DK149186B - Anologifremgangsmaade til fremstilling af n1-(l-(-)--2-hydroxy-4-aminobutyryl)-4-0-(2',6'-diamino-2',6'-dides-oxy-alfa,d-glucopyranosyl)-6-0-(3''-methylamino-3'',4'',6''-tridesoxy-alfa,d-xylohexopyranosyl)-2-desoxytreptamin eller additionssalte deraf - Google Patents

Description

149186

Opfindelsen angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af det hidtil ukendte N1-(L-(-)-2-hydroxy-4-aminobutyry1)-4-0-{2',6'-diamino-2',6'-didesoxy-cC· D-glucopyranosyl)-6-0-{3"-methylamino-3",4",6"-tridesoxy-o6,D-xylohexopyranosyl)-2-desoXystreptamin, med den i kravets indledning angivne almene formel I eller terapeutisk acceptable additionssalte deraf med mineralsyrer eller organiske syrer.

Saltene kan fås ved fuldstændig eller delvis neutralisation af de fem amingrupper i forbindelsen med formlen I.

Sådanne salte kan f.eks. være et hydrochlorid, et hydrobromid, et nitrat, et sulfat, et phosphat, et acetat, et formiat, et benzoat, et maleat, et fumarat, et succinat, et tartrat, et citrat, et oxalat, et benzylat, et glyoxylat, et asparaginat, et alkan- eller arylsulfo-nat.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved* det i kravets kendetegnende del anførte.

I en foretrukken udførelsesform for fremgangsmåden omsætter man forbindelsen med formlen II' med forbindelsen med formlen II i et opløsningsmiddel, som er en blanding af dimethylformamid og vand. Man kan ligeledes benytte dimethylacetamid, dioxan, tetrahydrofuran, pyri-din, vand, acetone, ethanol, methanol og 1,2-dimethoxyethan alene eller i blanding.

Man omsætter forbindelsen med formlen III' med produktet med formlen III, idet man fortrinsvis anvender et opløsningsmiddel, som er en blanding af vand og 1,2-di-methoxyethan, men man kan ligeledes benytte alene eller i blanding dioxan, dimethylacetamid, dimethylformamid, tetrahydrofuran, propylenglycoldimethylether eller vand.

Overgangen fra forbindelsen med formlen IV til forbindelsen med formlen I sker i nærværelse af hydrogen og en metalkatalysator. Denne katalysator er fortrinsvis palladium, men man kan ligeledes benytte platin, Raney-nikkel, rhodium, nikkel eller ruthenium. Man benytter 2 14918$ fortrinsvis et opløsningsmiddel, som er en blanding af vand og et med vand blandbart opløsningsmiddel såsom dioxan. Man kan ligeledes benytte tetrahydrofuran, 1,2-dimethoxyethan eller propylenglycoldimethylether.

Omdannelsen til salt af forbindelsen med formlen I kan ske ved gængse metoder. Den kan opnås ved indvirkning på denne forbindelse af syrer såsom f.eks. saltsyre, hydrogenbromidsyre, salpetersyre, svovlsyre, phosphor-syre, eddikesyre, benzoesyre, maleinsyre, fumarsyre, ravsyre, vinsyre, citronsyre, oxalsyre, benzylsyre, gly-oxylsyre, asparaginsyre, alkan- og arylsulfonsyrer.

Denne omdannelse til salt udføres fortrinsvis i et opløsningsmiddel eller en blanding af opløsningsmidler såsom vand, ethylether, methanol eller acetone.

Forbindelsen med formlen II, der benyttes som udgangsprodukt ved fremgangsmåden, og sulfatet af produktet med formlen II er beskrevet i belgisk patentskrift 814.724.

Forbindelsen med formlen I og dens additionssalte med syrer har en interessant antibiotisk virkning, dels på grampositive bakterier såsom staphylococcer og navnlig penicillinresistente staphylococcer og streptococcer, dels på gramnegative bakterier, navnlig coliforme bakterier.

