DE718400C

DE718400C - Method for determining the hemoglobin content of the blood

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Publication number: DE718400C
Application number: DEP71961D
Authority: DE
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Priority date: 1935-01-28
Filing date: 1935-10-18
Publication date: 1942-03-11

Description

Verfahren zum Bestimmen des Hämoglobingehaltes des Blutes Bei den zur Zeit üblichen Verfahren zum Bestimmen des Hämoglobingehaltes des Blutes wird die Blutprobe mit einer vielfach größeren Menge einer durchsichtigen Flussigkeit verdünnt, damit eine ausreichend helle Farbe entsteht, die deutlich feinere Farbunterschiede erkennen läßt.Method for determining the hemoglobin content of the blood In the currently the usual method for determining the hemoglobin content of the blood the blood sample with a much larger amount of a transparent liquid thinned, so that a sufficiently light color arises, the significantly finer color differences reveals.

Beim ältesten Verfahren wurde das Blut mit destilliertem Wasser verdünnt und dadurch gleichzeitig hämolysiert, um dann mit einem Rubinglaskeil verglichen zu werden. Da evtl. vorkommende Verdünnungsungenauigkeiten nicht an einer einzigen Probe kointrolliert werden können, schlug bereits um die Jahrhundertwende Dare vor, die notwendige Aufhellung der Blutfarbe dadurch zu erreichen, daß man die Blutprobe umbehandeit in eine kapillare Kammer mit parallelen Wänden laufen ließ, um sie darin mit dem üblichten Rubinglaskeil zu vergleichen. Dieser Weg hat aber den Nachteil, daß die Probe nicht hämolysiert ist, daher trübe aussieht und durch bald eintretende Senkung der Blutkörperchen in ihrem Aussehen verändert wird. In the oldest method, the blood was diluted with distilled water and thereby hemolyzed at the same time, to then be compared with a ruby glass wedge to become. Since any dilution inaccuracies that may occur are not due to a single Sample can be co-controlled, suggested as early as the turn of the century, Dare, to achieve the necessary lightening of the blood color by taking the blood sample re-treated in a capillary chamber with parallel walls to run them inside to be compared with the usual ruby glass wedge. But this way has the disadvantage that the sample is not hemolyzed and therefore looks cloudy and is due to the fact that it is soon to come Lowering the number of blood cells is changed in their appearance.

Beide Verfahren genügten aber bald aus einem anderen Grunde nicht mehr den Anforderungen an die Meßgenauigkeit: Wenn man rotes Blut in einem Licht betrachtet, das violette, blaue oder grüne Strahlen enthält, so haben dünnere Konzentrationen eine gelbliche, stärkere eine mehr bläuliche Farbe, während der Rubinglaskeil nur selne Intensität ändert. Um beides vergleichen zu können, mußte man die violette, blaue und grüne Strahlung bei der Beleuchtung ausschalten, indem man das Licht einer Kerze oder rötlichen Kohlenfadenlampe anwandte. Hiermit verdarb man aber den Einstellkontrast, der nach den Regeln der Kolorimetrie nur dann groß wird, wenn bei einem Licht verglichen wird, das der Farbe der Probe komplementäre Strahlen, d. h. bei Blut violette, blaue oder grüne, enthält. However, both procedures were soon insufficient for another reason more the requirements on the measurement accuracy: When you see red blood in a light considered containing violet, blue, or green rays, then have thinner concentrations a yellowish, stronger a more bluish color, while the ruby glass wedge only selne intensity changes. In order to be able to compare the two, one had to use the purple, Turn off blue and green radiation in lighting by turning on the light of a Applied candle or reddish carbon filament lamp. But this spoiled the setting contrast, which, according to the rules of colorimetry, only becomes large when compared with one light the rays complementary to the color of the sample, d. H. if blood is violet, blue or green, contains.

Die folgende Entwicklung führte dazu, daß eme Reihe von Verdünnungsverfahren geschaffen wurden, blei denen die Proben bei dem kontrastreichen Tageslicht oder dem inzwischen entstandenen elektrischen Licht der Metallfadenbirnen verglichen werden können. The ensuing development resulted in a number of dilution processes where the samples lead to the high-contrast daylight or compared to the electric light produced by the metal filament bulbs in the meantime can be.

