DEF0014746MA - - Google Patents
Info
- Publication number
- DEF0014746MA DEF0014746MA DEF0014746MA DE F0014746M A DEF0014746M A DE F0014746MA DE F0014746M A DEF0014746M A DE F0014746MA
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- actinomycin
- volume
- values
- parts
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 99
- 229930183665 actinomycin Natural products 0.000 claims description 77
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 76
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 claims description 60
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 59
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 54
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 50
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 46
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 46
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 44
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 claims description 40
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 27
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 26
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 26
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 26
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 claims description 25
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 claims description 25
- 239000008399 tap water Substances 0.000 claims description 25
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 claims description 25
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 24
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 24
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 claims description 24
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 24
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 23
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 23
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 23
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 22
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 22
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 claims description 22
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 20
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 20
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 19
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 19
- NJESAXZANHETJV-UHFFFAOYSA-N 4-methylsalicylic acid Chemical compound CC1=CC=C(C(O)=O)C(O)=C1 NJESAXZANHETJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 14
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical compound C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Chemical compound CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 claims description 7
- 229940072049 amyl acetate Drugs 0.000 claims description 7
- PGMYKACGEOXYJE-UHFFFAOYSA-N anhydrous amyl acetate Natural products CCCCCOC(C)=O PGMYKACGEOXYJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-M heptanoate Chemical compound CCCCCCC([O-])=O MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 7
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims description 7
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 claims description 3
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 claims description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 3
- WHSXTWFYRGOBGO-UHFFFAOYSA-N 3-methylsalicylic acid Chemical compound CC1=CC=CC(C(O)=O)=C1O WHSXTWFYRGOBGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 24
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 21
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 1-butoxybutane Chemical compound CCCCOCCCC DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 13
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 12
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 12
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- QCXJFISCRQIYID-IAEPZHFASA-N 2-amino-1-n-[(3s,6s,7r,10s,16s)-3-[(2s)-butan-2-yl]-7,11,14-trimethyl-2,5,9,12,15-pentaoxo-10-propan-2-yl-8-oxa-1,4,11,14-tetrazabicyclo[14.3.0]nonadecan-6-yl]-4,6-dimethyl-3-oxo-9-n-[(3s,6s,7r,10s,16s)-7,11,14-trimethyl-2,5,9,12,15-pentaoxo-3,10-di(propa Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N=C2C(C(=O)N[C@@H]3C(=O)N[C@H](C(N4CCC[C@H]4C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]3C)=O)[C@@H](C)CC)=C(N)C(=O)C(C)=C2O2)C2=C(C)C=C1 QCXJFISCRQIYID-IAEPZHFASA-N 0.000 description 5
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 5
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 5
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 5
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 5
- XLGPRYUFOGVPMM-WUXANXDBSA-N 2-amino-1-n,9-n-bis[(3r,6s,7r,10s,16s)-3-[(2s)-butan-2-yl]-7,11,14-trimethyl-2,5,9,12,15-pentaoxo-10-propan-2-yl-8-oxa-1,4,11,14-tetrazabicyclo[14.3.0]nonadecan-6-yl]-4,6-dimethyl-3-oxophenoxazine-1,9-dicarboxamide Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)[C@@H](C)CC)=C3N=C21 XLGPRYUFOGVPMM-WUXANXDBSA-N 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 108700002839 cactinomycin Proteins 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N Butyl acetate Natural products CCCCOC(C)=O DKPFZGUDAPQIHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Chemical compound CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 3
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 3
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 3
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- QCXJFISCRQIYID-GKYLFGMSSA-N 2-amino-1-n-[(3r,6s,7r,10s,16s)-3-[(2s)-butan-2-yl]-7,11,14-trimethyl-2,5,9,12,15-pentaoxo-10-propan-2-yl-8-oxa-1,4,11,14-tetrazabicyclo[14.3.0]nonadecan-6-yl]-4,6-dimethyl-3-oxo-9-n-[(3r,6s,7r,10s,16s)-7,11,14-trimethyl-2,5,9,12,15-pentaoxo-3,10-di(propa Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N=C2C(C(=O)N[C@@H]3C(=O)N[C@@H](C(N4CCC[C@H]4C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]3C)=O)[C@@H](C)CC)=C(N)C(=O)C(C)=C2O2)C2=C(C)C=C1 QCXJFISCRQIYID-GKYLFGMSSA-N 0.000 description 2
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 2-aminopentanoic acid Chemical compound CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LESXFEZIFXFIQR-UHFFFAOYSA-N DL-Leucylglycine Chemical compound CC(C)CC(N)C(=O)NCC(O)=O LESXFEZIFXFIQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- JDTWZSUNGHMMJM-UHFFFAOYSA-N N-acetylisoleucine Chemical compound CCC(C)C(C(O)=O)NC(C)=O JDTWZSUNGHMMJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N actinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N 0.000 description 2
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 2
- RTEXIPZMMDUXMR-UHFFFAOYSA-N benzene;ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O.C1=CC=CC=C1 RTEXIPZMMDUXMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MDHYEMXUFSJLGV-UHFFFAOYSA-N beta-phenethyl acetate Natural products CC(=O)OCCC1=CC=CC=C1 MDHYEMXUFSJLGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 2
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- HFBHOAHFRNLZGN-ZCFIWIBFSA-N (2r)-2-formamido-4-methylpentanoic acid Chemical group CC(C)C[C@H](C(O)=O)NC=O HFBHOAHFRNLZGN-ZCFIWIBFSA-N 0.000 description 1
- WWBHDWHAIVWDMT-UHFFFAOYSA-N 1,4-dimethylpiperazine-2,3-dione Chemical group CN1CCN(C)C(=O)C1=O WWBHDWHAIVWDMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PKDGRAULLDDTRN-UHFFFAOYSA-N 1,4-dimethylpiperazine-2,5-dione Chemical compound CN1CC(=O)N(C)CC1=O PKDGRAULLDDTRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXHQLGLGLZKHTC-CUNXSJBXSA-N 4-[(3s,3ar)-3-cyclopentyl-7-(4-hydroxypiperidine-1-carbonyl)-3,3a,4,5-tetrahydropyrazolo[3,4-f]quinolin-2-yl]-2-chlorobenzonitrile Chemical compound C1CC(O)CCN1C(=O)C1=CC=C(C=2[C@@H]([C@H](C3CCCC3)N(N=2)C=2C=C(Cl)C(C#N)=CC=2)CC2)C2=N1 UXHQLGLGLZKHTC-CUNXSJBXSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N Fe2+ Chemical compound [Fe+2] CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- GDFAOVXKHJXLEI-VKHMYHEASA-N N-methyl-L-alanine Chemical compound C[NH2+][C@@H](C)C([O-])=O GDFAOVXKHJXLEI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QLBOYGFQEQCIFM-UHFFFAOYSA-J S(=O)(=O)([O-])[O-].[Mg+2].P(=O)(O)(O)[O-].[K+].[Cl-].[Na+] Chemical compound S(=O)(=O)([O-])[O-].[Mg+2].P(=O)(O)(O)[O-].[K+].[Cl-].[Na+] QLBOYGFQEQCIFM-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 241000186988 Streptomyces antibioticus Species 0.000 description 1
- 241000186986 Streptomyces anulatus Species 0.000 description 1
- 241001655322 Streptomycetales Species 0.000 description 1
- RWDBMHZWXLUGIB-UHFFFAOYSA-N [C].[Mg] Chemical compound [C].[Mg] RWDBMHZWXLUGIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700017564 actinomycin C2 Proteins 0.000 description 1
- HAKNMMGTSLRIQO-UHFFFAOYSA-N actinomycin C2 Natural products CCC(C)C1NC(=O)C(NC(=O)C2=C(N)C(=O)C(=C3Oc4c(C)ccc(C(=O)NC5C(C)OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C6CCCN6C(=O)C(NC5=O)C(C)C)c4N=C23)C)C(C)OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C7CC(O)CN7C1=O HAKNMMGTSLRIQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700037506 actinomycin C3 Proteins 0.000 description 1
- WUQJNMMOIJHSQV-UHFFFAOYSA-N actinomycin C3 Natural products CCC(C)C1NC(=O)C(NC(=O)c2ccc(C)c3OC4=C(C)C(=O)C(=C(C(=O)NC5C(C)OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C6CC(O)CN6C(=O)C(NC5=O)C(C)CC)C4=Nc23)N)C(C)OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C7CCCN7C1=O WUQJNMMOIJHSQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700004665 actinomycin X Proteins 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- -1 amino acids Keto acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 244000144987 brood Species 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229940085868 calcium carbonate 250 mg Drugs 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N lysine Chemical compound NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- GSWAOPJLTADLTN-UHFFFAOYSA-N oxidanimine Chemical compound [O-][NH3+] GSWAOPJLTADLTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004810 partition chromatography Methods 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229940072033 potash Drugs 0.000 description 1
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Substances [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000015320 potassium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000001044 red dye Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
Description
BUNDESREPUBLIK DEUTSCHLANDFEDERAL REPUBLIC OF GERMANY
Tag der Anmeldung: 18. Mai 1954 Bekanntgemacht am 22. Dezember 1955Registration date: May 18, 1954. Advertised on December 22, 1955
DEUTSCHES PATENTAMTGERMAN PATENT OFFICE
Als Actinomycine sind rote, kristallisierte antibiotisch wirksame Stoffwechselprodukte von gewissen Streptomyceten bekanntgeworden. Nach den Untersuchungen von Wales ma η liefert Strep tomyces antibioticus ein Actinomycin A, Todd und Mitarbeiter haben ein Actinomycin aus Kulturlösungen einer anderen Streptomyces-Art isoliert, das sie Actinomycin B genannt haben, Brockmann und Mitarbeiter haben als Stoffwechselprodukt von Streptomyces chrysomallus ein weiteres Actinomycin aufgefunden und zunächst Actinochrysin, später Actinomycin C genannt (deutsche Patentschrift 912 010). Von Brockmann sind noch weitere Actinomycine aus anderen Streptomyces-Stämmen isoliert worden, die als Actinomycin I und Actinomycin X bezeichnet worden sind und die möglicherweise dem Actinomycin A bzw. B nahestehen.Actinomycins are red, crystallized, antibiotic metabolic products of certain substances Streptomycetes became known. According to the studies of Wales ma η gives Strep tomyces antibioticus an actinomycin A, Todd and coworkers have an actinomycin from culture solutions another species of Streptomyces that they named actinomycin B, Brockmann and coworkers have another metabolite of Streptomyces chrysomallus Actinomycin found and initially called actinochrysin, later actinomycin C. (German patent specification 912 010). From Brockmann further actinomycins have been isolated from other Streptomyces strains which are known as Actinomycin I and Actinomycin X have been designated and possibly the actinomycin A and B are closely related.
Obwohl sich diese Actinomycine gegenüber den klassischen Trennungsmethoden wie einheitliche ao Stoffe verhalten, zeigt sic'h bei der Verteilungsanalyse, daß sie alle aus verschiedenen Komponenten bestehen. Man kennt heute eine ganze Reihe Einzelkomponenten aus den verschiedenen Actinomycinen, die durch Zahlenindizes voneinander unterschieden werden. So bestellt z. B. das Actinomycin C im wesentlichen aus den Komponenten C1, C2 und C3, und auch Actinomycin A und B enthalten neben der Hauptkomponente noch einige Nebenkomportenten.Although these actinomycins behave like uniform ao substances compared to the classical separation methods, the distribution analysis shows that they all consist of different components. Today we know a whole series of individual components from the various actinomycins, which are differentiated from one another by numerical indices. So z. B. Actinomycin C consists essentially of components C 1 , C 2 and C 3 , and actinomycin A and B also contain a few secondary components in addition to the main component.