Disse egenskaber gør forbindelsen med formlen I samt dens terapeutisk acceptable salte egnede til at anvendes som medikamenter, navnlig ved behandlingen af staphylococci såsom staphylococcussepticemi, ondartet an-sigtsstaphylococci, kutan staphylococci, pyodermitis, septiske og suppurante sår, anthrax, phlegmone, ery sipel, primitiv eller efter influenza optrædende akut staphylococci, bronchopneumoni, pulmonære suppurationer og colibacillose. Produktet med formlen I samt dets terapeutisk acceptable salte kan ligeledes anvendes i behandlingen af Klebsiella-, Pseudomonas- og Enterobacterin-fektioner.

3 149186

Forbindelsen med formlen I og dens terapeutisk acceptable salte kan anvendes til fremstilling af farmaceutiske produkter, der som aktiv bestanddel indeholder den nævnte forbindelse eller i det mindste et salt deraf.

Disse farmaceutiske produkter kan indgives ad oral, rektal eller parenteral vej eller lokalt i topisk applikation på huden og slimhinderne.

Den kendte forbindelse (USA patentskrift nr.

3.781.268), som kommer forbindelserne fremstillet ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse nærmest, er forbindelsen: N1-(L-(-)-2-hydroxy-4-aminobutyryl)-4-0-(61-amino-6' desoxy-ct,D-glucopyranosyl)-6-0-(3"-amino-3"-desoxy-c^,D-xylohexopyranosyl)-2-desoxystreptamin med formlen

ch2nh2 nh2 M

AJA

HO I CH2

OH

CHpOH L·

A« P

/nh? Y 6 NH2

NIAJ

H0 OH

U9I86 4

Denne forbindelse går i handelen i form af sulfatet under den internationale betegnelse "Amikacin", I den biologiske dokumentation nedenfor er der anført gunstige sammenligningsforsøg mellem den ved fremgangsmåden Ifølge opfindelsen fremstillede forbindelse med formlen I i form af base eller sulfat og "Amikacin".

Hedenstående eksempler illustrerer fremgangsmåden ifølge opfindelsen.

Eksempel 1.

18^-(1-(-)-2-hydroxy·»4-aminobutyryl )-4-0-(21,6 t-diamino~2 * -6 ♦ — -didesoxy-g.D-gluoopyranosyl )-6 -0-(311 -meth.vlamino-31 * «4 *1« 6»1 ,-tridesoxy-tE,D-xylohexopyranosyl)-2-desoxystreptamin,

Trin A: 4-0-(2’-amino-å '-benzyloxycarbonylamino^^g^didés-oxy-g.D-gl.Pcopyranosyl )-6-0-(3 * t-meth.vlamlno-3t 1,4 ♦ *.

6»'-tridesoxy-a.D-xylohexopyrano.syl^-deaoxystrept- amin> . " . . _

Til 5,5 g 4-0-(2,,6*-diamino-2,,6,-didesoxy-a,D-gluco- •pyranosyl) — -6-0-(3' '-methylamino-3'f,4'* »6' '-tridesoxy-a,D-xylohexopyranosyl)-2-desoxystreptamin opløst i 58 ml destilleret vand sætter man ved 20-25°C 60 ml dimethylformamid.

Man afkøler til -5°C og tilsætter langsomt 3,01 g E'-(ben-zyloxycarbonyloxy)-succinimid opløst i 60 ml dimethylformamid. Man omrører 20 timer ved -5°C og derefter 24 timer ved 20-25°C, Man inddamper til tørhed og optager i vand mættet med n-butanol. Man vasker med butanol mættet med vand. Man inddamper faserne til tørhed, vandig fase: 6,21 g, butanol-fase: 2,82 g,

Ted chromatografi på et lag silicagel med et eluerings-middel bestående af chloroform, methanol og ammoniak i forholdet 4:4:1 konstaterer man, at den vandige fase er rig på det forventede produkt. Man renser denne fase på ionbytter-harpiks af carboxyltype på NH^-form. Man fikserer produktet i vandig opløsning og eluerer derefter med 0,1 ΪΓ fortyndet ammoniakvand og får 1,72 g af det forventede produkt.