Hierbei wird die Probe nicht nur verdünnt, sondern gleichzeitig chemisch verändert. An: weitesten verbreitet ist heute das Verfahren, die Blutprobe mit verdünnter Salzsäure in salzsaures Hämatin zu verwandeln und die dabei entstehende gelbbraune Farbe zu kolorimetrieren. Ein Nachteil dieses Verfahrens besteht darin, daß die Hämatinlösung gleich nach der Herstellung nachzudunkeln beginnt, so daß man bei der Eichung der Hämatininstrumente den genauen Ablesezeitpunkt festlegen muß. Da aber auch seine Einhaltung bei der Messting infolge individueller Verschiedenheiten des Hämatinnachdunkelungs verlaufes keine absolute Sicherheit für die Richtigkeit der Messung gewährleistet, wird neuerdings von sachkundiger Seite die Aufgabe der Hämatinmethode vorgeschlagen. Here, the sample is not only diluted, but also chemically at the same time changes. An: The most widespread method today is that the blood sample is diluted with To transform hydrochloric acid into hydrochloric acid hematin and the resulting yellow-brown Colorize color. A disadvantage of this method is that the Hematin solution begins to darken immediately after production, so that one can get at the calibration of the hematin instruments the exact time of reading must set. But since also its compliance with the Messting as a result of individual Differences in the course of hematin darkening are not absolutely certain Guaranteed for the correctness of the measurement, has recently become more knowledgeable Page proposed the abandonment of the hematin method.

Es sind Hämoglobinometer mit stufenförmig abgesetzten Kapillarkammern bekannt, in weichen das Blut unverdünnt mit einem Normal vergleichen wird. They are hemoglobinometers with stepped capillary chambers known, in soft, the blood undiluted is compared with a normal.

Das Kapillarkammerverfahren mit unverdünntem Blut ist inzwischen nicht wesentlich weiterentwickelt worden, obwohl mehrere Vorschläge zu einer besseren Durchführung bekanntwurden. Hier weist nun die vorliegende Erfindung den Weg, das Kapillarverfahren so zu vervollkommnen, daß es nicht nu.r den heutigen Ansprüchen genügt, sondern sogar den Verdünnungsmethoden überlegen ist. Die vorliegende Erfindung besteht darin, daß bei einem Verfahren zum Bestimmen des Hämoglobingehaltes, bei dem die Blutprobe ohne merkbare Verdünnung in eine B!eobachtungskammer gebracht und mit einer oder mehreren Farben verglichen wird, die unverdünnte Blutprobe mit einem geeigneten Medium, beispielsweise Saponin, hämolysiert, in eine keilförmige Beobachtungskammer gebracht und mit einem nach Farbe und Intensität abgestuften Normal verglichen wird. The capillary chamber method with undiluted blood is now not significantly improved, although several proposals lead to a better one Implementation became known. Here the present invention now shows the way that To perfect the capillary process in such a way that it does not only meet today's demands is sufficient, but is even superior to the dilution methods. The present invention is that in a method for determining the hemoglobin content, at the blood sample was brought into an observation chamber without noticeable dilution and the undiluted blood sample is compared with one or more colors a suitable medium, e.g. saponin, hemolyzed into a wedge-shaped Brought to the observation chamber and graded according to color and intensity Normally is compared.

Die Hämolyse des Blutes durch Saponin ist an sich bekannt.The hemolysis of the blood by saponin is known per se.

Dadurch, daß statt der parallelflächigen Kapillarkammer eine an sich bekannte keilförmige Kapillarkammer vorgesehen und mit der hämolysierten unverdünnten Blutprobe. gefüllt ist, ist die Möglichleeit gegeben, kontrastreiches Licht zu verwenden. Durch die Unterbringung des Blutes in einer Keilkammer entsteht ein natürlicher Blutfarbenkeil, der mit einer einzigen Vergieichsfarbe verglichen werden kann, die nach Intensität und Farbton so abgestimmt ist, daß die Meßwerte im gewünschten Meßbereich liegen. The fact that instead of the parallel capillary chamber one per se known wedge-shaped capillary chamber provided and with the hemolyzed undiluted Blood sample. is filled, it is possible to use high-contrast light. Placing the blood in a wedge chamber creates a natural one Blood color wedge that can be compared to a single comparison color, the is adjusted according to intensity and color so that the measured values are in the desired measuring range lie.

Ferner wird dadurch noch folgender Vorteil erreicht: In der parallelflächigen Kammer nach D a r e verändert sich infolge der Verdunstung die zu beobachtende Probe unregelmäßig. Fig. 4 zeigt eine parallelflächige Idtpillarkammer, die aus dem Teil 7 mit der eingeschliffenen Kammertiefe und dem planen übergeschobenen Dleckglas S besteht. Füllt man eine solche Kammer mit Blut, so verdunstet dieses an den offenen Kanten, und das Fortschreiten der leeren Stellen nach dem Innern geschieht in unregelmäßiger Weise. In addition, the following advantage is achieved in this way: In the parallelepiped Chamber after D a r e the sample to be observed changes as a result of evaporation irregular. Fig. 4 shows a parallel-faced Idtpillary chamber, which consists of the part 7 with the ground-in chamber depth and the flat cover glass pushed over S consists. If one fills such a chamber with blood, it evaporates from the open ones Edges, and the progression of the empty spaces towards the interior occurs more irregularly Way.