Trotz der Vielzahl der theoretisch denkbaren Kombinationsmöglic'hkeiten hat sich bisher dochDespite the large number of theoretically conceivable possible combinations, it has so far been
509 600/153509 600/153
F 14746 IVa/30 hF 14746 IVa / 30 h
gezeigt, dal.i die Zusammensetzung der verschiedenen Aetinomycine bezüglich ihrer Komponenten weitgehend charakteristisch ist. Die Actinomycine A und Ii liesteilen ebenso wie die Aciiiiomycine 1 und X im wesentlichen aus einer 1 lauptkomponente und daneben aus bestimmten und charakteristischen Nehenkomponenten, während das Actinoniycin C zwei I lauptkomponentcn, ("., und C.,, eine Nebenkoiuponenlc, C1, und außerdem noch kleinste in Mengen weiterer Aetinomycine enthält.has shown that the composition of the various aetinomycins in terms of their components is largely characteristic. The actinomycins A and II, like the aciiomycins 1 and X, essentially consist of a main component and besides that of certain and characteristic secondary components, while the actinomycin C has two main components, ("., And C. ,, a secondary component, C 1 , and also contains very small amounts of other aetinomycins.
I >ie Zusammensetzung der verschiedenen Actinoniycine ist im wesentlichen abhängig von derThe composition of the various actinoniycins is essentially dependent on the
] Art, die zur Herstellung benutzt] Kind used to manufacture
wird. I )ie vielen Stämme, die bisher untersucht WOT(Ii1D sind, lassen sich klar in drei (!nippen einteilen, in solche, die Λ bzw. I produzieren, solche, die Il bzw. X bilden und schließlich in C-Iüklner die B bzw. X bilden, und schließlich in C-Bi!dncr Der Kiniluß der Nährlösung ist demgegenüber für die Zusammensetzung der Aetinomycine nur sun untergeordneter Bedeutung gewesen. Nach den bisherigen Versuchen ist es nicht gelungen, durch Wechsel im Nährmedium wesentliche Verschiebungen Λνν Nonnalkoniponenten zu erzielen, geschweige denn die Bildung der neuen Komponenten zu bewirken, die nicht im (iemisch normalerweise bereits enthalten waren. Nach N. Pfennig, Arch, f. Mikrobiol. iS, S. 3J7, 1953, darf man nach allem wohl vermuten, dal.i die Zahl der in der Natur vorkommenden verschiedenen Actinoniycine mit ihren Komponenten keine beliebige ist, sondern daß nur einige bestimmte Bautypen vorkommen.will. I) he many strains that have been investigated so far WOT (Ii 1 D can be clearly divided into three (! Sips, those that produce Λ or I, those that produce II or X, and finally into C-Iüklner which form B or X, and finally in C-Bi! dncr The kini flow of the nutrient solution, on the other hand, was of secondary importance for the composition of the aetinomycins. Previous attempts have not succeeded in producing significant shifts in normal components by changing the nutrient medium achieve, let alone bring about the formation of the new components that were not normally already contained in the (iemisch. According to N. Pfennig, Arch, f. Mikrobiol. iS, p. i the number of naturally occurring different actinoniycins with their components is not arbitrary, but that only a few specific types occur.
Ks wurde nun gefunden, dal.i man die Art der komponenten bei der Herstellung von Actinoinyeinen durch Züchtung von Vilzstämnien aus der (iruppe der Slieptonivceten, welche in der Lage sind, Actinomycine zu bilden, dadurch lenken kann, daß man den zur Züchtung verwendeten Nährmcdien einzelne Aminosäuren mit mehr als J C-Atomen oder solche Verbindungen zusetzt, die während der kulturbedingungen in solche Aminosäuren übergehen, l'^.s ist nicht unwahrscheinlich, daß diese Aminosäuren in das Actinomycinmolekül, das nach unserer heutigen Kenntnis aus einemIt has now been found that the type of components in the production of actinomycins can be controlled by cultivating Vilzstämnien from the group of Slieptonivcetes, which are able to form actinomycins, by using the nutrient materials used for cultivation adding individual amino acids with more than J C-atoms or those compounds which are converted during the culture conditions in such amino acids, l '^. S is not unlikely that these amino acids in the Actinomycinmolekül, the one according to our present knowledge of
Ί5 Chroinophor und einer pcptidartigen Seitenkette besteht, eingebaut werden und daß sich die Zusammensetzung der I'eptidkette ändert, wenn einzelne Aminosäuren in der Nährlösung in deutlichem Oberschuß vorhanden sind.Ί5 chroinophore and a pcptide-like side chain exists, are incorporated and that the composition of the peptide chain changes when individual Amino acids are present in the nutrient solution in clear excess.
Man hat bereits Aetinomycin-Bildner auf aminosäurehaltigen Nährlösungen gezüchtet. So hat man z. B. proteinhaltige Stolle wie Sojamehl und Hefekochsaft der Nährlösung zugesetzt, und man hat auch bereits (ilykokoll als Stickstoffquelle angewendet. Bei all diesen Zusätzen, die mit dem Ziele einer Verbesserung des Wachstums des Streptomyces-Stammes zugegeben wurden, ist jedoch keine Verschiebung in der Zusammensetzung der einzelnen komponenten eingetreten.Aetinomycin-formers have already been found on amino acid-containing ones Grown nutrient solutions. So one has z. B. protein-containing stollen such as soy flour and yeast cooking juice added to the nutrient solution, and one has already used (ilykocolla as a nitrogen source. With all these additives, the aim is to improve the growth of the Streptomyces strain were added, however, there is no shift in the composition of each components occurred.
6" Ks ist daher überraschend, daß es gelingt, z. B. durch Zusatz von Valin zur Nährlösung eines Actinomvein-C-Bildners die Bildung der Hauptkoniponenle C1 weitgehend zugunsten der Bildung von C1 zu unterdrücken und damit aus einer NcI)Cnkompoueiite eine Ilauptkomponente zu machen. Noch überraschender ist es, daß man sogar neue, bisher noch nicht bekannte Actinoniycine biosynthetisch gewinnen kann, wie dies z. B. bei Zusatz von Isoleucin zur Nährlösung eines Actinomycin-L-Bildners beobachtet wurde.It is therefore surprising that it is possible, for example by adding valine to the nutrient solution of an actinoma vein C-former, to suppress the formation of the main conipones C 1 to a large extent in favor of the formation of C 1 and thus a component of an NcI) It is even more surprising that new, hitherto unknown actinoniycins can be obtained biosynthetically, as has been observed, for example, when isoleucine is added to the nutrient solution of an actinomycin L-former.
Neben dem sonst als Ilauptkomponente entstehenden Actinomycin 1 bildet sich dabei eine ganze Reihe von neuen und typischen Actinomycinen. die zusammen mengenmäßig gegenüber Actinomycin I den weitaus überwiegenden Teil ausmachen.In addition to actinomycin 1, which is otherwise the main component, one forms whole range of new and typical actinomycins. which together in terms of quantity Actinomycin I make up the vast majority.
Das neue Verfahren gibt also die Möglichkeit, nach Belieben besonders gewünschte Komponenten als Hauptprodukte herzustellen oder auch neue, bisher unbekannte Actinomycine herzustellen, die den bisher bekannten überlegen sein können.The new process therefore gives the option of adding particularly desired components at will to manufacture as main products or to manufacture new, previously unknown actinomycins that can be superior to those known so far.
Als Aminosäuren, welche eiiindungsgcmäß den Nährlösungen zugesetzt werden, kommen nicht nur diejenigen in Betracht, die normalerweise in den Peptidseitenketten der Actinomycine vorkommen, z. B. Valin, Isoleucin, Threonin, Prolin, Sarkosin und N-Methylvaliii, sondern auch diejenigen, die bis heute noch nicht als Bausteine der Actinomycine aufgefunden worden sind, z. B. Leucin, Serin, Arginin, N-Methylalanin sowie alle übrigen Aminosäuren, die als L-Formcn normalerweise Bausteine von l'eptidketten sind. Im allgemeinen genügt es bereits, eine einzige Aminosäure zuzugeben, doch findet man auch bei Zugabe von zwei oder mehreren Aminosäuren besondere Wirkungen in der Zusammensetzung der gebildeten Actinomycinc. Wesentlich ist es, daß durch diese Zusätze ein einseitiges Übergewicht einzelner Aminosäuren in der Nährlösung erzeugt wird und daß dem Streptomvces auf diese Weise nicht wie bei Zugabe von eiweißartigen Stoffen alle Eiwcißbausteine in gleicher Weise zur beliebigen Auswahl zur Verfügung stehen.As amino acids which Nutrient solutions are added, not only those that are normally in the Peptide side chains of actinomycins occur, e.g. B. valine, isoleucine, threonine, proline, sarcosine and N-Methylvaliii, but also those who have not yet been found as building blocks of actinomycins, e.g. B. Leucine, Serine, Arginine, N-methylalanine and all other amino acids, which, as L-forms, are normally building blocks of peptide chains. In general it is enough already to add a single amino acid, but it is also found when adding two or more Amino acids special effects in the composition of the formed actinomycinc. It is essential that these additives result in a one-sided preponderance of individual amino acids in the Nutrient solution is generated and that the Streptomvces in this way not as with the addition of protein-like substances, all protein building blocks are available for any selection in the same way stand.
Statt der Aminosäuren selbst können auch solche Verbindungen der Nährlösung zugesetzt werden, die unter den Kulturbedingungen in Aminosäuren übergehen, z. B. die den Aminosäuren entsprechenden Ketosäuren und Oxysäuren oder Abkömmlinge der Aminosäuren, wie z. B. ihre Ester, Amide oder Salze, oder die den Aminosäuren entsprechen- no den Alkohole.Instead of the amino acids themselves, such compounds can also be added to the nutrient solution, which convert into amino acids under the culture conditions, e.g. B. those corresponding to the amino acids Keto acids and oxy acids or derivatives of amino acids, such as. B. their esters, amides or salts, or the alcohols corresponding to the amino acids.
Auch mit Oligopcptiden kann man die Bildung der Actinomycine in eine bestimmte Richtung j lenken. Möglicherweise wird das Oligopeptid als solches in die Peptidkette eingebaut, ohne daß es vorher aufgespalten wird.The formation of actinomycins can also be guided in a certain direction with oligopeptides j direct. It is possible that the oligopeptide as such is incorporated into the peptide chain without it is split up beforehand.
Das Maß der Lenkung ist abhängig von der Konzentration der zugesetzten Stoffe. Bei Zusätzen in niedriger Konzentration ist meist noch kein Einfluß zu erkennen, dagegen ist er schon deutlich bei Konzentrationen von 0,3% und sehr erheblich, wenn man die Konzentration der Aminosäuren in der Nährlösung auf 0,5% und mehr erhöht. Es ist daher allgemein zweckmäßig, die einzelnen Aminosäuren in einer Konzentration von 0,3 bis 1% zuzusetzen, doch können je nach Zugänglichkeit undThe degree of steering depends on the Concentration of the added substances. In the case of additives in a low concentration, there is usually none Influence can be recognized, on the other hand it is already clear at concentrations of 0.3% and very considerable, if you increase the concentration of amino acids in the nutrient solution to 0.5% and more. It is therefore it is generally advisable to add the individual amino acids in a concentration of 0.3 to 1%, however, depending on accessibility and
600/153600/153
F 14746 IVa/30 hF 14746 IVa / 30 h
Preis der betreffenden Aminosäure auch andere Konzentrationen vorzuziehen sein.Price of the amino acid in question should also be preferred to other concentrations.