5 149186

Trin B: (L-(-) -2-hy droxy-4-benzyloxycarbonylaminobutyry1- »4-0-(2'-amino-å '-benzyloxyoarbonylamino^ 1«6 *-81-desoxy-g,I>-glucopyranosyl )-6-0-(31 ♦-metbylamino--3'*«4* t«6t >-tridesoxy-g.D-xylohexopyranosyl)-2-desoxystreptamin.

Til en opløsning af 1,8 g af produktet fra forrige trin i 14 ml destilleret vand og 14 ml 1,2-dimethoxyethan afkølet til 5°C sætter man i løbet af 1 time 1,1 g N-hydroxy-succinimidester af l-(-)-Y-benzyloxycarbonylamino-g-hydroxy-smørsyre opløst i 28 ml dimethoxyethan.

Man holder reaktionsblandingen under omrøring i 15 timer mellem 5 og 10°C og inddamper til tørhed under vakuum.

Sen tørre ekstrakt chromatograferes på silicagel med et elue-ringsmiddel bestående af chloroform, methanol og ammoniakvand i forholdet 75:25:5 »

Man karakteriserer det forventede produkt, som har en RF-værdi på 0,45 på silicagel og under eluering med en blanding bestående af methanol, chloroform og ammoniakvand i forholdet 2:2:1.

Trin C: N1-(.X-(-)-2-hydroxy-4-amipobutyiyl)-4-0-(2t.6*-dia-mino-2 *-,6 ,-didesoxy-g.S-gljn;copyranosyl)-6-0-(5 * *--methylamino-5 *1,4 *'.61^tridesoxy-g.S-xylohexopyrano-syl)-2-desoxystreptamin.

Til opløsningen af 473 mg af produktet fra forrige trin i 6 ml destilleret vand, 6 ml dioxan og 0,15 ml eddikesyre sætter man ved 20-25°C 90 mg katalysator bestående af palladium (105¾) på kul. Man foretager en hydrogengennem-bobling. Efter 5 timers reaktion tilsætter man 30 mg katalysator. Efter 1 times yderligere gennembobling standser man omrøringen og lader henstå natten over under hydrogenatmosfære. Man frafiltrerer katalysatoren og inddamper til tørhed under vakuum.

Man chromatograferer resten på silicagel med en blanding af methanol, chloroform og ammoniak i forholdet 2:2:1 og får 115 mg af det forventede produkt.

Man renser produktet ved passage over en ionbytter-harpiks af carboxyltype på KH^+-form (eluering med 0,5 H ammoniakvand). Udbyttet ved rensningen er 82,2%.

6 149186 N.M.R.spektrum (i 1^0)= • ' CH2 Ji«2 Jrø2 /-0.(8) D H/*—\BH-0^°.

(ohΤ' A (oh ; l JNC/1-0-‘uL/ho-c® c KK2 · (CH) 2

• * I

A O NH2 %)

/ °\H

(^X—

M-(B

OH ' A*-CH^ - 1,2 ppm , dublet, J = 6 Hz B. -CH5 - 2,54 ppm, C. -H 4,28 ppm, multiplet B. Anomert H, 5,25 ppm, dublet, J = 4 Hz

Farmakologiske undersøgelser af forbindelsen med formlen i« Antibakteriel virkning in vitro,

Ben antibakterielle virkning måles in vitro ved fortyndingsmetoden i væskeformet milieu.'

Man fremstiller en række glas, hvori man har fordelt samme kvantum næringsmilieu. Man fordeler voksende mængder af det undersøgte antibiotikum og derefter podes hvert glas med en bakteriestamme. Efter en inkubationstid på 18, 24 eller 48 timer i varmeskab ved 37°0 vurderes inhiberingen af bakterievækster ved gennemlysning, hvilket gør det muligt at bestemme de minimale inhiberende koncentrationer (MIC) af forbindelsen, her udtrykt i μg/ml, som base.