In der Keilkammer verläuft dieser Vorgang jedoch so, daß die der Beobachtung dienenden Teile lange Zeit hindurch unbeeinflußt bleiben. Dieser Vorgang ist in Fig. 5 veranschaulicht.In the wedge chamber, however, this process proceeds in such a way that that of observation Serving parts remain unaffected for a long time. This process is in Fig. 5 illustrates.

- Verdunstung kann nur an den Ränder stattfinden. Sobald nun z. B. das Wasser a.n.de!r Steller verdunstet. so sucht sich diese Stelle neuen Nachschub, der aber wegen der Keilform stets vom Nachbarteil b her bezogen wird und nicht von c oder d, da c und cl wegen ihrer geringeren Kapillarhöhe gegenüber b eine größere Kapillarhaltekraft haben als b. Dies ist deutlich zu beobachten, da die Probe in einer Kapillarkeilkammer die in Fig. 5 dargestellte Form annimmt, wobei das rückständige Hämoglobin der verdunsteten Flüssigkeit von Stelle a in Form eines roten Randes abgelagert ist, während die inneren für die Kolorimetrie notwendigen Kammerpartien unversehrt geblieben sind -Erst nach sehr langer Zeit dringt dann das konzentrierte Randhämoglobin deutlich sichtbar protuberanzenförmig in das Innere ein. - Evaporation can only take place at the edges. As soon as z. B. the water a.n.de! r steller evaporates. so this place is looking for new supplies, but because of the wedge shape it is always drawn from the neighboring part b and not from c or d, since c and cl have a larger capillary height compared to b because of their lower capillary height Have capillary holding power as b. This can be clearly observed as the sample is in a capillary wedge chamber assumes the shape shown in Fig. 5, the remaining Hemoglobin of the evaporated liquid from point a in the form of a red border is deposited, while the inner chamber parts necessary for colorimetry have remained intact - only after a very long time does the concentrated one penetrate Marginal hemoglobin is clearly visible in the form of a protuberance.

Somit vermeidet die Anwendung der ECeilkanillarkammer die Verdunstungsschwierigkeiten, die sonst nur durch starkcs Verdünnen der Probe umgangen werden konnten. Thus, the use of the e-canillary chamber avoids evaporation difficulties, which otherwise could only be circumvented by strongly diluting the sample.

Außerdem schafft die Keilform geradezu einer natürlichen Blutfarbenl,eil mit allen Farbe und Intensitätsabstufungen, so daß die Vergleichsfarbe auf wenige einzelne nach Farbe und Intensität abgestimmte Stücke beschränkt werden kann, die gewissermaßen nur die Meßbereiche bestimmen. In addition, the wedge shape almost creates a natural blood color with all color and intensity gradations, so that the comparison color is limited to a few individual pieces coordinated according to color and intensity can be restricted to a certain extent only determine the measuring ranges.

Der Erfindungsgegenstand ist in der Zeichnung an einem Ausführungsbeispiel veranschaulicht. In der Zeichnung zeigen Abb. 1 und 2 Aufriß und einen Grundriß einer Keilkammer mit zwei Vergleichsfarben im Schnitt, Abb. 3 und 4 Aufiiß und Grundriß einer parallelen Kapillarkammer bekannter Art mit Darsteilung des Verdunstungsvorganges, Abb. 5 den Grundriß einer keilförmigen Kapillarkammer mit einer Anschlagleiste und Andeutung des Verdunstungs-Vorganges. The subject of the invention is shown in the drawing using an exemplary embodiment illustrated. In the drawing, Figs. 1 and 2 show an elevation and a plan view a wedge chamber with two comparative colors in section, Fig. 3 and 4 elevation and plan a parallel capillary chamber of a known type with a representation of the evaporation process, Fig. 5 the plan of a wedge-shaped capillary chamber with a stop bar and Indication of the evaporation process.