Im allgemeinen entstehen auch bei Zusatz einzelner Aminosäuren Gemische aus verschiedenen Actinomycinen. Die qualitative und quantitative Zusammensetzung 'dieser Gemische ist abhängig von der Art der zugesetzten Aminosäure, von deren Konzentration und von der Art des verwendeten ActinomyceteiTStammes. Die Gemische können in anIn general, mixtures of different amino acids are formed even when individual amino acids are added Actinomycins. The qualitative and quantitative composition of these mixtures is dependent on the type of amino acid added, on its concentration and on the type of used ActinomyceteiT strain. The mixtures can be in
ίο sich bekannter Weise z. B. durch Extraktion mit Butyl- oder Äthylacetat aus der Nährlösung gewonnen und in ihrer Zusammensetzung z. B. durch Ringverteilungschromatograp'hie auf Papier erkannt werden. Sie lassen sich mit Hilfe der Verteilungschromatographie z. B. nach dem Verfahren des Patents 930 579 trennen und in reine Einzelkomponenten aufspalten.ίο known way z. B. by extraction with Butyl or ethyl acetate obtained from the nutrient solution and z. B. by Ring distribution chromatography can be recognized on paper. You can be with the help of partition chromatography z. B. separate according to the method of patent 930 579 and into pure individual components split.
Die so gewonnenen Actinomycine sollen als Heilmittel Verwendung finden.The actinomycins obtained in this way are said to be used as medicinal products.
B e i s ρ i e 1 ιB e i s ρ i e 1 ι
Eine Nährlösung der Zusammensetzung:A nutrient solution of the composition:
1,01 Leitungswasser1.01 tap water
20,0 g Glycerin20.0 grams of glycerin
5,0 g Kaliumnitrat5.0 g potassium nitrate
5,8 g D, L-Valin5.8 g D, L-valine
i,o g sek. Kaliumphosp'hati, o g sec. Kaliumphosp'hat
2,0 g Natriumchlorid2.0 g sodium chloride
1,0 g Calciumcarbonat1.0 g calcium carbonate
100,0 mg Magnesiumcarbonat100.0 mg magnesium carbonate
10,0 mg Eisen(II)-sulfat10.0 mg iron (II) sulfate
(Ph = 6,8 bis 7,2)(Ph = 6.8 to 7.2)
wird mit dem Streptomyces-Stamm BoP 476 beimpft und 5 Tage bei 300 in Erlenmeyerkolben geschüttelt. Die Kulturlösung mit einem End-pfj von 8,4 und einem Gehalt von 24 mg Actinomycin pro Liter Kulturlösung wird dreimal mit wenig Essigester oder Butylacetat ausgeschüttelt und der hellrote Extrakt unter vermindertem Druck eingeengt. Der mit wenig warmem Ligroin gewaschene rote Rückstand ergibt im Ringverteilungschromatogramm mit dem Zweiphasensystem 1 Volumteil Butanol, 4 Volumteile Di-n-butyläther, 5 Volumteile einer 8°/oigen wäßrigen Lösung des m-kresontinsauren Natriums, drei Ringe, die mit den Re2-Werteno,62, 1 und 1,63 den Actinomycinen C1, C C C lis inoculated with the Streptomyces strain BoP 476 and shaken for 5 days at 30 ° in Erlenmeyer flasks. The culture solution with a final pfj of 8.4 and a content of 24 mg actinomycin per liter of culture solution is extracted three times with a little ethyl acetate or butyl acetate and the light red extract is concentrated under reduced pressure. The red residue, washed with a little warm ligroin, gives in the ring distribution chromatogram with the two-phase system 1 part by volume of butanol, 4 parts by volume of di-n-butyl ether, 5 parts by volume of an 8% aqueous solution of sodium m-cresontinate, three rings marked with the R e2 - Values o, 62, 1 and 1.63 the actinomycins C 1 , CCC l
2
C2 und C 2
C 2 and C
3 entsprechen. Actinomycin C1 tritt als 3 correspond. Actinomycin C 1 occurs as
C NbC Nb
3 13 1
Hauptkomponente, Actinomycin C3 als Nebenkomponente auf.Main component, actinomycin C 3 as a minor component.
Das gleiche Ergebnis erhält man mit einer Nährlösung der Zusammensetzung:The same result is obtained with a nutrient solution of the composition:
1
g1
G
1,0
20,0
6,6
3,85 g1.0
20.0
6.6
3.85 g
1,0 g1.0 g
2,0 g2.0 g
500,0 mg500.0 mg
50,0 mg50.0 mg
10,0 mg10.0 mg
Leitungswassertap water
GlycerinGlycerin
KaliumnitratPotassium nitrate
D, L-ValinD, L-valine
sek. Kaliumphosphatsec. Potassium phosphate
NatriumchloridSodium chloride
CalciumcarbonatCalcium carbonate
MagnesiumcarbonatMagnesium carbonate
Eisen(II)-sulfatFerrous sulfate
(pH = 6,8 bis 7,2).(p H = 6.8 to 7.2).
Die Ausbeute unter gleichen Kulturbedingungen beträgt 23 mg Actinomycin pro Liter Kulturlösung, der End-pH-Wert nach 6 Tagen Kulturdauer 8,4. Demgegenüber bildet der Streptomyces-Stamm BoP 476 in valinfreien Nährlösungen z. B. der Zusammensetzung:The yield under the same culture conditions is 23 mg actinomycin per liter of culture solution, the final pH value is 8.4 after 6 days culture period. In contrast, the Streptomyces strain BoP 476 forms in valine-free nutrient solutions z. B. the composition:
ι 1 Leitungswasser 7"ι 1 tap water 7 "
20 g Glycerin
log Kaliumnitrat
ι g sek. Kaliumphosphat Natriumchlorid
Magnesiumsulfat20 g of glycerin
log potassium nitrate
ι g sec. Potassium phosphate sodium chloride
Magnesium sulfate
2 g 50 mg2 g 50 mg
10 mg Eisen(II) -sulfat10 mg iron (II) sulfate
(pH = 6,8 bis 7,2)(pH = 6.8 to 7.2)
ein Actinomycingemisch, in dem Actinomycin C3 und C2 als Hauptkomponenten, Actinomycin C1 als Nebenkomponente enthalten ist.an actinomycin mixture containing actinomycin C 3 and C 2 as main components, actinomycin C 1 as secondary component.
Beispiel 2 Eine Nährlösung der Zusammensetzung:Example 2 A nutrient solution of the composition:
wird mit dem Streptomyces-Staiinm BoP 509 beimpft. Die in Erlenmeyerkolben ausgeführte Kultur wird 5 Tage bei 300 geschüttelt und, wie im Beispiel ι beschrieben, aufgearbeitet. Die Ausbeute beträgt 57 mg Actinomycin pro Liter Kulturlösung, das End-pH 8,3. Nach der Untersuchung im Ringverteilungschromatogramm mit dem System 1 Volumteil Butanol, 4 Volumteile Di-n-Butyläther, 5 Volumteile einer 8%igen wäßrigen Lösung des m-kresotinsauren Natriums besteht das isolierte Actinomycingemisch zu etwa gleichen Teilen aus fünf Komponenten mit den Rc,-Werten 0,62, 1, 1,63, 2,41 und 3,53.is inoculated with the Streptomyces strain BoP 509. The culture carried out in Erlenmeyer flasks is shaken for 5 days at 30 ° and, as described in Example 1, worked up. The yield is 57 mg actinomycin per liter of culture solution, the final p H 8.3. According to the investigation in the ring distribution chromatogram with the system 1 part by volume of butanol, 4 parts by volume of di-n-butyl ether, 5 parts by volume of an 8% aqueous solution of sodium m-cresotinic acid, the isolated actinomycin mixture consists of approximately equal parts of five components with the R c , - Values 0.62, 1, 1.63, 2.41 and 3.53.
Demgegenüber bildet der Streptomyces-Stamm BoP 509 auf Nährlösungen ohne Isoleucinzusatz, bestehend z. B. ausIn contrast, the Streptomyces strain BoP 509 forms on nutrient solutions without the addition of isoleucine, consisting z. B. off
120 (Ph = 6,8 bis 7,2)120 (Ph = 6.8 to 7.2)
nach dem Ringverteilungschromatogramm (obengenanntes System) ein Actinomycingemisch aus einer Hauptkomponente mit R02 = 0,62 und einer Nebenkomponente mit R02= 1.according to the ring distribution chromatogram (above-mentioned system), an actinomycin mixture composed of a main component with R 02 = 0.62 and a secondary component with R 02 = 1.
509 600/153509 600/153
F 14746 IVa /30 hF 14746 IVa / 30 h
Die R1..,Werte sind ein Maß für die Lage der betreffenden Zone im Ringpapierchromatogramm, bezogen auf die Zone der reinen Komponente C2. Sie errechnen sich durch Division der Weglänge der betreffenden Komponente durch die Weglänge der C., Komponente.The R 1 .. values are a measure of the position of the relevant zone in the ring paper chromatogram, based on the zone of the pure component C 2 . They are calculated by dividing the path length of the component in question by the path length of the C., component.
B e i s ]) i e 1 3
Eine Nährlösung der Zusammensetzung:B eis]) ie 1 3
A nutrient solution of the composition:
1,0 1 I .ei lungs wasser1.0 1 liter of water
20,0 g (ilycerin20.0 g (ilycerin
5,0 g Kaliumnitrat5.0 g potassium nitrate
(1,5 g I), I.-Isoleucin(1.5g I), I.-isoleucine
1,0 g sek. Kaliumphosphat1.0 g sec. Potassium phosphate
2,0 g Natriumchlorid2.0 g sodium chloride
1,0 g Calciumcarbonat1.0 g calcium carbonate
100,0 mg Magnesiumcarbonat100.0 mg magnesium carbonate
10,0 mg Eisen(11 (-sulfat10.0 mg iron (11 (sulfate
1,0 g Speeköl1.0 g of speek oil
(ρ,, = 6,8 bis 7,2)(ρ ,, = 6.8 to 7.2)
wird mit dem Streptomyces-Stamm BoI'476 beimpft und in einem Submersfermenter 5 Tage bei 28" und starker Belüftung gerührt. Die Kulturlösuug mit einem End-pn von 8,9 wird durch einmaliges Zentrifugieren von dem Mvcel abgetrennt und fünfmal mit kleinen Anteilen Essigester ausgeschüttelt. Das abgeschleuderte Mycel wird ebenfalls mit Essigesler ausgezogen, bis der Extrakt nur sehwaehgelb gefärbt ist. Aus den vereinigten Kxtraklen wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck entfernt. Der rote Rückstand wird zweimal mit wenig warmem l.igroiu gewaschen. Die Ausbeute beträgt 200 mg Actinomycin pro Liter Kullurlösung. Zur weiteren Reinigung wird das Actinomvcingemisch in Benzol gelöst, filtriert und an eine Ahuniniumoxydsäule adsorbiert. Der rote Farbstoff wird mit Benzol-Essigester (Yolumen-is inoculated with the Streptomyces strain BoI'476 and stirred in a submerged fermenter for 5 days at 28 "and strong aeration. The culture solution with a final pn of 8.9 is separated from the Mvcel by centrifuging once and shaken out five times with small portions of ethyl acetate. The thrown off mycelium will also Stripped with Essigesler until the extract is only slightly yellow in color. From the united The solvent is removed under reduced pressure. The red residue becomes twice washed with a little warm l.igroiu. The yield is 200 mg actinomycin per liter Color solution. For further purification, the Actinomvcinemisch is dissolved in benzene, filtered and adsorbed on an ammonium oxide column. The red dye is mixed with benzene-ethyl acetate (Yolumen-
■1<> verhältnis ι : ι) eluiert und aus reinem Essigester umkristallisiert. Das so gewonnene Actinomycingeiniseh besteht nach dem Ringverteilungschromatogramm, ausgeführt mit dem Zweiphasensystem 1 Yolumteil Butanol, 4 Volumteile Di-η butvlälher, 5 Yolumteile einer 8%igen wäßrigen Lösung des 111 kresotinsauren Natriums, zu etwa gleichen Teilen aus drei Komponenten mit den R,..,Werten 1,6, 2.4 und 3,5.■ 1 <> ratio ι: ι) eluted and from pure ethyl acetate recrystallized. The actinomycin form obtained in this way consists according to the ring distribution chromatogram, executed with the two-phase system 1 part by volume of butanol, 4 parts by volume of di-η Butvlälher, 5 parts by volume of an 8% aqueous solution of 111 cresotinic acid sodium, to about equal parts from three components with the R, .., values 1.6, 2.4 and 3.5.