7 149186 d O xi Η® Λ it» in in cm S H » » ·> »

V) H CO Ο Ο Ο HOO

rt a tj- o

M d H

-P H tt> cd a H

(ntiø Λ 1Λ CM in CM

H (j h ·> ·> » ·>

p Η O -d- Ο Ο OOHOO O

CQ ri <H C\l "«d- Ο O

Η H

Λ A

X} ω £3 c\j vo ran

00 Ο O CM Η (Μ H Η Ο O CM Ο O

0 ^ CM

CQ H A

Η H ' ω •ti d d a •HH ri CM VO «d- "d- VO VO Η £1 £3 « **»·*> a»»« d d H-OOCuOOOOOOOOHOin Ο O CM 'd- -Ί· '"d-

fe'H A A A

ri in in ω cocMOinmoinHOinooooo

S'd’H CM 'd· Η H CM O

A h

0 /S

to ri in in in • Η H ·> ·> ·> d| ω 'd-HinmOintnHOtnooooo øl Ό d CM ’d" Η Η Η Ή" a d ω al ΉΗ

3 ri 3 ri CM CM

•P d d ·> » _ to oocOHCMCMOtntnHOtnHOintno

ft V) H «* CM

a a a o to Η H 00

S VO CM

H OH in

•d Η H w *d" in O

•a P h m cm “? Ο Ο Ο Ο H CM CTi 'd- o jo t> η cm vo in tn o d d -p to o cm m g P-. Ίί ·Η H tD ·Η Η ·Η ·Η Η Η Φ tn id p H das da®HH oj cm a ·Η be op«Hap<doeJuo«rt d ^ o «η ri d ri aojDrid^rod d KHcdPHCdaØ O >50

•h Ocddrocddcdcd-H-Ha'-'O-H

a «η tHriViHHdiori

Cd CQ-P CQ-P ΟΟΦΗ^ή ddS pda ra s o o d o ft >a oid oapocoppp ft xt +* p oHdoSdoocdid dm o p a o p a ο ο·η·η id ·η cd cd

w oriooriraooririH'^-'dH

S O O OOOOH OH

m H'^.'tii.H'^'^ooHHaraas d {^ino^ino-p-Pdd-Hdod o ri Hri Hftftaaraa>pg ft ft ft aaririri-Pda cd + +cd + +ddooaoaH ^ +> -p -p-prørar-jkiacd

<J CQ CQ CQCQftftMftftCQ

8 149186 β

(D

CQ

Η Φ β ο ο Η Ν ? ,Ω Η COI Λ βΗ 'd'l Ο ^ «Η.β _ Q) ti •UrH Ο 2 2 8 a! 'Sh CVJ »d- 'd- β CM /\

•P O

8 P

H-ci Λ O O O O O O

pi QJ oo H 'd- 'd- 'd- CM 'd- CQ S Η Λ Λ /]

!Ct A O O O

Q) CO CM 'i- "d- S ^ •o ra Η A Λ „ _ • Η Η ο Ο Ο

β φ CM Η CM

φ ϋ β w §β ω

,pj J

8 AS ί ο ο ο ο ο ο ο ο ο -ρ ββ ο Ο Ο Η Ο Ο Η Η Ο CQ Ο Ο C0 Η Η Η ΗΗ Η Φ fe ‘π Η . Λ Λ Α Λ Λ Λ -ρ β ω -Ρ ο3 •Η Β ti φ ω ,β - ^ ^ j Cl ^ β com ο ο cm ο ο cm m ο ο to in ιη ο ο •riffl'd· CM Ο 'd- 'Φ HH 'd*