In den Abbildungen bedeutet I die gläserne Grundplatte der Kapillarkeilkammer, 2 ihr Deckglas, 3 eine Anschlagplatte. Mit 4 und 5 sind die Vergleichsfarben, mit 6 eine Schiebeblende und mit 9 deren Fenster bezeichnet. Die Grundplatte einer zum Vergleich herangezogenen parallelen Kapillarkammer ist mit 7 und ihi Deckglas mit 8 bezeichnet. Auf der Grundplatte 1 befinden sich die Vergleichsfarben 4 und 5. Sie be stehen beispielsweise aus Streifen farbigen Glases oder aus Glasstreifen mit unterlegter, gefärbter Gelatine und sind auf der Platte fest verkittet. Sie bilden zugleich die Führung für das Deckgias 2. Dieses Deckgias ist so geschliffen, daß es den in Abb. I stark übertrieben dargestellten keilförmigen Raum bildet. Die Auskehlungen dienen dazu, zu verhindern, daß das Blut bis an die Auflagerflächen gelangt. Der Anschlag 3 legt den Nullpunkt des Keiles fest. In the figures, I means the glass base plate of the capillary wedge chamber, 2 her cover glass, 3 a stop plate. With 4 and 5 are the comparison colors, with 6 denotes a sliding panel and 9 its window. The base plate of a for The parallel capillary chamber used for comparison is with 7 and ihi cover slip with 8 designated. The comparison colors 4 and 5 are located on the base plate 1. They exist, for example, from strips of colored glass or from glass strips with underlaid, colored gelatine and are firmly cemented to the plate. she at the same time form the guide for the cover slip 2. This cover slip is ground in such a way that that there is the wedge-shaped space shown in Fig. I, greatly exaggerated forms. The grooves serve to prevent the blood from reaching the bearing surfaces got. The stop 3 defines the zero point of the wedge.

Es ist auch möglich, die Keilfestlegung in die Platten einzuschleifen und das Deckglas parallel zur Grundfläche auszugestalten. It is also possible to grind the wedge fixing into the panels and design the cover glass parallel to the base.

Um gegebenenfalls leine proportionale Slcalenteilung zu erreichen, kann der keilförmige Raum auch so ausgestaltet werden, daß die Höhe des Keilraumes anders als proportional mit der Abszisse wächst. Gemessen wird mit der beschriebenen Vorrichtung wie folgt: Das hämolysierte Blut wird in Form eines Streifens auf der Grundplatte zwischen den beiden Farbstreifen verteilt und das Deckglas 2 aufgelegt und gegen den Anschlag 3 geschoben.In order to achieve a proportional scale division if necessary, the wedge-shaped space can also be designed so that the height of the wedge space grows differently than proportionally with the abscissa. It is measured with the described Device as follows: The hemolyzed blood is in the form of a strip on the Base plate distributed between the two colored strips and the cover glass 2 placed on top and pushed against the stop 3.

Das Dechglas haftet infolge der Kapillaritätswirkung ohne jede weiteren Maßnahmen an.The Dechglas adheres due to the capillarity effect without any further Measures.

Man stellt nunmehr mit Hilfe des Schiebers 6 und dem darin befindlichen Fenster fest, an welcher Stelle des Keiles die Farbe des Blutes mit der Farbe eines der beiden Streifen 4 oder 5 übereinstimmt. An den Rändern der Farbstreifen werden zweckmäßig die gesuchten Prozentzahlen unmittelbar eingetragen, so daß man aus der Stelle der Farbgleichheit unmittelbar das Ergebnis ablesen kann.One now sets with the help of the slide 6 and the one located therein Window determines at which point of the wedge the color of the blood matches the color of a of the two strips 4 or 5 match. At the edges of the colored stripes will be expediently entered the desired percentages directly, so that one can get from the The result can be read directly from the point where the colors are identical.

Der Schieber ist zweckmäßig so ausgebildet, daß immer nur ein Streifen 4 oder 5 zugleich mit dem Ausschnitt des Blutkeiles im Fenster erscheint. Durch Herausschieben des Schiebers und Seitenvertauschung kann die passende Vergleichsfarbe gewählt werden (Umschaltung des Meßbereiches). Bei der beschriebenen Anordnung sind die Vergleichsfarben in Intensität und Farbe durch die geometrischen Werte der Vorrichtung und die Eigenart des zu untersuchenden Stoffes genau festgelegt. The slide is expediently designed so that only one strip at a time 4 or 5 appears in the window at the same time as the section of the blood wedge. By Pushing out the slider and swapping the sides can create the matching comparison color can be selected (switching of the measuring range). In the arrangement described are the comparison colors in intensity and color by the geometric values of the device and the nature of the substance to be examined is precisely defined.

Die Konzentration der Probe in der Keilkammer kann auch mit Hilfe einer phot,oelektrischen Einrichtung, wie sie für Absorptionsmessungen allgemein bekannt ist, gemessen werden. The concentration of the sample in the wedge chamber can also help with a phot, oelectric device, as used for absorption measurements in general is known to be measured.

Claims

P A T E N T A N S P R U C H: Procedure for determining the hemoglobin content of the blood, in which the blood sample is noticeably diluted in a capillary observation chamber is brought and compared with one or more colors, characterized in that that the undiluted blood sample with a suitable medium, for example saponin, hemolyzed, placed in a wedge-shaped observation chamber and followed by a Color and intensity graded normal is compared.