Demgegenüber bildet der Streptomyces-Stamm BoI'.176 unter analogen submersen Kulturbedingungen auf dem gleichen Nährboden, jedoch ohne Isoleucin, ein Actinomvcingemisch, das im R iiigverteilungschroniatogramm (obengenanntes System) aus zwei I lauptkomponenten mit denIn contrast, the Streptomyces strain BoI'.176 under analogous submerged culture conditions on the same medium, but without isoleucine, an actinoma virus mixture which is found in the Distribution chroniatogram (above System) from two main components with the
Λ5 !'!,..,-Werten ι und 1 ,Ci und einer Nebenkomponente mit R1.., : 0/12 bestellt.Λ5! '!, .., - Values ι and 1, Ci and a secondary component with R 1 .., : 0/12 ordered.
Mit einer Nährlösung der Zusammensetzung:With a nutrient solution of the composition:
2,0 g Natriumchlorid2.0 g sodium chloride
100,0 g Magnesiumsulfat100.0 grams of magnesium sulfate
100,0 g Magncsiumcarbonat100.0 g of magnesium carbonate
10,0 mg Eiscn(l l)-sulfat10.0 mg ice (l l) sulfate
500.0 mg Calciumcarbonat500.0 mg calcium carbonate
(p„ = 6,8 bis 7,2)(p "= 6.8 to 7.2)
erhält man mit dem gleichen Stamm in der Ausbeute 150 mg Actinomycin pro Liter Kulturlösung ein Actinomvcingemisch, das in bezug auf die Hauptkoniponenten mit dem oben beschriebenen identisch ist. Es enthält aber nach dem Ringverteilungschromatogramm, ausgeführt mit dem Verteilungssystem 4 Voluinteile Di-n-butyläther. 1 Volumteil Butanol, 5 Volumteile einer 8°/oigen wäßrigen Lösung des m-kresotinsatiren Natriums, zusätzlich zu den 1 lauptkomponenten mit den R1. .,-Werten 1,6, 2,4, 3,7 noch zwei Nebenkomponenten mit den K1..,-Werten 0,62 und i.an actinomycin mixture is obtained with the same strain in a yield of 150 mg actinomycin per liter of culture solution which is identical in terms of the main components to that described above. However, according to the ring distribution chromatogram, carried out with the distribution system, it contains 4 parts by volume of di-n-butyl ether. 1 part by volume of butanol, 5 parts by volume of an 8% aqueous solution of m-cresotinic sodium, in addition to the main components with the R 1 . ., - values 1.6, 2.4, 3.7 two secondary components with the K 1 .., - values 0.62 and i.
P) e i s ρ i e 1 4
Eine Nährlösung der Zusammensetzung:P) eis ρ ie 1 4
A nutrient solution of the composition:
ι ,öl Leitungswasserι, oil tap water
20.0 g Glycerin20.0 g glycerine
5,0 g Kaliumnitrat5.0 g potassium nitrate
6,5 g D, L-Leucin6.5 g D, L-leucine
1,0 g sek. Kaliumphosphat1.0 g sec. Potassium phosphate
2,0 g Natriumchlorid2.0 g sodium chloride
500,0 mg Calciumcarbonat500.0 mg calcium carbonate
100,0 mg Magncsiumcarbonat100.0 mg of magnesium carbonate
10,0 mg Eiscn(lT)-sulfat10.0 mg ice (IT) sulfate
(ρ,ι = 6,8 bis 7,2)(ρ, ι = 6.8 to 7.2)
wird mit dem Streptomyces-Stamm ISoI'476 beimpft, in einem Submersfermenter 6 Tage bei 2S0 unter starker Belüftung gerührt und, wie im Beispiel 3 beschrieben, aufgearbeitet. Die Ausbeute beträgt 65 mg Actinomycin pro Eiter Kullurlösung. Das gewonnene Actinomvcingemisch besteht nach dem Ringverteilungschromatogramm, ausgeführt mit dem Zweiphasensystem 1 Volum teil Butanol, 4 Volumteile Di-n-butyläther, 5 Volumteile einer 8°/oigen wäßrigen Lösung des m-krcsotinsauren Natriums, aus vier 1 lauptkomponenten mit den R1..,-Werten 1, 1,6, 2,4, 3,5 und vier Nebenkomponenten mit den R1..,-Werten 0,62, τ,2, t,g und 2,8. Demgegenüber bildet der Streptomyces-Stamm 1'oT 476 unter analogen Submersbedingungen, jedoch ohne Leucin, ein Actinomvcingemisch, das im Ringverteilungschromatogramm (obengenanntes System) aus zwei 1 fanptkomponenten mit den R1 ..,-Werten 1, 1,6 und einer Nebenkomponente mit R1. ο = 0,62 besteht.is inoculated with a Streptomyces strain ISoI'476 stirred in a Submersfermenter 6 days at 0 2S under strong aeration and, as described in Example 3, worked up. The yield is 65 mg actinomycin per pus of Kullur solution. The actinomvcinemisch obtained consists, according to the ring distribution chromatogram, carried out with the two-phase system 1 part by volume of butanol, 4 parts by volume of di-n-butyl ether, 5 parts by volume of an 8% aqueous solution of sodium m-crcsotinic acid, of four main components with the R 1 .. , Values 1, 1.6, 2.4, 3.5 and four secondary components with the R 1 .., values 0.62, τ, 2, t, g and 2.8. In contrast, the Streptomyces strain 1'oT 476 forms under analogous submerged conditions, but without leucine, an actinoma virus mixture, which in the ring distribution chromatogram (above-mentioned system) consists of two fanpt components with the R 1 ... values 1, 1.6 and a minor component R 1 . ο = 0.62 exists.
Eine Nährlösung der Zusammensetzung:A nutrient solution of the composition:
ι ,öl Leitungswasserι, oil tap water
20,0 g Glycerin20.0 grams of glycerin
5,0 g Kaliumnitrat5.0 g potassium nitrate
6,5 g D, L-Norleticin6.5 g D, L-norleticine
1,0 g sek. Kaliumphosphat1.0 g sec. Potassium phosphate
F 14746 IVa/30 hF 14746 IVa / 30 h
wird mit dem Streptomyces-Stamm BoP 476 beimpft und 6 Tage bei 300 im Erlenmeyerkolben geschüttelt. Die Fermentationslösung mit einem Etid-pH von 7 wird durch einmaliges Zentrifugieren von dem Mycel abgetrennt und die resultierende klare Kulturlösung sowie das Mycel mit - Essigester oder Butylacetat extrahiert. Aus den vereinigten Extrakten wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck entfernt, der rote Rückstand mit Benzol erschöpfend ausgezogen und an eine Aluminiumoxydsäule adsorbiert. Das mit Benzol-Essigester (1:2) gewonnene Eluat ergibt beim Einengen in einer Ausbeute von 36 mg pro Liter Kulturlösung ein Actinomycingemisch, das nach dem Ringverteiilungschromatogramm (System 1 Volumteil Butanol, 4 Volumteile Di-n-butyläther, 5 Valumteile einer 8°/oigen wäßrigen Lösung des m-kresotinsauren Natriums) aus drei Hauptkomponenten mit den R02-Werten 0,62, 1 und 1,63 besteht. Die drei Komponenten entsprechen den Komponenten des Actinomycingemisches C1, C2 und C3.is inoculated with the Streptomyces strain BoP 476 and shaken for 6 days at 30 ° in an Erlenmeyer flask. The fermentation solution having an E TID-p H of 7 is separated by a single centrifugation of the mycelium and the resulting clear solution and the culture mycelium with - extracted Essigester or butyl acetate. The solvent is removed from the combined extracts under reduced pressure, the red residue is exhaustively extracted with benzene and adsorbed on an aluminum oxide column. The eluate obtained with benzene-ethyl acetate (1: 2), when concentrated, gives an actinomycin mixture in a yield of 36 mg per liter of culture solution, which according to the ring distribution chromatogram (system 1 part by volume of butanol, 4 parts by volume of di-n-butyl ether, 5 parts by volume of an 8 ° Oigen aqueous solution of sodium m-cresotinate) consists of three main components with the R 02 values 0.62, 1 and 1.63. The three components correspond to the components of the actinomycin mixture C 1 , C 2 and C 3 .
Demgegenüber bildet der Stamm BoP 476 unter analogen Versuchsbedingungen ohne Norleucin zwar auch diese drei Komponenten, jedoch tritt die Komponente mit dem Ro2-Wert 0,62 nur als schwache Nebenkomponente auf. Durch den Norleucinzusatz ist also das Verhältnis der drei Komponenten zugunsten der Komponente mit dem Rc2-Werto,62 verschoben.In contrast, strain BoP 476 also forms these three components under analogous test conditions without norleucine, but the component with the R o2 value of 0.62 only occurs as a weak secondary component. Because of the addition of norleucine, the ratio of the three components is shifted in favor of the component with the R c2 value, 62.
Beispiel 6
Eine Nährlösung der Zusammensetzung:Example 6
A nutrient solution of the composition:
1,01 Leitungswasser1.01 tap water
20,0 g Glycerin20.0 grams of glycerin
5,0 g Kaliumnitrat5.0 g potassium nitrate
■ 4,4 g Sarkosin■ 4.4 g of sarcosine
1,0 g sek. Kaliumphosphat1.0 g sec. Potassium phosphate
i,s g Natriumchloridi, s g sodium chloride
250,0 mg Calciumcarbonat250.0 mg calcium carbonate
50,0 mg Magnesiumcarbonat50.0 mg magnesium carbonate
50,0 mg Magnesiumsulfat50.0 mg magnesium sulfate
10,0 mg Eisen(II) -sulfat10.0 mg iron (II) sulfate
2,0 g Bäckerhefe (vor der2.0 g baker's yeast (before
Sterilisationsterilization
der Nährlösung 3 Stunden bei 370 bebrütet)the nutrient solution incubated for 3 hours at 37 0)
(pH = 6,8 bis 7,2)(p H = 6.8 to 7.2)
wird mit dem Streptomyces-Stamm BoP 509 beimpft, 6 Tage bei 300 geschüttelt und, wie in Beispiel 5 beschrieben, aufgearbeitet. Der EndpH-Wert der Kulturlösung beträgt 8,8, die Ausbeute 100 mg Actinomycin pro Liter Kulturlösung. Das erhaltene Actinomycingemisch besteht nach dem Ringverteilungschromatogramm, ausgeführt mit dem System 5 Volumteile Amylacetat, 5 Volumteile einer io°/oigen wäßrigen Lösung des m-kresotinsauren Natriums, aus zwei Hauptkomponenten mit den Rc2-Werten 0,46 und 0,66 und einer Nebenkomponente mit Rc2 = 0,40.is inoculated with the Streptomyces strain BoP 509, shaken for 6 days at 30 0 and, as described in Example 5, worked up. The Endp H value of the culture solution is 8.8, the yield 100 mg actinomycin per liter of culture solution. The actinomycin mixture obtained consists, according to the ring distribution chromatogram, carried out with the system 5 parts by volume of amyl acetate, 5 parts by volume of a 10% aqueous solution of sodium m-cresotinic acid, of two main components with R c2 values 0.46 and 0.66 and a minor component with R c2 = 0.40.
Demgegenüber bildet der Stamm BoP 509 unter analogen Kulturbedingungen ohne Sarkosin nur eine Hauptkomponente mit dem Rc2-Wert 0,66 und einer Nebenkomponente mit R02= 1,0.In contrast, strain BoP 509 forms only one main component with an R c2 value of 0.66 and a minor component with R 02 = 1.0 under analogous culture conditions without sarcosine.
