Verfahren zur Herstellung kristallisierter Inselhormonpräparate Gegenstand
des Hauptpatents 852 591 ist ein Verfahren zur Herstellung von kristallisierten
Präparaten aus dem blutzuckersenkenden Hormon der Bauchspeicheldrüse, das dadurch
gekennzeichnet ist, daß man die Kristallisation des Hormons in Gegenwart von solchen
Verbindungen der Acridin- und Chinolinreihe vornimmt, deren Basen bei -einem zwischen
6,5 und 9 liegenden pH-Wert entweder unlöslich oder nur kolloidlöslich sind. Die
so gewonnenen Kristalle, die Inselhormonverbindungen mit wechselnden Mengen der
betreffenden Basen darstellen, eignen sich in hervorragender Weise zur Herstellung
von stark protrahiert wirkenden Inselhormonpräparaten. Bei der Durchführung des
beschriebenen Verfahrens treten gewisse Schwierigkeiten dadurch auf, daß es nicht
immer gelingt, Kristalle gleicher Größe zu erhalten. Da die .protrahierte Wirkung
der Präparate sowohl vom Gehalt an den Acridin-und Chinolinbasen als auch von der
Form und Größe der Kristalle abhängt, ist es unter diesen Umständen manchmal schwierig,
gleichmäßig wirksame Präparate herzustellen.Process for the production of crystallized islet hormone preparations The subject of the main patent 852 591 is a process for the production of crystallized preparations from the blood sugar lowering hormone of the pancreas, which is characterized in that the crystallization of the hormone is carried out in the presence of such compounds of the acridine and quinoline series, their bases are either insoluble or only colloid-soluble at a pH between 6.5 and 9. The crystals obtained in this way, which represent islet hormone compounds with varying amounts of the bases in question, are outstandingly suitable for the production of islet hormone preparations with a strongly protracted effect. When carrying out the process described, certain difficulties arise from the fact that it is not always possible to obtain crystals of the same size. Since the protracted effect of the preparations depends both on the content of the acridine and quinoline bases and on the shape and size of the crystals, it is sometimes difficult under these circumstances to produce preparations that are uniformly effective.
Es wurde nun ein Weg gefunden, um diese Schwierigkeiten zu umgehen.
Überraschenderweise hat sich gezeigt, daß man fertige Inselhormonkristalle ohne
Änderung der Kristallgröße und -form dadurch in Verbindungen mit den angeführten
Basen
umwandeln kann, daß man sie mit wäfirigen Lösungen dieser Basen bei etwa neutraler
Reaktion verrührt und dabei das pH durch Zugabe von Alkali konstant hält. Unter
diesen Bedingungen werden die Basen im Verlauf einiger Stunden quantitativ von den
Kristallen aufgenommen, und män erhält Produkte, die ebenso stark protrahiert wirken
wie die nach der obigen Patentschrift erhaltenen Kristalle und die. in derselben
Weise zur Herstellung von Depotpräparaten verwandt werden können.A way has now been found to circumvent these difficulties.
Surprisingly, it has been shown that you can get ready island hormone crystals without
Changes in crystal size and shape as a result in connection with the listed
Bases
can convert that you can with aqueous solutions of these bases at about neutral
Stir the reaction while keeping the pH constant by adding alkali. Under
Under these conditions, the bases are quantitatively removed in the course of a few hours
Crystals are absorbed, and we receive products that are just as protracted
such as the crystals obtained according to the above patent and the. in the same
Way can be used for the production of depot preparations.
Das neue Verfahren bietet eine Reihe von Vorteilen. Einmal ist es
nunmehr möglich, Kristallpräparate einheitlicher Größe, wie sie im Gang der Inselhormonherstellung
in großen Chargen anfallen, für die Herstellung der neuen Produkte einzusetzen und
so eine gleichmäßige Fabrikation zu garantieren. Weiterhin erhält man Endprodukte,
die von vornherein keinerlei amorphe Bestandteile enthalten, so daß sich eine Aufarbeitung
durch fraktionierte Sedimentation, eventuell sogar, wenn von Anfang an unter sterilen
Bedingungen -gearbeitet wird, eine Isolierung der Kristalle überhaupt erübrigt und
direkt gebrauchsfertige Suspensionen hergestellt werden können.The new process offers a number of advantages. Once it is
It is now possible to produce crystal preparations of a uniform size, as they are in the course of island hormone production
arise in large batches to use for the manufacture of the new products and
in this way to guarantee uniform fabrication. Furthermore, one obtains end products,
which from the outset do not contain any amorphous components, so that a work-up
through fractional sedimentation, possibly even if under sterile from the start
Conditions -worked, an isolation of the crystals is superfluous and
ready-to-use suspensions can be prepared directly.