OCQ H

I i i I

S ffl ϋ ^ m «Η cj ·*

β β ffl -d- CM Ο Ο Η O O CM ΚΛ LTv tA H CM CM O O P ·ΗΗ W HCM'd-'d- H

OPS -Ρ β β _ ο ο il σ f I p_ ·*

ffl CO CM to OHOOHCMtO to H CMHOlO

H H CM CM 'd-

H

O _ \ C" lf\ fl y H to o to · £> til'd· W CM β

I Op'd- 'd- \ Η β O t> H

β CM Η Ο \ Η Η O

•η 8 8 H 8 H critntoHCMrtC'd'Xiin to o rara rarnta cm to cj hh raO raO σ cm co

H o o O CD P H -PCMOCMOCMCOtOMD

a β β β co <5 ρβββθζ-ο

§ ·Η ·ί< ·Η 8 ρ ρ ρ 8 ·Η ·Η CM Ο CM

-Ρ ω) ώ y>p ο οο β y ω cm β β β β Ρ Ο "d- 'd- Η ·Η m -ρ β β ·Η ·Η (1) ββ β-Ρ ΗΗ·Η03ββΗ·ΗΗ y rara æ 5¾ ρ ρ o ο β ffl ω oho 8 8 8 ΜΡΡΟΟ88 8 8 ΟΟΟ ο8 ο ω ·η ο ρ. rarara 8888Horara8 8 8 8 8 8 ·Η ·Η ·Η ·Η β β 8 8 Η 8 Η y βββΗΟΟ,β.βί>φββ,β·Η,β S ΟοΟΗββΟΟ Ό Ο Ο ΟΟΟ ra asS<u©o}H*r,raHSS'r,’r1*rl β ΟΟ ο Η Ό Ό β β β β Ο β β'ββ Ο >ΰ Ό ra-HHfflfflffl-H ·β ffl ffl ffl ρ ββ βρ>·ι>ρϋ·ρ>. β β ,β ϋ ϋ ffl 0) φ ffl Ο Ο Ο Ο Ο ffl ffl ΟΟΟ rara ω η β β ra ra β · ra ra ro ra ra ρ ρ ρ ρ wppppqpp ρ ρ ρρρ 9 149186 s φ m Η © τ! .3 Λ _ ο Ο r μ οο η ο ^ φ Λ „ «Η Η ο <d θ Η- Η

Pi CVJ -Ρ Ο «Η ,£} Ο Ο Ο Ο Ο Ο Η ’ΰ Η- Η ·Ή- ->0- ^ ^ ££ S /Λ Λ Λ Λ Ί \ τ3 η s co ω * Μ Η Η Η μ Φ 1X1 Ρί ® c\j HH w ρ a Ρι Pi rj| Ό Ο Λ| 00

Hi . cj m IA 'H· Ό * ·» ·*

2 CO O C\J CM H H H CM O CM Η O CMHOOHOlA

« CM to ω ffl si in in in in -H·

5 Μ- O CM Η Η Η H CM tn CM Ο Ο HOOOHOH

1 § CM CM H

HH

ip S rt in m in in cm H- H- MM „ ♦.·>·>·> ··>

r°c2 CO O CM Η Η Ο Η H CM CM Ο Ο HOOOHOO

fø'H H H H

O CM -H- tn

H tn Η H CM

O tn CM CM CM

CM Ή- m ο σν o in jo o p

vo c- tn vo cm o R R R

o- c~ CM CSV CM (¾ O 10 10 ο Η® ω ω cm oo φη © o © ο φ ·η © © φ cm ον tj cd cd H· id cd cd © fl H cd cd cd H CM ·Η iH *H to o vo ·Η R Ή Ο ·Η O C5 Φ Cd *H ·Η ·Η

CM csv ritn a VO fl 00 R ο OV sr Pi ο Pi ο ο Μ ο P fi S

o tn o tn oh· ο ο o cd ο © Ο ο o •η ·η a cm s cm s cm ·Η ·η t) a a a o pi cd a a a

PtH-HP 3 3 hhh3 3 3 ηφ'η333 φ vo ο ©ο φ ο φ ο οοοφ φ φ o (i 222 MHO s o SO go ooos ΰ 3 ,,5¾¾¾