Eine Nährlösung der Zusammensetzung:A nutrient solution of the composition:
1,01 Leitungswasser1.01 tap water
20,0 g Glycerin20.0 grams of glycerin
5,0 g Kaliumnitrat5.0 g potassium nitrate
4,4 g Sarkosin4.4 g of sarcosine
1,0 g sek. Kaliumphosphat1.0 g sec. Potassium phosphate
2,0 g Natriumchlorid2.0 g sodium chloride
. 500,0 mg Calciumcarbonat. 500.0 mg calcium carbonate
100,0 mg Magnesiumcarbonat100.0 mg magnesium carbonate
10,0 mg Eisen(II)-sulfat10.0 mg iron (II) sulfate
(Ph = 6,8 bis 7,2)(Ph = 6.8 to 7.2)
wird mit dem Streptomyces-Stamm BoP 476 beimpft, 7 Tage bei 300 in Erlenmeyerkolben geschüttelt und, wie im Beispiel 1 beschrieben, aufgearbeitet. Das in einer Ausbeute von 30 mg pro Liter anfallende Actinomycingemisch besteht nach dem Ringverteilungschromatogramm ,mit dem System 1 Volumteil Butanol, 4 Volumteile Din-butyläther, 5 Volumteile einer 8°/oigen wäßrigen Lösung des m-kresotinsauren Natriums zu gleichen Teilen aus fünf Hauptkomponenten mit den Rc2-Werten 0,6, 0,8, 1, 1,3, 1,6 und einer Nebenkomponente mit R02 = 0,45.is inoculated with the Streptomyces strain BoP 476, shaken for 7 days at 30 ° in Erlenmeyer flasks and, as described in Example 1, worked up. The actinomycin mixture obtained in a yield of 30 mg per liter consists, according to the ring distribution chromatogram, with the system 1 part by volume of butanol, 4 parts by volume of din-butyl ether, 5 parts by volume of an 8% aqueous solution of sodium m-cresotinic acid in equal parts of five main components the R c2 values 0.6, 0.8, 1, 1.3, 1.6 and a secondary component with R 02 = 0.45.
Demgegenüber bildet Streptomyces-Stamm , BoP 476 ohne Sarkosin ein Actinomycingemisch, in dem die Komponenten mit den R02-Werten 1 und 1,6 als Hauptkomponenten, die mit dem Rc,-Wert 0,6 als Nebenkomponente auftreten.In contrast, Streptomyces strain, BoP 476, without sarcosine, forms an actinomycin mixture in which the components with the R 02 values 1 and 1.6 are the main components and those with the R c value 0.6 occur as secondary components.
Eine Nährlösung der Zusammensetzung:A nutrient solution of the composition:
1,01 Leitungswasser 20,0 g Glycerin1.01 tap water 20.0 g glycerin
4,5 g Kaliumnitrat 9,0 g N, N'-Dimethyldiketopiperazin 1,0 g sek. Kaliumphosphat 2,0 g Natriumchlorid 50,0 mg Magnesiumcarbonat 10,0 mg Eisen(II)-sulfat4.5 g potassium nitrate 9.0 g N, N'-dimethyldiketopiperazine 1.0 g sec. Potassium phosphate 2.0 g sodium chloride 50.0 mg magnesium carbonate 10.0 mg iron (II) sulfate
500,0 mg Calciumcarbonat 500,0 mg Bäckerhefe (vor der Sterilisation der Nährlösung 3 Stunden bei 370 bebrütet)500.0 mg 500.0 mg calcium carbonate baker's yeast (before sterilization of the nutrient solution incubated for 3 hours at 37 0)
= 6,8 bis 7,2)= 6.8 to 7.2)
509 600/153509 600/153
F 14746 IVa/30hF 14746 IVa / 30h
wird mit dem Streptomyces-Stamm BoP 509 beimpft, 6 Tage bei 300 in Erlenmeyer-Kolben geschüttelt und, wie im Beispiel 5 beschrieben, aufgearbeitet. Die Ausbeute beträgt 34 mg Actinomyxin pro Liter Kulturlösung, der End-pfl-Wert der KulUiiiösuiig η,2. Das erhaltene Actinomycingemisch besteht nachdem Ringverteilungschromatogranim, ausgeführt mit dem System 5 Volumteile Aniylacetat und 5 Volumteile einer ioVoigen wäßrigen Lösung des m-kresotinsauren Natriums, aus zwei 1 lauptkomponenten mit den U1.„-Werten 0,46 und 0,66.is inoculated with the Streptomyces strain BoP 509, shaken for 6 days at 30 ° in Erlenmeyer flasks and, as described in Example 5, worked up. The yield is 34 mg actinomyxin per liter of culture solution, the final p fl value of the culture η, 2. The actinomycin mixture obtained consists, according to the ring distribution chromatography, carried out with the system of 5 parts by volume of aniylacetate and 5 parts by volume of an aqueous solution of sodium m-cresotinic acid, of two main components with the U 1. "values 0.46 and 0.66.
Demgegenüber bildet der Streptomyces-Stamm BoP 509 ohne N, N'-Dimethyldiketopiperazin ein Actinomycingemisch mit einer llauptkompouente, die bei U1... -· 0,66 und einer Nebenkomponoiite, die bei R1..,== 1 zu liegen kommt.In contrast, the Streptomyces strain BoP 509 without N, N'-dimethyldiketopiperazine forms an actinomycin mixture with a main component which is at U 1 ... - · 0.66 and a secondary component which is at R 1 ..., == 1 .
Beispiel 9
Kine Nährlösung der Zusammensetzung:Example 9
No nutrient solution of the composition:
1,0 1 Leitungswasser1.0 1 tap water
20,0 g Glycerin20.0 grams of glycerin
5,0 g Kaliumnitrat5.0 g potassium nitrate
2c 7.9 g Leuciiiäthylesterchlorhydrat 2 c 7.9 g of leucyl ethyl ester chlorohydrate
1,0 g sek. Kaliuniphosphat1.0 g sec. Potash phosphate
1,2 g Natriumchlorid1.2 g sodium chloride
250,0 mg Natriumsulfat250.0 mg sodium sulfate
150,0 mg Magnesiumcarbonat150.0 mg magnesium carbonate
io,o mg Eisen(TI)-sulfatio, o mg iron (TI) sulfate
1,0 g Calciumcarbonat1.0 g calcium carbonate
r,og liefe (vorder Sterilisation der
Nährlösung 3 Stunden bei 370
bebrütet)r, og liefe (before sterilization of the
Nutrient solution for 3 hours at 37 °
incubated)
wird vor dem Sterilisieren mit 0,4 ecm n-Natronlauge versetzt und anschließend i'/a Stunden bei 1 io° sterilisiert. Der pj|-Wert nach der Sterilisation beträgt 6,5. Die Nährlösung wird mit dem Stamm BoP 476 beimpft und insgesamt 5 Tage bei 300 in Erlenmeyerkolben geschüttelt. Der pti-Wert sinkt innerhalb der ersten beiden lage auf 5,3 ab, erreicht jedoch nach 5 Tagen Kulturdauer den Wert 7. Die Kulturlösung wird vom Mycel durch Zentrifugieren abgetrennt und beide Fraktionen erschöpfend mit Kssigcster ausgezogen. Die Ausbeute beträgt 90111g Actinoinycin pro Liter Kulturlösung. Aus den vereinigten Extrakten wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck entfernt, der rote Rückstand mit Benzol erschöpfend extrahiert, filtriert und au eine Aluminiumoxydsäule adsorbiert. Das mit Benzolessigester (1 \2) gewonnene Eluat enthält ein Actinomycingemisch, das nach dem Ringverteilungschromatogramni, ausgeführt mit dem Verteilungssystem 6 Volumteile Di-n-butyläther, 1 Volumteil Butanol und 7 Volumteile einer 6°/oigen wäßrigen Lösung des m-kresotinsauren Natriums, aus vier I lauptkomponenten mit den R,,.,-Werten 1, 1,25, 1,6 und 2 sowie aus einer Nebenkomponente mit 'R1..,-ο,γ besteht.before sterilization, 0.4 ecm of sodium hydroxide solution is added and it is then sterilized for i / a hours at 10 °. The pj | value after sterilization is 6.5. The nutrient solution is inoculated with the strain BoP 476 shaken total of 5 days at 30 0 in Erlenmeyer flasks. The p ti value drops to 5.3 within the first two positions, but reaches the value 7 after 5 days of culture. The culture solution is separated from the mycelium by centrifugation and both fractions are exhaustively extracted with liquid. The yield is 90111 g of actinoinycin per liter of culture solution. The solvent is removed from the combined extracts under reduced pressure, the red residue is extracted exhaustively with benzene, filtered and adsorbed onto an aluminum oxide column. The eluate obtained with benzene acetic ester (1 \ 2) contains an actinomycin mixture which, according to the ring distribution chromatogram, carried out with the distribution system 6 parts by volume of di-n-butyl ether, 1 part by volume of butanol and 7 parts by volume of a 6% aqueous solution of sodium m-cresotinic acid, consists of four main components with the R ,,., - values 1, 1.25, 1.6 and 2 as well as of a secondary component with 'R 1 .., - ο, γ .
Demgegenüber bildet der Streptomyces-Stamm BoP 476 ohne Leuciiiäthylesterchlorhydrat, ohne Natriumsulfat und bei einer etwas größeren Menge Natriumchlorid ein Actinomycingemisch, das im Ringverteilungschromatogramm mit dem SystemIn contrast, the Streptomyces strain BoP 476 forms without Leuciiiäthylesterchlorhydrat, without Sodium sulfate and, in the case of a slightly larger amount of sodium chloride, an actinomycin mixture, which in the Ring distribution chromatogram with the system
6 Volumteile Di-n-butyläther, 1 Volumteil Butanol,6 parts by volume of di-n-butyl ether, 1 part by volume of butanol,
7 Volumteile einer 6%igen wäßrigen Lösung des m-kresotinsauren Natriums aus zwei Hauptkomponenten mit den R02-Werten 1 und 1,6 und einer Nebenkomponente mit Rc„ = o,7 besteht.7 parts by volume of a 6% strength aqueous solution of sodium m-cresotinic acid consists of two main components with R 02 values 1 and 1.6 and a minor component with R c "= 0.7.
70 Beispiel 10 70 Example 10
Eine Nährlösung der Zusammensetzung:A nutrient solution of the composition:
1,01 Leitungswasser1.01 tap water
20,0 g Glycerin20.0 grams of glycerin
5,0 g Kaliumnitrat5.0 g potassium nitrate
0,5 g D, L-Leucin0.5 g of D, L-leucine
1,0 g sek. Kaliumphosphat1.0 g sec. Potassium phosphate
1,5 g Natriumchlorid1.5 g sodium chloride
50,0 mg Magnesiumsulfat50.0 mg magnesium sulfate
50,0 mg Magnesiumcarbonat50.0 mg magnesium carbonate
10,0 mg Eisen(II)-sulfat10.0 mg iron (II) sulfate
250,0 mg Calciumcarbonat250.0 mg calcium carbonate
2.0 g Bäckerhefe (vor der Sterilisation2.0 g baker's yeast (before sterilization
der Nährlösung 3 Stunden bei 37° bebrütet)the nutrient solution incubated for 3 hours at 37 °)
(pH = 6,8 bis 7,2)(p H = 6.8 to 7.2)
wird mit dem Streptomyces-Stamm BoP 509 beimpft, 8 Tage bei 300 geschüttelt und, wie im Beispiel ι beschrieben, aufgearbeitet. Das End-pH der Kulturlösung beträgt 8,8, die Ausbeute 30 mg Aetinomycin pro Liter Kulturlösung. Nach der Untersuchung im Ringverteilungschromatogramm mit dem System 4 Volumteile Di-n-butyläther, ι Volumteil Butanol und 5 Volumteile einer 8°/oigen wäßrigen Lösung des m-kresotinsauren Natriums besteht das isolierte Actinomycingemisch aus drei Hauptkomponenten mit den R0O-Werten 0,62, ι und 1,5 sowie aus einer Nebenkomponente mit dem R11 „-Wert 2,2.is inoculated with the Streptomyces strain BoP 509, shaken for 8 days at 30 0 and, as described in Example ι, worked up. The final p H of the culture solution is 8.8, the yield of 30 mg Aetinomycin per liter of culture solution. After the investigation in the ring distribution chromatogram with the system 4 parts by volume of di-n-butyl ether, 1 part by volume of butanol and 5 parts by volume of an 8% aqueous solution of sodium m-cresotinic acid, the isolated actinomycin mixture consists of three main components with the R 0O values 0.62 , ι and 1.5 and from a secondary component with the R 11 “value 2.2.