Die Durchführung des neuen Verfahrens wird durch folgende Beispiele
erläutert. Beispiel i ¢o mg Bis-2-methyl-4-aminochinölyl-6-carbamidhydrochlorid
werden in 5oo ccm Wasser gelöst- und mit 0,7 ccm n/iö Natronlauge auf PH
7,2 gestellt. In diese Lösung wird unter Rühren i g kristallisiertes Inselhormon
eingetragen, und es wird unter weiterem Rühren durch Zusatz von n/io Natronlauge
ein pH-Wert-von 7,2 aufrechterhalten. Nach 24stündigem Rühren sind 1,95 ccm n/io
Natronlauge verbraucht, und das ganze Bis-2-methyl-4-aminochinolyl-6-carbamid ist
von den Inselhormonkristallen aufgenommen. Die Kristalle werden aasgeschleudert,
zweimal mit Wasser gewaschen und mit -Aceton und- Äther getrocknet. Man erhält o,97
g Kristalle, die einen Gehalt von 4% Bis-2-methyl-4-aminochinolyl-6-carbamid (auf
das Hydrochlorid berechnet) enthalten. -Beispiel 2 5 g Inselhormon werden in 225
ccm Wasser und 25 ccm Eisessig gelöst, die Lösung wird ,steril filtriert, auf .i,3
1 aufgefüllt und mit 15 o ccm Aceton und 16o ccm o,5%iger* Chlorzinklösung
versetzt. Dann wird unter sterilen Bedingungen mit Ammoniak auf pH 5,5 gestellt,
worauf unter Rühren innerhalb kurzer Zeit gleichmäßige Kristalle von etwa 1/zoo
mm Kantenlänge erhalten werden. Die Kristalle werden aasgeschleudert, mit Wasser
gewaschen, in einer neutralisierten Lösung,von 0,3 9
Bis --2 - methyl - 4-
aminochinolyl - 6-carbamidhydrochlorid in 2,5 f Wasser, das o.,5 % Aceton-Chloroformenthält,
verrührt und wie im Beispiel i weiter behandelt, wobei für die Einhaltung steriler
Bedingungen gesorgt wird. Nach 2¢ Stunden wird.so viel Kochsalzlösung . zugegeben,
daß man eine Suspension von 47 mg Inselhormon pro ccm in isotonischer Kochsalzlösung
erhält, die unter Rühren in Fläschchen zu io ccm abgefüllt wird. Man erhält so ein
Depotinselhormonpräparat mit 4o Einheiten pro ccm. Beispiel 3 75o mg B.is-2-methyl-q.-aminochinolyl-6-carbamidhydrochlorid
werden in redestilliertem sterilem Wasser zu 750 ccm gelöst und mit n/ioo
Natronlauge auf pH 5,6 eingestellt. Dann werden io g Kristallinsulin mit sterilem
redestillierteni Wasser verrührt und mit insgesamt 5oo ccm Wasser zur obigen Lösung,
gegeben. Im Verlauf von 4 Stunden wird das Reaktionsgemisch unter Rühren stufenweise
mit n/ioo Natronlauge, die durch einen Tropftrichter zugetropft wird, auf PH
7,2 eingestellt. Bei weiterem Rühren während 2 Stunden tritt dann keine Änderung
des pH mehr ein.The implementation of the new process is illustrated by the following examples. EXAMPLE 10 mg of bis-2-methyl-4-aminochinölyl-6-carbamide hydrochloride are dissolved in 500 cc of water and the pH is adjusted to 7.2 with 0.7 cc of sodium hydroxide solution. In this solution ig crystallized island hormone is introduced with stirring, and a pH of 7.2 is maintained with further stirring by adding n / 10 sodium hydroxide solution. After stirring for 24 hours, 1.95 ccm of n / io sodium hydroxide solution has been consumed and all of the bis-2-methyl-4-aminoquinolyl-6-carbamide has been absorbed by the islet hormone crystals. The crystals are centrifuged, washed twice with water and dried with acetone and ether. 0.97 g of crystals are obtained which contain 4% bis-2-methyl-4-aminoquinolyl-6-carbamide (calculated on the hydrochloride). -Example 2 5 g island hormone is dissolved in 225 cc of water and 25 cc of glacial acetic acid, the solution is sterile filtered, on .i replenished 3 1 with 1 5 o cc of acetone and 16o cc o, 5% * zinc chloride solution are added. The pH is then adjusted to 5.5 with ammonia under sterile conditions, whereupon uniform crystals of about 1 / zoo mm edge length are obtained within a short time with stirring. The crystals are centrifuged, washed with water, in a neutralized solution, of 0.3 9 bis --2 - methyl - 4 - aminoquinolyl - 6-carbamide hydrochloride in 2.5% water, which contains 0.5% acetone chloroform, stirred and treated further as in Example i, ensuring that sterile conditions are observed. After 2 ¢ hours there is so much saline solution. added that a suspension of 47 mg islet hormone per ccm is obtained in isotonic saline solution, which is filled into vials of 10 ccm with stirring. This gives a depot island hormone preparation with 40 units per ccm. EXAMPLE 3 750 mg of B.is-2-methyl-q.-aminochinolyl-6-carbamide hydrochloride are dissolved in redistilled sterile water of 750 cc and adjusted to pH 5.6 with 10000 sodium hydroxide solution. 10 g of crystalline insulin are then stirred up with sterile redistilled water and added to the above solution with a total of 500 ccm of water. Over the course of 4 hours, the reaction mixture is gradually adjusted to pH 7.2 , while stirring, with 100% sodium hydroxide solution, which is added dropwise through a dropping funnel. If the stirring is continued for 2 hours, there is no longer any change in the pH.
Die erhaltenen Kristalle werden aasgeschleudert, zweimal mit redestilliertem
sterilem Wasser gewaschen und mit Aceton und Äther -getrocknet. Man erhält in praktisch
quantitativer Ausbeute morphologisch unveränderte Kristalle mit einem Gehalt von
6,3% Bis-2-methyl-4-aminochinolyl-6-carbamid (auf das Hydrochlorid berechnet).The crystals obtained are centrifuged off, twice with redistilled
Washed sterile water and -dried with acetone and ether. You get in practical
quantitative yield of morphologically unchanged crystals with a content of
6.3% bis-2-methyl-4-aminoquinolyl-6-carbamide (calculated on the hydrochloride).