+s ρ,ο ρ,ϋ Ro R R R Pi Pi 3 R R R

p cd cd cd cd cd © © o Φ-H-Hcd cd cd HH-Htd cd cd -p -p o cd cd cd

S O ,3 Η Η Η il Λ il Η Η Η ο Ο Ο Η Η H

SOH Η Η OOOH Η H CdcdOHHH

CO Φ ·Η Φ φ Φ ΗΗΗΦ φ Φ ,£) R Ο Φ Φ © 3 tJ ft ·η ·Η ·Η Pi Pi Pi ·Η ·Η ·Η ρ ο ·Ρ ·Η ·Η ·Η φ·ηφπ) m ω φφφφ ra co ίι Ρ R ta ta ra

Ρ > ,3 ,α Ρ R ^JRiiR R i° © © © P R P

O O O © φ φ O O O © Φ Φ -ρ-ρΡιφφφ

Pi Pi to H H H toiatOH H H fi P H H H

R R pq S « S H S pq W W W pq pq ra « W M

10 149186 ti 0 0

H

0) 'ti •S -ti n oH CO OH ^

^ ti <h 0) A

ctfH

1 S h W P o cd p

<H A pH *Td P 0 00 CQ g H

Ό Λ 0 S' 5 ø W H ' riH -1 • ® . -Tjcj

ti © W

Η H P S U U -ti O O _

ϋ P

g .00 pH rH ri p) ΙΠ (f\ ” <· 0 0 .

Η Η P

nj ri H1 pH H pH pi in tn s 0 oo •Η H

U U ’ti ^ ^ o o * * ££θΟΗΗΟΟίΟ<Μ

rH

P

co

• CO

00 pH

O \ ø ø tn in cd cd tn •HO Hf- f3 \

floo flri p P

OCV1 O 00 VO

S ' B Ή -H in tn

p p 3fj H -H- m H

0 p © p o o _ ti g o o ffl P

ft ft

cd cd o o få få -Η -H o O

Ή H P P

H H O O Cd Cd

0 0 *pl ·ρ| ·ρί tH

•H -ri JH -P -P

ø ø ø ø cd cd P P i ii P ^

0 0 O O P ÉH

Η pH 0 0 0 0 « M o Pi m 03

XI

149186

Disse resultater viser« at forbindelsen med formlen I har en god aktivitet over for grampositive og gramnegative kim og navnlig udtalt over for sidstnævnte.

Denne virkning er serlig interessant på visse amino-glycosidresistente stammer*

Forbindelsen med formlen II samt dens sulfat har allerede en god antibiotisk virkning·

Forbindelsen med formlen I har en meget stærkt forøget virkning i forhold til diese to forbindelser, navnlig over for visse normalt aminoglycosidresistente kim.

Væksten i virkningen er navnlig betydelig over for visse stammer af Pseudomonas, Proteus og Klebsiella.

Eksempel 2.

Sulfatet af N^-(Ii-(-)-2-h.ydro:r.y-4-aminobut.vryl).-4-0-(2>.6t- -άί8ΐη1ηο-2«.6 t-didesoxy-tt.D-gluoop.vrano8.7l)-6-0-(5t ^meth.vl-amino-31 '.4* *.61 t‘-tridesox.v»g.D-xylohexopyranos.vl)~2-desory-streptamin.

1,8 g (l-(-)-2-hydroxy-4-aminobutyry1)-4-0-(2»,6 *- -diamino-2’,6'-didesoxy-ajD-glucopyranpsyl) -6-0-(3’1 -methyl-amino-3'f,4f’,61'-tridesoxy~a,D-xylohexopyranosyl)-2-desoxy-streptamin opløses i 120 ml destilleret vand. Ved hjælp af en burette symer man til en pH-værdi på 2 ved tilsætning af 13,5 ml 1 M svovlsyre. Man inddamper opløsningen til 20 ml og filtrerer på sintret glas. Man inddamper atter til 10 ml og tilsætter derpå 200 ml methanol. Man opbevarer den opnåede hvide suspension i 20 timer i køleskab og filtrerer på sintret glas. Man skyller de opnåede hvide krystaller med methanol og tørrer derefter under formindsket tryk. Der fås 1,87 g produkt. Moderludené inddampes til tørhed, og man får et andet udbytte på 0,35 g produkt, = +76,5° +2,5° (c = 0,6i» vand).