Demgegenüber bildet der Stamm BoP 509 ohne Leucinzusatz ein Actinomycingemisch, das im gleichen Ringchromatogramm aus einer Hauptkomponente mit dem R02-Wert 0,62 und einer Nebenkomponente mit R02=I besteht.In contrast, the BoP 509 strain forms an actinomycin mixture without the addition of leucine, which in the same ring chromatogram consists of a main component with an R 02 value of 0.62 and a secondary component with R 02 = I.
Beispiel 11 Eine Nährlösung der Zusammensetzung:Example 11 A nutrient solution of the composition:
1.01 Leitungswasser
20,0 g Glycerin1.01 tap water
20.0 grams of glycerin
5,0 g Kaliumnitrat
7,3 g D, L-Lysinhydrodhlorid 1,0 g sek. Kaliumphosphat
2,0 g Natriumchlorid lls 5.0 g potassium nitrate
7.3 g D, L-lysine hydrodhloride 1.0 g sec. Potassium phosphate 2.0 g sodium chloride lls
50,0 mg Magnesiumcarbonat 10,0 mg Eisen(II)-sulfat 10,0 mg Magnesiumsulfat 500,0 mg Calciumcarbonat50.0 mg magnesium carbonate 10.0 mg iron (II) sulfate 10.0 mg magnesium sulfate 500.0 mg calcium carbonate
1,0 g Bäckerhefe (vor der Sterilisation der Nährlösung 3 Stunden bei 370 bebrütet)1.0 g baker's yeast (before sterilization of the nutrient solution incubated for 3 hours at 37 0)
wird vor der Sterilisation mit 1 ecm n-Natronlaugc versetzt, 1V2 Stunden bei iio° sterilisiert, mit dem Stamm BoP 476 beimpft und 5 Tage bei 300 ge-is before sterilization with 1 cc of n-Natronlaugc offset sterilized 1V2 hours at iio ° inoculated with the strain BOP 476 and overall for 5 days at 30 0
600/153600/153
F 14746 IVa/30 hF 14746 IVa / 30 h
schüttelt. Der End-pH-Wert der Kulturlösung beträgt 6,6 bis 6,8, die Ausbeute 40 mg Actinomycin pro Liter Kulturlösung. Das reine Actinomycingemisch wird, wie im Beispiel 3 beschrieben, gewonnen und besteht nach dem Ringverteilungschromatogramm, ausgeführt mit dem Systemshakes. The final pH value of the culture solution is 6.6 to 6.8, the yield 40 mg actinomycin per liter of culture solution. The pure actinomycin mixture is obtained as described in Example 3 and consists of the ring distribution chromatogram carried out with the system
4 Volumteile Di-n-butyläther, 1 Volumteil Butanol,4 parts by volume of di-n-butyl ether, 1 part by volume of butanol,
5 Volumteile einer 8°/oigen wäßrigen Lösung des m-kresotinsauren Natriums, aus zwei Hauptkomponenten mit den R02-Werten 1 und 1,6 sowie aus drei Neibenkomponenten mit den R02-Werten* 0,6, 1,3 und 2.5 parts by volume of an 8% aqueous solution of sodium m-cresotinic acid, made up of two main components with R 02 values 1 and 1.6 and three other components with R 02 values * 0.6, 1.3 and 2.
Demgegenüber bildet der Stamm BoP 476 ohne Lysin ein Actinomycingemisch aus den zwei Hauptkomponenten R02=I und 1,6 und einer Ndbenkoniponente mit R02 = 0,6 (gleiches Verteilungssystem wie oben).In contrast, the BoP 476 strain without lysine forms an actinomycin mixture of the two main components R 02 = I and 1.6 and a Ndbenkoniponente with R 02 = 0.6 (same distribution system as above).
Beispiel- 12
Eine Nährlösung der Zusammensetzung:Example- 12
A nutrient solution of the composition:
i,o 1 Leitungswasser
20,0 g Glycerin
4,0 g Kaliumnitrat
9,3 g D, L-Leucylglycin
1,0 g sek. Kaliumphosphat
2,0 g Natriumchlorid
100,0 mg Magnesiumcarbonat
500,0 mg Calciumcarbonat
10,0 mg Eisen(II)-sülfat
200,0 mg Hefe (vor der Sterilisation
Nährlösung 3 Stunden bei 37
brütet)i, o 1 tap water
20.0 grams of glycerin
4.0 g potassium nitrate
9.3 g of D, L-leucylglycine
1.0 g sec. Potassium phosphate
2.0 g sodium chloride
100.0 mg magnesium carbonate
500.0 mg calcium carbonate
10.0 mg iron (II) sulphate
200.0 mg yeast (before sterilization
Nutrient solution 3 hours at 37
broods)
(pH = 6,8 bis 7,2)(p H = 6.8 to 7.2)
wird mit dem Streptomyces-Stamm BoP 476 beimpft und 7 Tage 'bei 300 in Erlenmeyerkolben geschüttelt. Die Kulturlösung von einem End-pH von 7,5 bis 7,8 und mit einer Ausbeute von 70 mg Actinomycin pro Liter wird, wie im Beispiel 5 beschrieben, aufgearbeitet. Das erhaltene Actinomycingemisch besteht ■ nach dem Ringverteilungschromatogramm mit dem System 6 Volumteile Di-n-butyläther, 1 Volumteil Butanol, 7 Volumteile einer 6°/oigen Lösung des m-kresotinsauren Natriums aus einer Nebenkomponente mit dem R02-Wert 0,7 und vier Hauptkomponenten mit den R02-Werten 1, 1,25, 1,6 und 2.is inoculated with the Streptomyces strain BoP 476 and shaken for 7 days at 30 ° in Erlenmeyer flasks. The culture solution of a final p H 7.5 to 7.8 and with a yield of 70 mg actinomycin per liter, is worked up as described in Example 5. Fig. The actinomycin mixture obtained consists ■ according to the ring distribution chromatogram with the system 6 parts by volume of di-n-butyl ether, 1 part by volume of butanol, 7 parts by volume of a 6% solution of sodium m-cresotinic acid from a secondary component with the R 02 value 0.7 and four Main components with the R 02 values 1, 1.25, 1.6 and 2.
Demgegenüber bildet der Streptomyces-Stamm BoP 476 ohne D, L-Leucylglycin ein Actinomycingemisch, das sidh aus zwei Hauptkomponenten mit den R02-Werten 1 und 1,6 und einer Nebenkomponente mit dem R02-Wert 0,7 zusammensetzt (gleiches Verteilungssystem wie oben).In contrast, the Streptomyces strain BoP 476 without D, L-leucylglycine forms an actinomycin mixture which is composed of two main components with the R 02 values 1 and 1.6 and a minor component with the R 02 value 0.7 (same distribution system as above).
der beBeispiel 13
Eine Nährlösung der Zusammensetzung:the example 13
A nutrient solution of the composition:
ι 1 Leitungswasserι 1 tap water
20 g Glycerin20 g of glycerin
5 g Kaliumnitrat5 g of potassium nitrate
6 g D, L-Threonin6 g of D, L-threonine
ι g sek. Kaliumphosphatι g sec. Potassium phosphate
2 g Natriumchlorid2 g sodium chloride
50 mg Magnesiumcarbonat50 mg magnesium carbonate
10 mg Magnesiumsulfat10 mg magnesium sulfate
10 mg Eisen(II)-sulfat10 mg iron (II) sulfate
500 mg Calciumcarbonat500 mg calcium carbonate
500 mg Hefe (vor der Sterilisation der Nährlösung 3 Stunden bei 370 bebrütet)500 mg yeast (before sterilization of the nutrient solution incubated for 3 hours at 37 0)
(pH = 6,8 bis 7,2)(p H = 6.8 to 7.2)
wird mit dem Streptomyces-Stamm BoP 476 beimpft, 7 Tage bei 300 in Erlenmeyerkolben geschüttelt und, wie im Beispiel 5 beschrieben, aufgearbeitet. Das End-pn der Kulturlösung beträgt 8,3, die Ausbeute 70 mg Actinomycin pro Liter Kulturlösung. Das erhaltene Actinomycingemisch setzt sich nach der Untersuchung im Ringverteilungsdhromatogramm, ausgeführt mit dem Systemis inoculated with the Streptomyces strain BoP 476, shaken for 7 days at 30 ° in Erlenmeyer flasks and, as described in Example 5, worked up. The end pn of the culture solution is 8.3, the yield is 70 mg actinomycin per liter of culture solution. The actinomycin mixture obtained settles after the examination in the circular distribution chromatogram carried out with the system
4 Volumteile Di-n-butyläther, 1 Volumteil Butanol,4 parts by volume of di-n-butyl ether, 1 part by volume of butanol,
5 Volumteile einer 8%igen wäßrigen Lösung des ■m-kresotinsauren Natriums, aus einer Hauptkomponente mit dem R02-Wert 1,6 und aus zwei Nebenkomponenten mit den R02-Werten 1 und 2,35 zusammen. Die Hauptkomponente 1,6 entspricht dem Actinomycin C3.5 parts by volume of an 8% strength aqueous solution of sodium m-cresotinate, composed of a main component with the R 02 value 1.6 and two secondary components with the R 02 values 1 and 2.35. The main component 1.6 corresponds to actinomycin C 3 .
Demgegenüber bildet der Streptomyces-Stamm BoP 476 ohne Threonin ein Actinomycingemisch, das im gleichen Verteilungssystem aus zwei Hauptkomponenten mit den R02-Werten 1 und 1,6 und einer Nebenkomponente mit dem Rc2-Wert 0,6 besteht.In contrast, the Streptomyces strain BoP 476 without threonine forms an actinomycin mixture which, in the same distribution system, consists of two main components with the R 02 values 1 and 1.6 and a minor component with the R c2 value 0.6.
95 Beispiel 14 95 Example 14
Eine Nährlösung der Zusammensetzung:A nutrient solution of the composition:
ι 1 Leitungswasserι 1 tap water
20 g Glycerin20 g of glycerin
5 g Kaliumnitrat5 g of potassium nitrate
8 g D, L-Norvalin8 g of D, L-norvaline
ι g sek. Kaliumphosphatι g sec. Potassium phosphate
2 g Natriumchlorid2 g sodium chloride
150 mg Calciumcaribonat150 mg calcium carbonate
50 mg Magnesiumcarbonat50 mg magnesium carbonate
50 mg Magnesiumsulfat50 mg magnesium sulfate
25 mg Natriumsulfat25 mg sodium sulfate
25 mg Eisen(II)-sulfat25 mg iron (II) sulfate
(Ph = 6,8 bis 7,2)(Ph = 6.8 to 7.2)
wird mit dem Streptomyces-Stamm BoP 476 beimpft, 5 Tage bei 300 geschüttelt und, wie im Beispiel 5 beschrieben, aufgearbeitet. Das in einer Ausbeute von 35 mg pro Liter Kulturlösung erhaltene Actinomycingemisch besteht nach dem Ringverteilungschromatogramm, ausgeführt mit dem System 4 Volumteile Di-n-butyläther, 1 Volumteil Butanol, 5 Volumteile einer 8°/oigen wäßrigen Lösung des m-kresotinsauren Natriums, aus sechs Komponenten mit den R02-Werten 0,6, 0,75, 0,8, 1, 1,2 und 1,6.is inoculated with the Streptomyces strain BoP 476, shaken for 5 days at 30 0 and, as described in Example 5, worked up. The actinomycin mixture obtained in a yield of 35 mg per liter of culture solution consists, according to the ring distribution chromatogram, carried out with the system 4 parts by volume of di-n-butyl ether, 1 part by volume of butanol, 5 parts by volume of an 8% aqueous solution of sodium m-cresotinic acid, of six Components with the R 02 values 0.6, 0.75, 0.8, 1, 1.2 and 1.6.
