 tur og henstilles natten over. Derpå sammenrøres reaktionsblandingen med 50 ml vand og 3,5 ml mættet NaHCO^-opløsning. Fældningen skilles fra ved sugning, vaskes grundigt og tørres. Udbytte 3,75 g (98%) med smp. 132-140°C og [a]^ - -0,19° (c=l, eddikesyre).
20 e) Z-Arg(Z^)-Lys-Tyr-Phe-Gln-OH
3 g (2 mmol) Z-Arg -Lys (Boc) -Tyr (Bu^) -Phe-Gln (Mbh) --OH opløses i 20 ml 90%'s trifluoreddikesyre. Der henstilles i 1 time ved stuetemperatur og inddampes, og remanensen sammenrives med ether. Udbytte 2,11 g (92%) med smp. 70-78°C 25 under sønderdeling.
f) H-Arq-Lys-Tyr-Phe-Gln-OH-diacetat 2 g Z-Arg-Lys-Tyr-Phe-Gln-OH opløses i 90%'s eddi-syre og hydrogeneres katalytisk analogt med eksempel lh). Remanensen chromatograferes i 90%'s methanol på en tværbundet 30 hydroxypropyleret dextrangel. Udbytte 473 mg med [a]^1* -7,4° (c=l, vand). Aminosyreanalyse (hydrolyse i 6 N HC1, 24 timer ved 120°C): Glu 1,0, Tyr 0,91, Phe 0,99, Lys 1,05, Arg 0,94.
35
Claims (1)
- 5 B-L-B2-AJL-A2-X (I) i hvilken Bi er arginin eller ly s in, hver gang i L- eller D-konfigura-tion, idet α-aminogruppen eventuelt kan være acyleret med 10 benzyloxycarbonyl eller tert.butyloxycarbonyl, B2 er arginin eller lysin, Ai er phenylalanin, tyrosin eller tryptophan, hver gang i L- eller D-konfiguration, A2 er phenylalanin, tyrosin eller tryptophan, og 15 X er glutamin, prolin, glycin eller arginin, idet carboxyl-gruppen kan være esterificeret med en aliphatisk alkohol med 1-6 C-atomer, kendetegnet ved, at man opbygger pentapeptidkæden ved inden for peptidkemien sædvanligt anvendte peptiddannende kondensationsreaktioner og om nødven-20 digt fjerner eventuelle beskyttelsesgrupper fra den dannede forbindelse.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE3146598 | 1981-11-25 | ||
DE19813146598 DE3146598A1 (de) | 1981-11-25 | 1981-11-25 | "neue peptide und verfahren zu ihrer herstellung" |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DK522582A DK522582A (da) | 1983-05-26 |
DK155948B true DK155948B (da) | 1989-06-05 |
Family
ID=6147104
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DK522582A DK155948B (da) | 1981-11-25 | 1982-11-24 | Analogifremgangsmaade til fremstilling af pentapeptider til paavirkning af modningen af t-lymfocyter. |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4487764A (da) |
EP (1) | EP0080194B1 (da) |
JP (1) | JPS5892642A (da) |
KR (1) | KR840002346A (da) |
AT (1) | ATE17584T1 (da) |
AU (1) | AU9084682A (da) |
DE (2) | DE3146598A1 (da) |
DK (1) | DK155948B (da) |
ES (1) | ES8308305A1 (da) |
FI (1) | FI824030L (da) |
GR (1) | GR77026B (da) |
IL (1) | IL67334A0 (da) |
PT (1) | PT75898A (da) |
ZA (1) | ZA828651B (da) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB2130590B (en) * | 1982-11-10 | 1986-01-08 | Erba Farmitalia | Peptides |
EP0215805A1 (en) * | 1985-01-18 | 1987-04-01 | MERCK PATENT GmbH | Immunoregulatory peptides |
NZ229004A (en) * | 1988-05-19 | 1993-09-27 | Immunobiology Res Inst Inc | Tetrapeptides having t cell helper acitivity |
DD292382B5 (de) * | 1990-03-06 | 1994-03-24 | Berlin Chemie Ag | Verfahren zur herstellung eines parenteral applizierbaren lagerbestaendigen immunstimulierenden praeparats |
US6354783B1 (en) | 1999-06-03 | 2002-03-12 | Nextrx Corporation | Medication-handling system for use in loading medication carts |
CN1403474A (zh) * | 2001-09-05 | 2003-03-19 | 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 | 一种短肽及以其为活性成份的药物 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4001199A (en) * | 1974-03-26 | 1977-01-04 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Novel polypeptides useful for treating diabetes and hypercholesteremia |
US4073890A (en) * | 1974-03-26 | 1978-02-14 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Novel polypeptides |
GB1596535A (en) * | 1977-11-23 | 1981-08-26 | Wellcome Found | Biologically-active peptides |
DE2938420A1 (de) * | 1979-09-22 | 1981-04-09 | Hoechst Ag, 6000 Frankfurt | Neue peptide und verfahren zu ihrer herstellung |
US4309340A (en) * | 1980-03-31 | 1982-01-05 | American Home Products Corporation | Polypeptide compositions |
-
1981
- 1981-11-25 DE DE19813146598 patent/DE3146598A1/de not_active Withdrawn
-
1982
- 1982-11-20 AT AT82110742T patent/ATE17584T1/de not_active IP Right Cessation