E.M.R.spektrum ^0): CH3-CH: 1,21 p.pi'm., dublet, J * 6 Es 0Η3-ιΦ 2,75 P.p.m.

H’ : 5,15 p.p.m.

H1^ s 6,03 p.p.m.

U9186 12 ff*-(1-(-)-2-hydroxy-4-aminobuty ry 1) -4 -0- (2 *, 61 -d i -amino<~2 * ,6 '-didesoxy-a,I)-glucopyrano8yl)-6-0-(3' '-methyl-amino-3 '' ,4 ’ *»6* »-tridesoxy-a,I>-xylohexopyranosyl)-2-desoxy-streptamin, der benyttes som udgangsprodukt i eksempel 2, fremstilles som angivet i eksempel 1 ovenfor.

Farmakologisk undersøgelse af sulfatet ifølge eksempel 2, Antibakteriel virkning in vitro.

Den antibakterielle virkning måles in vitro ved fortyndingsmetoden i væskeformet milieu.

Man fremstiller en række glas, hvori man fordeler samme mængde næringsmilieu. Man fordeler voksende mængder af det undersøgte antibiotikum, og derefter podes hvert glas med en bakteriestamme » Efter inkubation i 18, 24 eller 48 timer i varmeskab ved 37°C vurderes inhiberingen af bakterievæksten ved gennemlysning, hvilket tillader at bestemme de minimale inhiberende koncentrationer (MIC) af produktet, her udtrykt i μg/ml base.

149186 13 MIG i u,g/ml 18 h 24 h 48 h (Staphyloc.occus Milieu 0,4 0,6 1 / aureus + humant albumin } ATCC 5638 5# 0,6 1 5 ίPenicillinfølsom + serum fra føl 10# 0,6 1,5 2 (Staphylococcus Milieu 0,6 0,6 1 > aureus + humant albumin ) 5# 0,6 2 10 ( UC 1128 . ___ ) + serum fra (Penicillin resistent føl 10# 12 5

Staphylococcus aureus Exp. nr. 54146 0,2 0,4 0,6

Staphylococcus aureus Co 15# E cephalexin 5 10 40

Streptococcus poyogenes A 561 0,4 0,4 0,6

Streptococcus faecalis 5432 5 5 10

Streptococcus faecalis 99 F 74 2 5 15

Bacillus subtilis ATCC 6633 0,05 0,05 0,1

Escherichia coli, tetracyclinfølsom ATCC 9637 2 5 20 .

Escherichia coli, tetracyclinresistent : ATCC 11303 0,6 1 1

Escherichia coli Exp. T OggBg 112

Escherichia coli, gentamicinresistent E 55 123 D 0,4 0,4 2 149186 14 MIC 1 ug/ml 18 h 24 h 48 h

Klebsiella pneumoniae Exp. 52 145 0,2 0,2 0,4

Klebsiella pneumoniae 2536 gentamicinresistent 0,4 0,4 0,6

Proteus mit. (indol -) A 235 -2 5 5

Proteus vulgaris (indol +) A 232 2 5 10

Salmonella thyphl murium 420 2 5 20

Enterobacter cloacae 681 0,2 0,4 0,4

Providencia Du 48 10 20 40

Pseudomonas 3935 Exp. gentamicinfølsom 2 5 10

Serratia 2532 gentamicinresistent 225

Eksperimentel infektion med Escherichia coli.

Man undersøger virkningen af sulfatet på en eksperimentel infektion med Escherichia coli på mus. Man inficerer hold på 10 hanmus ved intraperitoneal indsprøjtning af 0,5 ml af en 24 timers kultur i næringsbouillon af stammen Escherichia coli galle fortyndet til 1/6 med destilleret vand.