Demgegenüber bildet der Streptomyces-Stamm BoP 476 ohne D, L-Norvalin eine Nebenkomponente mit R02= 0,6 und zwei Hauptkomponenten mit den Re2-Werten 1 und 1,6.In contrast, the Streptomyces strain BoP 476 without D, L-norvaline forms a secondary component with R 02 = 0.6 and two main components with R e2 values 1 and 1.6.
509 600/153509 600/153
F 14746 IVa /30 hF 14746 IVa / 30 h
I'.lllCI'.lllC
Ι' e i s |> i e 1 15
Nährlösung der Zusammensetzung;Ι 'ice |> ie 1 15
Nutrient solution of the composition;
1 1 Leitungswasser1 1 tap water
20 g (ilycerin20 g (ilycerin
.| g Kaliumnitrat. | g potassium nitrate
1 2 g I), !.-.Methionin1 2 g I),! .-. Methionine
1 g sek. Kaliumphosphat1 g sec. Potassium phosphate
2 g Natriumchlorid
250 mg (.'alciumearbonat2 g sodium chloride
250 mg (.'alcium carbonate
50 mg Magnesiumcarbonat50 mg magnesium carbonate
50 mg Magnesiumsulfat50 mg magnesium sulfate
25 nifi Eisen(l I )-sulfat25 nifi iron (l) sulfate
•ioo mg 1 lefe (vor der .Sterilisation der Nährliisuiii,' 3 Stunden bei 370 bebrütet")• ioo mg lefe 1 (before .Sterilisation the Nährliisuiii 'incubated for 3 hours at 37 0 ")
(ρ,,--6,8 bis 7,2)(ρ ,, - 6.8 to 7.2)
wird mit dein Streptomvees-Stamm BoI' 476 be- impft, 5 Tage Ιιι·ί 30" in Erlenmeverkolben geschüttelt und, wie im Beispiel 5 beschrieben, aufgearbeitet. l)as Knd-pii der Kulturlösungen beträft 7,.|, die Ausbeute 63 mg Actinomycin pro Liter Kultiirlösuiig. Nach dem Riiigverteilungschromatogramm, ausgeführt mit dem Verteilungssystem .| Volumteile l)i-n-l)Utyläther, 1 Volumteil Butanol, 5 Volumteile einer 8"/oigen wäßrigen Lösung des in-kresotiiisaurm Natriums, besteht das erhaltene Actinoinvcmgcinisch aus zwei I lauptkomponenten mit den K1..,-Werten 1 und 1,6 und aus einer Nebenkoinpoik'iik· mit K1., o,C>. is inoculated with your Streptomvees strain BoI '476, shaken for 5 days ιι · ί 30 "in Erlenmever flasks and worked up as described in Example 5. l) the Knd-pii of the culture solutions is 7,. |, the yield 63 mg of actinomycin per liter of culture solution. According to the distribution chromatogram, carried out with the distribution system, parts by volume of 1) in 1) utyl ether, 1 part by volume of butanol, 5 parts by volume of an 8% aqueous solution of sodium incresotic acid, the actinic acid obtained consists of two main components with the K 1 .., values 1 and 1.6 and from a secondary koinpoik'iik · with K 1. , o, C>.
Demgegenüber bildet der Streptnmyces-Stamm BoI'.176 ohne 1), L-Methioiiin ein Actinomycingemiseh, das im Kingverteiluiig.-chromatogramm mil gleichem Zweiphasensysteni aus zwei Hauptkomponenten mit den R1..,-Werten 1 und 1,6 und aus einer Nebenkomponente mit R1..,—~o,6 bestellt.In contrast, the Streptnmyces strain BoI'.176 without 1), L-methioiiin forms an actinomycin hemiseh, which in the King's distribution chromatogram with the same two-phase system consists of two main components with the R 1 ... values 1 and 1.6 and a minor component ordered with R 1 .., - ~ o, 6.
B e i s ])i e I inB e i s]) i e I in
Kiiie Nährlösung der Zusammensetzung:
1 1 LeitungswasserKiiie nutrient solution of the composition:
1 1 tap water
wird mit dem Streptomvces-Stamni BoF 476 beimpft, .| 'l'agi· bei 30" geschüttelt und, wie im Beispiel 5 beschrieben, aufgearbeitet. Das Knd-pn der Kulturlösung betrügt 7,4. die Ausbeute 65 mg Aciinoiiiyciii pro Liter Kulturlösung. Das gewonnene Actinoniycingemisch besteht nach dem R iiigverlcilungsehromatogramni, ausgeführt mit dem Verteilungssystem .) Volumteile Di-n-butylällier, 1 Volumteil Butanol, 5 Volumteile einer 8n/oigen wäßrigen f.ösung des m-kresotinsatiren Natriums aus drei I lauptkomponeuten mit den R1.o-Werten 1, 1,6, 2,35 und zwei Nebenkomponenten mit den Werten 0,6 und 3,4.is inoculated with the Streptomvces strain BoF 476,. | Shaken 'l'agi · at 30 "and worked up as described in Example 5. The Knd-pn of the culture solution is 7.4. The yield is 65 mg aciinoiiiyciii per liter of culture solution the distribution system.) parts by volume of di-n-butylällier, 1 part by volume of butanol, 5 parts by volume of a 8 n / o aqueous f.ösung of m-kresotinsatiren sodium from three lauptkomponeuten I with R 1 .o values 1, 1.6, 2 , 35 and two minor components with the values 0.6 and 3.4.
Demgegenüber bildet der Streptomyces-Stamm BoP 47G ohne Formyl-D-leucin ein Actinomycingemisch, das im Ringvcrtcilungschromatogramm mit gleichem Zweiphasensystem aus zwei llauptkomponenten mit den R1..,-Werten 1 und 1,6 und aus einer Nebenkomponente mit R(.., = o,6 besteht.In contrast, the Streptomyces strain BoP 47G without formyl-D-leucine forms an actinomycin mixture which, in the ring composition chromatogram with the same two-phase system, consists of two main components with R 1 .., values 1 and 1.6 and a secondary component with R ( .., = o, 6 exists.
I! e i s ρ i e 1 17
Eine Nährlösung der Zusammensetzung:I! ice ρ ie 1 17
A nutrient solution of the composition:
1,0 1 Leitungswasser1.0 1 tap water
20,0 g Glycerin20.0 grams of glycerin
5,0 g Kaliumnitrat5.0 g potassium nitrate
8,2 g Acetyl-D, L-isoleucin8.2 g acetyl-D, L-isoleucine
1,0 g sek. Kaliumphosphat1.0 g sec. Potassium phosphate
1,2 g Natriumchlorid1.2 g sodium chloride
500,0 mg Calciumcarbonat500.0 mg calcium carbonate
50,0 mg Magnesiumcarbonat50.0 mg magnesium carbonate
20,0 mg Eisen(Il)-sulfat20.0 mg iron (II) sulfate
20,0 mg Natriumsulfat20.0 mg sodium sulfate
500,0 mg Hefe (vor der Sterilisation der Nährlösung 3 Stunden bei 370 bebrütet) 500.0 mg yeast (before sterilization of the nutrient solution incubated for 3 hours at 37 0)
wird vor dem Sterilisieren mit 2 11-Natronlaugc auf Ph ~ 7 eingestellt und die sterile, mit dem Streptomyces-Stamm B0P476 beimpfte Nährlösung 4Tage bei 300 in Erlenmeyerkolben geschüttelt. Das pn der Nährlösung beträgt danach 7,2. Das in einer Ausbeute von 80 mg Actinomycin pro Liter Kulturlösung anfallende Actinomycingemisch setzt sich nach dem Ringverteilungschromalogramm mit dem Zweiphasensystem 4 Volumteile Di-11-butyläther, 1 A'olumteil Hutanol, 5 Volumteile einer 8"/oigen wäßrigen Lösung des m-kresotinsauren Natriums aus den Hauptkomponenten mit den R(..,-Werten 1,6, 2,4 und 3,5 und zwei Nebcnkomponenten mit 0,6 und 1 zusammen.and is adjusted before sterilization with 2 11-Natronlaugc to pH ~ 7 shaken sterile, inoculated with Streptomyces strain B0P476 broth 4days at 30 0 in Erlenmeyer flask. The pn of the nutrient solution is then 7.2. The actinomycin mixture obtained in a yield of 80 mg actinomycin per liter of culture solution is exposed, according to the ring distribution chromatogram with the two-phase system, to 4 parts by volume of di-11-butyl ether, 1 part by volume of hutanol, and 5 parts by volume of an 8% aqueous solution of sodium m-cresotinic acid the main components with the R ( .., values 1.6, 2.4 and 3.5 and two secondary components with 0.6 and 1 together.
Demgegenüber bildet der Streptomyces-Stamm BoI'476 ohne Acetyl-D, L-isoleucin ein Actinomycingemisch, das im Ringverteilungschromatogranim mit gleichem Zweiphasensystem aus zwei Hauptkomponenten mit den !^,..,-Werten 1 und 1,6 und aus einer Nebenkomponente mit R(.., = 0,6 besteht.In contrast, the Streptomyces strain BoI'476 without acetyl-D, L-isoleucine forms an actinomycin mixture which, in the ring distribution chromatography with the same two-phase system, consists of two main components with the values 1 and 1.6 and a minor component with R ( .., = 0.6 exists.
Beispiel 18
Eine Nährlösung der Zusammensetzung:Example 18
A nutrient solution of the composition:
1 I Leitungswasser1 l tap water
20 g Glycerin20 g of glycerin
4 g Kaliumnitrat4 g of potassium nitrate
4 g D. L-Threonin4 g of D. L-threonine
4 g D, L-VaIin4 g of D, L-VaIin
1 g selc. Kaliumphosphat1 g selc. Potassium phosphate
2 g Natriumchlorid2 g sodium chloride
50 mg Magnesiumcarbonat50 mg magnesium carbonate
25 mg Magnesiumsulfat 25 mg Eisen(Il)-sulfat25 mg magnesium sulfate 25 mg iron (II) sulfate
600/153600/153
F 14746 IVa/30 hF 14746 IVa / 30 h
250 mg Calciumcarbonat
250 mg Hefe {vor der Sterilisation der Nährlösung 3 Stunden bei 370 bebrütet)250 mg calcium carbonate
250 mg yeast {prior to sterilization of the nutrient solution incubated for 3 hours at 37 0)
(Ph = 6,8 bis 7,2)(Ph = 6.8 to 7.2)
wird mit dem Streptomyces-Stamm BoP 476 beimpft, 6 Tage bei 300 in Erlenmeyerkolben geschüttelt und, wie im Beispiel 5 beschrieben, aufgearbeitet. Das End-pH der Nährlösung beträgt 8,8, die Ausbeute 40 mg Actinomycin pro Liter Kulturlösung. Nach der Untersuchung im Ringverteilungschromatogramm mit dem Zweiphasensystemis inoculated with the Streptomyces strain BoP 476, shaken for 6 days at 30 ° in Erlenmeyer flasks and, as described in Example 5, worked up. The final p H of the culture medium is 8.8, the yield of 40 mg actinomycin per liter of culture solution. After the investigation in the ring distribution chromatogram with the two-phase system
4 Volumteile Di-n-butyläther, 1 Volumteil Butanol,4 parts by volume of di-n-butyl ether, 1 part by volume of butanol,
5 Volumteile einer 8°/oigen wäßrigen Lösung des m-kresotinsauren Natriums besteht das isolierte Actinomycingemisch aus drei Hauptkomponenten mit den R02-Werten 0,6, 1 und 1,6 sowie aus einer Nebenkomponente mit dem R02-Wert 2,25.5 parts by volume of an 8% aqueous solution of sodium m-cresotinic acid, the isolated actinomycin mixture consists of three main components with the R 02 values 0.6, 1 and 1.6 and a minor component with the R 02 value 2.25.