- 1982-11-20 DE DE8282110742T patent/DE3268716D1/de not_active Expired
- 1982-11-20 EP EP82110742A patent/EP0080194B1/de not_active Expired
- 1982-11-22 JP JP57203804A patent/JPS5892642A/ja active Pending
- 1982-11-23 ES ES517596A patent/ES8308305A1/es not_active Expired
- 1982-11-23 GR GR69878A patent/GR77026B/el unknown
- 1982-11-23 KR KR1019820005287A patent/KR840002346A/ko unknown
- 1982-11-23 US US06/443,900 patent/US4487764A/en not_active Expired - Fee Related
- 1982-11-23 FI FI824030A patent/FI824030L/fi not_active Application Discontinuation
- 1982-11-24 ZA ZA828651A patent/ZA828651B/xx unknown
- 1982-11-24 AU AU90846/82A patent/AU9084682A/en not_active Abandoned
- 1982-11-24 PT PT75898A patent/PT75898A/pt unknown
- 1982-11-24 DK DK522582A patent/DK155948B/da not_active Application Discontinuation
- 1982-11-24 IL IL67334A patent/IL67334A0/xx unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU9084682A (en) | 1983-06-02 |
PT75898A (de) | 1982-12-01 |
DE3146598A1 (de) | 1983-07-07 |
US4487764A (en) | 1984-12-11 |
KR840002346A (ko) | 1984-06-25 |
GR77026B (da) | 1984-09-04 |
ES517596A0 (es) | 1983-08-16 |
FI824030A0 (fi) | 1982-11-23 |
ATE17584T1 (de) | 1986-02-15 |
EP0080194A1 (de) | 1983-06-01 |
ZA828651B (en) | 1983-09-28 |
ES8308305A1 (es) | 1983-08-16 |
DE3268716D1 (en) | 1986-03-06 |
DK522582A (da) | 1983-05-26 |
EP0080194B1 (de) | 1986-01-22 |
IL67334A0 (en) | 1983-03-31 |
JPS5892642A (ja) | 1983-06-02 |
FI824030L (fi) | 1983-05-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4024248A (en) | Peptides having LH-RH/FSH-RH activity | |
US4505853A (en) | Enzyme-resistant immunomodulatory peptides | |
US4910296A (en) | Medicaments containing alpha 1 thymosin fragments and having an immunostimulant action, and fragments of alpha 1 thymosin | |
US4612365A (en) | Medicaments containing alpha 1-thymosin and having an immuno regulatory action and alpha 1-thymosin fragments | |
Lloyd et al. | Sequence of small cardioactive peptide A: a second member of a class of neuropeptides in Aplysia | |
FI60553B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av ovulationsframkallande nonapeptidamidderivat | |
US4003884A (en) | Peptides having LH-RH/FSH-RH activity | |
PT90596B (pt) | Processo para a preparacao de tetrapeptidos e de pentapeptidos com actividade auxiliar de celulas t | |
DK147851B (da) | Nonapeptidamidderivater til brug ved diagnosticering af hypofysefunktionog gonadotropindeficiens samt regulering af formeringen hos normale dyr | |
EP0025897B1 (de) | Neue Peptide und Verfahren zu ihrer Herstellung | |
US3345354A (en) | Intermediate in the synthesis of alpha1-24 acth | |
US4002740A (en) | Tridecapeptide compositions and methods | |
EP0016611B1 (en) | Tripeptides, process for their preparation, therapeutic compositions containing them and methods for their use | |
EP0574530A1 (en) | Endothelin antagonists | |
US4301065A (en) | Novel polypeptides having thymic activity or an antagonistic activity and processes for their synthesis | |
US4696913A (en) | Novel peptides which are active on the central nervous system and have an action on the cholinergic system | |
EP0016612B1 (en) | Peptides having ubiquitin-like activity, process for their preparation, therapeutic compositions containing them and their use | |
RU2362579C1 (ru) | Фармацевтическая композиция на основе пептида, обладающего противоопухолевым действием | |
DK155948B (da) | Analogifremgangsmaade til fremstilling af pentapeptider til paavirkning af modningen af t-lymfocyter. | |
US3749703A (en) | Asn15-bovine thyrocalcitonin | |
US3770715A (en) | Acth active peptides having d serine as first aminoacid from n terminus and l ornithine as11 aminoacid | |
US4179433A (en) | Angiotensin II antagonist peptides containing an alpha-aminooxyacid in the position-1 | |
NZ189101A (en) | Polypeptides having the ability to induce differentiation of both th-1+ t-lymphocytes and bu-1+ b-lymphocytes;pharmaceutical compositions | |
Mills | Observations on the composition and activity of partially arylated insulin | |
CA2011874C (en) | Sdk peptides, a preparation process of the same and therapeutic compositions containing them |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PTS | Application withdrawn |