Man indgiver ved subkutan injektion en bestemt mængde af produktet 1 time, 5 timer og 24 timer efter indsprøjtningen.

Man noterer dødeligheden i løbet af 8 dage,

Eesultaterne er som følger: 15 149186 bd

(O

'ό φ βω ο ο ο ο Φ Η Η Η Η > G >">>> φ Φ Ο 4 S' Ο Η Ό Η

U

Φ Φ

έ I

-cf

cM

i vol <r| o

fO

Λ H

H

tO

Φ in •p H

Φ 43 H

ό ω Φ CV1 •r) H O Φ to, •d

S 43 H

Ω in

C\JJ

o

tA

43 HH

fO

CM

to,

H

O

43 H

4

H bO bQ

o s bo g in u ε •h +> in tn

Μ β O H CM

o o ·» * *

Q M O O O

149186 16

Sammenligningsforsøg.

Idet man benytter metoden med væskefortynding, som er beskrevet på side 6, får man følgende gunstige resultater: MIC i hg/ml_

Forbindelse med formlen I Amikacin (sulfat) 18 h 24 h 48 h 18 h 24 h 48 h Escherichia coli Du 308 2 2 2 33 5 • " " Du 317 2 2 2 2 3 5 " " " 324 0,6 2 3 2 3 5 " " " 336 5 10 10 10 20 40 " " ” 337 1 1 2 2 2 3 " " " 352 2 2 3 3 3 5 " " " 350 2 2 2 2 3' 5

Klebsiella pneumoniae Du 221 0,4 0,4 0,4 1 1 1 " " " 222 0,4 0,4 1 1 1 1 ” " " 223 0,4 0,6 2 3 3 5 " " " 226 0,4 0,4 1 2 2 2 " " " 229 0,4 0,4 0,4 0,6 1 1 " " " 230 0,4 0,4 0,4 1 1 1 " " " 214 0,4 0,6 0,6 0,6 1 1

Forbindelse med formlen I Amikacin (base)_ _ 18 h 24 h 48 h 18 h 24 h 48 h

Proteus mirabilis D 234 3 5 10 10 10 10 " " D 235 3 5 10 5 10 10 " " D 266 2 3 5 5 10 10 " " D 267 3 5 5 5 10 10 " " D 268 3 5 5 5 5 10

Streptococcus aureus 586476 0,4 0,6 1 2 5 5

Escherichia coli 54127 1 χ χ 2 2 5

Klebsiella pneumoniae Coc 260 0,4 0,4 0,6 0,6 0,6 1

Proteus morganii Du 33 112 125

Claims (1)

1. U9186 Patentkrav, Analogifremgangsmåde til fremstilling af -2-hydroxy-4-aminobutyryl)-4-0-(2 · ,6 ,-diamino**2 · ,6 '-cl jjdee-oxy-a,D-glucopyranosyl)-6-0-(3' ’-methylamino-3' ’,4'' ,6' '-tri-desoxy-a,D-xylohexopyranosyl)-2-desoxystreptamin med formlen I ch2 nh2 nh2 /~°\| · kNtt · -o_Ho-ch HHo CH2 OH, O I r o «% sh2 <»<H N ' OH' · (I) eller terapeutisk acceptable additionssalte deraf med mineralsyrer eller organiske syrer, kendetegnet ved, at man omsætter en forbindelse med formlen II CHp NHj, ‘ ΜΗλ h rr æ/—<,_jw· hk2 oh3 o J—o H (iKn A — OH 149186 med forbindelsen med formlen II* IN-0-C-0-CH2~^ ^ (TT · ) <y s w % til opnåelse af forbindelsen med formlen III ch2 hh-c-o-ch2-^ y o nh2 hoN I • liH2 . ch5 0 ho* (ν^Ά } W- (III) OH som man behandler med forbindelsen med formlen III1 <0 Q f " V ^n-o-c-ch-(ch2)2 ΝΚ-ίί-0-0Η2-^ y (III‘) OH o til opnåelse af forbindelsen med formlen I?