Demgegenüber bildet der Streptomyces-Stamm BoP 476 ohne D, L-Threonin und D, L-Valin ein Actinomycingemisch, das im Ringverteilungschromatogramm mit gleichem Zweiphasensystem aus zwei Hauptkomponenten mit den Rc2-Werten 1 und 1,6 und aus einer Nebenkomponente mit R02 = 0,6 besteht.In contrast, the Streptomyces strain BoP 476 without D, L-threonine and D, L-valine forms an actinomycin mixture which, in the ring distribution chromatogram with the same two-phase system, consists of two main components with R c2 values 1 and 1.6 and a minor component with R 02 = 0.6 exists.
B ei s ρ i el 19For example, 19
Eine Nährlösung der Zusammensetzung:A nutrient solution of the composition:
1,01 Leitungswasser1.01 tap water
20,0 g Glycerin20.0 grams of glycerin
5,0 g Kaliumnitrat5.0 g potassium nitrate
6,5 g D, L-Valin6.5 g D, L-valine
1,0 g sek. Kaliumphosphat1.0 g sec. Potassium phosphate
2,0 g Natriumchlorid2.0 g sodium chloride
100,0 mg Magnesiumcarbonat100.0 mg magnesium carbonate
10,0 mg Magnesiumsulfat10.0 mg magnesium sulfate
10,0 mg Eisen(II)-sulfat10.0 mg iron (II) sulfate
1,0 g Calciumcarbonat1.0 g calcium carbonate
1,0 g Hefe (vor der Sterilisation der1.0 g yeast (before sterilization of the
Nährlösung 3 Stunden bei 370 bebrütet) Nutrient solution incubated for 3 hours at 37 0)
(Ph = 6,8 bis 7,2)(Ph = 6.8 to 7.2)
wird mit dem Streptomyces-Stamm BoP 458 a beimpft, 6 Tage in Erlenmeyerkolben geschüttelt und, wie im Beispiel 5 beschrieben, aufgearbeitet. Das End-pH der Kulturlösung beträgt 6,3, die Ausbeute 100 mg Actinomycin pro Liter Kulturlösung. Nach dem Ringverteilungschromatogramm mit dem Verteilungssystem 5 Volumteile Amylacetat, 5 Volumteile einer io°/oigen wäßrigen Lösung des m-'kresotinsauren Natriums besteht das gewonnene Actinomycingemisch aus einer Hauptkomponente mit R02 =1,2 und zwei Nebenkomponenten mit den Ro2-Werten 0,66 und 2.is inoculated with the Streptomyces strain BoP 458 a, shaken in Erlenmeyer flasks for 6 days and worked up as described in Example 5. The final pH of the culture solution is 6.3, the yield 100 mg actinomycin per liter of culture solution. After Ringverteilungschromatogramm with the distribution system 5 parts by volume of amyl acetate, 5 parts by volume of a io ° / o aqueous solution of sodium m-'kresotinsauren there is Actinomycingemisch obtained from a main component with R 02 = 1,2 and two minor components o2 with the values R 0, 66 and 2.
Demgegenüber bildet der Streptomyces-Stamm BoP 458 a ohne D, L-Valin ein Actinomycingemisch, das im Ringverteilungschromatogramm mit gleichem Verteilungssystem aus zwei Hauptkomponenten mit den R02-Werten 0,66 und 1,2 und aus einer Nebenkomponente mit R02 = 0,2 besteht. Das Actinomycin-C-Gemisch mit dem System 5 Volumteile Amylacetat, 5 Volumteile einer io°/oigen wäßrigen Lösung des m-kresotinsauren Natriums verteilt, ergibt zwei Hauptkomponenten mit den R02-Werten 1 (Actinomycin C2), i,55 (Actinomycin C3) und eine Nebenkomponente mit dem Rc2-Wert 0,66 (Actinomycin C1).In contrast, the Streptomyces strain BoP 458 a without D, L-valine forms an actinomycin mixture, which in the ring distribution chromatogram with the same distribution system consists of two main components with the R 02 values 0.66 and 1.2 and a secondary component with R 02 = 0, 2 exists. The actinomycin C mixture with the system 5 parts by volume of amyl acetate, 5 parts by volume of a 10% aqueous solution of sodium m-cresotinic acid, gives two main components with the R 02 values 1 (actinomycin C 2 ), 1.55 (actinomycin C 3 ) and a secondary component with an R c2 value of 0.66 (actinomycin C 1 ).
B e i s ρ i e 1 20 Eine Nährlösung der Zusammensetzung:B e i s ρ i e 1 20 A nutrient solution with the following composition:
ι 1 Leitungswasserι 1 tap water
20 g Glycerin20 g of glycerin
5 g Kaliumnitrat5 g of potassium nitrate
7 g D, L-Threonin7 g of D, L-threonine
ι g sek. Kaliumphosphatι g sec. Potassium phosphate
2 g Natriumchlorid2 g sodium chloride
100 mg Magnesiumcarbonat100 mg magnesium carbonate
25 mg Natriumsulfat25 mg sodium sulfate
10 mg Eisen(II)-sulfat10 mg iron (II) sulfate
ι g Calciumcarbonatι g calcium carbonate
ι g Hefe (vor der Sterilisation der Nährlösung 3 Stunden bei 370 bebrütet)ι g yeast (before sterilization of the nutrient solution incubated for 3 hours at 37 0)
(pH = 6,8 bis 7,2) 8S(p H = 6.8 to 7.2) 8 S.
wird mit dem Streptomyces-Stamm BoP 458 a beimpft, 6 Tage in Erlenmeyerkolben geschüttelt und, wie im Beispiel 5 beschrieben, aufgearbeitet. Das End-pH der Kulturlösung beträgt 7, die Ausbeute 25 mg Actinomycin pro Liter Kulturlösung. Nach dem Ringverteilungschromatogramm mit dem Verteilungssystem 5 Volumteile Amylacetat, 5 Volumteile einer io°/oigen wäßrigen Lösung des m-kresotinsauren Natriums besteht das erhaltene Actinomycingemisch aus zwei Hauptkomponenten mit den R02-Werten 0,66 und 1,2 und aus vier Nebenkomponenten mit den Rc2-Werten 0,4, 1, 1,7 und 2,1.is inoculated with the Streptomyces strain BoP 458 a, shaken in Erlenmeyer flasks for 6 days and worked up as described in Example 5. The final p H of the culture solution is 7 to yield 25 mg actinomycin per liter of culture solution. According to the ring distribution chromatogram with the distribution system 5 parts by volume of amyl acetate, 5 parts by volume of a 10% aqueous solution of sodium m-cresotinic acid, the actinomycin mixture obtained consists of two main components with the R 02 values 0.66 and 1.2 and four secondary components with the R c2 values 0.4, 1, 1.7 and 2.1.
Demgegenüber bildet der Streptomyces-Stamm BoP 458 a ohne D, L-Threonin ein Actinomycingemisch, das im Ringverteilungschromatogramm mit gleichem Verteilungssystem aus zwei Hauptkomponenten mit den R02-Werten 0,66 und 1,2 und aus einer Nebenkomponente mit R02 = 0,2 besteht.In contrast, the Streptomyces strain BoP 458 a without D, L-threonine forms an actinomycin mixture, which in the ring distribution chromatogram with the same distribution system consists of two main components with the R 02 values 0.66 and 1.2 and a secondary component with R 02 = 0, 2 exists.
B e i s ρ i e 1 21 Eine Nährlösung der Zusammensetzung:B e i s ρ i e 1 21 A nutrient solution of the composition:
i,o 1 Leitungswasseri, o 1 tap water
20,0 g Glycerin
5,0 g Kaliumnitrat
4,4 g Sarkosin
1,0 g sek. KaliumphospShat 2,0 g Natriumchlorid20.0 grams of glycerin
5.0 g potassium nitrate
4.4 g of sarcosine
1.0 g sec. Potassium phosphate 2.0 g of sodium chloride
100,0 mg Magnesiumcarbonat 10,0 mg Eisen(II)-sulfat 1,0 g Calciumcarbonat 1,0 g Hefe (vor der Sterilisation der100.0 mg magnesium carbonate 10.0 mg iron (II) sulfate 1.0 g calcium carbonate 1.0 g yeast (before sterilization of the
Nährlösung 3 Stunden bei 370 bebrütet) Nutrient solution incubated for 3 hours at 37 0)
(pH = 6,8 bis 7,2)(p H = 6.8 to 7.2)
wird mit dem Streptomyces-Stamm BoP 458 a beimpft, 8 Tage in Erlenmeyerkolben geschüttelt und, wie im Beispiel 5 beschrieben, aufgearbeitet. Dasis inoculated with the Streptomyces strain BoP 458 a, shaken for 8 days in Erlenmeyer flasks and, as described in Example 5, worked up. The
509 600/153509 600/153
Claims (1)
Eine Nährlösung der Zusammensetzung:Example 23
A nutrient solution of the composition:
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE2161164A1 (en) | Process for the microbiological Her position of protein and use of the process product | |
| DE2409627C3 (en) | Production of L-lysine feed concentrate | |
| DE2417336C3 (en) | Process for the biotechnical production of L-lysine, L-aspartic acid, L-alanine, L-valine, L-leucine and L-arginine | |
| DE1957980B2 (en) | METHOD OF PRODUCING DAUNORUBICIN BY THE BREEDING OF A STREPTOMYCE | |
| DE944395C (en) | Manufacture of actinomycins | |
| EP0829541B1 (en) | Osmo-controlled fermentation process for the preparation of acarbose | |
| DE2035814B2 (en) | Pleuromutilin derivatives, process for their preparation and use | |
| DE1919837B2 (en) | Leupeptins, their salts and process for their preparation | |
| DE2633451C3 (en) | Production of bacterial cell mass | |
| DEF0014746MA (en) | ||
| DE1291744B (en) | 3- (2-nitro-3-chlorophenyl) -4-chloropyrrole | |
| DE69214737T2 (en) | Antibiotics NK374186A, NK374186B, NK374186B3 and NK374186C3, process for their preparation and their use | |
| DE1911240C3 (en) | Antibiotic 20 798 RP, process for its production and medicinal products containing it | |
| DE2358496A1 (en) | PROCESS FOR PRODUCING L-SERINE | |
| DE3248420C2 (en) | ||
| DE2445615A1 (en) | PROCESS FOR THE PRODUCTION OF CEPHALOSPORIN C | |
| DE1916421C3 (en) | Process for the fermentative production of L Senn | |
| DE876310C (en) | Process for the production of biologically active substances | |
| DE3248280A1 (en) | Salbomycin and process for its preparation | |
| DE1809187C3 (en) | Process for the microbiological production of daunorubicin | |
| DE1642717C (en) | Method of making L Pro Im | |
| DE2102793A1 (en) | Process for the production of L 3 4 dihydroxyphenylalanine by fermentation | |
| DE2838252C3 (en) | Process for the production of coenzyme Q | |
| DE1900492C (en) | ||
| DE1070176B (en) | Process for the production of new steroid compounds of the 1, 4 - Pregnadiene series |